WO2006056312A1 - Stabile kristallmodifikationen von dotap chlorid - Google Patents

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WO2006056312A1
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Michael Platscher
Alfred Hedinger
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Definitions

  • the present invention relates to enantiomerically pure DOTAP chloride and crystal modifications of racemic and enantiomerically pure DOTAP chloride, processes for their preparation and their Verwen ⁇ tion for the preparation of pharmaceutical compositions.
  • N, N, N-trimethyl-2,3-bis [[(9Z) -1-oxo-9-octadecenyl] oxy] -1-propanaminium chloride also as (Z 1 Z) - N 1 N, N-tri methyl-2,3-bis [(1-oxo-9-octadecenyl) oxy] -1-propan ⁇ aminium chloride or 1 ⁇ -Dioleoyloxy-S-tri-methylammoniumpropanchlorid called, and its hydrates meant.
  • Liposomes are artificial multi-layered vesicles (spherically closed membranes) of ambiphilic substances, usually natural lipids, in which both hydrophilic substances are encapsulated in the aqueous interior, and lipophilic substances can be incorporated into the interior of the lipid membrane.
  • Liposomes are usually applied topically.
  • liposomes are increasingly gaining in importance because of the parenteral administration of Liposomes a more specific organ distribution can be achieved than when the active ingredients are applied in a freely dissolved form.
  • nanoparticles particles of approximately the same size as liposomes, but in their interior have no water phase but an oil phase. They are particularly suitable for the encapsulation of lipophilic substances.
  • Microemulsions are colloidally disperse, single-phase systems of aqueous, lipid-like and surfactant components. They have a particle size of 1-500 nm and behave similar to liquids.
  • DOTAP chloride belongs to the class of cationic lipids. These, unlike the naturally occurring phospholipids, have no zwitterionic character. Cationic lipid liposomes, alone or in combination with phospholipids or other lipid-like compounds, have a positively charged surface. This results in a high affinity for such cells, which have a negatively charged surface to the outside, for example endothelial cells.
  • DOTAP chloride also very interesting for cancer therapy. These properties make it possible to apply conventional cytostatic agents encapsulated in cationic DOTAP liposomes.
  • DOTAP chloride and other DOTAP salts such as the acetate, bromide, dihydrogen phosphate, hydrogen sulfate, iodide, mesylate, methyl sulfate, trifluoroacetate, sulfate or disulfate and triflate are well known in the literature.
  • DOTAP dihydrogen phosphate and DOTAP mesylate are mentioned in literature only as a racemate. All the other abovementioned salts are mentioned in each case as racemate and as 2S enantiomer, and the chloride and methyl sulfate are also mentioned in addition to the 2R enantiomers.
  • DOTAP salts with physiologically acceptable anions such as the corresponding chloride or the acetate, are to be preferred, especially in medical use on humans, and in particular for parenteral administration.
  • DOTAP chloride and other DOTAP salts are extremely unstable and therefore intrinsically difficult to prepare in acceptable purity such that they are suitable for use in the preparation of drug formulation.
  • lipids bearing oleic acid residues such as the natural phospholipids DOPC and DOPE
  • all DOTAP salts are very sensitive to oxidation.
  • the oxidation products of unsaturated fatty acid derivatives generally have a high toxicity.
  • DOTAP Acetate is a high-boiling oil and is therefore technically very difficult to obtain in sufficient quality.
  • DOTAP chloride is commercially available only as a chloroform solution or as an amorphous solid.
  • amorphous DOTAP chloride is also extremely hygroscopic and dissolves into a greasy film within a very short time under normal atmospheric humidity. This hampers the handling of this connection enormously.
  • DOTAP chloride For amorphous DOTAP chloride, the manufacturer generally recommends storage under an inert atmosphere at -2O 0 C and only guarantees a shelf life of approx. 6 months.
  • DOTAP chloride from DOTAP bromide by ion exchange in the solvent system chloroform / methanol / aqueous HCl and subsequent purification by means of chromatography.
  • DOTAP bromide is previously recovered in situ from 1-bromo-2,3-dioleoyl-oxypropane.
  • DOTAP iodide is previously obtained by methylation of the corresponding dimethylamino compound by means of methyl iodide.
  • the object of the present invention is therefore to provide DOTAP chloride salts and hydrates in high purity and with sufficient chemical and physical stability. Another object of the present invention is to provide these salts with high storage stability so that they can be used for the preparation of pharmaceutical formulations. Furthermore, there is a strong need for a reproducible, industrially feasible process for producing stable forms of DOTAP chloride salts and hydrates.
  • Enantiomerically pure DOTAP chloride can be obtained from enantiomerically pure starting materials analogously to the process described for the racemate, ie via (R or S) -1-chloro-2,3-dioleoyloxypropane, via (R or S) -1-LG-2, 3-dioleoyloxypropane and ion exchange
  • LG leaving group
  • R or S -1-dimethylamino-2,3-dioleoyloxypropane
  • Another method of preparation is the racemate resolution of racemic DOTAP chloride.
  • the stable crystal modifications may be in crystalline and partially crystalline form. They have an unprecedented purity of> 98%, together with an unprecedented stability of> 98% with respect to the initial value after 12 months storage under exclusion of air at 25 ° C and 60% relative humidity. (see Table 1).
  • the DOTAP chloride crystal modifications have a content of less than 1 equivalent of water or crystal solvent per 1 equivalent of DOTAP chloride.
  • the racemic DOTAP chloride crystal modifications are present, for example, in three different crystal modifications (type I, type II, and type III) and show medium-sharp bands in powder X-ray diffraction measurements (see FIG. 1 to FIG. 3 and table 2). Selected 2 theta values for the different crystal modifications are 12.6, 19.5, 20.2, 21.5, and 25.2 (Type I); or 3.3, 4.9, 19.3, 20.0 and 23.5 (Type II); or 2.8, 5.8, 20.0, 21.2 and 25.1 (type IM).
  • Enantiomerically pure DOTAP chlorides are also obtained in crystalline form. Selected 2 theta values for the crystal modification found are 12.8, 19.4, 19.8, 20.2, and 21.5 (type IV, see FIG. 4).
  • the enantiomers are optically active.
  • (2S) -DOTAP chloride has ei ⁇ nen optical rotation of -2.12 ° (2R) -DOTAP chloride of + 2.12 ° ([ ⁇ ] D at 20 0 C, 1% solution in dichloromethane).
