WO2008059074A1 - Estabilización del extracto de aloe vera - Google Patents
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Definitions
- the Aloe vera species belongs to the Liliáceas family, of which about 360 species have been classified.
- Aloe vera lowers the blood glucose level in diabetic patients as well as the lipid level in hyperlipidemic patients.
- the topical application of Aloe vera is effective in genital herpex and psoriasis, also reducing the healing time of wounds. It is also attributed laxative, antiasthmatic, antihepatotoxic, antiblenorragic, anthelmintic and antiscorbutic properties.
- Aloe vera The pharmacological effects of Aloe vera studied in Vitro or in animals include anti-inflammatory and anti-arthritic activity, as well as antibacterial and hypoglycemic effects.
- Aloe vera has been used for medicinal purposes in different cultures for millennia, such as Greece, Egypt, India, Mexico, Japan and China, however quality control methods for Aloe vera preparations have not been extensively studied.
- Aloe vera contains more than 75 potentially bioactive components: vitamins, enzymes, minerals, sugars, saponins, salicylic acids and amino acids, among them the essential amino acids Usina, threonine, valine, leucine, phenylalanine and methionine.
- Council Directive 88/388 / EEC concerning the approximation of the laws of the Member States, includes in its ANNEX II the maximum aloin content, which must be 0.1 milligrams / kilogram (mg / kg) in foodstuffs and beverages and 50 mg / kg in alcoholic beverages. Since there is no official method of analysis for these determinations, we have developed an analytical technique using HPLC (Table 1) that allows us to control these maximum quantities, for which we have performed a calibration curve by which we check that the level Alloin after stabilization is within the concentration range allowed by the aforementioned regulation 88/388 / EEC. The calibration curve was made with a gradient of pure aloin concentrations from 0.0001 to 0.001 mg / mL.
- Aloe vera has a very potent immunostimulatory activity, due to the presence of high molecular weight polysaccharides.
- One of the mechanisms by which the components of Aloe vera accelerate wound healing is through the activation of macrophages, which biosynthesize growth factors, oxide nitric and induce angiogenesis.
- Acemannan is obtained from Aloe Vera. The pharmacological properties attributed to it include antiviral effects, macrophage activation (hence induction of nitric oxide) and T cell stimulation. However, very high amounts of acemannan (200 to 2000 ⁇ g / mL) are required to achieve a moderate activation of macrophages.
- acemannan is not very potent, or that small amounts of another very potent compound are present as contaminants in acemannan preparations.
- the substance responsible for the immunostimulatory activity was found to be the aloeride polysaccharide.
- Our extract is rich in polysaccharides of high molecular weight, among which are, among others, acemannan and aloeride.
- Aloeride can be standardized as a commercial product of Aloe vera, instead of the one currently used, acemannan, much less active, so we have developed another analytical technique, using HPLC, to determine the content of aloeride in the extract.
- a refractive index detector and a Shodex OHpak SB-805 HQ column, 8mmIDX300mmL were used, eluting with water (HPLC grade) for 12 minutes each experiment. 10 ⁇ L volumes were grafted, previously filtered through a 0.2 ⁇ m membrane (millipore). The signal corresponding to the aloeride was detected at 5,027 minutes and that of acemannan at 8,818 minutes. Other signals were detected at 6,568, 7.38, 7,912, 8,114 and 10,545 minutes respectively. The experiments carried out until the time of writing this minority stabilize the Aloe vera extract for a minimum of twenty-six months, as evidenced by the performance of periodic analytical controls using HPLC techniques cited above, as well as microbiological analyzes.
- Quaternary ammonium compounds act at the level of the cell surface, increasing the permeability of the membrane with the consequent loss of cytoplasmic components.
- the spectrum of activity of these products is quite high against bacteria and fungi, but low against viruses and spores. It is necessary to note that there are microorganisms, such as pseudomonas, that in some quaternary ammoniums find a culture medium in which they multiply perfectly. This bacterium can grow, for example, in benzalkonium chloride which, used as a surface disinfectant, has been the cause of unexpected infections in hospitals. Quaternary ammonium compounds are inactive against hard water, so they should not be used to disinfect water from salt drain siphons.
- Chlorine is the universal disinfectant, active against most microorganisms.
- the disinfectant power of chlorine is one of the most important among known disinfectants. In general, all microorganisms such as bacteria, viruses, molds, yeasts, spores, algae and protozoa are inhibited or destroyed to a greater or lesser extent.
