WO2009004146A2 - Nouveaux dérives analogues de l'herbimycine a, compositions les contenant et utilisation - Google Patents
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- WO2009004146A2 WO2009004146A2 PCT/FR2008/000709 FR2008000709W WO2009004146A2 WO 2009004146 A2 WO2009004146 A2 WO 2009004146A2 FR 2008000709 W FR2008000709 W FR 2008000709W WO 2009004146 A2 WO2009004146 A2 WO 2009004146A2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D225/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D225/04—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D225/06—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
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- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
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- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
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- A61P33/00—Antiparasitic agents
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- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Definitions
- the present invention relates to novel chemical compounds of the benzoquinoid ansamycin family, compositions containing them, and their use as medicaments.
- the invention relates, in a first aspect, to new chemical compounds of the benzoquinoid ansamycin family and in particular new herbimycin A analogs exhibiting an anticancer activity, and in particular an inhibitory activity of the Hsp90 chaperone protein, and more particularly via the inhibition of the ATPase catalytic activity of the chaperone Hsp90 protein.
- HSPs Heat Shock Proteins
- Hsp27, Hsp40, Hsp70, Hsp90 are key elements of the balance between synthesis and degradation of cellular proteins, responsible for the correct folding of proteins. They play a vital role in response to cellular stress.
- HSPs, and in particular Hsp90 are also involved in the regulation of various major functions of the cell, via their association with various client proteins involved in cell proliferation or apoptosis (JoIIy C. and Morimoto RI, JN Cancer Inc. (2000), 92, 1564, Smith DF et al., Pharmacological Rev. (1998), 50, 493, Smith DF, Molecular Chaperones in the CEII, 165-178, Oxford University Press 2001).
- the Hsp90 chaperone which accounts for 1-2% of the protein content of the cell, is an ATPase related to the GHKL phosphotransferase family, characterized by a common folding called "Bergerat fold". Around the ATP fixation site.
- This GHKL family also contains DNA-gyrases, or type II topoisomerases, bacterial histidine kinases, mitochondrial serine kinases, human pyruvate dehydrogenase kinases, and repair proteins such as MutL (cf for Oak P., Nature Reviews Drug Discovery (p. 2002), 1, 665).
- Hsp 90 works with a number of co-chaperones and / or adapters, activators or repressors, such as Hsp70 or Hsp40, immunophilins, Hop, Aha1, p23, cdc37 ... (cf for Nature Struct review Mol Biol (2006), 13, 479).
- Hsp90 has recently been identified as a particularly promising target in anticancer therapy (see for review: Moloney A. and Workman P., Expert Opin. Biol Ther (2002), 2 (1), 3, Chiosis et al. Drug Discovery Today (2004), 9, 881, Powers M. and Workman P., Endocrine-Related Cancer (2006), 13, S125). This interest is due in particular to the cytoplasmic interactions of Hsp90 with the main Hsp90 client proteins, which are involved in the six mechanisms of tumor progression, as defined by Hanahan D.
- an insensitivity to proliferation stop signals Cdk4, PIkI, Wee1 ... an ability to activate angiogenesis: VEGF-R, FAK, HIF-1, Akt ...
- Hsp90 consists of two N- and C-terminal domains separated by a highly charged region.
- the dynamic interaction between these two domains determines the conformation of the chaperone and its activation state.
- the association of client proteins mainly depends on the nature of the co-chaperones Hsp70 / Hsp40, Hop60 etc ... and the nature of the ADP or ATP nucleotide linked to the N-terminal domain of Hsp90.
- the hydrolysis of ATP to ADP and the ADP / ATP exchange factor control all of the chaperone "machinery", and it has been shown that it is sufficient to prevent the hydrolysis of ATP to ADP.
- Parkinson's disease This disease is due to the progressive loss of dopaminergic neurons and characterized by the aggregation of the alpha-synuclein protein.
- Geldanamycin has been shown to protect Drosophila from the toxicity of alpha-synuclein on dopaminergic neurons.
- Focal cerebral ischemia It has been shown in a rat animal model that geldanamycin protects the brain against cerebral ischemia, due to the effect of stimulating the transcription of genes coding for "heat”. -shock proteins "by an Hsp0O inhibitor.
- Alzheimer's Disease and Multiple Sclerosis are due in part to the expression of pro-inflammatory cytokines and the inducible form of NOS (Nitric oxide synthase) in the brain, and this expression is suppressed by the stress response.
- NOS Nitric oxide synthase
- the Hsp90 inhibitors are capable of garnering this stress response, and it has been shown in vitro that geldanamycin and 17-AAG exhibit anti-inflammatory activity in brain glial cells (J. Neuroscience Res. 2002), 67, 461).
- Amyotrophic lateral sclerosis This neurodegenerative disease is due to the progressive loss of motor neurons.
- Arimoclomol a heat-shock protein inducer, has been shown to delay disease progression in an animal model (Nature Medicine (2004), 10, 402). Since an Hsp90 inhibitor is also an inducer of shock (MoI, CeII Biol (1999), 19, 8033; Mol. CeII Biol. (1998), 18, 4949), it is probable that a beneficial effect could be obtained also in this pathology for this type of inhibitors. .
- Hsp90 protein could potentially be useful in various diseases, other than the cancer mentioned above, such as parasitic, viral, fungal, or neurodegenerative diseases, by direct action on Hsp90 and special client proteins.
- diseases other than the cancer mentioned above, such as parasitic, viral, fungal, or neurodegenerative diseases, by direct action on Hsp90 and special client proteins.
- Some examples are presented below: vi) malaria: Plasmodium falciparum Hsp90 protein
- Toxoplasmosis Toxoplasma gondii, the parasite responsible for toxoplasmosis, has a chaperone protein Hsp90, for which it has been shown induction during conversion tachyzoite-bradyzoite, corresponding to the passage of chronic infection to active toxoplasmosis.
- Hsp90 chaperone protein
- Hsp90 protein potentiates the evolution of drug resistance, allowing new mutations to develop. Therefore, an inhibitor of Hsp90, alone or in combination with other antifungal therapy, may be useful in the treatment of some resistant strains (Science (2005), 309, 2185).
- the anti-Hsp90 antibody developed by Neu Tec Pharma demonstrates activity against C. albicans, sensitive and resistant to fluconazole, C. krusei, C. tropicalis, C. glabrata, C. lusitaniae and C. parapsilosis in vivo ( Current Molecular Medicine
- Hepatitis B Hsp90 is one of the host proteins that interacts with hepatitis B virus reverse transcriptase during the replication cycle of the virus. It has been shown that geldanamycin inhibits the replication of viral DNA and I 1 encapsulation of viral RNA
- Hepatitis C The human Hsp90 protein participates in the cleavage step between the NS2 and NS3 proteins by the viral protease.
- Geldanamycin and radicicol are capable of inhibiting this NS2 / 3 cleavage in vitro (Proc Natl Acad Sci USA (2001), 98, 13931).
- Herpes virus Geldanamycin has demonstrated activities to inhibit the replication of HSV-1 virus in vitro, with a good therapeutic index (Antimicrobial Agents and Chemotherapy (2004), 48, 867).
- Hsp90 Inhibitors are compounds of the benzoquinoid ansamycin family, in particular Geldanamycin (1) and Herbimycin A.
- Benzoquinoid ansamycins are macrocycles that have a substituted aliphatic chain linking two non-adjacent positions of a benzoquinone ring.
- Geldanamycin was the first molecule of this isolated family (De Boer, C. et al., J. Antibiot, (1970), 23, 442, Sasaki, K. et al.
- Novel geldanamycin derivatives have recently been described (WO2006016773 / US6855705 / US2005026894 / WO2006050477 / US 2006205705 / WO2006228405 / WO 2007001049).
- Radicicol is also a naturally occurring Hsp90 inhibitor (Roe SM et al., J. Med Chem. (1999), 42, 260-66). However, if it is by far the best in vitro inhibitor of Hsp90, its metabolic instability towards sulfur nucleophiles makes it difficult to use in vivo. Much more stable oximes derivatives such as KF 55823 or KF 25706 have been developed by Kyowa Hakko Kogyo (Soga et al., Cancer Research (1999), 59, 2931-2938).
- Radicicol 55823 Structures of natural origin related to radicicol have also been recently described, such as zearalenone by Conforma Therapeutics (WO 03041643) or zearalanol acetate.
- US2006089495 discloses mixed compounds comprising a quinone ring, such as ansamycin derivatives, and a resorcinol ring such as radicicol analogs, as Hsp90 inhibitors.
- novobiocin binds to a different ATP site located in the C-terminal domain of the protein (Itoh H. et al, Biochem J. (1999), 343, 697 -703 Recently, simplified analogues of Novobiocine have been identified as more potent
- Patent application WO 2006/050501 claims Novobiocine analogs as Hsp90 inhibitors.
- a depsipeptide named Pipalamycin or ICH 01 has also been described as a noncompetitive inhibitor of the ATP site of Hsp90 (J. Pharmacol Exp Ther (2004), 310, 1288).
- Sherperdine a KHSSGCAFL nonapeptide, mimics a portion of the Survivin sequence K79-K90 (KHSSGCAFLSVK) and blocks the interaction of the IAP family proteins with Hsp90 in vitro (WO 2006014744).
- Small peptides including an Otoferline type sequence (YSLPGYMVKKLLGA), have recently been described as Hsp90 inhibitors (WO2005072766).
- Purines such as PU3 compounds (Chiosis et al., Chem Biol.
- Patent application FR2880540 claims another family of Hsp90 inhibitory purines.
- Patent application WO2004 / 072080 claims a family of 8-heteroaryl-6-phenylimidazo [1,2-a] pyrazines as modulators of hsp90 activity.
- Patent application WO2005 / 028434 claims aminopurines, aminopyrrolopyrimidines, aminopyrazolopyrimidines and aminotriazolopyrimidines as Hsp90 inhibitors.
- the patent application WO2004 / 050087 claims a family of pyrazoles useful for treating pathologies related to the inhibition of "Heat Shock Proteins" such as the Hsp90 chaperone.
- WO2006 / 018082 claims another family of pyrazoles as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2005 / 06322 claims a family of resorcinol derivatives as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2005 / 051808 claims a family of resorcinylbenzoic acid derivatives as Hsp90 inhibitors.
- Proteins' such as the Hsp90 chaperone.
- WO2006 / 010595 claims a family of indazoles as Hsp90 inhibitors.
- WO2006 / 010594 claims a family of dihydrobenzimidazolones as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2006 / 055760 (Synta Pharma) claims a family of diaryl-triazole as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2006 / 087077 (Merck) claims a family of (s-triazol-3-yl) phenols as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2006 / 091963 claims families of tetrahydroindolones and tetrahydroindazolone as Hsp90 inhibitors.
- Patent Application DE10200509440 claims a family of thienopyridines as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2006 / 095783 claims a family of triazoles as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2006101052 claims a family of acetylenic derivatives as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2006105372 claims a family of alkynyl pyrrolo [2,3-d] pyrimidines as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2006109075 (Astex) claims a family of benzamides as HspOO inhibitors.
- Patent application WO2006109085 (Astex) claims a family of hydroxybenzamides as Hsp90 inhibitors.
- Patent application JP200606755 (Nippon Kayaku) claims a family of pyrazoles as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2006117669 claims a family of hydroxyarylcarboxamides as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2006123061 claims families of azabenzimidazolylfluorenes and benzimidazolylfluorenes as Hsp90 inhibitors.
- Patent Application WO2007017069 (Merck Gmbh) claims adenine derivatives as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2007021877 claims a family of arylimidazoles as Hsp90 inhibitors.
- Patent application WO2007021966 claims a family of arylpyrazoles as Hsp90 inhibitors.
- the present invention relates to products of formula (I)
- W represents the hydrogen atom or one of the following radicals: - (C1-C4) alkyl, - (C1-C4) alkenyl, -CO- (C1-C3) alkyl, -CO- (CI-C3) alkenyl, -CO-NH- (Cl-C 2) alkyl, -CO-NH- (Cl-C 2) alkenyl or -CO-NH 2; the carbon C15 of said products of formula (I) having the stereochemical configuration R or S, and the double bond between the C4 and C5 carbons of said products of general formula (I) having an E or Z geometry.
- A represents the ring a
- the carbon C15 has the stereochemical configuration R and the double bond between the carbons C4 and C5 is of geometry E
- A represents the ring b
- the carbon C15 has the stereochemical configuration R or S and the double bond between the carbons C4 and C5 are of Z geometry
- A represents the ring c
- the C15 carbon has the stereochemical configuration R or S and the double bond between the C4 and C5 carbons is of Z geometry
- alkyl radical denotes a linear or branched radical containing 1, 2, 3 or 4 carbon atoms chosen from methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl or tert-butyl radicals,
- alkenyl radical denotes a linear or branched radical containing 2, 3 or 4 carbon atoms chosen from vinyl, allyl, propenyl, butenyl or isobutenyl radicals,
- alkylamino or alkenylamino radicals NH- (C1-C2) alkyl and -NH- (C1-C2) alkenyl as defined above are such that the alkyl and alkenyl radicals are chosen from the radicals mentioned above. Mention may be made, for example, of methylamino, ethylamino or vinylamino radicals.
- the present invention relates in particular to the products of formula (I) as defined above, corresponding to the following formulas: product A AER A A A A A A A A A A A A 3 03677380 product B1 A003677378 type bSZ
- patient refers to humans but also other mammals.
- Prodrug refers to a product that can be converted in vivo by metabolic mechanisms (such as hydrolysis) into a product of formula (I).
- metabolic mechanisms such as hydrolysis
- an ester of a product of formula (I) containing a hydroxyl group can be converted by in vivo hydrolysis to its parent molecule.
- an ester of a product of formula (I) containing a carboxy group can be converted by hydrolysis in vivo into its parent molecule.
- hydroxyl group-containing esters of the formula (I) such as acetates, citrates, lactates, tartrates, malonates, oxalates, salicylates, propionates, succinates, fumarates, maleates, methylene bisulfates and the like.
- hydroxyl-containing products of the formula (I) can be prepared from acidic residues such as those described by Bundgaard et al. al., J. Med.
- these esters include, in particular, substituted (aminomethyl) benzoates, dialkylamino-methylbenzoates in which the two alkyl groups may be bonded together or may be interrupted by an oxygen atom or by a optionally substituted nitrogen atom is an alkylated nitrogen atom or else morpholino-methyl) benzoates, eg 3- or 4- (morpholinomethyl) -benzoates, and (4-alkylpiperazin-1-yl) benzoates, eg 3- or 4- (4-alkylpiperazin-1-yl) benzoates.
- the carboxyl group (s) of the products of formula (I) may be salified or esterified by the various groups known to those skilled in the art, among which may be mentioned, by way of non-limiting examples, the following compounds.
- mineral bases such as, for example, one equivalent of sodium, potassium, lithium, calcium, magnesium or ammonium or organic bases such as, for example, methylamine, propylamine, trimethylamine, diethylamine, triethylamine, N, N-dimethylethanolamine, tris (hydroxymethyl) amino methane, ethanolamine, pyridine, picoline, dicyclohexylamine, morpholine, benzylamine, procaine, lysine , arginine, histidine, N-methylglucamine,
- the alkyl radicals to form alkoxycarbonyl groups such as, for example, methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl or benzyloxycarbonyl, these alkyl radicals being able to be substituted by radicals chosen for example from among the atoms halogen, hydroxyl, alkoxy, acyl, acyloxy, alkylthio, amino or aryl groups such as, for example, in chloromethyl, hydroxypropyl, methoxymethyl, propionyloxymethyl, methylthiomethyl, dimethylaminoethyl, benzyl or phenethyl groups.
- alkoxycarbonyl groups such as, for example, methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl or benzyloxycarbonyl
- these alkyl radicals being able to be substituted by radicals chosen for example from among the atoms halogen, hydroxyl,
- esterified carboxy is meant for example radicals such as alkyloxycarbonyl radicals, for example methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, propoxycarbonyl, butyl or tert-butyloxycarbonyl, cyclobutyloxycarbonyl, cyclopentyloxycarbonyl or cyclohexyloxycarbonyl.
- alkyloxycarbonyl radicals for example methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, propoxycarbonyl, butyl or tert-butyloxycarbonyl, cyclobutyloxycarbonyl, cyclopentyloxycarbonyl or cyclohexyloxycarbonyl.
- radicals formed with easily cleavable ester residues such as the methoxymethyl and ethoxymethyl radicals; acyloxyalkyl radicals such as pivaloyloxymethyl, pivaloyloxyethyl, acetoxymethyl or acetoxyethyl; alkyloxycarbonyloxyalkyl radicals such as methoxycarbonyloxy methyl or ethyl radicals, isopropyloxycarbonyloxy methyl or ethyl radicals.
- ester radicals can be found, for example, in European Patent EP 0 034 536.
- aminodated carboxy is meant radicals of the -CONH 2 type whose hydrogen atoms are optionally substituted by one or two alkyl radicals to form alkylamino or dialkylamino radicals, themselves optionally substituted as indicated above or below, these radicals may also form with the nitrogen atom to which they are bound a cyclic amine as defined above.
- Salified carboxy means salts formed for example with an equivalent of sodium, potassium, lithium, calcium, magnesium or ammonium. Mention may also be made of salts formed with organic bases such as methylamine, propylamine, trimethylamine, diethylamine and triethylamine. The sodium salt is preferred.
- stereoisomerism can be defined in its broad sense as the isomerism of compounds having the same developed formulas, but whose different groups are arranged differently in space, such as in particular in monosubstituted cyclohexanes whose substituent can be in axial or equatorial position, and the different possible rotational conformations of the ethane derivatives.
- stereoisomerism due to the different spatial arrangements of fixed substituents, either on double bonds or on rings, often called geometric isomerism or cis-trans isomerism.
- stereoisomer is used in the present application in its broadest sense and therefore relates to all of the compounds indicated above.
- the present invention particularly relates to the products of formula (I) as defined above whose names follow:
- the products of formula (I) corresponding to formula (I) according to the present invention may be prepared according to the methods known to those skilled in the art and particularly according to the methods described below: the present invention thus also relates to the methods of synthesis of the products of formula (I) according to the present invention and in particular the general methods of synthesis described in the diagrams below.
- the present invention relates in particular to a process for the synthesis of the products of formula (I) as defined above in which the double bond between carbons 4 and 5 is of Z geometry. This process is characterized by a closure of the cycle by a reaction. macrolactamization between the carbonyl in position 1 and the nitrogen atom of aniline carried by carbon 20.
- the present invention relates in particular to a process for the synthesis of the products of formula (I) as defined above in which the double bond between carbons 4 and 5 is of geometry E. This process is characterized by ring closure by a metathesis reaction between carbons 4 and 5.
- the carbon at position 15 is either of configuration R or of configuration S,
- the intermediate moiety C5-C15 1 and brominated NN-diallylaniline 2b, c can be obtained by operating according to Org. Lett. (2007), 9, 145.
- A represents a cycle a
- the carbon at position 15 is either of configuration R or of configuration S,
- the intermediate fragment C5-C15 1 can be obtained by operating according to Org. Lett. (2007), 9, 145.
- brominated N, N-diallylaniline 2a may be prepared according to the scheme below:
- compound 8b, cS, intermediate n-1 of compound 4b, cS described above can lead to compounds of type I bSE and I cSE:
- compound 8b, cR, n-1 intermediate of compound 4b, cR described above can lead to compounds of type I bRE and I cRE:
- the products of the present invention are endowed with valuable pharmacological properties: they have been found to possess, in particular, properties inhibiting the activities of chaperone proteins and in particular their ATPase activities.
- the products of formula (I) can also be used in the veterinary field.
- the invention therefore relates to the application, as medicaments, pharmaceutically acceptable products of general formula (I).
- the subject of the invention is particularly the application as medicaments of the products of formula (I) as defined above, the following names of which are: Carbamate of (4E, 6E, 10E) - (8S, 9S, 12S, 13R, 14S, 16S, 17R) -20-hydroxy-8,13,14,17-tetramethoxy-4,10,12,16-tetramethyl-3-oxo-2-azabicyclo [16.3.1] docasa-1 (22) -4.6, 10, 18,20-hexaen-9-yl
- products of formula (I) being in all the possible isomeric forms racemic, enantiomers and diastereoisomers, as well as the addition salts with mineral and organic acids or with the pharmaceutically acceptable inorganic and organic bases of said products of formula (I).
- the products can be administered parenterally, orally, perlingually, rectally or topically.
- the invention also relates to pharmaceutical compositions, characterized in that they contain, as active ingredient, at least one of the drugs of general formula (I).
- compositions may be presented in the form of injectable solutions or suspensions, tablets, coated tablets, capsules, syrups, suppositories, creams, ointments and lotions.
- These pharmaceutical forms are prepared according to the usual methods.
- the active ingredient can be incorporated into excipients usually used in these compositions, such as aqueous vehicles or not, talc, gum arabic, lactose, starch, magnesium stearate, cocoa butter, fats of animal or vegetable origin, paraffinic derivatives, glycols, various wetting agents, dispersing or emulsifying agents, preservatives.
- the usual dose variable depending on the subject treated and the condition in question, can be, for example, from 10 mg to 500 mg per day in humans, orally.
- the present invention thus relates to the use of products of formula (I) as defined above or of pharmaceutically acceptable salts of said products of formula (I) for the preparation of medicaments intended to inhibit the activity of chaperone proteins, and especially of Hsp90.
- the present invention thus relates particularly to the use of products of formula (I) as defined above or of pharmaceutically acceptable salts of said products of formula (I) in which the chaperone protein is HSP90.
- the present invention thus relates to the use of products of formula (I) as defined above or of pharmaceutically acceptable salts of said products of formula (I) for the preparation of a medicament intended to prevent or treat a disease characterized by the disruption of the activity of a chaperone protein Hsp90 type and in particular such a disease in a mammal.
- the present invention relates to the use of products of formula (I) as defined above or of pharmaceutically acceptable salts of said products of formula (I) for the preparation of a medicament intended to prevent or treat a disease belonging to the following group : neurodegenerative diseases such as Huntington's disease, Parkinson's disease, focal cerebral ischemia, Alzheimer's disease, multiple sclerosis and amyotrophic lateral sclerosis, malaria, Brugia and Bancroft filariasis, toxoplasmosis, treatment-resistant fungi, hepatitis B, hepatitis C, herpes virus, dengue (or tropical flu), spinal and bulbar muscular atrophy, mesangial cell proliferation disorders, thrombosis , retinopathies, psoriasis, muscle degeneration, diseases in oncology, cancers.
- neurodegenerative diseases such as Huntington's disease, Parkinson's disease, focal cerebral ischemia, Alzheimer's disease, multiple sclerosis and amyotrophic lateral sclerosis, malaria, Brugi
- the present invention thus relates to the use of products of formula (I) as defined above or of pharmaceutically acceptable salts of said products of formula (I) for the preparation of a medicament for treating diseases in oncology.
- the present invention particularly relates to the use of products of formula (I) as defined above or pharmaceutically acceptable salts of said products of formula (I) for the preparation of a medicament for treating cancers.
- the present invention is particularly interested in the treatment of solid or liquid tumors and in the treatment of cancers resistant to cytotoxic agents.
