WO2009050677A2 - Utilisation de bacteries lactiques pour la prevention et/ou le traitement de pathologies cutanees - Google Patents
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Definitions
- the subject of the invention is a novel use of a lactic bacterium of the genus Lactobacillus for the prevention and / or treatment of cutaneous pathologies resulting in irritations or inflammations of the skin.
- the application WO 03/082307 in the name of INRA relates to the use of the species Lactobacillus farciminis for the prevention or the treatment of digestive pathologies. This use is based on the demonstration of an activity on inflammation of the digestive tract, more particularly of the colon, as well as on visceral pain, by the in situ production, in the digestive lumen, of nitric oxide (NO ).
- NO nitric oxide
- Skin irritations correspond to multifactorial inflammatory reactions and are most commonly characterized by the presence of redness, pain, heat and / or edema. They can extend over a larger or smaller area. These irritations can be of accidental nature, and due for example to shocks, contact with certain products, ultra-violet rays, etc. or be linked to pathologies, such as psoriasis, acne or eczema. It can also be skin disorders of the rosacea type or due to aging phenomena of the skin.
- skin pathologies cover both dermatological and non-dermatological applications, as well as applications in cosmetology.
- the invention therefore provides means for preventing and / or treating these cutaneous pathologies.
- This object is achieved, in accordance with the invention, by the use of at least one lactic bacterium of the species Lactobacillus farciminis, fragments or fractions of cellular components, and / or metabolites of this bacterium, to formulate a composition for the prevention and / or treatment of cutaneous pathologies.
- L. farciminis is a probiotic bacterium, ie having an effect considered to be positive on health. It is present in various food products, including meat products, such as sausages, or breadmaking leavens. Various strains are available in various culture collections, including those deposited at the ATCC under No. 29644, DSMZ under No. 20184, JCM under No. 1097, or CIP under number 103136 T.
- the composition may comprise, as active ingredient, one or more strains of L. farmicinis or at least one strain of L. farmicinis in combination with one or more strains of one or more other probiotic bacteria, such as those of the genera Lactobacillus or Bifidobacterium.
- the bacteria or bacteria are present in the composition in living form, or partially or totally inactivated.
- the bacteria can be whole. It may be an alternative of fragments obtained by mechanical, chemical or enzymatic, or fractions of cellular components extracted from the lysates, advantageously according to conventional techniques and / or metabolites produced by the bacterium and isolated from the culture medium.
- the bacteria and / or their derivatives can be used in fresh, frozen, freeze-dried or dried form.
- composition prepared in accordance with the invention is advantageously in a form suitable for oral or topical administration.
- said composition is in the form of powders, tablets, capsules, capsules, suspensions or oral solutions.
- the said composition advantageously contains from 10 6 to 10 12 CFU / g, preferably from 10 8 to 10 10 CFU / g.
- said composition is in the form of ointments, creams, suspensions or aqueous, hydro-alcoholic or oily solutions, lotion, serum, soap, milk-type emulsions, gels, microemulsions or microparticles.
- the composition contains from 10 5 to 10 12 CFU / g, preferably from 10 7 to 10 CFU / g.
- compositions in accordance with the invention show their effectiveness for preventing and / or treating cutaneous pathologies.
- the composition proves particularly suitable for the prevention and / or treatment of skin inflammations, in particular for the treatment of inflammatory skin lesions where appropriate with ulceration of the epidermis and / or inflammatory infiltrate. They have also been shown to be highly effective in cosmetology for preventing and / or treating cutaneous-type skin inflammations or aging of the skin.
- compositions obtained according to the invention are of great interest both in humans and in animals.
- Other characteristics and advantages of the invention are given in the following examples with reference to FIGS. 1 and 2, which give, respectively, the average macroscopic and microscopic scores of the cutaneous inflammation, according to the treatments undergone by treatment groups. mouse.
- L. farciminis were compared with those obtained with two other probiotics: Lactobacillus rhamnosus R0011 and Bifidobacterium longum R0175 (Lallemand SAS, Blagnac, France).
- inflammation was induced by daily applications of phorbol 12-myristate-13 acetate or TPA to Skh-1 hairless female mice.
- mice from 25 to 30 g at the beginning of the experiment, were used and housed per 2 cages, in a controlled environment (humidity: 50 +/- 10%, temperature: 22 ° C +/- 2 ° C; : 9pm to 9am).