  • Another object of the invention is a process for the preparation of DOTAP chloride crystal modifications, which is gekenn ⁇ characterized in that DOTAP chloride crystallized from an aprotic medium.
  • aprotic medium for this purpose, aromatic solvents or mixtures thereof can be used.
  • the aprotic medium may also to a small extent protic Lö ⁇ sungsstoff, such as. As water, included. In exceptional cases, 25% by weight of protic solvents may also be present under suitable conditions.
  • the crystallization of DOTAP chlorides can be carried out directly from the reaction solution without prior purification. Eben ⁇ so crystalline DOTAP chloride can be obtained by recrystallization of amorphous, semi-crystalline or crystalline material.
  • aprotic solvents are especially • j Q ethers, such as.
  • tetrahydrofuran methyltetrahydrofuran, dioxane,
  • Methyl tert-butyl ether ketones such as. Acetone and 2-butanone, methyl isobutyl ketone,
  • Methyl isopropyl ketone "15 nitriles, such as. For example, acetonitrile and
  • Esters such as. Ethyl formate, methyl acetate, ethyl acetate, propyl acetate,
  • solvents can each be used neat or in admixture, i. H. that both the different aprotic solvents of a group can be used in a mixture, and aprotic solvent types can be used together in a mixture.
  • protic solvent additives can be present in the aprotic solvent or solvent mixture used.
  • Such protic solvent additives may typically consist of the following solvents:
  • Alcohols such. Methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, 2-butanol, tert-butanol,
  • the protic solvent additives may again be additives of the pure solvents or of mixtures of these protic solvents.
  • the various DOTAP chloride crystal modifications can be converted into each other.
  • the transformations can be effected by temperature
  • treatments of the isolated crystal modifications can be achieved at elevated temperature or by prolonged stirring of their suspensions under crystallization conditions.
  • the invention also relates to the use of crystalline DOTAP chlorides for the preparation of pharmaceutical formulations, as the crystalline
  • DOTAP chlorides have excellent stability under the given conditions in solid form and have a constant and very good quality over practically unlimited time.
  • enantiomerically pure DOTAP chlorides have different physical properties than the racemate, in particular in combination with chiral compounds, such as the phospholipids or cholesterol.
  • the novel properties of the enantiomerically pure DOTAP chlorides found can be used alone or in conjunction with suitable phospholipids, cholesterol and de ⁇ ren derivatives provide new liposomal qualities available, which are on the one hand denser packs of lipids compared to conventional forms and on the other hand constructed more uniform.
  • liposomes prepared from the pure enantiomers show a 5 ° C higher phase transition temperature compared to the liposomes of racemic DOTAP chloride. This is a measure of the packing density. Therefore, liposomes of DOTAP chloride enantiomers also have a reduced leakage of the compound entrapped in them.
  • liposomes loaded with pharmaceutically active compounds release active substances in a delayed manner in interaction with the metabolism in the human or animal body.
  • DOTAP chloride enantiomers especially in combination with chiral lipids such as phospholipids, cholesterol and their derivatives, also show different transfection properties with respect to cell line specificities.
  • compositions resulting from the use of the claimed DOTAP chloride forms are therefore also the pharmaceutical compositions resulting from the use of the claimed DOTAP chloride forms.
  • Such pharmaceutical compositions may contain the crystal modifications of (2R, S) -, (2S) - and (2R) -DOTAP chloride together with other pharmaceutical active ingredients and known excipients commonly used in pharmaceutical preparation as well as one or more solvents ⁇ teln.
  • compositions may be, for example are present as liposomes, lipoplexes, microemulsions and nanoparticles and include, for example, an active ingredient from the group of peptides, nucleotides, vaccines or cytostatics.
  • the substances are, along with comparative samples at 25 0 C and 60% humidity relati ⁇ ver stored with exclusion of air. At periodic intervals, the remaining content of DOTAP chloride is measured and given in comparison to the starting value.
  • DOTAP chloride The purity and content of DOTAP chloride are determined by HPLC. The following values are found for type I:
  • the stability determination can be repeated at any time, the values given in Table 1 are reproducible.
  • Crystalline DOTAP chlorides give relatively well resolved spectra with moderate bands for lipids. The spectra indicate high crystalline proportions. Under the polarizing microscope no amor ⁇ phen shares are visible.
  • Fig. 1 Type I
  • Fig. 2 Type II
  • Fig. 3 Type III
  • Fig. 4 Type IV
  • a spectrum of a commercially available amorphous sample is shown in Fig. 5 (amorphous).
  • Table 2 lists selected 2 theta values for the different crystal modifications of the racemic and enantiomerically pure DOTAP chlorides:
  • DSC Differential scanning caliometry
  • Dispersions are then placed in lockable aluminum crucibles and with a calorimeter 204 Phoenix (Netzsch, Selb, Germany) measured. In each case three successive heating / cooling runs of - 5O 0 C to + 2O 0 C are carried out at 1 ° C / min.
  • phase transition temperatures below 0 C are found.
  • For these refrigeration cycles is in each case at -23 ° C to -24 0 C.
  • differences between racemic and e- nantiomerenreinem DOTAP chloride can be seen in each case in the heat cycling.
  • (2R) -DOTAP chloride and (2S) -DOTAP both endo- show a thermal phase transition at -12.5 0 C, while for the racemate is the phase transition at -17.5 0 C (see Fig. 6).
  • Racemic and enantiomerically pure DOTAP chloride and racemic DOTAP methyl sulfate are each dispersed with the same amount of cholesterol in the transfection medium and ultrasonicated.
  • the liposomes and GFP plasmid solution are mixed and incubated for 15 minutes,
  • Amounts per 6well 2 ⁇ g plasmid / 8 ⁇ g lipid.

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Abstract

Die Erfindung betrifft enantiomerenreines DOTAP Chlorid sowie stabile Kristallmodifikationen von (2R,S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid, ein Verfahren zur Herstellung dieser Modifikationen sowie deren Verwen­ dung als Bestandteil zur Herstellung von Arzneimitteln.

Description

Stabile Kristallmodifikationen von DOTAP Chlorid
Die vorliegende Erfindung betrifft enantiomerenreines DOTAP Chlorid sowie Kristallmodifikationen von racemischem und enantiomerenreinem DOTAP Chlorid, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwen¬ dung zur Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen.
