WO2006030602A1 - 卵巣癌の診断および／または治療薬 - Google Patents

卵巣癌の診断および／または治療薬 Download PDF

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ovarian cancer
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ribosome
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Kaoru Shimada
Yasuhiro Matsumura
Toshiaki Tagawa
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Mitsubishi Pharma Corporation
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    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]

Definitions

  • the present invention relates to diagnostic and Z or therapeutic agents for ovarian cancer.
  • Non-patent Document 1 Non-patent Document 2
  • GAH antibody which is a human monoclonal antibody that has been screened for reactivity with gastric cancer and colorectal cancer, is an example (Patent Document 1). ).
  • GAH antibody is known to be reactive with breast cancer in addition to gastric cancer and colon cancer used for screening (Patent Document 2), but it is known for lung cancer. Does not show reactivity. That is, it is difficult for those skilled in the art to predict the reactivity with different types of cancers, which is considered to be derived from the properties of monoclonal antibodies having extremely high specificity for antigens.
  • nmMHCA human non-muscle myosin heavy chain type A
  • Patent Document 1 Japanese Patent Laid-Open No. 5-304987
  • Patent Document 2 International Publication Pamphlet WO03 / 009870
  • Non-patent literature 1 Vogel C, Cobleigh MA, Eur J Cancer. 2001 Jan; 37 Suppl 1: 25-29
  • Non-patent literature 2 J. Baselga, Clinical trials of Herceptin, Eur. J. Cancer 37 Suppl 1 (20 01 ) S18-24.
  • Non-Patent Document 3 HOSOKAWA S, Hybridoma And Hybridomics.vol 23, no 2 (2004): 1 09-120
  • An object of the present invention is to provide a useful diagnostic and Z or therapeutic agent for ovarian cancer.
  • the present inventors have developed an ovary containing an antibody comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1 to 6 in the sequence listing. It was found that the antibody is also reactive to cancer and is useful as an ovarian cancer tissue-specific diagnostic and Z or therapeutic agent, and the present invention has been completed.
  • the gist of the present invention is as follows.
  • a diagnostic and Z or therapeutic agent for ovarian cancer comprising an antibody comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1 to 6 in the sequence listing.
  • the antibody contains the amino acid sequences of SEQ ID NOS: 1, 2, and 3 in the heavy chain hypervariable region, and the amino acids of SEQ ID NOS: 4, 5, and 6 in the light chain hypervariable region.
  • the antibody contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 in the heavy chain variable region and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 in the light chain variable region. Diagnosis and Z or treatment of ovarian cancer.
  • a diagnostic and Z or therapeutic agent for ovarium cancer containing the antibody according to any one of 1 to 3 above and a ribosome encapsulating the drug.
  • Antibody power The diagnosis and Z or therapeutic agent for ovarian cancer as described in 6 above, wherein 0.1 to 2 mol% of maleimide phospholipid is bound to 1 mol. 8. Diagnosis of ovarian cancer according to any one of 4 to 7 above, wherein the antibody is an F (ab ′) fragment
  • Compound power containing a polyalkylene glycol moiety 10.
  • FIG. 1 shows immunohistochemically stained images using GAH antibodies against human ovarian cancer patient tissues (A, C) and human ovarian non-cancerous tissues (B, D).
  • FIG. 2 shows an immunohistochemical staining image using GAH antibody (A) and human HgG antibody (B) against human ovarian cancer tissue.
  • FIG. 3 Representative examples of stained images of GAH antibodies against serous adenocarcinoma (A), endometrioid carcinoma (B), clear cell carcinoma (C) and mucinous adenocarcinoma (D) ovarian cancer .
  • FIG. 4 shows in vitro antitumor effects of GAH antibody-bound DXR-encapsulated ribosomes on human ovarian cancer cells.
  • the vertical axis shows the ratio (%) of the number of cells at each treatment concentration to the control (drug concentration 0).
  • the horizontal axis shows the concentration of antibody-bound ribosome (as DXR concentration (g / ml))
  • the antibody refers to an antibody comprising the amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1 to 6 in the sequence listing.
  • the heavy chain hypervariable region contains SEQ ID NOs: 1 and 2 in the sequence listing.
  • the hypervariable region of the light chain includes the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5, and 6 in the light chain, and particularly preferably, the heavy chain variable region and the light chain variable region.
  • SEQ ID NOs: 7 and 8 are represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 7 and 8 in the Sequence Listing.
  • the hypervariable region determines the specificity of an immunoglobulin as an antibody and the binding affinity between an antigenic determinant and the antibody, and is also called a complementarity determining unit. Therefore, in the present invention, the region other than the strong hypervariable region may be derived from other antibodies. In other words, antibodies having these hypervariable regions are considered to be included in the antibodies of the present invention.
  • antibodies that have been modified such as substitution, insertion, deletion, or addition of a part of amino acids within a range without impairing the reactivity with ovarian cancer tissue are also included in the antibody of the present invention.
  • the antibody is preferably a monoclonal antibody, particularly preferably a human monoclonal antibody, which is a heterologous animal when the ovarian cancer diagnosis and Z or therapeutic agent of the present invention is administered to humans. It is advantageous in that it is not a protein.
  • the human monoclonal antibody can be obtained by preparing a hybridoma of lymphocytes derived from a cancer patient and mouse myeloma cells, and selecting those having the specific amino acid sequence described above.
