WO2008009210A1

WO2008009210A1 - Composés de dihydropyrimidine optiquement purs et leurs utilisations dans la fabrication d'un médicament pour traiter ou prévenir des viroses

Info

Publication number: WO2008009210A1
Application number: PCT/CN2007/002099
Authority: WO
Inventors: Song Li; Guangqiang Xia; Guoming Zhao; Lili Wang; Zhibing Zheng; Yunde Xie; Wu Zhong; Junhai Xiao; Xingzhou Li; Hao Cui
Original assignee: Beijing Molecule Science And Technology Co., Ltd
Priority date: 2006-07-10
Filing date: 2007-07-09
Publication date: 2008-01-24
Also published as: WO2008009210A8; CN101104604A; JP2009542730A; US8329902B2; JP4988841B2; EP2048141B1; US20100004268A1; EP2048141A4; CN101104604B; EP2048141A1

Description

光学纯二氢嘧啶类化合物及其用于制备治疗和预防病毒性疾病的药物的用途技术领域

本发明涉及通式（ I )的光学纯的二氢嘧啶类化合物及其制备方法，包含上述化合物的药物组合物，以及该类化合物或其可药用盐或水合物作为药物的用途，尤其是作为用于治疗和预防乙型肝炎的药物的用途。

背景技术

慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV )引起的，世界范围内广泛流行的一种严重传染病，与肝硬化和肝癌的发生密切相关。我国是乙型肝炎高发区， 1992-1995 年全国病毒性肝炎血清流行病学调查结果表明，我国人群乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg )携带率为 9. 7%,估计约 1. 3 亿人为 HBV携带者。对我国病毒性肝炎流行现状的研究发现，乙型肝炎年报告发病率从 1990 年的 21. 9/ 10 万升高到 2003 年的 53. 3/ 10 万，呈明显上升趋势（王晓军，张荣珍，胡苑笙等疾病监测， 2004， 19 (8) : 290-292 ) 。慢性乙型肝炎不仅严重影响人体健康，而且给家庭、社会造成沉重的经济负担，慢性乙型肝炎已成为我国重大的公共卫生问题之一。

用于治疗慢性乙肝的药物主要有两类一一免疫调节剂和核苷类 DNA 聚合酶抑制剂（ Loomba R.， Liang T. J. , Ant ivir. Ther. ， 2006, 11 (1)： 1-15 ) 。前者包括: 干扰素 - a 2b (IFN- 2b , Intron A®)和聚乙二醇干扰素- ot 2a (peg-IFN- 2a , Pegasys®)；后者包括：拉米夫定 ( Lamivudine, Epivir-HBV® )、阿德福韦酯（Adefovir Dipivoxi l , Hepsera®)和恩替卡韦 ( Entecavir , Barac lude® ) 。相比较而言可供临床应用的用于治疗乙肝的药物种类和数量还很少，因此不断研究开发新的安全有效的抗病毒药物，尤其是具有全新作用机制的药物具有十分重要的意义。

Deres等报道了以 Bay41-4109、 Bay39-5493为代表的杂芳环取代的二氢嘧啶类（HAP )化合物，该类化合物能够通过阻止正常核衣壳的形成起到抑制 HBV复制的作用，该类化合物同核心蛋白的结合具有结构特异性。（ Deres K. , Schroder C. H. , Paessens A.， et al. Sc ience , 2003, 299 (5608) : 893-896 ) 。对其作用机制研究发现， HAP通过与核心蛋白的 113- 143氨基酸残基作用，改变了形成核衣壳的二聚体之间的夹角，导致形成不稳定的膨胀的核衣壳，加速核心蛋白的降解（Hacker H. J. , Deres K. , Mi ldenberger M. , et a l. ， Biochem. Pharmacol. 2003, 66 (12) : 2273-2279 ) 。 W099/54326 和 W099/54329中分别公开了 2 -吡啶基和 2-噻唑基取代的二氢嘧啶类化合物。

发明内容

本发明涉及了通式（I ) 光学纯的二氢嘧啶类化合物

或其可药用盐或水合物，

其中

R¹代表氢、（ d-C₄ ) -烷基、（ C₂-C₄ ) -链烯基、（ - C₆ ) - 酰基、芳酰基、芳磺酰基，

R²代表选择性被选自下述相同或不同取代基取代最高可达 5 次的苯基、噻唑基、咪唑基： ¾素、羟基、氰基、三氟曱基、硝基、苄基、（d- CJ -烷基、（d- C₆ ) -垸氧基、（d-Cj -烷硫基、（C ~ C₆) -烷氧羰基、（C广 C₆) -酰氧基、氨基、（CrCj - 烷基氨基或（ d-C₆ ) -二烷基氨基， ( C-C₆ ) -酰基氨基，

R³代表苯基、呋喃基、噻吩基、三唑基、吡啶基、具有 3-6 个碳原子的环烷基，

其中上述环系可任选被选自下述基团的相同或不同取代基单取代或多取代：卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟甲磺酰基、硝基、氰基、羧基、羟基、（d-C₆) -烷氧基、 ( C-C, ) -烷氧羰基和（d- C₆) -烷基，其中所述烷基可被具有 6-10个碳原子的芳基、卤素、或 -S-R⁵、 NR⁶R\ CO-N^R8R⁹和 -A-CH₂-R^1Q所示基団取代，其中

5代表可任选被 ¾素取代的苯基，

R⁶、 R⁷、 R⁸和 R⁹相同或不同，并分别代表氢、苯基、羟基取代苯基、羟基、（d-C₆) -酰基或（d- C₆) -炕基，其中所述烷基可被羟基、（d- C₆) -坑氧基羰基、苯基或羟基取代苯基取代，

A代表 0、 S、 SO或 S0₂，

R¹⁰代表可任选被选自下述基团相同或不同取代基单取代或多取代的苯基：鹵素、硝基、三氟甲基、（ d- ) -烷基和（ d-C₆ )

-烷氧基，

R⁴代表式 -OR¹¹或式

R¹ 所示基团，

其中

R¹¹代表氢，直链、支链或环状饱和或不饱和（d-C₈) -烃基，其中所述烃基可任选含有 1个或 2个选自 0、 CO, NH、 - N!Ud-Cj -烷基、 - N ( (C广 C -烷基） ₂、 S和 S0₂的相同或不同杂链单元，并且可任选被素、硝基、氰基、烷氧基、具有 6- 10 个碳原子的芳基、芳烷基、杂芳基或式- NR¹⁵R"所示基团取代，其中

R¹⁵和 R¹⁶相同或不同，并分别代表氢、苄基或（d-C₆ ) -烷基,

R¹²、 R¹³、 R"代表分别选自下述基团的不同取代基：氢、鹵素、硝基、氰基、烷氧羰基、芳基、直链，支链或环状饱和或不饱和（d-C -烃基，其中所述烃基可任选被 ή素、硝基、氰基、 ₆ 烷氧基、 ₆烷氧羰基、具有 6- 1 G 个碳原子的芳基、芳基垸基、杂芳基取代。