Mit DOTAP Chlorid sind oben und im Folgenden N,N,N-trimethyl-2,3- bis[[(9Z)-1 -oxo-9-octadecenyl]oxy]-1 -propanaminiumchlorid, auch als (Z1Z)-N1N, N-trιmethyl-2,3-bis[(1-oxo-9-octadecenyl)oxy]-1 -propan¬ aminiumchlorid oder 1 ^-Dioleoyloxy-S-tri-methylammoniumpropanchlorid bezeichnet, und dessen Hydrate gemeint.
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C42H80CINO4, Mw 698.54
CAS Nummern: 132172-61-3 und 477274-39-8 (Racemat), 197974-73-58 (Racemat, Monohydrat) 428506-51-8 (2S-Form), 328250-28-8 (2R-Form)
Liposomen sind künstliche mehrschichtige Vesikel (kugelig in sich ge¬ schlossene Membranen) aus ambiphilen Substanzen, meist natürlichen Lipiden, in die sowohl hydrophile Substanzen in den wässrigen Innen¬ raum verkapselt, als auch lipophile Substanzen in den Innenbereich der Lipidmembran inkorporiert werden können.
Sie werden vor allem in der Kosmetik und in der Medizin, speziell in der
Dermatologie eingesetzt. Dabei werden vor allem Vitamine, Coenzyme, Haut- und Sonnenschutzmittel eingebettet. Liposomen werden in der Regel topisch angewendet.
In der pharmazeutischen Technologie gewinnen Liposomen aber zu¬ nehmend weitere Bedeutung, da durch die parenterale Applikation von Liposomen eine spezifischere Organverteilung erzielt werden kann, als wenn die Wirkstoffe in frei gelöster Form angewendet werden.
Wenn DNA-, RNA- oder Proteine eingeschlossen werden, erhält man Li- poplexe.
Durch Zusatz von Ölen und Einsatz von Hochdruckhomogenisatoren kann man aus Liposomen die Bildung so genannter Nanopartikel (Nano- parts) erzwingen. Dabei handelt es sich um Partikel etwa gleicher Grö¬ ßenordnung wie Liposomen, die aber in ihrem Inneren keine Wasser- phase, sondern ein Ölphase besitzen. Sie eignen sich insbesondere für die Verkapselung von lipophilen Substanzen.
Mikroemulsionen sind kolloiddisperse, einphasige Systeme aus wässri- gen, lipidartigen und tensidischen Komponenten. Sie weisen eine Teil- chengrösse von 1-500 nm auf und verhalten sich ähnlich wie Flüssigkei¬ ten.
Gerade im Zusammenhang mit den normalerweise schlecht löslichen peptidischen Wirkstoffen, Nukleotiden, Vakzine und anderer Biopharma- zeutika hat der lösungsvermittelnde Effekt bei den oben beschriebenen Anwendungen eine sehr grosse Bedeutung.
Ausserdem lässt sich auf diese Weise der Abbau der Wirkstoffe im Kör¬ per bremsen und ein Sustained-Release-Effekt erzielen.
DOTAP Chlorid gehört zu der Klasse der kationischen Lipide. Diese ha¬ ben, im Gegensatz zu den natürlich vorkommenden Phospholipiden, kei¬ nen zwitterionischen Charakter. Liposomen aus kationischen Lipiden weisen, allein oder kombiniert mit Phospholipiden oder anderen lipidarti- gen Verbindungen, eine positiv geladene Oberfläche auf. Daraus ergibt sich eine hohe Affinität zu solchen Zellen, die nach Aussen eine negativ geladene Oberfläche besitzen, beispielsweise Endothelzellen.
Besonders wichtig ist jedoch die Fähigkeit von DOTAP basierten und an- deren kationischen Liposomen und Lipoplexen, in Zellen eindringen zu können und somit die in sie eingeschlossenen Wirkstoffe in das Zellinne¬ re zu transportieren (Transfektion).
All diese Eigenschaften machen DOTAP Chlorid auch sehr interessant für die Krebstherapie. Es bietet sich durch diese Eigenschaften die Mög- lichkeit, in, kationische DOTAP-Liposomen eingeschlossene herkömmli¬ che Cytostatika zu applizieren.
Die Transfektionseigenschaften von DOTAP Chlorid und anderen DOTAP-Salzen wie beispielsweise dem Acetat, Bromid, Dihydro- genphosphat, Hydrogensulfat, lodid, Mesylat, Methylsulfat, Trifluoracetat, Sulfat oder Disulfat und Triflat sind hinreichend aus der Literatur bekannt.
DOTAP Dihydrogenphosphat und DOTAP Mesylat werden in der Litera¬ tur nur als Racemat erwähnt. Alle anderen oben genannten Salze sind jeweils als Racemat und als 2S-Enantiomer genannt, vom Chlorid und vom Methylsulfat sind zusätzlich auch die 2R-Enantiomeren erwähnt.
Bei einigen In-Vitro-Studien haben andere Salze, wie etwa DOTAP Me¬ thylsulfat, bessere Transfektionsraten erzielt als DOTAP Chlorid.
In-Vivo angewendet findet jedoch im lebenden Körper ein Anionenaus- tausch an der Liposomenoberfiäche statt, so dass die Vorteile anderer Salze hier nicht zum Tragen kommen. Deshalb sind speziell bei der me¬ dizinischen Anwendung am Menschen und insbesondere zur parentera- len Applikation DOTAP-Salze mit physiologisch unbedenklichen Anionen, wie etwa das entsprechende Chlorid oder das Acetat, vorzuziehen.
Medizinische, insbesondere parenterale Anwendungen stellen höchste Anforderungen an die Qualität und Reinheit der verwendeten Wirk- und Hilfsstoffe. So gibt es von behördlicher Seite sehr strenge Vorschriften bezüglich der Herstellung, der Reproduzierbarkeit der Herstellung sowie des Nebenproduktprofils dieser Verbindungen. Bei parenteral angewen¬ deten Substanzen kommt noch hinzu, dass mikrobiologische Verunreini¬ gungen durch pathogene Keime und Endotoxine strikt zu vermeiden und zu kontrollieren sind. DOTAP Chlorid und andere DOTAP Salze sind extrem instabil und daher an sich schwierig in einer akzeptablen Reinheit herzustellen sind, so dass sie sich für die Verwendung zur Herstellung einer Arzneimittelfor¬ mulierung eignen.
Wie alle Lipide, die Ölsäurereste tragen, wie beispielsweise die natürli¬ chen Phospholipide DOPC und DOPE, sind alle DOTAP-Salze sehr oxi- dationsempfindlich. Die Oxidationsprodukte ungesättigter Fettsäurederi¬ vate weisen jedoch in der Regel eine hohe Toxizität auf.
