WO2007017580A2 - Preparations implantables - Google Patents

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    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like

Definitions

  • These preparations may be, in particular, in the form of powders, pastes, gels, suspensions, or injectable solutions, or implantable solid materials, intended in particular to correct wrinkles, or to protect or fill wounds and participate in their healing.
  • Different biopolymers or biomaterials are currently available for such applications.
  • human collagen which would be preferable to animal collagen to prevent immunological and inflammatory reactions, is conceivable from human skin tissues. But it is made very difficult because the collection of human tissue from cadavers poses considerable ethical problems and requires expensive tests to eliminate the risk of transmitting infectious, viral or other diseases.
  • the preparation of human collagen from placentas is expensive, complex and difficult to organize.
  • the preparation of human collagen by modern methods of genetic recombination or cell cultures is also very expensive, which will certainly hinder the commercial development of this product.
  • Globin is the constitutive protein of hemoglobin, which itself contains 4 peptide chains (2 ⁇ chains and 2 ⁇ chains) each associated with a heme.
  • the heme consists of a tetrapyrole structure containing 1 positively charged iron atom. There are 4 hemes per molecule, responsible for the red coloring of hemoglobin.
  • hemoglobin which is perfectly soluble at physiological pH
  • globin is remarkably insoluble under the same conditions.
  • the insoluble or poorly soluble nature of globin under physiological conditions has hitherto hindered the development of its medical applications as plasma substitutes. This is why most of the published tests have sought to prepare soluble derivatives of globin at physiological pH, in particular by succinylation using succinic anhydride or by acetylation using acetic anhydride, or by hydrolysis of amide functions at alkaline pH. All of these methods increase the negative charge of globin and lower its isoelectric pH, making the globin soluble at neutral pH.
  • the present invention proposes to provide novel implantable materials and preparations in the body prepared from chemically modified globin to be soluble at physiological pH. These implants do not have the disadvantages or limitations of known materials and formulations, for example of collagen, sodium hyaluronate, or the like, in particular because of the possibility of preparing them from the blood of the patient to be treated or from one of his similar and their natural character and perfectly tolerated.
  • the subject of the invention is an implantable preparation, entirely or partially soluble or insoluble, which can be formulated in various forms, comprising a material that can be obtained from modified globin, in particular chemically to be, at least partially, and preferably fully soluble at physiological pH, said material being biocompatible, preferably sterile, and biodegradable.
  • physiological pH is meant in particular a pH of between 6 and 8, preferably between 6.5 and 7.5 and preferably the range of physiological pH.
  • Implantable means the ability to be implanted in the body, in tissues or in contact with them, including included on the skin or on external wounds, intravascular administration being excluded.
  • Said modified globin is preferably modified to be completely soluble at physiological pH, but it can also be modified, for example from insoluble globin from hemoglobin, only in a more limited way, but making it clearly hydrophilic and partially soluble.
  • the implantable preparations according to the invention are preferably totally sterile, but may also not be, especially when they come from autologous biological samples of the patient himself. These questions of infertility are part of the ordinary knowledge of the specialized implantologist, especially when it comes to the care of a chronic cutaneous wound.
  • the sterilization can be obtained in particular by beta or gamma irradiation, for example in frozen form in the presence of dry ice, or by autoclaving, in particular at 120 ° C.
  • the material that can be obtained from globin modified to be soluble at physiological pH is this modified globin itself. In another embodiment, this material can be obtained by insolubilizing said modified globin soluble at physiological pH.
  • soluble or insoluble preparations are in particular in the form of an injectable paste or gel for implantation, of implantable solid materials, for example of powder, granules, or films. They can be soluble in a physiological liquid or made insoluble after chemical crosslinking of the soluble globin.
  • injectable means the property to be injected for local implantation, excluding any intravenous or intraarterial injection which are formally contraindicated.
  • the globin is chemically modified by alkaline treatment, in particular with sodium hydroxide, and / or by esterification of the carboxylic functions, and / or acetylation or succinylation, to which its amino functions are sensitive.
  • said globin may be rendered partially soluble, by a partial chemical reaction or a shorter alkaline incubation, or at a concentration less than 1 N.
  • NaOH sodium hydroxide treatments with a concentration of 0.1 to 1N for 4 to 24 hours at room temperature are possible.
  • the concentration of sodium hydroxide, or other alkaline base is increased the incubation time and / or the temperature can be decreased.
  • said material is substantially soluble at physiological pH, and in this case, preferably, said material is or has said globin modified to be soluble at physiological pH.
  • said material is substantially insoluble at physiological pH, preferably being obtained by cross-linking said soluble globin at physiological pH.
  • the preparation comprises both of said soluble materials at physiological pH and one of said insoluble materials at physiological pH.
  • the preparation may comprise another material, in particular filler, biocompatible, sterile and insoluble at physiological pH, in particular biodegradable globin, for example sterile, and insoluble at physiological pH as defined in FR-A-2 854 801.
  • Said other material may also be chosen from the group consisting of oxidized celluloses, collagens and chitosan, or generally the fillers or tissue augmentation materials.
  • the preparation may be in the form of a suspension, paste or gel, preferably sufficiently fluid to be injectable. But in other embodiments it can be in solid form, for example in the following forms:
  • the concentration of said globin be at least 10. %, preferably greater than or equal to 12% or 15%.
  • the preparation may comprise a globin powder modified to be soluble at physiological pH. It may then additionally comprise a crosslinking agent, the mixture being able to form an adhesive glue on the organic tissues. Said crosslinking agent may itself be in the form of a powder, the assembly being able to form an adhesive in the presence of a liquid medium, in particular a physiological liquid medium.
  • a preparation comprising said globin modified to be soluble at physiological pH may also comprise a pH insoluble solid material physiological obtained from said globin and / or another solid material, namely biodegradable globin, sterile and insoluble at physiological pH.
  • This other material may be in powder form.
  • These preparations comprising said globin powder modified to be soluble at physiological pH, may be formulated as a spray or dry aerosol, or said modified globin may be associated with a solid dressing.
  • an injectable preparation comprises globin modified to be soluble at physiological pH.
  • a preparation comprising globin modified to be soluble at physiological pH may also be provided in the form of implantable tissue, knit, mesh, sponge, or film, optionally reinforced with a suturable implantable material.
  • It may comprise another solid biocompatible material, in particular oxidized cellulose, collagen or chitosan, or an insoluble solid material at physiological pH obtained from said globin or else biodegradable globin, preferably sterile, and insoluble at room temperature.
  • physiological pH according to FR-A-2 854 801.
  • said preparation may also be formulated in the form of a powder, for example in the form of a spray or a dry aerosol.
  • a preparation comprising an insoluble material at physiological pH obtained from globin modified to be soluble at physiological pH can be carried out in the form of a film, optionally reinforced with a suturable material, or of a solid implant obtained, for example, by crosslinking. gel or modified globin foam to be soluble at physiological pH.
  • a preparation comprising an insoluble material at physiological pH obtained from globin modified to be soluble at physiological pH may comprise a fluidifying agent and be in the form of a suspension, paste or gel.
  • the fluidizing agent may be hyaluronic acid (which also includes its equivalents, hyaluronates), carboxymethylcellulose or gelatin.
  • said fluidizing agent may be globin modified to be soluble at physiological pH.
  • a liquid preparation comprising a solution of globin modified to be soluble at physiological pH, can be carried out in the form of a spray or liquid aerosol, or in solution associated with a dressing.
  • Such preparations in which said globin modified to be soluble at physiological pH is in solution may comprise a crosslinking agent, to form an adhesive glue on the organic tissues.
  • They can also be in the form of foam and include a crosslinking agent to form an adhesive adhesive on the organic tissues.
  • the biological glues according to the invention may also contain an adhesive agent, in particular hyaluronic acid or carboxy methylcellulose.
  • Preparations comprising globin modified to be soluble at physiological pH may further comprise a solid material and be in the form of a sponge, mesh, fabric, knit, or film, optionally reinforced with a suturable material, this other material being preferably selected from the group consisting of yarn-made textiles made from Absorbable or non-absorbable polymers such as polyesters, polyalkenes, families of polyhydroxy acids, oxidized celluloses, collagen and chitosan. Said other material may also be obtained from globin modified to be soluble at physiological pH and rendered insoluble at physiological pH, or else comprise biodegradable globin, and insoluble at physiological pH.
  • the adhesive preparations forming a biological glue may be in the form of a kit comprising, in separate reservoirs, the soluble material at physiological pH and the crosslinking agent.
  • the preparations according to the invention may be in one-piece form, preferably ready for use. However, they may also be in the form of two or more components intended to be combined or mixed, for example in the form of a kit, preferably in sterile form.
  • separate reservoirs or syringes may contain the material obtained from modified globin and another component, for example fluidizing or viscosity agent, crosslinking agent or adhesive agent.
  • fibrin glues such as Tisseel, Tissucol, Quixil, Hemaseal, Beriplast 0 and other with adhesives globin materials or non-adhesive .
  • fibrin glues such as Tisseel, Tissucol, Quixil, Hemaseal, Beriplast 0 and other with adhesives globin materials or non-adhesive .
  • These surgical glues according to the invention therefore comprise a content of fibrinogen-based material, preferably less than the usual content, and a soluble or non-soluble material obtainable from the modified globin according to the invention, or else still unmodified insoluble globin.
  • the material obtained from the above-mentioned modified globin acts as an active component, or even a main or exclusive active constituent, by its physiological interaction, especially at the level of cell, with the tissue in or on which it is implanted.
  • the homologous human globin may be preferable to a heterologous animal globin and thus makes it possible to avoid at best any immunological reaction of the patient to be treated, during or after implantation.
  • This product therefore represents a significant advantage over collagen which has hitherto been prepared from animal skins (veal, pork, etc.) and which requires a number of precautions and conditions to avoid immunological reactions in animals.
  • Patients Need to test each patient for possible animal collagen allergy and inability to treat allergic people.
  • the chemically modified globin, soluble at physiological pH, can be sterile filtered on porous membranes.
  • such solutions can be treated as protein solutions and can produce products such as: sponges, films, granules, powders, various solids, using or combining drying, lyophilization, crosslinking, precipitation techniques.
  • Globin is easy to purify from red blood cells from animal or human blood. Human red blood cells are available in large quantities from expired donations remaining in stock at blood centers and for which all pre-health tests have been performed at the time of collection.
  • the chemically modified and soluble globin at physiological pH has the originality of maintaining its soluble character despite prolonged alkaline treatment and / or despite sterilization by irradiation. This facilitates its safe use, thanks to the guarantee of a powerful inactivation of infectious or transmissible agents potentially present in any product of biological origin. This allows to exploit in human medicine, the biological properties of globin, when it is necessary to use a soluble preparation at physiological pH.
  • the implementation of the invention is also possible from a sample of blood from the patient to be treated of about 20 to 200 ml, and its transformation into autologous globin, chemically modified, with the same methods as for large volumes, then its transformation into an implantable biomaterial intended for applications such as the protection, filling or healing of chronic wounds, or the correction or filling of wrinkles.
  • the number of units prepared from a patient sample may be important and allow for repetitive and prolonged treatment of the patient.
  • these can be preliminarily purified, starting from a solution of purified hemoglobin, already separated from the plasma proteins. But this step can be suppressed, in particular by virtue of the specific insolubility property of globin in an aqueous solution of neutral pH, which distinguishes it from other plasma proteins and makes it possible to separate it.
  • the human placenta expelled after delivery contains blood which is usually destroyed by incineration, but which can also be used for the invention.
  • the blood bags of donors are officially controlled by blood transfusion agencies, thanks to numerous biochemical, bacteriological, serological and screening tests of different viruses and other infectious agents.
  • placental blood it would obviously be necessary to perform the same examinations on umbilical cord or mother blood samples before collecting, preserving and extracting blood from this raw material.
  • the tests to be performed can be simplified.
  • the embodiment of the invention may first require the collection and purification of red blood cells in these blood samples, or blood liquids, by simple and already known operations, for example according to the following method.
  • the red blood cells are recovered by centrifugation at low speed.
  • the plasma supernatant is separated and replaced with a physiological saline fluid of the PBS type; containing 9 g / l of NaCl and buffered at neutral pH. After several washes (3 to 5), the suspension of red blood cells is thus freed of plasma proteins.
  • the pellet of purified red blood cells is supplemented with 1 or 2 volumes of distilled water to achieve an osmotic shock which causes lysis of the membranes of red blood cells and releases the hemoglobin in concentrated and purified solution.
  • a high speed centrifugation step (10 to 20,000 rpm) allows remove membrane and cell debris in the pellet.
  • a final filtration step of the supernatant on a porosity membrane of 0.2 micron makes it possible to prepare a purified and sterile hemoglobin solution, devoid of particles and derivatives of tissue, cell or membrane origin.
  • Other methods can purify hemoglobin from frozen blood and hemolysis and prevent prior purification of red blood cells. They have been described in US Pat. No. 4,764,279 and combine precipitation with ethanol and chromatography on DEAE Cellulose, DEAE Spherodex or other supports.
  • Heme-Globin cleavage at acid pH was described in the presence of alcohol by SCHULZ as early as 1898.
  • TEALE (1959) prefers the use of methyl ethyl ketone instead of acetone.
  • AUTIO et al. (1984) separate globin at acidic pH by absorption and precipitation of heme with soluble carboxymethylcellulose. The globin thus prepared is soluble at acidic or alkaline pH but becomes insoluble as soon as the pH of the aqueous solution is neutralized between pH 6 and 8.
  • the globin powder thus prepared can be put in a syringe, sterilized by ethylene oxide or irradiation at a dose of 5 to 25 or 30 kGray and redissolved at high concentration in a physiological solution of PBS.
  • a crosslinking agent adapted to the chemical modification carried out such as diepoxides, or aldehydes, or polyaldehydes, or oxidized polysaccharides, or other reactive groups, a viscous and adhesive gel is obtained, perfectly biocompatible and biodegradable.
  • the initial powder or the solution of globin can be added other known adhesive adjuvants, such as hyaluronic acid, carboxy-methylcellulose, which can participate actively or passively in forming the cross-linked globin network and are trapped therein.
  • This biological glue can advantageously replace comparable products prepared from less well-tolerated synthetic polymers, or collagenic materials which generally require the use of heating means to be fluidized before use.
  • ethyl globin or other globin esters which are soluble at neutral pH it is possible to use it in the form of concentrated solution at neutral pH, reconstituted just before use from powder. and PBS in separate syringes and mixed.
  • Example 1 Preparation of rabbit globin, chemically modified, soluble at physiological pH.
  • Hemoglobin is transformed into globin. according to the technique described by TAYOT and VERON (1983). This hemoglobin solution is poured with stirring into 275 ml of 96% ethanol containing 1 ml of concentrated HCl. The pH is adjusted to 3. The final concentration is 74% ethanol and 22 g / l of hemoglobin at acidic pH. 3 g of active charcoal L4S of the CECA mark are added with vigorous stirring for 15 hours at 40 ° C. The suspension is centrifuged at 15,000 rpm for 30 minutes to remove the charcoal in the form of a pellet.
  • the decolorized acid globin-containing supernatant is filtered through a series of porous membranes to the smallest porosity (0.2 micron) to remove fine particles of charcoal.
  • the filtrate is then precipitated in 10 volumes of acetone.
  • the acidic precipitate of globin is washed with acetone to prepare an acidic, anhydrous powder, removed salts.
  • 4.5 g of this powder are diluted in 100 ml of 0.25 M NaOH, according to the publication by Strumia et al. (1951).
  • the alkaline solution obtained after stirring for 30 minutes is clear. It is then incubated at 37 ° C. for 27 hours and then neutralized to a pH of about 7.2, by addition of a hydrochloric acid solution.
  • the neutralized solution remains clear.
  • the globin in solution is then precipitated by the addition of 10 volumes of acetone.
  • the precipitate is collected by filtration on porous cloth, then washed with acetone to obtain an anhydrous powder, neutral and spontaneously soluble in water or a physiological solution at neutral pH.
  • Example 2 Preparation of human globin, chemically modified, soluble at physiological pH.
  • various mineral acids such as sulfuric, hydrochloric, phosphoric, etc.
  • carboxylic acids such as acetic acid, oxalic acid, or citric acid, for example, may be used to acidify the acetone solution or the hemoglobin solution before it fades.
  • Another variation of this process is to precipitate the acid solution of hemoglobin prior to its decolorization. The precipitation can be carried out by adding NaCl at a concentration of 40 to 60 g / l. The precipitate of acid hemoglobin is then decolourized by suspension in a sufficient volume of ethanol and / or acetone. The pigment is dissolved in ethanol and / or acetone; the globin remains in precipitated form and can be collected by filtration on porous cloth. By eliminating any aqueous phase, this variant makes it possible to reduce the necessary volume of ethanol and / or acetone by a factor of at least 5.
  • the acidic precipitate of decolorized globin, containing salts is then washed with an aqueous solution of acetone containing at least 90% acetone, then washed with anhydrous acetone and dried to prepare an acid powder, free of salts.
  • 4.5 g of this powder are diluted in 100 ml of 0.25 M NaOH and incubated at +20 ° C. for 24 hours, then treated as in Example 1.
  • the solution is neutralized to a pH of about 7.2 by addition. a solution of hydrochloric acid.