- the present invention thus relates in particular to the use of products of formula (I) as defined in any one of the preceding claims or of pharmaceutically acceptable salts of said products of formula (I) for the preparation of a medicament intended for treating cancers including lung, breast and ovarian cancers, gastric cancers, glioblastomas, chronic myeloid leukemias, acute lymphoblastic leukemias, prostate, pancreatic and colon cancers, metastatic melanomas, thyroid tumors and renal carcinomas.
- cancers including lung, breast and ovarian cancers, gastric cancers, glioblastomas, chronic myeloid leukemias, acute lymphoblastic leukemias, prostate, pancreatic and colon cancers, metastatic melanomas, thyroid tumors and renal carcinomas.
- Hsp90 inhibitors there may be mentioned, without limitation:
- non-small cell lung cancers breast cancers, ovarian cancers and glioblastomas that overexpress EGF-R wt and / or mutated or HER2;
- the present invention is more particularly concerned with the treatment of breast, colon and lung cancer.
- the present invention also relates to the use of products of formula (I) as defined above or of pharmaceutically acceptable salts of said products of formula (I) for the preparation of a medicament intended for the chemotherapy of cancers.
- the products of formula (I) according to the present invention may be used alone or in combination with chemotherapy or radiotherapy or alternatively in combination with other therapeutic agents.
- the present invention thus relates in particular to pharmaceutical compositions as defined above additionally containing active principles of other cancer chemotherapy drugs.
- Such therapeutic agents may be anti-tumor agents commonly used.
- inhibitors of protein kinases include butyrolactone, flavopiridol, 2- (2-hydroxyethylamino) -6-benzylamino-9-methylpurine, olomucine, Glivec and Iressa.
- the products of formula (I) according to the present invention can thus also advantageously be used in combination with anti-proliferative agents: by way of examples of such anti-proliferative agents but without however being limited to this list, mention may be made of the aromatase inhibitors, antiestrogens, topoisomerase I inhibitors, topoisomerase II inhibitors, microtubule-active agents, alkylating agents, histone deacetylase inhibitors, farnesyl transferase inhibitors, COX inhibitors -2, MMP inhibitors, mTOR inhibitors, antineoplastic antimetabolites, platinum compounds, proteasome inhibitors, such as Bortezomib, Histone Decalactylase Inhibitors (HDACs), such as SAHA, and particularly inhibitors of HDAC ⁇ , the compounds which decrease the activity of protein kinases and in particular tyrosine kinase receptor inhibitors, and in particular EGF-R and Her2 (small molecules and antibodies) and also anti-angiogenic compounds,
- anti-microtubule agents such as taxoids, epothilones, vinka-alkaloids, alkylating agents such as cyclophosphamide, DNA-intercalating agents such as cis-platinum, and the like.
- oxaliplatin interactive agents on topoisomerase such as camptothecin and derivatives, anthracyclines such as adriamycin, antimetabolites such as 5-fluorouracil and derivatives and the like.
- reaction medium The temperature of the reaction medium is slowly raised to ambient temperature, and after 2 hours, 2 ml of methanol and then 30 ml of water are carefully added.
- the aqueous phase is extracted with diethyl ether (3 x 100 mL).
- the combined organic phases are dried over magnesium sulphate and concentrated under vacuum. After purification by flash chromatography on silica gel, eluting with petroleum ether, ⁇ /, ⁇ / -diallyl- (3-bromo-5-iron) is obtained.
- step 3 To a solution of compound obtained in step 3 (642 mg, 0.846 mmol, 1 equiv.) In dichloromethane (50 mL) are added N, N- dimethylbarbituric (NDMBA 1793 mg, 5.08 mmol, 6 equiv) and palladium tetrakistriphenylphosphine (94 mg, 0.08 mmol, 0.1 equiv). After refluxing the dichloromethane for 2 hours, the reaction mixture is concentrated in vacuo. The resulting red solid is dissolved in ethyl acetate (200 ml) and washed with saturated aqueous sodium hydrogencarbonate solution (15 ml). The organic phase is dried over magnesium sulfate.
- N, N- dimethylbarbituric NDMBA 1793 mg, 5.08 mmol, 6 equiv
- palladium tetrakistriphenylphosphine 94 mg, 0.08 mmol, 0.1 equiv
- the crude reaction product is purified by flash chromatography on silica gel (eluent: gradient of pentane and diethyl ether 7/3 to 1/1) to give 3-Fe / f-butyldimethylsilyloxy.
- a solution of the aniline obtained in step 4 (198 mg, 0.292 mmol, 1 equiv) is added via a cannula.
- the reaction medium is diluted with diethyl ether (15 mL) and a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (10 mL) is added.
- the aqueous phase is extracted successively with diethyl ether (40 mL) and ethyl acetate (40 mL).
- the organic phases are combined and dried over magnesium sulfate.
- step 5 To a solution of the compound obtained in step 5 (113 mg, 0.143 mmol, 1 equiv) in anhydrous toluene (150 ml) is added Hoveyda- Grubbs H catalyst (18 mg, 0.028 mmol, 0.2 equiv). . After 4.5 hours of refluxing toluene, the reaction mixture is concentrated in vacuo.
- the crude reaction product is purified by preparative TLC (silica gel, eluent: petroleum ether / ethyl acetate 8/2) to yield (4E, 6E, 10E) - (8S.9S, 12S, 13R, 14S, 16S, 17R) -9,20-bis (tert-butyldimethylsilyloxy) -8,13,14,17-tetramethoxy-4,10,12,16-tetramethyl-2-azabicyclo [16.3.1] docosa- 1 (22) , 4,6,10,18,20-hexaen-3-one (56.2 mg, 0.075 mmol, 53%), the characteristics of which are as follows:
- step 6 To a solution of the macrolactam obtained in step 6 (21.8 mg, 0.028 mmol, 1 equiv) in THF (5 ml) is added a solution of tetra-n-butylammonium fluoride (0.35 ml, 1 M in THF, 0.35 mmol, 13 equiv). After 8 hours at room temperature, tetra-n-butylammonium fluoride (0.35 ml, 13 equiv) was added and the reaction mixture was stirred overnight. The reaction medium is then diluted with diethyl ether (10 ml) and a saturated aqueous solution of ammonium chloride (4 ml) is added.
- the aqueous phase is extracted with ethyl acetate (3 x 10 mL).
- the organic phases are combined and dried over magnesium sulfate.
- the crude reaction product is purified by flash chromatography on silica gel (eluent: pentane / ethyl acetate 1/1 and then ethyl acetate) to yield (4E, 6E, 10E) - (8S , 9S, 12S, 13R, 14S, 16S, 17R) -9,20-dihydroxy-8,13,14,17-tetramethoxy-4,10,12,16-tetramethyl-2-azabicyclo [16.3.1] docosa 1 (22), 4,6,10,18,20-hexaen-3-one (7.3 mg, 0.014 mmol, 50%), the characteristics of which are as follows:
- step 7 To a solution of the macrolactam obtained in step 7 (7.5 mg, 0.014 mmol, 1 equiv) in dichloromethane (3 ml) was added trichloroacetyl isocyanate (10 ⁇ l, 0.084 mmol, 6 equiv). After 35 minutes at room temperature the reaction mixture is evaporated in vacuo and dissolved in methanol (2 mL). Potassium carbonate (25 mg) is then added and the reaction mixture is stirred for 2 h at room temperature. After evaporation under vacuum, the reaction mixture is dissolved in ether (10 mL) and the organic phase is washed with water (1 mL) and brine (1 mL).
- the aqueous phase is extracted with diethyl ether (5 mL).
- the organic phases are combined and dried over magnesium sulfate.
- the crude reaction was purified by preparative TLC (eluent: petroleum ether / ethyl acetate 1/1) to yield the carbamate (4 £, 6E, 10E) - (I 8S 9S, 12S, 13R14S , the 16S 17R) - 20-hydroxy-8, 13,14,17-tetramethoxy-4, 10,12,16-tetramethyl-3-oxo-2-azabicyclo [16.3.1] docosa-1 (22) 4 , 6,10,18,20-hexa-9-yl (2.3 mg, 0.0041 mmol, 30%), the characteristics of which are as follows:
- Example 2 "15-EO / ' -Herbim Vein A" or carbamate of (4 £, 6Z, 10E) - (8S, 9SJ2SJ3R, 14SJ6SJ7S) -8J3] -4-tetramethoxy-4 > 10 > 12 > 16-tetramethyl-3 , 20,22-trioxo-2-azabicyclo [16.3.1] docasa-1 (21) -4,6,10,18-pentaen-2-yl (compound of type I bSZ) Step 1:
- N, N-diallyl-3-bromo-2,5-dimethoxyaniline (475 mg, 1.52 mmol, 5 equiv), which can be obtained according to Canova S. et al., Org. Lett (2007), 9, 145-8, in anhydrous diethyl ether (8 ml) cooled to -78 0 C is added n-butyllithium (0.6 ml, 2.5 M in hexane 1.5 mmol, equiv). After 30 minutes at room temperature, the reaction medium is again cooled to -78 ° C.
- step 2 To a solution of the aniline obtained in step 2 (85 mg, 0.14 mmol, 1 equiv) in anhydrous THF (10 ml) is added triethylamine (0.12 mL, 0.84 mmol). , 6 equiv.), A catalytic amount of ⁇ -dimethylaminopyridine (5 mg) and tert-butyloxycarbonyl anhydride (91 mg, 0.42 mmol, 3 equiv).
- step 3 To a solution of the protected alcohol obtained in step 3 (92 mg, 0.114 mmol, 1 equiv) in THF (5 ml) was added tetrabutylammonium fluoride (0.6 ml, 1M in THF, 0.6 mmol, 5 equiv.). After stirring for 24 hours at room temperature, saturated aqueous sodium chloride solution (5 ml) is added. The aqueous phase is extracted with diethyl ether (3 x 15 ml). The organic phases are combined, dried over magnesium sulfate and concentrated in vacuo to yield the corresponding deprotected alcohol which is used without further purification.
- tetrabutylammonium fluoride 0.6 ml, 1M in THF, 0.6 mmol, 5 equiv.
- step 4 To a solution of the acrylic ester obtained in step 4 (45 mg, 0.06 mmol, 1 equiv) in degassed anhydrous toluene (12 ml) is added second generation Grubbs G2 catalyst (8 mg, 15 mol%). After 2 hours of refluxing toluene, catalyst G2 is added (6 mg, 10 mol%) and the reaction mixture is heated for a further 4 hours.
- Step 7 corresponds to the scheme below in which the successive reactions are chained without particular purification of the various intermediates.
- the crude reaction product is purified by preparative TLC on silica gel (eluent: dichloromethane / methanol 9/1) to yield the corresponding macrolactam (6 mg, 0.01 mmol, 41%), contaminated with a non-organic impurity. identified, but used without further purification.
- This carbamate (0.01 mmol, 1 equiv) is dissolved in a mixture of acetonitrile and water (10/1, 2.2 mL) and a 1 M aqueous solution of cerium ammonium nitrate (CAN , 20 .mu.l, 20 equiv.) was added at -10 0 C. After 0.5 hour at -10 0 C 1 water (2 mL) was added and the aqueous phase is extracted with dichloromethane (5 x 5mL). The organic phases are combined and dried over magnesium sulfate.
- CAN cerium ammonium nitrate
- the crude reaction product is purified by preparative TLC on silica gel (eluent: 9/1 dichloromethane / methanol) and then on a small silica column (eluent: ethylel acetate) to yield the (4E) carbamate.
- Example 3 (4E, 6Z, 10E) - (8S, 9S, 12S, 13K, 14S, 16S, 17R) -9-carbamoyloxy-8,13,14-trimethoxy-4,10,12,16-tetramethyl carbamate -3,20,22-trioxo-2-azabicyclo [16.3.1] docasa-1 (21) -4,6,10,18-pentaen-17-yl or "15-demethoxy-15-carbamoyloxy-herbimycin A" (compound of type I bRZ) Step 1:
- N, N-diallyl-3-bromo-2,5-dimethoxyaniline (475 mg, 1.52 mmol, 5 equiv), which can be obtained according to Canova S. et al, Org. Lett (2007), 9, 145-8, in anhydrous diethyl ether (8 ml) cooled to -78 0 C is added n-butyllithium (0.6 ml, 2.5 M in hexane 1.5 mmol, equiv). After 30 minutes at room temperature, the reaction medium is again cooled to -78 ° C.
- 2,6,8-trimethyldodeca-7,11-dien-1-ol (133 mg, 0.197 mmol, 1 equiv) in cyclohexane (10 mL) and dichloromethane (7 mL) are added para-methoxybenzyl trichloroacetimidate. (111 mg, 0.393 mmol, 2 equiv) in solution in dichloromethane (3 ml) and camphorsulfonic acid (5 mg, 0.02 mmol, 0.1 equiv). After 24 hours of agitation at temperature At room temperature, a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (10 ml) is added. The aqueous phase is extracted with diethyl ether (3 x 25 mL).
- step 3 To a solution of the aniline obtained in step 3 (103 mg, 0.144 mmol, 1 equiv) in anhydrous THF (8 mL) is added triethylamine (0.12 mL, 0.86 mmol, 6 mL). equiv.), a catalytic amount of ⁇ -dimethylaminopyridine (5 mg) and tert-butyloxycarbonyl mg, 0.43 mnnol, 3 equiv.).
- step 4 To a solution of the protected alcohol obtained in step 4 (131 mg, 0.144 mmol, 1 equiv) in THF (5 mL) was added tetrabutylammonium fluoride (0.72 mL, 1M in THF, 0.72 mmol, equiv.). After stirring for 24 hours at room temperature, a saturated aqueous solution of sodium chloride (5 ml) is added. The aqueous phase is extracted with diethyl ether (2 x 15 ml). The organic phases are combined and dried over magnesium sulfate and concentrated in vacuo to yield the corresponding deprotected alcohol which is used without further purification.
- step 5 To a solution of the acrylate obtained in step 5 (94 mg, 0.110 mmol, 1 equiv) in anhydrous toluene (22 ml) was added second generation Grubbs G2 catalyst (18.6 mg, 20 mol). %). After refluxing the toluene for 3 hours, catalyst G2 is added (11 mg, 12 mol%) and the reaction mixture is heated for a further 3 hours.
- step 7 To a solution of the biscarbamate obtained in step 7 (38 mg, 0.042 mmol, 1 equiv.) In dichloromethane (3 mL) cooled to 0 ° C. is added trifluoroacetic acid (250 ⁇ l, 3.33 mmol, 80 equiv.). After 10 minutes at 0 ° C. and 7 h at room temperature, toluene (1 mL) is added and the reaction mixture is concentrated under vacuum and then dissolved in ethyl acetate (10 mL). The organic phase is washed with a saturated aqueous solution of sodium carbonate (2 mL) and with a saturated aqueous solution of sodium chloride (2 mL).
- the organic phase is dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo.
- the reaction crude obtained is directly engaged without further purification.
- reaction crude obtained is directly engaged without further purification.
- diisopropylethylamine 360 ⁇ l, 2.08 mmol, 50 equiv
- bis (2-oxo-3-oxazolidinyl) phosphinyl chloride BOPCI, 53 mg, 0.208 mmol, equiv.
- step 8 To a solution of macrolactam obtained in step 8 (4 mg, 0.007 nrirnol, 1 equiv.) In dichloromethane (1 5 mL) was added trichloroacétylisocyanate (10 ⁇ l_ W 1 .08 mmol, 10 equiv.). After 40 minutes at room temperature, the reaction mixture is concentrated in vacuo and then methanol (1.5 ml) and potassium carbonate (15 mg) are added. After 1.5 hours at room temperature, the methanol is evaporated under vacuum and the reaction mixture is dissolved in diethyl ether (10 mL). The organic phase obtained is washed with water (1 mL) and a saturated aqueous solution of sodium chloride (1 mL). The aqueous phase is extracted with diethyl ether (3 x 5 mL). The organic phases are combined, dried over magnesium sulfate and concentrated in vacuo to yield the expected dicarbamate which is used without further purification.
- This dicarbamate (0.007 mmol, 1 equiv) is dissolved in a mixture of acetonitrile and water (9/1, 5 ml) and a 1 M aqueous solution of cerium ammonium nitrate (20 ⁇ l, 2 ml). 9 equiv.) Is added at -10 ° C. After 1 hour at -10 ° C., water (2 ml) is added and the aqueous phase is extracted with dichloromethane (5 ⁇ 5 ml). The organic phases are combined and dried over magnesium sulfate.
- Example 4 pharmaceutical composition:
- the present invention also includes all pharmaceutical compositions prepared with any product of formula (I) according to the present invention.
- the inorganic phosphate released during the hydrolysis of ATP by the ATPase activity of Hsp82 is quantified by the green malachite method.
- this reagent there is formation of the inorganic phosphate-molybdate-malachite green complex which absorbs at a wavelength of 620 nm.
- the products to be evaluated are incubated in a reaction volume of 30 ⁇ l, in the presence of 1 ⁇ M Hsp82 and 250 ⁇ M substrate (ATP) in a buffer composed of 50 mM Hepes-NaOH (pH 7.5), 1 mM DTT, 5 mM MgCl 2 and 50 mM KCl at 37 ° C. for 60 min.
- a range of phosphate inorganic between 1 and 40 ⁇ M is formed in the same buffer.
- the ATPase activity is then revealed by the addition of 60 .mu.l of the reagent biomol green (Tebu).
- the absorbance of the different wells is measured using a microplate reader at 620 nm.
- the inorganic phosphate concentration of each sample is then calculated from the calibration curve.
- the ATPase activity of Hsp82 is 1 expressed as the concentration of inorganic phosphate produced in 60 min.
- the effect of the various products tested is expressed as a percentage inhibition of ATPase activity.
- the formation of ADP due to the ATPase activity of Hsp82 was used to develop another method for evaluating the enzymatic activity of this enzyme by application of an enzymatic coupling system involving pyruvate kinase (PK ) and lactate dehydrogenase (LDH).
- PK pyruvate kinase
- LDH lactate dehydrogenase
- PK catalyzes the formation of ATP and pyruvate from phosphoenol-pyruvate (PEP) and ADP produced by HSP82.
- PEP phosphoenol-pyruvate
- the pyruvate formed, substrate of the LDH, is then converted into lactate in the presence of NADH.
- NADH phosphoenol-pyruvate
- the decrease in NADH concentration as measured by the decrease in absorbance at the wavelength of 340 nm is proportional to the concentration of ADP produced by HSP82.
- the tested products are incubated in a reaction volume of 100 ⁇ l of buffer composed of 100 mM Hepes-NaOH (pH 7.5), 5 mM MgCl 2, 1 mM DTT, 150 mM KCl, 0.3 mM NADH, 2.5 mM PEP and 250 ⁇ M ATP.
- This mixture is preincubated at 37 ° C. for 30 min before addition of 3.77 units of LDH and 3.77 units of PK.
- the reaction is initiated by adding the product to be evaluated, in varying concentrations, and Hsp82, at the concentration of 1 .mu.M.
- the measurement of the enzymatic activity of Hsp82 is then carried out, continuously, in a microplate reader, at 37 ° C., at the wavelength of 340 nm.
- the initial speed of the reaction is obtained by measuring the slope of the tangent at the origin of the recorded curve.
- the enzymatic activity is expressed in ⁇ M of ADP formed per minute.
- the effect of the various products tested is expressed as percentage inhibition of ATPase activity according to the coding below:
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Abstract
Produits de formule (I), avec A représente l'un des trois cycles suivants: cycle a, cycle b, cycle c et W représente hydrogène ou -(C1-C4)alkyle, -(C1 -C4)alkényle, -CO-(C1 -C3)alkyle, - CO-(C1-C3)alkényle, -CO-NH-(C1 -C2)alkyle, -CO-NH-(C1 -C2)alkényle ou -CO-NH2; le carbone C15 ayant la configuration stéréochimique R ou S, et la double liaison entre les carbones C4 et C5 ayant une géométrie E ou Z, étant entendu que lorsque A représente le cycle b et le carbone C15 a la configuration stéréochimique R alors W ne représente pas hydrogène ou méthyle, ces produits étant sous toutes les formes isomères et les sels, à titre de médicaments.
Description
NOUVEAUX DERIVES ANALOGUES DE L'HERBIMYCINE A. COMPOSITIONS LES CONTENANT ET UTILISATION
La présente invention concerne de nouveaux composés chimiques de la famille des ansamycines benzoquinoïdes, les compositions qui les contiennent, et leur utilisation comme médicaments.
Plus particulièrement, l'invention concerne, selon un premier aspect, de nouveaux composés chimiques de la famille des ansamycines benzoquinoïdes et notamment nouveaux analogues de l'herbimycine A présentant une activité anticancéreuse, et en particulier une activité inhibitrice de la protéine chaperone Hsp90, et plus particulièrement via l'inhibition de l'activité catalytique de type ATPasique de la protéine chaperone Hsp90.
Protéines Chaperones : Les chaperones moléculaires de la famille « Heat Shock Proteins » (HSPs), classées en fonction de leur masse moléculaire (Hsp27, Hsp40, Hsp70, Hsp90...), sont des éléments clés de l'équilibre entre la synthèse et la dégradation des protéines cellulaires, responsables du repliement correct des protéines. Elles jouent un rôle vital en réponse au stress cellulaire. Les HSPs, et en particulier Hsp90, sont également impliquées dans la régulation de diverses fonctions majeures de la cellule, via leur association avec diverses protéines clients impliquées dans la prolifération cellulaire ou l'apoptose (JoIIy C. et Morimoto R.I., J. N. Cancer lnst..(2000), 92, 1564 ; Smith D.F. et al., Pharmacological Rev. (1998), 50, 493 ; Smith D. F., Molecular Chaperones in the CeII, 165-178, Oxford University Press 2001).
Chaperone Hsp90 et inhibiteurs d'Hsp90 dans le traitement des cancers : La chaperone Hsp90, qui représente 1 à 2% du contenu protéique de la cellule, est une ATPase apparentée à la famille des phosphotransférases GHKL, caractérisées par un repliement commun appelé « Bergerat fold » autour du site de fixation de l'ATP. Cette famille GHKL contient également
des DNA-gyrases, ou topoisomérases de type II, des histidine-kinases bactériennes, des sérine-kinases mitochondriales, les pyruvate- déhydrogénase-kinases humaines et des protéines de réparation comme MutL (cf pour revue Chêne P., Nature Reviews Drug Discovery (2002), 1 , 665).
Afin d'assurer la maturation de ses clients, de même que les autres protéines chaperones, Hsp 90 œuvre de concert avec un certain nombre de co- chaperones et/ou d'adaptateurs, activateurs ou répresseurs, comme Hsp70 ou Hsp40, des immunophilines, Hop, Aha1 , p23, cdc37... (cf pour revue Nature Struct. Mol. Biol. (2006), 13, 479).
