WO2007071855A2 - Procede de caracterisation d'un element biochimique presentant une activite biologique, notamment pathogene, par analyse des signaux electromagnetiques de basses frequences - Google Patents

Procede de caracterisation d'un element biochimique presentant une activite biologique, notamment pathogene, par analyse des signaux electromagnetiques de basses frequences Download PDF

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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N37/00—Details not covered by any other group of this subclass
    • G01N37/005—Measurement methods not based on established scientific theories

Definitions

  • the present invention relates to the field of biochemical material characterization, by the analysis of the electromagnetic signals generated after high dilution and filtering of a medium as well as the associated therapeutic treatments, aimed at the substantial modification or destruction of these biochemical materials.
  • State of the art ;
  • PCR polymerase chain reaction
  • the European patent EP0701695 describes a method and a transmission device in the form of a signal characteristic of the manifestation of the biological activity or of the biological behavior specific to a given substance. such a signal, from a first carrier material having said biological activity to a second material physically separated from the first material and initially free from any physical presence of said determined substance, and a material obtained by such a method.
  • This method of the prior art comprises the amplification of the electrical or electromagnetic signal emitted by the first substance, and captured by a sensor, and the transmission to a transmitter, of a signal characteristic of the manifestation of the biological activity or the biological behavior presented by the first material, then the detection in the second material of a signal characteristic of the manifestation of the biological activity specific to said determined substance and transmitted to this second material via the means d ! high gain amplification.
  • the purpose of the present invention is to make significant improvements to this technique in order to extend the scope and the performances, in particular in the detection of specifically pathogenic activity.
  • the present invention makes it possible to detect these forms, which will be named in the remainder of this document "nanoforms" and thus to deepen the detection of infectious agents in latent forms in a large number of pathologies in particular, in the presence of treatments which will lead to their selection, Typically, in the case of monitoring the treatment of an HIV patient, especially treated with triple therapy, these methods are ineffective to know precisely the state of seropositivity.
  • the present invention aims at the development of a new technology capable of detecting and characterizing, not molecules, but microorganisms and / or their infectious traces by the emission of low frequency electromagnetic signals (SEM). in vitro cultures, in biological fluids, from humans, animals or plants, as well as in food, cosmetic or hygiene products produced by industry.
  • SEM low frequency electromagnetic signals
  • the invention relates to a method of characterizing a biochemical element having a biological activity, being in a biological medium, said method comprising the following steps: a. pre-dilute a sample of biological media to obtain a diluted medium; b. Filter the diluted medium at least once to obtain a filtered medium; vs. dilute the filtered medium to obtain a dilute solution; d. homogenizing said diluted solution by strong stirring, acquiring the low frequency electromagnetic signals emitted by said diluted and homogenized solution, f. recording said signals on a suitable computer medium; boy Wut. analyze said signals. h. Decompose said signals into elementary signals (single frequency) i. Comparing said elementary signals with a library of elementary reference signals already recorded
  • biochemical element exhibiting a biological activity is intended to mean any form capable of manifesting, in a given medium (generally in water or an aqueous solution), the characteristic biological properties of a molecule or a source cell or microorganism, in the absence of the latter or of the latter.
  • the sample is filtered through a filter having a porosity of less than 100 nanometers, and in particular a porosity of between 20 nanometers and 100 nanometers.
  • the dilution step c) consists of a dilution of between 10 -2 and 10-20 and in particular of between 10 -2 and 10-9 ,
  • the method comprises a centrifugation step after the strong stirring step d).
  • an excitation of the solution is carried out by a soft noise or, preferably, a signal of a determined frequency and amplitude, during the acquisition of the electromagnetic signals.
  • the method according to the invention makes it possible to record the signature characterizing a given biochemical element, and to compare it with the previously recorded signatures of known biochemical elements.
  • the invention relates to the use of the method according to the invention to obtain an indicator of biological inhibition on a given biochemical element, after application to said element of a conventional therapeutic treatment, such as an antibiotic treatment, or a specific electromagnetic inhibition signal.
  • a conventional therapeutic treatment such as an antibiotic treatment, or a specific electromagnetic inhibition signal.
  • FIG. 1 shows schematically the preparatory protocol of a sample
  • FIG. 2 represents a schematic view of the signal acquisition equipment
  • FIGS. 3 and 4 represent views of the electrical signals generated by the solenoid in the presence of an emitting source (M. Pirum) after filtration of 0.02 micrometer and 0.1 micrometer, respectively;
  • M. Pirum emitting source
  • FIG. 5 represents a three-dimensional histogram of the distribution of the wavelengths detected by the solenoid in the absence of a source transmitter (background noise);
  • FIG. 6 represents a three-dimensional histogram of the wavelength distribution detected by the solenoid in the presence of an emitting source (HIV) after 0.02 micrometer filtration
  • FIG. 7 represents the Fourier analysis of the background noise (unfiltered power supply harmonics) of FIG. 5;
  • FIG. 8 represents the Fourier analysis of the signal generated by the selenoid in the presence of an emitter source (HIV) of FIG. 6;
  • FIG. 9 represents the Fourier analysis extracted logarithmically from the Fourier decomposition in very low frequency mode of an emitting source (HIV)
  • FIG. 10 represents, in tabular form, the main frequencies and their respective amplitudes emitted by the filtered medium of a pathogenic organism (HIV);
  • FIG. 11 represents the comparative amplitudes of the different dilutions of the same medium; having been filtered from a noticeably pathogenic organism such as the HIV virus,
  • FIG. 12 shows the comparative histogram of the sum of the amplitudes of all frequencies within a given dilution of a filtered medium of HIV, of the undiluted dilution denoted n, dilution October 15
  • FIG. 13 represents a decomposition of this same signal, under a logarithmic scale, and in particular over the very low frequency range.
  • FIG. 14 represents a spectral decomposition of a synthetically generated mono-frequency file (28 Hz).
  • FIGS. 15 to 17 represent, in the form of a block diagram, the cascade of successive filtering and reading operations of the electromagnetic activity of the different solutions of the same filtered medium of a pathogenic microorganism, in order to identify its family of origin, and its approximate size.
  • FIG. 18 represents the comparative histogram of the hemolysis of red blood cells subjected to the different solutions of the same filtered medium of pathogenic microorganisms.
  • the biological medium within the meaning of the invention comprises the in vitro culture medium of microorganisms (mycoplasmas, bacteria such as Escherichia coli, viruses such as HIV, influenza virus, avian influenza, as well as microorganisms suspected to the origin of rheumatoid arthritis, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, multiple sclerosis) or, for samples taken in vivo: heparin plasma; urine; sperm; saliva ; tear fluid; placental fluid, or any other aqueous medium of natural origin (water, body fluid, milk products), or of industrial origin (cosmetics, paints).
  • the biochemical elements exhibiting biological activity are kept in filtered culture media to remove any living organism (0.45 ⁇ m filters, then 0.1 ⁇ m or 0.02 ⁇ m for the bacteria, respectively 0.45 ⁇ m and 0.02 ⁇ m). for viruses).
  • Electromagnetic signals are recorded on a computer and give rise to various forms of representations:
  • the biological medium for example a piasma originating from human blood
  • a physiological liquid RPMI 16/40 medium or physiological medium
  • a filter for example a 0.45 ⁇ m filter to eliminate all conventional sized bacteria.
  • the filtrate is filtered again, on 0.1 ⁇ m filters, or by filters of 0.02 ⁇ m (20 nm).
  • the resulting filtrate is then diluted (step c) from 10 to 10, for example 0.1 ml filtrate + 0.9 ml of the medium already used for the first dilution to one hundredth, for example in sterile and closable 1.5 ml plastic tubes. by a plug.
  • the tube of the preceding dilution is homogenized (step d) for at least 15 seconds in a Vortex type apparatus at maximum power.
  • each tube containing a dilution is deposited on the sensitive reading cell from 0 to 20000 hertz, placed on a table in a non-conductive material.
  • Each sample is read for 6 seconds, (step e) twice in succession, each reading being seized separately to allow a duplication of the results, (see Figure 4).
  • an activation signal composed of a known frequency and amplitude. This frequency or its derivatives will be filtered at the time of reading.
  • the electrical signals produced by the reading cell, and from the electromagnetic waves that have passed through the tube, are recorded (step 0 on a computer using an audio card, compressed and amplified 500 times, before being recorded and measured on the next computer.
  • This software is capable of recording and representing in different graphic forms, a global compression of the signals (Figure 4) that can show a difference in amplitude compared to an ambient background noise ( Figure 3). This amplitude difference up to a ratio of two to three with respect to background noise.
  • the main frequencies composing the signal are then classified, in three dimensions, with display in arbitrary shades of gray according to the frequency ranges (Figure 5). Finally, by a Fourier decomposition, to highlight (es main frequency signal components ( Figures 7 and 8).
  • the digital information from IA Fourier transform are stored in a database, and give rise to the production of tables in absolute mode In order to reduce the background noise and increase the specificity of the signals, it is recommended to carry out the measurements, in a room which is not too disturbed by radio signals, for example from telephones laptops,
  • electromagnetic activity sensors (1) facing each of the sedimentation strata in the tube that is to be recorded. These different sensors will be selected by the switch (4) depending on the layer of biological fluid that we want to record after centrifugation,
  • a remote sensor (5) of the medium to be recorded will be added to the device, so that the final signal which will be recorded on the mediums
  • the recording of the computer (3) will consist of the difference between the signal acquired on one of the sensors of (1) and the ambient noise sensed (5).
  • the different toroidal sensors are successively connected by the electromagnetic signal capture software, from the smallest (undiluted) to the highest declared dilution, preferably 1 (X 13 , as well as the undiluted control and unfiltered tubes.
  • the acquisition sensor or sensors as described above, and a remote signal processing unit, connected to the sensor by electronic transmission means.