- Staphylococcus aureus absence (reference value: absence).
- Molds and yeasts less than 10 ⁇ g / mL (reference value 1000).
- Candida albicans absence (reference value: absence).
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Abstract
Las hojas de Aloe se lavan y se les corta el borde lateral para eliminar las antraquinonas, después se las introduce en un baño con detergente bactericida y, posteriormente, en un baño con hipoclorito sódico al 3%, controlando el pH. El extracto obtenido se estabiliza con sorbato potásico, ácido cítrico, vitamina E y metabisulfito sódico. El extracto estabilizado puede ser utilizado en medicamentos, preparados alimenticios y productos cosméticos.
Description
DDD
Estabilización del extracto de Aloe vera
[i]
[2] La especie Aloe vera pertenece a la familia de las Liliáceas, de las que se han clasificado unas 360 especies.
[3] La administración oral de Aloe vera baja el nivel sanguíneo de glucosa en pacientes diabéticos así como el nivel lipídico en pacientes hiperlipidémicos. La aplicación tópica de Aloe vera es efectiva en el herpex genital y la psoriasis, reduciendo también el tiempo de cicatrización de las heridas. Se le atribuyen además propiedades laxantes, antiasmáticas, antihepatotóxicas, antiblenorrágicas, antihelmínticas y antiescorbúticas.
[4] Los efectos farmacológicos del Aloe vera estudiados in Vitro o en animales incluyen actividd antiinflamatoria y antiartrítica, así como efectos antibacterianos e hipoglucémicos.
[5] El Aloe vera se ha utilizado con propósitos medicinales en diferentes culturas durante milenios, como Grecia, Egipto, India, México, Japón y China, sin embargo no se han estudiado extensivamente métodos de control de calidad para los preparados de Aloe vera.
[6] Aloe vera contiene más de 75 componentes potencialmente bioactivos: vitaminas, enzimas, minerales, azúcares, saponinas, ácidos salicílicos y aminoácidos, entre estos los aminoácidos esenciales Usina, treonina, valina, leucina, fenilalanina y metionina. Contiene antronas (aloe-emodín, aloina A, aloina B, 8-O-metil-7-hidroxialoína A, 8-O-metil-7-hidroxialoína B y 10-hidroxialoína A), fenil piranas (aloina A y aloina B) y cromonas (aloesín, 8-C-glucosil-7-O-metil-(S)-aloesol, isoaloeresín D y aloeresín E) (Esquema 1).
[7] La gran variedad de sustancias presentes en la planta, así como la bioactividad de las mismas ha ocasionado que algunos investigadores definan al Aloe vera como 'una Farmacia en una planta', haciendo imprescindible la estabilización de estas sustancias para impedir la pérdida o disminución de la actividad de las mismas, principal problema para su comercialización.
[8] Obtención del extracto
[9] Cosméticos y algunos productos medicinales se obtienen del tejido mucilaginoso del centro de la hoja de Aloe vera. Las células periféricas del borde de la hoja biosintetizan un látex amarillento y amargo, comúnmente denominado jugo o aloes o 'sap', que frecuentemente se confunde con el gel de Aloe vera. Los aloes contienen antraquinonas, a las que se debe el fuerte efecto laxante de los mismos. Procesada la hoja para eliminar la mayoría de las células con alto contenido en aloina el resto de la hoja se utiliza para la obtención del denominado gel de Aloe vera.
[10] Curva de calibrado [H] Una de las diversas sustancias que se encuentran en el Aloe vera es la aloína. La directiva 88/388/CEE del Consejo, relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados Miembros incluye en su ANEXO II los contenidos máximos de aloína, que deben ser 0.1 miligramos /kilogramo(mg/kg) en productos alimenticios y bebidas y 50 mg/kg en las bebidas alcohólicas. Como quiera que no existe un método oficial de análisis para dichas determinaciones hemos puesto a punto una técnica analítica mediante HPLC (Tabla 1) que nos permite controlar dichas cantidades máximas, para lo que hemos realizado una curva de calibrado mediante la cual comprobamos que el nivel de aloína después de la estabilización está dentro del rango de concentración permitido por la citada normativa 88/388/CEE. La curva de calibrado se hizo con un gradiente de concentraciones de aloína pura desde 0.0001 hasta 0.001 mg/mL. Se utilizó un detector de ultravioleta programado en el canal 1 a 220 y en el canal 2 a 365 nanómetros respectivamente. El tiempo de elución del cromatograma fue de 87 minutos en cada experimento. La señal correspondiente a la aloína apareció a los 24.78 minutos. Los disolventes utilizados fueron de grado HPLC. Se injectaron volúmenes de 10 μL, previamente filtrados a través de una membrana de 0.2 μm (millipore).
