WO2007105730A1

WO2007105730A1 - インスリン抵抗性改善剤

Info

Publication number: WO2007105730A1
Application number: PCT/JP2007/054973
Authority: WO
Inventors: Toshikazu Kamiya; Fumiko Ogino
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.
Priority date: 2006-03-13
Filing date: 2007-03-13
Publication date: 2007-09-20

Abstract

　本発明の目的は、安全で効果の高いインスリン抵抗性改善剤または高インスリン血症改善剤を提供することにある。　本発明により、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ－アシル化誘導体またはその塩とビグアナイド剤とを有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤および高インスリン血症改善剤を提供することができる。

Description

明細書

インスリン抵抗性改善剤

技術分野

[0001] 本発明は、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—ァシルイ匕誘導体またはその塩とビグアナイド剤とを有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤および高インスリン血症改善剤に関する。

背景技術

[0002] 糖尿病患者の大多数を占める 2型糖尿病の病態は、インスリン分泌不全による場合とインスリン抵抗性による場合に大別される。糖尿病治療剤は、その作用機序により、スルホニル尿素剤、速効'短時間作用型インスリン分泌促進剤、 _α—ダルコシダーゼ阻害剤、ビグアナイド剤、およびチアゾリジン誘導体に分類され、糖尿病治療にはこれらの治療剤が単独または組合せて用いられている。

[0003] このうちビグアナイド剤には、メトホルミン、ブホルミンなどが知られている。ビグアナイド剤はインスリン分泌促進を介さず血糖を低下させるインスリン抵抗性改善剤である。ビグアナイド剤の血糖低下作用は、肝臓における糖新生の抑制、骨格筋への糖取り込みの促進、組織に取り込まれた糖の嫌気的解糖の亢進、および消化管での糖の吸収遅延などによると報告されている（非特許文献 1参照）。

[0004] ヒドロキシプロリンは、コラーゲン中の主要構成アミノ酸として自然界に広く存在し、 Ν—ァセチル体が消炎剤として用いられているほか、カルバぺナム系抗生物質や血圧降下剤、抗喘息薬、末梢循環改善剤、血液凝固阻止剤等種々の医薬品の合成原料として用レ、られており、また保湿性を有するという機能的特性力化粧品にも用いられている (非特許文献 2参照)。また食品添加物として、果汁飲料や清涼飲料水、一般食品の味質の調整や風味の改善に使用、あるいはフレーバーの原料としても使用されてレ、る (非特許文献 3参照)。

[0005] ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの Ν—ァシル化誘導体またはその塩の薬理作用として、肌の老化抑制作用および肌質改善作用（特許文献 1、 2参照）、消炎作用、抗リュウマチ作用、鎮痛作用および創傷治癒作用（特許文献 3参照）、糖尿病改善作用（特許文献 4参照）が知られている。

[0006] し力ながら、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—ァシル化誘導体またはその塩とビグアナイド剤とを組み合せて用いることで、インスリン抵抗性または高インスリン血症が顕著に改善されることは知られてレ、なレ、。

特許文献 1：国際公開第 2000/051561号パンフレット

特許文献 2 :特開 2002— 80321号公報

特許文献 3：特開平 8— 337526号公報

特許文献 4 :国際公開第 2004/083179号パンフレット

非特許文献 1：「日本臨床」、 2005年、第 63卷、増刊号 2号、 p. 433-437 非特許文献 2 :「バイオサイエンスとインダストリ一」、 1998年、第 56卷、第 1号、 p. 11 - 16

非特許文献 3 :「第 7版食品添加物公定書解説書」、廣川書店、 1998年、 p. D- 11 14- 1115

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0007] 本発明の目的は、安全で効果の高いインスリン抵抗性改善剤または高インスリン血症改善剤を提供することにある。

課題を解決するための手段

[0008] 本発明は、下記の（1)〜（10)に関する。

(1)ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤とを有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。

(2)ヒドロキシプロリンの N_ァシル化誘導体力 S、 N—ァセチル化誘導体、 N_プロピォニル化誘導体、 N—ブチリルイ匕誘導体または N_イソブチリルイ匕誘導体である上記（1)のインスリン抵抗性改善剤。