Hsp90 a été récemment mise en évidence comme une cible particulièrement prometteuse en thérapie anticancéreuse (cf pour revue : Moloney A. et Workman P., Expert Opin. Biol. Ther. (2002), 2(1), 3 ; Chiosis et al, Drug Discovery Today (2004), 9, 881 ; Powers M. et Workman P., endocrine-Related Cancer (2006), 13, S125). Cet intérêt tient en particulier aux interactions cytoplasmiques d'Hsp90 avec les principales protéines clientes d'Hsp90, protéines qui sont impliquées dans les six mécanismes de progression des tumeurs, tels que définis par Hanahan D. et Weinberg R.A. (CeII (2002), 100, 57-70 ), à savoir : - une capacité à proliférer en l'absence de facteurs de croissance : EGFR- R/HER2, Src, Akt, Raf, MEK, Bcr-Abl, Flt-3 ...
- une capacité à échapper à l'apoptose : forme mutée de p53, mdm2, Akt, survivine ...
- une insensibilité aux signaux d'arrêt de prolifération : Cdk4, PIkI, Wee1 ... - une capacité à activer l'angiogénèse : VEGF-R, FAK, HIF-1 , Akt ...
- une capacité à proliférer sans limite réplicative : hTert ...
- une capacité à envahir de nouveaux tissus et à métastaser : c-Met, FAK ... Parmi les autres protéines clients de Hsp90, des facteurs de transcription, tels que Stat3 ou des récepteurs aux hormones stéroïdiennes comme le récepteur à l'estrogène ou le récepteur à l'androgène, présentent également un intérêt important dans le cadre des thérapies anticancéreuses.
II a été montré récemment que la forme alpha d'Hsp90 avait également un rôle extracellulaire via son interaction avec la métalloprotéase MMP-2, elle- même impliquée dans l'invasion tumorale (Eustace B.K. et al, Nature CeII Biology (2004), 6, 507). Hsp90 est constituée de deux domaines N- et C-terminaux séparés par une région fortement chargée. L'interaction dynamique entre ces deux domaines, coordonnée par la fixation de nucléotides et de co-chaperones, détermine la conformation de la chaperone et son état d'activation. L'association des protéines clients dépend principalement de la nature des co-chaperones Hsp70/Hsp40, Hop60 etc ... et de la nature du nucléotide ADP ou ATP liée au domaine N-terminal de Hsp90. Ainsi l'hydrolyse de l'ATP en ADP et le facteur d'échange ADP/ATP contrôlent l'ensemble de la « machinerie » chaperone, et il a été montré qu'il suffit de prévenir l'hydrolyse de l'ATP en ADP - activité ATPasique d'Hsp90 - pour libérer dans le cytoplasme des protéines-clientes qui seront alors dégradées par le protéasome (Neckers L et Neckers K, Expert Opin. Emerging Drugs (2002), 7, 277; Neckers L, Current Médicinal Chemistry, (2003), 10, 733; Piper P.W., Current Opin. Invest. New Drugs (2001), 2, 1606) .
Rôle d'HspθO et de ses inhibiteurs dans des pathologies autres que le cancer :
Diverses pathologies humaines sont la conséquence d'un repliement incorrect de protéines clés, conduisant notamment à des maladies neurodégénératives suite à l'agrégation de certaines protéines comme dans les maladies d'Alzheimer et de Huntington ou les maladies liées aux prions (Tytell M. et Hooper P.L., Emerging Ther. Targets (2001), 5, 3788). Dans ces pathologies, des approches visant à inhiber Hsp90 dans le but d'activer les voies de stress (Hsp70 par exemple) pourraient être bénéfiques (Nature Reviews Neuroscience (2005), 6, 11). Quelques exemples sont cités ci- dessous :
i) La maladie de Huntinqton : Cette maladie neurodégénérative est due à une extension de triplets CAG dans l'exon 1 du gène codant pour la protéine huntingtine. Il a été montré que la geldanamycine inhibe l'agrégation de cette protéine du fait de la surexpression des chaperones Hsp70 et Hsp40 (Human Molecular Genetics (2001),
10, 1307). ii) La maladie de Parkinson : Cette maladie est due à la perte progressive des neurones dopaminergiques et caractérisée par l'aggrégation de la protéine alpha-synuclein. Il a été montré que la geldanamycine est capable de protéger la drosophile contre la toxicité de l'alpha-synuclein sur les neurones dopaminergiques. iii) L'ischémie cérébrale focale : II a été montré dans un modèle animal de rat que la geldanamycine protège le cerveau contre l'ischémie cérébrale, et ce du fait de l'effet de stimulation de la transcription des gènes codant pour les « heat-shock proteins » par un inhibiteur d'HspθO. iv) Les maladies d'Alzheimer et la sclérose en plaques : Ces maladies sont dues en partie à l'expression de cytokines pro-inflammatoires et de la forme inductible de la NOS (Nitric oxide synthase) dans le cerveau, et cette expression délétaire est supprimée par la réponse au stress. En particulier, les inhibiteurs d'Hsp90 sont capables d'engranger cette réponse au stress, et il a été montré in vitro que la geldanamycine et le 17-AAG présentent une activité antiinflammatoire dans des cellules gliales de cerveau (J. Neuroscience Res. (2002), 67, 461). v) La sclérose latérale amvotrophique : Cette maladie neurodégénérative est due à la perte progressive des neurones moteurs. Il a été montré que l'arimoclomol, un inducteur « heat- shock proteins », retarde l'évolution de la maladie dans un modèle animal (Nature Medicine (2004), 10, 402). Etant donné qu'un inhibiteur d'Hsp90 est également un inducteur des protéines heat-
shock (MoI. CeII Biol. (1999), 19, 8033 ; Mol. CeII Biol. (1998), 18, 4949), il est probable qu'un effet bénéfique pourrait être obtenu également dans cette pathologie pour ce type d'inhibiteurs.
D'autre part, un inhibiteur de la protéine Hsp90 pourrait être potentiellement utile dans diverses maladies, autres que le cancer cité précédemment, telles que des infections parasitaires, virales, fongiques, ou des maladies neurodégénératives et ce par une action directe sur Hsp90 et des protéines clientes particulières. Quelques exemples sont présentés ci- dessous : vi) la malaria : la protéine Hsp90 de Plasmodium falciparum présente
59% d'identité et 69% de similarité avec la protéine Hsp90 humaine, et il a été montré que la geldanamycine inhibe la croissance du parasite in vitro (Malaria Journal (2003), 2, 30 ; J. Biol. Chem. (2003), 278, 18336 ; J. Biol. Chem. (2004), 279,
46692). vii) Les filarioses de Bruqia et de Bancroft : ces parasites filaires lymphatiques possèdent une protéine Hsp90 pouvant potentiellement être inhibée par des inhibiteurs de la protéine humaine. En effet, il a été montré pour un autre parasite proche, le
Brugia pahangi, que ce dernier est sensible à l'inhibition par la geldanamycine. Les séquences de B. pahangi et humaines sont identiques à 80% et similaires à 87%. (Int. J. for Parasitology (2005), 35, 627) viii) La toxoplasmose : Toxoplasma gondii, le parasite responsable de la toxoplasmose, possède une protéine chaperone Hsp90, pour laquelle il a été montré l'induction au cours de la conversion tachyzoite-bradyzoite, correspondant au passage de l'infection chronique vers la toxoplasmose active. De plus, la geldanamycine bloque in vitro cette conversion tachyzoite-bradyzoite (J. Mol. Biol.
(2005), 350, 723).
ix) Les mycoses résistantes aux traitements : II est possible que la protéine Hsp90 potentialise l'évolution de la résistance aux drogues, en permettant à de nouvelles mutations de se développer. Par conséquent, un inhibiteur de Hsp90, seul ou en combinaison avec un autre traitement antifongique, pourrait se révéler utile dans le traitement de certaines souches résistantes (Science (2005), 309, 2185). De plus, l'anticorps anti-Hsp90 développé par Neu Tec Pharma démontre une activité contre C. albicans, sensible et résistant au fluconazole, C. krusei, C. tropicalis, C. glabrata, C. lusitaniae et C. parapsilosis in vivo (Current Molecular Medicine
(2005), 5, 403). x) L'hépatite B : Hsp90 est l'une des protéines de l'hôte qui interagit avec la transcriptase inverse du virus de l'hépatite B au cours du cycle de réplication du virus. Il a été montré que la geldanamycine inhibe la réplication de I1ADN viral et l'encapsulation de l'ARN viral
(Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1996), 93, 1060). xi) L'hépatite C : La protéine Hsp90 humaine participe à l'étape de clivage entre les protéines NS2 et NS3 par la protéase virale. La geldanamycine et le radicicol sont capables d'inhiber ce clivage NS2/3 in vitro (Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2001), 98, 13931). xii) Le virus de l'Herpès : La geldanamycine a démontré des activités d'inhibition de la réplication du virus HSV-1 in vitro, et ce avec un bon index thérapeutique (Antimicrobial Agents and Chemotherapy (2004), 48, 867). Les auteurs ont également trouvé une activité de la geldanamycine sur les autres virus HSV-2, VSV, Cox B3, HIV-1 et le coronavirus SARS (données non montrées), xiii) La denque (ou grippe tropicale) : II a été montré que la protéine humaine Hsp90 participe à l'étape d'entrée du virus, en formant un complexe contenant également Hsp70 qui sert de récepteur au virus ; Un anticorps anti-Hsp90 diminue le pouvoir infectieux du virus in vitro (J. of Virology (2005), 79, 4557)
xiv) L'atrophie musculaire spinale et bulbaire : (SBMA : Spinal and bulbar muscular atrophy), une maladie neurodégénérative héréditaire caractérisée par une extension de triplets CAG dans le gène du récepteur aux androgènes. Il a été montré que le 17-AAG, un dérivé de la Geldanamycine, présente une activité in vivo sur des animaux transgéniques servant de modèles expérimentaux de cette maladie (Nature Medicine (2005), 11 , 1088).
Inhibiteurs d'Hsp90 : Les premiers inhibiteurs connus d'Hsp90 sont des composés de la famille des ansamycines benzoquinoïdes, en particulier la Geldanamycine (1) et l'Herbimycine A.
Les ansamycines benzoquinoïdes sont des macrocycles qui possèdent une chaîne aliphatique substituée liant deux positions non adjacentes d'un noyau benzoquinone. La Geldanamycine a été la première molécule de cette famille isolée ( De Boer, C. et al, J. Antibiot. (1970), 23, 442 ; Sasaki, K. et al
J. Amer. Chem. Soc. (1970), 92, 7591). D'autres molécules naturelles ont été identifiées ultérieurement telles que les Herbimycines A-C et la Macbécine I.
Actuellement le NIH et Kosan BioSciences assurent le développement clinique du 17-AAG, inhibiteur d'Hsp90 dérivé de la geldanamycine qui bloque l'activité ATPasique d'Hsp90 en se liant au site de reconnaissance N- terminal de l'ATP. Les résultats des essais cliniques de phase I du 17-AAG conduisent aujourd'hui à initier des essais de phase II, mais orientent aussi les recherches vers des dérivés plus solubles tels que l'analogue 17-DMAG (Kosan BioSciences), porteur d'une chaîne diméthylaminée à la place du résidu méthoxy, et vers des formulations optimisées du 17AAG (CNF1010 de
Conforma Therapeutics) ou vers l'analogue réduit du 17AAG, IPI 504, de la société lnfinity Pharmaceuticals (WO 2005063714 / US 2006019941).
De nouveaux dérivés de geldanamycine ont été décrits récemment (WO2006016773 / US6855705 / US2005026894/ WO2006050477 / US 2006205705 /WO2006228405 / WO 2007001049).
Des nouveaux dérivés d'ansamycine, et notamment de Macbécine I1 ont été récemment décrits par la société Biotica technology Ltd. Ces dérivés sont des monoesters carboxyliques ou carbamoïques en position 18 de 18,21-dihydromacbecine (WO200702627).
Des dimères d'ansamycines, et notamment des dimères de
Geldanamycine, ont été récemment préparés et montrent soit une activité inhibitrice prolongée (Zhang H. et al, Int. J. Cancer (2007), 120, 918) soit une capacité à prévenir la dimérisation d'Hsp90 (Chiosis G. et al, Bioorg. & Med.
Chem. Lett. (2006), 16, 3529).
Le Radicicol est également un inhibiteur d'Hsp90 d'origine naturelle (Roe S.M. et al, J. Med Chem. (1999), 42, 260-66). Toutefois, si celui-ci est de loin le meilleur inhibiteur in vitro d'Hsp90, son instabilité métabolique vis à vis des nucléophiles soufrés le rend difficilement utilisable in vivo. Des dérivés oximes bien plus stables tels que le KF 55823 ou le KF 25706 ont été développés par la société Kyowa Hakko Kogyo (Soga et al, Cancer Research (1999), 59, 2931-2938)
Zéaralénone Zéaralanol acétate
La demande de brevet US2006089495 décrit des composés mixtes comprenant un noyau quinone, comme les dérivés d'ansamycine, et un noyau résorcinol comme les analogues de radicicol, comme inhibiteurs d'Hsp90.
Un autre type d'inhibiteur d'Hsp90 d'origine naturelle, la novobiocine se lie à un site ATP différent situé dans le domaine C-terminal de la protéine (Itoh H. et al, Biochem J. (1999), 343, 697-703. Récemment des analogues simplifiés de la Novobiocine ont été identifiés comme plus puissants
La demande de brevet WO 2006/050501 revendique des analogues de Novobiocine comme inhibiteurs d'Hsp90.
Un depsipeptide, nommé Pipalamycin ou ICH 01 a également été décrit comme inhibiteur non compétitif du site ATP d'Hsp90 (J. Pharmacol. Exp. Ther. (2004), 310, 1288).
La Sherperdine, nonapeptide KHSSGCAFL, mime une partie de la séquence K79-K90 (KHSSGCAFLSVK) de la Survivine et bloque l'interaction des protéines de la famille IAP avec Hsp90 in vitro (WO 2006014744).
Des petits peptides, comprenant une séquence de type Otoferline (YSLPGYMVKKLLGA), ont été récemment décrits comme inhibiteurs de Hsp90 (WO 2005072766 ). Des purines, comme les composés PU3 (Chiosis et al, Chem. Biol.
(2001), 8, 289) et PU24FCI (Chiosis et al, Curr. Cane. Drug Targets (2003), 3, 371 ; WO 2002/036075 ) ont également été décrites comme inhibiteurs d'Hsp90. Un dérivé de purine CNF2024 a été récemment introduit en clinique par la société Conforma Therapeutics, en collaboration avec le Sloan Kettering Mémorial Institute for Cancer Research (WO 2006/084030).
La demande de brevet WO2004/072080 (Cellular Genomics) revendique une famille de 8-hétéroaryl-6-phényl-imidazo[1 ,2-a]pyrazines comme modulateurs de l'activité d'hsp90.
La demande de brevet WO2005/028434 (Conforma Therapeutics) revendique des aminopurines, des aminopyrrolopyrimidines, des aminopyrazolopyrimidines et des aminotriazolopyrimidines comme inhibiteurs d'Hsp90. La demande de brevet WO2004/050087 (Ribotarget/Vernalis) revendique une famille de pyrazoles utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock Proteins » tels que la chaperone Hsp90.
La demande de brevet WO2004/056782 (Vernalis) revendique une nouvelle famille de pyrazoles utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock Proteins » tels que la chaperone Hsp90.
La demande de brevet WO2004/07051 (Vernalis) revendique des dérivés d'arylisoxazoles utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock Proteins » tels que la chaperone Hsp90.
La demande de brevet WO2004/096212 (Vernalis) revendique une troisième famille de pyrazoles utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock Proteins » tels que la chaperone Hsp90.
La demande de brevet WO2005/00300 (Vernalis) revendique de manière plus générale des hétérocycles à 5 chaînons, substitués par des radicaux aryles, utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock Proteins » tels que la chaperone Hsp90.
La demande de brevet JP2005/225787 (Nippon Kayaku) revendique une autre famille de pyrazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande WO2006/018082 (Merck) revendique une autre famille de pyrazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2005/00778 (Kyowa Hakko Kogyo) revendique une famille de dérivés de benzophénone comme inhibiteurs d'Hsp90, utiles pour le traitement des tumeurs.
La demande de brevet WO2005/06322 (Kyowa Hakko Kogyo) revendique une famille de dérivés de résorcinol comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2005/051808 (Kyowa Hakko Kogyo) revendique une famille de dérivés d'acides résorcinyl-benzoïques comme inhibiteurs d'Hsp90.
Les demandes de brevet WO2005/021552, WO2005/0034950, WO2006/08503 WO2006/079789 et WO2006/090094 (Vernalis) revendiquent des familles de pyrimidothiophènes ou de pyridothiophènes , utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock
Proteins » tels que la chaperone Hsp90.
La demande WO2006/010595 (Novartis) revendique une famille d'indazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande WO2006/010594 (Novartis) revendique une famille de dihydrobenzimidazolones comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2006/055760 (Synta Pharma) revendique une famille de diaryl-triazole comme inhibiteurs d'Hsp90. La demande de brevet WO2006/087077 (Merck) revendique une famille de (s-triazol-3-yl)phenols comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet FR2882361 (Aventis) revendique une famille de 3-aryl-1 ,2-benzisoxazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2006/091963 (Serenex) revendique des familles de tetrahydroindolones et de tetrahydroindazolone comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet DE10200509440 (Merck Gmbh) revendique une famille de thiénopyridines comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet W02006/095783 (Nippon Kayaku) revendique une famille de triazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2006101052 (Nippon Kayaku) revendique une famille de dérivés acétylèniques comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2006105372 (Conforma Therapeutics) revendique une famille d'alkynyl pyrrolo[2,3-d]pyrimidines comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet FR2884252 (Aventis) revendique une famille d'isoindoles comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2006109075 (Astex) revendique une famille de benzamides comme inhibiteurs d'HspθO. La demande de brevet WO2006109085 (Astex) revendique une famille d'hydroxybenzamides comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet JP200606755 (Nippon Kayaku) revendique une famille de pyrazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2006117669 (Pfizer) revendique une famille d'hydroxyarylcarboxamides comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2006123061 (Aventis) revendique des familles d'azabenzimidazolylfluorènes et de benzimidazolylfluorènes comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2007017069 (Merck Gmbh) revendique des dérivés d'adénine comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2007021877 (Synta Pharma) revendique une famille d'arylimidazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.
La demande de brevet WO2007021966 (Synta Pharma) revendique une famille d'arylpyrazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.
La présente invention concerne des produits de formule (I)
dans lesquels A représente l'un des trois cycles suivants :
cycle a
W représente l'atome d'hydrogène ou l'un des radicaux suivants : -(C1- C4)alkyle, -(C1-C4)alkényle, -CO-(C1-C3)alkyle, -CO-(CI -C3)alkényle, -CO- NH-(CI -C2)alkyle, -CO-NH-(CI -C2)alkényle ou -CO-NH2 ; le carbone C15 desdits produits de formule (I) ayant la configuration stéréochimique R ou S, et la double liaison entre les carbones C4 et C5 desdits produits de formule générale (I) ayant une géométrie E ou Z.
étant entendu que lorsque A représente le cycle b ci-dessus, et que le carbone C15 a la configuration stéréochimique R alors W ne représente pas hydrogène ou méthyle.
lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes tautomères et isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi
que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I). La présente invention concerne notamment les produits de formule (I) tels que définis ci-dessus dans lesquels W a la signification indiquée ci-dessus et :
A représente le cycle a, le carbone C15 a la configuration stéréochimique R et la double liaison entre les carbones C4 et C5 est de géométrie E, A représente le cycle b, le carbone C15 a la configuration stéréochimique R ou S et la double liaison entre les carbones C4 et C5 est de géométrie Z, ou bien A représente le cycle c, le carbone C15 a la configuration stéréochimique R ou S et la double liaison entre les carbones C4 et C5 est de géométrie Z, lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes tautomères et isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I).
Dans les produits de formule (I) et dans ce qui suit, les termes indiqués ont les significations qui suivent :
- le terme radical alkyle désigne un radical linéaire ou ramifié renfermant 1 , 2, 3 ou 4 atomes de carbone choisi parmi les radicaux méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle ou tert-butyle,
- le terme radical alkényle désigne un radical linéaire ou ramifié renfermant 2, 3 ou 4 atomes de carbone choisi parmi les radicaux vinyle, allyle, propényle, butényle ou isobutényle,
Les radicaux alkylamino ou alkénylamino NH-(C1-C2)alkyle et -NH-(CI- C2)alkényle tels que définis ci-dessus, sont tels que les radicaux alkyl et alkényle sont choisis parmi les radicaux cités ci-dessus . On peut citer par exemple les radicaux méthylamino, éthylamino ou vinylamino.
La présente invention concerne notamment les produits de formule (I) tels que définis ci-dessus répondant aux formules suivantes :
produit A A003677380 de type aRE
produit B1 A003677378 de type bSZ
lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes tautomères et isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I).
Le terme patient désigne les êtres humains mais aussi les autres mammifères.
Le terme "Prodrug" désigne un produit qui peut être transformé in vivo par des mécanismes métaboliques (tel que l'hydrolyse) en un produit de formule (I). Par exemple, un ester d'un produit de formule (I) contenant un groupe hydroxyle peut être converti par hydrolyse in vivo en sa molécule mère. Ou encore un ester d'un produit de formule (I) contenant un groupe carboxy peut être converti par hydrolyse in vivo en sa molécule mère.
On peut citer à titre d'exemples des esters de produits de formule (I) contenant un groupe hydroxyle tels que les acétates, citrates, lactates, tartrates, malonates, oxalates, salicylates, propionates, succinates, fumarates, maléates, méthylene-bis-b-hydroxynaphthoates, gentisates, iséthionates, di-p-toluoyltartrates, méthanesulfonates, éthanesulfonates, camphorsulfonates, benzenesulfonates, p-toluènesulfonates, cyclohexyl- sulfamates et quinates.
Des esters de produits de formule (I) particulièrement utiles contenant un groupe hydroxyle peuvent être préparés à partir de restes acides tels que ceux décrits par Bundgaard et. al., J. Med. Chem., 1989, 32, page 2503- 2507: ces esters incluent notamment des (aminométhyl)-benzoates substitués, dialkylamino-méthylbenzoates dans lesquels les deux groupements alkyle peuvent être liés ensemble ou peuvent être interrompus par un atome d'oxygène ou par un atome d'azote éventuellement substitué soit un atome d'azote alkylé ou encore des morpholino-méthyl)benzoates, e.g. 3- ou 4-(morpholinométhyl)-benzoates, et (4-alkylpiperazin-1- yl)benzoates, e.g. 3- ou 4-(4-alkylpiperazin-1-yl)benzoates.
Le ou les radicaux carboxy des produits de formule (I) peuvent être salifiés ou estérifiés par les groupements divers connus de l'homme du métier parmi lesquels on peut citer, à titre d'exemples non limitatifs, les composés suivants.