本发明说明书中，（ C₂-C₆ ) -链浠基是指具有 2-6个碳原子的直链或支链烯基，优选 3-5个碳原子的直链或支链烯基，包括但是并不局限于乙烯基、丙烯基、正戊烯基、正己烯基。

本发明说明书中，（d-Cj -酰基是指具有 1-6个碳原子的直链或支链酰基，优选具有 2-4个碳原子的直链或支链酰基，包括但是并不局限于甲酰基、乙酰基。

本发明说明书中，芳基通常是指 5-14元的取代的或非取代的芳环系统，或可能包含稠合的双环或三环的芳环系统，包括但是并不局限于苯基和萘基。

本发明说明书中，（d-Cj -烷基是指直链或支链的含有 1-6 个碳原子的碁団，包括但并不局限于曱基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基等。

本发明说明书中，（d-CJ -烷氧基是指含有 1-6个碳原子的直链或支链烷氧基，优选具有 1-4个碳原子的直链或支链烷氧基，包括但并不局限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基和叔丁氧基等。

本发明说明书中，（ C "C₆ ) -烷硫基是指含有 1-6个碳原子的直链或支链烷硫基，优选具有 1-4个碳原子的直链或支链烷硫基。

本发明说明书中，（ d- C₆ ) -烷氧羰基是指具有 1-6个碳原子的直链或支链烷氧羰基，优选具有 1-4个碳原子的直链或支链烷氧羰基，包括但并不局限于甲氧羰基、乙氧欺基、丙氧羰基、异丙氧羰基、丁氧羰基、异丁氧羰基和叔丁氧羰基等。

本发明说明书中，手性伯氨是指分子中至少含一个手性中心的伯氨，可以为 R构型或 S构型。包括但并不局限于（R )或（S ) -1-苯基乙胺、（R )或（S ) - 1-苯基丙胺、（R )或（S ) -1- ( 2- 萘基）乙胺、 D或 L型的天然或非天然氨基酸。

本发明化合物可以以立体异构体形式存在。

本发明化合物包括通式 I及其异构体 la和它们的混合物。如果^为氢，异构体 I和 la以互变异构体平衡存在：

I I a

本发明化合物还可以成盐的形式。

其中可药用的优选的盐包括但是并不局限于与无机酸如盐酸、硫酸、磷酸、亚磷酸、氢溴酸和硝酸所成的盐以及与各种有机酸，如马来酸、富马酸、苹果酸、延胡索酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、乙酸、乳酸、苯甲酸、曱磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、棕榈酸等所成的盐。

其可药用的盐还包括但并不局限于本发明化合物的金属盐如钠盐、钾盐、镁盐或钙盐，或与氨或有机胺如乙胺、二乙胺、三乙胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、精氨酸、赖氨酸、乙二胺、或 2-苯基乙胺等成的铵盐。

本发明中的一些化合物可能用水或各种有机溶剂结晶或重结晶，在这种情况下，可能形成各种溶剂化物。本发明包括那些化学计量的溶剂化物，包括水合物，也包括在用低压升华干燥法制备时形成的包含可变量水的化合物。

定义如下的通式（I )化合物及它们的盐或水合物是优选的，其中：

R¹代表氢、甲基、甲酰基、乙酰基、芳酰基、芳磺酰基，

R² 代表被选自卤代最高达 5次的苯基、或选自下述基团的相同或不同取代基取代最高达 3次的噻唑基、咪唑基：氟、氯、溴、苄基、（ C「C₄ ) -烷基、（ d- C₄ ) -烷氧基、氨基、（ d- ) -酰基氨基，

R³代表苯基、呋喃基、噻哈基、吡啶基、环戊基或环己基，其中上述环系可任选被选自下述基团的相同或不同取代基单取代或多取代：卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟曱磺酰基、硝基、氰基、羧基、羟基、甲氧基羰基和式 -C0NHCH₂C ( CH₃ ) 3、 - CONH (CH₂) ₂OH、 -CONHCH₂C₆H₅、 - CONHC₆H₅、 - OCH₂C₆H₅或 -S-pC卜 C₆H₄ 所示基团，

R⁴代表式 -OR¹¹或式

所示基团，

其中

R¹¹代表氢、（d-C₄ ) -链烯基或（d-C₄ ) -梡基，其中所述基团可任选被！ ¾素、吡啶基、氰基、苯氧基、垸氧基、三氟乙基、苄基或式 -NR¹⁵R"所示基团取代，

其中

R¹⁵和 R¹⁶相同或不同，并分别代表氢、苄基或（ d-C₄ ) -烷基， R¹²、 R¹³、 R¹⁴代表分别选自下述基团的不同取代基：氢、氟、氯、硝基、氰基、烷氧羰基、芳基、直链，支链或环状饱和或不饱和（d-C₆ ) -烃基，其中所述烃基可任选被卤素、硝基、氰基、烷氧基、烷氧羰基、具有 6-10 个碳原子的芳基、芳烷基、杂芳基取代。

定义如下的通式（ I )化合物及它们的盐或水合物是特别优选的，其中：

R¹代表氢、曱基、曱酰基、乙酰基、苯甲酰基、苯磺酰基、对甲苯磺酰基，

R² 代表被选自氟代最高达 5次的苯基、或选自下述基团的相同或不同取代基取代最高达 2次的噻唑基、咪唑基：氟、氯、溴、苄基、（d- C₃ ) -烷基、（d- C₃ ) -烷氧基、氨基、（d-C₃ ) -酰基氨基，

R³代表苯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、环戊基或环己基，其中上述环系可任选被选自下述基团的相同或不同取代基取代最高达 3次：氟、氯、溴、碘、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟甲磺酰基、硝基、氰基、羧基、甲氧基羰基和式 -C0NHCH₂C( CH₃ ) 3、 -C0NH (CH₂) ₂OH、 -CONHCH₂C₆H₅、 -C0NHC₆H_S, - OCH₂C₆H₅或- S-p -C₆H₄ 所示基团，

R⁴代表式 -OR¹¹或式

所示基团，

其中

R¹¹代表氢、（d-C₃ ) -链烯基或（d-C₄ ) -烷基，其中所述基团可任选被！ ¾素、吡啶基、氰基、苯氧基、烷氧基、三氟乙基、苄基或式- NR¹⁵R"所示基团取代，

其中

R¹⁵和 R¹⁶相同或不同，并分别代表氢、苄基或甲基， R¹²、 R¹³、 R"代表分别选自下迷基团的不同取代基：氢、烷氧羰基、取代或非取代苯基、萘基、苄基、直链或支链（d-C₃ ) - 烃基。

定义如下的通式（I )化合物及它们的盐或水合物是非常特别优选的，

其中-.