  • LAN local area network
  • GPRS global positioning system
  • GSM Data Global System for Mobile communications
  • UMTS Universal Mobile communications
  • the acquisition sensor may be directly carried by the living organism (person, animal, plant), for example in the form of a bracelet, a collar, a belt or a patch on or under the These examples are not limiting.
  • This sensor will record, by local electromagnetic induction, through the tissues of the body, the radiation emitted by blood, urine, or any other physiological fluid, opposite one of its natural containers (vein, artery urinary pouch, placental pocket) from which he has been placed.
  • a micro-controller powered by a battery or battery
  • an electromagnetic acquisition sensor for example a bluetooth or wifi module
  • a communication device for example a bluetooth or wifi module, which will use, after acquisition and recording, the bluetooth-compatible cellular phone. of the patient, for transmitting, via the cellular mobile telephone network, the raw electromagnetic signal to a remote processing center.
  • diagnosis or the possible messages of correction or treatment could also use this local module, to be displayed or to apply for information purposes of the patient and / or his therapist, of administration to neutralization or correction of the original medium.
  • This local module to be displayed or to apply for information purposes of the patient and / or his therapist, of administration to neutralization or correction of the original medium.
  • LAI strain IHB
  • a culture of M, pirum in CEM cells is prepared in a 1640 culture medium + 10% fetal calf serum. Cells in good condition, show the presence of typical aggregates related to the presence of M. pirum,
  • the suspension is centrifuged at low speed to remove the cells.
  • the supernatant is filtered through a 0.45 ⁇ Millipore PEVD filter, and the filtrate is then filtered again on Whatman 0.02 ⁇ filter or Millipore 0.1 ⁇ filter.
  • FIG. 2 represents a schematic view.
  • the equipment comprises a reading cell (1) sensitive from 0 to 20000 hertz, placed on a wooden table.
  • the solutions to be read are distributed in plastic tubes (2) Eppendorf (trade name) of 1.5 ml.
  • the volume of liquid is in general of ImI, in some cases from 0.3 to 0.5 ml, without a difference in response is noted.
  • Each sample is for 6 seconds, twice in succession, each reading being entered separately.
  • the origin of the signals is selected according to the switch (4). Indeed, at each sedimentation stratum, there corresponds a reading cell composed of a enamelled copper wire of length and of similar diameter.
  • the electromagnetic signals are transformed into electrical signals before being amplified by means of an audio card (6) located in the computer (3).
  • the ambient electromagnetic noise is picked up by a cell (5) remote from the tube containing the source to be recorded (2).
  • Suitable software located in the computer (3) performs the necessary filtering processes (for example subtraction of the ambient noise obtained on (5) and deduced from the signal recorded on (1), give a visual representation of the recordings thus obtained:
  • Centrifugation is carried out for 2 hours at 35,000 rpm at + 4 ° C. The first 0.02 ⁇ filtrate stored at + 4 ° C. is kept overnight. It is verified that it is still positive just before centrifugation.
  • Fractions 2 is then bundles 2. They are diluted to 10 "7 in RPMI medium + 16/40 calf serum concentration of 10%.
  • the source of the electromagnetic signals behaves like a large polymer (but ⁇ 0.02 ⁇ ) and density between 1.16 and 1.26.
  • This experiment concerns a culture of HIV1 / HIB infected CEM cells, prepared in two culture times: - 4 days: beginning of the cyto-pathogenic effect (CPE)
  • CPE ++ effect Eue is compared with a control culture of uninfected CEM.
  • the operating protocol comprises the following steps:
  • the supernatant of the 0.02 micron filtered positive culture is centrifuged at the 20-70% sucrose gradient density equilibrium at 35000 rpm in BECKMANN (trade name) rotor SW56 at 4 ° C.
  • a control supernatant of uninfected CEM cells is treated in the same way.
  • the basic fraction groups of the tube (density 1.25 to 1.28) give positive signals at only a few dilutions.
  • the size of the bacteria is very clearly greater than 500 nm, and is on average around 1000 nm, ie 1 ⁇ m. This is particularly the case of the bacterium Coii.
  • the size of the mycoplasma is about 300 nm on average. end, the viruses, have a size less than 200 nm, located on average around 100 nm. HIV for example has a size of 120 nm,
  • the organisms whose size is greater than 500 nm, will be naturally filtered, which will not be the case of microorganisms such as mycoplasma and viruses that will remain in the environment.
  • the characteristic signal does not appear, it is assured that it is a microorganism whose size is certainly smaller than the diameter of the pores of the filter used.
  • This ability to select the family of microorganisms at the origin of the presence of the signal allows in particular to choose the type of treatment to be applied to the patient to suppress the infection, for example, we can apply antibiotic treatments in the case of a bacterial origin, which has no interest or effect in the case of a viral origin.
  • several samples of the filtered and diluted medium may be applied to various antibiotic treatments in order to select the most effective treatment or treatments for a given patient.
  • Polynuclear neutrophils represent the first defense barrier of the body against bacteria that are phagocytosed and killed (1).
  • Activation of PMN can be initiated by different stimuli such as bacteria, TNF ⁇ (tumor necrosis factor ⁇ ) and chemotactic peptides: fMLP (N-Formyl-methionyHeucyl ⁇ phenylalanine) and PMA (4-phorbol-12- ⁇ -Myristate-13-acetate).
  • TNF ⁇ tumor necrosis factor ⁇
  • fMLP N-Formyl-methionyHeucyl ⁇ phenylalanine
  • PMA 4-phorbol-12- ⁇ -Myristate-13-acetate
  • the active frequencies of the PMN can be recorded over the course of the experiments, so that when it is exposed to the electromagnetic signal of a new product, or a diluted and filtered solution of a microorganism, will react similarly when one or more of its "active frequencies" or close to these reference active frequencies, will appear in the spectral decomposition of the signal.
  • these active frequencies have no harmonics in the spectrum. This means that a frequency that has harmonics can not be an active frequency of natural origin, and therefore very likely results from local electromagnetic interference, as is often the case in urban areas heavily parasitized by electromagnetic radiation. ambient.
  • FIGS. 3,4,5,6,7,8,9,10 and 11 show how the frequencies related to the electromagnetic radiation of the electrical current of the sector appear, as well as the associated harmonic lines.
  • a few harmonics, of rank 2, 3, 4 for example the activation effect of the PMN is not increased accordingly. It is even rather diminished.
  • the potential effect of the signals is compared to a negative control (Buffer) and a positive control (a weight dose of the product inducing neutrophil activation).
  • the activation of PMN is evaluated in vitro by measuring their adhesion and by measuring the expression of activation markers,
  • the experiments are made in triplicate. 18 measurements (of which control) are carried out on the neutrophile for each series. That is 54 measuring points per series. There are therefore 162 measuring points for the dilutions, and 162 measuring points for the electromagnetic signals of these solutions, ie a total of 324 measuring points.
  • an index referred to as a concordance index, is incremented from 1 to 50.
  • This is therefore constituted by the number of frequencies common to the microorganism at the origin of the dilution and to each microorganism decomposed in the reference base. The higher its index, the more the PMN is likely to be activated. by applying the electromagnetic signatures of a diluted medium and filtered, until saturation.
  • the human basophile is a key cell for the study of immediate hypersensitivity reactions since it releases a variety of mediators (such as histamine, leukotriene C4, interleukin IL-4 and IL-13) following activation by allergens.
  • mediators such as histamine, leukotriene C4, interleukin IL-4 and IL-13
  • the activation of basophils is evaluated in vitro by measuring the expression of activation markers using flow cytometry.
  • basophtles can be triggered by anti-immunoglobulin E (anti-IgE), fMLP and interleukin-3 (IL-3).
  • anti-IgE anti-immunoglobulin E
  • fMLP fMLP
  • IL-3 interleukin-3
  • the potential effect of the signals is compared to a negative control (buffer) and a positive control (dose of the product inducing neutrophil activation).
  • the activation of basophils is evaluated in vitro by measuring the expression of activation markers
  • the decomposition of the electromagnetic signals from the different filtered solutions of the medium is compared with the frequencies identified as "active" in basophils.
  • Experiment 8 implements a complementary test to measure the direct impact of filtered and diluted solutions of a significantly pathogenic organism, such as Escherichia CoIi, on the free radical defense potential of a living organism.
  • KRL Free Radical Kit, Spiral patent
  • KRL Free Radical Kit, Spiral patent
  • Michel PROST its inventor
  • FR2861463 Method for determining the potential of anti-free radical defense and use including preventive human and veterinary therapeutic.
  • This test is also perfectly suited to the dynamic determination of pro or antioxidant properties of many compounds such as drugs, foods, products of the industry.
  • Microorganisms of different types such as retroviruses (HIV), bacteria without rigid walls close to Gram + (M.pirum), bacteria with rigid walls Gram - (E. coli) produce persistent nanostructures in solutions aqueous.
  • HIV retroviruses
  • M.pirum bacteria without rigid walls close to Gram +
  • E. coli bacteria with rigid walls Gram -
  • these nanostructures After the indispensable filtration step, which will eliminate the physical particles of micro-organisms, these nanostructures (smaller than 100 nanometers) emit complex electromagnetic signals of low frequencies that can be recorded and digitized. The same results can be obtained from the plasma of subjects infected with these microorganisms.
  • nanostructures differ from the microorganisms that generated them by their broad density spectrum, and their susceptibility to freezing.
  • the signals they emit can be neutralized by auto-interference with signals previously recorded and inverted in phase, or by allo-interference with signals from other microorganisms.
  • the present invention can usefully be used for the detection of these new pathogenic forms in the natural media, as well as for their elimination, by a suitable prophylactic treatment, such as an antibiotic in the case of the identification of a bacterial origin. It therefore seems that this particularly high electromagnetic activity and broad spectrum on certain high dilution ranges of the filtered medium constitutes:
  • a pathogenic risk warning device in aqueous media when used in food, cosmetic or industrial substances.