(3)ビグアナイド剤がメトホルミンもしくはブホルミンまたはその塩である上記（1)または（2)のインスリン抵抗性改善剤。

(4)ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤との有効量を、必要とする対象に投与することを特徴とする、インスリン抵抗性改善方法。

(5)インスリン抵抗性改善剤の製造のための、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N ァシルイ匕誘導体またはその塩とビグアナイド剤との使用。

(6)ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤とを有効成分として含有する高インスリン血症改善剤。

(7)ヒドロキシプロリンの N_ァシル化誘導体力 S、 N—ァセチル化誘導体、 N_プロピォニル化誘導体、 N—ブチリルイ匕誘導体または N_イソブチリルイ匕誘導体である上記 (6)の高インスリン血症改善剤。

(8)ビグアナイド剤がメトホルミンもしくはブホルミンまたはその塩である上記（6)または（7)記載の高インスリン血症改善剤。

(9)ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤との有効量を、必要とする対象に投与することを特徴とする、高インスリン血症改善方法。

(10)高インスリン血症改善剤の製造のための、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプ口リンの N ァシルイ匕誘導体またはその塩とビグアナイド剤との使用。

発明の効果

[0009] 本発明により、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤とを有効成分として含有する、安全で効果の高レ、インスリン抵抗性改善剤または高インスリン血症改善剤を提供することができる。

発明を実施するための最良の形態

[0010] 本発明で用いられるヒドロキシプロリンは、いずれのヒドロキシプロリンの立体異性体であってもよい。すなわち、ヒドロキシプロリンのプロリンが D体力 L体力、、また水酸基の位置が 3位か 4位か、およびその立体異性体がシス力ランスかによつて 8種類の立体異性体があるが、いずれの化合物も本発明に用いることができる。

[0011] 具体的なヒドロキシプロリンとしては、シス一 4—ヒドロキシ一 L プロリン、シス一 4— ヒドロキシ D—プロリン、シスー3—ヒドロキシ L—プロリン、シスー3—ヒドロキシー D—プロリン、トランスー4ーヒドロキシ L—プロリン、トランスー4ーヒドロキシー D— プロリン、トランス一 3—ヒドロキシ一L—プロリンおよびトランス一 3—ヒドロキシ一 D— プロリンがあげられる。

[0012] ヒドロキシプロリンは、コラーゲン中の主要構成アミノ酸成分として、また、エラスチンの構成アミノ酸として自然界に広く存在するアミノ酸の一種であり、例えばブタゃゥシ等の動物由来のコラーゲンを酸加水分解し、常法により精製することにより製造すること力 Sできる。

[0013] トランス一 4—ヒドロキシ一L—プロリンは、アミコラトプシス（AmvcolatoDsis)属またはダクチロスポランジゥム (Dactvlosporangium)属より単離したプロリン 4位水酸化酵素（特開平 7— 313179)を用いて製造することができる。また、シス一 3—ヒドロキシ一 L —プロリンは、ストレプトマイセス (Streotomvces)属より単離したプロリン 3位水酸化酵素（特開平 7— 322885)を用いて製造することができる（バイオインダストリ一， 14卷, 31号， 1997年）。

[0014] 上記の微生物由来の酵素を用いて製造されるヒドロキシプロリンは、品質が優れており、本発明で用いるヒドロキシプロリンとしてより好ましい。

本発明で用いられるヒドロキシプロリンの N—ァシル化誘導体としては、上記の各種ヒドロキシプロリンの立体異性体の N—ァシル化誘導体をあげることができる。該 N— ァシルイ匕誘導体のァシル基としては、炭素数:!〜 24、より好ましくは炭素数 1〜： 12、特に好ましくは炭素数 1〜6のアシノレ基があげられ、具体的には、例えばホルミル、ァセチル、プロピオニル、ブチリノレ、イソブチリル、バレリル、ピバロィル、へキサノィル、ヘプタノィル、オタタノィル、ノナノィル、デカノィル、ゥンデカノィル、ドデカノィル等をあげること力 Sでき、特にァセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリルが好ましい。

[0015] ヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンの N—ァシル化誘導体の塩としては、酸付加塩、金属塩、アンモニゥム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等があげられる酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クェン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、 α—ケトグルタル酸塩、グノレコン酸塩、力プリル酸塩等の有機酸塩があげられる。

