WO2007023880A1 - ケモカイン産生阻害剤 - Google Patents

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Mayumi Saki
Kazumi Miura
Katsutoshi Sasaki
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Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.
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Definitions

  • the present invention relates to a chemokine production inhibitor containing, as an active ingredient, a substance that inhibits a function relating to GPR4 signal transduction.
  • Chemokine is a chemotactic site-in that induces leukocyte migration and local infiltration, and is known to be involved in bad habits when inflammation is induced.
  • interleukin-8 IL-8
  • MCP-1 Monocyte chemoattractant protein-1
  • IL-8 is a region of palmoplantar pustulosis and psoriasis, synovial fluid from patients with rheumatoid arthritis, pleural fluid from patients with emphysema, alveolar macrophages in patients with idiopathic pulmonary fibrosis, acute respiratory distress syndrome, cystic fibrosis It has been detected in alveolar bronchial washings from patients with bronchitis and bronchiectasis.
  • IL-8 is known to be involved in sepsis, asthma, glomerulonephritis, inflammatory bowel disease, ischemia-reperfusion injury, multiple myeloma, reflux esophagitis, multiple sclerosis, and diabetes.
  • MCP-1 is rheumatoid arthritis [Clinical and Experimental Immunology, 101st pp. 398-407, 1995], asthma [Journal 'Ob' Allergi ' And 'Tari-Kal' Immunology, pp. 98, 580-587, 1996], Atherosclerosis [Procydindas ⁇ the ⁇ National ⁇ Academy ⁇ ⁇ • Sciences 'Ob' The United United States of America (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United btates of America), No.
  • IL-8 is also reported to be involved in cancer growth, invasion, and metastasis because cancer cells are constitutively produced, enhance angiogenesis, and proliferate cancer cells. Force-in 'And'Grouse' Factor ⁇ ⁇ ⁇ Cytokine and Growth Factor Reviews, Vol. 12, pages 375-391, 200 1]. MCP-1 is also strong and has an angiogenic effect! /, [International Journal of Cancer, 82nd, 765-770, 1999]. Therefore, compounds that suppress the production of chemokines such as IL-8 and MCP-1 are considered useful as preventive and Z or therapeutic agents for the above diseases.
  • GPR4 is a G protein-coupled receptor protein (hereinafter abbreviated as GPCR) and is known to be activated under mild acidity and increase intracellular cAMP levels [Nature, No. 425]. 93-98, 2003].
  • GPCR G protein-coupled receptor protein
  • strong acidosis in the whole body is induced by nephritis, and weak acidosis is observed in aging, menopause, respiratory diseases, etc. [The Proceedings of the Proceedings of Society the Nutrit ion Society), 62, 511-520, 2003].
  • Patent Document 1 International Publication No. 2004Z017994 Pamphlet
  • Patent Document 2 Pamphlet of International Publication No. 2004Z017995
  • Patent Document 3 International Publication No. 2004Z093912 Pamphlet
  • An object of the present invention is to provide a substance that inhibits a function related to GPR4 signal transduction as an active ingredient. It is to provide a chemokine production inhibitor and the like.
  • a chemokine production inhibitor containing, as an active ingredient, a substance that suppresses a function relating to signal transduction of a protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11.
  • SEQ ID NOs: 12, 14, and 18 are selected! /, The nucleotide sequence represented by one of them. DNA sequence that is hybridized under stringent conditions with DNA, and the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11.
  • a chemokine production inhibitor containing any one of the above as an active ingredient.
  • amino acid sequence represented by any one of SEQ ID NOs: 11, 13, and 17 the amino acid sequence has one or more amino acids deleted, substituted or added, and represented by SEQ ID NO: 11.
  • a chemokine production inhibitor containing any one of the above as an active ingredient.
  • R 1 is cyan, formyl, substituted or unsubstituted heterocyclic group, —NR 5a R 5b (wherein R 5a and R 5b are the same or different and are hydrogen atoms, substituted or unsubstituted, Power of lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkenyl, substituted or unsubstituted lower alkyl or substituted or unsubstituted aralkyl, or R 5a And R 5b together with the adjacent nitrogen atom form a substituted or unsubstituted heterocyclic group), -OR 6 (wherein R 6 is a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted Unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkenyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstitute
  • R 2 represents a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted Represents aralkyl
  • R 3 and R 4 are the same or different and each represents a hydrogen atom, halogen or lower alkyl, n represents 0 or 1,
  • R 8a and R 8b are the same or different and each represents a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkenyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, The ability to represent a substituted or unsubstituted aryl or substituted or unsubstituted aralkyl, or R 8a and R 8b together with two adjacent carbon atoms, respectively, a substituted or unsubstituted aromatic ring or a substituted or unsubstituted Form a substituted heterocycle,
  • R 9 is a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower alkynyl, substituted or unsubstituted aryl, Represents a substituted or unsubstituted heterocyclic group or a substituted or unsubstituted aralkyl)] or a quaternary ammonium salt thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • a chemokine production inhibitor containing as an active ingredient.
  • R w R 1Qb and the same or different represents a hydrogen atom or a substituted or unsubstituted lower alkyl
  • chemokine production inhibitor according to any one of (1) to (5), which is chemokine interleukin 8 or monocyte running activity factor 1.
  • R 11 represents a hydrogen atom, a halogen, a substituted or unsubstituted lower alkyl, a substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, a substituted or unsubstituted lower alkenyl, a substituted or unsubstituted lower alkyl; , Substituted or unsubstituted lower alkanol, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl carbo yl, substituted or unsubstituted lower alkoxy, substituted or unsubstituted lower alkoxy carbo yl, substituted or unsubstituted aryl, Represents substituted or unsubstituted aralkyl, substituted or unsubstituted aroyl, substituted or unsubstituted alicyclic heterocyclic group or substituted or unsubstituted aromatic heterocyclic group (excluding tetrazolyl),
  • Q is an alicyclic heterocyclic ring of a substituted or unsubstituted phenylene, a substituted or unsubstituted naphthylene, a substituted or unsubstituted heteroarylene, or a substituted or unsubstituted alicyclic heterocyclic group.
  • T is formyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkanol, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl.
  • na represents an integer of 0 to 3
  • nb an integer of 1 to 4,
  • J represents a single bond or carbonyl
  • Y 1 - one Y 2 is CR 14 - CH (wherein, R "is a hydrogen atom, a halogen, nitro, hydroxy, Shiano,
  • R 13 is a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkanol, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl carbocycle, substituted or unsubstituted Represents aryl, substituted or unsubstituted aralkyl, substituted or unsubstituted aroyl or substituted or unsubstituted aromatic heterocyclic group (excluding tetrazolyl)],
  • R 15a and R 15b are the same or different and are a hydrogen atom, formyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted Lower alkanoyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl carbonyl
  • R 16 represents a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkanol, substituted or unsubstituted lower cycloalkylcarbohydrate.
  • R 15a and R 15b are each as defined above,
  • R 17 is a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkanol, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl carbocycle, substituted or unsubstituted Represents a reel, a substituted or unsubstituted aralkyl or a substituted or unsubstituted aroyl),
  • R 17 has the same meaning as defined above,
  • R 18 represents substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted aryl, or substituted or unsubstituted aralkyl).
  • R 1Q is as defined above
  • R 19 is a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted aryl, substituted or unsubstituted aralkyl, or substituted or unsubstituted aromatic heterocyclic group (tetrazolyl Represents)], [Wherein, X 1 represents an oxygen atom or a sulfur atom, R 2 ° represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted lower alkyl, a substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, a substituted or unsubstituted lower alkanol. Substituted or unsubstituted lower cycloalkyl carbonyl
  • X 1 represents an oxygen atom
  • R 2 ° is not a hydrogen atom
  • R 21 represents a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkanol, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl carbocycle, substituted or unsubstituted.
  • Lower alkanoyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl carbo yl, substituted or unsubstituted lower alkoxy carbo yl, substituted Ku is unsubstituted Ariru, or even the properly substituted represents the unsubstituted Ararukiru, substituted or unsubstituted Aroiru or substituted or unsubstituted aromatic Hajime Tamaki (except tetrazolyl), R 23a and R 23b are adjacent Together with a carbon atom to form a saturated aliphatic ring, or R 23a and R 23b together represent an oxygen atom or a sulfur atom]
  • the chemokine production inhibitor which contains as an active ingredient the bicyclic heterocyclic compound represented by these, or its pharmacologically acceptable salt.
  • a prophylactic and Z or therapeutic agent for a disease involving a chemokine comprising the bicyclic heterocyclic compound or the pharmacologically acceptable salt thereof according to (8) as an active ingredient.
  • W is a nitrogen atom or CR 27
  • R 27 is a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkanol, substituted or unsubstituted lower
  • R 27 is a hydrogen atom, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkanol, substituted or unsubstituted lower
  • R 25 is a hydrogen atom, halogen, amino-containing nitro, cyan-containing carboxy, lower alkoxycarbolumino, mono- or di-lower alkylamino-containing lower alkyl sulfo, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl.
  • Substituted or unsubstituted lower alkenyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower alkoxy, substituted or unsubstituted aryl, substituted or unsubstituted aralkyl, or substituted or unsubstituted alicyclic hetero Represents a cyclic group,
  • R 26a , R 26b, and R 26e are the same or different and each is a hydrogen atom, halogen, sia-substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted lower alkenyl, substituted or unsubstituted Lower alkyl, substituted or unsubstituted lower alkoxy, substituted or unsubstituted lower alkoxycarbonyl, substituted or unsubstituted aryl, substituted or unsubstituted aralkyl, substituted or unsubstituted aryl, substituted or unsubstituted fat
  • chemokine production inhibitor according to any one of (11) to (17), which is chemokine interleukin 8 or monocyte running activity factor 1.
  • a chemokine production inhibitor containing a substance that inhibits a function relating to GPR4 signal transduction as an active ingredient.
  • FIG. 1 is a graph showing an increase in intracellular Ca 2+ concentration at each pH in GPR4-expressing cells (HEK293 / GPR4) and control cells (HEK293 cells).
  • the vertical axis represents the rate of increase of intracellular Ca 2+ concentration when the maximum value of intracellular Ca 2+ concentration is 100%, and the horizontal axis represents pH.
  • ⁇ indicates the rate of increase of intracellular Ca 2+ concentration in HEK293 / GPR4, and ⁇ indicates the rate of increase of intracellular Ca 2+ concentration in HEK293 cells.
  • FIG. 2 is a diagram showing IL-8 production at each pH in GPR4-expressing cells (HEK293 / GPR4 cells) and control cells (HEK293 cells).
  • the vertical axis represents IL-8 production (pg / mL), and the horizontal axis represents pH.
  • ⁇ represents IL-8 production in HEK293 / GPR4, and ⁇ represents IL-8 production in HEK293 cells.
  • FIG. 3 shows MCP-1 production at each pH in GPR4-expressing cells (HEK293 / GPR4 cells) and control cells (HEK293 cells).
  • the vertical axis represents MCP-1 production (pg / mL), and the horizontal axis represents pH.
  • ⁇ represents MCP-1 production in HEK293 / GPR4, and ⁇ represents MCP-1 production in HE K293 cells.
  • FIG. 4 is a diagram showing MIP-2 production from RAW264.7 cells and suppression of Ml P-2 production by Compound 1 due to constitutive activity of GPR4.
  • the filled graph shows the amount of MIP-2 produced in RAW264.7 cells into which the GPR4 expression plasmid pME18S-GP R4 (GPR4 in the figure) was introduced.
  • the vertical axis represents the amount of MIP-2 produced (pg / mL), and the horizontal axis represents the concentration of Compound 1 ( ⁇ mol / L).
  • FIG. 5 shows IL-8 production from HUVEC by GPR4 constitutive activity and suppression of IL-8 production by Compound 1.
  • the filled graph shows IL-8 production in HUVEC with the GPR4 expression plasmid pCAG-GPR4 (GPR 4 in the figure) introduced, and the white graph shows IL-8 production in HUVEC with the empty vector pCAG (vector in the figure) Represents.
  • the vertical axis represents IL-8 production (pg / mL), and the horizontal axis represents the concentration of Compound 1 ( ⁇ mol / L).
  • FIG. 6 shows IL-8 production from A549 cells by GPR4 constitutive activity and suppression of IL-8 production by Compound 1.
  • the filled graph shows IL-8 production in A549 cells transfected with the GPR4 expression plasmid pME18S-GPR4 (GPR4 in the figure).
  • -8 represents production.
  • the vertical axis represents IL-8 production (pg / mL), and the horizontal axis represents the concentration of Compound 1 ( ⁇ mol / L).
  • Halogen includes fluorine, chlorine, bromine and iodine atoms.
  • lower alkyl examples include linear or branched alkyl having 1 to 10 carbon atoms, and more specifically methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentinole, Neopentyl, hexyl, heptyl, octinore, noninore, Examples include decyl.
  • the lower alkyl part of lower alkoxy, lower alkanol, lower alkoxycarbole, lower alkoxy group, chloroamino, lower alkylsulfol and mono- or di-lower alkylamino has the same meaning as the aforementioned lower alkyl.
  • the two lower alkyl moieties of the di-lower alkylamino may be the same or different.
  • lower cycloalkyl examples include monocyclic, bicyclic or tricyclic cycloalkyl having 3 to 10 carbon atoms, and more specifically cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl. , Bicyclo [3.2.1] octanyl, adamantyl and the like.
  • the lower cycloalkyl part of the lower cycloalkylcarbonyl has the same meaning as the lower cycloalkyl.
  • lower alkali examples include linear or branched alcohol having 2 to 10 carbon atoms, and more specifically, bur, aryl, 2-butyl, 3-butyl, and 4-pentale. , 5-hexel, 6-heptur, 7-octatur, 8-none, 9-decycle and the like.
  • the lower alkynyl includes, for example, linear or branched alkyl having 2 to 10 carbon atoms, and more specifically, ethur, propargyl, 3-butul, 3-hexul, 4-methyl. -2-pentynyl, 6-heptynyl, 7-octynyl, 8-nonynyl, 9-decynyl and the like.
  • the saturated aliphatic ring formed together with adjacent carbon atoms includes, for example, a saturated aliphatic ring having 3 to 8 carbon atoms, more specifically, a cyclopropane ring, a cyclobutane ring, a cyclopentane ring, and cyclohexane.
  • a xanth ring, a cycloheptane ring, a cyclooctane ring, etc. are mentioned.
  • aryls include aryls having 6 to 14 carbon atoms, and more specifically, vinyl, naphthyl, indul, anthryl and the like.
  • aromatic ring formed together with two adjacent carbon atoms is synonymous with the addition of one hydrogen atom to the aryl.
  • the aryl reel part of the aryl reel, aryl reel and aroyl has the same meaning as the above reel.
  • the aryl moiety of the aralkyl has the same meaning as the above-mentioned aryl, and the alkylene part has the same meaning as that obtained by removing one hydrogen atom from the lower alkyl.
  • examples of the aryl moiety of aralkyl include those described above, for example, a group in which one hydrogen atom has been removed from a condensed ring in which aryl and cycloalkyl are condensed. Specifically, indanyl, 1,2,3,4 -Tetrahydronaphthyl, 6,7,8,9-tetrahydro-5H-benzocycloheptyl and the like.
  • Phylene is synonymous with the hydrogen removed from a hydrogen.
  • Naphthylene is synonymous with naphthylca with one hydrogen atom removed.
  • aromatic heterocyclic group for example, a 5-membered or 6-membered monocyclic aromatic heterocyclic group containing at least one atom selected from a nitrogen atom, an oxygen atom and a sulfur atom, and a 3- to 8-membered ring are condensed.
  • a bicyclic or tricyclic fused ring aromatic heterocyclic group containing at least one atom selected from a nitrogen atom, an oxygen atom and a sulfur atom, and more specifically furyl, chenyl examples include pyrrolyl, pyridyl, isoxazolyl, oxazolyl, thiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyrimidinyl, triazinyl, indolyl, quinolyl, purinyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, thiadiazolyl, benzoimidazolyl, pyridonyl, oxaziazolyl, pyrajol and the like.
  • aromatic heterocyclic group part of the aromatic heterocyclic carbonyl, aromatic heterocyclic oxycarbonyl, and aromatic heterocyclic sulfonyl has the same meaning as the aromatic heterocyclic group.
  • Heteroarylene is synonymous with the above aromatic heterocyclic group with one hydrogen atom removed.
  • the alicyclic heterocyclic group includes, for example, at least one atom selected from a nitrogen atom, an oxygen atom and a sulfur atom.
  • pyrrolidinyl piperidino, piperidinyl, piperazinyl, morpholinylated morpholinyl, thiomorpholined thiomorpholinyl, homopiveridic homopiperidyl, homopiperazinyl, tetrahydropyridyl, tetrahydro Quinolyl, Tetrahydroisoquinolyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydropyranyl, Dihydro
  • the divalent group formed by removing any one hydrogen atom from the alicyclic heterocyclic ring of the alicyclic heterocyclic group is synonymous with the above-described alicyclic heterocyclic group power having one hydrogen atom removed. is there.
  • heterocyclic group examples include the aromatic heterocyclic group and the alicyclic heterocyclic group.
  • heterocyclic group formed together with the adjacent nitrogen atom examples include the adjacent nitrogen atom.
  • heterocyclic group examples include a 5-membered or 6-membered monocyclic alicyclic heterocyclic group containing at least one nitrogen atom (the monocyclic alicyclic heterocyclic group includes other nitrogen atoms and oxygen atoms).
  • Or may contain a sulfur atom), a condensed bicyclic or tricyclic condensed 3- to 8-membered ring, and a condensed cycloaliphatic heterocyclic group containing at least one nitrogen atom (the condensed group).
  • the cyclic alicyclic heterocyclic group may contain other nitrogen atom, oxygen atom or sulfur atom), and the like. Pyrrolidinyl, piperidinylated piperazinyl, morpholino, thiomorpholined homopiperided homopiperadur, tetrahydropyridyl, tetrahydroquinolyl, tetrahydroisoquinolyl, indolinyl, isoindoleyl, etc.
  • the aromatic heterocyclic group thus formed include a 5-membered or 6-membered monocyclic aromatic heterocyclic group containing at least one nitrogen atom (the monocyclic aromatic heterocyclic group includes other A nitrogen atom, an oxygen atom or a sulfur atom), a condensed bicyclic or tricyclic condensed 3- to 8-membered ring containing at least one nitrogen atom (The condensed aromatic heterocyclic group may contain other nitrogen atom, oxygen atom or sulfur atom), and more specifically pyrrolyl, imidazolyl, indoline. , Indazolyl, carbazolyl and the like.
  • heterocyclic ring formed together with two adjacent carbon atoms is synonymous with the addition of one hydrogen atom to the above heterocyclic group.
  • substituent group A in (1) are the same or different, In particular, halogen, hydroxy, formyl, trifluoromethyl, vinyl, styryl, phenylethyl, lower alkoxycarbol, aryloxy, aralkyloxy, aroyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl [substitution in the substituted lower cycloalkyl
  • the group include, for example, the same or different substitution number 1 to 3, more specifically, halogen, hydroxy, oxo, methylenedioxy, ethylenedioxy, aryl, substituted or
  • substituent in the formula heterocyclic group examples include the same or different lower alkyl having 1 to 3 substituents, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy-substituted lower alkyl, lower alkoxycarbol and the like. ].
  • Substituted or unsubstituted lower alkoxy the substituted low
  • substituent in alkoxy include, for example, the same or different and the number of substitutions of 1 to 3, more specifically, hydroxy, lower alkoxy, etc., substituted or unsubstituted lower alkanol (in the substituted lower alkanol).
  • substituents include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substitutions, more specifically aryl, etc.), a substituted or unsubstituted lower cycloalkyl carbocycle (the substituted lower cycloalkyl carbo-
  • substituent in the alkyl group include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substituents, more specifically, aryl, etc.), substituted or unsubstituted aralkyl (the substituent in the substituted lower aralkyl is, for example, (For example, the same or different, and having 1 to 3 substitutions, more specifically, halogen, hydroxy, lower alkoxy, etc.)
  • an unsubstituted alicyclic heterocyclic group the substituent in the substituted alicyclic heterocyclic group has the same meaning as the substituent group B described later
  • a substituted or unsubstituted aromatic heterocyclic group excluding tetrazolyl.
  • the substituent in the substituted aromatic heterocyclic group has the same meaning as the substituent group B described later), mono or di (substituted or unsubstituted lower alkyl) aminocarbonyl [the mono or di (substituted lower alkyl)
  • substituent in the amino carbocycle include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substituents, more specifically halogen, hydroxy, substituted or unsubstituted alicyclic heterocyclic group (the substituted alicyclic heterocyclic ring).
  • substituent in the group examples include the same or different lower alkyl having 1 to 3 substituents, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy-substituted lower alkyl, lower alkoxycarbol, etc.) Under is],
  • the substituted or unsubstituted alicyclic heterocyclic carbonyl [the substituent cycloaliphatic double heterocyclic carbonyl, for example, in the same or different 1 to 3 substituents More specifically, halogen, hydroxy, lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy-substituted lower alkyl, lower alkoxycarbonyl, substituted or unsubstituted alicyclic heterocyclic group (substitution in the substituted alicyclic heterocyclic group)
  • the group include the same or different lower alkyl having 1 to 3 substituents, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy-substituted lower alkyl, lower alkoxycarbol
  • substituted or unsubstituted aralkyl substituted or unsubstituted aralkyl (substituents in the substituted aralkyl are, for example, the same or different, the number of substitutions 1 to 3 More specifically, halogen, hydroxy, lower alkyl, etc.) or a substituted or unsubstituted aromatic heterocyclic group (excluding tetrazolyl.
  • the substituents in the substituted aromatic heterocyclic group include: for example the same or different is a few substituted 1-3, more specifically represents halogen, hydroxy, lower alkyl or the like can be mentioned, et al are), R 29 is substituted Or unsubstituted lower alkyl (substituents in the substituted lower alkyl include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substituents, more specifically, halogen, hydroxy, etc.), substituted or non-substituted A substituted lower cycloalkyl (substituents in the substituted lower cycloalkyl include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substituents, more specifically halogen, hydroxy, etc.), substituted or unsubstituted alkyl A reel (substituents in the substituted aryl include, for example, the same or different and having 1 to 3 substituents, more specifically, halogen, hydroxy, lower alkyl, etc.
  • Cyclic heterocyclic group ⁇ Substituents in the substituted alicyclic heterocyclic group are, for example, the same or different lower alkyl having 1 to 3 substituents, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy-substituted lower alkyl, lower alkoxycarbonyl, Mono- or di (substituted or unsubstituted lower alkyl) amino [substituents in the mono- or di (substituted lower alkyl) amino are, for example, the same or different and have 1 to 3 substituents, more specifically halogen, hydroxy And alicyclic heterocyclic groups, etc.], substituted or unsubstituted alicyclic heterocyclic groups (the substituted alicyclic heterocyclic Examples of the substituent in the cyclic group include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substituents, and more specifically, lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy
  • substituents in the substituted aryl include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substituents, more specifically, halogen, hydroxy, lower alkoxy Etc.).
  • the alkylene part, alicyclic heterocyclic group and aromatic heterocyclic group are as defined above, and the lower alkyl part of mono- or di (lower alkyl) amino and mono- or di (lower alkyl) aminocarbol is the same as above.
  • the alkylene part of the halogen-substituted lower alkyl and hydroxy-substituted lower alkyl has the same meaning as that obtained by removing one hydrogen atom, and the halogen part of the halogen-substituted lower alkyl is the same as the halogen.
  • the alicyclic heterocyclic group portion of the alicyclic heterocyclic carbonyl has the same meaning as the alicyclic heterocyclic group. Note that the two lower alkyl moieties of di (lower alkyl) amino and di (lower alkyl) aminocarbonyl may be the same or different.
  • Substituents (substituent group B) in the divalent group formed by removing any one hydrogen atom from the alicyclic heterocycle of the substituted heteroarylene and the substituted alicyclic heterocycle are, for example, the same or different.
  • halogens amino-containing nitro, hydroxy, shear-containing formyl, and equivalents thereof having 1 to 3 substitutions (equivalents of the formyl include, for example, 1,3-dioxolan-2-yl Etc.), rubamoyl, trifluoromethoxy, methylenedioxy, ethylenedioxy, lower alkoxy, mono- or di-lower alkylamido-lower alkanolamido-lower alkoxycarbonylamido-substituted or unsubstituted lower alkyl (the substituted lower alkyl
  • substituent in the group include, for example, the same or different substituents of 1 to 3, more specifically, halogen, hydroxy, substituted or unsubstituted alicyclic heterocyclic group (substitution in the substituted alicyclic heterocyclic group).
  • Examples of the group include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substituents, more specifically, lower alkyl, lower alkoxycarbol and the like), mono or di (substituted or unsubstituted lower alkyl) amino [the above Examples of the substituent in mono- or di (substituted lower alkyl) amino are the same or Different 1 to 3 substituents, more specifically a halogen, hydroxy, aliphatic heterocyclic group and the like] and the like ⁇ , if substituted Or an unsubstituted lower cycloalkyl [substituents in the substituted lower cycloalkyl are, for example, the same or different and have 1 to 3 substituents, more specifically halogen, hydroxy, substituted or unsubstituted alicyclic heterocycle.
  • a cyclic group (the substituent in the substituted alicyclic heterocyclic group may be, for example, the same or different lower alkyl having 1 to 3 substituents, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy-substituted lower alkyl, lower alkoxycarbol, etc.
  • Substituted or unsubstituted lower alkoxycarbonyl (the substituents in the substituted lower alkoxycarbonyl include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substituents, more specifically halogen, Hydroxy, etc.), substituted or unsubstituted lower cycloalkyloxycarbol (the substituted lower cycloalkyl).
  • Examples of the substituent in the xycarbol are the same or different and have 1 to 3 substitutions, more specifically, halogen, hydroxy, etc., substituted or unsubstituted lower alkanol (the substituted lower alkanol).
  • Examples of the substituent in the alkanoyl include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substituents, more specifically halogen, hydroxy and the like, and substituted or unsubstituted lower cycloalkyl alkyl (the substituted lower cycloalkyl).
  • substituent in the alkyl carbocycle examples include, for example, the same or different substituents having 1 to 3 substituents, more specifically, halogen, hydroxy, etc., substituted or unsubstituted aryl (the substituent in the substituted aryl) For example, it may be the same or different and the number of substitution is 1 to 3, more specifically, halogen, hydroxy, etc.).
  • substituted aryloxy substituted or unsubstituted aryloxy
  • substituted or unsubstituted aralkyl substituted or unsubstituted aralkyl
  • substituted or unsubstituted aralkyloxy substituted or unsubstituted aralkyloxy
  • substituted or unsubstituted aroyl substituted or unsubstituted aroyl
  • substituted or unsubstituted aroyl substituted or unsubstituted aroyl include, for example, the same or different 1 to 3 substitutions, more specifically halogen, hydroxy, etc.