  • the globin is then precipitated by the addition of at least 10 volumes of acetone.
  • the precipitate is collected by filtration on porous cloth, then washed with acetone and dried, to finally obtain a neutral powder and soluble in water or a physiological solution.
  • Example 3 Another preparation of human globin, chemically modified, soluble at physiological pH.
  • the method of Example 1 is carried out from controlled and expired globular pellet obtained from a blood transfusion center.
  • Example 4 Another preparation of human globin, modified by succinylation, soluble at physiological pH. This preparation is carried out in accordance with the work of Volckmann (1988). The acidic precipitate of decolorized globin, containing salts, is washed with a solution of acetone, containing enough water to dissolve the salts without dissolving the globin, then washed with anhydrous acetone and dried to prepare an acidic powder, rid of salts. This powder is taken up at a concentration of 30 mg / ml, in 1 g / l NaOH solution containing 9 g / l of NaCl, and then 80 mg of succinic anhydride per gram of globin are added at a temperature of 20 ° C.
  • the pH decreases spontaneously to 9, where it is maintained by gradual addition of NaOH, with continuous control at pH meter.
  • the reaction is complete when the pH is stable.
  • the solution is adjusted to neutral pH and precipitated with a 90% aqueous solution of acetone.
  • the precipitate is washed with anhydrous acetone and then dried.
  • a neutral powder of soluble globin in physiological solution at neutral pH is obtained.
  • Example 5 Another preparation of human globin, modified by esterification, soluble at physiological pH.
  • the preparation of the precipitate of human globin according to Example 2 is carried out.
  • the acid precipitate of bleached globin, containing salts is then washed with an aqueous acetone solution containing at least 90% acetone, and then washed with water.
  • 800 mg of finely divided human globin powder is weighed into a 25 ml flask, to which is added 20 ml of anhydrous methanol containing 0.2 ml of 12N HCl, ie a final acid concentration of 0.12N.
  • the powder remains perfectly insoluble under these conditions, swells a little and disperses well.
  • a one-week incubation is carried out at room temperature with gentle agitation several times a day.
  • the globin precipitate is separated from the acidic methanol with the aid of a nylon filter with a porosity of 1 ⁇ m.
  • the precipitate is washed twice with 20 ml of pure acetone and then dried in air to obtain 740 mg of a well-divided fine powder.
  • This spontaneously wettable powder can be quickly dissolved in 20ml of distilled water in a small beaker. A clear straw-yellow solution with a pH of 2.8 is obtained.
  • ethylglobin ethyl ester is obtained, devoid of toxicity for the organism, even at a high dose.
  • the globin esters thus prepared are progressively hydrolysed in vivo and spontaneously regenerate the initial insoluble globin, which itself will be degraded. It is therefore a perfectly reversible modification. It is therefore preferable to prepare such finished products in dry or non-aqueous form, so as to avoid degradation prior to their use.
  • the globin esters thus prepared have a very marked positive electrical charge. Their basic isoelectric point, close to 10, comes from the more or less complete disappearance of the carboxylic functions. This property gives them an adhesive character vis-à-vis the negatively charged fabrics.
  • globin esters have a large amount of amino functions that can be readily crosslinked by aldehyde functional reagents, such as glutaraldehyde, or oxidized polysaccharides. In addition, they can easily form stable networks through strong electrostatic bonds, in the presence of any negatively charged polymers or biopolymers, such as fibrinogen, fibrin, albumin, hyaluronates, heparin or any other polysaccharides sulphated, or rich in carboxylic functions.
  • aldehyde functional reagents such as glutaraldehyde
  • oxidized polysaccharides such as glutaraldehyde
  • they can easily form stable networks through strong electrostatic bonds, in the presence of any negatively charged polymers or biopolymers, such as fibrinogen, fibrin, albumin, hyaluronates, heparin or any other polysaccharides sulphated, or rich in carboxylic functions.
  • Example 6 Preparation of a sterile powder
  • the powder After checks, the powder remains soluble in a solution of neutral pH, physiological type PBS, up to a concentration of about 50%.
  • the powder may also be sterilized by ethylene oxide which allows for additional chemical modification by grafting hydroxyethyl groups onto the globin.
  • This powder can be applied to a skin wound by spraying, to fill the loss of tissue substance.
  • Soluble globin powder has adhesive properties in contact with a wound. This facilitates its use. It allows an absorption of wound exudates which gradually dissolve the globin powder, forming a viscous solution which is gradually diluted. This provides nutrients directly assimilated by the injured tissue and promotes the formation of granulation tissue, a necessary first step in the healing process.
  • the powder is first dissolved in PBS at a high concentration, greater than 30%, and then applied by liquid spraying.
  • Such a solution of 10 to 30% can be prepared by mixing the powder and PBS in a sterile syringe before use, and then injected intradermally for the purpose of filling wrinkles, or for other known applications of tissue augmentation. It is interesting to use ethyl-globin in this indication, because after hydrolysis, it regains its original character of insolubility, stopping its diffusion, which prolongs and improves its activity.
  • the powder or the soluble globin liquid may be used in combination with a dressing adapted to the wound to be treated.
  • Example 7 Preparation of a mixture of soluble globin powder as prepared in Example 5, with an insoluble globin powder.
  • the example describes the preparation of this product from pig globin and its use in the healing of deep cutaneous wounds in pigs.
  • Example 2 is reproduced from pig blood whose red blood cells are purified and then lysed to extract hemoglobin.
  • the pig globin is prepared according to the protocol described in Example 2, 3, 4 or 5 and provides a globin powder, chemically modified and become soluble at physiological pH.
  • a second preparation of insoluble globin powder at physiological pH is obtained by following Example 2, with a variant which consists in suppressing the alkaline treatment of chemical modification.
  • This powder is obtained in the following manner, in accordance with the teaching of patent FR 2854801.
  • the acid globin precipitate is separated and then redissolved in an aqueous solution at pH 3.
  • the solution is filtered on a sterilizing membrane with a porosity of 0.22 microns.
  • Globin is precipitated by neutralization at pH 7.2. This neutral precipitate is dissolved, again, in 3 volumes of 0.1M NaOH sodium hydroxide solution and incubated at 20 ° C. for 1 hour with stirring.
  • This alkaline treatment is not sufficient to cause a significant change in globin which remains insoluble at neutral pH.
  • the alkaline solution is acidified to pH 3 by addition of a 3N hydrochloric acid solution.
  • the acid globin precipitate that forms contains salts. It is washed with an aqueous solution of acetone containing about 90% acetone and containing enough water to dissolve the salts without dissolving the acidic globin. This washing allows the elimination of the salts of the precipitate.
  • the water of the precipitate is then removed by washing with pure acetone and the dry acidic globin powder is obtained by evaporation of the acetone under vacuum.
  • a neutralized pH globin powder insoluble at physiological pH, prepared by acetonic precipitation or lyophilization could be used.
  • 2 grams of acid globin powder insoluble at neutral pH
  • 8 grams of soluble globin powder and at neutral pH in a closed bottle.
  • the homogeneous mixture of the two powders is then sterilized by gamma irradiation at a dose of 5 to 25 or 30 kGray and can be directly used as a filler and scarring of external cutaneous wounds or internal surgical wounds.
  • Other proportions varying from 1 to 99% soluble powder in the mixture can be used.
  • the weight of wound powder may itself vary, depending on this proportion and the desired osmotic pumping effect on the wound.
  • a soluble portion in the powder allows aspiration and drainage of physiological fluids "exudates" from the wound, which dissolve the soluble globin, hydrate and neutralize the insoluble globin powder and release nutrients important for the cells and the development of the granulation tissue.
  • physiological fluids "exudates” from the wound, which dissolve the soluble globin, hydrate and neutralize the insoluble globin powder and release nutrients important for the cells and the development of the granulation tissue.
  • the interstitial space thus released allows optimal cell migration and colonization of the implant.
  • These fluids and cells migrate and adsorb to the insoluble globin granules and promote rapid filling by the granulation tissue.
  • This perfectly tolerated filling agent degraded in less than two weeks, significantly reduces contraction by the wound margins and promotes harmonious healing in less than four weeks, characterized by complete epithelialization of good quality.
  • Example 8 Preparation of a soluble globin powder as prepared in Example 5, and association with a sponge, cloth or oxidized cellulose powder. Use as a filler for wounds and healing.
  • Two grams of soluble human globin powder at physiological pH are prepared according to Example 5.
  • Mixed sponges of soluble globin and oxidized cellulose are obtained by lyophilization of an aqueous suspension of 1% oxidized cellulose at pH 7.2, containing 0.2 to 2% of soluble globin at the same pH.
  • the oxidized cellulose may also be in the form of two or three-dimensional fabric or knit.
  • the lyophilized sponges of rectangular dimension 5x7cm and thickness 3mm contain 105 mg of oxidized cellulose and 20 to 210 mg of soluble globin.
  • This product can be sterilized for example by ethylene oxide and used as a filler and scarring of burns and chronic internal or internal surgical skin wounds, as in the previous example.
  • biomaterials including collagens, chitosan and other known wound treatment polymers, can be used in place of oxidized cellulose in combination with soluble globin powder.
  • Example 9 Preparation of a solution of globin, chemically modified, soluble at pH 7.2. Use for filling skin tissue or protecting wounds, and ensuring their sealing
  • globin powder 1 gram of globin powder, soluble at neutral pH, prepared according to Example 5, is distributed dry in a 5 ml syringe.
  • the filled and blocked syringe is sterilized by beta irradiation (electron beam) at a dose of 5 to 25 or 30kGray.
  • This syringe is connected to a second sterile syringe containing 2 to 10ml of physiological solution, thanks to a luer connector with two ends, 2mm internal diameter.
  • the solution is injected into the syringe containing the powder. Successive round trips make it possible to prepare a homogeneous solution of neutral globin, viscous, concentrated from 10 to 50%.
  • Such a preparation at a concentration of 10 to 30% can be injected intradermally for filling wrinkles, or by any other route for increasing the volume of a tissue structure, with the exception of the intravascular route which is prohibited.
  • a third sterile syringe containing 0.5 ml of 0.2% glutaraldehyde or 0.5 ml of 3% oxidized starch can be combined in parallel with the syringe containing the solution of globin at a concentration of 30 to 50%, in a mixing kit. two components. By pushing on both syringes at the same time, a mixture or adhesive gel is obtained, which crosslinks in seconds or minutes and hardens. The setting time is adjustable by the respective concentrations of globin and crosslinking agent.
  • This adhesive can be used for various surgical applications that require this type of product, or for covering or protecting cutaneous or surgical wounds.
  • the globin syringe, or the syringe containing the crosslinking agent can be added with an adjuvant adhesive, such as hyaluronic acid or other negatively charged polymers, such as carboxymethylcellulose.
  • an adjuvant adhesive such as hyaluronic acid or other negatively charged polymers, such as carboxymethylcellulose.
  • This polymer is incorporated in the globin gel network, at the moment its crosslinking, increases its adhesive power and viscosity and promotes its adhesion to the wound to be treated.
  • the syringe containing the concentrated liquid globin may contain air or any other gas and may be mixed with the syringe containing the crosslinking agent by successive round trips of syringe with syringe, immediately before being applied to the tissues to be protected, in the form of adhesive fluid foam. After a few seconds or minutes, depending on the amount of crosslinking agent and the concentration of the globin solution, the foam cures and remains attached to the tissues to which it has been applied. Finally this solution or adhesive foam can be mixed with a fibrin glue at the time of its preparation. This dilution of the fibrin glue increases its volume without reducing its adhesive power, the complex thus created has healing and filling properties.
  • Example 10 Preparation of a crosslinked insoluble paste or suspension. Application as a wound filling agent or as an injectable material for tissue augmentation.
  • the adhesive product described in the preceding example may be applied to an external or internal wound, to protect it or promote its healing. It can also be injected with fine needles, before it is set in bulk, in intradermal or subcutaneous sites to create or restore a volume or correct a wrinkle.
  • An alternative for the preparation of a non-soluble injectable product is to subject a suspension of soluble globin granules, prepared according to Example 2, 3, 4 or 5, to a secondary crosslinking by a crosslinking agent appropriate to the type of modification.
  • chemical globin such as for example: a diepoxide, in particular 1-4 butanediol-diglycidyl ether, especially for acetyl or succinylglobin, glutaraldehyde, or an oxidized polysaccharide in the form of macromolecular polyaldehyde, especially for globin esters or derivatives obtained by alkaline treatment.
  • a diepoxide in particular 1-4 butanediol-diglycidyl ether
  • acetyl or succinylglobin especially for acetyl or succinylglobin, glutaraldehyde
  • an oxidized polysaccharide in the form of macromolecular polyaldehyde especially for globin esters or derivatives obtained by alkaline treatment.
  • the suspension of concentration close to 15% can be divided into syringes and sterilized, in particular by autoclave at 120 ° C. or by beta or gamma irradi
  • a lubricating agent such as hyaluronic acid or gelatin may be necessary, while allowing the final sterilization.
  • the fluidizing agent can be packaged in another separate syringe and can be sterilized independently by known means, such as autoclaving at 120 ° C.
  • the mixture with globin can then be done using a sterile kit containing the two syringes of globin and fluidifying agent.
  • Both syringes are equipped with a female Luer tip and can be connected using a sterile connector with two male Luer tips.
  • Their homogeneous mixture is by pushing the content of a syringe in the other and vice versa, by making several round trips. A dozen or so round trips are generally enough to obtain a homogeneous pasty and viscous suspension, ready to be injected.
  • Example 11 Preparation of a soluble dry film, from chemically modified globin, soluble at pH 7.2. Application to the protection of wounds and the prevention of postoperative adhesions.
  • the gel or foam product, prepared according to Example 9, by omitting the addition of the crosslinking agent, can be deposited on a flat surface. After drying, a solid film is obtained whose thickness can be adjusted by the height of the deposit and whose flexibility can be adjusted by adding a plasticizer such as, for example, glycerol or polyethylene glycol.
  • This film can be used in the protection or healing of internal or external wounds, either directly by spontaneous adhesion, or after fixation with an adhesive agent such as oxidized starch, or by application of a laser beam, if a dye has been introduced in the film.
  • the initial gel may be cast, incorporating a mesh of resorbable or non-absorbable son.
  • the final membrane, obtained after drying, can be sutured.
  • the film and the membrane have properties of prevention of surgical adhesions.
  • Example 12 Preparation of an insoluble film, starting from chemically modified globin, soluble at pH 7.2, then crosslinked with a polyaldehyde.
  • the product gel or foam, prepared according to Example 9 may be deposited on a flat surface, to a certain thickness, before its setting in mass. When the crosslinking is complete, a solid film is obtained, the thickness of which can be adjusted by partial or total dehydration. This film can be used as in Example 11, in the protection or healing of internal or external wounds. It has properties of prevention of surgical adhesions.
  • Example 13 Preparation of solids by molding from the crosslinked adhesive gels obtained according to Example 9. Use as implants for the delayed delivery of drugs in the body.
  • the gel or adhesive foam prepared according to Example 9 can be molded to acquire the desired shape and volume for the implant. A drug may be added in the mass to allow for gradual and delayed delivery and to obtain a prolonged pharmacological effect.
  • Example 14 Medical applications of globin implants chemically modified and secondarily crosslinked to become insoluble.
  • the chemically modified globin implants, soluble or made insoluble by crosslinking, for example those prepared according to any one of Examples 9, 10, 12 and 13, may be used in the following non-limiting applications: -Characterization, protection or filling of external cutaneous wounds or internal surgical wounds. -Comfort of wrinkles and skin defects
  • Example 15 Medical Applications of Chemically Modified Globin Implants Soluble at Physiological pH. Soluble chemically modified globin implants, for example, those prepared according to any of Examples 1 to 7, 9 and 11 may be used in the following nonlimiting applications: Cutaneous cicatrization, using the neutral and soluble powder by spraying or topical application to the open wound.
  • This application can be carried out directly from the powder or after dissolution in a physiological liquid or a fibrin glue. This application may be in combination with other healing products or growth factors.
  • a preferred formulation is produced by a mixture of insoluble globin powder at physiological pH, prepared according to the teaching of patent FR 2854801 and soluble powder at physiological pH of globin chemically modified, carried out according to Example 5 above.
  • the preferred proportion calculated as dry weight is 30 to 10% of insoluble powder for 70 to 90% of soluble powder.
  • This powder gradually becomes impregnated with the natural exudate of the wound, by osmotic pumping thanks to the fraction of soluble powder which also stimulates the colonization by the fibrocytes.
  • the fraction of insoluble powder remains in the wound and inhibits its contraction.
  • the insoluble powder also contributes to the stimulation of the granulation tissue, and the neosynthesis of collagen. It becomes part of the granulation tissue before disappearing in one to two weeks by biodegradation.
  • the subject of the present invention is therefore also the use of a material that can be obtained from globin modified to be soluble at physiological pH, for producing a preparation according to the invention, adapted to the corresponding application. .
  • the methods are for therapeutic purposes. According to the persons concerned, methods of filling wrinkles can simply be cosmetic.
  • the method according to the invention comprises the step of implanting locally, in or on the tissue of the patient or the person, who needs it, a therapeutically or cosmetically effective amount of a preparation according to the invention. invention, in particular for the aforementioned applications.
  • the preparations according to the invention may preferably be sterilized by beta or gamma irradiation, preferably between 5 and 25 or 30.
  • beta or gamma irradiation preferably between 5 and 25 or 30.
  • kGray for example in frozen form, especially in the presence of dry ice, preferably in their final packaging. It is even insoluble globin preparations at neutral pH described in the applications or patents FR 2 854 801 and US 6 949 652, which are incorporated herein by reference.
  • preparations according to the invention or the applications and patents incorporated by reference comprise a mixture of globin and one or more heat-sterilizable components or autoclaving
  • a sterile kit preparation containing a syringe of a radiation-sterilized physiological pH-insoluble globin paste can be prepared. and a syringe of lubricating agent, for example hyaluronic acid or hyaluronate sterilized by autoclaving, with usual means for sterile mixing the contents of the two syringes.