Hier sind geeignete Herstell- und Reinigungsmethoden gefordert.
DOTAP Acetat liegt beispielsweise als hochsiedendes Öl vor und ist deshalb technisch nur sehr schwer in hinreichender Qualität zu erhalten.
Die üblichen Methoden zur Überwindung der Instabilität, wie z. B. die Zu- gäbe von Oxidationsschutzmitteln in Form von Ascorbinsäure oder redu¬ ziertem L-Glutathion, schränken die generelle Anwendbarkeit von DOTAP Chlorid stark ein, weil Interaktionen mit den später einzubetten¬ den Wirkstoffen nicht auszuschliessen sind. Ein vollständiger Sauer- stoffausschluss während der Herstellung, Lagerung und Verwendung ist kaum zu verwirklichen, bzw. nur mit sehr grossem Aufwand zu ermögli¬ chen.
DOTAP Chlorid ist kommerziell einzig als Chloroform-Lösung oder als amorpher Feststoff erhältlich.
Amorphes DOTAP Chlorid ist neben seiner Oxidatidationsempfindlichkeit auch noch extrem hygroskopisch und zerläuft bei normaler Luftfeuchtig¬ keit innerhalb kürzester Zeit zu einem schmierigen Film. Dies erschwert die Handhabbarkeit dieser Verbindung enorm.
So wird für amorphes DOTAP Chlorid in der Regel vom Hersteller eine Lagerung unter Schutzgas bei -2O0C empfohlen und nur eine Haltbarkeit von ca. 6 Monaten garantiert.
Aus der Literatur sind lediglich verschiedene Synthesenwege für die Her¬ stellung von amorphem, racemischem DOTAP Chlorid bekannt: Eibel und Unger, DE4013632A1 , schildern die Synthese von DOTAP Chlorid aus DOTAP Bromid durch lonentausch im Lösungsmittelsystem Chloroform/ Methanol/wässrige HCl und anschliessende Aufreinigung mittels Chromatographie. DOTAP Bromid wird zuvor in situ aus 1-Brom- 2,3-dioleoyl-oxypropan gewonnen.
Leventis und Silvius, Biochim. Biophys. Acta, 1023 (1990) 124-132, be¬ richten über die Synthese von DOTAP Chlorid aus DOTAP Jodid durch lonentausch im zweiphasigen System Lösungsmittel/NaCI-Lösung. DOTAP lodid wird vorgängig durch Methylierung von der entsprechenden Dimethylamino-Verbindung mittels Methyiodid gewonnen.
Nantz et al., Biochim. Biophys. Acta, 1299 (1996) 281-283, J. Med. Chem. 40 (1997) 4069-4078, beschreiben die Synthese von DOTAP Chlorid durch nichtwässrige lonenaustauscherchromatographie. Die ge¬ wünschte Verbindung wird durch Eindampfen des Eluates erhalten.
Feigner et al., US 5,264,618, nehmen die Methylierung der entsprechen¬ den Dimethylamino-Verbindung direkt zu DOTAP Chlorid mittels Methyl- Chlorid vor. Sie erhalten ein gelbes Wachs angeblich durch eine Kristalli¬ sation aus Acetonitril bei -200C. DOTAP Chlorid ist jedoch bei Raumtem¬ peratur in Acetonitril praktisch unlöslich. Versuche diese sogenannte Kristallisation zu reproduzieren ergaben nur amorphes Material durch Verfestigung der beim Abkühlen aus der heissen Lösung ausgeölten Substanz. Dass es sich hierbei um keine Kristallisation handelt, zeigt sich auch dadurch, dass die Autoren offenbar keinen Reinigungseffekt erzie¬ len und die Substanz chromatographisch aufreinigen müssen.
Folglich sind bisher weder Synthesewege zur Herstellung der beiden enantiomeren DOTAP Chloride noch deren charakteristischen Eigen¬ schaften bekannt. Durch Chemical Abstracts wurden zwar für beide E- nantiomere Nummern vergeben, jedoch werden in den entsprechenden Publikationen ausschliesslich Arbeiten mit dem racemischen DOTAP Chlorid beschrieben. Insbesondere wenn die Verbindungen für die parenterale Anwendung gedacht sind, ist eine Herstellung, welche eine Behandlung mit lonentau- scherharz einschließt, äusserst problematisch im Hinblick auf mögliche mikrobiologische Verunreinigung, da entsprechende Harze ein idealer Nährboden für Keime sind und auch nach deren Abtötung noch das Risi¬ ko der Kontamination durch Endotoxine bestehen bleibt.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, DOTAP Chlorid Salze und Hydrate in hoher Reinheit und mit ausreichender chemischer und physikalischer Stabilität zur Verfügung zu stellen. Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung dieser Salze mit hoher Lagerstabilität, so dass sie zur Herstellung pharmazeutischer Formulie¬ rungen einsetzbar sind. Weiterhin besteht ein starkes Bedürfnis nach ei¬ nem reproduzierbaren, in technischem Maßstab durchführbaren Prozess zur Herstellung von stabilen Formen von DOTAP Chlorid Salzen und Hydraten.
Enantiomerenreines DOTAP Chlorid kann aus enantiomerenreinen Edukten analog der für das Racemat beschriebenen Verfahren erhalten werden, also über (R bzw. S)-1-Chlor-2,3-dioleoyloxypropan, über (R bzw. S)-1-LG-2,3-dioleoyloxypropan und lonentausch
(LG=Abgangsgruppe) oder über (R bzw. S)-1-Dimethylamino-2,3- dioleoyloxypropan.
Als weitere Herstellmethode ist die Racemattrennung von racemischem DOTAP Chlorid zu nennen.
Durch Versuche wurde nun überraschend gefunden, dass sich sowohl racemisches, als auch enantiomerenreines, kristallines DOTAP Chlorid mit einer hohen chemischen Reinheit und einer ausgezeichneten Sta¬ bilität in einfacher Weise erhalten lassen. Die so erhaltenen kristallinen Produkte sind bei Raumtemperatur unter Schutzgas praktisch unbe¬ schränkt stabil. Sie sind daher als Bestandteil oder als Ausgangsmaterial zur Herstellung von Arzneimittelformen geeignet. Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind demnach enantiomerenrei- nes DOTAP Chlorid sowie stabile Kristallmodifikationen von racemi- schem und enantiomerenreinem DOTAP Chlorid.
