WO2008003836A1 - Utilisation de sels d'onium fonctionnalisés pour la synthèse de peptides - Google Patents

Utilisation de sels d'onium fonctionnalisés pour la synthèse de peptides Download PDF

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WO2008003836A1
WO2008003836A1 PCT/FR2006/001597 FR2006001597W WO2008003836A1 WO 2008003836 A1 WO2008003836 A1 WO 2008003836A1 FR 2006001597 W FR2006001597 W FR 2006001597W WO 2008003836 A1 WO2008003836 A1 WO 2008003836A1
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carbon atoms
representing
ntf
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PCT/FR2006/001597
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Michel Vaultier
Céline ROCHE
Saïd GMOUH
Alain Commercon
Original Assignee
Centre National De La Recherche Scientifique
Universite De Rennes 1
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C07K1/042—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers characterised by the nature of the carrier

Definitions

  • the subject of the present invention is the use of functionalized onium salts for the synthesis of peptides, in particular by reverse-path synthesis, directly or by convergent synthesis.
  • the first method involves assembling the peptides by coupling the different amino acids in solution. This approach is laborious because each step requires complex and expensive purification. Peptide synthesis on support has been developed to overcome these problems.
  • the peptides can be prepared by a linear strategy (direct or reverse pathway) or by a convergent strategy. More precisely, the convergent peptide synthesis is based on the condensation of fragments and the synthesis has been developed.
  • Solid Phase Convergent Peptide (CSPPS) [P. Lloyd Williams, F. Albericio, E. Giralt, Tetrhedron. 1993, 49, 48, 11065; K. Barlos, D. Gatos, "Fmoc Soid Phase Peptide Synthesis, A Practical Approach", Oxford University Press, 2000, Chapter 9, “Convergent Peptide Synthesis," 215] or Fragmented Condensation Solid Phase Synthesis (SPFC) [ H. Benz, Synthesis, 1993, 337; B. Riniker, A. Floresheimer, H.
  • the convergent synthesis (by fragments or blocks) of peptides is not possible without prior cleavage, and it is impossible to separate the expected supported molecules from the by-products grafted onto the resin (resulting from incomplete reactions or secondary reactions).
  • a product mixture is obtained whose final purification by HPLC (reverse phase high pressure liquid chromatography) of the peptide does not always make it possible to separate the peptides having truncated or deleted chains, as well as the diastereoisomers formed by epimerization. during the synthesis.
  • HPLC reverse phase high pressure liquid chromatography
  • the supported peptide must contain a large percentage by mass of fluorine (greater than 40% by weight ) to allow proper purification (otherwise peptide emulsions or precipitations are observed during extraction), implying that this technology is only valid for small peptides.
  • Ionic liquids (Wasserscheid P., Welton T., "Ionic Liquids in Synthesis", Wiley-VCH, 2003) are low temperature liquid salts (melting ⁇ 100 ° C). Numerous possible applications were highlighted: new solvents for 'synthesis and catalysis, catalysts in certain reactions, liquid media task-specific, etc .. They have some interesting physico-chemical properties such as high thermal stability, very low vapor pressures, great solubilization power of organic molecules as well as salts or polymers. They are low in flammability, recyclable and their solvent properties can be adjusted at will by varying the nature of the cations and anions.
  • Functionalized onium salts have properties that allow their use as soluble supports for organic synthesis, parallel synthesis and combinatorial chemistry. Indeed, they are perfectly defined entities of low molecular weight and characterized by all physicochemical methods. They are soluble in a wide range of non-functional ionic liquids then serving as a liquid matrix leading to dedicated-task ionic liquids. They are also soluble in a large number of organic solvents and insoluble in others, this solubility depending essentially on the associated anion. This makes it possible to purify them by simple washing and thus to use an excess of reagents. In addition, their high thermal stability makes it possible to eliminate the excess of reagents by distillation under vacuum. Finally, their synthesis is simple, the cost price is low and their synthesis on a large scale is possible.
  • X " represents an anion, functional or otherwise, chosen in particular from Cl “ , Br " , T,
  • R 1 representing an alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms or an aryl group comprising from 6 to 30 carbon atoms, or a perfluoroalkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, said groups alkyl or aryl being optionally functionalized, R 1 representing in particular -CHCl-CCl 3 or - ⁇ / y - NO 2, the salt of formula (I) then comprising a cation functionalized by a mixed carbonate function and corresponding to the following formula (Lj) .-
  • a + represents a cationic entity, in particular chosen from pyridinium, imidazolium, ammonium, phosphonium or sulphonium cations, cyclic or otherwise, substituted or unsubstituted, and preferably ammonium or phosphonium,
  • L represents an arm, in particular an alkyl group, linear or branched, or aralkyl or alkaryl comprising from 3 to 20 carbon atoms,
  • R represents a group chosen from the following groups:
  • R a and R b representing, independently of one another, a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, the group of formula -C (R 3 ) (R b ) - preferably representing a group -CH 2 -, -CH (Me) - or -C (Me) 2 -, a group of formula -T-Ar 1 -CH (R 0 ) -, in which:
  • - T is chosen from one of the following groups: CH 2 , O, S and NR d5 R d representing a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms,
  • Ar 1 represents an aromatic group of following formula:
  • n represents an integer equal to 0, 1, 2, 3 or 4,.
  • Re represents a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 12 carbon atoms, especially a methyl group, or an alkoxy group comprising from 1 to 12 carbon atoms, especially a methoxy, ethoxy, propyloxy, isopropyloxy or butyloxy group; , isobutyloxy or tert-butyloxy, - R c represents either a hydrogen atom or an alkyl group, linear or branched, comprising from 1 to 20 carbon atoms, or an Ar 2 aromatic group of the following formula:
  • R f represents a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 12 carbon atoms, in particular a methyl group, or an alkoxy group comprising from 1 to 12 carbon atoms, in particular a methoxy, ethoxy, propyloxy or isopropyloxy group, butyloxy, isobutyloxy or tertiobutyloxy.
  • the dedicated-task salts of formula (I) could be used as soluble supports - in peptide synthesis directly or inversely, giving results of at least one yield and purity. as effective as those obtained with state-of-the-art techniques and in the convergent peptide synthesis, giving very improved results compared to the techniques of the state of the art, which releases the convergent peptide synthesis of the limitations encountered to date.
  • dicated task salt refers to the ammonium, phosphonium and sulphonium salts, as well as all the salts resulting from the quaternization of an amine, a phosphine, an arsine, a thioether or a heterocycle containing one or more of these heteroatoms, and carrying at least one organic function F; or F'j.
  • This expression also denotes an onium salt whose cation as defined above is not functionalized but whose flag carries a function F'j.
  • This expression may also denote a salt of which Panion and the cation carry at least one organic function.
  • soluble carrier refers to a functional onium salt serving as an "anchor" for performing, in solution, successive transformations of a molecule hung by the function.
  • This anchor confers properties on the hooked molecule (and thus ultimately on the assembly formed by the anchor and the hooked molecule) which make it possible to purify easily by washing, evaporation or any other technique. This could not be done easily with volatile molecules and / or soluble in the usual solvents for example. Using this technique, excess reagents can be used, for example, as in the case of insoluble Merrifield resins.
  • a soluble carrier should by definition be soluble in a solvent or other ionic liquid.
  • a dedicated onium salt type soluble support must also be recoverable at the end of the transformations. In other words, the molecules synthesized on this support must be able to be easily unhooked. Moreover, the backbone of the soluble support must not react with the reagents used, the reactions occurring selectively on the functions attached to the base skeleton.
  • the present invention relates to the use of a dedicated-task onium salt as defined above for the synthesis of peptides comprising in particular from 2 to 30 amino acids, and preferably from 2 to 25, especially from 10 to 25. amino acids, or
  • the aforementioned L arm represents an alkyl, aralkyl or alkaryl group comprising from 3 to 20 carbon atoms, and especially comprising 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 atoms of carbon. If the arm L contains less than 3 carbon atoms, problems of stability of the reagents supported with such an arm are observed because of the proximity of the cation.
  • the present invention relates to the use as defined above, for the synthesis of peptides, azapeptides or pseudopeptides, said peptides, azapeptides or pseudopeptides comprising at least one peptide bond and / or at least one azapeptide bond and / or at least one pseudopeptide bond, and optionally comprising at least one ⁇ -hydrazino acid, ⁇ -amino acid or ⁇ -amino acid unit, in particular ⁇ -amino acid or ⁇ -cyclic or linear amino acid.
  • the ⁇ -hydrazino acids may be represented for example by the following formula: R-HN-NH- (CHR ') n -COOH, R and R' representing an alkyl or aryl or aralkyl or alaryl group comprising from 1 to 20 carbon atoms and n varying from 1 to 10.
  • the present invention relates to the use as defined above, for the grafting of at least one amino acid
  • . p representing an integer ranging from 1 to 20,
  • R 2 represents a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms and capable of forming a ring with the R 'group, the nitrogen atom bearing the R 2 group and the carbon atom bearing the group R ', said ring comprising from 3 to 20 members, in particular 5 or 6 members, and R 3 representing a hydrogen atom or a protecting group of the terminal acid function of the amino acid, and being chosen from one of the following groups: a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms , in particular methyl or tert-butyl, a benzyl group or an Si (OR h ) 3 group , R h representing a linear or branched alkyl group of 1 to 20 carbon atoms, and especially representing a tert-butyl group, to obtain a compound of the following formula :, X ⁇ '
  • R 3 it may represent H or a protecting group of the terminal acid function of the amino acid.
  • R 3 represents H in the case where the amino acid is a ⁇ -amino acid or a higher homolog ( ⁇ , ⁇ , etc.) in which the nucleophilia of the nitrogen atom is sufficient.
  • R 3 preferably represents a protecting group, due to the nucleophilia of the nitrogen and the insufficient solubility of the unesterified ⁇ -amino acids.
  • Amino acids being bifunctional compounds two pathways can be envisaged for peptide synthesis: the direct C -> N pathway (the amino acid is grafted to the support by its acid function and its amine function is engaged in the peptide coupling reaction) and the N-C reverse pathway (the amino acid is grafted to the support by its amino function via a carbamate function and its acid function is engaged in the peptide coupling reaction).
  • the present invention also relates to the use as defined above, of a, ⁇ ⁇ , for the synthesis
  • R 1 represents in particular a group -CHCl-CCl 3 or - / y -NO 2;
  • R represents a group of formula -C (Ra) (R b ) -, Ra and Rb represent independently of one another a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, the group of formula -C (R 8 ) (Rb) - preferably representing a group -CH 2 -, -CH ( Me) - or -C (Me) 2 -.
  • the present invention relates to the use as defined above, a dedicated task salt of formula A-OH + -LR, XT ", for peptide synthesis by direct route, wherein :
  • R represents a group of formula -T-Ar 1 -CH (R c ) -, in which:
  • T is chosen from one of the following groups: CH 2 , O, S and NRd, especially O, where R d represents a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, Ar 1 represents an aromatic group of following formula:
  • n representing a number equal to 0, 1 or 2, 3, or 4
  • Re represents a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, in particular a methyl group, or an alkoxy group comprising from 1 to 20 carbon atoms, in particular a methoxy, ethoxy, propyloxy, isopropyloxy or butyloxy group; , isobutyloxy or tertiobutyloxy,
  • R 0 represents either a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, or an Ar 2 aromatic group of the following formula:
  • R f representing a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, in particular a methyl group, or an alkoxy group comprising from 1 to 20 carbon atoms, especially a methoxy, ethoxy, propyloxy or isopropyloxy group, butyloxy, isobutyloxy or tertiobutyloxy.
  • the present invention also relates to the use as defined above, for the convergent peptide synthesis, of a dedicated task salt A + -LR-OY, X " of formula (I) as defined above. , and a dedicated task salt of formula Aj + -Li-Ri-OH, Xf, the elements A + , L, R, Y and X ⁇ being as defined above, and the elements Aj + , Lj , Rj and Xf having the definitions given above respectively about A + , L, R and XT, A + -LR and A + -Lj-Rj may be the same or different.
  • the present invention relates to the use as defined above, characterized in that A + is selected from quaternary ammonium cations, cyclic or otherwise.
  • L represents a linear alkyl chain comprising 4 or 5 carbon atoms.
  • the present invention also relates to the use as defined above, characterized in that the anion X ⁇ is PF 6 " or NTf 2 " .
  • the present invention also relates to the use as defined above, for reverse peptide synthesis, comprising the use of a dedicated-task salt of formula (Ii) as defined above, the cation corresponding to one of the following formulas:
  • the present invention also relates to the use as defined above, for the direct peptide synthesis, comprising the use of a dedicated-task salt of formula (I D ) as defined above, the cation corresponding to to the following formula:
  • the present invention also relates to the use as defined above, for convergent peptide synthesis, comprising the use of two dedicated-task salts of formulas (I) as defined above, the cations corresponding to the following formulas:
  • the present invention also relates to the use as defined above, characterized in that the dedicated task salt is:
  • a conventional organic solvent such as dichloromethane, tetrahydrofuran, dioxane, acetonitrile, propionitrile, dimethylformamide, dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, acetone, toluene, chlorobenzene, dichlorobenzene, nitromethane, nitroethane, or a mixture of these solvents,
  • an ionic liquid matrix preferably of triméthylbutylammonium triflimide or [tmba] [NTf 2], the triflrmidure of l-ethyl-3- methylimidazolium and [emim] [NTf 2], the s-butyl triflimide 3-methylimidazolium or [bmim] [NTf 2], or any other combination of onium cation and liquid anion at a lower temperature than or equal to 100 0 C 5 preferably 50 ° C,
  • organic solvent / ionic liquid mixture may, for example, make it possible to reduce the viscosity of the reaction medium.
  • the present invention relates to the use as defined above, for the direct peptide synthesis, characterized in that the dedicated task salt is in solution in an organic solvent.
  • Preferred organic solvents include aprotic dipolar solvents in general, and especially acetonitrile, propionitrile, DMF, DMSO, DMPU, sulfolane, nitromethane, nitroethane and nitrobenzene.
  • the present invention also relates to the use as defined above, for the direct synthesis of peptides, characterized in that the salt with a dedicated task is solubilized and immobilized in an ionic liquid matrix A 2 + , X 2 " , the cation A 2 + being chosen from imidazolium, pyridinium, substituted or unsubstituted cations, ammonium, phosphonium, sulfonium or any other optionally functionalized onium cation, and the anion X 2 " being chosen from Cl “ , Br “ , I “ , F “ , BF 4 “ , CF 3 SO 3 - , N (SO 2 CF 3 ) 2 - , PF 6 " ,
  • the present invention relates to the use as defined above, for the synthesis of peptides by the reverse route, characterized in that the dedicated task salt is in solution in an organic solvent.
  • Preferred organic solvents include aprotic dipolar solvents in general, and especially acetonitrile, propionitrile, DMF, DMPU, nitromethane, nitroethane and nitrobenzene.
  • the present invention relates to the use as defined above, for the synthesis of peptides by the reverse route, characterized in that the dedicated task salt is solubilized and immobilized in an ionic liquid matrix A 2 + , X 2 " , the cation A 2 being chosen from imidazolium, pyridinium, substituted or unsubstituted cations, ammonium, phosphonium, sulphonium or any other optionally functionalized onium cation, and the anion X 2 " being chosen from Cl “ , Br “ , I “ , F “ , BF 4 ' , CF 3 SO 3 “ , N (SO 2 CF 3 ) 2 " , mp 6 " ,
  • the present invention relates to the use as defined above, for the synthesis of peptides by the convergent route, characterized in that the dedicated-task salts are in solution in an organic solvent.
  • organic solvents include aprotic dipolar solvents in general, and especially acetonitrile, propionitrile, DMF, DMPU, nitromethane, nitroethane and nitrobenzene.
  • the present invention relates to the use as defined above, for the synthesis of peptides by the convergent route, characterized in that the dedicated-task salts are solubilized and immobilized in an ionic liquid matrix A 2 + , X 2 " , the cation A 2 + being chosen from imidazolium cations, pyridinium, substituted or unsubstituted, ammonium, phosphonium, sulfonium or any other onium cation optionally functionalized, and the anion X 2 ' being chosen from Cl “ , Br “ , I “ , F “ , BF 4 " , CF 3 SO 3 - , N (SO 2 CF 3 ) 2 - , PF 6 " ,
  • the present invention also relates to a process for synthesizing peptides directly (C -> N) on a support as defined above, for the preparation of a peptide of formula (II) below
  • - i is an integer ranging from 1 to q
  • q is an integer ranging from 1 to 30, preferably from 1 to 20,
  • pi is an integer ranging from 1 to 20
  • R'i represents an amino acid residue as defined above
  • R 2 represents H or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms and capable of forming a ring with the R 'group, the nitrogen atom carrying the R group; 2 and the carbon atom bearing the group R'i, said ring comprising from 3 to 20 members, in particular 5 or 6 members, said process comprising the following steps: a) a step of grafting an amino acid HOOC- [CH (R 'OJp 1 -N (Ri 2 ) -GP,
  • R 'i, R 1 2 and P 1 are as defined above and GP representing a protecting group for the amine function, with the exception of Boc, including Fmoc, Cbz, Z, SO 2 R, R representing a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, a substituted or unsubstituted aryl group, a perfluoroalkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, on a soluble support of the following formula (I D ): A + -LR- OH, XT, A + , L, R and X ⁇ being as defined above,
  • the peptides of formula (II) can also be represented as follows:
  • the present invention also relates to a process for synthesizing peptides by the reverse (N -> C) route on a support as defined above, for the preparation of a peptide of formula (IV) below:
  • i is an integer ranging from 1 to q
  • q is an integer ranging from 1 to 30, preferably from 1 to 20,
  • pi is an integer ranging from 1 to 20
  • R'i represents an amino acid residue as defined above
  • R 2 represents H or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms and capable of forming a ring with the R '1 group, the nitrogen atom bearing the Ri 2 group and the carbon carrying the R 'group, said ring comprising from 3 to 20 members, in particular 5 or 6 members
  • R 3 represents a hydrogen atom or a group protecting the terminal acid function of the amino acid, and being chosen from one of the following groups: a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms; carbon, in particular methyl or tert-butyl, a benzyl group or an Si (OR h ) 3 group , R h representing a linear or branched alkyl group of 1 to 20 carbon atoms, and in particular representing a tert-butyl group, said process comprising the following steps :
  • R 1 being as defined above, and in particular representing -CHCl-CCl 3 or
  • peptides of formula (IV) can also be represented as follows:
  • the present invention also relates to a process for synthesizing peptides by a convergent route on a support as defined above, for the preparation of a peptide of formula (VI) below:
  • i is an integer ranging from 1 to q
  • q is an integer ranging from 1 to 30, preferably from 1 to 20,
  • pi is an integer ranging from 1 to 20
  • R'j represents an amino acid residue
  • R 2 represents H or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms and capable of forming a ring with the R '1 group, the nitrogen atom carrying the R 2 group and the carbon carrying the R 'group, said ring comprising from 3 to 20 members, in particular 5 or 6 members,
  • s is an integer ranging from 1 to r
  • r is an integer ranging from 1 to 20,
  • t s is an integer ranging from 1 to 20,
  • R s 2 represents H or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms and capable of forming a ring with the R " s group , the nitrogen atom carrying the R s 2 group and the a carbon atom bearing the group R " s , said ring comprising from 3 to 20 members, in particular 5 or 6 members,
  • AD, L D , R D and X D having the same definition as that previously given for A + , L, R and XT,
  • a D - L D and R D Ai - LI-R I can be identical or different, and X D "and Xf can be identical or different, s, r, R s 2, t and R s' s being such that defined above,
  • the peptide synthesis method according to the invention is characterized in that the supports are:
  • a conventional organic solvent such as dichloromethane, tetrahydrofuran, dioxane, acetonitrile, propionitrile, dimethylformamide, dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, acetone, toluene, chlorobenzene, dichlorobenzene, nitromethane, nitroethane, or a mixture of these solvents,
  • ionic liquid matrix preferably trimethylbutylammonium triflimide or [tmba] [NTf 2 ], tri-1-ethyl-3-methylimidazolium triflimide or [ernim] [NTf 2 ], tri-1-butyl triflimide 3-methylimidazolium or [bmim] [NTf 2 ] or any other combination of onium cation and liquid anion at a temperature less than or equal to 100 0 C, preferably 50 0 C,
  • the invention also relates to a process for the synthesis of peptides of the formulas shown above, in which the terminal acid group is esterified, in other words peptides in which the -COOH group is replaced by -COOR 3 , R 3 having in particular, the following meanings: a protecting group of the terminal acid function of the amino acid, and being chosen from one of the following groups: a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, in particular methyl or tert-butyl, a benzyl group or an Si (OR h ) 3 group , R h representing a linear or branched alkyl group of 1 to 20 carbon atoms, and especially representing a tert-butyl group.
  • the present invention also relates to compounds of formula (I-bis) below:
  • R 1 representing in particular -CHCl-CCl 3 or - or a group of formula (A ') following:
  • bone is an integer varying from 1 to r, or is an integer ranging from 1 to 30, preferably 1 to 20, ot s is an integer ranging from 1 to 20, where R "s is an amino acid residue, where R s represents H or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to
  • oi is an integer ranging from 1 to q, where q is an integer ranging from 1 to 30, preferably from 1 to 20, where pi is an integer ranging from 1 to 20, where R 'is a amino acid residue, wherein R 2 represents H or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to
  • R 3 represents a hydrogen atom or a protecting group of the terminal acid function of the amino acid, and being chosen from one of the following groups: a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, in particular methyl or tert-butyl, a benzyl group or an Si group; (ORh) 3 , Rh representing a linear or branched alkyl group of 1 to 20 carbon atoms, and in particular representing a tert-butyl group,
  • os, r, t s , R " s and R s 2 are as defined above in the formula (A '), and oi, q, pi, R'i and Rj 2 are as defined above in the formula (B '),
  • Xp ⁇ represents an anion, functional or not, chosen in particular from Cl “ , Br “ , F, BF 4 -, CF 3 SO 3 " , N (SO 2 CF 3 ) 2 " , PF 6 “ , CH 3 CO 2 “ , CF 3 CO 2 -, RaCO 2 " , R F CO 2 “ , RaSO 3 “ , RFSO 3 “ , R 0 SO 4 “ , (R a ) 3-x PO 4 x " , x represents an integer equal to at 1, 2 or 3, AlCl 4 " , SnCl 3 " , ZnCl 3 " , R 3 representing an alkyl group comprising 1 to 20 carbon atoms, Rp representing a perfluoroalkyl group comprising from
  • AD + represents a cationic entity, in particular chosen from pyridinium, imidazolium, ammonium, phosphonium or sulfonium cations, cyclic or otherwise, substituted or unsubstituted, and preferably ammonium or phosphonium
  • L represents an arm , in particular an alkyl group, linear or branched, or aralkyl or alkaryl comprising from 3 to 20 carbon atoms
  • R represents a group chosen from the following groups:
  • - T is chosen from one of the following groups: CH 2 , O, S and NR d , R d representing an atom of hydrogen or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms,
  • Ar 1 represents an aromatic group of following formula:
  • R e represents an alkyl group, linear or branched, comprising from 1 to 12 carbon atoms, in particular a methyl group, or an alkoxy group comprising from 1 to 12 carbon atoms, in particular a methoxy, ethoxy, propyloxy, isopropyloxy group, butyloxy, isobutyloxy or tertiobutyloxy,
  • R 0 represents either a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 carbon atoms, or an Ar 2 aromatic group of the following formula:
  • R f represents a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 12 carbon atoms, in particular a methyl group, or an alkoxy group comprising from 1 to 12 carbon atoms, in particular a methoxy, ethoxy, propyloxy or isopropyloxy group, butyloxy, isobutyloxy or tertiobutyloxy,
  • D + -L D -R D and A + -LR may be the same or different, and X D " and X " may be the same or different, the following compounds being excluded:
  • the present invention also relates to compounds as defined above, corresponding to the following formula (I):
  • salt of formula (I) then comprising a cation functionalized with an alcohol function and corresponding to the following formula (I D ): A + -LR-OH, X " , or a -COOR 1 group, R 1 being as defined above, the salt of formula (I) then comprising a cation functionalized by a mixed carbonate function and corresponding to the following formula (I 1 ):
  • a - Primary alcohols a) single carbon chain arms
  • This synthesis includes the reduction of a ketone to obtain a chloroalcohol, the quaternization of Me 3 N and finally the metathesis of anion by LiNTf 2 .
  • MeMgI Cl 95% Two lanes are used depending on the anions targeted:
  • the objective is to create an analogue of a ter-butyloxycarbonyl group Boc, stable against bases, nucleophiles, weak acids, oxidants and weak reducing agents.
  • Dedicated task salt [HMPeTMA] [X] was therefore used to bring the reaction conditions to the point.
  • the nature of the support was then diversified.
  • the carbonate forms quantitatively in 5 to 10 hours. The transformation is therefore faster in the ionic liquids.
  • the grafting of the isonipecotic acid was carried out on the [HPrTMA] [NTf 2 ] or [HBuTMA] [NTf 2 ] salts in 0.95mol / L solution in the [taba] [NTf 2 ].
  • the reactions are carried out without addition of organic solvent because the viscosity of the medium allows good stirring.
  • the carbamate [HPrTMA-Aiso] [NTf 2 ] ( 2nd step) is obtained in 8 hours but a mixture of 40% alcohol [HPrTMA] [NTf 2 ] and 60% carbamate [HPrTMA-AiSo] [NTf 2 ] is obtained. Similarly, the carbamate [HBuTMA-Aiso] [NTf 2 ] ( 2nd step) is in about 18 hours (as in organic solvents). A mixture of 30% alcohol [HBuTMA] [NTf 2 ] and 70% carbamate [HBuTMA-Aiso] [NTf 2 ] is obtained.
  • Ionic liquids are hygroscopic. However, the intermediate carbonate is not stable to moisture, which probably explains the high proportion of alcohol obtained. It may be necessary to dry these binary ionic liquids (Duty Salt + Ionic Liquid) to improve conversions. The grafting of the first amino acid was not continued in the ionic liquids, given the difficulties encountered. We preferred to carry out this operation in a molecular solvent and then dissolve these supported amino acids in the ionic liquids to test the peptide coupling reactions.
  • step 1 The conditions used for the grafting of the isonipecotic acid (step 1: 1.9 eq of paranitrophenyl chloroformate, 3.0 eq of pyridine in acetonitrile - step 2: 3.5 eq of amino acid and pyridine in DMF) were tested by engaging an ⁇ -amino acid (alanine) but the conversion of the carbamate formation step did not exceed 40%.
  • NMP N-methylmorpholine
  • glycine is one of the least soluble amino acids and its amine is one of the least nucleophilic, grafting of other ⁇ -amino acids should not be a problem.
  • the treatment of the reaction medium consists in evaporating the DMF from the reaction medium.
  • the residue obtained is then washed with ether and then dissolved in DCM.
  • the organic phase is then washed with water and then with an aqueous solution of HPF 6 thus avoiding the problem of anion metathesis.
  • the treatment developed for the reaction with the methylenesters can be reproduced with the tert-butyl esters.
  • the aqueous washes acids made during processing to remove excess amino ester does not involve cleavage of the tert-butyl ester, although it is sensitive to acidic conditions.
  • [HMPhBTMA-AIa-OSiI] [PF 6 ] is quantitative in 3 hours according to the 1 H NMR. In this case, the product is not contaminated with free support [HMPhBTMA-AIa-OSiI] [PF 6 ] .
  • the grafting is total.
  • the best purification technique for the reactions carried out in acetonitrile is, after removal of the solvent, to carry out a column chromatography of neutral alumina with DCM as eluent which makes it possible first of all to eliminate all that is not stick to the spot-onium salt and then elute the salts with 1% to 2% DCM / MeOH.
  • the reaction was then diversified to other amino esters such as Ala-OMe, Leu-OMe, VaI-OMe and Phe-OMe: [HMPhBTMA-Aiso-Ala-OMe] [NTf 2 ], [HMPhBTMA-Aiso-Leu-OMe] [NTf 2 ],
  • reaction time number of equivalents of Me 3 SiOK, drying of the support
  • This cleavage causes a drop in yield.
  • a simple filtration on celite is sufficient to remove substrates not attached to the support and allows to continue peptide synthesis in good conditions.
  • methyl esters are cleaved under relatively hard conditions (Me 3 SiO 2) which promote racemization. This is why the use of other esters has been considered. Cleavage of [HMPhBTMA-Ala-OtBu] [PF 6 ] with either aqueous or anhydrous HCl or HPF 6 leads to partial or complete cleavage of the carbamate bond.
  • the steps of grafting, peptide coupling and cleavage of the protective group of the terminal acid function are in point, and the synthesis can be continued (see diagram below). ).
  • the tripeptides [HMPhBTMA-Aiso-Leu-Gly-OMe] [PF 6 ], [HMPhBTMA-Aiso-Leu-Phe-OMe] [PF 6 ], [HMPhBTMA-Aiso-Leu-Val-OMe] [PF 6 ], [HMPhBTMA-Aiso-Phe-Leu-OMe] [NTf 2 ] were thus synthesized.
  • the objective is to test the feasibility of peptide synthesis supported on ionic liquid or task-specific onium salt by grafting the amino acid by its acid function to the support and by carrying out the coupling reactions on the amine function thus supported. Synthesis has been considered with the Fmoc strategy which is the most commonly used.
  • ** is either a binary ionic liquid, i.e. a solution of a task-specific onium salt bearing a hydroxyl function in an ionic liquid matrix, or a solution of a a task-specific onium salt bearing a hydroxyl function in a molecular solvent.
  • a first amino acid is grafted to the support by esterification.
  • the terminal amine function is then deprotected before being engaged in the peptide coupling reaction with a second amino acid.
  • a final cleavage step makes it possible to release the peptide formed and to regenerate the support.
  • the treatment is easy: most of the urea is removed by filtration. The remaining traces of urea and the excess of amino acid are removed by washing with ether.
  • the supported amino acids [FmocAla-HHeTMA] [NTf 2 ] and [FmocAla-HMPhBTMA] [NTf 2 ] are then dissolved in DCM and are extracted with twice one-tenth volume of 1N aqueous HCl solution, which eliminates traces. of remaining DMAPs.
  • the Fmoc group is cleaved with a 1/5 piperidine / DMF mixture in 15 minutes.
  • Deprotection of [FmOcAIa-HHeTMA] [NTf 2 ] and [FmocAla-HMPhBTMA] [NTf 2 ] is effective in anhydrous acetonitrile.
  • the treatment consists in evaporating the solvent and then extracting the residue obtained with ether in order to eliminate the Fmoc degradation products. The yield is greater than 90%.
  • This step of deprotection of the terminal amine function of [FmocAla-HHeTMA] [NTf 2 ] or [FmocAla-HMPhBTMA] [NTf 2 ] is represented as follows:
  • Fmoc-leucine was selected for the study of peptide coupling because this amino acid (as well as Fmoc-alanine) is the one that poses the least problems during the reaction (excellent yields, no protection of the side chain, formation diketopiperazine less than glycine and proline).
  • the standard solid support reaction conditions were applied (1.5 equivalents of DCC, HOBt, TEA and Fmoc-leucine in a DCM / DMF mixture: 1/1, two hours of reaction at room temperature) in acetonitrile. The conversion is total according to the NMR.
  • the peptide coupling step between [Ala-HHeTMA] [NTf 2 ] or [Ala-HMPhBTMA] [NTf 2 ] and Fmoc-leucine is represented as follows:
  • the cleavage by diketopiperazine formation at the deprotected supported dipeptide stage is a recurrent problem observed during the synthesis of peptides by Fmoc technology on Wang resin (analogous to [HMPhBTMA] [NTf 2 ]).
  • the observed cleavage is due to the same phenomenon.
  • This reaction consists of the hucleophilic attack of the terminal amine on the ester function for grafting (see diagram below). It causes not only a fall in the yield of the synthesis, but also the appearance of peptide sequences comprising amino acid deletions by grafting onto the support which has been regenerated.
  • the diagram below represents the mechanism of formation of diketopiperazine DKP.
  • AIa-HMPhBTMA] [NTf 2 ] peptide coupling with Fmoc-leucine, deprotection of [Fmoc-Leu-AIa-HMPhB TMA] [NTf 2 ]) was also tested with the support ([HMPhBTMA] [NTf 2 ] / four equivalents of ionic liquid [tmba] [NTf 2 ]) while preserving the same experimental protocols (addition of acetonitrile to guarantee good agitation, identical treatments). The yields are comparable to those observed for handling in conventional organic solvents.
  • the objective was to create a dedicated task salt (analogous to existing solid supports) for which cleavage by DKP formation at the deprotected supported dipeptide stage is negligible.
  • the support Under the reaction and treatment conditions developed for onium salt synthesis, the support must be insoluble in water (DCM / water extractions); stable in an aqueous acidic medium (acid aqueous washes after the peptide coupling reactions) and stable in a basic medium (use of piperidine, TEA, DMAP).
  • the grafting of the first amino acid is carried out in several stages.
  • benzhydryl alcohol of [HTMPPTMA] [Br] is quantitatively substituted by chlorine by reaction with 1.5 equivalents of thionyl chloride in 20 minutes in anhydrous acetonitrile.
  • the Fmoc-amino acid is grafted by esterification in 30 minutes:
  • the counter-ion of the support is either a bromide (initial anion of the onium salt) or a chloride (metathesis during the chlorination step).
  • a bromide initial anion of the onium salt
  • a chloride metalathesis during the chlorination step.
  • [FmOC-AA 1 -HTMPTTMA] [Br or Cl] is not soluble in water, which is essential for the treatments previously developed.
  • a metathesis reaction of the counter-ion was nevertheless envisaged, on the one hand to know the exact nature of this anion, on the other hand to avoid retaining nucleophilic counter-ions which could be at the origin secondary reactions.
  • the anion hexafluorophosphate was chosen because it is possible to carry out washes with an aqueous solution of HPF 6 without fear of anion exchange reactions.
  • Metathesis of the counterion is then carried out by KPF6 in two hours in acetonitrile:
  • the terminal amine function can then be deprotected by piperidine under the same conditions as those developed for the other dedicated-task salts:
  • the average yield on these four stages is about 85%.
  • the degree of grafting is quantitative: there is no free [HTMPTTMA] [PF 6 ] left. [HA-HTMPPTMA] [PF 6 ], [GIy-HTMPPTMA] [PF 6 ], [He-HTMPPTMA] [PF 6 ], [Leu-HTMPPTMA] [PF 6 ], [Phe-HTMPPTMA] [PF 6 ] and [VaI-HTMPPTMA] [PF 6 ] were thus synthesized.
  • AA 1 Val, Leu, GIy, Phe, lie, AIa
  • AA 2 AIa, GIy, Ile, Leu, Val
  • the treatment is the same as that developed for the reverse route:
  • the reaction medium is filtered. After evaporation of the acetonitrile, the residue is dissolved in DCM. This phase is washed with water and then with an aqueous solution of HPF 6 . After drying and evaporation, the residue is then washed with ether.
  • [Fmoc-Ala-Phe-HTMPPTMA] [PF 6 ] [Fmoc-Ala-Val-
  • HBTU coupling reagent very often used in peptide synthesis, was therefore used (1.5 equivalents, all, PF ⁇ other conditions otherwise preserved) with success. Elimination of excess reagent and products from degradation is complete during treatment (ether washings and HBTU acid aqueous extraction), and is even easier than total elimination of ureas derived from carbodiimides (IUDs, DCUs) by the previous method, especially for syntheses on large quantities.
  • IUDs, DCUs carbodiimides
  • the time for the peptide coupling reaction is 30 minutes, and the conversions of the coupling reactions are always quantitative.
  • the next step is the deprotection of the terminal amine function.
  • the lifetime of the deprotected supported dipeptide must be minimized and initiated as soon as possible in the next peptide coupling reaction.
  • the Fmoc group is cleaved with a 1/5 MeCN / piperidine mixture, followed by washes with an aqueous solution of HPF 6 : 5% of DE-P are obtained.
  • Marfey has described a method which makes it possible not only to determine the rate of racemization during the grafting of the first amino acid on the support, but also to study the racemization during peptide synthesis.
  • the principle is as follows: The amino acid to be analyzed reacts with the Marfey reagent in the presence of base to form the corresponding diastereoisomer which strongly absorbs UV at 340 nm (see diagram below). This is injected in reverse phase HPLC.
  • the retention time of the LL diastereoisomer is lower than that of the DL: the intramolecular interactions by H bonds are stronger for the latter diastereoisomer, which makes it more hydrophobic, it therefore interacts more strongly with the HPLC column and therefore its retention time is higher.
  • This method has the advantage of being sensitive (the formed chromophore absorbs a lot of UV, and only unreacted Marfey reagent is likely to interfere with this wavelength), effective (the Marfey reagent is very
  • the diagram below represents the geffage of the chromophore by reaction between V amino acid to be analyzed and the reagent of Marfey: Marfey reagent FDAA diastereomer LL diastereomer DL L-AA-DNPA D-AA-DNPA
  • the Fmoc-L-alanine was grafted to the support [HTMPPTMA] [PF 6 ] under the previously described conditions, then the amine function was deprotected and the amino acid was cleaved from the dedicated task salt.
  • the diastereoisomer was synthesized by reaction between the released alanine and the FDAA reagent according to the conditions described by Marfey, then it was injected in HPLC under conditions C (see below - experimental part). 1.3% of D-AIa-DNPA are obtained, which is of the order of the margin of error of 1.5%: the racemization seems to be negligible during the grafting step.
  • L-Leu-L-AIa-DNPA The retention time of L-Leu-L-AIa-DNPA is much higher than that of L-AIa-DNPA, which is why it was necessary to adapt the elution conditions (eluent 15/85: acetonitrile / water for AIa-DNPA against 20/80: acetonitrile / water for Leu-AIa-DNP A).
  • eluent 15/85 acetonitrile / water for AIa-DNPA against 20/80: acetonitrile / water for Leu-AIa-DNP A
  • the peak of D-Leu-L-AIa-DNP A is not observed.
  • the tripeptides D-Val-L-Leu-L-Ala and L-Val-D-Leu-L-Ala were also synthesized on [HTMPPTMA] [PF 6 ], grafted onto the FDAA after cleavage of the support and injected into HPLC. .
  • the reference retention times are 19.1 min for D-Val-L-Leu-L-Al-DNPA, which is not visible on the L-Val-L-Leu-L-Ala-DNPA spectra.
  • Solid support synthesis by linear strategy is often poorly suited to the production of long peptides: the final peptide is contaminated by peptides whose chain contains amino acid deletions, and purification is often problematic.
  • the diagram represents the principle of convergent synthesis on solid phase:
  • SASRIN resin for example
  • SASRIN resin for example
  • Each fragment can be purified and characterized individually.
  • the introduction of the first fragment can be carried out by synthesizing it by linear synthesis on the resin or by grafting it directly (the advantage is that the fragment has been previously purified but in general the yields of fragment grafting reactions on a resin are low).
  • Convergent synthesis may also consist of reacting together two supported fragments. This is not possible from fragments bound to solid supports because these fragments are attached to separate beads and the probability that they meet is close to zero.
  • Suzuki coupling biaryl synthesis between an aryl iodide and a boronic acid each supported on a monomethoxypoly (ethylene glycol) was carried out in solution (KD Janda et al., Chem Comm 2003, 480-481) with yields ranging from 72 to 95% with purities ranging from 50 to 95%. HPLC purification of the impure products proved difficult. Another problem is related to the very low specific charge of these media due to their large molecular weight. The quantities of products involved are then homeopathic.
  • B-Convergent synthesis supported on onium salt The peptide synthesis on ammonium salt is carried out under homogeneous conditions. Convergent syntheses can thus be carried out by coupling in solution peptides supported on onium salts that have been synthesized one by reverse route, the other by direct route. Two supported tripeptides were thus coupled, thus forming a hexapeptide. The reaction was carried out with 1.0 equivalent of each supported peptide; 1.5 equivalents of DCC, HOBt and TEA then left overnight at room temperature.
  • the pursuit of the convergent synthesis is conceivable by selectively cleaving one of the two supports to obtain the monosupported peptide, which can then be coupled with another appropriately protected supported peptide, this making it possible to extend the chain.
  • the stability of the carbamate function for grafting amino acid to the [HMPhBTMA-Aiso-Leu-Val] [PF 6 ] support was tested under the ester function cleavage conditions developed for SOTS [Val-Leu- Al-CTMPTTMA] [PF 6 ] used for direct synthesis (0.01 eq of HPF 6 in refluxing methanol).
  • the carbamate does not cleave under these conditions.
  • Bruker AC300P high-field spectrometer with automatically tunable multi-channel BBO ATMA autosampler and probe (300.1 MHz for proton, 75.5 MHz for carbon 13, 282.4 MHz for fluorine 19 and 121.5 MHz for phosphorus 31).
  • Bruker AVANCE 500 high-field spectrometer with triple 5mm multiline TBI probe 500 MHz for the proton, 125 MHz for the 13 carbon).
  • Coupling constants are expressed in Hertz (Hz). The following abbreviations have been used to describe the multiplicity of signals: s singlet, d doublet, t triplet, q quadruplet, m multiplet.
  • VARIAN MAT 311 high-resolution dual focus mass spectrometer (NIER-JOHNSON reverse BE geometry) of the Western Regional Center for Physical Measurements.
  • the energy of the beam is 70 eV
  • the ion acceleration voltage is 3000 V.
  • Source LSIMS Liquid Secondary Ion Mass Spectrometry
  • the high and low resolution mass spectra were made in ionization
  • LSIMS in positive mode using a cesium gun.
  • M-nitrobenzyl alcohol was used as a matrix.