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Abstract

Procédé de caractérisation d'un élément biochimique présentant une activité biologique, se trouvant dans un milieu biologique, ledit procédé comportant les étapes suivantes; a. prédiluer le milieu biologique pour obtenir un milieu dilué; b. filtrer au moins une fois le milieu dilué pour obtenir un milieu filtré; c. diluer le milieu filtré pour obtenir une solution diluée d. homogénéiser ladite solution diluée par agitation forte ; e. acquérir les signaux électromagnétiques de basse fréquence émis par ladite solution diluée et homogénéisée ; f. enregistrer lesdits signaux sur un support informatique approprié ; g. analyser lesdits signaux.

Description

PROCEDE DE CARACTE RÏS ATIO N D'UN ELEMENT BIOCHIMIQUE PRESENTANT UNE ACTIVITE BIOLOGIQUE, NOTAMMENT PATHOGENE, PAR ANALYSE DES SIGNAUX ELECTROMAGNETIQUES DE BASSES FREQUENCES
La présente invention concerne le domaine de ia caractérisation de matériel biochimique, par l'analyse des signaux électromagnétiques générés après forte dilution et filtrage d'un milieu ainsi que les traitements thérapeutiques associés, visant la modification substantielle ou la destruction de ces matériels biochimiques. Etat de l'art ;
Les techniques actuelles de détection de virus et de bactéries reposant sur le principe de détection de la reconnaissance d'antigènes par des anticorps sont bien connues (biiles de latex, kit elisa).
Plus récemment, les méthodes dites de PCR (polymérase chain reaction) permettent d'identifier de manière extrêmement sensible, l'ADN ou TARN de germes, par la duplication à grande échelle de certaines de leurs séquences d'ADN caractéristiques.
Par contre ces deux méthodes s'avèrent impuissantes à la détection des formes nouvelles d'infection, notamment celles portées par les mycoplasmes telles que décrites notamment dans le brevet WO O2/089744. Ces formes inédites d'infectivité ont fait par ailleurs l'objet de publications Montagnier L, Berneman D, Guetard D et al. "Inhibition de f'infectiosité de souches prototypes du VÏH par des anticorps dirigés contre une séquence peptidique de mycoplasme. "Comptes Rendus de L'Académie des Sciences 1990; 311(111) : 425-430; Balter M."Montagnier pursues the Mycopiasma-AIDS link." Research News. Science 1991 ; 251-271.
Par ailleurs, il est connu d'après les travaux du Professeur Jacques BENVENISTE d'enregistrer et de numériser avec une carte-son d'ordinateur l'activité spécifique d'une molécule à activité biologique. Les molécules analysées dans l'art antérieur sont une substance naturelle (histamine, caféine, nicotine, adrénaline...) ou des médicaments.
On a proposé dans l'art antérieur de capter ce signal, et de le transmettre sous une forme analogique ou de préférence numérique. Dans le cadre de ces travaux, le brevet européen EP0701695 décrit un procédé et un dispositif de transmission sous forme d'un signal caractéristique de ia manifestation de l'activité biologique ou du comportement biologique spécifique à une substance déterminée, II décrit également un traitement d'un tel signal, à partir d'une première matière porteuse présentant ladite activité biologique à une deuxième matière physiquement séparée de la première matière et initialement exempte de toute présence physique de ladite substance déterminée, et d'une matière obtenue par un tel procédé. Ce procédé de l'art antérieur comporte l'amplification du signal électrique ou électromagnétique émis par la première substance, et capté par un capteur, et la transmission à un émetteur, d'un signal caractéristique de la manifestation de l'activité biologique ou du comportement biologique présentée par la première matière, puis la détection dans la seconde matière d'un signal caractéristique de la manifestation de l'activité biologique spécifique à ladite substance déterminée et transmis à cette deuxième matière par l'intermédiaire des moyens d!amplification à haut gain.
On connaît également le brevet français FR2811591 décrivant un procédé pour produire des signaux, notamment des signaux électriques, caractéristiques de l'activité biologique et/ou chimique d'une substance étudiée, pour traiter une substance réceptrice ne présentant initialement aucune activité biologique particulière, notamment de l'eau, de telle sorte qu'elle présente après traitement une activité biologique. La substance réceptrice après traitement est appelée ci-après la "Substance Traitée" (ou encore Matière Informée), Quand la substance réceptrice est de l'eau, Ia Substance Traitée est appelée de T'Eau Traitée" (ou encore de l'Eau Informée). La substance ayant une activité biologique peut également se présenter sous la forme de préparation ou de granules homéopathiques.
La demande de brevet internationale WO0001412 décrit un procédé pour activer une solution inactive et à très faible concentration d'une substance déterminée biologique et/ou chimique dans un solvant, consistant à placer ladite solution dans un champ d'excitation mécanique et à soumettre ladite solution à une agitation pour créer ledit champ d'excitation mécanique. La concentration de ladite substance déterminée dans ladite solution est inférieure à 10"6 moles par litre.
Le but de la présente invention est d'apporter des améliorations notables à cette technique afin d'en étendre le champ d'application et les performances, notamment dans la détection d'activité spécifiquement pathogènes.
La présente invention permet de détecter ces formes, que l'on baptisera dans la suite de ce document « nanoformes » et ainsi d'approfondir la détection d'agents infectieux sous des formes latentes dans un grand nombre de pathologies notamment, en présence de traitements qui vont conduire à leur sélection, Typiquement, dans le cas du suivi du traitement d'un patient HIV, notamment traité sous trithérapie, ces méthodes sont inopérantes pour connaître précisément l'état de séropositivité.
Cette carence constitue une perte substantielle de fiabilité dans les tests de détection de virus ou de leur activité virale associée, notamment, et par exemple, dans les processus de collecte du sang pour les instances hospitalières.
En outre, tout laisse penser que ces formes infectieuses pourraient parfaitement s'avérer être à l'origine ou la cause des maladies dites nosocomiales.
La présente invention a pour objectif la mise au point d'une technologie nouvelle capable de détecter et caractériser, non pas des molécules, mais des micro- organismes et/ou leurs traces infectieuses par l'émission de signaux électromagnétiques de basse fréquence (SEM), aussi bien dans des cultures in vitro, dans des fluides biologiques, provenant de l'homme, d'animaux ou de plantes, que dans des produits d'alimentation, de cosmétiques, ou d'hygiène nés de l'industrie.
Ces technologies s'appliquent notamment à la détection de germes infectieux impliqués dans des maladies chroniques, aussi bien qu'au suivi thérapeutique de patients dont le traitement aboutit à la sélection et au maintien de ces germes.
La présente invention permet ainsi de détecter et de caractériser des agents infectieux présents sous des formes latentes dans un grand nombre de pathologies
(SiDA, grippe, grippe aviaire, polyarthrite rhumatoïde, maladie de parkinson, maladie d'Alzheirner, sclérose en plaques et dans quelques cas de cancer, probablement d'origine virale), y compris en présence de traitements qui vont conduire à la sélection de ces formes,
Seton un premier aspect, l'invention concerne un procédé de caractérisation d'un élément biochimique présentant une activité biologique, se trouvant dans un milieu biologique, ledit procédé comportant les étapes suivantes: a. pré diluer un échantillon de milieu biologique pour obtenir un milieu dilué; b. Filtrer au moins une fois le milieu dilué pour obtenir un milieu filtré; c. diluer le milieu filtré pour obtenir une solution diluée ; d. homogénéiser ladite solution diluée par agitation forte e, acquérir les signaux électromagnétiques de basse fréquence émis par ladite solution diluée et homogénéisée, f. enregistrer lesdits signaux sur un support informatique approprié ; g. analyser lesdits signaux. h. Décomposer lesdits signaux en signaux élémentaires (mono fréquence) i. Comparer les dits signaux élémentaires à une bibliothèque de signaux élémentaires de référence déjà enregistrés
On entend, dans le cadre de la présente invention, par l'expression « élément biochimique présentant une activité biologique » toute forme apte à manifester, dans un milieu donné (en général dans l'eau ou une solution aqueuse), les propriétés biologiques caractéristiques d'une molécule ou d'une cellule ou d'un microorganisme source, en l'absence de cette dernière ou de ce dernier.
L'échantillon est filtré à travers un filtre présentant une porosité inférieure à 100 nanomètres, et en particulier une porosité comprise entre 20 nanomètres et 100 nanomètres. Avantageusement, l'étape c) de dilution consiste en une dilution comprise entre 10"2 et 10"20 et en particulier comprise entre 10"2 et 10'9,
Selon un mode de réalisation préféré, le procédé comporte une étape de centrifugation après l'étape d'agitation forte d). On procède seton un mode de réalisation préféré à une excitation de la solution par un bruit bianc ou préférentiellement, un signai de fréquence et d'amplitude déterminée, pendant l'acquisition des signaux électromagnétiques.
Le procédé selon l'invention permet d'enregistrer la signature caractérisant un élément biochimique donné, et à la comparer avec les signatures préalablement enregistrées d'éléments biochimiques connus.
Selon un deuxième aspect, l'invention concerne l'utilisation du procédé selon l'invention pour obtenir un indicateur d'inhibition biologique sur un élément biochimique donné, après application audit élément d'un traitement thérapeutique classique, comme par exemple un traitement antibiotique, ou d'un signai d'inhibition électromagnétique spécifique.
Elle concerne encore un équipement pour ia mise en œuvre du procédé selon l'invention, comportant un ou plusieurs capteurs pour l'acquisition des signaux électromagnétiques émis par une solution obtenue à l'étape d) du procédé, un circuit de traitement desdits signaux pour le calcul d'une signature d'un élément biochimique analysé et un circuit de comparaison de fa signature ainsi calculée avec des signatures mono fréquence enregistrées préalablement et figurant dans une base de données.