R¹代表氢或乙酰基，

R²代表被选自氟代最高达 3次的苯基、或选自下述基团的相同或不同取代基取代最高达 2次的 2 -噻唑基、 4- 唑基、 5-噻唑基、 2-咪唑基：氟、氯、甲基、苄基、氨基、乙酰基氨基，

R³代表可任选被选自下述基团的相同或不同取代基取代最高达 3次的苯基：氟、氯、溴、羟基、硝基、曱氧基、甲基，

R⁴代表式 -OR¹¹或式

所示基团，

R¹¹代表具有最高达 3个碳原子的直链或支链烷基，所述烷基可被氟或氯原子取代。

R¹²、 R¹³、 R"代表分别选自下述基团的不同取代基：氢、甲基、乙基、丙基、甲氧羰基、乙氧羰基、苯基，

本发明特别优选的通式（ I )化合物或其可药用盐或水合物为下面的化合物：

1. ( R, R ) -N- ( 1 -苯基乙基） -4- ( 2-氯 -4-氟苯基） -6 -甲基 -2- (2-噻唑基） -1 , 4-二氢嘧啶 -5-甲酸酰胺

2. ( ) -4- ( 2 -氯 -4-氟苯基） -6 -甲基 - 2-（2-噻唑基) -1， 4 -二氢嘧啶 -5-曱酸乙酯 3. (R) -4- (2-氯- 4-氟苯基） -6-甲基- 2- (2-噻唑基） - 1， 4-二氢嘧啶- 5-甲酸三氟乙酯

4. (R, R) -N- (1 -苯基乙基） -4- (2-氯- 4-氟苯基） -6-甲基 -2- (2， 4， 6-三氟苯基） -1, 4-二氢嘧啶- 5-甲酸酰胺

5. (R) -4- (2 -氯 -4-氟苯基) -6-甲基 -2- (2， 4， 6-三氟苯基) - 1， 4-二氢嘧啶 -5-甲酸乙酯

6. (S, R) -N- ( 1-苯基乙基） -4- (2-氯 -4-氟苯基） -6-甲基- 2- (5-噻唑基） -1, 4-二氢嘧啶 -5-甲酸酰胺

7. (R) -4- (2-氯- 4-氟苯基） -6-曱基 -2- (5-噻唑基） -1, 4-二氢嘧啶 -5-甲酸乙酯

本发明化合物通式（ I ) 可通过下述方法制备：

1) 在加入或不加入碱或酸的情况下，在适当的惰性溶剂中，通式（ Π )脒类或其盐

其中 R²定义同上，

与通式（III) 醛

^R3 j ( ΙΠ )

其中 R³定义同上，

以及通式（ IV)反应，

CH₃COCH₂CONHCR¹²R¹³R¹⁴ ( IV )

其中 R¹²、 R¹³、 R"定义同上,

得到通式（ V ) 的化合物

( v ) 或者，

在加入或不加入碱或酸的情况下，于 20-150° ( ，在适当的惰性溶剂中，通式（VI)或（VII)

其中 R³、 R¹²、 R¹³、 R"定义同上，

与上述通式（ II )反应

或者，

在铵盐^^在下，将上述通式（ III ) 醛与通式（ IV )化合物以及通式（Vffl) 亚氨基醚反应，

其中 R²定义同上，且 ^为（^-(₄烷基。

2 )通式（ V )在适当的溶剂中进行酰基化，得通式（IX)

其中 R¹为（d- CJ -酰基、芳酰基或芳磺酰基， R², R³, R¹²、 R¹³、 R"定义同上，

3)通式（IX)在酸性或碱性条件下，适当的溶剂中进行亚硝基化，然后与醇钠 R^u0Na反应得通式（ I )化合物

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1. 对、 B、 C反应方案而言，反应步驟 1适用的溶剂是所有的惰性有机溶剂。这些溶剂优选包括醇类如乙醇、甲醇、异丙醇，醚类如二氧杂环己烷、乙醚、四氢呋喃、乙二醇一甲醚、乙二醇二甲醚或冰醋酸、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、吡啶和六甲基磷酰胺。

反应温度可在较宽的范围内变化。通常该反应在 20-150°C进行，优选在各溶剂的沸点进行。

该反应可在常压，但也可在升高的压力下进行。通常该反应在常压下进行。

该反应可在加入或不加入碱或酸的条件下进行，但本发明反应优选在相对弱的酸如乙酸或曱酸的存在下进行。

用作起始物质的通式（Π)的脒在某些情况下是已知的，或者可以按照文献中记载的已知方法由相应的氰基化合物制备 (参见 Diana, G. D. , Yarinsky, A. , Zalay, Ε. S. , et al. J. Med. Chem. 1969, 12 (9) : 791-793; Garigipati, R. S. Tetrahedron. Lett. 1990, 31 (14): 1969-1972; Boere, R. J.， Oakley, R. T.， Read, R. V. J Organometal. Chera. 1987, 331: 161-167; Judkins, B. D. , Allen, D. G. , Cook, T. A. Synth. Coramun. 1996, 26 (23): 4351-4367; Tomraasi, R. A. , Macchia, W. M.， Parker, D. T. Tetrahedron. Lett. 1998, 39:5947-5950)。

用作起始物质的通式（III )的醛是已知的，或者可以按照文献中记载的已知方法制备（T. D. Harris和 G. P. Roth, J. Org. Chera. 1979, 44， 146; DE 2165260, July 1972; DE 2401665, July 1974; Mijano et. al. CA 1963, 59， 13929c; E. Adler , H. D. Becker, Chera. Scand. 1961, 15, 849; E. P. Papadopoulos, M. Mardin, Ch. Issidoridis, J. Org. Chem. Soc. 1956, 78, 2543) 。

用作起始物质的通式（IV)的化合物 CH₃COCH₂CONHR¹²由分子结构中含手性中心的伯氨 R¹²NH₂与双乙烯酮或双乙烯酮丙酮加成物，在加入减或不加入碱的条件下，于惰性溶剂中反应制备。通常该反应在 50- 150°C进行，优选在 80-100°C进行。用作起始物质通式（VI ) 或通式（νπ )化合物可按文献记载的已知方法由通式（IV)化合物 CH₃COCH₂CONHR¹²与通式（ΙΠ ) 的醛在惰性溶剂中，加入或不加入酸和碱的条件下制备（参见 G . Jones，"诺文葛耳缩合"，有机反应，第 XV卷，第 204页起（1967) )。

用作起始物质的通式（種）的亚氨基醚是已知的，或者可以按文献记载的已知方法制备（参见 S. A. Glckman, A. C. Cope, J. Am. Chem. Soc. 1945， 67 , 1017)。