- mice had free access to food (2016 standard diet (Harlan Teklad Diet, Oxon, Great Britain)) and water. After an acclimation period of 7 days, the mice were weighed and randomly divided into 5 groups: Group 1 (control group): treatment only with physiological saline (vehicle) Group 2: induction of cutaneous inflammation and treatment with the vehicle
- Group 3 induction of skin inflammation and treatment with the probiotic Lactobacillus rhamnosus R0011, at a dose of 3.3 mg / mouse / day (corresponding to 10 9 CFU / day)
- Group 4 same treatment, but with Lactobacillus farciminis R1127 at 5, Omg / mouse / day (corresponding to 10 9 CFU / day)
- Group 5 same treatment, but with Bifidobacterium longum R0175, at 6.0 mg / mouse / day (corresponding to 10 9 CFU / day ).
- TPA was used as a solution in acetone and applied daily to the back of mice for 7 days.
- the probiotics were prepared as saline physiological saline solutions, with immediate administration to the animals, at concentrations of 13.2, respectively; 20.0; and 24.0 mg / ml, by gavage orally at the doses indicated above. These treatments started 2 weeks before the induction of skin inflammation, and then for 1 week after the start of this induction, with the administration of a volume of 0.25ml of probiotic / mouse solution.
- mice were weighed 3 times / week before and after the induction of cutaneous inflammation. Their viability and behavior were recorded throughout the experiments, without any abnormality being noted.
- Macroscopic score of cutaneous inflammation At D + 20, a quantification of the surface of cutaneous inflammation on the back and on the abdomen and a quantification of the degree of inflammation were carried out to calculate an overall macroscopic score of inflammation cutaneous for each mouse. The results are given in Figure 1.
- mice were anesthetized on D + 20 and blood collected by cardiac puncture 4 h after the last treatment with Oral route with probiotics or a vehicle. After leaving the blood coagulated, the serum was recovered from each mouse, frozen at 20 ° C. and stored at -80 ° C. • Skin samples
- the skin samples were taken from the backs of the mice, after the blood samples, at the place of application of the TPA solution or at the same level for the control animals. These samples were fixed and preserved in formalin. Histopathological analyzes were performed on 6 to 8 different areas / skin sample. The degree of inflammation was characterized for each layer of skin, epidermis, dermis and hypodermis so as to define a global microscopic score of cutaneous inflammation for all the analyzed samples.
- Figure 2 illustrates the results obtained on the average microscopic score of cutaneous inflammation of the mice of the different groups.
- Lactobacillus farciminis 10 CFU / g potato starch: 150 mg Magnesium stearate: 0.02 mg
- Example 3 Composition for topical route Ointment:
- Lactobacillus farciminis in powder form 5.00 Vaseline officinale: qsp 100%
- This preparation was tested by three volunteers with eczema on the forearms or elbow creases. After 7 days of bi-daily application of the preparation on one side, the other side serving as a "control", two people reported a very significant improvement in the treated part compared with the previous state and with respect to side untreated. For the third person, the improvement was more moderate, but nonetheless significant.
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Abstract
L'invention porte sur l'utilisation d'au moins une bactérie lactique de l'espèce Lactobacillus farciminis, de fragments ou de fractions de composants cellulaires, et/ou de métabolites de cette bactérie, pour élaborer une composition pour la prévention et/ou le traitement de pathologies cutanées. Applications, notamment, en dermatologie et en cosmétologie.
Description
Utilisation de bactéries lactiques pour la prévention et/ou le traitement de pathologies cutanées
L'invention a pour objet une nouvelle utilisation d'une bactérie lactique du genre Lactobacillus pour la prévention et/ou le traitement de pathologies cutanées se traduisant par des irritations ou inflammations de la peau.
La demande WO 03/082307 au nom de l'INRA se rapporte à l'utilisation de l'espèce Lactobacillus farciminis pour la prévention ou le traitement de pathologies digestives. Cette utilisation repose sur la mise en évidence d'une activité sur l'inflammation du tube digestif, plus particulièrement du colon, ainsi que sur la douleur viscérale, par la production in situ, dans la lumière digestive, de monoxyde d'azote (NO) .
L'étude des effets de cette espèce de Lactobacillus par les inventeurs a montré que, de manière surprenante, elle était également capable d'exercer une action sur la peau extérieure, qui n'était donc pas limitée aux seules muqueuses comme enseigné par la demande WO ci-dessus.