[0016] 金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、力ルシゥム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられる。アンモニゥム塩としては、アンモニゥム、テトラメチルアンモニゥム等の塩があげられる。

有機アミン付加塩としては、モノレホリン、ピぺリジン等の塩があげられる。

[0017] アミノ酸付加塩としては、グリシン、フエ二ルァラニン、リジン、ァスパラギン酸、ダルタミン酸等の塩があげられる。

ヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体は、公知の方法により調製することができる。例えば、ヒドロキシプロリンの N—ァシルイ匕誘導体は、直鎖または分岐状の炭素数 1〜24の飽和または不飽和の脂肪酸を塩化チォニル、ホスゲン等のハロゲン化剤を用いてクロライド、ブロマイド等のハロゲン化物に変換した後、前述のヒドロキシプロリンと縮合させる力、、または脂肪酸を酸無水物に変換した後、ヒドロキシプロリンと反応させることにより製造することができる。

[0018] 脂肪酸としては、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、ピバル酸、へキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ゥンデ力ン酸、ドデカン酸等の脂肪酸を単独または組合せたものが用いられる。

酸ハロゲン化物を経由するヒドロキシプロリンの N—ァシル化誘導体の製造方法を、以下に例示する。

[0019] 脂肪酸を塩化メチレン、クロ口ホルム、四塩化炭素、ベンゼン、トルエン、キシレン、 n—へキサン等の溶媒中に分散し、これに 1〜5倍当量のハロゲン化剤を添加して反応させ、脂肪酸ハライドを得る。次に、ヒドロキシプロリンを溶媒に溶解または分散させ、得られた溶液を 5〜70°Cに保ちながら、上記の脂肪酸ハライドをヒドロキシプロリン対して 0. 3〜3. 0倍当量加え、ァシル化反応を行うことによりヒドロキシプロリンの N —ァシルイ匕誘導体を製造することができる。

[0020] ァシル化反応に用いられる溶媒としては、水、メタノーノレ、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール、アセトン、トルエン、テトラヒドロフラン、酢酸ェチル、 N, N—ジメチノレホノレムアミド、ジメチルスルホキシド等があげられ、これらは単独または混合して用いてもよい。ヒドロキシプロリンを溶媒に溶解または分散する際、ヒドロキシプロリンに対して 0. 8〜2. 0倍当量の水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ物質を必要に応じて溶媒に溶解または分散させてもよい。 [0021] ヒドロキシプロリンの N ァシル化誘導体の塩を取得したいとき、ヒドロキシプロリンの N ァシルイ匕誘導体が塩の形で得られる場合には、そのまま精製すればよぐ遊離の形で得られる場合には、適当な溶媒に溶解または懸濁し、塩基をカ卩えて塩を形成させればよい。