  • Ku the substituent in the aromatic Hajime Tamaki
  • a substituted or unsubstituted alicyclic heterocyclic group (the substituent in the substituted alicyclic heterocyclic group is, for example, the same or different lower alkyl having 1 to 3 substituents, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy-substituted Lower alkyl, lower alkoxy carbonyl, etc.), substituted or unsubstituted alicyclic heterocyclic carbonyl (substituents in the substituted alicyclic heterocyclic carbonyl are the same or different, for example, 1 to 3 lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy-substituted lower alkyl, lower alkoxycarbonyl, etc.).
  • the substituent in the divalent group formed by removing any one hydrogen atom from the alicyclic heterocycle of the substituted alicyclic heterocyclic group and the substituted alicyclic heterocyclic group is the above-described substituent. In addition, it may be oxo.
  • the halogen part of the halogen-substituted lower alkyl has the same meaning as the above-mentioned halogen
  • the alicyclic heterocyclic group part of the alicyclic heterocyclic carbonyl has the same meaning as the above alicyclic heterocyclic group.
  • the two lower alkyl moieties of di (lower alkyl) amino may be the same or different.
  • a substituent in a substituted heterocyclic group formed together with an adjacent nitrogen atom are, for example, the same or different and having 1 to 3 substitutions, more specifically, halogen, hydroxy, oxo, strong rubamoyl, lower alkoxy, lower alkoxycarbol, lower alkanol, lower cycloalkylcarbonyl, lower alkylsulfonyl, Aromatic heterocyclic carbocycle, substituted or unsubstituted lower alkyl (substituent in the substituted lower alkyl is as defined in the above substituent group A), substituted or unsubstituted lower cycloalkyl (the substituted lower cycloalkyl The substituents in are the same as the substituent group A), substituted or unsubstituted aryls (the substituents in the substituted aryls are synonymous with the substituent group B), substituted or unsubstituted aralkyls (the substituted aralkyls).
  • substituent is the same as defined in the above substituent group B), a substituted or substituted alicyclic heterocyclic group (the substituted The substituent in the alicyclic heterocyclic group has the same meaning as the substituent group B), a substituted or unsubstituted aromatic heterocyclic group (excluding tetrazolyl, and the substituent in the substituted aromatic heterocyclic group is -NR 3Qa R 3Qb [wherein R 3Qa and R 3Qb are the same or different and represent a lower alkyl group, a lower alkylsulfonyl group, an aromatic heterocyclic carbonyl group, a substituted or unsubstituted group.
  • Lower alkyl (the substituent in the substituted lower alkyl has the same meaning as the substituent group A), substituted or unsubstituted lower cycloalkyl (the substituent in the substituted lower cycloalkyl has the same meaning as the substituent group A) ), Substituted or unsubstituted aryl (substituent in the substituted aryl has the same meaning as the substituent group B), substituted or unsubstituted aralkyl (substituent in the substituted aralkyl is A substituted or unsubstituted alicyclic heterocyclic group (the substituent in the substituted alicyclic heterocyclic group has the same meaning as the substituent group B), or a substituted or unsubstituted group.
  • a substituted heterocyclic group (the substituent in the substituted heterocyclic group formed together with the adjacent nitrogen atom is as defined in Substituent Group B)], -CONR 3 ° 3 ° d (Wherein R 3 ° e and R 3 ° d have the same meanings as R 3 ° a and R 3 ° b , respectively).
  • the lower alkyl part of halogen, lower alkyl, lower alkoxy, lower alkoxy carbo yl, lower alkanol and lower alkyl sulfol. Lower cyclo Lower cycloalkyl part of alkyl and lower cycloalkyl carboyl, aryl part of aralkyl and aralkyl, alkylene part of aralkyl, aromatic heterocyclic group and aromatic heterocyclic part of aromatic heterocyclic carbocycle, alicyclic hetero
  • the ring group and the heterocyclic group formed together with the adjacent nitrogen atom are as defined above.
  • the pharmacologically acceptable salts of compounds (1), (II) and (III) include pharmacologically acceptable metal salts, ammonium salts, organic amine addition salts, amino acid addition salts, acid salts. Addition salt, etc. are listed.
  • pharmacologically acceptable metal salts include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as magnesium salt and calcium salt, aluminum salt and zinc salt.
  • acceptable ammonium salts include ammonium and tetramethyl ammonium salts
  • examples of pharmacologically acceptable organic amine addition salts include morpholine and piperidine.
  • Examples of the pharmacologically acceptable amino acid addition salts include addition salts of amino acids such as lysine, glycine, and ferrolanine.
  • Examples of the pharmacologically acceptable acid addition salts include Examples include inorganic acid salts such as hydrochloride, sulfate, and phosphate, and organic acid salts such as acetate, maleate, fumarate, tartrate, and citrate.
  • the present inventors have produced chemokines (for example, IL-8, MCP-1, MIP-2, etc.) by activation of GPR4, and substances that suppress GPR4's functions related to signal transduction are produced by chemokines. Newly found to suppress Furthermore, the present inventors also found that GPR4 activity increases the intracellular Ca 2+ concentration, and that a substance that suppresses the signal transduction function of GPR4 suppresses the increase in intracellular Ca 2+ concentration. Newly found. Based on the above results, the present inventors have found that substances that suppress the function of GPR4 relating to signal transduction are chemokine production inhibitors, prevention of Z onset or worsening due to enhanced chemokine production, and Z or therapeutic agents, etc. We found useful and came to complete this invention
  • the chemokine production inhibitor means a substance that inhibits production of chemokines from cells such as IL-8 and MCP-1.
  • Substances that suppress GPR4's functions related to signal transduction include substances that inhibit or suppress the expression of GPR4 itself, substances that inhibit the binding of ligands to GPR4, GPR4 Substances that suppress signal transduction [eg, changes in intracellular cAMP concentration, changes in intracellular Ca 2+ concentration, phosphorylation of mitogen-activated protein (MAP) kinase, etc.] caused by ligand binding to Examples include substances that suppress signal transduction caused by constitutive activity of GPR4 (including, for example, GPR4 inverse agonist), substances that decrease GPR4-expressing cells due to antibody-dependent cytotoxicity (ADCC activity), and the like.
  • the substance is not particularly limited as long as it has these functions, and may have a known structure.
  • a protein having the amino acid sequence described in any one of SEQ ID NOs: 11, 13, and 17 or an amino acid sequence described in any one selected from SEQ ID NOs: 11, 13, and 17 is used.
  • examples thereof include a protein having a function related to signal transduction of a protein having an amino acid sequence in which one or more amino acids have been deleted, substituted or added, and having the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 11.
  • chemokines include, for example, psoriasis, atopic dermatitis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, asthma, COPD, adult respiratory distress syndrome (ARDS), inflammatory bowel disease, clone disease, ulcerative colitis, stroke , Septic shock, multiple sclerosis, endotoxin shock, Gram-negative sepsis, toxic shock syndrome, cardiac and renal reperfusion injury, glomerulonephritis, thrombosis, graft-versus-host reaction, Alzheimer's disease Allograft rejection, malaria, arterial restenosis, angiogenesis, atherosclerosis, osteoporosis, gingivitis, meningitis, cystic fibrosis, cough, sputum, multiple organ failure, trauma, sprain, bruise Psoriatic arthritis, herpes, encephalitis, central nervous system vasculitis, traumatic brain injury, central nervous system cancer, subarachnoid blood, postoperative trauma, interstitial pneumonia, hyper
  • amino acid sequence according to any one of SEQ ID NOs: 11, 13 and 17 one or more amino acids have an amino acid sequence deleted, substituted or added, and the amino acid sequence according to SEQ ID NO: 11 Proteins that have functions related to signal transduction of proteins that have a protein ⁇ MA, literature [Molecular Cloning, A Laboratory Manual, second Edition, old bpnng Harbor Laboratory Press (1989) (hereinafter, Molecular ⁇ ⁇ Cloning 2nd Edition Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987-1997) (hereinafter referred to as Current Protocols in Molecular Biology), Nucleic Acids Research, 10, 6487 (1982) ), Proc. Natl. Acad. Sci.
  • the number of amino acids deleted, substituted or added is not particularly limited, but is 1 to several tens, preferably 1 to 20, more preferably 1 to 10, and still more preferably 1 to 5 It is.
  • one or more amino acid residues are deleted, substituted or added means any one or more positions in the amino acid sequence. Means that there is a deletion, substitution or addition of one or more amino acid residues, and the deletion, substitution or addition of amino acid residues that may occur simultaneously. , Whether natural or non-natural.
  • Natural amino acid residues include L-alanine, L-asparagine, L-aspartic acid, L-glutamine, L-glutamic acid, glycine, L-histidine, L-isoleucine, L-leucine, L-lysine, L -Al Examples include residues of ginine, L-methionine, L-phenylalanine, L-proline, L-serine, L-threonine, L-tryptophan, L-tyrosine, L-parin and L-cysteine.
  • amino acid residues that can be substituted with each other are shown below.
  • the amino acid residues contained in the same group can be substituted for each other.
  • Group A Leucine, isoleucine, norleucine, norin, norpaline, alanine, 2-aminobutanoic acid, methionine, 0-methylserine, tert-butylglycine, tert-butylalanine, cyclohexylalanine
  • Group B aspartic acid, glutamic acid, isoaspartic acid, isoglutamic acid, 2-aminoadipic acid, 2-aminosuberic acid
  • Group D lysine, arginine, ornithine, 2,4-diaminobutanoic acid, 2,3-diaminopropionic acid
  • Group E proline, 3-hydroxyproline, 4-hydroxyproline
  • Group F serine, threonine, homoserine
  • a protein having an amino acid sequence in which one or more amino acid residues are deleted, substituted, or added is SEQ ID NO:
  • the amino acid sequence and the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 11 are at least 75% or more, usually 80% or more, preferably 90% or more, Furthermore, it is preferable to have an identity of 95% or more! /.
  • oligonucleotide having a complementary sequence of oligonucleotide (hereinafter also referred to as antisense oligonucleotide), DNA having the base sequence described in any one of SEQ ID NOS: 12, 14, and 18 stringent conditions
  • oligonucleotides that inhibit or suppress the expression of a protein having the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 11, derivatives of these oligonucleotides hereinafter referred to as oligonucleotide derivatives
  • the antisense oligonucleotide the nucleotide sequence described in any one of SEQ ID NOS: 12, 14, and 18 is selected.
  • it is not particularly limited as long as it is an antisense oligonucleotide having a nucleotide it preferably has a complementary sequence of an oligonucleotide having 17 to 60 bases, more preferably 20 to 60 bases, and even more preferably 30 to 60 bases.
  • Antisense oligonucleotides are examples of antisense oligonucleotides.
  • an antisense oligonucleotide having a complementary sequence of the above oligonucleotide in the translation initiation region.
  • the antisense oligonucleotide may be used in a conventional manner, for example, using a DNA synthesizer, based on information on the base sequence described in any one of SEQ ID NOS: 12, 14 and 18 or a fragment thereof. Can be prepared.
  • Oligonucleotide derivatives include oligonucleotide derivatives in which phosphodiester bonds in oligonucleotides are converted to phosphorothioate bonds, and phosphodiester bonds in oligonucleotides to N3, -P5, phosphoamidate bonds.
  • SEQ ID NOs: 12, 14, and 18 are selected as the DNA having the nucleotide sequence described in any one of the above and nucleotides that are hybridized under stringent conditions.
  • the mouth-to-one hybridization method, plaque 'hybridization method, Southern blot hybridization method Specifically, it is hybridized at 65 ° C in the presence of 0.7-1.0 mol / L sodium chloride using a filter on which colony or plaque-derived DNA is immobilized.
  • the nucleotide to be nobliZed is, for example, at least 75 and a DNA having a complementary sequence of a DNA having a base sequence described in any one of 12, 14 and 18 When calculated using the above BLAST, FASTA, etc.
  • a DNA having a homology of at least% is preferred.
  • a DNA having a homology of 80% or more is preferred, and a DNA having a homology of 95% or more is more preferred.
  • DNA, RNA, etc. can be used, but DNA is preferably used.
  • the above-mentioned antisense oligonucleotide, the antisense oligonucleotide derivative, or DNA having the base sequence described in any one of SEQ ID NOS: 12, 14, and 18 under stringent conditions After insertion of the nucleotide or nucleotide derivative that is novelized in singly or into a gene therapy vector such as a retrovirus vector, adenovirus vector, or adenovirus associated virus vector, the conventional method described below is used.
  • the formulation can be used as a preventive or Z or therapeutic agent for diseases that develop and become Z or worse due to enhanced chemokine production.
  • a gene therapy vector When a gene therapy vector is used as a preventive or Z or therapeutic agent for a disease that develops due to enhanced chemokine production and Z or worse, and as a Z or therapeutic agent, the gene therapy vector and the base used for the gene therapy agent are used. It can be produced by blending [Nature Genet., 8, 42 (1994)].
  • any base that is usually used for injections can be used.
  • salt solution such as sodium chloride or a mixture of salt sodium and inorganic salt
  • examples thereof include sugar solutions such as tall, lactose, dextran, and glucose, amino acid solutions such as glycine and arginine, organic acid solutions, or a mixed solution of a salt solution and a glucose solution.
  • these bases include osmotic pressure adjusting agent, pH adjusting agent, sesame oil, soybean oil, etc.
  • injectables may be prepared as solutions, suspensions, or dispersions by adding auxiliary agents such as vegetable oils or surfactants such as lecithin or nonionic surfactants. These injections can also be prepared as preparations for dissolution upon use by operations such as pulverization and freeze-drying.
  • Preventive and Z or therapeutic agents for diseases associated with chemokines are used as they are in the case of liquids, or in the case of solids, dissolved in the above sterilized base, if necessary, immediately before administration. can do.
  • Examples of the administration method include a method of local administration so as to be absorbed at a treatment site of a patient. DNA can also be transported to the target treatment site by non-viral gene transfer.
  • Non-viral gene transfer methods include calcium phosphate coprecipitation (Virology, 52, 456-467 (1973); Science, 209, 1414-1422 (1980)), microinjection [Proc. Natl. Ac ad. Sci. USA, 77, 5399-5403 (1980); Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 7380-7384 (1 980); Cell, 27, 223-231 (1981); Nature, 294, 92- 94 (1981)], ribosome-mediated membrane fusion-mediated transfer [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413-7417 (1987); Biochemistry, 28, 9508-9514 (1989); Biol.
  • Examples of the substance that inhibits the binding of a ligand to GPR4 include an antibody that recognizes GPR4, a compound having an antagonistic action on GPR4, and the like.
  • the antibody may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
  • a neutralizing antibody that recognizes GPR4 Etc examples include an antibody having antibody-dependent cytotoxic activity (ADCC activity).
  • the above-mentioned antibody can be prepared, for example, according to the following method.
  • a purified antibody of GPR4 or a partial fragment polypeptide thereof, or a peptide having a partial amino acid sequence of GPR4, can be used as an antigen, and a polyclonal antibody can be prepared by administering to an animal.
  • Usagi, goat, rat, mouse, hamster and the like can be used as an animal to be administered.
  • the dose of the antigen is preferably 50 to 100 g per animal.
  • a peptide When a peptide is used, it is desirable that the peptide is covalently bound to a carrier protein such as keyhole limpet haem cyanine or bovine thyroglobulin as an antigen.
  • a carrier protein such as keyhole limpet haem cyanine or bovine thyroglobulin.
  • the peptide used as an antigen can be synthesized with a peptide synthesizer.
  • the antigen is administered 3 to 10 times every 1 to 2 weeks after the first administration. On the 3rd to 7th day after each administration, blood was collected from the fundus venous plexus, and it was determined that the serum reacted with the antigen used for immunization. Year), Antibodies-A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)].
  • a polyclonal antibody can be obtained by obtaining serum from a non-human mammal whose serum showed a sufficient antibody titer against the antigen used for immunization, and separating and purifying the serum.
  • Separation and purification methods include centrifugation, salting out with 40-50% saturated ammonium sulfate, caprinolic acid precipitation [Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laborat ory, (1988)], or DEAE-Sepharose.
  • Examples of the method include a column, an anion exchange column, a chromatography using a protein A or G-column or a gel filtration column, etc., alone or in combination.
  • the source of antibody-producing cells is a purified sample of GPR4 or its partial fragment polypeptide used for immunization, or a rat whose serum has a sufficient antibody titer against a peptide having a partial amino acid sequence of GPR4. Serve as.
  • the spleen is shredded in MEM medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.), loosened with tweezers, centrifuged at 1,200 rpm for 5 minutes, and the supernatant is discarded.
  • the spleen cells of the obtained precipitate fraction were treated with Tris-salt-ammonium buffer (pH7.65) for 1-2 minutes to remove erythrocytes, and then washed 3 times with MEM medium. Spleen cells are used as antibody producing cells.
  • myeloma cells cell lines obtained from mice or rats are used.
  • 8-azaguanine resistant mouse BALB / c-derived myeloma cell line P3-X63Ag8-U1 (hereinafter abbreviated as P3—U1) [Curr. Topics Microbiol. Immunol, 81, 1 (1978), Eur. Immunol, 6, 51 1 (1976)], SP2 / 0-Agl4 (SP-2) [Nature, 276, 269 (1978)], P3— X63— Ag8653 (653) [J.
  • the cell group of the obtained precipitate fraction is thoroughly loosened, and the resulting cell group is stirred at 37 ° C with 10 g of polyethylene glycol-1000 (PEG-1000) per 10 8 antibody-producing cells. 2 mL and Add 0.2 to 1 mL of a mixed solution of 0.7 mL of dimethyl sulfoxide (DMSO), and add 1-2 mL of MEM medium several times every 1 to 2 minutes.
  • PEG-1000 polyethylene glycol-1000
  • enzyme immunoassay include the following methods.
  • a purified preparation of GPR4 or a partial fragment polypeptide used as an antigen, or a peptide having a partial amino acid sequence of GPR4 is coated on an appropriate plate, and the supernatant of the hybridoma or the following (The labeled antibody after reacting the purified antibody obtained in d) as the first antibody and further reacting with the anti-rat or anti-mouse immunoglobulin antibody labeled with piotin, enzyme, chemiluminescent substance or radiation compound as the second antibody
  • a reaction that specifically reacts with the polypeptide used for the antigen is selected as a hyperidoma that produces the monoclonal antibody used in the present invention.
  • Cloning was repeated twice by limiting dilution using the above-mentioned ibridoma [first time is HT medium (the medium in which HAT medium power is also excluded from aminopterin), and the second time is normal medium] Those having stable and strong antibody titer are selected as a hyperidoma strain producing the monoclonal antibody used in the present invention.
  • Hybridoma cells producing 20-20 ⁇ 10 6 cells producing monoclonal antibodies used in the present invention are injected intraperitoneally. Hypridoma becomes ascites tumor in 10-21 days.
  • the monoclonal antibody can be purified and obtained by the same method as that used for the polyclonal antibody.
  • the antibody subclass is determined using a mouse monoclonal antibody typing kit or a rat monoclonal antibody typing kit.
  • the amount of polypeptide is calculated from the absorbance by the Raleigh method or 280.
  • chemokine production inhibitor containing an antibody that recognizes GPR4, prevention of disease that develops and Z or aggravates due to enhanced chemokine production, and Z or therapeutic agent can be prepared as follows, for example: .
  • a drug containing the antibody as an active ingredient can be administered alone, but usually the active ingredient is combined with one or more pharmacologically acceptable carriers. It is desirable to provide a pharmaceutical preparation that is mixed and manufactured by any method well known in the technical field of pharmaceutics.
  • a sterile solution dissolved in water or an aqueous carrier such as an aqueous solution of sodium chloride, glycine, glucose, human albumin or the like is used.
  • pharmacologically acceptable additives such as buffering agents and isotonic agents for bringing the formulation solution close to physiological conditions, such as sodium acetate, sodium chloride salt, sodium lactate, salt solution. Potassium, sodium citrate and the like can also be added. It can also be lyophilized and stored, and dissolved in an appropriate solvent before use.
  • the route of administration may include oral administration, for which it is desirable to use the most effective treatment, or parenteral administration such as intravenous administration.
  • parenteral administration such as intravenous administration.
  • Examples of the dosage form include tablets and injections.
  • Suitable formulations for oral administration include tablets. Tablets include excipients such as lactose and mantol, disintegrants such as starch, lubricants such as magnesium stearate, binders such as hydroxypropylcellulose, surfactants such as fatty acid esters, glycerin It can manufacture using a plasticizer etc. as an additive.
  • preparations suitable for parenteral administration include injections. The injection is prepared using, for example, a salt solution, a glucose solution, or a carrier that can also be a mixture of both.
  • the components exemplified as additives for oral preparations can also be added to parenteral preparations.
  • the dose or frequency of administration varies depending on the intended therapeutic effect, administration method, treatment period, age, body weight, etc. The usual adult dose is 10 ⁇ g / kg to 8 mg / kg per day.
  • Substances that suppress signal transduction caused by constitutive activity of GPR4 can also be obtained by searching for substances that can suppress signal transduction caused by the constitutive activity.
  • a signal derived from the constitutive activity of GPR4 can be detected using a CRE reporter.
  • a substance that suppresses this reporter activity By searching for a substance that suppresses this reporter activity, a substance that suppresses GPR4 signal transmission can be searched.
  • GPR4 Since GPR4 has been reported to be activated by mildly acidic stimuli, there are cells that endogenously express GPR4! ⁇ is able to examine whether chemokine production is induced by the activity of GPR4 by stimulating weakly acidic GPR4 cells into which GPR4 expression plasmid is introduced and examining whether chemokine production occurs. (See Test Examples 4 and 5). Since GPR4 is a constitutively active GPCR, it is also possible to examine whether various chemokines are produced when GPR4 expression plasmid is introduced into appropriate cells and GPR4 is transiently highly expressed. It is possible to examine whether chemokine production is induced by GPR4 activity (see Test Examples 6 to 8).
  • Compound (I) can be obtained, for example, by the method described in WO2004 / 017995.
  • R 31 represents substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, substituted or unsubstituted aryl, or substituted or unsubstituted aromatic heterocyclic group (excluding tetrazolyl).
  • D represents a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, and R 25 , R 26a , R 26b , R 26e and W are as defined above.
  • Compound (VI) can be synthesized by subjecting commercially available compound (IV) to the method described in US5151435 or a method analogous thereto.
  • Compound (V) can be obtained by the method described in JP-A-3-95181 or a method analogous thereto.
  • Compound (VII) is compound (VI) in a solvent in an amount of 1 equivalent to a large excess, preferably 1 to 10 equivalents.
  • a reducing agent if necessary, add a large excess of inorganic compound or acid and react at a temperature between the boiling points of the solvent used, preferably from 0 ° C, preferably from room temperature to 120 ° C, for 10 minutes to 48 hours. It is possible to synthesize it.
  • Examples of the solvent include methanol, ethanol, tetrahydrofuran (THF), 1,4-dioxane, dimethoxyethane, dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide (DMA), benzene, toluene, xylene, and acetonitrile.
  • THF tetrahydrofuran
  • DMF dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • benzene toluene
  • xylene acetonitrile
  • a mixed solvent thereof or the like can be used, and methanol or ethanol can be preferably used.
  • Examples of the reducing agent include tin (0), tin chloride (11), titanium chloride (111), sodium chloride (11), zinc, iron, nickel, hydrazine, sodium borohydride, lithium aluminum hydride, water Lithium boron nitride or the like can be used, and preferably tin chloride (11), titanium chloride (111), and iron can be used.
  • inorganic compounds examples include salty nickel (11), Raney nickel, and salty cobalt (II).
  • hydrochloric acid for example, hydrochloric acid, sulfuric acid, acetic acid and the like can be used, and hydrochloric acid is preferably used.
  • Compound ( ⁇ -a) is compound (VII) in a solvent in the presence of 1 equivalent to a large excess, preferably 1 to 10 equivalents of a base, and 1 equivalent to a large excess, preferably 1 to 10 equivalents of ( It can be synthesized by reacting VIII) or (IX) with a temperature between 0 ° C. and the boiling point of the solvent used, preferably from room temperature to 120 ° C. for 10 minutes to 48 hours.
  • Examples of the base include triethylamine, diisopropylethylamine, lithium diisopropylamide, potassium tert-butoxide, pyridine, N-methylmorpholine, potassium carbonate, 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -7-undecene, Alternatively, a functional resin or the like on which a basic functional group is supported can be used without reacting with acid chloride or acid anhydride, and preferably triethylamine, pyridine or polyvinylpyridine can be used.
  • Examples of the solvent include dichloromethane, chloroform, THF, 1,4-dioxane, dimethetetane, DMF, DMA, benzene, toluene, xylene, acetonitrile, ethyl acetate, pyridine, tetralin, and mixed solvents thereof. It is preferable to use Alternatively, dichloromethane can be used.
  • R 32a and R 32b are the same or different and each represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted lower alkyl, or a substituted or unsubstituted lower cycloalkyl, or R 32a and R 32b together.
  • R 25 , R 26a , R 26b , R 2 & and W are as defined above
  • Compound ( ⁇ -b) is compound (VII) and 1 equivalent to a large excess, preferably 1 to 10 equivalents of compound in the presence of a reducing agent in an amount of 1 equivalent to a large excess, preferably 1 to 3 equivalents.
  • (X) -7-7 to 100 It can be synthesized by reacting at C, preferably 0 to 50 ° C., for 10 minutes to 24 hours. In addition, this reaction may be carried out by adding a catalytic amount to a large excess amount, preferably 0.5 to 5 equivalents of acid if necessary.
  • reducing agent for example, sodium borohydride, sodium triacetoxyborohydride, sodium cyanoborohydride and the like can be used, and preferably sodium triacetoxyborohydride can be used.
  • the acid for example, formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, hydrochloric acid and the like can be used, and acetic acid can be preferably used.
  • Examples of the solvent include dichloromethane, chloroform, carbon tetrachloride, dichloroethane, benzene, toluene, xylene, jetyl ether, THF, 1,4-dioxane, DMF, DMA, acetonitrile, hexane, and the like.
  • a mixed solvent or the like can be used, and preferably THF or dichloromethane can be used.
  • nc represents an integer of 0 to 3
  • R represents lower alkyl
  • R 25 , R 26a , R 26e and W are as defined above
  • Compound (XI) is compound ( ⁇ -c) obtained according to Production Method 2, in a solvent at a temperature between 0 ° C and the boiling point of the solvent, preferably 1 to 1 equivalent at room temperature to 100 ° C. From 1 to 48 hours, preferably 1 to 3 hours in the presence of a large excess of base.
  • sodium hydroxide, lithium hydroxide, potassium hydroxide, potassium carbonate, cesium carbonate, sodium methoxide and the like can be used, and preferably sodium hydroxide is used. Can be used.
  • the solvent for example, water, THF, jetyl ether, methanol, ethanol, propanol, dichloromethane, dichloroethane, benzene, toluene, xylene, a mixed solvent thereof or the like can be used, preferably THF, methanol, or water with them. These mixed solvents can be used.
  • Compound (XI) is reacted in a basic solvent with 1 equivalent to a large excess, preferably 1 to 20 equivalents, of a halogenating agent at ⁇ 10 to 100 ° C., preferably at room temperature for 10 minutes and for 24 hours.
  • a halogenating agent at ⁇ 10 to 100 ° C., preferably at room temperature for 10 minutes and for 24 hours.