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Abstract

Préparation implantable, comprenant un matériau susceptible d'être obtenu à partir de globine modifiée, notamment chimiquement pour être, au moins partiellement, soluble à pH physiologique, ledit matériau étant biocompatible, et biodégradable dans l'organisme. Le matériau peut être soluble à pH physiologique, ou bien insoluble à ce pH. La préparation peut se présenter sous forme de solution, suspension, pâte, gel, film, éponge, poudre ou granules, ou implant solide. Application notamment à la cicatrisation, protection ou comblement de plaies cutanées externes, au comblement de rides et défauts cutanés, au comblement de tissus, comme moyen de fixation de prothèses ou biomatériaux, ou moyen de prévention d'adhérences.

Description

Préparations implantables .
La présente invention a pour but de fournir de nouvelles préparations de globine utiles pour une administration à l'homme sous forme d'implants. Ces préparations peuvent se présenter, notamment, sous forme de poudres, pâtes, gels, suspensions, ou solutions injectables, ou de matériaux solides implantables, destinés notamment à corriger des rides, ou à protéger ou combler des plaies et participer à leur cicatrisation. Différents biopolymères ou biomatériaux sont actuellement disponibles pour de telles applications.
On a déjà décrit de nombreuses applications médicales du collagène, que ce soit sous forme de pâtes, par exemple pour le comblement, de formulations fluides ou solides, comme des films ou des compresses, ou sous forme d'implants divers. En fait, seul le collagène animal est généralement utilisé.
La préparation de collagène humain, qui serait préférable au collagène animal pour éviter des réactions immunologiques et inflammatoires, est envisageable à partir de tissus cutanés humains. Mais elle est rendue très difficile car le prélèvement de tissus humains à partir de cadavres pose des problèmes éthiques considérables et nécessite des tests coûteux pour éliminer les risques de transmission de maladies infectieuses, virales ou autres. La préparation de collagène humain à partir de placentas est coûteuse, complexe et difficile à organiser. La préparation de collagène humain par les méthodes modernes de recombinaison génétique ou de cultures cellulaires est aussi très coûteuse, ce qui gênera certainement le développement commercial de ce produit.
La globine insoluble à pH physiologique, non chimiquement modifiée, a récemment été décrite comme alternative au collagène, dans certaines applications médicales: (brevet FR 2854801) . La globine est la protéine constitutive de l'hémoglobine qui, elle même, contient 4 chaînes peptidiques (2 chaînes α et 2 chaînes β) chacune associée à un hème. L'hème est constitué d'une structure tétrapyrole contenant 1 atome de fer chargé positivement. Il y a 4 hèmes par molécule, responsables de la coloration rouge de l'hémoglobine.
Les procédés de préparation de la globine sont connus depuis très longtemps et ont été développés dans le but d'application alimentaire ou pour la préparation de solutions pharmaceutiques injectables.
Contrairement à l'hémoglobine qui est parfaitement soluble à pH physiologique, la globine est remarquablement insoluble dans les mêmes conditions. Le caractère insoluble, ou difficilement soluble, de la globine dans des conditions physiologiques a gêné jusqu'à présent le développement de ses applications médicales, en tant que substituts plasmatiques . C'est pourquoi la plupart des essais publiés ont cherché à préparer des dérivés solubles de la globine à pH physiologique, notamment par succinylation à l'aide de l'anhydride succinique ou par acétylation à l'aide de l'anhydride acétique, ou par hydrolyse des fonctions amides à pH alcalin. Tous ces procédés augmentent la charge négative de la globine et abaissent son pH isoélectrique, rendant la globine soluble à pH neutre.
Un produit injectable associant une préparation soluble de globine acide avec de l'insuline a été mis au point, breveté et commercialisé : REINER (1939) ; REINER et al. (1939). Il permet après injection, une délivrance progressive de l'insuline à partir de ce complexe : RABINOWITCH et al. (1947) ; BERG et al. (1953). La globine qui compose cette préparation n'est pas chimiquement modifiée ; elle est insoluble à pH physiologique, présente à faible concentration, et elle n'est pas l'élément actif, ni l'élément principal de ce produit. Récemment de nouveaux matériaux et de nouvelles applications médicales ont été décrits à partir de globine insoluble à pH neutre dans des conditions physiologiques et ont fait l'objet d'une famille de brevets issus du brevet FR 2854801.
Cependant, il nous a paru intéressant de pouvoir fabriquer des biomatériaux qui soient solubles ou insolubles à volonté, à pH physiologique, en utilisant une même matière première dérivée de la globine.
La présente invention se propose de fournir de nouveaux matériaux et préparations implantables dans l'organisme, préparés à partir de globine modifiée chimiquement pour être soluble à pH physiologique. Ces implants ne présentent pas les inconvénients ou limitations des matériaux et formulations connus, par exemple de collagène, hyaluronate de sodium, ou autres, notamment grâce à la possibilité de les préparer à partir du sang du patient à traiter ou de l'un de ses semblables et à leur caractère naturel et parfaitement toléré .
L'invention a pour objet une préparation implantable, entièrement ou partiellement soluble ou insoluble, pouvant être formulée sous diverses formes, comprenant un matériau susceptible d'être obtenu à partir de globine modifiée, notamment chimiquement pour être, au moins partiellement, et de préférence entièrement soluble à pH physiologique, ledit matériau étant biocompatible, de préférence stérile, et biodégradable. Par pH physiologique on entend notamment un pH compris entre 6 et 8, préférablement entre 6,5 et 7,5 et préférentiellement la gamme des pH physiologiques . Par implantable, on entend la faculté d'être implanté dans l'organisme, dans des tissus ou en contact avec eux, y compris sur la peau ou sur des plaies externes, l'administration intra-vasculaire étant exclue.
Ladite globine modifiée est de préférence modifiée pour être complètement soluble à pH physiologique, mais elle peut aussi n'être modifiée, par exemple à partir de la globine insoluble provenant de l'hémoglobine, que d'une façon plus limitée, mais la rendant nettement hydrophile et soluble partiellement.
Les préparations implantables selon l'invention sont, de préférence, totalement stériles, mais peuvent également ne pas l'être, notamment lorsqu'elles proviennent de prélèvements biologiques autologues du patient lui même. Ces questions de stérilité font partie des connaissances ordinaires de l ' implantologue spécialisé, notamment lorsqu'il s'agit du soin d'une plaie chronique cutanée.
La stérilisation peut être obtenue notamment par irradiation beta ou gamma, par exemple sous forme congelée en présence de carboglace, ou par autoclavage, notamment à 12O0C.
Dans un mode de mise en œuvre, le matériau susceptible d'être obtenu à partir de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique, est cette globine modifiée elle-même. Dans un autre mode de mise en œuvre ce matériau peut être obtenu en insolubilisant ladite globine modifiée soluble à pH physiologique.
Ces préparations solubles ou insolubles sont notamment sous forme de pâte ou gel injectable pour l'implantation, de matériaux solides implantables, par exemple de poudre, de granules, ou de films. Elles peuvent être solubles dans un liquide physiologique ou rendues insolubles après réticulation chimique de la globine soluble. Par injectable, on entend la propriété de pouvoir être injecté pour réaliser l'implantation locale, à l'exclusion de toute injection intraveineuse ou intraartérielle qui sont formellement contre-indiquées .
De préférence, pour être rendue soluble à pH physiologique, la globine est modifiée chimiquement par traitement alcalin, notamment à la soude, et/ou par estërification des fonctions carboxyliques, et/ou acétylation ou succinylation, auxquelles sont sensibles ses fonctions aminés . De plus ladite globine peut être rendue partiellement soluble, par une réaction chimique partielle ou une incubation alcaline plus courte, ou à une concentration inférieure à IN. A titre d'exemples, des traitements en soude NaOH de concentration 0,1 à IN pendant 4 à 24 heures, à température ambiante sont possibles. Lorsque la concentration de soude, ou d'une autre base alcaline, est augmentée le temps d'incubation ou/et la température peuvent être diminués .
Dans une forme de réalisation, ledit matériau est sensiblement soluble à pH physiologique, et dans ce cas, de préférence, ledit matériau est ou comporte ladite globine modifiée pour être soluble à pH physiologique.
Dans une autre forme de réalisation, au contraire, ledit matériau est sensiblement insoluble à pH physiologique, de préférence en étant obtenu par réticulation de ladite globine soluble à pH physiologique .
Dans une autre forme de réalisation, la préparation comporte, à la fois, un desdits matériaux soluble à pH physiologique et un desdits matériaux insoluble à pH physiologique.
Dans d'autres formes de réalisation, la préparation peut comprendre un autre matériau, notamment de comblement, biocompatible, stérile et insoluble à pH physiologique, notamment de la globine biodégradable, par exemple stérile, et insoluble à pH physiologique telle que définie dans FR-A-2 854 801.
Ledit autre matériau peut aussi être choisi dans le groupe constitué par les celluloses oxydées, les collagènes et le chitosan, ou généralement les matériaux de comblement ou augmentation tissulaire.
La préparation peut se présenter sous forme de suspension, pâte, ou gel, de préférence suffisamment fluide pour être injectable. Mais dans d'autres formes de réalisation elle peut se présenter sous forme solide, par exemple sous les formes suivantes :
- poudre ou granules, film, membrane ou treillis, - éponge, implant solide préformé.
Elle peut également se présenter sous forme d'une solution injectable, et dans ce cas, si ladite globine modifiée pour être soluble à pH physiologique est présente et forme le constituant actif principal, on préfère que la concentration en ladite globine soit au moins de 10%, de préférence supérieure ou égale à 12% ou 15%.
La préparation peut comprendre une poudre de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique, Elle peut alors comporter, de plus, un agent réticulant, le mélange pouvant former une colle adhésive sur les tissus organiques. Ledit agent réticulant peut être lui-même sous forme de poudre, l'ensemble pouvant former une colle en présence d'un milieu liquide, notamment liquide physiologique .
Une préparation comprenant ladite globine modifiée pour être soluble à pH physiologique peut comprendre également un matériau solide insoluble à pH physiologique obtenu à partir de ladite globine et/ou un autre matériau solide, à savoir de la globine biodégradable, stérile et insoluble à pH physiologique.
Cet autre matériau peut être sous forme de poudre . Ces préparations comprenant ladite poudre de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique, peuvent être formulées sous forme de spray ou aérosol sec, ou bien ladite globine modifiée peut être associée à un pansement solide. De préférence une préparation injectable comporte de la globine modifiée pour être soluble à pH physiologique .
Mais une préparation comportant de la globine modifiée pour être soluble à pH physiologique peut aussi être réalisée sous forme de tissu, de tricot, de treillis, d'épongé, ou de film implantables, optionnellement renforcés par un matériau implantable suturable .
Elle peut comprendre un autre matériau solide biocompatible, notamment de la cellulose oxydée, du collagène ou du chitosan, ou bien un matériau solide insoluble à pH physiologique obtenu à partir de ladite globine ou encore de la globine biodégradable, de préférence stérile, et insoluble à pH physiologique selon FR-A-2 854 801.
Si le matériau est insoluble à pH physiologique, ladite préparation peut aussi être formulée sous forme de poudre, par exemple sous forme de spray ou aérosol sec.
Une préparation comprenant un matériau insoluble à pH physiologique obtenu à partir de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique peut être réalisée sous forme de film, optionnellement renforcé par un matériau suturable, ou d'implant solide obtenu, par exemple, par réticulation d'un gel ou d'une mousse de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique.
Dans une autre forme de réalisation une préparation comprenant un matériau insoluble à pH physiologique obtenu à partir de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique peut comporter un agent fluidifiant et se présenter sous forme de suspension, pâte ou gel. L'agent fluidifiant peut être de l'acide hyaluronique (ce qui sous entend aussi ses équivalents, hyaluronates) , de la carboxy méthylcellulose ou de la gélatine. De façon avantageuse ledit agent fluidifiant peut être de la globine modifiée pour être soluble à pH physiologique .
Une préparation liquide comprenant une solution de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique, peut être réalisée sous forme de spray ou aérosol liquide, ou bien en solution associée à un pansement.
De telles préparations dans lesquelles ladite globine modifiée pour être soluble à pH physiologique est en solution peuvent comporter un agent réticulant, pour former une colle adhésive sur les tissus organiques.
Elles peuvent aussi se présenter sous forme de mousse et comporter un agent réticulant pour former une colle adhésive sur les tissus organiques.
D'une façon générale, les colles biologiques selon l'invention peuvent aussi contenir un agent adhésif, notamment l'acide hyaluronique ou la carboxy méthylcellulose .
Les préparations comprenant de la globine modifiée pour être soluble à pH physiologique peuvent comprendre, de plus un matériau solide et se présenter sous forme d'épongé, de treillis, tissu, tricot, ou film, optionnellement renforcés par un matériau suturable, cet autre matériau étant, de préférence, choisi dans le groupe des textiles formés de fils fabriqués à partir de polymères résorbables ou non résorbables tels que les polyesters, les polyalcènes, les familles des polyhydroxyacides, celluloses oxydées, collagènes et chitosan. Ledit autre matériau peut aussi être obtenu à partir de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique et rendu insoluble à pH physiologique, ou bien encore comprendre de la globine biodégradable, et insoluble à pH physiologique.
De façon avantageuse les préparations adhésives formant une colle biologique peuvent se présenter sous forme d'un kit comprenant, dans des réservoirs distincts, le matériau soluble à pH physiologique et l'agent réticulant .
Les préparations selon l'invention peuvent se présenter sous une forme d'un seul tenant, de préférence prêtes à l'emploi. Cependant elles peuvent aussi se présenter sous forme de deux ou plusieurs composants destinés à être associés ou mélangés, par exemple sous forme de kit, de préférence sous forme stérile. Par exemple, des réservoirs ou seringues distincts peuvent contenir le matériau obtenu à partir de globine modifiée et un autre composant, par exemple agent fluidifiant ou de viscosité, agent réticulant ou agent adhésif.
L'intérêt de cette nouvelle famille de produits réside notamment dans le fait qu'il s'agit de biomatériaux protéiques solubles ou insolubles à volonté, préparés à partir d'une protéine définie, pure et homologue, parfaitement biocompatible avec les tissus environnants dans lesquels ils sont injectés. Cette protéine, lorsqu'elle est d'origine naturelle, doit subir avant d'être utilisée une modification chimique pour la rendre soluble à pH physiologique.