2. 反应步骤 2 的酰基化反应适用的溶剂是所有的惰性非质子性有机溶剂。这些溶剂优选包括醚类如二氧杂环己垸、乙醚、四氢呋喃、乙二醇二甲醚或二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、吡啶和六甲基磷酰胺。

反应温度可在较宽的范围内变化。通常该反应在 -20-10(TC进行，但优选在室温进行。

该反应通常在碱性条件下进行，可应用的碱优选但不局限于无机碱如碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钾、醋酸钠或有机碱如三乙胺、吡啶、六氢吡啶、 N, N-二甲基氨基吡啶、吗啉等。

3. 步骤 3 的亚硝化产物通常在酸性条件如醋酸、盐酸或硫酸存在下与亚硝酸钠反应或在碱性条件如醋酸钠、吡啶、六氢吡啶、 N， N-二甲基氨基吡啶存在下与 1^0₂81?₄或^08?₄反应制备。

亚硝化反应适用的溶剂是惰性的有机溶剂，优选但并不局限于二氧杂环己烷、乙醚、乙腈、二氯甲烷、硝基甲垸、四氢呋喃、乙二醇一甲醚、乙二醇二曱醚、冰醋酸、二甲基甲酰胺、二甲基亚砚、吡啶和六甲基磷酰胺。

反应通常在惰性气体保护下，于- 50- 50 °C进行，但优选在 0 。C 进行。

亚硝基化产物一般不经纯化，直接同醇钠 R^u0Na反应得到产物。醇钠可由相应的醇与金属钠制备得到。

关于制备通式 I化合物更详尽的资料见实施例。

本发明化合物的抗病毒作用按 Sells等人（M. A. Sells, M. L. Chen, G, Proc. Natl. Acad. Sci. 1987， 84， 1005-1009) 和 Korba等 (B. E. Korba, J. L. Ger in Antiviral Research 1992， 19， 55-70) 描述的方法测定。

在 96孔微量滴定板中进行抗病毒试验。该板的第一竖行只含生长培养基和 HepG 2.2.15细胞，用作空白对照。

首先将试验化合物的贮备液（50亳摩尔）溶解在 DMS0中，用 HepG 2.2.15 细胞生长培养基制备进一步稀释液。通常将本发明的化合物以 100 g/ml的试验浓度（第 1试验浓度）吸移到微量滴定板笫二竖试验排的各孔中，然后用生长培养基加 2%胎牛血清 (25 μ ΐ) 进行稀释，每次稀释 2倍，稀释最高达 2^lfl倍。

然后将 225 μ ΐ HepG 2.2.15细胞在生长培养基加 2 %胎牛血清中的悬浮液（5 X 10⁴个细胞 /ml)加到该 96 孔微量滴定板的每个孔中。

该试验混合物在 37°C, 5%C0₂条件下培育 4天。然后吸出上清液并弃去，在各孔中加入 225 μ 1新制备的生长培养基。再次加入本发明化合物，溶液体积 25 μ 1。将该混合物再培育 4天。

在收获上清液测定抗病毒效果之前用光学显微镜技术或生物化学检测方法（如 Alamar Blue 染色或 Trypan Blue 染色）考察 HepG 2.2.15细胞毒性变化。

然后收集上清液，并用真空将其吸收到用尼龙膜盖住的 96 孔斑点印迹室中（按生产商的使用说明）。

细胞毒性测定

由物质诱发的在 HepG 2.2.15 细胞中的细胞毒性或抑制细胞的变化可采用例如光学显微镜技术来测定，并以细胞形态的变化表示。这类在 HepG 2. 2. 15细胞中由物质诱发的变化与未经处理的细胞相比是明显的，例如细胞溶解、空泡形成或细胞形态改变。以观察细胞病变为指标， 8 天显微镜下观察细胞病变，完全破坏为 4; 75%为 3; 50%为 2; 25%为 1 ; 无病变为 0。计算各浓度下平均细胞病变程度和抑制百分数。按 Reed&Muench法计算半数有毒浓度（TC₅。），最大无毒浓度 (TCo)。

TCso是指 50 %的细胞具有与相应的细胞对照相似的形态时的本发明化合物的浓度。

抗病毒活性测定

将上清液转移到斑点装置（参见上文）的尼龙膜上之后，将 HepG 2. 2. 15细胞的上清液变性 (1. 5 M NaCl / 0. 5 M NaOH)、中和（3M NaC l / 0. 5 M Tr i s HC1， H 7. 5)和洗涤（2 x SSC)。然后将滤膜在 120°C保温 2— 4小时使 DNA被烘烤到该膜上。

DNA杂交

通常采用非放射活性地高辛配基标记的乙型肝炎特异性 DNA 探针来测定尼龙滤膜上处理后的 HepG 2. 2. 15 细胞的病毒 DNA。其中，每次都是依据生产商的使用说明将所述探针用地高辛配基标记、纯化和杂交。

简单地说，预杂化和杂化是在 5 x SSC；、 l x封闭剂、 0. 1 % N- 月桂酰肌氨酸、 0. 02 % SDS和 Ι ΟΟ μ ^青鱼精子 DNA中进行预杂交和杂交。在 60°C进行 30分钟预杂交，用 20- 40ng / ml地高辛配基化的变性 HBV特异性 MA进行特异性杂交（14小时， 60 °C！)。然后将过滤膜进行洗涤，进行 HBV DNA的地高辛配基抗体检测。

地高辛配基标记的 DNA的免疫学检测按生产商的说明进行。筒单地说，该滤膜用封闭剂进行洗涤和预杂交 (按制造商的说明），然后用事先偶联到碱性磷酸酶上的抗 -DIG抗体进行杂交 ³0 分钟。洗涤后，加入碱性磷酸酯酶底物 CSPD, 与滤器一起培养 5 分钟，然后包在塑料薄膜中，并在 37 °C再培养 15分钟。将过滤器暴露于 X-射线膜上测量乙型肝炎特定 DM的化学发光信号（根据信号强度培养 10分钟至 2小时），计算半数抑制浓度（IC₅。）。

半数抑制浓度（IC₅。)是指与未处理样品相比，使乙型肝炎特异性带减少 50 %时本发明化合物的浓度。

本发明的化合物显示出较强的抗病毒作用。这类化合物对乙型肝炎（HBV)具有出乎预料的抗病毒活性，因此适于用来治疗病毒引起的各种疾病，尤其是急性和慢性持久性 HBV病毒感染引起的疾病。由 HBV引起的慢性病毒性疾病可以导致各种不同严重程度的综合症状，众所周知，慢性乙型肝炎病毒感染可导致肝硬化和 (或）肝细胞癌。

可用本发明化合物治疗的适应症的实例有：

治疗可导致感染性肝炎的急性和慢性病毒感染的，例如乙型肝炎病毒感染。特别优选的是慢性乙型肝炎感染的治疗和急性乙型肝炎病毒感染的治疗。

本发明化合物的药物组合物，可以以下方面的任意方式施与：口服、喷雾吸入、直肠给药、鼻腔给药、阴道给药、局部给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药，其中优选口服、肌注、腹膜内或静脉内用药方式。

本发明化合物或含有本发明化合物的药物组合物可以单位剂量形式给药。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶嚢、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂、包合物、埋植剂、贴剂、擦剂等。 .