  • Corresponding acid halides can be synthesized.
  • the basic solvent include force using pyridine, triethylamine, diisopropylethylamine, N-methylmorpholine, a mixed solvent thereof, or the like, or dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, THF, 1,4- Pyridine, triethylamine, diisopropylethylamine, N-methylmorpholine, etc.
  • a solvent such as dioxane, DMF, DMA, acetonitrile, benzene, toluene,
  • halogenating agent for example, chlorothionyl, oxalyl chloride, phosphorus oxychloride can be used, and preferably chlorothiol.
  • the obtained acid halide is added in a solvent in the presence of 1 equivalent to a large excess, preferably 1 to 10 equivalents of a base, if necessary, in the presence of 1 equivalent to a large excess, preferably 1 to 10 equivalents of the compound (X II) and a temperature between ⁇ 30 ° C. and the boiling point of the solvent used, preferably from 0 ° C. to room temperature, for 1 minute to 24 hours, preferably 30 minutes to 2 hours.
  • d) can be synthesized.
  • pyridine triethylamine, diisopropylethylamine, N-methylmorpholine and the like can be used, and pyridine or triethylamine can be preferably used.
  • solvent examples include jetyl ether, THF, 1,4-dioxane, DMF, DMA, dimethyl sulfoxide (DMSO), benzene, toluene, xylene, acetonitrile, ethyl acetate, pyridine, dichloromethane, chloroform, Salty carbon or the like can be used.
  • compound (XI) is reacted with 1 to 10 equivalents of compound (XII) in a solvent in the presence of 0.5 to 10 equivalents of a condensing agent at 0 to 50 ° C. for 10 minutes to 70 hours.
  • ⁇ -d can be synthesized.
  • Examples of the condensing agent include 1,3-dicyclohexylcarbodiimide, 1- [3- (dimethylamino) propyl] -3-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC), 1- [3- (dimethylamino) propyl] -3. -Ethyl carpositimide-bonded polystyrene resin (EDC resin) and the like.
  • EDC resin can be produced by the method described in the literature [Tetrahedron Letters 34, 48, 7685 (1993)].
  • Examples of the solvent include jetyl ether, THF, 1,4-dioxane, DMF, DMA, DMSO, benzene, toluene, xylene, acetonitrile, ethyl acetate, pyridine, dichloromethane, chloroform, tetrasalt. Soot carbon can be used, and preferably DMF or THF can be used!
  • 1-hydroxybenzotriazole preferably 1-hydroxybenzotriazole, etc.
  • Compound ( ⁇ -e) is obtained by reacting compound ( ⁇ -d) in a solvent at -78 to 100 ° C with 2 to 4 equivalents of a reducing agent for 10 minutes to 24 hours, preferably 1 to 3 hours.
  • a solvent at -78 to 100 ° C with 2 to 4 equivalents of a reducing agent for 10 minutes to 24 hours, preferably 1 to 3 hours.
  • lithium aluminum hydride for example, lithium aluminum hydride, sodium borohydride, disopropyl lithium aluminum hydride and the like can be used, and preferably aluminum lithium hydride or sodium borohydride can be used.
  • Examples of the solvent include dichloromethane, chloroform, carbon tetrachloride, dichloroethane, benzene, toluene, xylene, jetyl ether, THF, 1,4-dioxane, DMF, DMA, acetonitrile, methanol, ethanol, propanol, and the like.
  • a mixed solvent or the like can be used, and methanol, THF, or toluene can be preferably used.
  • the isolation and purification of the product in the above production method is carried out by appropriately combining methods used in ordinary organic synthesis, for example, filtration, extraction, washing, drying, concentration, crystallization, various chromatographies and the like. Can do. Furthermore, it can be purified using a purification method commonly used in a general parallel synthesis method, for example, a scavenger resin or an ion exchange resin. Further, the intermediate can be subjected to the next reaction without any particular purification.
  • Test Example 1 GPR4 antagonistic action
  • human GPR4 assembly cells were constructed. By using this Atsy cell, the constitutive activity of human GPR4 can be detected by the activity of a reporter (firefly luciferase).
  • a reporter firefly luciferase
  • Human GPR4 inducible expression plasmid pAGal9-GPR4 (2 ⁇ g: WO03 / 087366) and reporter plasmid pACREpluc (2 ⁇ g; WO03 / 087366) were prepared by the Electo mouth position method using KJMGER8 (WO03 / 087366) of 6 ⁇ 10 6 cells. ). Is the transformant 8 mL RPMI16 40'1?
  • GPR4 Atsey cell Blasticidin S (2.0 ⁇ g / mL) (Funakoshi), Hygromycin B (300 ⁇ g / mL) (Wako Pure Chemical Industries) and Dieticin (500 / zg / mL) (Nacalai Testa) And further cultured for 14 days to obtain a stable transformant (referred to as GPR4 Atsey cell).
  • the transformant was subcultured with RPMI1640 ⁇ ITPSG medium containing blasticidin S (2.0 ⁇ g / mL), negromycin B (300 ⁇ g / mL) and geneticin (500 ⁇ g / mL).
  • control plasmid pAGal9-nd (2 ⁇ g; WO03 / 087366) and the reporter plasmid pACREpluc (2 ⁇ g; WO03 / 087366) were co-introduced into KJMGER8 and stable transformation (with control cells) Obtained).
  • the obtained GPR4-expressing cells are seeded at 10 5 per well on a white plate, and 13-estradiol (j8-estradiol, hereinafter abbreviated as E2) so as to be 10 nmol / L in the reaction solution; Sigma-Aid rich Diluted with a medium and a test compound, and a 37 ° C, 5% CO incubator.
  • E2 13-estradiol
  • the activity (antagonism) of the test compound at 1 ⁇ mol / L is the inhibition calculated based on the count per second with and without E2 addition (count per second) as shown in the following equation. Expressed as a percentage.
  • A, B and C represent the following meanings, respectively.
  • HEK293 cells stably expressing human GPR4 were constructed by the following method. After cutting pAGal9-GPR4 (WO03 / 087366) with Hindlll (Takara Bio) and Notl (Takara Bio), a Hindlll-Notl fragment encoding GPR4 was obtained and the expression vector pcDNA3.1 (Invitrogen) GPR4 expression plasmid pCDNA3.1-GPR4 was prepared by integrating between HindIII and Notl.
  • HEK293 / GPR4 After introducing pcDNA3.1-GPR4 into HEK293 cells using Fugene6 (Roche diagnosis), 1 mg / mL dienetin, 10% fetal bovine serum (FBS; JRH Biosciences), 100 Select a single clone (clone 65) that highly expresses human GPR4 by culturing in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) (Invitrogen) containing units / mL penicillin and 100 ⁇ g / ml L streptomycin did. This clone is hereinafter referred to as HEK293 / GPR4.
  • DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium
  • Test example 3 GPR4 activity increases the intracellular Ca 2+ concentration and suppresses it
  • GPR4 is activated under mildly acidic conditions (pH 6.5 to 7.0) and intracellular cAMP production, which is the second messenger, is increased. Therefore, when HEK293 / GPR4 (GPR4-expressing cells) prepared in Test Example 2 was treated with various pH values and GPR4 was activated, the ability to increase intracellular Ca 2+ concentration, another second messenger, was examined. . As a control tool, the host HEK293 cells were used.
  • the intracellular Ca 2+ concentration was determined according to Grynkiewicz's formula [The Journal of Biological Chemistry, Vol. 260, pages 3440-3450, 1985]. As a result, in HEK293 / GPR4, when the pH was lowered from pH 7.5 to slightly acidic side, the intracellular Ca 2+ concentration increased to pH 6.7. On the other hand, HEK293 cells (control) did not increase intracellular Ca 2+ concentration due to weak acidification. The results are shown in FIG.
  • Test Example 4 IL-8 production by GPR4 activity and its inhibitory action
  • HEK293 / GPR4 (GPR4-expressing cells) prepared in Test Example 2 was treated with various pHs, and the ability of IL-8 to be produced when GPR4 was activated under mildly acidic conditions was examined.
  • As a control HEK293 cells, the owner, were used.
  • DMEM containing 10% FBS is supplemented with 10 mmol / L HEPES, 10 mmol / L 2-morpholinoethanesulfonic acid monohydrate (MES; manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and each medium has a pH of 6, 6.5, 7.0, 7.5, or 8.0.
  • MES 2-morpholinoethanesulfonic acid monohydrate
  • HEK293 / GPR4 (GPR4-expressing cells) or HEK293 cells (control) were seeded on a 96-well plate, and when the cells became confluent, the supernatant was replaced with a medium of each pH. After culturing in a CO incubator at 37 ° C for 18 hours, collect the supernatant
  • IL-8 concentration in the supernatant was quantified using an ELISA kit (DuoSet ELISA Development System, Funakoshi). The results are shown in FIG. According to Fig. 2, HEK293 / GPR4 showed IL-8 production with a peak at pH 6.5. On the other hand, IL-8 production by weak acidification was not seen in HEK293 cells (control).
  • IL-8 was produced by the activity of GPR4 and was inhibited by compounds 2 and 3. Therefore, substances that suppress the function related to signal transduction of the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, including compounds (1), (II), and (III), are useful as IL-8 production inhibitors. It was shown that. The substance is thought to be useful in diseases involving IL-8.
  • Test Example 5 Production of MCP-1 by GPR4 activity and its inhibitory action by compounds (1), (II) and (III)
  • HEK293 / GPR4 (GPR4-expressing cells) prepared in Test Example 2 was treated with various pH values, and the ability of MCP-1 to be produced when GPR4 was activated was examined.
  • As a control HE K293 cells as a host were used.
  • MCP-1 was produced by the activity of GPR4 and was inhibited by compounds 2 and 3. Therefore, substances that suppress the signal transduction function of the protein having the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 11, including compounds (1), (II) and (III) are useful as MCP-1 production inhibitors. It was shown that. The substance is considered to be useful as a therapeutic agent for diseases involving MCP-1.
  • Test Example 6 Production of chemokine MIP-2 from mouse macrophage cell line RAW264.7 cell via GPR4 signal
  • GPR4 expresses a signal due to constitutive activity when transiently overexpressed. Therefore, we examined whether chemokines were produced when GPR4 expression plasmid was introduced into RAW264.7 cells and GPR4 was expressed transiently.
  • pAGal9-GPR4 (WO03 / 087366) was cleaved with Hindlll, blunt-ended with T4 DNA polymerase (Takara Bio), then further cleaved with Notl, and Hindlll encoding GPR4 (blunt end) -Obtained Notl fragment.
  • the expression vector pME18S-FL3 (Genbank accession number AB009864) was cleaved with EcoRI, blunt-ended with T4 DNA polymerase, and further cleaved with Notl to obtain an EcoRI (blunt end) -Notl fragment.
  • a GPR4 expression plasmid PME18S-GPR4 was prepared by ligating the two fragments.
  • RAW264.7 cells were cultured in RPMI1640 medium supplemented with 100 nits / mL penicillin, 100 ⁇ g / ml streptomycin, and 10% FCS. About 5 ⁇ 10 4 cells were seeded on a 24-well plate and cultured at 37 ° C. for 1 day. Subsequently, the GPR4 expression plasmid pME18 S-GPR4 and the empty vector (pME18S-FL3) prepared above were respectively introduced into RAW264.7 cells using jetPEI (Funakoshi). The plasmid was obtained from endotoxin free using a kit manufactured by Qiagen. After culturing in a CO incubator for 24 hours at 37 ° C, collect the supernatant and determine the MIP-2 concentration in the supernatant by ELIS.
  • pAGal9-GPR4 (WO03 / 087366) was cleaved with Notl, blunt-ended with T4 DNA polymerase, and further cleaved with Hindlll to obtain a Hindlll-Notl (blunt-ended) fragment encoding GPR4. .
  • the expression vector pCAG [Gene, 108, 193-199 (1991)] was cleaved with 83 14071 (manufactured by New England Biolabs), blunt-ended with T4 DNA polymerase, further cleaved with Hindlll, and Hindlll-Bspl407I A (blunt end) fragment was obtained.
  • a GPR4 expression plasmid pCAG-GPR4 was prepared.
  • HUVEC were cultured using an endothelial cell culture medium kit-2 (manufactured by Takara Bio Inc.).
  • kit-2 manufactured by Takara Bio Inc.
  • approximately 2 ⁇ 10 4 cells were seeded on a 24-well plate and cultured at 37 ° C. for 1 day.
  • the GPR4 expression plasmid pCAG-GPR4 and the empty vector (pCAG) prepared above were introduced into HUVEC using Lipofectin (manufactured by Gibconnet).
  • the plasmid was obtained from endotoxin free using a kit manufactured by Qiagen. After incubation in a CO incubator for 24 hours at 37 ° C,
  • the supernatant was collected and the IL-8 concentration in the supernatant was quantified with an ELISA kit.
  • the GPR4 expression plasmid pCAG-GPR4 was introduced, and GPR4 was transiently expressed. IL-8 production increased compared to cells transfected with.
  • IL-8 was produced from human umbilical vascular endothelial cells (HUVEC) by GPR4 activity and was inhibited by compound 1. Therefore, substances that suppress the signal transduction function of the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, including compound (I), are useful as inhibitors of IL-8 production also in vascular endothelial cells. Indicated. The substance is considered to be useful as a therapeutic agent for diseases involving IL-8.
  • Test Example 8 Chemokine IL from human alveolar epithelial cell line (A549 cells) via GPR4 signal
  • A549 cells were cultured in F-12 medium (Invitrogen) supplemented with 100 units / mL penicillin, 100 ⁇ g / mL streptomycin, and 10% FCS. About 5 ⁇ 10 4 cells were seeded in 24-well p late and cultured at 37 ° C. for 1 day. Subsequently, the GPR4 expression plasmid pME18S-GPR4 and the empty vector (pME18S-FL3) obtained in Test Example 6 were each introduced into A549 cells using jetPEI. The plasmid was obtained from endotoxin free using a kit manufactured by Qiagen. After culturing in a CO incubator for 24 hours at 37 ° C, the supernatant is recovered and the supernatant is recovered.
  • F-12 medium Invitrogen
  • IL-8 concentration of IL-8 was quantified using an ELISA kit.
  • IL-8 production increased in A549 cells into which GPR4 expression plasmid PME18S-GPR4 was introduced and GPR4 was transiently expressed compared to cells into which the empty vector was introduced.
  • substances that suppress the signal transduction function of the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, including compound (I), are useful as IL-8 production inhibitors also in alveolar epithelial cells. It has been shown. The substance is considered to be useful as a therapeutic agent for diseases involving IL-8.
  • GPR4 for example, lung, kidney, vascular endothelial cells (HUVE, human umbilical vein endothelial cells; HMVE); dA, human dermal microvascular e ndothelial cells; HPAEC, human pulmonary artery endothelial cells; — 1, immortalized human dermal microvascular endothelial cell line-1; HBMEC, human brain microvascular endothelial cell), renal bed tubule, large intestine cancer, renal cancer [Genomics,, 84-88 (1995) ); American Journal of Physiology-Heart and Lrculatory Physiology ⁇ 285, H178b-1789 (200 3); Oncogene, 23, 6299-6303 (2004); The FASEB Journal, 19, 819-821 (2005); The
  • Compounds (1), (II) and (III) or pharmacologically acceptable salts thereof can be administered alone as they are, but it is usually desirable to provide them as various pharmaceutical preparations. . These pharmaceutical preparations are used for animals and humans.
  • the pharmaceutical preparation according to the present invention comprises compounds (1), (ii) and (III) or pharmacologically acceptable salts thereof as active ingredients alone or with any other active ingredient for treatment. It can be contained as a mixture.
  • these pharmaceutical preparations are produced by any method well known in the technical field of pharmaceutics by mixing the active ingredient together with one or more pharmaceutically acceptable carriers. Is done.
  • Examples of the dosage form include tablets and injections.
  • Suitable for oral administration such as tablets, excipients such as lactose and mannitol, disintegrants such as starch, lubricants such as magnesium stearate, binders such as hydroxypropylcellulose, and surface activity such as fatty acid esters And a plasticizer such as glycerin.
  • Injectables suitable for parenteral administration are preferably sterile aqueous solutions containing an active compound which is isotonic with the blood of the recipient.
  • a solution for injection is prepared using a carrier such as a salt solution, a glucose solution, or a mixture of salt water and a glucose solution.
  • a carrier such as a salt solution, a glucose solution, or a mixture of salt water and a glucose solution.
  • these parenteral agents one kind selected from diluents, preservatives, flavors, excipients, disintegrants, lubricants, binders, surfactants, plasticizers, etc., exemplified for oral agents. Or more auxiliary components can be added.