Les applications médicales permises par ces biomatériaux préparés à partir de globine modifiée chimiquement sont nombreuses. De plus, ces applications sont inattendues, car à ce jour, aucun produit dérivé de la globine n'est commercialisé sous forme de biomatériau implantable pour des applications médicales ou chirurgicales. Ce caractère inattendu est d'autant plus surprenant que la globine représente environ 75% de toutes les protéines du sang (Globules + plasma) et que seules les protéines plasmatiques, représentant les 25% restant, sont utilisées aujourd'hui en médecine. Parmi elles, l'albumine, ou le fibrinogène sont utilisés pour des applications médicales et chirurgicales diverses telles que : solutions colloïdales injectables, revêtements, adhésifs, etc. Il est alors possible par exemple d'associer de manière nouvelle les colles à base de fibrinogène plasmatique, dites colles de fibrine, telles que Tisseel , Tissucol , Quixil , Hemaseal , Beriplast0 et d'autres avec les matériaux de globine adhésifs ou non adhésifs. Cette opportunité permet une utilisation rationnelle des protéines sanguines qui peut contribuer à éviter leur gaspillage, diminuer les doses nécessaires, améliorer leurs performances et augmenter le nombre de leurs applications. Ces colles chirurgicales selon l'invention comportent donc une teneur en matériau à base de fibrinogène, de préférence inférieure à la teneur habituelle, et un matériau soluble ou non pouvant être obtenu à partir de la globine modifiée, conformément à l'invention, ou bien encore de la globine insoluble non modifiée.
Dans de nombreuses applications de l'invention le matériau obtenu à partir de la susdite globine modifiée joue le rôle d'un constituant actif, voire d'un constituant actif principal ou exclusif, par son interaction physiologique, notamment au niveau cellulaire, avec le tissu dans ou sur lequel il est implanté .
La globine humaine homologue peut être préférable à une globine animale hétérologue et permet alors d' éviter au mieux toute réaction immunologique du patient à traiter, pendant ou après l'implantation. Ce produit représente donc un avantage important par rapport au collagène qui jusqu'à présent est préparé à partir de peaux d'animaux (veau, porc, etc..) et qui nécessite un certain nombre de précautions et conditions pour éviter les réactions immunologiques chez les patients : Nécessité de tester chaque patient pour une éventuelle allergie au collagène animal et impossibilité de traiter les personnes allergiques. La globine chimiquement modifiée, soluble à pH physiologique peut être filtrée stérilement sur des membranes poreuses . Pour des concentrations appropriées de 1 à 50% (10 à 500 mg/ml) , de telles solutions peuvent être traitées comme des solutions de protéines et permettent de réaliser des produits tels que : éponges, films, granules, poudres, solides divers, en utilisant ou combinant les techniques de séchage, lyophilisation, réticulation, précipitation. Quelques exemples sont développés ci-dessous. La globine est facile à purifier à partir de globules rouges provenant de sang animal ou humain. Les globules rouges humains sont disponibles en quantité importante à partir des dons périmés restant en stock dans les centres de transfusion sanguine et pour lesquels tous les tests préalables sanitaires ont été réalisés au moment du prélèvement. La préparation de globine soluble à pH physiologique et implantable, ou d'autres biomatériaux insolubles à base de la même globine chimiquement modifiée puis réticulée, représentent donc une voie nouvelle pour satisfaire des applications biomédicales qui se développent de plus en plus, tout en permettant de valoriser le sang non utilisé ou les dons de sang périmés et d'éviter ou de diminuer leur destruction. En contraste avec d'autres protéines, dont les collagènes, la globine chimiquement modifiée et soluble à pH physiologique présente l'originalité de conserver son caractère soluble malgré un traitement alcalin prolongé ou/et malgré une stérilisation par irradiation. Ceci facilite son emploi en toute sécurité, grâce à la garantie d'une puissante inactivation des agents infectieux ou transmissibles potentiellement présents dans tout produit d'origine biologique. Ceci permet d'exploiter en médecine humaine, les propriétés biologiques de la globine, lorsqu'il est nécessaire d'utiliser une préparation soluble à pH physiologique.
La mise en œuvre de l'invention est possible aussi à partir d'un prélèvement d'échantillon de sang du patient à traiter d'environ 20 à 200 ml, et sa transformation en globine autologue, chimiquement modifiée, avec les mêmes méthodes que pour de grands volumes, puis sa transformation en biomatériau implantable destiné à des applications telles que la protection, le comblement ou la cicatrisation des plaies chroniques, ou la correction ou le comblement des rides. Le nombre d'unités préparées à partir d'un prélèvement du patient peut être important et permettre un traitement répétitif et prolongé du patient. Pour l'étape d'hémolyse des globules rouges, ceux-ci peuvent être préalablement purifiés, pour partir d'une solution d'hémoglobine purifiée, déjà séparée des protéines plasmatiques . Mais cette étape peut être supprimée, notamment grâce à la propriété spécifique d'insolubilité de la globine dans une solution aqueuse de pH neutre, qui la distingue des autres protéines plasmatiques et permet de la séparer.
De même le placenta humain qui est expulsé après l'accouchement contient du sang qui est généralement détruit par incinération, mais qui peut servir aussi à l' invention.
Les poches de sang de donneurs sont contrôlées officiellement par les organismes de transfusion sanguine, grâce aux nombreux examens biochimiques, bactériologiques, sérologiques et tests de screening des différents virus et d'autres agents infectieux. Dans le cas du sang placentaire, il serait évidemment nécessaire de réaliser les mêmes examens sur des échantillons de sang du cordon ombilical ou de la mère avant de pouvoir collecter, conserver et extraire le sang de cette matière première. Pour le sang autologue, les tests à effectuer peuvent être simplifiés.
La réalisation de l'invention peut nécessiter d'abord de recueillir et purifier les globules rouges dans ces échantillons de sang, ou liquides sanguins, par des opérations simples et déjà connues, par exemple selon le procédé suivant .
Les globules rouges sont récupérés par centrifugation à basse vitesse. Le surnageant plasmatique est séparé et remplacé par un liquide salin physiologique de type PBS ; contenant 9g/1 de NaCl et tamponné à pH neutre. Après plusieurs lavages (3 à 5) , la suspension de globules rouges est ainsi débarrassée des protéines du plasma. Le culot de globules rouges purifiés est additionné de 1 ou 2 volumes d'eau distillée pour réaliser un choc osmotique qui entraîne la lyse des membranes des globules rouges et libère l'hémoglobine en solution concentrée et purifiée. Une étape de centrifugation à haute vitesse (10 à 20.000 t/mn) permet d'éliminer les débris membranaires et cellulaires dans le culot. Une étape finale de filtration du surnageant sur membrane de porosité de 0,2 micron permet de préparer une solution d'hémoglobine purifiée et stérile, dépourvue de particules et dérivés d'origine tissulaire, cellulaire ou membranaire. D'autres méthodes permettent de purifier l'hémoglobine à partir de sang congelé et hémolyse et d'éviter la purification préalable des globules rouges. Elles ont été décrites dans le brevet US 4764279 et combinent des précipitations par l'éthanol et une chromatographie sur des supports échangeurs d'anions de type DEAE Cellulose, DEAE Spherodex ou autres supports.
Le clivage Hème-Globine à pH acide a été décrit en présence d'alcool par SCHULZ dès 1898. ANSON et MIRSKY en 1930, puis ROSSI-FANELLI et coll. en 1958 utilisent l'acétone en présence d'acide à O0C. TEALE (1959) préfère l'utilisation de la méthyl-éthyl cétone à la place de l'acétone. AUTIO et coll. (1984) séparent la globine à pH acide grâce à l'absorption et la précipitation de l'hème avec la carboxymethylcellulose soluble . La globine ainsi préparée est soluble à pH acide ou alcalin mais devient insoluble dès que le pH de la solution aqueuse est neutralisé entre pH 6 et 8. Grâce à cette propriété spécifique, il est possible de réaliser une précipitation sélective de la globine en solution aqueuse à pH neutre, en présence d'une faible concentration saline voisine de 5g/l de chlorure de sodium, conditions dans lesquelles les autres protéines plasmatiques sont solubles, ne co- précipitent pas avec la globine et sont séparées dans le surnageant. Cette méthode est utile lorsque l'on souhaite éviter une séparation préalable des globules rouges et du plasma, ce qui permet de congeler le sang aussitôt son prélèvement . Des essais de solubilisation de la globine à pH physiologique sont déjà connus. Certains ont été réalisés par STRUMIA et coll. en 1951 et 1952 par un traitement alcalin prolongé qui entraîne une déamidation partielle de la globine au niveau des résidus asparagine et glutamine transformés respectivement en acide aspartique et acide glutamique (VARS 1952) . D'autres essais de solubilisation ont été notamment réalisés par VOLCKMANN en 1988 par succinylation. Ces préparations de globine chimiquement modifiée, soluble à pH physiologique, ont été proposées comme substituts du plasma ou de l'albumine, par injection intraveineuse, chez des patients nécessitant une augmentation du volume sanguin circulant, à la suite d'une cirrhose hépatique, de pertes sanguines accidentelles, ou de grandes brûlures. Ces applications médicales n'ont pas vu le jour, malgré un développement clinique satisfaisant, (Strumia et al., 1952) ou ont été abandonnées rapidement notamment pour des raisons de toxicité à forte dose, ou d'élimination trop rapide par la voie rénale. Personne n'a pensé jusque maintenant, que cette globine chimiquement modifiée et soluble à pH physiologique, pouvait être utilisée pour la fabrication d'implants autologues ou homologues, destinés notamment au comblement, à la protection, ou à la cicatrisation des plaies internes ou cutanées.
La possibilité de réticuler la globine chimiquement modifiée, soluble et utilisable à forte concentration, en lui conférant un caractère insoluble en milieu physiologique explique la persistance de cette forme de globine après implantation tissulaire, ce qui la rend aussi relativement résistante à une dégradation enzymatique, surtout si la quantité injectée est importante, ce qui est le cas dans les applications de comblement ou d'augmentation tissulaire. La vérification de l'intérêt de l'invention peut être facilement réalisée à partir d'une préparation de globine de porc chimiquement modifiée par traitement alcalin prolongé ou par estérification des fonctions carboxyliques, ou par acétylation ou succinylation des fonctions aminés, puis purifiée et déshydratée pour obtenir une poudre entièrement soluble en milieu aqueux physiologique. La poudre de globine ainsi préparée peut être mise dans une seringue, stérilisée par l'oxyde d'éthylène ou irradiation à une dose de 5 à 25 ou 30kGray et redissoute à haute concentration dans une solution physiologique de PBS. Après mélange à température ambiante avec un agent réticulant adapté à la modification chimique réalisée, tel que des diépoxides, ou des aldéhydes, ou des polyaldéhydes , ou des polysaccharides oxydés, ou d'autres groupements réactifs, on obtient un gel visqueux et adhésif, parfaitement biocompatible et biodégradable. La poudre initiale ou la solution de globine peuvent être additionnées d'autres adjuvants adhésifs connus, tels que l'acide hyaluronique , la carboxy-methylcellulose, qui peuvent participer activement ou passivement à la constitution du réseau réticulé de globine et s'y trouvent piégés. Cette colle biologique peut remplacer avantageusement les produits comparables préparés à partir de polymères synthétiques moins bien tolérés, ou de matériaux collagéniques qui nécessitent généralement l'emploi de moyens de chauffage pour être fluidifiés avant utilisation. Dans le cas d'une préparation d' ethyl-globine ou d'autres esters de globine solubles à pH neutre, il est possible de l'utiliser sous forme de solution concentrée à pH neutre, reconstituée juste avant l'emploi à partir de poudre et de PBS en seringues séparées puis mélangées. Après injection dans les tissus à combler ou à protéger, les fonctions esters de la globine seront rapidement hydrolysées et la globine retrouvera son caractère insoluble. Ceci souligne l'intérêt de l' estérification de la globine qui lui confère une modification chimique réversible, par hydrolyse en milieu aqueux.
L'absence de pouvoir antigénique de la globine de lapin, chimiquement modifiée par succinylation a été vérifiée par immunisation de lapins avec ou sans adjuvant de Freund par voie sous cutanée et intra musculaire. Les prélèvements de sang effectués après l'immunisation permettent de vérifier l'absence d'anticorps anti-globine ou anti-hémoglobine par les tests habituels de contrôle : Volckmann (1988) . La modification chimique de la globine solubilisée par traitement alcalin prolongé a été documentée par Vars et al. (1952) et sa biocompatibilité a été démontrée par Strumia et al. (1952)
Exemples de réalisation de produits selon l'invention.
Exemple 1 : Préparation de globine de lapin, chimiquement modifiée, soluble à pH physiologique.
Cinq lapins anesthésiés sont saignés par ponction cardiaque. Le sang est récupéré en présence d'héparine ou en présence de citrate de sodium pour éviter sa coagulation. On obtient ainsi 210 ml de sang qui sont centrifugés pendant 30 minutes à 2500 t/mn. Le surnageant contenant le plasma est prélevé avec une pipette et le culot est lavé 5 fois par 3 volumes de tampon PBS, contenant 9 g/1 NaCl et tamponné à pH 7.2. Le culot final, lavé, est additionné, sous agitation, d'un volume égal d'eau distillée pour lyser les hématies. La suspension finale est centrifugée à 12 000t/mn pour éliminer des débris cellulaires et membranaires . Le surnageant est filtré sur membrane d'acétate de cellulose de porosité 0.22 micron. On obtient 82 ml contenant 97 g/1 d'hémoglobine.
L'hémoglobine est transformée en globine. selon la technique décrite par TAYOT et VERON (1983) . Cette solution d'hémoglobine est versée sous agitation dans 275 ml d'éthanol 96% contenant 1 ml d'HCL concentré. Le pH est ajusté à 3. La concentration finale est de 74% d'éthanol et de 22g/l d'hémoglobine à pH acide. On ajoute 3 g de charbon actif L4S de la marque CECA sous agitation vigoureuse pendant 15 heures à 40C. La suspension est centrifugée à 15 000t/mn pendant 30 minutes pour éliminer le charbon sous forme de culot . Le surnageant contenant la globine acide décolorée est filtré sur une série de membranes poreuses jusqu'à la porosité la plus faible (0.2 micron) pour éliminer les particules fines de charbon. Le filtrat est ensuite précipité dans 10 volumes d'acétone. Le précipité acide de globine est lavé par l'acétone pour préparer une poudre acide, anhydre, dêbarassée des sels. 4,5g de cette poudre sont dilués dans 100ml de NaOH 0,25 M, conformément à la publication de Strumia et al. (1951). La solution alcaline obtenue après 30 minutes d'agitation est limpide. Elle est ensuite incubée à 37°C pendant 27 heures, puis neutralisée à un pH voisin de 7,2, par addition d'une solution d'acide chlorhydrique . La solution neutralisée reste limpide. La globine en solution est ensuite précipitée par addition de 10 volumes d'acétone. Le précipité est récolté par filtration sur toile poreuse, puis lavé par l'acétone pour obtenir une poudre anhydre, neutre et spontanément soluble dans l'eau ou une solution physiologique à pH neutre. Exemple 2 : Préparation de globine humaine, chimiquement modifiée, soluble à pH physiologique.