- parmi les composés de salification, des bases minérales telles que, par exemple, un équivalent de sodium, de potassium, de lithium, de calcium, de magnésium ou d'ammonium ou des bases organiques telles que, par exemple, la méthylamine, la propylamine, la triméthylamine, la diéthylamine, la triéthylamine, la N,N-diméthyléthanolamine, le tris (hydroxyméthyl) amino méthane, l'éthanolamine, la pyridine, la picoline, la dicyclohexylamine, la morpholine, la benzylamine, la procaïne, la lysine, l'arginine, l'histidine, la N- méthylglucamine,
- parmi les composés d'estérification, les radicaux alkyle pour former des groupes alcoxy carbonyle tel que, par exemple, méthoxycarbonyle, éthoxycarbonyle, tert-butoxy-carbonyle ou benzyloxycarbonyle, ces radicaux alkyles pouvant être substitués par des radicaux choisis par exemple parmi les atomes d'halogène, les radicaux hydroxyle, alcoxy, acyle, acyloxy, alkylthio, amino ou aryle comme, par exemple, dans les groupements chlorométhyle, hydroxypropyle, méthoxy-méthyle, propionyloxyméthyle, méthylthiométhyle, diméthyl-aminoéthyle, benzyle ou phénéthyle.
Par carboxy estérifié on entend par exemple les radicaux tels que les radicaux alkyloxycarbonyle par exemple méthoxycarbonyle, éthoxycarbonyle,
propoxycarbonyle, butyl ou tert-butyloxycarbonyle, cyclobutyloxycarbonyle, cyclopentyloxycarbonyle ou cyclohexyloxycarbonyle.
On peut également citer des radicaux formés avec les restes esters facilement clivables tels que les radicaux méthoxyméthyle, éthoxyméthyle ; les radicaux acyloxyalkyle tels que pivaloyloxyméthyle, pivaloyloxyéthyle, acétoxyméthyle ou acétoxyéthyle ; les radicaux alkyloxycarbonyloxy alkyle tels que les radicaux méthoxycarbonyloxy méthyle ou éthyle, les radicaux isopropyloxycarbonyloxy méthyle ou éthyle.
Une liste de tels radicaux esters peut-être trouvée par exemple dans le brevet européen EP 0 034 536.
Par carboxy amidifié, on entend les radicaux du type -CONH2 dont les atomes d'hydrogène sont éventuellement substitués par un ou deux radicaux alkyle pour former des radicaux alkylamino ou dialkylamino eux-mêmes éventuellement substitués comme indiqué ci-dessus ou ci-dessous, ces radicaux pouvant également former avec l'atome d'azote auquel ils sont liés une aminé cyclique tel que définie ci-dessus.
Par carboxy salifié on entend les sels formés par exemple avec un équivalent de sodium, de potassium, de lithium, de calcium, de magnésium ou d'ammonium. On peut également citer les sels formés avec les bases organiques telles que la méthylamine, la propylamine, la triméthylamine, la diéthylamine, la triéthylamine. On préfère le sel de sodium.
On peut rappeler que la stéréoisomérie peut être définie dans son sens large comme l'isomérie de composés ayant mêmes formules développées, mais dont les différents groupes sont disposés différemment dans l'espace, tels que notamment dans des cyclohexanes monosubstitués dont le substituant peut être en position axiale ou équatoriale, et les différentes conformations rotationnelles possibles des dérivés de l'éthane. Cependant, il existe un autre type de stéréoisomérie, dû aux arrangements spatiaux différents de substituants fixés, soit sur des doubles liaisons, soit sur des cycles, que l'on appelle souvent isomérie géométrique ou isomérie cis-trans. Le terme
stéréoisomère est utilisé dans la présente demande dans son sens le plus large et concerne donc l'ensemble des composés indiqués ci-dessus.
La présente invention concerne tout particulièrement les produits de formule (I) tels que définis ci-dessus dont les noms suivent :
Carbamate de (4E,6E,10E)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17R)-20-hydroxy- 8,13,14,17-tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3-oxo-2-azabicyclo[16.3.1 ] docasa-1 (22)-4,6, 10, 18,20-hexaèn-9-yle Carbamate de (4E,6Z,10E)-(8S,9S,12S,13R14S,16S,17S)-8,13,14,17- tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 ] docasa-1 (21)-4,6,10,18-pentaèn-2-yle , ou « 15-ép/-Herbimycine A Carbamate de (4E.6Z, 10E)-(8S,9S, 12S, 13R, 14S, 16S, 17R)-9-carbamoyloxy- 8,13,14-triméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 - docasa-1(21)-4,6,10,18-pentaèn-17-yle ou « 15-déméthoxy-15- carbamoyloxy-herbimycine A »
Les produits de formule (I) répondant à la formule (I) selon la présente invention peuvent être préparés selon les méthodes connues de l'homme du métier et particulièrement selon les méthodes décrites ci-après: la présente invention a ainsi également pour objet les méthodes de synthèse des produits de formule (I) selon la présente invention et notamment les méthodes générales de synthèses décrites dans les schémas ci-après. La présente invention concerne notamment un procédé de synthèse des produits de formule (I) tels que définis ci-dessus dans lesquels la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie Z. Ce procédé est caractérisé par une fermeture du cycle par une réaction de macrolactamisation le entre le carbonyle en position 1 et l'atome d'azote d'une aniline portée par le carbone 20.
La présente invention concerne notamment un procédé de synthèse des produits de formule (I) tels que définis ci-dessus dans lesquels la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie E. Ce procédé est
caractérisé par une fermeture du cycle par une réaction de métathèse entre les carbones 4 et 5.
De tels procédés peuvent être réalisés comme indiqué ci-après. Méthodes générales de synthèses des produits de formule générale (I) : Une méthode nouvelle et originale de synthèse totale de l'Herbimycine A a été développée dans le cadre de la présente invention et fait partie de la présente invention (Canova S. et al, Org. Lett. 2007, 9, 145). Cette synthèse met en œuvre l'analyse rétrosynthétique décrite dans le schéma ci-dessous :
Herbimycinβ A
MétathèSΘ cyclisantβ
Allyltitanation
«* K
he
Méthode générale 1 : Synthèse des composés de type I bRZ, I cRZ, I bSZ et I cSZ
Dans le cadre de l'invention, nous avons développé une stratégie voisine de celle décrite dans Org. Lett. 2007, 9, 145 pour préparer les composés de formule générale I1 dans lesquels W étant étant tel que décrit précédemment :
- A représente un cycle b ou un cycle c,
- le carbone en position 15 est soit de configuration R soit de configuration S,
- et la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie Z.
La réaction du lithien dérivé de la N.N-diallylaniline bromée 2b, c avec l'aldéhyde 1 correspondant au fragment C5-C15 des composés de formule générale I conduit au mélange 1,6 / 1 des composés intermédiaires 3b,cR et 3b,cS. aisément séparables, selon le schéma ci-dessous :
A partir du composé 3b,cR, il est possible d'accéder aux composés de formule générale I bRZ et I cRZ et dans lesquels le carbone en position 15 est de configuration absolue R, selon le schéma général ci-dessous:
Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N,N-diallyle « N(all)2 » et N,N-diferfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et te/tbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales
connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry. Dans le cadre de l'invention, il est particulièrement avantageux de préparer les composés de formule générale I cRZ et I cSZ à partir des composés de formule générale I bRZ et I bSZ par réduction en milieu organo-aqueux à l'aide d'hydrosulfite de sodium, dans les conditions décrites par Ge J. et al, J. Med. Chem. (2006), 49, 4606 pour la transformation du 17AAG en IPI504.
A partir du composé 3b,cS. il est possible d'accéder aux composés de formule générale I bSZ et I cSZ, dans lesquels le carbone en position 15 est de configuration absolue S, selon le schéma général ci-dessous:
en 7 en 7
Méthode générale 1 : Synthèse des composés de type I aRZ et I aSZ
La même stratégie peut être utilisée pour préparer les composés de formule générale I1 dans lesquels W étant étant tel que décrit précédemment :
- A représente un cycle a,
- le carbone en position 15 est soit de configuration R soit de configuration S,
et la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie Z.
La réaction du lithien dérivé de la N,N-diallylaniline bromée 2a avec l'aldéhyde 1 correspondant au fragment C5-C15 des composés de formule générale I conduit au mélange 1 ,6 / 1 des composés intermédiaires 3aR et 3aS. aisément séparables, selon le schéma général ci-dessous:
Le fragment intermédiaire C5-C15 1 peut être obtenu en opérant selon Org. Lett. (2007), 9, 145.
la N,N-diallylaniline bromée 2a peut être préparée selon le schéma ci- dessous:
2a
A partir du composé 3aR, il est possible d'accéder aux composés de formule générale I aRZ, dans lesquels le carbone en position 15 est de configuration absolue R, selon le schéma ci-dessous :
7 et 18
3 étapes : protection en 15 7 modification de groupe N-protecteur
2 étapes : réduction puis Wittig
Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience).
Les groupements protecteurs des fonctions aminés N,N-diallyle « N(all)2 » et N,N-diferfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et tertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS » utilises dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions
mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry.
A partir du composé 3aS. il est possible d'accéder aux composés de formule générale I aSZ, dans lesquels le carbone en position 15 est de configuration absolue R1 selon le schéma ci-dessous :
7 et 18 7
Méthode générale 2 : Synthèse des composés de type I aRE. I bRE, I cRE. I aSE, I bSE et I cSZ
Dans le cadre de l'invention, à partir de l'aminé non protégée 8aR, intermédiaire n-1 de l'aminé protégée 4aR décrite précédemment, nous avons développé, selon le schéma général ci-dessous, une stratégie afin de préparer les composés de formule générale I1 dans lesquels W étant étant tel que décrit précédemment :
- A r e p r é s e n t e u n c y c l e a ,
- le carbone en position 15 est de configuration
- et la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie E.
15 (W=H) en 15 18
Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N1N- diallyle « N(all)2 » et N.N-diterfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et tertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry.
Selon un schéma similaire, le composé 8aS , intermédiaire n-1 du composé 4aS décrit précédemment, peut conduire aux composés de type I aSE :
15 (W=H) en 15 18
Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N1N- diallyle « N(all)2 » et N,N-diterfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et fertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry.
Selon un schéma similaire, le composé 8b,cS , intermédiaire n-1 du composé 4b,cS décrit précédemment, peut conduire aux composés de type I bSE et I cSE :
15 (W=H) en 15 18 et 21 »
Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N,N-diallyle « N(all)2 » et N,N-diterfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et fertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene
(John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry. Dans le cadre de l'invention, il est particulièrement avantageux de préparer les composés de formule générale I cSE et I cSE à partir des composés de formule générale I bSE et I bSE par réduction en milieu organo-aqueux à l'aide d'hydrosulfite de sodium, dans les conditions décrites par Ge J. et al, J. Med. Chem. (2006), 49, 4606 pour la transformation du 17AAG en IPI504.
Selon un schéma similaire, le composé 8b,cR , intermédiaire n-1 du composé 4b,cR décrit précédemment, peut conduire aux composés de type I bRE et I cRE :
15 (W=H) en 15 18 et 21
Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les
méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N,N-diallyle « N(all)2 » et N,N-diterfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et fertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry. Dans le cadre de l'invention, il est particulièrement avantageux de préparer les composés de formule générale I cRE et I cSE à partir des composés de formule générale I bRE et I bSE par réduction en milieu organo-aqueux à l'aide d'hydrosulfite de sodium, dans les conditions décrites par Ge J. et al, J. Med. Chem. (2006), 49, 4606 pour la transformation du 17AAG en IPI504.
Les produits objet de la présente invention sont doués de propriétés pharmacologiques intéressantes: on a constaté qu'ils possédaient notamment des propriétés inhibitrices des activités des protéines chaperones et notamment de leurs activités ATPasiques.
Parmi ces protéines chaperones, on cite notamment la chaperone humaine HSP90.
Les produits répondant à la formule générale (I) tels que définis ci-dessus présentent ainsi une activité inhibitrice de la chaperone Hsp90 importante .
Des tests donnés dans la partie expérimentale ci-après illustrent l'activité inhibitrice de produits de la présente invention vis-à-vis de telles protéines chaperones.
Ces propriétés rendent donc les produits de formule générale (I) de la présente invention utilisables comme médicaments pour le traitement de tumeurs malignes.
Les produits de formule (I) peuvent également être utilisés dans le domaine vétérinaire.
L'invention a donc pour objet l'application, à titre de médicaments, des produits de formule générale (I) pharmaceutiquement acceptables.
L'invention a particulièrement pour objet l'application à titre de médicaments, des produits de formule (I) tels que définis ci-dessus dont les noms suivent : - Carbamate de (4E,6E,10£)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17R)-20-hydroxy- 8,13,14,17-tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3-oxo-2-azabicyclo[16.3.1 ] docasa-1 (22)-4,6, 10, 18,20-hexaèn-9-yle
- Carbamate de (4E,6Z,10E)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17S)-8,13,14,17- tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 ] docasa-1(21)-4,6,10,18-pentaèn-2-yle , ou « 15-ép/-Herbimycine A
- Carbamate de (4E,6Z,10£)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17R)-9-carbamoyloxy- 8,13,14-triméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 - docasa-1(21)-4,6,10,18-pentaèn-17-yle ou « 15-déméthoxy-15- carbamoyloxy-herbimycine A »
ainsi que leurs prodrugs, lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I).
Les produits peuvent être administrés par voie parentérale, buccale, perlinguale, rectale ou topique.
L'invention a aussi pour objet les compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment, à titre de principe actif, un au moins des médicaments de formule générale (I).
Ces compositions peuvent être présentées sous forme de solutions ou de suspensions injectables, de comprimés, de comprimés enrobés, de capsules, de sirops, de suppositoires, de crèmes, de pommades et de lotions. Ces formes pharmaceutiques sont préparées selon les méthodes usuelles. Le principe actif peut être incorporé à des excipients habituellement employés dans ces compositions, tels que les véhicules aqueux ou non, le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs.
La dose usuelle, variable selon le sujet traité et l'affection en cause, peut être, par exemple, de 10 mg à 500 mg par jour chez l'homme, par voie orale.
La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (I) tels que définis ci -dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation de médicaments destinés à inhiber l'activité de protéines chaperones et notamment d'Hsp90.
La présente invention concerne ainsi particulièrement l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) dans laquelle la protéine chaperone est HSP90.
La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir ou traiter une maladie caractérisée par le dérèglement de l'activité d'une protéine chaperone de type Hsp90 et notamment une telle maladie chez un mammifère.
La présente invention concerne l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir ou traiter une maladie appartenant au groupe suivant: les maladies neurodégénératives telles que la maladie de Huntington, la maladie de Parkinson, l'ischémie cérébrale focale, la maladie d'Alzheimer, la sclérose en plaques et la sclérose latérale amyotrophique, la malaria, les filarioses de Brugia et de Bancroft, la toxoplasmose, les mycoses résistantes aux traitements, l'hépatite B, l'hépatite C, le virus de l'Herpès, la dengue (ou grippe tropicale), l'atrophie musculaire spinale et bulbaire, désordres de la prolifération de cellules mésangiales, thromboses, rétinopathies, psoriasis, dégénération musculaire, maladies en oncologie, cancers.
La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à traiter des maladies en oncologie.
La présente invention concerne particulièrement l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à traiter des cancers.
Parmi ces cancers, la présente invention s'intéresse tout particulièrement au traitement des tumeurs solides ou liquides et au traitement de cancers résistants aux agents cytotoxiques
La présente invention concerne ainsi notamment l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à traiter des cancers parmi lesquels les cancers du poumon, du sein et de l'ovaire, les cancers gastriques, les glioblastomes, les leucémies myéloîdes chroniques, les leucémies lymphoblastiques aigûes, les cancers de la prostate, du pancréas et du colon, les mélanomes métastatiques, les tumeurs de la thyroïde et les carcinomes rénaux .
Aussi parmi les principales indications potentielles d'inhibiteurs d'Hsp90, peut-on citer, à titre non limitatif:
- les cancers du poumon « non à petites cellules », les cancers du sein, les cancers de l'ovaire et les glioblastomes qui surexpriment EGF-R wt et/ou muté ou HER2 ;
- les leucémies myéloîdes chroniques qui surexpriment Bcr-Abl ;
- les leucémies lymphoblastiques aigûes qui surexpriment Flt-3 ;
- les cancers du sein, de la prostate, du poumon, du pancréas, du colon ou de l'ovaire qui surexpriment Akt ;
- les mélanomes metastatiques et les tumeurs de la thyroïde qui surexpriment la forme mutée de la protéine B-Raf ;
- les cancers de la prostate androgène-dépendants et androgène- indépendants ;
- les cancers du sein oestrogène-dépendants et oestrogène-indépendants ;
- les carcinomes rénaux qui surexpriment HIF-Ia ou la protéine c-met mutée.
La présente invention s'intéresse encore plus particulièrement au traitement du cancer du sein, du colon et des poumons.
La présente invention concerne aussi l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à la chimiothérapie de cancers.
A titre de médicaments selon la présente invention destinés à la chimiothérapie de cancers, les produits de formule (I) selon la présente invention peuvent être utilisés seuls ou en association avec chimiothérapie ou
radiothérapie ou alternativement en association avec d'autres agents thérapeutiques.
La présente invention concerne ainsi notamment les compositions pharmaceutiques telles que définies ci-dessus contenant en plus, des principes actifs d'autres médicaments de chimiothérapie contre le cancer.
De tels agents thérapeutiques peuvent être des agents anti-tumoraux utilisés communément.
Comme exemples d'inhibiteurs connus de protéines kinases, on peut citer notamment la butyrolactone, le flavopiridol, la 2-(2-hydroxyéthylamino)-6- benzylamino-9-méthylpurine, l'olomucine, le Glivec ainsi que l'Iressa.
Les produits de formule (I) selon la présente invention peuvent ainsi également être avantageusement utilisés en combinaison avec des agents anti-prolifératifs : à titre d'exemples de tels agents anti-prolifératifs mais sans toutefois se limiter à cette liste, on peut citer les inhibiteurs d'aromatase, les antiestrogènes, les inhibiteurs de topoisomérase I, les inhibiteurs de topoisomérase II, les agents actifs sur les microtubules, les agents d'alkylation, les inhibiteurs d'histone désacétylase, les inhibiteurs de farnésyl transférase, les inhibiteurs de COX-2, les inhibiteurs de MMP, les inhibiteurs de mTOR , les antimétabolites antinéoplastique, les composés du platine, les inhibiteurs de protéasome, comme le Bortezomib, les inhibiteurs d'Histone Déactylase (HDACs), comme le SAHA, et notamment les inhibiteurs d'HDACβ, les composés faisant décroître l'activité des protéines kinases et notamment les inhibiteurs de récepteur tyrosine-kinase, et en particulier EGF- R et Her2 (petites molécules et anticorps) et également les composés anti- angiogéniques, les agonistes de la gonadoréline, les anti-androgènes, les bengamides, les biphosphonates et le trastuzumab.
On peut citer ainsi à titre d'exemples, des agents anti-microtubules, comme les taxoides, les epothilones, les vinka-alkaloides, des agents d'alkylation tels que cyclophosphamide, des agents DNA-intercalant comme le cis-platinum, et l'oxaliplatine, des agents interactifs sur topoisomérase comme la
camptothécine et dérivés, les anthracyclines comme l'adriamycine, des antimétabolites comme le 5-fluorouracile et dérivés et analogues.
Les produits de formule (I) selon la présente invention peuvent être préparés par l'application ou l'adaptation de méthodes connues et notamment des méthodes décrites dans la littérature comme par exemple celles décrites par R.C.Larock dans: Comprehensive Organic Transformations, VCH publishers, 1989.
Dans les réactions décrites ci-après, il peut être nécessaire de protéger des groupes fonctionnels réactifs tels que par exemple des groupements hydroxy, amino, imino, thio ou carboxy, quand ceux-ci sont désirés dans le produit final mais quand leur participation n'est pas souhaitée dans les réactions de synthèse des produits de formule (I). On peut utiliser des groupes protecteurs conventionnels en accord avec les pratiques usuelles standard comme ceux décrits par exemple par T.W. Greene and P.G.M.Wuts dans "Protective Groups in Organic Chemistry" John Wiley and Sons, 1991.
La partie expérimentale ci-après donne des exemples non limitatifs de produits de départ: d'autres produits de départ peuvent être trouvés dans le commerce ou préparés selon les méthodes usuelles connues de l'homme du métier.
Exemples illustrant l'invention : Les exemples dont la préparation suit illustrent la présente invention sans toutefois la limiter.
Tous les exemples décrits ont été caractérisés par spectroscopie RMN du proton, la majorité de ces exemples ont également été caractérisés en spectroscopie Infra Rouge en RMN du carbone et par mesure de leur pouvoir rotatoire.
Exemple 1 : Carbamate de (4E,6E,10E)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17R)-20- hydroxy-8,13,14,17-tétraméthoxy-4,10,12,16-tétraméthyl-3-oxo-2- azabicyclo[16.3.1]docosa-1(22),4,6,10,18,20-hexaén-9-yle (composé de type I aRE) Etape 1
A une solution de 1 ,3-dibromo-5-ferf-butyldiméthylsilyloxybenzène, qui peut être obtenu selon Baldwin J. E. et al, Tetrahedron (1991), 47, 5603-14, (7,43 g, 20,32 mmol, 1 équiv.) et de diallylamine (30 ml_, 243 mmol, 12 équiv.) dans le THF (10 ml_) refroidie à -100C, est ajouté goutte à goutte du n-butyllithium (20 ml de solution 2,5M dans l'hexane, 50 mmol, 2,5 équiv.). La température du milieu réactionnel est lentement remontée à l'ambiante, et après 2 heures on ajoute, avec précaution, 2 mL de méthanol puis 30 mL d'eau. La phase aqueuse est extraite à l'oxyde de diéthyle (3 x 100 mL). Les phases organiques jointes sont séchées sur sulfate de magnésium et concnetrées sous vide. Après purification par flash-chromatographie sur gel de silice, en éluant à l'éther de pétrole, on obtient la Λ/,Λ/-diallyl-(3-bromo-5-ferf-
butyldiméthylsilyloxyphényl)-amine (4,34g, 11,36 mmol, 56%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0,39 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole)
RMN 1H (400 MHz, CDCI3) : δ : 6,44 (t , 1H, J = 1 ,9 Hz, H1), 6,34 (t, 1H, J = 1,8 Hz, H5), 6,08 (t, 1 H, J = 2,2 Hz, H3), 5,87-5,77 (2H, H2), 5,20-5,12 (4H, H3), 3,86 (4H, Hr)1 0,97(s, 9H, f-Bu), 0,19 (s, 6H, Me).
Etape 2 :
RMN 1H (400 MHz) : δ : 6.32 (s, 1H, H1), 6.15 (s, 1 H, H5), 6.07 (m, 1 H, H3), 5.89-5.77 (2H, H2), 5.53 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.3 et J = 7.4 Hz, H20), 5.26- 5.05 (7H, H15 et H21 et H3), 4.55 (m, 1 H, J = 4.7 Hz, H7), 3.95-3.80 (5H, H18 et H1 ), 3.49 (m, 1H, H19), 3.48 (s, 3H, OMe), 3.35 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.27 (m, 1H, H11), 3.12 (dd, 1 H, J = 9.4 et J = 1.2 Hz, H12), 2.78 (s élargi, 1 H, OH), 2.39 (m, 1H, H13), 1.90 (m, 1H, H8), 1.73 (ddd syst AB, 1H, 2J = 14.9, J = 10.3 et J = 6.5 Hz, H10), 1.54 (d, 3H, J = 0.8 Hz, H17), 1.35 (m, 1 H1 H10), 1.01 (d, 3H, J = 6.5 Hz, H14), 0.96 (s, 9H, f-Bu), 0.88 (s, 9H1 f-Bu), 0.73 (d, 3H, J = 6.7 Hz, H9), 0.16 (s , 6H, SiMe2), 0.07 (s, 3H, SiMe), 0.02 (s, 3H, SiMe).