  • the ions are accelerated with a voltage of 8000 V.
  • the determination of the precise masses is carried out by scanning the electric field using PEG ions as internal reference.
  • Electrospray Source ESI
  • Conditions B for the peptides supported on [HTMPTTMA] [PF 6 ]: 70/30 mixture: acetonitrile / water containing 1.1% acetic acid and 20 mmol.L -1 ammonium acetate. , 75 mL / min UV detection at 230 nm
  • Conditions C for the amino acid racemization study: 15/85 mixture: acetonitrile / water containing 1.1% acetic acid and 20 mmol.L " 1 of ammonium acetate. Flow rate of 1.5 mL / min. UV detection at 340nm.
  • the anhydrous ether and THF are distilled under argon on sodium / benzophenone.
  • the anhydrous DCM and isopropanol are distilled under argon on CaH 2 .
  • the concentrations of the SOTS solutions in molecular solvents are 0.1 mol / L.
  • the purity of the SOTS is greater than 95% according to the NMR spectra.
  • LiNTf 2 are dissolved in a minimum of water and then the two solutions are mixed. The medium is stirred for one hour at room temperature (RT). The expected salt is oily and decanted at the bottom of the balloon. Dichloromethane is added to the reaction medium.
  • the aqueous and organic phases are separated.
  • the organic phase is dried over sodium sulphate.
  • the mixture is filtered.
  • the dichloromethane is evaporated.
  • HTMPPTMA (hydroxy-p-tolyl-methyl) -phenoxy] -pentyl ⁇ trimethylammonium [HTMPPTMA] [Br].
  • [HTMPPTMA] [NTf 2 ] is soluble in DCM. The yield is 90%. * * Yellow viscous oil.
  • Step 1 30min.
  • Step 2 24h.
  • the mass yield is 70%.
  • Step 1 30min.
  • Step 2 24h.
  • the mass yield is 92%.
  • Step 1 18h.
  • Step 2 96h.
  • the mass yield is 70%.
  • Step 1 20min.
  • Step 2 24h.
  • the mass yield is 95%.
  • Step 1 10min.
  • Step 2 3h.
  • Step 1 10min. Step 2: 3h. The yield is 95%.
  • Step 1 10min.
  • Step 2 3h.
  • the yield is 88%.
  • Step 1 10min.
  • Step 2 3h.
  • the mass yield is 84%.
  • Step 1 10min.
  • Step 2 3h.
  • TEA carbodiimide
  • HOBt aminoester
  • the reaction medium is filtered (DCU slightly soluble in acetonitrile) and then the acetonitrile is evaporated.
  • the yield is 32% (partial loss of [HBuTMA-Aiso-Gly-OMe] [NTf 2 ] during aqueous washes)
  • the yield is 46% (partial loss of [HHeTMA-Aiso-Gly-OMe] [NTf 2 ] during aqueous washes)
  • the yield is 97%.
  • the yield is 95%.
  • the yield is 80%.
  • the yield is 50%.
  • the supported peptide having the terminal amine protected by an Fmoc group is dissolved in acetonitrile and then piperidine (10 to 20% by volume) is added.
  • the medium is stirred for 15 minutes at RT before evaporating the solvents.
  • the residue is washed with ether.
  • the yield is 97%.

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Abstract

L'invention a pour objet l'utilisation d'un sel à tâche dédiée de formule (I) : A+-L-R-OY, X- comme support soluble pour la synthèse de peptides, dans laquelle : • X- représente un anion, fonctionnel ou non, • Y représente soit un atome d'hydrogène, soit un groupe -COOR1, R1 représentant notamment un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, • A+ représente une entité cationique, • L représente un bras, notamment un groupe alkyle de 3 à 20 atomes de carbone, • R représente notamment un groupe de formule -C(Ra)(Rb)-, Ra et Rb représentant indépendamment l'un de l'autre notamment un hydrogène ou un groupe alkyle, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone.

Description

UTILISATION DE SELS D'ONIUM FONCTIONNALISÉS POUR LA
SYNTHÈSE DE PEPTIDES
La présente invention a pour objet l'utilisation de sels d'onium fonctionnalisés pour la synthèse de peptides, notamment par synthèse en voie inverse, en voie directe ou par synthèse convergente.
Deux techniques pour la synthèse de peptides peuvent être mises en œuvre : la synthèse en solution non supportée et la synthèse sur supports. La première méthode consiste à assembler les peptides par couplage des différents acides aminés en solution. Cette approche est laborieuse car chaque étape nécessite une purification complexe et coûteuse. La synthèse peptidique sur support a donc été développée pour pallier ces problèmes.
En 1963, Merrifield a introduit la synthèse peptidique sur support solide [SPPS (R. B. Merrifield, J Am. Chem. Soc, 1963, 85, 2149)]. Quatre étapes sont associées à cette méthodologie : greffage d'un substrat sur une résine ; modification de la structure greffée ; décrochage de la molécule synthétisée de son support et analyse et purification éventuelle de la molécule. De nombreux avantages sont associés à cette technique [S. R. Wilson, A. W. Czarnik, "Combinatorial Chemistry: Synthesis and Application", John Wiley and Sons New York, 1997 ; I. M. Charken, K. D. Janda, "Molecular Diversity and Combinatorial Chemistry", American Chemical Society, Washington, DC, 1996 ; R.E. Sammelson, MJ. Kurth, Chem. Rev. 2001, 101, 137] : la purification, effectuée par de simples lavages, est très aisée, ce qui rend l'automatisation possible ; un excès de réactifs peut être utilisé pour rendre les réactions quantitatives (typiquement 4 à 5 équivalents) et les techniques de synthèse parallèle ou de "split and mix" sont adaptables. Cette méthodologie présente également des inconvénients : les prix des résines fonctionnalisées sont très élevés et leur charge spécifique est très faible (souvent inférieure à 1 mmol/g de résine, atteignant rarement 2 mmol/g). De plus, les réactions ont lieu en conditions hétérogènes et les méthodes de suivi des réactions sont peu nombreuses et souvent associées à un clivage préalable de la résine (méthode pouvant être destructrice). Par ailleurs, indépendamment des méthodes indiquées ci-dessus, les peptides peuvent être préparés par une stratégie linéaire (voie directe ou par voie inverse) ou par une stratégie convergente. Plus précisément, la synthèse peptidique convergente repose sur la condensation de fragments et on a développé la synthèse peptidique convergente en phase solide (CSPPS) [P. Lloyd- Williams, F. Albericio, E. Giralt, Tetrάhedron. 1993, 49, 48, 11065 ; K. Barlos, D. Gatos, « Fmoc Soîid Phase Peptide Synthesis, A Practical Approach », Oxford University Press, 2000, chapitre 9, « Convergent Peptide Synthesis », 215] ou synthèse en phase solide par condensation de fragments (SPFC) [ H. Benz, Synthesis, 1993, 337 ; B. Riniker, A. Flôrsheimer, H.
Fretz, P. Sieber, B. Kamber, Tetrahedron, 1993, 49, 41, 9307].
Selon la technique de Merrifîeld, la synthèse convergente (par fragments ou blocs) de peptides n'est pas possible sans clivage préalable, et il est impossible de séparer les molécules supportées attendues des sous-produits greffés sur la résine (issus de réactions incomplètes ou de réactions secondaires). Après clivage, on obtient un mélange de produits dont la purification finale par HPLC (chromatographie liquide haute pression) sur phase inversée du peptide ne permet pas toujours de séparer les peptides ayant des chaînes tronquées ou comportant des suppressions, ainsi que les diastéréoisomères formés par épimérisation lors de la synthèse. A ce jour, il n'existe aucun procédé de synthèse convergente industrialisable impliquant la formation de liaisons peptidiques, ni sur support solide, ni sur support soluble.
Une autre gamme de supports a donc été développée. L'emploi de polymères solubles [D. J. Gravert, K. D. Janda, Chem. Rev. 1997, 97, 489 ; P. Wentworth, K. D. Janda, Chem. Comm., 1999, 1917 ; P. M. Fischer, D. I. Zheleva, J. Peptide ScL, 2002, 8,
529] permet d'effectuer les réactions en conditions homogènes tout en conservant la possibilité de purification aisée par simple précipitation du polymère par ajout d'un solvant approprié puis filtration du milieu réactionnel et lavage pour éliminer les réactifs en excès et les sous-produits. Les polyéthylèneglycols (PEG 2000 et 5000 en particulier) sont les polymères solubles les plus utilisés pour la synthèse peptidique sur polymère soluble. Cependant, divers problèmes sont associés à cette méthodologie. En • effet, pour avoir les propriétés physico-chimiques requises, les polymères doivent avoir une masse comprise entre 2000 et 20000 daltons, ce qui implique une charge spécifique très faible (0,05 à 0,5 mmol/g pour des polymères monobranchés) ; la purification des produits est souvent laborieuse (notamment à cause des problèmes de co-précipitation) ; l'automatisation est plus délicate qu'en synthèse sur support solide (solutions très visqueuses, opérations de précipitation, recristallisation coûteuses en temps, nécessité d'effectuer plusieurs couplages successifs pour rendre les réactions quantitatives) ; une mauvaise solubilisation des PEG est observée pour de grands peptides (agrégation des chaînes de peptides) ; et, comme en synthèse sur phase solide, il est impossible de séparer les molécules supportées attendues des sous-produits greffés au polymère et il n'est pas toujours possible de purifier totalement le peptide clivé par HPLC en phase inverse. En pratique, l'emploi de polymères solubles pour la synthèse peptidique reste rare.
La synthèse de peptides de moins de cinq aminoacides est habituellement effectuée en solution alors que la synthèse sur support solide est utilisée pour des peptides plus longs. Celle-ci est adéquate pour produire de petites quantités de peptides, mais pour le scale-up (échelle industrielle), en particulier lorsque des kilogrammes sont nécessaires pour des productions industrielles, la synthèse traditionnelle en solution reste la plus adaptée. Il existe également des techniques dites "hybrides" qui combinent la synthèse sur support solide et la synthèse en solution (K. Barlos, D. Gatos, Biopolymers, 1999, 51, 266).
Une autre alternative développée récemment consiste à employer des supports fluorés pour la synthèse peptidique [M. Mizuno, K. Goto, T. Miura, D. Hosaka, T.
Inazu, Chem. Canon., 2003, 972 ; M. Mizuno, K. Goto, T. Miura, T. Matsuura, T. Inazu, Tetrahedron Lett., 2004, 45, 3425]. Le peptide est greffé sur un support fluoré. Les réactions ont lieu en solvant organique classique puis une extraction par un solvant fluoré permet d'extraire sélectivement le peptide portant le groupement fluoré. Cette technique permet de combiner les avantages de la synthèse sur support solide
(purification aisée, utilisation d'un grand nombre d'équivalents de réactifs pour rendre les réactions quantitatives) et de la synthèse classique en solution (purification des intermédiaires possibles, suivi des réactions par RMN, CCM (chromatographie sur couche mince), MS (spectrométrie de masse), possibilité d'effectuer des réactions à grande échelle). Cependant deux inconvénients majeurs sont associés à cette méthode.
Elle emploie, d'une part, des solvants fluorés dont la synthèse n'est pas respectueuse de l'environnement, et, d'autre part, le peptide supporté doit contenir un important pourcentage en masse de fluor (supérieur à 40% en masse) pour permettre une purification correcte (sinon des émulsions ou des précipitations du peptide sont observées pendant l'extraction), ce qui implique que cette technologie n'est valable que pour de petits peptides.
Les technologies actuelles de synthèse peptidique présentent donc des limitations. Le développement de nouvelles technologies pour la synthèse peptidique est donc nécessaire. Par ailleurs, dans les nouvelles technologies SOSLI (synthèse organique supportée sur liquide ionique) et SOSSO (synthèse organique supportée sur sel d'onium), telles que décrites respectivement dans les demandes internationales WO 2004/029004 et WO
2005/005345, développées pour la synthèse organique, il n'est pas fait état de la possibilité d'utiliser ces méthodes dans le cadre de la synthèse de peptides.
Les liquides ioniques (P. Wasserscheid, T. Welton, "Ionic Liquids in Synthesis", Wiley-VCH, 2003) sont des sels liquides à basse température (fusion < 100°C). De très nombreuses possibilités d'utilisation ont été mises en évidence : nouveaux solvants pour ' la synthèse et les catalyses, catalyseurs dans certaines réactions, milieux liquides à tâche spécifique, etc.. Ils présentent certaines propriétés physico-chimiques intéressantes telles qu'une grande stabilité thermique, des tensions de vapeur très faibles, un grand pouvoir de solubilisation aussi bien des molécules organiques que des sels ou des polymères. Ils sont peu inflammables, recyclables et leurs propriétés de solvant peuvent être ajustées à volonté en faisant varier la nature des cations et des anions. Les sels d'onium fonctionnalisés (ou à tâche spécifique ou à tâche dédiée) présentent des propriétés qui permettent leur utilisation comme supports solubles pour la synthèse organique, la synthèse parallèle et la chimie combinatoire. En effet, ce sont des entités parfaitement définies, de faible poids moléculaire et caractérisables par toutes les méthodes physico-chimiques. Ils sont solubles dans une large gamme de liquides ioniques non fonctionnels servant alors de matrice liquide conduisant à des liquides ioniques à tâche dédiée. Ils sont aussi solubles dans un grand nombre de solvants organiques et insolubles dans d'autres, cette solubilité dépendant essentiellement de l'anion associé. Ceci permet de les purifier par simple lavage et donc d'utiliser un excès de réactifs. De plus, leur grande stabilité thermique permet d'éliminer les excès de réactifs par distillation sous vide. Enfin, leur synthèse est simple, le prix de revient est faible et leur synthèse à grande échelle est possible.
La présente invention a pour but de fournir de nouveaux sels d'onium fonctionnalisés destinés à être utilisés dans le cadre de la synthèse peptidique. La présente invention a également pour but de fournir un procédé de synthèse par voie inverse, par voie directe ou par synthèse convergente de peptides, par l'utilisation de liquides ioniques fonctionnalisés.
Les différents aspects sont réalisés en utilisant les sels d'onium fonctionnalisés comme supports solubles. Plus précisément, la présente invention concerne l'utilisation d'un sel d'onium à tâche dédiée de formule (I) :
A+-L-R-OY, X" (I) comme support soluble pour la synthèse de peptides, dans laquelle : X" représente un anion, fonctionnel ou non, choisi notamment parmi Cl", Br", T,
BF4 ", CF3SO3 ", N(SO2CFs)2 ", PF6 ", CH3CO2 ", CF3CO2; RαCO2; RFCO2 ", R0SO3; RFSO3 ", R0SO4 ", (Ra)3-xPθ4 X; x représentant un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, AlCl4 ", SnCl3 ", ZnCl3 ", Ra représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, Rp représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, • Y représente :
* soit un atome d'hydrogène, le sel de formule (I) comprenant alors un cation fonctionnalisé par une fonction alcool et répondant à la formule (ID) suivante : A+-L-R-OH, X",
* soit un groupe -COOR1, R1 représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone ou un groupe aryle comprenant de 6 à 30 atomes de carbone, ou un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, lesdits groupes alkyle ou aryle étant éventuellement fonctionnalisés, R1 représentant notamment -CHCl-CCl3 ou -</ y — NO2 le sel de formule (I) comprenant alors un cation fonctionnalisé par une fonction carbonate mixte et répondant à la formule (Lj) suivante .-
A— L— R— CL xOR1 > X-
O
• A+ représente une entité cationique, notamment choisie parmi les cations pyridinium, imidazolium, ammonium, phosphonium ou sulfonium, cycliques ou non, substitués ou non, et de préférence ammonium ou phosphonium,
• L représente un bras, notamment un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, ou aralkyle ou alkaryle comprenant de 3 à 20 atomes de carbone,
• R représente un groupe choisi parmi les groupes suivants :
* un groupe de formule -C(Ra)(Rb)-, Ra et Rb représentant indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, le groupe de formule -C(R3)(Rb)- représentant de préférence un groupe -CH2-, -CH(Me)- ou -C(Me)2-, * un groupe de formule -T-Ar1-CH(R0)-, dans laquelle :
- T est choisi parmi l'un des groupes suivants : CH2, O, S et NRd5 Rd représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone,
- Ar1 représente un groupe aromatique de formule suivante :
Figure imgf000007_0001
. n représentant un nombre entier égal à 0, 1, 2, 3 ou 4 , . Re représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy, — Rc représente soit un atome d'hydrogène, soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, soit un groupe aromatique Ar2 de formule suivante :
Figure imgf000007_0002
. m représentant un nombre entier égal à 1, 2, 3 , 4, ou 5 . Rf représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy.
Les Inventeurs ont trouvé, de façon surprenante, que les sels à tâche dédiée de formule (I) pouvaient être utilisés comme supports solubles - dans la synthèse peptidique par voie directe ou par voie inverse, en donnant des résultats de rendement et de pureté au moins aussi performants que ceux obtenus avec les techniques de l'état de l' art et - dans la synthèse peptidique convergente en donnant des résultats très améliorés par rapport aux techniques de l'état l'art, ce qui dégage la synthèse peptidique convergente des limitations rencontrées à ce jour.
L'expression "sel à tâche dédiée" désigne les sels d'ammonium, de phosphonium, de sulfonium, ainsi que tous les sels résultant de la quaternarisation d'une aminé, d'une phosphine, d'une arsine, d'un thioéther ou d'un hétérocycle contenant l'un ou plusieurs de ces hétéroatomes, et portant au moins une fonction organique F; ou F'j. Cette expression désigne aussi un sel d'onium dont le cation tel que défini ci-dessus n'est pas fonctionnalisé mais dont Fanion porte une fonction F'j. Cette expression peut également désigner un sel dont Panion et le cation portent au moins une fonction organique.
L'expression "support soluble" désigne un sel d'onium fonctionnel servant d"' ancre" pour effectuer, en solution, des transformations successives d'une molécule accrochée par la fonction. Cette ancre confère des propriétés à la molécule accrochée (donc finalement à l'ensemble formé par l'ancre et la molécule accrochée) qui permettent de purifier aisément par lavage, évaporation ou tout autre technique. Ceci ne pourrait être fait facilement avec des molécules volatiles et/ou solubles dans les solvants usuels par exemple. En utilisant cette technique, on peut utiliser des excès de réactifs, par exemple, comme dans le cas des résines de Merrifield insolubles. Un support soluble doit par définition être soluble dans un solvant ou dans un autre liquide ionique.
Ceci confère l'avantage d'effectuer les réactions en solution et de pouvoir en suivre l'avancement à l'aide de techniques d'analyse classiquement utilisées dans le domaine de la synthèse peptidique. Un support soluble de type sel d'onium à tâche dédiée doit également être récupérable à la fin des transformations. En d'autres termes, les molécules synthétisées sur ce support doivent pouvoir être facilement décrochées. Par ailleurs, le squelette du support soluble ne doit pas réagir avec les réactifs utilisés, les réactions ayant lieu sélectivement sur les fonctions accrochées sur le squelette de base.
La présente invention concerne l'utilisation d'un sel d'onium à tâche dédiée tel que défini ci-dessus pour la synthèse de peptides comprenant notamment de 2 à 30 acides aminés, et de préférence de 2 à 25, notamment de 10 à 25 acides aminés, ou de
15 à 20 acides aminés.
De façon avantageuse, le bras L susmentionné représente un groupe alkyle, aralkyle ou alkaryle comprenant de 3 à 20 atomes de carbone, et notamment comprenant 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 atomes de carbone. Si le bras L contient moins de 3 atomes de carbone, on observe des problèmes de stabilité des réactifs supportés avec un tel bras en raison de la proximité du cation.
La présente invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour la synthèse de peptides, d'azapeptides ou de pseudopeptides, lesdits peptides, azapeptides ou pseudopeptides comprenant au moins une liaison peptidique et/ou au moins une liaison azapeptidique et/ou au moins une liaison pseudopeptidique, et comprenant éventuellement au moins un motif α-hydrazinoacide, α-aminoacide ou ω-aminoacide, notamment β-aminoacide ou γ-aminoacide cyclique ou linéaire.
Les α-hydrazinoacides peuvent être représentés par exemple par la formule suivante : R-HN-NH-(CHR')n-COOH, R et R' représentant un groupe alkyle ou aryle ou aralkyle ou alaryle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et n variant de 1 à 10.
La présente invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour le greffage d'au moins un acide aminé
• de formule HOOC- [CH(R' )]P-NHGP, sur un composé de formule (ID) telle que définie ci-dessous, . p représentant un nombre entier variant de 1 à 20,
. R' représentant un résidu d'acide aminé, ledit acide aminé étant un acide aminé non fonctionnel ou un acide aminé fonctionnel (tel que la lysine, la tyrosine, la thréonine, la serine...) dont la fonction ou les fonctions sont protégées et ne servent donc pas de point d'ancrage pour le support, . GP représentant un groupe protecteur de la fonction aminé, à l'exception de Boc, notamment Fmoc, Cbz, Z, SO2Rg, Rg représentant un groupement alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, un groupement aryle substitué ou non, un groupement perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, pour obtenir un composé de formule suivante :
Figure imgf000009_0001
A , L et R étant tels que définis ci-dessus, p, R' et GP étant tels que définis ci-dessus,
• ou de formule R2-NH-[CH(R')]P-COOR3, sur un composé de formule (Ii) telle que définie ci-dessous,
. p représentant un nombre entier variant de 1 à 20,
. R' représentant un résidu d'acide aminé tel que défini ci-dessus, c'est-à- dire fonctionnel ou non,
. R2 représentant un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R', l'atome d'azote portant le groupe R2 et l'atome de carbone portant le groupe R', ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons, et . R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur de la fonction acide terminale de l'acide aminé, et étant choisi parmi l'un des groupes suivants : un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment méthyle ou tertiobutyle, un groupe benzyle ou un groupe Si(ORh)3, Rh représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 20 atomes de carbone, et représentant notamment un groupe tertiobutyle, pour obtenir un composé de formule suivante : , X~ '
Figure imgf000010_0001
A , L et R étant tels que définis ci-dessus, p, R2, R' et R3 étant tels que définis ci-dessus.
L'utilisation d'un acide aminé de formule HOOC- [CH(R' )]P-NHGP sur un composé de formule (I0) correspond à la synthèse peptidique directe et permet d'obtenir la formation d'un ester après greffage sur le support. L'utilisation d'un acide aminé de formule R2-NH- [CH(R' )]P-COOR3 sur un composé de formule (Ii) correspond à la synthèse peptidique inverse et permet d'obtenir la formation d'un carbamate apreès greffage sur le support.
Compte tenu de la définition de R3, celui-ci peut représenter H ou un groupe protecteur de la fonction acide terminale de l'acide aminé. Ainsi, de préférence, R3 représente H dans le cas où l'acide aminé est un β-aminoacide ou un homologue supérieur (γ, δ, etc ..) dans lesquels la nucléophilie de l'atome d'azote est suffisante. Dans le cas où Paminoacide est un α-aminoacide, R3 représente de préférence un groupe protecteur, en raison de la nucléophilie de l'azote et de la solubilité insuffisante des α- aminoacides non estérifiés.
Les aminoacides étant des composés bifonctionnels, deux voies peuvent être envisagées pour la synthèse peptidique : la voie directe C -> N (l'aminoacide est greffé au support par sa fonction acide et sa fonction aminé est engagée dans la réaction de couplage peptidique) et la voie inverse N -» C (l'aminoacide est greffé au support par sa fonction aminé via une fonction carbamate et sa fonction acide est engagée dans la réaction de couplage peptidique).
La présente invention concerne également l'utilisation telle que définie ci-dessus, d'un , χ~, pour la synthèse
Figure imgf000011_0001
• A+, X" et L sont tels que définis ci-dessus,
• R1 représente notamment un groupe -CHCl-CCl3 ou -</ y — NO2 • R représente un groupe de formule -C(Ra)(Rb)-, Ra et Rb représentant indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, le groupe de formule -C(R8)(Rb)- représentant de préférence un groupe -CH2-, -CH(Me)- ou -C(Me)2-.
Selon un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, d'un sel à tâche dédiée de formule A+-L-R-OH, XT", pour la synthèse peptidique par voie directe, dans laquelle :
• A+, X~ et L sont tels que définis ci-dessus, • R représente un groupe de formule -T-Ar1-CH(Rc)-, dans laquelle :
- T est choisi parmi l'un des groupes suivants : CH2, O, S et NRd, notamment O, Rd représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, - Ar1 représente un groupe aromatique de formule suivante :
Figure imgf000012_0001
. n représentant un no égal à 0, 1 ou 2, 3,ou4
. Re représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy,
- R0 représente soit un atome d'hydrogène, soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, soit un groupe aromatique Ar2 de formule suivante :
Figure imgf000012_0002
. m représentant un nombre entier égal à 1, 2, 3 4 ou 5 . Rf représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy.
La présente invention concerne également l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour la synthèse peptidique par voie convergente, d'un sel à tâche dédiée A+-L-R-OY, X" de formule (I) telle que définie ci-dessus, et d'un sel à tâche dédiée de formule Aj+-Lj- Ri-OH, Xf, les éléments A+, L, R, Y et X~ étant tels que définis ci-dessus, et les éléments Aj+, Lj, Rj et Xf ayant les définitions données ci-dessus à propos respectivement de A+, L, R et XT, A+-L-R et A+-Lj-Rj pouvant être identiques ou différents. La présente invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, caractérisée en ce que A+ est choisi parmi les cations ammoniums quaternaires, cycliques ou non.
Selon un mode de réalisation avantageux, l'utilisation telle que définie ci-dessus est caractérisée en ce que L représente une chaîne alkyle linéaire comprenant 4 ou 5 atomes de carbone.
La présente invention concerne également l'utilisation telle que définie ci-dessus, caractérisée en ce que l'anion X~ est PF6 " ou NTf2 ".
La présente invention concerne également l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour la synthèse peptidique par voie inverse, comprenant l'utilisation d'un sel à tâche dédiée de formule (Ii) telle que définie ci-dessus, le cation répondant à l'une des formules suivantes :
Figure imgf000013_0001
[HMPeTMA] [HMPhBTMA]
Figure imgf000013_0002
[HPrTMA] [HBuTMA] [HHeTMA]
La présente invention concerne également l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour la synthèse peptidique par voie directe, comprenant l'utilisation d'un sel à tâche dédiée de formule (ID) telle que définie ci-dessus, le cation répondant à la formule suivante :
Figure imgf000013_0003
[HTMPPTMA]
Figure imgf000014_0001
[HHeTMA] [HMPhBTMA]
La présente invention concerne également l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour Ia synthèse peptidique convergente, comprenant l'utilisation de deux sels à tâche dédiée de formules (I) telles que définies ci-dessus, les cations répondant aux formules suivantes :
Figure imgf000014_0002
[HTMPPTMA]
Figure imgf000014_0003
[HMPhBTMA]
La présente invention concerne également l'utilisation telle que définie ci-dessus, caractérisée en ce que le sel à tâche dédiée est :
- soit solubilisé dans un solvant organique classique tel que le dichlorométhane, le tétrahydrofuranne, le dioxane, l'acétonitrile, le propionitrile, le diméthylformamide, le diméthylacétamide, la N-méthyl-pyrrolidone, l'acétone, le toluène, le chlorobenzène, le dichlorobenzène, le nitrométhane, le nitroéthane, ou un mélange de ces solvants,
- soit solubilisé dans une matrice liquide ionique, de préférence le triflimidure de triméthylbutylammonium ou [tmba] [NTf2], le triflrmidure de l-éthyl-3- méthylimidazolium ou [emim] [NTf2], le triflimidure de l-butyl-3-méthylimidazolium ou [bmim][NTf2] ou tout autre combinaison de cation onium et d'anion liquide à une température inférieure ou égal à 1000C5 de préférence 50°C,
- soit solubilisé dans un mélange comprenant un solvant organique et une matrice liquide ionique tels que définis ci-dessus. - soit solubilisé dans un mélange comprenant un solvant organique et un sel d' onium non fonctionnalisé tel que [tmba] [PF6]
Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, il est possible d'utiliser différents solvants organiques et/ou liquides ioniques au cours de la synthèse des peptides. On peut donc envisager de changer de solvant et/ou de liquide ionique au cours de la synthèse par exemple pour obtenir un meilleur couplage peptidique, améliorer la sélectivité, améliorer la solubilité.
L'utilisation d'un mélange solvant organique / liquide ionique peut par exemple permettre de diminuer la viscosité du milieu réactionnel.
Selon un mode de réalisation préféré, la présente invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour la synthèse de peptides par voie directe, caractérisée en ce que le sel à tâche dédiée est en solution dans un solvant organique.
Parmi les solvants organiques préférés, on peut citer les solvants dipolaires aprotiques d'une façon générale, et notamment l'acétonitrile, le propionitrile, le DMF, le DMSO, le DMPU, le sulfolane, le nitrométhane, le nitroéthane et le nitrobenzène.
La présente invention concerne également l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour la synthèse de peptides par voie directe, caractérisée en ce que le sel à tâche dédiée est solubilisé et immobilisé dans une matrice liquide ionique A2 +, X2 ", le cation A2 + étant choisi parmi les cations imidazolium, pyridinium, substitués ou non, ammonium, phosphonium, sulfonium ou tout autre cation onium éventuellement fonctionnalisé, et l'anion X2 " étant choisi parmi Cl", Br", I", F", BF4 ", CF3SO3 ", N(SO2CF3)2 ", PF6 ",
CH3CO2 ", CF3CO2 ", RaCO2 ", RFCO2 ", RαSO3 ", RFSO3 ", RaSO4 ", (R^PO/", x représentant un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, AlCl4 ", SnCl3 ", ZnCl3 ", Rα représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, Rp représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone. Parmi les liquides ioniques préférés, on peut citer [Imba] [NTf2], [emim] [NTf2], [bmim][NTf2], [emim][PF6], [bmim] [PF6], [tmba] [BF4], [βmim] [BF4], [bmim] [BF4], [Imba] [OTfI, [emim] [OTf] et [bmim] [OTf].
Selon un mode de réalisation préféré, la présente invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour la synthèse de peptides par voie inverse, caractérisée en ce que le sel à tâche dédiée est en solution dans un solvant organique.
Parmi les solvants organiques préférés, on peut citer les solvants dipolaires aprotiques d'une façon générale, et notamment Pacétonitrile, le propionitrile, le DMF, le DMPU, le nitrométhane, le nitroéthane et le nitrobenzène.
Selon un mode de réalisation préféré, la présente invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour la synthèse de peptides par voie inverse, caractérisée en ce que le sel à tâche dédiée est solubilisé et immobilisé dans une matrice liquide ionique A2 +, X2 ", le cation A2 étant choisi parmi les cations imidazolium, pyridinium, substitués ou non, ammonium, phosphonium, sulfonium ou tout autre cation onium éventuellement fonctionnalisé, et l'anion X2 " étant choisi parmi Cl", Br", I", F", BF4 ', CF3SO3 ", N(SO2CF3)2 ", PF6 ",
CH3CO2 ", CF3CO2 ", RaCO2 ", RFCO2 ", RaSO3 ", RpSO3 ", RaSO4 ", (Ra)3-xPO4 x", x représentant un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, AlCl4 ", SnCl3 ", ZnCl3 ", Rα représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, Rp représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone.
Parmi les liquides ioniques préférés, on peut citer [tmba] [NTf2], [emim] [NTf2],
[bmim][NTf2], [emim][PF6], [bmim] [PF6], [tmba] [BF4], [emim] [BF4], [bmim] [BF4], [tmba][OTf], [emim][0Tf] et [bmim][OTfJ.
Selon un mode de réalisation préféré, la présente invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour la synthèse de peptides par voie convergente, caractérisée en ce que les sels à tâche dédiée sont en solution dans un solvant organique. Parmi les solvants organiques préférés, on peut citer les solvants dipolaires aprotiques d'une façon générale, et notamment Pacétonitrile, le propionitrile, le DMF, le DMPU, le nitrométhane, le nitroéthane et le nitrobenzène. Selon un mode de réalisation préféré, la présente invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour la synthèse de peptides par voie convergente, caractérisée en ce que les sels à tâche dédiée sont solubilisés et immobilisés dans une matrice liquide ionique A2 +, X2 ", le cation A2 + étant choisi parmi les cations imidazolium, pyridinium, substitués ou non, ammonium, phosphonium, sulfonium ou tout autre cation onium éventuellement fonctionnalisé, et l'anion X2 ' étant choisi parmi Cl", Br", I", F", BF4 ", CF3SO3 ", N(SO2CF3)2 ", PF6 ",
CH3CO2 ", CF3CO2 ", RaCO2 ", RFCO2 ", RaSO3 ", RFSO3 ", R0SO4 ", (Ra)3-xPO4 x", x représentant un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, AlCl4 ", SnCl3 ", ZnCl3 ", Rα représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, Rp représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone.
Parmi les liquides ioniques préférés, on peut citer [tmba] [NTf2], [emim] [NTf2], [bmim][NTf2], [emim][PF6], [bmim][PF6], [tmba][BF4], [emim][BF4], [bmim][BF4], [tmba][OTf], [emim][0Tf] et [bmim][0Tf].
La présente invention concerne également un procédé de synthèse de peptides par voie directe (C — > N) sur un support tel que défini ci-dessus, pour la préparation d'un peptide de formule (II) suivante
Figure imgf000017_0001
dans laquelle : — i est un nombre entier variant de 1 à q,
- q est un nombre entier variant de 1 à 30, de préférence de 1 à 20,
- pi est un nombre entier variant de 1 à 20,
- R'i représente un résidu d'acide aminé tel que défini ci-dessus,
- Rj2 représente H ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R';, l'atome d'azote portant le groupe R;2 et l'atome de carbone portant le groupe R'i, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) une étape de greffage d'un acide aminé HOOC-[CH(R' OJp1-N(Ri 2)-GP,
R'Î, R1 2 et P1 étant tels que définis ci-dessus, et GP représentant un groupe protecteur de la fonction aminé, à l'exception de Boc, notamment Fmoc, Cbz, Z, SO2Rg, Rg représentant un groupement alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, un groupement aryle substitué ou non, un groupement perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, sur un support soluble de formule (ID) suivante : A+-L-R-OH, XT, A+, L, R et X~ étant tels que définis ci-dessus,
afin d'obtenir le produit de formule (II-l) suivante
Figure imgf000018_0001
b) une étape de déprotection du produit de formule (II-l) tel qu'obtenu à l'issue de l'étape précédente afin d'obtenir le produit déprotégé de formule (III- 1 ) suivante :
Figure imgf000018_0002
cette étape de déprotection correspondant à la déprotection du groupe protecteur GP susmentionné,
c) la répétition séquentielle des étapes a) et b) de greffage et de déprotection jusqu'à l'obtention du peptide supporté protégé de formule (Il-q) suivante :
Figure imgf000018_0003
d) une étape de déprotection du peptide supporté protégé de formule (Il-q) tel qu'obtenu à l'issue de l'étape précédente afin d'obtenir le peptide supporté déprotégé de formule (Iïï-q) suivante :
Figure imgf000018_0004
(Ill-q)
cette étape de déprotection correspondant à la déprotection du groupe protecteur GP susmentionné,
e) et une étape de clivage du support afin d'obtenir le peptide susmentionné de formule (II) et éventuellement de recycler le support de formule (ID) A+-L-R-OH, X", l'ordre des étapes d) et e) pouvant être inversé.
Les peptides de formule (II) peuvent être également représentés de la façon suivante :
Figure imgf000019_0001
La présente invention concerne également un procédé de synthèse de peptides par voie inverse (N — > C) sur un support tel que défini ci-dessus, pour la préparation d'un peptide de formule (IV) suivante :
Figure imgf000019_0002
dans laquelle :
- i est un nombre entier variant de 1 à q,
- q est un nombre entier variant de 1 à 30, de préférence de 1 à 20,
- pi est un nombre entier variant de 1 à 20,
- R'i représente un résidu d'acide aminé tel que défini ci-dessus,
- Rj2 représente H ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R'i, l'atome d'azote portant le groupe Ri2 et l'atome de carbone portant le groupe R';, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons, - R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur de la fonction acide terminale de l'acide aminé, et étant choisi parmi l'un des groupes suivants : un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment méthyle ou tertiobutyle, un groupe benzyle ou un groupe Si(ORh)3, Rh représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 20 atomes de carbone, et représentant notamment un groupe tertiobutyle, ledit procédé comprenant les étapes suivantes :
a) une étape de réaction d'un composé de formule suivante :
Figure imgf000020_0001
R1 étant tel que défini ci-dessus, et représentant notamment -CHCl-CCl3 ou
Figure imgf000020_0002
sur un support soluble de formule (ID) suivante : A+-L-R-OH, JT
A+, L, R et X~ étant tels que définis ci-dessus,
afin d'obtenir un support soluble de formule (Ii) suivante :
Figure imgf000020_0003
A+, L, R, R1 et X~ étant tels que définis ci-dessus,
b) une étape de greffage d'un acide aminé NH(RiZ>[CH(R'i)]p -COOR3, sur un support soluble de formule (Ii) tel qu'obtenu à l'issue de l'étape précédente, . pi, R1 2 et R5 ! étant tels que définis ci-dessus,
. R3 étant tel que défini ci-dessus, pour obtenir un composé de formule suivante (IV-I) :
Figure imgf000020_0004
XT, A+, L, R, pi, R'i et R3 étant tels que définis ci-dessus, c) une étape de déprotection éventuelle du produit de formule (IV-I) tel qu'obtenu à l'issue de l'étape précédente afin d'obtenir le produit déprotégé de formule
(V-I) suivante :
Figure imgf000021_0001
cette éventuelle étape de déprotection correspondant à la déprotection du groupe R3 lorsque R3 est différent de H,
d) la répétition séquentielle des étapes b) et c) de greffage et de déprotection jusqu'à l'obtention du peptide supporté de formule (IV-q) suivante :
Figure imgf000021_0002
e) une étape de déprotection éventuelle du peptide supporté de formule (IV-q) tel qu'obtenu à l'issue de l'étape précédente afin d'obtenir le peptide supporté déprotégé de formule (V-q) suivante :
Figure imgf000021_0003
cette éventuelle étape de déprotection correspondant à la déprotection du groupe R3 lorsque R3 est différent de H,
f) et une étape de clivage du support afin d'obtenir le peptide susmentionné de formule (IV) et éventuellement de recycler le support de formule (ID) A+-L-R-OH, X", l'ordre des étapes e) et f) pouvant être inversé. Les peptides de formule (IV) peuvent être également représentés de la façon suivante :
Figure imgf000022_0001
La présente invention concerne également un procédé de synthèse de peptides par voie convergente sur un support tel que défini ci-dessus, pour la préparation d'un peptide de formule (VI) suivante :
Figure imgf000022_0002
dans laquelle :
- i est un nombre entier variant de 1 à q,
- q est un nombre entier variant de 1 à 30, de préférence de 1 à 20,
- pi est un nombre entier variant de 1 à 20,
- R'j représente un résidu d'acide aminé,
- Rj2 représente H ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R'i, l'atome d'azote portant le groupe Rj2 et l'atome de carbone portant le groupe R';, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons,
- s est un nombre entier variant de 1 à r,
- r est un nombre entier variant de 1 à 20,
- ts est un nombre entier variant de 1 à 20,
- R" s représente un résidu d'acide aminé,
- Rs 2 représente H ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R"s, l'atome d'azote portant le groupe Rs 2 et l'atome de carbone portant le groupe R"s, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons,
ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) la réaction d'un peptide supporté obtenu par synthèse peptide par voie inverse de formule (VII-I) suivante :
Figure imgf000023_0001
Ai+, LI, RI et Xi répondant à la même définition que celle donnée pour A+, L, R et
X~ ci-dessus, i, q, Rj , pj et R'; étant tels que définis ci-dessus,
avec un peptide supporté obtenu par synthèse par voie directe de formule (VII-D) suivante :
Figure imgf000023_0002
AD , LD, RD et XD répondant à la même définition que celle donnée précédemment pour A+, L, R et XT,
AD — LD-RD et Ai — LI-RI pouvant être identiques ou différents, et XD " et Xf pouvant être identiques ou différents, s, r, Rs 2, ts et R" s étant tels que définis ci-dessus,
afin d'obtenir un peptide bi-supporté de formule suivante (VIII) :
Figure imgf000023_0003
b) et une étape de clivage du produit de formule (VIII) afin d'obtenir le peptide susmentionné de formule (VI), et éventuellement de recycler les supports de formule suivante : AD +-LD-RD-OH, XD ~, et AI +-LI-RI-OH, Xf. Selon un mode de réalisation préféré, le procédé de synthèse peptidique selon l'invention est caractérisé en ce que les supports sont :
- soit solubilisés dans un solvant organique classique tel que le dichlorométhane, le tétrahydrofuranne, le dioxane, l'acétonitrile, le propionitrile, le diméthylformamide, le diméthylacétamide, la N-méthyl-pyrrolidone, l'acétone, le toluène, le chlorobenzène, le dichlorobenzène, le nitrométhane, le nitroéthane, ou un mélange de ces solvants,
- soit solubilisés dans une matrice liquide ionique, de préférence le triflimidure de triméthylbutylammonium ou [tmba][NTf2], le triflimidure de l-éthyl-3- méthylimidazolium ou [ernim] [NTf2], le triflimidure de l-butyl-3-méthylimidazolium ou [bmim] [NTf2] ou tout autre combinaison de cation onium et d'anion liquide à une température inférieure ou égal à 1000C, de préférence 500C,
- soit solubilisé dans un mélange comprenant un solvant organique et une matrice liquide ionique tels que définis ci-dessus.