  • the dosage and frequency of administration of compounds (I), (II) and (III) or a pharmacologically acceptable salt thereof depend on the dosage form, patient age, body weight, nature of the symptoms to be treated or Oral administration is usually 0.01 mg to lg, preferably 0.05 to 50 mg per adult, once a day or several times, depending on the severity. In the case of parenteral administration such as intravenous administration, 0.001 to 100 mg, preferably 0.01 to 10 mg per adult is administered once to several times a day. However, these doses and the number of doses vary depending on the various conditions described above.
  • ethyl 4-cyclohexanonecarboxylate (16.8 g, 98.7 mmol) and aline (6.0 0 mL, 65.8 mmol) were dissolved in acetonitrile (400 mL) and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Sodium triacetoxyborohydride (56.0 g, 0.264 mol) was added, and the mixture was further stirred for 6 hr.
  • Saturated aqueous sodium hydrogen carbonate was slowly added to the reaction mixture, stirred for a while, and extracted twice with ethyl acetate. The organic layer was washed successively with water and saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
  • An injection having the following composition is prepared by a conventional method. Dissolve 1 g of Compound 1 in purified soybean oil and add 12 g of purified egg yolk lecithin and 25 g of glycerin for injection. This mixture is kneaded and emulsified to 1000 mL with distilled water for injection by a conventional method. The obtained dispersion is filtered aseptically using a 0.2 m disposable membrane filter, and 2 mL each is aseptically filled into a glass vial to give an injection (containing 2 mg of active ingredient per vial). Get.
  • a chemokine production inhibitor and the like containing a substance that inhibits a function relating to GPR4 signal transduction as an active ingredient is provided.
  • SEQ ID NO: 1 Description of artificial sequence: synthetic DNA
  • SEQ ID NO: 6 Description of Artificial Sequence: Synthetic DNA SEQ ID NO: 7—Description of artificial sequence: Synthetic DNA SEQ ID NO: 8—Description of artificial sequence: Synthetic DNA SEQ ID NO: 9 Description of artificial sequence: Synthetic DNA SEQ ID NO: 10—Description of artificial sequence: Synthetic DNA SEQ ID NO: 15 Description of artificial sequence : Synthetic DNA SEQ ID NO: 16 Description of artificial sequence: Synthetic DNA

Description

ケモカイン産生阻害剤
技術分野
[0001] 本発明は、 GPR4のシグナル伝達に関する機能を阻害する物質を有効成分として 含有するケモカイン産生阻害剤に関する。
背景技術
[0002] ケモカインは白血球の遊走と局所への浸潤を誘導する走ィ匕性サイト力インであり、 炎症の惹起ゃ悪ィ匕に関与することが知られている。例えば、インターロイキン- 8 (IL-8 )は好中球に作用し、好中球の炎症部位への浸潤と活性化を誘導する。単球走化活 性化因子 1 (monocyte chemoattractant protein- 1、 MCP- 1)は、単球及び Tリンパ球 に作用し、これらの炎症部位への浸潤と活性ィ匕を誘導する。 IL-8は、掌躕膿疱症部 位や乾癬部位、関節リウマチ患者の滑液、気腫患者の胸膜液、特発性肺線維症患 者の肺胞マクロファージ、急性呼吸窮迫症候群、嚢胞性線維症、気管支炎、気管支 拡張症患者の肺胞気管支洗条浄液等で検出されている。さらに、 IL-8は、敗血症、 喘息、糸球体腎炎、炎症性腸疾患、虚血再灌流障害、多発性骨髄腫、逆流性食道 炎、多発性硬化症、糖尿病に関与していることが知られている（日本臨床、第 63卷、 2 20-225頁、 2005年； US2004/0208873)。 MCP-1は、関節リウマチ [タリ-カル'アンド' ェクスペリメンタル'ィムノロジー（Clinical and Experimental Immunology)、第 101卷、 398-407頁、 1995年]、喘息 [ジャーナル'ォブ 'アレルギ一'アンド 'タリ-カル'ィムノ ロジー（Journal of Allergy and Clinical Immunology)、第 98卷、 580- 587頁、 1996年]、 ァテローム性動脈硬化症 [プロシーディンダス ·ォブ ·ザ ·ナショナル ·アカデミー ·ォブ •サイエンシーズ'ォブ 'ジ'ユナイテッド .ステーッ 'ォブ 'アメリカ（Proceedings of the National Academy of sciences of the United btates of America)、第 88卷、 5252-525 6頁、 1991年]、特発性肺線維症 [プロシーディンダス ·ォブ ·ザ ·ナショナル ·ァカデミ 一'ォブ ·サイエンシーズ ·ォブ ·ジ ·ユナイテッド 'ステーッ'ォブ 'アメリカ（Proceeding s of the National Academy of Sciences or the United States of America)、 89卷、 Ού 71-5375頁、 1992年]、半月体形成糸球体腎炎 [ジャーナル ·ォブ 'ジ'アメリカン'ソサ エティ ~~ .ォブ.ネフロロジ1 ~~ (Journal of the American Society of Nephrology)、第 11 卷、 2231-2242頁、 2000年]等の炎症性疾患で発現が増加していることが報告されて いる。 MCP-1は、閉塞性細気管支炎 [ザ.ジャーナル.ォブ 'タリ-カル 'インべスティ ゲーシヨン（The Journal of Clinical Investigation)、第 108卷、 547- 556頁、 2001年]、 心筋梗塞における炎症反応 [カーディオパスキユラ一'リサーチ（Cardiovascular Rese arch)、第 53卷、 31-47頁、 2002年]、動脈再狭窄 [ァーテリオスクレローシス'トロンボ ~~シス' /'ンド 'ノヽスキュフ1 ~~ 'ノ ィォロン1 ~~ (Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascula r Biology)、第 21卷、 297-299頁、 2001年]、感染症、悪性腫瘍、多発性硬化症、ルー ブス腎炎、冠状動脈疾患、肺虚血再灌流障害、クローン病、アルツハイマー病への 関与も報告されている（日本臨床、第 63卷、 220-225頁、 2005年)。また、 IL-8は、癌 細胞が構成的に産生し、血管新生を増強し、癌細胞を増殖させることから、癌の増殖 、浸潤、転移に関与していることも報告されている [サイト力イン 'アンド'グロウス'ファ クタ^ ~ ·レビューズ（Cytokine and Growth Factor Reviews)、第 12卷、 375- 391頁、 200 1年]。 MCP-1も強 、血管新生作用を有して!/、る [インターナショナル ·ジャーナル ·ォ ブ 'キャンサー（International Journal of Cancer)、第 82卷、 765- 770頁、 1999年]。 従って、 IL-8、 MCP-1等のケモカインの産生を抑制する化合物は、上記の疾患の 予防及び Zまたは治療剤として有用と考えられる。
GPR4は、 G蛋白質共役型レセプター蛋白質 (以下、 GPCRと略す)であり、弱酸性下 で活性化され、細胞内 cAMP量を増加させることが知られて ヽる [ネイチヤー (Nature) 、第 425卷、 93-98頁、 2003年]。一方、全身の強いアシドーシスは腎炎により誘発さ れ、弱いアシドーシスは加齢や更年期障害、呼吸器疾患等で認められる [ザ ·プロシ 一ディングス 'ォブ 'ザ'ニュートリチオン'ソサエティ一（The Proceedings of the Nutrit ion Society)、第 62卷、 511-520頁、 2003年]。また、炎症、感染、傷害や癌 [ラジオセ ラピ^ ~ ·アンド'オンコロジ一（Radiotherapy and Oncology)、第 2卷、 343- 366頁、 1984 年]、虚血性疾患 [カーディオパスキユラ一'トキシコロジー（Cardiovascular Toxicolog y)、第 3卷、 283-298頁、 2003年]の局所では、細胞外液の pHが低くなることが知られ て 、る。例えば、急性喘息患者や慢性閉塞性肺疾患 (COPD)患者の呼気凝縮の pH は健常人に比べ低下しており [カレント'オピニオン 'イン'プルモナリー'メディシン（C urrent Opinion in Pulmonary Medicine)、第 11卷、 135- 139頁、 2005年]、喘息患者で は、コルチコステロイド治療により呼気凝縮の pHが元に戻ることが報告されている [ァ メリカン'ジャーナル ·ォブ ·レスビレートリ一'アンド ·クリティカル ·ケア ·メデイシン (Am erican Journal of Respiratory and し riticalし are Medicine)、 ¾¾丄り丄卷、 694— 699頁、 20 00年]。また、喘息患者に酸を投与すると、咳や気道収縮が観察される [ザ *ァメリカン 'ジャーナル'ォブ 'メデイシン（The American Journal of Medicine)、 Suppl8A、 18S-24 S、 2001年]。好中球と炎症の関連はよく知られているが、好中球は細胞外液が弱酸 性の条件で活性化され、さらにアポトーシスが抑制されることにより、長期間機能でき ることが報告されている [ザ'ジャーナル'ォブ 'ィムノロジー（The Journal of Immunolo gy、第 162卷、 4849-4857頁、 1999年]。また、弱酸性条件下では、粘液の粘性が増 加することも報告され [サイエンス ·ォブ ·ザ ·トータル ·エンバイロメント（Science of the Total Environment)、第 41卷、 101-123頁、 1985年]、炎症性呼吸器疾患の悪化にァ シドーシスが関与して 、ることが示唆されて 、る。弱酸性条件下では骨再吸収が促 進して 、る [ザ ·プロシーディングス ·ォブ ·ザ ·ニュートリチオン ·ソサエティ一 (The Pro ceedings of the Nutrition Society)、第 62卷、 511- 520頁、 2003年]。癌では、組織中 の細胞外液が弱酸性となり、癌細胞の増殖が誘導され、癌細胞の浸潤や転移に関 与していることが知られている [タリ-カル ·アンド'ェクスペリメンタル 'メタスタシス（Cli nical and Experimental Metastasis)、第 14卷、 176- 186頁、 1996年]。いくつかの癌細 胞では、弱酸性条件下において、血管新生因子でもある IL-8の産生が認められてい る [キャンサ一'リサーチ（Cancer Research)、第 60卷、 4610- 4616頁、 2000年]。
[0004] 本願で用いられる含窒素三環式化合物を有効成分とする、喘息、搔痒及び好中球 性炎症疾患の治療剤が知られて ヽる (特許文献 1、 2及び 3参照)。
特許文献 1：国際公開第 2004Z017994号パンフレット
特許文献 2：国際公開第 2004Z017995号パンフレット
特許文献 3：国際公開第 2004Z093912号パンフレット
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0005] 本発明の目的は、 GPR4のシグナル伝達に関する機能を阻害する物質を有効成分 とするケモカイン産生阻害剤等を提供することにある。
課題を解決するための手段
[0006] (1)配列番号 11で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質のシグナル伝達に関する機能 を抑制する物質を有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤。
(2)以下の 1)〜4)
1)配列番号 12で表される塩基配列の連続した 15〜60塩基力 なるオリゴヌクレオチ ドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、
2)配列番号 14で表される塩基配列の連続した 15〜60塩基力 なるオリゴヌクレオチ ドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、
3)配列番号 18で表される塩基配列の連続した 15〜60塩基力 なるオリゴヌクレオチ ドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、
4)配列番号 12、 14及び 18力 選ばれる!/、ずれか一つで表される塩基配列力 なる D NAとストリンジェントな条件下でノヽイブリダィズし、かつ配列番号 11で表されるアミノ酸 配列を有する蛋白質のシグナル伝達に関する機能を抑制する 15〜60塩基力 なる オリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、
のいずれか一つを有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤。
[0007] (3)以下の 1)〜4)
1)配列番号 11で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質と結合する抗体、
2)配列番号 13で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質と結合する抗体、
3)配列番号 17で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質と結合する抗体、
4)配列番号 11、 13及び 17から選ばれるいずれか一つで表されるアミノ酸配列におい て一つ以上のアミノ酸が欠失、置換または付加したアミノ酸配列力 なり、かつ配列 番号 11で表されるアミノ酸配列力 なる蛋白質のシグナル伝達に関する機能を有す る蛋白質と結合する抗体、
のいずれか一つを有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤。
(4)式 (I)
[0008] [化 1]
Figure imgf000007_0001
[0009] [式中、 R1はシァノ、ホルミル、置換もしくは非置換の複素環基、 -NR5aR5b (式中、 R5a及 び R5bは同一または異なって水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換も しくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置換も しくは非置換の低級アルキ-ルまたは置換もしくは非置換のァラルキルを表す力、ま たは R5a及び R5bが隣接する窒素原子と一緒になつて置換もしくは非置換の複素環基 を形成する）、 -OR6 (式中、 R6は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置 換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置 換もしくは非置換の低級アルキ-ル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換 もしくは非置換のァリールまたは置換もしくは非置換のァラルキルを表す）、 -SR6a (式 中、 R6aは前記 R6と同義である）、 -CONR5eR5d (式中、 R5e及び R5dはそれぞれ前記 R5a及 び R5bと同義である）または- CO R6b (式中、 R6bは前記 R6と同義である）を表し、
2
R2は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シク 口アルキル、置換もしくは非置換の低級ァルケ-ル、置換もしくは非置換の低級アル キ-ルまたは置換もしくは非置換のァラルキルを表し、
R3及び R4は同一または異なって水素原子、ハロゲンまたは低級アルキルを表し、 nは 0または 1を表し、
Xは- (CH ) -または- CH=CH-を表し、
2 2
Yは
[0010] [化 2]
Figure imgf000007_0002
[0011] (式中、 Zは CHまたは窒素原子を表し、
R8a及び R8bは同一または異なって水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置 換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置 換もしくは非置換の低級アルキ-ル、置換もしくは非置換のァリールまたは置換もしく は非置換のァラルキルを表す力、または R8a及び R8bがそれぞれ隣接する 2つの炭素原 子と一緒になつて置換もしくは非置換の芳香環または置換もしくは非置換の複素環 を形成し、
R9は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シク 口アルキル、置換もしくは非置換の低級ァルケ-ル、置換もしくは非置換の低級アル キニル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換の複素環基または置換 もしくは非置換のァラルキルを表す)を表す]で表される含窒素三環式化合物もしくは その四級アンモ-ゥム塩またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有 するケモカイン産生阻害剤。
(5) !?1が- NR5gR5h(式中、 R5g及び R5hは隣接する窒素原子と一緒になつて置換もしくは 非置換の複素環基を形成する)であり、 R2、 R3及び R4が水素原子であり、 nが 1であり、 Xが- (CH ) -であり、 Yが
2 2
[0012] [化 3]
Figure imgf000008_0001
(式中、 Rw R1Qb及び ま同一または異なって水素原子または置換もしくは非置換 の低級アルキルを表す)である前記 (4)記載のケモカイン産生阻害剤。
(6)ケモカインカインターロイキン 8または単球走ィ匕活性ィ匕因子 1である前記（1)〜（5) の!、ずれかに記載のケモカイン産生阻害剤。
(7)前記（1)〜（5)の 、ずれかに記載の含窒素三環式ィ匕合物もしくはその四級アンモ -ゥム塩またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するケモカインが 関与する疾患の予防及び zまたは治療剤。
(8)式 (Π)
[0014] [化 4]
Figure imgf000009_0001
[0015] 〔式中、 R11は水素原子、ハロゲン、シァ入置換もしくは非置換の低級アルキル、置換 もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置換 もしくは非置換の低級アルキ-ル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もし くは非置換の低級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換の低級アルコキシ 、置換もしくは非置換の低級アルコキシカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、 置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイル、置換もしくは非置 換の脂環式複素環基または置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除 く）を表し、
Figure imgf000009_0002
R12e及び R12dは同一または 異なって、それぞれ前記 R11と同義である）、 N=CR12b-CR12e=CR12d (式中、 R12b、 R1 及 び R12dはそれぞれ前記と同義である）、 CR12a=N-CR12e=CR12d (式中、 R12a、 R1 及び R12d はそれぞれ前記と同義である）、 CR12a=CR12b_N=CR12d (式中、 R12a、 R12b及び R12dはそ れぞれ前記と同義である）、 CR12a=CR12b- CR1 =N (式中、 R12a、 R12b及び R12eはそれぞ れ前記と同義である）、 N=CR12b-N=CR12d (式中、 R12b及び R12dはそれぞれ前記と同義 である）、 CR12a=N-CR1 =N (式中、 R12a及び R1 はそれぞれ前記と同義である)または N=CR12b-CR1 =N (式中、 R12b及び R1 はそれぞれ前記と同義である）を表し、
[0016] Qは置換もしくは非置換のフエ-レン、置換もしくは非置換のナフチレン、置換もしく は非置換のへテロァリレンまたは置換もしくは非置換の脂環式複素環基の脂環式複 素環上から任意の 1つの水素原子を除いてできる 2価基を表し、
Tはホルミル、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロ アルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低級シクロ アルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキ ル、置換もしくは非置換のァロイル、置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾ リルを除く）、置換もしくは非置換の芳香族複素環カルボニル (該芳香族複素環カル ボニルの芳香族複素環基部分はテトラゾリルではな 、）、
[0017] [化 5]
Figure imgf000010_0001
[0018] [式中、 naは 0〜3の整数を表し、
nbは 1〜4の整数を表し、
Jは単結合またはカルボニルを表し、
Y1 -一 Y2は CR14- CH (式中、 R"は水素原子、ハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、シァノ、
2
トリフルォロメチル、ホルミル、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシカルボ -ル、低級アルカノィル、低級シクロアルキルカルボ-ルまたは低級アルコキシカル ボ-ルァミノを表す）または C = CHを表し、
R13は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換の ァラルキル、置換もしくは非置換のァロイルまたは置換もしくは非置換の芳香族複素 環基 (テトラゾリルを除く）を表す]、
-NR15aR15b [式中、 R15a及び R15bは同一または異なって、水素原子、ホルミル、置換もし くは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしく は非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキルカルボ-ル
、置換もしくは非置換の低級アルコキシカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、 置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイル、置換もしくは非置 換のァリールォキシカルボニル、置換もしくは非置換の脂環式複素環基、置換もしく は非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く)または置換もしくは非置換の芳香族 複素環カルボニル (該芳香族複素環カルボニルの芳香族複素環基部分はテトラゾリ ルではない）を表すか、または R15a及び R15bが隣接する窒素原子と一緒になつて置換 もしくは非置換の複素環基を形成する]、
[0019] -OR16 [式中、 R16は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非 置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非 置換の低級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換の低級アルコキシカルボ -ル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしく は非置換のァロイル、置換もしくは非置換のァリールォキシカルボ-ル、置換もしくは 非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）、置換もしくは非置換の芳香族複素環 ォキシカルボニル (該芳香族複素環ォキシカルボニルの芳香族複素環基部分はテト ラゾリルではない）、置換もしくは非置換の低級アルキルスルホ -ル、置換もしくは非 置換のァリールスルホニル、置換もしくは非置換の芳香族複素環スルホニル (該芳香 族複素環スルホニルの芳香族複素環基部分はテトラゾリルではな 、)または- C(=0)N R15aR15b (式中、 R15a及び R15bはそれぞれ前記と同義である)を表す]、
[0020] [化 6]
、人
R17 R15b
[0021] (式中、 R15a及び R15bはそれぞれ前記と同義であり、
R17は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換の ァラルキルまたは置換もしくは非置換のァロイルを表す）、
[0022] [化 7]
Figure imgf000011_0001
[0023] (式中、 R17は前記と同義であり、
R18は置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロア ルキル、置換もしくは非置換のァリールまたは置換もしくは非置換のァラルキルを表 す)、
[0024] [化 8]
Figure imgf000012_0001
[0025] [式中、 RlQは前記と同義であり、
R19は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル または置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を表す]、
Figure imgf000012_0002
[式中、 X1は酸素原子または硫黄原子を表し、 R2°は水素原子、置換も しくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしく は非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキルカルボ-ル
、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非 置換のァロイルまたは置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を 表す。但し、 X1が酸素原子を表す場合は、 R2°は水素原子ではない]、
-C(=X2)-NR15aR15b (式中、 X2は前記 X1と同義であり、 R15a及び R15bはそれぞれ前記と同 義である）、または
[0026] [化 9]
[0027] {式中、 E二 Fは CR a=CR [式中、 R a及び bは同一または異なって、水素原 子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル 、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル カルボニル、置換もしくは非置換の低級アルコキシカルボ-ル、置換もしくは非置換 のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイルまたは 置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を表す]または C≡ Cを表 し、
R21は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換の ァラルキル、置換もしくは非置換のァロイル、置換もしくは非置換の芳香族複素環基 ( テトラゾリルを除く）または- C(R23a)(R23b)NR15aR15b [式中、 R15a及び R15bはそれぞれ前記と 同義であり、 R23a及び R23bは同一または異なって水素原子、ハロゲン、置換もしくは非 置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置 換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキルカルボ-ル、置換 もしくは非置換の低級アルコキシカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、置換も しくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイルまたは置換もしくは非置換 の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を表すか、 R23a及び R23bが隣接する炭素原子 と一緒になつて飽和脂肪族環を形成するか、または R23a及び R23bが一緒になつて酸素 原子または硫黄原子を表す]を表す }を表す〕
で表される二環性複素環化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とし て含有するケモカイン産生阻害剤。
[0028] (9)ケモカインカインターロイキン 8または単球走ィ匕活性ィ匕因子 1である前記 (8)記載 のケモカイン産生阻害剤。
(10)前記 (8)に記載の二環性複素環化合物またはその薬理学的に許容される塩を 有効成分として含有するケモカインが関与する疾患の予防及び Zまたは治療剤。
(11)式 (ΠΙ)
[0029] [化 10]
Figure imgf000014_0001
[0030] {式中、 ί ま前記 Tと同義であり、
Wは窒素原子または CR27 [式中、 R27は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキ ル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィ ル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリ ール、置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイルまたは置換も しくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を表す]を表し、
R25は水素原子、ハロゲン、アミ入ニトロ、シァ入カルボキシ、低級アルコキシカルボ -ルァミノ、モノまたはジ低級アルキルアミ入低級アルキルスルホ -ル、置換もしくは 非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非 置換の低級アルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキ-ル、置換もしくは非置換 の低級アルコキシ、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル または置換もしくは非置換の脂環式複素環基を表し、
R26a、 R26b及び R26eは同一または異なって水素原子、ハロゲン、シァ入置換もしくは非 置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置 換の低級アルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキ-ル、置換もしくは非置換の 低級アルコキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシカルボニル、置換もしくは非 置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイル、 置換もしくは非置換の脂環式複素環基または置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を表す }で表される二環性複素環化合物またはその薬理学的に 許容される塩を有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤。
[0031] (12) R24が- NR15aR15b (式中、 R15a及び R15bはそれぞれ前記と同義である)である前記（1 1)記載のケモカイン産生阻害剤。
(13) R24が- NHR15a (式中、 R15aは前記と同義である)である前記（11)記載のケモカイン 産生阻害剤。
( 14) R24が- NHR15e (式中、 R15eは置換もしくは非置換の低級シクロアルキルを表す)で ある前記（11)記載のケモカイン産生阻害剤。
(15) R25が水素原子であり、 R26a、 R26b及び R26eが置換もしくは非置換の低級アルキル である前記（11)〜（14)の 、ずれかに記載のケモカイン産生阻害剤。
[0032] (16) W力CR27 (式中、 R27は前記と同義である）である前記（11)〜（15)の 、ずれかに 記載のケモカイン産生阻害剤。
(17) W力CHである前記（11)〜（15)の 、ずれかに記載のケモカイン産生阻害剤。
(18)ケモカインカインターロイキン 8または単球走ィ匕活性ィ匕因子 1である前記（11)〜（ 17)のいずれかに記載のケモカイン産生阻害剤。
(19)前記（11)〜（17)の 、ずれかに記載の二環性複素環化合物またはその薬理学 的に許容される塩を有効成分として含有するケモカインが関与する疾患の予防及び Zまたは治療剤。
発明の効果
[0033] 本発明により、 GPR4のシグナル伝達に関する機能を阻害する物質を有効成分とし て含有するケモカイン産生阻害剤等が提供される。
図面の簡単な説明
[0034] [図 1]GPR4発現細胞（HEK293/GPR4)及びコントロール細胞（HEK293細胞）におけ る各 pHでの細胞内 Ca2+濃度の上昇を示す図である。縦軸は細胞内 Ca2+濃度上昇の 最大値を 100%とした時の細胞内 Ca2+濃度の上昇率を表し、横軸は pHを表す。參は H EK293/GPR4における細胞内 Ca2+濃度の上昇率を表し、〇は HEK293細胞における 細胞内 Ca2+濃度の上昇率を表す。