RMN 13C (100 MHz) : δ : 156.2 (s, C4), 149.7 (s, C2), 145.2 (s, C6), 135.0 (d, C20), 135.0 (s, C16), 134.2 (2d, C2), 131.2 (d, C15), 117.6 (t, C21), 116.0 (2t, C3), 106.5 (d, C5), 104.0 (d, C1), 103.2 (d, C3), 86.2 (d, C19), 84.3 (d, C12), 82.5 (d, C11), 81.7 (d, C18), 76.5 (d, C7), 60.8 (q, OMe), 57.1 (q, OMe), 56.6 (q, OMe), 52.9 (2t, C1 ), 37.7 (d, C8), 34.8 (d, C13), 32.9 (t, C10), 25.8 (6q, 2t- Bu), 18.2 (2s, 2f-Bu), 17.2 (q, C14), 14.5 (q, C9), 12.2 (q, C17), -4.4 (2q, SiMe2), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).
et 402,4 mg (0,539 mmol, 27%) de (7E)-(2S,4fi,5R,6S,9S,10S)-9-ferf- butyldiméthylsilyloxy-1-(3-tert-butyldiméthylsilyloxy-5-diallylaminophényl)- 4,5,10-triméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7,11-dién-1R-ol
Rf= 0.27 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole / Oxyde de diéthyle 6/4). [α]D 20 + 3.58 (c 0.64, CHCI3). IR (film) : v : 3420, 2928, 2856, 1598, 1462, 1389, 1361, 1251 , 1192, 1080, 990, 920, 834, 777, 670 CnT1.
RMN 1H (400 MHz) : δ : 6.29 (s, 1H, H1), 6.16 (s, 1 H1 H5), 6.09 (m, 1 H, H3), 5.88-5.77 (2H, H2), 5.50 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.3 et J = 7.4 Hz, H20), 5.30- 5.06 (7H, H15 et H21 et H3), 4.10 (m, 1 H, J = 8.3 Hz, H7), 3.94-3.80 (5H, H18 et H1 ), 3.50 (s, 3H, OMe), 3.47 (m, 1 H, H19), 3.38 (s, 3H, OMe)1 3.29 (s, 3H1 OMe), 3.27 (m, 1 H1 H11), 3.13 (dd, 1 H1 J = 9.3 et J = 1.4 Hz, H12), 2.39 (m, 1H1 H13), 1.99 (ddd syst AB1 1 H1 2J = 14.9, J = 10.5 et J = 4.7 Hz1 H10), 1.81 (m, 1 H1 H8), 1.52 (d, 3H1 J = 0.8 Hz1 H17), 1.25 (m, 1H1 H10), 1.01 (d, 3H1 J = 6.5 Hz1 H14), 0.96 (s, 9H1 f-Bu), 0.87 (s, 9H1 f-Bu), 0.67 (d, 3H1 J = 6.9 Hz, H9), 0.16 (s , 6H1 SiMe2), 0.06 (s, 3H1 SiMe), 0.01 (s, 3H, SiMe).
RMN 13C (100 MHz) : δ : 156.3 (s, C4), 149.8 (s, C2), 145.8 (s, C6), 135.0 (d, C20), 135.0 (s, C16), 134.2 (2d, C2), 131.1 (d, C15), 117.7 (t, C21), 116.0 (2t, C3), 107.2 (d, C5), 104.8 (d, C1), 103.7 (d, C3), 86.3 (d, C19), 84.2 (d, C12), 82.7 (d, C11), 81.7 (d, C18), 80.5 (d, C7), 60.8 (q, OMe)1 57.1 (q, OMe)1 56.8 (q, OMe)1 52.9 (2t, C1 ), 38.4 (d, C8), 34.8 (d, C13), 33.7 (t, C10), 25.8 (6q, 2t- Bu)1 18.2 (2s, 2f-Bu), 18.2 (q, C9), 17.2 (q, C14), 12.2 (q. C17), -4.3 (2q, SiMe2), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).
Etape 3 :
A une solution de (yEJ^S^R.δR.βS.gS.IOSJ-θ-feAf-butyldiméthylsilyloxy-i- (S-tert-butyldiméthylsilyloxy-S-diallylaminophényO^.δ.iO-triméthoxy^.δ.δ- triméthyldodéca-7,11-dién-1R-ol, obtenu à l'étape précédente (678 mg, 0.91 mmol, 1 équiv.) dans le DMF (10 ml_) à 0 0C, sont ajoutés successivement de l'hydrure de sodium (182 mg, 60% dans l'huile, 4.55 mmol, 5 équiv.) et de l'iodométhane (0.6 ml_, 9.10 mmol, 10 équiv.). Après 4 h d'agitation en laissant le milieu réactionnel revenir à température ambiante, du méthanol (3 ml_) et de l'eau (12 ml_) sont ajoutés. La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 50 ml_). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane / oxyde de diéthyle 9/1) pour conduire à la Λ/, Λ/-d ia I Iy I -3-fe/f- butyldiméthylsilyloxy-5-[(7E)-(1 R,2S,4S,5R,6S,9S, 10S)-9-ferf-butyldiméthyl- silyloxy-1 ,4,5,10-tétraméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7,11-diényl]aniline
(669.4 mg, 0.881 mmol, 97%), sous la forme d'une huile incolore, dont les caractéristiques sont les suivantes :
Rf= 0.41 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole/oxyde de diéthyle 8/2). [α]D 20 + 34.1 (c 1.35, CHCI3). IR (film) : v : 2929, 1599, 1462, 1389, 1360, 1289, 1251, 1192, 1080, 920, 834,777,669 cm1.
RMN 1H (400 MHz) : δ : 6.22 (s élargi, 1H, H1), 6.12 (s élargi, 1H, H5), 6.09 (s élargi, 1 H, H3), 5.90-5.78 (2H, H2), 5.51 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.4 Hz, H20), 5.21-5.07 (7H, Hi5 et H21 et H3), 3.90 (m, 1H, J = 4.4 Hz, H7), 3.89- 3.84 (5H, H18 et Hr), 3.46 (m, 1H, Hi9), 3.45 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe),
3.28 (s, 3H1 OMe), 3.23 (s, 3H, OMe), 3.15 (m, 1H, H11), 3.07 (dd, 1 H, J = 8.8 et J = 2.0 Hz, H12), 2.41 (m, 1 H1 H13), 1.91 (m, 1 H, H8), 1.70 (m, 1H1 H10), 1.54 (d, 3H1 J = 0.9 Hz, H17), 1.29 (m, 1 H, H10), 0.99 (d, 3H1 J = 6.7 Hz1 H14), 0.96 (s, 9H1 f-Bu), 0.87 (s, 9H, t-Bu), 0.77 (d, 3H, J = 6.7 Hz, H9), 0.17 (s , 6H, SiMe2), 0.06 (s, 3H1 SiMe), 0.00 (s, 3H, SiMe).
RMN 13C (100 MHz) : δ : 156.2 (s, C4), 149.7 (s, C2), 143.1 (s, C6), 134.9 (d, C20), 134.8 (s, C16), 134.2 (2d, C2), 131.5 (d, C15), 117.5 (t, C21), 116.0 (2t, C3), 107.4 (d, C5), 104.9 (d, C1), 103.4 (d, C3), 88.7 (d, C7), 86.3 (d, C19), 85.0 (d, C12), 81.8 (d, C18), 81.1 (d, C11), 60.8 (q, OMe), 57.4 (q, OMe)1 57.1 (q, OMe), 57.0 (q, OMe), 52.9 (2t, C1 ), 36.2 (d, C8), 34.5 (d, C13), 33.5 (t, C10), 25.8 (6q, 2t-Bu), 18.2 (2s, 2f-Bu), 17.0 (q, C14), 13.8 (q, C9), 12.3 (q, C17), -4.4 (2q, SiMe2), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).
Etape 4 :
A une solution du composé obtenu à l'étape 3 (642 mg, 0.846 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (50 ml_) sont ajoutés de l'acide N,N- diméthylbarbiturique (NDMBA1 793 mg, 5.08 mmol, 6 équiv) et du palladium tétrakistriphénylphosphine (94 mg, 0.08 mmol, 0.1 équiv.). Après 2 heures de chauffage au reflux du dichlorométhane, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le solide rouge résultant est dissout dans l'acétate d'éthyle (200 ml_) et lavé avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (15 ml_). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde diéthyle de 7/3 à 1/1) pour conduire à la 3-fe/f-butyldiméthylsilyloxy-5-[(7£)-
(IR^S^S.δR.βS^S.IOSJ-g-te/f-butyldiméthylsilyloxy-I ^.S.IO-tétraméthoxy- 2,6)8-triméthyldodéca-7,11-diényl]aniline (388.3 mg, 0.571 mmol, 68%) sous la forme d'une huile jaune, dont les caractéristiques sont les suivantes :
Rf = 0.18 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/oxyde de diéthyle 1/1). [α]D 20 + 33.4 (c 0.77, CHCI3).
IR (film) : v : 3460, 3370, 2928, 2856, 1584, 1461, 1359, 1250, 1175, 1080, 836,777,669 cm-1.
RMN 1H (400 MHz) : δ : 6.24 (s élargi, 1H, Hi ou H5), 6.20 (s élargi, 1 H, Hi ou H5), 6.11 (s élargi, 1H, H3), 5.51 (ddd, 1H, J = 17.3, J = 10.3 et J = 7.5 Hz, H20), 5.21-5.07 (3H, H15 et H2i), 3.89 (m, 1 H1 J = 4.5 Hz, H7), 3.87 (d, 1H, J = 7.2 Hz, H18), 3.46 (m, 1H, H19), 3.45 (s, 3H, OMe), 3.30 (s, 3H, OMe), 3.28 (s, 3H, OMe), 3.23 (s, 3H, OMe), 3.15 (m, 1 H, H11), 3.09 (dd, 1H, J = 9.0 et J = 1.9 Hz, H12), 2.40 (m, 1H, H13), 1.90 (m, 1 H, H8), 1.70 (ddd syst AB, 1 H, 2J = 14.3, J = 10.8 et J = 2.8 Hz, H10), 1.54 (d, 3H, J = 0.9 Hz, H17), 1.28 (m, 1 H, H10), 0.99 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H14), 0.97 (s, 9H, f-Bu), 0.87 (s, 9H1 t-Bu), 0.76 (d, 3H, J = 6.8 Hz, H9), 0.18 (s, 3H1 SiMe), 0.17 (s, 3H, SiMe)1 0.06 (s, 3H, SiMe)1 0.00 (s, 3H, SiMe).
RMN 13C (100 MHz) : δ : 156.4 (s, C4), 144.0 (s, C2), 134.9 (d, C20), 134.9 (s, C6 ou C16), 134.8 (s, C6 ou C16), 131.4 (d, C15), 117.6 (t, C21), 109.7 (d, C1 ou C5), 107.6 (d, C1 ou C5), 106.8 (d, C3), 88.3 (d, C7), 86.3 (d, C19), 84.8 (d, C12), 81.7 (d, C18), 81.1 (d, C11), 60.8 (q, OMe), 57.4 (q, OMe)1 57.1 (q, OMe), 57.0 (q, OMe), 36.1 (d, C8), 34.6 (d, C13), 33.3 (t, C10), 25.8 (3q, f-Bu), 25.7 (3q, t-Bu), 18.2 (2s, 2f-Bu), 17.1 (q, C14), 13.6 (q, C9), 12.3 (q, C17), -4.4 (2q, SiMe2), -4.7 (q, SiMe)1 -4.8 (q, SiMe).
Etape 5 :
A une solution d'acide (2E,4E)-2-méthylhexa-2,4-diénoïque, qui peut être obtenu selon Coutrot P. et al, Synthesis (1986), 790-2, (146 mg, 1.26 mmol, 4.3 équiv.) dans le dichlorométhane (10 ml_) refroidie à 0 0C, sont ajoutés de la pyridine (250 ml_, 3.15 mmol, 11 équiv.) et du chlorure d'oxalyle (96 μl_, 1.10 mmol, 3.8 équiv.). Après 30 minutes à 0 0C et 2 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est de nouveau refroidi à 0 0C et une solution de l'aniline obtenue à l'étape 4 (198 mg, 0.292 mmol, 1 équiv.) est ajoutée via une canule. Après un retour lent à température ambiante, le milieu réactionnel est dilué avec de l'oxyde de diéthyle (15 mL) et une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (1O mL) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite successivement avec de l'oxyde de diéthyle (40 mL) et de l'acétate d'éthyle (40 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient d'éther de pétrole et d'acétate d'éthyle de 9/1 à 8/2) pour conduire au (2E,4E)-Λ/-{3-teAf-Butyldiméthylsilyloxy-5-[(7£)-
(1R,2S,4S,5f?,6S,9S,10S)-9-tert-Butyldiméthylsilyloxy-1 ,4,5,10-tétraméthoxy- 2,6,8-triméthyldodéca-7,11-diényl]phényl}-2-méthylhexa-2,4-diénamide (182 mg, 0.231 mmol, 79%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes :
Rf= 0.58 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/acétate d'éthyle 8/2). [α]D 20 + 32.9 (c 1.03, CHCI3).
IR (film) : v : 2928, 2856, 1648, 1599, 1541 , 1458, 1426, 1251 , 1102, 1080, 967, 836, 777, 670 ctτT1.
RMN 1H (400 MHz) : δ : 7.40 (s, 1 H, NH), 7.34 (s, 1H, H1 ou H3 ou H5), 6.93 (d, 1H, J = 10.9 Hz, H25), 6.78 (s, 1H, H1 ou H3 ou H5), 6.51 (s, 1H, H1 ou H3 ou H5), 6.36 (m, 1H, H26), 6.06 (m, 1H, H27), 5.49 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.4 Hz, H20), 5.20-5.05 (3H, H21 et H15), 3.95 (d, 1 H, J = 4.2 Hz, H7), 3.85 (d, 1H, J = 7.1 Hz, H18), 3.45 (m, 1 H, H19), 3.44 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.27 (s, 3H, OMe), 3.23 (s, 3H, OMe), 3.15 (d élargi, 1H, J = 10.6 Hz, H11), 3.09 (dd, 1H, J = 9.2 Hz, H12), 2.38 (m, 1 H, H13), 2.02 (s, 3H, H24), 1.92 (m, 1 H, H8), 1.87 (d, 3H, J = 6.7 Hz, H28), 1.68 (m, 1 H, H10), 1.52 (s, 3H1 H17), 1.27 (m, 1H, H10), 0.98 (m, 3H, H14), 0.96 (s, 9H1 f-Bu), 0.86 (s, 9H, t- Bu), 0.74 (d, 3H1 J = 6.7 Hz1 H9), 0.20 (s, 6H, SiMe2), 0.04 (s, 3H, SiMe), 0.01 (s, 3H1 SiMe). RMN 13C (100 MHz) : δ : 167.3 (s, C22), 156.1 (s, C4), 143.4 (s, C6), 138.9 (s, C2), 136.8 (d, C27), 134.9 (d, C20), 134.9 (s, C16), 134.4 (d, C25), 131.3 (d, C15), 128.2 (s, C23), 127.1 (d, C26), 117.6 (t, C21), 114.6 (d, C1 ou C3 ou C5), 111.3 (d, C1 ou C3 ou C5), 110.8 (d, C1 ou C3 ou C5), 88.1 (d, C7), 86.3 (d, C19), 84.7 (d, C12), 81.7 (d, C18), 81.0 (d, C11), 60.9 (q, OMe)1 57.5 (q, OMe)1 57.1 (q, OMe), 57.0 (q, OMe), 36.1 (d, C8), 34.6 (d, C13), 33.1 (t, Ci0), 25.8 (3q, t-Bu), 25.7 (3q, f-Bu), 18.9 (q, C28), 18.2 (2s, 2f-Bu), 17.1 (q, C14), 13.5 (q, C9), 13.0 (q, C24), 12.3 (q, C17), -4.4 (2q, SiMe2). -4.7 (q, SiMe)1 -4.8 (q, SiMe).
Etape 6
Rf = 0.19 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/acétate d'éthyle 8/2). RMN 1H (400 MHz, acétone d6) : <5 : 8.64 (s élargi, 1H, NH), 6.68-6.35 (5H, H3, H4, H19, H2i et H17), 5.59 (ddd, 1H, J = 14.4, J = 8.2 et J = 1.5 Hz, H5), 5.23 (d élargi, 1 H, J = 9.4 Hz, H9), 4.40 (s élargi, 1 H, H15), 3.99 (d élargi, 1 H, J = 8.0, H7), 3.62 (t apparent, 1 H, J = 8.1 Hz1 H6), 3.41 (s, 3H, OMe), 3.38 (s, 3H, OMe), 3.30 (s, 3H, OMe), 3.26 (s, 3H, OMe), 3.22 (m, 1 H, H12), 3.09 (m, 1H, H11), 2.46 (m, 1 H, H10), 1.89 (m, 1H, H13), 1.73 (m, 1H, H14), 1.64 (s élargi, 3H, 2-Me), 1.53 (s élargi, 3H, 8-Me), 1.12 (m, 1 H, H13), 1.00 (s, 9H, t- Bu), 0.99 (m, 3H, 10-Me), 0.88 (s, 9H, f-Bu), 0.74 (d élargi, 3H1 J = 7.0 Hz, 14-Me), 0.23 (s, 6H, SiMe2), 0.08 (s, 3H, SiMe), 0.05 (s, 3H, SiMe).
Etape 7 :
Rf= 0.46 (gel de silice ; éluant ether de pétrole/acétate d'éthyle 1/1).
RMN 1H (400 MHz, CDCI3) : δ : 7.48 (s élargi, 1H, NH), 6.77 (s élargi, 1H,
H2O, 6.69 (d, 1 H, J =11.2 Hz, H3), 6.51 (s élargi, 1H, H19), 6.36 (s élargi, 1H, H17), 6.31 (dd, 1 H, J = 15.2 et J = 11.2 Hz, H4), 5.53 (dd, 1 H, J = 15.2 et J = 9.3 Hz, H5), 5.33 (d, 1 H, J = 9.8 Hz, H9), 4.46 (s, 1 H, H15), 3.90 (d, 1 H, J = 9.1 Hz, H7), 3.54 (t, 1H, J = 9.2 Hz, H6), 3.44 (s, 3H, OMe), 3.35 (s, 3H, OMe), 3.32 (s, 3H, OMe), 3.26 (s, 3H1 OMe), 3.11 (m, 1 H, H12), 2.99 (dd, 1 H1 J = 7.7 et J = 2.8 Hz, H11), 2.51 (m, 1H, H10), 1.91 (ddd syst AB, 1H, 2J = 14.9, J = 8.8 et J = 6.9 Hz, H13), 1.57 (s, 3H, 8-Me), 1.51 (s, 3H, 2-Me), 1.46 (m, 1 H, H14), 1.25 (m, 1H, H13), 1.02 (d, 3H, J = 6.5 Hz, 10-Me), 0.69 (d, 3H, J = 7.1 Hz, 14-Me).
Etape 8 :
A une solution du macrolactame obtenu à l'étape 7 (7.5 mg, 0.014 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (3 ml_) est ajouté du trichloroacétylisocyanate (10 μl_, 0.084 mmol, 6 équiv.). Après 35 minutes à température ambiante le mélange réactionnel est évaporé sous vide et dissout dans du méthanol (2 mL). Du carbonate de potassium (25 mg) est ensuite ajouté et le mélange réactionnel est agité pendant 2 h à température ambiante. Après évaporation sous vide, le mélange réactionnel est dissout dans de l'éther (10 mL) et la phase organique est lavée avec de l'eau (1 mL) et de la saumure (1 mL). La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (5 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par CCM préparative (éluant : éther de pétrole/acétate d'éthyle 1/1) pour conduire au carbamate de (4£,6E,10E)-(8SI9S,12S,13R14S,16Sl17R)- 20-hydroxy-8, 13,14,17-tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3-oxo-2- azabicyclo[16.3.1]docosa-1(22),4,6,10,18,20-hexaén-9-yle (2.3 mg, 0.0041 mmol, 30%), dont les caractéristiques sont les suivantes :
Rf= 0.24 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole / acétate d'éthyle 1/1).
RMN 1H (400 MHz, CDCI3) : δ : 7.27 (s él, 1H, NH), 6.73 (s él, 1 H, H2i), 6.51 (d, 1 H, J = 11.2 Hz, H3), 6.49 (s él, 1 H, H19), 6.38 (s él, 1 H, Hi7), 6.31 (dd, 1 H, J = 15.1 et J = 11.2 Hz1 H4), 5.69 (s él, 1 H1 OH), 5.51 (dd, 1H1 J = 15.1 et J =
8.7 Hz, H5), 5.43 (d, 1H, J = 9.7 Hz, H9), 5.14 (d, 1H, J = 8.9 Hz, H7), 4.80- 4.55 (2H, NH2), 4.33 (d, 1 H, J = 2.2 Hz, H15), 3.70 (t apparent, 1 H, J = 8.8 Hz, H6), 3.44 (s 3H1 OMe), 3.33 (s 3H, OMe), 3.32 (s 3H, OMe), 3.23 (s, 3H, OMe), 3.11 (dt, 1 H, J = 9.2 et J = 2.7 Hz, H12), 3.04 (dd, 1 H1 J = 7.8 et J = 2.7 Hz, H11), 2.45 (m, 1 H, H10), 1.92 (ddd syst AB, 1H, 2J = 14.5, J = 9.2 et J = 5.9 Hz, H13), 1.69 (m, 1H, H14), 1.64 (s, 3H, 2-Me), 1.49 (s él, 3H, 8-Me), 1.12 (m, 1H, H13), 1.00 (d, 3H1 J = 6.5 Hz, 10-Me), 0.69 (d, 3H, J = 7.0 Hz, 14-Me).