Die stabilen Kristallmodifikationen können in kristalliner und teilkristalliner Form vorliegen. Sie weisen eine bisher nie erreichte Reinheit von > 98% zusammen mit einer bisher nie erreichten Stabilität von > 98% in Bezug auf den Ausgangswert nach 12 Monaten Lagerung unter Luftausschluss bei 25°C und 60% relativer Luftfeuchtigkeit auf. (siehe dazu Tabelle 1). Die DOTAP Chlorid Kristallmodifikationen haben einen Gehalt von weni¬ ger als 1 Aequivalent Wasser oder Kristalllösungsmittel auf 1 Aequivalent DOTAP Chlorid.
Die racemischen DOTAP Chlorid Kristallmodifikationen liegen beispiels- weise in drei verschiedenen Kristallmodifikationen vor (Typ I, Typ II, und Typ III) und zeigen bei Pulverröntgendiffraktions-Messungen mittelschar¬ fe Banden (siehe dazu Abb. 1 bis Abb. 3 und Tabelle 2). Ausgewählte 2 Theta-Werte für die verschiedenen Kristallmodifikationen liegen bei 12.6, 19.5, 20.2, 21.5 und 25.2 (Typ I); bzw. 3.3, 4.9, 19.3, 20.0 und 23.5 (Typ II); bzw. 2.8, 5.8, 20.0, 21.2 und 25.1 (Typ IM).
Enantiomerenreine DOTAP Chloride werden ebenfalls in kristalliner Form erhalten. Ausgewählte 2 Theta-Werte für die gefundene Kristallmodifika¬ tion liegen bei 12.8, 19.4, 19.8, 20.2, und 21.5 (Typ IV, siehe dazu Abb. 4).
Die Enantiomeren sind optisch aktiv. So besitzt (2S)-DOTAP Chlorid ei¬ nen Drehwert von -2.12°, (2R)-DOTAP Chlorid von +2.12° ([α]D bei 200C, 1%ige Lösung in Dichlormethan).
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von DOTAP Chlorid Kristallmodifikationen, welches dadurch gekenn¬ zeichnet ist, dass man DOTAP Chlorid aus einem aprotischen Medium auskristallisiert. Als aprotisches Medium können zu diesem Zweck apro- tische Lösungsmittel oder deren Mischungen verwendet werden. Das aprotische Medium kann auch in geringem Umfang protische Lö¬ sungsmittel, wie z. B. Wasser, enthalten. In Ausnahmefällen können un¬ ter geeigneten Bedingungen auch 25 Gew.-% protische Lösungsmittel enthalten sein. Die Kristallisation der DOTAP Chloride kann hierbei ohne vorgängige Aufreinigung direkt aus der Reaktionslösung erfolgen. Eben¬ so kann kristallines DOTAP Chlorid durch Umkristallisation von amor¬ phem, teilkristallinem oder kristallinem Material gewonnen werden.
Als aprotische Lösungsmittel eignen sich vor allem •jQ Ether, wie z. B. Tetra hydrofu ran, Methyltetrahydrofuran, Dioxan,
Diethylether, Dipropylether, Diisopropylether und
Methyl-tert.-butylether Ketone, wie z. B. Aceton und 2-Butanon, Methylisobutylketon,
Methylisopropylketon, «15 Nitrile, wie z. B. Acetonitril und
Ester, wie z. B. Ethylformiat, Methylacetat, Ethylacetat, Propylacetat,
Isopropylacetat, Butylacetat, Isobutylacetat,
Dimethylcarbonat, Diethylcarbonat und 1 ,3-
Dioxolidin-2-on.
20
Diese Lösungsmittel können jeweils rein oder im Gemisch verwendet werden, d. h. dass sowohl die verschiedenen aprotische Lösungsmittel einer Gruppe im Gemisch verwendet werden können, als auch aproti- schen Lösungsmitteltypen miteinander im Gemisch eingesetzt werden 25 können.
Wie oben schon angedeutet, können in dem verwendeten aprotischen Lösungsmittel oder Lösungsmittelgemisch protische Lösungsmittelzusät¬ ze enthalten sein.
30 Solche protischen Lösungsmittelzusätze können typischerweise aus fol¬ genden Lösungsmitteln bestehen:
Alkohole wie z. B. Methanol, Ethanol, n-Propanol, iso-Propanol, n- Butanol, iso-Butanol, 2-Butanol, tert-Butanol,
35 3-Methyl-1 -butanol und Ethylenglycol, Methoxy- ethanol, Ethoxyethanol, oder - o. -
Wasser.
Bei den protischen Lösungsmittelzusätzen kann es sich wiederum um Zusätze der reinen Lösungsmittel oder von Gemischen dieser protischen Lösungsmittel handeln.
Die Kristallisation der DOTAP Chlorid Modifikationen wird in der Regel gezielt durch langsames Abkühlen der hergestellten Lösung auf Tempe¬ raturen unter 3O0C erreicht. Die Bildung der Kristalle erfolgt entweder spontan oder durch Animpfen mit der entsprechenden DOTAP Chlorid Kristallmodifikation.
Die verschiedenen DOTAP Chlorid Kristallmodifikationen lassen sich in¬ einander umwandeln. Die Umwandlungen können durch Temperatur¬
behandlungen der isolierten Kristallmodifikationen bei erhöhter Tempera- tur oder durch länger andauerndes Rühren ihrer Suspensionen unter Kristallisationsbedingungen erreicht werden.
Durch den Einsatz von amorphem oder teilkristallinem DOTAP Chlorid als Ausgangsmaterial für die Umkristallisierung erhält man durch das be- schriebene Verfahren im Wesentlichen kristalline DOTAP Chloride von bisher nie erreichter Reinheit zusammen mit einer bisher nie erreichten Stabilität.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung kristalliner DOTAP Chloride zur Herstellung von Arzneimittelformulierungen, da die kristallinen
DOTAP Chloride unter den gegebenen Bedingungen in fester Form eine ausgezeichnet Stabilität besitzen und eine zeitlich praktisch unbe¬ schränkt eine gleichbleibende und sehr gute Qualität aufweisen.
Darüber hinaus weisen enantiomerenreine DOTAP Chloride andere phy¬ sikalische Eigenschaften auf als das Racemat, insbesondere in Kombi¬ nation mit chiralen Verbindungen, wie den Phospholipiden oder Cho- lesterol.