精製は、例えば結晶化、クロマトグラフィー等の通常の方法が用いられる。

[0022] 具体的なヒドロキシプロリンの N_ァシル化誘導体としては、例えば、 N—ァセチル —シス _4—ヒドロキシ一L—プロリン、 N—ァセチノレ一シス _4—ヒドロキシ一D—プ口リン、 N—ァセチルーシス _ 3—ヒドロキシ一L—プロリン、 N—ァセチルーシス _ 3 —ヒドロキシ一D—プロリン、 N—ァセチノレ一トランス一 4—ヒドロキシ一L—プロリン、 N—ァセチノレ一トランス一 4—ヒドロキシ一D—プロリン、 N—ァセチル一トランス一 3 —ヒドロキシ一L—プロリン、 N—ァセチノレ一トランス一 3—ヒドロキシ一D—プロリン、 N—プロピオニル一シス _4—ヒドロキシ一L—プロリン、 N—プロピオニル一シス _4 ーヒドロキシ D—プロリン、 N—プロピオニノレーシスー3—ヒドロキシ L—プロリン、 N -プロピオ二ルーシス 3—ヒドロキシ一 D—プロリン、 N プロピオニルトランス 4 -ヒドロキシ L プロリン、 N プロピオニル一トランス一 4—ヒドロキシ一 D プロリン、 N プロピオニル一トランス一 3—ヒドロキシ一 L プロリン、 N プロピオニル一トランスー3—ヒドロキシ D—プロリン、 N ブチリルーシスー4ーヒドロキシ Lープ口リン、 N ブチリノレーシスー4ーヒドロキシ D—プロリン、 N ブチリノレーシスー3— ヒドロキシ L—プロリン、 N ブチリルーシスー3—ヒドロキシ D—プロリン、 N ブチリル一トランス一 4—ヒドロキシ一 L プロリン、 N ブチリル一トランス一 4—ヒドロキシ D—プロリン、 N ブチリルートランスー3—ヒドロキシ L—プロリン、 N ブチリノレ一トランス一 3—ヒドロキシ一D—プロリン、 N—イソブチリノレ一シス _4—ヒドロキシ —L—プロリン、 N—イソブチリノレ一シス _4—ヒドロキシ一D—プロリン、 N—イソブチリル一シス _ 3—ヒドロキシ一L—プロリン、 N—イソブチリル一シス _ 3—ヒドロキシ一 D—プロリン、 N—イソブチリル一トランス一 4—ヒドロキシ一L—プロリン、 N—イソブチリル一トランス一 4—ヒドロキシ一D—プロリン、 N—イソブチリル一トランス一 3—ヒドロキシ一L—プロリン、 N—イソブチリル一トランス一 3—ヒドロキシ一D—プロリン等をあげ'ること力 Sできる。 [0023] 本発明で用いられるビグアナイド剤としては、例えばメトホルミン、ブホルミン、フェンホノレミン、クロルへキシジン、プログァニル、またはそれらの塩等があげられる力メトホノレミン、ブホルミンまたはそれらの塩が好ましく用いられる。メトホルミン、ブホルミン、フェンホルミン、クロルへキシジンまたはプログァニルンの塩としては、上記のヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンの N—ァシル化誘導体の塩と同様のものがあげられる力塩酸塩が好ましい。例えば、塩酸メトホルミンは日本新薬社製、大日本住友製薬社製等を、塩酸ブホルミンは日医ェ社製等をそれぞれ用レ、ることができる。

[0024] ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—ァシル化誘導体またはその塩とビグアナイド剤との組成比は、重量比で 1 : 100〜100 : 1、好ましくは1 : 50〜50 : 1、とりわけ好ましくは 10 :：！〜 1： 10である。

また、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—ァシルイ匕誘導体またはその塩とビグアナイド剤とを、同一の組成物に含有するように調製してもよいが、それぞれ別々の組成物を製造し、キットまたはセット形態の組成物（以下、単にキット等ともいう )として用いてもよい。

[0025] キット等に含まれる各組成物は、それぞれ別個に存在する形態であれば、いずれの状態で存在してもよい。例えば、それぞれの組成物が別個に包装されていてもよいし、同一の容器内に混在されていてもよい。

キット等に含まれる各組成物を別々に投与する場合は、組成物中の有効成分が体内で高い効力を有する時間内に投与することが望ましい。例えば、 1回の投与につき、 8時間以内、好ましくは 2時間以内に全ての組成物を投与する。

[0026] 本発明のインスリン抵抗性改善剤または高インスリン血症改善剤としては、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N _ァシル化誘導体またはその塩、およびビグアナイド剤をそのまま投与することも可能であるが、各種の製剤として提供するのが望ましい。

[0027] 製剤は、有効成分としてヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—ァシルイ匕誘導体またはその塩、およびビグアナイド剤を含有するが、更に任意の他の治療のための有効成分を含有していてもよい。また、それら製剤は、有効成分を薬理学的に許容される一種またはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野にぉレ、てよく知られている任意の方法により製造される。

[0028] 製剤の投与形態は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましぐ経口投与または、例えば静脈内、腹膜内もしくは皮下投与等の非経口投与をあげることができるが、経口投与が好ましい。

投与する剤形としては、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、浸剤-煎剤、カプセル剤、シロップ剤、液剤、エリキシル剤、エキス剤、チンキ剤、流エキス剤等の経口剤、注射剤、点滴剤、クリーム剤、坐剤等の非経口剤のいずれでもよいが、経口剤として好適に用いられる。

[0029] 経口剤を製剤化する際には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることができる。経口投与に適当な、例えばシロップ剤のような液体調製物は、水、蔗糖、ソルビトーノレ、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のダリコール類、ごま油、ォリーブ油、大豆油等の油類、 p—ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、パラォキシ安息香酸メチル等のパラォキシ安息香酸誘導体、安息香酸ナトリウム等の保存剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類などを添加して製剤化することができる。