本发明的药物组合物中还可以含有常用的载体，这里所述可药用载体包括但不局限于：离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白如人血清蛋白，緩沖物质如磷酸盐，甘油，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢鉀，氯化钠，辞盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，羊毛酯等。载体在药物组合物中的含量可以是 1% -98%重量，通常大约占到 80 % 重量。为方便起见，局部麻醉剂，防腐剂，緩沖剂等可直接溶于载体中。

口服片剂和胶嚢可以含有赋形剂如粘合剂，如糖浆，阿拉伯胶，山梨醇，黄芪胶, 或聚乙烯吡咯烷酮，填充剂，如乳糖，蔗糖，玉米淀粉，磷酸钙，山梨醇，氨基乙酸，润滑剂，如硬脂酸镁，滑石，聚乙二醇，硅土，崩解剂，如马铃薯淀粉，或可接受的增润剂，如月桂醇钠硫酸盐。片剂可以用制药学上公知的方法包衣。

口月液可以制成水和油的悬浮液，溶液，乳浊液，糖浆或酏剂，也可以制成干品，用前补充水或其它合适的媒质。这种液体制剂可以包含常规的添加剂，如悬浮剂，山梨醇，纤维素曱醚，葡萄糖糖浆，凝胶，羟乙基纤维素，羧甲基纤维素，硬脂酸铝凝胶，氢化的食用油脂，乳化剂，如卵磷脂，山梨聚醣单油酸盐，阿拉伯胶；或非水载体（可能包含可食用油），如杏仁油，油脂如甘油，乙二醇或乙醇；防腐剂如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，山梨酸。如需要可添加调味剂或着色剂。

栓剂可包含常规的栓剂基质，如可黄油或其它甘油酯。对胃外投药，液态剂型通常由化合物和一种消毒的载体制成。载体首选水。依照所选载体和药物浓度的不同，化合物既可溶于载体中也可制成悬浮溶液，在制成注射用溶液时先将化合物溶于水中，过滤消毒后装入封口瓶或安瓿中。

当皮肤局部施用时，本发明化合物可以制成适当的软膏，洗剂，或霜剂的形式，其中活性成分悬浮或溶解于一种或多种的载体中。其中软膏制剂可以使用的载体包括但不局限于：矿物油，液体凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蜡和水；洗剂和霜剂可使用的载体包括但不限于：矿物油，脱水山槊糖醇单硬脂酸酯，吐温 60，十六烷酯蜡，十六碳烯芳醇， 2-辛基十二烷醇，苄醇和水。

在上述药物制剂中通式（I)的活性化合物的存在浓度应为该混合物总重量的约 0. 1 ~ 99. 5 %，优选约 0. 5 ~ 95 % (重量）。

上述药物制剂除了包含通式（I)的化合物外，还可进一步包含其它的药物活性化合物。

一般而言，已经证明有利的是无论在人体医药还是在兽医药中，本发明活性化合物的给药总量每 24小时为约 0. 5-500mg, 优选 1-l OOnig / kg体重，如果合适的话，分多次单剂量给药，以达到所要求的效果。单剂量中含活性化合物的量优选为约 l-80mg，更优选为 1-50 mg / kg体重，但也可以不按照上述的剂量，即取决于治疗对象的种类和体重、疾病的性质和严重程度、制剂的类型和药物的给药方式，以及给药周期或时间间隔。

具体实施方式

下面的具体实施例是本发明的优选实施方案，其不应理解为对本发明构成任何限制。

化合物的熔点由 RY-1 熔点仪测定，温度计未较正。质谱由 Micromas s ZabSpec 高分辨率质谱仪（分辨率 1000 )测定。 ^ NMR 由 JNM-ECA-400超导 NMR仪测定，工作频率 ^XH NMR 400MHz, ¹³C NMR 100MHz 。实施例

实施例 1 (R, R ) -N- ( 1-苯基乙基） -4- ( 2 -氯- 4-氟苯基） - 6-甲基 -2- (2-噻唑基） -1， 4-二氢嘧啶 -5-甲酸酰胺

步骤 1 (R) - α-甲基苄胺 6· 06克（50讓 ol)，双乙烯酮丙酮加成物 7.11克（50mraol)置于单口的 250ml圆底烧瓶中，加入 N, N二甲基甲酰胺 100ml，三乙胺 6.01克（ 60ramol ) ，于 80-100°C 反应 1小时，停止反应。加入 200ml水，用 4N的盐酸中和到中性，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得化合物 1 9.33克，收率 91%。

步骤 2 化合物 14.5克（ 22.05mmol )、2-氯- 4-氟苯曱醛 3.5 克（ 22.05mmol ) 、 2-噻唑甲脒醋酸盐 4.5克（ 22.05mmol ) 和无水醋酸钠 1.0克（ 22.05 mrnol ) ，加入无水乙醇 100ml，回流反应 16小时，浓缩除去溶剂，所得固体加入乙酸乙酯 40ml和水 40ml，分液，水相用乙酸乙酯 20ml*2进行萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液进行洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，快速柱层析分离得颗粒状淡黄色细针状固体 (化合物 2) 2.93 克，收率 45% 。 rap 224-226 °C 。 ^-NMR (400MHz， DMS0-d₆) δ

1.30-1.34 (3H,m);

2.01 (3H， s)； 4.84-4.88 (1H, m)； 5.97 (1H， s)； 7.03-7.05 (2H ， m)； 7.12-7.24 (4H , ra)； 7.36-7.39 (1H ,m)； 7.49-7.53 (1H , m) ; 7.87-7.88 (1H， d) ； 7.93-7.96 (1H , ra) ; 8.17-8.19 (1H, d) ； 9.35 (1H, s); MS (EI) 454.0 (M⁺)

实施例 2 (R) -4- (2-氯 -4-氟苯基） -6-甲基- 2- (2-噻唑基） -1， .4-二氢嘧啶- 5-甲酸乙酯

化合物 20.91克（ 2mmol )溶于无水 N, N-二甲基甲酰胺 20ml 中，加入 0.3三乙胺 03克（ 3mmol )，滴入乙酰氯 0.16ral (2.4mmol) , 室温反应 6小时。加入水 20ml, 乙酸乙酯 15ml*6进行萃取。有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，快速柱层析分离得化合物 30.746克，收率 75%。 'H-NMR (400MHz, DMS0-d₆) δ 1.23-1.41 (3Η， ra); 1.98 (3Η， s); 2.17