L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée qui suit et des dessins annexés correspondant à des exemples non limitatifs de réalisation, dans lesquels :
- la figure 1 représente schématiquement le protocole préparatoire d'un échantillon ;
- la figure 2 représente une vue schématique de l'équipement d'acquisition des signaux ;
- les figures 3 et 4 représentent des vues des signaux électriques générés par le solénoïde en présence d'une source émettrice (M. Pirum) après filtration respectivement de 0,02 micromètre et de 0,1 micromètre ;
- la figure 5 représente un histogramme en trois dimensions de la distribution des longueurs d'onde détectées par le solénoïde en l'absence de source émettrice (bruit de fond) ;
- la figure 6 représente un histogramme en trois dimensions de la distribution des longueurs d'onde détectées par le solénoïde en présence d'une source émettrice (HIV) après fîltratîon de 0,02 micromètre ; - Ia figure 7 représente l'analyse de Fourier du bruit de fond (les harmoniques du courant électrique d'alimentation non filtrées) de la figure 5 ;
- la figure 8 représente l'analyse de Fourier du signal généré par le soiénoïde en présence d'une source émettrice (HIV) de la figure 6 ;
- la figure 9 représente l'analyse de Fourier extrait en mode logarithmique de la décomposition de fourrier en mode très basse fréquences d'une source émettrice (HIV)
- la figure 10 représente, sous forme de tableau, les principales fréquences et de leurs amplitudes respectives émises par le milieu filtré d'un organisme pathogène (HIV), - la figure 11 représente, les amplitudes comparées des différentes dilutions d'un même milieu ayant été filtré d'un organisme notablement pathogène comme le virus HIV,
- La figure 12 représente l'histogramme comparatif de la somme des amplitudes de toutes les fréquences comprises dans une dilution donnée d'un milieu filtré du HIV, de la dilution non diluée notée ND, à la dilution 10 15
- La figure 13 représente une décomposition de ce même signal, sous une échelle logarithmique, et notamment sur la plage des très basses fréquences. - La figure 14 représente une décomposition spectrale d'un fichier mono fréquentiel (28 Hz) généré synthétiquement.
- Les figures 15 à 17 représentent sous forme de synoptique, la cascade d'opérations successives de filtrage et de lecture de l'activité électromagnétique des différentes solutions d'un même milieu filtré d'un micro organisme pathogène, afin d'identifier sa famille d'origine, et sa taille approximative.
- La figure 18 représente l'histogramme comparatif de l'hémolyse de globules rouges soumis aux différentes solutions d'un même milieu filtré de micro organismes pathogènes. Dans ce qui suit, on conviendra que :
- le milieu biologique au sens de l'invention comprend le milieu de culture in vitro des mîcroorganismes (mycoplasmes, bactéries telles que Escherichia coîï, virus tel que HIV, virus de la grippe, de la grippe aviaire, ainsi que les micro organismes présumés à l'origine de la polyarthrite rhumatoïde, de la maladie d'Alzheimer, de la maladie de Parkinson, de la Sclérose en plaques) ou, pour les prélèvements effectués in vivo : le plasma prélevé sur héparine ; l'urine ; le sperme ; la salive ; le liquide lacrymal ; le liquide placentaire, ou tout autre milieu aqueux d'origine naturelle (eaux, liquide physiologique, produits lactés), ou d'origine industrielle (cosmétiques, peintures). - les éléments biochimiques présentant une activité biologique sont gardés dans des milieux de culture filtrés pour enlever tout organisme vivant (filtres de 0,45μm, puis 0,lμm ou 0,02μm pour les bactéries, respectivement de 0,45μm, puis 0,02μm pour les virus).
Les signaux électromagnétiques sont enregistrés sur ordinateur et donnent lieu à diverses formes de représentations :
- globaux, en amplitude sur 6 secondes ;
- positifs (+), s'ils comprennent au moins deux fois le bruit de fond ;
- en analyse de Fourier (histogramme en 2D) ;
- en analyse de Fourier (histogramme en 3D), - en tableau, avec (es fréquences triées par ordre inverse d'importance de leur amplitude, selon avec une décomposition par pas de 1 Hz, 0,1 Hz ou 0,01 Hz plus.
- en tableau, avec les fréquences triées par ordre inverse de différence d'amplitude avec les autres dilutions du même milieu, Le principe de la méthode est fe suivant : le milieu biologique (par exemple un piasma provenant du sang humain) est d'abord prédilué au centième dans un liquide physiologique (milieu RPMI 16/40 ou milieu physiologique), il est ensuite filtré (étape b) par un filtre, par exemple un filtre de 0,45 μm pour éliminer toutes bactéries de taille classique.
Le filtrat est filtré à nouveau, sur des filtres de 0,1 μm, ou par des filtres de 0,02 μm (20nm). Le filtrat résultant est ensuite diiué (étape c) de 10 en 10, par exemple 0,1 ml filtrat + 0,9 ml du milieu déjà utilisé pour la première dϋution au centième, par exemple dans tubes plastique de 1,5ml stériles et obturables par un bouchon. Entre chaque dilution, le tube de la dilution précédente est homogénéisé (étape d) pendant minimum 15 secondes dans un appareil de type Vortex, à la puissance maximum.
Toutes ces opérations sont effectuées dans une hotte à flux laminaire de classe 100, l'opérateur portant vêtements et gants stériles pour éviter toute contamination extérieure.
Puis chaque tube contenant une dilution, est déposé sur la cellule de lecture sensible de 0 à 20000 hertz, placée sur une table en un matériau non conducteur. Chaque échantillon est lu pendant 6 secondes, (étape e) deux fois de suite, chaque lecture étant saisie séparément afin de permettre une duplication des résultats, (cf figure 4). Afin de rendre le plus lisible possible !e signai caractéristique émis par l'échantillon, on peut avantageusement émettre un signal d'activation, composé d'une fréquence et d'une amplitude connues. Cette fréquence ou ses dérivés sera filtrée au moment de la lecture.
Les signaux électriques produits par la cellule de lecture, et issus des ondes électromagnétiques qui ont traversé le tube, sont enregistrés (étape 0 sur ordinateur grâce à une carte audio, compressés puis amplifiés 500 fois, avant d'être enregistrés et mesurés sur ordinateur suivant un logiciel original spécifiquement adapté. Ce logiciel est capable d'enregistrer et de représenter sous différentes formes graphiques, une compression globale des signaux (Figure 4) pouvant montrer une différence d'amplitude par rapport à un bruit de fond ambiant (Figure 3). Cette différence d'amplitude pouvant atteindre un rapport de deux ou trois par rapport au bruit de fond.
Les principales fréquences composant le signal sont ensuite classées, en trois dimensions, avec affichage en nuances de gris arbitraires en fonction des plages de fréquences (Figure 5). Enfin, par une décomposition de Fourier, permettant de mettre en évidence (es principales fréquences composantes du signal (Figures 7 et 8). Les informations numériques issues de îa transformation de fourrier sont stockées dans une base de données, et donnent lieu à la production de tableaux en mode absolu Afin de diminuer le bruit de fond et d'augmenter la spécificité des signaux, il est recommandé d'effectuer les mesures, dans un local qui ne soit pas trop perturbé par des signaux radio électriques, par exemple provenant de téléphones portables,
Dans une variante avantageuse de iinvention décrite en figure 2, on disposera de capteurs d'activité électromagnétique (1) en regard de chacune des strates de sédimentation dans le tube que l'on veut enregistrer. Ces différents capteurs seront sélectionnés par le commutateur (4) en fonction de la couche de liquide biologique que l'on voudra enregistrer après centrifugation,
De même, dans une variante avantageuse de l'invention, afin de filtrer plus facilement le bruit électromagnétique ambiant, on ajoutera au dispositif un capteur distant (5) du milieu à enregistrer, de sorte que le signal final qui sera enregistré sur les supports d'enregistrement de l'ordinateur (3) sera constitué de la différence entre le signal acquis sur l'un des capteurs de (1) et le bruit ambiant capté (5).
Dans une autre variante avantageuse de l'invention, on pourra disposer de seize capteurs toriques, placés sur un support spécifique en regard des seize tubes contenant les dilutions successives du même milieu filtré. Ceci afin de faciliter la préparation par un automate industriel de ces seize tubes et d'éviter toute erreur de manipulation par l'opérateur. Les différents capteurs toriques étant connectés successivement par le logiciel de capture du signal électromagnétique, de la plus petite (non diluée) à la plus haute dilution déclarée, avantageusement 1(X13, ainsi que les tubes contrôle et non filtré non dilué. Dans une autre variante avantageuse de l'invention, on pourra disposer sur place du ou des capteurs d'acquisition, tels que décrits ci-dessus, et d'une unité de traitement distante des signaux, reliée au capteur par des moyens de transmission électronique filaires tels que réseau informatique (LAN, Internet) ou hertziens, notamment ceux du réseau de téléphonie cellulaire (GPRS, GSM Data, UMTS) ou informatique (bluetooth, WI-FI, WIMAX).
Dans une autre variante avantageuse de l'invention, le capteur d'acquisition pourra être directement porté par l'organisme vivant (personne, animal, plante) par exemple sous forme de bracelet, de collier, de ceinture, de patch sur ou sous la peau, ces exemples n'étant pas limitatifs.
Ce capteur, enregistrera, par induction électromagnétique locale, à travers les tissus de l'organisme, les rayonnements émis par le sang, i'urine, ou tout autre liquide physiologique, en regard de l'un de ses contenants naturels (veine, artère, poche urinaïre, poche placentaire) duquel il aura été placé. On pourra par exemple coupler à un micro contrôleur, alimenté par pile ou batterie, un capteur électromagnétique d'acquisition, et un dispositif de communication, par exemple un module bluetooth ou wifi, qui utilisera, après acquisition et enregistrement, le téléphone cellulaire compatible bluetooth du patient, pour transmettre, via le réseau de téléphonie mobile cellulaire, le signal électromagnétique brut à un centre de traitement distant.