Exemple 2 : « 15-éjo/'-Herbim veine A » ou carbamate de (4£,6Z,10£)- (8S,9SJ2SJ3R,14SJ6SJ7S)-8J3J4J7-tétraméthoxy-4>10>12>16- tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1]docasa-1(21)-4,6,10,18- pentaèn-2-yle (composé de type I bSZ) Etape 1 :
A une solution de Λ/,Λ/-diallyl-3-bromo-2,5-diméthoxyaniline (475 mg, 1 ,52 mmol, 5 équiv.), qui peut être obtenue selon Canova S. et a/, Org. Lett (2007), 9, 145-8, dans de l'oxyde de diéthyle anhydre (8 ml_) refroidie à -78 0C, est ajouté du n-butyllithium (0,6 ml_, 2,5 M dans l'hexane, 1,5 mmol, 5 équiv.). Après 30 minutes à température ambiante, le milieu réactionnel est de nouveau refroidi à -78 °C et une solution de (7E)-(2S,4S,5R,6S,9S,10S)-9- te/f-butyldiméthylsilyloxy-4,5,10-triméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7,11-diénal (0.30 mmol, 1 équiv.), qui peut être obtenu selon Canova S. et al, Org. Lett (2007), 9, 145-8, dans de l'oxyde de diéthyle anhydre (4 mL) est ajoutée via une canule. Après 1,5 heure à -78 0C, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (1O mL) est ajoutée et la phase aqueuse
résultante est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 30 ml_). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde de diéthyle de 8/2 à 6/4) pour conduire aux deux épimères en C15 :
le (T^IS^S^S.δRβS.ΘS.IOS^g-tert-butyldiméthylsilyloxy-i-CS-diallyl- amino-2,5-diméthoxyphényl)-4,5, 10-triméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7, 11 - dién-1-ol (66 mg, 0.098 mmol, 33%), sous la forme d'une huile jaune, dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.13 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole / oxyde de diéthyle 6/4). [α]D 2σ 3.05 (c 1.05, CHCI3).
IR (film) : v : 3430, 2927, 2855, 1595, 1464, 1361, 1249, 1215, 1194, 1173, 1079, 1005, 919, 836, 776, 670 cm"1. RMN 1H (400 MHz) : δ: 6.48 (d, 1H, J= 3.0 Hz, H3), 6.38 (d, 1H, J= 3.0 Hz, H5), 5.82-5.70 (2H, H2), 5.51 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.6 Hz, H20), 5.21-5.05 (7H1 H15 et H21 et H3), 4.58 (d, 1 H, J = 8.9 Hz, H7), 3.88 (d, 1H, J = 7.2 Hz, H18), 3.81-3.66 (4H, H1 ), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.49 (s, 3H, OMe), 3.45 (m, 1H, H19), 3.38 (s, 3H, OMe), 3.28 (s, 3H, OMe), 3.27 (m, 1H, H11), 3.14 (dd, 1 H1 J = 9.1 et J = 1.5 Hz, H12), 2.41 (m, 1H1 H13), 2.08 (ddd syst AB, 1 H, 2J = 15.0, J = 10.5 et J = 4.6 Hz1 H10), 1.85 (m, 1 H, H8), 1.53 (d, 3H, J = 1.3 Hz, H17), 1.31 (m, 1 H, H10), 1.01 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H14), 0.86 (s, 9H1 f-Bu), 0.68 (d, 3H1 J = 6.8 Hz, H9), 0.05 (s, 3H1 SiMe)1 0.00 (s, 3H1 SiMe). RMN 13C (100 MHz) : <5 : 155.6 (s, C4), 144.9 (s, C1 ou C2), 144.0 (s, C1 ou C2), 138.0 (s, C6), 135.1 (2d, C2), 135.1 (d, C20), 135.0 (s, C16), 131.2 (d, C15), 117.6 (t, C2i), 117.2 (2t, C3), 106.9 (d, C5), 104.1 (d, C3), 86.3 (d, C19), 84.3 (d, C12), 82.8 (d, C11), 81.7 (d, C18), 74.6 (d, C7), 60.8 (q, OMe), 59.7 (q, OMe), 57.1 (q, OMe), 56.8 (q, OMe), 55.4 (q, OMe), 53.9 (2t, C1 ), 38.5 (d, C8), 34.8 (d, C13), 33.9 (t, C10), 25.8 (3q, f-Bu), 18.3 (s, f-Bu), 18.2 (q, C9), 17.2 (d, C14), 12.2 (q, C17), -4.7 (q, SiMe)1 -4.8 (q, SiMe).
et le (7£)-(1/?)2S,4S,5R6S,9SI10S)-9-feAf-butyldiméthylsilyloxy-1-(3-diallyl- amino-2,5-diméthoxyphényl)-4,5,10-triméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7,11- dién-1-ol (109 mg, 0.161 mmol, 54%), dont les caractéristiques sont décrites à l'étape 1 de l'exemple 3.
Etape 2 :
A une solution de (7£)-(1S,2S,4S,5R6S,9S,10S)-9-teAf- butyldiméthylsilyloxy-1-(3-diallyl-amino-2,5-diméthoxyphényl)-4,5,10- triméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7,11-dién-1-ol (171 mg, 0,25 mmol, 1 équiv.), obtenu à l'étape 1 dans le dichlorométhane (10 ml_) sont ajoutés de l'acide Λ/,Λ/-diméthylbarbiturique (155 mg, 0,99 mmol, 4 équiv.) et du palladium tétrakistriphénylphosphine (29 mg, 0,025 mmol, 0,1 équiv.). Après 8 heures de chauffage au reflux du dichlorométhane, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le solide rouge résultant est dissout dans l'acétate d'éthyle (30 ml_) et lavé avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (4 x 10 ml_). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/oxyde de diéthyle 1/1) pour conduire à .la 3-[(7E)- (1 S,2S,4S,5R,6S,9S, 10S)-9-ferf-Butyldiméthylsilyloxy-1 ,4,5,10-tétraméthoxy- 2,6,8-triméthyldodéca-7,11-diényl]-2,5-diméthoxyaniline (86.7 mg, 0.142 mmol, 57%), sous la forme d'une huile jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.33 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole/oxyde de diéthyle 1/1). [<x]D 20 - 12.3 (c 1.09, CHCI3).
IR (film) : v : 3450, 3360, 2928, 1615, 1493, 1463, 1351, 1246, 1196, 1080, 1003, 836, 775 cm"1.
RMN 1H (400 MHz) : δ : 6.31 (d, 1 H, J = 2.9 Hz, H3), 6.22 (d, 1 H, J = 2.9 Hz, H5), 5.49 (ddd, 1H1 J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.5 Hz, H20), 5.20-5.06 (3H1 H15 et H21), 4.12 (d, 1H, J = 8.4 Hz, H7), 3.86 (d, 1 H, J = 7.2 Hz, H18), 3.72 (s, 3H, OMe)1 3.70 (s, 3H, OMe)1 3.49 (s, 3H, OMe), 3.44 (m, 1 H, H19), 3.31 (s, 3H, OMe), 3.26 (s, 3H, OMe), 3.19 (s, 3H1 OMe), 3.18 (m, 1H, H11), 3.12 (dd, 1H, J = 8.8 et J = 2.0 Hz, H12), 2.41 (m, 1H1 H13), 2.25 (m, 1H, H10), 1.97 (m, 1H, H8), 1.52 (d, 3H, J = 1.0 Hz, H17), 1.04 (m, 1H, H10), 0.99 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H14), 0.86 (s, 9H, t-Bu), 0.64 (d, 3H, J = 6.8 Hz1 H9), 0.05 (s, 3H, SiMe), 0.00 (s, 3H, SiMe).
RMN 13C (100 MHz) : δ : 156.7 (s. C4), 140.7 (s, C1 ou C2), 140.2 (s, C1 ou C2), 135.1 (s, C6), 134.9 (d, C20), 134.7 (s, C16), 131.6 (d. C15), 117.6 (t, C21), 101.2 (d, C5), 101.0 (d, C3), 86.3 (d, C19), 84.8 (d. C12), 82.2 (d, C7), 81.7 (d, C18), 80.6 (d, C11), 60.8 (q, OMe), 59.9 (q, OMe), 57.3 (q, OMe), 56.9 (q, OMe), 56.8 (q, OMe), 55.4 (q, OMe), 35.7 (d, C8), 34.5 (d, C13), 32.7 (t, C10), 25.8 (3q, f-Bu), 18.2 (s, f-Bu), 17.0 (q, C14), 15.8 (d, C9), 12.2 (q, C17), -4.8 (2q, SiMe2).
Etape 3 :
A une solution de l'aniline obtenue à l'étape 2 (85 mg, 0,14 mmol, 1 équiv.) dans le THF anhydre (10 ml_), sont ajoutés de la triéthylamine (0,12 mL, 0,84 mmol, 6 équiv.), une quantité catalytique de Λ/.Λ/-4- diméthylaminopyridine (5 mg) et de l'anhydride de terf-butyloxycarbonyle (91 mg, 0,42 mmol, 3 équiv.). Après 8 heures de chauffage au reflux du THF, le
milieu réactionnel est concentré sous vide puis purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde de diéthyle de 7/3 à 6/4) pour conduire au Λ/-{3-[(7E)-(1S,2S,4S,5R,6S,9S,10S)- 9-tert-butyldiméthylsilyloxy-1 ,4,5,10-tétraméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7, 11 - diényl]-2,5-diméthoxyphényl}biscarbamate de te/t-butyle (92,1 mg, 0,114 mmol, 82%), sous la forme d'une huile jaune dont les caractéristiques sont les suivantes :
Rf= 0.54 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/oxyde de diéthyle 1/1). [α]D 20 - 27.2 (c 0.92, CHCI3). IR (film) : v : 2929, 1789, 1753, 1725, 1610, 1481, 1368, 1276, 1250, 1153, 1095, 837, 776 cm1.
RMN 1H (400 MHz) : <5: 6.85 (d, 1H, J= 3.1 Hz, H3), 6.55 (d, 1H, J= 3.1 Hz, H5), 5.48 (ddd, 1H, J= 17.3, J= 10.2 et J = 7.6 Hz, H20), 5.19-5.04 (3H, H2i et H15), 4.11 (d, 1H, J = 8.8 Hz, H7), 3.86 (d, 1H, J = 7.0 Hz, H18), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.67 (s, 3H, OMe), 3.47 (s, 3H, OMe), 3.43 (m, 1H, Hi9), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.23 (s, 3H, OMe), 3.18 (m, 1H, H11), 3.12 (s, 3H, OMe), 3.12 (m, 1H, H12), 2.38 (m, 1H, H13), 2.26 (m, 1H, H10), 1.92 (m, 1H, H8), 1.52 (d, 3H1 J = 1.2 Hz, Hi7), 1.37 (s, 18H, 2Boc), 1.03 (m, 1H, H10), 0.97 (d, 3H, J = 6.5 Hz, H14), 0.84 (s, 9H, f-Bu), 0.58 (d, 3H, J= 6.8 Hz1 H9), 0.03 (s, 3H, SiMe), -0.02 (s, 3H1SiMe).
RMN 13C (100 MHz) : δ : 155.7 (s, C4), 151.6 (2s, 2Boc), 148.3 (s, C1), 136.0 (s, C6), 134.9 (d, C20), 134.7 (s, C16), 133.2 (s, C2), 131.5 (d, C15), 1 17.5 (t, C21), 114.1 (d, C5), 111.3 (d, C3), 86.4 (d, C19), 84.6 (d, C12), 82.4 (2s, 2Boc),
82.0 (d, C7), 81.6 (d, Ci8), 80.6 (d, Cn), 60.8 (2q, OMe), 57.0 (q, OMe), 56.9 (q, OMe), 56.8 (q, OMe), 55.6 (q, OMe), 36.0 (d, C8), 34.6 (d, Ci3), 32.7 (t, C10), 27.8 (6q, 2Boc), 25.8 (3q, f-Bu), 18.2 (s, f-Bu), 17.1 (q, C14), 16.0 (q, C9), 12.3 (q, C17), -4.8 (2q, SiMe2).
Etape 4 :
A une solution de l'alcool protégé obtenu à l'étape 3 (92 mg, 0,114 mmol, 1 équiv.) dans le THF (5 ml_) est ajouté du fluorure de tétrabutylammonium (0,6 ml_, 1 M dans le THF, 0,6 mmol, 5 équiv.). Après 24 h d'agitation à température ambiante, uen solution aqueuse saturée de chlorure de sodium (5 ml_) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 15 ml_). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide pour conduire à l'alcool déprotégé correspondant qui est utilisé sans purification supplémentaire.
A une solution de cet alcool déprotégé (0,114 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (6 mL) refroidie à -78 0C, sont ajoutés de la diisopropyléthylamine (60 μL, 0,68 mmol, 6 équiv.) et du chlorure d'acryloyle (28 μL, 0,34 mmol, 3 équiv.). Après 16 heures d'agitation à -78 0C, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (5 mL) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (3 x 15 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/acétate d'éthyle 8/2) pour conduire à l'acrylate de (5E)-(3S,4S,7S,8R,9S, 11 S, 12S)-12-[3-bis(ferf-
butoxycarbonyOamino^.δ-diméthoxyphénylJ-S.δ.θ.^-tétraméthoxy-δ.Z.H- triméthyldodéca-1 ,5-dién-4-yle (45,5 mg, 0,061 mmol, 53%) sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.44 (gel de silice ; éluant :ether de pétrole/acétate d'éthyle 7/3). [α]D 20 - 27.8 (c 1.14, CHCI3).
IR (film) : v : 2926, 1787, 1752, 1726, 1610, 1481 , 1368, 1274, 1252, 1187, 1152, 1095, 1049, 855, 808, 778, 731 cm"1.
RMN 1H (400 MHz) : δ : 6.86 (d, 1H1 J = 3.1 Hz, H3), 6.56 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, H5), 6.48 (dd, 1 H1 J = 17.3 et 2J = 1.4 Hz1 H24), 6.13 (dd, 1H1 J = 17.3 et J = 10.4 Hz1 H23), 5.79 (dd, 1H , J = 10.4 et 2J = 1.4 Hz, H24), 5.58 (ddd, 1H1 J = 17.5, J = 10.3 et J = 7.5 Hz, H20), 5.33 (d, 1 H, J = 6.8 Hz, H15), 5.30-5.18 (2H, H2i), 5.15 (d, 1H1 J = 6.8 Hz1 H18), 4.12 (d, 1H1 J = 8.6 Hz1 H7), 3.75 (s, 3H, OMe)1 3.71 (m, 1H1 Hi9), 3.68 (s, 3H1 OMe)1 3.46 (s, 3H1 OMe)1 3.26 (s, 6H1 2OMe), 3.16-3.07 (2H1 H11 et H12), 3.13 (s, 3H1 OMe)1 2.42 (m, 1 H1 H13), 2.23 (m, 1H1 H10), 1.92 (m, 1H1 H8), 1.62 (d, 3H1 J = 0.7 Hz1 H17), 1.38 (s, 18H1 2Boc), 1.02 (m, 1H1 H10), 1.00 (d, 3H1 J = 6.5 Hz1 Hu)1 0.60 (d, 3H1 J = 6.8 Hz1 H9).
RMN 13C (100 MHz) : δ : 165.1 (s, C22), 155.7 (s, C4), 151.6 (2s, 2Boc), 148.3 (s, C1), 135.9 (s, C6), 134.0 (d, C20), 133.2 (d, C15), 133.2 (s, C2), 130.7 (t, C24), 130.3 (s, C16), 128.6 (d, C23), 119.2 (t, C21), 114.1 (d, C5), 111.3 (d, C3). 84.7 (d, C12), 83.3 (d, Ci9), 82.5 (2s, 2Boc), 82.0 (d, C7), 80.6 (d, C11), 79.9 (d, C18), 60.8 (2q, OMe), 57.0 (q, OMe)1 56.8 (2q, OMe), 55.7 (q, OMe), 36.0 (d, C8), 34.7 (d, C13), 32.7 (t, C10), 27.8 (6q, 2Boc), 17.0 (q, C14), 15.9 (q, C9), 14.0 (q, C17).
Etape 5
Rf= 0.30 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole/acétate d'éthyle 1/1).
IR (film) : v : 2924, 2853, 1782, 1725, 1610, 1457, 1368, 1276, 1250, 1152, 1096, 853, 824, 778, 731 cm"1.
RMN 1H (400 MHz) : δ : 6.97 (dd, 1 H, J = 9.8 et J = 5.3 Hz, H20), 6.86 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, H3), 6.57 (d, 1H, J = 3.1 Hz, H5), 6.20 (d, 1H, J = 9.8 Hz, H2i), 5.52 (d, 1H, J = 10.2 Hz, H15), 4.68 (d, 1 H, J = 2.6 Hz, H18), 4.15 (d, 1H, J = 8.5 Hz1 H7), 3.91 (dd, 1 H, J = 5.3 et J = 3.2 Hz1 H19), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.69 (s, 3H1 OMe), 3.51 (s, 3H, OMe), 3.35 (s, 3H, OMe), ), 3.31 (s, 3H, OMe), 3.36 (m, 1 H, Hn), 3.20 (dd, 1H1 J = 8.6 et J = 2.2 Hz, H12), 3.15 (s, 3H, OMe), 2.58 (m, 1 H1 H13), 2.24 (m, 1 H, H10), 1.96 (m, 1H, H8), 1.75 (s, 3H H17), 1.39 (s, 18H1 2Boc), 1.08 (m, 1 H, H10), 1.07 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H14), 0.63 (d, 3H, J = 6.8 Hz, H9). RMN 13C (100 MHz) : δ : 163.1 (s, C22), 155.7 (s, C4), 151.6 (2s, 2Boc), 148.3 (s, C1), 142.1 (d, C20), 135.9 (s, C6), 133.2 (s, C2), 131.5 (d, C15), 128.7 (s. C16), 124.2 (d, C21), 114.1 (d, C5), 111.4 (d, C3), 84.9 (d, C12), 83.2 (d, C18), 82.5 (2s, 2Boc), 82.0 (d, C7), 80.6 (d, C11), 70.0 (d, C19), 60.8 (2q, 2OMe), 57.3 (q, OMe)1 56.9 (q, OMe), 56.8(q, OMe), 55.7 (q, OMe)1 36.0 (d, C8), 34.8 (d, C13), 32.9 (t, C10), 27.8 (6q, 2Boc), 17.1 (q, C14), 15.8 (q, C17). 13.9 (q, C9).
Etape 6 :
A une solution de la lactone obtenue à l'étape 5 (24 mg, 0,033 mmol, 1 équiv.) dans l'oxyde ded iéthyle anhydre (2 ml_) refroidie à -78 0C est ajouté une solution d'hydrure de di/sobutylaluminium (0,1 mL, 1 M dans l'hexane, 0,1 mmol, 3 équiv.). Après 2 heures à -78 0C, le mélange réactionnel est versé sur une solution aqueuse saturée de tartrate mixte de sodium et de potassium (2 mL). Après 2 heures d'agitation vigoureuse, la phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 10 mL). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, et concentrées sous vide pour conduire au lactol correspondant qui est utilisé sans purification supplémentaire.
A une solution de ce lactol (0,033 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre (6 mL) est ajouté du (carbéthoxyéthylidène)-triphénylphosphorane (36 mg, 0,1 mmol, 3 équiv.). Après 3,5 heures de chauffage au reflux du toluène, le mélange réactionnel est concentré sous vide et purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'acétate d'éthyle de 6/4 à 1/1) pour conduire au (2E,4Z,8E)- (6S.7S, 10S, 11 R, 12S, 14S, 15S)-15-[3-bis(terf-butoxycarbonyl)amino-2,5- diméthoxyphényl]-7-hydroxy-6, 11 ,12,15-tétraméthoxy-2,8, 10, 14-tétraméthyl- pentadéca-2,4,8-triénoate d'éthyle (22 mg, 0,027 mmol, 83%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.54 (EP/AE : 1/1). [α]D 20 + 5.36 (c 1.10, CHCI3). IR (film) : v : 3500, 2930, 1784, 1751, 1708, 1609, 1458, 1367, 1247, 1152, 1094, 854, 747 cm-1.
RMN 1H (400 MHz) : δ : 7.46 (m, 1H, H22), 6.84 (d, 1H, J = 3.1 Hz, H3), 6.57 (d, 1H, J = 3.1 Hz, H5), 6.53 (t apparent, 1 H, J = 11.5 Hz, H21), 5.52 (t apparent, 1 H, J = 10.4 Hz, H20), 5.38 (d, 1 H, J = 9.9 Hz, H15), 4.27-4.06 (4H, H7 et OEt et H19), 3.89 (d, 1H, J = 7.6 Hz, H18), 3.76 (s, 3H, OMe)1 3.68 (s, 3H1 OMe), 3.44 (s, 3H, OMe), 3.30 (s, 6H1 2OMe), 3.20 (m, 1 H1 H11), 3.14 (s, 3H1 OMe)1 3.06 (dd, 1H, J = 7.3 et J = 2.9 Hz, H12), 2.83 (s élargi, 1H, OH), 2.48 (m, 1 H1 H13), 2.16 (m, 1H1 H10), 1.93 (d, 3H, J = 0.8 Hz, H24), 1.93 (m, 1H, H8), 1.59 (d, 3H1 J = 0.6 Hz1 H17), 1.39 (18H, 2Boc), 1.29 (t, 3H, J = 7.1 Hz, OEt), 1.10 (m, 1 H, H10), 0.98 (d, 3H, J = 6.7 Hz, H14), 0.63 (d, 3H, J = 6.8 Hz1 H9).
RMN 13C (100 MHz) : δ : 168.0 (s, C25), 155.7 (s, C4), 151.6 (2s, 2Boc), 148.2 (s, C1), 135.8 (s, C6), 133.8 (d, C20), 133.4 (d, C15), 133.2 (s, C2), 132.2 (s, C16), 131.4 (d, C22). 130.2 (s. C23), 128.6 (d, C21), 114.0 (d, C5), 111.5 (d, C3), 85.3 (d, C11), 82.5 (2s. 2Boc), 82.0 (d, C7 ou C19), 80.2 (d, C12), 79.6 (d, C18), 79.2 (d, C7 ou C19), 60.8 (q, OMe), 60.8 (t, OEt), 60.6 (q, OMe), 57.0 (q, OMe), 56.8 (q, OMe)1 56.6 (q, OMe)1 55.7 (q, OMe), 36.0 (d, C8), 34.4 (d, C13), 33.1 (t, C10), 27.8 (6q, 2Boc), 16.4 (q, C14), 16.0 (q, C9), 14.3 (q, OEt), 13.1 (q, C17), 12.5 (q, C24).
Etape 7 :
L'étape 7 correspond au schéma ci-dessous dans lesquelles les réactions successives sont enchaînées sans purification particulières des divers intermédiaires.
produit de l'étape 6
15-épi-Herbimycine A
A une solution du biscarbamate obtenu à l'étape 6 (21 mg, 0,026 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (2 ml_) refroidie à 0 0C est ajouté de l'acide trifluoroacétique (150 μl_, 2,08 mmol, 80 équiv.). Après 10 minutes à 00C puis 1 heure à température ambiante, du toluène (2 ml_) est ajouté et le mélange réactionnel est concentré sous vide puis dissout dans de l'acétate d'éthyle (20 ml_). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse saturée de carbonate de potassium (4 m L) et avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium (4 mL). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et concentrée sous vide pour conduire à l'aniline déprotégée qui est utilisée sans purification supplémentaire.
A une solution de cette aniline déprotégée (0,026 mmol, 1 équiv.) dans un mélange de méthanol de THF et d'eau (2/2/1 , 5 mL) est ajoutée de l'hydroxyde de lithium (12,5 mg, 0,52 mmol, 20 équiv.). Après 60 heures à température ambiante, le mélange réactionnel est concentré sous vide et une solution aqueuse à 10% de dihydrogénophosphate de sodium (3 mL) est ajoutée. La phase aqueuse résultante est saturée en chlorure de sodium et extraite avec du dichlorométhane (3 x 10 mL). Les phases organiques sont
rassemblées, séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour conduire à l'aminoacide correspondant qui est utilisé sans purification supplémentaire.