Vorteilhafter Weise können die gefundenen neuen Eigenschaften der enantiomerenreinen DOTAP Chloride dazu genutzt werden, allein oder im Zusammenwirken mit geeigneten Phospholipiden, Cholesterol und de¬ ren Derivaten neue Liposomen-Qualitäten zur Verfügung zu stellen, die im Vergleich zu herkömmlichen Formen einerseits dichtere Packungen der Lipide darstellen und andererseits einheitlicher aufgebaut sind. So zeigen Liposomen, die aus den reinen Enantiomeren hergestellt werden, im Vergleich mit den Liposomen aus racemischem DOTAP Chlorid eine um 5°C höhere Hauptphasenübergangstemperatur. Diese ist ein Mass für die Packungsdichte. Liposomen aus DOTAP Chlorid Enantiomeren weisen deshalb auch ein vermindertes Leaking der in sie eingeschlosse¬ nen Verbindung auf.
Dieses hat zur Folge, dass mit pharmazeutisch aktiven Verbindungen be- ladene Liposomen in der Wechselwirkung mit dem Stoffwechsel im menschlichen oder tierischen Körper Wirkstoffe verzögert abgeben wer¬ den. Vorteilhafter Weise können so insbesondere empfindliche Wirkstof- fe gezielter an den gewünschten Ort, bzw. zu dem Organ transportiert werden, wo die Arzneimittelwirkung erwünscht ist.
Auch zeigen die DOTAP Chlorid Enantiomeren besonders in Verbindung mit chiralen Lipiden wie Phospholipiden, Cholesterol und deren Derivate zeillinienspezifisch unterschiedliche Transfektionseigenschaften.
Dem Fachmann ist es möglich, zur Herstellung dieser neuen Liposomen gezielt eine Form oder ein bestimmtes Mischungsverhältnis der hiermit zur Verfügung gestellten DOTAP-Chloride auszuwählen, um Liposomen mit bestimmten neuen Eigenschaften herzustellen.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung sind folglich auch die aus der Verwendung der beanspruchten DOTAP Chlorid Formen resultierenden pharmazeutischen Zusammensetzungen. Solche pharmazeutischen Zu- sammensetzungen können die Kristallmodifikationen von (2R,S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid enthalten zusammen mit anderen pharmazeu¬ tischen Wirkstoffen und bekannten üblicherweise in der Arzneimittelzube¬ reitung eingesetzten Hilfsstoffen sowie einem oder mehreren Lösemit¬ teln.
Diese pharmazeutischen Zusammensetzungen können beispielsweise als Liposomen, Lipoplexe, Mikroemulsionen und Nanopartikel vorliegen und beispielsweise einen Wirkstoff aus der Gruppe der Peptide, Nukleo¬ tide, Vakzine oder Zytostatika beinhalten.
Die vorliegende Beschreibung ermöglicht es dem Fachmann die Erfin- düng umfassend anzuwenden. Die folgenden Beispiele dienen darüber hinaus zum besseren Verständnis und zur Veranschaulichung möglicher Varianten der Erfindung. Diese Beispiele sind daher in keiner Weise als einschränkend zu verstehen.
Alle in den folgenden Beispielen erwähnten Temperaturen sind in Grad Celsius angegeben. Wo nicht anders bezeichnet sind Gehaltsangaben als Gew.-% aufgeführt.
Beispiele zur Illustrierung der Erfindung
Beispiel 1 Stabilitäten
Zur Stabilitätsbestimmung der kristallinen DOTAP Chloride werden die Substanzen zusammen mit Vergleichsmustern bei 250C und 60% relati¬ ver Feuchte unter Luftausschluss gelagert. In periodischen Abständen wird der verbleibende Gehalt an DOTAP Chlorid gemessen und im Ver¬ gleich zum Ausgangswert angegeben.
Reinheit und Gehalt an DOTAP Chlorid werden mit HPLC bestimmt. Für Typ I werden folgende Werte gefunden:
Die Stabilitätsbestimmung kann zu einem beliebigen Zeitpunkt wiederholt werden, die in Tabelle 1 angegebenen Werte sind reproduzierbar.
Tabelle 1:
Figure imgf000013_0001
Beispiel 2 [Pulverröntgendiagramme]
Zur Charakterisierung der strukturellen Eigenschaften (Kristallmodifikati¬ onen) der kristallinen DOTAP Chloride werden von diesen Substanzen Pulverröntgendiagramme (Beugungsspektren) aufgenommen. Kristalline DOTAP Chloride ergeben für Lipide relativ gut aufgelöste Spektren mit mittelscharfen Banden. Die Spektren weisen auf hohe kri¬ stalline Anteile hin. Unter dem Polarisationsmikroskop sind keine amor¬ phen Anteile sichtbar.
Beispiele von Spektren sind in Abb. 1 (Typ I), Abb. 2 (Typ II), Abb. 3 (Typ III) und Abb. 4 (Typ IV ) ersichtlich.
Zum Vergleich ist ein Spektrum einer kommerziell erhältlichen, amorphen Probe in Abb. 5 (amorph) aufgeführt.
In Tabelle 2 sind ausgewählte 2 Theta-Werte für die verschiedenen Kris¬ tallmodifikationen der racemischen und enantiomerenreinen DOTAP Chloride aufgelistet:
Tabelle 2:
Figure imgf000014_0001
Beispiel 3 Hauptphasenübergangstemperaturen
Differential Scanning Caliometry (DSC) Messungen werden an multila- mellaren Liposomen in Wasser vorgenommen. Von den berechneten Mengen an racemischem oder enantiomerenreinem DOTAP Chlorid wer¬ den Liposomen nach der Dünnfilmmethode hergestellt. Die Lipidkon- zentration beträgt dabei jeweils 0.1g/ml. Geeignete Mengen dieser
Dispersionen werden dann in verschliessbare Aluminiumtiegel verbracht und mit einem Kalorimeter 204 Phoenix (Netzsch, Selb, Deutschland) vermessen. Jeweils drei aufeinanderfolgende Heiz/Kühl-Veriäufe von - 5O0C bis +2O0C werden mit 1 °C/min durchgeführt.
Für alle drei DOTAP Chlorid Varianten werden Phasenübergangstempe- raturen unterhalb von O0C gefunden. Für die Kühlzyklen liegt diese je¬ weils bei -23°C bis -240C. Unterschiede zwischen racemischem und e- nantiomerenreinem DOTAP Chlorid sind jeweils bei den Heizzyklen zu sehen. (2R)-DOTAP Chlorid und (2S)-DOTAP zeigen beide einen endo- thermischen Phasenübergang um -12.5 0C, während für das Racemat der Phasenübergang bei -17.5 0C liegt (siehe Abb. 6).