[12] [13] Tabla 1. HPLC del extracto de Aloe vera utilizando una columna C- 18
[14] Actividad inmunoestimuladora [15] El Aloe vera posee una actividad inmunoestimuladora muy potente, debido a la presencia de polisacáridos de elevado peso molecular. Uno de los mecanismos por el cual los componentes del Aloe vera aceleran la cicatrización de las heridas es mediante la activación de los macrófagos, que biosintetizan factores de crecimiento, óxido
nítrico e inducen la angiogénesis. El acemanano se obtiene del Aloe vera. Entre la propiedades farmacológicas que se le atribuyen se incluyen efectos antivirales, activación de macrófagos ( por lo tanto inducción de óxido nítrico) y estimulación de células T. Sin embargo se requieren cantidades muy altas de acemannano ( 200 a 2000 μg/mL) para conseguir una activación moderada de los macrófagos. Esto indica que, o bien el acemannano no es muy potente, o que pequeñas cantidades de otro compuesto muy potente están presentes como contaminantes en los preparados de acemannano. La sustancia responsable de la actividad inmunoestimuladora resultó ser el polisacárido aloérido. Nuestro extracto es rico en polisacáridos de elevado peso molecular, entre los que se encuentran, entre otros , el acemannano y el aloérido. El aloérido puede estandarizarse como producto comercial del Aloe vera, en lugar del utilizado actualmente, el acemannano, mucho menos activo, por lo que hemos puesto a punto otra técnica analítica, mediante HPLC, para determinar el contenido de aloérido en el extracto. Se utilizó un detector de índice de refracción y una columna Shodex OHpak SB-805 HQ, 8mmIDX300mmL, eluyendo con agua (grado HPLC) durante 12 minutos cada experimento. Se injertaron volúmenes de 10 μL, previamente filtrados a través de una membrana de 0.2 μm (millipore). La señal correspondiente al aloérido se detectó a los 5.027 minutos y la del acemanano a los 8.818minutos. Otras señales se detectaron a los 6.568, 7.38, 7.912, 8.114 y 10.545 minutos respectivamente.Los experimentos realizados hasta el momento de redactar esta menoría estabilizan el extracto de Aloe vera un mínimo de veintiséis meses, como lo demuestra la realización de controles analíticos periódicos utilizando las técnicas de HPLC citadas anteriormente, así como los análisis microbiológicos.
[16]
[17]
[18]
DDDD
[19] Estabilización de extractos y sustancias de uso farmacéutico, alimetario y cosmético.
DDDD
[20] 3,892,853 Stabilized aloe vera gel and preparation of same
[21] 4,178,372 Hypoallergenic stabilized aloe vera gel
[22] 5,294,434 Aloe vera gel toothpaste
[23] 4,446, 131 Controlled temperature process for manufacturing of improved stabilized aloe vera
DDD DDD DD
[24]
DDD DDD DD
Estabilización del extracto de Aloe vera
DDD DD
[25] 1. Las hojas recién cortadas de Aloe vera se lavan con abundante agua, proceso que cunple la función de eliminar los sólidos adheridos a la hoja y se introducen en un baño de agua con deterbac, en una concentración de 2 a 5 partes por millón (ppm), que contiene una sal de amonio cuaternario, durante 10 minutos, baño en el que hay que controlar periódicamente el pH para mantenerlo entorno a 7.2-7.5. Se trata de un desinfactante de amplio espectro con efecto residual, efectivo sobre bacterias Gram positivas (Gram +) y Gram negativas (Gram -), virus, hongos y algas, producto biodegradable que contiene 5-15 por ciento de tensioactivos catiónicos, 5-15 por ciento de tensioactivos no iónicos, secuestrantes, anticorrosivos y bioalcoholes (inscripción en el regitro sanitario con el N° 37.00910/TF). Este conjunto de compuestos (conocidos como 'quats' poliméricos) representan una familia de compuestos antimicrobianos en los cuales las cuatro valencias del átomo de nitrógeno están ocupadas por grupos tipo alquilo de complejidad variable. Son solubles en agua y en alcohol y poseen propiedades tensioactivas. Los compuestos de amonio cuaternario actúan a nivel de la superficie celular, incrementando la permeabilidad de la membrana con la consecuente pérdida de los componentes citoplasmáticos. El espectro de actividad de estos productos es bastante elevado frente a bacterias y hongos, pero escaso frente a virus y esporas. Es necesario remarcar que hay microorganismos, como pseudomonas, que en algunos amonios cuaternarios encuentran un medio de cultivo en el que se multiplican perfectamente. Esta bacteria puede crecer, por ejemplo, en cloruro de benzalconio que, utilizado como desinfectante de superficies, ha sido la causa de inesperadas infecciones en hospitales. Los compuestos de amonio cuaternario son inactivos frente a las aguas duras, por lo que no deben utilizarse para desinfectar el agua de los sifones de vaciado, rica en sales.