[図 2]GPR4発現細胞（HEK293/GPR4細胞）及びコントロール細胞（HEK293細胞）に おける各 pHでの IL-8産生を示す図である。縦軸は IL-8の産生量 (pg/mL)を表し、横 軸は pHを表す。參は HEK293/GPR4における IL-8の産生量を表し、〇は HEK293細 胞における IL-8の産生量を表す。 [図 3]GPR4発現細胞（HEK293/GPR4細胞）及びコントロール細胞（HEK293細胞）に おける各 pHでの MCP-1産生を示す図である。縦軸は MCP-1の産生量 (pg/mL)を表 し、横軸は pHを表す。參は HEK293/GPR4における MCP-1の産生量を表し、〇は HE K293細胞における MCP-1の産生量を表す。
[図 4]GPR4の構成的活性による RAW264.7細胞からの MIP-2産生と化合物 1による Ml P-2産生抑制を示す図である。塗りつぶしたグラフは GPR4発現プラスミド pME18S-GP R4 (図中 GPR4)を導入した RAW264.7細胞における MIP-2産生量、白抜けのグラフは 空ベクター PME18S-FL3 (図中 vector)を導入した RAW264.7細胞における MIP-2産 生量を表す。縦軸は MIP-2の産生量 (pg/mL)を表し、横軸は化合物 1の濃度（ μ mol /L)を表す。
[図 5]GPR4の構成的活性による HUVECからの IL-8産生と化合物 1による IL-8産生抑 制を示す図である。塗りつぶしたグラフは GPR4発現プラスミド pCAG- GPR4 (図中 GPR 4)を導入した HUVECにおける IL-8産生量、白抜けのグラフは空ベクター pCAG (図 中 vector)を導入した HUVECにおける IL-8産生量を表す。縦軸は IL-8の産生量（pg/ mL)を表し、横軸は化合物 1の濃度（ μ mol/L)を表す。
[図 6]GPR4の構成的活性による A549細胞からの IL-8産生と化合物 1による IL-8産生 抑制を示す図である。塗りつぶしたグラフは GPR4発現プラスミド pME18S-GPR4 (図中 GPR4)を導入した A549細胞における IL-8産生量、白抜けのグラフは空ベクター pME 18S-FL3 (図中 vector)を導入した A549細胞における IL-8産生量を表す。縦軸は IL-8 の産生量 (pg/mL)を表し、横軸は化合物 1の濃度（ μ mol/L)を表す。
発明を実施するための最良の形態
以下、式 (I)、 (II)または (III)で表される化合物をそれぞれ化合物 (I)、 (II)または (II I)という。他の式番号の化合物についても同様である。
化合物（I)、 (II)及び (ΠΙ)の各基の定義にぉ 、て、
ハロゲンとしてはフッ素、塩素、臭素、ヨウ素の各原子が挙げられる。
低級アルキルとしては、例えば直鎖状または分岐状の炭素数 1〜10のアルキル、よ り具体的にはメチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、 sec-ブチ ル、 tert-ブチル、ペンチノレ、ネオペンチル、へキシル、ヘプチル、ォクチノレ、ノニノレ、 デシル等が挙げられる。
[0036] 低級アルコキシ、低級アルカノィル、低級アルコキシカルボ-ル、低級アルコキシ力 ルポ-ルァミノ、低級アルキルスルホ-ル及びモノまたはジ低級アルキルァミノの低 級アルキル部分は、前記低級アルキルと同義である。ジ低級アルキルァミノの 2つの 低級アルキル部分は同一でも異なって 、てもよ 、。
低級シクロアルキルとしては、例えば炭素数 3〜10の単環性、二環性または三環性 のシクロアルキル、より具体的にはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シ クロへキシル、シクロへプチル、シクロォクチル、ビシクロ [3.2.1]ォクタニル、ァダマン チル等が挙げられる。
[0037] 低級シクロアルキルカルボニルの低級シクロアルキル部分は前記低級シクロアルキ ルと同義である。
低級ァルケ-ルとしては、例えば直鎖状または分岐状の炭素数 2〜10のァルケ-ル が挙げられ、より具体的にはビュル、ァリル、 2-ブテュル、 3-ブテュル、 4-ペンテ-ル 、 5-へキセ -ル、 6-ヘプテュル、 7-オタテュル、 8-ノネ-ル、 9-デセ-ル等が挙げら れる。
[0038] 低級アルキニルとしては、例えば直鎖状または分岐状の炭素数 2〜10のアルキ- ルが挙げられ、より具体的にはェチュル、プロパルギル、 3-ブチュル、 3-へキシュル 、 4-メチル -2-ペンチニル、 6-へプチニル、 7-ォクチニル、 8-ノニニル、 9-デシニル等 が挙げられる。
隣接する炭素原子と一緒になつて形成される飽和脂肪族環としては、例えば炭素 数 3〜8の飽和脂肪族環、より具体的にはシクロプロパン環、シクロブタン環、シクロべ ンタン環、シクロへキサン環、シクロヘプタン環、シクロオクタン環等が挙げられる。
[0039] ァリールとしては、例えば炭素数 6〜14のァリールが挙げられ、より具体的にはフエ -ル、ナフチル、インデュル、アントリル等が挙げられる。
それぞれが隣接する 2つの炭素原子と一緒になつて形成される芳香環は、前記ァリ ールに水素原子を一つ加えたものと同義である。
ァリールォキシカルボ-ル、ァリールスルホ-ル及びァロイルのァリール部分は前 記ァリールと同義である。 [0040] ァラルキルのァリール部分は前記ァリールと同義であり、アルキレン部分は前記低 級アルキルから水素原子を 1つ除いたものと同義である。さらにァラルキルのァリール 部分としては前記にカ卩え、例えばァリールとシクロアルキルとが縮合した縮合環から 水素原子を一つ除いた基も挙げられ、具体的にはインダニル、 1,2,3,4-テトラヒドロナ フチル、 6,7,8,9-テトラヒドロ- 5H-ベンゾシクロへプチル等が挙げられる。
[0041] フエ-レンはフエ-ルから水素原子を 1つ除いたものと同義である。
ナフチレンはナフチルカも水素原子を 1つ除いたものと同義である。
芳香族複素環基としては、例えば窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる 少なくとも 1個の原子を含む 5員または 6員の単環性芳香族複素環基、 3〜8員の環が 縮合した二環または三環性で窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる少な くとも 1個の原子を含む縮環性芳香族複素環基等が挙げられ、より具体的にはフリル 、チェニル、ピロリル、ピリジル、イソォキサゾリル、ォキサゾリル、チアゾリル、イミダゾ リル、ピラゾリル、ピリミジニル、トリアジニル、インドリル、キノリル、プリニル、ベンゾォ キサゾリル、ベンゾチアゾリル、チアジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピリドニル、ォキ サジァゾリル、ピラジュル等が挙げられる。
[0042] 芳香族複素環カルボニル、芳香族複素環ォキシカルボニル及び芳香族複素環ス ルホニルの芳香族複素環基部分は前記芳香族複素環基と同義である。
ヘテロァリレンは前記芳香族複素環基力 水素原子を 1つ除いたものと同義である 脂環式複素環基としては、例えば窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる 少なくとも 1個の原子を含む 5員または 6員の単環性脂環式複素環基、 3〜8員の環が 縮合した二環または三環性で窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる少な くとも 1個の原子を含む縮環性脂環式複素環基等が挙げられ、より具体的にはピロリ ジニル、ピペリジノ、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリ入モルホリニル、チオモルホ リ入チオモルホリニル、ホモピベリジ入ホモピペリジル、ホモピペラジニル、テトラヒド 口ピリジル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、テトラヒドロフラニル、テトラヒ ドロピラニル、ジヒドロベンゾフラニル、キヌクリジニル、インドリニル、イソインドリニル 等が挙げられる。 [0043] 脂環式複素環基の脂環式複素環上から任意の 1つの水素原子を除いてできる 2価 基は前記脂環式複素環基力も水素原子を 1つ除いたものと同義である。
複素環基としては、例えば前記芳香族複素環基、脂環式複素環基等が挙げられる 隣接する窒素原子と一緒になつて形成される複素環基としては、隣接する窒素原 子と一緒になつて形成される脂環式複素環基、隣接する窒素原子と一緒になつて形 成される芳香族複素環基等が挙げられ、隣接する窒素原子と一緒になつて形成され る脂環式複素環基としては例えば少なくとも 1個の窒素原子を含む 5員または 6員の 単環性脂環式複素環基 (該単環性脂環式複素環基は、他の窒素原子、酸素原子ま たは硫黄原子を含んでいてもよい）、 3〜8員の環が縮合した二環または三環性で少 なくとも 1個の窒素原子を含む縮環性脂環式複素環基 (該縮環性脂環式複素環基は 、他の窒素原子、酸素原子または硫黄原子を含んでいてもよい)等が挙げられ、具体 的にはピロリジニル、ピペリジ入ピペラジニル、モルホリノ、チオモルホリ入ホモピぺ リジ入ホモピぺラジュル、テトラヒドロピリジル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノ リル、インドリニル、イソインドリ-ル等が挙げられ、隣接する窒素原子と一緒になつて 形成される芳香族複素環基としては、例えば少なくとも 1個の窒素原子を含む 5員ま たは 6員の単環性芳香族複素環基 (該単環性芳香族複素環基は、他の窒素原子、 酸素原子または硫黄原子を含んでいてもよい）、 3〜8員の環が縮合した二環または 三環性で少なくとも 1個の窒素原子を含む縮環性芳香族複素環基 (該縮環性芳香族 複素環基は、他の窒素原子、酸素原子または硫黄原子を含んでいてもよい)等が挙 げられ、より具体的にはピロリル、イミダゾリル、インドリル、インダゾリル、カルバゾリル 等が挙げられる。
[0044] それぞれが隣接する 2つの炭素原子と一緒になつて形成される複素環は、前記複 素環基に水素原子を一つ加えたものと同義である。
置換低級アルキル、置換低級アルコキシ、置換低級アルカノィル、置換低級シクロ アルキル、置換低級シクロアルキルカルボ-ル、置換低級アルコキシカルボ-ル、置 換低級アルキルスルホ -ル、置換低級ァルケ-ル及び置換低級アルキ-ルにおける 置換基 (置換基群 A)としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体 的にはハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、トリフルォロメチル、ビニル、スチリル、フエニル ェチュル、低級アルコキシカルボ-ル、ァリールォキシ、ァラルキルォキシ、ァロイル 、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル [該置換低級シクロアルキルにおける置 換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、 ヒドロキシ、ォキソ、メチレンジォキシ、エチレンジォキシ、ァリール、置換もしくは非置 換の脂環式複素環基 (該置換脂環式複素環基における置換基としては、例えば同 一または異なって置換数 1〜3の低級アルキル、ハロゲン置換低級アルキル、ヒドロキ シ置換低級アルキル、低級アルコキシカルボ-ル等が挙げられる）等が挙げられる] 、置換もしくは非置換の低級アルコキシ (該置換低級アルコキシにおける置換基とし ては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはヒドロキシ、低級ァ ルコキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置換の低級アルカノィル (該置換低級アル カノィルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具 体的にはァリール等が挙げられる）、置換もしくは非置換の低級シクロアルキルカル ボ-ル (該置換低級シクロアルキルカルボ-ルにおける置換基としては、例えば同一 または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはァリール等が挙げられる）、置換もしく は非置換のァラルキル (該置換低級ァラルキルにおける置換基としては、例えば同 一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級アルコキ シ等が挙げられる)、置換もしくは非置換の脂環式複素環基 (該置換脂環式複素環 基における置換基は後記置換基群 Bと同義である）、置換もしくは非置換の芳香族複 素環基 (テトラゾリルを除く。なお、該置換芳香族複素環基における置換基は後記置 換基群 Bと同義である）、モノもしくはジ (置換もしくは非置換の低級アルキル)アミノカ ルボニル [該モノもしくはジ (置換低級アルキル)ァミノカルボ-ルにおける置換基とし ては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ 、置換もしくは非置換の脂環式複素環基 (該置換脂環式複素環基における置換基と しては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の低級アルキル、ハロゲン置換低級 アルキル、ヒドロキシ置換低級アルキル、低級アルコキシカルボ-ル等が挙げられる） 等が挙げられる]、置換もしくは非置換の脂環式複素環カルボニル [該置換脂環式複 素環カルボニルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の 、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル、ハロゲン置換低級アルキル、ヒ ドロキシ置換低級アルキル、低級アルコキシカルボニル、置換もしくは非置換の脂環 式複素環基 (該置換脂環式複素環基における置換基としては、例えば同一または異 なって置換数 1〜3の低級アルキル、ハロゲン置換低級アルキル、ヒドロキシ置換低級 アルキル、低級アルコキシカルボ-ル等が挙げられる）等が挙げられる]、 -C(=NOR28 )R29 [式中、 R28は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル (該置換低級アルキ ルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的に はハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル（ 該置換低級シクロアルキルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置 換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置 換のァリール (該置換ァリールにおける置換基としては、例えば同一または異なって 置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル等が挙げられる） 、置換もしくは非置換のァラルキル (該置換ァラルキルにおける置換基としては、例え ば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級ァ ルキル等が挙げられる)または置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを 除く。なお、該置換芳香族複素環基における置換基としては、例えば同一または異 なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル等が挙げら れる）を表し、 R29は置換もしくは非置換の低級アルキル (該置換低級アルキルにおけ る置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲ ン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル (該置換低 級シクロアルキルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3 の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置換のァリ ール (該置換ァリールにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1 〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル等が挙げられる）または置 換もしくは非置換のァラルキル (該置換ァラルキルにおける置換基としては、例えば 同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキ ル等が挙げられる）を表す]等が挙げられ、置換低級シクロアルキル及び置換低級シ クロアルキルカルボ-ルにおける置換基は前記の置換基に加え、ォキソ、メチレンジ ォキシ、エチレンジォキシ、置換もしくは非置換の低級アルキル〈該置換低級アルキ ルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的に はハロゲン、ヒドロキシ、置換もしくは非置換の脂環式複素環基 {該置換脂環式複素 環基における置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の低級アルキ ル、ハロゲン置換低級アルキル、ヒドロキシ置換低級アルキル、低級アルコキシカル ボニル、モノもしくはジ (置換もしくは非置換の低級アルキル)ァミノ [該モノもしくはジ（ 置換低級アルキル)ァミノにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換 数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、脂環式複素環基等が挙げられる]、 置換もしくは非置換の脂環式複素環基 (該置換脂環式複素環基における置換基とし ては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的には低級アルキル、ハロ ゲン置換低級アルキル、ヒドロキシ置換低級アルキル、低級アルコキシカルボ-ル等 が挙げられる）等が挙げられる }、モノもしくはジ (置換もしくは非置換の低級アルキル） ァミノ [該モノもしくはジ (置換低級アルキル)ァミノにおける置換基としては、例えば同 一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、脂環式複素 環基等が挙げられる]等が挙げられる〉であってもよい。さらに、置換低級アルコキシ、 置換低級アルカノィル、置換低級シクロアルキル、置換低級シクロアルキルカルボ- ル、置換低級アルコキシカルボ-ル、置換低級アルキルスルホ -ル、置換低級アル ケニル及び置換低級アルキ-ルにおける置換基は前記の置換基に加え、置換もしく は非置換のァリール (該置換ァリールにおける置換基としては、例えば同一または異 なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、低級アルコキシ等が挙げ られる）であってもよい。
前記置換低級アルキル、置換低級アルコキシ、置換低級アルカノィル、置換低級シ クロアルキル、置換低級シクロアルキルカルボ-ル、置換低級アルコキシカルボ-ル 、置換低級アルキルスルホ -ル、置換低級ァルケ-ル及び置換低級アルキ-ルにお ける置換基の定義において、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコ キシカルボ-ル及び低級アルカノィルの低級アルキル部分、低級シクロアルキル及 び低級シクロアルキルカルボ-ルの低級シクロアルキル部分、ァリール、ァリールォ キシ及びァロイルのァリール部分、ァラルキル及びァラルキルォキシのァリール部分 及びアルキレン部分、脂環式複素環基ならびに芳香族複素環基はそれぞれ前記と 同義であり、モノもしくはジ (低級アルキル)ァミノ及びモノもしくはジ (低級アルキル)アミ ノカルボ-ルの低級アルキル部分は前記低級アルキルと同義であり、ハロゲン置換 低級アルキル及びヒドロキシ置換低級アルキルのアルキレン部分は、前記低級アル キル力 水素原子を 1つ除いたものと同義であり、ハロゲン置換低級アルキルのハロ ゲン部分は前記ハロゲンと同義であり、脂環式複素環カルボ二ルの脂環式複素環基 部分は前記脂環式複素環基と同義である。なお、ジ (低級アルキル)ァミノ及びジ (低 級アルキル)ァミノカルボ-ルの 2つの低級アルキル部分は同一でも異なっていてもよ い。
置換ァリール、置換ァラルキル、置換ァロイル、置換ァリールォキシカルボ-ル、置 換ァリールスルホニル、置換複素環基、置換脂環式複素環基、置換芳香族複素環 基、置換芳香族複素環カルボニル、置換芳香族複素環ォキシカルボニル、置換芳 香族複素環スルホニル、隣接する 2つの炭素原子と一緒になつて形成される置換芳 香族複素環及び置換複素環、置換フエ二レン、置換ナフチレン、置換へテロァリレン ならびに置換脂環式複素環基の脂環式複素環上から任意の 1つの水素原子を除い てできる 2価基における置換基 (置換基群 B)としては、例えば同一または異なって置 換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、アミ入ニトロ、ヒドロキシ、シァ入ホルミル及 びその等価体 (該ホルミルの等価体としては、例えば 1,3-ジォキソラン- 2_ィル等が挙 げられる）、力ルバモイル、トリフルォロメトキシ、メチレンジォキシ、エチレンジォキシ、 低級アルコキシ、モノもしくはジ低級アルキルアミ入低級アルカノィルアミ入低級ァ ルコキシカルボニルアミ入置換もしくは非置換の低級アルキル {該置換低級アルキ ルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的に はハロゲン、ヒドロキシ、置換もしくは非置換の脂環式複素環基 (該置換脂環式複素 環基における置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体 的には低級アルキル、低級アルコキシカルボ-ル等が挙げられる）、モノもしくはジ（ 置換もしくは非置換の低級アルキル)ァミノ [該モノもしくはジ (置換低級アルキル)アミ ノにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的に はハロゲン、ヒドロキシ、脂環式複素環基等が挙げられる]等が挙げられる }、置換もし くは非置換の低級シクロアルキル [該置換低級シクロアルキルにおける置換基として は、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、 置換もしくは非置換の脂環式複素環基 (該置換脂環式複素環基における置換基とし ては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の低級アルキル、ハロゲン置換低級ァ ルキル、ヒドロキシ置換低級アルキル、低級アルコキシカルボ-ル等が挙げられる）等 が挙げられる]、置換もしくは非置換の低級アルコキシカルボニル (該置換低級アル コキシカルボニルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3 の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置換の低級 シクロアルキルォキシカルボ-ル（該置換低級シクロアルキルォキシカルボ-ルにお ける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロ ゲン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置換の低級アルカノィル (該置換低 級アルカノィルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、 より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置換の低級シク 口アルキルカルボ-ル (該置換低級シクロアルキルカルボ-ルにおける置換基として は、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ 等が挙げられる）、置換もしくは非置換のァリール (該置換ァリールにおける置換基と しては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキ シ等が挙げられる）、置換もしくは非置換のァリールォキシ (該置換ァリールォキシに おける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハ ロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置換のァラルキル (該置換ァラル キルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的 にはハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置換のァラルキルォキシ（ 該置換ァラルキルォキシにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換 数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置換 のァロイル (該置換ァロイルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置 換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる）、置換もしくは非置 換の芳香族複素環基 (該置換芳香族複素環基における置換基としては、例えば同 一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ等が挙げられる )、置換もしくは非置換の脂環式複素環基 (該置換脂環式複素環基における置換基 としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の低級アルキル、ハロゲン置換低 級アルキル、ヒドロキシ置換低級アルキル、低級アルコキシカルボ-ル等が挙げられ る）、置換もしくは非置換の脂環式複素環カルボニル (該置換脂環式複素環カルボ二 ルにおける置換基としては、例えば同一または異なって置換数 1〜3の低級アルキル 、ハロゲン置換低級アルキル、ヒドロキシ置換低級アルキル、低級アルコキシカルボ ニル等が挙げられる)等が挙げられる。また、置換脂環式複素環基及び置換脂環式 複素環基の脂環式複素環上から任意の 1つの水素原子を除いてできる 2価基におけ る置換基は、前記の置換基に加えォキソであってもよ 、。
[0047] 置換ァリール、置換ァラルキル、置換ァロイル、置換ァリールォキシカルボ-ル、置 換ァリールスルホニル、置換複素環基、置換脂環式複素環基、置換芳香族複素環 基、置換芳香族複素環カルボニル、置換芳香族複素環ォキシカルボニル、置換芳 香族複素環スルホニル、隣接する 2つの炭素原子と一緒になつて形成される置換芳 香族複素環及び置換複素環、置換フエ二レン、置換ナフチレン、置換へテロァリレン ならびに置換脂環式複素環基の脂環式複素環上から任意の 1つの水素原子を除い てできる 2価基における置換基の定義において、ハロゲン、低級アルキル、低級アル コキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルコキシカルボ-ルアミ入低級アルカノ ィル、低級アルカノィルァミノ及びモノもしくはジ低級アルキルァミノの低級アルキル 部分、低級シクロアルキル、低級シクロアルキルカルボ-ル及び低級シクロアルキル ォキシカルボ-ルの低級シクロアルキル部分、ァリール、ァリールォキシ及びァロイ ルのァリール部分、ァラルキル及びァラルキルォキシのァリール部分及びアルキレン 部分、芳香族複素環基ならびに脂環式複素環基はそれぞれ前記と同義であり、ハロ ゲン置換低級アルキル及びヒドロキシ置換低級アルキルのアルキレン部分は前記低 級アルキルカゝら水素原子を 1つ除いたものと同義であり、ハロゲン置換低級アルキル のハロゲン部分は前記ハロゲンと同義であり、脂環式複素環カルボ二ルの脂環式複 素環基部分は前記脂環式複素環基と同義である。なお、ジ (低級アルキル)ァミノの 2 つの低級アルキル部分は同一でも異なって 、てもよ 、。
[0048] 隣接する窒素原子と一緒になつて形成される置換複素環基における置換基として は、例えば同一または異なって置換数 1〜3の、より具体的にはハロゲン、ヒドロキシ、 ォキソ、力ルバモイル、低級アルコキシ、低級アルコキシカルボ-ル、低級アルカノィ ル、低級シクロアルキルカルボニル、低級アルキルスルホニル、芳香族複素環カルボ -ル、置換もしくは非置換の低級アルキル (該置換低級アルキルにおける置換基は 前記置換基群 Aと同義である）、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル (該置換低 級シクロアルキルにおける置換基は前記置換基群 Aと同義である）、置換もしくは非 置換のァリール (該置換ァリールにおける置換基は前記置換基群 Bと同義である）、 置換もしくは非置換のァラルキル (該置換ァラルキルにおける置換基は前記置換基 群 Bと同義である）、置換もしくは置換の脂環式複素環基 (該置換脂環式複素環基に おける置換基は前記置換基群 Bと同義である)、置換もしくは非置換の芳香族複素環 基 (テトラゾリルを除く。なお、該置換芳香族複素環基における置換基は前記置換基 群 Bと同義である）、 -NR3QaR3Qb [式中、 R3Qa及び R3Qbは同一または異なって低級アル力 ノィル、低級アルキルスルホニル、芳香族複素環カルボニル、置換もしくは非置換の 低級アルキル (該置換低級アルキルにおける置換基は前記置換基群 Aと同義である )、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル (該置換低級シクロアルキルにおける置 換基は前記置換基群 Aと同義である）、置換もしくは非置換のァリール (該置換ァリー ルにおける置換基は前記置換基群 Bと同義である）、置換もしくは非置換のァラルキ ル (該置換ァラルキルにおける置換基は前記置換基群 Bと同義である）、置換もしくは 非置換の脂環式複素環基 (該置換脂環式複素環基における置換基は前記置換基 群 Bと同義である)または置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (該置換芳香族複素 環基における置換基は前記置換基群 Bと同義である）を表すか、または R3Qaと R3Qbが隣 接する窒素原子と一緒になつて置換もしくは非置換の複素環基 (該隣接する窒素原 子と一緒になつて形成される置換複素環基における置換基は前記置換基群 Bと同義 である）を形成する]、 -CONR3° 3°d (式中、 R3°e及び R3°dはそれぞれ前記 R3°a及び R3°b と同義である)等が挙げられる。
前記隣接する窒素原子と一緒になつて形成される置換複素環基における置換基の 定義において、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシカルボ- ル、低級アルカノィル及び低級アルキルスルホ -ルの低級アルキル部分、低級シクロ アルキル及び低級シクロアルキルカルボ-ルの低級シクロアルキル部分、ァリール及 びァラルキルのァリール部分、ァラルキルのアルキレン部分、芳香族複素環基及び 芳香族複素環カルボエルの芳香族複素環基部分、脂環式複素環基ならびに隣接す る窒素原子と一緒になつて形成される複素環基はそれぞれ前記と同義である。
[0050] 化合物 (1)、 （II)及び (III)の薬理学的に許容される塩としては、薬理学的に許容さ れる金属塩、アンモニゥム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩、酸付加塩等が挙 げられる。薬理学的に許容される金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアル カリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩 、亜鉛塩等が挙げられ、薬理学的に許容されるアンモ-ゥム塩としては、アンモ-ゥ ム、テトラメチルアンモ -ゥム等の塩が挙げられ、薬理学的に許容される有機アミン付 加塩としては、モルホリン、ピぺリジン等の付加塩が挙げられ、薬理学的に許容される アミノ酸付加塩としては、リジン、グリシン、フエ-ルァラニン等のアミノ酸の付加塩が 挙げられ、薬理学的に許容される酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の 無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クェン酸塩等の有機酸 塩が挙げられる。
[0051] 本発明者らは、 GPR4の活性化によりケモカイン（例えば、 IL- 8、 MCP- 1、 MIP- 2等） が産生され、 GPR4の有するシグナル伝達に関する機能を抑制する物質がケモカイン の産生を抑制することを新たに見出した。また本発明者らは、 GPR4の活性ィ匕により、 細胞内 Ca2+濃度が上昇し、 GPR4の有するシグナル伝達に関する機能を抑制する物 質が細胞内 Ca2+濃度の上昇を抑制することも新たに見出した。以上の結果から、本 発明者らは、 GPR4の有するシグナル伝達に関する機能を抑制する物質がケモカイン 産生阻害剤、ケモカイン産生の亢進によって発症及び Zもしくは悪化する疾患の予 防ならびに Zまたは治療剤等として有用なことを見出し、本発明を完成するに至った
[0052] ケモカイン産生阻害剤は、例えば IL-8、 MCP-1等のケモカインの細胞からの産生を 阻害する物質を意味する。
GPR4の有するシグナル伝達に関する機能を抑制する物質としては、 GPR4自身の 発現を阻害または抑制する物質、リガンドの GPR4への結合を阻害する物質、 GPR4 へのリガンド結合により生ずるシグナル伝達 [例えば、細胞内 cAMP濃度の変化、細 胞内 Ca2+濃度の変化、 mitogen-activated protein (MAP)キナーゼのリン酸化等が含 まれる]を抑制する物質、 GPR4の構成的活性により生ずるシグナル伝達を抑制する 物質 (例えば GPR4のインバースァゴ-スト等が含まれる）、抗体依存性細胞障害活性 (ADCC活性)等により GPR4発現細胞を減少させる物質等が含まれる。上記物質は、 これら機能を有する物質であれば、その構造は特に限定されず、公知の構造を有す るものでもよい。 GPR4としては、例えば配列番号 11、 13及び 17力も選ばれるいずれか 一つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質、あるいは配列番号 11、 13及び 17から選 ばれる 、ずれか一つに記載のアミノ酸配列にお 、て一つ以上のアミノ酸が欠失、置 換または付加したアミノ酸配列を有し、かつ配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する 蛋白質のシグナル伝達に関する機能を有する蛋白質等が挙げられる。
ケモカインが関与する疾患としては、例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、骨関節炎、 関節リウマチ、喘息、 COPD、成人型呼吸窮迫症候群 (ARDS)、炎症性大腸疾患、ク ローン病、潰瘍性大腸炎、脳卒中、敗血症性ショック、多発性硬化症、内毒素性ショ ック、グラム陰性敗血症、毒素性ショック症候群、心臓及び腎の再灌流障害、糸球体 腎炎、血栓症、対宿主性移植片反応、アルツハイマー病、同種移植の拒絶反応、マ ラリア、動脈再狭窄、血管形成、ァテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、歯肉炎、髄膜 炎、嚢胞性線維症、咳、搔痒、多臓器不全、トラウマ、捻挫、打撲傷、乾癬性関節炎 、ヘルぺス、脳炎、中枢神経系血管炎、外傷性脳損傷、中枢神経系癌、くも膜下出 血、術後外傷、間質性肺炎、過敏性、結晶性関節炎、急性及び慢性脾炎、急性アル コール性肝炎、壊死性腸炎、慢性副鼻腔炎、ブドウ膜炎、多発性筋炎、脈管炎、にき び、胃十二指腸潰瘍、セリアツク病、食道炎、舌炎、気流通過障害、気道過敏症、細 気管支炎、閉塞性細気管支炎、特発性器質化肺炎、気管支拡張症、慢性気管支炎 、肺性心、呼吸困難、気腫、炭酸過剰症、過膨張、低酸素症、酸素過剰誘導炎症、 手術による肺容量減少、肺線維症、肺高血圧、サルコイドーシス、左心室肥大、末梢 気道病変、換気血流不均等、喘鳴、力ゝぜ、狼瘡、虚血再循環障害、肺気腫、急性肺 障害 (ALI)、鼻炎、敗血症、関節炎、ベーチェット病、シ ーングレン症候群、強皮症 、接触性皮膚炎、蓴麻疹、紅斑、結膜炎、好酸球増多症、ブドウ膜炎、円形脱毛症、 湿疹、扁平苔癬、水疱症、天疱症、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クロー ン病、潰瘍性大腸炎、後天性免疫不全症候群 (AIDS)、全身性エリテマトーデス、橋 本病、ネフローゼ症候群、重症筋無力症、 I型糖尿病、好酸球性筋膜炎、高 IgE血漿 、ライ病、紫斑病、移植片拒絶、扁平上皮癌、肺癌、悪性腫瘍、心臓及び末梢肢に おける再灌流障害、痛風、過敏性腸症候群、炎症性肺疾患、肝炎、アレルギー、潰 瘍、肺線維症以外の線維症、偏頭痛、放射線による炎症、髄膜炎等の炎症、虚血（ 心筋梗塞、脳虚血、骨格筋虚血、腸虚血等)、内毒症、石綿沈着症等が挙げられる。
