WO2007071199A1 - Composes de 2,4-disubstituee amido-6-substituee-[1,3,5]triazine ou de 1,3-pyrimidine, leurs procedes d'elaboration, et preparations pharmaceutiques les contenant et leurs utilisations - Google Patents

Composes de 2,4-disubstituee amido-6-substituee-[1,3,5]triazine ou de 1,3-pyrimidine, leurs procedes d'elaboration, et preparations pharmaceutiques les contenant et leurs utilisations Download PDF

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morpholin
substituted
phenylamino
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PCT/CN2006/003546
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Hualiang Jiang
Xu Shen
Yongtang Zheng
Jian Li
Li Du
Liumeng Yang
Ruirui Wang
Kaixian Chen
Hong Liu
Yiping Wang
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Shanghai Institute Of Materia Medica, Chinese Academy Of Sciences
Kunming Institute Of Zoology, Chinese Academy Of Sciences
Shanghai Pharmaceutical (Group) Co., Ltd
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    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond

Definitions

  • the present invention relates to the field of medicinal chemistry and pharmacotherapy, and in particular to a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound, a process for the preparation thereof, and a Pharmaceutical compositions and uses of such compounds.
  • AIDS AIDS immunodeficiency syndrome
  • the total number of AIDS patients and virus carriers in the world has reached more than 42 million, including nearly 1 million in China, ranking second in Asia and ranking 14th in the world.
  • the rapid growth of AIDS cases in China in recent years at an average rate of 30-40% per year has become an increasingly serious public safety problem.
  • IN integrase
  • IN can complete the process of integration of HIV double-stranded DNA molecules into the host chromosome.
  • IN has 3, cleavage endonuclease activity and chain transfer activity in vivo.
  • IN first cleaves two bases in the 3'-5' direction at both ends of the double-stranded DNA of the HIV linear blunt DNA to form the recessed end of CA-OH-3', and cuts a 5 bp gap in the DNA double strand of the host cell.
  • IN is a 32kD protein consisting of 288 amino acids, which is structurally divided into three parts: the N-terminal region, the core region, and the C-terminal region.
  • the N-terminal region consists of 1 to 50 amino acids and is a conserved HHCC zinc finger domain with viral DNA recognition function. It also has the function of promoting IN tetramerization and enhancing catalytic activity.
  • the core region consists of 52 210 amino acids and is the most important site for IN catalysis. It contains three acidic amino acid residues (Asp64, Aspll6 and Glul52) arranged in the DD35E form, which is a very conserved structure and is the site of the core enzyme and nucleoside transferase.
  • the binding of this moiety to one or two divalent cations is essential for catalytic activity.
  • the C-terminal region is the least conserved region in IN and consists of 213 to 288 amino acids. It contains a nuclear localization signal that binds to DNA non-specifically and is involved in the multimerization of IN.
  • the crystal structure of the three regions of IN and the crystal structure of the complex with various inhibitors have been obtained, but the crystal structure of the full length of IN has not been solved. Since IN plays an indispensable role in the replication of HIV virus, and IN has no functional analog of IN in human cells, IN is an ideal target for the treatment of AIDS.
  • Inhibitors of IN found so far include: DNA binding agents, oligonucleotides and nucleoside analogs, sulfate analogs, polypeptides, and hydroxy-substituted aromatic compounds. According to these inhibitors, the binding sites with IN can be classified into four categories.
  • the first nucleoside compound to be used as an IN inhibitor was AZT and its derivative AZTMP.
  • AZT monophosphate, diphosphate and triphosphate both have anti-IN chain transfer activity.
  • Their inhibition of IN is achieved by interfering with the binding of IN to DNA.
  • K156, K159 and K160 of IN are the binding sites for single nucleotides, and the highly conserved K159 is the key to the binding of IN to DNA. It was subsequently found that dinucleosides and iso-dinucleosides, as well as oligonucleotide-like compounds, also inhibit IN activity.
  • the metal ion binding site polyhydroxy aromatic compound chelate with the divalent metal ion (Mg 2+ or Mn 2+ ) of IN to inhibit the activity of IN. This is the most reported of the compounds with IN inhibition, including lignanols, coumarin monomers or dimers, styrenequinones and catechol-containing spirocyclic terpenoids. Wait. Such compounds have a good inhibitory effect on IN in an in vitro assay, but are too toxic in cell culture.
  • the limitation of the activity measurement method the cell culture-based assay cannot determine whether the compound acts directly on the IN, and the molecular level screening has too many false positives;
  • Limitations The crystal structure of IN and the crystal structure of its DNA substrate complex are not determined, and there are many mechanisms in the integration of this complex biochemical process.
  • the treatment of AIDS mainly adopts the strategy of combination therapy, that is, the combination of HIV reverse transcriptase and protease inhibitor, but the drug resistance caused by HIV virus mutation and the side effects of reverse transcriptase and protease inhibitor during treatment. serious. Therefore, the search for and discovery of HIV-1 integrase inhibitors has become a new and important topic in the treatment of AIDS.
  • An object of the present invention is to provide a novel 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound having an anti-HIV virus, and its structure
  • the general formula is as shown in formula (I).
  • Another object of the present invention is to provide a novel 2,4-disubstituted amino-6-substituted compound starting from 2,4,6-trichloro-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine.
  • Still another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for use in an anti-HIV virus comprising a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound.
  • the compound of the present invention can be used as a small molecule inhibitor of HIV-1 integrase to inhibit viral replication by blocking the integration of HIV-involved HIV double-stranded DNA molecules into the host chromosome. Therefore, it is expected to develop into a new anti-HIV virus drug.
  • the present invention provides a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound having the structure of the following formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof: among them:
  • X is selected from € or ⁇ .
  • Y is selected from O or NH.
  • A is selected from CH, CH 2 , N or NH.
  • B is selected from CH, CH 2 , N or Li.
  • Z represents a group of atoms or atoms.
  • the atom is a carbon atom or a nitrogen atom
  • the group of the atom is an alkyl group selected from a hydrogen atom, a halogen, a halogenated C1 to C3, a linear or branched hydrocarbon group of Cl ⁇ C6, a cyano group, Substituted by a group of a nitro group, an amino group, a hydroxyl group, a hydroxymethyl group, a trifluoromethyl group, a trifluoromethoxy group, a carboxyl group, a C1-C4 alkoxy group, a fluorenyl group, a C1-C4 acyl group, and an aromatic group Ar carbon atom.
  • n is selected from an integer of 0 to 3.
  • the dotted line indicates a single bond or a double bond.
  • a saturated or unsaturated hydrocarbon group selected from hydrogen, ⁇ C 6 straight or branched, C 3 ' ⁇ C 7 cycloalkyl, alkanoyl RCO, aromatic acyl ArCO, alkylsulfonyl RS0 2 , aromatic sulfonyl ArS0 2 , benzyl , an aromatic group Ar, a 5 to 7 membered aromatic heterocyclic ring (containing 1 to 3 hetero atoms selected from oxygen, sulfur, nitrogen, may be combined by a phenyl group and an aromatic heterocyclic ring, or may be selected from one or more selected from halogen, CC 6 straight or branched hydrocarbon group, cyano group, nitro group, amino group, hydroxyl group, hydroxy group, trifluorodecyl group, trifluoromethoxy group, carboxyl group, ( ⁇ ( 4 alkoxy group,
  • R 3 , R 5 and R 6 are each independently selected from hydrogen, d-C 6 straight or branched saturated or unsaturated alkyl and decyloxy, C 3 -C 7 cycloalkyl, benzyl, aryl Ar , 5 to 7-membered aromatic heterocyclic ring (containing 1 to 3 heteroatoms selected from oxygen, sulfur, nitrogen heteroatoms, which may be a phenyl group and an aromatic heterocyclic coalescence, or by one or more groups selected element, ⁇ C 6 linear Chain or branched hydrocarbon group, aryl group, nitro group, amino group, hydroxyl group, hydroxymethyl group, trifluoromethyl group, trifluoromethoxy group, carboxyl group, Cj-Q alkoxy group, fluorenyl group, Q ⁇ C 4 acyl group, aryl group Substituted by the group of Ar).
  • the aromatic group Ar may be a phenyl group or a substituted phenyl group (the substituent may be 1 to 4 selected from the group consisting of halogen, ( ⁇ (: 6 straight or branched chain, cyano, nitro, amino, hydroxy, oxindole) a group of a group, a trifluoromethyl group, a trifluoromethoxy group, a carboxyl group, a d-C 4 alkoxy group, a decyl group, a d-C 4 acyl group, a naphthyl group, a biphenyl group.
  • halogen ⁇ (: 6 straight or branched chain, cyano, nitro, amino, hydroxy, oxindole
  • a group of a group a trifluoromethyl group, a trifluoromethoxy group, a carboxyl group, a d-C 4 alkoxy group, a decyl group, a d-C 4 acy
  • the acceptable salts are, in particular, organic acids and aspartic acid such as propionic acid, oxalic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, lactic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, and the like.
  • a salt formed with an acidic base such as glutamic acid to form an ester, such as sodium, potassium, calcium, aluminum and ammonium salts, or a salt with an organic base such as methylamine salt, ethylamine salt or ethanolamine salt.
  • a salt of a mineral acid such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydrofluoric acid, sulfuric acid, nitric acid or phosphoric acid which is esterified with a basic amino acid such as lysine, arginine or ornithine, or with citric acid or acetic acid.
  • a salt of an organic acid such as picric acid, methanesulfonic acid or ethanesulfonic acid.
  • a further preferred embodiment of the compound of the formula (I) of the present invention is a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof: wherein X Is N; Y is NH;
  • a further preferred embodiment of the compound of the formula (I) of the present invention is a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-1,3-pyrimidine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof: wherein X is C; Y Is O;
  • a fourth preferred embodiment of the compound of the formula (I) of the present invention is a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-1,3-pyrimidine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof: wherein X is C Y is ⁇ ;
  • a fifth preferred embodiment of the compound of the formula (I) of the present invention is a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound or a pharmaceutically acceptable compound thereof Accepted salt: wherein A is C; B is N;
  • a sixth preferred embodiment of the compound of the formula (I) of the present invention is a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or a 1,3-pyrimidine compound or a pharmaceutically thereof thereof Acceptable salts: wherein A is CH; B is CH;
  • a seventh preferred embodiment of the compound of the formula (I) of the present invention is a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound or a pharmaceutically acceptable compound thereof Accepted: where A is CH; B is N;
  • An eighth preferred embodiment of the compound of the formula (I) of the present invention is a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound or a pharmaceutically acceptable compound thereof Accepted salts: wherein A is N; B is CH;
  • a ninth preferred embodiment of the compound of the formula (I) of the present invention is a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound or a pharmaceutically acceptable compound thereof Accepted salt: where A is N; BN;
  • a tenth preferred embodiment of the compound of the formula (I) of the present invention is a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound or a pharmaceutically acceptable compound thereof Accepted salt: Where Z is ⁇ ;
  • ⁇ -Methylaminononanoic acid 3-( ⁇ - ⁇ aminodecanoyloxy)-4-[(4-morpholin-4-yl-6-phenylamino-[1,3,5]triazin-2-yl -decenyl]-phenyl ester, 3-(3-hydroxyindoloylpropionyloxy)-4-[(4-morpholin-4-yl-6-phenylamino-[1,3] ,5]triazin-2-yl)-nonenyl]-phenyl ester, 3-decyloxy-4-[(4-morpholin-4-yl-6-phenylamino-[1,3] ,5]triazin-2-yl)-nonenyl]-phenyl ester,
  • the present invention provides a compound of formula I A I included,, Ic :, ID, and I e compounds and intermediates II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, Preparation methods of XIV, XV, XVI, XVII, XVIII, XIX.
  • R 2 , , , R 5 , and Y are as defined above.
  • class I A compounds is based on 2,4,6-trichloro-[1,3,5]triazines, which are obtained by monoamine substitution, bis-amino substitution, hydrazine substitution, Y-substitution and condensation reaction, respectively. .
  • the synthesis strategy is embodied in the schema 1 of the schema.
  • class I c compounds is based on N-Boc-2-( 4,6-dichloro-[1,3,5]triazin-2-yl)guanamine, which is substituted by monoamine and substituted by diamine.
  • De Boc-protecting group, Y-substitution and condensation reaction are prepared.
  • the synthesis strategy is embodied in the schema scheme 3.
  • class I E compounds The synthesis of class I E compounds is based on 2-((1,3-dimercapto-2-yl)indolyl)-4,6-dichloro-1,3,5-triazine, which is substituted by monoamine. , bis-substituted, deprotected 1, 3-dihydryl protecting group, Y-substitution and condensation reaction.
  • the synthesis strategy is embodied in the schema scheme 5.
  • Another aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition for preventing and/or treating a viral infection of a virus, the pharmaceutical composition comprising a 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3, represented by formula (I), 5] a triazine or a 1,3-pyrimidine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof and at least one pharmaceutically acceptable carrier which is useful for in vivo treatment and biocompatibility.
  • the pharmaceutical composition can be prepared in various forms depending on the route of administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be used for the prevention and/or treatment of HIV virus-infected diseases.
  • the pharmaceutical compositions provided by the present invention may be in various forms such as tablets, capsules, powders, syrups, solutions, suspensions and aerosols, and the like, and may be present in a suitable solid or liquid carrier or diluent. And a suitable sterilizing device for injection or drip.
  • the pharmaceutical composition may also contain an odorant, a flavoring agent, etc., in a desirable ratio, the compound of the formula ( ⁇ ) as an active ingredient accounts for more than 65% by weight, and the balance is 0.5 to 40% by weight of the total weight, or More preferably from 1 to 20%, or preferably from 1 to 10%, of a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or solution or salt solution.
  • the compound of the formula (I) as described above can be used clinically in mammals, including humans and animals, through a route of administration such as the mouth, nose, skin, lungs, or gastrointestinal tract.
  • the most preferred is oral.
  • the best recommended daily dose is 0.01 - 200 mg / kg body weight, taken once, or 0.01 ⁇ 100 mg / kg body weight. Regardless of the month of use, the optimal dosage for a individual should be based on the specific treatment. Usually starting with a small dose, gradually increase the dose until the most suitable dose is found.
  • the compound of formula (I) acts to inhibit viral replication by blocking the integration of HIV-involved HIV double-stranded DNA molecules into the host chromosome.
  • FIG. 1 is an electropherogram for detecting purified protein
  • FIG. 2 is a kinetic analysis of IA-3 and HIV-1 integrase
  • FIG. 3 is a measurement of IC50 value of IA-3.
  • BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The present invention will be further exemplified in the following examples. These examples are for illustrative purposes only, and are not intended to limit the invention in any way. All parameters in the examples, as well as the remaining descriptions, are based on quality unless otherwise stated.
  • Example 1 is an electropherogram for detecting purified protein
  • FIG. 2 is a kinetic analysis of IA-3 and HIV-1 integrase
  • FIG. 3 is a measurement of IC50 value of IA-3.
  • the benzoyl chloride is replaced by 4-methoxybenzoyl chloride, and the remaining materials, reagents and preparation methods are the same as those in Examples 4 and 6, to obtain 3-decyloxybenzoic acid 3-decyloxy-4-[( 4-morpholine-4-yl-6-phenylamino-[1,3,5]triazin-2-yl)-indolyl]-phenyl ester.
  • the acetylsalicylic acid is replaced by 2-aminobenzoic acid, and the remaining raw materials, reagents and preparation methods are the same as those in the example 24, and the 3-benzoic acid 2-aminobenzoic acid 3-(2-aminobenzoyloxy)_4- [(4-Morpholin-4-yl-6-phenylamino-[1,3,5]triazin-2-yl)-nonenyl]-phenyl ester.
  • acetylsalicylic acid was replaced by 2-acetamidobenzoic acid, and the remaining raw materials, reagents and preparation methods were the same as those in Example 24 to obtain 3-acetamidobenzoic acid 3-(2-acetamidobenzoyloxy)_4.
  • 3-acetamidobenzoic acid 3-(2-acetamidobenzoyloxy)_4.
  • N-Boc-2-(4-anilino-6-morpholine-[1,3,5]triazin-2-yl)guanamine (X-1)
  • Example 39 2-Boc-amino-4-anilino-6-morpholine-[1,3,5]triazine (XIII-1) 4,6-dichloro-[1,3,5]triazine-2-
  • the aniline is replaced by 2-Boc-amino-4-anilino-6-chloro-[1,3,5]triazine, and the remaining raw materials, reagents and preparation methods are the same as those in Example 2 to obtain 2-Boc-amino- 4-anilino-6-morpholine-[1,3,5]triazine.
  • a DNA fragment of IN was obtained from the pUC18-IN plasmid by PCR (gene sequence according to AF040373 (GE EBANK)).
  • RV 5 '-ata tct cga get aat cct cat cct g-3'
  • the PCR product was identified by 1% agarose gel electrophoresis and the PCR fragment was recovered.
  • the cells to be used were suspended in 20 ml of PBS, sonicated, and centrifuged at 15,000 rpm for 30 min, and the supernatant and the Glutathione SepharoseTM 4B affinity resin which had been equilibrated with PBS were taken at 4. Mix C for 4 hrs. After passing through the column, wash the heteroprotein with 100-150 ml PBS and finally elute the GST-labeled IN with 50 mM GSH.
  • the purified protein was detected by 8% SDS-PAGE and stained with Coomassie blue: The full length of HIV-1 integrase was 282 amino acids, plus a 27 kD GST marker, and the entire fusion protein was approximately 60 kD. As shown in Figure 1, the left lane is the marker, and the right side is the purified protein HIV-1 integrase.
  • the stained SDS-PAGE gel can clearly see the band at about 60kD, and the purity is judged to be greater than 95%.
  • Biacore3000 system operating environment is HBS-EP buffer (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA and 0.01% P20, pH 7.4).
  • the IC SQ value of PLK275 for HIV-1 integrase was determined by biosensor:
  • the purified HIV-1 integrase and different concentrations of I A -3 were incubated on ice for 1 hour for kinetic analysis, as the compound competed for binding to HIV-1 integrase, making the HIV-1 integrase on the chip.
  • the binding ability of the DNA analog is decreased, which is manifested by a decrease in the RU value.
  • the value of RU was plotted and the concentration corresponding to different concentrations of compounds, the analysis of the obtained compound IC 50 values using the software Origin.
  • Example 52 In vitro anti-HIV-1 activity of twelve compounds such as Xs2
  • Xs2, Xsl9, Xs32, Xs77, XsF2, XsF9, Xs274, Xs275, Xs276/Xs277, Xs278, Xs279 were provided by Professor Shen Xu of the Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences.
  • the positive control compound, 3'-Azido-3 '-deoxythymidine (AZT) was purchased from Sigma. Twelve samples were dissolved in DMSO, the concentration of the stock solution was 25 mg/ml, and the storage conditions were: -20 °C.
  • AZT was dissolved in RPMI-1640 complete medium, 0.22 ⁇ filter was used for filtration and sterilization, and after disassembly, -20 ⁇ save.
  • HEPES N-2 (2-Hydroxyothyl) piperazine-N'-(2-ethanesufonic acid), MTT (3,(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide), DMF ( , '-Dimethyl formamine).
  • Penicillin, Streptomycin sulfate, Glutamine are purchased from Sigma; 2-mercaptoethanol (2-ME, 2-Mercaptoethanol) is Bio-Rad Products RPMI-1640 and newborn calf serum are products of Gibco.
  • Human T lymphoid cell line C8166, MT4 cells and HIV-1 experimental strain HIV-1 were all donated by the British Medical Research Council, AIDS Reagent Project. All cells and viruses were cultured in RPMI-1640 complete medium containing 10% calf serum. HIV-l mB was prepared in a conventional manner, and the TCID 5 of the virus was titrated and calculated. . After the virus stock solution is dispensed, store at -70 °C. Cells and viruses are cryopreserved and resuscitated in the usual manner.
  • HIV- 1 IIIB was titrated by Johnson & Byington the improved method, summarized as follows: The HIV-1 as a stock solution diluted 4-fold in 96 well plates, 10 gradients, each gradient six replicate wells, and set the control wells 6 holes. C8166 cells were added to each well at 50 ⁇ (4 10 5 / ml) with a final volume of 200 ⁇ l per well. 37. C, 5% C0 2 culture. On the third day, fresh RPMI-1640 complete medium was added for 100 ⁇ .
  • the HIV-1 induced cytopathic effect (CPE) in each well was observed under an inverted microscope to see if there were syncytia in each well ( Syncytium
  • the formation of the virus was determined; the TCID 5 o (50 % Tissue culture infection dose ) of the virus was calculated according to the Reed & Muench method.
  • the OD value was measured by an ELx800 ELISA instrument with a measurement wavelength of 595 nm and a reference wavelength of 630 nm.
  • the toxicity of the compound to normal cells and the protection against HIV-1 IIIB infected cells were calculated by the formula. -
  • Inhibition rate of HIV-1 cytopathic effect (%) (1 - number of syncytium cells in the experimental well / number of syncytia cells in the control well) X 100
  • Table 4 Summary of in vitro cytotoxicity and anti-HIV-1 activity of compounds: Compounds Experimental Methods CC50 EC50 EC50 Therapeutic Index
  • Infected cells are protected MTT 93.38 Inactive
  • Infected cells ensure MTT > 1 0.096 > 10 protective effect test
  • the compounds of the present invention have high binding activity to HIV-1 integrase and are effective in inhibiting the binding of integrase to substrates in a substrate competition test.
  • the present inventors have also found that the compound disclosed in Example 8 (IA-3) is less toxic to C8166 cells in an in vitro anti-HIV virus assay, and has a CC50 greater than 20 ( ⁇ g/ml, which induces C8166 cells against HIV-1).
  • the EC50 for the formation of syncytia was 1.13-2.41 g/ml and the therapeutic index TI was 177.46-73.63, further confirming the anti-HIV effect of these compounds.
  • the preparation method of the 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound of the invention has the advantages of mild reaction conditions, abundant raw materials, easy operation, and post-treatment barrel Single advantage.
  • the 2,4-disubstituted amino-6-substituted-[1,3,5]triazine or 1,3-pyrimidine compound of the present invention is subjected to computer virtual screening and binding constant to HIV-1 integrase, and is at the bottom. In the competition test, the integrase binding to the substrate can be effectively inhibited. The mechanism of action against HIV infection was verified.