Dans une variante plus sophistiquée de l'invention, on pourra décomposer localement, grâce à la capacité de traitement de certains micro contrôleurs de type Digital Signal Processor - DSP, le signal brut recueilli du patient, procéder localement à une transformation de fourrier, et ne transmettre, au centre d'analyse distant, que les couples fréquences / amplitudes de la décomposition spectrale par ordre inverse d'amplitude (fi, ai). Ceci afin de ne transmettre qu'un volume d'information très réduit, (fréquence, amplitude, phase), limitée à quelques octets par fréquence principale, permettant un réponse plus rapide du centre, et un acheminement des informations sur des réseaux à faible débit tels que le GPRS ou même le SMS. I I
En retour, le diagnostic ou les messages éventuels de correction ou de traitement, pourront également utiliser ce module local, pour s'afficher ou s'appliquer à des fins d'information du patient et/ou de son thérapeute, d'administration à des fins de neutralisation ou de correction du milieu d'origine. La description est complétée par les essais de réalisation suivants, relatifs:
- au mycoplasme Mycoplasma pirum ;
- au virus du SIDA, souche IHB (LAI) ;
- à la bactérie Escherichia CoIi K12 ;
- au plasma d'un patient souffrant d'une maladie neurologique dont l'origine supposée, mais non prouvée, serait l'agent de Lyme, Borrelia Borgendorft,
- à faction des milieux dilués, et des signaux enregistrés en provenance de ceux-ci, sur des micro organismes responsables de l'activité immunitaire d'un organisme vivant, tels que neutrophiles et basophiles ainsi que les défenses radicalaires. Expérience 1 ; Application à une culture de M.ptrum en cellules CEM.
Une culture de M, pirum en cellules CEM est préparée dans un milieu de culture rpmi 1640+10% de sérum de veau foetal. Les cellules en bon état, montrent la présence d'agrégats typiques liés à la présence de M. pirum,
La suspension est centrifugée en basse vitesse pour éliminer les cellules. Le surnageant est filtré sur filtre Millipore PEVD 0,45μ, puis le filtrat est filtré à nouveau sur filtre Whatman 0,02μ ou Millipore 0,lμ,
On compare avec un surnageant de cellules CEM non infectées, filtré dans les mêmes conditions. Les solutions sont diluées de 10 en 10 en rpmi complet sous hotte à flux laminaire jusqu'à IQ"7. On traite au Vortex (puissance maximum) pendant 15 secondes chaque solution avant la dilution suivante.
La détection des signaux est réalisée avec un équipement dont la figure 2 représente une vue schématique. L'équipement comprend une cellule de lecture (1) sensible de 0 à 20000 hertz, placée sur une table en bois. Les solutions à lire sont distribuées dans des tubes en plastique (2) Eppendorf (nom commercial) de 1,5 ml. Le volume de liquide est en général de ImI, dans quelques cas de 0,3 à 0,5 ml, sans qu'une différence de réponse soit notée. Chaque échantillon est tu pendant 6 secondes, deux fois de suite, chaque lecture étant saisie séparément.
L'origine des signaux, correspondant aux différents niveaux de sédimentation dans le tube, est sélectionnée selon le commutateur (4), En effet, à chaque strate de sédimentation, correspond une cellule de lecture composée d'un fil en cuivre émaillé de longueur et de diamètre similaire. Les signaux électromagnétiques sont transformés en signaux électriques avant d'être amplifiés grâce à une carte audio (6) située dans l'ordinateur (3). Le bruit électromagnétique ambiant est capté par une cellule (5) éloignée du tube contenant la source à enregistrer (2), Des logiciels appropriés situés dans l'ordinateur (3) effectuent les traitements de filtrage nécessaires (par exemple soustraction du bruit ambiant obtenu sur (5) et déduit du signal enregistré sur (1), donnent une représentation visuelle des enregistrements ainsi obtenus :
- Une représentation globale brute en amplitude (figure 4). Un bruit de fond (-) (figure 3) est observé, transformé en moyenne. Un signal électromagnétique est détecté, défini alors comme (+), lorsque i'amplitude dépasse au moins 1,5 fois le bruit de fond. En général l'amplitude détectée est le double du bruit de fond (++), parfois le triple : il sera appelé signal électromagnétique ou signature électromagnétique (SEM). - Une analyse par histogramme en 3d (figure 6)
- Une décomposition en fréquences individuelles (fi,ai) par transformation de Fourier (figure 8).
Expérience 2 : Comportement de la source de SEM en centrifuαation à l'éαuïlibre de densité en gradient de saccharose 20-70% en PBS sans Ca++ ni Mq++.
On procède à une centrifugation pendant 2h à 35000 tours par minute à +4°C On part du premier filtrat 0.02μ conservé pendant une nuit à +4°C On vérifie qu'il est toujours positif juste avant la centrifugation.
Après cette centrifugation, on collecte 12 fractions à partir du fond du tube. La mesure des indices de réfraction permet de déterminer le gradient de densité.
On regroupe ensuite les fractions 2 à 2. On les dilue jusqu'à 10"7 en milieu RPMI 16/40 + sérum de veau à concentration de 10%.
Figure imgf000014_0001
La négativité des fractions les moins diluées peut s'expliquer par une auto-interférence des signaux émis par des sources trop nombreuses. On vérifie cette auto-inhibition en mélangeant 0,1 millilitre du non dilué à 0,4 ml de la dilution 10"4 : après vortex, on observe effectivement une extinction du signal qui devient négatif.
Pool 5-6 : Pool 7-8 densité 1,21-1,225 I densité 1,165- 1,194
Non dilué (-) Non dilue (-)
10"1 (-) 10 1 (-)
10"2 (-) lu"2 (-)
103 (-) 1er3 (-)
10"4 C-) 10 4 (-)
105 (++) ÎO"5 C++) ,
1(T6 (++) 10"6 (++) io-7 (+) 107 (++)
Figure imgf000015_0001
On constate que la source des signaux électromagnétiques se comporte comme un polymère de grande taille (mais <0,02μ) et de densité située entre 1,16 et 1,26.
Il existe par ailleurs un effet de zone qui n'avait pas été vu avec Ia préparation brute non centrifugée. Il y a auto interférence pour les dilutions jusqu'à 10"4 au pic d'activité (5-6 et 7-8).
Expérience 3 : Application à une culture de cellules CEM infectées VIHl /IHB
Cette expérience porte sur une culture de cellules CEM infectées par le VIH1/HIB, préparé en deux temps de culture : - 4 jours : début de l'effet cyto-pathogène (CPE)
- 6 jours : effet CPE ++ Eue est comparée avec une culture témoin de CEM non infectée. Le protocole opératoire comporte les étapes suivantes :
- filtration du surnageant à 0,45 micromètre
- puis fiitration à 0,02 micromètre - dilution du filtrat de 10 en 10 jusqu'à 10'7 en milieu RPMI + sérum de veau
- agitation forte au vortex 15 secondes à chaque étape de dilution.
Résultats : 1) avec la culture de 4 jours, on n'observe aucun signal au-dessus du bruit de fond. Il n'y a pas de différence avec le témoin CEM non infecté jusqu'à dilution 10~7
2 ) avec la culture infectée de 6 jours :
10"1 à 10"5 (-) 10"6 (++)
10"7 (++) 10"8 (++) io~9 iσ15 (-)
On refait une expérience d'auto interférence : 0,1 ml de la solution 10"1 (négative) + 0,4 ml de la solution 10"7
(positive) : cette dernière devient négative. Il y a donc bien auto interférence aux faibles dilutions.
3) Analyse en gradient de densité
Le surnageant de la culture positive filtré à 0,02 micromètre est centrifugé à l'équilibre de densité en gradient de saccharose 20-70% à 35000 tours par minute en rotor BECKMANN (nom commercial) SW56 à 4° C.
Un surnageant témoin de cellules CEM non infectées est traité de la même façon.
Après centrifugation, 13 fractions sont collectées et regroupées 2 à 2, Les indices de réfraction de certaines fractions sont déterminées avec un réfractomètre ABBE (nom commercial) pour déterminer le gradient de densité.
Les fractions de 400 mi sont diluées en milieu RPMI 16/40 pius sérum de veau. Des dilutions successives sont effectuées de 10 en 10 à partir de ces fractions, On constate que les groupes de densité 1,23 - 1,24 et densité 1,19-
1,21 sont très positifs jusqu'à la dilution 10"7. Le groupe de densité 1,15-1,16 donne des signaux positifs jusqu'à la dilution 10"7. Le groupe du haut du tube ne donne pas de signaux, quelle que soit la dilution,
Les groupes de fraction de base du tube (densité 1,25 à 1,28) donnent de signaux positifs à seulement quelques dilutions.
Contrairement à M. pirum, il y a auto-interférence pour le filtrat de départ et pas d'auto-interférence à partir des fractions du gradient.
La majorité des signaux dans ce cas se concentre, comme chez M. pirum, dans les fractions de densité de 1,19 à 1,26, avec cependant une épaule vers les fractions pius légères de 1,16.
Expérience 4 : Identification de la famille du micro organisme
On sait que la taille des bactéries est très nettement supérieure à 500 nm, et avoisine en moyenne plutôt 1000 nm, soit lμm. C'est le cas notamment, de la bactérie Coii. La taiile des mycoplasmes avoisine quant à elfe, 300 nm en moyenne. fin, les virus, ont une taille inférieure à 200 nm, située plutôt en moyenne autour de 100 nm. Le HIV par exemple a une taille de 120 nm,
Compte tenu de la taille notablement différente de ces micro-organismes en provenance des différentes familles, on se propose d'utiliser cette caractéristique physique, pour différentier l'origine de la famille du micro organisme responsable de la présence des signaux électromagnétiques dans le plasma.
On a vu plus haut, dans l'expériences précédente, que la seule présence du micro organisme dans le milieu « éteignait » le signal électromagnétique caractéristique dans la plage active (10"5 à 10"11) des hautes dilutions, A ces fins, on filtre en cascade une solution diluée du plasma d'un patient infecté dont on ne connait pas la famille d'appartenance, à travers un filtre de 500 nm et de 150 nm.