[0030] また、経口投与に適当な、例えば錠剤、散剤および顆粒剤等は、乳糖、白糖、ブドゥ糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール等の糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシ等の澱粉、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム等の無機物、結晶セルロース、カンゾゥ末、ゲンチアナ末等の植物末等の賦形剤、澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコーン油等の滑沢剤、ポリビニーノレアノレコーノレ、ヒドロキシプ口ピノレセノレロース、メチノレセノレロース、ェチノレセノレロース、カルメロース、ゼラチン、澱粉のり液等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤などを添加して製剤化することができる。

また、経口投与に適当な製剤には、一般に飲食品に用いられる添加剤、例えば甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色剤、漂白剤、防かび剤、ガムベース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物等が添加されてもよい。

経口投与に適当な製剤は、そのまま、または例えば粉末食品、シート状食品、瓶詰め食品、缶詰食品、レトルト食品、カプセル食品、タブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等の形態としては、インスリン抵抗性改善用、または高インスリン血症改善用の健康食品、機能性食品、栄養補助食品、特定保健用食品等の飲食品として用いてもよレ、。

[0031] 非経口投与に適当な、例えば注射剤は、好ましくは受容者の血液と等張であるヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—ァシルイ匕誘導体またはその塩、およびビグアナイド剤を含む滅菌水性剤からなる。例えば、注射剤の場合は、塩溶液、ブドゥ糖溶液または塩溶液とブドウ糖溶液の混合物からなる担体等を用いて注射用の溶液を調製する。

また、これら非経口剤においても、経口剤で例示した希釈剤、防腐剤、フレーバー類、賦形剤、崩壊剤、潤沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤などから選択される 1種またはそれ以上の補助成分を添加することができる。

[0032] 本発明のインスリン抵抗性改善剤または高インスリン血症改善剤におけるヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩、およびビグァナイド剤の濃度は、製剤の種類、当該製剤の投与により期待する効果等に応じて適宜選択されるが、例えば経口剤の場合、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—ァシルイ匕誘導体またはその塩とビグアナイド剤として、通常は 0. 1〜： 100重量 %、好ましくは 0. 5〜70重量％、特に好ましくは 1〜50重量％である。

[0033] 本発明のインスリン抵抗性改善剤または高インスリン血症改善剤の投与量および投与回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療すべき症状の性質もしくは重篤度により異なる力通常、成人一日当り、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N— ァシル化誘導体またはその塩として、通常は 5mg〜5000mg、好ましくは 50mg〜5 000mg、より好ましくは 500mg〜5000mg、ビグアナイド剤として、通常は 5mg〜50 00mg、好ましくは 50mg〜5000mg、より好ましくは 500mg〜5000mgとなるように、一日一回ないし数回投与する。投与期間は、特に限定されないが、通常は 1日間〜1年間、好ましくは 2週間〜 3ヶ月間である。

[0034] なお、本発明の製剤は、ヒトだけでなぐヒト以外の動物（以下、非ヒト動物と略す）に対しても使用すること力 Sできる。

非ヒト動物としては、ほ乳類、鳥類、は虫類、両生類、魚類等、ヒト以外の動物をあげ'ること力 Sできる。

本発明のインスリン抵抗性改善剤または高インスリン血症改善剤を非ヒト動物に投与する場合の投与量および投与回数は、投与形態、動物の年齢、種類等により異なる力通常、体重 lkgl日当たり、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—ァシル化誘導体またはその塩として、通常は 0. 1〜： 100mg、好ましくは:!〜 100mg、より好ましくは 10〜： 100mg、ビグアナイド剤として、通常は 0. lmg〜100mg、好ましくは lmg〜100mg、より好ましくは 10mg〜100mgとなるように、一日一回ないし数回投与する。投与期間は、特に限定されないが、通常は 1日間〜 1年間、好ましくは 2週間〜 3ヶ月間である。

[0035] 以下に、ヒドロキシプロリンとメトホルミンの組合せによるインスリン抵抗性および高ィンスリン血症の改善効果を調べた試験例を示す。

試験例

2型糖尿病モデルであり、インスリン抵抗性により高インスリン血症の症状を示す K K-A^y/Ta Jclマウス（日本クレア社製、ォス、 8週齢） 40匹を 10匹ずつ 4つの群に分け、第 1群〜第 4群とした。