  • the compounds of the invention are very toxic.
  • the compounds of the present invention are useful for the preparation of a medicament for treating a viral infection of HIV.

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Description

2,4-二取代氨基 -6-取代 -『1,3,51三嗪或 1,3-嘧啶类化合物、 其制备 方法、 药物组合物及用途
技术领域 本发明涉及药物化学和药物治疗学领域， 具体涉及 2,4-二取代氨 基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物、其制备方法、含此类化合 物的药物组合物及用途。 背景技术 自 1981 年在美国发现首例艾滋病 AIDS ( acquired immunodeficiency syndrome, 获得性免疫缺陷病症） 患者以来， 艾滋 病已在全球的 180多个国家和地区快速蔓延。 目前全球艾滋病患者和 病毒携带者总数已达到 4，200多万， 这其中中国有近 100万， 在亚洲 居第 2位， 在全球居第 14位。 而且近年来中国艾滋病病例数在以平 均每年 30 ~ 40 %的速度快速增长， 已经成为一个日益严峻的公共安 全问题。
HIV病毒作为 AIDS的病原体，其感染人体后在体内的复制过程 需要整合酶（integrase, IN ) 的参与才能完成。 IN能完成 HIV双链 DNA分子整合进入宿主染色体的过程。 IN在体内具有 3，切割的内切 酶活性和链转移活性。 IN先在 HIV线形平端 DNA的双链两端按 3'-5' 方向切割两个碱基， 形成 CA-OH-3'的凹端， 在宿主细胞的 DNA双 链上切开一个 5bp的缺口； 然后 HIV DNA双链的 CA-OH-3'的凹端 在 IN的作用下与宿主细胞 DNA链切口的 5bp以磷酸二酯键的形式 结合， 形成整合中间体； 再在细胞内某些酶的作用机制下去掉病毒 DNA5，末端未配对的两个碱基,修复病毒及宿主细胞 DNA链的缺口。
IN是由 288个氨基酸组成的分子量 32kD的蛋白质，它在结构上 分为三个部分： N端区、核心区和 C端区。 N端区由 1 ~ 50位氨基酸 组成， 是一个保守的 HHCC锌指结构域， 具有病毒 DNA识别功能， 此外还有促进 IN四聚化和增强催化活性的功能。 核心区由 52 210 位氨基酸组成， 是 IN催化最重要的部位。 它包含三个酸性氨基酸残 基（Asp64、 Aspll6和 Glul52 ), 排列成 DD35E型， 是非常保守的 结构， 是内核酶和核苷转移酶的位点。该部位和一个或两个二价阳离 子 (Mg2+或 Mn2+)结合对催化活性是必需的。 C端区是 IN中保守性最 小的区域， 由 213 ~ 288位氨基酸组成。 它包含核定位信号， 能非特 异性的结合 DNA, 还参与 IN的多聚化。 IN三个区的晶体结构及与 各种抑制剂的复合物晶体结构都已得到， 但是 IN全长的晶体结构仍 然没有解决。 由于 IN在 HIV病毒复制过程中起着不可缺少的重要作用， 而且 IN在人体细胞内没有 IN的功能类似物， 因而 IN是 AIDS治疗的理 想靶标。 寻找新的 IN抑制剂， 结合 HIV逆转录酶和蛋白酶抑制剂联 合用药， 可以提高抗病毒活性、 降低毒副作用和减少耐药性， 是很有 意义的治疗方案。 到目前为止发现的 IN的抑制剂包括： DNA结合剂、 寡核苷酸及 核苷类似物、硫酸酯类似物、 多肽和羟基取代的芳香化合物等。 根据 这些抑制剂跟 IN的结合位点可以分为四类。
1 核苷结合位点 最早用做 IN 抑制剂研究的核苷化合物是 AZT 及其衍生物 AZTMP。 AZT单磷酸、 双磷酸和三磷酸均具有抗 IN链转移活性。 它 们对 IN的抑制是通过干扰 IN与 DNA的结合实现的。 IN的 K156、 K159和 K160是单核苷的结合位点， 其中高度保守的 K159是 IN与 DNA结合的关键。 随后发现二核苷及异二核苷， 还有寡核苷酸类化 合物也有抑制 IN的活性。
2金属离子结合位点 多羟基芳香化合物与 IN的二价金属离子（ Mg2+或 Mn2+ )螯合从 而抑制 IN的活性。 这是具有 IN抑制作用的化合物中被报道最多的， 有木脂内酯类、香豆素单体或二聚体类、苯乙烯喹淋类和含邻苯二酚 的螺环类蒽醌类等。 这类化合物在体外测定中对 IN有很好的抑制作 用， 但在细胞培养中毒性太大。
3 LTR (长末端重复) DNA序列结合位点 这类抑制剂目前已经报道的有 DNA双螺旋小沟结合剂 （如纺锤 霉素和偏端霉素）、 DNA嵌入剂 （如多柔比星）和拓朴异构酶抑制剂 (如米多蒽醌）。 2000年默克公司发现了两种能遏制 IN的二酮酸类抑制剂， 这是 目前为止唯——类选择性作用于 IN的抑制剂。 这类化合物对整合反 应的第二步有选择性抑制作用。除此之外其他的抑制剂都可能同时有 多个作用位点。 尽管对 IN的抑制剂已有十余年的研究，但是 IN抑制剂目前没有 药物上市， 仅有少数进入临床。 究其原因， 主要有两方面的限制： 一 是活性测定方法的限制：基于细胞培养的测定无法确定化合物是否直 接作用于 IN， 而分子水平的筛选又有太多假阳性； 二是结构生物学 方面的限制： IN的晶体结构及其 DNA底物复合物的晶体结构都没有 确定， 而且整合这个复杂的生化过程中还有许多机理没弄清楚。 目前对 AIDS病的治疗主要采用联合用药的策略，即采用 HIV逆 转录酶和蛋白酶抑制剂联合用药， 但是治疗过程中 HIV病毒突变导 致的耐药性以及逆转录酶和蛋白酶抑制剂的毒副作用情况严重。 因 此，寻找和发现 HIV- 1整合酶抑制剂成为 AIDS治疗的新的重要主题。 从天然产物中发现 fflV-1整合酶的新型抑制剂，对于进一步设计合成 新型有效的 HIV-1整合酶抑制剂及 AIDS的治疗具有重大的开拓性的 意义。 发明内容 本发明的一个目的是提供了具有抗 HIV 病毒作 '用的新型的 2,4- 二取代氨基 -6-取代 -[1,3，5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物，其结构通式如式 ( I ) 所示。 本发明的另一个目的是提供以 2,4,6-三氯 -[1,3，5]三嗪或 1,3-嘧啶 为原料合成新型的 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1，3,5]三嗪或 1,3-嘧啶类化 合物的方法。 本发明的再一个目的是提供包含 2，4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5] 三嗪或 1,3-嘧啶类化合物的抗 HIV病毒方面的应用的药物组合物。 本发明所涉及的化合物可作为 HIV-1整合酶的小分子抑制剂，通 过阻断 IN参与的 HIV双链 DNA分子整合进入宿主染色体的过程， 从而起到抑制病毒复制的作用。 因此， 有望开发成为新的抗 HIV病 毒药物。 本发明提供具有如下通式 （I ) 结构的 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐：
Figure imgf000007_0001
其中：
X选自€或]^。
Y选自 O或 NH。
A选自 CH、 CH2、 N或 NH。
B选自 CH、 CH2、 N或丽。
Z表示原子或原子的基团。 其中， 所述原子为碳原子或氮原子， 所述原子的基团为被选自氢原子、 卤素、 卤代 C1~C3的烷基、 Cl~ C6 的直链或支链烃基、 氰基、 硝基、 氨基、 羟基、 羟曱基、 三氟曱 基、 三氟曱氧基、 羧基、 C1-C4 的烷氧基、 巯基、 C1-C4 的酰基 和芳香基 Ar的一个基团所取代的碳原子。 n选自 0至 3的整数。 虚线表示单键或双键。 选自氢、 ~C6直链或支链的饱和或不饱和烃基、 C3'~C7环 烃基、 烷酰基 RCO、 芳香酰基 ArCO、 烷磺酰基 RS02、 芳香磺酰基 ArS02、 苄基、 芳香基 Ar、 5 ~ 7元芳香杂环（含有 1 ~ 3个选自氧、 硫、 氮的杂原子， 可被苯基和芳香杂环并合， 或被一个或多个选自卤 素、 C C6直链或支链烃基、 氰基、 硝基、 氨基、 羟基、 羟曱基、 三 氟曱基、 三氟曱氧基、 羧基、 （^~(4烷氧基、 巯基、 d~C4酰基、 芳香基 Ar的基团所取代）。 选自氢、 卤素、 d 直链或支链烃基、 ~C4直链或支链 烷氧基、 氰基、 三氟甲基、 三氟曱氧基、 R!Y-基团。
R3、 、 R5和 R6各自独立地选自氢、 d~C6直链或支链的饱和 或不饱和烷基及浣氧基、 C3~C7环烃基、 苄基、 芳香基 Ar、 5~7元 芳香杂环（含有 1~3个选自氧、 硫、 氮的杂原子， 可被苯基和芳香 杂环并合，或被一个或多个选自 素、 ~C6直链或支链烃基、氛基、 硝基、 氨基、 羟基、 羟曱基、 三氟曱基、 三氟曱氧基、 羧基、 Cj-Q 烷氧基、 巯基、 Q~C4酰基、 芳香基 Ar的基团所取代）。 芳香基 Ar可以是苯基、取代苯基 (取代基可以是 1 ~ 4个选自卤 素、 （^~(：6直链或支链炫基、 氰基、 硝基、 氨基、 羟基、 羟曱基、 三 氟甲基、 三氟曱氧基、 羧基、 d~C4烷氧基、 巯基、 d~C4酰基的 基团）、 萘基、 联苯基。 本说明书中所述的 "药学上可接受的盐，， 具体地可列举与丙酸、 草酸、 丙二酸、 琥珀酸、 富马酸、 马来酸、 乳酸、 苹果酸、 酒石酸、 柠檬酸、等有机酸和天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸形成酯后再与无 机碱形成的盐， 如钠、 钾、 钙、 铝盐和铵盐， 或与有机碱形成的盐， 如甲胺盐、 乙胺盐、 乙醇胺盐等， 或与赖氨酸、 精氨酸、 鸟氨酸等碱 性氨基酸形成酯后的盐酸、 氢溴酸、 氢氟酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸等无 机酸的盐， 或与曱酸、 乙酸、苦味酸、 甲磺酸、 乙磺酸等有机酸的盐。 本发明式 （I)化合物的一个优选实施方案是如下 2,4-二取代氨 基— 6 -取代 _[1,3，5]三嗪类化合物或其药学上可接受的盐： 其中， X是 N; Y是 O;
A、 B、 Z、 n、 、 R2、 R3、 、 R5和 Re的定义同权利要求 1。 本发明式（I )化合物的又一个优选实施方案是如下 2,4-二取代 氨基 -6-取代 -[1,3，5]三嗪类化合物或其药学上可接受的盐： 其中， X是 N; Y是 NH;
A、 B、 Z、 n、 、 R2、 、 、 R5和 的定义同权利要求 1。 本发明式 （I )化合物的再一个优选实施方案是如下 2,4-二取代 氨基 -6-取代 -1,3-嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐： 其中， X是 C; Y是 O;
A、 B、 Z、 n、 、 R2、 R3、 , R5和 的定义同权利要求 1。 本发明式.（I )化合物的第四个优选实施方案是如下 2,4-二取代 氨基 -6-取代- 1 ,3-嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐： 其中， X是 C; Y是 ΝΉ;
A、 B、 Z、 n、 、 R2、 R3、 、 R5和 的定义同权利要求 1。 本发明式 （I )化合物的第五个优选实施方案是如下 2,4-二取代 氨基— 6-取代 -[1，3，5]三嗪或 1，3-嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐： 其中， A是 C; B是 N;
X、 Y、 Z、 n、 R!、 R2、 R3、 、 R5和 Rg的定义同权利要求 1。 本发明式（I )化合物的第六个优选实施方案是如下 2，4-二取代 氨基 -6-取代 -[1,3，5]三嗪或, 1,3-嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐： 其中， A是 CH; B是 CH;
X、 Y、 Ζ、 η、 、 R2、 R3、 、 R5和 Re的定义同权利要求 1。 本发明式（I )化合物的第七个优选实施方案是如下 2,4-二取代 氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物或其药学上可接受的 ： 其中， A是 CH; B是 N;
X、 Y、 Ζ、 η、 、 R2、 R3、 、 R5和 的定义同权利要求 1。 本发明式（I )化合物的第八个优选实施方案是如下 2，4-二取代 氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐： 其中， A是 N; B是 CH;
X、 Y、 Z、 n、 R!、 R2、 R3、 、 R5和 的定义同权利要求 1。 本发明式（I )化合物的第九个优选实施方案是如下 2，4-二取代 氨基- 6-取代 -[1，3，5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐： 其中， A是 N; B N;
X、 Y、 Ζ、 η、 、 R2、 R3、 、 R5和 的定义同权利要求 1。 本发明式 （I )化合物的第十个优选实施方案是如下 2,4-二取代 氨基 -6-取代 -[1，3，5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐： 其中， Z是 ΝΉ;
X、 Υ、 Α、 Β、 η、 R!、 R2、 R3、 、 和 的定义同权利要求
1。 本发明的具体优选实施方案选自下列化合物：
4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基- [1，3,5]三嗪 -2-基)-亚肼基曱基] -1,3-苯 二酚，
2-氯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) - 肼甲烯基] -苯酯， 苯曱酸 3-苯甲酰氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪- 2- 基) -肼甲烯基]-苯酯，
2-乙酰氧基苯曱酸 3 -(2-乙酰氧基苯曱酰氧基 )-4-[(4-吗啉 -4-基 -6- 苯氨基 -[1,3，5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯，
4-特戊酰氧基苯曱酸 3-(4-特戊酰氧基苯甲酰氧基) -4- [(4-吗啉 -4- 基- 6-苯氨基 - [1,3，5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯，
2-羟基苯曱酸 3- (2-羟基苯甲酰氧基) -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1 ,3，5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基〗 -苯酯，
2-氨基苯曱酸 3-(2-氨基苯曱酰氧基 )-4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯， 2-乙酰氨基苯曱酸 3-(2-乙酰氨基苯曱酰氧基 )-4- [(4-吗啉 -4-基 -6- 苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基)-肼甲烯基]-苯酯，
Ν,Ν-二曱氨基曱酸 3-( Ν,Ν-二曱氨基甲酰氧基) -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3,5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯 ,
Ν-甲氨基曱酸 3-( Ν-曱氨基曱酰氧基) -4-[(4-吗啉 -4-基- 6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯， 丁二酸 3-(3-羟曱酰基丙酰氧基） -4-[(4-吗啉- 4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯， 苯甲酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼 曱烯基] -苯酯，
{4-{Λ -[4-(3-溴苄氧基) -2-曱氧基-苄稀基] -肼基 }-6-吗啉 -4-基 -[1,3，5]-三嗪- 2-基}-苯胺，
3-溴苯甲酸 3-曱氧基 -4- [(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3,5]三嗪 -2-基) - 肼甲烯基] -苯酯，
4-三氟曱基苯曱酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三 嗪 -2-基) -肼甲晞基] -苯酯，