A une solution de cet aminoacide (0,026 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre (33 mL) sont ajoutés de la di/sopropyléthylamine (136 μl_, 0.78 mmol, 30 équiv.) et du chlorure de bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)phosphinyle (BOPCI, 20 mg, 0.078 mmol, 3 équiv.). Après 3 jours à 85 0C et un ajout supplémentaire de BOPCI (5 mg), le mélange réactionnel est versé sur une solution aqueuse tamponnée de dihydrogénophosphate de sodium (pH = 4.5, 40 mL). La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 20 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par CCM préparative sur gel de silice (éluant : dichlorométhane/méthanol 9/1) pour conduire au macrolactame correspondnat (6 mg, 0,01 mmol, 41%), contaminé par une impureté non identifiée, mais utilisé sans purification supplémentaire.
A une solution de ce macrolactame (6 mg, 0,01 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (2 mL) est ajouté de l'isocyanate de trichloroacétyle (8 μL, 0,067 mmol, 6 équiv.). Après 1 heure à température ambiante, le mélange réactionnel est concentré sous vide puis du méthanol (1 mL) et du carboante de potassium (11 mg) sont ajoutés. Après 1,5 heure à température ambiante, le méthanol est évaporé sous vide et le mélange réactionnel est dissout dans l'oxyde de diéthyle (10 mL). La phase organique obtenue est lavée avec de l'eau (1 mL) et une solution saturée de chlorure de sodium (1 mL). La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 5 mL). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide pour conduire au carbamate attendu qui est utilisé sans purification supplémentaire.
Ce carbamate (0,01 mmol, 1 équiv.) est dissout dans un mélange d'acétonitrile et d'eau (10/1 , 2,2 mL) et une solution aqueuse 1 M de nitrate de cérium et d'ammonium (CAN, 20 μL, 20 équiv.) est ajoutée à -10 0C. Après 0,5 heure à -10 0C1 de l'eau (2 mL) est ajoutée et la phase aqueuse
est extraite avec du dichlorométhane (5 x 5mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par CCM préparative sur gel de silice (éluant : dichlorométhane/méthanol 9/1) puis sur une petite colonne de silice (éluant : acétate d'éthylel) pour conduire au carbamate de (4E.6Z.10E)- (8S.9S, 12S.13R.14S,16S,17S)-8, 13, 14,17-tétraméthoxy-4,10,12,16- tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1]docosa-1(21),4,6,10)18- pentaén-9-yl15, ou 15-ép/-herbimycine A, (1 mg, 0,0017 mmol, 17%), sous la forme d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.66 (AE).
[α]D 20 + 18.0 (c 0.05, CHCI3).
IR (film) : v : 3428, 3300, 3170, 2923, 2823, 1734, 1698, 1645, 1608, 1503,
1379, 1318, 1269, 1194, 1094, 1051 , 908 cnrï1.
RMN 1H (400 MHz) : δ : 8.47 (s élargi, 1 H1 NH), 7.48 (d, 1 H1 J = 2.5 Hz, H19), 6.72 (s élargi, 1H, H17), 6.55 (t apparent, 1 H, J = 11.3 Hz, H4), 5.87 (m, 1H, H3), 5.70-5.45 (2H, H5 et H9), 5.04 (m, 1H, H7), 4.65 (m, 2H, NH2), 4.30-4.11 (2H, H15 et H6), 3.58-3.25 (12H, 4OMe), 3.20-3.08 (2H, Hn et H12), 2.35 (m, 1H, H10), 2.02 (s, 3H, 2-Me), 1.76 (s él, 3H1 8-Me), 1.65 (m, 1 H, H13 ou H14), 1.60 (m, 1 H1 H13 ou H14), 1.31 (m, 1 H, H13), 1.13-0.78 (6H, 10-Me et 14-Me).
Exemple 3 : Carbamate de (4E,6Z,10E)-(8S,9S,12S,13K,14S,16S,17R)-9- carbamoyloxy-8,13,14-triméthoxy-4,10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo- 2-azabicyclo[16.3.1]docasa-1(21)-4,6,10,18-pentaèn-17-yle ou « 15- déméthoxy-15-carbamoyloxy-Herbimycine A » (composé de type I bRZ) Etape 1 :
le (7£)-(1 R2S,4S,5R,6S,9S, 10S)-9-ferf-butyldiméthylsilyloxy-1 -(3-diallyl- amino-2,5-diméthoxyphényl)-4,5,10-triméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7,11- dién-1-ol (109 mg, 0.161 mmol, 54%), sous forme d'une huile jaune dont les caractéristiques sont les suivantes :
Rf= 0.20 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole/oxyde de diéthyle 6/4). [α]D 20 + 22.5 (c 4.19, CHCI3).
IR (film) : v : 3450, 2928, 2856, 1594, 1470, 1361 , 1249, 1215, 1194, 1172, 1078, 1005, 919, 836, 775, 670 cm'1. RMN 1H (400 MHz) : <5 : 6.58 (d, 1 H, J = 3.0 Hz, H3), 6.36 (d, 1 H, J = 3.0 Hz1 H5), 5.76 (2H, H2), 5.52 (ddd, 1 H1 J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.5 Hz, H20), 5.23- 5.05 (7H, H15 et H21 et H3), 4.87 (d, 1 H, J = 4.7 Hz, H7), 3.87 (d, 1H, J = 7.2 Hz, H18), 3.80-3.66 (4H, H1 ), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.74 (s, 3H, OMe), 3.46 (m, 1H, H19), 3.44 (s, 3H, OMe), 3.35 (s, 3H1 OMe), 3.28 (s, 3H, OMe), 3.27 (m, 1H, H11), 3.09 (dd, 1 H, J = 9.0 et J = 1.5 Hz, H12), 3.06 (s élargi, 1H, OH),
2.39 (m, 1 H1 H13), 2.01 (m, 1H1 H8), 1.71 (ddd syst AB, 1 H, 2J = 14.9, J = 10.3 et J = 6.4 Hz, H10), 1.53 (d, 3H1 J = 0.9 Hz, H17), 1.27 (m, 1 H1 H10), 0.99 (d, 3H, J = 6.6 Hz1 H14), 0.86 (s, 9H1 t-Bu), 0.78 (d, 3H, J = 6.8 Hz, H9), 0.05 (s, 3H1 SiMe)1 0.00 (s, 3H, SiMe). RMN 13C (100 MHz) : δ : 155.3 (s, C4), 143.9 (s, C1 ou C2), 143.7 (s, C1 ou C2), 137.2 (s, C6), 135.0 (2d, C2), 135.0 (d, C20), 135.0 (s, C16), 131.2 (d, C15), 117.7 (t, C21), 117.2 (2t, C3), 106.8 (d, C5), 104.4 (d, C3), 86.4 (d, C19), 84.6 (d, C12), 82.5 (d, C11), 81.8 (d, C18). 72.5 (d, C7), 60.7 (q, OMe), 59.1 (q, OMe), 57.1 (q, OMe), 56.7 (q, OMe), 55.4 (q, OMe), 53.8 (2t, C1 ), 36.5 (d, C8), 34.7 (d. C13), 32.9 (t, C10), 25.8 (3q, f-Bu), 18.2 (s, f-Bu), 17.2 (q, C14), 15.1 (q, C9), 12.1 (q, C17), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).
et le (7£)-(18,25,48,5^,68,9S110S)-9-ferf-butyldiméthylsilyloxy-1 -(3-diallyl- amino^.S-diméthoxyphénylH.δ.iO-triméthoxy^.δ.δ-triméthyldodéca^.i i- dién-1-ol (66 mg, 0.098 mmol, 33%), dont les caractéristiques sont décrites à l'étape 1 de l'exemple 2.
Etape 2 :
A une solution de (7£)-(1Rl2S,4S,5Rl6S,9S,10S)-9-fert-butyl- diméthylsilyloxy-1 -(3-diallyl-amino-2,5-diméthoxyphényl)-4,5, 10-triméthoxy-
2,6,8-triméthyldodéca-7,11-dién-1-ol (133 mg, 0,197 mmol, 1 équiv.) dans le cyclohexane (1O mL) et le dichlorométhane (7 ml_) sont ajoutés du trichloroacétimidate de para-méthoxybenzyle (111 mg, 0,393 mmol, 2 équiv.) en solution dans le dichlorométhane (3 ml_) et de l'acide camphresulfonique (5 mg, 0,02 mmol, 0.1 équiv.). Après 24 heures d'agitation à température
ambiante, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (10 ml_) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 25 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde de diéthyle de 8/2 à 6/4) pour conduire à la Λ/,Λ/-diallyl-3- [(y^-CIR^S^S.δR.δS.gS.IOSJ-g-fe/t-butyl-diméthylsilyloxy^.δ.iO- triméthoxy-1 -para-méthoxybenzyloxy-2,6,8-triméthyl-dodéca-7, 11 -diényl]-2,5- diméthoxyaniline (47.4 mg, 0.060 mmol, 30%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes :
Rf= 0.26 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/oxyde de diéthyle 8/2). [α]D 20 + 22.8 (c 0.98, CHCI3).
IR (film) : v : 2927, 2855, 1589, 1513, 1464, 1247, 1172, 1061 , 1058, 920, 836, 776, 670 cm-1. RMN 1H (400 MHz) : 5 : 7.26 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H6), 6.85 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H7), 6.59 (d, m, J = 2.9 Hz, H3), 6.40 (d, 1 H1 J = 3.0 Hz, H5), 5.86-5.73 (2H, H2), 5.51 (ddd, 1H, J = 17.2, J = 10.4 et J = 7.4 Hz, H20), 5.23-5.06 (7H, H15 et H21 et H3), 4.61 (d, 1 H, J = 5.3 Hz, H7), 4.40 (d syst AB, 1 H, 2J = 11.1 Hz, H4), 4.23 (d syst AB, 1 H, 2J = 11.1 Hz, H4), 3.86 (d, 1 H, J = 7.2 Hz, H18), 3.84-3.68 (4H, H1 ), 3.79 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 6H, 2OMe), 3.45 (m, 1H, H19), 3.40 (s, 3H, OMe), 3.28 (s, 3H, OMe), 3.27 (s, 3H, OMe), 3.19 (d élargi, 1 H, J = 8.2 Hz, H11), 3.03 (dd, 1H, J = 8.2 et J = 2.5 Hz, H12), 2.42 (m, 1H, H13), 1.98 (m, 1 H, H8), 1.65 (ddd syst AB, 1 H, 2J = 14.3, J = 10.5 et J = 3.5 Hz, H10), 1.53 (s, 3H, H17), 1.34 (m, 1H, H10), 0.98 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H14), 0.91- 0.85 (12H, f-Bu et H9), 0.06 (s, 3H, SiMe), 0.01 (s, 3H, SiMe).
RMN 13C (100 MHz) : δ : 158.9 (s, C8), 155.4 (s, C4), 145.2 (s, C1), 143.9 (s, C2), 135.7 (s, C6), 135.2 (2d, C2), 135.0 (d, C20), 134.5 (s, C16), 131.6 (d, C15), 131.3 (s, C5), 129.2 (2d, C6), 117.5 (t, C21), 117.2 (2t, C3), 113.6 (2d, C7), 106.8 (d, C5), 104.6 (d, C3), 86.3 (d, C19), 85.0 (d, C12), 81.9 (d, C18), 81.0 (d, C11), 80.2 (d, C7), 70.7 (t, C4), 60.6 (q, OMe), 59.1 (q, OMe), 57.1 (q, OMe), 56.8 (q, OMe), 55.4 (q, OMe), 55.3 (q, OMe), 53.8 (2t, C1 ), 35.8 (d, C8), 34.5
(d, C13), 32.9 (t, C10), 25.8 (3q, f-Bu), 18.2 (s, f-Bu), 16.8 (q, C14), 14.6 (d, C9), 12.1 (q, Ci7), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).
Etape 3 :
A une solution de la Λ/,Λ/-diallylamine obtenue à l'étape 2 (160 mg,
0,201 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (10 ml_) sont ajoutés de l'acide Λ/,Λ/-diméthylbarbiturique (126 mg, 1 ,1 mnnol, 4 équiv) et du palladium tétrakistriphénylphosphine (46 mg, 0,04 mmol, 0,2 équiv.). Après 10 heures de chauffage au reflux du dichlorométhane, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le solide rouge résultant est dissout dans de l'acétate d'éthyle (70 ml_) et lavé avec une solution aqueuse saturée de carbonate de sodium (6 x 10 ml_). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde de diéthyle de 1/1 à 3/7) pour conduire à la 3-[(7E)- (1 R,2S,4S,5R6S,9S, 10S)-9-ferf-Butyldiméthylsilyloxy-4,5, 10-triméthoxy-1 - para-méthoxybenzyloxy-2 ,6 , 8-triméthyldodéca-7 , 11 -diényl]-2 , 5-d iméthoxyan i- line (103 mg, 0,144 mmol, 72%), sous la forme d'une huile jaune dont les caractéristiques sont les suivantes :
Rf= 0.20 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/oxyde de diéthyle 1/1). [α]D 20 + 22.7 (c 1.03, CHCI3).
IR (film) : v : 3450, 3350, 2928, 1612, 1513, 1492, 1463, 1350, 1245, 1170, 1098, 1077, 1043, 1003, 835, 776, 733 cnrf1.
RMN 1H (400 MHz) : <5 : 7.26 (d, 2H1 J = 8.6 Hz, H3), 6.85 (d, 2H1 J = 8.6 Hz, H4), 6.40 (s élargi, 1H1 H3), 6.24 (s élargi, 1H, H5), 5.51 (ddd, 1H, J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.4 Hz, H20), 5.21-5.08 (3H, Hi5 et H2i), 4.57 (d, 1H, J = 4.8 Hz, H7), 4.43 (d syst AB, 1 H, 2J = 11.2 Hz, H1 ), 4.24 (d syst AB, 1 H, 2J = 11.2 Hz, Hv), 3.87 (d, 1H, J = 7.2 Hz, H18), 3.79 (s, 3H, OMe), 3.72 (s, 3H, OMe), 3.68 (s, 3H, OMe), 3.46 (m, 1H, H19), 3.43 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.28 (s, 3H, OMe), 3.16 (d élargi, 1 H, J = 10.4 Hz, H11), 3.07 (dd, 1 H, J = 8.4 et J = 2.4 Hz, H12), 2.43 (m, 1H, H13), 2.04 (m, 1H, H8), 1.70 (ddd syst AB, 1 H, 2J = 14.3, J = 10.4 et J = 3.4 Hz, H10), 1.54 (d, 3H, J = 0.8 Hz, H17), 1.37 (ddd syst AB, 1H, 2J = 14.3, J = 10.6 et J = 3.4 Hz, H10), 0.99 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H14), 0.91-0.84 (12H, f-Bu et H9), 0.07 (s, 3H, SiMe)1 0.02 (s, 3H, SiMe). RMN 13C (100 MHz) : δ : 158.9 (s, C5), 156.3 (s, C4), 140.4 (s, C1 ou C2), 140.0 (s, C2 ou C1), 135.4 (s, C6), 135.0 (d, C20), 134.6 (s, C16), 131.5 (d, C15), 131.2 (s, C2), 129.1 (2d, C3), 117.5 (t, C21), 113.6 (2d, C4), 101.8 (d, C5), 101.0 (d, C3), 86.3 (d, C19), 84.9 (d, C12), 81.9 (d, C18), 81.0 (d, Cn), 79.9 (d, C7), 70.6 (t, Cv), 60.6 (q, OMe), 59.9 (q, OMe), 57.1 (q, OMe), 56.9 (q, OMe), 55.4 (q, OMe), 55.3 (q, OMe), 35.6 (d, C8), 34.5 (d, C13), 33.3 (t, C10), 25.8 (3q, f-Bu), 18.2 (s, f-Bu), 16.9 (q, C14), 14.2 (d, C9), 12.1 (q, C17), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).
Etape 4 :
A une solution de l'aniline obtenue à l'étape 3 (103 mg, 0,144 mmol, 1 équiv.) dans le THF anhydre (8 mL), sont ajoutés de la triéthylamine (0,12 mL, 0,86 mmol, 6 équiv.), une quantité catalytique de Λ/.Λ/-4- diméthylaminopyridine (5 mg) et de l'anhydride de ferf-butyloxycarbonyle (94
mg, 0,43 mnnol, 3 équiv.). Après 10 heures de chauffage au reflux du THF, le milieu réactionnel est concentré sous vide puis purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/oxyde de diéthyle 6/4) pour conduire au Λ/-{3-[(7£)-(1f?,2SI4S,5R,6S,9S,10S)-9-feAf-butyl- diméthylsilyloxy^.δ.iO-triméthoxy-i-para-nnéthoxybenzyloxy^.δ.δ-triméthyl- dodéca-7,11-diényl]-2,5-diméthoxyphényl}biscarbamate de ferf-butyle (131 mg, 0,144 mmol, 100%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.32 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/oxyde de diéthyle 1/1). [α]D 20 + 18.5 (c 1.51 , CHCI3).
IR (film) : v : 2930, 1788, 1738, 1612, 1514, 1464, 1368, 1278, 1248, 1145, 1098, 1005, 838, 776, 732 cm'1.
RMN 1H (400 MHz) : δ: 7.23 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H3), 6.94 (d, 1H, J = 3.0 Hz, H3), 6.84 (d, 2H, J = 8.6 HZ, H4), 6.58 (d, 1H, J = 3.0 Hz, H5), 5.49 (ddd, 1H, J = 17.3, J = 10.3 et J = 7.4 Hz, H20), 5.21-5.00 (3H, H2i et H15), 4.60 (d, 1H, J = 4.2 Hz, H7), 4.39 (d syst AB, 1H1 2J = 11.2 Hz, H1 •), 4.23 (d syst AB, 1H1 2J = 11.2 Hz, H1 ), 3.86 (d, 1 H1 J = 7.2 Hz1 H18), 3.78 (s, 3H, OMe), 3.75 (s, 3H1 OMe)1 3.66 (s, 3H1 OMe), 3.45 (m, 1 H, H19), 3.42 (s, 3H, OMe), 3.27 (s, 3H, OMe), 3.26 (s, 3H, OMe), 3.16 (m, 1H1 H11), 3.06 (dd, 1H, J = 8.4 et J = 2.3 Hz, H12), 2.41 (m, 1H, H13), 2.03 (m, 1H, H8), 1.70 (m, 1 H, H10), 1.54 (d, 3H, J = 0.8 Hz, H17), 1.41 (s, 19H, 2Boc et H10), 0.98 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H14), 0.87 (s, 9H1 NBu)1 0.77 (d, 3H1 J = 6.8 Hz1 H9), 0.05 (s, 3H1 SiMe), 0.00 (s, 3H, SiMe). RMN 13C (100 MHz) : δ : 159.0 (s, C5), 155.2 (s, C4), 151.6 (2s, 2Boc), 147.54 (s, C1), 135.8 (s, C6), 134.9 (d, C20), 134.6 (s, C16), 133.4 (s, C2), 131.5 (d, C15), 130.9 (s, C2), 129.2 (2d, C3), 117.4 (t, C21), 113.6 (2d, C4), 113.4 (d, C5), 112.1 (d, C3), 86.3 (d, C19), 84.8 (d, C12), 82.4 (2s, 2Boc), 81.7 (d, C18), 81.0 (d, C11), 79.8 (d, C7), 70.7 (t, C1 ), 60.8 (q, OMe)1 60.7 (q, OMe), 57.0 (q, OMe), 56.8 (q, OMe), 55.6 (q, OMe), 55.2 (q, OMe), 35.0 (d, C8), 34.5 (d, C13), 33.6 (t, C10), 27.8 (6q, 2Boc), 25.8 (3q, NBu), 18.2 (s, f-Bu), 16.9 (q, C14), 13.5 (q, C9), 12.2 (q, C17), -4.8 (2q, SiMe2).
Etape 5 :
A une solution de l'alcool protégé obtenu à l'étape 4 (131 mg, 0,144 mmol, 1 équiv.) dans le THF (5 ml_) est ajouté du fluorure de tétrabutylammonium (0,72 ml_, 1 M dans le THF, 0,72 mmol, 5 équiv.). Après 24 heures d'agitation à température ambiante, une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium (5 ml_) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (2 x 15 ml_). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide pour conduire à l'alcool déprotégé correspondant qui est utilisé sans purification supplémentaire.
A une solution de cet alcool (0,144 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (5 mL) refroidie à -78 0C, sont ajoutés de la di/sopropyléthylamine (200 μL, 1 ,15 mmol, 8 équiv.) et du chlorure d'acryloyle (47 μL, 0,58 mmol, 4 équiv.). Après 6 heures d'agitation à -78 0C, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (5 mL) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (3 x 20 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/acétate d'éthyle 7/3) pour conduire à l'acrylate de (5E)-(3S,4S,7S,8R,9S,11S,12S)-12-[3-bis(ferf- butoxycarbonyl)amino-2,5-diméthoxyphényl]-3,8,9-triméthoxy-12-para- méthoxybenzyloxy-5,7,11-triméthyldodéca-1 ,5-dién-4-yle (96 mg,
0,112 mmol, 78% pour deux étapes), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes :
Rf= 0.40 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/acétate d'éthyle 7/3). [α]D 20 + 28.3 (c 2.37, CHCI3). IR (film) : v : 2932, 1783, 1752, 1724, 1612, 1514, 1480, 1368, 1274, 1248, 1152, 1097, 1049, 1004, 853, 808, 752, 666 cnrf1.
RMN 1H (400 MHz) : δ : 7.21 (d, 2H, J = 11.3 Hz, H3), 6.91 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, H3), 6.82 (d, 2H, J = 11.3 Hz1 H4), 6.56 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, H5), 6.36 (dd, 1H1 J = 17.2 et 2J = 1.5 Hz1 H24), 6.12 (dd, 1 H, J = 17.2 et J = 10.3 Hz1 H23), 5.78 (dd, 1H , J = 10.3 et 2J = 1.5 Hz, H24), 5.56 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.4 Hz1 H20), 5.31 (d, 1H, J = 10.0 Hz, Hi5), 5.28-5.17 (2H, H21), 5.14 (d, 1H, J = 6.8 Hz, H18), 4.57 (d, 1 H, J = 4.3 Hz, H7), 4.37 (d syst AB, 1 H, 2J = 11.2 Hz1 Hr), 4.20 (d syst AB, 1 H1 2J = 11.2 Hz1 H1 ), 3.77 (s, 3H, OMe)1 3.73 (s, 3H1 OMe), 3.70 (m, 1H1 H19), 3.64 (s, 3H, OMe), 3.39 (s, 3H, OMe), 3.25 (s, 3H, OMe), 3.21 (s, 3H, OMe), 3.09 (d élargi, 1 H, J = 10.5 Hz, H11), 3.03 (dd, 1H1 J = 8.2 et J = 2.7 Hz1 H12), 2.42 (m, 1 H, H13), 2.00 (m, 1H, H8), 1.64 (m, 1 H, H10), 1.60 (d, 3H1 J = 0.9 Hz, H17), 1.39 (19H1 2Boc et H10), 0.97 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H14), 0.75 (d, 3H1 J = 6.8 Hz, H9). RMN 13C (100 MHz) : δ : 165.0 (s, C22), 159.0 (s, C5), 155.2 (s, C4), 151.6 (2s, 2Boc), 147.4 (s, C1), 135.8 (s, C6), 133.9 (d, C20), 133.4 (s, C2), 133.3 (d, C15), 130.9 (s, C16), 130.6 (t, C24), 130.2 (s, C2), 129.2 (2d, C3), 128.7 (d, C23), 119.2 (t, C21), 113.7 (2d, C4), 113.4 (d, C5), 112.1 (d, C3), 84.9 (d, C12), 83.3 (d, C19), 82.4 (2s, 2Boc), 81.0 (d, C11), 79.9 (d, C7), 79.8 (d, C18), 70.7 (t, C1 ), 60.8 (q, OMe), 60.7 (q, OMe), 57.0 (2q, 2OMe)1 55.6 (q, OMe)1 55.2 (q, OMe), 35.0 (d, C8), 34.6 (d, C13), 33.7 (t, C10), 27.8 (6q, 2Boc), 16.8 (q, C14), 13.9 (q, C9), 13.4 (q, C17).