[26] A continuación las hojas se pasan a un baño de agua con una concentración de hipoclorito sódico al 3 por ciento durante 15 minutos, baño en el que antes de introducir las hojas se controló el nivel del pH para posteriormente, previas las determinaciones oportunas, mantener el pH en el mismo rango, correspondiente al 3 por ciento de hipoclorito sódico en agua, con un residual bajo, entre 0.1 y 0.2 ppm. El cloro es el desinfectante universal, activo frente a la mayoría de los microorganismos. El poder desinfectante del cloro es uno de los más importantes entre los desinfectantes conocidos. En general, todos los microorganismos como bacterias, virus, mohos, levaduras, esporas, algas y protozoos se ven inhibidos o destruidos en mayor o menor medida. De entre los contaminantes fecales, algunos de ellos con una elevada
capacidad patogénica, hay que considerar los Gram - y, en particular, las enterobacterias. Para estos microorganismos, y después de haber formado biofilm en la superficie, el hipoclorito es capaz de eliminarlos en el 100% de los ensayos. Las esporas bacterianas son más resistentes que las formas vegetativas, así como las bacterias Gram +, como el Staphylococcus aureus, que tienden a ser más resistentes que los Gram -. Los mohos, en cambio, son más resistentes a la acción del hipoclorito que las células vegetativas bacterianas. No se conoce muy bien la causa. En el caso del Cryptosporidium, parásito responsable de brotes de origen en las aguas de consumo en Estados Unidos que ha afectado a más de 100.000 personas, el desinfectante más efectivo es el cloro. Consigue la destrucción de la formas vegetativas y que los ooquistes pierdan su capacidad infectante. Todas las formas de cloro son activas contra este parásito, ya que la aplicación de 80 ppm de cloro (hipoclorito) consigue una completa desinfección. En general, se utiliza en forma de hipoclorito sódico, con diversas concentraciones de cloro libre. Se trata de un enérgico agente oxidante, corrosivo para los metales. Contiene el cloro en estado de oxidación +1 y por lo tanto es un oxidante fuerte y económico. Debido a esta característica destruye muchos colorantes por lo que se utiliza como blanqueante. Además se aprovechan sus propiedades desinfectantes. En disolución acuosa sólo es estable a pH básico. Al acidular en presencia de cloruro libera cloro elemental. Por esto debe almacenarse alejado de cualquier ácido.
[27] Una vez finalizado este tiempo las hojas se vuelven a lavar con abundante agua y, después de cortar los bordes laterales de las hojas para eliminar la mayor cantidad posible de antraquinonas, dado que es precisamente en esa parte de la hoja donde se acumulan esas sustancias, se van pasando por la maquinaria que se utiliza para eliminar la epidermis de la hoja. El extracto así obtenido se trituró, se filtró y se realizó un análisis microbiológico obteniéndose los siguientes resultados:
[28] Recuento total de gérmenes aerobios mesófilos: 70 microgramos/mililitro ( μg/mL)(valor de referencia: 1000).
[29] Esccherichia colϊ. ausencia (valor de referencia: ausencia).
[30] Staphylococcus aureus: ausencia (valor de referencia: ausencia).
[31] Pseudomonas aeruginosa: ausencia (valor de referencia: ausencia).
[32] Mohos y levaduras: menos de 10 μg/mL (valor de referencia 1000).