200 ml de sang humain périmé, prélevé sur citrate de sodium sont centrifugés pendant 30 mn à 2500 t/mn. Le surnageant contenant le plasma est prélevé avec une pipette en aspirant aussi la couche cellulaire blanchâtre superficielle correspondant aux leucocytes. Le culot de globules rouges est lavé 5 fois avec 3 volumes de solution physiologique PBS, contenant 9 g/1 NaCl et tamponné à pH 7.2, par des centrifugations successives. Le culot final est additionné de 2 volumes d'eau distillée pour lyser les hématies. La suspension hémolysée est clarifiée par centrifugation pendant 30 mn à 12000t/mn et filtrée sur membrane de porosité 0.2 micron. On obtient 210 ml contenant 52 g/1 d'hémoglobine qui sont conservés à 4° C. Cette solution est lentement versée sous agitation dans 4 1 d'acétone, contenant 40 ml d'HCl 10 N. La suspension est agitée vigoureusement et laissée au repos pendant 1 heure à température ambiante, sous une hotte chimique. L'hème dissout dans l'acétone est éliminé par filtration sur toile poreuse et le précipité de globine décolorée est récupéré, lavé en acétone et séché sous courant d'air.
En variante, divers acides minéraux (sulfurique, chlorhydrique, phosphorique...) ou carboxyliques, tels que l'acide acétique, l'acide oxalique, ou l'acide citrique par exemple, peuvent être utilisés pour acidifier la solution d'acétone ou la solution d'hémoglobine avant sa décoloration. Une autre variante de ce procédé consiste à précipiter la solution acide d'hémoglobine avant sa décoloration. La précipitation peut être réalisée par addition de NaCl à une concentration de 40 à 60 g/1. Le précipité d'hémoglobine acide est ensuite décoloré par suspension dans un volume suffisant d'éthanol ou/et d'acétone. Le pigment passe en solution dans l'éthanol ou/et l'acétone ; la globine reste sous forme précipitée et peut être récoltée par filtration sur toile poreuse. Grâce à l'élimination de toute phase aqueuse, cette variante permet de réduire le volume nécessaire d'éthanol ou/et d'acétone d'un facteur au moins égal à 5.
Le précipité acide de globine décolorée, contenant des sels, est ensuite lavé par une solution aqueuse d'acétone contenant au moins 90% d'acétone, puis lavé par l'acétone anhydre et séché pour préparer une poudre acide, débarrassée des sels. 4,5g de cette poudre sont dilués dans 100ml de NaOH 0,25 M et incubés à +200C pendant 24 heures, puis traités comme dans l'exemple 1. La solution est neutralisée à un pH voisin de 7,2 par addition d'une solution d'acide chlorhydrique . La globine est ensuite précipitée par addition d'au moins 10 volumes d'acétone. Le précipité est récolté par filtration sur toile poreuse, puis lavé par l'acétone et séché, pour obtenir en final une poudre neutre et soluble dans l'eau ou une solution physiologique.
Plusieurs variantes permettent de préparer, de la globine partiellement ou totalement soluble, par une incubation alcaline plus courte, ou à une concentration inférieure à IN. A titre d'exemples, des traitements en soude NaOH de concentration 0,1 à IN pendant 4 à 24 heures, à température ambiante sont possibles. Lorsque la concentration de soude, ou d'une autre base alcaline, est augmentée le temps d' incubation ou/et la température doivent être diminués.
Exemple 3: Autre préparation de globine humaine, modifiée chimiquement, soluble à pH physiologique. On réalise le procédé de l'exemple 1 à partir de culot globulaire contrôlé et périmé obtenu auprès d'un centre de transfusion sanguine. On obtient une poudre neutre de globine humaine, chimiquement modifiée, soluble dans l'eau ou un liquide physiologique, biocompatible et implantable par injection ou chirurgicalement .
Exemple 4: Autre préparation de globine humaine, modifiée par succinylation, soluble à pH physiologique. Cette préparation est réalisée conformément aux travaux de Volckmann (1988) . Le précipité acide de globine décolorée, contenant des sels, est lavé par une solution d'acétone, contenant assez d'eau pour dissoudre les sels sans dissoudre la globine, puis lavé par l'acétone anhydre et séché pour préparer une poudre, acide, débarrassée des sels. Cette poudre est reprise à une concentration de 30 mg/ml, en solution de NaOH lg/1 contenant 9 g/1 de NaCl, puis additionnée de 80 mg d'anhydride succinique par gramme de globine, à une température de 200C. Le pH décroît spontanément jusqu'à 9, où il est maintenu par addition progressive de NaOH, avec contrôle continu au pH mètre . La réaction est terminée lorsque le pH est stable. Après 1 heure d'attente, la solution est ajustée à pH neutre et précipitée par une solution aqueuse d'acétone à 90%. Le précipité est lavé par de l'acétone anhydre puis séché. On obtient une poudre neutre de globine soluble en solution physiologique à pH neutre.
Exemple 5: Autre préparation de globine humaine, modifiée par estërification, soluble à pH physiologique. On réalise la préparation de précipité de globine humaine selon l'exemple 2. Le précipité acide de globine décolorée, contenant des sels, est ensuite lavé par une solution aqueuse d'acétone contenant au moins 90% d'acétone, puis lavé par l'acétone anhydre et séché pour préparer une poudre acide, débarrassée des sels. On pèse 800mg de poudre de globine humaine, finement divisée, dans un flacon de 25ml, auquel est ajouté 20ml de méthanol anhydre, contenant 0,2ml d' HCl 12N, soit une concentration acide finale de 0,12N. La poudre reste parfaitement insoluble dans ces conditions, gonfle un peu et se disperse bien. Après bouchage hermétique du flacon, une incubation d'une semaine est réalisée à température ambiante sous agitation modérée plusieurs fois par jour. Le précipité de globine est séparé du méthanol acide, à l'aide d'un filtre nylon de porosité lμm. Le précipité est lavé par deux fois 20ml d'acétone pure, puis séché à l'air pour obtenir 740mg d'une poudre fine bien divisée. Cette poudre peu mouillable spontanément, peut être rapidement dissoute dans 20ml d'eau distillée, dans un petit bêcher. On obtient une solution limpide jaune paille, de pH 2,8. La neutralisation du pH de cette solution par addition goutte à goutte de soude 0,5N, sous agitation manuelle et avec contrôle continu du pH permet de vérifier le caractère soluble de la globine à pH neutre entre 6 et 8, puis sa précipitation massive à un pH alcalin voisin de 9,5 à 10.
Il est possible d'observer un début de précipitation vers pH5, lorsque la poudre de départ n'est pas finement divisée. Ceci correspond à la présence partielle de globine non modifiée, protégée de la réaction d' estérification au cœur d'un gros agrégat de poudre. La méthylglobine ainsi préparée pourrait manifester une certaine toxicité à haute dose. En effet, in vivo, en présence des liquides aqueux physiologiques, il y a une hydrolyse spontanée des fonctions esters méthyliques, avec libération de méthanol toxique à hautes doses et régénération progressive de la globine initiale. Pour éviter ce risque théorique, la réaction d' estérification peut s'effectuer en remplaçant le méthanol par de l'éthanol, de préférence à d'autres alcools moins réactifs. Dans ce cas on obtient un ester éthylique d' ethylglobine, dépourvu de toxicité pour l'organisme, même à forte dose. Il est à noter que les esters de globine ainsi préparés sont progressivement hydrolyses in vivo et régénèrent spontanément la globine insoluble initiale, qui elle-même sera dégradée. Il s'agit donc d'une modification parfaitement réversible. Il est donc préférable de préparer de tels produits finis sous forme sèche, ou non aqueuse, de manière à éviter une dégradation préalable à leur emploi. Il est à noter aussi que les esters de globine ainsi préparés possèdent une charge électrique positive très marquée. Leur point isoélectrique basique, voisin de 10, provient de la disparition plus ou moins complète des fonctions carboxyliques . Cette propriété leur confère un caractère adhésif vis-à-vis des tissus chargés négativement. Ces esters de globine possèdent une grande quantité de fonctions aminés qui peuvent être facilement réticulées par des réactifs à fonctions aldéhydes, tels que le glutaraldéhyde, ou les polysaccharides oxydés. En outre, ils peuvent facilement former des réseaux stables grâce à des liaisons électrostatiques fortes, en présence de tous polymères ou biopolymères chargés négativement, tels que le fibrinogène, la fibrine, l'albumine, les hyaluronates, l'héparine ou tous les autres polysaccharides sulfatés, ou riches en fonctions carboxyliques . Exemple 6 : Préparation d'une poudre stérile de globine chimiquement modifiée et soluble à pH 7,2.
Utilisation en spray sec ou liquide pour faciliter la cicatrisation des plaies. En suivant l'un des exemples 2 à 5, on prépare de la poudre de globine humaine, chimiquement modifiée, soluble à pH neutre en solution physiologique. Cette poudre est conditionnée en flacons étanches bouchés et stérilisés, en présence de carboglace à -800C, par béta ou gamma- irradiation, à une dose de 5 à 25 ou 30kGray.
Après contrôles, la poudre reste soluble dans une solution de pH neutre, physiologique de type PBS, jusqu'à une concentration d'environ 50%.
En variante, la poudre peut aussi être stérilisée par l'oxyde d'éthylène qui permet une modification chimique complémentaire par greffage de groupements hydroxy-ethyle sur la globine. Cette poudre peut être appliquée sur une plaie cutanée par pulvérisation, pour combler la perte de substance tissulaire. La poudre de globine soluble possède des propriétés adhésives au contact d'une plaie. Ceci facilite son utilisation. Elle permet une absorption des exsudats de la plaie qui dissolvent progressivement la poudre de globine, en formant une solution visqueuse qui se dilue progressivement. Ceci apporte des nutriments directement assimilables par les tissus lésés et favorise la formation du tissu de granulation, première étape nécessaire dans le processus de cicatrisation. Dans une variante, la poudre est d'abord dissoute en PBS à une concentration élevée, supérieure à 30%, puis appliquée par pulvérisation liquide. Une telle solution de 10 à 30% peut être préparée par mélange de la poudre et de PBS dans une seringue stérile avant l'emploi, puis injectée par voie intradermique en vue du comblement de rides, ou pour les autres applications connues d'augmentation tissulaire. Il est intéressant d'utiliser l' ethyl-globine dans cette indication, car après hydrolyse, elle retrouve son caractère initial d'insolubilité, stoppant sa diffusion, ce qui prolonge et améliore son activité.
Enfin la poudre ou le liquide de globine soluble peuvent être utilisés en association avec un pansement adapté à la plaie à traiter.
Exemple 7 : Préparation d'un mélange de poudre de globine soluble telle que préparée dans l'exemple 5, avec une poudre de globine insoluble.
Utilisation comme agent de comblement des plaies et de cicatrisation. L'exemple décrit la préparation de ce produit à partir de globine de porc et son utilisation dans la cicatrisation de plaies cutanées profondes chez le porc.
L'exemple 2 est reproduit à partir de sang de porc dont les globules rouges sont purifiés, puis lysés pour extraire l'hémoglobine. La globine de porc est préparée selon le protocole décrit dans l'exemple 2, 3, 4 ou 5 et permet d'obtenir une poudre de globine, modifiée chimiquement et devenue soluble à pH physiologique.
Une seconde préparation de poudre de globine insoluble à pH physiologique est obtenue en suivant l'exemple 2, avec une variante qui consiste à supprimer le traitement alcalin de modification chimique. Cette poudre est obtenue de la manière suivante, conformément à l'enseignement du brevet FR 2854801. Après décoloration de l'hémoglobine de porc par une solution d'acétone acide, le précipité de globine acide est séparé puis redissout dans une solution aqueuse à pH 3. La solution est filtrée sur une membrane stérilisante de porosité 0.22 microns. La globine est précipitée par neutralisation à pH 7.2. Ce précipité neutre est dissout, à nouveau, dans 3 volumes de soude NaOH 0.1 M à IM et incubé à 200C pendant 1 heure sous agitation. Ce traitement alcalin n'est pas suffisant pour entraîner une modification significative de la globine qui demeure insoluble à pH neutre. Puis la solution alcaline est acidifiée à pH 3 par addition d'une solution d'acide chlorhydrique 3N. Le précipité de globine acide qui se forme contient des sels . Il est lavé par une solution aqueuse d'acétone contenant environ 90% d'acétone et contenant assez d'eau pour dissoudre les sels sans dissoudre la globine acide. Ce lavage permet l'élimination des sels du précipité. L'eau du précipité est ensuite éliminée par lavage en acétone pure et la poudre sèche de globine acide est obtenue par évaporation de l'acétone sous vide. En variante, une poudre de globine de pH neutralisé, insoluble à pH physiologique, préparée par précipitation acétonique ou lyophilisation pourrait être utilisée. 2 grammes de poudre de globine acide (insoluble à pH neutre) sont mélangés avec 8 grammes de poudre de globine soluble et à pH neutre, dans un flacon fermé. Le mélange homogène des deux poudres est ensuite stérilisé, par irradiation gamma à une dose de 5 à 25 ou 30 kGray et peut être directement utilisé comme agent de comblement et cicatrisation de plaies cutanées externes ou de plaies chirurgicales internes. D'autres proportions variant de 1 à 99% de poudre soluble dans le mélange peuvent être utilisées. Le poids de poudre appliqué par plaie peut lui-même varier, en fonction de cette proportion et de l'effet osmotique de pompage recherché sur la plaie.
Une expérimentation sur des plaies cutanées profondes, rectangulaires de 2x3 cm de côté, créées chez le porc, permet de vérifier l'intérêt de cette poudre de globine dans le processus de cicatrisation. Le volume de la plaie est comblé, au moins pour moitié et les plaies sont ensuite recouvertes par un pansement occlusif non adhérent de type OPSITE®. Le corps du porc est ensuite recouvert d'un pansement serré qui protège les plaies de toute contamination externe. Tous les 3 à 4 jours, les plaies sont nettoyées à l'eau physiologique, mais le produit de comblement reste parfaitement intégré à la plaie et n'est ni enlevé, ni remplacé. La présence d'une partie soluble dans la poudre permet l'aspiration et le drainage des fluides physiologiques « exsudats » de la plaie, qui dissolvent la globine soluble, hydratent et neutralisent la poudre de globine insoluble et libèrent des nutriments importants pour les cellules et le développement du tissu de granulation. L'espace interstitiel ainsi libéré permet une migration et une colonisation cellulaire optimale de l'implant. Ces fluides et les cellules migrent et s'adsorbent sur les granules de globine insoluble et favorisent un comblement rapide par le tissu de granulation. Cet agent de comblement parfaitement toléré, dégradé en moins de deux semaines, diminue de manière significative la contraction par les berges de la plaie et favorise une cicatrisation harmonieuse en moins de quatre semaines, caractérisée par une épithélialisation complète de bonne qualité.
De la même manière il est possible de préparer le même produit à partir de globine humaine, pour une utilisation dans la cicatrisation des plaies de brûlés ou des plaies chroniques de patients âgés, ulcères d'origine diabétique, ou d'insuffisance veineuse ou artérielle, ou escarres . Le caractère homologue de la globine réduit à son minimum la réaction inflammatoire généralement observée au contact de biomatériaux moins bien tolérés . Exemple 8 : Préparation d'une poudre de globine soluble telle que préparée dans l'exemple 5, et association avec une éponge, un tissu ou une poudre de cellulose oxydée. Utilisation comme agent de comblement des plaies et de cicatrisation.