L'invention concerne également un procédé de synthèse de peptides de formules représentées ci-dessus, dans lesquelles le groupe acide terminal est estérifié, en d'autres tenues des peptides dans lesquels le groupe -COOH est remplacé par -COOR3, R3 ayant notamment les significations suivantes : un groupe protecteur de la fonction acide terminale de l'acide aminé, et étant choisi parmi l'un des groupes suivants : un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment méthyle ou tertiobutyle, un groupe benzyle ou un groupe Si(ORh)3, Rh représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 20 atomes de carbone, et représentant notamment un groupe tertiobutyle.
La présente invention concerne également des composés de formule (I-bis) suivante :
A+-L-R-OW, X~ dans laquelle : • W représente :
- soit un atome d'hydrogène, - soit un groupe -COOR1, Ri représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à
20 atomes de carbone ou un groupe aryle comprenant de 6 à 30 atomes de carbone, ou un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, lesdits groupes alkyle ou aryle étant éventuellement fonctionnalisés, R1 représentant notamment -CHCl-CCl3 ou
Figure imgf000024_0001
- soit un groupe de formule (A') suivante :
Figure imgf000025_0001
dans laquelle : o s est un nombre entier variant de 1 à r, o r est un nombre entier variant de 1 à 30, de préférence de 1 à 20, o ts est un nombre entier variant de 1 à 20, o R" s représente un résidu d'acide aminé, o Rs représente H ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à
20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R"s, l'atome d'azote portant le groupe Rs 2 et l'atome de carbone portant le groupe R"s, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons, o V représente un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur de la fonction aminé, à l'exception de Boc, notamment Fmoc, Cbz, Z, SO2Rg, Rg représentant un groupement alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, un groupement aryle substitué ou non, un groupement perfluoro alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone,
— soit un groupe de formule (B') suivante :
Figure imgf000025_0002
dans laquelle : o i est un nombre entier variant de 1 à q, o q est un nombre entier variant de 1 à 30, de préférence de 1 à 20, o pi est un nombre entier variant de 1 à 20, o R'i représente un résidu d'acide aminé, o Rj2 représente H ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à
20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R'i, l'atome d'azote portant le groupe Rj2 et l'atome de carbone portant le groupe R';, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons, o R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur de la fonction acide terminale de l'acide aminé, et étant choisi parmi l'un des groupes suivants : un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment méthyle ou tertiobutyle, un groupe benzyle ou un groupe Si(ORh)3, Rh représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 20 atomes de carbone, et représentant notamment un groupe tertiobutyle,
- soit un groupe de formule (C) suivante :
(C)
Figure imgf000026_0001
dans laquelle :
o s, r, ts, R"s et Rs 2 sont tels que définis ci-dessus dans la formule (A'), et o i, q, pi, R'i et Rj2 sont tels que définis ci-dessus dans la formule (B'),
0 Xp~ représente un anion, fonctionnel ou non, choisi notamment parmi Cl", Br", F, BF4-, CF3SO3 ", N(SO2CF3)2 ", PF6 ", CH3CO2 ", CF3CO2-, RaCO2 ", RFCO2 ", RaSO3 ", RFSO3 ", R0SO4 ", (Ra)3-xPO4 x", x représentant un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, AlCl4 ", SnCl3 ", ZnCl3 ", R3 représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, Rp représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de
1 à 20 atomes de carbone, o AD+ représente une entité cationique, notamment choisie parmi les cations pyridinium, imidazolium, ammonium, phosphonium ou sulfonium, cycliques ou non, substitués ou non, et de préférence ammonium ou phosphonium, o L représente un bras, notamment un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, ou aralkyle ou alkaryle comprenant de 3 à 20 atomes de carbone, o R représente un groupe choisi parmi les groupes suivants :
* un groupe de formule -C(Ra)(Rt>)-, Ra et Rb représentant indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, le groupe de formule -C(Ra)(Rb)- représentant de préférence un groupe -CH2-, -CH(Me)- ou -C(Me)2-,
* un groupe de formule -T-Ar1-CH(Rc)-, dans laquelle : - T est choisi parmi l'un des groupes suivants : CH2, O, S et NRd, Rd représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone,
- Ar1 représente un groupe aromatique de formule suivante :
Figure imgf000027_0001
. n représentant un nombre entier égal à 0, 1 , 2,3, ou 4 . Re représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy,
— R0 représente soit un atome d'hydrogène, soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, soit un groupe aromatique Ar2 de formule suivante :
Figure imgf000027_0002
. m représentant un nombre entier égal à 1, 2, 3 , 4 ou 5 . Rf représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy,
• A+, L, R et X" répondant à la même définition que celle donnée pour ci-dessus pour AD+, L0, RD et XD ~,
AD +-LD-RD et A+-L-R pouvant être identiques ou différents, et XD " et X" pouvant être identiques ou différents, les composés suivants étant exclus :
+/\ / OH NTf," (Me)3N ^^ ' ^
X = Cl, PF6, BF4 ou NTf2
(Me)3N X (Me)3N "OH X X = Cl, OTfou NTf2 X = Cl ou NTf2
Figure imgf000028_0001
X = Cl ou NTf2
Dans la formule (I-bis), lorsque :
W=H, le composé correspondant est un alcool ;
W=COOR1, le composé correspondant est un ester ; W=(A'), le composé correspondant est un peptide supporté (voie directe)
W= (B'), le composé correspondant est un peptide supporté (voie inverse)
W= (C), le composé correspondant est un peptide bi-supporté (synthèse convergente)
La présente invention concerne également des composés tels que définis ci-dessus, répondant à la formule (I) suivante :
A+-L-R-OY5 XT (I) dans laquelle :
• A+, X~, L et R sont tels que définis ci-dessus,
• Y représente :
* soit un atome d'hydrogène, le sel de formule (I) comprenant alors un cation fonctionnalisé par une fonction alcool et répondant à la formule (ID) suivante : A+-L-R-OH, X", * soit un groupe -COOR1, R1 étant tel que défini ci-dessus, le sel de formule (I) comprenant alors un cation fonctionnalisé par une fonction carbonate mixte et répondant à la formule (I1) suivante :
Figure imgf000029_0001
Les composés préférés selon la présente invention répondent à l'une des formules suivantes :
Figure imgf000029_0002
[HMPeTMA] [HMPhBTMA]
Figure imgf000029_0003
DESCRIPTION DETAILLEE
I - SYNTHESE DES SUPPORTS
A - Alcools primaires : a) bras simples à chaines carbonées
® Θ
,OH Θ Θ Θ © .OH Θ Me3N , NTf2 Me3N^ OH NTf, Me,N ' , NTf2 Me3N' NTf2 [HETMA][NTf2] [HPrTWIA][NTf2] [HBuTMA][NTf2] [HHeTMA][NTf2]
Schéma de synthèse
Θ ® Θ.
Cl -H, OH ~N' Me3NWOH Cl >- Me3N H- OH NTf2
MeCN/H2O LiNTf2 n = 3, 4 ou 6 7O0C, 2Oh H2O, immédiat n = 3 82% n = 4 94% n = 2 90% [HETMA][NTf2] n = 6 quantitatif π = 3 90% [HPrTMA][NTf2] n = 4 quantitatif [HBuTMA][NTf2] n = 6 95% [HHeTMA][NTf2]
Ces réactions donnent de bons résultats et ne donnent pas de produits parasites. HE = hydroxyéthyle ; HPr = hydroxypropyle ; HBu = hydroxybutyle ; HHe = hydroxyhexyle.
b) bras de type benzylique (formule (I) avec X = O ; alcool benzylique primaire) Synthèse de FHMPhBTMAIfNTf2 /PF6J
Figure imgf000030_0001
M
Figure imgf000030_0002
[HMPhBTMA][Br]
Figure imgf000030_0003
B - Alcools secondaires : a) Synthèse de FHPeTMAl[NTf2I
Figure imgf000031_0001
[HPeTMA][Cl] [HPeTNlA][NTf2]
Cette synthèse comprend la réduction d'une cétone pour obtenir un chloroalcool, la quaternarisation de Me3N et enfin la métathèse d'anion par LiNTf2.
b) Synthèse de [HPMPTTMAIrBrZNTf2I (formule (I) avec X = O ; alcool benzhydrilique)
Figure imgf000031_0002
quantitatif
[HPMPTTMA][Br]
Figure imgf000031_0003
[HPMPTTMA][NTf2]
C - Alcools tertiaires :
Synthèse de THMPeTMAI [Xl
1ère étape : synthèse du chloroalcool précurseur selon le schéma ci-dessous
éther/THF OH
MeMgI Cl
Figure imgf000031_0004
95% Deux voies sont employées selon les anions visés :
• lère voie : on alkyle une aminé tertiaire selon le schéma suivant :
Figure imgf000032_0001
Avec le triflate de méthyle, on observe la formation d'oléfmes par perte d'eau.
2ème voie : quaternarisation de la triméthylamine
Figure imgf000032_0002
[HMPeTMA][CI] [HWlPeTMA][PF6]
H2O
" HBF, θ
Me3N , BF4
OH [HMPeTMA][BF4]
En raison des résultats obtenus lors de la métathèse avec HPF6 et HBF4, il semble préférable d'effectuer la métathèse avec KPF6 et NaBF4.
II - SYNTHESE PEPTIDIOUE PAR VOIE INVERSE
Le principe de la synthèse peptidique inverse supportée sur sel d'onium à tâche dédiée est le suivant :
o ©
© A-L
A-L-OH "°"Y bon 9rouPe Partant "Y o.,
carbonate mixte
GREFFAGE
Figure imgf000033_0001
COUPLAGE PEPTIDIQUE
DEPROTECTION
Figure imgf000033_0002
Figure imgf000033_0003
COUPLAGE PEPTIDIQUE
DEPROTECTION CLIVAGE !-L-OH . H*NY R V " V O *Λ R" • »
L'objectif est de créer un analogue d'un groupement ter-butyloxycarbonyle Boc, stable vis à vis des bases, des nucléophiles, des acides faibles, des oxydants et des agents réducteurs faibles. Le sel à tâche dédiée [HMPeTMA][X] a donc été utilisé pour mettre les conditions de la réaction au point. La nature du support a ensuite été diversifiée. A- Etude de la formation des carbonates mixtes avec Ie chloroformiate de 4- nitrophényle :
a) Mise au point de la réaction avec le support [HMPeTMA][Il
Figure imgf000034_0001
Conditions
• Réaction, dans .1? açétonitrile
La réaction est effectuée pendant 12 à 18 heures à température ambiante avec 1,9 équivalents de chloroformiate de 4-nitrophényle et 3,0 équivalents de pyridine / support avec X = I.
On observe alors une conversion totale.
Mais le carbonate est sensible à l'eau et l'alcool [HMPeTMA][I] de départ est reformé par hydrolyse. Ce problème peut facilement être évité en réalisant directement la réaction suivante de formation du carbamate (deux étapes en un seul pot).
• Réaction, dans .les ..liquides ioniques
Les réactions ont été effectuées à partir du support [HMPeTMA][Cl] en solution dans quatre équivalents de [bmim] [NTf2] ou [bmim] [PF6] ou [bmim] [BF4] ou [bmim][0Tf] en ajoutant quelques gouttes d' açétonitrile pour diminuer la viscosité et obtenir une bonne agitation.
Le carbonate se forme quantitativement en 5 à 10 heures. La transformation est donc plus rapide dans les liquides ioniques.
• Natoe.du.çpntr.e ipn.du.se.l.à tâche dédiée
En engageant des supports [HMPeTMA][X] séchés préalablement au Kugelrohr, la formation du carbonate est quantitative (contrôle RMN) quelque soit le contre-ion (X
= I, Cl, BF4, NTf2, PF6) que ce soit dans l'acétonitrile ou dans les liquides ioniques. Les carbonates ne sont pas isolés mais engagés directement dans la réaction suivante.
b) Diversification de la nature du sel à tâche dédiée Les carbonates issus de [HPrTMA][NTf2], [HBuTMA][NTf2] ou
[HHeTMA][NTf2], [HMPhBTMA][X] (X = NTf2 ou PF6) sont formés quantitativement en une demi-heure dans l'acétonitrile et en 15 minutes dans [tmba] [NTf2]. B- Etude de Ia formation des carbamates
Greffage de P acide isonipécotique
a) Formation du carbamate [HMPeTMA- Aiso] [X]
Figure imgf000035_0001
• Réaçtign.dans.le.DMF
La formation du carbamate [HMPeTMA- Aiso] [I] est effectuée dans le DMF à température ambiante en engageant 3,0 à 3,5 équivalents d'acide isonipécotique et d'un excès de pyridine (> 3 équivalents). La réaction dure 4 à 5 jours. Dans tous les cas, un mélange de carbamate [HMPeTMA-Aiso][I] (80 à 90%) et d'alcool [HMPeTMA][I] (10 à 20%) résultant de la dégradation du carbonate mixte intermédiaire est obtenu mais qui n'est pas gênant pour la suite des opérations. Les résultats sont similaires quelque soit l'anion du sel à tâche dédiée (X = I, Cl, BF4, NTf2, PF6). Dans tous les cas, le carbamate [HMPeTMA- Aiso] [X] se forme (conversions de 70 à 90% en cinq jours, le reste du carbonate se dégradant en alcool) selon les mêmes conditions.
• Réaçtion.daris .les .liquides joni.ques
Les réactions ont été lancées à partir du carbonate supporté sous forme d'un chlorure dans quatre équivalents de [bmim] [NTf2] ou [bmim] [PF6] ou [bmim] [BF4] ou [bmim][0Tf] en ajoutant quelques gouttes de DMF, qui permettent une bonne agitation. Dans tous les cas, la réaction est lente (environ 100 heures) et un mélange du carbamate [HMPeTMA-AiSo][Cl] attendu et d'alcool [HMPeTMA][Cl] est obtenu. La proportion d'alcool est similaire à celle obtenue dans le DMF dans les cas de [bmim] [NTf2] et [bmim] [OTf] (respectivement 20 et 13%). Par contre, le pourcentage d'alcool est de 40% pour les manipulations réalisées dans [bmim][BF4] et [bmim][PF6], ce qui peut probablement s'expliquer par la présence intrinsèque d'acide fluorhydrique et de traces d'eau dans ces deux liquides ioniques.
b) Diversification de la nature du sel à tâche dédiée
Les sels à tâche dédiée les plus hydrophobes avec les contre-ions X = PF6 ou NTf2, ont été utilisés pour rendre possible les lavages à l'eau sans perte de substrat. • Lpjsqueja.matriçe est un splv^t mojéçuj£ώe
La formation des carbamates [HPrTMA- Aiso] [X], [HBuTMA- Aiso] [X] et [HHeTMA][X] avec X = PF6 ou NTf2 a été testée exactement dans les mêmes conditions que celles concernant la synthèse de [HMPeTMA- Aiso] [X], sans isolation du carbonate intermédiaire.
Figure imgf000036_0001
n n n
Figure imgf000036_0002
Formation des carbamates [HPrTMA-Aiso] [XJ ', [HBuTMA-AisoJ [XJ et
[HHeTMAJ[XJ ; X = PF6 ou NTf2
Le greffage sur le sel portant une fonction alcool benzylique [HMPhBTMA][X] a été effectué (Schéma ci-dessous). Pour X = NTf2 ou PF6, le carbonate intermédiaire est formé en une demi-heure puis le carbamate [HMPhBTMA- Aiso] [X] en 18 heures. Dans ce cas, un mélange d'alcool et de carbamate est également obtenu dans les proportions
8/92.
Figure imgf000037_0001
Formation de [HMPhB TMA-AisoJ [XJ ; X = NTf2 ou PF6
Le tableau suivant regroupe les résultats avec les divers supports dans le cas où X = NTf2. Une différence de réactivité est observée entre les sels portant un alcool primaire ([HPrTMA][NTf2], [HBuTMA][NTf2], [HMPhBTMA][NTf2]) ou tertiaire ([HMPeTMA][X]). Dans ce dernier cas, l'alcool est plus encombré et les temps de réactions sont donc plus longs.
Proportion d'alcool
Support Durée étape 1 Durée étape 2 Conversion libre non greffé
[HPrTMA] [NTQ] 0,5 h 18 h 90% 10%
[HBuTMA] [NTf2] 0,5 h 18 h 80% 20%
[HHeTMA][NTf2] 0,5 h 184 h 80% 20%
[HMPeTMA][NTf2] 18 h 4 jours 85% 15%
[HMPhBTMA][NTf2] 0,5 h 18 h 92% 8%
Tableau : Comparaison des temps de réaction et des conversions avec divers supports.
• LorsqueJa.maώce est un HqμjdeJpmque
Le greffage de l'acide isonipécotique a été effectué sur les sels [HPrTMA][NTf2] ou [HBuTMA][NTf2] en solution 0,95mol/L dans le [taba] [NTf2]. Les réactions sont réalisées sans ajout de solvant organique car la viscosité du milieu permet une bonne agitation.
La formation des carbonates issus de [HPrTMA][NTf2] ou [HBuTMA][NTf2] est effectuée en 15 minutes à température ambiante (lère étape).
Le carbamate [HPrTMA- Aiso] [NTf2] (2ème étape) est obtenu en 8 heures mais un mélange de 40% d'alcool [HPrTMA][NTf2] et de 60% de carbamate [HPrTMA- AiSo][NTf2] est obtenu. De même, le carbamate [HBuTMA- Aiso] [NTf2] (2ème étape) se fait en environ 18 heures (comme dans les solvants organiques). Un mélange de 30% d'alcool [HBuTMA][NTf2] et de 70% de carbamate [HBuTMA-Aiso] [NTf2] est obtenu.
Les liquides ioniques sont hygroscopiques. Or le carbonate intermédiaire n'est pas stable à l'humidité, ce qui explique probablement la forte proportion d'alcool obtenue. Il serait sans doute nécessaire de sécher ces liquides ioniques binaires {sel à tâche dédiée + liquide ionique} pour améliorer les conversions. Le greffage du premier aminoacide n'a pas été poursuivi dans les liquides ioniques, compte tenu des difficultés rencontrées. Nous avons préféré réaliser cette opération dans un solvant moléculaire puis dissoudre ces aminoacides supportés dans les liquides ioniques pour tester les réactions de couplage peptidique.
Greffage d'aminoacides naturels.
• Greffage.dlαtaminpacides.ou.dJ.α^-am
II est nécessaire de développer une méthode générale de greffage valable pour tous les aminoacides, en particulier pour les α-aminoacides. Le sel à tâche dédiée portant une fonction alcool benzylique [HMPhBTMA][PF6] a été choisi pour ces études.
Les conditions utilisées pour le greffage de l'acide isonipécotique (étape 1 : 1,9 éq. de chloroformiate de paranitrophényle ; 3,0 eq. de pyridine dans l'acétonitrile - étape 2 : 3,5 eq. d'aminoacide et de pyridine dans le DMF) ont été testées en engageant un α-aminoacide (alanine) mais la conversion de l'étape de formation du carbamate n'a pas dépassé 40%.
L'augmentation du nombre d'équivalents d' alanine et/ou du temps de réaction de la deuxième étape n'a pas permis d'améliorer cette conversion (schéma ci-dessous).
Figure imgf000038_0001
R=H1CH3 [HMPhBTMA-CxAA][X] Par contre, le greffage d'un β-aminoacide (β-Alanine) à [HMPhBTMA][PF6] par la méthode développée pour l'acide isonipécotique est quantitative, sans doute du fait que la fonction aminé est plus nucléophile que dans le cas des α-aminoacides.
L'utilisation de la N-méthylmorpholine (NMP) au lieu de la pyridine comme base permet un greffage quantitatif de l'acide isonipécotique en 6 heures (contre 18 lorsque la pyridine est utilisée). L'avantage majeur apporté par cette base est que le greffage d'esters méthyliques d' α-aminoacides est possible. Ainsi, les esters méthyliques de la phénylalanine, de la leucine et de la glycine ont été greffés avec des rendements de 88 à
98%. La glycine étant l'un des aminoacides les moins solubles et son aminé étant l'une des moins nucléophiles, le greffage d'autres α-aminoacides ne devrait pas poser de problème.
Le traitement du milieu réactionnel consiste à évaporer le DMF du milieu réactionnel. Le résidu obtenu est ensuite lavé à Péther puis dissous dans du DCM. La phase organique est alors lavée à l'eau puis par une solution aqueuse de HPF6 évitant ainsi le problème de métathèse d'anion.
• Greffage, dj'.amirω^
Des groupes protecteurs de la fonction acide autres que des esters méthyliques ont été envisagés. Ainsi, le greffage de l'ester t-butylique de l'alanine est effectif dans les mêmes conditions que celles développées pour les aminoesters méthyliques avec un rendement de 84% en [HMPhBTMA-AIa-OtBu][PF6] isolé. Le produit est contaminé par seulement 3% de [HMPhBTMA][PF6] (alcool non greffé).
Le traitement développé pour la réaction avec les aminoesters méthyliques peut être reproduit avec les esters tertio-butyliques. En particulier, les lavages aqueux acides ' effectués lors du traitement pour éliminer l'excès d'aminoester n'entraînent pas de clivage de l'ester tertiobutylique, bien que celui-ci soit sensible aux conditions acides.
De même, l'ester de tri-terbutoxysilyle de l'alanine a également été synthétisé puis greffé par analogie aux travaux de Hallberg. La formation du carbamate
[HMPhBTMA-AIa-OSiI][PF6] est quantitative en 3 heures d'après la RMN 1H. Dans ce cas, le produit n'est pas contaminé par du support libre [HMPhBTMA-AIa-OSiI][PF6].
Le greffage est total.
Figure imgf000040_0001
R= t-Bu [HMPhBTMA-AIa-OtBu][PF6] : 84% R= Si(OtBu)3[HMPhBTMA-AIa-OSI][PF6]: 95%
C- Couplage peptidique
• Cpuplage.peptMique.avec un.α-aminp.este
La réaction de [HBuTMA- Aiso] [NTf2] et de Pisopropylamine dans Pacétonitrile ou le [TMBA][NTf2] conduit à l'amide attendue avec 95% de rendement.
Le couplage de [HBuTM A- Aiso] [NTf2] et de l'ester méthylique de la glycine a été effectué dans le CH3CN (Schéma ci-dessous). La liaison peptidique est créée quantitativement et le produit de substitution au niveau de la fonction carbamate ne se forme pas. Les mêmes bons résultats sont obtenus avec les supports [HMPbBTM A- Aiso][NTf2] et [HHeTMA- Aiso] [NTf2] aussi bien dans l'acétonitrile que dans le [TMBA][NTf2]. Un criblage du nombre d'équivalents des réactifs HOBt/DCC et GIy- OMe.HCl (1,05 ; 1,2 ; 1,5 ou 2,0 équivalents et le double de TEA) a montré que les conditions optimales sont l'utilisation de 1,5 équivalents de chaque réactif (3,0 de TEA). La conversion excède alors les 95% (aucune trace de sel de départ en RMN).
Figure imgf000041_0001
[HBuTMA-AiSo][NTf2] [HBuTMA-AiSO-NHiPr][NTf2]
Figure imgf000041_0002
[HBuTMA-AiSO][NTf2]
Figure imgf000041_0003
[HBuTMA-AiSo-GIyOMe][NTf2]: 95%
NTf2
Figure imgf000041_0004
>95%
Figure imgf000041_0005
Un screening des carbodiimid.es les plus couramment utilisés a été effectué en engageant AIa-OMe et non GIy-OMe dans la réaction de couplage. La conversion est quantitative avec le DCC, le DIC et EDCHCl. Nous avons choisi de continuer ces études avec le DCC qui est le réactif le moins cher. Cependant, lorsque les réactions sont effectuées sur de grosses quantités, il est préférable d'utiliser le DIC dont l'urée DIU est plus facile à éliminer que la DCU.
• Traitement de .la réaction
La meilleure technique de purification pour les réactions réalisées dans l'acétonitrile est, après élimination du solvant, de réaliser une chromatographie sur colonne d'alumine neutre avec comme éluant le DCM qui permet dans un premier temps d'éliminer tout ce qui n'est pas accroché au sel d'onium à tâche spécifique puis d'éluer les sels avec un mélange DCM/MeOH à 1 à 2%. La réaction a alors été diversifiée à d'autres aminoesters tels que AIa-OMe, Leu-OMe, VaI-OMe et Phe-OMe : [HMPhBTMA-Aiso-Ala-OMe] [NTf2], [HMPhBTMA-Aiso-Leu-OMe] [NTf2],
[HMPhBTMA-AiSO-VaI-OMe][NTf2], [HMPhBTMA-Aiso-Phe-OMe] [NTf2] ont été obtenus. La conversion est supérieure à 95% et la purification par chromatographie sur alumine s'avère très efficace : les peptides supportés sont obtenus avec une grande pureté et peuvent être engagés dans les réactions suivantes de clivage du support ou de déprotection de l'acide pour continuer la synthèse peptidique. Les rendements en produits isolés purs avoisinent les 65%.
Une autre alternative consiste à changer le contre-ion du sel d'onium support en substituant le TSTTf2 par un ion "PF6 (utilisation de [HMPhBTMA][PF6] à la place de [HMPhBTMA][NTf2]). Il est alors possible d'effectuer des lavages aqueux acides par des solutions de HPF6 (plus de problème de métathèse, le contre-ion de la solution de lavage et du sel d'ammonium étant les mêmes) et d'éliminer plus facilement AA-OMe : les lavages aqueux par HPF6 entraînent la formation de [H3N-AA-OMe][PF6]. Or, PF6 étant moins lipophile que NTf2, cette espèce passe en phase aqueuse. Le nouveau traitement consiste donc en une filtration du milieu réactionnel.
L'acétonitrile du filtrat est alors évaporé. Le résidu est dissous dans le DCM et cette phase est lavée trois fois à l'eau, puis trois fois par une solution aqueuse de HPF6 (l<pH<2). La phase organique est séchée sur Na2SO4, filtrée et le DCM est évaporé. Le résidu est alors lavé à l'éther. Le rendement est d'environ 85% pour un dipeptide supporté (contre 65% lorsque le contre-ion est NTf2 après purification sur colonne d'alumine). [HMPhBTMA-Aiso-Ala-OMe] [PF6] et [HMPhBTMA-Aiso-Leu- OMe] [PF6] ont été synthétisés en suivant ce protocole.
Outre le fait que l'utilisation du sel [HMPhBTMA][PF6] soit associée à un traitement plus facilement automatisable, le prix de revient des sels d'ammonium comportant "PF6 comme anion est plus faible que ceux comportant un TSfTf2 (LiNTf2 beaucoup plus coûteux que KPF6).
• Déprpteçtion.de .la .fonction acide .terminale L'étape de déprotection de la fonction acide terminale intervient : - soit au stade dipeptide supporté lorsque le premier aminoacide greffé est l'acide isonipécotique, et que le second est un α-aminoester ; - soit juste après le greffage si la fonction acide du premier aminoacide greffé est protégée. a) Cas des esters méthyliques
La réaction des esters méthyliques avec le triméthylsilanolate de potassium en excès conduit aux sels de potassium des acides carboxyliques correspondants. Dans le cas des dipeptides au départ de l'acide isonipécotique, les rendements sont quantitatifs : aucun clivage n'est observé au niveau du carbamate. Dans le cas où le premier greffage est réalisé avec un aminoester naturel, on observe un clivage partiel de 5 à 10% au niveau de la fonction carbamate libérant ainsi le support de départ. Les conditions
(temps de réaction, nombre d'équivalents de Me3SiOK, séchage du support) ont été modifiées mais sans amélioration. Ce clivage provoque une chute du rendement. Cependant, une simple filtration sur célite suffit à éliminer les substrats non accrochés au support et permet de poursuivre la synthèse peptidique dans de bonnes conditions.
Les dipeptides [HMPhBTMA-Aiso-Leu-OK] [PF6], [HMPhBTMA- Aiso-Phe- OK][NTf2] et [HMPhBTMA-AiSo-VaI-OK][NTf2] dont la fonction acide terminale est déprotégée ont été obtenus. Les aminoacides déprotégés supportés [HMPhBTMA-Leu- OK][PF6] et [HMPhBTMA-GIy-OK][PF6] ont également été synthétisés. b) Cas des autres esters
Les esters méthyliques sont clivés dans des conditions relativement dures (Me3SiOK) qui favorisent la racémisation. C'est pourquoi l'utilisation d'autres esters a été envisagée. Le clivage de [HMPhBTMA-AIa-OtBu][PF6] aussi bien à l'aide d'HCl aqueux ou anhydre ou de HPF6 conduit à un clivage partiel ou total de la liaison carbamate.
L'utilisation d'α-aminoesters de tri-terbutoxysilyle supporté a alors été envisagée, mais le clivage de l'ester conduit également au clivage du support dans les conditions testées (conditions 1 : solution aqueuse de HPF6 à 60%/MeCN : 5/95, 20 minutes à température ambiante ; conditions 2 : 0,2 équivalent de HPF6 par rapport au support, 20 minutes à température ambiante). Hallberg utilise le TFA pour déprotéger la fonction acide terminale, mais l'emploi de ce réactif n'a pas été envisagé car la liaison carbamate du greffage est clivée dans ces conditions. • Po.ujsuite.deja.sy^thèsepeptidi.que Les dipeptides [HMPhBTMA-LeU-AIa-OMe][PF6] et [HMPhBTMA-GIy-AIa-
OMe][PF6] ont été synthétisés selon le schéma suivant :
Figure imgf000044_0001
[HMPhBTMA][PF6] 5 à 15%
Figure imgf000044_0002
[HMPhBTMA-AA-AIa-OMe][PF6] AA = Leu ou GIy
Dans le cas où le premier aminoacide greffé est l'acide isonipécotique, les étapes de greffage, de couplage peptidique et de clivage du groupe protecteur de la fonction acide terminale sont au point, et la synthèse peut donc être poursuivie (voir schéma ci- dessous). Les tripeptides [HMPhBTMA- Aiso-Leu-Gly-OMe] [PF6], [HMPhBTMA- Aiso-Leu-Phe-OMe][PF6], [HMPhBTMA- Aiso-Leu-Val-OMe] [PF6], [HMPhBTMA- Aiso-Phe-Leu-OMe] [NTf2] ont ainsi été synthétisés.
Figure imgf000044_0003
X = PF6 ou NTf2 AA-i = Leu, Phe AA2 = Giy, Phe, Val, Leu Synthèse de tripeptides supportés. • .Glivage.du support
[HMPeTMA-AiSO-NHBn][I] est clivé quantitativement en 2,5 heures par un mélange de TFA/DCM : 1/1 comme suit :
Figure imgf000045_0001
,CFoCOO
[HMPeTMA-AiSO-NHBn][I] [HMPeTMA-CO-CF3][I]
Schéma : Clivage de [HMPeTMA-Aiso-NHBn] [I] par le TFA
Le carbamate de [HBuTMA- Aiso-NHiPr] [NTf2] n'est pas clivé en milieu acide, ni par une solution aqueuse HCl 12N5 ni par un mélange TFA/DCM : en 24h à température ambiante, seuls 10% du produit réagit pour donner le peptide libre et le trifluoroacétate correspondant. L'utilisation de cinq équivalents de Me3SiI par rapport à
[HBuTMA-AiSO-NHiPr][NTf2] permettent de cliver le support (voir schéma ci- dessous). La réaction est terminée au bout de quatre heures dans l'acétonitrile à 5O0C. Quatre équivalents de MeOH sont alors ajoutés au milieu réactionnel. Après évaporation des solvants, l'ajout de DCM et d'eau au résidu permet de séparer le sel du peptide. La liaison amide n'est pas clivée dans ces conditions.
)
Figure imgf000045_0002
Clivage de [HBuTMA-Aiso-NHiPr] [NTf2] par Me3SiI.
Le clivage du carbamate de [HMPhBTMA- Aiso- AA-OMe] [NTf2] a été réalisé avec succès par le TFA. Les conditions de la réaction sont optimales pour 10 équivalents de TFA par rapport au support dans l'acétonitrile en solution 10 à 20%. La réaction dure 10 minutes à température ambiante. Après évaporation des solvants, un mélange d'eau et de DCM est ajouté au résidu. Le peptide libéré se solubilise en phase aqueuse alors que le support, sous forme d'ester trifluoroacétique, reste en phase organique (voir schéma ci-dessous). Le rendement en produit brut est de 95%. Les peptides Aiso-Leu-OMe, Aiso-Phe-OMe et Aiso-Val-OMe ont ainsi été isolés.
Figure imgf000046_0001
[HMPhBTMA-CO-CF3][NTf2] soluble en phase organique
Clivage de [HMPhBTMA-Aiso-AA-OMe] [NTf2] par du TFA.
Le clivage de [HMPhBTMA- Aiso] [PF6] avec 1,5 équivalents de TMSBr dans Pacétonitrile est quantitatif en 30 minutes. Il suffît alors d'évaporer le solvant et d'ajouter du DCM et de l'eau au résidu pour séparer le peptide du support. Le rendement brut avoisine 95%. Le support [HMPhBTMA][PF6] n'est pas régénéré dans ces conditions.
Figure imgf000046_0002
soluble en phase organique
Figure imgf000046_0003
Figure imgf000046_0004
soluble en phase aqueuse
Clivage du support par le TMSBr III - SYNTHESE PEPTIDIOUE PAR VOIE DIRECTE
L'objectif est de tester la faisabilité de la synthèse peptidique supportée sur liquide ionique ou sel d'onium à tâche spécifique en greffant l'aminoacide par sa fonction acide au support et en effectuant les réactions de couplage sur la fonction aminé ainsi supportée. La synthèse a été envisagée avec la stratégie Fmoc qui est la plus couramment utilisée.
Le principe de la synthèse peptidique directe supportée sur sel d'onium à tâche spécifique est le suivant :
Figure imgf000047_0001
Déprotection
Figure imgf000047_0003
Figure imgf000047_0002
Couplage peptidique dipeptide
.OH
Dans ce schéma, ^**" représente soit un liquide ionique binaire, c'est-à-dire une solution d'un sel d'onium à tâche spécifique portant une fonction hydroxyle dans une matrice liquide ionique, soit une solution d'un sel d'onium à tâche spécifique portant une fonction hydroxyle dans un solvant moléculaire.
Un premier aminoacide est greffé au support par estérification. La fonction aminé terminale est alors déprotégée avant d'être engagée dans la réaction de couplage peptidique avec un second aminoacide. Après déprotection, une dernière étape de clivage permet de libérer le peptide formé et de régénérer le support.
Trois générations de supports ont été étudiées. La structure du support a été modifiée et optimisée pour que la liaison ester servant au greffage soit stable dans les conditions des synthèses et des traitements des milieux réactionnels.
A- Supports :
Les sels à tâche dédiée [HHeTMA][NTf2] et [HMPhBTMA][NTf2] ont été utilisés.
Figure imgf000047_0004
Les réactions d'estérification de ces deux supports en présence de 1.5 équivalents de DCC ; 0,1 de DMAP et 1,1 de Fmoc-alanine dans Pacétonitrile sont quantitatives d'après le suivi RMN. Le rendement après traitement avoisine les 90%. Le schéma ci- dessous représente l'estérification entre [HHeTMA][NTf2] ou [HMPhBTMA][NTf2] et la Fmoc-alanine.
Figure imgf000048_0001
Le traitement est aisé : la majorité de l'urée est éliminée par filtration. Les traces d'urée restantes et l'excès d'aminoacide sont éliminés par lavages à l'éther. Les aminoacides supportés [FmocAla-HHeTMA] [NTf2] et [FmocAla-HMPhBTMA] [NTf2] sont alors dissous dans le DCM puis sont extraits par deux fois un dixième en volume de solution aqueuse de HCl IN, ce qui élimine les traces de DMAP restantes.
Aucun problème de stabilité des produits n'a été observé (pas de clivage de l'ester ni du groupe protecteur de l'aminé terminale).
B- Déprotection de Ia fonction aminé terminale :
Le groupement Fmoc est clivé par un mélange 1/5 pipéridine/DMF en 15 minutes. La déprotection de [FmOcAIa-HHeTMA][NTf2] et [FmocAla-HMPhBTMA] [NTf2] est effective dans Pacétonitrile anhydre. Le traitement consiste à évaporer le solvant puis à extraire le résidu obtenu à l'éther pour éliminer les produits de dégradation du Fmoc. Le rendement est supérieur à 90%. Cette étape de déprotection de la fonction aminé terminale de [FmocAla-HHeTMA] [NTf2] ou [FmocAla-HMPhBTMA] [NTf2] est représentée comme suit :
Figure imgf000049_0001
Le clivage de la fonction ester n'a pas lieu pendant la déprotection, ce qui confirme que les supports utilisés sont stables dans les conditions mises en œuvre.
C- Couplage Peptidique :
La Fmoc-leucine a été sélectionnée pour l'étude du couplage peptidique car cet aminoacide (ainsi que la Fmoc-alanine) est celui qui pose le moins de problèmes lors de la réaction (rendements excellents, pas de protection de la chaîne latérale, formation de dicétopipérazine moindre par rapport à la glycine et à la proline). Les conditions classiques de réaction sur support solide ont été appliquées (1,5 équivalents de DCC, HOBt, TEA et de Fmoc-leucine dans un mélange DCM/DMF : 1/1, deux heures de réaction à température ambiante) dans Pacétonitrile. La conversion est totale d'après la RMN. L'étape de couplage peptidique entre [AIa-HHeTMA][NTf2] ou [AIa- HMPhBTMA][NTf2] et la Fmoc-leucine est représentée comme suit :
Figure imgf000049_0002
Le traitement des réactions a été optimisé de façon similaire aux études pour la synthèse peptidique par voie inverse. Après filtration et évaporation de Pacétonitrile, le résidu est dissous dans le DCM et cette phase est lavée avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique pour éliminer [HNEt3][OBt]. Dans le cas où la réaction de couplage n'a pas été totale, ce lavage présente également l'avantage d'éliminer le produit de départ [AIa-HHeTMA][NTf2] ou [AIa-HMPIiBTMA][NTf2] : en effet les sels ayant une aminé libre protonée passent en phase aqueuse acide, alors que le produit attendu dont l'aminé terminale est protégée par un groupement Fmoc reste en phase organique. La DCU et la Fmoc-leucine en excès sont alors éliminées par des lavages à l'éther. Les rendements sont supérieurs à 85%.
D- Déprotection de Ia fonction aminé terminale :
La déprotection de [Fmoc-Leu- AIa-HMPhBTMA] [NTf2] par la pipéridine est effective mais 15% de produits de clivage du support sont observés. Le suivi par RMN grâce au -CH2- du benzyle montre la présence de l'alcool supporté [HMPhBTMA][NTf2].
Le clivage par formation de dicétopipérazine au stade dipeptide supporté déprotégé est un problème récurrent observé lors de la synthèse de peptides par la technologie Fmoc sur résine de Wang (analogue à [HMPhBTMA][NTf2]). Le clivage observé est dû au même phénomène. Cette réaction consiste en l'attaque hucléophile de l'aminé terminale sur la fonction ester servant au greffage (voir schéma ci-dessous). Elle provoque non seulement une chute du rendement de la synthèse, mais aussi l'apparition de séquences peptidiques comportant des suppressions d'aminoacides par greffage sur le support qui a été régénéré.
Le schéma ci-dessous représente le mécanisme de formation de la dicétopipérazine DKP.
Figure imgf000050_0001
[HMPhBTMA][NTf2]
DKP Les mêmes résultats sont observables pour la déprotection de [Fmoc-Leu-Ala- HHeTMA][NTf2].
• Réactions .dans .les. liquides, ioniques La faisabilité des réactions dans les liquides ioniques (déprotection de [Fmoc-
AIa-HMPhBTMA][NTf2], couplage peptidique avec la Fmoc-leucine, déprotection de [Fmoc-Leu- AIa-HMPhB TMA] [NTf2]) a également été testée avec le support ([HMPhBTMA][NTf2] / quatre équivalents de liquide ionique [tmba] [NTf2]) en conservant les mêmes protocoles expérimentaux (ajout d'acétonitrile pour garantir une bonne agitation, traitements identiques). Les rendements sont comparables à ceux observés pour les manipulations dans les solvants organiques classiques.
Le suivi des réactions avec le support benzylé [HMPhBTMA] [NTf2] est facile car le support absorbe en UV. Les temps de rétention des peptides supportés non protégés par le groupement Fmoc sont inférieurs à ceux des peptides protégés : la technique semble donc adéquate pour suivre les réactions de couplage et de déprotection du groupement Fmoc.
E- Mise au point d'un autre Support TCTMPTTMAI TNTf7I : Les travaux précédents nous ont conduit à étudier le support
[CTMPTTMA][NTf2] représenté ci-dessous :
L'objectif était de créer un sel à tâche dédiée (par analogie aux supports solides existants) pour lequel le clivage par formation de DKP au stade dipeptide supporté déprotégé soit négligeable.
Dans les conditions de réaction et de traitement développées pour la synthèse sur sel d'onium, le support doit être insoluble dans l'eau (extractions DCM/eau) ; stable en milieu aqueux acide (lavages aqueux acides après les réactions de couplage peptidique) et stable en milieu basique (emploi de pipéridine, TEA, DMAP). a) Greffage du Premier Aminoacide
Le greffage du premier aminoacide est effectué en plusieurs étapes.