[0036] 第 1群のマウスには、マウス'ラット飼育用粉末飼料 CE— 2 (日本クレア社製、以下、 CE— 2と略す）を摂取させた。第 2群のマウスには、トランス一 4—ヒドロキシ一 L—プ口リン (協和発酵工業社製、以下、ヒドロキシプロリンと略す）を 0. 5重量％添加した C E— 2を摂取させた。第 3群のマウスには、 1， 1—ジメチルビグアナイドハイド口クロライド (1 , 1― dimethylbiguanide hydrochloride,シグマ社製、以下、メトホノレミンと略す）を 0. 5重量⁰ /₀添カ卩した CE— 2を摂取させた。第 4群のマウスには、ヒドロキシプ口リン 0. 5重量％およびメトホルミン 0. 5重量％添加した CE— 2を摂取させた。

[0037] マウスに各飼料を 32日間摂取させた後、ジェチルエーテル吸入麻酔下で腹大動脈より採血し血清を得た。該血清中のインスリン濃度はレビスマウスインスリンキット（シバヤギ社製）を用いて測定した。吸光度の測定には、自動吸光度測定装置ォートリーダー 3 (三光純薬社製)を使用した。

[0038] 値は平均値土標準誤差 (n=9— 10、試験途中に 1匹が手技的要因により死亡したため、第 3群のみ n= 9)で示した。統計学的な危険率 (p値）は、第 1群対第 2群、第 1 群対第 3群、第 1群対第 4群、第 2群対第 4群および第 3群対第 4群について次のように求めた。まず、 F検定を行なレ、、有意でなかった場合は等分散を仮定した 2標本による t—検定を、有意であった場合は分散が等しくないと仮定した 2標本による t—検定を実施し p値を求めた。なお、 p値が 0.05未満で有意差ありと判断した。

[0039] 結果を表 1に示す。

[0040] [表 1] 血清中インスリン濃度（ngZdL) 有意差

第 1群 13. 503 + 0. 159

第 2群 13, 557 ±0. 282

第 3群 13. 406±0. 204

第 4群 8. 868土 1. 425 * "、 * * ²⁾ 、 * ³⁾

* ： p<0. 05、 * * ： p<0. 01

" 第 1群に対して、 ² >第2群に対して、 ³⁾第 3群に対して

[0041] 表 1に示されるとおり、飼料にヒドロキシプロリンまたはメトホルミンを単独で添加した第 2群および第 3群の血清中インスリン濃度は、飼料中にいずれの化合物も添加してレ、ない第 1群の血清中インスリン濃度と比較して、有意な変化は認められなかった。し力、しながら、ヒドロキシプロリンおよびメトホルミンを組合せて飼料に添カ卩した第 4群の血清中インスリン濃度は、第 1群、第 2群および第 3群の血清中インスリン濃度と比較して顕著に低値を示した。

[0042] 以上より、ヒドロキシプロリンとメトホルミンとを組合せて投与することによりインスリン抵抗性が改善され、その結果として高インスリン血症が改善されることが明らかとなつた。以下に、本発明の実施例を示す。実施例 1

[0043] 表 2記載の配合によりインスリン抵抗性または高インスリン血症の改善用清涼飲料水（10本分）を製造する。

[0044] [表 2] 組成含冇量

ヒドロキシプロリン 4 . 2 5 g 塩酸メ卜ホルミン 7 5 0 m g ビタミン C 1 g ビタミン B 1 5 m g ビタミン B 2 1 0 m g ビタミン B 6 ■■■■■■■··························· 2 5 m g 液糖 ■ ■■■■■■■■■ 1 5 0 g クェン酸 3 g 香料 1 g

[0045] 水にて lOOOmLとする。

実施例 2

[0046] 表 3記載の配合によりインスリン抵抗性または高インスリン血症の改善用茶飲料 10

OOmLを製造する。

[0047] [表 3] 組成含有

[0048] 水 lOOOmLにて溶出する。

実施例 3

[0049] 表 4記載の配合によりインスリン抵抗性または高インスリン血症の改善用チューインガム（30個分)を製造する。

[0050] [表 4]