Deux grammes de poudre de globine humaine soluble à pH physiologique, sont préparés selon l'exemple 5. Des éponges mixtes de globine soluble et de cellulose oxydée sont obtenues par lyophilisation d'une suspension aqueuse de cellulose oxydée à 1% à pH 7.2, contenant 0.2 à 2% de globine soluble au même pH. La cellulose oxydée peut être aussi sous forme de tissu ou tricot bi ou tridimensionnel. Les éponges lyophilisées de dimension rectangulaire 5x7cm et d'épaisseur 3mm contiennent 105 mg de cellulose oxydée et de 20 à 210 mg de globine soluble. Ce produit peut être stérilisé par exemple par l'oxyde d'éthylène et utilisé comme agent de comblement et de cicatrisation des brûlures et des plaies chroniques cutanées externes ou chirurgicales internes, comme dans 1 ' exemple précédent .
D'autres biomatëriaux, notamment les collagènes, le chitosan et d'autres polymères connus pour le traitement des plaies, peuvent être utilisés à la place de la cellulose oxydée, en association avec la poudre de globine soluble.
Exemple 9 : Préparation d'une solution de globine, chimiquement modifiée, soluble à pH 7,2. Utilisation pour le comblement de tissus cutanés ou pour protéger des plaies, et assurer leur ëtanchéité
1 gramme de poudre de globine, soluble à pH neutre, préparée suivant l'exemple 5, est réparti à sec dans une seringue de 5ml. La seringue remplie et bouchée est stérilisée par irradiation béta (faisceau d'électrons) à une dose de 5 à 25 ou 30kGray. Cette seringue est connectée à une seconde seringue stérile contenant de 2 à 10ml de solution physiologique, grâce à un connecteur luer à deux extrémités, de 2mm de diamètre interne. La solution est injectée dans la seringue contenant la poudre. Des allers-retours successifs permettent de préparer une solution homogène de globine neutre, visqueuse, concentrée de 10 à 50%. Une telle préparation à une concentration de 10 à 30% peut être injectée par voie intradermique pour le comblement de rides, ou par toute autre voie pour l'augmentation du volume d'une structure tissulaire, à l'exception de la voie intravasculaire qui est proscrite. Une troisième seringue stérile contenant 0.5 ml de glutaraldéhyde à 0.2% ou 0.5 ml d'amidon oxydé à 3% peut être associée en parallèle avec la seringue contenant la solution de globine à une concentration de 30 à 50%, dans un kit de mélange des deux composants . En poussant sur les deux seringues en même temps, on obtient un mélange ou gel adhésif, qui se réticule en quelques secondes ou minutes et durcit. Le temps de prise en masse est réglable par les concentrations respectives de globine et d'agent réticulant. Cet adhésif peut être utilisé pour les diverses applications chirurgicales qui nécessitent ce type de produit, ou pour la couverture ou la protection des plaies cutanées ou chirurgicales .
Dans une première variante, la seringue de globine, ou la seringue contenant l'agent réticulant peuvent être additionnées d'un adjuvant adhésif, tel que l'acide hyaluronique ou d'autres polymères chargés négativement, tels que la carboxymethylcellulose . Ce polymère s'incorpore dans le réseau du gel de globine, au moment de sa rëticulation, en augmente le pouvoir adhésif et la viscosité et favorise son adhésion à la plaie à traiter.
Dans une seconde variante, la seringue contenant la globine liquide concentrée peut contenir de l'air ou tout autre gaz et peut être mélangée à la seringue contenant l'agent réticulant par des allers-retours successifs de seringue à seringue, immédiatement avant d'être appliquée sur les tissus à protéger, sous forme de mousse fluide adhésive. Après quelques secondes ou minutes, en fonction de la quantité d'agent réticulant et de la concentration de la solution de globine, la mousse durcit et reste fixée aux tissus sur lesquels elle a été appliquée. Enfin cette solution ou mousse adhésive peut être mélangée à une colle de fibrine au moment de sa préparation. Cette dilution de la colle de fibrine permet d'augmenter son volume sans réduire son pouvoir adhésif, le complexe ainsi créé possède des propriétés de cicatrisation et de comblement .
Exemple 10 : Préparation d'une pâte ou d'une suspension insoluble réticulée. Application comme agent de comblement de plaies ou comme matériau injectable d'augmentation tissulaire.
Le produit adhésif décrit dans l'exemple précédent peut être appliqué sur une plaie externe ou interne, pour la protéger ou favoriser sa cicatrisation. Il peut aussi être injecté à l'aide d'aiguilles fines, avant sa prise en masse, dans des sites intradermiques ou sous-cutanés pour créer ou restaurer un volume ou corriger une ride . Une variante pour la préparation d'un produit non soluble injectable consiste à soumettre une suspension de granules de globine soluble, préparés selon l'exemple 2, 3, 4 ou 5, à une réticulation secondaire par un agent de réticulation approprié au type de modification chimique de la globine, tel que par exemple : un diépoxide, en particulier le 1-4 butane-diol-diglycidyl-ether, notamment pour l'acetyl ou la succinylglobine, le glutaraldéhyde, ou un polysaccharide oxydé sous forme de polyaldéhyde macromoléculaire, notamment pour les esters de globine ou les dérivés obtenus par traitement alcalin. Après réticulation et lavage à pH neutre, la suspension de concentration voisine de 15% peut être répartie en seringues et stérilisée , notamment par autoclave à 1200C ou par irradiation béta ou gamma de 5 à 25 ou 30kGray, par exemple sous forme congelée en présence de carboglace. Pour faciliter son injection à travers de fines aiguilles, un agent lubrifiant tel que l'acide hyaluronique ou la gélatine peut être nécessaire, tout en permettant la stérilisation finale. En variante, l'agent fluidifiant peut être conditionné dans une autre seringue séparée et peut être stérilisé indépendamment par les moyens connus, tels que l' autoclavage à 1200C. Le mélange avec la globine peut se faire ensuite à l'aide d'un kit stérile contenant les deux seringues de globine et d'agent fluidifiant. Ces deux seringues sont équipées d'un embout Luer femelle et peuvent être reliées grâce à un connecteur stérile possédant deux embouts Luer mâles. Leur mélange homogène se fait par poussée du contenu d'une seringue dans l'autre et réciproquement, en effectuant plusieurs aller-retours. Une dizaine d'aller- retours suffit en général à obtenir une suspension pâteuse et visqueuse homogène, prête à être injectée.
Exemple 11 : Préparation d'un film sec soluble, à partir de globine chimiquement modifiée, soluble à pH 7,2. Application à la protection des plaies et à la prévention d'adhérences post-opératoires. Le produit gel ou mousse, préparé selon l'exemple 9, en omettant l'addition de l'agent réticulant, peut être déposé sur une surface plane. Après séchage, on obtient un film solide dont l'épaisseur peut être réglée par la hauteur du dépôt et dont la souplesse peut être ajustée par addition d'un agent plastifiant tel que, par exemple, le glycérol ou le polyethylène-glycol . Ce film peut être utilisé dans la protection ou la cicatrisation des plaies internes ou externes, soit directement par adhésion spontanée, soit après fixation par un agent adhésif tel que l'amidon oxydé, soit par application d'un faisceau laser, si un colorant a été introduit dans le film. Dans une variante, le gel initial peut être coulé, en incorporant un treillis constitué de fils résorbables ou non résorbables. Dans ce cas, la membrane finale, obtenue après séchage, peut être suturée. Le film et la membrane possèdent des propriétés de prévention des adhérences chirurgicales .
Exemple 12: Préparation d'un film insoluble, à partir de globine chimiquement modifiée, soluble à pH 7,2, puis réticulée par un polyaldéhyde .
Application à la protection des plaies et à la prévention d'adhérences post-opératoires. Le produit gel ou mousse, préparé selon l'exemple 9 peut être déposé sur une surface plane, sur une certaine épaisseur, avant sa prise en masse. Lorsque la réticulation est terminée, on obtient un film solide dont l'épaisseur peut être réglée par déshydratation partielle ou totale. Ce film peut être utilisé comme dans l'exemple 11, dans la protection ou la cicatrisation des plaies internes ou externes. Il possède des propriétés de prévention des adhérences chirurgicales . Exemple 13 : Préparation de solides par moulage à partir des gels adhésifs réticulés obtenus selon l'exemple 9. Utilisation comme implants pour la délivrance retardée de médicaments dans l'organisme. Le gel ou la mousse adhésive préparés selon l'exemple 9 peuvent être moulés pour acquérir la forme et le volume souhaités pour l'implant. Un médicament peut être ajouté dans la masse pour permettre une délivrance progressive et retardée et obtenir un effet pharmacologique prolongé.
Exemple 14 : Applications médicales des implants de globine chimiquement modifiée et secondairement réticulés pour devenir insolubles . Les implants de globine chimiquement modifiée, solubles ou rendus insolubles par réticulation, par exemple ceux préparés selon l'un quelconque des exemples 9, 10, 12 et 13, peuvent être utilisés dans les applications suivantes non limitatives : -Cicatrisation, protection ou comblement de plaies cutanées externes ou chirurgicales internes . -Comblement des rides et défauts cutanés
-Comblement des tissus conjonctifs ou sphincters pour des applications en urologie : reflux vésico-urétéral de l'enfant, incontinence d'effort de la femme ; en O.R.L. : correction de volume des cordes vocales .
-Bouchon adhésif et hémostatique pour les plaies tissulaires ou les plaies artérielles percutanées. -Moyen de fixation de prothèses ou biomatériaux sur les tissus receveurs, notamment pour la fixation des dispositifs de renfort pariétal et viscéral. -Films, gels et membranes pour prévention des adhérences post opératoires, utilisés seuls ou en association avec d'autres dispositifs médicaux. Exemple 15: Applications médicales des implants de globine chimiquement modifiée et solubles à pH physiologique . Les implants de globine chimiquement modifiée, solubles, par exemple, ceux préparés, selon l'un quelconque des exemples 1 à 7, 9 et 11 peuvent être utilisés dans les applications suivantes non limitatives : Cicatrisation cutanée, par utilisation de la poudre neutre et soluble par pulvérisation ou application topique sur la plaie ouverte. Cette application peut être réalisée directement à partir de la poudre ou après dissolution dans un liquide physiologique ou une colle de fibrine. Cette application peut être en association avec d'autres produits de cicatrisation ou facteurs de croissance. Une formulation préférée est réalisée par un mélange de poudre de globine insoluble à pH physiologique, préparée selon l'enseignement du brevet FR 2854801 et de poudre soluble à pH physiologique de globine chimiquement modifiée, réalisée selon l'exemple 5 ci-dessus .
La proportion préférée calculée en poids sec est de 30 à 10% de poudre insoluble pour 70 à 90% de poudre soluble. Cette poudre s'imprègne progressivement de 1' exsudât naturel de la plaie, par pompage osmotique grâce à la fraction de poudre soluble qui stimule aussi la colonisation par les fibrocytes. La fraction de poudre insoluble reste dans la plaie et inhibe sa contraction. La poudre insoluble participe aussi à la stimulation du tissu de granulation, et de la néosynthèse de collagène Elle s'intègre au tissu de granulation avant de disparaître en une à deux semaines par biodégradation. Cicatrisation du cartilage ou de l'os, par utilisation de la poudre de globine chimiquement modifiée, soluble à pH physiologique, seule ou en association avec d'autres produits de cicatrisation osseuse: phosphate de calcium, carbonate de calcium, hydroxyapatite, facteurs de croissance de type BMP, associés ou non à de la poudre de globine insoluble préparée selon l'enseignement du brevet FR 2854801.
Association à des antibiotiques pour inhiber le développement bactérien, pendant la période de colonisation et dégradation de l'implant.
La présente invention a donc également comme objet l'utilisation d'un matériau susceptible d'être obtenu à partir de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique, pour la réalisation d'une préparation selon l'invention, adaptée à l'application correspondante .
D'une façon générale, quelle que soit la préparation selon l'invention, les méthodes sont à visée thérapeutique. Des méthodes de comblement de rides peuvent, suivant les personnes concernées, être à visée simplement cosmétique. Dans tous les cas, la méthode selon l'invention comporte l'étape d'implanter localement, dans ou sur le tissu du patient ou de la personne, qui en a besoin, une quantité thérapeutiquement ou cosmétiquement efficace, d'une préparation selon l'invention, notamment pour les applications précitées.
Comme cela a été décrit ci-dessus, notamment dans l'exemple 10, les préparations selon l'invention, quelle que soit leur forme, peuvent, de préférence, être stérilisées par irradiation beta ou gamma, de préférence entre 5 et 25 ou 30 kGray, par exemple sous forme congelée, notamment en présence de carboglace, de préférence dans leur conditionnement final. Il en est de même des préparations de globine insoluble au pH neutre décrites dans les demandes ou brevets FR 2 854 801 et US 6 949 652, qui sont incorporés ici par référence. Quand les préparations selon l'invention ou les demandes et brevets incorporés par référence comportent un mélange de globine et d'un ou plusieurs composants stérilisables à la chaleur ou autoclavage, on préfère irradier la globine et stériliser séparément ce ou ces composants avant de les mélanger de façon stérile, par exemple, en utilisant les seringues comme décrit dans l'exemple 10. Ainsi, par exemple, on peut réaliser une préparation stérile en kit contenant une seringue d'une pâte de globine insoluble à pH physiologique, stérilisée par irradiation, et une seringue d'agent lubrifiant, par exemple d'acide hyaluronique ou hyaluronate stérilisé par autoclavage, avec des moyens usuels pour mélanger stérilement les contenus des deux seringues .
Bibliographie
ANSON M. L. - MIRSKY A. E. (1930) Protein Coagulation and its reversai. The préparation of insoluble globin, soluble globin and heme. J. Gen. Physiol. 13, 469-476
AUTIO K - KIESVAARA M. - MALKKI Y. - KANKU S. (1984) Chemical and functional properties of blood globin prepared by a new method Journal of Food Science 49, 859-862
BERG J. W. - ORTMEYER D.W. - OTT D. L. - JACKSON R. L. (1953)
Comparison of Globin Insulin and NPH Insulin Diabètes, 2, 5, p.365-369
RABINOWITCH I.M. - FOWLER A. F. - BENSLEY E. H. - GORDON A. L. - MOUNTFORD M. (1947) Globin Insulin The Canadian Médical Association J., 56, 6, p.595-605
REINER L. (1939) Insulin préparation US Patent # 2161198
REINER L. - SEARLE D. S. - LANG E. H. (1939) Insulin préparations with prolongea activity I. Globin Insulin
Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 40, p.71 ROSSI-FANELLI A. - ANTONINI E. -CAPUTO A. (1958) Studies on the structure of haemoglobin I-Physicochemical properties of human globin Biochem. Biophys. Acta 30, 608-615
SCHULZ F. N. (1898)
Der Eiweisskôrper des hâmoglobins
Ztsch. F. physiol. chera. 24, 449-460
STRUMIA M. M. - SAMPLE A. B. - MAWR B. (1951) Modified globin
I-Method for préparation from human erythrocytes . J. Lab. and Clin.Med. 37, 959-968
STRUMIA M.M. - Mc GRAW J. J. - SAMPLE A. B. - MAWR B. (1952)
Modified globin
IV- Some of the physiological properties of modified human globin J. Lab. and Clin. Med. 40, 2, 211-222
TAYOT J. L. - VERON J. L. (1983) Brevet Institut Mérieux : FR 8311324
Process for preparing globin from haemoglobin and globin obtained by this process. US Patent 4543209 (1985)
TEALE F. W. J. (1959)
Cleavage of the haem-protein link by acid methyl-ethyl keton
Biochem. Biophys. Acta 35, 543 VARS H. M. - BOXER G. E. - MAWR B. (1952)
Modified Globin
II- Chemical changes in human globin by alkaline modification J. Lab. and Clin. Med. 39, 5, 743-751
VOLCKMANN H. (1988)
Essais de développement d'un substitut plasmatique d'origine placentaire. Thèse d'ingénieur CNAM Lyon.