[0054] 配列番号 11、 13及び 17から選ばれるいずれか一つに記載のアミノ酸配列において 一つ以上のアミノ酸が欠失、置換または付加したアミノ酸配列を有し、かつ配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシグナル伝達に関する機能を有する蛋白質 ίま、文献 [Molecular Cloning, A Laboratory Manual, second Edition, し old bpnng Ha rbor Laboratory Press (1989年）（以下、モレキュラ^ ~·クロー-ング第 2版と略す）、 Cu rrent Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987- 1997年）（以下、カレ ント.プロトコールズ.イン.モレキュラー.バイオロジーと略す）、 Nucleic Acids Researc h, 10, 6487 (1982)、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 6409(1982)、 Gene, 34, 315 (19 85)、 Nucleic Acids Research, 13, 4431 (1985)、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 488 ( 1985)等]記載の部位特異的変異導入法を用いて、例えば配列番号 11、 13及び 17か ら選ばれるいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する蛋白質をコードする DNAに 部位特異的変異を導入することにより、取得することができる。
[0055] 欠失、置換または付加したアミノ酸の数は特に限定されないが、 1個〜数十個、好 ましくは 1〜20個、より好ましくは 1〜10個、さらに好ましくは 1〜5個である。
配列番号 11、 13及び 17から選ばれるいずれか一つに記載のアミノ酸配列において 一つ以上のアミノ酸残基が欠失、置換または付加したとは、該アミノ酸配列中の任意 かつ 1もしくは複数の位置において、 1または複数のアミノ酸残基の欠失、置換または 付加があることを意味し、欠失、置換または付加が同時に生じてもよぐ欠失、置換ま たは付加されるアミノ酸残基については、天然型と非天然型とを問わない。天然型ァ ミノ酸残基としては、 L-ァラニン、 L-ァスパラギン、 L-ァスパラギン酸、 L-グルタミン、 L -グルタミン酸、グリシン、 L-ヒスチジン、 L-イソロイシン、 L-ロイシン、 L-リジン、 L-アル ギニン、 L-メチォニン、 L-フエ二ルァラニン、 L-プロリン、 L-セリン、 L-スレオニン、 L- トリプトファン、 L-チロシン、 L-パリン及び L-システィンの各残基等が挙げられる。
[0056] 以下に、相互に置換可能なアミノ酸残基の好ましい例を示す。同一群に含まれるァ ミノ酸残基は相互に置換可能である。
A群：ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、ノ リン、ノルパリン、ァラニン、 2-アミノブタ ン酸、メチォニン、 0-メチルセリン、 tert-ブチルグリシン、 tert-ブチルァラニン、シクロ へキシルァラニン
B群：ァスパラギン酸、グルタミン酸、イソァスパラギン酸、イソグルタミン酸、 2-アミノア ジピン酸、 2-アミノスべリン酸
C群：ァスパラギン、グルタミン
D群：リジン、アルギニン、オル二チン、 2,4-ジァミノブタン酸、 2,3-ジァミノプロピオン 酸
E群：プロリン、 3-ヒドロキシプロリン、 4-ヒドロキシプロリン
F群：セリン、スレオニン、ホモセリン
G群：フエ-ルァラニン、チロシン
また、配列番号 11、 13及び 17から選ばれるいずれか一つに記載のアミノ酸配列に お 、て一つ以上のアミノ酸残基が欠失、置換または付加したアミノ酸配列を有する蛋 白質が、配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシグナル伝達に関する機 能を有するには、そのアミノ酸配列と配列番号 11記載のアミノ酸配列とが、少なくとも 75%以上、通常は 80%以上、好ましくは 90%以上、さらには 95%以上の同一性を有して 、ることが好まし!/、。
[0057] アミノ酸配列や塩基配列の同一性は、 Karlin and Altschulによるアルゴリズム BLAS T[Pro. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 5873(1993)]や FASTA [Methods EnzymoL, 183, 6 3 (1990) ]を用いて決定することができる。このアルゴリズム BLASTに基づいて、 BLAS TN (塩基対塩基データベース）や BLASTX (塩基対アミノ酸データベース）とよばれる プログラムが開発されている [J. Mol. Biol, 215, 403(1990)] 0 BLASTに基づいた BLA STNによって塩基配列を解析する場合には、パラメータ一は例えば score = 100、 word length= 12とする。また、 BLASTに基づいて BLASTXによってアミノ酸配列を解析する 場合には、パラメータ一は例えば score = 50、 wordlength=3とする。 BLASTと Gapped BLASTプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる [Gapped BLASTについては文献（Nuc. Acids Res., 25, 3389-3402 (1997))を参照] 。これらの解析方法の具体的な手法は公知である（http：〃 www.ncbi.nlm.nih.gov.参 照)。
[0058] GPR4自身の発現を阻害または抑制する物質としては、例えば、配列番号 12、 14及 び 18から選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列力 選ばれる連続した 15〜60塩 基力 なるオリゴヌクレオチドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチド（以下、アンチ センス ·ォリゴヌクレオチドともいう）、配列番号 12、 14及び 18力 選ばれるいずれか一 つに記載の塩基配列を有する DNAとストリンジェントな条件でハイブリダィズし、かつ 配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質の発現を阻害または抑制するオリゴ ヌクレオチド、これらのオリゴヌクレオチドの誘導体 (以下、オリゴヌクレオチド誘導体と いう）等が挙げられる。
[0059] 上記アンチセンス ·ォリゴヌクレオチドとしては、配列番号 12、 14及び 18力 選ばれ るいずれか一つに記載の塩基配列力 選ばれる連続した 15〜60塩基力 なるオリゴ ヌクレオチドの相補的配列を有するアンチセンス ·ォリゴヌクレオチドであれば特に限 定されないが、好ましくは 17〜60塩基、より好ましくは 20〜60塩基、さらに好ましくは 3 0〜60塩基力 なるオリゴヌクレオチドの相補的配列を有するアンチセンス'オリゴヌク レオチドが挙げられる。特に好ましくは翻訳開始領域にある上記オリゴヌクレオチドの 相補的配列を有するアンチセンス'オリゴヌクレオチドが挙げられる。該アンチセンス' オリゴヌクレオチドは、配列番号 12、 14及び 18力 選ばれるいずれか一つに記載の 塩基配列またはその断片の塩基配列に関する情報に基づき、常法により、例えば DN A合成機を用いることにより調製することができる。
[0060] オリゴヌクレオチド誘導体としては、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合が ホスホロチォエート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中 のリン酸ジエステル結合が N3， -P5，ホスホアミデート結合に変換されたオリゴヌクレオ チド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステルとの結合がペプチド 核酸結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のゥラシルが C-5プロピ-ルゥラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中 のゥラシルが C-5チアゾリルゥラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌ クレオチド中のシトシンが C-5プロピ-ルシトシンで置換されたオリゴヌクレオチド誘導 体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがフエノキサジン修飾シトシン（phenoxazine-modifi ed cytosine)で置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリボース 力^， -0-プロピルリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド 中のリボースが 2，-メトキシエトキシリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体等 を挙げることができる [細胞工学， ， 1463 (1997)]。
[0061] 上記アンチセンス ·ォリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド誘導体を用い、アン チセンス RNA/DNA技術 [バイオサイエンスとインダストリ一， 50, 322 (1992)、化学， 4£ , 681 (1991)、 Biotechnology, 9, 358 (1992)、 Trends in Biotechnology, 10, 87 (1992) 、 Trends in Biotechnology, 10, 152 (1992)、細胞工学， 16, 1463 (1997)]、トリプル 'へ リックス技術 [Trends in Biotechnology, 10, 132 (1992)]、リボザィム技術 [Current Op inion in Chemical Biology, 3, 274 (1999)、 FEMS Microbiology Reviews, 23, 257 (199 9)、 Frontiers in Bioscience, 4, D497 (1999)、 Chemistry & Biology, 6, R33 (1999)、 N ucleic Acids Research, 26, 5237 (1998)、 Trends in Biotechnology, 16, 438 (1998)]、 め O ヽ アコィ DNA法 [Nippon Rinsho - Japanese Journal of Clinical Medicine, 56, 5 63 (1998)、 Circulation Research, 82, 1023 (1998)、 Experimental Nephrology, 5, 429 (1997)、 Nippon Rinsho - Japanese Journal of Clinical Medicine, 54, 2583 (1996)]に 準じて、 GPR4自身の発現を阻害または抑制することができる。
[0062] 配列番号 12、 14及び 18力 選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列を有する DN Aとストリンジェントな条件下でノヽイブリダィズするヌクレオチドとは、配列番号 12、 14及 び 18力 選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列を有する DNAの一部、または全 部をプローブとして、コ口-一'ハイブリダィゼーシヨン法、プラーク 'ハイブリダィゼー シヨン法、サザンブロットハイブリダィゼーシヨン法等を用いることにより得られる DNA を意味し、具体的には、コロニーまたはプラーク由来の DNAを固定ィ匕したフィルター を用いて、 0.7〜1.0 mol/Lの塩化ナトリウム存在下、 65 °Cでハイブリダィゼーシヨンを 行った後、 0.1〜2倍濃度の SSC溶液（1倍濃度の SSC溶液の組成は、 150 mmol/L塩 化ナトリウム、 15 mmol/Lクェン酸ナトリウムよりなる）を用い、 65 °C条件下でフィルタ 一を洗浄することにより同定できる DNA等を挙げることができる。ハイブリダィゼーショ ンは、モレキュラ^ ~ ·クロー-ング第 2版、カレント 'プロトコ一ルズ'イン'モレキュラ^ ~ · ノヽィォロン ~~、 DNA Cloning 1: し ore Techniques, A Practical Approacn, Second Edit ion, Oxford University (1995)等に記載されている方法に準じて行うことができる。ノヽ イブリダィズするヌクレオチドとしては、例えば上記 BLASTや FASTA等を用いて計算 したときに 12、 14及び 18力 選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列を有する DNA の相補的配列を有する DNAと少なくとも 75%以上の相同性を有する DNAが好ましぐ より好ましくは 80%以上の相同性を有する DNA、さらに好ましくは 95%以上の相同性を 有する DNAを挙げることができる。ヌクレオチドとしては、 DNA、 RNA等いずれも用い られるが DNAが好適に用いられる。
[0063] 上記アンチセンス ·ォリゴヌクレオチドもしくは該アンチセンス ·ォリゴヌクレオチド誘 導体、または配列番号 12、 14及び 18力 選ばれるいずれか一つに記載の塩基配列 を有する DNAとストリンジェントな条件下でノヽイブリダィズするヌクレオチドもしくは該ヌ クレオチド誘導体を単独でまたはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ァ デノウィルスァソシエーテッドウィルスベクター等の遺伝子治療用ベクターに挿入した 後、下記に記載した常法に従って製剤化したものをケモカイン産生の亢進によって 発症及び Zもしくは悪化する疾患の予防ならびに Zまたは治療剤等として使用する ことちでさる。
[0064] 遺伝子治療用ベクターをケモカイン産生の亢進によって発症及び Zもしくは悪ィ匕 する疾患の予防ならびに Zまたは治療剤等として用いる場合には、該遺伝子治療用 ベクターと遺伝子治療剤に用いる基剤を調合することにより製造することができる [Na ture Genet., 8, 42 (1994)]。
上記基剤としては、通常注射剤に用いる基剤であればどのようなものでもよぐ例え ば蒸留水、塩ィ匕ナトリウムまたは塩ィ匕ナトリウムと無機塩との混合物等の塩溶液、マン 二トール、乳糖、デキストラン、ブドウ糖等の糖溶液、グリシン、アルギニン等のアミノ 酸溶液、有機酸溶液または塩溶液とグルコース溶液との混合溶液等が挙げられる。 また常法に従い、これらの基剤に浸透圧調整剤、 pH調整剤、ゴマ油、ダイズ油等の 植物油またはレシチンもしくは非イオン界面活性剤等の界面活性剤等の助剤を加え て、溶液、懸濁液または分散液として注射剤を調製してもよい。これらの注射剤を、 粉末化、凍結乾燥等の操作により用時溶解用製剤として調製することもできる。
[0065] ケモカインが関与する疾患の予防及び Zまたは治療剤等は、液体の場合はそのま まで、固体の場合は、投与直前に、必要により滅菌処理をした上記の基剤に溶解し て使用することができる。
投与方法としては、例えば患者の治療部位に吸収されるように、局所的に投与する 方法を挙げることができる。また、非ウィルス遺伝子移入法によっても目的とする治療 部位に DNAを輸送することができる。
[0066] 非ウィルス遺伝子移入法としては、リン酸カルシウム共沈法 [Virology, 52, 456-467 (1973) ; Science, 209, 1414-1422 (1980) ]、マイクロインジェクション法 [Proc. Natl. Ac ad. Sci. USA, 77, 5399-5403 (1980) ; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 7380-7384 (1 980) ; Cell, 27, 223-231 (1981) ; Nature, 294, 92-94 (1981)]、リボソームを介した膜融 合-介在移入法 [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413-7417 (1987) ; Biochemistry, 28, 9508-9514 (1989) ; J. Biol. Chem., 264, 12126-12129 (1989) ; Hum. Gene Ther., 3, 267-275 (1992) ; Science, 249, 1285-1288 (1990) ; Circulation, 83, 2007-2011 (19 92) ]、直接 DNA取り込みまたは受容体-媒介 DNA移入法 [Science, 247, 1465-1468 (1990) ; J. Biol. Chem., 266, 14338-14342 (1991) ; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 3 655-3659 (1991) ;J. Biol. Chem., 264, 16985-16987 (1989) ; BioTechniques, U, 474 -485 (1991) ; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 3410-3414 (1990) ; Proc. Natl. Acad. S ci. USA, 88, 4255-4259 (1991) ; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 4033-4037 (1990) ; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 8850-8854 (1991) ; Hum. Gene Ther., 3, 147-154 (1 991)]等を挙げることができる。
[0067] リガンドの GPR4への結合を阻害する物質としては、例えば、 GPR4を認識する抗体、 GPR4に拮抗作用を有する化合物等を挙げることができる。
上記抗体としては、 GPR4を認識する抗体であれば 、ずれも用いることができるが、 GPR4を特異的に認識する抗体が好ま ヽ。また該抗体はポリクローナル抗体でもモ ノクローナル抗体でもよい。このような抗体として、例えば、 GPR4を認識する中和抗体 等をあげることができる。 GPR4を発現している細胞を減少させて、その機能を抑制す る抗体としては、例えば、抗体依存性細胞障害活性 (ADCC活性)を持つ抗体等を挙 げることができる。
[0068] 上記の抗体は、例えば、以下の方法に準じて調製することができる。
(1)ポリクローナル抗体の作製
GPR4またはその部分断片ポリペプチドの精製標品、ある 、は GPR4の一部のァミノ 酸配列を有するペプチドを抗原として用い、動物に投与することによりポリクローナル 抗体を作製することができる。
[0069] 投与する動物としては、ゥサギ、ャギ、ラット、マウス、ハムスター等を用いることがで きる。
該抗原の投与量は動物 1匹当たり 50〜 100 gが好まし 、。
ペプチドを用いる場合は、ペプチドをスカシガイへモシァ-ン（keyhole limpet haem ocyanin)ゃ牛チログロブリン等のキャリア蛋白に共有結合させたものを抗原とするの が望ましい。抗原とするペプチドは、ペプチド合成機で合成することができる。
[0070] 該抗原の投与は、 1回目の投与の後 1〜2週間おきに 3〜10回行う。各投与後、 3〜7 日目に眼底静脈叢より採血し、該血清が免疫に用いた抗原と反応することを酵素免 疫測定法 [酵素免疫測定法 (ELISA法）：医学書院刊（1976年）、 Antibodies-A Labor atory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)]等で確認する。
免疫に用いた抗原に対し、その血清が充分な抗体価を示した非ヒト哺乳動物より血 清を取得し、該血清を分離、精製することによりポリクローナル抗体を取得することが できる。
[0071] 分離、精製する方法としては、遠心分離、 40〜50%飽和硫酸アンモニゥムによる塩 析、カプリノレ酸沈殿 [Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laborat ory, (1988)]、または DEAE-セファロースカラム、陰イオン交換カラム、プロテイン Aま たは G-カラムあるいはゲル濾過カラム等を用いるクロマトグラフィー等を、単独でまた は組み合わせて処理する方法が挙げられる。
[0072] (2)モノクローナル抗体の作製
(a)抗体産生細胞の調製 免疫に用いた GPR4またはその部分断片ポリペプチドの精製標品、あるいは GPR4 の一部のアミノ酸配列を有するペプチドに対し、その血清が十分な抗体価を示したラ ットを抗体産生細胞の供給源として供する。
[0073] 該抗体価を示したラットに抗原物質を最終投与した後 3〜7日目に、脾臓を摘出す る。
該脾臓を MEM培地（日水製薬社製）中で細断し、ピンセットでほぐし、 l,200rpmで 5 分間遠心分離した後、上清を捨てる。
得られた沈殿画分の脾細胞をトリス—塩ィ匕アンモ-ゥム緩衝液 (pH7.65)で 1〜2分 間処理し赤血球を除去した後、 MEM培地で 3回洗浄し、得られた脾細胞を抗体産生 細胞として用いる。
(b)骨髄腫細胞の調製
骨髄腫細胞としては、マウスまたはラットから取得した株化細胞を使用する。例えば 、 8-ァザグァニン耐性マウス（BALB/c由来）骨髄腫細胞株 P3- X63Ag8- U1 (以下、 P3 — U1と略す） [Curr. Topics Microbiol. Immunol, 81, 1 (1978)、 Eur. J. Immunol, 6, 51 1 (1976)]、 SP2/0-Agl4(SP-2) [Nature, 276, 269 (1978)]、 P3— X63— Ag8653(653)[J. I mmunoL, 123, 1548 (1979)]、 P3-X63-Ag8(X63) [Nature, 256, 495 (1975)]等を用い ることができる。これらの細胞株は、 8-ァザグァニン培地 [RPMI-1640培地にグルタミ ン（1.5 mmol/1)、 2-メルカプトエタノール（5 X 10— 5mol/l)、ジェンタマイシン（10 μ g/ml )及び牛胎児血清 (FCS) (CSL社製、 10%)を加えた培地（以下、正常培地という）に、 さらに 8-ァザグァニン（15 μ g/ml)を加えた培地]で継代する力 細胞融合の 3〜4日 前に正常培地で培養し、融合には該細胞を 2 X 107個以上用いる。
(c)ハイプリドーマの作製
(a)で取得した抗体産生細胞と (b)で取得した骨髄腫細胞を MEM培地または PBS (リ ン酸ニナトリウム 1.83 g、リン酸一カリウム 0.21 g、食塩 7.65 g、蒸留水 1リットル、 pH7.2 )でよく洗浄し、細胞数が、抗体産生細胞:骨髄腫細胞 =5〜10 : 1になるよう混合し、 1 ,200rpmで 5分間遠心分離した後、上清を捨てる。
[0074] 得られた沈殿画分の細胞群をよくほぐし、該細胞群に、攪拌しながら、 37 °Cで、 108 抗体産生細胞あたり、ポリエチレングリコール- 1000 (PEG-1000) 2 g、 MEM 2 mL及び ジメチルスルホキシド（DMSO) 0.7 mLを混合した溶液を 0.2〜1 mL添加し、さらに 1〜 2分間毎に MEM培地 1〜2 mLを数回添加する。
添加後、 MEM培地をカ卩えて全量が 50 mLになるように調製する。該調製液を 900rp mで 5分間遠心分離後、上清を捨てる。得られた沈殿画分の細胞を、ゆるやかにほぐ した後、メスピペットによる吸込み、吹出しでゆるやかに HAT培地 [正常培地にヒポキ サンチン（10— 4mol/L)、チミジン（1.5 X 10— 5 mol/L)及びアミノプテリン（4 X 10— 7 mol/L) を加えた培地] 100 mL中に懸濁する。
[0075] 該懸濁液を 96穴培養用プレートに 100 μ L/穴ずつ分注し、 5%COインキュベーター
2
中、 37 °Cで 7〜14日間培養する。
培養後、培養上清の一部をとりアンチボディィズ [Antibodies, A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory, Chapter 14 (1988)]等に述べられている酵素免疫 測定法により、本発明のポリペプチドの部分断片ポリペプチドに特異的に反応するハ イブリドーマを選択する。
[0076] 酵素免疫測定法の具体例として、以下の方法を挙げることができる。
免疫の際、抗原に用いた GPR4またはその部分断片ポリペプチドの精製標品、ある いは GPR4の一部のアミノ酸配列を有するペプチドを適当なプレートにコートし、ハイ プリドーマ培養上清もしくは後述の (d)で得られる精製抗体を第一抗体として反応させ 、さらに第二抗体としてピオチン、酵素、化学発光物質あるいは放射線化合物等で 標識した抗ラットまたは抗マウスィムノグロブリン抗体を反応させた後に標識物質に応 じた反応を行 、、抗原に用いたポリペプチドに特異的に反応するものを本発明で用 いられるモノクローナル抗体を生産するハイプリドーマとして選択する。
[0077] 該ノ、イブリドーマを用いて、限界希釈法によりクローユングを 2回繰り返し [1回目は、 HT培地 (HAT培地力もアミノプテリンを除いた培地）、 2回目は、正常培地を使用する ]、安定して強 、抗体価の認められたものを本発明で用いられるモノクローナル抗体 を産生するハイプリドーマ株として選択する。
(d)モノクローナル抗体の調製
プリスタン処理 [2,6, 10, 14-テトラメチルペンタデカン（Pristane) 0.5 mLを腹腔内投 与し、 2週間飼育する]した 8〜10週令のマウスまたはヌードマウスに、（c)で取得した 本発明で用いられるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞 5〜20 X 106細 胞 Z匹を腹腔内に注射する。 10〜21日間でハイプリドーマは腹水癌化する。
[0078] 該腹水癌化したマウス力 腹水を採取し、 3,000rpmで 5分間遠心分離して固形分を 除去する。
得られた上清より、ポリクローナル抗体で用いた方法と同様の方法でモノクローナル 抗体を精製、取得することができる。
抗体のサブクラスの決定は、マウスモノクローナル抗体タイピングキットまたはラット モノクローナル抗体タイピングキットを用いて行う。ポリペプチド量は、ローリー法ある いは 280應での吸光度より算出する。
[0079] 上記、 GPR4を認識する抗体を含有するケモカイン産生阻害剤、ケモカイン産生の 亢進によって発症及び Zもしくは悪化する疾患の予防ならびに Zまたは治療剤等は 、例えば以下のように調製することができる。
該抗体を有効成分として含有する医薬は、該有効成分を単独で投与することも可 能ではあるが、通常は該有効成分を薬理学的に許容される一つあるいはそれ以上の 担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られる任意の方法により製 造した医薬製剤として提供するのが望ましい。好ましくは水、あるいは食塩、グリシン 、グルコース、ヒトアルブミン等の水溶液等の水性担体に溶解した無菌的な溶液が用 いられる。また、製剤溶液を生理的条件に近づけるための緩衝化剤や等張化剤のよ うな、薬理学的に許容される添加剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩ィ匕ナトリウム、乳酸ナ トリウム、塩ィ匕カリウム、クェン酸ナトリウム等を添加することもできる。また、凍結乾燥し て貯蔵し、使用時に適当な溶媒に溶解させて用いることもできる。
[0080] 投与経路は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましぐ経口投与、ま たは静脈内投与等の非経口投与を挙げることができる。投与形態としては、錠剤、注 射剤等が挙げられる。
経口投与に適当な製剤としては、錠剤等が挙げられる。錠剤等は、乳糖、マン-ト ール等の賦形剤、デンプン等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ヒド ロキシプロピルセルロース等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン 等の可塑剤等を添加剤として用いて製造できる。 [0081] 非経口投与に適当な製剤としては、注射剤等が挙げられる。注射剤は、例えば塩 溶液、ブドウ糖溶液または両者の混合物力もなる担体等を用いて調製する。また、非 経口剤にぉ 、ても経口剤で添加剤として例示した成分を添加することもできる。 投与量または投与回数は、目的とする治療効果、投与方法、治療期間、年齢、体 重等により異なる力 通常成人 1日当たり 10 μ g/kg〜8 mg/kgである。
[0082] GPR4の構成的活性により生じるシグナル伝達を抑制する物質は、該構成的活性に より生ずるシグナル伝達を抑制することのできる物質を探索することによつても取得す ることがでさる。
例えば、試験例 1に示したように、適当な宿主細胞で GPR4を誘導発現することによ り、 GPR4の構成的活性に由来するシグナルを CREレポーターを用 V、て検出すること ができる。このレポーター活性を抑制する物質を探索することにより、 GPR4のシグナ ル伝達を抑制する物質を探索することができる。
[0083] GPR4は弱酸性刺激により活性ィ匕されることが報告されていることから、 GPR4を内在 的に発現する細胞、ある！ヽは GPR4発現プラスミドを導入した GPR4強制発現細胞を 弱酸性刺激し、各種ケモカインの産生が起こるかどうかを調べることにより、 GPR4の 活性ィ匕によりケモカイン産生が誘導されるかどうかを調べることができる (試験例 4及 び 5参照)。 GPR4は構成活性型 GPCRであることから、 GPR4発現プラスミドを適当な 細胞に導入し、一過的に GPR4を高発現させた際に各種ケモカインの産生が起こるか どうかを調べることによつても、 GPR4の活性ィ匕によりケモカイン産生が誘導されるかど うかを調べることができる（試験例 6〜8参照)。
[0084] GPR4のシグナル伝達を抑制する物質力 上記のケモカイン産生を抑制するかどう かを調べることにより、 GPR4のシグナル伝達を抑制する物質がケモカイン産生阻害 剤として作用するかどうかを調べることができる。
次に、化合物 (1)、（II)及び (III)の製造方法について説明する。
以下に示した製造法において、定義した基が反応条件下変化するか、または方法 を実施するのに不適切な場合、有機合成化学で常用される方法、例えば官能基の 保護、脱保護等 [例えば、プロテクティブ'グループス'イン'オーガニック 'シンセシス 第二版 (Protective uroups in urganic Synthesis, the third edition)、クリ ~~ン (T. W . Greene)、ワッツ（Peter G. M. Wuts)著、ジョン'ワイリ^ ~ ·アンド'サンズ 'インコーポ レイテッド (John Wiley & Sons Inc.) (1999年）]の手段に付すことにより容易に製造を 実施することができる。また、必要に応じて置換基導入等の反応工程の順序を変える ことちでさる。
[0085] 化合物（I)は、例えば WO2004/017995に記載の方法によって得ることができる。
次に、化合物（Π)及び (III)の製造方法にっ 、て説明する。化合物（II)及び (III)は
、例えば以下の製造法によって得ることができる。
製造法 1
[0086] [化 11]
Figure imgf000040_0001
[0087] [式中、 R31は置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロ アルキル、置換もしくは非置換のァリールまたは置換もしくは非置換の芳香族複素環 基 (テトラゾリルを除く）を表し、 Dは塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を表し、 R25 、 R26a、 R26b、 R26e及び Wはそれぞれ前記と同義である]
工程 1
化合物 (VI)は、市販の化合物（IV)を US5151435記載の方法またはそれに準じた方 法に付すことによって合成することができる。
[0088] 化合物 (V)は特開平 3-95181記載の方法またはそれに準じた方法によって得られ る。
工程 2
化合物 (VII)は、化合物 (VI)を溶媒中、 1当量から大過剰量、好ましくは 1〜10当量 の還元剤存在下、必要により触媒量力 大過剰の無機化合物または酸を加え、 0 °c 力も使用する溶媒の沸点の間の温度、好ましくは室温から 120 °Cで、 10分間から 48 時間反応させること〖こよって合成することができる。
[0089] 溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、テトラヒドロフラン (THF)、 1,4-ジォキ サン、ジメトキシェタン、ジメチルホルムアミド（DMF)、ジメチルァセトアミド（DMA)、ベ ンゼン、トルエン、キシレン、ァセトニトリル、それらの混合溶媒等を用いることができ、 好ましくはメタノールまたはエタノールを用いることができる。
還元剤としては、例えばスズ (0)、塩化スズ (11)、塩化チタン (111)、塩ィ匕クロム (11)、亜鉛 、鉄、ニッケル、ヒドラジン、水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウム、水 素化ホウ素リチウム等を用いることができ、好ましくは塩化スズ (11)、塩ィ匕チタン (111)、鉄 を用いることができる。
[0090] 無機化合物としては、例えば塩ィ匕ニッケル (11)、ラネーニッケル、塩ィ匕コバルト (II)等 を用いることができる。
酸としては、例えば塩酸、硫酸、酢酸等を用いることができ、好ましくは塩酸を用い ることがでさる。
工程 3
化合物（ΠΙ-a)は、化合物 (VII)を溶媒中、 1当量から大過剰量、好ましくは 1〜10当 量の塩基存在下、 1当量から大過剰量、好ましくは 1〜10当量の (VIII)または（IX)と、 0 °C力 使用する溶媒の沸点の間の温度、好ましくは室温から 120 °Cで 10分間から 4 8時間反応させることによって合成することができる。
[0091] 塩基としては、例えばトリェチルァミン、ジイソプロピルェチルァミン、リチウムジイソ プロピルアミド、カリウム tert-ブトキシド、ピリジン、 N-メチルモルホリン、炭酸カリウム、 1,8-ジァザビシクロ [5.4.0]- 7-ゥンデセン、または酸クロリドもしくは酸無水物と反応し な!、塩基性官能基が担持された機能性レジン等を用いることができ、好ましくはトリエ チルァミン、ピリジンまたはポリビニルピリジンを用いることができる。
[0092] 溶媒としては、例えばジクロロメタン、クロ口ホルム、 THF、 1,4-ジォキサン、ジメトキ シェタン、 DMF、 DMA,ベンゼン、トルエン、キシレン、ァセトニトリル、酢酸ェチル、ピ リジン、テトラリン、それらの混合溶媒等を用いることができ、好ましくはクロ口ホルムま たはジクロロメタンを用いることができる。
製造法 2
[化 12]
Figure imgf000042_0001
[0094] (式中、 R32a及び R32bは、同一または異なって水素原子、置換もしくは非置換の低級ァ ルキルまたは置換もしくは非置換の低級シクロアルキルを表す力、または R32aと R32bが 一緒になつて置換もしくは非置換の低級シクロアルキルを形成し、 R25、 R26a、 R26b、 R2& 及び Wはそれぞれ前記と同義である）
工程 4
化合物（ΙΠ-b)は、溶媒中、 1当量から大過剰量、好ましくは 1〜3当量の還元剤存在 下、化合物 (VII)及び 1当量から大過剰量、好ましくは 1〜10当量の化合物 (X)を、 -7 8〜100。C、好ましくは 0〜50 °Cで、 10分間から 24時間反応させることによって合成す ることができる。また、この反応は、必要により触媒量から大過剰量、好ましくは 0.5〜5 当量の酸を添カ卩してもょ 、。