(3Η， s)； 4.96-5.0 (1Η， m)； 6.59 (1Η， s)； 7.07-7.42 (8H ,m); 7.98- 7.99(lH,d) ； 8.02-8.03 (1H , d) 8.63-8.64 (lH,d) ； MS (EI) 496.1 (M⁺)

氮气保护下，将化合物 3 0.5克（ lmraol ) 置于 25ml的三口圆底烧瓶中，加入醋酸 5ml溶解，冰浴冷却，于 0°C加入亚硝酸钠 0.14克（ 2mmol ) 。反应 6小时，加入水 30ml，冷却的二氯甲烷 15ml*3快速萃取。有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩得 0.521克，不经纯化直接进行反应。

将 0.521克上述产物加入无水乙醇 15ml中，水浴冷却，加入乙醇钠 0.135g, 于 0°C反应 50分钟。停止反应加入 15ml水，用 4N盐酸调节 PH到中性，浓缩，乙酸乙酯与水进行分液，水相再用乙酸乙酯 10ml*3进行萃取。有机相用无水硫酸钠干燥。柱层析分离得化合物 40.296克，收率 78%。 ^-NMR (400MHz, DMS0-d₆) δ 1.01-1.07 (3H,m); 2.46 (3Η, s)； 3.90

-3.95 (2H， m)； 5.99 (1H， s)； 7.17-7.22 (IH ,m); 7.90-7.91 (1H， d)； 7.97- 7.98 (IH, d); 9.96 (IH, s) ; MS (EI) 379.0 (M⁺)

[a]_D=-54.6(c=l% ，CH₃0H)

实施例 3 ( R ) -4- ( 2 -氯- 4-氟苯基） - 6-曱基- 2- (2-噻唑基） -1，

4 -二氢嘧啶- 5-甲酸三乙酯

3 5

采用实施例 2 的制备方法，将乙醇钠改为三氟乙醇钠得黄色无定型固体化合物 5 0.296 克，收率 78%。 MR(⁴00MHz， DMS0-d₆) δ 4.60-4.64

(2Η, m)； 6.01 (1H， s)； 7.16-7.21 (IH ,ra); 7.34-7.43 (2H, m) ； 7.92-7.93 (IH, d) ； 7.98—7· 99 (1H， d) ； 10.23(1H, s);MS (ED 432.1 (M⁺)

[a]_D= -80.1 (c=l°/o , CHsOH)

实施例 4 ( R， R ) - N- ( 1-苯基乙基 ) -4- ( 2-氯- 4-氟苯基 ) -6 -甲基 -2- (2, 4， 6-三氟苯基） -1, 4-二氢嘧啶 -5-甲酸酰胺

2 -氯- 4-氟苯甲醛 1.58g (lOmmol) ,化合物 12.04g(10讓 ol) , 溶于乙醇 40 ml中，室温搅拌 2d.，然后加入 2， 4, 6-三氟苯甲脒醋酸盐 2.34g (lOmmol), 回流反应过夜，蒸除溶剂，加入乙酸乙酯和水分液，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离得混合物 4.7g, 溶于乙酸乙酯，析出固体化合物 6， 50% 乙醇重结晶得无色细针状固体 2.2g H- NMR(400MHz, DMS0-d₆) δ 1.3-1.33 (3Η， ra)； 1.97 (3Η, s)； 4.81-4.88

(IH, m)； 5.96 (1H， s)； 7.04-7.39 (9H ,m); 7.57-7.61 (IH, m) ； 8.11-8.13 (IH, d)； 9.25(1H, s); MS (EI) 501 (M⁺)

实施例 5 (R) -4- (2-氯- 4-氟苯

苯基） -1, 4-二氢嘧啶 -5-甲酸乙酯

釆用实施例 2 的方法，由化合物 6 制备得到化合物 7无色细针状结晶。 -NMR OOMHz, DMS0-d₆) δ 1.39-1.41 (3Η, d, J=7.0)； 2.07 (3H, s) ； 2.10 (3H, s) ； 4.95-4.99 (IH, ra)； 6.47 (1H， s)； 7.08-7.30 (8H, m)； 7.45-7.51 (2H m); 8.70-8.72 (IH, d, J=8.12); MS (EI) 543 (M+)。

由化合物 7 得到化合物 8。无色针状结晶， mp 162- 165°C; 'H-NMR (400MHz, DMS0-d₆) δ 1.02-1.05 (3H, t, J=7.0 Hz)； 2.32 (3H, s)； 3.92-3.96 (2H, m, J=7. OHz)； 5.97 (1H， s)； 7.21-7.45 (5H, ra)；

9.86(lH,s); MS (EI) 426 (M⁺); [ a ] _D=-92.38 ( c-1% ，甲醇）。

实施例 6 (S, R) -N- (1-苯基乙基） -4- (2-氯- 4-氟苯基） - 6-甲基 -2- (5-噻唑基） -1， 4-二氢嘧啶- 5-甲酸酰胺

采用实施例 1 的制备方法，由（ S ) - a -甲基苄胺 6. lg (50讓 ol)，得到化合物 9 9.6g (产率 95%) 。

化合物 9 2.9g(14.2mmol)，2- 氯 -4- 氟苯曱醛 2.2g(14.2ramol), 溶于无水乙醇 50ml中，加入醋酸和六氢吡啶各 7滴，室温反应 24hr, 浓缩，柱层析分离得白色固体 4. lg, 乙酸乙酯 /石油醚重结晶。

^JH-NMR (400MHz, CDC1₃) δ 1.42-1.44 (3Η, d);2.45 (3Η, s); 5· 18—5.21 (IH, m)； 6.07-6.09 (1H， d)； 6.72-6.76 (IH ， ra) ; 7.12-7.47 (9H， m)； 7. 75 (1H, s) ;

化合物 10 3. 4g ( 1 Oramo 1 ) , 5 -噻唑甲脒醋酸盐 1. 9 (10mmol) , 醋酸钠 1. 0 (12mmol) 溶于无水乙醇 50ml中，加热回流 20hr，浓缩除去溶剂，所得固体加入乙酸乙酯和水，分液，水相用乙酸乙酯进行萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液进行洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离得淡黄色固体（化合物 11 ) 1. 9克，收率 41% ^-NMR (400MHz, DMS0-d₆) δ 1. 22-1. 25 (3H, ra) ; 2. 11 (3Η， s)； 4. 85-4. 88 (1H, m)； 5. 96 (1H, s)； 7. 14- 7. 43 (8H ， m)；