4-甲基苯磺酸酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 - [1,3,5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯， 3-溴苯甲酸 2-甲氧基 -4- [(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2_基) - 肼甲婦基] -苯酯，
3-溴苯甲酸 2-乙氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) - 肼曱烯基] -苯酯，
3-溴苯甲酸 3_甲氧基 -4-{[4_苯氨基 -6-(4-氛磺酰基苯氨基) -[I,3,5] 三嗪 -2-基] -肼甲烯基 }-苯酯，
4-氯苯甲酸 3-曱氧基 _4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) - 肼曱烯基]-苯酯，
4 -溴苯曱酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3，5]三嗪 -2-基) - 肼曱烯基]-苯酯，
4-氯苯曱酸 3-羟基 -4- [(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基)-肼 曱烯基] -苯酯，
2,6-二氯苯曱酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 - [1,3，5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯，
3一曱氧基— 4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基- [1,3,5]三嗪 -2-基)-亚肼基曱 基]-苯酚， '
4-甲氧基苯曱酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-笨氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯， 3-溴苯甲酸 4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼曱烯 基] -苯酯，
3-溴苯曱酸 4-[(4,6-二 (4-甲氧基苯氨基 )-[1,3，5]三嗪 -2-基) -肼曱烯 基] -苯酯，
N_{4_[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基)- 肼甲烯基]苯 基}-3-溴苯甲酰胺，
N'-(2,4-二羟基苯基) -N-(4-吗啉 -6-苯胺基 - 1，3，5-三嗪 -2-基)甲咪， 苯甲酸 3-甲氧基 -4-((4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3,5-三嗪 -2-基氨基)亚甲 基氨基)苯酯 ,
4- (2- (4-吗啉 -6-苯胺基 -1 ,3，5-三嗪 -2-基)乙缩醛氨基） - 1 ,3-苯二酚， 苯甲酸 3-曱氧基 -4-(2- (4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3，5-三嗪- 2-基）乙缩醛 氨基)苯酯，
4-(2-(4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3，5-三嗪 -2-基氨基)乙烯基）-1,3-苯二酚， 苯甲酸 3-曱氧基 -4-((4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3，5-三嗪 -2-基氨基）乙烯 基)苯酯，
4-(3-(4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3,5-三嗪 -2-基)丙 -1-烯基） -1,3-苯二酚， 苯曱酸 3-甲氧基 -4-(2-(4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3,5_三嗪 -2_基） 丙- 1-烯 基)苯酯， 4— (((4_吗啉 _6-苯胺基 -1,3,5-三嗪 -2-基)曱基亚氨基)甲基） -1,3-苯 二酚， 或 苯曱酸 3-甲氧基 -4-(((4-吗啉 -6- (苯胺基) -I,3,5-三嗪 _2_基)曱基亚 氨基)曱基)苯酯。 本发明提供式化合物 I包含的 IA、 、 Ic：、 ID、 和 Ie类化合物及 其中间体 II、 III、 IV、 V、 VI、 VII、 VIII、 IX、 X、 XI、 XII、 XIII、 XIV、 XV、 XVI、 XVII、 XVIII、 XIX的制备方法。 其中 R2、 、 、 R5、 和 Y的定义如上所述。
Figure imgf000016_0001
Figure imgf000017_0001
LD
IA类化合物的合成是以 2,4,6-三氯 -[1,3,5]三嗪为原料， 分别经单 氨取代， 双氨取代， 肼取代， Y-取代和缩合反应制得。 合成策略具体 体现在图式方案 1中。
Figure imgf000017_0002
V
方案 1 2,4-二取代氨基 -6-取代肼基 -[1,3,5]三嗪类化合物 IA制备 IB类化合物的合成是以 2,4,6-三氯 -1,3-嘧啶为原料， 分别经单氨 取代， 双氨取代（反应条件较 IA苛刻）， 肼取代， Y-取代和缩合反应 制得。 合成策略具体体现在图式方案 2中。
CI
CV CI
Figure imgf000018_0001
V I B
方案 2 2,4-二取代氨基 -6-取代肼基 -1,3-嘧啶类化合物 IB制备
Ic类化合物的合成是以 N-Boc-2- ( 4，6-二氯 -[1,3，5]三嗪 -2基） 曱 胺为原料， 分别经单氨取代， 双氨取代， 脱 Boc-保护基， Y-取代和缩 合反应制得。 合成策略具体体现在图式方案 3中。
ci
Figure imgf000018_0002
V
方案 3 2,4-二取代氣基 -6-取代 -[1，3,5]三嗪类化合物 Ic制备 ID类化合物的合成是以 2-Boc-氨基 -4,6-二氯 -[1,3,5]三嗪为原料， 分别经单氨取代，双氨取代，脱 Boc-保护基， Y-取代和缩合反应制得。 合成策略具体体现在图式方案 4中。
Figure imgf000019_0001
XV XVI ID
方案 4 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1，3,5]三嗪类化合物 ID制备
IE类化合物的合成是以 2-((1,3-二巯基 -2-基)曱基) -4,6-二氯 -1,3,5- 三嗪为原料，分别经单氨取代，双氨取代，脱 1 , 3-二巯基保护基， Y- 取代和缩合反应制得。 合成策略具体体现在图式方案 5中。
Figure imgf000019_0002
XV XVI ΪΕ
方案 2，4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪类化合物 IE制备 本发明的另一个方面涉及预防和 /或治疗 HIV病毒感染疾病的药 物組合物， 所迷药物组合物含有式（I )所示 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1，3，5]三嗪或 1 ,3-嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐和至少一种 药学上可接受的载体， 其可用于体内治疗并具有生物相容性。 所述药 物组合物可以根据不同给药途径而制备成各种形式。本发明的药物组 合物可以用于预防和 /或治疗 HIV病毒感染疾病。 本发明所提供的药用组合物可以是多种形式， 如片剂、 胶嚢、 粉 末、 糖浆、 溶液 、 悬浮液和气雾剂等， 并可以存在于适宜的固体或 液体的载体或稀释液中和适宜的用于注射或滴注的消毒器具中。该药 用组合物也可以包含气味剂、 香味剂等， 其理想的比例是， 式（Ϊ ) 化合物作为活性成分占总重量比 65%以上， 其余部分为占总重量比 0.5 ~ 40%, 或更好为 1 ~ 20%, 或最好为 1 ~ 10%的药学可接受的载 体、 稀释液或溶液或盐溶液。
如上所述的结构式（I )的化合物可对哺乳动物临床使用， 包括 人和动物， 可以通过口、 鼻、 皮肤、 肺、 或者胃肠道等的给药途径。 最佳优选为口服。 最佳优选日剂量为 0.01 - 200 mg/kg体重， 一次性 服用， 或 0.01 ~ 100 mg/kg体重分次服用。 不管用何种月良用方法， 个 人的最佳剂量应依据具体的治疗而定。 通常情况下是从小剂量开始， 逐渐增加剂量一直到找到最适合的剂量。
式（ I )化合物通过阻断 IN参与的 HIV双链 DNA分子整合进入 宿主染色体的过程， 从而起到抑制病毒复制的作用。 用于 HIV病毒 感染疾病的治疗。 附图说明 图 1为检测纯化的蛋白的电泳图； 图 2为 IA-3与 HIV-1整合酶动力学分析； 图 3为 IA-3的 IC50值的测定。 具体实施方式 在以下的实施例中将进一步举例说明本发明。这些实施例仅用于 说明本发明， 但不以任何方式限制本发明。 实施例中的所有参数以及 其余的说明， 除另有说明外， 都是以质量为说明依据的。 实施例 1
4，6-二氯 -[1，3，5〗三嗪 -2-基苯胺 ( II-1 ) 将 2.0克 2，4,6-三氯 -[1，3,5]三嗪溶于 12毫升二氧六环中， 冰浴冷 却搅拌下， 緩慢滴加苯胺的丙酮溶液（1 克 /2 毫升）。 滴加完毕后， 一次性加入 1.16克破酸钠， 继续冰浴搅拌 5小时后， 升温至室温搅 拌 2小时。 向反应液中滴加 150毫升水中， 搅拌 30分钟， 析出大量 固体， 抽滤， 水洗， 干燥得浅黄色固体产物 2.48克， 收率 95.4%。 Mp 132-133 °C(lit.l33-135 °C)。 MS-EI 240(M + , 100%)。 实施例 2
(4-氯 -6-吗啉 -4-基 -[1，3，5]三嗪 -2-基)苯胺 ( III-1 ) 将 1.0克 II-l溶于 6毫升二氧六环中， 冰浴冷却搅拌下， 緩慢滴 加吗啉的丙酮溶液（0.36克 /1毫升）。 滴加完毕后， 一次性加入 0.438 克碳酸钠， 继续冰浴搅拌 2小时后， 升温至室温搅拌 1小时。 向反应 液中滴加 70毫升水中， 搅拌 30分钟， 析出大量固体， 抽滤， 水洗， 干燥得浅黄色固体产物 1.06 克， 收率 88.0%。 Mp 193-195 °C (lit.198.5-199.5 °C )。 lH- MR(400Hz, CDC13) δ： 3.75(4H, m) , 3.85(4H, m), 7.14(1H, t), 7.18(1H, br), 7.38(2H, t), 7.52(2H, t)。 实施例 3
(4-肼基 -6-吗 -基 -[1，3，5]三嗪 -2-基)苯胺 ( IV-1 ) 将 0.5克 ΠΙ-1投入到 15毫升 85 %的水合肼中，回流搅拌 1小时， 冷至室温，抽率，少量无水乙醇洗，得类白色固体 0.4克，收率 81.6%。
Mp 170-171 °C ; MS-EI 287(M + , 100%)。 实施例 4
苯甲酸 -3-甲氧基 -4-甲酰基 -苯酯（ V-1 ) 将 0.2克 2-甲氧基 -4-羟基 -苯曱 溶于 5毫升无水吡啶中 , 室温 搅拌下， 滴加 0.36克苯甲酰氯， 加毕室温搅拌 12小时， 将反应液倾 入 50毫升水中， 乙酸乙脂提取（30mlx3 ), 合并有机层， 稀酸水溶液 洗三次， 碳酸钠水溶液洗一次， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压蒸除溶 剂得浅黄色固体 0.16克， 收率 48.5%。 lH- MR(400Hz, CDC13) δ : 3.95(3H, s), 6.93(2H, m)， 7.56(2H, t)， 7.67(1H, d)， 7.94(1H， d), 8.22(2H, d), 10.44(1H, s)。 实施例 5
4-(3-溴苄 L&)-2-甲 苯甲醛（V-2 )
将 0.88克 3-溴苄氯， 0.5克 4-羟基 -2-曱氧基苯曱醛和 0.59克碳 酸钾投入到 10毫升丙酮中， 回流搅拌 12小时， 冷至室温， 加入 50 毫升水， 乙酸乙脂提取，柱层析分离得白色固体 0.46克， Mp 101-103 °C , 收率 43.6%。 iH-NMR OOHz, CDC13) δ： 3.90(3H, s), 5.10(2H, s)， 6,54(2H， s)， 7.30(1H, t), 7.36(1H, d), 7.50(1H, d)， 7.61(1H, s), 7.83(1H， d), 10.30(1H, s)。 MS-EI 320 (M+), 169(100%)。
实施例 6
苯甲酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3，5】三臻 -2-基) -肼 甲烯基】 -苯酯（IA-1 )
将 128毫克 V-1和 144毫克 IV-1投入到 25毫升无水乙醇中， 加 2滴水醋酸， 搅拌回流 2小时， 冷至室温， 抽率， 少量乙醇洗， 得白 色固体 IA-1 145毫克， Mp 211-213 °C , 收率 55.3%。 ^-NM ^OOHz, DMSO-d6) δ： 3.66(4Η, m), 3.75(4Η, m), 3.85(3Η, s), 7.00(2Η, m), 7.09(1Η, s)， 7.30(2Η, t), 7.65(2Η, t), 7.74-7.85(3Η, m), 7.95(1Η, d), 8.16(2Η, d), 8.46(1Η, s)。 MS-EI 525 (Μ+), 271(100%)。
实施例 Ί (4-{iV'-[4.(3-溴苄氧基) -2-甲氧基-苄稀基] -肼基 }-6-吗啉 -4-基 -[1，3，5卜三嗪 -2-基) -苯胺 ( lA-2 )
将 V-1替换成 V-2， 其余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 6, 得白色固体 IA-2 187 亳克， Mp 185-186 °C , 收率 63.4%。 1H-NMR(400Hz, DMSO-d6) δ： 3.67(4H, m)， 3.75(4H, m)， 3.84(3H, s), 5.19(2H， s), 6.73(2H, s), 6.98(1H， t), 7.30(2H, t), 7.41(1H, t), 7.51(1H, d), 7.58(1H, d), 7.70(1H, s), 7.78-7.79(3H, m), 8.39(1H, s)。 MS-EI 589 (M+)， 271(100%)。
实施例 8
3-溴苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[l，3，5j三嗪 -2- 基) -肼甲烯基】-苯酯（IA-3 )
将苯甲酰氯替换成 3-溴苯甲酰氯，其余所需原料、试剂及制备方 法同实施例 4和 6， 得白色固体 IA-3 270亳克， Mp 175-177 °C , 收率 89.4%„ 1H-NMR(400Hz, DMSO-d6) δ： 3.66(4H, m), 3.74(4H， m)， 3.84(3H, s), 6.92-7.01(2H, m)， 7.12(1H, s), 7.29(2H, t), 7.62(1H, t), 7.82(2H, br), 7.99(2H, m)， 8.15(1H, d)， 8.26(1H, s)， 8.45(1H, s)。 MS-EI 603 (M+)， 271(100%)。
实施例 9
4-三氟甲基苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3，5】三 嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯（ IA-4 )
将苯曱酰氯替换成 4-三氟曱基苯甲酰氯，其余所需原料、试剂及 制备方法同实施例 4和 6,得白色固体 IA-4 135毫克， Mp 234-236 V , 收率 67.2%。 - NMR(400Hz, DMSO-d6) δ： 3.65(4H, m), 3.75(4H, m)， 3.85(3H, s), 6.92-7.03(2H, m), 7.12(1H, s), 7.29(2H, t), 7.82(2H, br), 7.95(1H, d), 8.01(2H, d)， 8.36(2H, d), 8.46(1H, s)。 MS-EI 593 (M+), 271(100%)。 实施例 10
4-甲基苯磺酸酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5〗三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯（ IA-5 )
将苯甲酰氯替换成 4-甲基苯磺酰氯，其余所需原料、试剂及制备 方法同实施例 4和 6,得白色固体 IA-5240毫克， Mp 239-241 °C , 收 率 83.6%。 ^- MR OOHz, DMSO-d6) δ： 2.41(3H, s), 3.65(4H, m), 3.75(7H, m), 6.64-6.70(2H, m), 6.97(1H, t), 7.28(2H, t), 7.50(2H, d), 7.79(5H, m), 8.35(1H， s)。 MS-EI 575 (M+), 271(100%)。
实施例 11
3-溴苯甲酸 2-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5】三嗪 -2- 基) -肼甲烯基】 -苯酯（IA-6 )