[0095] 還元剤としては、例えば水素化ホウ素ナトリウム、トリァセトキシ水素化ホウ素ナトリウ ム、シアン化水素化ホウ素ナトリウム等を用いることができ、好ましくはトリァセトキシ水 素化ホウ素ナトリウムを用いることができる。
酸としては、例えばギ酸、酢酸、トリフルォロ酢酸、プロピオン酸、塩酸等を用いるこ とができ、好ましくは酢酸を用いることができる。
[0096] 溶媒としては、例えばジクロロメタン、クロ口ホルム、四塩化炭素、ジクロロェタン、ベ ンゼン、トルエン、キシレン、ジェチルエーテル、 THF、 1,4-ジォキサン、 DMF、 DMA 、ァセトニトリル、へキサン、それらの混合溶媒等を用いることができ、好ましくは THF またはジクロロメタンを用いることができる。
製造法 3 [0097] [化 13]
Figure imgf000043_0001
[0098] (式中、 ncは 0〜3の整数を表わし、 R ま低級アルキルを表し、 4 a及び はそれぞ れ前記 R15a及び R15bと同義であり、 R25、 R26a、
Figure imgf000043_0002
R26e及び Wはそれぞれ前記と同義で ある）
工程 5
化合物 (XI)は、製造法 2に準じて得られる化合物 (ΙΠ-c)を溶媒中、 0 °Cから使用す る溶媒の沸点の間の温度、好ましくは室温から 100 °Cで、 1当量から大過剰量の塩基 存在下、 1〜48時間、好ましくは 1〜3時間反応させることによって合成することができ る。
[0099] 塩基としては、例えば水酸ィ匕ナトリウム、水酸化リチウム、水酸ィ匕カリウム、炭酸カリ ゥム、炭酸セシウム、ナトリウムメトキシド等を用いることができ、好ましくは水酸ィ匕ナトリ ゥムを用いることができる。
溶媒としては、例えば水、 THF、ジェチルエーテル、メタノール、エタノール、プロパ ノール、ジクロロメタン、ジクロロェタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、それらの混合 溶媒等を用いることができ、好ましくは THF、メタノールまたはそれらと水の混合溶媒 を用いることができる。
工程 6
化合物 (XI)を塩基性溶媒中、 1当量から大過剰量、好ましくは 1〜20当量のハロゲ ン化剤と、 - 10〜100 °C、好ましくは室温で 10分間力 24時間反応させることによって 相当する酸ハロゲンィ匕物を合成することができる。 [0100] 塩基性溶媒としては、例えばピリジン、トリェチルァミン、ジイソプロピルェチルァミン 、 N-メチルモルホリン、それらの混合溶媒等を用いる力、またはジクロロメタン、クロ口 ホルム、酢酸ェチル、 THF、 1,4-ジォキサン、 DMF、 DMA,ァセトニトリル、ベンゼン、 トルエン、キシレン等の溶媒にピリジン、トリエチルァミン、ジイソプロピルェチルァミン 、 N-メチルモルホリン等を混合して用いることでき、好ましくはピリジンを用いることが できる。
[0101] ハロゲンィ匕剤としては、例えば塩ィ匕チォニル、ォキサリルクロリド、ォキシ塩化リンを 用いることができ、好ましくは塩ィ匕チォ-ルを用いることができる。
次に、得られた酸ハロゲン化物を溶媒中、必要により 1当量から大過剰量、好ましく は 1〜10当量の塩基存在下、 1当量から大過剰量、好ましくは 1〜10当量の化合物（X II)と、 -30 °C力 使用する溶媒の沸点の間の温度、好ましくは 0 °Cから室温で、 1分 間から 24時間、好ましくは 30分間から 2時間反応させることによって化合物（ΠΙ-d)を 合成することができる。
[0102] 塩基としては、ピリジン、トリエチルァミン、ジイソプロピルェチルァミン、 N-メチルモ ルホリン等を用いることができ、好ましくはピリジンまたはトリェチルァミンを用いること ができる。
溶媒としては、例えばジェチルエーテル、 THF、 1,4-ジォキサン、 DMF、 DMA,ジメ チルスルホキシド（DMSO)、ベンゼン、トルエン、キシレン、ァセトニトリル、酢酸ェチ ル、ピリジン、ジクロロメタン、クロ口ホルム、四塩ィ匕炭素等を用いることができる。
[0103] 化合物（ΙΠ-d)の合成は、ペプチドィ匕学で常用される手法を用いて行うこともできる。
すなわち、化合物 (XI)を溶媒中、 0.5〜10当量の縮合剤存在下、 1〜10当量の化合 物（XII)と、 0〜50 °Cで、 10分間から 70時間反応させることによって化合物（ΠΙ-d)を合 成することができる。
縮合剤としては、例えば 1,3-ジシクロへキシルカルポジイミド、 1-[3- (ジメチルァミノ） プロピル]- 3-ェチルカルボジイミド塩酸塩（EDC)、 1-[3- (ジメチルァミノ)プロピル] -3- ェチルカルポジイミド結合ポリスチレンレジン (EDCレジン)等が挙げられる。 EDCレジ ンは文献 [テトラへドロンレターズ（Tetrahedron Letters) 34卷、 48号、 7685頁（1993 年) ]記載の方法で製造することができる。 [0104] 溶媒としては、例えばジェチルエーテル、 THF、 1,4-ジォキサン、 DMF、 DMA, DM SO、ベンゼン、トルエン、キシレン、ァセトニトリル、酢酸ェチル、ピリジン、ジクロロメタ ン、クロ口ホルム、四塩ィ匕炭素等を用いることができ、好ましくは DMFまたは THF等を 用!/、ることができる。
またこの時、 N-ヒドロキシこはく酸イミド、 3,4-ジヒドロ- 3-ヒドロキシ- 4-ォキソ -1,2,3- ベンゾトリアジン、 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール等、好ましくは 1-ヒドロキシベンゾトリ ァゾール等の添加剤を用いることもできる。
工程 7
化合物（ΠΙ-e)は、化合物（ΠΙ-d)を溶媒中、 - 78〜100 °Cで、 2〜4当量の還元剤と 1 0分間から 24時間、好ましくは 1〜3時間反応させることによって製造することができる
[0105] 還元剤としては、例えば水素化アルミニウムリチウム、水素化ホウ素ナトリウム、ジィ ソプロピル水素化アルミニウムリチウム等を用いることができ、好ましくは水素化アルミ -ゥムリチウムまたは水素化ホウ素ナトリウムを用いることができる。
溶媒としては、例えばジクロロメタン、クロ口ホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、ベ ンゼン、トルエン、キシレン、ジェチルエーテル、 THF、 1,4-ジォキサン、 DMF、 DMA 、ァセトニトリル、メタノール、エタノール、プロパノール、それらの混合溶媒等を用い ることができ、好ましくはメタノール、 THFまたはトルエンを用いることができる。
[0106] 上記製造法における生成物の単離、精製は、通常の有機合成で用いられる方法、 例えば濾過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、結晶化、各種クロマトグラフィー等を適宜組み 合わせて行うことができる。さらに一般的な並列合成法で常用される精製法、例えば 、スカベンジャーレジン、イオン交換レジンを用いて精製することができる。また、中間 体においては、特に精製することなく次の反応に供することもできる。
[0107] 化合物（I)、 (II)及び (III)の塩を取得した 、場合には、化合物（I)、 (II)及び (III)の 塩が得られるときはそのまま精製すればよぐまた化合物（1)、（II)及び (III)が遊離の 形で得られるときは、化合物 (1)、（II)及び (III)を適当な溶媒に溶解または懸濁し、酸 または塩基を加えて単離'精製すればよい。
次に、化合物 (1)、（II)及び (III)の薬理作用について実験例により具体的に説明す [0108] 以下の試験例で用いた化合物 1、 2及び 3は、それぞれ2-(2-ェチル-5,7-ジメチル- 3H-イミダゾ [4,5-b]ピリジン- 3-ィルメチル) -8-(4-メチルビペラジン- 1-ィルメチル) -10 ,11-ジヒドロ [b,f]ァゼピン 2フマル酸塩 (WO2004/017995)、 trans- 4- [4- (2,5,7-トリメ チル -3H-イミダゾ [4,5-b]ピリジン- 3-ィルメチル)フエ-ルァミノ]シクロへキサンカルボ ン酸 (4-メチルビペラジン- 1-ィル)アミド及び trans-4-[4-(2,5,7-トリメチル -3H-イミダゾ [4,5-b]ピリジン- 3-ィルメチル)フエ-ルァミノ]シクロへキサンカルボン酸 [2- (ピロリジン -1-ィル)ェチル]アミドである。各化合物の構造を以下に示す。
[0109] [化 14]
Figure imgf000046_0001
[0110] 試験例 1： GPR4拮抗作用
WO03/087366記載の方法に準じて、ヒト GPR4のアツセィ細胞の構築を行った。本 アツセィ細胞を用いることにより、ヒト GPR4の構成活性をレポーター（ホタル レシフェ ラーゼ)の活性で検出することができる。
ヒト GPR4誘導発現プラスミド pAGal9- GPR4 (2 μ g:WO03/087366)及びレポーター プラスミド pACREpluc (2 μ g;WO03/087366)を、エレクト口ポレーシヨン法により、 6 X 1 06細胞の KJMGER8 (WO03/087366)に共導入した。該形質転換株を 8 mLの RPMI16 40'1丁？3〇培地1^\111640'01¾0培地[6 mmol/L L-グルタミン (インビトロジェン社製 )、 100 units/mLペニシリン（インビトロジェン社製）、 100 μ g/mLストレプトマイシン（ インビトロジェン社製）、 10 mmol/L N- 2-ヒドロキシェチルピペラジン- N，- 2-エタンス ノレホン酸 (N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid； HEPES；ナカライ テスタ社製）、 3 μ g/mLインシュリン（シグマ社製）、 5 μ g/mLトランスフェリン（シグマ 社製）、 5 mmol/Lピルビン酸ナトリウム（和光純薬社製）、 125 nmol/L亜セレン酸 (ナ 力ライテスタ社製）、 1 mg/mLガラクトース (ナカライテスタ社製)を含む RPMI培地（日 水製薬社製) ]に懸濁し、 COインキュベータ一中、 37 °Cで 24時間培養した。培養後
2
、ブラストサイジン S (2.0 μ g/mL) (フナコシ社製）、ハイグロマイシン B (300 μ g/mL) ( 和光純薬社製)及びジエネティシン (500 /z g/mL) (ナカライテスタ社製)を添加し、さら に 14日間培養して安定形質転換株 (GPR4アツセィ細胞と呼ぶ）を取得した。該形質 転^ を、ブラストサイジン S (2.0 μ g/mL)、ノヽィグロマイシン B (300 μ g/mL)及びジェ ネテイシン（500 μ g/mL)を含む RPMI1640 · ITPSG培地で継代した。
[0111] 同様にして、コントロールプラスミド pAGal9-nd (2 μ g ;WO03/087366)及びレポータ 一プラスミド pACREpluc (2 μ g ;WO03/087366)を KJMGER8に共導入し、安定形質転 • (コントロール細胞と呼ぶ）を取得した。
得られた GPR4発現細胞を白色プレートに 1ゥエル当たり 105個を播種し、反応液中 1 0 nmol/Lになるように 13 -エストラジオール（ j8 -estradiol,以下 E2と略する； Sigma- Aid rich社)を培地で希釈したものと試験化合物を加え、 37 °C、 5%COインキュベーター
2
中で 6時間反応した。その後、 Steady Glo Luciferase Assay System (Promega社）溶液 を加え反応を停止し、トップカウント（Packard, Meriden, CT, USA)で 1秒間の発光量 を測定した。
[0112] 1 μ mol/Lでの試験化合物の活性 (拮抗作用）は、以下の式に示す通り E2添加時と 非添カ卩時のカウント数 (count per second)をもとに算出した阻害率で表した。
式中、 A、 B及び Cは、それぞれ以下の意味を表す。
A： E2及び試験化合物を添加した時のカウント数
B： E2及び試験化合物の両方が非添加時のカウント数
C： E2のみ添カ卩した時のカウント数
[0113] [数 1]
Figure imgf000047_0001
[0114] 結果を表 1に示す。 [0115] [表 1] 表 1
化合物番号 阻害率 （％)
1 93
2 86
3 89
[0116] 以上の結果より、化合物 2及び 3が、 GPR4拮抗作用を有することがわ力つた。この 結果から、化合物 (1)、 （II)及び (III)が、 GPR4拮抗作用を有することが示された。 試験例 2： GPR4発現細胞の構築
以下の方法によって、ヒト GPR4を安定に発現する HEK293細胞を構築した。 pAGal9- GPR4 (WO03/087366)を Hindlll (タカラバイオ社製）と Notl (タカラバイオ社 製）で切断後、 GPR4をコードする Hindlll- Notl断片を取得し、発現ベクター pcDNA3.1 (インビトロジェン社製）の HindIII、 Notl間に組み込むことにより、 GPR4発現プラスミド p CDNA3.1- GPR4を作製した。 pcDNA3.1- GPR4を Fugene6 (Roche diagnosis社製)を用 いて HEK293細胞に導入後、 1 mg/mLジエネティシン、 10%ゥシ胎児血清（fetal bovine serum ;FBS ;JRHバイオサイエンシーズ社製）、 100 units/mLペニシリン、 100 μ g/m Lストレプトマイシンを含む Dulbecco' s Modified Eagle Medium (DMEM) (インビトロジ ェン社製)で培養し、ヒト GPR4を高発現しているシングルクローン (clone 65)を選択し た。このクローンを以後 HEK293/GPR4と呼ぶ。
試験例 3： GPR4の活性ィ匕による細胞内 Ca2+濃度上昇、及びその抑制作用
前記の通り、 GPR4は弱酸性条件（pH6.5〜7.0)で活性化され、セカンドメッセンジャ 一である細胞内 cAMP産生が上昇することが知られている。そこで、試験例 2で作製し た HEK293/GPR4 (GPR4発現細胞）を各種 pHで処理し、 GPR4を活性化した時に、他 のセカンドメッセンジャーである細胞内 Ca2+濃度の上昇が起こる力検討した。コント口 ールとしては宿主である HEK293細胞を使用した。 [0117] 細胞を 20 mmol/L HEPESを含有する Hanks ' balanced salt solution (HBSSゝ pH7.5) に懸濁し、 3 μ mol/L Fura-2AM (同仁化学）、 0.003 w/v%プル口ニック F-127存在下 、 37 °Cで、 1時間インキュベートした。 HBSSで 3回洗浄後、 HBSSに懸濁し、 CAF-100 カルシウム測定装置（日本分光工業）にて細胞内 Ca2+濃度を測定した。懸濁液の pH は、 2 vol%塩酸をカ卩えることにより、各 pH (7.3, 7.0, 6.7)に調製した。細胞内 Ca2+濃度 は、 Grynkiewiczの式 [ザ'ジャーナル'ォブ 'バイオロジカル 'ケミストリー（The Journal of Biological Chemistry)、第 260卷、 3440-3450頁、 1985年]に従い求めた。その結 果、 HEK293/GPR4では、 pH7.5から弱酸性側まで pHを低下させていくと、 pH6.7まで 細胞内 Ca2+濃度の上昇がみられた。一方、 HEK293細胞 (コントロール)では弱酸性 化による細胞内 Ca2+濃度の上昇はみられな力つた。結果を図 1に示した。
[0118] 次いで、化合物 2及び 3が、弱酸性刺激による細胞内 Ca2+濃度の上昇を阻害する 力どうか検討した。上記のように調製した HEK293/GPR4の細胞懸濁液に、最終濃度 1 μ mol/Lの化合物を添カ卩し 2分後、 2 vol%塩酸を添カ卩して、細胞懸濁液の pHを 7.2に 変化させ、上記と同様にして細胞内 Ca2+濃度の上昇を測定した。細胞内 Ca2+濃度上 昇の阻害率は以下の式により算出した。
[0119] 式中、 A及び Bはそれぞれ以下の意味を表す。
A：試験化合物存在下で塩酸を添加した時の細胞内 Ca2+濃度の変化量
B：試験化合物非存在下で塩酸を添加した時の細胞内 Ca2+濃度の変化量
[0120] [数 2]
Figure imgf000049_0001
結果を表 2に示した。表 2によると、化合物 2及び 3は、 HEK293/GPR4の pH7.2で の細胞内 Ca2+濃度の上昇を抑制した。
以上の結果、弱酸性刺激による GPR4の活性ィ匕により細胞内 Ca2+濃度が上昇し、化 合物 1、 2及び 3によってそれが阻害されることが明らかになった。従って、化合物 (1)、 (II)及び (III)を始めとする、配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシグナ ル伝達に関する機能を抑制する物質は、弱酸性ィ匕刺激による GPR4の活性ィ匕を抑制 することが明ら力となった
[0122] [表 2] 表 2
化合物番号 阻害率 （％)
1 92
2 88
3 93
[0123] 試験例 4: GPR4の活性ィ匕による IL-8産生、及びその抑制作用
試験例 2で作製した HEK293/GPR4 (GPR4発現細胞）を各種 pHで処理し、 GPR4を 弱酸性条件で活性ィ匕した時に IL-8が産生される力検討した。コントロールとしては宿 主である HEK293細胞を使用した。
10% FBS含有 DMEMに 10 mmol/L HEPES、 10 mmol/L 2-morpholinoethanesulfonic acid monohydrate (MES ;和光純薬社製）を添カ卩し、 pH6、 6.5、 7.0、 7.5、 8.0の各 pH の培地を調製した。 HEK293/GPR4 (GPR4発現細胞）または HEK293細胞（コントロー ル）を 96-well plateに播種し、細胞がコンフルェントになったところで、上清を各 pHの 培地に交換した。 37 °Cにて、 18時間 COインキュベータ一中で培養後、上清を回収
2
し、上清中の IL- 8濃度を ELISAキット（DuoSet ELISA Development System,フナコシ )にて定量した。結果を図 2に示した。図 2によれば、 HEK293/GPR4では、 pH6.5をピ ークとした IL-8産生がみられた。一方、 HEK293細胞（コントロール）では弱酸性化に よる IL-8産生はみられな力つた。
[0124] 次いで、化合物 2及び 3が、 pH6.5の弱酸性刺激による IL-8産生を阻害するかどう か検討した。 20 mmol/L MES、 10% FBS含有 DMEMを pH6.5に調製し、最終濃度 1 μ mol/Lの化合物と一緒に HEK293/GPR4に添カ卩し、上記と同様にして IL-8産生量を測 定した。 IL-8産生阻害率は以下の式により算出した。式中、 A及び Bはそれぞれ以下 の意味を表す。 A：試験化合物添加時の IL-8濃度
B：試験化合物未添加時の IL-8濃度
[0125] [数 3] 阻害率（¾>) = 1一 X 100
Figure imgf000051_0001
[0126] 結果を表 3に示した。表 3によれば、化合物 2及び 3は、 HEK293/GPR4の pH6.5で の IL-8産生を抑制した。
以上の結果、 GPR4の活性ィ匕により IL-8が産生され、化合物 2及び 3によってそれ が阻害されることが明らかになった。従って、化合物 (1)、（II)及び (III)を始めとする、 配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシグナル伝達に関する機能を抑 制する物質は、 IL-8産生阻害剤として有用なことが示された。該物質は、 IL-8が関与 する疾患において有用であると考えられる。
[0127] [表 3] 表 3
化合物番号 阻害率 （％
97
2 97
3 97
[0128] 試験例 5 : GPR4の活性ィ匕による MCP-1産生、ならびに化合物（1)、（II)及び (III)によ るその抑制作用
試験例 2で作製した HEK293/GPR4 (GPR4発現細胞）を各種 pHで処理し、 GPR4を 活性ィ匕した時に MCP-1が産生される力検討した。コントロールとしては宿主である HE K293細胞を使用した。
[0129] 10% FBS含有 DMEMに 10 mmol/L HEPES、 10 mmol/L MESを添カロし、 pH6、 6.5、 7. 0、 7.5、 8.0の各 pHの培地を調製した。 HEK293/GPR4 (GPR4発現細胞）または HEK2 93細胞（コントロール）を 96-well plateに播種し、細胞がコンフルェントになったところ で、上清を各 pHの培地に交換した。 37 °Cで 18時間 COインキュベータ一中で培養
2
後、上清を回収し、上清中の MCP- 1濃度を ELISAキット（DuoSet ELISA Development System,フナコシ、東京）にて定量した。結果を図 3に示した。図 3によれば、 HEK293
/GPR4では、 pH6.5をピークとした MCP-1産生がみられた。一方、 HEK293細胞（コン トロール)では弱酸性ィ匕による MCP-1産生はみられなかった。
[0130] 次いで、化合物 2及び 3が、 pH6.5の弱酸性刺激による MCP-1産生を阻害するか どうか検討した。 20 mmol/L MES、 10% FBS含有 DMEMを pH6.5に調製し、最終濃度 1 μ mol/Lの化合物と一緒に HEK293/GPR4に添カ卩し、上記と同様にして MCP-1産生 量を測定した。 MCP-1産生阻害率は以下の式により算出した。式中、 A及び Bはそれ ぞれ以下の意味を表す。
A：試験化合物添加時の MCP-1濃度
B：試験化合物未添加時の MCP-1濃度
[0131] [数 4]
Figure imgf000052_0001
[0132] 結果を表 4に示した。表 4によれば、化合物 2及び 3は、 HEK293/GPR4の pH6.5で の MCP-1産生を抑制した。
以上の結果、 GPR4の活性ィ匕により MCP-1が産生され、化合物 2及び 3によってそ れが阻害されることが明らかになった。従って、化合物 (1)、（II)及び (III)を始めとす る、配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシグナル伝達に関する機能を 抑制する物質は、 MCP-1産生阻害剤として有用なことが示された。該物質は、 MCP- 1が関与する疾患の治療剤としても有用であると考えられる。
[0133] [表 4] 表 4
化合物番号 阻害率 （％)
1 99
2 96
3 99
[0134] 試験例 6： GPR4シグナルを介したマウスマクロファージ系細胞株 RAW264.7細胞から のケモカイン MIP-2の産生
試験例 1に示したように、 GPR4は一過的に強発現すると構成的活性によるシグナル を流す。そこで、 GPR4発現プラスミドを RAW264.7細胞に導入し、一過的に GPR4を発 現した時にケモカインが産生されるか検討した。
[0135] pAGal9-GPR4 (WO03/087366)を Hindlllで切断し、 T4 DNAポリメラーゼ（タカラバイ ォ社製)を用いて平滑末端ィ匕した後、さらに Notlで切断し、 GPR4をコードする Hindlll (平滑末端） - Notl断片を取得した。発現ベクター pME18S-FL3 (Genbankァクセッシ ヨン番号 AB009864)を EcoRIで切断し、 T4 DNAポリメラーゼで平滑末端化した後、さ らに Notlで切断し、 EcoRI (平滑末端) - Notl断片を取得した。上記 2断片を結合する ことにより、 GPR4発現プラスミド PME18S- GPR4を作製した。 RAW264.7細胞は、 100 u nits/mLペニシリン、 100 μ g/mlストレプトマイシン、 10% FCSを添カ卩した RPMI1640培 地で培養した。約 5 X 104個の細胞を 24-well plateに播種し、 37 °Cで 1日間培養した。 次いで、 jetPEI (フナコシ社製）を用いて、上記で作成した GPR4発現プラスミド pME18 S-GPR4及び空ベクター（pME18S-FL3)をそれぞれ RAW264.7細胞に導入した。プラ スミドは、 Qiagen社製のキットを用いて、 endotoxin freeのものを取得した。 37 °Cにて 2 4時間 COインキュベータ一中で培養後、上清を回収し、上清中の MIP-2濃度を ELIS
2
Aキットにて定量した。その結果、 GPR4発現プラスミド pME18S-GPR4を導入し、一過 的に GPR4を発現させた RAW264.7細胞では、空ベクターを導入した細胞に比較して MIP-2産生が増加した。 [0136] 次いで、化合物 1がこの MIP-2産生の増加を阻害するかどうか検討した。上記と同 様にして PME18S-GPR4または pME18S-FL3を RAW264.7細胞に導入後、最終濃度 0 、 0.1、または 1 /z mol/Lの化合物 1を添カ卩し、上記と同様にして MIP-2産生量を測定し た。結果を図 4に示した。化合物 1は pME18S-GPR4導入細胞における MIP-2産生の 増加を濃度の増加に伴って抑制した。
[0137] 以上の結果、 GPR4の活性化により、マウスマクロファージ系細胞株 RAW264.7細胞 力 MIP-2が産生され、化合物 1によってそれが阻害されることが明らかになった。従 つて、化合物（I)を始めとする、配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシ グナル伝達に関する機能を抑制する物質は、マウスにおいては MIP-2産生阻害剤と して有用なことが示された。 MIP-2は、ヒトでは IL-8に相当するケモカインであり、マウ スにおいても GPR4の活性ィ匕によりケモカインが産生されることが明らかになった。 試験例 7： GPR4シグナルを介したヒト臍帯血管内皮細胞（HUVEC)力 のケモカイン I L-8の産生
試験例 6と同様にして、 GPR4発現プラスミドを HUVECに導入し、一過的に GPR4を 発現した時にケモカインが産生されるか検討した。
[0138] pAGal9-GPR4 (WO03/087366)を Notlで切断し、 T4 DNAポリメラーゼを用いて平滑 末端化した後、さらに Hindlllで切断し、 GPR4をコードする Hindlll - Notl (平滑末端） 断片を取得した。発現ベクター pCAG[Gene、 108、 193- 199 (1991) ]を83 14071 (ニュ 一イングランドバイオラボ社製)で切断し、 T4 DNAポリメラーゼで平滑末端ィ匕した後、 さらに Hindlllで切断し、 Hindlll - Bspl407I (平滑末端）断片を取得した。上記 2断片 を結合することにより、 GPR4発現プラスミド pCAG- GPR4を作製した。 HUVECは内皮 細胞培地キット- 2 (タカラバイオ社製)を用いて培養した。 HUVECは約 2 X 104個の細 胞を 24-well plateに播種し、 37 °Cで 1日間培養した。次いで、 Lipofectin (ギブコネ土製 )を用いて、上記で作製した GPR4発現プラスミド pCAG-GPR4及び空ベクター（pCAG )をそれぞれ HUVECに導入した。プラスミドは、 Qiagen社製のキットを用いて、 endoto xin freeのものを取得した。 37 °Cにて 24時間、 COインキュベータ一中で培養後、上
2
清を回収し、上清中の IL-8濃度を ELISAキットにて定量した。その結果、 GPR4発現プ ラスミド pCAG- GPR4を導入し、一過的に GPR4を発現させた HUVECでは、空ベクター を導入した細胞に比較して IL-8産生が増加した。
[0139] 次いで、化合物 1がこの IL-8産生の増加を阻害するかどうか検討した。上記と同様 にして pCAG- GPR4または pCAGを HUVECに導入後、最終濃度 0、 0.1または 1 μ mol/ Lの化合物 1を添加し、上記と同様にして IL-8産生量を測定した。結果を図 5に示した 。化合物 1は pCAG- GPR4導入細胞における IL-8産生の増加を抑制した。
以上の結果、 GPR4の活性ィ匕により、ヒト臍帯血管内皮細胞 (HUVEC)から IL-8が産 生され、化合物 1によってそれが阻害されることが明らかになった。従って、化合物 (I) を始めとする、配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシグナル伝達に関 する機能を抑制する物質は、血管内皮細胞においても IL-8産生阻害剤として有用な ことが示された。該物質は、 IL-8が関与する疾患の治療剤としても有用であると考え られる。
試験例 8： GPR4シグナルを介したヒト肺胞上皮細胞株 (A549細胞）からのケモカイン IL
-8の産生
試験例 6と同様にして、 GPR4発現プラスミドを A549細胞に導入し、一過的に GPR4 を発現した時にケモカインが産生する力検討した。
[0140] A549細胞は、 100 units/mLペニシリン、 100 μ g/mLストレプトマイシン、 10% FCSを 添カロした F-12培地 (インビトロジェン社製)で培養した。約 5 X 104個の細胞を 24-well p lateに播種し、 37 °Cで 1日間培養した。次いで、 jetPEIを用いて、試験例 6で取得した GPR4発現プラスミド pME18S-GPR4及び空ベクター（pME18S-FL3)をそれぞれ A549 細胞に導入した。プラスミドは、 Qiagen社製のキットを用いて、 endotoxin freeのものを 取得した。 37 °Cにて 24時間、 COインキュベータ一中で培養後、上清を回収し、上清
2
中の IL-8濃度を ELISAキットにて定量した。その結果、 GPR4発現プラスミド PME18S- GPR4を導入し、一過的に GPR4を発現させた A549細胞では、空ベクターを導入した 細胞に比較して IL-8産生が増加した。
[0141] 次いで、化合物 1がこの IL-8産生の増加を阻害するかどうか検討した。上記と同様 にして PME18S-GPR4または pME18S-FL3を A549細胞に導入後、最終濃度 0または 1 /z mol/Lの化合物 1を添カ卩し、上記と同様にして IL-8産生量を測定した。結果を図 6 に示した。化合物 1は pME18S-GPR4導入細胞における IL-8産生の増加を抑制した。 以上の結果、 GPR4の活性ィ匕により、ヒト肺胞上皮細胞株 (A549細胞)から IL-8が産 生され、化合物 1によってそれが阻害されることが明らかになった。従って、化合物 (I) を始めとする、配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシグナル伝達に関 する機能を抑制する物質は、肺胞上皮細胞においても IL-8産生阻害剤として有用な ことが示された。該物質は、 IL-8が関与する疾患の治療剤としても有用であると考え られる。
[0142] 以上の試験結果から、配列番号 11記載のアミノ酸配列を有する蛋白質のシグナル 伝達に関する機能を抑制する物質は、 GPR4の活性ィ匕を介したケモカイン産生の阻 害剤として有用なことが示された。 GPR4は、例えば肺、腎臓、血管内皮細胞 (HUVE し, human umbilical vein endothelial cells; HMVEし— d, human dermal microvascular e ndothelial cells; HPAEC, human pulmonary artery endothelial cells; HAEC, human a ortic endothelial cells; HMEC— 1, immortalized human dermal microvascular endothel ial cell line-1; HBMEC, human brain microvascular endothelial cell)、腎床細管、大 腸癌、腎臓癌において高発現していることから [Genomics、 、 84-88 (1995)； Americ an Journal of Physiology - Heart andし lrculatory Physiology ^ 285、 H178b-1789 (200 3) ; Oncogene, 23, 6299-6303 (2004)； The FASEB Journal, 19, 819-821 (2005)；腎 尿細管での発現は抗 GPR4抗体 LS-A145を用いた組織染色による解析結果 (LifeSp an社カタログに記載) ]、 GPR4はこれらの細胞におけるケモカイン産生に関与し、炎 症や癌に関与して 、ると考えられる。
[0143] 化合物（1)、 （II)及び (III)またはその薬理学的に許容される塩は、そのまま単独で 投与することも可能であるが、通常各種の医薬製剤として提供するのが望ましい。ま た、それら医薬製剤は、動物及び人に使用されるものである。
本発明に係わる医薬製剤は、活性成分として化合物 (1)、 （Π)及び (III)またはその 薬理学的に許容される塩を単独で、あるいは任意の他の治療のための有効成分との 混合物として含有することができる。また、それら医薬製剤は、活性成分を薬理学的 に許容される一種もしくはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野にお V、てよく知られて 、る任意の方法により製造される。
[0144] 投与経路としては、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましぐ経口また は、例えば静脈内等の非経口をあげることができる。
投与形態としては、例えば錠剤、注射剤等が挙げられる。
経口投与に適当な、例えば錠剤等は、乳糖、マンニット等の賦形剤、澱粉等の崩壊 剤、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤 、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等を用いて製造できる。
[0145] 非経口投与に適当な注射剤は、好ましくは受容者の血液と等張である活性ィ匕合物 を含む滅菌水性剤カゝらなる。例えば、注射剤の場合は、塩溶液、ブドウ糖溶液または 塩水とブドウ糖溶液の混合物カゝらなる担体等を用いて注射用の溶液を調製する。 また、これら非経口剤においても、経口剤で例示した希釈剤、防腐剤、フレーバー 類、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤等から選択される 1種も しくはそれ以上の補助成分を添加することもできる。
[0146] 化合物 (I)、 (II)及び (III)またはその薬理学的に許容される塩の投与量及び投与 回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療すべき症状の性質もしくは重篤度により 異なるが、通常経口の場合、成人一人当り 0.01 mg〜l g、好ましくは 0.05〜50 mgを 一日一回な 、し数回投与する。静脈内投与等の非経口投与の場合、成人一人当り 0 .001〜100 mg、好ましくは 0.01〜10 mgを一日一回ないし数回投与する。しかしなが ら、これら投与量及び投与回数は、前述の種々の条件により変動する。
[0147] 以下に、本発明の態様を実施例及び参考例で説明するが、本発明はこれらに限定 されるものではない。
参考例 1： 2-(2-ェチル - 5,7-ジメチル-31"[-ィミダゾ[4,5-1)]ピリジン-3-ィルメチル)-8-( 4-メチルビペラジン- 1-ィルメチル) -10, 11-ジヒドロ [b,f]ァゼピン 2フマル酸塩（化合物 1)は WO2004/017995記載の合成法に従って合成した。
[0148] 参考例 2 : &^-4-[4-(2,5,7-トリメチル-31"[-ィミダゾ[4,5-1)]ピリジン-3-ィルメチル)フ ェ-ルァミノ]シクロへキサンカルボン酸 (4-メチルビペラジン- 1-ィル)アミド（ィ匕合物 2) 工程 1
2,3-ジァミノ- 4,6-ジメチルビリジン（25.0 g, 0.182 mol)をポリリン酸（465 g)に懸濁さ せ、酢酸 (31.3 mL, 0.547 mol)を加えて 100 °Cにて 3時間攪拌した。反応混合物を氷 水中へと移した後に、攪拌下にて炭酸ナトリウム (345 g)を少しずつ加えた。その後 28 %アンモニア水溶液を加えて pHを 9に調整し、そのまま 1時間攪拌した。析出した結 晶をろ取し、水で洗浄した後、得られた結晶を 40 °Cにて一晩減圧乾燥させることによ り 2, 5, 7-トリメチル -3H-イミダゾ [4,5- b]ピリジン（ィ匕合物 P1) (26.2 g, 0.162 mol, 89%)を 得た。
ESI-MS: m/z 162 [M + H]+
1H NMR (CDCl ) δ (ppm): 2.68 (s, 3H), 2.70(s, 3H), 6.95 (s, IH), 8.15(s, IH), 13.8 (
3
brs, IH).