Elle s'est révélée ainsi active sur des irritations cutanées, accidentelles ou liées à des pathologies et ce même lorsqu'elle était administrée par une voie n'impliquant pas à un contact direct avec la partie à traiter. Les irritations cutanées correspondent à des réactions inflammatoires multifactorielles et sont le plus généralement caractérisées par la présence de rougeurs, de douleurs, de chaleurs et/ou d'œdèmes. Elles peuvent s'étendre sur une surface plus ou moins grande. Ces irritations peuvent être de nature accidentelle, et dues par exemple à des chocs, le contact avec certains produits, les rayonnements Ultra- Violets, etc ou être liées à des pathologies, comme le psoriasis, l'acné ou l'eczéma. Il peut s'agir aussi
d' affections cutanées du type couperose ou dues aux phénomènes de vieillissement de la peau.
Ces différents types d'irritations/inflammations seront désignés globalement ci-après par l'expression « pathologies cutanées » et couvrent aussi bien les applications dermatologiques et non dermatologiques, ainsi que les applications en cosmétologie.
L' invention fournit donc des moyens pour prévenir et/ou traiter ces pathologies cutanées. Ce but est atteint, conformément à l'invention, par l'utilisation d'au moins une bactérie lactique de l'espèce Lactobacillus farciminis, de fragments ou de fractions de composants cellulaires, et/ou de métabolites de cette bactérie, pour élaborer une composition pour la prévention et/ou le traitement de pathologies cutanées.
L . farciminis est une bactérie probiotique, c-à-d ayant un effet considéré comme positif sur la santé. Elle est présente dans différents produits alimentaires, notamment les produits carnés, comme les saucisses, ou les levains de panification. Différentes souches sont accessibles dans diverses collections de culture, notamment celles déposées à l'ATCC sous le N° 29644, à la DSMZ sous le N° 20184, à JCM sous le N° 1097, ou au CIP sous le numéro 103136 T.
La composition peut comprendre, à titre de principe actif, une ou plusieurs souches de L . farmicinis ou encore au moins une souche de L . farmicinis en combinaison avec une ou plusieurs souches d'une ou plusieurs autres bactéries probiotiques, comme celles des genres Lactobacillus ou Bifidobacteri um . Dans l'utilisation selon l'invention, la ou les bactéries sont présentes dans la composition sous forme vivante, ou partiellement ou totalement inactivée.
La bactérie peut être entière. Il peut s'agir en variante de fragments obtenus par lyse mécanique, chimique ou
enzymatique, ou de fractions de composants cellulaires extraits des lysats, avantageusement selon les techniques classiques et/ou de métabolites produits par la bactérie et isolés à partir du milieu de culture.
Ces fragments, fractions et métabolites sont utilisables selon l'invention dès lors qu'ils sont actifs dans les tests utilisés à cet égard pour L . farciminis et rapportés dans les exemples. Le terme « dérivés » sera également utilisé dans la suite de la description et les revendications pour les désigner .
La ou les bactéries et/ou leurs dérivés peuvent être utilisés sous forme fraîche, congelée, lyophilisée ou séchée.
La composition élaborée conformément à l'invention est avantageusement sous une forme appropriée pour une administration par voie orale ou par voie topique.
Pour une administration par voie orale, ladite composition se présente sous forme de poudres, comprimés, gélules, capsules, de suspensions ou de solutions buvables. La dite composition renferme avantageusement de 106 à 1012 UFC/g, de préférence de 108 à 1010 UFC/g.
Pour une administration par voie topique, ladite composition se présente sous forme de pommades, crèmes, suspensions ou solutions aqueuses, hydro-alcooliques ou huileuses, lotion, sérum, savon, émulsions de type lait, gels, microémulsions ou microparticules.
Dans ces formes, la composition renferme de 105 à 1012 UFC/g, de préférence de 107 à 1010 UFC/g.
Les tests réalisés avec des compositions conformes à l'invention montrent leur efficacité pour prévenir et /ou traiter des pathologies cutanées.