Les organismes dont la taille est supérieure à 500 nm, vont donc être naturellement filtrés, ce qui ne sera pas le cas de micro organismes tels que mycoplasmes et virus qui resteront dans le milieu.
En diluant donc ce milieu filtré à 500 nm jusqu'aux piages de dilutions potentiellement actives, typiquement de 10"5 à 10"11, on est alors en mesure de constater très vite, si le milieu porte ou non, le signal actif. Si tel est ie cas, c'est que le micro organisme responsable de ce signal, était bien d'une taille supérieure à 500 nm, soit très vraisemblablement une bactérie, ne pouvant assurément s'agir de mycoplasme ou de virus qui auraient, par leur seule présence, éteint le signal.
A l'inverse, si le signai caractéristique n'apparaît pas, c'est qu'assurément il s'agit d'un micro organisme dont la taille est assurément plus petite que le diamètre des pores du filtre utilisé. En déroulant les opérations de filtrage jusqu'à des niveaux très fins, on peut identifier la famille d'appartenance du micro-organisme responsable de la présence du signal.
Cette capacité de sélectionner la famille des micro-organismes à l'origine de la présence du signal, permet notamment de choisir Ie type de traitement à appliquer au patient pour supprimer l'infection, A titre d'exemple, on pourra appliquer des traitements antibiotiques dans le cas d'une origine bactérienne, ce qui n'a aucun intérêt ni effet dans le cas d'une origine virale. On pourra également appliquer en parallèle, afin d'accélérer le choix thérapeutique, sur plusieurs échantillons du milieu filtré et dilué, des traitements antibiotiques variés afin de sélectionner le ou les traitements les plus efficaces pour un patient donné.
Description de l'expérience : On place dans un tube Eppendorf un millilitre d'un filtrat 500 nm (0,5 μm) du plasma d'un patient infecté par une pathologie dont on ne connait pas l'origine. On dilue le milieu jusqu'aux piages de dilution de 10"13 On enregistre à deux reprises, comme précédemment, l'activité électromagnétique émise par les différentes solutions. On observe le résultat. Si le signal apparaît notablement actif, par rapport aux premières dilutions, le patient est assurément infecté par une maladie d'origine bactérienne. Si ce n'est pas le cas, donc si le signal est négatif, on continue de procéder à une nouvelle étape de filtration du plasma préalablement filtré, en lui appliquant dorénavant un filtre de 200 nm (0,2 μm), Si le signal apparaît, dans les plages de hautes dilutions, c'est que nous avions bien à faire à un micro organisme dont la taille est inférieure à 500 nm, et supérieure à 200 nm, très vraisemblablement un mycoplasme. Celui-ci a été filtré par le filtre 200 nm, et c'est son absence et l'absence d'autres micro organismes plus petit qui rend positif le signal de la solution dans les hautes dilutions.
Il va de soit, qu'en disposant de ia taille exacte des différents micro organismes susceptibles d'être rencontrés, et des filtres intermédiaires entre chacune de ces tailies, on peut, en généralisant la présente méthode à une cascade d'étapes de fîltration, identifier encore plus finement les bactéries, mycoplasmes ou virus et autres organismes formellement responsables de l'activation du signal et aider à caractériser le traitement thérapeutique le plus adapté. Expérience 5 : analyse du plasma de sujets atteints par différentes infections (VIH, urétrite à Uréaolasma urolvticum, polyarthrite rhumatoïde, maladie de parkinson, maladie d'Alzheimer, sclérose en plaque, cancers probablement d'origine viralei.
L'analyse des sangs de patients atteints des pathologies suivantes (VIH, urétrite à Uréaplasma urolyticum, polyarthrite rhumatoïde, maladie de parkinson, maladie d'Alzheimer, sclérose en plaque, cancers probablement d'origine virale) révèlent toutes que ces plasmas, une fois filtrés et dilués convenablement, sont émetteurs de signaux analogues à ceux émis par les mêmes micro-organismes in vitro, à l'exception de la polyarthrite, de Ia maladie de Parkinson, de la maladie d'Alzheimer, de la Sclérose en plaques, où la cause infectieuse n'a pas encore été identifiée, En particulier, dans le cas de sujets atteints de Sida et traités par trithérapie anti-rétrovirale, ces signaux sont émis par de hautes dilutions du plasma (jusqu'à ICT16), suggérant qu'ils existent en abondance après disparition de la charge virale plasmatique et pourraient contribuer à l'infection résiduelle persistant au traitement. C'est ce que nous avons étudié dans les expériences suivantes, 6, 7 et 8. On peut également étudier si l'éradication de ces signaux dans le plasma d'un patient HIV sous tri thérapie est de nature à définitivement inhiber la réapparition de la charge plasmatique du patient, en cas d'abandon du traitement. En d'autres termes, si un patient, après avoir été séro-positif serait devenu séro-négatif par éradication du signal électromagnétique.
Ces résultats nous poussent à croire que l'élément causal de maladies telles que la polyarthrite rhumatoïde, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la sclérose en plaques, et certains cas de cancers, seraient des micro organismes d'origine virale, bactérienne, ou mycoplasmiques. L'analyse même des signaux électromagnétiques, tout particulièrement ceux retrouvés dans les plasma de patients infectés par les pathologies telles que SIDA, (HIV I & II), grippe, sclérose en plaques, Parkinson, Alzheimer, Polyarthrite rhumatoïde, et ce, dans des plages de dilutions supérieures à ItT4 et inférieures à IQ"13, présentent une activité électromagnétique extrêmement intense (amplitude double ou triple au moins par rapport au signal de contrôle) et sur un nombre de fréquences bien supérieur, notamment sur les très basses fréquences. Les différentes décompositions de fourrier des signaux électromagnétiques en mode logarithmique, recueillies sur les hautes dilutions (1O'S à 10 ~13) font l'objet de l'illustration 9. En revanche, il a été observé que les micro-organismes relativement peu pathogènes ne laissaient dans le plasma duquel ils avaient été filtrés, qu'une activité électromagnétique faible, quelque soit le niveau de dilution de ce plasma. Cette propriété particulière, très intéressante, nous amène à pratiquer les expériences suivantes, pour voir si il y a corrélation ou non, entre activité pathogène et activité électromagnétique dans le milieu filtré et dilué. Expérience 7 : Activation des neutrophiles soumis aux différentes solutions d'un même milieu filtré de micro organismes pathogènes et à leurs signaux électromagnétiques associés
Le polynucléaire neutrophîle (PMN) représente Ia première barrière de défense de l'organisme contre les bactéries qui sont phagocytées et tuées (1).
L'activation des PMN peut être initiée par différents stimuli tel que les bactéries, le TNFα (tumor necrosis factor α) et les peptides chimiotactiques : fMLP (N-Formyl-methionyHeucyl~phenylalanine) et le PMA (4-phorbol-12-β-myristate-13- acetate). En recherche fondamentale, Tactivation des PMN est évaluée in vitro par la mesure de leur adhésion, de la libération des radicaux libres d'oxygène et/ou l'expression des marqueurs d'activation grâce à la cytométrie en flux.
Avant de tester l'effet des solutions filtrées et diluées d'un microorganisme, nous avons souhaité identifier formellement ies fréquences sur lesquelles les PMN s'activaient. Pour ce faire, nous avons appliquer une méthode simple mais inédite, non connue de l'art antérieur, et propre à être utilisée sur toutes substances ou toutes solutions de micro-organisme afin d'en déterminer les fréquences actives.
Nous savons que le Neutrophile s'active au contact du PMA. Nous avons donc enregistré, sur support informatique, l'activité électromagnétique du PMA, et décomposé son spectre en principales fréquences. Celles-ci apparaissent dans le graphique de l'illustration 13. Après un tri de ces fréquences, par ordre d'importance inverse, donc de Ia plus grande amplitude à la petite, on crée un nouveau fichier informatique, totalement synthétique, pour chacune des fréquences identifiées. Chaque fichier ne possède donc qu'une seule fréquence, et on fixe arbitrairement son amplitude, à l'amplitude maximale obtenue précédemment dans la décomposition du signa! PMA,
On peut s'assurer de ces deux points, en décomposant par transformée de fourrier, chacun des différents fichiers « mono fréquentieis » ainsi crées. En effet, une seule « pic » les caractérise comme en témoigne l'illustration 14, « pic » calée sur la valeur de fréquence qui a été choisie, en l'occurrence 28 Hz,
En appliquant successivement et individuellement chacun de ces fichiers sur les PMN, on en déduit rapidement quelles sont les fréquences, qui, à eux seuls, « activent » le PMN, Afin de s'assurer que les fréquences identifiées sont rigoureusement correctes, on synthétise, au pas de 0,1 Hz, les fréquences environnantes, et on les applique de manière similaire au PMN. Dans un groupe de fréquences environnantes, on finit par choisir celle qui active le plus fortement le PMN, on fa sélectionne.
Ainsi, lorsque dans les prochaines expériences, le PMN rencontrera l'une de ces fréquences dites « d'activation », il s'activera..
On peut donc consigner, au fil des expériences, les fréquences actives du PMN, de sorte que lorsque celui-ci sera exposé au signal électromagnétique d'un nouveau produit, ou d'une solution diluée et filtrée d'un micro-organisme, il réagira pareillement quand une ou plusieurs de ses « fréquences actives » ou proches de ces fréquences actives de référence, apparaîtront dans la décomposition spectrale du signal.
On pourra donc caractériser un micro-organisme, tel que le PMN, par ses fréquences actives de référence, et déduire par simple décomposition de fourrier de la signature électromagnétique d'un produit ou d'une solution diluée qui le fait réagir, , quelles fréquences sont susceptibles de figurer parmi ses fréquences « actives ». On peut, si besoin est, renouveler i'expéricence avec toutes les substances susceptibles d'activer le PMN, pour connaître la quantité maximale de ses fréquences « actives ».