L'alcool en position benzhydrilique de [HTMPPTMA][Br] est substitué quantitativement par un chlore par réaction avec 1,5 équivalents de chlorure de thionyle en 20 minutes dans Facétonitrile anhydre. Le Fmoc-aminoacide est greffé par estérification en 30 minutes :
Figure imgf000052_0001
Cl]
Le contre-ion du support est soit un bromure (anion initial du sel d'onium), soit un chlorure (métathèse lors de l'étape de chloration). L'expérience montre que [FmOC-AA1-HTMPTTMA][Br ou Cl] n'est pas soluble dans l'eau, ce qui est essentiel pour les traitements mis au point précédemment. Une réaction de métathèse du contre- ion a tout de même été envisagée, d'une part pour connaître la nature exacte de cet anion, d'autre part pour éviter de conserver des contre-ions à caractère nucléophile qui pourraient être à l'origine de réactions secondaires. L'anion hexafluorophosphate a été choisi puisqu'il est possible de réaliser des lavages avec une solution aqueuse de HPF6 sans craindre des réactions d'échange d'anions. Une métathèse du contre-ion est alors effectuée par KPF6 en deux heures dans Pacétonitrile :
Figure imgf000052_0002
La fonction aminé terminale peut alors être déprotégée par la pipéridine dans les mêmes conditions que celles développées pour les autres sels à tâche dédiée :
Figure imgf000053_0001
[Fmoc-AArHTMPPTMA][PF6] [AA1-HTMPPTMA][PF6]
Le rendement moyen sur ces quatre étapes est de 85% environ. Le taux de greffage est quantitatif : il ne reste pas de [HTMPTTMA][PF6] libre. [AIa- HTMPPTMA][PF6], [GIy-HTMPPTMA][PF6], [He-HTMPPTMA][PF6], [Leu- HTMPPTMA][PF6], [Phe-HTMPPTMA] [PF6] et [VaI-HTMPPTMA][PF6] ont ainsi été synthétisés.
b) Couplage Peptidique
Le couplage peptidique a été testé (1,5 éq. de TEA, de Fmoc-aminoacide, de HOBt et de DCC (ou DIC)) et est quantitatif :
Figure imgf000053_0002
AA-I
Figure imgf000053_0003
[FmOC-AA2-AA1-HTIVIPPTyA][PFg]
AA1 = Val, Leu, GIy, Phe, lie, AIa
AA2 = AIa, GIy, Ile, Leu, Val
Le traitement est le même que celui développé pour la voie inverse : Le milieu réactionnel est filtré. Après évaporation de l'acétonitrile, le résidu est dissous dans du DCM. Cette phase est lavée à l'eau puis par une solution aqueuse de HPF6. Après séchage et évaporation, le résidu est alors lavé à l'éther. [Fmoc-Ala-Ile- HTMPPTMA][PF6], [Fmoc-Ala-Phe-HTMPPTMA][PF6], [Fmoc-Ala-Val-
HTMPPTMA][PF6], [Fmoc-Gly-Leu-HTMPPTMA][PF6], [Fmoc-Gly-Phe-
HTMPPTMA][PF6], [Fmoc-Gly-Val-HTMPPTMA][PF6], [Fmoc-Ile-Leu-
HTMPPTMA][PF6], [Fmoc-Leu- AIa-HTMPPTMA] [PF6] et [Fmoc-Val-Ile- HTMPPTMA][PF6] ont ainsi été synthétisés. Le rendement en produit isolé est de l'ordre de 85%.
Aucun clivage du support n'est observé lors des lavages aqueux acides (benzhydrile sensible aux conditions acides), probablement du fait du milieu biphasique.
Les méthodes de couplage utilisant les carbodiimides (DCC, DIC ou EDCI) et HOBt ont été appliquées avec succès. Ces réactifs ont été choisis car ils sont couramment utilisés et ce ne sont pas des sels. Ces études ont conduit à utiliser finalement des supports sels d'ammonium avec un contre ion "PF6. Or, il existe dans la littérature de nombreux réactifs sous forme de sel comportant ce même contre-ion. Leur utilisation n'entraînerait donc pas de réaction de métathèse indésirable.
Le réactif de couplage HBTU, très souvent utilisé en synthèse peptidique, a donc été utilisé (1,5 équivalents, toutes , PFβ autres conditions conservées par ailleurs) avec succès. L'élimination de l'excès de réactif et des produits de
Figure imgf000054_0001
dégradation est totale lors du traitement (lavages à l'éther et HBTU extraction aqueuses acides), et est même plus facile que l'élimination totale des urées issues des carbodiimides (DIU, DCU) par la méthode précédente, en particulier pour les synthèses sur grosses quantités. La technologie décrite ici est donc adaptable à d'autres méthodes de couplage, en particulier à tous les réactifs sous forme de sel avec un contre ion "PF6 (BOP, PyBOP, PyBroP, HATU, HAPyU, HAPipU...).
Le temps de la réaction de couplage peptidique est de 30 minutes, et les conversions des réactions de couplage sont toujours quantitatives.
c) Déprotection de la fonction aminé et clivage par formation de DKP
L'étape suivante est la déprotection de la fonction aminé terminale. Pour minimiser la formation de dicétopipérazine, il faut minimiser le temps de vie du dipeptide supporté déprotégé et l'engager le plus vite possible dans la réaction de couplage peptidique suivante. Le groupement Fmoc est clivé par un mélange 1/5 MeCN/pipéridine, suivi de lavages par une solution aqueuse de HPF6 : 5%de DE-P sont obtenus.
Figure imgf000055_0001
En effet, ceux-ci provoquent la protonation de l'aminé terminale qui n'est donc plus nucléophile et ne peut plus attaquer la fonction ester servant au greffage. Ces lavages sont possibles car [H3N-AA2-AA1 -HTMPPTMA] ([PF6])2 est plus soluble dans le dichlorométhane qu'en phase aqueuse, car le bras espaceur du sel d'onium est lipophile. La formation de DKP est bien minimisée par rapport au sel [Leu-Ala- HMPhBTMA][NTf2] (15% de clivage).
d) Poursuite de la synthèse peptidique Le couplage peptidique avec un troisième Fmoc-aminoacide a été effectué
Figure imgf000055_0002
[Fmoc-Gly-Ala-Phe-HTMPPTMA][PF6], [Fmoc-Leu-Ala-Phe-HTMPPTMA] [PF6], [Fmoc-Val-Gly-Phe-HTMPPTMA][PF6] et [Fmoc-Val-Leu-Ala-HTMPPTMA][PF6] ont ainsi été synthétisés. Le spectre RMN1H à 300MHz dans l'acétone d6 est donné ci- dessous.
e) Clivage du support
Le clivage a été mis au point sur [AIa-HTMPTTMA][PF6] et [Val-Leu-Ala- HTMPTTMA][PF6]. Le peptide supporté est solubilisé dans le méthanol et 0,01 éq. d'une solution aqueuse de HPF6 sont ajoutés. Le mélange est porté une heure à reflux. Le clivage est quantitatif dans ces conditions. Le méthanol est alors évaporé. Du DCM et de l'eau sont alors ajoutés au résidu. L'aminoacide ou le peptide libéré est soluble en phase aqueuse alors que le sel d'onium et ses dérivés sont solubles en phase organique. Le rendement brut en peptide isolé est d'environ 85%.
Figure imgf000056_0001
et dérivés soiubles en phase organique
Après clivage, trois sels d'onium sont obtenus : l'alcool [HTMPTTMA][PFg] (environ 35%), l'éther méthylique [Me-HTMPTTMA][PF6] (environ 60%) et le dimère [HTMPTTMA-O-HTMPTTMA][PF6] (environ 5%) identifiés par RMN et HPLC/SM. L'ajout de chlorure de thionyle à ce mélange permet d'obtenir quantitativement le dérivé chloré, qui est le précurseur permettant de recommencer une nouvelle synthèse peptidique. La régénération du support est donc possible.
Figure imgf000057_0001
F- Etude de Ia racémisation :
Pour valider la méthodologie de synthèse peptidique sur support sel d'onium, il est essentiel d'étudier la racémisation, qui est un paramètre important en synthèse peptidique.
Marfey a décrit une méthode qui permet non seulement de déterminer le taux de racémisation lors du greffage du premier aminoacide sur le support, mais aussi d'étudier la racémisation lors de la synthèse peptidique. Le principe est le suivant : L' aminoacide à analyser réagit avec le réactif de Marfey en présence de base pour former le diastéréoisomère correspondant qui absorbe fortement en UV à 340 nm (voir schéma ci- dessous). Celui-ci est injecté en HPLC sur phase inverse. Le temps de rétention du diastéréoisomère L-L est inférieur à celui du D-L : les interactions intramoléculaires par liaisons H sont plus fortes pour ce dernier diastéréoisomère, ce qui le rend plus hydrophobe, il interagit donc plus fortement avec la colonne HPLC et donc son temps de rétention est plus élevé. Cette méthode a l'avantage d'être sensible (le chromophore formé absorbe beaucoup en UV, et seul le réactif de Marfey n'ayant pas réagi est susceptible d'interférer à cette longueur d'onde), efficace (le réactif de Marfey est très réactif) et rapide.
Cette méthode a été généralisée à l'étude de la racémisation pour des peptides.
Le schéma ci-dessous représente le geffage du chromophore par réaction entre V aminoacide à analyser et le réactif de Marfey :
Figure imgf000058_0001
réactif de Marfey FDAA diastéréomère L-L diastéréomère D-L L-AA-DNPA D-AA-DNPA
L'étude a été réalisée sur le peptide modèle Val-Leu-Ala.
Premièrement, un mélange racémique d'alanine (commercial) a été mis à réagir avec le réactif de Marfey puis injecté en HPLC comme référence. Les conditions HPLC ont été optimisées pour ce mélange. Après plusieurs mesures, le pourcentage des aires des pics de L-AIa-DNPA et D-AIa-DNPA sont respectivement de 48,% et 51,% (valeurs statistiques) contre 50% attendus pour chacune. L'incertitude est de ± 1,5%, ce qui est relativement important pour une étude de racémisation, mais qui permettra tout de même d'avoir une première estimation sérieuse.
Ensuite, la Fmoc-L-alanine a été greffée au support [HTMPPTMA][PF6] dans les conditions précédemment décrites, puis la fonction aminé a été déprotégée et l'aminoacide a été clivé du sel à tâche dédiée. Le diastéréoisomère a été synthétisé par réaction entre l'alanine libérée et le réactif FDAA selon les conditions décrites par Marfey, puis il a été injecté en HPLC dans les conditions C (voir ci-après - partie expérimentale). 1,3% de D-AIa-DNPA sont obtenus, ce qui est de l'ordre de la marge d'erreur de 1,5% : la racémisation semble être négligeable lors de l'étape de greffage.
La synthèse peptidique a été poursuivie à partir de [L-AIa-HTMPPTMA][PF6]. La nature des réactifs de couplage influence la racémisation, c'est pourquoi les couplages peptidiques ont été effectués en parallèle soit avec DIC/HOBt, soit avec HBTU. Ainsi, le dipeptide L-Leu-L-Ala a été clivé du support, mis à réagir avec le réactif de Marfey et injecté en HPLC dans les conditions D (voir ci-après - partie expérimentale). Le temps de rétention de L-Leu-L- AIa-DNPA est beaucoup plus élevé que celui de L-AIa-DNPA, c'est pourquoi il a été nécessaire d'adapter les conditions d'élution (éluant 15/85 : acétonitrile/eau pour AIa-DNPA contre 20/80 : acétonitrile/eau pour Leu- AIa-DNP A). Le pic de D-Leu-L- AIa-DNP A n'est pas observé. La même procédure a été suivie pour le tripeptide L-Val-L-Leu-L-Ala. Les tripeptides D-Val-L-Leu-L-Ala et L-Val-D-Leu-L-Ala ont également été synthétisés sur [HTMPPTMA][PF6], greffés sur le FDAA après clivage du support et injectés en HPLC. Les temps de rétention de références sont de 19,1 min pour D-Val-L-Leu-L-Ala- DNPA, qui n'est pas visible sur les spectres de L-Val-L-Leu-L-Ala-DNPA, et 20,6 min pour L-Val-D-Leu-L- AIa-DNP A, présent à 1% sur les spectres de L-Val-L-Leu-L-Ala- DNPA, que les couplages peptidiques aient été effectués par HOBt/DIC ou HBTU, ce qui est de l'ordre de grandeur de la marge d'erreur.
Ces résultats permettent de constater que la racémisation est faible à l'étape de greffage et lors des réactions de couplage peptidique.
IV - SYNTHESE CONVERGENTE
A- La synthèse convergente dans Ia littérature :
La synthèse en solution de peptides de moins de cinq aminoacides est effectuée par une stratégie linéaire alors qu'une approche convergente est préférable pour les peptides dont la chaîne est plus longue. Dans ce cas, un choix judicieux des fragments (taille, raccords au niveau d' aminoacides peu sensibles à la racémisation), des groupes protecteurs et des méthodes de couplage est primordial. Les problèmes principaux sont la racémisation et surtout la faible solubilité des fragments.
La synthèse sur support solide par stratégie linéaire est souvent peu adaptée à la fabrication de longs peptides : le peptide final est contaminé par des peptides dont la chaîne comporte des suppressions d'aminoacides, et la purification est souvent problématique.
Ceci a conduit au développement de la synthèse peptidique convergente en phase solide (CSPPS) ou synthèse en phase solide par condensation de fragments (SPFC). Cette approche dite hybride combine la synthèse en solution et la synthèse sur supports solides : les fragments sont synthétisés sur support solide (en général ils comportent moins de 15 aminoacides) puis,
- soit un seul des deux fragments est clivé ; l'autre reste greffé à la résine et le couplage peptidique suivant est effectué en phase hétérogène ;
- soit clivés tous les deux et couplés en solution (méthode parfois avantageuse lorsque le rendement du couplage peptidique en phase hétérogène est faible (« séquences difficiles ») et parce que les deux fragments peuvent être utilisés en quantités équimolaires).
Le schéma représente le principe de la synthèse convergente sur phase solide :
GP' GP-AA6-AA7-AA8
Clivage du peptide protégé Purification
GP" GP' GP'
GP-AA6-AA7-AA8-COOH H2N-AA9-AAI0-AA1I-AA12 •
GP' GP1 GP-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5
Couplage peptidique sur le support solide
Clivage du peptide protégé Déprotection du N terminal Purification
GP' GP' GP' GP1 GP' GP-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-COOH H2N-AA6-AA7-AA8-AA9-AA1O-AA11-AAI2 -
Couplage peptidique sur le support solide Déprotection du N terminal
GP1 GP' GP1 GP1 GP'
GP-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AAe-AA7-AA8-AAg-AA10-AA11-AAi2
Clivage du peptide protégé
Déprotection
Purification
AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-AA1O-AA1 1-AA12
GP groupe protecteur de l'aminé terminale support solide AA aminoacide GP1 groupe protecteur des fonctions des chaînes latérales
II y a de plus en plus de supports solides qui peuvent être clivés dans des conditions douces (résine SASRIN par exemple) ce qui permet de conserver les groupes protecteurs des chaînes fonctionnelles des fragments, qui sont essentiels pour la suite de la synthèse. Chaque fragment peut être purifié et caractérisé individuellement. L'introduction du premier fragment peut être effectuée en le synthétisant par synthèse linéaire sur la résine ou en le greffant directement (l'avantage est que le fragment a été purifié auparavant mais en général les rendements des réactions de greffage de fragments sur une résine sont faibles).
Divers paramètres doivent être étudiés scrupuleusement avant la synthèse : la nature de la (ou des) résines, des fragments, des groupes protecteurs, les méthodes de couplage peptidique et de clivage des résines, les temps de réaction et le nombre d'équivalents de fragments. Il est essentiel que le fragment libre soit soluble dans le solvant utilisé pour le couplage peptidique en phase hétérogène suivant, et ces problèmes de solubilité à l'origine de mauvaises réactivités sont la plus grosse limitation de la méthode, d'autant plus qu'ils ne sont pas toujours prévisibles. Les risques de racémisation doivent également être pris en compte.
La synthèse convergente peut aussi consister à faire réagir ensemble deux fragments supportés. Ceci n'est pas possible à partir de fragments liés à des supports solides car ces fragments sont accrochés à des billes distinctes et la probabilité pour qu'ils se rencontrent est voisine de zéro. Cependant, la synthèse de biaryles par couplage de Suzuki entre un iodure d'aryle et un acide boronique chacun supporté sur un monométhoxypoly(éthylene glycol) a été réalisée en solution (K.D. Janda et al. Chem Comm. 2003, 480-481) avec des rendements variant de 72 à 95% avec des puretés allant de 50 à 95%. La purification par HPLC des produits impurs s'est avérée difficile. Un autre problème est lié à la très faible charge spécifique de ces supports due à leur grande masse moléculaire. Les quantités de produits mises en jeu sont alors homéopathiques.
B- La synthèse convergente supportée sur sel d'onium : La synthèse peptidique sur sel d'ammonium est effectuée dans des conditions homogènes. Les synthèses convergentes peuvent donc être effectuées en couplant en solution des peptides supportés sur sels d'onium ayant été synthétisés l'un par voie inverse, l'autre par voie directe. Deux tripeptides supportés ont ainsi été couplés, formant ainsi un hexapeptide. La réaction a été réalisée avec 1,0 équivalent de chaque peptide supporté ; 1,5 équivalents de DCC, HOBt et TEA puis laissée une nuit à la température ambiante.
Le spectre de masse du produit brut de la réaction montre l'absence des deux peptides initiaux engagés et celle du peptide attendu (HRMS de (C68H1OsNgO11) : [C4+] mthéorique = 1212,8138 ; m/zthéorique = 606,4069 ; m/zeXpérimentai = 606,4063) : la réaction est totale. Ceci montre la faisabilité de la synthèse convergente avec cette nouvelle technologie et ouvre la voie à la synthèse de plus longs peptides contenant jusqu'à 30 aminoacides.
Le schéma qui suit représente un exemple d'hexapeptide issu d'une synthèse convergente :
Figure imgf000062_0001
Ces travaux ouvrent la voie à la synthèse convergente de peptides par couplage de fragments supportés. -
Lorsque le peptide disupporté est obtenu, la poursuite de la synthèse convergente est envisageable en clivant sélectivement un des deux supports pour obtenir le peptide monosupporté, qui pourra alors être couplé avec un autre peptide supporté convenablement protégé, ceci permettant d'allonger la chaîne.
Par exemple, la stabilité de la fonction carbamate servant au greffage de Paminoacide au support [HMPhBTMA- Aiso-Leu- Val] [PF6] a été testée dans les conditions de clivage de la fonction ester développées pour le SOTS [Val-Leu-Ala- CTMPTTMA][PF6] utilisé pour la synthèse par voie directe (0,01 éq. de HPF6 dans le méthanol à reflux). Le carbamate ne se clive pas dans ces conditions. Il est donc possible de cliver sélectivement la fonction ester benzhydrilique de [HMPhBTMA- Aiso-Leu-Val-Val-Leu- AIa-CTMPTTM A] ([PF6J)2 et de poursuivre la synthèse par la fonction acide terminale en effectuant une deuxième réaction de couplage avec un troisième fragment.
PARTIE EXPERIMENTALE
1. Appareillage
1.1. Spectromètres de RMN
• Spectromètre haut champ Bruker ARX200 (200,1 MHz pour le proton ; 50,0 MHz poux le carbone 13).
• Spectromètre haut champ Bruker AC300P avec passeur d'échantillons et sonde BBO ATMA multinoyaux automatiquement accordable (300,1 MHz pour le proton ; 75,5 MHz pour le carbone 13 ; 282,4 MHz pour le fluor 19 et 121,5 MHz pour le phosphore 31). • Spectromètre haut champ Bruker AVANCE 500 avec sonde triple TBI multinoyaux 5mm (500 MHz pour le proton, 125 MHz pour le carbone 13).
• Les déplacements chimiques δ sont exprimés en parties par millions (ppm) :
- par rapport au tétraméthylsilane utilisé comme référence externe pour la RMN du proton et du carbone 13.
- par rapport à l'acide phosphorique à 85% dans l'eau utilisé comme référence externe pour la RMN du phosphore 31.
- par rapport à CFCl3 comme référence externe pour la RMN du fluor 19.
- par rapport à l'éther trifluoroborate utilisé comme référence externe pour la RMN du bore 11.
• Les constantes de couplage sont exprimées en Hertz (Hz). Les abréviations suivantes ont été utilisées pour décrire la multiplicité des signaux : s singulet, d doublet, t triplet, q quadruplet, m multiplet.
1.2. Spectromètres de masse • Impact électronique : IE
Spectromètre de masse haute résolution à double focalisation VARIAN MAT 311 (géométrie BE de NIER-JOHNSON inversée) du Centre Régional de Mesures Physiques de l'Ouest. L'énergie du faisceau est de 70 eV, l'intensité du courant d'émission de 300 μA et la tension d'accélération des ions est de 3 000 V. • Source LSIMS (Liquid Secondary Ion Mass Spectrometry)
Spectromètre de masse haute résolution MS/MS ZABSpec TOF de Micromass possédant une géométrie EBE TOF (secteurs magnétiques et électriques avec temps de vol orthogonal) du Centre Régional de Mesures Physiques de l'Ouest. Les spectres de masse haute et basse résolution ont été réalisés en ionisation
LSIMS en mode positif à l'aide d'un canon à césium. L'alcool m-nitrobenzylique a été employé comme matrice. Les ions sont accélérés avec une tension de 8 000 V. La détermination des masses précises est réalisée par balayage du champ électrique en utilisant les ions du PEG comme référence interne.
• Source Electrospray : ESI
Spectromètre de masse haute résolution MS/MS ZABSpec TOF de Micromass possédant une géométrie EBE TOF (secteurs magnétiques et électriques avec temps de vol orthogonal) du Centre Régional de Mesures Physiques de l'Ouest. La détermination des masses précises est réalisée par balayage du champ électrique en utilisant les ions du polyéthylèneglycol comme référence interne.
1.3. Analyse élémentaire
Microanalyseur Flash EAl 112 CHNS/O du Centre Régional de Mesures Physiques de l'Ouest. 1.4. Chromatographies
1.4.1. HPLC/SM
HPLC Waters 2695, colonne Cl 8 3 x 50 mm Hypersil GoId 3 μm, débit de 900 μL/min, gradient A : H2O (0,1% HCOOH)/ B : MeCN : 5 à 90% de B en 5 minutes. Détection UV et ELS simultanées. Ionisation : Electrospray positif et négatif. 1.4.2. HPLC
Deux types de colonne ont été utilisés :
• Colonne Waters Nova-Pak 4 μm Cl 8 3,9x150 mm pour :
- HPLC isocratique : Waters 515 HPLC Pump, détecteur UV Milton Roy. Conditions A : pour les peptides supportés sur [HMPhBTMA][NTf2] : mélange 60/40 : acétonitrile/eau contenant 1% d'acide acétique et 10 mmol.L"1 d'acétate d'ammonium. Débit de 1 mL/min. Détection à l'UV à 254 nm.
Conditions B : pour les peptides supportés sur [HTMPTTMA][PF6] : mélange 70/30 : acétonitrile/eau contenant 1,1% d'acide acétique et 20 mmol.L"1 d'acétate d'ammonium. Débit de 0,75 mL/min. Détection à l'UV à 230nm. Conditions C : pour l'étude de racémisation d'aminoacide : mélange 15/85 : acétonitrile/eau contenant 1,1% d'acide acétique et 20 mmol.L"1 d'acétate d'ammonium. Débit de 1,5 mL/min. Détection à l'UV à 340nm. Conditions D : pour l'étude de racémisation de dipeptides : mélange 20/80 : acétonitrile / eau contenant 1.1% d'acide acétique et 20 mmol.L"1 d'acétate d'ammonium. Débit de 1.5mL/min. Détection à l'UV à 340nm.
Conditions E : pour l'étude de racémisation de tripeptides : mélange 25/75 : acétonitrile / eau contenant 1.1% d'acide acétique et 20 mmol.L"1 d'acétate d'ammonium. Débit de 1.5mL/min. Détection à l'UV à 340nm.
- HPLC à gradient d'éluant : Waters 2996, console : Waters 600 controller, injection : Waters Delta 600 pour :
Conditions F : pour les peptides supportés sur [CTMPTTMA][PF6] : gradient A : H2O (1.1% d'acide acétique et 20 mmol.L"1 d'acétate d'ammonium)/ B : MeCN : 40 à
*
100% de B en 20 minutes puis 10 minutes à 100% de B. Débit de lmL/min.
Conditions G : pour les peptides libres : gradient A : H2O (1% de TFA)/ B : MeCN (1%TFA) : 0 à 100% de B en 30 minutes. Débit de lmL/min.
• Colonne Macherey-Nagel phase nucleodur 100Â 5μm C18 50 x 4,6 mm pour : HPLC à gradient d'éluant Waters 515 HPLC Pump
Conditions H : pour les peptides supportés sur [CTMPTTMA][PF6] : gradient A : H2O (0,07% de TFA)/ B : MeCN (0,07% TFA) : 0 à 100% de B en 30 minutes. Débit de 1 mL/min.
1.4.3. Chromatographies éclair colonne sur oxyde d'aluminium activée neutre 50 à 200 μm.
1.5. Points de fusion
Les points de fusion ont été mesurés à l'aide d'un banc Koffler.
1.6. Solvants
L'éther et le THF anhydres sont distillés sous argon sur sodium/benzophénone. Le DCM et l'isopropanol anhydres sont distillés sous argon sur CaH2.
2. Modes opératoires
Les modes opératoires suivants sont décrits dans le cas où le sel à tâche dédiée est utilisé seul comme support soluble. Les procédures sont exactement identiques lorsqu'une matrice (liquide ionique, par exemple [tmba][NTf2], ou sel d'onium, par exemple [tmba] [PF6]) est ajoutée.
Les concentrations des solutions de SOTS dans les solvants moléculaires sont de 0,1 mol/L. La pureté des SOTS est supérieure à 95% d'après les spectres RMN. 2. 1. Synthèse des Sels à Tâche Dédiée
*> Mode opératoire général 1 pour la réaction de quaternarisation
1,0 eq. de dérivé halogène est introduit dans un tube de Schlenk. 2,0 eq. de solution aqueuse de triméthylamine à 45% et de l'acétonitrile sont alors ajoutés. Le milieu est porté 18 heures à 70°C. Les solvants sont alors évaporés sous vide. De Péther est ajouté au résidu qui cristallise. Le solide est filtré et lavé à Péther, avant d'être placé une nuit au dessicateur.
*> Mode opératoire général 2 pour la réaction de métathèse entre un halogénure et un sulfonate de trifluorométhane: 1,0 eq. de l'halogénure d'onium est dissous dans un minimum d'eau. 1,1 eq. de
LiNTf2 sont dissous dans un minimum d'eau puis les deux solutions sont mélangées. Le milieu est agité une heure à température ambiante (TA). Le sel attendu est huileux et décante au fond du ballon. Du dichlorométhane est ajouté au milieu réactionnel.
Si le sel est soluble dans le DCM, les phases aqueuse et organique sont séparées. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium. Le mélange est filtré. Le dichlorométhane est évaporé.
Si le sel est insoluble dans le DCM, la phase liquide ionique est séparée de la phase aqueuse et de la phase DCM, puis de l'acétonitrile et du Na2SO4 y sont ajoutés. La solution est filtrée puis l'acétonitrile est évaporé. 2.1.2. Synthèse de [HPrTMA] [NTf2]
Figure imgf000067_0001
> X = Cl : [HPrTMA][Cl]
*X* Mode opératoire: cf mode opératoire général 1 en engageant le 3-chloropropanol 4. Rendement est de 82%.
* Solide blanc. PF = 158-160°C.
* RMN1H (200MHz, D2O) : δ(Ha) ≈ 3.00 (s, 9H); δ(Hb) = 3.30 (m, 2H); δ(Hc) - 1.92 (m, 2H); δ(Hd) = 3.60 (t, J = 7.1 , 2H).
* RMN13C (50MHz, D2O) : δ(Ca) = 53.31 (t, JN-C = 4.1); δ(Cb) = 58.52; δ(Cc) ≈ 25.68; δ(Cd) = 64.52.
* HRMS(FAB) : [2C+,A"] (C12H32N2O2Cl) m/zth = 271.2152; m/zexp = 271.2149.
> X = NTf2 : [HPrTMA][NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 2 en engageant le chlorure de (3- hydroxy-propyl)-triméthylammonium [HPrTMA][Cl]. Le rendement est de 90%.
*> huile visqueuse incolore
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.25 (s, 9H); δ(Hb+d) ≈ 3.50-3.80 (m, 2H+2H); δ(H0) - 2.10 (m, 2H). * RMN13C (50MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 54.27 (t, JN-0 = 4.1); δ(Cb) = 60.05; δ(Cc) 29.14; δ(Cd) = 66.09; δ(CNTβ) = 121.05 (q, Jc-F = 321.2).
* HRMS(FAB) : [2C+A"] (C14H32N3O6F6S2) m/zth = 516.1636; m/zexp =516.1632.
Figure imgf000068_0001
> X = Cl : [HBuTMA][Cl]
*l* Mode opératoire: cf mode opératoire général 1 en engageant le 4-chlorobutanol 5. Le rendement est de 94%.
*> solide blanc hygroscopique. PF = 118-120°C.
* RMN1H (200MHz, D2O) : δ(Ha) = 3.25 (s, 9H); δ(Hb) = 3.45 (m, 2H); δ(Hc) = 1.69 (m, 2H); δ(Hd) = 1.95 (m, 2H); δ(He) = 3.60 (t, J = 7.2, 2H).
* RMN13C (50MHz, D2O) : δ(Ca) = 53.18 (t, J = 4.1); δ(Cb) = 61.11; δ(Cc) = 19.50; δ(Cd) = 28.43; δ(Ce) = 66.66.
> X = NTf2 : [HBuTMA][NTf2]
*** Mode opératoire: cf mode opératoire général 2 en engageant le chlorure de (4- hydroxy-butyl)-triméthylammonium [HBuTMA][Cl]. Le rendement est quantitatif. *> huile visqueuse incolore
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb+e+f) = 3.57-3.69 (m, 2H+2H+1H); δ(Hc) = 1.63 (m, 2H); δ(Hd) = 2.04 (t, J = 6.1, 2H).
* RMN13C (50MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.99 (t, J = 3.9); δ(Cb) = 61.14;; δ(Cc) = 19.82; δ(Cd) = 29.30; δ(C6) = 66.80; δ(CNTf2) = 120.36 (q, Jc-F=320.9). * RMN19F (282MHz, acétone d6) : δ(FNτf2) = -79.91.
* HRMS(FAB) : [2C+,A"] (C16H36N3O6F6S2) m/zth = 544.1950; m/zexp =544.1928.
2.1.4. Synthèse de [HHeTMA][NTf2]
Figure imgf000068_0002
'
> X = Cl : [HHeTMA][Cl]
*l* Mode opératoire: cf mode opératoire général 1 en engageant le 6-chlorohexanol 6. Le rendement est quantitatif.
<* Solide blanc hygroscopique. PF = 178-18O0C.
* RMN1H (200MHz, D2O) : δ(Ha) = 3.02 (s, 9H); δ(Hb) = 3.23 (m, 2H); δ(Hc) = 1.48
(m, 2H); δ(Hd+e) = 1.27-1.34 (m, 2H+2H); δ(Hf) = 1.72 (m, 2H); δ(Hg) = 3.51 (t, J = 6.2,
2H).
*> RMN13C (75MHz, D2O) : δ(Ca) = 52.85 (t, J = 3.6); δ(Cb) = 66.00; δ(C0) = 22.26; δ(Cd) ≈ 25.26; δ(Ce) = 24.61; δ(Cf) = 31.07; δ(Cg) = 61.56.
*> HRMS(FAB) : [M+] (C18H44N2O2Cl) m/zth = 355.3091; m/zexp =355.3093.
> X = NTf2 : [HHeTMA][NTf2]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 2 en engageant le chlorure de (6- hydroxy-héxyl)-triméthylammonium [HHeTMA][Cl]. Le rendement est de 95%. *** huile visqueuse incolore
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.36 (s, 9H); δ(Hb+g+h) = 3.52-3.61 (m, 2H+2H+1H); δ(Hc+d+e) = 1.36-1.68 (m, 2H+2H+2H); δ(Hf) ≈ 2.00 (m, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.55; δ(Cb) = 66.51; δ(Cc) ≈ 22.53; δ(Cd) = 25.65; δ(Ce) = 25.02; δ(Cf) = 32.20; δ(Cg) = 61.45; δ(CNTf2) = 119.95 (q, Jc-F=321.0).
* RMN19F (282MHz, acétone d6) : δ(FNτβ) = -79.90.
2.1.5. Synthèse de [HPeTMA][NTf2]
Figure imgf000069_0001
> X = Cl : [HPeTMA][Cl]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 1 en engageant le 5-chloropentan-2-ol 8. Le rendement est de 95%. *> solide blanc hygroscopique * RMN1H (200MHz, D2O) : δ(Ha) = 3.05 (s, 9H); δ(Hb) = 3.27 (m, 2H); δ(Hc) = 1.46
(m, 2H); δ(Hd) = 1.78 (m, 2H); δ(He) = 3.81 (q, J = 6.3, IH); δ(Hf) = 1.13 (d, J = 6.2, 3H).
* RMN13C (75MHz, D2O) : δ(Ca) = 52.87 (t, JN-C = 3.8); δ(Çb) = 66.46; δ(Cc) = 18.91; δ(Cd) = 34.26; δ(Ce) - 66.98; δ(Cf) = 21.95.
* HRMS(LSIMS) de (C8H20NO): [M+] m/zthéorique = 146.1545; m/zβXpérimentai = 146.1547.
> X = NTf2 : [HPeTMA][NTf2]
*X* Mode opératoire: cf mode opératoire général 2 en engageant le chlorure de (4- hydroxy-pentyl)-triméthylammonium [HPeTMA][Cl]. Le rendement est de 95%. *t* huile incolore visqueuse * RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) - 3.39 (s, 9H); δ(Hb) = 3.60 (m, 2H); δ(Hc) =
1.52 (m, 2H); δ(Hd) = 2.04 (m, 2H); δ(He) = 3.84 (m, IH); δ(Hf) = 1.18 (d, J = 6.1, 3H); δ(Hg) = 3.70 (d, J = 4.7, IH).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.28 (t, JN-C = 3.8); δ(Cb) = 66.28; δ(Cc) = ' 18.90; δ(Cd) = 34.68; δ(Ce) = 65.96; δ(Cf) = 22.50; δ(CNTf2) ≈ 119.60 (q, Jc-F= 320.7). *> HRMS(ESI) de (C18H40N3O6F6S2): [2C+,A"] m/zthéorique = 572.2263; m/zexpérimentai =
572.2266.
2.1.6. Synthèse de [HMPeTMA][X]
Figure imgf000069_0002
*> Mode opératoire: 30,6 mL (492 mmol ; 3,0eq.) d'iodure de méthyle dans l'éther anhydre sont ajoutés goutte à goutte à 12,75 g (252 mmol ; 3,2 eq.) de magnésium préalablement activé par chauffage sous vide. La solution est alors agitée 30 min à TA. Une solution de 20 mL (164 mmol ; l,0eq.) de 4-chlorobutyrate de méthyle 9 dans 250 mL de THF anhydre est ajoutée goutte à goutte à TA puis le milieu est porté une nuit à reflux. Le mélange est neutralisé au méthanol à 0°C puis les solvants sont évaporés sous vide. De l'éther est ajouté au résidu et le mélange est filtré sur fritte. Les solvants sont évaporés sous vide. 21,6g (95%) d'huile sont obtenus. *X* huile jaune
* RMN1H (200MHz, CDCl3) : δ(Ha) = 3.58 (t, J = 6.6, 2H); δ(Hb) = 1.59 (m, 2H); δ(Hc) = 1.89 (m, 2H); δ(He) = 1.23 (s, 6H).
* RMN13C (50MHz, CDCI3) : δ(Ca) = 45.69; δ(Cb) = 27.69; δ(Cc) = 40.89; δ(Cd) = 70.42; δ(Ce) = 29.20.
*> HRMS(ESI) de (C5H10OCI): [M^CH3 +] m/zthéorique = 121.0420; m/zeXpérimentai = 121.0412.
Figure imgf000070_0001
*i* Mode opératoire: 2,0 g (14,6mmol ; 1,0 eq.) de 5-chloro-2-méthylpentan-2-ol 10 sont dissous dans 20 mL d'acétonitrile puis 5,1 g (36,6 nraiol ; 2,5 eq.) de K2CO3 et 4,6 mL (36,6 mmol ; 2,5 eq.) d'une solution aqueuse de diméthylamine H, à 40% sont ajoutés. Le milieu est porté une nuit à 50°C puis il est filtré. Le filtré est extrait à l'acétonitrile et le filtrat est séché sur sulfate de sodium. Le mélange est filtré et les solvants sont évaporés sous vide. 1,8 g (85%) de 5-diméthylamino-2-méthylpentan-2-ol 12 sont obtenus. *** huile jaune
* RMN1H (200MHz, CDCl3) : δ(Ha) = 2.25 (s, 6H); δ(Hb) = 2.33 (m, 2H); δ(Hc+d) = 1.61-1.63 (m, 2H+2H); δ(Hf) = 1.21 (s, 6H); δ(Hg) = 5.67 (m, IH).
*> RMN13C (50MHz, CDCl3) : δ(Ca) = 45.26; δ(Cb) = 43.31; δ(Cc) = 22.65; δ(Cd) = 60.63; δ(Ce) = 68.81; δ(Cf) = 29.99.
* HRMS(IE) de (C8H19NO) : [M+'] m/zthέorique = 145.1467; m/zexpérimentai = 145.1469.
Figure imgf000070_0002
> X = Cl : [HMPeTMA][Cl]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 1 en engageant le 5-chloro-2- méthylpentan-2-ol K). Le rendement est de 70%.
*> solide blanc cassé hygroscopique. Pp = 132-134°C.
* RMN1H (200MHz, D2O) : δ(Ha) = 3.04 (s, 9H); δ(Hb) = 3.25 (m, 2H); δ(Hc) = 1.43 (m, 2H); δ(Hd) = 1.77 (m, 2H); δ(Hf) = 1.16 (s, 6H).
*> RMN13C (75MHz, D2O) : δ(Ca) = 52.89 (t, JN-C = 3.9); δ(Cb) = 66.76; δ(Cc) = 17.86; δ(Cd) = 38.72; δ(Ce) = 70.98; δ(Cf) = 27.73.
* LRMS(LSIMS) de (C18H44N2O2Cl) : [2C+, CF] m/zthéorique = 355 ; m/zeχPérimentai = 355.3.
> X = NTf2 : [HMPeTMA][NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 2 en engageant le chlorure de 4- hydroxy-4-méthyl-pentyl-triméthylammonium. Le rendement est de 92%.
*t* huile visqueuse jaune pâle.
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.39 (s, 9H); δ(Hb) = 3.58 (m, 2H); δ(Hc) =
2.06 (m, 2H); δ(Hd) = 1.53 (t, J = 7.8, 2H); δ(Hf) = 1.23 (s, 6H), δ(Hg) = 3.45 (s, IH). * RMN13C (50MHz, D2O) : δ(Ca) = 53.13 (t, JN-C = 4.0); δ(Cb) = 67.03; δ(Cc) = 18.14; δ(Cd) = 38.98; δ(Ce) = 71.30; δ(Cf) = 27.89; b(Cma) ≈ 119.59 (q, J = 319.6).
* RMN19F(282MHz, acétone d6) : δ(CF3) ≈ -79.90
* HRMS(LSIMS) de (C20H44N3O6F6S2) : [2C+, NTf2 '] m/zn^que = 600.2576; nVZeXpérimeπta] = 600.2583.
> X ≈ BF4 : [HMPeTMA][BF4]
*> Mode opératoire: 3.0g (15.3mmol, l.Oeq.) de chlorure de 4-hydroxy-4-méthyl-pentyl- triméthylammonium sont dissous dans l'eau puis 2.5mL (19.9mmol, 1.3eq.) de solution aqueuse de HBF6 à 50% sont ajoutés goutte à goutte à la solution qui est agitée trois heures à TA. Les solvants sont évaporés sous vide. Le résidu est lavé trois fois à l'éther puis est placé au dessicateur. 3.0g (80%) de produit sont obtenus. *> solide blanc hygroscopique. PF = 92-940C.
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) ≈ 3.36 (s, 9H); δ(Hb) = 3.56 (m, 2H); δ(Hc) = 1.53 (m, 2H); δ(Hd) = 2.00 (m, 2H); δ(Hf) = 1.23 (s, 6H); δ(Hg) = 3.18 (s, IH).
* RMN13C (50MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.80 (t, JN-C = 4.0); δ(Cb) = 68.18; δ(C0) = 19.28; δ(Cd) = 40.83; δ(Ce) ≈ 70.23; δ(Cf) = 30.08.
* RMN11B (96MHz, acétone d6) : 6(B) = -0.97.
* HRMS(LSIMS) de (C18H44N2O2F4B) : [2C+, BF4 "] m/zthéoriqUe = 407.3432; m/Zexpérimental = 407.3441.
> X = PF6 : [HMPeTMA][PF6]
*> Mode opératoire: 200mg (l.Ommol, l.Oeq.) de chlorure de 4-hydroxy-4-méthyl- pentyl-triméthylammonium sont dissous dans l'eau puis 0.2mL (1.3mmol, 1.3eq.) de solution aqueuse de HPF6 à 60% sont ajoutés goutte à goutte à la solution qui est agitée cinq heures à TA. Les solvants sont évaporés sous vide. Le résidu est lavé trois fois à l'éther puis est séché au dessicateur. 0.25g (80%) de produit sont obtenus. <* solide blanc cassé hygroscopique. PF = 191-193°C. *> RMN1H (200MHz, D2O) : 6(H11) ≈ 3.05 (s, 9H); δ(Hb) = 3.25 (m, 2H); δ(Hc) = 1.44 (m, 2H); δ(Hd) = 1.78 (m, 2H); δ(Hf) = 1.17 (s, 6H).