将 2-曱氧基 -4-羟基苯甲酸替换成 3-甲氧基 -4-羟基苯甲酪， 其余 所需原料、 试剂及制备方法同实施例 4和 6, 得白色固体 IA-6 173毫 克， Mp 142-144 °C , 收率 79.0%。 ！H-NMR^OOHz, DMSO-d6) δ： 3.66(4Η, m), 3.75(4Η, m)， 3.84(3Η, s)， 6.97(1Η, t), 7.29(2Η, t)， 7.33(2Η, s), 7.48(1Η, s), 7.62(1Η, t), 7.81(2Η, br), 7.99(1Η， d), 8.15(2Η, d), 8.22(1Η, s)。 MS-EI 603 (Μ+), 271(100%)。 实施例 12
3-溴苯甲酸 2-乙氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3,51三嗪 -2- 基) -肼甲烯基〗 -苯酯（IA-7 )
将 2-曱氧基 -4-羟基苯曱酪替换成 3-乙氧基 -4-羟基苯曱醛， 其余 所需原料、 试剂及制备方法同实施例 4和 6, 得浅黄色固体 IA-7 240 亳克， Mp 118-119 收率 77.7%。 1H- MR(400Hz, DMSO-d6) δ : 1.28(3H, t), 3.66(4Η, m), 3.75(4Η, m), 4.14(2Η, q), 6.98(1Η, t), 7.29(2Η, t), 7.33(2Η, s), 7.47(1Η, s), 7.62(1Η, t), 7.81(2Η, br)， 7.99(1Η, d), 8.14(2Η, d), 8.23(1Η, s)。MS-EI 617 (Μ+)， 271(100%)。
实施例 13
3-溴苯甲酸 3-甲 ½-4-{[4-^&-6-(4-氨磺酰基 «^)-〖1,3,5〗 三嗪 -2-基〗 -肼甲烯基 } -苯酯（ ΙΑ-8 )
将苯胺，吗啉和苯甲酰氯分别替换成磺胺，苯胺和 3-溴苯甲酰氯， 其余所需原料、试剂及制备方法同实施例 1-4和 6,得类白色固体 ΙΑ-8 157亳克， Mp 218-220 °C， 收率 76.2%。 'H-NMR OOHz, DMSO-d6) δ： 3.87(3H, s), 7.05(2H, m), 7.15(1H, d), 7.35(2H， t) , 7.63(1H, t)， 7.73(2H, d), 7.85(2H, br), 7.99(2H, m), 8.06(2H, br), 8.16(1H, d), 8.27(1H, t)， 8.54(1H, s)。 MS-ESI 689 [M+H]+。
实施例 14
4-氯苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3，5】三嗪 -2- 基)—胼甲烯基] -苯酯（ΙΑ-9 ) 将苯曱酰氯替换成 4-氯苯甲酰氯，其余所需原料、试剂及制备方 法同实施例 4和 6， 得白色固体 IA-9 250亳克， Mp 211-212 °C , 收率 86.6%。 ^-NMR OOHz, DMSO-d6) δ： 3.66(4Η, m), 3.74(4Η, m), 3.85(3Η, s), 7.00(2Η, m), 7.10(1Η, s)， 7.29(2Η, t), 7.71(2Η, d), 7.81(2Η, br), 7.94(1Η, d), 8·16(2Η, d), 8.45(1Η, s)。 MS-EI 559 (M + ), 271(100%)。
实施例 15
4-溴苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氣基 - [1，3，5】三嗪 -2- 基) -肼曱烯基 苯酯（IA-10 )。
将苯曱酰氯替换成 3-溴苯甲酰氯， 其余所需原料、试剂及制备方 法同实施例 4和 6,得 4-溴苯甲酸 3-甲氧基 -4- [(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基]-苯酯。
实施例 16 '
4-甲氧基苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3，5】三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯（IA-11 )
将苯甲酰氯替换成 4-甲氧基苯甲酰氯，其余所需原料、试剂及制 备方法同实施例 4和 6, 得 4-曱氧基苯曱酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4_基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯。
实施例 17
2-氯苯曱酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氣基 -[1，3，5]三嗪 _2_ 基) -肼曱烯基】 -苯酯（IA-12 ) 将苯曱酰氯替换成 2-氯苯曱酰氯，其余所需原料、试剂及制备方 法同实施例 4和 6,得 2-氯苯甲酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3,5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯。
实施例 18
2,6-二氯苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3，5】三嗪 -2-基) -肼曱烯基】 -苯酯（IA-13 )
将苯甲酰氯替换成 2,6-二氯苯甲酰氯， 其余所需原料、 试剂及制 备方法同实施例 4和 6, 得 2，6-二氯苯甲酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3,5]三嗪- 2-基) -肼曱烯基] -苯酯。
实施例 19
3-甲氧基 -4-[(4-吗 ·4-基 -6-«1&- [1，3，5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基】 - 苯酚 (ΙΑ-14)
将 V-1替换成 2-曱氧基 -4-羟基-苯甲醛， 其余所需原料、 试剂及 制备方法同实施例 6, 得 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基- [1,3,5] 三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酚。
实施例 20
3-溴苯甲酸 4-〖(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -〖1,3,5〗三嗪 -2-基)-肼甲烯 基卜苯酯 (IA-1S)
将 2-曱氧基 -4-羟基-苯甲醛替换成 4-羟基-苯甲醛，将苯甲酰氯替 换成 3-溴苯曱酰氯将其余所需原料、试剂及制备方法同实施例 4和 6, 得 3-溴苯曱酸 4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3,5]三嗪 -2-基) -肼曱婦基] - 苯酯。 实施例 21
4-氯苯甲酸 3-羟基 -4-〖(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -〖1，3，5〗三嗪 -2_基) - 肼甲烯基】 -苯酯 (IA-16)
将 2-曱氧基 -4-羟基-苯曱醛替换成 2，4-二羟基-苯曱醛， 将苯曱酰 氯替换成 4-氯苯甲酰氯将其余所需原料、试剂及制备方法同实施例 4 和 6, 得 4-氯苯曱酸 3-羟基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2- 基) -肼甲烯基] -苯酯。
实施例 22
4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基- [1，3，5】三嗪 -2-基) -亚肼基甲基 ]-1，3-苯 二酚 (IA-17)
将 V-1替换成 2，4-二羟基-苯甲醛，其余所需原料、试剂及制备方 法同实施例 6， 得 4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基- [1,3，5]三嗪 -2-基)-亚肼基 曱基] -1,3-苯二酚。 1H-NMR (300 Hz, d6-DMSO) δ 3.64 (m, 4H)， 3.74 (m， 4H), 6.34 (d, s, 2H), 6.96 (m， 1H), 7.16 (d, 1H， J=8.1 Hz), 7.27 (m， 2H), 7.75 (br, 2H), 8.17 (s, 1H)。 MS-EI m/z: 407(M+)。 HR EI-MS: Calcd. for C20H21N7O3: 407.1706; Found: 407.1715。
实施例 23
3-溴苯甲酸 4-〖(4，6-二 (4-甲氧基 ^ J -[1，3，5]三嗪 _2_基) -肼甲烯 基】 -苯酯 (IA-18)
将苯胺， 吗啉和苯甲酰氯分别替换成 4-甲氧基苯胺和 3-溴苯曱 酰氯， 其余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 1-4和 6, 得 3-溴苯 甲酸 4-[(4,6-二 (4-甲氧基苯氨基 HU,5]三嗪 -2-基) -肼甲浠基]-苯酯。 实施例 24
2-乙酰氧基苯甲酸 3-(2-乙酰氧基苯甲酰氧基 )-4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯 J^-[1，3，5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯 （IA-19)
将 99mg( 0.55mmol )的乙酰水杨酸悬浮于 5mL的干燥的 CH2C12, 冰浴下加入 55μΙ^ ( 0.61mmol )的新蒸的草酰氯， 加入一滴 DMF催化 反应， lOmin后转室温搅拌 4-5h; 然后， 冰浴下直接加入 lOOmg的 (IA-17)(0.25mmol),搅拌 lOmin后，慢慢加入 TEA到溶液呈弱碱性， 继续反应 lh, 往溶液中加入 20mL的 CH2C12， 水洗一次（10ml), 饱 和 NaCl洗一次（ 10ml), 无氷 Na2S04干燥， 抽干， 得到 185mg粗产 物， 色谱柱纯化得到 165mg2-乙酰氧基苯甲酸 3-(2-乙酰氧基苯曱酰 氧基) -4- [(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯 (IA-19), 收率 91·7%， Mp99-101°C= ^-NMR ( 300Hz, CDC13 ) δ 2.29
(s, 3H), 2.33 (s, 3H), 3.74 (m, 4H)53.83 (m, 4H), 7.05 (t, 1H, J=7.5Hz), 7.13 (m, 2H), 7.20 (m， 3H), 7.32 (t, 2H, J=7.5Hz, ), 7.42 (q, 2H, J=7.8Hz)， 7.59-7.71 (m, 4H), 7.91 (s, 1H), 8.23 (t, 2H, J=7.8Hz ); MS-EI m/z: 731 (M"。
实施例 25
4-特戊酰 苯甲酸 3-(4-特戊酰氧基苯甲酰氧基) -4-[(4-吗啉 -4- 基 -6-^ J^-[l，3，5】三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯 (IA-20)
将乙酰水杨酸替换成 4-特戊酰氧基苯甲酸，其余所需原料、试剂 及制备方法同实施例 24,得 176mg4-特戊酰氧基苯曱酸 3- (4-特戊酰 氧基苯甲酰氧基) -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基)-肼曱烯 基] -苯酯 (IA-20) ,收率 96·2%。 ^- MR 300HZ, CDC13 )δ 1.36 (s, 18H), 3.72 (m, 4H), 3.80 (m, 4H), 7.04 (t, 1H， J=7.8Hz), 7.15-7.32 (m, 9H), 7.35 (m， 2H), 7.98 (s， 1H ), 8.18-8.26 (m, 4H); MS-EI m/z 815 ( M " )。
实施例 26
笨甲酸 3-苯甲酰氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5】三嗪 -2- 基) -肼甲烯基] -苯酯 (IA-21)
将乙酰水杨酸替换成苯曱酸，其余所需原料、试剂及制备方法同 实施例 24, 得苯曱酸 3-苯甲酰氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3，5] 三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯。
实施例 27
2-羟基苯甲酸 3-(2-羟基苯甲酰氧基 )-4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3，5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基】 -苯酯（IA-22)
将乙酰水杨酸替换成 2-羟基苯甲酸，其余所需原料、试剂及制备 方法同实施例 24 , 得苯甲酸 2-羟基苯甲酸 3-(2-羟基苯曱酰氧 基 )_4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1 ,3,5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯。
实施例 28
2-氨基苯曱酸 3-(2-氨基苯曱酰氧基 )-4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3，5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯（IA-23)
将乙酰水杨酸替换成 2-氨基苯甲酸，其余所需原料、试剂及制备 方法同实施例 24 , ·得苯甲酸 2-氨基苯甲酸 3-(2-氨基苯曱酰氧 基 )_4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3，5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯。
实施例 29 2-乙酰氨基苯甲酸 3-(2 乙酰氨基苯曱酰氧基 )-4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯 J>-〖1，3，5〗三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯 (IA-24)
将乙酰水杨酸替换成 2-乙酰氨基苯曱酸，其余所需原料、试剂及 制备方法同实施例 24，得 2-乙酰氨基苯甲酸 3-(2-乙酰氨基苯曱酰氧 基 )_4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯。
实施例 30
(2,6-二氯嘧啶 -4-基) -(4-甲氧基苯基)胺（VI-1 )
将 2,4,6-三氯嘧啶 2.36克， 4-甲氧基苯胺 3.17克和碳酸钠 1.36 克投入到 20毫升乙醇中， 回流搅拌 2小时。 冷至室温， 加入 70毫升 水， 抽率得到得粗产品用 75 %乙醇水溶液重结晶得白色固体 2.4克， Mp 158-160 °C (lit.160- 162 。C),收率 69.4 %。 ^-NMR OOHz, CDC13) δ : 3.84(3Η, s), 6.37(1H, s), 6.98(2H, d), 7.26(2H, d), 7.37(1H, br)„
实施例 31
6-氯 - V4- -甲 苯基) -_ V2-苯基 -嘧啶 -2,4-二胺 ( VIM )
将 VI-1 1.2克， 苯胺 3.17克和碳酸钠 1.2克投入到 20毫升二氧 六环中， 回流搅拌 48小时。 冷至室温， 加入 70毫升水， 二氯甲烷提 取， 干燥， 浓缩， 残余物柱层析分离， 得类白色固体产品 0.8克， Mp 102 - 105 °C , 收率 55.2 %。 MS-EI 326 (M+), 269(100%)。
实施例 32
6-肼基 -7^-(4-甲 苯基) -iV2-苯基 -嘧啶 -2,4-二胺 ( VIII-l ) 将 VII-2 0.3克投入到 10毫升 85 %的水合肼中，搅拌回流 2小时， 冷至室温， 抽率， 得类白色固体产物 0.23克。 Mp 173-174 °C , 收率 77.7%。 MS-EI 322 (M+， 100%)。
实施例 33
3-溴苯甲酸 3-甲氧基 -4-{[6-(4-甲氧基苯胺基) -2-苯胺基 -嘧啶 -4- 基】-肼甲烯基} -苯酯（IB-1 )
将苯曱酰氯， IV-1分别替换成 3-溴笨曱酰氯， VIII-1, 其余所需 原料、试剂及制备方法同实施例 4和 6，得类白色固体 IB-1 105毫克， Mp 187-188 。C , 收率 55.0%。 ^-NMR^OOHz , DMSO-d6) δ： 3.74(3Η, s) , 3.87(3Η, s), 6.04(1Η, s), 6.92(3Η, m), 7.02(1Η, d), 7.14(1Η, s), 7.27(2Η, t)， 7.57-7.64(3Η, m), 7.83(2Η, d), 7.91(1Η, d), 8.00(1Η, d), 8.17(1Η, d), 8.28(1Η, s), 8.42(1Η, s)。 MS-EI 602 (M+), 270(100%)。
实施例 34