Il convient de remarquer plusieurs points caractéristiques importants de cette découverte.
D'une part, ces fréquences actives n'ont pas d'harmoniques dans ie spectre. Ce qui signifie qu'une fréquence qui présenterait des harmoniques ne peut être une fréquence active d'origine naturelle, et donc résulte très vraisemblablement d'une interférence électromagnétique locale, comme c'est souvent le cas en milieu urbain fortement parasité par les rayonnements électromagnétiques ambiants. Dans la plupart des décompositions présentées dans tes figures 3,4,5,6,7,8,9,10 et 11 on voit comment apparaissent par exemple les fréquences liées aux rayonnement électromagnétique du courant électrique du secteur, ainsi que les raies harmoniques associées, D'autre part, lorsque l'on adjoint artificiellement à ces fréquences actives fondamentales, quelques harmoniques, de rang 2, 3, 4 par exemple, l'effet d'activation des PMN ne s'en trouve pas augmenté d'autant. II s'en trouve même plutôt diminué.
Maintenant que nous connaissons les « fréquences actives » du PMN, comme le 28 Hz, il convient de passer aux parties II et III de l'expérience.
C'est ainsi que nous avons testé l'effet de solutions filtrées et diluées d'Escherichia CoIi jusqu'à IQ"15 ainsi que leurs signaux électromagnétiques associés sur le neutrophile.
Pour valider les résultats, l'effet potentiel des signaux est comparé à un témoin négatif (Tampon) et un témoin positif (dose pondérale du produit induisant f'activatïon du neutrophile).
L'activation des PMN est évaluée in vitro par la mesure de leur adhésion et par la mesure de l'expression des marqueurs d'activation,
Les expériences sont faites en triplicate. 18 mesures (dont témoin) sont réalisées sur le neutrophile pour chaque série. Soit 54 points de mesure par série. Il y a donc 162 points de mesure pour ies dilutions, et 162 points de mesure pour les signaux électromagnétiques de ces solutions soit au total 324 points de mesure.
A chaque fois que l'une des fréquences émise par fa signature électromagnétique des solutions correspond à l'une des fréquences « actives » du PMN, on incrémente un indice, dit indice de concordance, noté de 1 à 50.
Celui-ci est donc constitué par le nombre de fréquences communes au micro organisme à l'origine de la dilution et à chaque micro organisme décomposé dans la base de référence, Plus son indice est élevé, plus Ie PMN est susceptible d'être activé, par l'application des signatures électromagnétique d'un milieu dilué et filtré, jusqu'à saturation.
Au dépouillement, les différentes séries confirment la corrélation entre l'activation des PMN, et la présence des fréquences actives dans la signature électromagnétique des solutions filtrées et diluées. Expérience 8 ; Activatioπ des basophiles soumis aux différentes solutions d'un même milieu filtré de micro organismes pathogènes ainsi qu'à leur signatures électromagnétiques.
Le basophile humain est une cellule clé pour l'étude des réactions d'hypersensibilité immédiate puisqu'il libère toute une variété de médiateurs (tel que f'histamine, leukotriène C4, Interleukine IL-4 et IL- 13) suite à une activation par les allergènes.
L'activation des basophiles est évaluée in vitro par la mesure de l'expression des marqueurs d'activation grâce à la cytométrie en flux.
L'activation des basophtles peut être déclenchée par l'anti- Immunoglobuline E (anti-IgE), le fMLP et l'interleukine 3 (IL-3). Nous avons testé l'effet du signal électromagnétique de l'anti-IgE, le fMLP et IL-3 sur le basophile.
Après avoir identifié formellement et consignées, pour les basophiles, les « fréquences actives » par la même méthode d'identification que pour les neutrophiles, en utilisant le signal électromagnétique de l'anti-IgE, du fMLP, et de l'IL- 3, et stocké ces fréquences dans un tableau, nous passons à la phase II de l'expérience.
Elle consiste à tester, en triplicate, sur le basophile, l'effet de solutions d' Escherichia CoIi, de la solution non filtrée non diluée (ND NF) jusqu'à la solution diluée à 10"ls ainsi que leurs signaux électromagnétiques respectifs associés. 18 mesures (dont témoin) sont réalisées sur le Basophile pour chaque série. Soit 54 points de mesure par série. Il y a donc 162 points de mesure pour les dilutions, et 162 points de mesure pour îes signaux électromagnétiques de ces solutions soit au total 324 points de mesure.
Pour valider les résultats, l'effet potentiel des signaux est comparé à un témoin négatif (Tampon) et un témoin positif (dose pondérale du produit induisant l'activation du neutrophile).
L'activatïon des basophiles est évaluée in vitro par la mesure de l'expression des marqueurs d'activation,
La décomposition des signaux électromagnétiques en provenance des différentes solutions filtrées du milieu, est comparée aux fréquences identifiées comme « actives » chez les basophiles.
Au dépouillement, les différentes séries confirment la corrélation entre i'activation (dé granulation) des Basophiles, et la présence de leurs fréquences actives dans la signature électromagnétique des solutions diluées. Expérience 9: hémolyse de globules rouges soumis aux différentes solutions d'un même milieu filtré de micro organismes pathogènes.
L'expérience 8 met en œuvre un test complémentaire permettant de mesurer l'impact direct des solutions filtrées et diluées d'un organisme notablement pathogène, tel que Escherichia CoIi, sur le potentiel de défense antiradicalaire d'un organisme vivant.
Le test utilisé KRL (Kit Radicaux Libres, brevet Spiral) est un test biologique simple, développé par les Laboratoires Spiral, permettant de mesurer la résistance globale chez l'homme vis-à-vis de l'agression des radicaux libres. Il est décrit par Monsieur Michel PROST, son inventeur, dans la demande de Brevet N° FR2861463 (2003) "Procédé de détermination du potentiel de défense antiradicaiaire et utiiisation notamment thérapeutique préventive humaine et vétérinaire". Ce test est de plus parfaitement également adapté à la détermination dynamique des propriétés pro- ou anti-oxydantes de nombreux composés comme les médicaments, les aliments, les produits de l'industrie. En effet, il apparaît qu'un nombre croissant d'études soulignent que les radicaux libres sont impliqués non seulement dans des phénomènes aigus tels que traumatisme ou ischémie, mais aussi dans la genèse et le développement de nombreuses pathologies comme les maladies cardiovasculaires, le diabète, le cancer, les maladies inflammatoires et le déclin du système immunitaire, I! apparaît donc très pertinent de pouvoir évaluer de façon précise l'état de défense des individus vis-à-vis de l'agression des radicaux libres, dans ie cas des activités biologiques produites par des solutions diluées et filtrées d'organismes hautement pathogènes, comme Echeria CoIi ou Ie virus HIV.
Pour cela, les différentes solutions diluées d'un miiieu filtré de la bactérie Escherichia colî, de la solution non diluée notée ND à la solution diluée à 10" 15r ont été soumises au test KRL, selon 8 réplications, selon le protocole décrit dans la demande de brevet sus référencée.
Les valeurs (en minute), rendent compte du temps de demi hémolyse, donc du temps nécessaire à la destruction de la moitié de la population de globules rouges exposés au milieu dilué.
Les résultats sont donnés dans le tableau suivant :
Figure imgf000026_0001
L'histogramme, affichant la moyenne des 6 réplications et la variabilité associée pour chacune des dilutions jusqu'à 10 1S est présenté figure 18.
On constate d'une part que la présence du micro organisme dans le milieu déclenche, par rapport au témoin, une très importante défense radicalaire (Soi ND NF - Solution non diluée, non filtrée). Ce qui est parfaitement conforme aux résultats connus en routine opératoire. Mais ce qui est particulièrement intéressant et nouveau de constater, c'est que l'activité radicalaire continue, alors que le micro organisme, a été filtré du milieu. Notablement pour la solution filtrée non diluée (Soi ND F) mais également pour des hautes dilutions du milieu, telles que ICT8 IQ"10 10"î2. Pour d'autres hautes dilutions, au contraire, l'activité radicalaire est plus basse que le témoin.
Il y a donc, à certaines dilutions, une activité biologique qui continue d'agresser l'organisme et qui mobilise ses défenses immunitaires alors que le milieu a été, par filtration, débarrassé du micro organisme d'origine, Cette agression constante, même de faible importance, épuise à la longue les réserves immunitaires de l'organisme, de sorte que celui-ci présentera une fragilité notable lorsqu'il sera de nouveau agressé par l'arrivée d'un nouveau organisme pathogène, fragilité permettant à ce micro-organisme de prospérer rapidement sans grande résistance chez un être vivant à la capacité défensive alors diminuée,
A travers les expériences 6 à 8, on constate donc une corrélation entre ia perturbation des défenses immunitaires de l'organisme et l'activité électromagnétique, notamment dans les basses et très basses fréquences du signal de la solution diluée et filtrée d'un organisme pathogène.
Il convient de conclure comment ce phénomène hautement énergétique déclenche l'apparition de nouvelles fréquences qui donnent probablement lieu à une mise en résonance partielle des organismes chargés des défenses immunitaires, ce phénomène étant vraisemblablement la clé de compréhension de leur inhibition dans le cas de certaines pathologies. CONCLUSION GENERALE
Des micro-organismes de nature différente, tels que des rétrovirus (VIH), des bactéries sans parois rigides proches des Gram + (M.pirum), des bactéries avec parois rigides Gram - (E.coli) produisent des nanostructures persistant dans des solutions aqueuses.
Après l'étape indispensable de filtration, qui va éliminer les particules physiques des micro-organismes, ces nanostructures (de taille inférieure à 100 nanomètres) émettent des signaux électromagnétiques complexes de basses fréquences qui peuvent être enregistrés et numérisés. Les mêmes résultats peuvent être obtenus à partir du plasma de sujets infectés par ces micro-organismes.