Claims

REVENDICATIONS
1- Préparation implantable , l'implantation par voie intraveineuse ou par voie intraartérielle étant exclue, comprenant un matériau susceptible d'être obtenu à partir de globine modifiée, notamment chimiquement pour être, au moins partiellement, soluble à pH physiologique, ledit matériau étant biocompatible, et biodégradable dans l'organisme, ladite préparation se présentant sous forme solide, pâteuse, de gel, de suspension ou de solution, étant entendu que lorsque la préparation est sous forme de solution injectable et que ladite globine modifiée, notamment chimiquement pour être, au moins partiellement, soluble à pH physiologique, en forme le constituant actif principal, la concentration en ladite globine modifiée est au moins de 10%.
2- Préparation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la globine est une globine d' origine humaine . 3- Préparation selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que la globine a été modifiée chimiquement par traitement alcalin, notamment à la soude, et/ou par acétylation ou succinylation.
4- Préparation selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que la globine a été modifiée par estérification de ses fonctions carboxyliques, notamment par méthylation ou éthylation.
5- Préparation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que ledit matériau est sensiblement soluble à pH physiologique.
6- Préparation selon la revendication 5, caractérisée en ce que ledit matériau est ou comporte ladite globine modifiée pour être soluble à pH physiologique.
7- Préparation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit matériau est sensiblement insoluble à pH physiologique.
8- Préparation selon la revendication 7, caractérisée en ce que ledit matériau insoluble a été obtenu par réticulation de ladite globine soluble à pH physiologique .
9- Préparation selon la revendication 8, caractérisée en ce que cette réticulation est effectuée par un agent de réticulation approprié au type de modification chimique de la globine, notamment un diépoxide, notamment le 1-4 butane-diol-diglycidyl- ether, notamment pour l'acetyl ou la succinylglobine, ou le glutaraldéhyde , ou un polysaccharide oxydé sous forme de polyaldéhyde macromoléculaire, notamment pour les esters de globine ou les dérivés obtenus par traitement alcalin.
10- Préparation selon l'une des revendications 1 à
9, caractérisée en ce qu'elle comporte, à la fois, un desdits matériaux soluble à pH physiologique et un desdits matériaux insoluble à pH physiologique.
11- Préparation selon l'une des revendications 1 à
10, caractérisée en ce qu'elle comprend également un autre matériau, notamment de comblement, biocompatible, et stérile, insoluble à pH physiologique.
12- Préparation selon la revendication 11, caractérisée en ce que ledit autre matériau comprend de la globine biodégradable, stérile, et insoluble à pH physiologique.
13- préparation selon l'une des revendications 11 et 12, caractérisée en ce que ledit autre matériau est choisi dans le groupe constitué par les celluloses oxydées, les collagènes et le chitosan. 14- Préparation selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de suspension, pâte, ou gel injectable.
15- Préparation selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme solide.
16- Préparation selon la revendication 15, caractérisée en ce qu'elle se présente sous l'une des formes suivantes :
- poudre ou granules, - film, membrane ou treillis, éponge , implant solide préformé.
17- Préparation selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme d'une solution injectable,
18- Préparation selon la revendication 17, caractérisée en ce qu'elle comporte un ester de globine, notamment ethyl-globine, sous forme de solution concentrée à pH neutre, la concentration en ledit ester de globine étant au moins de 10%.
19- Préparation selon la revendication 16, caractérisée en ce qu'elle comprend une poudre de globine modifiée pour être soluble, au moins partiellement, à pH physiologique ,
20- Préparation selon la revendication 19, caractérisée en ce qu'elle comporte, de plus, un agent réticulant, leur mélange formant une colle adhésive sur les tissus organiques.
21- Préparation selon la revendication 20, caractérisée en ce que ledit agent réticulant est lui- même sous forme de poudre, l'ensemble pouvant former une colle en présence d'un milieu liquide, notamment liquide physiologique.
22- Préparation selon l'une des revendications 19 à 21, comprenant ladite globine modifiée pour être soluble à pH physiologique, caractérisée en ce qu'elle comprend également un matériau solide insoluble à pH physiologique obtenu à partir de ladite globine.
23- Préparation selon l'une des revendications 19 à 22, comprenant ladite globine modifiée pour être soluble à pH physiologique, caractérisée en ce qu'elle comprend également un autre matériau solide, à savoir de la globine biodégradable, stérile et insoluble à pH physiologique .
24- Préparation selon l'une des revendications 22 et 23, caractérisée en ce que ledit autre matériau est sous forme de poudre .
25- Préparation selon l'une des revendications 19 ou 20 à 24, comprenant ladite poudre de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique, caractérisée en ce qu'elle est formulée sous forme de spray ou aérosol sec.
26- Préparation selon l'une des revendications 19 ou 20 à 24, caractérisée en ce que ladite globine modifiée est associée à un pansement solide.
27- Préparation selon la revendication 16, caractérisée en ce qu'elle comporte de la globine modifiée pour être soluble à pH physiologique,
28- Préparation selon la revendication 27, caractérisée en ce qu'elle est réalisée sous forme de tissu, de tricot, de treillis, d'épongé, ou de film implantables, optionnellement renforcés par un matériau implantable suturable .
29- Préparation selon la revendication 27 ou 28, caractérisée en ce qu'elle comprend un autre matériau solide biocompatible, notamment de la cellulose oxydée, du collagène ou du chitosan.
30- Préparation selon l'une des revendications 27 à 29 caractérisée en ce qu'elle comprend également un matériau solide insoluble à pH physiologique obtenu à partir de ladite globine. 31- Préparation selon l'une des revendications 27 à 29, caractérisée en ce qu'elle comprend également un autre matériau solide, à savoir de la globine biodégradable, stérile et insoluble à pH physiologique. 32- Préparation selon la revendication 16, caractérisée en ce que ledit matériau est insoluble à pH physiologique, ladite préparation étant formulée sous forme de poudre. 33- Préparation selon la revendication 32 caractérisée en ce qu'elle est réalisée sous forme de spray ou aérosol sec .
34- Préparation selon l'une des revendications 6 et 7, caractérisée en ce qu'elle est réalisée sous forme de film, optionnellement renforcé par un matériau suturable .
35- Préparation selon l'une des revendications 7 et 8, caractérisée en ce qu'elle est réalisée sous forme d'implant solide obtenu par réticulation d'un gel ou d'une mousse de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique.
36- Préparation selon l'une des revendications 7 et 8, caractérisée en ce qu'elle comporte un agent fluidifiant et se présente sous forme de suspension, pâte ou gel. 37- Préparation selon la revendication 36, caractérisée en ce que ledit, agent fluidifiant comprend de l'acide hyaluronique, de la carboxy mêthylcellulose ou de la gélatine.
38- Préparation selon la revendication 36, caractérisée en ce que ledit agent fluidifiant comprend de la globine modifiée pour être soluble à pH physiologique .
39- Préparation selon l'une des revendications 5 et 6, caractérisée en ce que ledit matériau est en solution sous forme de spray ou aérosol liquide.
40- Préparation selon l'une des revendications 5 et 6, caractérisée en ce que ledit matériau est en solution associée à un pansement.
41- Préparation selon l'une des revendications 5 et 6, caractérisée en ce que ledit matériau est en solution et comporte , de plus, un agent réticulant, pour former une colle adhésive sur les tissus organiques. 42- Préparation selon l'une des revendications' 5 et 6, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de mousse et comporte un agent réticulant pour former une colle adhésive sur les tissus organiques.
43- Préparation selon l'une des revendications 20 41 et 42, caractérisée en ce qu'elle comprend un agent adhésif, notamment l'acide hyaluronique ou la carboxy méthylcellulose .
44- Préparation selon l'une des revendications 5 et 6, caractérisée en ce qu'elle comprend, de plus un matériau solide et se présente sous forme d'épongé, de treillis, tissu, tricot, ou film, optionnellement renforcés par un matériau suturable .
45- Préparation selon la revendication 44,
• caractérisée en ce que ledit autre matériau est choisi dans le groupe formé par les celluloses oxydées , les collagènes et le chitosan.
46- Préparation selon la revendication 44, caractérisée en ce que ledit autre matériau est obtenu à partir de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique et rendu insoluble à pH physiologique.
47- Préparation selon la revendication 44, caractérisée en ce que ledit autre matériau comprend de la globine biodégradable, stérile, et insoluble à pH physiologique .
48- Préparation selon l'une des revendications 20, 21, 41 et 42, pour former une colle biologique, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme d'un kit comprenant, dans des réservoirs distincts, le matériau soluble à pH physiologique et l'agent réticulant .
49- Préparation selon l'une des revendications caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de kit comprenant, dans des réservoirs distincts, ledit matériau susceptible d'être obtenu à partir de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique et un autre matériau.
50- Préparation selon l'une des revendications 1 à 49, caractérisée en ce qu'elle est stérile.
51- Préparation selon la revendication 50, caractérisée en ce qu'au moins le matériau susceptible d' être obtenu à partir de globine modifiée pour être soluble à pH physiologique a été stérilisé par irradiation beta ou gamma, notamment entre 5 et 25 kGray, optionnellement sous forme congelée, optionnellement en présence de carboglace.
52- Préparation selon la revendication 51 caractérisée en ce qu'elle comporte au moins un autre matériau qui a été stérilisé à la chaleur.
53- Préparation selon l'une des revendications 1 à 52, caractérisée en ce qu'elle comporte, en outre, un matériau de colle à base de fibrinogène plasmatique.
54- Utilisation d'un matériau susceptible d'être obtenu à partir de globine modifiée, notamment chimiquement, pour être soluble à pH physiologique, pour la réalisation d'une préparation selon l'une des revendications 1 à 53 utilisable, notamment, pour la cicatrisation, protection ou comblement de plaies cutanées externes ou chirurgicales internes, le comblement des rides et défauts cutanés, le comblement des tissus conjonctifs ou sphincters pour des applications en urologie : reflux vésico-urétéral de l'enfant, incontinence d'effort de la femme ; en O.R.L. : correction de volume des cordes vocales, la formation de bouchon adhésif et hémostatique pour les plaies tissulaires ou les plaies artérielles percutanées, ou comme moyen de fixation de prothèses ou biomatériaux sur les tissus receveurs, notamment pour la fixation des dispositifs de renfort pariétal et viscéral, la réalisation de films, gels et membranes pour prévention des adhérences post opératoires, utilisés seuls ou en association avec d'autres dispositifs médicaux, la cicatrisation du cartilage ou de l'os, ou l'association à des antibiotiques pour inhiber le développement bactérien.
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DK07730855.9T DK2046407T3 (en) 2006-08-02 2007-01-24 Implantable preparation that can be used especially for tissue supplementation and wound healing
CNA2007800364468A CN101522228A (zh) 2006-08-02 2007-01-24 尤其可用于组织填补和瘢痕形成的可植入制剂
EP07730855.9A EP2046407B1 (fr) 2006-08-02 2007-01-24 Preparation implantable, utilisable notamment pour le complement tissulaire et la cicatrisation
CA002659612A CA2659612A1 (fr) 2006-08-02 2007-01-24 Preparation implantable, utilisable notamment pour le complement tissulaire et la cicatrisation
KR1020097004235A KR20090038025A (ko) 2006-08-02 2007-01-24 조직 보강 및 반흔 형성에 특히 유용한 이식용 제제
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US (1) US7709017B2 (fr)
FR (1) FR2889449B1 (fr)
WO (1) WO2007017580A2 (fr)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2920666A1 (fr) * 2007-09-11 2009-03-13 Khorionyx Soc Responsabilite L Preparations implantables contenant de la globine, procede pour leur fabrication et utilisations
EP2452698A2 (fr) 2010-11-12 2012-05-16 Khorionyx Nouveau procédé pour le traitement des plaies de la plaie et préparation pour son implémentation