Beispiel 4
Transfektionseigenschaften an COS-7 -Zellen
Racemisches und enantiomerenreines DOTAP Chlorid sowie racemi- sches DOTAP Methylsulfat werden jeweils mit der gleichen Menge Cho- lesterol im Transfektionsmedium dispergiert und ultrabeschallt. Die- Liposomen und GFP-Plasmid-Lösung werden gemischt und 15 Minuten inkubiert,
Mengen pro 6well: 2 μg Plasmid/8 μg Lipid.
Nach 5 Std. Inkubation wird von den Zellen bei 37 °C/5 % CO2 der Über¬ stand abgesaugt, 2 ml frisches Medium zugesetzt und weitere 20 Stun¬ den inkubiert. Die FACS-Analyse ergibt nach der Aufarbeitung für alle Lipoplexe eine effiziente Transfektion. Ein signifikanter Unterschied zwi¬ schen den Transfektionsraten für die einzelnen Lipidmischungen ist fest¬ zustellen:
(R)-DOTAP Chlorid/Cholesterol-Komplex: 32.4 % (S)-DOTAP Chlorid/Cholesterol-Komplex: 11.0 %
(R1S)-DOTAP Chlorid/Cholesterol-Komplex: 25.9 %
(R1S)-DOTAP Methylsulfat/Cholesterol-Komplex: 20.2 %

Claims

P A T E N T A N S P R Ü C H E
1. Kristallines (2R1S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid.
2. Kristallines (2R1S)-DOTAP Chlorid.
3. (2R1S)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 2 mit 2 Theta-Werten von 12.6, 19.5, 20.2, 21.5 und 25.2.
4. (2R1S)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 2 mit 2 Theta-Werten von 6.5, 12.6, 13.4, 19.5, 20.2, 21.5, 25.2 und 29.8.
5. (2R1S)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 2 mit einem Spektrum ge- mäss Fig. 1 (Typ I)
6. (2R1S)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 2 mit 2 Theta-Werten von 3.3, 4.9, 19.3, 20.0 und 23.5.
7. (2R1S)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 2 mit 2 Theta-Werten von 3.3, 4.9, 15.1 , 16.2, 19.3, 20.0, 23.5 und 24.3.
8. (2R1S)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 2 mit einem Spektrum ge- mäss Fig. 2 (Typ II)
9. (2R1S)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 2 mit 2 Theta-Werten von 2.8, 5.8, 20.0, 21.2 und 25.1
10. (2R1S)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 2 mit 2 Theta-Werten von 2.8, 5.8, 12.9, 15.9, 20.0, 21.2, 25.1 und 29.4.
11. (2R1S)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 2 mit einem Spektrum ge- mäss Fig. 3 (Typ III)
12. (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid.
13. Kristallines (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid.
14. (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 13 mit 2 Theta- Werten von 12.8, 19.4, 19.8, 20.2, und 21.5.
15. (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 13 mit 2 Theta- Werten von 6.5, 12.8, 19.4, 19.8, 20.2, 20.7, 21.5 und 25.3.
16. (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid gemäß Anspruch 13 mit einem Spektrum gemäss Fig. 4 (Typ IV)
17. Verfahren zur Herstellung von Kristallmodifikationen von (2R,S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid, dadurch gekennzeichnet, dass die Kristallisation aus einem oder mehreren aprotischen Lösungsmitteln erfolgt.
18. Verfahren zur Herstellung von Kristallmodifikationen von (2R1S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid gemäss Anspruch 17, dadurch ge¬ kennzeichnet, dass als aprotisches Lösungsmittel ein Ether, ausge¬ wählt aus der Gruppe Tetrahydrofuran, Methyltetrahydrofuran, Dio- xan, Diethylether, Dipropylether, Diisopropylether und Methyl-tert.- butylether, oder ein Gemisch dieser Ether eingesetzt wird.
19. Verfahren zur Herstellung von Kristallmodifikationen von (2R5S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid gemäss Anspruch 17, dadurch ge¬ kennzeichnet, dass als aprotisches Lösungsmittel ein Keton, aus- gewählt aus der Gruppe Aceton, 2-Butanon, Methylisobutylketon und Methylisopropylketon, oder ein Gemisch dieser Ketone einge¬ setzt wird.
20. Verfahren zur Herstellung von Kristallmodifikationen von (2R,S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid gemäss Anspruch 17, dadurch ge¬ kennzeichnet, dass als aprotisches Lösungsmittel Acetonitril einge¬ setzt wird.
21. Verfahren zur Herstellung von Kristallmodifikationen von (2R1S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid gemäss Anspruch 17, dadurch ge¬ kennzeichnet, dass als Lösungsmittel ein Ester, ausgewählt aus der Gruppe Ethylformiat, Methylacetat, Ethylacetat, Propylacetat, I- sopropylacetat, Butylacetat, Isobutylacetat, Dimethylcarbonat, Diethylcarbonat und 1 ,3-Dioxolidin-2-on, oder ein Gemisch dieser Ester eingesetzt wird.
22. Verfahren gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 17 bis 21 , dadurch gekennzeichnet dass ein aprotisches Medium im Gemisch mit einem Alkohol, ausgewählt aus der Gruppe Methanol, Ethanol, n-Propanol, iso-Propanol, n-Butanol, iso-Butanol, 2-Butanol, tert- Butanol, 3-Methyl-1-butanol, Ethylenglycol, Methoxyethanol und E- thoxyethanol, oder mit deren Gemischen verwendet wird.
23. Verfahren nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, dass die Kristallisation ohne vorgängige Aufreinigung direkt aus der Reakti- onslösung erfolgt.
24. Verfahren nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, dass eine Umkristallisation von amorphem oder kristallinem (2R,S)-, (2S)- o- der (2R)-DOTAP Chlorid erfolgt.
25. Verwendung von Kristallmodifikationen von (2R1S)-, (2S)- und (2R)- DOTAP Chlorid als Bestandteil zur Herstellung von Arzneimitteln.
26. Verwendung von von (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid als Bestand- teil zur Herstellung von Arzneimitteln.
27. Pharmazeutische Zusammensetzung enthaltend Kristallmodifikati¬ onen von (2R,S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid zusammen mit pharmazeutischen Wirkstoffen, Hilfsstoffen oder einem Lösemittel.