Ces nanostructures diffèrent des micro-organismes qui les ont générés par leur large spectre de densité, et leur sensibilité à la congélation. Les signaux qu'elles émettent peuvent être neutralisés par auto-interférence avec les signaux préalablement enregistrés et inversés en phase, ou par allo-interférence avec les signaux provenant d'autres micro-organismes.
Enfin, on a vu comment, cette activité électromagnétique intense, très caractéristique et seulement présente sur certaines plages de haute dilution d'un milieu filtré d'un micro organisme, n'apparaissait que pour les micro-organismes notablement pathogènes.
Cette activité électromagnétique intensive, se traduit par un renforcement notable de l'activation des neutrophiles et des basophiles ainsi que par une augmentation sensible de l'activité des défenses antiradîcalaires. Ces signaux électromagnétiques se sont révélés particulièrement intenses dans certaines plages de haute dilution d'un milieu Filtré et dilué, alors que les différents micro organismes composant les défenses immunitaires de l'organisme étaient particulièrement agressés.
A la lecture de ces résultats, il apparaît donc établit qu'il existe une certaine corrélation entre l'intensité e des signaux électromagnétiques de basses fréquences émis par des solutions diluées et filtrées de micro organismes pathogènes, ET i'activation des défenses immunitaires d'un organisme vivant, typiquement sur certaines des plages de hautes dilutions. Et que cette activité électromagnétique particulière est facilement identifiable par la mise en œuvre d'outils de capture simples.
On pourra utilement mettre à profit la présente invention pour la détection de ces nouvelles formes pathogènes dans tes milieux naturels, ainsi que pour leur élimination, par un traitement prophylactique adapté, tel que antibiotique dans le cas de l'identification d'une origine bactérienne. Ii semble donc que cette activité électromagnétique particulièrement élevée et de spectre large sur certaines plages de haute dilution du milieu filtré constitue :
• Un marqueur fort d'une agression immunitaire, préparant le terrain à l'émergence d'une pathologie lourde opportuniste.
• un marqueur utile de l'efficacité d'un traitement prophylactique, pendant l'évolution de la pathologique et l'application du traitement,
• Un avertisseur de risque pathogène dans des milieux aqueux, lorsqu'il est utilisé dans des substances alimentaires, cosmétiques, ou industrielles.

Claims

REVENDICATIONS
1 - Procédé de caractérisation d'un élément biochimique présentant une activité biologique, se trouvant dans un milieu biologique, ledit procédé comportant les étapes suivantes: a. pré diluer le milieu biologique pour obtenir un milieu dilué; b. filtrer au moins une fois le milieu dilué pour obtenir un milieu filtré; c. diluer le milieu Filtré pour obtenir une solution diluée ; d. homogénéiser ladite solution diluée par agitation forte e. acquérir les signaux électromagnétiques de basse fréquence émis par ladite solution diluée et homogénéisée, f. enregistrer lesdits signaux sur un support informatique approprié ; g. analyser lesdits signaux.
2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite étape de filtration utilise un filtre présentant une porosité inférieure ou égaie à 100 nanomètres, de préférence comprise entre 20 nanomètres et 100 nanomètres.
3 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que le niveau de dilution de ladite étape de dilution est compris entre IQ"2 et 10"20 , de préférence compris entre 10"2 et 10"9. 4 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comporte une étape de centrifugation après l'étape d'agitation forte,
5 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que ladite étape d'acquisition desdits signaux électromagnétiques de basses fréquences émis par ladite solution diluée comprend une étape d'excitation de ladite solution par un signal électromagnétique d'excitation défini.
6 - Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que le signal électromagnétique d'excitation défini de ladite solution est d'amplitude et de fréquence fixes connues. 7 - Procédé selon l'une des revendications 5 ou 6 caractérisé en ce que l'on procède soit au filtrage de la dite fréquence fixe connue pendant la lecture desdits signaux électromagnétiques émis par ladite solution diluée, soit à ia soustraction du signal ambiant capté, pour obtenir une signature caractéristique d'un élément biochimique.
8 - Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'étape d'analyse des signaux comprend:
- une étape de décomposition par transformation de fourrier de la signature obtenue en couples fréquence amplitude - une étape de tri des couples fréquence amplitude par ordre inverse d'importance de leur amplitude (ai)
- une étape de sélection des n premiers couples fréquence amplitude (fi,ai).
- une étape de comparaison des dits couples fréquence amplitude (fi, ai) de ladite signature avec les couples fréquence amplitude des signatures des éléments biochimiques connus, pareillement décomposées et enregistrées
(fj, aj) dans une base dite de référence,
9 - Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que n est inférieur à 50, préférentiellement vaut 10,
10 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de production d'un fichier synthétique de fréquence f et d'amplitude fixe, pour chacune des n fréquences caractérisées,
11 - Procédé selon la revendication 10 caractérisé en ce que l'amplitude du dit fichier synthétique est fixée à l'amplitude maximale atteinte parmi les n couples fréquence amplitude (fi,ai).
12 - Procédé selon la revendication 11, caractérisée en ce que ce fichier synthétique de fréquence fi connue, peut être appliqué sur un test biologique d'activation d'un milieu ou d'un micro-organisme, afin de déterminer s'il l'active ou non. 13 - Procédé selon îa revendication 12, caractérisée en ce que Ia fréquence fi sera considérée comme active, notée alors Fi, dans ie cas d'une activation du dit test biologique,
14 - Procédé selon la revendication 8 caractérisé en ce qu'un indice de concordance, noté de 1 à 10, est constitué par le nombre de fréquences communes dans les signatures électromagnétiques de deux micro organismes ou de leurs solutions filtrées,
15 - Procédé selon la revendication 14, caractérisée en ce que le dît microorganisme peut être un polynucléaire neutrophtle, un basophile, un radical libre, ou tout micro-organisme pouvant concourir à une activité immunitaire de l'organisme.
16 - Procédé selon la revendication 14, caractérisée en ce que le dit microorganisme peut être un virus, une bactérie, un mycoplasme, un radical libre, ou tout micro-organisme pouvant concourir à une activité pathogène contre l'organisme.
17 - Procédé selon les revendications 14 à 16, caractérisé en ce que la seule présence, de une ou plusieurs fréquences, dans le signal électromagnétique des dilutions actives de la solution filtrée, des fréquences actives identifiées des micros organismes composant les défenses immunitaires de l'organisme, active les tests des dits micro-organismes.
18 - Procédé selon les revendications 14 à 17, caractérisé en ce que l'on détecte le caractère pathogène du micro organisme d'origine d'un milieu filtré, par la présence dans la signature électromagnétique du dit milieu, des fréquences actives identifiées des micro-organismes composant les dites défenses immunitaires de l'organisme.
19 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il comprend une étape d'identification des plages de dilution dans lesquelles la somme des amplitudes (ai) des fréquences (fi) composant le signal, est au moins le double de la somme des amplitudes de fréquences composant fe signal témoin. Les signaux électromagnétiques ou la signature de la dite solution sont alors dit « positifs ».
20 - Procédé seion la revendication 19, caractérisé en ce que les « plages actives » se situent dans les dilutions d'un milieu filtré supérieures à 10"4" 21 - Procédé selon (es revendications 19 et 20, caractérisé en ce que l'on détecte le caractère pathogène du micro organisme d'origine d'un milieu filtré du dit micro organisme, par la présence de plusieurs plages successives, dites « plages actives » de haute dilution du dit milieu, dans lesquelles le signal est positif. 22 - Equipement pour la mise en œuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 et/ou d'une application selon l'une quelconque des revendications 15 à 21 caractérisé en ce qu'il comprend un ou plusieurs capteurs pour l'acquisition des signaux électromagnétiques émis par un élément biochimique donné ; un circuit de traitement desdits signaux pour la calcul d'une signature dudit élément ; un circuit de comparaison de ladite signature avec des signatures des éléments biochimiques connus préalablement figurant dans une base de données ; un circuit de production de signaux d'inhibition.
23 - Equipement selon la revendication 22 consistant à ce que le capteur principal, dit capteur pour l'acquisition des signaux électromagnétiques émis par un élément, est connecté au canal droit de la carte son de l'ordinateur.
24 - Equipement selon les revendications 22 à 23, caractérisé en ce que un autre capteur, dit capteur de contrôle, connecté au canal gauche de la carte son de l'ordinateur, est éloigné de l'élément biochimique à caractériser. 25 - Equipement selon les revendications 22 à 24 caractérisé en ce que les capteurs sont situés en regard des différentes strates de sédimentation du milieu biologique à enregistrer.
26 - Equipement selon la revendication 22 à 25 consistant à ce que les capteurs d'acquisition sont situés sur un rack 96 emplacements, en regard des 16 tubes correspondant aux 13 niveaux de dilution de la solution, allant de IQ"1 à IG"13' ainsi que trois tubes spécifiques ; Le milieu non dilué non filtré du micro organisme, le milieu non diiué filtré, le tube contrôle,
27 - Equipement selon l'une au moins des revendications 22 à 26 caractérisé en ce que l'équipement de capture pour l'acquisition des signaux électromagnétiques émis par un élément biochimique, est séparé de l'équipement distant de comparaison des signaux et relié par réseau informatique ou de téléphonie cellulaire.
28 - Equipement selon la revendication 27 caractérisé en ce que seuls les n premiers couples fréquence amplitude (fi,ai) de la décomposition du signal électromagnétique reçus de l'équipement de capture sont transmis à l'équipement de traitement distant.
29 - Equipement selon l'une des revendications 26 à 28 caractérisé en ce que l'équipement distant est muni d'un module d'émission de commandes et d'affichage de message vers l'équipement de capture, 30 - Equipement selon l'une des revendications 22 à 29 consistant à ce que le capteur pour l'acquisition des signaux électromagnétiques émis par un élément biochimique soit connecté au canal micro d'un terminal de téléphonie mobile.
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