Compte tenu des effets mis en évidence dans les tests d'inflammation induite, la composition s'avère particulièrement appropriée pour la prévention et/ou le
traitement d'inflammations cutanées, en particulier pour le traitement de lésions inflammatoires cutanées le cas échéant avec ulcération de l'épiderme et/ou infiltrat inflammatoire. Elles se sont également révélées de grande efficacité en cosmétologie pour prévenir et/ou traiter des inflammations cutanées de type couperose ou le vieillissement de la peau.
Les compositions obtenues conformément à l'invention présentent un grand intérêt aussi bien chez l'homme que chez 1' animal . D'autres caractéristiques et avantages de l'invention sont donnés dans les exemples qui suivent avec référence aux figures 1 et 2, qui donnent, respectivement, les scores macroscopiques et microscopiques moyens de l'inflammation cutanée, selon les traitements subis par des groupes de souris.
Exemple 1 : Effet de probiotiques sur une inflammation cutanée sur un modèle souris
Les effets de L. farciminis ont été comparés à ceux obtenus avec deux autres probiotiques : Lactobacillus rhamnosus R0011 et Bifidobacterium longum R0175 (Lallemand SAS, Blagnac, France) .
Dans les expériences rapportées ci-après, l'inflammation a été induite par applications journalières d'acétate de phorbol 12-myristate-13 ou TPA à des souris femelles Skh-1 hairless .
Le protocole suivant a été appliqué: • Conditions des traitements
30 souris femelles, de 25 à 30g en début d'expérience, ont été utilisées et logées par 2 par cages, dans un environnement contrôlé (humidité : 50+/- 10% ; température : 22°C+/-2°C ; lumière : 21h à 9h) .
Les souris avaient libre accès à la nourriture (régime standard 2016(Harlan Teklad Diet, Oxon, Grande-Bretagne)) et à 1' eau .
Après une période d'acclimatation de 7 jours, les souris ont été pesées et divisées au hasard en 5 groupes : Groupe 1 (groupe contrôle) : traitement seulement avec du sérum physiologique (véhicule) Groupe 2 : induction d'une inflammation cutanée et traitement avec le véhicule
Groupe 3 : induction d'une inflammation cutanée et traitement avec le probiotique Lactobacillus rhamnosus R0011, à une dose de 3,3 mg/souris /jour (correspondant à 109 UFC/jour) Groupe 4 : même traitement, mais avec Lactobacillus farciminis R1127, à 5, Omg/souris/j our ((correspondant à 109 UFC/jour) Groupe 5 : même traitement, mais avec Bifidobacterium longum R0175, à 6,0 mg/souris/j our (correspondant à 109 UFC/jour) .
Le TPA a été utilisé sous forme de solution dans l'acétone et appliqué chaque jour sur le dos des souris, pendant 7 jours.
Les 3 probiotiques ont été préparés sous forme de solutions aqueuses salines physiologiques, avec administration immédiate aux animaux, à des concentrations respectives de 13,2 ; 20,0 ; et 24,0 mg/ml, par gavage par voie orale aux doses indiquées ci-dessus. Ces traitements ont commencé 2 semaines avant l'induction de l'inflammation cutanée, puis durant 1 semaine après le début de cette induction, avec l'administration d'un volume de 0,25ml de solution de probiotique/souris .
Les traitements appliqués sont résumés dans le tableau 1 ci-après :
Tableau 1
Les souris ont été pesées 3 fois /semaine avant et après l'induction de l'inflammation cutanée. Leur viabilité et leur comportement ont été enregistrés tout au long des expériences, sans qu'aucune anomalie n'ait été notée.
Score macroscopique de l'inflammation cutanée A J+20, une quantification de la surface de l'inflammation cutanée sur le dos et sur le ventre et une quantification du degré d' inflammation ont été effectuées pour calculer un score macroscopique global de l'inflammation cutanée pour chaque souris . Les résultats sont donnés sur la figure 1.
L'examen de cette figure montre que le score macroscopique moyen varie selon le traitement appliqué, mais est toujours supérieur à celui du groupe contrôle.