28. Pharmazeutische Zusammensetzung enthaltend (2R,S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid gemäss Anspruch 27, dadurch gekennzeich¬ net, dass als pharmazeutischer Wirkstoff ein Wirkstoff, ausgewählt aus der Gruppe der Peptide, Nukleotide, Vakzine und Zytostatika, eingesetzt wird.
29. Pharmazeutische Zusammensetzung enthaltend Kristallmodifikati¬ onen von (2R1S)-, (2S)- und (2R)-DOTAP Chlorid gemäss An¬ spruch 27, dadurch gekennzeichnet, dass sie Liposomen, Lipople- xe, Nanopartikel oder Mikroemulsionen aufweist.
30. Pharmazeutische Zusammensetzung enthaltend (2S)- und (2R)- DOTAP Chlorid zusammen mit pharmazeutischen Wirkstoffen, Hilfsstoffen oder einem Lösemittel.
31. Pharmazeutische Zusammensetzung enthaltend (2S)- und (2R)- DOTAP Chlorid gemäss Anspruch 30, dadurch gekennzeichnet, dass als pharmazeutischer Wirkstoff ein Wirkstoff, ausgewählt aus der Gruppe der Peptide, Nukleotide, Vakzine und Zytostatika, ein¬ gesetzt wird.
32. Pharmazeutische Zusammensetzung enthaltend (2S)- und (2R)- DOTAP Chlorid gemäss Anspruch 30, dadurch gekennzeichnet, dass sie Liposomen, Lipoplexe, Nanopartikel oder Mikroemulsionen aufweist.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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US7303881B2 (en) * 2004-04-30 2007-12-04 Pds Biotechnology Corporation Antigen delivery compositions and methods of use
DE102005046490A1 (de) 2005-09-28 2007-03-29 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Modifikationen von RNA, die zu einer erhöhten Transkriptstabilität und Translationseffizienz führen
US8877206B2 (en) * 2007-03-22 2014-11-04 Pds Biotechnology Corporation Stimulation of an immune response by cationic lipids
RU2530555C2 (ru) * 2008-04-17 2014-10-10 ПиДиЭс БАЙОТЕКНОЛОДЖИ КОРПОРЭЙШН Стимуляция иммунного ответа энантиомерами катионных липидов
US10738355B2 (en) 2011-05-24 2020-08-11 Tron-Translationale Onkologie An Der Universitätsmedizin Der Johannes Gutenberg-Universität Mainz Ggmbh Individualized vaccines for cancer
PL2755680T3 (pl) * 2011-09-12 2019-03-29 Pds Biotechnology Corporation Preparaty szczepionkowe w postaci cząstek
WO2013143555A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
CN105101991A (zh) 2012-09-21 2015-11-25 Pds生物科技公司 改进的疫苗组合物和使用方法
EP3417874A1 (de) 2012-11-28 2018-12-26 BioNTech RNA Pharmaceuticals GmbH Individualisierte impfstoffe gegen krebs
WO2014180490A1 (en) 2013-05-10 2014-11-13 Biontech Ag Predicting immunogenicity of t cell epitopes
WO2016045732A1 (en) 2014-09-25 2016-03-31 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Stable formulations of lipids and liposomes
WO2016128060A1 (en) 2015-02-12 2016-08-18 Biontech Ag Predicting t cell epitopes useful for vaccination
WO2017059902A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh 3' utr sequences for stabilization of rna
CA3005251A1 (en) 2015-11-13 2017-05-18 Pds Biotechnology Corporation Lipids as synthetic vectors to enhance antigen processing and presentation ex-vivo in dendritic cell therapy

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5264618A (en) * 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
WO2005049549A1 (en) * 2003-11-12 2005-06-02 Chemi Spa Process for the synthesis of cationic lipids

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4013632A1 (de) * 1990-04-27 1991-10-31 Max Planck Gesellschaft Liposomen mit positiver ueberschussladung
DE19521412A1 (de) * 1995-06-14 1996-12-19 Boehringer Mannheim Gmbh Neue kationische und polykationische Amphiphile, diese enthaltende Reagenzien und deren Verwendung
PL199201B1 (pl) * 1996-05-08 2008-08-29 Nika Health Products Ltd Pęcherzyk lipidowy, sposób wytwarzania pęcherzyka lipidowego oraz zastosowanie pęcherzyka lipidowego
ES2305157T3 (es) * 1996-09-13 2008-11-01 Lipoxen Technologies Limited Liposomas.
US6458382B1 (en) * 1999-11-12 2002-10-01 Mirus Corporation Nucleic acid transfer complexes
ES2183720B1 (es) * 2001-06-18 2004-01-16 Esteve Labor Dr Procedimiento para la preparacion de derivados de 1,5-diaril-3-trifluorometil-delta2-pirazolinas racemicas y enantiomericamente puras.

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5264618A (en) * 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
WO2005049549A1 (en) * 2003-11-12 2005-06-02 Chemi Spa Process for the synthesis of cationic lipids

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
COLLOIDS AND SURFACES, A: PHYSICOCHEMICAL AND ENGINEERING ASPECTS , 198-200, 613-623 CODEN: CPEAEH; ISSN: 0927-7757, 2002 *
DATABASE CA [online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; PERISSI, ILARIA ET AL: "Electron Spin Resonance and Differential Scanning Calorimetry as Combined Tools for the Study of Liposomes in the Presence of Long Chain Nitroxides", XP002368978, retrieved from STN Database accession no. 137:348712 *
DATABASE CA [online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; PFOHL, T. ET AL: "Biological polyelectrolyte complexes in solution and confined on patterned surfaces", XP002368979, retrieved from STN Database accession no. 136:382000 *
JOURNAL OF PHYSICAL CHEMISTRY B , 106(40), 10468-10473 CODEN: JPCBFK; ISSN: 1520-6106, 2002 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012159704A1 (en) 2011-05-20 2012-11-29 Merck Patent Gmbh Stable crystal modifications of dotap chloride
AU2012261276B2 (en) * 2011-05-20 2017-05-25 Merck Patent Gmbh Stable crystal modifications of DOTAP chloride
RU2627354C2 (ru) * 2011-05-20 2017-08-07 Мерк Патент Гмбх Устойчивые кристаллические модификации хлорида dotap
US10000445B2 (en) 2011-05-20 2018-06-19 Merck Patent Gmbh Stable crystal modifications of DOTAP chloride
NO344225B1 (no) * 2011-05-20 2019-10-14 Merck Patent Gmbh Stabile krystallmodifikasjoner av DOTAP-klori

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