Etape 6 :
A une solution de l'acrylate obtenu à l'étape 5 (94 mg, 0,110 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre (22 ml_) est ajouté du catalyseur de Grubbs de seconde génération G2 (18,6 mg, 20 mol%). Après 3 heures de chauffage au reflux du toluène, du catalyseur G2 est rajouté (11 mg, 12 mol%) et le mélange réactionnel est chauffé pendant 3 heures supplémentaires. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/acétate d'éthyle 1/1) pour conduire au Λ/-(2,5-diméthoxy-3-{(7£)-(1R,2S,4S,5R,6S)-4,5-triméthoxy-8- [(2S13S)-3-méthoxy-6-oxo-3 , 6-d ihyd ro-2H-pyran-2-yl]- 1 -para-méthoxybenzy I- oxy-2,6-diméthylnon-7-enyl}phenyl)biscarbamate de fe/f-butyle (51.7 mg, 0.062 mmol, 57%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.27 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/acétate d'éthyle 1/1). [α]D 20 + 69.5 (c 0.43, CHCI3).
IR (film) : v : 2929, 1733, 1610, 1517, 1458, 1368, 1249, 1153, 1103, 839, 778, 740 cm-1. RMN 1H (400 MHz) : δ : 7.22 (d , 2H, J = 8.6 Hz, H3), 6.96 (dd, 1 H, J = 9.8 etJ = 5.4 Hz, H20), 6.92 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, H3), 6.83 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H4), 6.57 (d, 1H1 J = 3.1 Hz, H5), 6.19 (d, 1H, J = 9.8 Hz, H21), 5.52 (d, 1H, J = 10.3 Hz, H15), 4.65 (d, 1 H, J = 2.2 Hz, H18), 4.59 (d, 1 H, J = 4.0 Hz, H7), 4.38 (d syst AB, 1 H, 2J = 11.1 Hz1 H1 ), 4.22 (d syst AB, 1 H, 2J = 11.1 Hz, H1 ), 3.88 (dd, 1H, J = 5.4 et J = 3.2 Hz, H19), 3.78 (s, 3H, OMe), 3.74 (s, 3H, OMe)1 3.65 (s, 3H1 OMe), 3.46 (s, 3H, OMe), 3.30 (s, 3H, OMe)1 3.26 (s, 3H, OMe)1
3.21 (d élargi, 1H, J = 8.1 Hz, H11), 3.15 (dd, 1 H, J = 8.1 et J = 2.8 Hz, H12), 2.58 (m, 1 H, H13), 2.03 (m, 1H, H8), 1.71 (s, 3H, H17), 1.70 (m, 1 H, Hi0), 1.40 (19H1 2Boc et H10), 1.05 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H14), 0.74 (d, 3H, J = 6.8 Hz, H9). RMN 13C (100 MHz) : δ : 163.1 (s, C22), 159.1 (s, C5), 155.2 (s, C4), 151.6 (2s, 2Boc), 147.4 (s, C1), 142.1 (d, C20), 135.7 (s, C6), 133.5 (s, C2), 131.2 (d, C15), 130.2 (s, C2), 129.2 (2d, C3), 128.5 (s, C16), 124.2 (d, C21), 113.6 (2d, C4), 113.4 (d, C5), 112.2 (d, C3), 85.0 (d, C12), 83.0 (d, C18), 82.5 (2s, 2Boc), 81.0 (d, C11), 79.8 (d, C7), 70.8 (t, C1 ), 69.8 (d, C19), 60.9 (2q, OMe), 57.2 (q, OMe), 56.9 (q, OMe), 55.6 (q, OMe), 55.3 (q, OMe)1 35.1 (d, C8), 34.9 (d, C13), 33.8 (t, C10), 27.8 (6q, 2Boc), 17.1 (q, C14), 13.8 (q, C17), 13.1 (q, C9).
Etape 7 :
A une solution de la lactone biscarbamate obtenue à l'étape 6 (51 ,7 mg, 0,062 mmol, 1 équiv.) dans l'oxyde de diéthyle anhydre (4 rtiL) refroidie à
-78 0C est ajoutée une solution d'hydrure de di/sobutylaluminium (0,19 ml_, 1
M dans l'hexane, 0,19 mmol, 3 équiv.). Après 2 heures à -78 0C, le mélange réactionnel est versé sur une solution aqueuse saturée en tartrate mixte de sodium et de potassium (5 ml_). Après 2 heures d'agitation vigoureuse, la phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (2 x 10 ml_). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, et concentrées sous vide pour conduire au lactol correspondant qui est utilisé sans purification supplémentaire.
A une solution du ce lactol (0,062 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre (5 mL) est ajouté du (carbéthoxyéthylidène)-triphénylphosphorane
(68 mg, 0,19 mmol, 3 équiv.). Après 3,5 heures de chauffage au reflux du toluène, le mélange réactionnel est concentré sous vide et purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'acétate d'éthyle de 7/3 à 6/4) pour conduire au (2£,4Z,8£)-(6S,7S,10S,11R 12S,14S,15R)-15-[3-bis(teAt-butoxycarbonyl)amino-2,5-diméthoxyphényl]-7- hydroxy-6, 11 ,12-triméthoxy-15-para-méthoxybenzyloxy-2,8, 10,14-tétra- méthylpentadéca-2,4,8-triénoate d'éthyle (38,1 mg, 0,042 mmol, 67%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.47 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/acétate d'éthyle 1/1). [α]D 20 + 50.7 (c 1.91 , CHCI3).
IR (film) : v : 3500, 2930, 1784, 1751, 1707, 1611, 1514, 1462, 1367, 1246, 1152, 1095, 1050, 853, 745, 732 cm"1.
RMN 1H (400 MHz) : δ: 7.46 (d, 1H, J = 12.0 Hz, H22), 7.21 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H3), 6.91 (d, 1H, J= 3.1 Hz, H3), 6.83 (d, 2H, J= 8.6 Hz, H4), 6.57 (d, 1H,J = 3.1 Hz, H5), 6.51 (t apparent, 1H, J = 11.7 Hz, H2i), 5.48 (t, 1H, J = 10.4 Hz, H20), 5.36 (d, 1H, J = 9.6 Hz, H15), 4.57 (d, 1H, J = 4.2 Hz, H7), 4.38 (d syst AB, 1 H, 2J = 11.2 Hz, H1 ), 4.26-4.09 (4H, OEt et H19 et H1 ), 3.88 (d, 1H, J = 7.8 Hz, H18), 3.79 (s, 3H, OMe), 3.75 (s, 3H, OMe), 3.65 (s, 3H, OMe), 3.39 (s, 3H, OMe), 3.30 (s, 3H, OMe), 3.24 (s, 3H, OMe), 3.15 (m, 1H, H11), 3.00 (dd, 1 H, J = 7.0 et J = 3.4 Hz, H12), 2.85 (s élargi, 1 H, OH), 2.48 (m, 1 H, H13), 2.00 (m, 1H, H8), 1.89 (s, 3H, H24), 1.73 (m, 1H, H10), 1.59 (s, 3H, H17), 1.41 (19H, 2Boc et H10), 1.29 (t, 3H, J = 7.2 Hz, OEt), 0.97 (d, 3H, J = 6.7 Hz, H14), 0.75 (d, 3H, J = 6.8 Hz, H9). RMN 13C (100 MHz) : δ : 168.0 (s, C25), 159.0 (s, C5), 155.3 (s, C4), 151.6 (2s, 2Boc), 147.5 (s, C1), 135.7 (s, C6), 133.6 (d, C20), 133.5 (d, C15), 133.4 (s, C2), 132.1 (s, C16), 131.4 (d, C22), 130.9 (s, C2. ou C23), 130.3 (s, C23 ou C2), 129.1 (2d, C3), 128.7 (d, C21), 113.6 (2d, C4), 113.5 (d, C5), 112.0 (d, C3), 85.2 (d, C12), 82.5 (2s, 2Boc), 80.6 (d, C11), 79.7 (2d, C7 et C18), 79.0 (d, Ci9), 70.7 (t, Cr), 60.9 (q, OMe)1 60.8 (t, OEt), 60.6 (q, OMe), 56.9 (q, OMe), 56.6 (q, OMe), 55.6 (q, OMe), 55.3 (q, OMe), 35.1 (d, C8), 34.4 (d, C13), 34.1 (t,
Cio), 27.8 (6q, 2Boc), 16.4 (q, C14), 14.3 (q, OEt), 13.4 (q, C9), 12.9 (q, C17), 12.5 (q, C24). Etape 8 :
IR (film) : v : 3410, 2924, 1650, 1592, 1459, 1366, 1322, 1220, 1156, 1094, 1061 , 1045, 1003, 953, 867, 752, 665 cnrï1.
RMN 1H (400 MHz, acétone d6) : δ : 8.30 (s, 1H, NH), 6.84 (d, 1H1 J = 3.1 Hz, H3), 6.73 (m, 1 H, Hi7), 6.36 (t apparent, 1 H, J = 11.3 Hz, H4), 6.25 (s élargi, 1H, H19), 5.09 (s élargi, 1 H, H5), 5.07 (s élargi, 1H, H9), 4.93 (m, 1H, H6), 3.80 (m, 1 H, Hi5 ou H7), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.67 (m, 1H, H7 ou H15), 3.52 (s, 3H, OMe), 3.46 (s, 3H OMe), 3.30 (s, 3H, OMe), 3.16 (m, 1H, H12), 3.12 (s, 3H, OMe), 3.04 (m, 1H, H11), 2.80 (s, 1 H, H10), 2.25 (m, 1 H, H14), 2.16 (m, 1H, H13), 1.96 (d, 3H, J = 1.4 Hz, 2-Me), 1.65 (ddd syst AB, 1 H, 2J = 14.1 , J = 8.9 et J = 4.4 Hz, H13), 1.18 (s, 3H, 8-Me), 0.96 (d, 3H, J = 6.6 Hz, 10-Me), 0.78 (d, 3H1 J = 6.7 Hz, 14-Me).
Etape 9 :
A une solution du macrolactame obtenu à l'étape 8 (4 mg, 0,007 nrirnol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (1 ,5 ml_) est ajouté du trichloroacétylisocyanate (10 μl_, O1.08 mmol, 10 équiv.). Après 40 minutes à température ambiante, le mélange réactionnel est concentré sous vide puis du méthanol (1 ,5 ml_) et du carbonate de potassium (15 mg) sont ajoutés. Après 1 ,5 heure à température ambiante, le méthanol est évaporé sous vide et le mélange réactionnel est dissout dans l'oxyde de diéthyle (10 mL). La phase organique obtenue est lavée avec de l'eau (1 mL) et une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium (1 mL). La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 5 mL). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide pour conduire au dicarbamate attendu qui est utilisé sans purification supplémentaire.
Ce dicarbamate (0,007 mmol, 1 équiv.) est dissout dans un mélange d'acétonitrile et d'eau (9/1 , 5 mL) et une solution aqueuse 1 M de nitrate de cérium et d'ammonium (20 μL, 2,9 équiv.) est ajoutée à -10 0C. Après 1 heure à -10 °C, de l'eau (2 mL) est ajoutée et la phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (5 x 5mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par CCM préparative sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle) pour conduire au carbamate de (4E,6Z,10E)- (δS.ΘS.^SJSRMS.ieS.^RJ-g-carbamoyloxy-δ.ia.^-triméthoxy^.i O,^, 16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 ]docosa-1 (21 ),4,6, 10,18- pentaén-17-yle ou « 15-déméthoxy-15-carbamoyloxy-Herbimycine A » (~1
mg, -0,001 mmol, ~25% en 2 étapes), sous la forme d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.44 (gel de silice ; éluant : acétate d'éthyle).
RMN 1H (400 MHz) : δ : 8.80 (s él, 1H, NH)1 7.35 (d, 1H, J = 2.5 Hz, Hi9), 7.00 (m, 1H, H3), 6.56-6.47 (2H1 H17 et H4), 5.90-5.80 (2H1 H5 et H7 ou H15), 5.66-
5.54 (2H1 H9 et H7 ou H15), 4.70 (s él, 4H, 2NH2), 4.47 (d él, 1H, J = 6.9 Hz,
H6), 3.55-3.30 (2H1 H11 et H12), 3.52 (s 3H1 OMe), 3.33 (s, 6H, 2OMe), 2.71
(m, 1H, H10), 2.02 (s, 3H, 2-Me), 1.79 (m, 1H, H13 ou H14), 1.67 (m, 1H, H13 ou
H14), 1.69 (s él, 3H, 8-Me)1 1.30 (m, 1H, H13), 1.09 (d, 3H, J = 6.8 Hz1 10-Me), 0.91 (d, 3H1 J = 6.9 Hz1 14-Me).
Exemple 4 : composition pharmaceutique:
On a préparé des comprimés répondant à la formule suivante :
Produit de l'exemple 1 0,2 g Excipient pour un comprimé terminé à 1 g
(détail de l'excipient : lactose, talc, amidon, stéarate de magnésium).
La présente invention comprend également toutes les compositions pharmaceutiques préparées avec tout produit de formule (I) selon la présente invention
Tests biologiques permettant de caractériser biologiquement les produits de l'invention :
Le phosphate inorganique libéré au cours de l'hydrolyse de l'ATP par l'activité ATPasique de Hsp82 est quantifié par la méthode du green Malachite. En présence de ce réactif, il y a formation du complexe phosphate inorganique- molybdate-vert de malachite qui absorbe à une longueur d'onde de 620 nm.
Les produits à évaluer sont incubés dans un volume réactionnel de 30 μl, en présence de 1μM Hsp82 et de 250 μM de substrat (ATP) dans un tampon composé de 50 mM Hepes-NaOH (pH 7.5), 1 mM DTT, 5 mM MgCI2 et 50 mM KCI à 37 0C pendant 60 min. Parallèlement, une gamme de phosphate
inorganique comprise entre 1 et 40 μM est constituée dans le même tampon. L'activité ATPasique est ensuite révélée par l'addition de 60 μl du réactif biomol green (Tebu). Après 20 min d'incubation à température ambiante, l'absorbance des différents puits est mesurée à l'aide d'un lecteur de microplaque à 620 nm. La concentration en phosphate inorganique de chaque échantillon est alors calculée à partir de la courbe d'étalonnage. L'activité ATPasique d1 Hsp82 est exprimée en concentration de phosphate inorganique produit en 60 min. L'effet des divers produits testés est exprimé en pourcentage d'inhibition de l 'activité ATPasique. La formation d'ADP due à l'activité ATPasique de Hsp82 a été utilisée pour mettre au point une autre méthode d'évaluation de l'activité enzymatique de cette enzyme par application d'un système de couplage enzymatique faisant intervenir la pyruvate kinase (PK) et la lactate deshydrogensase (LDH). Dans cette méthode spectrophotométrique de type cinétique, la PK catalyse la formation d'ATP et de pyruvate à partir de phosphoenol-pyruvate (PEP) et de l'ADP produit par HSP82. Le pyruvate formé, substrat de la LDH, est ensuite transformé en lactate en présence de NADH. Dans ce cas, la diminution de la concentration en NADH, mesurée par la diminution de l'absorbance à la longueur d'onde de 340 nm est proportionnelle à la concentration en ADP produit par HSP82.
Les produits testés sont incubés dans un volume réactionnel de 100 μl de tampon composé de 100 mM Hepes-NaOH ( pH 7.5), 5 mM MgCI2, 1mM DTT, 150 mM KCI, 0.3 mM NADH, 2.5 mM PEP et 250 μM ATP. Ce mélange est preincubé à 37°C pendant 30 min avant addition de 3.77 unités de LDH et 3.77 unités de PK. La réaction est initiée par addition du produit à évaluer, en concentrations variables, et de Hsp82, à la concentration de 1μM. La mesure de l'activité enzymatique de Hsp82 est alors réalisée, en continu, dans un lecteur de microplaque, à 370C, à la longueur d'onde de 340nm. La vitesse initiale de la réaction est obtenue par la mesure de la pente de la tangente à l'origine de la courbe enregistrée. L'activité enzymatique est exprimée en μM d'ADP formé par minute. L'effet des divers produits testés
est exprimé en pourcentage d'inhibition de l'activité ATPasique selon la codification ci-dessous :
Tableau de résultats
Claims
Revendications
1) Produits de formule (I) :
dans lesquels A représente l'un des trois cycles suivants
cycle a
W représente l'atome d'hydrogène ou l'un des radicaux suivants : -(C1- C4)alkyle, -(C1-C4)alkényle, -CO-(CI -C3)alkyle, -CO-(CI -C3)alkényle, -CO- NH-(C1-C2)alkyle, -CO-NH-(CI -C2)alkényle ou -CO-NH2 ; le carbone C15 desdits produits de formule (I) ayant la configuration stéréochimique R ou S, et la double liaison entre les carbones C4 et C5 desdits produits de formule générale (I) ayant une géométrie E ou Z, étant entendu que lorsque A représente le cycle b ci-dessus, et que le carbone C15 a la configuration stéréochimique R alors W ne représente pas hydrogène ou méthyle,
lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes tautomères et isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I).
2) Produits de formule (I) tels que définis à la revendication 1 dans lesquels
W a la signification indiquée ci-dessus et :
A représente le cycle a, le carbone C15 a la configuration stéréochimique R et la double liaison entre les carbones C4 et C5 est de géométrie E,
A représente le cycle b, le carbone C15 a la configuration stéréochimique R ou S et la double liaison entre les carbones C4 et C5 est de géométrie Z, ou bien A représente le cycle c, le carbone C15 a la configuration stéréochimique R ou S et la double liaison entre les carbones C4 et C5 est de géométrie Z, lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes tautomères et isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I).
3) Produits de formule (I) tels que définis à la revendication 1 ou 2 répondant aux formules suivantes :
lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes tautomères et isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I).
4) Produits de formule (I) tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 3 dont les noms suivent :
Carbamate de (4E,6E,10E)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17R)-20-hydroxy- 8,13,14,17-tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3-oxo-2-azabicyclo[16.3.1 ] docasa-1 (22)-4,6, 10,18,20-hexaèn-9-yle
Carbamate de (4E,6Z,10E)-(8S,9S)12S)13R,14SI16S,17S)-8,13)14,17- tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 ] docasa-1(21)-4,6,10,18-pentaèn-2-yle , ou « 15-ép/-Herbimycine A Carbamate de (4E.6Z, 10E)-(8S,9S, 12S113R, 14S, 16S, 17R)-9-carbamoyloxy- 8,13,14-triméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1- docasa-1(21)-4,6,10,18-pentaèn-17-yle ou « 15-déméthoxy-15- carbamoyloxy-herbimycine A »
5) Procédé de synthèse des produits de formule (I) tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 4 dans lesquels la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie Z, caractérisé par une fermeture du cycle par une réaction de macrolactamisation le entre le carbonyle en position 1 et l'atome d'azote d'une aniline portée par le carbone 20.
6) Procédé de synthèse des produits de formule (I) tels que définis tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 4 dans lesquels la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie E, caractérisé par une fermeture du cycle par une réaction de métathèse entre les carbones 4 et 5.
7) A titre de médicaments, les produits de formule (I) telle que définie aux revendications 1 à 4, ainsi que leurs prodrugs, lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I).
8) A titre de médicaments, les produits de formule (I) telle que définie à la revendication 4, ainsi que leurs prodrugs, lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et
organiques ou avec les bases minérales et organiques pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I).
9) Compositions pharmaceutiques contenant à titre de principe actif, l'un au moins des médicaments tels que définis aux revendications 7 et 8.
10) Compositions pharmaceutiques telles que définies à la revendication précédente contenant en plus, des principes actifs d'autres médicaments de chimiothérapie contre le cancer.
11) Compositions pharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisées en ce qu'elles sont utilisées comme médicaments, en particulier pour la chimiothérapie de cancers.
12) Utilisation de produits de formule (I) tels que définis à l'une quelconque des revendications précédentes ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation de médicaments destinés à inhiber l'activité de protéines chaperones et notamment d'Hsp90.
13) Utilisation de produits de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir ou traiter une maladie caractérisée par le dérèglement de l'activité d'une protéine chaperone de type Hsp90 .
14) Utilisation de produits de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir ou traiter une maladie appartenant au groupe suivant: les maladies neurodégénératives telles que la maladie de Huntington, la maladie de Parkinson, l'ischémie cérébrale focale, la maladie d'Alzheimer, la sclérose en plaques et la sclérose latérale amyotrophique, la malaria, les filarioses de Brugia et de Bancroft, la toxoplasmose, les mycoses résistantes aux traitements, l'hépatite B, l'hépatite C, le virus de l'Herpès, la dengue (ou grippe tropicale), l'atrophie musculaire spinale et bulbaire, désordres de la
prolifération de cellules mésangiales, thromboses, rétinopathies, psoriasis, dégénération musculaire, maladies en oncologie, cancers.
15) Utilisation de produits de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à traiter des cancers.
16) Utilisation de produits de formule (I) selon la revendication précédente dans laquelle la maladie à traiter est un cancer de tumeurs solides ou liquides.
17) Utilisation de produits de formule (I) selon la revendication précédente dans laquelle la maladie à traiter est un cancer résistant aux agents cytotoxiques.
18) Utilisation de produits de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à traiter des cancers parmi lesquels les cancers du sein, du colon et des poumons.
19) Utilisation de produits de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à la chimiothérapie de cancers.
20) Utilisation de produits de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation de médicaments destinés à la chimiothérapie de cancers utilisés seuls ou en association.
21) Utilisation de produits de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation de médicaments destinés à
être utilisés seuls ou en association avec chimiothérapie ou radiothérapie ou alternativement en association avec d'autres agents thérapeutiques.
22) Utilisation de produits de formule (I) selon la revendication précédente dans laquelle les agents thérapeutiques peuvent être des agents anti- tumoraux utilisés communément.
23) Produits de formule (I) tels que définis à l'une quelconque des revendications précédentes comme inhibiteurs de HSP90, lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) ainsi que leurs prodrugs.
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