N-Boc-2- ( 4-笨胺基 -6-氯 -[1,3,5]三嗪 -2基） 曱胺（IX-1 )
将 2,4，6-三氯 -[1，3，5]三嗪替换成 N-Boc-2-( 4，6-二氯- [1，3,5]三嗪 -2 基） 曱胺， 其余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 1 , 得 N- Boc-2- ( 4-苯胺基 -6-氯 -[1,3,5]三嗪 -2基） 曱胺。
实施例 35
N-Boc-2- ( 4-苯胺基 -6-吗啉 -[1,3，5]三嗪 -2基） 曱胺（X-1 ) 将 4,6_二氯 -[1,3，5]三嗪 _2_基苯胺替换成 N-Boc-2- ( 4_苯胺基-6- 氯 _[1,3,5]三嗪 -2基）曱胺， 其余所需原料、试剂及制备方法同实施例 2, 得 N-Boc-2- ( 4-苯胺基 -6-吗啉 -[1，3,5]三嗪 -2基） 甲胺。
实施例 36
2- ( 4-苯胺基 -6-吗啉 -[1,3,5]三嗪 -2基） 甲胺（XI-1 )
将 0,5克 N-Boc-2- ( 4-苯胺基 -6-吗啉 -[1，3,5]三嗪 -2基）曱胺溶于 20亳升 20%三氟乙酸 /干燥二氯曱烷溶液， 常温反应 2小时后， 减压 蒸馏， 收集固体， 水洗多次， 得 2- ( 4-苯胺基 -6-吗啉- [1，3，5]三嗪 -2 基） 曱胺。
实施例 37
苯曱酸 3-甲氧基 -4-(((4-吗啉 -6- (苯胺基) - 1 ,3 ,5-三嗪 -2-基)曱基亚 氨基)曱基)苯脂 （Ic-1 )
将 (4-肼基 -6-吗啉 -4-基 -[1,3,5]三嗪 -2-基)苯胺替换成 2- ( 4-苯胺基 _6-吗啉 -[1,3，5]三嗪 -2基） 甲胺， 其余所需原料、 试剂及制备方法同 实施例 6,得苯甲酸 3-甲氧基 -4-(((4-吗啉 -6- (苯胺基) -1,3,5-三嗪 -2-基) 曱基亚氨基)曱基)苯脂。
实施例 38
2-Boc-氨基 -4-苯胺基 -6-氯 -[1,3，5]三嗪（XII-1 )
将 2,4,6-三氯 -[1,3，5]三嗪替换成 2-800氨基-4,6-二氯-[1,3，5]三 嗪， 其余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 1， 得 2-Boc-氨基 _4- 苯胺基 - 6-氯 -[1，3,5]三嗪。
实施例 39 2-Boc-氨基 -4-苯胺基 -6-吗啉 -[1，3，5]三嗪（XIII-1 ) 将 4,6-二氯 -[1，3,5]三嗪 -2-基苯胺替换成 2-Boc-氨基 -4-苯胺基 -6- 氯- [1,3，5]三嗪，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例 2,得 2-Boc - 氨基 -4-苯胺基 -6-吗啉 -[1,3,5]三嗪。
实施例 40
2 -氨基 -4-苯胺基 -6-吗啉 -[1,3,5]三嗪（XIV-1 )
将 N-Boc- 2- ( 4-苯胺基 -6-吗啉 -[1,3，5]三嗪 -2基） 曱胺替换成 2-Boc-氛基 -4-苯胺基 -6-吗啉 -[1，3,5]三嗪，其余所需原料、试剂及制备 方法同实施例 36, 得 2 -氨基 -4-苯胺基 -6-吗啉 -[1,3,5]三嗪。
实施例 41
苯甲酸 -3-曱氧基 -4- ( N-Boc氨基） -苯酯（XV-1 )
将 2-曱氧基 -4-羟基-苯曱醛替换成 2-甲氧基 -4-羟基 -N-Boc-苯胺， 其余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 4, 得苯曱酸 -3-甲氧基 -4- ( N-Boc氨基） -苯酯。
实施例 42
苯甲酸 -3-曱氧基 -4-氨基 -苯酯（ XVI-1 )
将 N-Boc-2- ( 4-苯胺基 -6-吗啉 -[1，3，5]三嗪 -2基）甲胺替换成苯曱 酸 -3-甲氧基 -4- ( N-Boc氨基） -苯酯， 其余所需原料、 试剂及制备方 法同实施例 36 , 得苯曱酸 -3-甲氧基 -4-氨基 -苯酯。
实施例 43
苯甲酸 3-甲氧基 -4-((4-吗啉 -6-苯胺基 -1，3，5-三嗪 -2-基氨基)亚曱 基氨基)苯酯（ ID-1 ) 将 100亳克 IXV-1和 1当量 XVI-l溶于适量四氢呋喃中，加入一 当量甲醛， 室温搅拌， 反应完成后减压蒸馏， 柱层析得化合物苯曱酸
3-甲氧基 -4-((4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3 ,5-三嗪 -2-基氨基)亚甲基氨基)苯酯。
实施例 44
2-((1,3-二巯基 -2-基)曱基) -4-苯胺基 -6-氯 -1,3,5-三嗪（XVII-1 ) 将 2,4,6-三氯 -[1，3,5]三嗪替换成 2-((1，3-二巯基 -2-基)甲基) -4,6-二 氯 -1,3，5-三嗪，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例 1 ,得 2- ((1,3- 二巯基 -2-基)甲基) -4-苯胺基 -6-氯 -1，3，5-三嗪。
实施例 45
2-((1，3-二巯基 -2-基)甲基) -4-苯胺基 -6-吗啉 -1,3，5-三嗪（XVIII-1 ) 将 4，6-二氯 -[1,3,5]三嗪 -2-基苯胺替换成 2- ((1,3-二巯基 -2-基)曱 基) -4-苯胺基 -6-氯 -1，3，5-三嗪， 其余所需原料、 试剂及制备方法同实 施例 2， 得 2-((1,3-二巯基 -2-基)甲基) -4-苯胺基 -6-吗啉 -1,3，5-三嗪。
实施例 46
2-乙醛基 -4-苯胺基 -6-吗啉 -1,3,5-三嗪（XIX-1 )
将 0.5克 2-((1,3-二巯基 -2-基)曱基) -4-苯胺基 -6-吗啉- 1，3,5-三嗪溶 于适量丙酮中，加入等当量的氯化铜和等当量的氧化铜，回流三小时， 柱层析得产物 2-乙醛基 -4-苯胺基 -6-吗啉- 1，3,5-三嗪。
实施例 47
苯曱酸 3-甲氧基 -4-(2-(4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3,5-三嗪 -2-基）乙缩酉筌 氨基)苯酯 （ IE-1 ) 将 (4-肼基 -6-吗啉 -4-基 -[1,3，5]三嗪 -2-基)苯胺和苯甲酸 -3-曱氧基 -4-甲酰基-苯酯分别替换成 2-乙醛基 -4-苯胺基 -6-吗啉- 1 ,3 ,5-三嗪和苯 曱酸 -3-曱氧基 -4-氨基-苯酯， 其余所需原料、 试剂及制备方法同实施 例 6， 得苯曱酸 3-曱氧基 -4-(2-(4-吗啉 -6-苯胺基 -1，3,5-三嗪 -2-基)乙缩 醛氨基)苯酯。 实施例 48
GST 标记的 HIV-1 整合酶（IN， integrase )的融合蛋白质粒 pGEX-4T-l-IN ( F185K )的构建：
(一） 实俭方法：
1 ) 用 PCR技术从 pUC18-IN质粒获得 IN的 DNA片段（基因 序列依据 AF040373(GE EBANK) )。
引物： FW: 5'-ata tgg ate ctt ttta gat gga ata gat-3'
RV: 5 '-ata tct cga get aat cct cat cct g-3'
94。C变性 5 min,然后开始循环： 94°C 45s, 55。C 45s, 72°C lmin30 s, 重复 29次循环， 然后 72。C 10min。
采用 1 %琼脂糖凝胶电泳鉴定 PCR产物并回收 PCR片段。
2 ) 将 IN PCR片段克隆到载体 pGEX-4T-l上： IN PCR产物和 pGEX-4T-l分别用 BamHI和 Xhol进行酶切反应；用胶回收试剂盒回 收酶切产物； 用 T4 DNA连接酶做连接反应； 连接产物转化到 DH5(x 感受态细月包涂布在含氨苄青霉素 （lOOmg/1 ) 的平板上； 通过酶切和 测序鉴定出正确的克隆。 3 ) 将 HIV-1整合酶 185位的苯丙氨酸突变成赖氨酸：本步骤 采用 Invitrogen公司的点突变试剂盒。
突变引物： FW: 5 ' -ggcagtattcatccacaataagaaaagaaaaggggggattgg-3 ' RV: 5，- ccaatccccccttttcttttcttattgtggatgaatactgcc -3，
通过测序确定发生正确突变的克隆质粒 PGEX-4T- 1-IN( F185K )。 (二） 实验结果
1 ) 琼脂糖凝胶电泳鉴定酶切结果： pGEX-4T-l载体的多克隆 位点上有 BamHI和 Xhol两个酶切位点， IN通过这两个位点克隆到 pGEX-4T-l上， 正硝的酶切结果切出 IN本身的片段约 900bp和载体 的片段约 4900bp;
2 ) 测序结果显示克隆的序列与 AF040373(GE EBANK)相同， 仅在序列的 553 - 555位由原有的" ttt"突变为 "aaa", 对应为 185位的 氨基酸由苯丙氨酸突变成赖氨酸。
实施例 49
GST标记的 HIV-1整合酶 ( GST-IN ) 的表达纯化：
(一） 实验方法
1 ) 将质粒 pGEX-4T-l-IN ( F185K )转入表达菌株 BL21(DE3) 中， 挑选正确的克隆在 37。C过夜振荡培养于 10 ml 氨苄 LB培养基 (酵母提取物 5g/L,胰蛋白胨 10g/L和 NaCl 10g/L, 氨苄青霉素浓度 为 100mg/L ) 中， 按 1 : 100转接到新鲜的氨苄 LB培养基中， 振荡 培养到 OD60Q值处于 0.6 - 0.8之间时，加入 IPTG至终浓度为 0.2 mM 并将培养温度降低至 25。C诱导蛋白表达 5 - 7小时。 5，000 rpm离心 lO min收集细菌， 用 PBS緩冲液悬洗细菌后再次离心， 并将收集的 细菌置于 -70。C水箱保存待用。
2 ) 待用的菌体用 20ml PBS悬起， 超声破碎细菌， 15,000rpm 离心 30min后取上清和已经用 PBS平衡好的 Glutathione Sepharose™ 4B亲和树脂在 4。C混匀 4 hrs, 穿过柱子后， 用 100-150ml PBS洗去 杂蛋白， 最后用 50mM GSH洗脱 GST标记的 IN。
3 ) 洗脱的蛋白溶液按照 Amersham Biosciences公司提供的说 明书利用 Hiload 16/60 Superdex75分子筛预装柱进一步分离纯化， 所 用溶液为 10mM HEPES和 150mM NaCl, 收集蛋白用 SDS-PAGE检 测纯度。
(二） 实验结果
8 % SDS-PAGE 并用考马斯亮蓝染色检测純化的蛋白： HIV-1 整合酶全长 282个氨基酸，加上大小为 27kD的 GST标记，整个融合 蛋白大小约为 60kD。 如图 1所示， 左边泳道为 marker, 右边则为纯 化好的蛋白 HIV-1整合酶， 染色后的 SDS-PAGE胶上可以清楚的看 到约 60kD处的条带， 判断純度大于 95 %。
实施例 50
利用生物传感器 Biacore 3000检测 IA-3与 HIV-1 ^酶的结合 活性：
(一） 实验方法
1 ) 将纯化好的 HIV-1 整合酶用氨基偶联的方法利用 Biacore 3000 自带的程序偶联到 CM5芯片上。 Biacore3000系统运行环境为 HBS-EP緩冲液（ 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA和 0.01% P20, pH 7.4 )。
2 ) 将不同浓度的 IA-3配成含 0.1%DMSO的 HBS-EP緩冲液 ( 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA和 0.01% P20, pH 7.4 ) 作动力学分析， 用 Biacore evaluation 3.2 软件分析得出该化合物和 fflV-1整合酶的平衡解离常数 KD。
(二） 实验结果
IA-3表现出对 HIV-1整合酶很高的结合活性 ΚΕ)=0.38μΜ (图 2 ) 实施例 51
用生物传感器测定 PLK275对 HIV-1整合酶的 ICSQ值：
(―) 实验方法
1 )将 HIV-1整合酶的底物类似物偶联到生物传感器 SA芯片上： 根据 HIV-1整合酶的病毒 DNA末端底物序列设计合成底物类似 DNA , 并在 5，端加上生物素 （ biotin ) 标记。 序列 ： biotin-5 '-GTGTGGAAAATCTCTAGGTGT-3 ' 0将合成的带生物素标记 的 DNA利用生物素和链霉素结合的原理偶联到 SA芯片。
2 ) 生物传感器测定 IA-3对 HIV-1整合酶的 IC50值：
将纯化好的 HIV-1整合酶和不同浓度的 IA-3在冰上孵育 1小时 后作动力学分析， 因为化合物竟争结合 HIV-1整合酶，使得 HIV- 1整 合酶对芯片上底物 DNA类似物的结合能力下降， 表现为 RU值的下 降。 根据化合物的不同浓度对应的 RU值与浓度作图， 用软件 Origin 分析得出化合物的 IC50值。 (二） 实验结果
由图 3可以看到随着化合物浓度的增加， HIV-1整合酶对 SA 芯片的 RU值下降。根据化合物的不同浓度对应的 RU值与浓度作图， 用 Origin分析得出化合物 IA-3的 IC50值为 0.97μΜ。
实施例 52 Xs2等十二个化合物体外抗 HIV-1活性
1.材料和方法
(1) 药物和化合物
待测样品 Xs2, Xsl9, Xs32, Xs77, XsF2, XsF9, Xs274， Xs275, Xs276/ Xs277, Xs278, Xs279由中国科学院上海药物研究所沈旭教 授提供。 阳性对照化合物叠氮胸苷 （3'-Azido-3 '-deoxythymidine , AZT )购自 Sigma公司'。 十二个样品均溶解于 DMSO中， 贮存液浓 度为 25mg/ml,储存条件为： -20 °C ; AZT溶解于 RPMI- 1640完全培 养基中， 0.22 μ ηι滤膜过滤除菌， 分装后 -20Ό保存。
(2)试剂和溶液 a.试剂
HEPES (N-2 (2-Hydroxyothyl) piperazine-N'-(2-ethanesufonic acid)、 MTT (3 ,(4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide), DMF ( , ' -Dimethyl formamine). 青霉素 ( Penicillin )、 酸链霉素（Streptomycin sulfate )、 谷氨酰胺 (Glutamine)均购自 Sigma 公司； 2 -巯基乙醇 (2 - ME, 2-Mercaptoethanol)为 Bio-Rad公司产品。 RPMI - 1640和新生小牛血清为 Gibco公司产品。
b.培养基 RPMI-1640完全培养基， 含有 10 %灭活新生小牛血清， 2 mM L- 谷氨酰胺， lOMmHEPES, 50 μΜ2-巯基乙醇， 100,000 IU青霉素， lOO g/ml链霉素。
(3) 细胞和病毒
人 T淋巴细包系 C8166、 MT4细胞及 HIV-1实验株 HIV-1趣均 由英国 Medical Research Council, AIDS Reagent Project惠赠。 所有细 胞和病毒均以含 10%小牛血清的 RPMI-1640完全培养基进行培养。 按常规方法制备 HIV-lmB, 滴定并计算出病毒的 TCID5。。 病毒贮存液 分装后， 置 -70°C保存。 细胞和病毒按常规方法冻存和复苏。
(4) HIV-1感染性滴定
HIV- 1 IIIB按 Johnson & Byington所述方法改良进行滴定， 简述 如下： 将 HIV-1贮存液在 96孔板上作 4倍稀释， 10个梯度， 每梯度 6个重复孔， 同时设置对照孔 6孔。 每孔加入 C8166细胞 50 μΐ (4 105/ ml), 每孔终体积为 200 μ1。 37。C, 5% C02培养。 第三天补加 新鲜 RPMI-1640完全培养基 100 μΐ, 第七天在倒置显微镜下观察每 孔中 HIV-1诱导的细胞病变效应 ( Cytopathic effect, CPE )，以每孔是 否有合胞体 ( Syncytium ) 的形成确定； 按 Reed&Muench方法计算 病毒的 TCID5o ( 50 % Tissue culture infection dose )。
(5) 化合物对 C8166细胞的毒性实验
4 105/ml C8166细胞悬液 lOOul与不同的待测化合物溶液混合， 设三个重复孔。 同时设置不含化合物的对照孔, 37°C， 5% C02培养 3 天， 采用 MTT比色法检测细胞毒性。 ELx800酶标仪测定 OD值， 测定波长为 595nm, 参考波长为 630 nm。 计算得到 CC5Q值 ( 50 % Cytotoxic concentration )， 即对 50%的正常 T淋巴细胞系 C8166产生 毒性时的化合物浓度。
(6) 化合物 HIV-1IIIB致细胞病变 (CPE)的抑制实验
将 8 X 105/ml C8166细胞 50ul/孔接种到含有 100 μ ΐ/孔梯度倍比 稀释化合物的 96孔细胞培养板上， 然后加入 50 μ 1的 HIV-1IIIB稀释 上清， 1300 TCID5。/孔。 设 3个重复孔。 同时设置不含化合物的正常 细胞对照孔。 AZT为阳性药物对照。 37°C, 5°/。C02培养 3天， 倒置显 微镜下（100 X )计数合胞体的形成。 EC5Q(50 % Effective concentration) 为抑制合胞体形成 50 %时的化合物浓度。
(7)化合物对 HIV-1感染 MT4细胞的保护作用实验