* RMN13C (50MHz, D2O) : δ(Ca) ≈ 53.10 (t, JN-C≈ 4.0); δ(Cb) = 67.05; 6(CC) = 18.11; 6(C4) = 38.97; 6(Ce) = 71.30; δ(Cf) = 27.86.
*> RMN31P (121MHz, D2O) : 6(P) ≈ -144.97 (sept, J = 708).
* LRMS(LSIMS)de (C9H22NO): [C+] m/zthéorique ≈ 160; m/zeχPérimentai = 160.
> X = I : [HMPeTMA][I]
*l* Mode opératoire: 8.0g (55.2mmol, l.Oeq.) de 5-diméthylamino-2-méthylpentan-2-ol
12 sont dissous dans 6OmL d'acétonitrile puis 4.ImL (66.2mmol, 1.2eq.) d'iodométhane sont ajoutés à 00C. Une suspension apparait. Le milieu revient à TA pendant la nuit puis il est filtré sur fritte. Le filtré est lavé à l'éther.12.6g (80%) de [HMPeTMA] [I] sont obtenus.
* solide blanc hygroscopique. PF ≈ 168-1700C.
<* RMN1H (200MHz, D2O) : δ(Ha) = 3.18 (s, 9H); δ(Hb) = 3.39 (m, 2H); 6(Hc) - 1.56 (m, 2H); δ(Hd) = 1.89 (m, 2H); δ(Hf) = 1.29 (s, 6H).
* RMN13C (50MHz, D2O) : δ(Ca) = 53.37 (t, JN-0 = 4.0); δ(Cb) = 67.12; δ(Cc) = 18.28; 6(Cd) = 39.06; 6(C6) ≈ 71.43; δ(Cf) = 28.10. * Analyse élémentaire : Théorique C : 37.64% - H : 7.72% - N : 4.88%.
Mesure C : 37.51% - H : 7.79% - N : 4.98%.
> X = MeSO4 : [HMPeTMA][MeSO4] * Mode opératoire: 3,8 g (26,2 mmol ; l,Oeq.) de 5-diméthylamino-2-méthylpentan-2-ol
12 sont dissous dans 30 mL d'éther anhydre puis 2,7 mL (28,8 mmol ; l,leq.) de diméthylsulfate fraichement distillé sont ajoutés à 0°C. Une suspension apparaît. Le milieu est agité 45 min à TA puis il est filtré sur fritte. Le filtré est lavé à l'éther. 5,9 g (83%) de [HMPeTMA][MeSO4] sont obtenus. *> solide blanc hygroscopique. PF = 82-840C.
* RMN1H (200MHz, D2O) : δ(Ha) = 3.03 (s, 9H); δ(Hb) = 3.23 (m, 2H); δ(Hc) = 1.41 (m, 2H); δ(Hd) = 1.76 (m, 2H); δ(Hf) = 1.15 (s, 6H); δ(HMeso4) = 3.75 (s, 3H).
*> RMN13C (50MHz, D2O) : δ(Ca) = 53.13 (t, JN-C = 4.0); δ(Cb) = 67.07; δ(Cc) = 18.15; δ(Cd) = 39.00; δ(Ce) = 71.31; δ(Cf) ≈ 27.93; δ(CMeso4) = 55.74. * HRMS(LSIMS) de (Ci9H47N2O6S) : [2C+, MeSO4 "] m/za^ique = 431.3155; m/Zeχpérimental = 431.3148.
2.1.7. Synthèse de [HMPhBTMA][NTf2] ou [PF6]
Figure imgf000072_0001
*> Mode opératoire:
10,0 g (80,6 mmol) d'alcool 4-hydroxybenzylique 19 sont dissous dans 125 mL d'acétone. 19,2 mL (2,0 eq. ; 161,lmmol) de 1-4-dibromobutane 18 et 11,1 g (1,0 eq. ;
- 80,6 mmol) de K2CO3 sont ajoutés au milieu, qui est alors mis à reflux 18 heures sous agitation. Le mélange est filtré. Le produit de disubstitution précipite dans le filtrat et est éliminé par une seconde filtration. L'acétone du filtrat est alors évaporée. Du pentane est ajouté au résidu. Le produit attendu 20 précipite, est filtré, nettoyé au pentane et séché une nuit au dessicateur. 16,9 g (80%) de produit sont obtenus.
*> solide blanc cassé. PF < 5O0C. *> RMN1H (200MHz, CDCl3) : δ(Ha) = 3.50 (t, J ≈ 6.5, 2H); δ(Hb+c) = 1.91-2.21 (m,
2H+2H); δ(Hd) = 4.04 (t, J = 5.7, 2H); δ(Hf) = 6.92 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hg) ≈ 7.33 (d, J =
8.9, 2H); δ(H;) ≈ 4.66 (s, 2H); δ(Hj) ≈ 1.65 (s, IH).
* RMN13C (75MHz, CDCl3) : δ(Ca) = 33.50; δ(Cb) - 27.89; δ(Cc) = 29.47; δ(Cd) =
66.89; δ(Ce) = 158.49; δ(Cf) = 114.52; δ(Cg) = 128.68; δ(Ch) = 133.20; δ(Q) = 65.03. *> HRMS(ESI) de (C11H15O2Br): [M+*] m/zthéorique≈ 258.0255; m/zeχpérimentai = 258.0266.
Figure imgf000073_0001
> X = Br : [HMPhBTMA][Br]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 1 en engageant le [4-(4- bromobutoxy)phényl]-méthanol .12. Le rendement est de 98%.
*l* Solide blanc hygroscopique. Pp = 144-1460C.
* RMN1H (200MHz, D2O) : δ(Ha) = 3.04 (s, 9H); δ(Hb) ≈ 3.32 (m, 2H); δ(Hc+d) = 1.74- 1.99 (m, 2H+2H); δ(He) = 4.06 (t, J = 5.1, 2H); δ(Hg) = 6.95 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hh) = 7.29 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 4.50 (s, 2H). * RMN13C (75MHz, D2O) : δ(Ca) = 52.82 (JC-N = 3.8); δ(Cb) = 66.14(JC-N = 3.0); δ(Cc) =
19.34; δ(Cd) ≈ 25.17; δ(Ce) = 67.38; δ(Cf) = 157.59; δ(Cg) = 114.90; δ(Ch) = 129.34; δ(Q) =
*
Figure imgf000073_0002
= 238.1811.
> X = PF6 : [HMPhBTMA][PF6]
*X* Mode opératoire: 2,0g (6,3mmol) de bromure de 4-[4-(hydroxyméthyl)phénoxy]- iV,iV,7V-triméthylbutan-l -ammonium [HMPhBTMA][Br] sont dissous dans un minimum d'eau. 2,3g (2,0 eq. ; 12,6 mmol) de KPF6 sont alors ajoutés. Le milieu réactionnel est agité deux heures à TA. L'hexafluorophosphate de 4-[4-(hydroxyméthyl)phénoxy]-ΛζN,N- triméthylbutan-1 -ammonium formé précipite, est filtré et lavé trois fois à l'eau et trois fois à l'éther avant d'être placé une nuit au dessicateur. 3,11g (85%) de solide sont obtenus. *> solide blanc hygroscopique. Pp = 56-580C.
*> RMN1H (200MHz, acétone A6) : δ(Ha) = 3.41 (s, 9H); δ(Hb) - 3.71 (m, 2H); δ(Hc) = 1.93 (m, 2H); δ(Hd) = 2.19 (m, 2H); δ(He+k) ≈ 4.06-4.14 (m, 2H+1H); δ(Hg) = 6.92 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hh) = 7.30 (d, J = 8.4, 2H); δ(H) = 4.58 (d, J = 5.5, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.66 (J0-N= 4.2); δ(Cb) = 66.26 (JC-N = 2.9) ; δ(Cc) = 19.73; δ(Cd) = 25.87; δ(Ce) = 66.79; δ(Cf) = 158.03; δ(Cg) = 114.23; δ(Ch) = 128.12; δ(Q) = 134.67; δ(Cj) = 63.48.
* RMN31P (121MHz, acétone d6) : δ(PPF6) = -144.24 (sept, J = 708). *> RMN19F (282MHz, acétone d6) : δ(FPF6) = -72.457 (d, J = 707).
* HRMS(ESI) de (C28H48N2O4F6P): [2C+,TF6] m/zthéorique = 621.3256; m/zeXpérimeπtai = 631.3259.
> X ≈ NTf2 : [HMPhBTMA][NTf2] *> Mode opératoire: cf mode opératoire général 2 en engageant le bromure de 4-[4-
(hydroxyméthyl)ρhénoxy] -iV^N-triméthylbutan- 1 -ammonium [HMPhBTMA] [Br] .
[HMPhBTMA][NTf2] est soluble dans le DCM. Le rendement est de 95%.
*> huile visqueuse légèrement jaune.
<* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) ≈ 3.40 (s, 9H); δ(Hb) = 3.70 (m, 2H); δ(Hc) = 1.91 (m, 2H); δ(Hd) = 2.17 (m, 2H); δ(He+k) = 4.03-4.11 (m, 2H+1H); δ(Hg) = 6.89 (d, J =
8.6, 2H); δ(Hh) ≈ 7.28 (d, J = 8.5, 2H); δ(Hj) = 4.56 (d, J = 5.5, 2H). * RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.60; δ(Cb) = 66.22; δ(Cc) = 19.63; δ(Cd) = 25.69; δ(Cβ) = 66.81; δ(Cf) = 158.20; δ(Cg) = 114.41; δ(Ch) = 128.61; δ(Q) = 134.14; δ(Cj) = 63.57, δ(CNTf2) = 120.02 (q, J = 321.3).
* RMN19F (282MHz, acétone d6) : δ(FNTf2) = -79.88.
* HRMS(ESI) de (C30H48N3O8F6S2) : [2C+,NTf2 '] m/zthέorique = 756.2787; m/zeXpérimentai = 756.2785.
2.1.8. Synthèse de [HTMPTTMA][Br] ou [NTf2]
Figure imgf000074_0001
*X* Mode opératoire: 8.9g (73mmol) de p-hydroxybenzaldéhyde 22 sont dissous dans 115mL d'acétone technique. 2OmL (2.0eq., 146mmol) de. l-5-dibromopentane 21 et 10g (l.Oeq., 73mmol) de K2CO3 sont ajoutés au mélange qui est mis à reflux 18 heures avec une forte agitation. La solution, rouge au départ, devient jaune. Le milieu réactionnel est filtré. Le produit attendu 23 (Teb ≈ 125°C pour P ≈ 0.05mm Hg) est isolé après distillation de l'huile résiduelle au Kϋgelrohr. 9.7g (50%) de 4-(5-bromopentyloxy)-benzaldéhyde 23 sont obtenus. *î* huile jaune
* RMN1H (200MHz, CDCl3) : δ(Ha) = 3.47 (t, J = 6.6, 2H); δ(Hb+d) = 1.78-2.06 (m, 2H+2H); δ(Hc) = 1.69 (m, 2H); δ(He) = 4.08 (t, J = 6.3, 2H); δ(Hg) = 7.01 (d, J ≈ 8.8, 2H); δ(Hh) = 7.86 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hk) = 9.90 (s, IH).
* RMN13C (75MHz, CDCl3) : δ(Ca) = 33.67; δ(Cb) = 33.30; δ(Cc) = 24.61; δ(Cd) = 28.10; δ(Ce) = 67.90; δ(Cf) = 163.91; δ(Cg) - 114.66; δ(Ch) = 131.80; δ(Q) = 129.71; δ(Çj) = 190.47.
Figure imgf000074_0002
*X* Mode opératoire: Une solution de 9,4 g (2,0 eq. ; 12,7mmol) de 4-bromotoluène dans l'éther anhydre est ajoutée goutte à goutte à 1,4g (2,leq. ; 57,8mmol) de magnésium préalablement décapé. Le mélange est agité 30 minutes, puis 7,5g (l,0eq. ; 27,5mmol) de
4-(5-bromopentyloxy)-benzaldéhyde 23 dissous dans l'éther anhydre sont ajoutés goutte à goutte à 0°C. Le milieu réactionnel est alors agité une heure à TA, puis le magnésien est hydrolyse par ajout de méthanol. Les solvants du milieu sont évaporés sous vide. De l'éther est ajouté au résidu et ce mélange est filtré sur fritte. Après évaporation, 10,0 g (99%) de [4-(5-bromopentyloxy)-phényl]-p-tolylméthanol 25 sont obtenus.
*> huile jaune
* RMN1H (200MHz, CDCl3) : δ(Ha) = 3.48 (t, J = 6.7, 2H); δ(Hb+d) = 1.76-2.08 (m, 2H+2H); δ(Hc) = 1.65 (m, 2H); δ(He) = 4.00 (t, J = 6.3, 2H); δ(Hg) = 6.91 (d, J = 9.5, 2H); δ(Hh+m+n) = 7.17-7.34 (m, 2H+2H+2H); δ(Hj) = 5.82 (d, J = 3.3, IH); δ(Hk) = 2.25 (d, J =
3.5, lH); δ(Hp) = 2.38 (s, 3H).
* RMN13C (50MHz, CDCl3) : δ(Ca) = 34.40; δ(Cb) = 33.06; δ(Cc) ≈ 25.41; δ(Cd) =
29.01; δ(Ce) = 68.13; δ(Cf) = 158.79; δ(Cg) = 114.88; δ(Ch) = 128.43; δ(Q) = 137.04; δ(Cj) = 75.98; δ(Q) = 141.95; δ(Cm) = 127.03; δ(Cn) ≈ 129.63; δ(C0) = 137.38; δ(Cp) =
21.78.
Figure imgf000075_0001
> X = Br : [HTMPPTMA][Br]
*l* Mode opératoire : 10,0 g (27,5 mmol) de [4-(5-bromopentyloxy)-phényl]~p- tolylméthanol 25 sont introduits dans un tube de schlenk. 8,4 mL (2,0 eq. ; 55,lmmol) de solution aqueuse de triméthylamine à 45% et 2OmL d'acétonitrile sont alors ajoutés. Le milieu est porté 18 heures à 7O0C. Les solvants sont alors évaporés sous vide. Le résidu huileux est lavé à l'éther. 9,6 g (83%) de produit sont obtenus. *> huile très visqueuse jaune.
*> RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.42 (s, 9H); δ(Hb) = 3.72 (m, 2H); δ(Hc+6) = 1.69-1.94 (m, 2H+2H); δ(Hd) = 1.51 (m, 2H); δ(Hf) = 4.01 (t, J = 6.2, 2H); δ(Hh) = 6.89 (d, J = 8.8, 2H); δ(Hi+n+0) = 7.08-7.38 (m, 2H+2H+2H); δ(Hk) = 5.73 (s, IH); δ(H1+q) = 2.03-2.34 (m, 3H+1H).
* RMN13C (75MHz, CD3CN) : δ(Ca) - 52.74; δ(Cb) = 66.04; δ(Cc) ≈ 22.38; δ(Cd) = 22.59; δ(Ce) - 28.46; δ(Cf) = 67.54; δ(Cg) = 157.94; δ(Ch) = 114.25; δ(Q) = 126.56; δ(Q) - 136.30; δ(Ck) = 74.05; δ(Cm) = 143.04; 0(Cn) = 127.79; 6(C0) = 128.82; δ(Cp) = 138.06; δ(Cq) = 20.38.
* HRMS(ESI) de (C22H32NO2): [C+] m/zthéoriqUe= 342.2433; m/zeXpérimentai = 342.2435.
> X = NTf2 : [HTMPPTMA] [NTf2] *> Mode opératoire: cf mode opératoire général 2 en engageant le bromure de {5-[4-
(hydroxy-p-tolyl-méthyl) -phénoxy]- pentyl}- triméthyl-ammonium [HTMPPTMA][Br]. [HTMPPTMA][NTf2] est soluble dans le DCM. Le rendement est de 90%. *t* huile visqueuse jaune.
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb) - 3.62 (m, 2H); δ(Hc) = 1.87 (m, 2H); δ(Hd) = 1.61 (m, 2H); δ(He) = 2.08 (m, 2H); δ(Hf) = 4.01 (t, J = 6.2, 2H); δ(Hh) = 6.84 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hi+n+0) = 7.07-7.33 (m, 2H+2H+2H); δ(Hk) = 5.74 (s, IH); . δ(Hi) = 2.83 (s, IH); δ(Hq) = 2.29 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) ≈ 52.71 (q, J = 3.8); δ(Cb) = 66.50; δ(Cc) = 22.66; δ(Cd) = 22.39; δ(Ce) = 28.49; δ(Cf) = 67.23; 0(C2) = 158.16; δ(Ch) = 114.12; δ(Q) = 126.39; δ(Q) = 136.24; δ(Ck) = 74.80; δ(Cm) = 142.83; δ(Cn) = 127.70; δ(C0) = 128.76; δ(Cp) = 137.81; δ(Cq) = 20.30; δ(CNTf2) ≈ 120.13 (q, J = 321.3). *> RMN19F (282MHz, acétone d6) : δ(FNTf2) = -79.88.
* LRMS(ESI)de (C22H32NO2): [2C+] m/zthéorique = 342; m/zexpérimentai = 342. 2.2. Synthèse Peptidique Supportée sur Sel d'Onium - Voie Inverse 2.2.1. Greffage du premier aminoacide. 2.2.2.1. Greffage de V acide isonipécotique
Mode opératoire général 3 pour le greffage de l'acide isonipécotique.
1,0 eq. de sel d'onium portant une fonction alcool sont dissous dans l'acétonitrile anhydre. l,9eq. de chloroformiate de p-nitrophényle et 3,0eq. de pyridine ou de NMM sont ajoutés au milieu qui est agité à TA (étape 1). La majorité de l'acétonitrile est alors évaporé puis du DMF anhydre, 3,5eq. d'acide isonipécotique et 3,5 eq. de pyridine ou de NMM sont ajoutés au milieu réactionnel qui est agité à TA (étape 2). L'avancement de la réaction est suivi par RMN. Les solvants sont évaporés sous vide. De l'acétonitrile est ajouté au résidu qui est filtré. Les solvants du filtrat sont évaporés sous vide et le résidu est lavé trois fois à Péther.
>Avec le support [HPrTMA]
Figure imgf000076_0001
[HPrTMA-AiSo][NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 3 en engageant [HPrTMA][NTf2].
Etape 1: 30min. Etape 2: 24h.
Le rendement massique est de 70%.
10% de [HPrTMA][NTf2] restent non greffés (conversion de 90%).
*** huile visqueuse jaune
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) ≈ 3.42 (s, 9H); δ(Hb) = 3.74 (m, 2H); δ(Hc) =" 2.36 (m, 2H); δ(Hd) = 4.23 (t, J = 6.0, 2H); δ(Hf) = 2.99 (m, 2H); δ(Hf) = 4.03 (m, 2H); δ(Hg) = 1.58 (m, 2H); δ(Hg.) ≈ 1.91 (m, 2H); δ(Hh) ≈ 2.56 (m, IH).
* RMN13C (50MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 54.16 (t, JN-C ≈ 3.9); δ(Cb) = 63.02; δ(Cc) = 24.30; δ(Cd) = 65.44; δ(Ce) = 155.81; δ(Cf) = 44.34; δ(Cg) = 29.27; δ(Ch) = 41.70; δ(Q) = 177.241; δ(CNTf2) ≈ 121.39 (q, JC-F≈ 320.9).
*> HRMS(LSIMS) de (C13H25N2O4): [M+] m/zthéorique ≈ 273.1814; m/Zexpérimentai = 273.1814. >Avec le support [HBuTMA]
Figure imgf000077_0001
[HBuTMA-AiSO][NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 3 en engageant [HBuTMA][NTf2].
Etape 1: 30min. Etape 2: 24h.
Le rendement massique est de 92%.
20% de [HBuTMA][NTf2] restent non greffés (conversion de 80%).
*> huile visqueuse jaune
*> RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.40 (s, 9H); δ(Hb) ≈ 3.66 (m, 2H); δ(Hc+d+h+h0 = 1.41-2.02 (m, 2H+2H+2H+2H); δ(He) ≈ 4.15 (t, J = 6.2, 2H); δ(Hg) = 2.98
(m, 2H); δ(Hg-) ≈ 4.03 (m, 2H); δ(H;) = 2.52 (m, IH).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.76 (t, J = 4.0); δ(Cb) ≈ 63.81; δ(Cc) = 19.56; δ(Cd) ≈ 25.73; δ(Ce) = 66.22; δ(Cf) = 154.86; δ(Cg) = 43.05; δ(Ch) = 27.88; δ(Q) = 40.58; δ(Çj) = 176.36; δ(CNTΩ) = 120.08 (q, JC-F=321.2).
* HRMS(LSIMS) de (C14H27N2O4): [M+] in/ataoή*» = 287.1971; m/zeχpérimentai ≈ 287.1970.
>Avec le support [HHeTMA]
Figure imgf000077_0002
[HHeTMA-AiSo][NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 3 en engageant [HHeTMA][NTf2]. Etape 1: 30min. Etape 2: 24h. Le rendement est de 80%.
20% de [HHeTMA][NTf2] restent non greffés (conversion de 80%). *> huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.35 (s, 9H); δ(Hb) = 3.55 (m, 2H); δ(Hc+d+e+j') ≈ 1.43-1.72 (m, 2H+2H+2H+2H); δ(Hf+j) ≈ 1.82-2.03 (m, 2H+2H); δ(Hg+i) = 3.95-4.07 (m, 2H+2H); 0(Hr) = 2.96 (m, 2H); δ(Hk) = 2.54 (m, IH).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.64; δ(Cb) = 66.50; δ(Cc) = 22.51; δ(Cd) = 25.60; δ(Ce) = 25.24; δ(Q) = 27.95; δ(Cg) = 69.09; δ(Ch) = 155.27; δ(Q) ≈ 43.00; δ(Cj) =
28.43; δ(Ck) = 40.40; δ(Q) = 176.13; δ(CNτf2) = 119.99 (q, JC-F =321.2).
* HRMS(LSIMS) de (C16H31N2O4): [M+] ni/zthéorique = 315.2284; m/zeXpérimentai ≈ 315.2279. >Avec le support [HMPeTMAJ
Figure imgf000078_0001
[HMPeTMA-AiSo][I]
*X* Mode opératoire: cf mode opératoire général 3 en engageant [HMPeTMA][I].
Etape 1: 18h. Etape 2: 96h.
Le rendement massique est de 70%.
15% de [HMPeTMA][NTf2] restent non greffés (conversion de 85%).
*** huile jaune
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.46 (s, 9H); δ(Hb) = 3.70 (m, 2H); δ(Hc+i+i.) = 1.45-1.82 (m, 2H+2H+2H); δ(Hd) = 1.94 (m, 2H); δ(Hf) = 1.51 (s, 6H); δ(Hh<) = 2.98 (m, 2H); δ(Hh) = 4.02 (m, 2H); δ(H,) = 2.54 (m, IH).
* RMN13C (50MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.24; δ(Cb) = 66.86; δ(Cc) = 17.94; δ(Cd) = δ(Q) =
=
Figure imgf000078_0002
>Avec le support [HMPhTMA]
Figure imgf000078_0003
*t* Mode opératoire : cf mode opératoire général 3 en engageant [HMPhBTMA][NTf2 ou
PF6].
Etape 1: 20min. Etape 2: 24h.
Le rendement massique est de 95%.
7 à 8% de [HPrTMA][NTf2] restent non greffés et le produit est contaminé par 10 à 15% de produit secondaire (déterminé par RMN) et qui sera totalement éliminé lors du traitement de l'étape suivante.
Figure imgf000078_0004
> X = NTf2 : [HMPhBTMA- Aiso] [NTf2]
*l* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.40 (s, 9H); δ(Hb) = 3.70 (m, 2H); δ(Hc+m)
= 1.85-1.96 (m, 2H+2H); δ(Hd) - 2.17 (m, 2H); δ(He) = 4.11 (t, J = 6.0, 2H); δ(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hh) = 7.34 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 5.04 (s, 2H) ; δ(H,) = 2.95 (m, 2H); δ(Hr) = 4.01 (m, 2H); δ(Hm.) = 1.52 (m, 2H); δ(Hn) = 2.50 (m, IH).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.73 (t, JN-C = 3.7); δ(Cb) = 66.25; δ(Cc) = 19.77; δ(Cd) = 25.81; δ(Ce) = 66.82; δ(Cf) = 158.75; δ(Cg) = 114.24; δ(Ch) = 129.59; δ(Q) = 129.49; δ(Q) = 66.31; δ(Ck) = 154.96; δ(Q) = 43.23; δ(Cm) = 29.91; δ(Cn) = 41.08; δ(Co) = 176.77; δ(CNτβ) = 120.08 (q, Jc-F= 321.3).
* HRMS(ESI)de (C21H33N2O5): [C+] m/zthéorique = 393.2390; m/zexpérimentai = 393.2390.
> X = PF6 : [HMPhBTMA-AiSO][PF6] * RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.39 (s, 9H); δ(Hb) - 3.68 (m, 2H); δ(Hc+m)
= 1.80-1.98 (m, 2H+2H); δ(Hd) = 2.14 (m, 2H); δ(He) = 4.11 (t, J = 6.1, 2H); δ(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hh) = 7.34 (d, J = 8.5, 2H); δ(Hj) = 5.04 (s, 2H) ; 0(H1) = 2.94 (m, 2H); δ(Hr) = 4.02 (m, 2H); δ(Hm.) = 1.52 (m, 2H); 0(Hn) = 2.48 (m, IH).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.68 (t, JN-C = 4.0); δ(Cb) = 67.03; δ(Cc) = 19.73; δ(Cd) = 25:83; δ(Ce) = 66.83; δ(Cf) = 158.75; δ(Cg) = 114.42; δ(Ch) = 129.61; δ(Q)
= 129.56; δ(Çj) = 66.21; δ(Ck) = 154.87; δ(Q) = 43.22; δ(Cm) = 28.28; δ(Cn) = 41.04; δ(C0) ≈ 176.26.
2.2.2.2. Greffage d'autres acides aminés P- Avec des aminoesters méthyliques
Mode opératoire général 3' pour le greffage de Paminoester. 1,0 eq. de [HMPhBTMA][PF6] est dissous dans l'acétonitrile anhydre. 2,0eq. de chloroformiate de p-nitrophényle et 3,0eq. de NMM sont ajoutés au milieu qui est agité à TA (étape 1). L'acétonitrile est alors évaporé puis du DMF anhydre, 3,5eq. d'aminoester méthylique et 3,5eq. de NMM sont ajoutés au milieu réactionnel qui est agité à TA (étape 2). L'avancement de la réaction est suivi par RMN. Les solvants sont alors évaporés sous vide. De l'acétonitrile est ajouté au résidu qui est filtré. Les solvants du filtrat sont évaporés sous vide. Le résidu est lavé trois fois à l'éther puis est dissous dans le DCM. Cette phase organique est extraite trois fois à l'eau, trois fois par une solution aqueuse de HPF6 (1 < pH < 2) puis elle est séchée sur sulfate de sodium. Le
DCM est alors évaporé.
Figure imgf000079_0001
[HMPhBTMA-GIy-OMe] [PF6]
* Mode opératoire : cf mode opératoire général 3' en engageant [HMPhBTMA][PF6] et GIy-OMe.
Etape 1: 10min. Etape 2: 3h.
Le rendement est de 98%. Aucune trace de [HMPhBTMA][PF6] libre n'est observée en
RMN.
*t* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.35 (s, 9H); S(Hb+0) = 3.58-3.70 (m, 2H+3H); δ(Hc) = 1.91 (m, 2H); δ(Hd) = 2.11 (m, 2H); δ(H6) = 4.10 (t, J = 6.1, 2H); 8(H8) = 6.94 (d, J ≈ 8.7, 2H); δ(Hh) = 7.33 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hj) = 5.03 (s, 2H) ; 8(H]) = 6.62 (m, IH); δ(Hm) = 3.90 (d, J = 6.2, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.60; δ(Cb) = 67.15; δ(Cc) = 20.67; δ(Cd) = 26.72; 8(Ce) = 67.68; δ(Cf) ≈ 159.66; 8(C6) ≈ 115.22; δ(Ch) = 130.61; δ(Q) = 130.28; 8(Cj) = 66.66; δ(Ck) = 157.55; δ(Cm) = 43.04; 8(Cn) = 171.38; S(C0) = 52.13.
* HRMS(ESI)de (Ci8H29N2O5): [C+]
Figure imgf000080_0001
= 353.2066.
Figure imgf000080_0002
[HMPhBTM A-Leu-OMe] [PF6]
*X* Mode opératoire : cf mode opératoire général 3' en engageant [HMPhBTMA][PF6] et
Leu-OMe.
Etape 1: 10min. Etape 2: 3h. Le rendement est de 95%.
Aucune trace de [HMPhBTMA][PF6] libre n'est observée en RMN.
*l* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.39 (s, 9H); δ(Hb+r) = 3.66-3.71 (m, 2H+3H); S(Hc) = 1.92 (m, 2H); S(Hd) = 2.17 (m, 2H); S(H6) = 4.11 (t, J ≈ 6.0, 2H); S(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); S(Hh) = 7.31 (d, J = 8.6, 2H); S(Hj) = 5.01 (s, 2H) ; 0(H1) = 6.60 (m, IH); S(H1n) = 4.11 (m, IH); δ(Hn+nO = 1.49-1.66 (m, 1H+1H) ; δ(H0) = 1.73 (m, IH); δ(Hp) = 0.93 (d, J = 7.4, 6H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(C8) = 52.70 (t, JN-C = 4.0); 8(Cb) = 66.25 (t, JN-C = 2.9); δ(Cc) = 19.77; δ(Cd) = 25.86; δ(Ce) = 66.79; δ(Cf) = 158.76; 8(C8) = 114.32; δ(Ch) = 129.65; δ(Q) = 129.38; 8(Cj) = 65.68; 8(Ck) = 156.32; 8(C1n) = 52.52; S(Cn) = 40.48; 8(C0) = 24.52; S(Cp) = 20.81; 8(Cp-) = 22.34; 8(Cq) = 173.28; δ(Cr) = 51.38.
* HRMS(ESI)de (C22H37N2O5): [C+] m/zthéorique= 409.2702; m/zeXpariraentai ≈ 409.2700.
Figure imgf000081_0001
[HMPhBTMA-VaI-OMe] [PF6]
*> Mode opératoire : cf mode opératoire général 3' en engageant [HMPhBTMA][PF6] et
VaI-OMe.
Etape 1: 10min. Etape 2: 3h. Le rendement est de 88%.
Aucune trace de [HMPhBTMA][PF6] libre n'est observée en RMN.
*> huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb+q) = 3.61-3.73 (m, 2H+3H); δ(Hc) = 1.92 (m, 2H); δ(Hd+n) = 2.08-2.22 (m, 2H+1H); δ(He+m) = 4.06-4.17 (m, 2H+1H); δ(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hh) = 7.32.(d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 5.01 (s, 2H) ; δ(Hi) = 6.44 (m, IH); δ(H0) = 0.94 (d, J = 4.8, 3H); 8Qi0-) = 0.97 (d, J = 4.8, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.60 (t, JN-C = 3.8); δ(Cb) = 66.16; δ(Cc) = 19.63; δ(Cd) = 25.81; δ(Ce) = 66.88; δ(Cf) = 158.81; δ(Cg) = 114.47; δ(Ch) = 129.70; δ(Q) = 129.24; δ(Cj) = 65.93; δ(Ck) = 156.62; δ(Cm) = 59.76; 0(Cn) = 30.56; δ(C0) = 17.54; δ(Co') = 18.63; δ(Cp) = 172.45; δ(Cq) = 51.48.
* HRMS(ESI)de (C2IH35N2O5): [C+] LRMS(ESI)de (C42H70N4Oi0, PF6):
Figure imgf000081_0002
P Avec des aminoesters t-butyliques
Figure imgf000081_0003
[HMPhBTMA-AIa-OtBu] [PF6]
*> Mode opératoire : cf mode opératoire général 3' en engageant [HMPhBTMA][PF6] et
AIa-OtBu.
Etape 1: 10min. Etape 2: 3h. Le rendement massique est de 84%.
3% de [HMPhBTMA][PF6] libre contaminent le produit (déterminé par RMN).
*> huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.36 (s, 9H); δ(Hb) = 3.66 (m, 2H); δ(Hc) = 1.91 (m, 2H); δ(Hd) = 2.14 (m, 2H); δ(He+m) = 4.03-4.17 (m, 2H+1H); δ(Hg) = 6.93 (d, J ≈ 8.6, 2H); δ(Hh) = 7.32 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 5.00 (s, 2H) ; 0(H1) = 6.48 (m, IH); δ(Hn) = 1.35 (d, J = 7.3, 3H) ; δ(Hq) = 1.44 (s, 9H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.67 (t, JN-C = 4.1); δ(Cb) = 66.22 (t, JN-C = 2.9); δ(Cc) = 19.75; δ(Cd) = 25.83; δ(Ce) = 66.80; δ(Cf) = 158.75; δ(Cg) = 114.31; δ(Ch) = 129.72; δ(Q) = 129.43; δ(Q) = 65.56; δ(Ck) = 155.95; δ(Cm) = 50.31; δ(Cn) = 17.18; δ(C0) = 172.08; δ(Cp) = 80.54; δ(Cq) = 27.23.
*:* HRMS(ESI)de (C22H37N2O5): [C+]
Figure imgf000081_0004
= 409.2690. P- Avec des aminoesters de tri-terbutoxysilyle
Figure imgf000082_0001
[HMPhBTMA-AIa-OSiI] [PF6]
*> Mode opératoire : cf mode opératoire général 3' en engageant [HMPhBTMA][PF6] et Ala-Osil en en remplaçant les lavages à Féther par des lavages à l'heptane distillé.
Etape 1: 10min. Etape 2: 3h.
Le rendement est de 95%. Aucune trace de [HMPhBTMA][PF6] libre n'est observée en RMN.
*> huile visqueuse jaune * RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.40 (s, 9H); δ(Hb) = 3.71 (m, 2H); δ(Hc) =
1.91 (m, 2H); δ(Hd) ≈ 2.14 (m, 2H); δ(He+m) = 4.05-4.30 (m, 2H+1H); δ(Hg) = 6.92 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hh) = 7.32 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 5.00 (m, 2H); δ(Hn) = 1.43 (d, J = 7.4, 3H); δ(Hq) = 1.36 (s, 27H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.76 (t, JN-C = 4.0); δ(Cb) = 66.16; δ(Cc) = 19.75; δ(Cd) = 25.88; δ(Ce) = 66.87; δ(Cf) = 158.78; δ(Cg) = 114.38; δ(Ch) = 129.74; δ(Q)
= 129.33; δ(Q) = 65.66; δ(Ck) = 155.95; δ(Cm) = 50.76; δ(Cn) = 16.84; δ(C0) = 170.10; δ(Cp) = 73.82; δ(Cq) = 30.89.
* HRMS(ESI)de (C30H55N2O8Si): [C+] m/zthéorique = 599.3728; m/zeχpérimentai = 599.3733.
2.2.2. Synthèse de dipeptides protégés supportés.
Mode opératoire général 4 pour le couplage peptidique voie inverse:
1,0 eq. de peptide supporté est dissous dans l'acétonitrile puis 1,5 eq. de TEA, de carbodiimide (DCC, DIC ou EDCHCl), de HOBt et d'aminoester (GIy-OMe, AIa- OMe, VaI-OMe, Phe-OMe ou Leu-OMe) sont ajoutés. Le milieu est agité 2 heures à TA.
Si le carbodiimide utilisé est le DCC, le milieu réactionnel est filtré (DCU peu soluble dans l'acétonitrile) puis l'acétonitrile est évaporé.
Si le DIC ou EDCHCl sont utilisés, l'acétonitrile est évaporé directement.
Le résidu obtenu est alors lavé à Féther. > X = NTf2 Une chromatographie sur colonne d'alumine neutre est effectuée avec l'éluant DCM/ MeOH 1%.
> X = PF6 Le résidu est dissout dans du dichlorométhane puis la phase est lavée trois fois à l'eau puis trois fois par une solution aqueuse de HPF6 (KpH<2) avant d'être séchée sur sulfate de sodium puis filtrée. Le dichlorométhane est évaporé. >Avec le support [HBuTMA]
Figure imgf000083_0001
[HBuTMA-Aiso-Gly-OMe] [NTf2]
4J* Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HBuTM A- Aiso] [NTf2] et GIy-OMe.
Le rendement est de 32% (perte partielle de [HBuTMA- Aiso-Gly-OMe] [NTf2] lors des lavages aqueux)
*t* huile visqueuse jaune
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.40 (s, 9H); δ(Hb) = 3.67 (m, 2H); δ(Hc+d+h+h0 = 1.21-1.88 (m, 2H+2H+2H+2H); δ(He+g) = 4.03-4.22 (m, 2H+2H); δ(Hg.) = 2.88 (m, 2H); δ(H0 = 2.54 (m, IH); δ(Hk) = 6.87 (m, IH); 0(H1) = 3.96 (d, J = 5.9, 2H); δ(Hn) = 3.70 (s, 3H).
*> RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.70 (t, Jc-N = 4.0); δ(Cb) = 67.11; δ(Cc) = 20.44; δ(Cd) = 25.51; δ(Ce) = 64.51; δ(Cf) = 155.64; δ(Cg) = 44.05; δ(Ch) = 30.34; δ(Q) = 42.74; δ(Cj) = 175.30; δ(C,) = 41.36; δ(Cm) = 171.12; δ(Cn) = 52.06; δ(CNTf2) = 121.03 (q, Jc-F =321.5).
* HRMS(LSIMS) de (C24H38N3O6): [M+] m/zthéorique = 464.2761; m/zeχpérimentai = 464.2765.
>Avec le support [HHeTMA]
Figure imgf000083_0002
[HHeTMA-Aiso-Gly-OMe] [NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HHeTMA- Aiso] [NTf2] et GIy-OMe.
Le rendement est de 46% (perte partielle de [HHeTMA-Aiso-Gly-OMe] [NTf2] lors des lavages aqueux)
*** huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.33 (s, 9H); δ(Hb) = 3.55 (m, 2H); δ(Hc+d+e+j0 = 1.43-1.72 (m, 2H+2H+2H+2H); δ(Hf+j) = 1.75-2.02 (m, 2H+2H); δ(Hg+i) = 3.98-4.17 (m, 2H+2H); δ(Hr) = 2.86 (m, 2H); δ(Hk) = 2.51 (m, IH); δ(Hm) = 7.48 (m, IH); 0(H11) = 3.94 (d, J = 5.9, 2H); δ(Hp) = 3.67 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) - 52.74 (t, JCN = 4.1); δ(Cb) = 64.55; δ(Cc) = 22.59; δ(Cd) ≈ 25.69; δ(Ce) = 25.31; δ(Cf) = 28.34; δ(Cg) = 66.55; δ(Ch) = 154.95; δ(Q) = 43.15; δ(Cj) = 28.60; δ(Ck) = 40.55; δ(Q) = 174.70; 0(Cn) = 41.95; δ(C0) = 170.22; δ(Cp) = 51.24; δ(CNTQ) = 120.09 (q, Jc-F=321.1). * HRMS(LSIMS) de (Ci9H36N3O5): [M+] m/zthéorique = 386.2655; m/z6Xpéπmentai = 386.2653.
>Avec le support [HMPhTMA]
Figure imgf000084_0001
> X = PF6 : [HMPhBTMA-AiSo-AIa-OMe][PF6]
*l* Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA-
Figure imgf000084_0002
Le rendement est de 85%.
*> huile visqueuse jaune
<* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb) = 3.68 (m, 2H); δ(Hc) = 1.92 (m, 2H); δ(Hd) = 2.16 (m, 2H); δ(He+i) = 4.02-4.16 (m, 2H+2H); δ(Hg) = 6.94 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hh) ≈ 7.34 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 5.04 (s, 2H) ; δ(Hr) = 2.86 (m, 2H); δ(Hm) = 1.58 (m, 2H); 0(Hn,) = 1.75 (m, 2H); 0(H0) = 2.48 (m, IH); δ(Hp) = 7.43 (m, IH); δ(Hq)
= 4.41 (m, IH); δ(Hr) = 1.34 (d, J = 7.3, 3H); δ(Ht) = 3.66 (s, 3H). * RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.69 (t, JN-C = 3.9); δ(Cb) = 66.17; δ(Cc) = 19.78; δ(Cd) = 25.87; δ(Ce) = 66.80; δ(Cf) = 158.75; δ(Cg) = 114.38; δ(Ch) = 129.65; δ(Q) - 129.58; δ(Cj) = 66.17; δ(Ck) = 154.79; δ(Q) = 43.19; δ(Cm) = 28.30; δ(Cn) = 41.85; δ(C0) = 173.98; δ(Cq) = 47.80; δ(Cr) = 16.81; 0(C8) = 173.12; δ(Ct) = 51.38.
> X = NTf2 : [HMPhBTMA-AiSO-AIa-OMe][NTf2]
*X* Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA- AiSo][NTf2] et AIa-OMe. Le rendement est de 55%.
*> huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.41 (s, 9H); δ(Hb) = 3.71 (m, 2H); δ(Hc+m) = 1.72-1.97 (m, 2H+2H); δ(Hd) = 2.18 (m, 2H); 0(H6+1) - 4.04-4.16 (m, 2H+2H); δ(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hh+p) = 7.33-7.36 (m, 2H+1H); δ(Hj) - 5.04 (s, 2H) ; δ(Hr) = 2.85 (m, 2H); δ(Hm.) = 1.58 (m, 2H); δ(Hn) = 2.48 (m, IH); δ(Hq) = 4.42 (m, IH); δ(Hr) - 1.34
(d, J = 7.3, 3H); 0(H1) = 3.67 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.78 (t, JN-C = 4.1); δ(Cb) = 66.30; δ(Cc) = 19.84; δ(Cd) = 25.84; δ(Ce) = 66.77; δ(Cf) = 158.73; δ(Cg) = 114.36; δ(Ch+i) = 129.63; δ(Cj) = 66.17; δ(Ck) = 154.80; δ(Q) = 43.18; δ(Cm) = 28.30; 0(Cn) - 41.88; δ(C0) = 174.01; δ(Cq) = 47.81; δ(Q = 16.81; δ(Cs) = 173.07; δ(Q) = 51.37; δ(CNTf2) = 120.12 (q,
Jc-F= 321.4). *> HRMS(ESI) de (C25H40N3O6): [C+] m/zthéorique = 478.2917; m/zeχpéπmentai = 478.2918.
Figure imgf000085_0001
[HMPhBTMA-Aiso-Gly-OMe] [NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA- Aiso][NTf2] et GIy-OMe. Le rendement est de 74%. *** huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.40 (s, 9H); δ(Hb) = 3.70 (m, 2H); δ(Hc+m) ≈ 1.75-1.98 (m, 2H+2H); δ(Hd) = 2.18 (m, 2H); δ(He+1) = 4.04-4.20 (m, 2H+2H); δ(Hg) ≈ 6.93 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hh) = 7.34 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 5.04 (s, 2H) ; δ(Hr) = 2.90 (m, 2H); δ(Hm.) = 1.60 (m, 2H); 0(Hn) = 2.53 (m, IH); δ(Hp) ≈ 7.43 (m, IH); δ(Hq) = 3.94 (d, J = 5.9, 2H); δ(Hs) = 3.67 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.80 (t, JN-c = 4.1); δ(Cb) = 66.36; δ(Cc) ≈ 19.87; δ(Cd) = 25.83; δ(Ce) = 66.76; δ(Cf) = 158.72; δ(Cg) = 114.35; δ(Ch+D ≈ 129.64; δ(Q) = 66.13; δ(Ck) = 154.76; δ(Q) ≈ 40.50; δ(Cm) = 28.70; δ(Cn) = 41.91; δ(C0) = 174.41; δ(Cq) = 40.50; δ(Cr) = 170.23; δ(Cs) = 51.18; δ(CNTf2) = 120.14 (q, Jc-F= 321.5).
* HRMS(ESI) de (C24H38N3O6): [M+] m/zthéoπque = 464.2761; m/zexpirimmtaι ≈ 464.2765.
Figure imgf000085_0002
> X = NTf2: [HMPhBTMA-AiSO-LeU-OMe][NTf2]
*l* Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA- AiSO][NTf2] et Leu-OMe. Le rendement est de 65%. *> huile visqueuse jaune *> RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.39 (s, 9H); δ(Hb) = 3.70 (m, 2H); δ(Hc) =
1.92 (m, 2H); δ(Hd) ≈ 2.17 (m, 2H); δ(He+i) = 4.03-4.17 (m, 2H+2H); δ(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hh+p) = 7.32-7.35 (m, 2H+1H); δ(Hj) = 5.04 (s, 2H); δ(Hr) = 2.87 (m, 2H); δ(Hm+I+r.+s) = 1.47-1.69 (m, 2H+1H+1H+1H); δ(Hm.) ≈ 1.75 (m, 2H); δ(Hn) = 2.50 (m, IH); δ(Hq) = 4.49 (m, IH); δ(Ht) = 0.90 (d, J = 6.4, 3H); S(Ht) = 0.93 (d, J = 6.4, 3H); δ(Hv) = 3.66 (s, 3H).
*> RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.76 (t, JN-C = 3.9); δ(Cb) = 66.33; δ(Cc) = 19.82; δ(Cd) = 25.84; δ(Ce) = 66.80; δ(Cf) = 158.75; δ(Cg) = 114.41; δ(Ch) = 129.60; δ(Q) = 129.53; δ(Q) = 66.25; δ(Ck) = 154.85; δ(Q) ≈ 43.20; δ(Cm) = 28.70; δ(Cn) = 41.95; S(C0) ≈ 174.39; δ(Cq) = 50.55; δ(Cr) = 40.39; δ(Cs) = 24.64; δ(Q) = 20.97; δ(Cf) = 22.39; δ(Cu) = 173.08; δ(Cv) = 51.40; δ(CNTβ) = 120.10 (q, JC.F= 321.3). * HRMS(ESI) de (C28H46N3O6): [C+] m/zthéorique = 520.3386; m/ZeχPériemntai = 520.3386.
> X = PF6 : [HMPhBTMA-AiSo-LeU-OMe][PF6]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA- Aiso][PF6] et Leu-OMe.
Le rendement est de 85%. *** huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb) = 3.68 (m, 2H); δ(Hc) = 1.92 (m, 2H); δ(Hd) = 2.17 (m, 2H); δ(He+i) = 4.03-4.15 (m, 2H+2H); δ(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hh+p) = 7.29-7.36 (m, 2H+1H); δ(Hj) = 5.04 (s, 2H); δ(Hr) = 2.87 (m, 2H); δ(Hmwt-s) = 1.45-1.69 (m, 2H+1H+1H+1H); δ(Hm.) = 1.75 (m, 2H); δ(Hn) = 2.48 (m, IH); δ(Hq) = 4.49 (m, IH); 5(H1) = 0.90 (d, J = 6.3, 3H); 5(H1?) = 0.93 (d, J = 6.4, 3H); δ(Hv) = 3.66 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.56; δ(Cb) = 66.40; δ(Cc) = 19.64; δ(Cd) = 25.82; δ(Ce) ≈ 66.87; δ(Cf) = 158.76; δ(Cg) = 114.52; δ(Ch) = 129.62; δ(Cj) = 129.41; δ(Cj) = 66.12; δ(Ck) = 154.98; δ(Q) = 43.25; δ(Cm) = 28.57; 5(C11) = 41.94; 5(C0) = 174.76; δ(Cq) = 50.67; δ(Cr) ≈ 40.25; δ(Cs) = 24.68; δ(Ct) = 21.08; δ(Q) ≈ 22.53; δ(Cu) ≈ 173.15; δ(Cv) = 51.64.
Figure imgf000086_0001
[HMPhBTMA-Aiso-Phe-OMe] [NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA- AiSo][NTf2] et Phe-OMe. Le rendement est de 65%. *l* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.36 (s, 9H); 5(Hb) = 3.72 (m, 2H); δ(Hc) ≈ 1.91 (m, 2H); δ(Hd) = 2.15 (m, 2H); δ(He+0 = 3.99-4.11 (m, 2H+2H); δ(Hg) = 6.96 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hh+p+t+u+v) = 7.04-7.37 (m, 2H+1H+2H+2H+1H); δ(Hj) = 5.03 (s, 2H); δ(Hr) = 2.81 (m, 2H); δ(Hm) = 1.48 (m, 2H); δ(Hm.) = 1.68 (m, 2H); δ(Hn) = 2.44 (m, IH); δ(Hq) = 4.71 (m, IH); 0(Hr+1-) = 2.95-3.21 (m, 1H+1H); 0(Hx) = 3.67 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.79 (t, JN-c = 3.9); δ(Cb) = 66.33; δ(Cc) = 19.85; δ(Cd) = 25.83; δ(Ce) = 66.79; δ(Cf) = 158.73; δ(Cg) = 114.40; 5(Ch) = 129.59; δ(Q) = 129.55; 5(Q) = 66.27; δ(Ck) = 155.84; δ(Q) = 43.15; δ(Cm) ≈ 29.56; 5(Cn) = 41.89; 5(C0) = 174.12; δ(Cq) = 53.47; δ(Q) = 37.34; δ(Cs) = 137.18; δ(Q) = 129.24; δ(Cu) = 128.30; 5(Cv) = 126.67; δ(Cw) = 171.95; δ(Cx) = 51.56; δ(CNTβ) = 120.10 (q, JC-F =
Figure imgf000086_0002
554.3230; m/zeXpérimentai = 554.3233.
Figure imgf000087_0001
[HMPhBTMA-Aiso-Val-OMe] [NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA- AiSo][NTf2] et VaI-OMe. Le rendement est de 65%. *X* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) - 3.41 (s, 9H); δ(Hb) = 3.71 (m, 2H); δ(Hc) = 1.93 (m, 2H); δ(Hd+r) = 2.08-2.24 (m, 2H+1H); δ(He+]) = 4.05-4.18 (m, 2H+2H); δ(Hg) = 6.93 (d, J ≈ 8.7, 2H); δ(Hh) = 7.34 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 5.04 (s, 2H); δ(Hr) = 2.87 (m, 2H); δ(Hm) = 1.60 (m, 2H); δ(Hra.) = 1.78 (m, 2H); δ(Hn) = 2.56 (m, IH); δ(Hp) = 7.34 (m, IH); δ(Hq) = 4.41 (m, IH); δ(Hs+s') = 0.90-0.94 (m, 3H+3H); δ(Hu) = 3.69 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.76 (t, JN-C = 4.0); δ(Cb) = 66.31; δ(Cc) = 19.82; δ(Cd) = 25.83; δ(Ce) = 66.80; δ(Cf) = 158.74; δ(Cg) = 114.41; δ(Ch) = 129.59; δ(Q) ≈ 129.53; δ(Q) = 66.26; δ(Ck) = 155.87; δ(Q) = 43.24; δ(Cm) = 26.59; δ(Cn) = 41.95; δ(C0) = 174.48; δ(Cq) = 57.41; δ(Cr) = 30.54; δ(Cs) = 17.53; δ(Cs.) = 17.60; δ(Q) = 172.12; δ(Cu) = 51.27; δ(CNTf2) = 120.10 (q, JC-F= 321.4).
*> HRMS(ESI) de (C27H44N3O6): [C+] m/ziωoriquβ≈ 506.3230; m/zςXpérimentai = 506.3226.
Figure imgf000087_0002
> [HMPhBTMA-GIy-AIa-OMe][PF6]
*X* Mode opératoire: cf mode opératoire général 5 en engageant [HMPhBTMA-GIy- OMe][PF6] puis 4 en engageant [HMPhBTMA-GIy][PF6] formé et AIa-OMe. Le rendement massique est de 95% (sur les deux étapes). *> huile visqueuse jaune
<* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb) = 3.68 (m, 2H); δ(Hc) = 1.92 (m, 2H); δ(Hd) ≈ 2.17 (m, 2H); δ(He) = 4.11 (t, J ≈ 6.0, 2H); δ(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hh) = 7.33 (d, J = 8.6, 2H); δ(H) = 5.02 (s, 2H) ; 0(H1) = 6.47 (m, IH); δ(Hm) = 3.83 (d, J = 5.9, 2H); δ(H0) = 7.50 (m, IH); δ(Hp) = 4.46 (m, IH); δ(Hq) = 1.35 (d, J - 7.2, 3H); δ(Hs) = 3.68 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.69 (t, JN-C = 4.0); δ(Cb) = 66.24; δ(Cc) = 19.75; δ(Cd) = 25.84; δ(Ce) = 66.81; δ(Cf) = 158.77; δ(Cg) = 114.36; δ(Ch) = 129.71; δ(Q) = 129.37; δ(Q) = 66.24; δ(Ck) = 157.00; δ(Cm) = 43,75; 0(Cn) = 172.85; δ(Cp) = 47.87; δ(Cq) ≈ 17.01; δ(Cr) = 168.92; δ(Cs) = 51.51.
* HRMS(ESI) de (C2IH34N3O6): [C+] m/zthéorique = 424.2448; m/zeχpérimentai = 424.2448.
Figure imgf000088_0001
> [HMPhBTMA-LeU-AIa-OMe][PF6] * Mode opératoire: cf mode opératoire général 5 en engageant [HMPhBTMA-Leu-
OMe][PF6] puis 4 en engageant [HMPhBTMA-Leu] [PF6] et AIa-OMe. Le rendement est de 40% sur les deux étapes. *t* huile visqueuse jaune *> RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb) = 3.68 (m, 2H); δ(Hc) ≈ 1.92 (m, 2H); δ(Hd) = 2.17 (m, 2H); δ(He) = 4.10 (t, J = 6.0, 2H); δ(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6,
2H); δ(Hh) - 7.32 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 5.01 (s, 2H) ; δ(H0 = 6.34 (m, IH); δ(Hm) = 4.24 (m, IH); δ(Hn+nO = 1.50-1.65 (m, 1H+1H); δ(H0) = 1.76 (m, IH); δ(Hp) = 0.92 (m, 6H); δ(Hr) ≈ 7.58 (m, IH); δ(Hs) ≈ 4.43 (m, IH); δ(Ht) = 1.35 (d, J = 7.3, 3H); δ(Hv) = 3.68 (s, 3H). *> RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) ≈ 52.68 (t, JN-C = 4.1); δ(Cb) = 66.23; δ(Cc) =
19.74; δ(Cd) = 25.87; δ(Ce) = 66.83; δ(Cf) = 158.76; δ(Cg) = 114.35; δ(Ch) = 129.62; δ(Q) = 129.39; δ(Cj) = 65.71; δ(Ck) = 156.22; δ(Cffl) = 51.49; δ(Cn) = 41.41; δ(C0) ≈ 24.42; δ(Cp) - 22.58; δ(Cp>) = 21.13; δ(Cq) = 172.25; δ(Cs) = 47.89; δ(Q) = 16.85; 0(Cn) =
Figure imgf000088_0002
2N3O6): [C+] m/zthéorique = 480.3074; m/zeXpérimentai = 480.3074.
2.2.3. Déprotection des dipeptides supportés.
Mode opératoire général 5 pour le clivage de l'ester méthylique terminal l.Oeq. de peptide supporté protégé est dissous dans l'acétonitrile anhydre. 2.0eq. de triméthylsilanolate de potassium sont ajoutés au milieu qui est alors agité 2 heures à TA. Le milieu est alors filtré sur célite. Les solvants sont évaporés sous vide et le résidu est lavé à l'éther.
Figure imgf000088_0003
[HMPhBTMA-Aiso-Leu-OK] [PF6]
*X* Mode opératoire: cf mode opératoire général 5 en engageant [HMPhBTMA-Aiso-
Figure imgf000089_0001
Le rendement est de 97%.
*** huile visqueuse jaune
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) ≈ 3.36 (s, 9H); δ(Hb) = 3.66 (m, 2H);
Figure imgf000089_0002
1.31-2.23 (m, 2H+2H+2H+2H+1H+1H+1H); δ(He+I+q) = 3.99-4.29 (m,
2H+2H+1H); δ(Hg) ≈ 6.94 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hh) = 7.34 (d, J ≈ 8.5, 2H); δ(Hj) = 5.04 (s,
2H); δ(Hr) = 2.84 (m, 2H); δ(Hn) = 2.59 (m, IH); δ(Hp) = 7.89 (m, IH); δ(Ht+t-) ≈ 0.80-
1.02 (m, 3H+3H).
*> RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.67; δ(Cb) ≈ 66.20; δ(Cc) ≈ 19.74; δ(Cd) =
25.83; δ(Ce) ≈ 66.82; δ(Cf) = 158.72; δ(Cg) = 114.42; δ(Ch) = 129.62; δ(Q) = 129.52; δ(Cj) = 66.20; δ(Ck) = 154.87; δ(Q) = 43.36; δ(Cm) = 29.28; δ(Cn) = 42.10; 0(C0) =
178.24; δ(Cq) = 53.58; δ(Cr) = 41.89; δ(Cs) = 25.13; δ(Q) = 21.59; δ(Cf) ≈ 23.26; δ(Cu) ≈
174.57.
Figure imgf000089_0003
[HMPhBTMA-Aiso-Phe-OK] [NTf2] *l* Mode opératoire: cf mode opératoire général 5 en engageant [HMPhBTMA-Aiso-
Figure imgf000089_0004
Le rendement est de 95%.
*X* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.36 (s, 9H); δ(Hb) - 3.72 (m, 2H); δ(Hc) = 1.91 (m, 2H); δ(Hd) = 2.15 (m, 2H); δ(He+i) = 3.99-4.11 (m, 2H+2H); δ(Hε) = 6.96 (d, J =
8.6, 2H); δ(Hh+p+t+u+v) = 7.04-7.37 (m, 2H+1H+2H+2H+1H); δ(Hj) = 5.03 (s, 2H); δ(Hr) ≈
2.81 (m, 2H); δ(Hm) ≈ 1.48 (m, 2H); δ(Hm.) = 1.68 (m, 2H); 0(H11) = 2.44 (m, IH); δ(Hq) =
4.71 (m, IH); 0(H^) = 2.95-3.21 (m, 1H+1H).
*> RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.79; δ(Cb) ≈ 66.22; δ(Cc) = 19.82; δ(Cd) ≈ 25.85; δ(Cè) = 68.41; δ(Cf) = 158.71; δ(Cg) ≈ 114.41; δ(Ch) = 129.62; δ(Q) - 129.53; δ(Q) = 66.81; δ(Ck) = 154.83; δ(Q) = 43.27; δ(Cm) = 29.56; 0(Cn) = 42.00; δ(C0) ≈
174.01; δ(Cq) ≈ 56.12; δ(Cr) ≈ 38.09; δ(Cs) ≈ 139.78; δ(Ct) = 129.62; δ(Cu) = 127.81; δ(Cy) = 125.72; δ(Cw) = 176.48; δ(CNτi2) = 120.11 (q, JC-F = 321.3).
Figure imgf000090_0001
[HMPhBTMA-Aiso-Val-OK] [NTf2]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 5 en engageant [HMPhBTMA-Aiso- VaI-OMe][NTf2].
Le rendement est de 80%.
*> huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.41 (s, 9H); δ(Hb) = 3.71 (m, 2H); δ(Hc) =
1.93 (m, 2H); δ(Hd+r) = 2.08-2.24 (m, 2H+1H); δ(He+i) = 4.05-4.18 (m, 2H+2H); S(H8) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hh) = 7.34 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 5.04 (s, 2H); δ(Hr) = 2.87 (m,
2H); δ(Hm) = 1.60 (m, 2H); δ(Hm.) = 1.78 (m, 2H); δ(Hn) = 2.56 (m, IH); δ(Hp) = 7.34 (m,
IH); δ(Hq) = 4.41 (m, IH); δ(Hs+s.) = 0.90-0.94 (m, 3H+3H).
*> RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.78; δ(Cb) = 66.18; δ(Cc) = 19.66; δ(Cd) =
25.86; δ(Ce) = 66.80; δ(Cf) = 158.71; S(C8) = 114.40; δ(Ch+i) = 129.60; S(Cj) = 66.31; S(Ck) = 154.84; δ(Q) = 43.34; S(C1n) = 26.59; S(Cn) = 42.17; S(C0) = 177.47; S(Cq) =
60.03; S(Cr) = 30.54; δ(Cs) = 12.73; S(C8.) = 18.08; δ(Ct) = 174.34; δ(CNTβ) = 120.10 (q,
Jc-F= 321.4).
2.2.4. Synthèse de tripeptides protégés.
Figure imgf000090_0002
[HMPhBTMA-Aiso-Leu-Gly-OMe] [PF6]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA-Aiso- LeU-OK][PF6] et GIy-OMe.
Le rendement est de 50%.
*X* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : S(H8) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb+y) = 3.58-3.70 (m,
2H+3H); S(Hc) = 1.91 (m, 2H); 8(HL3) = 2.10 (m, 2H); δ(He+1) = 4.01-4.18 (m, 2H+2H); S(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hh+p) = 7.23-7.37 (m, 2H+1H); S(Hj) = 5.04 (s, 2H); δ(Hv)
= 2.85 (m, 2H); δ(Hm+ny+sW) = 1.43.-1.82 (m, 2H+2H+1H+1H+1H); 8(Hn) = 2.49 (m, IH); S(Hq) ≈ 4.48 (m, IH); δ(Ht) = 0.89 (d, J = 6.3, 3H); δ(Ht.) = 0.92 (d, J = 6.4, 3H); δ(Hv) = 7.62 (m, IH); 8(HW) = 3.94 (d, J = 7.1, 2H).
*> RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.68 (t, JN-c = 4.0); δ(Cb) = 66.22; δ(Cc) =
19.77; δ(Cd) = 25.84; δ(Ce) ≈ 66.79; δ(Cf) = 158.75; δ(Cg) = 114.37; δ(Ch) = 129.68; δ(Ci)
= 129.52; δ(Cj) = 66.22; δ(Ck) = 154.81; δ(Q) = 43.18; δ(Cm) = 28.52; 8(Cn) = 42.16;
Figure imgf000091_0001
[HMPhBTMA-Aiso-Leu-Phe-OMe] [PF6]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA-Aiso- LeU-OK][PF6] et Phe-OMe. Le rendement est de 92%. *t* huile visqueuse j aune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : S(H8) ≈ 3.36 (s, 9H); δ(Hb) = 3.64 (m, 2H); S(H0) = 1.91 (m, 2H); δ(Hd) = 2.10 (m, 2H); δ(He+i) = 4.03-4.18 (m, 2H+2H); δ(Hg) - 6.93 (d, J = 8.5, 2H); δ(Hh+p+v+z+aa+ab) = 7.17-7.51 (m, 2H+1H+1H+2H+2H+1H); S(Hj) = 5.04 (s, 2H); S(HiO = 2-83 (m, 2H); δ^+^+s^.) = 1.23-1.80 (m, 2H+2H+1H+1H+1H); S(Hn) = 2.43 (m, IH); S(Hq) = 4.45 (m, IH); S(H1) = 0.86 (d, J = 6.3, 3H); S(H4O = 0.90 (d, J = 6.4, 3H);
5(HW) = 4.69 (m, IH); δ(Hx+x.) = 2.94-3.23 (m, 1H+1H); δ(Had) = 3.67 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(C8) = 52.66 (t, JN-C ≈ 3.9); 8(Cb) = 66.27; δ(Cc) = 19.75; S(Cd) = 25.85; S(C6) = 66.82; δ(Cf) = 158.77; δ(Cg) = 114.42; S(Ch) = 129.51; S(Q) = 129.29; 8(Cj) = 66.27; S(Ck) = 154.83; δ(Ci) = 43.21; δ(Cm) = 28.36; S(Cn) = 42.05; 8(C0) ≈ 174.39; δ(Cq) = 53.51; S(Q) = 40.71; S(C8) = 24.36; S(Ct) = 21.24; S(Q) = 22.54;
S(C11) = 171.62; S(Cw) = 55.24; S(Cx) = 37.29; S(Cy) = 136.87; S(C2) = 128.82; δ(Caa) = 128.35; δ(Cab) = 126.71; δ(Cao) = 172.24; δ(Cad) = 51.56.
* HRMS de (C37H55N4O7) : [C+] m/zthéorique = 667.4071; m/zexpérimentai = 667.4070.
Figure imgf000091_0002
[HMPhBTMA-AiSO-LeU-VaI-OMe][PF6]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA-Aiso- LeU-OK][PF6] et VaI-OMe. Le rendement est de 52%. *** huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb) = 3.68 (m, 2H); δ(Hc) =
1.92 (m, 2H); δ(Hd+x) = 2.08-2.24 (m, 2H+1H); δ(He+1) = 4.07-4.18 (m, 2H+2H); δ(Hg) =
6.93 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hh+p+v) = 7.23-7.45 (m, 2H+1H+1H); δ(Hj) = 5.04 (s, 2H); δ(Hr) = 2.84 (m, 2H); δ(Hm+m.+s+rfr.) = 1.45-1.83 (m, 2H+2H+1H+1H+1H); δ(Hn) ≈ 2.52 (m, IH); δ(Hq) = 4.50 (m, IH); δ(Ht+f+y+y) = 0.82-0.97 (m, 3H+3H+3H+3H); δ(Hw) = 4.38 (m, IH); δ(Haa) = 3.69 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.66 (t, JN-C = 4.0); δ(Cb) = 66.25; δ(Cc) = 19.77; δ(Cd) = 25.84; δ(Cβ) = 66.80; δ(Cf) = 158.76; δ(Cg) = 114.39; 0(Cn) = 129.65; δ(Q) = 129.50; δ(Cj) = 66.25; δ(Ck) = 154.82; δ(Q) = 43.21; δ(Cm) = 28.57; 0(Cn) = 42.14; δ(Co) = 174.58; δ(Cq) = 51.44; δ(Cr) = 40.50; 0(C8) ≈ 24.55; δ(Ct) = 21.21; δ(Ct.) = 21.25; δ(Cu) = 172.44; δ(Cw) = 57.25; δ(Cx) = 30.76; δ(Cy) = 17.40; δ(Cy.) = 18.53; δ(Cz) ≈
Figure imgf000092_0001
* HRMS de (C33Hs5N4O7) : [C+] m/zfcêαrique = 619.4071; m/zeχpérimentai = 619.4070.
Figure imgf000092_0002
[HMPhBTMA-AiSO-PhC-LeU-OMe][NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 4 en engageant [HMPhBTMA-Aiso- Phe-OK] [NTf2] et Leu-OMe. Le rendement est de 64%. *** huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.36 (s, 9H); δ(Hb) = 3.70 (m, 2H); δ(Hc) = 1.92 (m, 2H); δ(Hd) = 2.18 (m, 2H); δ(He+]) = 3.97-4.13 (m, 2H+2H); δ(Hg) - 6.92 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hh) = 7.33 (d, J = 8.6, 2H); δ(Hj) = 5.03 (s, 2H); δ(Hr) = 2.85 (m, 2H); δ(Hm+mWn) = 1.28-1.78 (m, 2H+2H+1H+1H+1H); 0(Hn) = 2.43 (m, IH); δ(Hp+t+u+v) = 7.14-7.26 (m, 1H+2H+2H+1H); δ(Hq) = 4.72 (m, IH); 0(H1+1.) = 2.88-3.22 (m, 1H+1H); 0(Hx) = 7.51 (m, IH); δ(Hy) = 4.49 (m, IH); S(H2) = 0.90 (d, J = 6.3, 3H); δ(Hy) = 0.91 (d, J = 6.4, 3H); 0(H4) = 3.68 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.80 (t, JN-C = 4.1); δ(Cb) = 66.31; δ(Cc) = 19.86; δ(Cd) = 25.86; δ(Ce) = 66.78; δ(Cf) = 158.72; δ(Cg) - 114.35; 0(Cn) = 129.64; δ(Q) = 129.32; δ(Q) ≈ 66.15; δ(Ck) = 154.74; δ(Q) = 43.09; δ(Cm) = 29.51; δ(Cn) = 41.98; δ(C0) = 174.05; δ(Cq) = 53.84; δ(Cr) = 37.62; δ(Cs) = 137.68; δ(Q) = 129.40; δ(Cu) = 128.13; δ(Cv) = 126.39; δ(Cw) = 172.69; δ(Cy) = 50.62; δ(Cz) - 40.64; 0(C1) = 24.46; δ(C2) = 20.96; 0(C2.) = 21.04; δ(C3) = 171.29; δ(C4) = 51.45; δ(CNTf2) = 120.14 (q, Jc-F = 321.5).
* HRMS de (C37H55N4O7) : [C+] m/zthéoπque≈ 667.4071; m/zeχpérimemai = 667.4069. 2.2.5. Clivage des peptides supportés.
Mode opératoire général 6 pour le clivage de peptides supportés par voie inverse par le TFA: l.Oeq. de peptide supporté est dissous dans une solution à 10% de TFA dans le DCM anhydre avec un volume de solution tel qu'environ lOeq. de TFA par rapport au sel soient ajoutés. Le mélange est agité 10 minutes à TA puis les solvants sont évaporés sous vide. Du dichlorométhane et de l'eau sont ajoutés au résidu. La phase organique est lavée trois fois à l'eau. Les phases aqueuses sont réunies et l'eau est évaporée.
Figure imgf000093_0001
[Aiso-Leu-OMe] [CF3COO]
»> Mode opératoire: cf mode opératoire général 6 en engageant [HMPhBTMA-Aiso- LeU-OMe][NTf2]. Le rendement est de 95%. *X* huile incolore
* RMN1H (200MHz, D2O) : δ(Hc) = 2.98 (m, 2H); δ(Hc.) = 3.39 (m, 2H); δ(Hd+d.+i) = 1.67-2.04 (m, 2H+2H+1H); δ(He) = 2.61 (m, IH); δ(Hg) = 4.33 (m, IH); δ(Hh) = 1.56 (d, J ≈ 6.4, 2H); δ(Hj) = 0.80 (d, J = 8.9, 3H); δ(Hj.) = 0.82 (d, J = 8.9, 3H); δ(Hi) = 3.65 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, D2O) : δ(Ca) = 116.67 (q, Jc-F = 289.1); δ(Cb) = 162.89; δ(Cc) ≈ 43.33; δ(Cd) = 25.34; δ(Cd.) = 25.12; δ(Ce) = 39.40; δ(Cf) = 176.86; δ(Cg) = 53.21; δ(Ch) = 39.66; δ(Q) = 24.75; δ(Q) = 20.82; δ(Q.) ≈ 22.40; δ(Ck) =175.53; δ(Q) = 51.75.
Figure imgf000093_0002
[Aiso-Phe-OMe] [CF3COO]
*l* Mode opératoire: cf mode opératoire général 6 en engageant [HMPhBTMA-Aiso-
Phe-OMe] [NTf2]. Le rendement est de 98%.
*X* huile incolore
* RMN1H (300MHz, D2O) : δ(Hc+c.+h+h.) = 2.79-3.42 (m, 2H+2H+1H+1H); δ(Hd+d.) =
1.41-1.93 (m, 2H+2H); δ(He) = 2.46 (m, IH); δ(Hg) = 4.65 (dd, J1 ≈ 5.5, J2 = 4.2, IH); δ(Hj+k+]) = 7.14-7.30 (m, 2H+2H+1H); δ(Hn) = 3.65 (s, 3H). * RMN13C (75MHz, D2O) : δ(Ca) = 116.30 (q, JC-F = 291.5); δ(Cb) = 162.84 (q, J = 35.7); δ(Cc) = 42.87; δ(Cd) = 24.91; δ(Cd-) = 24.55; δ(Ce) = 39.19; δ(Cf) = 175.92; δ(Cg) = 53.77; δ(Ch) = 36.55; δ(Q) = 136.51; δ(Q) = 129.17; δ(Ck) = 128.69; δ(Q) = 127.12; δ(Cm) = 173.58; δ(Cn) = 52.95.
Figure imgf000094_0001
[Aiso-Val-OMe] [CF3COO]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 6 en engageant [HMPhBTMA-Aiso- VaI-OMe] [NTf2] . Le rendement est de 98%.
*> huile incolore
* RMN1H (200MHz, D2O) : δ(Hc) = 3.01 (m, 2H); δ(Hc.) = 3.43 (m, 2H); δ(Hd) = 1.82 (m, 2H); δ(Hd.) = 2.00 (m, 2H); δ(He) = 2.69 (m, IH); δ(Hg) = 4.22 (d, J = 6.1, IH); δ(Hh) = 2.12 (m, IH); 0(H1) = 0.87 (d, J = 6.9, 6H); δ(Hk) = 3.70 (s, 3H). * RMN13C (75MHz, D2O) : δ(Ca) =116.22 (q, J ≈ 291.3); δ(Cb) = 162.53 (q, Jc-F =
35.8); δ(Cc) = 43.01; δ(Cd) = 24.81; δ(Cd.) = 25.11; δ(Ce) = 39.26; δ(Cf) = 176.51; δ(Cg) = 58.50; δ(Ch) = 29.88; δ(Q) = 17.40; δ(Q.) ≈ 18.20; δ(Q) = 174.08; δ(Ck) = 52.64.
Mode opératoire général 6' pour le clivage de peptides supportés par voie inverse par TMSBr
1,0 eq. de peptide supporté [HMPhBTMA-AA1 -...-AAn] [PF6] est dissous dans l'acétonitrile anhydre puis 1,5 eq. de TMSBr sont ajoutés. Le mélange est agité 30 minutes à TA puis est filtré. Le filtré (peptide) est lavé à l'acétonitrile.
Le clivage dans ces conditions a été testé sur [HMPhBTMA- Aiso] [PF6]. L'acide isonipécotique a été isolé avec un rendement de 95%.
2.3. Synthèse Peptidique Supportée sur Sel d'Onium - Voie Directe
2.3.1. Greffage du premier aminoacide
Mode opératoire général 7 pour le greffage de la Fmoc-alanine par estérification
1,0 eq. de sel d'onium sont dissous dans l'acétonitrile puis 1,5 eq. de DCC et 0,1 eq. de DMAP sont ajoutés. Le milieu est agité toute la nuit à TA. Le mélange est filtré puis l'acétonitrile est évaporé. Le résidu est lavé à Péther puis dissous dans du DCM. Cette phase est lavée deux fois par un dixième en volume de solution aqueuse de HCl IN avant d'être séchée sur sulfate de sodium et filtrée. Le DCM est alors évaporé.
Mode opératoire général 8 pour le clivage du groupement Fmoc
Le peptide supporté ayant l'aminé terminale protégée par un groupement Fmoc est dissous dans Pacétonitrile, puis de la pipéridine (10 à 20% en volume) est ajoutée.
Le milieu est agité 15 minutes à TA avant d'évaporer les solvants. Le résidu est lavé à l'éther.
>Avec le support [HPrTMA]
Figure imgf000095_0001
[Fmoc- AIa-HPrTMA] [NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 7 en engageant [HPrTMA][NTf2]. Le rendement est de 80%. *> huile visqueuse jaune.
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb) = 3.71 (m, 2H); δ(Hc) = 2.37 (m, 2H); δ(Hd+f+j+k) = 4.21-4.41 (m, 2H+1H+2H+1H); δ(Hg) = 1.45 (d, J = 7.3, 3H); δ(Hh) = 7.07 (m, IH); δ(Hm) ≈ 7.73 (d, J = 7.2, 2H); δ(Hn+0) = 7.33-7.50 (m, 2H+2H); δ(Hp) = 7.91 (d, J = 6.9, 2H).
* RMN13C (50MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 54.15 (t, JN-C = 4.0); δ(Cb) = 62.47; δ(Cc) = 23.97; δ(Cd) = 65.11; δ(Ce) = 174.14; δ(Cf) = 51.20; δ(Cg) = 17.89; δ(Q) = 157.48; δ(Cj) = 67.65; δ(Ck) = 48.34; δ(Ci) ≈ 145.39; δ(Cm) = 126.55; 0(Cn) = 128.44; δ(C0) = 129.06; δ(Cp) ≈ 121.31; δ(Cq) = 142.51; δ(CNTf2) = 121.43 (q, Jc-F= 321.2).
Figure imgf000095_0002
[AIa-HPrTMA][NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 8 en engageant [Fmoc-Ala-
HPrTMA][NTf2].
Le rendement est de 97%.
*** huile visqueuse jaune * RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.43 (s, 9H); δ(Hb) = 3.72 (m, 2H); δ(Hc) = 2.37 (m, 2H); δ(Hd) = 4.28 (t, J = 6.1, 2H); δ(Hf) = 4.37 (q, J = 6.7, IH); δ(Hg) = 1.33 (d, J = 6.7, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.85; δ(Cb) = 61.22; δ(Cc) = 25.98; δ(Cd) = 63.87; δ(Cβ) = 172.82; δ(Cf) = 57.94; δ(Cg) = 20.75; δ(CNTβ) = 120.01 (q, JC-F =321.1).
* HRMS(LSIMS) de (C9H21N2O2): [M+] m/Zthéήqae = 189.1603; mJzex≠ήmentai = 189.1610.
>Avec le support [HBuTMA]
Figure imgf000096_0001
[Fmoc-AIa-HBuTMA] [NTf2]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 7 en engageant [HBuTMA][NTf2]. Le rendement est de 71%. *** huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.34 (s, 9H); δ(Hb) = 3.61 (m, 2H); δ(Hc) = 1.80 (m, 2H); δ(Hd) = 2.05 (m, 2Η);δ(β^g+w) = 4.12-4.42 (m, 2H+1H+2H+1H); δ(Hh) ≈ 1.43 (d, J = 7.3, 3H); δ(H0 = 7.03 (m, IH); 0(Hn) = 7.71 (d, J ≈ 7.4, 2H); δ(H0+p) = 7.33- 7.47 (m, 2H+2H); δ(Hq) = 7.89 (d, J = 7.5, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) ≈ 52.72 (t, JN-C = 4.0); δ(Cb) = 63.55; δ(Cc) ≈ 19.40; δ(Cd) = 25.26; δ(Ce) = 66.34; δ(Cf) = 172.94; δ(Cg) = 49.90; δ(Ch) = 16.74; δ(Cj) = 156.15; δ(Ck) = 66.05; δ(Cj) = 47.07; δ(Cra) = 144.10; δ(Cn) ≈ 125.26; δ(C0) = 127.13; δ(Cp) ≈ 127.76; δ(Cq) = 118.01; δ(Cr) = 141.21; 0(CNTG) = 120.14 (q, JC-F= 321.3).
* HRMS(LSIMS) de (C25H33N2O4): [M+] m/ztilé0rique = 425.2440; m/zeXpérimentai = 425.2437.
Figure imgf000096_0002
[AIa-HBuTMA][NTf2] *l* Mode opératoire: cf mode opératoire général 8 en engageant [Fmoc-Ala-
HBuTMA][NTf2]. Le rendement est de 87%.
*t* huile visqueuse jaune
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.41 (s, 9H); δ(Hb) = 3.66 (m, 2H); δ(Hc) =
1.80 (m, 2H); δ(Hd) = 2.06 (m, 2H); δ(He+g) = 4.15-4.28 (m, 2H+1H); δ(Hh) - 1.30 (d, J = 6.7, 3H); δ(H0 = 2.86 (m, 2H). * RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.73; δ(Cb) = 63.24; δ(Cc) = 19.48; δ(Cd) = 25.18; δ(Ce) = 66.58; δ(Cf) = 172.90; δ(Cg) = 58.21; δ(Ch) ≈ 17.97; δ(CNτf2) = 120.02 (q, Jc-F= 321.1).
>Avec le support [HHeTMA]
Figure imgf000097_0001
[Fmoc-Ala-HHeTMA] [NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 7 en engageant [HHeTMA][NTf2]. Le rendement est de 92%.
*%* huile visqueuse jaune
* RMN1H (200MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.35 (s, 9H); δ(Hb) = 3.37 (m, 2H); δ(Hc+d+e+f) = 1.50-2.03 (m, 2H+2H+2H+2H); δ(Hg) = 4.15 (t, J = 6.2, 2H);δ(Hi+m+n) = 4.23-4.40 (m, 1H+2H+1H); δ(Hj) = 1.40 (d, J = 7.6, 3H); δ(Hk) = 6.95 (m, IH); δ(Hp) = 7.71 (d, J ≈ 7.4, 2H); δ(Hq+r) = 7.33-7.50 (m, 2H+2H); δ(Hs) = 7.92 (d, J = 7.1, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.69 (t, JN-c = 4.0); δ(Cb) = 66.45; δ(Cc) = 22.45; δ(Cd) = 25.48; δ(Ce) = 25.06; δ(Çf) = 28.09; δ(Cg) = 64.42; δ(Ch) = 172.86; δ(Q) = 49.85; δ(Cj) = 16.97; δ(Q) = 156.03; δ(Cm) = 66.49; δ(Cn) = 47.08; δ(C0) = 144.08; δ(Cp) = 125.27; δ(Cq) = 127.13; δ(Cr) = 127.77; δ(Cs) = 120.01; δ(Ct) = 141.20; δ(CNTf2) = 120.13 (q, Jc-F= 321.3).
* HRMS(LSIMS) de (C27H37N2O4): [M+] m/zthé0rique = 453.2753; m/zeXpérimentai = 453.2753.
Figure imgf000097_0002
[AIa-HHeTMA][NTf2]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 8 en engageant [Fmoc-Ala- HHeTMA] [NTf2] . Le rendement est de 90%. *> huile visqueuse j aune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.38 (s, 9H); δ(Hb) = 3.59 (m, 2H); δ(Hc) = 1.68 (m, 2H); δ(Hd+e) = 1.42-1.53 (m, 2H+2H);δ(Hf) = 1.98 (m, 2H); δ(Hg) = 4.06 (t, J ≈ 6.6, 2H); δ(H0 = 4.20 (q, J = 6.7, IH); δ(Hj) = 1.27 (d, J = 6.6, 3H); δ(Hk) = 2.78 (m, 2H). *> RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.65; δ(Cb) = 66.47; δ(Cc) = 22.47; δ(Cd) = 25.47; δ(Ce) = 25.08; δ(Cf) = 28.07; δ(Cg) = 64.18; δ(Ch) = 177.12; δ(Q) = 50.34; δ(Q) = 21.05; δ(CNTf2) = 119.98 (q, Jc-F= 321.0). >Avec le support [HMPhTMA]
Figure imgf000098_0001
[Fmoc-AIa-HMPhBTMA] [NTf2]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 7 en engageant [HMPhBTMA][NTf2]. Le rendement est de 88%. *> huile visqueuse jaune *> RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.40 (s, 9H); δ(Hb) = 3.69 (m, 2H); δ(Hc) =
1.90 (m, 2H); δ(Hd) = 2.16 (m, 2H); δ(He) = 4.06 (t, J = 5.9, 2H); δ(Hg+n) = 6.80-6.91 (m, 2H+1H); δ(Hh+t) = 7.28-7.37 (m, 2H+2H); δ(H) = 5.11 (s, 2H); δ(H1+p+q) = 4.14-4.42 (m, 1H+2H+1H); δ(Hm) = 1.42k(d, J = 7.3, 3H); δ(Hs) ≈ 7.71 (d, J = 7.4, -2H); δ(Hu) = 7.43 (m, 2H); δ(Hv) = 7.88 (d, J = 7.5, 2H). * RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.79 (t, JN-C = 4.1); δ(Cb) = 66.27; δ(Cc) -
19.75; δ(Cd) ≈ 25.74; δ(Cβ) = 66.77; δ(Cf) = 158.90; δ(Cg) = 114.43; δ(Ch) = 129.86; δ(Q) = 128.33; δ(Cj) = 66.21; δ(Ck) = 172.86; δ(Ci) = 50.00; δ(Cm) = 16.97; δ(C0) = 156.12; δ(Cp) ≈ 66.41; δ(Cq) = 47.06; δ(Cr) = 144.17; δ(Cs) = 125.31; δ(C£) = 126.54; δ(Cu) = 127.18; δ(Cv) = 120.05; δ(Cw) = 141.21; δ(CNTf2) = 120.15 (q, J0-F= 321.3). * HRMS(ESI) de (C32H39N2O5) : [C+] m/zώéorique = 531.2859; m/zexpérimeπtai = 531.2859.