8. 10-8: 12 (1H， d)； 8. 49 (1H， s)； 9. 09 (1H， s)； 9. 17 (1H， s)； MS (EI) 454. 0 (M⁺)

实施例 7 ( R ) -4- ( 2-氯- 4-氟苯基） -6-甲基 -2- (5-噻唑基） -1， 4 -二氢嘧啶 -5-曱酸乙酯

11 12 13 釆用实施例 2 的方法，由化合物 11 制备化合物 12得黄色泡沫样固体 H-NMR (400MHz, DMS0-d₆) δ 1. 34-1. 36 (3Η, d) ; 2. 08 (3Η, s)； 2. 18 (3H, s)； 4. 97-5. 01 (1H, m)； 6. 56 (1H, s)； 7. 11-7. 37 (7H ，m) ; 7. 50-7. 53 (1H, dd) ; 7. 93 (1H, s) ; 8. 72-8. 74 (1H, d) ; 9. 23 (1H, s) ； MS (EI) 496. 1 (M⁺)

由化合物 12 得到化合物 13。 ^-NMR OOMHz^MSO- d₆) δ 1. 0-1. 06 (3H, t, J=7. 0Hz)； 2. 44 (3H， s)； 3. 92-3. 94 (2H, m, J=7. OH z)； 5. 93 (1H, s)； 7. 36-7. 39 (3H， ra)； 8. 54 (1H， s) ; 9. 11 (1H, s)； 9. 60 (1H, s) ; MS (EI) 379.0 (M⁺); [ a ] _D--65.0 ( c-l%，甲醇）。

实施例 8 化合物的细胞毒性及抗病毒活性测定

照说明书描述的方法测定本发明化合物的细胞毒性及抗病毒活性，结果见表 1

表 1化合物对 HBV DNA的抑制作用

实施例编号 IC₅₀ μΜ Τ0₅。μΜ

2 <0.8 >62.9

3 5.1 37.4

5 1.3 13.8

7 1.8 >12.5

Claims

权利要求

1. 通式（I) 光学纯化合物

( I)

或其可药用盐或水合物，

其中

R¹代表氢、（d-Cj -烷基、（C₂-C₄) -链烯基、（d-Cj -酰基、芳酰基、芳磺酰基，

R²代表选择性被选自下述基团的相同或不同取代基取代的苯基、噻唑基、咪唑基： ¾素、羟基、氰基、三氟甲基、硝基、苄基、 ( C「C₆ ) -烷基、 ( C C_fi ) -烷氧基、 ( c-c₆ ) -烷硫基、 ( C-C₆ )

-烷氧漿基、 ( -Cs ) -酰氧基、氨基、（ d-C₆ ) -烷基氨基或（ C「C₆ ) -二烷基氨基，（ ( C₆ ) -酰基氨基，

R³代表苯基、呋喃基、噻吩基、三唑基、吡啶基、具有 3-6个碳原子的环烷基，

其中上述环系可任选被选自下述基团的相同或不同取代基单取代或多取代：卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟甲磺酰基、硝基、氰基、羧基、羟基、（d-C₆)-烷氧基、（d- C₆) -烷氧羰基和（d-C₆) -烷基，其中所述烷基可被具有 6- 10个碳原子的芳基、！¾素、或 -S-R⁵、 NR⁶R⁷、 CO-NR⁸R⁹和 -A- CH₂-R^1Q所示基团取代，

其中

R⁵代表可任选被 1¾素取代的苯基，

R⁶、 R⁷、 R⁸和 R⁹相同或不同，并分别代表氢、苯基、羟基取代苯基、羟基、（Ci-Cj -酰基或（d-C₆ ) -烷基，其中所述烷基可被羟基、（d-C₆ ) -烷氧基羰基、苯基或羟基取代苯基取代，

A代表 0、 S、 SO或 S0₂，

R¹⁰代表可任选或选择性被选自下述基团相同或不同取代基单取代或多取代的苯基：卤素、硝基、三氟甲基、（ C!-C ) -坑基和（ C -C₆ )

-烷氧基

R⁴代表式 -OR¹¹或式

所示基团，

其中

R¹¹代表氢，直链、支链或环状饱和或不饱和（d-C₈ ) -烃基，其中所述烃基可任选含有 1个或 2个选自 0、 C0、 NH、 - NH ( C「C₄ ) -烷基、 - N ( ( d- C₄ ) - 基） ₂、 S和 S0₂的相同或不同杂链单元，并且可任选被素、硝基、氰基、烷氧基、具有 6- 10 个碳原子的芳基、芳基 d-₆烷基、杂芳基或式- NR¹⁵R"所示基团取代，其中

R¹⁵和 R¹⁶相同或不同，并分别代表氢、苄基或（d-Cj -烷基， R¹²、 R¹³、 R"代表分别选自下述基团的不同取代基：氢、鹵素、硝基、氰基、 C ₆烷氧羰基、芳基、直链，支链或环状饱和或不饱和 ( d-C₈ ) -烃基，其中所述烃基可任选被卤素、硝基、氰基、 d-₆ 烷氧基、 d-₆烷氧羰基、具有 6- 10 个碳原子的芳基、芳烷基、杂芳基取代。

2. 权力要求 1的通式（ I )光学纯化合物或其可药用盐或水合物，

其中

R¹代表氢、甲基、甲酰基、乙酰基、芳酰基、芳磧酰基， R²代表选择性被选自鹵代最高达 5次的苯基、或选自下述相同或不同取代基取代最高达 3次的噻唑基、咪唑基：氟、氯、溴、苄基、（ d- C₄ ) -烷基、（ d- C₄ ) -烷氧基、氨基、 ( d- C₄ ) -酰基氨基，

R³代表笨！^、呋喃基、噻吩基、吡啶基、环戊基或环己基，其中上述环系可任选被选自下述基团的相同或不同取代基单取代或多取代：鹵素、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟甲磺酰基、硝基、氰基、羧基、羟基、甲氧基羰基和式 -C0NHCH₂C ( CH₃ ) 3、 - CONH (CH₂) ₂OH、 -C謹 CH₂C₆H₅、 -CONHC₆H₅、 - OCH₂C₆H₅或 -S- pC卜 C₆H₄ 所示基团，

R⁴代表式 -OR¹¹或式

所示基团，

其中

R¹¹代表氢、（d- C₄ ) -链烯基或（C「C₄ ) -烷基，其中所述基团可任选被 iS素、吡啶基、氰基、苯氧基、烷氧基、三氟乙基、苄基或式 -NR¹⁵R "所示基团取代，