将 8 X 105/ml MT4细胞 50ul/孔接种到含有 ΙΟΟμΙ/孔倍比稀释化合 物的 96孔细胞培养板上， 培养板的一半孔加入 50 μ ΐ的 HIV-lmB # 释 (M.O.I.=006), 另一半孔加入 50μ1培养基。 每个浓度梯度 2个重复 孔，同时设置不含化合物的对照孔和空白对照孔， 37°C , 5% C02培养， 第三天每孔补加 ΙΟΟμΙ新鲜培养基， 第五天或第六天采用 ΜΤΤ比色 法检测细胞存活率。 ELx800 ELISA仪测定 OD值，测定波长为 595nm, 参考波长为 630 nm。 用公式计算出化合物对正常细胞的毒性和对 HIV-1IIIB感染细胞的保护作用。 -
(8) 计算公式
根据实验结果绘制剂量反应曲线，按 Reed &Muench法计算出化 合物抑制病毒的 50 %有效浓度( £(¾。）, 50 %抑制细胞生长浓度（ CC50 ) 及抗 HIV-1活性的治疗指数( Therapeutic index, TI )为： ΤΙ = CC5G/EC50。
1、 细胞生长存活率 (％) =实验孔 OD值 /对照孔 OD值 X 100 (
2、 HIV-1 致细胞病变的抑制率(％) = (1-实验孔合胞体数 /对照孔 合胞体数） X 100
3、感染细胞的保护率（％ ) = (实验孔 OD值 -阳性对照孔 OD值） I (阴性对照孔 OD值 -阳性对照孔 OD值） X 100
2.结果
(1)化合物对人 T淋巴细胞系 C8166细胞的毒性作用 表 1 化合物对 C8166细胞的毒性作用的实验数据
化合物 浓度 细胞存活率土 SD CC50
( g/ml) ( % ) ( /ml)
Xs2 200 -0.86 ± 0.14 13.21
40 -0.67 ± 0.08
8 72.94 ± 3.33
1.6 84.63 土 5.25
0.32 88.89 ± 2.66
0.064 92.53 土 8.87
Xsl9 200 1.35 ± 0.41 73.11
40 79.15 + 2.16
8 82.93土 3.73
1.6 99.14 + 4.11 0.32 86.33 ± 6.34
0.064 93.63 ± 3.17
Xs32 200 1.57 ± 0.19 17.27
40 2.59 ± 1.12
8 93.46 + 7.75
1.6 100.70 + 0.99
0.32 94.33 + 7.31
0.064 100.05 ± 1.72
Xs77 200 8.33 ± 0.19 26.36
40 32.73 + 2.80
8 99.39 + 2.58
1.6 103.26 + 1.86
0.32 103.59 ± 4.24
0.064 106.62 ± 1.31
XsF2 200 -0.05 + 0.17 19.80
40 11.64 + 2.52
8 99.43 + 5.13
1.6 96.46 + 10.28
0.32 93.25 ± 3.74
0.064 95.64 ± 5.82
XsF9 200 1.39 ± 1.33 22.61
40 21.46 ± 1.60 8 101.96 ±2.83
1.6 96.31 ±1.81
0.32 98.04 ±1.41
0.064 93.44 ±1.90
Xs274 200 41.40 ±9.67 158.16
40 100.34 ±10.34
8 95.35 ±2.78
1.6 93.41 ±2.57
0.32 93.32 + 5.46
0.064 95.69 ±4.13
Xs275 200 114.24 + 3.98 >200
40 110.38 ±4.84
8 111.81 ±8.04
1.6 113.74 ±2.59
0.32 108.78 ±4.64
0.064 100.72 ±8.24
Xs276 200 38.36 + 2.16 102.98
40 66.58 + 5.31
8 82.00 ± 5.58
1.6 93.20 ±2.34
0.32 95.61 ±3.96
0.064 101.86 ±2.82 Xs277 200 63.17 ± 13.67 >200
40 67.84 ± 8.62
8 69.40 ± 9.88
1.6 74.15+2.34
0.32 80.50 ± 9.42
0.064 80.92 ± 10.90
Xs278 200 31.28 + 3.04 45.34
40 51.58 ±4.23
8 86.01 ±2.21
1.6 89.70 + 0.17
0.32 90.50 + 2.11
0.064 92.59 ±3.31
Xs279 200 13.00 ±0.63 64.12
40 65.34 ±0.93
8 87.46 + 1.70
1.6 85.52 ±3.22
0.32 91.03 ±1.98
0.064 88.94 ± 1.38
AZT 2000 16.03+0.38 989.03
400 93.67 ± 8.43
80 95.15 ±2.13
16 105.03土 14.99 3.2 90.08 ±7.30
(2) 化合物对 HIV-1IIIB诱导 C8166细胞病变的抑制作用 表 2.化合物对 fflV-lIIIB诱导 C8166细胞病变的抑制作用实验数 化合物 浓度 抑制 率 士 SD EC5o
( % ) ( μ g/ml)
Xs2 200 100 ±0.00 1.65
40 100 ±0.00
8 100 + 0.00
1.6 49.02 + 8.99
0.32 12.25 + 3.47
Xsl9 200 100.00 + 0.00 2.84
40 100.00 ± 0.00
8 75.81+4.87
1.6 35.69 ±5.03
0.32 30.97 + 2.50
Xs32 200 100 ±0.00 7.85
40 100 ±0.00
8 50.74 + 7.15
1.6 -10.32 + 3.68 0.32 -16.81 ±2.50
Xs77 200 100 ±0.00 1.66
40 100 ±0.00
8 48.84 ±3.82
1.6 27.78 ± 1.39
XsF2 200 100 ±0.00 6.61
40 100 ±0.00
8 22.55 + 2.94
1.6 6.54 ±3.71
0.32 0.00 ±5.19
XsF9 200 100 ±0.00 5.50
40 100 + 0.00
8 61.76 ±6.93
1.6 11.27 ±6.24
0.32 23.04 + 9.01
Xs274 200 100.00士 0.00 10.95
40 77.57 ±5.09
8 43.32 ±4.94
1.6 10.30 ±5,78
0.32 7.85 + 3.08
Xs275 200 100 ±0.00 2.27
40 97,96 ± 1.87 8 71.05 ± 1.87
1.6 44.14 ±3.08
0.32 20.90 ± 6.28
Xs276 200 100.00 ±0.00 1.03
40 100.00 + 0.00
8 82.87 ± 4.24
1.6 61.26 ±8.14
0.32 20,08士 5.78
Xs277 200 100.00 ±0.00 0.55
40 96.85 ± 1.31
8 85.69 ±3.25
1.6 68.24 ±0.00
0.32 40.77 + 6.81
0.064 37.05 + 4.32
Xs278 200 100.00 ±0.00 0.29
40 100.00 + 0.00
8 91.13 + 1.79
1.6 79,40 ± 1.49
0.32 53.08 ±5.72
0.064 9.87 + 8.96
Xs279 200 100.00 ±0.00 2.28
40 98.86 + 1.98 8 66.09 + 0.61
1.6 45.49 ± 5.46
0.32 11.16 ± 1.82
AZT 1 100 + 0.00 0.0038
0.2 100 ± 0.00 0.04 92.63 + 1.02 0.008 73.45 ± 4.42 0.0016 39.82 + 1.77
(3) 化合物对 HIV-lmB感染 MT4细胞的保护作用 表 3. 化合物对实验株 HIV-1„IB感染 MT4细胞保护作用的实验 数据
化合物 浓度 存活率 ±SD 保护率 ±SD CCso EC50 治疗指数
( g/ml ) ( % ) ( % ) (pg/ml)
Xs2 200 7.58±8.93 16.27±1.06
40 1.26±3.83 14.63±0.21 19.23 无活性
8 108.39±6.51 49.78±15.73
1.6 108.75±2.17 0.00±0.42
0.32 109.39±2.81 -0.60±0.63
Xsl9 200 1.80±0.40 19.54±1.09
40 127.08±14.46 85.54±3.26
8 101.04±11.92 2.15±1.74 5.35
107.67 20.14
1.6 100.47±15.94 0.38±0.11
0.32 91.38±2.28 1.15±0.33
0.064 90.25±3.62 3.92±1.63
Xs32 200 -2.44±2.17 17.39±0.11 16.69
40 -3.34±2.17 14.85±0.11 无活性
8 94.86± 16.21 8.88±2.43 ος
ZfS£ ΟΟΖ < 99'ΡΪ ΖΖτί OOZ
6Γ0干 S9O 乙 Γ£干乙8'98 WOO
OO'OTSS'O 1/6Ό干 09·08 ZZ'O
9f6WL9 9·ΐ
L6'£Z fr9'frn
SL'P 09'6 L9'ZS 8
Figure imgf000052_0001
OOZ
Z-8"lT39'l 干 8乙 '96 WOO
干 on ΙΓζτ98"ΐΐΐ Ζί'Ο
9Ό干 6Γ0 S £干 8Ζ/ΖΠ 91
IV0£ OdZ <
W9< 39 Τ9^Όΐ ΙΓ 干 SO'96 8
ί8 干 80'9Π OP
ΙΓ9 9ξ 9 OOZ
ΐΓΟ干 6S'0一 WOO
ιε·ο干乙 ro ΐΐ·9干 ·66 Ζί'Ο
^{'^lf 90Ί6 ΟΓΟ干乙 ΟΌ εε·ς干 9" I
干 6 8
6 Ζ Ζ9-6£ £8·Π干 Π·ίΠ O
ΟΓΟ干 O 干 917'8_ 003
乙1'0干80'0- 68"lWO0I ZZ'O
£0'S干 9S'£ 9· I
6S'Ll 6ΓΙΤ1Γ9 99'W干 6t'66 8
ςο·ι干 π·6ΐ Ot^
6 Ο干 LVZT6£'£ 003
ινο ινο- IV91 0V001 Z£'0
乙 ΐ7'ο干 εε'ο- 6ε·9干 9"l
SZ,'8X 6SO干 Ι1 ΐ SS' T86'90I 8
SO'lW81 ε//ο干 is'o- 017
09'ΐ ίςτ- ΓΟ干 ζ9'0 90O
οο'ο干 sro- L£'i 06'Z6 Z£'0
9'ΐ
ZS'9L
96"ΐΤ36'8 8
1?6'ZTS9"69 O
LZ'OWS OOZ SX
9£'S干 ·96 WOO
00ΌΤ09 - 8干 £Γ 01 Z O
IZ TSrO- 9Ί ^SC00/900ZN3/X3d 66ΪΙΖ.0/.00Ζ OAV 40 91.71±13.60 53.98±0.87一
8 85.90±10.79 2.47±1.16 〉5.66
1.6 89.64±0.82 0.27±0.19
0.32 88.47±5.51 0.34±0.68
0.064 94.20±5.16 -0.14±0.58
Xs278 200 30.63±0.31 39.10±0.27
40 71.56±1.34 48.42±7.35
8 99.49±7.75 48.54±3.23
93.38
1.6 103.51±6.41 7.73±9.50 无活性
0.32 97.22±9.30 0.13±0.54
0.064 106.36±7.75 0.06±0.63
Xs279 200 4.17±0.10 15.40±0.81
40 35.01±4.24 30.42±3.58
8 99.20±8.58 8.81±6.90
27.47 无活性
1.6 100.15±2.89 0.32±0.27
0.32 105.34±1.14 0.13±0.54
0.064 103.44±1.55 0.32±1.52
1 119.44±2.88 108.50±6.49 >1 0.096 >10
AZT 0.2 112.59±6.29 66.60±1.10
0.04 107.31±6.15 29.98±18.09
0.008 110.56±4.98 2.54±1.10
0.0016 107.87±3.27 1.37土 0.83
0.00032 121.67±13.09 2.93±1.66
3.试验结果汇总
表 4: 化合物体外细胞毒性和抗 HIV-1活性结果汇总表: 化合物 实验 方法 CC50 EC50 EC50 治疗指数
( g/ml ) ( μ§/ηι1 )第 ( g/ml ) ( TI )
一次 第二次
Xs2 细月包毒性实 MTT 13.21 8.01-3.34 验
致细胞病变 CPE 1.65 3.95
抑制实验
感染细胞保 MTT 19.23 无活性
护作用实验
Xsl9 细胞毒性实 MTT 73.11 25.74-26.5
验 致细胞病变 CPE 2.84 2.76
抑制实验
感染细胞保 MTT 107.67 20.14 5.35 护作用实验
Xs32 细 &毒性实 MTT 17.27 2.07-0.97 验
致细胞病变 'CPE 7.85 16.79
抑制实验
感染细胞保 MTT 16.69 无活性
护作用实验
Xs77 细胞毒性实 MTT 26.36 15.9-16.4
验
致细胞病变 CPE 1.66 1.61
抑制实验
感染细胞保 MTT 76.82 23.8 3.23 护作用实验
XsF2 细胞毒性实 MTT 19.80 3.00-1.43 验
致细胞病变 CPE 6.61 13.83
抑制实验
感染细胞保 MTT 18.75 无活性
护作用实验
XsF9 细胞毒性实 MTT 22.61 4.11-2.82 验
致细 包病变 CPE 5.50 8.03
抑制实验
感染细胞保 MTT 17.89 无活性
护作用实验
Xs274 细胞毒性实 MTT 158.15 14.44
验
致细胞病变 CPE 10.95
抑制实验
感染细胞保 MTT 91.06 无活性
护作用实验
Xs275 细胞毒性实 MTT > 200 > 176.99- >
验 88.11 致细胞病变 CPE 1.13 2.27
抑制实验
感染细胞保 MTT > 200 30.11 > 6.64 护作用实驗
Xs276 细胞毒性实 MTT 102.98 99.98
验
致细胞病变 CPE 1.03
抑制实验 感染细胞保 MTT 114.64 23.97 4.78 护作用实验
Xs277 细胞毒性实 MTT > 200 363.64
验
致细胞病变 CPE 0.55
抑制实验
感染细胞保 MTT > 200 35.32 > 5.66 护作用实验
Xs278 细胞毒性实 MTT 45.34 156.34
验
致细胞病变 CPE 0.29
抑制实验
感染细胞保 MTT 93.38 无活性
护作用实验
Xs279 细胞毒性实 MTT 64.12 28.12
验
致细胞病变 CPE 2.28
抑制实验
感染细胞保 MTT 27.47 无活性
护作用实验
AZT 细胞毒性实 MTT 989.03 260271.05 验
致细胞病变 CPE 0.0038
抑制实验
感染细胞保 MTT > 1 0.096 > 10 护作用实验
本发明所示化合物与 HIV-1整合酶具有很高结合活性，并且在底 物竟争测试中能够有效的抑制整合酶对底物的结合。 本发明者还发 现， 实施例 8 ( IA-3 )所揭示的化合物在体外抗 HIV病毒实验中， 对 C8166细胞的毒性较小， CC50大于 20(^g/ml, 对 HIV-1诱导 C8166 细胞形成合胞体抑制的 EC50 为 1.13-2.41 g/ml , 治疗指数 TI 为 177.46 ~ 73.63 , 进一步证实了这类化合物抗 HIV病毒的作用。
工业实用性 本发明的 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1，3,5]三嗪或 1，3-嘧啶类化合物 的制备方法具有反应条件温和、原料丰富易得、操作及后处理筒单等 优点。
本发明的 2，4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物 在计算机虚拟筛选以及与 HIV-1整合酶的结合常数，并且在底物竟争 测试中能够有效的抑制整合酶对底物的结合。 验证了抗 HIV 病毒感 染的作用机制。
本发明的化合物毒性很低。
因此， 本发明的化合物可用于制备治疗 HIV病毒感染疾病的药 物。

Claims

权利要求 书
1. 一类结构如下式（I )的 2，4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1，3-嘧啶'类化合物、 其对映异构体、 非对映异构体、 外消旋体和混合 物， 以及其与可药用酸和碱所成的盐
Figure imgf000057_0001
其中：
X选自 C或 N;
Y选自 0或 H;
A选自 CH、 CH2、 N或 NH;
B选自 CH、 CH2、 N或 NH;
Z表示原子或原子的基团， 其中， 所述原子为碳原子或氮原子， 所述原子的基团为被选自氢原子、 卤素、 卤代 C1 ~ C3的烷基、 Cl ~ C6 的直链或支链烃基、 氰基、 硝基、 氨基、 羟基、 羟曱基、 三氟曱 基、 三氟甲氧基、 羧基、 C1-C4 的烷氧基、 巯基、 C1-C4 的酰基 和芳香基 Ar的一个基团所取代的碳原子； n为选自 0至 3的整数； 虚线表示单键或双键；