工程 2
市販の 4-シクロへキサノンカルボン酸ェチル（16.8 g, 98.7 mmol)及びァ-リン（6.0 0 mL, 65.8 mmol)をァセトニトリル (400 mL)に溶解し、室温にて 30分間攪拌した。トリ ァセトキシ水素化ホウ素ナトリウム (56.0 g, 0.264 mol)を加え、さらに 6時間攪拌した。 反応混合物に飽和重曹水をゆっくり加えてしばらく攪拌し、酢酸ェチルにて 2回抽出 した。有機層を水及び飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムにて乾燥さ せた後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸ェチル：へキ サン = 1： 13)にて精製することにより cis-4- (フエ-ルァミノ)シクロへキサンカルボン酸 ェチルエステル（ィ匕合物 P2c) (5.80 g, 36%)及び trans-4- (フエ-ルァミノ)シクロへキサ ンカルボン酸ェチルエステル（ィ匕合物 P2t) (6.51 g, 40%)を得た。
化合物 P2c
ESI-MS: m/z 248 [M + H]+
1H NMR (CDCl ) δ (ppm): 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.61—1.98 (m, 8H), 2.47 (m, IH),
3
3.47 (m, IH), 4.13 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 6.60 (dd, J = 1.0, 8.6 Hz, 2H), 6.65 (tt, J = 1.0, 8.2 Hz, IH), 7.14 (t, J = 8.6 Hz, 2H).
化合物 P2t
ESI-MS: m/z 248 [M + H]+
1H NMR (CDCl ) δ (ppm): 1.13 (dq, J = 3.6, 13.2 Hz, 2H), 1.26 (t, J = 7.3 Hz, 3H),
3
1.60 (dq, J = 3.3, 13.2 Hz, 2H), 2.05 (m, 2H), 2.21 (m, 2H), 2.29 (tt, J = 3.6, 12.2 Hz, IH), 3.25 (tt, J = 4.0, 11.2 Hz, IH), 4.13 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 6.57 (dd, J = 1.0, 8.6 Hz, 2H), 6.68 (tt, J = 1.0, 7.6 Hz, IH), 7.16 (dd, J = 7.3, 7.6 Hz, 2H). 工程 3
化合物 P2t (1.00 g, 4.04 mmol)を 1,4-ジォキサン（32 mL)及び酢酸（8 mL)に溶解 し、 37%ホルマリン（0.904 mL, 12.1 mmol)及びピロリジン（0.676 mL, 9.10 mmol)を加 え、 60 °Cにて 4時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、クロ口ホルムにて抽出した 。有機層を飽和重曹水及び飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムにて乾燥 させた後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロ口ホルム: 2 mol/Lアンモニア一メタノール =30 : 1)にて精製することにより trans- 4- [4- (ピロリジン -1-ィルメチル)フエ-ルァミノ]シクロへキサンカルボン酸ェチルエステル（ィ匕合物 P3) (1.28 g, 96%) (1.28 g, 96%)を得た。
ESI-MS: m/z 331 [M + H]+
JH NMR (CDC1 ) δ (ppm): 1.15 (dq, J = 3.3, 13.0 Hz, 2H), 1.27 (t, J = 7.2 Hz, 3H),
3
1.58 (dq, J = 3.1, 13.4 Hz, 2H), 1.76—1.80 (m, 4H), 2.06 (m, 2H), 2.19 (m, 2H), 2.3 0 (tt, J = 3.7, 12.1 Hz, 1H), 2.50 (m, 4H), 3.24 (brt, J = 10.8 Hz, 1H), 3.51 (s, 2H), 4.14 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 6.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 2H).
工程 4
化合物 P3 (1.07 g, 3.23 mmol)をクロ口ホルム（30 mL)に溶解し、ヨウ化メチル（0.80 7 mL, 13.0 mmol)をカ卩ぇ室温にて一晩攪拌した後、減圧濃縮した。次いで残渣を D MF (10 mL)に溶解し、化合物 P1 (1.02 g, 6.31 mmol)及び 55%水素化ナトリウム（0.27 6 g, 6.33 mmol)の DMF溶液（20 mL)に 0 °Cにて滴下し、室温にて 5時間攪拌した。 飽和塩ィ匕アンモ-ゥム水溶液を加えしばらく攪拌した後、酢酸ェチルにて抽出した。 有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムにて乾燥させた後、減 圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸ェチル：へキサン = 5 : 1) にて精製することにより trans-4-[4-(2,5,7-トリメチル -3H-イミダゾ [4,5-b]ピリジン- 3-ィ ルメチル)フエ-ルァミノ]シクロへキサンカルボン酸ェチルエステル（化合物 P4) (0.67 0 g, 49%)を得た。なお、化合物 P4も本発明で用いられる含窒素複素環化合物に包 含される。
ESI-MS: m/z 421 [M + H]+
JH NMR (CDC1 ) δ (ppm): 1.05 (dq, J = 3.3, 13.2 Hz, 2H), 1.22 (t, J = 6.9 Hz, 3H), \HZ 'ΖΗ ·8 = f 'Ρ) 96·9 '(Ηΐ 's) 8·9 '{HZ 'ΖΗ VS = ί 'Ρ) V9 '{HZ <s) '( HZ Ί ΐ9·ε '{ΗΖ Ί 8 ·ε '(Ηΐ 'ω) ΖΖτ '(Η9 <s) 8S '(HS 's) SVZ '(HS 'ω)
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"(HS 'ZH S'8 = f 'Ρ) 96·9 '(Ηΐ 's) 8·9 HZ 'ΖΗ ε·8 = f 'Ρ) V9 HZ 's) 9Z' HZ 'ZH Z'L = f 60·， '(HI 'ZH ΓΟΐ = f '^q) 9V£ '(H9 's) S"2 '(HS 's) LVZ '(Ηΐ '^Η
2"2ΐ '9·ε = f 'W) '(Η2 'ω) ΐ '(Η2 'ω) 00 '(Η2 '^Η 2X1 '0·ε = f <bP) ¾·ΐ
09S9TC/900Zdf/X3d 89 088CZ0/.00Z OAV ()(ρSH fΗ - -•
Figure imgf000061_0001
〔〕ΐΐο3
^お nsi遛お50
(¾¾ 。 馬鈴薯澱粉 30 mg
ヒド、口キシプロピルセルロース 6 mg
ステアリン酸マグネシウム 0.6 mg
200 mg
実施例 2
[0152] 製剤例 2 :注射剤
常法により、次の組成からなる注射剤を調製する。 1 gの化合物 1を精製大豆油に溶 解させ、精製卵黄レシチン 12 g及び注射用グリセリン 25 gを加える。この混合物を常 法により注射用蒸留水で 1000 mLとして練合 '乳化する。得られた分散液を 0.2 m のデイスポーザブル型メンブランフィルターを用いて無菌濾過後、ガラスバイアルに 2 mLずつ無菌的に充填して、注射剤（1バイアルあたり活性成分 2 mgを含有する）を得 る。
処方 化合物 1 2 mg
精製大豆油 200 mg
精製卵黄レシチン 24 mg
注射用グリセリン 50 mg
m i 1.72 mL
2.00 mL
産業上の利用可能性
[0153] 本発明により、 GPR4のシグナル伝達に関する機能を阻害する物質を有効成分とし て含有するケモカイン産生阻害剤等が提供される。
配列表フリーテキスト
[0154] 配列番号 1 人工配列の説明：合成 DNA
配列番号 2—人工配列の説明：合成 DNA
配列番号 3—人工配列の説明：合成 DNA
配列番号 4 人工配列の説明：合成 DNA
配列番号 5—人工配列の説明：合成 DNA
配列番号 6—人工配列の説明：合成 DNA 配列番号 7—人工配列の説明：合成 DNA 配列番号 8—人工配列の説明：合成 DNA 配列番号 9 人工配列の説明：合成 DNA 配列番号 10—人工配列の説明：合成 DNA 配列番号 15 人工配列の説明：合成 DNA 配列番号 16 人工配列の説明：合成 DNA

Claims

請求の範囲
[1] 配列番号 11で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質のシグナル伝達に関する機能を抑 制する物質を有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤。
[2] 以下の 1)〜4)
1)配列番号 12で表される塩基配列の連続した 15〜60塩基力 なるオリゴヌクレオチ ドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、
2)配列番号 14で表される塩基配列の連続した 15〜60塩基力 なるオリゴヌクレオチ ドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、
3)配列番号 18で表される塩基配列の連続した 15〜60塩基力 なるオリゴヌクレオチ ドの相補的配列を有するオリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、
4)配列番号 12、 14及び 18力 選ばれる!/、ずれか一つで表される塩基配列力 なる D NAとストリンジェントな条件下でノヽイブリダィズし、かつ配列番号 11で表されるアミノ酸 配列を有する蛋白質のシグナル伝達に関する機能を抑制する 15〜60塩基力 なる オリゴヌクレオチドまたは該オリゴヌクレオチド誘導体、
のいずれか一つを有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤。
[3] 以下の 1)〜4)
1)配列番号 11で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質と結合する抗体、
2)配列番号 13で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質と結合する抗体、
3)配列番号 17で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質と結合する抗体、
4)配列番号 11、 13及び 17から選ばれるいずれか一つで表されるアミノ酸配列におい て一つ以上のアミノ酸が欠失、置換または付加したアミノ酸配列力 なり、かつ配列 番号 11で表されるアミノ酸配列力 なる蛋白質のシグナル伝達に関する機能を有す る蛋白質と結合する抗体、
のいずれか一つを有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤。
[4] 式 (I)
[化 15]
Figure imgf000065_0001
[式中、 R1はシァノ、ホルミル、置換もしくは非置換の複素環基、 -NR5aR5b (式中、 R5a及 び R5bは同一または異なって水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換も しくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置換も しくは非置換の低級アルキ-ルまたは置換もしくは非置換のァラルキルを表す力、ま たは R5a及び R5bが隣接する窒素原子と一緒になつて置換もしくは非置換の複素環基 を形成する）、 -OR6 (式中、 R6は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置 換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置 換もしくは非置換の低級アルキ-ル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換 もしくは非置換のァリールまたは置換もしくは非置換のァラルキルを表す）、 -SR6a (式 中、 R6aは前記 R6と同義である）、 -CONR5eR5d (式中、 R5e及び R5dはそれぞれ前記 R5a及 び R5bと同義である）または- CO R6b (式中、 R6bは前記 R6と同義である）を表し、
2
R2は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シク 口アルキル、置換もしくは非置換の低級ァルケ-ル、置換もしくは非置換の低級アル キ-ルまたは置換もしくは非置換のァラルキルを表し、
R3及び R4は同一または異なって水素原子、ハロゲンまたは低級アルキルを表し、 nは 0または 1を表し、
Xは- (CH ) -または- CH=CH-を表し、
2 2
Yは
[化 16]
Figure imgf000065_0002
(式中、 Zは CHまたは窒素原子を表し、
R8a及び R8bは同一または異なって水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置 換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置 換もしくは非置換の低級アルキ-ル、置換もしくは非置換のァリールまたは置換もしく は非置換のァラルキルを表す力、または R8a及び R8bがそれぞれ隣接する 2つの炭素原 子と一緒になつて置換もしくは非置換の芳香環または置換もしくは非置換の複素環 を形成し、
R9は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シク 口アルキル、置換もしくは非置換の低級ァルケ-ル、置換もしくは非置換の低級アル キニル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換の複素環基または置換 もしくは非置換のァラルキルを表す)を表す]で表される含窒素三環式化合物もしくは その四級アンモ-ゥム塩またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有 するケモカイン産生阻害剤。
R1が- NR5gR5h(式中、 R5g及び R5hは隣接する窒素原子と一緒になつて置換もしくは非 置換の複素環基を形成する）であり、
Figure imgf000066_0001
R3及び R4が水素原子であり、 nが 1であり、 X が- (CH ) -であり、 Yが
[化 17]
Figure imgf000066_0002
(式中、 RW R1Qb及び ま同一または異なって水素原子または置換もしくは非置換 の低級アルキルを表す)である請求項 4記載のケモカイン産生阻害剤。
[6] ケモカインカインターロイキン 8または単球走ィ匕活性ィ匕因子 1である請求項 1〜5のい ずれかに記載のケモカイン産生阻害剤。
[7] 請求項 1〜5のいずれかに記載の含窒素三環式ィ匕合物もしくはその四級アンモ-ゥ ム塩またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するケモカインが関 与する疾患の予防及び zまたは治療剤。
式 (π)
[化 18]
Figure imgf000067_0001
〔式中、 R11は水素原子、ハロゲン、シァ入置換もしくは非置換の低級アルキル、置換 もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置換 もしくは非置換の低級アルキ-ル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もし くは非置換の低級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換の低級アルコキシ 、置換もしくは非置換の低級アルコキシカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、 置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイル、置換もしくは非置 換の脂環式複素環基または置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除 く）を表し、
Figure imgf000067_0002
R12e及び R12dは同一または 異なって、それぞれ前記 R11と同義である）、 N=CR12b-CR12e=CR12d (式中、 R12b、 R1 及 び R12dはそれぞれ前記と同義である）、 CR12a=N-CR12e=CR12d (式中、 R12a、 R1 及び R12d はそれぞれ前記と同義である）、 CR12a=CR12b_N=CR12d (式中、 R12a、 R12b及び R12dはそ れぞれ前記と同義である）、 CR12a=CR12b- CR1 =N (式中、 R12a、 R12b及び R12eはそれぞ れ前記と同義である）、 N=CR12b-N=CR12d (式中、 R12b及び R12dはそれぞれ前記と同義 である）、 CR12a=N-CR1 =N (式中、 R12a及び R1 はそれぞれ前記と同義である)または N=CR12b-CR1 =N (式中、 R12b及び R1 はそれぞれ前記と同義である）を表し、
Qは置換もしくは非置換のフエ-レン、置換もしくは非置換のナフチレン、置換もしく は非置換のへテロァリレンまたは置換もしくは非置換の脂環式複素環基の脂環式複 素環上から任意の 1つの水素原子を除いてできる 2価基を表し、
Tは（1)ホルミル、（2)置換もしくは非置換の低級アルキル、（3)置換もしくは非置換の 低級シクロアルキル、（4)置換もしくは非置換の低級アルカノィル、（5)置換もしくは非 置換の低級シクロアルキルカルボニル、（6)置換もしくは非置換のァリール、（7)置換 もしくは非置換のァラルキル、（8)置換もしくは非置換のァロイル、（9)置換もしくは非 置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）、（10)置換もしくは非置換の芳香族複素 環カルボニル (該芳香族複素環カルボニルの芳香族複素環基部分はテトラゾリルで はない）、
(11)
[化 19]
Figure imgf000068_0001
[式中、 naは 0〜3の整数を表し、
nbは 1〜4の整数を表し、
Jは単結合またはカルボニルを表し、
Y1 -一 Y2は CR14- CH (式中、 R"は水素原子、ハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、シァノ
2
、トリフルォロメチル、ホルミル、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルコキシカル ボニル、低級アルカノィル、低級シクロアルキルカルボ-ルまたは低級アルコキシ力 ルポ-ルァミノを表す）または C = CHを表し、
R13は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換の ァラルキル、置換もしくは非置換のァロイルまたは置換もしくは非置換の芳香族複素 環基 (テトラゾリルを除く）を表す]、
(12) -NR15aR15b [式中、 R15a及び R15bは同一または異なって、水素原子、ホルミル、置換 もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もし くは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキルカルボ- ル、置換もしくは非置換の低級アルコキシカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリー ル、置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイル、置換もしくは 非置換のァリールォキシカルボニル、置換もしくは非置換の脂環式複素環基、置換 もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）または置換もしくは非置換の 芳香族複素環カルボニル (該芳香族複素環カルボニルの芳香族複素環基部分はテ トラゾリルではな 、）を表すか、または R15a及び R15bが隣接する窒素原子と一緒になつ て置換もしくは非置換の複素環基を形成する]、
(13) -OR16 [式中、 R16は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしく は非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしく は非置換の低級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換の低級アルコキシ力 ルボニル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル、置換も しくは非置換のァロイル、置換もしくは非置換のァリールォキシカルボ-ル、置換もし くは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）、置換もしくは非置換の芳香族複 素環ォキシカルボニル (該芳香族複素環ォキシカルボニルの芳香族複素環基部分 はテトラゾリルではない）、置換もしくは非置換の低級アルキルスルホ -ル、置換もしく は非置換のァリールスルホニル、置換もしくは非置換の芳香族複素環スルホニル (該 芳香族複素環スルホニルの芳香族複素環基部分はテトラゾリルではな ヽ)または- C( =0)NR15aR15b (式中、 R15a及び R15bはそれぞれ前記と同義である)を表す]、
(14)
[化 20]
Figure imgf000069_0001
(式中、 R15a及び R15bはそれぞれ前記と同義であり、
R17は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換の ァラルキルまたは置換もしくは非置換のァロイルを表す）、
(15) [化 21]
Figure imgf000070_0001
(式中、 R17は前記と同義であり、
R18は置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロア ルキル、置換もしくは非置換のァリールまたは置換もしくは非置換のァラルキルを表 す)、
(16)
[化 22]
Figure imgf000070_0002
[式中、 は前記と同義であり、
R19は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル または置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を表す]、 (
Figure imgf000070_0003
R2°は水素原子、置 換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換 もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキルカル ボニル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル、置換もし くは非置換のァロイルまたは置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除 く）を表す。但し、 X1が酸素原子を表す場合は、 R2Qは水素原子ではない]、
(18) -C(=X2)-NR15aR15b (式中、 X2は前記 X1と同義であり、 R15a及び R15bはそれぞれ前記 と同義である）、または
(19)
[化 23] {式中、 E二 Fは CR22a=CR22b [式中、 R22a及び R22bは同一または異なって、水素原 子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル 、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル カルボニル、置換もしくは非置換の低級アルコキシカルボ-ル、置換もしくは非置換 のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイルまたは 置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を表す]または C≡ Cを表 し、
R21は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低 級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換の ァラルキル、置換もしくは非置換のァロイル、置換もしくは非置換の芳香族複素環基 ( テトラゾリルを除く）または- C(R23a)(R23b)NR15aR15b [式中、 R15a及び R15bはそれぞれ前記と 同義であり、 R23a及び R23bは同一または異なって水素原子、ハロゲン、置換もしくは非 置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置 換の低級アルカノィル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキルカルボ-ル、置換 もしくは非置換の低級アルコキシカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリール、置換も しくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイルまたは置換もしくは非置換 の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を表すか、 R23a及び R23bが隣接する炭素原子 と一緒になつて飽和脂肪族環を形成するか、または R23a及び R23bが一緒になつて酸素 原子または硫黄原子を表す]を表す }を表す〕
で表される二環性複素環化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とし て含有するケモカイン産生阻害剤。
[9] ケモカインカインターロイキン 8または単球走ィ匕活性ィ匕因子 1である請求項 8記載のケ モカイン産生阻害剤。
[10] 請求項 8に記載の二環性複素環化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効 成分として含有するケモカインが関与する疾患の予防及び Zまたは治療剤。
[11] 式 (III)
[化 24]
Figure imgf000072_0001
{式中、 ι ま前記 τと同義であり、
Wは窒素原子または CR27 [式中、 R27は水素原子、置換もしくは非置換の低級アルキ ル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置換の低級アルカノィ ル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキルカルボ-ル、置換もしくは非置換のァリ ール、置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイルまたは置換も しくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を表す]を表し、
R25は水素原子、ハロゲン、アミ入ニトロ、シァ入カルボキシ、低級アルコキシカルボ -ルァミノ、モノまたはジ低級アルキルアミ入低級アルキルスルホ -ル、置換もしくは 非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非 置換の低級アルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキ-ル、置換もしくは非置換 の低級アルコキシ、置換もしくは非置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル または置換もしくは非置換の脂環式複素環基を表し、
R26a、 R26b及び R26eは同一または異なって水素原子、ハロゲン、シァ入置換もしくは非 置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級シクロアルキル、置換もしくは非置 換の低級アルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキ-ル、置換もしくは非置換の 低級アルコキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシカルボニル、置換もしくは非 置換のァリール、置換もしくは非置換のァラルキル、置換もしくは非置換のァロイル、 置換もしくは非置換の脂環式複素環基または置換もしくは非置換の芳香族複素環基 (テトラゾリルを除く）を表す }で表される二環性複素環化合物またはその薬理学的に 許容される塩を有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤。
R24が- NR15aR15b (式中、 R15a及び R15bはそれぞれ前記と同義である)である請求項 11記 載のケモカイン産生阻害剤。
[13] R24が- NHR15a (式中、 R15aは前記と同義である)である請求項 11記載のケモカイン産 生阻害剤。
[14] R24が- NHR15e (式中、 R15eは置換もしくは非置換の低級シクロアルキルを表す)である 請求項 11記載のケモカイン産生阻害剤。
[15] R25が水素原子であり、 R26a、 R26b及び R26eが置換もしくは非置換の低級アルキルである 請求項 11〜 14のいずれかに記載のケモカイン産生阻害剤。
[16] W力 CR27 (式中、 R27は前記と同義である）である請求項 11〜15のいずれかに記載の ケモカイン産生阻害剤。
[17] Wが CHである請求項 11〜 15の!、ずれかに記載のケモカイン産生阻害剤。
[18] ケモカインカインターロイキン 8または単球走ィ匕活性ィ匕因子 1である請求項 11〜17の
V、ずれかに記載のケモカイン産生阻害剤。
[19] 請求項 11〜17のいずれかに記載の二環性複素環化合物またはその薬理学的に許 容される塩を有効成分として含有するケモカインが関与する疾患の予防及び Zまた は治療剤。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8541411B2 (en) 2010-10-06 2013-09-24 Glaxosmithkline Llc Benzimidazole derivatives as PI3 kinase inhibitors
CN111358787A (zh) * 2020-03-26 2020-07-03 四川大学华西医院 一种杂环化合物在制备治疗肺炎药物中的应用
US11034669B2 (en) 2018-11-30 2021-06-15 Nuvation Bio Inc. Pyrrole and pyrazole compounds and methods of use thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004093912A1 (ja) * 2003-04-23 2004-11-04 Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. 好中球性炎症疾患の予防および／または治療剤
EP1537879A1 (en) * 2002-08-22 2005-06-08 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Preventive and/or therapeutic drugs for asthma
EP1547616A1 (en) * 2002-08-22 2005-06-29 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Preventive and/or therapeutic drugs for itch
WO2005082904A1 (ja) * 2004-02-26 2005-09-09 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 好中球性炎症疾患の予防及び／または治療剤

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1537879A1 (en) * 2002-08-22 2005-06-08 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Preventive and/or therapeutic drugs for asthma
EP1547616A1 (en) * 2002-08-22 2005-06-29 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Preventive and/or therapeutic drugs for itch
WO2004093912A1 (ja) * 2003-04-23 2004-11-04 Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. 好中球性炎症疾患の予防および／または治療剤
WO2005082904A1 (ja) * 2004-02-26 2005-09-09 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 好中球性炎症疾患の予防及び／または治療剤

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LAHRTZ F. ET AL.: "Chemokines and chemotaxis of leukocytes in infectious meningitis", JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY, vol. 85, no. 1, 1998, pages 33 - 43, XP002198989 *
MATSUSHIMA K. ET AL.: "Atarashii Enshosei Cytokine, IL-8", CELL TECHNOLOGY, vol. 9, no. 5, 1990, pages 435 - 443, XP003009114 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8541411B2 (en) 2010-10-06 2013-09-24 Glaxosmithkline Llc Benzimidazole derivatives as PI3 kinase inhibitors
US8674090B2 (en) 2010-10-06 2014-03-18 Glaxosmithkline Llc Benzimidazole derivatives as PI3 kinase inhibitors
US8865912B2 (en) 2010-10-06 2014-10-21 Glaxosmithkline Llc Benzimidazole derivatives as PI3 kinase inhibitors
US9062003B2 (en) 2010-10-06 2015-06-23 Glaxosmithkline Llc Benzimidazole derivatives as PI3 kinase inhibitors
US9156797B2 (en) 2010-10-06 2015-10-13 Glaxosmithkline Llc Benzimidazole derivatives as PI3 kinase inhibitors
US9872860B2 (en) 2010-10-06 2018-01-23 Glaxosmithkline Llc Benzimidazole derivatives as PI3 kinase inhibitors
US10314845B2 (en) 2010-10-06 2019-06-11 Glaxosmithkline Llc Benzimidazole derivatives as PI3 kinase inhibitors
US10660898B2 (en) 2010-10-06 2020-05-26 Glaxosmithkline Llc Benzimidazole derivatives as PI3 kinase inhibitors
US11034669B2 (en) 2018-11-30 2021-06-15 Nuvation Bio Inc. Pyrrole and pyrazole compounds and methods of use thereof
CN111358787A (zh) * 2020-03-26 2020-07-03 四川大学华西医院 一种杂环化合物在制备治疗肺炎药物中的应用

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