Le groupe traité avec L . farciminis présente un score beaucoup plus faible que ceux des autres groupes. • Prélèvements sanguins et isolement de sérum
Les souris ont été anesthésiées à J+20 et le sang prélevé par ponction cardiaque 4 h après le dernier traitement par
voie orale avec des probiotiques ou un véhicule. Après avoir laissé le sang coagulé, le sérum a été récupéré sur chaque souris, congelé à 200C et stocké à -800C. • Prélèvements cutanés
Les prélèvements cutanés ont été effectués sur les dos des souris, après les prélèvements sanguins, à l'endroit de l'application de la solution de TPA ou à ce même niveau pour les animaux témoins. Ces prélèvements ont été fixés et conservés dans le formol. Les analyses histopathologiques ont été réalisées sur 6 à 8 zones différentes/échantillon cutané. Le degré d' inflammation a été caractérisé pour chaque couche de peau, épiderme, derme et hypoderme de manière à définir un score global microscopique d' inflammation cutanée pour tous les échantillons analysés.
Les résultats de l'analyse histopathologique des prélèvements cutanés sont résumés dans le tableau 2 ci-après :
Tableau 2
La figure 2 illustre les résultats obtenus concernant le score microscopique moyen de l'inflammation cutanée des souris des différents groupes.
L'étude de ces résultats met en évidence l'effet favorable de L . farciminis sur l'inflammation cutanée. En effet, le score macroscopique moyen est nettement plus faible que celui observé avec les autres groupes. • Dosages des cytokines pro- et anti-inflammatoires
Après décongélation des sera, les 8 cytokines pro- et anti-inflammatoires suivantes ont été dosées simultanément en utilisant la technique Bio-Plex : IL-lβ, IL-2, IL-4, IL-5, IL- 10, GM-CSF, IFN-γ et TNF-α. Les dosages ont été effectués en double .
Les résultats obtenus montrent une réduction, par rapport au groupe 2 (traité par TPA+ véhicule) , de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires IL-I β, IL-2, GM-CSF, IFN-γ et TNF-α et une augmentation de la sécrétion de cytokines antiinflammatoires IL-4, IL-5, IL-IO. Exemple 2 : composition pour voie orale Gélules :
Lactobacillus farciminis : 10 UFC/g amidon de pomme de terre : 150 mg Stéarate de magnésium : 0,02 mg Exemple 3 : composition pour voie topique Pommade :
Lactobacillus farciminis sous forme de poudre : 5,00 vaseline officinale : qsp 100%
Cette préparation a été testée par trois volontaires souffrant d'eczéma sur les avant-bras ou les plis du coude. Après 7 jours d'application bi-quotidienne de la préparation sur un seul côté, l'autre côté servant de « témoin », deux personnes ont rapporté une amélioration très significative de la partie traitée par rapport à l'état antérieur et par rapport au côté
non traité. Pour la troisième personne, l'amélioration a été plus modérée, mais néanmoins notable.
Claims
Revendications
1 - Utilisation d'au moins une bactérie lactique de l'espèce Lactobacillus farciminis, de fragments ou de fractions de composants cellulaires, et/ou de métabolites de cette bactérie, pour élaborer une composition pour la prévention et/ou le traitement de pathologies cutanées.
2 - Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite composition comprend à titre de principe actif, une ou plusieurs souches de L . farmicinis ou encore au moins une souche de L . farmicinis en combinaison avec une ou plusieurs souches d'une ou plusieurs autres bactéries probiotiques, comme celles des genres Lactobacillus ou Bifidobacterium.
3 - Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que la ou les bactéries sont présentes dans la composition sous forme vivante, ou partiellement ou totalement inactivée.
4 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la ou les bactéries et/ou levures dérivées sont sous forme fraîche, congelée, lyophilisée ou séchée.
5 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que ladite composition se présente sous une forme appropriée pour une administration par voie orale ou par voie topique.
6 - Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que, pour une administration par voie orale, ladite
composition se présente sous forme de poudres, comprimés, gélules, capsules, de suspensions ou de solutions buvables.
7 - Utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que, ladite composition renferme de 106 à 1012 UFC/g, de préférence de 108 à 1010 UFC/g.
8 - Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que, pour une administration par voie topique, ladite composition se présente sous forme de pommades, crèmes, suspensions ou solutions aqueuses, hydro-alcooliques ou huileuses, lotion, sérum, savon, émulsions de type lait, gels, microémulsions ou microparticules.
9 - Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que, ladite composition renferme de 105 à 1012 UFC/g, de préférence de 107 à 1010 UFC/g.
10 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, en dermatologie ou en cosmétologie.
11 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, pour le traitement de lésions inflammatoires cutanées le cas échéant avec ulcération de l'épiderme et/ou infiltrat inflammatoire.
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