其中

R¹⁵和 R"相同或不同，并分别代表氢、苄基或（d-CJ -烷基， R¹²、 R¹³、 R¹⁴代表分别选自下述基团的不同取代基：氢、氟、氯、硝基、氰基、烷氧羰基、芳基、直链，支链或环状饱和或不饱和 ( d-Cj -烃基，其中所述烃基可任选被! ¾素、硝基、氰基、烷氧基、烷氧羰基、具有 6-10 个碳原子的芳基、芳烷基、杂芳基取代。

3. 权力要求 1的通式（I )光学純化合物或其可药用盐或水合物，其中

R¹代表氢、甲基、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、苯磺酰基、对甲苯磺酰基，

R² 代表被选自氟代最高达 5次的苯基、或选自下述基团的相同或不同取代基取代最高达 2次的噻唑基、咪唑基：氟、氯、溴、苄基、（d- C₃ ) -烷基、（d- C₃ ) -烷氧基、氨基、（d-Cj -酰基氨基，

R³代表苯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、环戊基或环己基，其中上述环系可任选被选自下述基团的相同或不同取代基取代最高达 3次：氟、氯、溴、碘、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟甲磺酰基、硝基、氰基、羧基、甲氧基叛基和式- CONHCH₂C ( CH₃ ) ₃、 -CONH (CH₂) ₂0H、 -CONHCH₂C₆H₅、 -CONHC₆H₅、 - OCH₂C₆H₅或- S-pC卜 C₆H₄ 所示基团，

R⁴代表式 -OR¹¹或式

所示基团，

其中

R¹¹代表氢、（d-Cj -链烯基或（d-C₄ ) -烷基，其中所述基团可任选被素、吡啶基、氰基、苯氧基、烷氧基、三氟乙基、苄基或式- NR¹⁵R"所示基团取代，

其中

R¹⁵和 R"相同或不同，并分别代表氢、苄基或甲基，

R¹²、 R¹³、 R¹⁴代表分别选自下述基团的不同取代基：氢、烷氧羰基、取代或非取代苯基、萘基、苄基、直链或支链（d- C₃ ) -烃基。

4. 权力要求 1 的通式（I ) 光学纯化合物或其可药用盐或水合物，其中

R¹代表氢或乙酰基，

R²代表被选自氟代最高达 3次的苯基、或选自下述基团的相同或不同取代基取代最高达 2次的 2-噻唑基、 4-噻唑基、 5-噻唑基、

2 -咪唑基：氟、氯、甲基、苄基、氨基、乙酰基氨基，

R³代表可任选被选自下述基团的相同或不同取代基取代最高达 3 次的笨基：氟、氯、溴、羟基、硝基、甲氧基、曱基，

R⁴代表式 -OR¹¹或式

所示基团，

其中

5. 权力要求 1-4 中任何一项的通式（I ) 光学纯化合物或其可药用盐或水合物，

其中

R²代表 2个或 3个氟原子取代的苯基，或者选自下述基团取代的 2 -噻唑基、 4-噻唑基、 5-噻唑基：氟、氯、甲基、氨基或乙酰氨基，或者选自下述基团取代的 2-咪唑基：甲基、苄基，

6. 权力要求 1 的光学纯化合物或其可药用盐或水合物，其中所述化合物选自：

1. ( R， R )-N-( 1-苯基乙基）-4-( 2-氯 -4-氟苯基）-6-甲基 -2- (2- 噻唑基） -1 , 4-二氢嘧啶- 5-甲酸酰胺

2. ( R ) -4- ( 2-氯- 4-氟苯基） -6-甲基 -2- (2-噻唑基) -1 , 4- 二氢嘧啶- 5-甲酸乙酯

3. (R) -4- ( 2 -氯- 4-氟苯基） -6-甲基 -2- (2-噻唑基) -1， 4- 二氢嘧啶- 5-甲酸三氟乙酯

4. (R, ) -N- ( 1-苯基乙基） -4- (2-氯- 4-氟苯基） -6-甲基 -²- (²,⁴，⁶-三氟苯基） -1， 4-二氢嘧啶 -5-甲酸酰胺

5. ) -4- (2-氯- 4-氟苯基）-6-甲基- 2- (2， 4, 6-三氟苯基） - 1， 4 -二氢嘧啶- 5-甲酸乙酯

6. ( S, R )-N- ( 1-苯基乙基）- 4-( 2-氯 -4-氟苯基）-6 -甲基 -2- (5- 噻唑基） -1, 4-二氢嘧啶 -5 -甲酸酰胺

7. (R) -4-（2-氯 -4-氟苯基） -6-曱基 -2- (5-噻唑基) -1, 4- 二氢嘧啶 -5-甲酸乙酯

7. 制备权力要求 1-6任一项的光学纯化合物的方法，其包括如下步驟：

1) 在加入或不加入碱或酸的情况下，在适当的惰性溶剂中，通式 ( Π )眯类或其盐

其中 R²定义同上，

与通式（ ΙΠ ) 醛

^R3~^ ( III )

其中 R³定义同上，

以及通式（ IV )反应，

CH₃COCH₂CONHCR¹²R¹³R¹⁴ ( IV )

其中 R¹²、 R¹³、 R¹⁴定义同上，

得到通式（ V ) 的化合物

或者，

在加入或不加入碱或酸的情况下，于 20-150° ( ，在适当的惰性溶剂中，通式（VI)或（νπ)

其中 R³、 R¹²、 R¹³、 R"定义同上，

与上述通式（ Π )反应

或者，

在铵盐存在下，将上述通式（III) 醛与通式（IV)化合物以及通式（VIII) 亚氨基醚反应，

其中 R²定义同上，且 ^为（^— C₄烷基。

2 )通式（ V )在适当的溶剂中进行酰基化，得通式（IX)

其中 R¹为 (d-CJ -酰基、芳酰基或芳磺酰基， R²， R³, R¹²、 R¹³、 R¹⁴定义同上，

3 )通式（ IX )在酸性或碱性条件下，适当的溶剂中进行亚硝基化，然后与醇钠 R^u0Na反应得通式（ I ) 光学纯化合物

其中 R¹为氢， R²， R³， R⁴, R¹¹定义同上，

8. 权力要求 7中化合物 CH₃COCH₂CONHCR¹²R¹³R¹⁴ ( IV )的制备方法，其包括手性伯氨 R¹²R¹³R"CNH₂与双乙烯酮或双乙烯酮丙酮加成物，在加入碱或不加入碱的条件下，于惰性溶剂中反应制备，其中 R¹²、 R¹³、 R"定义同上。

9. 药物组合物，包含权利要求 1 - 6任一项的通式（I)的光学纯化合物、其所有可能的异构体或其可药用的盐或水合物以及至少一种可药用的载体。

10. 权利要求 1 - 6任一项的通式（I)的光学纯化合物、其所有可能的异构体或其可药用的盐或水合物用于生产治疗急性或慢性病毒性疾病如急性或慢性乙型肝炎的药物的用途。