Figure imgf000098_0002
[AIa-HMPhBTMA] [NTf2] *l* Mode opératoire: cf mode opératoire général 8 en engageant [Fmoc-Ala-
HMPhBTMA][NTf2]. Le rendement est de 88%. *> huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.40 (s, 9H); δ(Hb) = 3.70 (m, 2H); δ(Hc) = 1.93 (m, 2H); δ(Hd) = 2.18 (m, 2H); δ(He) = 4.11 (t, J = 6.0, 2H); δ(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6,
2H); δ(Hh) = 7.32 (d, J ≈ 8.6, 2H); δ(H) = 5.06 (s, 2H); 0(H1) = 4.24 (q, J = 6.7, IH); δ(Hra) ≈ 1.28 (d, J = 6.6, 3H); δ(Hn) = 2.94 (m, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.72 (t, JN-C = 3.9); δ(Cb) = 66.29; δ(Cc) = 19.74; δ(Cd) = 25.77; δ(Ce) ≈ 66.83; δ(Cf) = 158.92; δ(Cg) = 114.46; δ(Ch) = 129.91; δ(Q) = 128.48; δ(Q) = 65.86; δ(Ck) = 176.92; δ(Q) = 50.42; δ(Cm) = 20.97; δ(CNTβ) = 120.06 (q, Jc-F= 321.2).
>Avec le support [HTMPPTMA] Mode opératoire général 9 pour le greffage du premier aminoacide à
[HTMPPTMA][PF6]
[AA^HTMPPTMA][PF6] est synthétisé en quatre étapes à partir du bromure de {5-[4-(hydroxy-p-tolyl-méthyl)-phénoxy]-pentyl}-triméthyl-ammonium [HTMPPTMA][Br] - chloration de la position benzhydrilique
- greffage du Fmoc-aminoacide
- métathèse du contre-ion (Br (ou éventuellement Cl) ->• PF6)
- clivage du groupement Fmoc
1,0 eq. de bromure de {5-[4-(hydroxy-p-tolyl-méthyl)-phénoxy]-pentyl}- triméthyl-ammonium [HTMPTTMA][Br] sont dissous dans l'acétonitrile anhydre. 1,5 eq. de chlorure de thionyle sont ajoutés goutte à goutte à 0°C puis le milieu est agité 20 minutes à TA sous argon. Les solvants sont alors évaporés sous vide. Le résidu est dissous dans l'acétonitrile anhydre puis 1,5 eq de Fmoc-aminoacide et 1,5 eq. de TEA sont ajoutés au milieu qui est agité 30 minutes à TA. L'acétonitrile est alors évaporé. Le résidu est lavé à l'éther et dissous dans l'acétonitrile. 3,0 eq. de KPF6 sont ajoutés au milieu qui est agité deux heures puis filtré sur célite. Les solvants du filtrat sont évaporés sous vide et le résidu est dissous dans le DCM. Cette phase est lavée par trois fois un dixième en volume d'eau puis elle est séchée sur sulfate de sodium et filtrée. Le
DCM est évaporé. Un mélange d'acétonitrile et de pipéridine (10 à 20%) est ajouté au résidu et le milieu réactionnel est agité 15 minutes à TA avant d'évaporer les solvants.
Le résidu est alors lavé à l'éther puis dissous dans du DCM. La phase organique obtenue est lavée trois fois à l'eau puis est séchée sur sulfate de sodium et filtrée. Le
DCM est alors évaporé. Le taux de greffage est supérieur à 95%.
Figure imgf000100_0001
[AIa-HTMPPTMA] [PF6]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire 9 en engageant Fmoc-Ala.
Le rendement est de 95% sur 4 étapes.
*t* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.36 (s, 9H); δ(Hb+r) = 3.50-3.63 (m,
2H+1H); δ(Hc) = 1.87 (m, 2H); δ(Hd) = 1.60 (m, 2H); δ(He) = 2.02 (m, 2H); δ(Hf) = 4.03
(t, J = 6.2, 2H); δ(Hh) = 6.90 (d, J = 8.5, 2H); δ(Hi+m+n) = 7.11-7.39 (m, 2H+2H+2H); δ(Hk) = 6.78 (s, IH); δ(Hp) = 2.31 (s, 3H); δ(Hs) = 1.33 (d, J = 6.6, 3H); δ(Ht) = 2.29 (m,
2H).
*> RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.69; δ(Cb) = 66.42; δ(Cc) = 22.34; δ(Cd) =
20.25; δ(Ce) = 28.44; δ(Cf) = 67.23; δ(Cg) = 158.74; δ(Ch) = 114.34; δ(Q) = 128.35; δ(Çj)
= 132.99; δ(Ck) = 76.47; δ(Q) = 137.25; δ(Cm) = 126.57; δ(Cn) = 129.03; δ(C0) = 138.19; δ(Cp) = 20.13; δ(Cq) = 171.48; δ(Cr) = 58.47; δ(Cs) = 18.06.
*> HRMS(ESI) de (C25H37N2O3) : [C+] m/zthéorique = 413.2804; m/zexpérimentai = 413.2789.
Figure imgf000100_0002
[GIy-HTMPPTMA] [PF6]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire 9 en engageant Fmoc-Gly. Le rendement est de 98% sur 4 étapes.
*t* huile visqueuse marron
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.33 (s, 9H); δ(Hb+r) = 3.53-3.62 (m, 2H+1H); δ(Hc) = 1.88 (m, 2H); δ(Hd) = 1.59 (m, 2H); δ(He) = 2.05 (m, 2H); δ(Hf) = 4.03 (t, J - 6.2, 2H); δ(Hh) = 6.91 (d, J = 8.7, 2H); δ(H0 = 7.18 (d, J = 8.0, 2H); δ(Hm+n) = 7.29-7.38 (m, 2H+2H); δ(Hk) = 6.83 (s, IH); δ(Hp) = 2.31 (s, 3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.57; δ(Cb) = 66.35; δ(Cc) = 22.65; δ(Cd) = 22.32; δ(Ce) = 28.45; δ(Cf) = 67.38; δ(Cg) = 158.80; δ(Ch) = 114.51; δ(Q) = 128.46; δ(Ç,) = 132.90; δ(Ck) = 76.78; δ(Q) = 137.41; δ(Cm) = 126.73; δ(Cn) = 129.21; δ(C0) = 138.11; δ(Cp) = 20.45; δ(Cq) = 171.21; δ(Cr) = 53.30. * HRMS(ESI) de (C24H35N2O3) : [C+] m/ztωoriφ,,. = 399.2648; m/zexpérimentai = 399.2649.
Figure imgf000101_0001
[Ile-HTMPPTMA] [PF6]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire 9 en engageant Fmoc-Ile. Le rendement est de 89% sur 4 étapes. *> huile visqueuse marron
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.33 (s, 9H); δ(Hb+r) = 3.48-3.60 (m, 2H+1H); δ(Hc+s) = 1.79-1.97 (m, 2H+1H); δ(Hd) = 1.59 (m, 2H); δ(He) ≈ 2.05 (m, 2H); δ(Hf) - 4.03 (t, J = 6.2, 2H); δ(Hh) = 6.91 (d, J = 8.6, 2H); δ(H0 = 7.18 (d, J = 10.3, 2H); δ(Hk) = 6.80 (s, IH); δ(Hm+n) = 7.19-7.32 (m, 2H+2H); δ(Hp) = 2.31 (s, 3H); δ(Ht+v) = 0.80-0.96 (m, 3H+3H); δ(Hu) = 1.17 (m, IH); δ(Hu>) = 1.49 (m, IH).
* RMN13C (75MHz5 acétone d6) : 8(C8) = 52.58; δ(Cb) = 66.36; δ(Cc) ≈ 22.67; δ(Cd) = 22.34; δ(Ce) = 28.47; δ(Cf) = 67.34; δ(Cg) = 158.77; δ(Ch) = 114.39; δ(Q) = 128.58; δ(Cj) = 132.88; δ(Ck) = 76.47; δ(Q) = 137.33; δ(Cm) ≈ 126.69; 0(Cn) = 129.13; δ(C0) = 138.08; δ(Cp) = 20.43; δ(Cq) = 170.65; δ(Cr) = 68.96 ; δ(Cs) = 38.22; δ(Ct) = 15.27; δ(Cu) = 24.88;
Figure imgf000101_0002
de (C28H43N2O3) : [C+] m/zftéorique≈ 455.3274; m/zeXpérimentai = 455.3286.
Figure imgf000101_0003
[Leu-HTMPPTMA] [PF6] *l* Mode opératoire: cf mode opératoire 9 en engageant Fmoc-Leu.
Le rendement est de 89% sur 4 étapes. *t* huile visqueuse marron
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.36 (s, 9H); δ(Hb+r) = 3.53-3.67 (m, 2H+1H); δ(Hc+d+s+s>+t) = 1.50-1.97 (m, 2H+2H+1H+1H+1H); δ(He) = 2.05 (m, 2H); δ(Hf) = 4.03 (t, J = 6.2, 2H); δ(Hh) = 6.91 (m, 2H); δ(Hi+m+n) = 7.09-7.34 (m, 2H+2H+2H); δ(Hk) = 6.78 (s, IH); δ(Hp) = 2.31 (s, 3H); 0(H11) = 0.84 (d, J = 6.5, 3H); δ(Hu.) = 0.91 (d, J = 6.5, IH).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.59; δ(Cb) = 66.36; δ(Cc) ≈ 22.34; δ(Cd) = 22.66; δ(Ce) = 28.47; δ(Cf) = 67.32; δ(Cg) = 158.75; δ(Ch) = 114.43; δ(Q) = 128.37; δ(Q) = 132.88; δ(Ck) = 76.57; δ(Q) = 137.28; δ(Cm) = 126.70; δ(Cn) = 129.13; δ(C0) = 138.16; δ(Cp) = 20.42; δ(Cq) = 171.27; δ(Cr) = 61.98; δ(Cs) = 42.21; δ(Q) = 24.59; 0(C11) = 21.69.
* HRMS(ESI) de (C28H43N2O3) : [C+] m/zthéorique = 455.3274; m/zeXpérimentai = 455.3272.
Figure imgf000102_0001
[Phe-HTMPPTMA] [PF6]
*** Mode opératoire: cf mode opératoire 9 en engageant Fmoc-Phe. Le rendement est de 80% sur 4 étapes. *X* huile visqueuse marron
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.33 (s, 9H); δ(Hb+r) ≈ 3.50-3.61 (m, 2H+1H); δ(H0) = 1.93 (m, 2H); δ(Hd) = 1.60 (m, 2H); δ(He) = 2.05 (m, 2H); δ(Hf) = 4.03 (t, J = 6.1, 2H); δ(Hh) = 6.88 (m, 2H); δ(Hi+m+n+u+v+w) = 7.09-7.33 (m, 2H+2H+2H+2H+2H+1H); δ(Hk) = 6.77 (s, IH); δ(Hp) = 2.31 (s, 3H); δ(Hs+S') = 2.87-3.06 (m, 1H+1H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.61; δ(Cb) = 66.38; δ(Cc) = 22.69; δ(Cd) = 22.35; δ(Ce) = 28.49; δ(Cf) = 67.35; δ(Cg) = 158.75; δ(Ch) = 114.44; S(Q) = 129.13; S(Cj) = 132.75; δ(Ck) = 76.79; δ(Q) = 137.34; δ(Cm) = 126.72; 5(Cn) = 129.62; 5(C0) = 138.27; 5(Cp) = 20.44; δ(Cq) = 170.67; δ(Cr) = 65.45; 5(C8) = 39.29 ; δ(Q) = 138.03; 5(C11) = 128.47; 5(Cy) = 128.28; δ(Cw) = 126.42.
* HRMS(ESI) de (C3IH4IN2O3) : [C+] m/zthéorique = 489.3117; m/zeXpérimentai = 489.3121.
Figure imgf000102_0002
[VaI-HTMPPTMA] [PF6] *> Mode opératoire: cf mode opératoire 9 en engageant Fmoc-Val.
Le rendement est de 80% sur 4 étapes.
*t* huile visqueuse marron
*> RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.34 (s, 9H); δ(Hb+r) = 3.50-3.61 (m,
2H+1H); 5(Hc) = 1.87 (m, 2H); S(Hd) = 1.60 (m, 2H); S(H6) = 2.05 (m, 2H); S(H1) = 4.03 (t, J = 6.1, 2H); 5(Hh) = 6.90 (d, J = 8.7, 2H); δ(Hi+m+n) = 7.12-7.36 (m, 2H+2H+2H);
5(Hk) = 6.79 (s, IH); δ(Hp+s) = 2.23-2.39 (m, 3H+1H); δ(Ht+t0 = 0.80-1.00 (m, 3H+3H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.59; δ(Cb) = 66.37; S(Cc) = 22.66; S(Ca) = 22.34; S(Ce) = 28.46; δ(Cf) = 67.33; S(C8) = 158.76; 5(Ch) = 114.40; S(CO = 128.33; 5(Cj) = 132.91; 5(Ck) = 76.45; δ(Q) = 137.34; δ(Cm) - 126.66; 0(Cn) = 129.11; δ(C0) = 138.10; δ(Cp) = 20.41; δ(Cq) = 170.65; δ(Cr) = 69.79; δ(Cs) = 31.70; S(C1) = 18.01; S(QO = 18.94.
* HRMS(ESI) de (C27H41N2O3) : [C+] m/zfcéoriquβ≈ 441.3117; m/zeχpérimentai = 441.3120. 2.3.2. Synthèse de dipeptides supportés.
Mode opératoire général 10 pour le couplage peptidique voie directe avec des supports trifluorométhane sulfonate d'onium:
1,0 eq. du peptide supporté à coupler est dissous dans l'acétonitrile, puis 1,5 eq. de DCC, de HOBT, de TEA et de Fmoc-aminoacide sont ajoutés. Le milieu est agité 2 heures à TA puis le mélange est filtré. L'acétonitrile est évaporé et le résidu obtenu est lavé à l'éther puis dissous dans du dichlorométhane. Cette phase est lavée par trois fois un dixième en volume de solution aqueuse de HCl IN avant d'être séchée sur sulfate de sodium et filtrée. Le DCM est évaporé.
>Avec le support [HHeTMA]
Figure imgf000103_0001
[Fmoc-Leu-Ala-HHeTMA] [NTf2]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 10 en engageant [AIa-HHeTMA][NTf2] et la Fmoc-leucine. Le rendement est de 78%. *> huile visqueuse jaune
*> RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) ≈ 331 (s, 9H); δ(Hb) = 3.58 (m, 2H); δ(Hc+n) = 1.59-1.70 (m, 2H+2H); δ(Hd+e) = 1.40-1.53 (m, 2H+2H); δ(Hf) = 1.97 (m, 2H); δ(Hg) = 4.10 (t, J = 6.4, 2H); δ(Hi+m+s+t) = 4.19-4.46 (m, 1H+1H+2H+1H); δ(Hj) = 1.36 (d, J = 7.3, 3H); δ(Hk) = 7.59 (m, IH); δ(H0) = 1.78 (sept, IH); δ(Hp) = 0.93 (d, J = 6.6, 3H); δ(Hp>) ≈ 0.95 (d, J = 6.6, 3H); δ(Hq) ≈ 6.62 (m, IH); δ(Hv) = 7.71 (d, J = 7.4, 2H); δ(Hw+x) = 7.32- 7.46 (m, 2H+2H); δ(Hy) = 7.89 (d, J = 7.5, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.71 (t, JN-C ≈ 4.0); δ(Cb) = 66.45; δ(Cc) ≈ 22.44; δ(Cd) = 25.49; δ(Ce) ≈ 25.00; δ(Cf) = 28.07; δ(Cg) = 64.48; δ(Ch) = 172.44; 0(Q) = 48.16; δ(Çj) = 16.92; δ(Q) = 172.59; δ(Cm) = 53.41; δ(Cn) = 41.43; δ(C0) ≈ 24.50; δ(Cp) = 21.19; δ(Cτ) ≈ 156.28; δ(Cg) = 66.45; δ(Ct) ≈ 47.14; 0(C11) = 144.17; δ(Cv) ≈ 125.29; δ(Cw) = 127.15; δ(Cx) = 127.77; δ(Cy) = 120.02; δ(Cz) = 141.20; δ(CNTf2) = 120.04 (q, JC-F = 321.4).
* HRMS(LSIMS) de (C33H48N3O5): [M+] m/zthéorique = 566.35940; m/zeχpérimentai = 566.3603. >Avec le support [HMPhTMA]
Figure imgf000104_0001
[Fmoc-Leu-Ala-HMPhBTMA] [NTf2]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 10 en engageant [AIa- HMPhBTMA] [NTf2] et la Fmoc-leucine. Le rendement est de 85%.
*t* huile visqueuse jaune
<* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.40 (s, 9H); δ(Hb) = 3.69 (m, 2H); δ(Hc) = 1.91 (m, 2H); δ(Hd) = 2.16 (m, 2H); δ(Hε) = 4.09 (t, J ≈ 5.9, 2H); δ(Hg) = 6.92 (d, J = 8.5, 2H); δ(Hh+z) = 7.28-7.37 (m, 2H+2H); δ(Hj) = 5.08 (s, 2H); δ(Hi+v+w) = 4.17-4.39 (m, 1H+2H+1H); δ(Hra) = 1.36 (d, J ≈ 7.3, 3H); 0(Hn) ≈ 6.62 (m, IH); δ(Hp) ≈ 4.47 (m, IH); δ(Hq+q.) = 1.60 (m, 1H+1H); δ(Hr) = 1.76 (m, IH); δ(Hs) = 0.91 (d, J = 6.9, 3H) ; 6(H8.) ≈
0.93 (d, J = 7.0, 3H); δ(Ht) ≈ 7.61 (m, IH); δ(Hy) = 7.72 (m, 2H); 8(H1) ≈ 7.43 (m, 2H); δ(H2) = 7.88 (d, J = 7.5, 2H).
* RMN13C (100MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 54.13; δ(Cb) ≈ 67.62; δ(Cc) ≈ 25.93; δ(Cd) = 27.14; δ(Ce) = 68.06; δ(Cf) = 157.39; δ(Cs) = 115.64; δ(Ch) = 131.20; δ(Q) ≈ 129.68; δ(Q) ≈ 67.35; δ(Ck) = 173.56; δ(Q) = 49.32; δ(Cm) = 18.14; δ(C0) = 173.56; δ(Cp) ≈ 54.48; δ(Cq) = 42.70; δ(Q.) = 23.93; δ(Cs) = 21.15; δ(Cs.) ≈ 22.35; δ(C) = 160.17; δ(Cv) = 67.50; δ(Cw) = ) ≈ 128.96; 0(C2) = 121.23; * HRMS(ESI)
Figure imgf000104_0002
= 644.3699.
>Avec le support [HTMPPTMAJ[PF6]
Mode opératoire général 11 pour le couplage peptidique voie directe avec les supports héxafluorophosphate d'onium 1,0 eq. de peptide supporté ayant l'aminé déprotégée est dissous dans l'acétonitrile puis 1,5 eq. de TEA, de Fmoc-aminoacide et
- soit l,5éq. de HOBt et de carbodiimide (DCC ou DIC) et sont ajoutés.
- soit l,5éq. de HBTU
Le milieu réactionnel est agité 30 minutes à TA. Si les réactifs de couplage sont DCC/HOBt, le milieu réactionnel est filtré (DCU peu soluble dans l'acétonitrile) puis l'acétonitrile est évaporé. Sinon, l'acétonitrile est évaporé directement.
Le résidu obtenu est alors lavé à l'éther puis il est dissous dans du dichlorométhane. Cette phase est lavée trois fois à l'eau puis trois fois par une solution aqueuse de HPF6 (KpH<2) avant d'être séchée sur sulfate de sodium puis filtrée. Le dichlorométhane est évaporé.
Figure imgf000105_0001
[FmOC-AIa-IIe-HTMPPTMA][PF6]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 11 en engageant [He- HTMPPTMA][PF6] et la Fmoc-alanine. Le rendement est de 88%. *> huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.37 (s, 9H); δ(Hb) = 3.60 (m, 2H); δ(Hc) ≈ 1.86 (m, 2H); δ(Hd) = 1.59 (m, 2H); δ(He+s) = 1.97-2.09 (m, 2H+1H); δ(Hf) = 4.00 (m,
2H); δ(Hh+k+aa) = 6.68-6.94 (m, 2H+1H+1H); δ(Hi+m+n+w+ag+ah) ≈ 7.03-7.50 (m, 2H+2H+2H+1H+2H+2H); δ(Hp) = 2.23-2.33 (m, 3H); δ(Hr) = 4.53 (m, IH); δ(Ht+v) = 0.78-0.90 (m, 3H+3H); δ(Hu+u.) = 1.03-1.28 (m, 1H+1H); δ(Hy+ac+ad) ≈ 4.21-4.40 (m, 1H+2H+1H); δ(Hz) = 1.35 (d, J = 7.0, 3H); δ(Haf) = 7.71 (m, 2H); δ(Hai) = 7.88 (d, J = 7.5, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.56; δ(Cb) = 67.44; δ(Cc) = 23.58; δ(Cd) = 23.28; δ(Ce) = 29.65; δ(Cf) = 68.20; δ(Cg) = 159.74; δ(Ch) = 115.25; δ(Q) = 129.56; δ(Çj) = 133.41; δ(Ck) = 78.16; δ(Q) = 138.24; δ(Cm) ≈ 127.56; δ(Cn) = 129.97; δ(C0) = 138.59; δ(Cp) = 21.32; δ(Cq) = 171.40; δ(Cr) = 57.80; δ(Cs) = 38.16; δ(Q) = 16.13; δ(Cu) = 25.69; δ(Cv) = 11.88; 0(Cx) ≈ 173.76; δ(Cy) = 51.34; δ(Cz) = 18.83; δ(Cab) = 156.98; δ(Cac) =
67.29; δ(Cad) = 47.99; δ(Cae) = 145.04; δ(Caf) = 126.23; δ(Cag) = 128.11; δ(Cah) = 128.70; δ(Cai) = 120.93; δ(Caj) = 142.10.
* HRMS(ESI) de (C46H58N3O6) : [C+]
Figure imgf000105_0002
748.4325; m/zexpérimentai = 748.4319.
Figure imgf000105_0003
[Fmoc-AIa-Phe-HTMPPTMA] [PF6] *> Mode opératoire: cf mode opératoire général 11 en engageant [Phe- HTMPPTMA][PF6] et la Fmoc-alanine. Le rendement est de 98%. *> huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.36 (s, 9H); δ(Hb) = 3.59 (m, 2H); δ(Hc) = 1.83 (m, 2H); δ(Hd) = 1.61 (m, 2H); δ(He) = 2.04 (m, 2H); δ(Hf) - 4.01 (m, 2H); δ(Hh) - 6.88 (m, 2H); δ(Hi+m+n+u+v+w+ah+ai) = 7.05-7.48 (m, 2H+2H+2H+2H+2H+1H+2H+2H); δ(Hk) = 6.79 (s, IH); δ(Hp) = 2.30 (d, J = 10.0, 3H); δ(Hr) ≈ 4.86 (m, IH); δ(Hs+s>) = 2.92- 3.25 (m, 1H+1H); δ(Hx) = 7.51 (m, IH); δ(H2+ad+ae) = 4.12-4.36 (m, 1H+2H+1H); δ(Haa) = 1.30 (d, J = 7.1, 3H); δ(Hab) = 6.70 (m, IH); δ(Hag) = 7.71 (m, 2H); δ(Haj) = 7.88 (d, J = 7.4, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.51; δ(Cb) = 66.48; δ(Cc) = 23.60; δ(Cd) = 22.27; δ(Ce) = 29.67; δ(Cf) = 68.24; δ(Cg) = 159.67; δ(Ch) = 115.35; δ(Q) = 130.07; δ(Cj) = 133.36; δ(Ck) = 78.46; δ(Q) = 137.59; δ(Cm) = 127.60; δ(Cn) = 130.30; δ(C0) = 138.54; δ(Cp) = 21.34; δ(Cq) = 171.24; δ(Cr) = 54.78; δ(Cs) = 38.07; δ(Ct) = 138.24; δ(Cu) = 129.63; δ(Cv) ≈ 129.33; δ(Cw) = 127.46; δ(Cy) = 173.53; δ(Cz) = 51.43; δ(Caa) = 18.81; δ(Cac) = 156.96; δ(Cad) = 67.26; δ(Cae) = 48.00; δ(Caf) = 145.06; δ(Cag) = 126.29; δ(Cah) = 127.69; δ(Cai) = 127.90; δ(Caj) = 121.00; δ(Cak) = 142.13. *> HRMS(ESI) de (C49H56N3O6) : [C+] m/zthéorique = 782.4169; m/zeχpérimentai = 782.4175.
Figure imgf000106_0001
[Fmoc- Ala-Val-HTMPPTMA] [PF6]
*> Mode opératoire: cf mode opératoire général 11 en engageant [VaI- HTMPPTMA][PF6] et la Fmoc-alanine. Le rendement est de 70%.
* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : 0(H8) - 3.36 (s, 9H); δ(Hb) = 3.59 (m, 2H); δ(Hc) = 1.83 (m, 2H); δ(Hd) = 1.57 (m, 2H); δ(He) = 2.04 (m, 2H); δ(Hf) = 4.00 (m, 2H); δ(Hh) =
6.88 (m, 2H); δ(Hi+m+n+u+ae+af) = 7.06-7.49 (m, 2H+2H+2H+1H+2H+2H); δ(Hk) = 6.82 (s, IH); δ(Hp) = 2.30 (d, J = 4.7, 3H); δ(Hr) = 4.52 (m, IH); δ(Hs) = 2.22 (m, IH); δ(Ht) = 0.86 (d, J - 6.9, 3H); δ(Hf) = 0.90 (d, J = 6.8, 3H); δ(Hw+aa+ab) = 4.16-4.40 (m, 1H+2H+1H); δ(Hx) = 1.35 (d, J = 7.1, 3H); δ(Hy) = 6.72 (m, IH); δ(Had) = 7.71 (m, 2H); δ(Hag) = 7.88 (d, J = 7.4, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.53; δ(Cb) = 67.29; δ(Cc) = 23.58; δ(Cd) = 23.26; δ(Ce) = 29.58; δ(Cf) = 68.16; δ(Cg) = 159.73;, δ(Ch) = 115.24; δ(Cj) = 129.52; δ(Q) = 133.44; δ(Ck) = 78.13; δ(Q) = 138.22; δ(Cm) = 127.80; δ(Cn) = 129.97; δ(C0) = 138.63; δ(Cp) = 21.26; δ(Cq) ≈ 171.38; δ(Cr) = 58.50; δ(Cs) = 31.62; δ(Ct) = 18.28; δ(Ct>) = 19.66; δ(Cv) = 173.74; δ(Cw) ≈ 51.31; δ(Cx) = 18.80; δ(Cz) = 156.93; δ(Caa) = 67.29; δ(Cab) =
47.99; δ(Cac) = 145.05; δ(Cad) = 126.22; δ(Cae) = 128.10; δ(Caf) = 128.69; δ(Cag) = 120.93; δ(Cah) = 142.10.
* HRMS(ESI) de (C45H56N3O6) : [C+] m/zthéorique≈ 734.4169; m/zexpérimentai = 734.4173.
Figure imgf000107_0001
[Fmoc-GIy-Leu-HTMPPTMA] [PF6]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 11 en engageant [Leu- HTMPPTMA][PF6] et la Fmoc-glycine. Le rendement est de 70%. *** huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.35 (s, 9H); δ(Hb) = 3.59 (m, 2H); δ(Hc) ≈ 1.85 (m, 2H); δ(Hd+s+s.+t) ≈ 1.48-1.75 (m, 2H+1H+1H+1H); δ(He) = 2.05 (m, 2H); δ(Hf+x) = 3.81-4.08 (m, 2H+2H); δ(Hh+y) = 6.80-6.95 (m, 2H+1H); δ(Hi+m+n+v+ae+af) = 7.01-7.57 (m, 2H+2H+2H+1H+2H+2H); δ(Hk) = 6.78 (s, IH); δ(Hp) = 2.29 (m, 3H); δ(Hr) = 4.62 (m, IH); δ(Hu) = 0.88 (d, J = 4.0, 6H); δ(Haa+ab) = 4.20-4.42 (m, 2H+1H); δ(Had) = 7.73 (m, 2H); δ(Hag) = 7.88 (d, J = 7.5, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.54; δ(Cb) = 67.56; δ(Cc) = 23.57; δ(Cd) = 23.26; δ(Ce) = 29.62; δ(Cf) = 68.16; δ(Cg) = 159.67; δ(Ch) = 115.30; δ(Q) = 129.28; δ(Q) = 133.53; δ(Ck) = 78.14; δ(Q) = 138.23; δ(Cm) = 127.62; δ(Cn) = 130.03; 0(C0) = 138.71; δ(Cp) = 21.29; δ(Cq) = 170.45; δ(Cr) = 51.94; δ(Cs) = 41.24; δ(Q) = 25.47; δ(Cu) = 22.12; δ(Cw) = 172.36; δ(Cx) = 44.74; δ(Cz) = 157.67; δ(Caa) = 67.29; δ(Cab) = 47.97; δ(Cac) = 145.00; δ(Cad) - 126.25; δ(Cae) - 128.12; δ(Caf) = 128.73; δ(Cag) = 120.96; δ(Cah) = 142.10.
* HRMS(ESI) de (C45H56N3O6) : [C+] m/zthéorique = 734.4169; m/zeχpérimentai = 734.4170.
Figure imgf000107_0002
[Fmoc-Gly-Phe-HTMPPTMA] [PF6]
*** Mode opératoire: cf mode opératoire général 11 en engageant [Phe- HTMPPTMA][PF6] et la Fmoc-glycine. Le rendement est de 85%. <* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.36 (s, 9H); δ(Hb) = 3.59 (m, 2H); δ(Hc) = 1.85 (m, 2H); δ(Hd) - 1.61 (m, 2H); δ(He) - 2.04 (m, 2H); δ(Hf) = 4.02 (m, 2H); δ(Hh) = 6.88 (m, 2H); δ(Hi+m+n+u+v+w+aa+ag+ah) = 7.05-7.45 (m,
2H+2H+2H+2H+2H+1H+1H+2H+2H); δ(Hk) = 6.78 (s, IH); δ(Hp) = 2.30 (d, J = 4.4, 3H); δ(Hr) = 4.86 (m, IH); δ(Hs+s.) = 2.96-3.24 (m, 1H+1H); 0(Hx) - 7.54 (m, IH); δ(Hz) = 3.86 (m, 2H); δ(Hac+ad) = 4.17-4.40 (m, 2H+1H); δ(Haf) = 7.73 (d, J = 7.2, 2H); δ(Hai) = 7.88 (d, J = 7.4, 2H). * RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.53; δ(Cb) = 67.52; δ(Cc) = 23.58; δ(Cd) = 23.25; δ(Ce) = 29.35; δ(Cf) = 68.15; δ(Cg) = 159.72; δ(Ch) = 115.25; δ(Q) = 129.85; δ(Q) = 133.40; δ(Ck) = 78.35; δ(Q) = 137.55; δ(Cm) = 127.83; δ(Cn) = 130.00; δ(C0) = 138.76; δ(Cp) = 21.24; δ(Cq) = 170.12; δ(Cr) = 54.67; δ(Cs) = 38.09; δ(Q) = 138.19; δ(Cu) = 129.30; δ(Cv) = 129.24; δ(Cw) = 127.58; δ(Cy) ≈ 171.19; δ(Cz) = 44.74; δ(Cab) = 157.61; δ(Cao) = 67.28; δ(Cad) = 47.96; δ(Cae) = 145.02; δ(Caf) = 126.23; δ(Cag) = 128.10; δ(Cah) = 128.69; δ(Cai) = 120.93; δ(Caj) = 142.11.
* HRMS(ESI) de (C48H54N3O6) : [C+] m/zthéorique= 768.4012; m/zexpérimentai = 768.4012.
Figure imgf000108_0001
[Fmoc-Gly-Val-HTMPPTMA] [PF6]
*** Mode opératoire: cf mode opératoire général 11 en engageant [VaI- HTMPPTMA][PF6] et la Fmoc-glycine. Le rendement est de 95%. *t* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.35 (s, 9H); δ(Hb) = 3.58 (m, 2H); δ(Hc) = 1.85 (m, 2H); δ(Hd) = 1.58 (m, 2H); 8(BL8) = 2.04 (m, 2H); δ(Hf+w) = 3.88-4.08 (m, 2H+2H); δ(Hh+x) = 6.84-6.98 (m, 2H+1H); δ(Hi+m+n+u+ad+ae) = 7.09-7.51 (m, 2H+2H+2H+1H+2H+2H); δ(Hk) = 6.82 (s, IH); δ(Hp) = 2.30 (s, 3H); δ(Hr) = 4.56 (m, IH); δ(Hs) = 2.22 (m, IH); δ(Ht) = 0.86 (d, J = 7.0, 3H); δ(Ht>) = 0.90 (d, J = 6.8, 3H); δ(Hz+aa) ≈ 4.20-4.40 (m, 2H+1H); δ(Hao) = 7.73 (m, 2H); δ(Hag) = 7.88 (d, J = 7.5, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.52; δ(Cb) = 67.60; δ(Cc) = 23.57; δ(Cd) = 23.26; δ(Ce) = 29.66; δ(Cf) = 68.18; δ(Cg) = 159.66; δ(Ch) = 115.29; δ(Q) = 129.49; δ(Cj) = 133.43; δ(Ck) = 78.22; δ(Q) = 138.27; δ(Cm) = 127.60; 0(Cn) = 130.03; δ(C0) = 138.57; δ(Cp) = 21.33; δ(Cq) = 170.60; δ(Cr) ≈ 58.58; δ(Cs) = 31.65; δ(Ct) = 18.35; δ(Q') = 19.71; δ(Cv) = 171.52; δ(Cw) = 44.80; δ(Cy) = 157.76; δ(Cz) = 67.27; δ(Caa) = 47.96; δ(Cab) = 144.99; δ(Cac) = 126.25; δ(Cad) ≈ 128.15; δ(Cae) = 128.75; δ(Caf) = 120.97; δ(Cag) = 142.10.
*> HRMS(ESI) de (C44H54N3O6) : [C+] m/zthéoπque≈ 720.4013; m/zexpérimentai = 720.4015.
Figure imgf000108_0002
[Fmoc-Ile-Leu-HTMPPTMA] [PF6]
*l* Mode opératoire: cf mode opératoire général 11 en engageant [Leu- HTMPPTMA][PF6] et la Fmoc-isoleucine. Le rendement est de 78%. *> huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.37 (s, 9H); δ(Hb) ≈ 3.58 (m, 2H); δ(Hc) = 1.86 (m, 2H); δ(Hd+s+s.+t+aa) = 1.45-1.75 (m, 2H+1H+ 1.94-2.12 (m, 2H+1H); δ(Hf+x) = 3.94-4.17 (m, 2H+1H); δ(Hh)
Figure imgf000109_0001
≈ 7.03-7.50 (m, 2H+2H+2H+2H+2H); δ(Hk) = 6.80 (s, IH); δ(Hp) = 2.31 (m, 3H); δ(Hr) = 4.65 (m, IH); δ(Hu+u.+z+ab) ≈ 0.73-0.98 (m, 3H+3H+3H+3H); δ(Hv) = 7.48 (m, IH); δ(Haa.) = 1.17 (m, IH); δ(Hac) = 6.55 (m, IH); δ(Hae+af) = 4.19-4.40 (m, 2H+1H); δ(Hah) = 7.72 (m, 2H); δ(Hak) = 7.88 (d, J = 7.6, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.49; δ(Cb) = 67.27; δ(Cc) - 23.34; δ(Cd) ≈ 23.26; δ(Ce) = 29.68; δ(Cf) = 68.22; δ(Cg) ≈ 159.74; δ(Ch) = 115.32; δ(Q) = 129.51; δ(Çj) ≈ 133.46; δ(Ck) = 78.21; δ(Q) = 138.19; δ(Cm) = 127.81; δ(Cπ) = 130.05; 8(C0) = 138.67; δ(Cp) ≈ 21.36; δ(Cq) = 172.39; δ(Cr) = 51.92; δ(Cs) = 41.26; δ(Q) = 25.60; δ(Cu) = 22.14; δ(Cw) = 172.62; 6(Cx) = 60.47; δ(Cy) = 38.15; 0(C2) = 16.19; δ(Caa) = 25.46; δ(Cab) ≈ 11.72; δ(Cad) = 157.23; δ(Cae) = 67.27; δ(Caf) = 48.07; δ(Cag) ≈ 145.10; δ(Cah) = 126.25; δ(Cai) ≈ 128.13; δ(Caj) = 128.74; δ(Cak) ≈ 120.98; δ(Cal) - 142.11.
*> HRMS(ESI) de (C49H64N3O6) : [C+] m/zftéoriφiβ≈ 790.4795; m/ZeχPérimentai = 790.4798.
Figure imgf000109_0002
[Fmoc-Leu-Ala-HTMPPTMA] [PF6]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 11 en engageant [AIa- HTMPPTMA] [PF6] et la Fmoc-leucine. Le rendement est de 94%.
*t* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.32 (s, 9H); δ(Hb) = 3.56 (m, 2H); δ(Hc+d+w) = 1.50-1.67 (m, 2H+2H+2H); δ(He) = 1.85 (m, 2H); δ(Hf) = 4.00 (m, 2H); δ(Hh) - 6.89 (dd, J1 ≈ 8.5, J2 = 3.4, 2H); δ(Hi+m+n+af+ag) = 7.11-7.50 (m, 2H+2H+2H+2H+2H); δ(Hk) = 6.78 (s, IH); δ(Hp) = 2.30 (d, J ≈ 4.5, 3H); 0(EWa,.) = 4.18-4.43 (m, 1H+2H+1H); δ(Hs)
= 1.40 (dd, J1 = 7.2, J2 = 3.2, 3H); δ(Ht+ae) = 7.63-7.74 (m, 1H+2H); δ(Hv) ≈ 4.59 (m, IH); 0(Hx) = 1.74 (m, IH); δ(Hy) = 0.90 (d, J ≈ 5.8, 3H); δ(Hy) - 0.92 (d, J = 6.1, 3H); 0(H2) = 6.65 (m, IH); δ(Hah) = 7.86 (d, J = 8.0, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 52.69 (t, JC-N = 4.0); δ(Cb) - 66.43; δ(Cc) = 22.72; δ(Cd) = 22.36; δ(Ce) = 28.45; δ(Cf) ≈ 67.21; δ(Cg) = 158.74; δ(Ch) ≈ 114.31; δ(Ci)
= 128.34; δ(Cj) = 132.75; δ(Ck) = 77.09; δ(Q) = 137.24; δ(Cm) = 126.69; δ(Cn) = 129.03; δ(Co) = 137.93; δ(Cp) = 21.03; δ(Cq) = 171.31; δ(Cr) = 48.23; δ(Cs) = 16.83; δ(Cu) - 171.41; δ(Cy) - 53.30; δ(Cw) = 41.46; 6(Cx) = 24.47; δ(Cy) = 20.24; δ(Caa) = 156.20; δ(Cab) = 66.27; δ(Cac) = 47.16; δ(Cad) = 144.23; δ(Cae) = 125.29; δ(Caf) = 127.09; δ(Cag) =
127.70; δ(Cah) = 119.97; δ(Cak) = 141.21.
* HRMS(ESI) de (C46H58N3O6) : [C+] m/ztilé0riqUe = 748.4325; m/zeXpérimentai = 748.4321.