ヒドロキシプロリン 0 . 7 5 g 塩酸メトホルミン 0 . 7 5 g ガムベース 2 5 g 砂糖 6 3 g 水飴 1 0 g 香料 1 g 実施例 4

[0051] 表 5記載の配合によりインスリン抵抗性または高インスリン血症の改善用キャンディ一（20個分)を製造する。

[0052] [表 5] 組成含有量ヒドロキシプロリン 0 . 5 g 塩酸メトホルミン 0 . 5 g 砂糖 8 0 g 水飴 2 0 g 香料 0 . 1 g 実施例 5

[0053] 表 6記載の処方で常法によりインスリン抵抗性または高インスリン血症の改善用錠剤（1錠あたり 200mg)を製造する。

[0054] [表 6]

ヒドロキシフロリン 0 . 5 g 塩酸メトホルミン 0 . 5 g 砂糖 8 0 g 水飴 2 0 g 香料 0 . 1 g 実施例 6

[0055] 表 7記載の処方で常法によりインスリン抵抗性または高インスリン血症の改善剤（1 包あたり 550mg)を製造する。

[0056] [表 7] 組成含有量

ヒドロキシプロリン 2 Omg 塩酸メホルミン二 3 Omg 乳糖 30 Omg コーンスターチ 200m g 実施例 7

表 8記載の処方でインスリン抵抗性または高インスリン血症の改善用ハードカプセル剤（1カプセルあたり 160mg)を製造する。

[表 8] 組成含有量

ヒドロキシプロリン 2 5 m g 塩酸メトホルミン 2 5 mg 乳糖 6 Omg コーンスターチ 3 Omg ヒドロキシプロピルセルロース 2 Omg

[0059] 25mgのヒドロキシプロリンと 25mgの塩酸メトホルミンに乳糖 60mgおよびコーンスターチ 30mgを添加して混合し、これにヒドロキシプロピルセルロース 20mgの水溶液を添加して練合する。次いで、押し出し造粒機を用いて、常法により顆粒を製造する。この顆粒をゼラチンハードカプセルに充填することにより、ハードカプセル剤を製造する。

実施例 8

[0060] 表 9記載の処方でインスリン抵抗性または高インスリン血症の改善用ソフトカプセル剤（1カプセルあたり 170mg)を製造する。 [0061] [表 9] 組成含有量

—ヒドロキシ 7ΰリ―ン 3 0 m g 塩酸メトホルミン 2 0 m g 大豆油 1 2 O m g

[0062] 大豆油 120mgにヒドロキシプロリン 30mgと塩酸メトホルミン 20mgを添加して混合する。次いで、ロータリー 'ダイズ式自動成型機を用いて、常法に従い、ソフトカプセルに充填することにより、ソフトカプセル剤を製造する。

産業上の利用可能性

[0063] 本発明により、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤とを有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤および高インスリン血症改善剤を提供することができる。

Claims

請求の範囲

[1] ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤とを有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。

[2] ヒドロキシプロリンの N_ァシル化誘導体力 S、 N—ァセチル化誘導体、 N_プロピオニル化誘導体、 N—プチリル化誘導体または N—イソプチリル化誘導体である請求項 1記載のインスリン抵抗性改善剤。

[3] ビグアナイド剤がメトホルミンもしくはブホルミンまたはその塩である請求項 1または 2 記載のインスリン抵抗性改善剤。

[4] ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤との有効量を、必要とする対象に投与することを特徴とする、インスリン抵抗性改善方法。

[5] インスリン抵抗性改善剤の製造のための、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤との使用。

[6] ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤とを有効成分として含有する高インスリン血症改善剤。

[7] ヒドロキシプロリンの N_ァシル化誘導体力 S、 N—ァセチル化誘導体、 N_プロピオニル化誘導体、 N—プチリル化誘導体または N—イソプチリル化誘導体である請求項 6記載の高インスリン血症改善剤。

[8] ビグアナイド剤がメトホルミンもしくはブホルミンまたはその塩である請求項 6または 7 記載の高インスリン血症改善剤。

[9] ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤との有効量を、必要とする対象に投与することを特徴とする、高インスリン血症改善方法。

[10] 高インスリン血症改善剤の製造のための、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンの N—アシノレ化誘導体またはその塩とビグアナイド剤との使用。