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090038025A (ko) 2006-08-02 2009-04-17 코리오닉스 조직 보강 및 반흔 형성에 특히 유용한 이식용 제제
US8932619B2 (en) * 2007-06-27 2015-01-13 Sofradim Production Dural repair material
US20090004455A1 (en) * 2007-06-27 2009-01-01 Philippe Gravagna Reinforced composite implant
AU2008282922B2 (en) * 2007-07-27 2014-01-16 Humacyte, Inc. Compositions comprising human collagen and human elastin and methods for soft tissue augmentation
US20090068250A1 (en) 2007-09-07 2009-03-12 Philippe Gravagna Bioresorbable and biocompatible compounds for surgical use
US9308068B2 (en) * 2007-12-03 2016-04-12 Sofradim Production Implant for parastomal hernia
DE102008008522A1 (de) 2008-02-11 2009-08-13 Magforce Nanotechnologies Ag Implantierbare Nanopartikel-enthaltende Produkte
US20090263456A1 (en) * 2008-04-18 2009-10-22 Warsaw Orthopedic, Inc. Methods and Compositions for Reducing Preventing and Treating Adhesives
EP2313104B2 (fr) * 2008-04-24 2020-08-26 Medtronic, Inc Gel de chitosane thiolé
US8802652B2 (en) 2008-04-24 2014-08-12 Medtronic, Inc. Rehydratable polysaccharide particles and sponge
US8530632B2 (en) 2008-04-24 2013-09-10 Medtronic Xomed, Inc. Chitosan-containing protective composition
AU2009240512B2 (en) 2008-04-24 2014-07-10 Medtronic, Inc. Protective gel based on chitosan and oxidized polysaccharide
AU2009240509B2 (en) 2008-04-24 2014-08-21 Medtronic, Inc. Rehydratable thiolated polysaccharide particles and sponge
US9242026B2 (en) * 2008-06-27 2016-01-26 Sofradim Production Biosynthetic implant for soft tissue repair
US20100104608A1 (en) * 2008-09-26 2010-04-29 Tyco Healthcare Group Lp Reactive surgical implant
US8241654B2 (en) * 2008-09-26 2012-08-14 Tyco Healthcare Group Lp Reactive surgical implant
US20100111919A1 (en) * 2008-10-31 2010-05-06 Tyco Healthcare Group Lp Delayed gelation compositions and methods of use
CA2762212C (fr) * 2009-05-20 2015-12-29 Humacyte, Inc. Elastine pour l'augmentation des tissus mous
FR2949688B1 (fr) 2009-09-04 2012-08-24 Sofradim Production Tissu avec picots revetu d'une couche microporeuse bioresorbable
CA3111806A1 (fr) 2010-06-17 2011-12-22 New York University Utilisations therapeutiques et cosmetiques, et applications de calreticuline
FR2972626B1 (fr) 2011-03-16 2014-04-11 Sofradim Production Prothese comprenant un tricot tridimensionnel et ajoure
FR2977789B1 (fr) 2011-07-13 2013-07-19 Sofradim Production Prothese pour hernie ombilicale
FR2977790B1 (fr) 2011-07-13 2013-07-19 Sofradim Production Prothese pour hernie ombilicale
CA2849052C (fr) 2011-09-30 2019-11-05 Sofradim Production Raidissement reversible d'une maille de poids leger
US9867909B2 (en) 2011-09-30 2018-01-16 Sofradim Production Multilayer implants for delivery of therapeutic agents
FR2985170B1 (fr) 2011-12-29 2014-01-24 Sofradim Production Prothese pour hernie inguinale
FR2985271B1 (fr) 2011-12-29 2014-01-24 Sofradim Production Tricot a picots
FR2994185B1 (fr) 2012-08-02 2015-07-31 Sofradim Production Procede de preparation d’une couche poreuse a base de chitosane
FR2995779B1 (fr) 2012-09-25 2015-09-25 Sofradim Production Prothese comprenant un treillis et un moyen de consolidation
FR2995788B1 (fr) 2012-09-25 2014-09-26 Sofradim Production Patch hemostatique et procede de preparation
FR2995778B1 (fr) 2012-09-25 2015-06-26 Sofradim Production Prothese de renfort de la paroi abdominale et procede de fabrication
CA2880380C (fr) 2012-09-28 2020-09-15 Sofradim Production Emballage pour dispositif de reparation des hernies
DE102013203997A1 (de) * 2013-03-08 2014-09-11 Aesculap Ag Medizinisches Produkt
EP2781224A1 (fr) 2013-03-18 2014-09-24 Khorionyx Préparations implantables comprenant de la globine insoluble dans à pH physiologique et du sérum pour la régénération de tissus et le traitement de plaies.
FR3006581B1 (fr) 2013-06-07 2016-07-22 Sofradim Production Prothese a base d’un textile pour voie laparoscopique
FR3006578B1 (fr) 2013-06-07 2015-05-29 Sofradim Production Prothese a base d’un textile pour voie laparoscopique
CN103705985B (zh) * 2014-01-08 2016-01-20 深圳市博立生物材料有限公司 一种鼻用高分子凝胶填塞材料及其制备方法
EP3000489B1 (fr) 2014-09-24 2017-04-05 Sofradim Production Procédé de préparation d'un film barrière anti-adhésion
EP3000432B1 (fr) 2014-09-29 2022-05-04 Sofradim Production Prothèse à base textile pour le traitement d'une hernie inguinale
EP3000433B1 (fr) 2014-09-29 2022-09-21 Sofradim Production Dispositif pour introduire une prothèse pour le traitement de la hernie dans une incision et prothèse textile flexible
EP3029189B1 (fr) 2014-12-05 2021-08-11 Sofradim Production Tricot poreux prothétique, procédé pour son obtention et prothèse à hernie
EP3059255B1 (fr) 2015-02-17 2020-05-13 Sofradim Production Méthode pour préparer une matrice de chitosane comprenant un élément de renfort fibreux
EP3085337B1 (fr) 2015-04-24 2022-09-14 Sofradim Production Prothèse pour supporter une structure mammaire
ES2676072T3 (es) 2015-06-19 2018-07-16 Sofradim Production Prótesis sintética que comprende un tejido de punto y una película no porosa y método para formarla
EP3195830B1 (fr) 2016-01-25 2020-11-18 Sofradim Production Prothèse de réparation de hernie
EP3312325B1 (fr) 2016-10-21 2021-09-22 Sofradim Production Méthode pour la fabrication un treillis avec suture crantée attachée et treillis ainsi obtenu
EP3398554A1 (fr) 2017-05-02 2018-11-07 Sofradim Production Prothèse pour réparation de hernie inguinale
EP3653171B1 (fr) 2018-11-16 2024-08-21 Sofradim Production Implants conçus pour la réparation de tissus mous
US12064330B2 (en) 2020-04-28 2024-08-20 Covidien Lp Implantable prothesis for minimally invasive hernia repair

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2460550A (en) * 1945-08-10 1949-02-01 John S Sharpe Res Foundation O Modified globin and method for its preparation
US2597432A (en) * 1951-01-12 1952-05-20 Cutter Lab Acetyl globin and process of preparation
JPS62195400A (ja) * 1986-02-24 1987-08-28 Toyo Soda Mfg Co Ltd 改質グロビン蛋白の製造法
FR2854801A1 (fr) * 2003-05-12 2004-11-19 Khorionyx Implant injectable de globine insoluble
US20040248774A1 (en) * 2003-05-12 2004-12-09 Jean-Louis Tayot Injectable implant of insoluble globin

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2912359A (en) * 1955-05-04 1959-11-10 Developments Inc Wound healing agent obtained from blood and method of preparation
IT1186787B (it) * 1985-11-06 1987-12-16 Mediolanum Farmaceutici Srl Ferro-derivati della globina e dell'acetilglobina dotati di elevata biodisponibilita',processo di preparazione e composizioni farmaceutiche
FR2635114A1 (fr) * 1988-08-02 1990-02-09 Cibevial Sa Procede de traitement de solutions proteiques contenant des pigments tels que groupements heminiques ou chlorophylles en vue de leur decoloration et produits obtenus
US5665383A (en) * 1993-02-22 1997-09-09 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Methods for the preparation of immunostimulating agents for in vivo delivery
EP1022031B1 (fr) * 1999-01-21 2005-03-23 Nipro Corporation Membrane suturable pour la prévention d'adhérences
US20020122816A1 (en) * 2000-12-18 2002-09-05 Hsing-Wen Sung Use of 3-hydroxypropinoaldehyde in crosslinking and sterilizing a biomolecule, and a biocompatible implant, substitute or wound dressing containing the crosslinked biomolecule
JP3947391B2 (ja) * 2001-11-28 2007-07-18 独立行政法人 日本原子力研究開発機構 橋かけ構造を有するキチン誘導体及び／又はキトサン誘導体の製造方法
US20040265371A1 (en) * 2003-06-25 2004-12-30 Looney Dwayne Lee Hemostatic devices and methods of making same

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2460550A (en) * 1945-08-10 1949-02-01 John S Sharpe Res Foundation O Modified globin and method for its preparation
US2597432A (en) * 1951-01-12 1952-05-20 Cutter Lab Acetyl globin and process of preparation
JPS62195400A (ja) * 1986-02-24 1987-08-28 Toyo Soda Mfg Co Ltd 改質グロビン蛋白の製造法
FR2854801A1 (fr) * 2003-05-12 2004-11-19 Khorionyx Implant injectable de globine insoluble
US20040248774A1 (en) * 2003-05-12 2004-12-09 Jean-Louis Tayot Injectable implant of insoluble globin

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2920666A1 (fr) * 2007-09-11 2009-03-13 Khorionyx Soc Responsabilite L Preparations implantables contenant de la globine, procede pour leur fabrication et utilisations
WO2009044059A2 (fr) * 2007-09-11 2009-04-09 Khorionyx Préparations implantables contenant de la globine, procédé pour leur fabrication et utilisations
WO2009044059A3 (fr) * 2007-09-11 2009-06-04 Khorionyx Préparations implantables contenant de la globine, procédé pour leur fabrication et utilisations
EP2452698A2 (fr) 2010-11-12 2012-05-16 Khorionyx Nouveau procédé pour le traitement des plaies de la plaie et préparation pour son implémentation

Also Published As

Publication number Publication date
US7709017B2 (en) 2010-05-04
US20070031474A1 (en) 2007-02-08
FR2889449A1 (fr) 2007-02-09
WO2007017580A3 (fr) 2007-06-14
FR2889449B1 (fr) 2011-06-10

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