Figure imgf000110_0001
[Fmoc-Val-Ile-HTMPPTMA] [PF6]
*t* Mode opératoire: cf mode opératoire général 11 en engageant [He- HTMPPTMA][PF6] et la Fmoc-valine. Le rendement est de 94%. *> huile visqueuse jaune * RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.37 (s, 9H); δ(Hb) = 3.61 (m, 2H); δ(Hc) =
1.86 (m, 2H); δ(Hd) = 1.58 (m, 2H); δ(He+s+z) = 1.90-2.09 (m, 2H+1H+1H); δ(Hf) ≈ 4.02 (m, 2H); δ(Hh+k) = 6.76-6.94 (m, 2H+1H); δ(Hi+m+n+w+ah+ai) = 7.02-7.52 (m, 2H+2H+2H+1H+2H+2H); δ(Hp) = 2.30 (d, J = 5.1, 3H); δ(Hr) = 4.58 (m, IH); δ(Ht+v+aa+aa0 = 0.77-0.97 (m, 3H+3H+3H+3H); 0(H11) = 1.19 (m, IH); δ(Hu0 = 1.37 (m, IH); δ(Hy+ad+ae) = 4.08-4.37 (m, 1H+2H+1H); δ(Hab) ≈ 6.54 (m, IH); δ(Hag) = 7.72 (m,
2H); δ(Haj) = 7.88 (d, J ≈ 7.5, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) = 53.53; δ(Cb) = 67.29; δ(Cc) = 23.58; δ(Cd) = 23.27; δ(Ce) = 29.64; δ(Cf) = 68.21; δ(Cg) = 159.77; δ(Ch) = 115.24; δ(Q) = 129.69; δ(Çj) = 133.40; δ(Ck) = 78.20; δ(Q) = 138.19; δ(Cm) = 127.53; 0(Cn) = 129.96; δ(C0) = 138.70; δ(Cp) = 21.33; δ(Cq) = 171.49; δ(Cr) = 57.77; 0(C8) = 38.16; δ(Q) = 16.13; δ(Cu) = 25.72; δ(Cy) = 11.87; δ(Cx) = 172.61; δ(Cy) ≈ 61.13; δ(Cz) = 31.90; δ(Caa) = 18.54; δ(Caa') = 20.01; δ(Cac) ≈ 157.35; δ(Cad) = 67.29; δ(Cae) ≈ 48.05; δ(Caf) = 145.07; δ(Cag) = 126.22; δ(Cah) = 128.09; δ(Cai) = 128.69; δ(Caj) = 120.93; δ(Cak) = 142.11. *> HRMS(ESI) de (C48H62N3O6) : [C+] m/zthéorique = 776.4638; mfzex≠ήmentai = 776.4633.
2.3.3. Synthèse de tripeptides protégés supportés.
Mode opératoire général 8' pour le clivage du groupement Fmoc avec le support [HTMPPTMA][PF6]
Le peptide supporté ayant l'aminé terminale protégée par un groupement Fmoc est dissous dans l'acétonitrile puis de la pipéridine (10 à 20% en volume) est ajoutée. Le milieu est agité 15 minutes à TA avant d'évaporer les solvants. Le résidu est lavé à l'éther puis est dissous dans du DCM. Cette phase est lavée trois fois par un dixième en volume de solution aqueuse de HPF6. La phase organique est séchée sur Na2SO4, filtrée et le DCM est évaporé.
Figure imgf000111_0001
[Fmoc-Gly-Ala-Phe-HTMPPTMA] [PF6]
< >>•> Mode opératoire: cf modes opératoires 8' en engageant [Fmoc-Ala-Phe- HTMPPTMA][PF6] puis 11 en engageant [Ala-Phe-HTMPPTMA] [PF6] formé et la Fmoc-glycine. Le rendement massique est de 98% sur deux étapes. Le produit est contaminé par 4% de [HTMPPTMA][PF6] (clivage par formation de DKP au stade dipeptide supporté déprotégé). *** huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.34 (s, 9H); δ(Hb) ≈ 3.56 (m, 2H); δ(Hc) = •1.86 (m, 2H); δ(Hd) = 1.58 (m, 2H); δ(He) = 2.07 (m, 2H); δ(Hf+ad) ≈ 3.80-4.07 (m, 2H+2H); δ(Hh+ae) = 6.80-6.95 (m, 2H+1H); δ(Hi+m+n+u+v+w+x+ab+ai+ak) = 7.05-7.54 (m, 2H+2H+2H+2H+2H+1H+1H+1H+2H+2H); δ(Hk) ≈ 6.77 (s, IH); δ(Hp) = 2.29 (m, 3H); δ(Hr) = 4.81 (m, IH); δ(Hs+S') ≈ 2.90-3.25 (m, 1H+1H); δ(Hz) = 4.48 (m, IH); δ(Haa) = 1.24 (d, J = 6.9, 3H); δ(Hag+ah) - 4.16-4.40 (m, 2H+1H); δ(Haj) = 7.69 (m, 2H); δ(Ham) = 7.87 (d, J = 7.4, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : δ(Ca) ≈ 52.67; δ(Cb) = 66.71; δ(Cc) ≈ 22.68; δ(Cd) ≈ 22.35; δ(Ce) = 28.43; δ(Cf) = 67.27; δ(Cg) = 158.79; δ(Ch) - 114.37; δ(Q) = 129.08; δ(Q) ≈ 132.50; δ(Ck) = 77.46; δ(Q) = 136.69; δ(Cm) ≈ 126.88; δ(Cn) = 129.33; δ(C0) = 137.75; δ(Cp) = 20.34; δ(Cq) = 170.27; δ(Cr) ≈ 54.09; δ(Cs) = 37.13; δ(Ct) = 137.30; 0(C11) ≈ 128.72; δ(Cv) = 128.59; δ(Cw) = 126.69; δ(Cy) = 172.25; δ(Cz) ≈ 48.70; δ(Caa) = 17.56; δ(Cac) = 169.25; δ(Cad) = 44.28; δ(Caf) ≈ 157.01; δ(Cag) ≈ 66.40; δ(Cah) = 47.04; δ(Cai) = 144.21; δ(Caj) = 125.32; δ(Cak) = 127.20; 0(C83) ≈ 128.19; δ(Cam) - 120.04; δ(Can) ≈ 141.21.
* HRMS(ESI) de (C5IHs9N4O7) : [C+] m/zthéorique = 839.4383; m/zexpérimentai = 839.4378.
Figure imgf000111_0002
[Fmoc-Leu-Ala-Phe-HTMPPTMA][PF6)
*l* Mode opératoire: cf modes opératoires 8' en engageant [Fmoc- Ala-Phe- HTMPPTMA] [PF6] puis 11 en engageant [Ala-Phe-HTMPPTMA] [PF6] formé et la Fmoc-leucine. Le rendement massique est de 98% sur deux étapes. Le produit est contaminé par 4% de [HTMPPTMA][PF6] (clivage par formation de DKP au stade dipeptide supporté déprotégé). *l* huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) ≈ 3.34 (s, 9H); δ(Hb) = 3.58 (m, 2H); δ(Hc+d+e+ae+af) = 1.50-2.08 (m, 2H+2H+2H+2H+1H); δ(Hf) = 4.01 (m, 2H); δ(Hh) = 6.88 (m, 2H); δ(Hi+m+n+u+v+w+x+ab+an+ao) = 7.02-7.60 (m, 2H+2H+2H+2H+2H+1H+1H+1H+2H +2H); δ(Hk+ah) = 6.67-6.77 (m, 1H+1H); δ(Hp) = 2.30 (m, 3H); δ(Hr) = 4.81 (m, IH); δ(Hs+s.) = 2.90-3.23 (m, 1H+1H); δ(Hz+ad+aj+ak) = 4.12-4.50 (m, 1H+1H+2H+1H); δ(Haa) = 1.25 (d, J = 7.0, 3H); δ(Hag) = 0.92 (d, J = 6.3, 3H); 8(H88O = 0.94 (d, J = 6.4, 3H); δ(Ham) = 7.70 (m, 2H); δ(Hap) = 7.87 (d, J = 7.4, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(C11) = 52.68 (t, Jc-N = 3.7); δ(Cb) = 66.43; δ(Cc) = 22.73; 8(Cd) = 22.36; 8(C6) = 28.46; δ(Cf) = 67.25; 8(C8) = 158.82; δ(Ch) = 114.33; δ(Q) = 129.02; 8(Cj) = 132.50; 8(Ck) = 77.39; 8(CO = 136.69; 8(C1n) ≈ 126.948; 8(Cn) = 129.28; 8(C0) = 137.93; 8(Cp) = 21.10; 8(Cq) = 170.19; δ(Cr) = 53.94; 8(CS) = 37.26; δ(Ct) ≈ 137.25; δ(Cu) = 128.37; δ(Cv) = 128.16; 8(Cw) = 126.68; δ(Cy) = 172.12; δ(Cz) = 48.66; δ(Caa) = 17.69; δ(Cac) = 172.32; δ(Cad) = 53.73; δ(Cae) = 41.13; δ(Caf) = 24.57; δ(Cag) = 20.31; 8(CaO = 156.48; δ(Caj) = 66.43; δ(Cak) = 47.14; 8(C8O = 144.17; δ(Cam) = 126.35; δ(Cail) - 126.16; δ(Ca0) = 127.74; δ(Cap) = 120.01; δ(Caq) = 141.22.
* HRMS(ESI) de (C55H67N4O7) : [C+] m/zthéorique = 895.5009; m/zeχPérimentai = 895.5006.
Figure imgf000112_0001
[Fmoc-Val-Gly-Phe-HTMPPTMA] [PF6]
«>• Mode opératoire: cf modes opératoires 8' en engageant [Fmoc-Gly-Phe- HTMPPTMA][PF6] puis 11 en engageant [Gly-Phe-HTMPPTMA] [PF6] formé et la Fmoc-valine. Le rendement massique est de 83% sur deux étapes. Le produit est contaminé par 5% de [HTMPPTMA][PF6] (clivage par formation de DKP au stade dipeptide supporté déprotégé). *> huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz5 acétone d6) : 8(H8) = 3.34 (s, 9H); δ(Hb) = 3.56 (m, 2H); 8(Hc) = 1.86 (m, 2H); 8(Hd) = 1.58 (m, 2H); δ(He+ad) = 2.07 (m, 2H+1H); δ(Hf+z) = 3.70-4.05 (m, 2H+2H); 8(Hh) = 6.86 (m, 2H); δ(Hi+ra+n+u+v+w+aa+ai+am) = 7.05-7.54 (m, 2H+2H+2H+2H+2H+1H+1H+2H+2H); δ(Hk+af) = 6.71-6.82 (m, 1H+1H); δ(Hp) - 2.29 (m, 3H); δ(Hr) = 4.80 (m, IH); 8(EUO = 2.95-3.20 (m, 1H+1H); δ(Hx+ak) = 7.53-7.73 (m, 1H+2H); δ(Hac+ah+aO = 4.18-4.55 (m, 1H+2H+1H); δ(Hae) = 0.99 (d, J = 6.7, 6H); δ(Han) ≈ 7.86 (d, J = 7.5, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(C8) = 52.65; δ(Cb) = 66.59; δ(Cc) = 22.70; δ(Cd) = 22.36; δ(Ce) = 28.46; δ(Cf) = 67.24; 8(C8) ≈ 158.77; 8(Ch) = 114.32; 8(CO = 129.03; 8(Cj) = 132.50; 8(Ck) = 77.38; δ(Q) = 136.73; 8(C1n) = 126.87; δ(Cn) = 129.30; 8(C0) - 137.75; 8(Cp) = 20.33; 8(Cq) = 170.27; δ(Cr) = 54.06; 8(C8) = 37.36; δ(Q) = 137.25; δ(Cu) = 128.56; δ(Cv) = 128.40; δ(Cw) = 126.72; 8(Cy) = 171.93; δ(Cz) = 42.37; δ(Cab) = 168.90; δ(Cac) = 61.08; δ(Cad) = 30.50; δ(Cae) ≈ 17.78; δ(CaeO = 18.93; δ(Cag) = 158.09; δ(Cah) = 66.40; δ(CaO = 47.10; δ(Caj) = 144.12; δ(Cak) = 125.33; δ(Ca]) = 127.16; δ(Cam) = 127.76; δ(Caπ) = 120.01; δ(Cao) = 141.20. * HRMS(ESI) de (C53H63N4O7) : [C+]
Figure imgf000113_0001
= 867.4693.
Figure imgf000113_0002
[Fmoc-Val-Leu-Ala-HTMPPTMA] [PF6]
*> Mode opératoire: cf modes opératoires 8' en engageant [Fmoc-Leu-Ala- HTMPPTMA][PF6] puis 11 en engageant [LeU-AIa-HTMPPTMA][PF6] formé et la Fmoc-valine. Le rendement massique est de 91% sur deux étapes. Le produit est contaminé par 3% de [HTMPPTMA][PF6] (clivage par formation de DKP au stade dipeptide supporté déprotégé). *** huile visqueuse jaune
* RMN1H (300MHz, acétone d6) : δ(Ha) = 3.34 (s, 9H); δ(Hb) = 3.57 (m, 2H); δ(Hc+d+w) = 1.52-1.67 (m, 2H+2H+2H); δ(He) = 1.86 (m, 2H); δ(Hf) ≈ 4.00 (m, 2H); δ(Hh) = 6.88
(dd, Ji = 8.8, J2 = 2.8, 2H); δ(Hi+m+n+alcfa,) = 7.11-7.49 (m, 2H+2H+2H+2H+2H); 5(H15) = 6.77 (s, IH); δ(Hp)
Figure imgf000113_0003
= 4.09-4.44 (m, 1H+1H+2H+1H); δ(Hs) ≈ 1.37 (dd, J1 - 7.1, J2 = 2.9, 3H); δ(Ht+aj) ≈ 7.66-7.78 (m, 1H+2H); δ(Hv+ab) = 4.50- 4.61 (m, 1H+1H); S(Hx) = 1.70 (m, IH); 8(Hy) = 0.96 (d, J = 6.6, 3H); S(Hy) = 0.99 (d, J = 5.5, 3H); S(H2) = 7.57 (m, IH); δ(Had) ≈ 0.85.(d, J = 6.3, 3H); δ(Had>) = 0.86 (d, J = 6.4,
3H); δ(Hae) = 6.72 (m, IH); δ(Ham) = 7.87 (d, J = 7.5, 2H).
* RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(C11) = 52.70 (t, JC-N = 3.7); δ(Cb) = 66.48; δ(Cc) = 22.64; S(Cd) = 22.37; S(C6) = 28.50; S(Q) = 67.19; S(C8) ≈ 158.72; S(Ch) = 114.28; δ(Q) = 128.34; S(Q) = 132.76; S(Ck) = 77.05; δ(Q) - 137.23; S(C1n) = 126.69; S(Cn) ≈ 129.01; S(C0) = 137.93; S(Cp) - 21.17; S(Cq) = 171.85; S(Q) = 48.19; S(C8) = 16.85; S(Cu) ≈
171.37; S(Cv) = 51.23; δ(Cw) = 41.11; S(Cx) = 24.39; S(Cy) = 20.23; δ(Caa) ≈ 171.37; δ(Cab) = 60.62; δ(Cac) = 30.91; δ(Cad) = 17.63; δ(Cad.) = 18.91; δ(Caf) ≈ 156.61; δ(Cag) = 66.48; δ(Cah) ≈ 47.13; S(CaO = 144.19; δ(Caj) ≈ 126.32; δ(Cak) = 126.69; δ(Cal) ≈ 128.32; δ(Cam) = 119.95; δ(Can) = 141.19. * HRMS(ESI) de (C5IH67N4O7) : [C+] m/zthéorique = 847.5010; m/ZeχPérimentai = 847.5024.
2.3.4. Clivage des peptides supportés.
Mode opératoire général 12 pour le clivage des peptides supportés:
1,0 eq. de peptide supporté ayant l'aminé déprotégée [AAn-- •- AA1-
HTMPPTMA][PF6] est dissous dans le méthanol (concentration de 0,1 mol/L) puis 1% de solution aqueuse de HPF6 à 60% est ajouté. Le mélange est porté une heure à reflux puis le méthanol est évaporé. Du dichlorométhane et de l'eau sont ajoutés au résidu. L'évaporation du solvant de chaque phase permet d'isoler d'une part le peptide (dissous en phase aqueuse) et [HTMPPTMA][PF6] (dissous en phase organique).
Figure imgf000114_0001
Val-Leu-AIa
*** Mode opératoire: cf modes opératoires 8' en engageant [Fmoc-Val-Leu-Ala- HTMPPTMA][PF6] puis 12 en engageant [VaI-LeU-AIa-HTMPPTMA][PF6]. Le rendement est de 85%. *** huile incolore
*> RMN1H (300MHz, D2O) : δ(Ha) = 3.72 (d, J = 5.81H); δ(Hb) = 2.11 (m, IH); δ(Hc) = 0.92 (t, J = 6.5, 6H); δ(Hd) = 4.33 (t, J = 7.3, IH); δ(He+e-+f) = 1.46-1.54 (m, 1H+1H+1H); δ(Hg) = 0.82 (dd, J1 = 6.3, J2 = 6.0, 6H); δ(Hh) = 4.03 (q, J = 7.2, IH); δ(Hj) = 1.23 (d, J = 7.2, 3H).
2.3.5. Synthèse Convergente
Figure imgf000114_0002
[HMPhBTMA-Aiso-Leu-VaI-Val-Leu-Ala-CTMPTTMA]([PF6])2
*t* Mode opératoire:
1,0 eq. de [VaI-LeU-AIa-CTMPTTMA][PF6] et 1,0 eq. de [HMPhBTMA-Aiso-Leu- VaI][PF6] sont dissous dans l'acétonitrile puis 1,5 eq. de TEA, de HOBt et de carbodiimide sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité une nuit à TA. L'acétonitrile est évaporé. Le résidu obtenu est alors lavé à Péther ce qui provoque sa précipitation. Le solide obtenu est lavé trois fois à l'eau puis trois fois par une solution aqueuse de HPF6 (KpH<2) avant d'être séché une nuit au dessicateur. Les deux peptides supportés de départ ne sont pas visibles en spectre de masse Le rendement est de 50%. *> solide crème * HRMS de (C68H108N8O11) : [C"""] mthéorique= 1212.8138; m/zeXpérimentai = 606.4063.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'un sel à tâche dédiée de formule (I) : A+-L-R-OY, 2C comme support soluble pour la synthèse de peptides, dans laquelle :
• XT représente un anion, fonctionnel ou non, choisi notamment parmi Cl", Br", I", BF4 ", CF3SO3-, N(SO2CFs)2 ", PF6 ", CH3CO2 ", CF3CO2-, RaCO2 ", RFCO2 ", R0SO3 ", RFSO3 ", RaSO4 ", (Ra)3-xPO4 x", x représentant un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, AlCl4 ", SnCl3 ", ZnCl3 ", Rn représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, RF représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone,
• Y représente :
* soit un atome d'hydrogène, le sel de formule (I) comprenant alors un cation fonctionnalisé par une fonction alcool et répondant à la formule (ID) suivante : A+-L-R-OH, XT, * soit un groupe -COOR1, R1 représentant un groupe alkyle comprenant de
1 à 20 atomes de carbone ou un groupe aryle comprenant de 6 à 30 atomes de carbone, ou un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, lesdits groupes alkyle ou aryle étant éventuellement fonctionnalisés, R1 représentant notamment -CHCl-CCl3 ou -^ y — NO2 le sel de formule (I) comprenant alors un cation fonctionnalisé par une fonction carbonate mixte et répondant à la formule (I£) suivante :
+
A-L — R—Ck ^OR vi , x~ o
• A+ représente une entité cationique, notamment choisie parmi les cations pyridinium, imidazolium, ammonium, phosphonium ou sulfonium, cycliques ou non, substitués ou non, et de préférence ammonium ou phosphonium,
• L représente un bras, notamment un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, ou aralkyle ou alkaryle comprenant de 3 à 20 atomes de carbone,
• R représente un groupe choisi parmi les groupes suivants : * un groupe de formule -C(R3)(Rb)-, Ra et Rb représentant indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, le groupe de formule -C(R3)(Rb)- représentant de préférence un groupe -CH2-, -CH(Me)- ou
-C(Me)2-,
* un groupe de formule -T-ArI-CH(R0)-, dans laquelle :
- T est choisi parmi l'un des groupes suivants : CH2, O, S et NRd, Rd représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone,
- Ar1 représente un groupe aromatique de formule suivante :
Figure imgf000116_0001
. n représentant un nombre entier égal à 0, 1, 2, 3 ou 4, • . Re représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy, - Rc représente soit un atome d'hydrogène, soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, soit un groupe aromatique Ar2 de formule suivante :
Figure imgf000116_0002
. m représentant un nombre entier égal à 1, 2, 3, 4 ou 5, . Rf représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy.
2. Utilisation selon la revendication 1, pour la synthèse de peptides, d'azapeptides ou de pseudopeptides, lesdits peptides, azapeptides ou pseudopeptides comprenant au moins une liaison peptidique et/ou au moins une liaison azapeptidique et/ou au moins une liaison pseudopeptidique, et comprenant éventuellement au moins un motif α-hydrazinoacide, α-aminoacide ou ω-aminoacide, notamment β-aminoacide ou γ-aminoacide cyclique ou linéaire.
3. Utilisation selon la revendication 1, pour le greffage d'au moins un acide aminé
• de formule HOOC-[CH(R')]P-NΗGP, sur un composé de formule (I0) telle que définie dans la revendication 1,
. p représentant un nombre entier variant de 1 à 20, . R' représentant un résidu d'acide aminé, . GP représentant un groupe protecteur de la fonction aminé, à l'exception de Boc, notamment Fmoc, Cbz, Z, SO2Rg, Rg représentant un groupement alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, un groupement aryle substitué ou non, un groupement perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, pour
Figure imgf000117_0001
A+, L et R étant tels que définis dans la revendication 1, p, R' et GP étant tels que définis ci-dessus,
• ou de formule R2-NH-[CH(R')]P-COOR3, sur un composé de formule (Ii) telle que définie dans la revendication 1,
. p représentant un nombre entier variant de 1 à 20,
. R' représentant un résidu d'acide aminé,
. R2 représentant un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R', l'atome d'azote portant le groupe R2 et l'atome de carbone portant le groupe R', ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons, et . R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur de la fonction acide terminale de l'acide aminé, et étant choisi parmi l'un des groupes suivants : un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à
20 atomes de carbone, notamment méthyle ou tertiobutyle, un groupe benzyle ou un groupe Si(ORh)3, Rh représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 20 atomes de carbone, et représentant notamment un groupe tertiobutyle, pour obtenir un c
Figure imgf000118_0001
A , L et R étant tels que définis dans la revendication 1, p, R2, R' et R3 étant tels que définis ci-dessus.
4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, d'un sel à tâche dédiée de formule A — L — R — Ox . OR1 , XT, pour la synthèse peptidique par voie inverse, dans laquelle : 11
• A+, ~XT et L sont tels que définis dans la revendication 1,
• R1 représente notamment un groupe -CHCl-CCl3 ou -*' ^-
• R représente un groupe de formule -C(Ra)(Rb)-, Ra et Rb représentant indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, le groupe de formule -C(R5)(Rb)- représentant de préférence un groupe -CH2-, -CH(Me)- ou -C(Me)2-.
5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, d'un sel à tâche dédiée de formule A+-L-R-OH, X", pour la synthèse peptidique par voie directe, dans laquelle : • A+, X" et L sont tels que définis dans la revendication 1 ,
• R représente un groupe de formule -T-Ar1-CH(Rc)-, dans laquelle :
- T est choisi parmi l'un des groupes suivants : CH2, O, S et NRd, notamment O, Rd représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, - Ar1 représente un groupe aromatique de formule suivante :
Figure imgf000118_0002
. n représentant un nombre entier égal à O, 1, 2, 3 ou 4, . R8 représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy, - R0 représente soit un atome d'hydrogène, soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, soit un groupe aromatique Ar2 de formule suivante :
Figure imgf000119_0001
. m représentant un nombre entier égal à 1, 2, 3, 4 ou 5, . Rf représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy.
6. Utilisation selon la revendication 1, pour la synthèse peptidique par voie convergente, d'un sel à tâche dédiée A+-L-R-OY, X~ de formule (I) telle que définie dans la revendication 1, et d'un sel à tâche dédiée de formule Ai+-Lj-Ri-OH, Xf, les éléments A+, L, R, Y et XT étant tels que définis dans la revendication 1, et les éléments Aj+, Lj, Rj et Xf ayant les définitions données dans la revendication 1 à propos respectivement de A+, L, R et X", A+-L-R et Ai+-Li-Ri pouvant être identiques ou différents.
7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que A+ est choisi parmi les cations ammoniums quaternaires, cycliques ou non.
8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que L représente une chaîne alkyle linéaire comprenant 4 ou 5 atomes de carbone.
9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que Fanion X" est PF6 " ou NTf2 ".
10. Utilisation selon la revendication 4, comprenant l'utilisation d'un sel à tâche dédiée dans lequel le cation répond à l'une des formules suivantes :
Figure imgf000120_0001
[HMPeTMA] [HMPhBTMA]
Figure imgf000120_0002
[HPrTMA] [HBuTMA] [HHeTMA]
11. Utilisation selon la revendication 5, comprenant l'utilisation d'un sel à tâche dédiée dans lequel le cation répond à la formule suivante :
Figure imgf000120_0003
12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisée en ce que le sel à tâche dédiée est :
- soit solubilisé dans un solvant organique classique tel que le dichlorométhane, le tétrahydrofuranne, le dioxane, l'acétonitrile, le propionitrile, le diméthylformamide, le diméthylacétamide, la N-méthyl-pyrrolidone, l'acétone, le toluène, le chlorobenzène, le dichlorobenzène, le nitrométhane, le nitroéthane, ou un mélange de ces solvants,
- soit solubilisé dans une matrice liquide ionique, de préférence le triflimidure de triméthylbutylammonium ou [tmba] [NTf2], le triflimidure de l-éthyl-3- méthylimidazolium ou [emim] [NTf2], le triflimidure de l-butyl-3-méthylimidazolium ou [bmim][NTf2] ou tout autre combinaison de cation onium et d'anion liquide à une température inférieure ou égal à 100°C, de préférence 50°C,
- soit solubilisé dans un mélange comprenant un solvant organique et une matrice liquide ionique tels que définis ci-dessus.
13. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, 5 et 7 à 12, pour la synthèse de peptides par voie directe, caractérisée en ce que le sel à tâche dédiée est en solution dans un solvant organique.
14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 35 5 et 7 à l2, pour la synthèse de peptides par voie directe, caractérisée en ce que le sel à tâche dédiée est solubilisé et immobilisé dans une matrice liquide ionique A2 +, X2 ", le cation A2 étant choisi parmi les cations imidazolium, pyridinium, substitués ou non, ammonium, phosphonium, sulfonium ou tout autre cation onium éventuellement fonctionnalisé, et l'anion X2 " étant choisi parmi Cl", Br", I", F", BF4 ", CF3SO3 ", N(SO2CF3)2 ", PF6 ",
CH3CO2 ", CF3CO2 ", RaCO2 ", RFCO2 ", RaSO3 ", RFSO3 ", RaSO4 ", (Ra)3-xPO4 x", x représentant un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, AlCl4 ", SnCl3 ", ZnCl3 ", Rα représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, Rp représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone.
15. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et 7 à 12, pour la synthèse de peptides par voie inverse, caractérisée en ce que le sel à tâche dédiée est en solution dans un solvant organique.
16. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et 7 à 12, pour la synthèse de peptides par voie inverse, caractérisée en ce que le sel à tâche dédiée est solubilisé et immobilisé dans une matrice liquide ionique A2 +, X2 ", le cation A2 + étant choisi parmi les cations imidazolium, pyridinium, substitués ou non, ammonium, phosphonium, sulfonium ou tout autre cation onium éventuellement fonctionnalisé, et l'anion X2 " étant choisi parmi Cl", Br", I", F", BF4 ", CF3SO3 ", N(SO2CF3)2 ", PF6 ", CH3CO2 ", CF3CO2 ", RaCO2 ", RFCO2 ", RaSO3 ", RpSO3 ", R3SO4 ", (Ra)3-xPO4 x", x représentant un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, AlCl4 ", SnCl3 ", ZnCl3 ", Rα représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, RF représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone.
17. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 et 6 à 12, pour la synthèse de peptides par voie convergente, caractérisée en ce que les sels à tâche dédiée sont en solution dans un solvant organique.
18. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 et 6 à 12, pour la synthèse de peptides par voie convergente, caractérisée en ce que les sels à tâche dédiée sont solubilisés et immobilisés dans une matrice liquide ionique A2 +, X2 ", le cation A2 + étant choisi parmi les cations imidazolium, pyridinium, substitués ou non, ammonium, phosphonium, sulfonium ou tout autre cation onium éventuellement fonctionnalisé, et l'anion X2 " étant choisi parmi Cl', Br", I", F", BF4 ", CF3SO3 ", N(SO2CF3)2 ", PF6 ",
CH3CO2 ", CF3CO2 ", RaCO2 ", RFCO2 ", R01SO3 ", RFSO3 ", RaSO4 ", (Ra)3-xPO4 x", x représentant un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, AlCl4 ", SnCl3 ", ZnCl3 ", Rα représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, Rp représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone.
19. Procédé de synthèse de peptides par voie directe (C — > N) sur un support tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 18, pour la préparation d'un peptide de formule (II) suivante :
Figure imgf000122_0001
dans laquelle :
- i est un nombre entier variant de 1 à q, — q est un nombre entier variant de 1 à 20,
- pi est un nombre entier variant de 1 à 20,
- R'i représente un résidu d'acide aminé,
- Ri2 représente H ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R';, l'atome d'azote portant le groupe R,2 et l'atome de carbone portant le groupe R'i, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons, ledit procédé comprenant les étapes suivantes :
f) une étape de greffage d'un acide aminé HOOC-[CH(R' i)]Pl-N(Ri2)-GP,
R' ι, R1 2 et P1 étant tels que définis ci-dessus, et GP représentant un groupe protecteur de la fonction aminé, à l'exception de Boc, notamment Fmoc, Cbz, Z, SO2Rg, Rg représentant un groupement alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, un groupement aryle substitué ou non, un groupement perfiuoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, sur un support soluble de formule (ID) suivante : A+-L-R-OH, X~, A+, L, R et X~ étant tels que définis dans la revendication 1,
afin d'obtenir le produit de formule (II- 1) suivante :
Figure imgf000123_0001
g) une étape de déprotection du produit de formule (II- 1) tel qu'obtenu à l'issue de l'étape précédente afin d'obtenir le produit déprotégé de formule (III- 1 ) suivante :
Figure imgf000123_0002
h) la répétition séquentielle des étapes a) et b) de greffage et de déprotection jusqu'à l'obtention du peptide supporté protégé de formule (Il-q) suivante :
ζ-e-r \
Figure imgf000123_0003
i) une étape de déprotection du peptide supporté protégé de formule (Il-q) tel qu'obtenu à l'issue de l'étape précédente afin d'obtenir le peptide supporté déprotégé de formule (Ill-q) suivante :
Figure imgf000124_0001
j) et une étape de clivage du support afin d'obtenir le peptide susmentionné de formule (II) et éventuellement de recycler le support de formule (I0) A+-L-R-OH, X", l'ordre des étapes d) et e) pouvant être inversé.
20. Procédé de synthèse de peptides par voie inverse (N -» C) sur un support tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 18, pour la préparation d'un peptide de formule (IV) suivante :
Figure imgf000124_0002
dans laquelle :
- i est un nombre entier variant de 1 à q,
- q est un nombre entier variant de 1 à 20,
- pi est un nombre entier variant de 1 à 20,
- R',- représente un résidu d'acide aminé,
- Rj2 représente H ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R',, l'atome d'azote portant le groupe Ri2 et l'atome de carbone portant le groupe R'i, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons,
- R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur de la fonction acide terminale de l'acide aminé, et étant choisi parmi l'un des groupes suivants : un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment méthyle ou tertiobutyle, un groupe benzyle ou un groupe Si(ORh)3, Rh représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 20 atomes de carbone, et représentant notamment un groupe tertiobutyle, ledit procédé comprenant les étapes suivantes :
g) une étape de réaction d'un composé de formule suivante : \ ^ i
O
R1 étant tel que défini dans la revendication 1, et représentant notamment
Figure imgf000125_0001
sur un support soluble de formule (ID) suivante :
A+-L-R-OH, XT A+, L, R et X" étant tels que définis dans la revendication 1,
afin d'obtenir un support soluble de formule (Ii) suivante
Figure imgf000125_0002
A+, L, R, R1 et X~ étant tels que définis ci-dessus,
h) une étape de greffage d'un acide aminé NH(Ri 2)-[CH(R'i)]p -COOR3, sur un support soluble de formule (Ii) tel qu'obtenu à l'issue de l'étape précédente, . P1, R1 2 et R5 ! étant tels que définis ci-dessus, . R3 étant tel que défini dans la revendication 3,
pour obtenir un composé de formule suivante (IV-I) :
Figure imgf000125_0003
X~, A+, L, R, pi, R'i et R3 étant tels que définis ci-dessus, i) une étape de déprotection éventuelle du produit de formule (IV-I) tel qu'obtenu à l'issue de l'étape précédente afin d'obtenir le produit déprotégé de formule
(V-I) suivante :
Figure imgf000126_0001
j) la répétition séquentielle des étapes b) et c) de greffage et de déprotection jusqu'à l'obtention du peptide supporté de formule (IV-q) suivante :
Figure imgf000126_0002
k) une étape de déprotection éventuelle du peptide supporté de formule (IV-q) tel qu'obtenu à l'issue de l'étape précédente afin d'obtenir le peptide supporté déprotégé de formule (V-q) suivante :
Figure imgf000126_0003
1) et une étape de clivage du support afin d'obtenir le peptide susmentionné de formule (IV) et éventuellement de recycler le support de formule (Ip) A+-L-R-OH, X~, l'ordre des étapes e) et f) pouvant être inversé.
21. Procédé de synthèse de peptides par voie convergente sur un support tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 18, pour la préparation d'un peptide de formule (VI) suivante :
Figure imgf000126_0004
dans laquelle :
- i est un nombre entier variant de 1 à q, - q est un nombre entier variant de 1 à 20,
- pi est un nombre entier variant de 1 à 20,
- R'i représente un résidu d'acide aminé,
- Rj2 représente H ou un groupe alkyie, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R'j, l'atome d'azote portant le groupe Rj2 et l'atome de carbone portant le groupe R'i, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons,
- s est un nombre entier variant de 1 à r,
- r est un nombre entier variant de 1 à 20,
- ts est un nombre entier variant de 1 à 20,
- R" s représente un résidu d'acide aminé,
- Rs 2 représente H ou un groupe alkyie, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R"s, l'atome d'azote portant le groupe R3 2 et l'atome de carbone portant le groupe R"s, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons,
ledit procédé comprenant les étapes suivantes :
c) la réaction d'un peptide supporté obtenu par synthèse peptide par voie inverse de formule (VII-I) suivante :
Figure imgf000127_0001
Ai+, LI, RI et Xf répondant à la même définition que celle donnée pour A+, L, R et
X~ dans la revendication 1, i, q, Rj2, pi et R'i étant tels que définis ci-dessus,
avec un peptide supporté obtenu par synthèse par voie directe de formule (VII-D) suivante :
Figure imgf000127_0002
AQ+, LD, RD et XD" répondant à la même définition que celle donnée pour A+, L, R et X" dans la revendication 1,
AD +-LD-RD et AI+-LI-RI pouvant être identiques ou différents, et XD " et Xf pouvant être identiques ou différents, s, r, Rs 2, ts et R"s étant tels que définis ci-dessus,
afin d'obtenir un peptide bi-supporté de formule suivante (VIII) :
Figure imgf000128_0001
d) et une étape de clivage du produit de formule (VIII) afin d'obtenir le peptide susmentionné de formule (VI), et éventuellement de recycler les supports de formule suivante : AD +-LD-RD-OH, XD~, et AI +-LI-RI-OH, Xf.
22. Procédé de synthèse peptidique selon l'une quelconque des revendications 19 à 21, caractérisé en ce que les supports sont :
— soit solubilisés dans un solvant organique classique tel que le dichlorométhane, le tétrahydrofuranne, le dioxane, Pacétonitrile, le propionitrile, le diméthylformamide, le diméthylacétamide, la N-méthyl-pyrrolidone, l'acétone, le toluène, le chlorobenzène, le dichlorobenzène, le nitrométhane, le nitroéthane, ou un mélange de ces solvants,
— soit solubilisés dans une matrice liquide ionique, de préférence le triflimidure de triméthylbutylammonium ou [tmba] [NTf2], le triflimidure de l-éthyl-3- méthylimidazolium ou [emim] [NTf2], le triflimidure de l-butyl-3-méthylimidazolium ou
[bmim] [NTf2] ou tout autre combinaison de cation onium et d'anion liquide à une température inférieure ou égal à 100°C, de préférence 5O0C,
— soit solubilisé dans un mélange comprenant un solvant organique et une matrice liquide ionique tels que définis ci-dessus.
23. Composés de formule (I-bis)
A+-L-R-OW, X" dans laquelle : • W représente : - soit un atome d'hydrogène,
- soit un groupe -COORi, Ri représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone ou un groupe aryle comprenant de 6 à 30 atomes de carbone, ou un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, lesdits groupes alkyle ou aryle étant éventuellement fonctionnalisés, Ri représentant notamment -CHCl-CCl3 ou
Figure imgf000129_0001
soit un groupe de formule (A') suivante :
Figure imgf000129_0002
dans laquelle : o s est un nombre entier variant de 1 à r, o r est un nombre entier variant de 1 à 20, o ts est un nombre entier variant de 1 à 20, o R' 's représente un résidu d'acide aminé, o R8 2 représente H ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à
20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R"s, l'atome d'azote portant le groupe R8 2 et l'atome de carbone portant le groupe R"s, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons, o V représente un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur de la fonction aminé, à l'exception de Boc, notamment Fmoc, Cbz, Z, SO2Rg, Rg représentant un groupement alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, un groupement aryle substitué ou non, un groupement perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone,
- soit un groupe de formule (B') suivante :
Figure imgf000129_0003
dans laquelle : o i est un nombre entier variant de 1 à q, o q est un nombre entier variant de 1 à 20, o pi est un nombre entier variant de 1 à 20, o R'i représente un résidu d'acide aminé, o Rj2 représente H ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à
20 atomes de carbone et pouvant former un cycle avec le groupe R';, l'atome d'azote portant le groupe R;2 et l'atome de carbone portant le groupe R'i, ledit cycle comprenant de 3 à 20 chaînons, notamment 5 ou 6 chaînons, o R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur de la fonction acide terminale de l'acide aminé, et étant choisi parmi l'un des groupes suivants : un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, notamment méthyle ou tertiobutyle, un groupe benzyle ou un groupe Si(ORh)3, Rh représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié de 1 à
20 atomes de carbone, et représentant notamment un groupe tertiobutyle,
- soit un groupe de formule (C) suivante
Figure imgf000130_0001
dans laquelle : o s, r, ts, R"s et Rs 2 sont tels que définis ci-dessus dans la formule (A'), et o i, q, pi, R'i et Rj2 sont tels que définis ci-dessus dans la formule (B'),
0 XD ~ représente un anion, fonctionnel ou non, choisi notamment parmi Cl", Br", r, BF4 ", CF3SO3 ", N(SO2CF3)2 ", PF6 ", CH3CO2 ", CF3CO2 ", RuCO2 ", RFCO2 ", R3SO3 ", RFSO3 ", RaSO4 ", (Ra)3-xPO4 x", x représentant un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, AlCl4 ", SnCl3 ", ZnCl3 ", R0 représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, Rp représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de
1 à 20 atomes de carbone, o AD + représente une entité cationique, notamment choisie parmi les cations pyridinium, imidazolium, ammonium, phosphonium ou sulfonium, cycliques ou non, substitués ou non, et de préférence ammonium ou phosphonium, o L représente un bras, notamment un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, ou aralkyle ou alkaryle comprenant de 3 à 20 atomes de carbone, o R représente un groupe choisi parmi les groupes suivants : * un groupe de formule -C(Ra)(Rb)-, R3 et Rb représentant indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, le groupe de formule -C(Ra)(Rb)- représentant de préférence un groupe -CH2-, -CH(Me)- ou -C(Me)2-,
* un groupe de formule -T-Ar1-CH(Rc)-, dans laquelle :
- T est choisi parmi l'un des groupes suivants : CH2, O, S et NRd, Rd représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone,
- Ar1 représente un groupe aromatique de formule suivante :
Figure imgf000131_0001
. n représentant un nombre entier égal à 0, 1, 2, 3 ou 4, . Re représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy, — R0 représente soit un atome d'hydrogène, soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, soit un groupe aromatique Ar2 de formule suivante :
Figure imgf000131_0002
. m représentant un nombre entier égal à 1, 2, 3, 4 ou 5, . Rf représentant soit un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthyle, soit un groupe alcoxy comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, notamment un groupe méthoxy, éthoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, isobutyloxy ou tertiobutyloxy, • A+, L, R et X" répondant à la même définition que celle donnée pour ci-dessus pour A0 +, L0, RD et X0 ",
AD+-LD-RD et A+-L-R pouvant être identiques ou différents, et XD " et X~ pouvant être identiques ou différents,
les composés suivants étant exclus :
OH > NT?;
(Me)3N (Me)3N OH X
X = Cl5 PF65 BF4 Ou NTf2
(Me)3N (Me)3N ^OH X X = Cl5 OTfOu NTf2 X = CI oU NTf2
Figure imgf000132_0001
Cl ouNTf2
Figure imgf000132_0002
X = Cl OuNTf2
24. Composés selon la revendication 23, répondant à la formule (I) suivante :
A+-L-R-OY5 X" (I) dans laquelle :
• A+, X", L et R sont tels que définis dans la revendication 23,
• Y représente :
* soit un atome d'hydrogène, le sel de formule (I) comprenant alors un cation fonctionnalisé par une fonction alcool et répondant à la formule (ID) suivante : A+-L-R-OH, X",
* soit un groupe -COOR1, R1 étant tel que défini dans la revendication 23, le sel de formule (I) comprenant alors un cation fonctionnalisé par une fonction carbonate mixte et répondant à la formule (Ii) suivante .-
Figure imgf000132_0003
25. Composés selon la revendication 23 ou 24, répondant à l'une des formules suivantes :
Figure imgf000133_0001
[HMPeTMA] [HMPhBTMA]
Figure imgf000133_0002
[HHeTMA]
Figure imgf000133_0003
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