[33] Candida albicans: ausencia (valor de referencia: ausencia).
[34]
[35] El extracto se sometió a diferentes condiciones experimentales que recogemos a continuación:
[36] 2. A 100 mL del extracto obtenido mediante el protocolo 1 se le añadieron 100 mg de sorbato potásico, 100 mg de metabisulfito sódico, 60 mg de vitamina C, 60 μL de
vitamina E, 600 mg de goma antana, 10 mg de butilhidroxianisol, 20 mg de 2,6-di-tert-butyl-4-methyl-phenol, 60 mg de L(+)-ascorbic acid, 60 mg de (+-)-alfa-tocopherol phosphate. Se mantiene en refrigeración a 4°C.
[37] 3. A 100 mL del extracto obtenido mediante el protocolo 1 se le añadieron 100 mg de sorbato potásico, 100 mg de metabisulfito sódico, 60 mg de vitamina C, 60 μL de vitamina E, 600 mg de goma antana, 10 mg de butilhidroxianisol, 20 mg de 2,6-di-tert-butyl-4-methyl-phenol, 60 mg de (+)-Na-ascorbic acid.Se mantiene en refrigeración a 4°C .
[38] 4. A 100 mL del extracto obtenido mediante el protocolo 1 se le añadieron 100 mg de sorbato potásico, 100 mg de metabisulfito sódico, 60 mg de vitamina C, 60 μL de vitamina E, 600 mg de goma xantana, 10 mg de butilhidroxianisol, 20 mg de 2,6-di-tert-butyl-4-methyl-phenol, 60 mg de L-ascorbic acid-2-phosfate, 60 mg de (+-)-alfa-tocopherol.Se mantiene en refrigeración a 4°C .
[39] 5. A 100 mL del extracto obtenido mediante el protocolo 1 se le añadieron 100 mg de sorbato potásico, 60 mg de ácido cítrico, 60 μL de vitamina E, 100 mg de metabisulfito Na. Se mantiene en refrigeración a 4°C .
[40] 6. 100 mL del extracto obtenido mediante el protocolo 1 se mantiene en refrigeración a 4°C .
[41] 7. 100 mL del extracto obtenido mediante el protocolo 1 se trató en el microondas a potencia 3 durante 1 minuto. Se mantiene en refrigeración a 4°C .
[42] El control de calidad de estos extractos se hizo mediante análisis microbiológicos en laboratorios agroalimentarios homologados y mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), utilizando una columna C- 18, mediante un detector ultravioleta, que nos permite una análisi tanto cualitativo como cuantitativo de las antraquinonas, entre ellas la aloína, cuya cantidad máxima en productos alimentarios, bebidas y bebidas alcohólicas viene regulada administrativamente (véase por ejemplo la directiva 88/388 CEE) y otra técnica mediante HPLC, utilizando un detector de índice de refracción, mediante una columna Shodex para detectar polisacáridos, concretamente el aloérido y el acemanano.
[43] Esquema 1. Estructura de fenil piranas, compuestos fenólicos y cromonas aislados de Aloe vera
[44]
Anthrones
Compounds Ri R2 R3 R4
Aloe-emodin H H C=O
Aloin A H H C-glucopyranosyl H
Aloin B H H H C-glucopyranosyl
8-O-methyl-7-hydroxyalo¡n A CH3 OH C-glucopyranosyl H
8-0-methyl-7-hydroxyaloin B CH3 OH H C-glucopyranosyl
10-Hydroxyaloin A H H C-glucopyranosyl H
Phenyl pyrons
Compounds R1 R2 Aloenin H Glucopyranosyl Aloenin B Glucopyranosyl Glucopyranosyl-2'-p-cumaroyl
Chromones
Compounds R1 R2 R3
Aloesin H CH2COCH3 H
8-C-glucosyl-7-0-methyl-(S)-aloesol CH3 OH2OCzH3 H
H 'θH lsoaloeresin D CH3 p-(E)-coumaroul
Aloeresin E CH3 (E)-cinamoy[
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[45] 1. Las hojas recién cortadas de Aloe vera se lavan con abundante agua y, después de cortarles el borde lateral para eliminar la mayor cantidad posible de antraquinonas, dado que es precisamente ahí donde se acumulan esas sustancias, se introducen en una baño de agua con una concentración de 2-5 ppm de deterbac durante 10 minutos, baño en el que hay que controlar periódicamente el pH para mantenerlo constante. A continuación las hojas se pasan a un baño de agua con una concentración de hipoclorito sódico al 3 por ciento durante 15 minutos, baño en el que antes de introducir las hojas se controló el nivel del pH para posteriormente, previas las determinaciones oportunas, mantener el pH en el mismo rango, correspondiente al 3 por ciento de hipoclorito sódico en agua. Una vez finalizado este tiempo las hojas se vuelven a lavar con abundante agua y se van pasando por la maquinaria que se utiliza para eliminar la epidermis de la hoja. El extracto así obtenido se tritura, se filtra y se trata según descripción 5.