1^选自氢、 ~C6直链或支链的饱和或不饱和烃基、 C3~C7环 烃基、 烷酰基 RCO、 芳香酰基 ArCO、 烷磺酰基 RS02、 芳香磺酰基 ArS02、 苄基、 芳香基 Ar、 5 ~ 7元芳香杂环（含有 1 ~ 3个选自氧、 硫、 氮的杂原子， 可被苯基和芳香杂环并合， 或被一个或多个选自卤 素、 C^ 直链或支链烃基、 氰基、 硝基、 氨基、 羟基、 羟曱基、 三 氟曱基、 三氟甲氧基、 羧基、 ~C4烷氧基、 巯基、 ~C4酰基、 芳香基 Ar的基团所取代）；
R2选自氢、 卤素、 d~C6直链或支链烃基、 （^~(：4直链或支链 烷氧基、 氰基、 三氟甲基、 三氟甲氧基， 或者为 R!Y-基团；
R3、 、 和 各自独立地选自氢、 ~C6直链或支链的饱和 或不饱和烷基及烷氧基、 C3~C7环烃基、 苄基、 芳香基 Ar、 5~7元 芳香杂环（含有 1~3个选自氧、 硫、 氮的杂原子， 可被苯基和芳香 杂环并合，或被一个或多个选自 素， d~C6直链或支链烃基、氰基、 硝基、 氨基、 羟基、 羟甲基、 三氟曱基、 三氟曱氧基、 羧基、 c,~c4 烷氧基、 巯基、 d~C4酰基、 芳香基 Ar的基团所取代）； 芳香基 Ar可以是苯基、取代苯基 (取代基可以是 1 ~ 4个选自卤 素、 d ~ C6直链或支链烃基、 氰基、硝基、 氨基、 羟基、 羟甲基、 三 氟甲基、 三氟曱氧基、 羧基、 d ~ C4烷氧基、 巯基、 ~ C4酰基的 基团）、 萘基、 联苯基。
2.如权利要求 1所述的 2，4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1,3- 嘧啶类化合物， 其中：
X是 N;
Y是 0;
A、 B、 Z、 n、 、 R2、 R3、 、 R5和 Re的定义同权利要求 1。
3.如权利要求 1所述的 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1，3- 嘧啶类化合物， 其中：
X是 N;
Y是 NH;
A、 B、 Z、 n、 R!、 R2、 R3、 、 R5和 R6的定义同权利要求 1。
4.如权利要求 1所述的 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1,3- 嘧啶类化合物， 其中：
X是 C;
Y是 0; A, B, Z, n， Rj , R2, R3, , R5和 R6的定义同权利要求 1。
5.如权利要求 1所述的 2，4_二取代氨基 -6-取代 -[1，3，5]三嗪或 1，3_ 嘧啶类化合物， 其中：
X是 C;
Y是 NH;
A、 B、 Z、 n、 、 R2、 R3、 、 和 的定义同权利要求 1。
6.如权利要求 1所述的 2，4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3，5]三嗪或 1,3- 嘧啶类化合物， 其中：
A是 C;
B是 N;
X、 Y、 Z、 n、 R!、 R2、 R3、 、 R5和 的定义同权利要求 1。
7.如权利要求 1所述的 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1，3,5]三嗪或 1,3- 嘧啶类化合物， 其中：
A是 CH;
B是 CH;
X、 Y、 Z n、 R2、 R3、 、 和 R6的定义同权利要求 1。
8.如权利要求 1所述的 2，4-二取代氨基 -6-取代 -[1，3，5]三嗪或 1,3- 嘧啶类化合物， 其中： A是 CH; B N;
X、 Y、 Z、 n、 Ri , R2、 R3、 , 1 5和 的定义同权利要求 1。
9.如权利要求 1所述的 2，4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1，3- 嘧啶类化合物， 其中：
A是 N;
B是 CH;
X、 Y、 Ζ、 η、 、 R2、 R3、 、 R5和 的定义同权利要求 1。
10. 如权利要求 1 所述的 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1，3,5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物， 其中：
A是 N;
B是 N;
X、 Y、 Ζ、 η、 、 R2、 R3、 、 R5和 Re的定义同权利要求 1。
11. 如权利要求 1 所述的 2，4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1,3_嘧啶类化合物， 其中：
Z是 NH;
X、 Y、 Α、 Β、 η、 、 R2、 R3、 、 R5和 的定义同权利要求
12. 如权利要求 1 所述的 2,4-二取代氨基- ^取代 -[1，3,5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物， 其特征在于， 该化合物为：
4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3,5]三嗪 -2-基) -亚肼基甲基 ]-1,3-苯 二酚，
2-氯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) - 肼甲烯基] -苯酯， 苯甲酸 3-苯曱酰氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3,5]三嗪 -2- 基)-肼甲烯基] -苯酯，
2-乙酰氧基苯曱酸 3-(2-乙酰氧基苯曱酰氧基 )-4-[(4-吗啉 -4-基 -6- 苯氨基 -[1,3，5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯，
4-特戊酰氧基苯曱酸 3-(4-特戊酰氧基苯曱酰氧基) -4-[(4-吗啉 -4- 基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯，
2-羟基苯甲酸 3-(2-羟基苯曱酰氧基) -4-[(4-吗啉- 4-基 -6-苯氨基 -[1 ,3，5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯，
2-氨基苯甲酸 3-(2-氨基苯曱酰氧基 )-4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3, 5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯，
2-乙酰氨基苯曱酸 3-(2-乙酰氨基苯甲酰氧基 )-4- [(4-吗啉- 4-基- 6- 苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基)-肼曱烯基] -苯酯 , Ν,Ν-二曱氨基曱酸 3-( Ν,Ν-二曱氨基甲酰氧基) -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3，5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯，
Ν-曱氨基曱酸 3-( Ν-甲氨基甲酰氧基) -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3,5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯， 丁二酸 3-(3-羟甲酰基丙酰氧基） -4-[(4-吗啉 -4-基- 6-苯氨基 -[1 ,3 ,5]三嗪 -2-基) -肼曱烯基] -苯酯， 苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) r肼 曱烯基] -苯酯，
(4_{Λ '_[4-(3-溴苄氧基) -2-曱氧基-苄稀基] -肼基 }- 6-吗啉 -4-基 -[1,3，5]-三嗪 -2-基) -苯胺，
3-溴苯曱酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3,5]三嗪 _2-基) - 肼曱烯基]-苯酯，
4-三氟甲基苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[13,5]三 嗪 -2-基)-肼曱烯基] -苯酯，
4-曱基苯磺酸酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 - [1,3,5]三嗪 - 2-基) -肼曱烯基]-苯酯，
3-溴苯甲酸 2-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 - [1,3,5]三嗪 -2-基) - 肼曱烯基]—苯酯， 3-溴苯曱酸 2-乙氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1，3，5]三嗪 -2-基) - 肼曱烯基] -苯酯，
3-溴苯曱酸 3-曱氧基 -4-{[4-苯氨基 -6-(4-氨磺酰基苯氨基 HU,5] 三嗪 -2-基] -肼曱烯基 } -苯酯，
4-氯苯曱酸 3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪- 2-基) - 肼甲婦基]-苯酯，
4-溴苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉- 4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) - 肼曱烯基] -苯酯，
4-氯苯曱酸 3-羟基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基)-肼 曱烯基] -苯酯，
2,6-二氯苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯，
3-曱氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基- [1，3,5]三嗪 -2-基) -亚肼基曱 基] -苯酚，
4-曱氧基苯甲酸 3-甲氧基 -4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼甲烯基] -苯酯，
3-溴苯曱酸 4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) -肼曱烯 基]-苯酯, 3-溴苯甲酸 4-[(4，6-二 (4-甲氧基苯氨基) -[1 ,3,5]三嗪 -2-基) -肼甲烯 基] -苯酯，
N-{4-[(4-吗啉 -4-基 -6-苯氨基 -[1,3,5]三嗪 -2-基) - 肼甲烯基]苯 基}-3-溴苯甲酰胺，
N'-(2,4-二羟基苯基) -N-(4-吗啉 -6-苯胺基- 1 ,3 ,5-三嗪 -2-基)甲咪， 苯曱酸 3-甲氧基 -4-((4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3，5-三嗪 -2-基氨基)亚曱 基氨基)苯酯，
4- (2-(4-吗啉 -6-苯胺基- 1，3,5-三嗪 -2-基)乙缩醛氨基） - 1 ,3-苯二酚， 苯甲酸 3-甲氧基 -4-(2-(4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3,5-三嗪 -2-基）乙缩醛 氨基)苯酯，
4-(2-(4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3，5-三嗪 -2-基氨基）乙烯基） -1,3-苯二酚， 苯甲酸 3-曱氧基 -4-((4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3,5-三嗪 -2-基氨基)乙烯 基)苯酯，
4-(3-(4-吗啉 -6-苯胺基 -1,3，5-三嗪 -2-基)丙 -1-烯基） -1,3-苯二酚， 苯甲酸 3-曱氧基 -4-(2-(4-吗啉- 6-苯胺基 -1，3,5-三嗪- 2-基） 丙 -1-烯 基)苯酯，
4-(((4-吗啉 -6-苯胺基 -1，3，5-三嗪 -2-基)曱基亚氨基)曱基） -I,3-苯 二 ， 或 苯曱酸 3-甲氧基 -4-(((4-吗啉 -6- (苯胺基) -1,3,5-三嗪 -2-基)曱基亚 氨基)曱基)苯酯。
13. 一种制备权利要求 2 ~ 12任一项所述的 2,4-二取代氨基 -6- 取代 -[1，3，5]三嗪或 1,3-嘧啶类化合物的方法， 其特征在于， 该方法包 括以下步驟：
1 ) 4，6-二氯 -[1,3,5]三嗪 -2-基 取代胺类化合物 II的合成： 向 2,4,6-三氯 -[1,3,5]三嗪的丙酮溶液中加入等当量的取代胺和 碱， ；水浴搅拌 2-48小时； 将反应液倾入大量水中， 搅拌 30分钟， 析 出大量固体， 抽滤， 水洗， 干燥得产物 II； 合成策略如下：
Figure imgf000066_0001
^-耳^^^-氯- -取代- ^^三嗪-二胺类化合物^^, IX, XII, XVII的合成： 向 4,6-二氯 -[1,3,5]三嗪 -2-取代化合物的二氧六环溶液中加入等 当量的取代胺和碱， 水浴搅拌 2 ~ 48小时； 将反应液倾入大量水中， 搅拌 30分钟， 析出大量固体， 抽滤， 水洗， 干燥得产物 III， IX, XII, XVII； 合成策略如下: CI ci
N人 N N人 N
5 Rs、 A 丄 R
II III
, . NHBoc
H2C H2CTNHBOC
N人 N N
CI八 N 、CI CI N NI
R ： -
NHBoc NHBoc R NI
、 NN _ N' 、、N
C .V人 N C Λ—I CI人 N人 · ' R!
XII
Figure imgf000067_0001
3 ) 2,4,6-三取代 -[1,3,5]三嗪-二胺类化合物 IV, X, XIII, XVIII 的合成： 将 4,6-二氯 -[1，3，5]三嗪 -2-取代化合物与过量的取代胺反应，回流 搅拌 3 ~ 24 小时， 冷至室温， 抽滤， 干燥， 得产物 IV, X, XIII, XVIII； 合成策略如下: R 5i
Figure imgf000068_0001
XVIII
4 ) Γ-取代 -R2取代类化合物 V， XV的合成:
将醛或保护过的胺与过量酰卤 /烷卤在碱性条件下， 控温 20~70 V, 搅拌 5〜24小时， 将反应液倾入大量水中， 有机溶剂萃取， 依次 用酸洗、 碱洗、 水洗， 干燥， 过滤， 减压蒸除溶剂得产物 V， XV； 合成策略如下：
Figure imgf000069_0001
HY、
NHBoc
Figure imgf000069_0002
XV
5 ) 2，6-二氯 -嘧啶 -4-基-取代胺类化合物 VI的合成： 将 2,4,6-三氯嘧啶与过量取代胺在碱性条件下， 回流搅拌 10 ~ 48 小时， 冷至室温， 加大量水， 抽滤， 干燥得产物 VI； 合成策略如下：
Figure imgf000069_0003
6 ) 6-氯 -N^iV4-多取代 -嘧啶 -2,4-二胺类化合物 VII的合成： 化合物 VI与过量的取代胺在碱性条件下，回流搅拌 10 ~ 48小 冷至室温， 加大量水， 抽滤， 干燥得产物 VII； 合成策略如下：
Figure imgf000069_0004
7 ) 6-肼代 -N^N4-多取代 -嘧啶 -2,4-二胺类化合物 VIII的合成： 将化合物 VII与过量的水合肼反应， 回流搅拌 3 ~ 24小时， 冷至 室温， 抽滤， 干燥， 得产物 VIII；
合成策略如下：
Figure imgf000070_0001
IV V
Figure imgf000071_0001
、
Figure imgf000071_0002
XI V
Figure imgf000071_0003
XIV XV]
ID ,R5
N
14. 如权利要求 13所述的制备方法， 其中各步中所用的碱可以 是无机碱， 如碳酸钠、 碳酸钾、 氢氧化钠、 碳酸氢钠， 也可以是各种 有机碱， 如三乙胺、 二乙胺、 吡啶； 步驟 1 Y，- .3中所用丙酮、 二氧六 环溶剂， 可互换， 也可替换成甲醇、 THF、 丙醇、 异丙醇； 步骤 8中 所用酸可以是冰醋酸、 盐酸、 硫酸、 磷酸。
15. 如权利要求 13所述的制备方法， 各步所得产物可分别提纯， 得到纯产物。
16. 如权利要求 13所述的制备方法， 其中提纯的方法包括柱层 析或重结晶。
17. 一种药用组合物， 其特征在于， 该药用组合物包含权利要求 1 ~ 12任一项所述的 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1,3-嘧啶类 化合物和赋形剂、 载体或稀释剂。
18. 如权利要求 17所述的药用组合物， 其制剂配方的单位剂量 中包含 0.05mg ~ 200mg的所述化合物。
19. 如权利要求 17所述的药用组合物， 其制剂配方的单位剂量 中包含 O.lmg ~ lOOmg的所述化合物。
20. 如权利要求 17所述的药用组合物， 其给药途径包含口服、 鼻腔吸入、 透皮吸收、 肺部给药以及非肠道的注射给药。
21. 如权利要求 17所述的药用组合物， 其特征在于： 其用于治 疗时， 4巴它与其它的抗 HIV病毒感染药物结合使用。
22. 根据权利要求 17所述的药用組合物， 其特征在于： 它以与 其它的抗 HIV病毒感染药物的组合物形式存在， 选择性地， 在药物 包装时以分开的单位剂量形式存在。
23. 权利要求 1所述的 2,4-二取代氨基 -6-取代 -[1,3,5]三嗪或 1,3- 嘧啶类化合物或包含权利要求 1 所述化合物的药用組合物在预防和 治疗 HIV病毒感染及其相关疾病中的应用。
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