[46] Descripción 5. A 100 mL del extracto obtenido mediante el protocolo 1 se le añadieron 100 mg de sorbato potásico, 60 mg de ácido cítrico, 60 μL de vitamina E, 100 mg de metabisulfito Na.Se mantiene en refrigeración a 4°C .
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[47] El principal problema para la comercialización del Aloe vera es la degradación de sus componentes, disminuyendo e incluso perdiendo sus propiedades farmacológicas, propiedades que se mantienen con nuestro método.
DDD DDD DD DDD DD [48]
DDD DDD DD DD [49]
DDDD [50]
Claims
DDD DD
[1] 1. Un método de extracción y estabilización del extracto de la especie Aloe vera, que comprende el siguiente protocolo: las hojas recién cortadas de Aloe vera se lavan con abundante agua y, después de cortarles el borde lateral para eliminar la mayor cantidad posible de antraquinonas, dado que es precisamente ahí donde se acumulan esas sustancias, se introducen en una baño de agua con con una concentración de 2-5 ppm de deterbac durante 10 minutos, baño en el que hay que controlar periódicamente el pH para mantenerlo constante con referencia a la determinación inicial. A continuación las hojas se pasan a un baño de agua con una concentración de hipoclorito sódico al 3 por ciento durante 15 minutos, baño en el que antes de introducir las hojas se controló el nivel del pH para posteriormente, previas las determinaciones oportunas, mantener el pH en el mismo rango, correspondiente al 3 por ciento de hipoclorito sódico en agua. Una vez finalizado este tiempo las hojas se vuelven a lavar con agua y se van pasando por la maquinaria que se utiliza para eliminar la epidermis de la hoja. El extracto así obtenido se tritura, se filtra y se trata según el experimento 5.
2. Un método de estabilización del extracto reivindicado en la reivindicación 1 y que incluye el siguiente protocolo: a 100 mL del extracto obtenido mediante el protocolo 1 se le añadieron 100 mg de sorbato potásico, 60 mg de ácido cítrico, 60 μL de vitamina E, 100 mg de metabisulfito Na.Se mantiene en refrigeración a 4°C .
3. Utilización del extracto reivindicado en las reivindicaciones 1 y 2 para usarlo como el tratamiento de las diferentes patologías en las que sea efectivo.
4. Un extracto reivindicado en la reivindicaciones 1 y 2 del que se han eliminado todas las impurezas que no poseen actividad o que poseen efectos adversos.
5. Una composición como la descrita en la reivindicaciones 1 y 2 con una presentación en una sola dosis.
6. Una composición como la descrita en la reivindicaciones 1 y 2 con un diluyente, excipiente o vehículo farmacéutico.
7. El uso de un extracto como el reivindicado en la reivindicaciones 1 y 2 para usar como un medicamento.
8. Una composición que posea el extracto reivindicado en las reivindicaciones 1 y 2.
9. El uso de una composición con el extracto reivindicado en las reivindicaciones 1 y 2 para usar como un medicamento, preparado alimentario o cosmético.
10. El uso de una composición con el extracto descrito en las reivindicaciones 1 y 2 para usar en preparados dentífricos.
11. Un medicamento con todas sus formas farmacéuticas y todas sus presentaciones que contenga el extracto reivindicado en las reivindicaciones 1 y 2.
12. Una preparación alimentaria con todas sus presentaciones que contenga el extracto reivindicado en las reivindicaciones 1 y 2 .
13. Una preparación cosmética con todas sus presentaciones que contenga el extracto reivindicado en las reivindicaciones 1 y 2 .
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-
2006
- 2006-11-11 WO PCT/ES2006/070175 patent/WO2008059074A1/es active Application Filing
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