  • Neubridoma first isolated lymphocytes from lymph nodes belonging to cancer that had been removed by cancer patient, It is obtained by fusing with mouse myeloma cells using glycol. Using the supernatant of the obtained hybridoma, select hyperidoma that produces antibodies positive by Enzymnoassay against various cancer cell lines fixed with baraformaldehyde, and clone them. Do. Next, the monoclonal antibody was purified from the supernatant of the hyperidoma by a conventional method (RC Duhamel et al., J. Immuno 1.
  • the base sequence of the DNA encoding the antibody produced by the wild hybridoma selected by force can be obtained, for example, by the following method.
  • (dG) tailing is performed on cDNA, and poly C hybridizing to this dG tail and the common sequence portion of the human antibody heavy chain gene and light chain gene that have already been acquired! Amplify the cDNA encoding the antibody by PCR.
  • Antibodies can also be prepared by genetic engineering techniques. The method in this case is not particularly limited, but the following methods can be mentioned.
  • the hybridoma producing this antibody is cultured using fetal bovine serum-containing eRDF, RPMI 1640 culture medium, or the like, or the DNA encoding the variable region including the specific hypervariable region described above is further added to the heavy chain and light chain.
  • PKCRH2 can be used to synthesize and synthesize genes to which DNAs encoding the constant regions of Nature, 307, 605 (1984)] can be constructed by the procedure shown in Fig. 1 or Fig.
  • pKCR pKCR
  • CHO cells Choinese high It can be obtained by expression in a host such as a star ovary cell.
  • a heavy chain gene with Hindlll sites attached to both ends is inserted into the Hindlll site of pKCR ( ⁇ ) / ⁇ , and a selectable marker gene such as a DHFR gene is inserted into the Sal I site of this plasmid.
  • the light chain gene Insert EcoRI sites at both ends into the EcoRI site of pKCRD, and insert the DHFR gene into the Sail site of this plasmid.
  • Both plasmids were introduced into cells such as CHOdhfr- [Urlaub G. & Chasin LA, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 4216 (1980)] by the calcium phosphate method. It can be obtained by further selecting cells producing antibodies from cells proliferating in a culture solution or the like. The antibody is purified from a culture solution obtained by culturing these cells by adsorbing and eluting protein A on a column or the like bound to a support such as cell mouth fine or agarose.
  • nucleotide sequences of the constant regions of the heavy and light chains of the antibody are described in, for example, Nucleic Acids Research 14, 1779 (1986), The Journal of Biological Chemistry 257, 1516 (1962) and Cell 22, 197 (1980) It may have the same sequence as described in 1.
  • Antibodies include full-length antibodies (whole antibodies), antibody fragments (antibody fragments such as Fab ', F (ab'))
  • the antibody may be used alone or in combination with a good drug or the like.
  • a method of directly binding to an antibody a method of binding to a drug through a spacer, a method of binding a ribosome encapsulating the drug to an antibody, etc. are preferable. Examples include a method of binding an antibody to a ribosome encapsulating a drug.
  • the ribosome means, for example, natural lecithin (eg, egg yolk lecithin, soybean lecithin) dipalmitoyl phosphatidylcholine (DPPC), dimyristoyl phosphatidylcholine (DMPC), distearoyl phosphatidylcholine.
  • natural lecithin eg, egg yolk lecithin, soybean lecithin
  • DPPC dipalmitoyl phosphatidylcholine
  • DMPC dimyristoyl phosphatidylcholine
  • distearoyl phosphatidylcholine distearoyl phosphatidylcholine.
  • DSPC dioleophosphatidylcholine
  • DOPC dimyristoylphosphatidylethanolamine
  • DPPE dipalmitoylphosphatidylethanolamine
  • DOPE dioleoylphosphatidylethanolamine
  • Phospholipids such as dipalmitoyl phosphatidic acid (DPP A), dipalmitoyl phosphatidyl glycerol (DPPG), dimyristoyl phosphatidic acid (DMPA), glycolipids such as sphingoglycolipids and glyce oral glycolipids, fatty acids , Amphiphilic dialkyl dimethyla mmnonium amphiphiles), polyglycerol alkyl ether, polyoxyethylene alkyl ether, etc.
  • lipids can be used alone or in combination of two or more.
  • non-polar substances such as cholesterol, DC-chol (3 ⁇ -[ ⁇ - ( ⁇ ', ⁇ '-dimethylaminoethyl) carbamoyllcholesterol), etc. Can be used in combination with other cholesterol derivatives! ,.
  • the method for producing ribosome is not particularly limited, and any method available to those skilled in the art is applicable. Further, the form of the ribosome is not particularly limited, and may be any form.
  • multilamellar ribosome formed by adding aqueous solution to lipid thin film attached to glass wall and mechanically shaking
  • Small-lamellar ribosome obtained by sonication method, ethanol injection method, and French press method (SUV): Obtained by surfactant removal method, reverse phase evaporation method (ribosome, Junzo Sunamoto et al., Nankodo, 1998), extrusion method of extruding MLV from a membrane with uniform pore size by pressure, etc.
  • LUV Large-lamellar ribosome
  • the particle size of the ribosome is, for example, 300 nm or less, preferably about 30 to 200 nm.
  • the method for introducing the drug into the ribosome is not particularly limited, and any method available to those skilled in the art is applicable.
  • it may be added as an aqueous solution at the time of ribosome formation and enclosed inside the ribosome.
  • a concentration gradient such as a pH gradient is formed inside and outside the vesicle, and this potential is used as a driving force to incorporate an ionizable antitumor substance into the ribosome (Cancer Res., 49, 5922, 1989; BBA, 455, 269, 1976).
  • the method for binding an antibody to a ribosome is not particularly limited, but a hydrophobic substance is bound to a purified antibody, which is preferably bound to the surface of the ribosome, The ability to insert into a ribosome, the method of cross-linking phosphatidylethanolamine and an antibody with dartal, etc. Thereafter, there is a method of modifying the liposome with an antibody by reacting the maleimide group of ribosome with the thiol antibody.
  • an antibody-derived xio group that is, an endogenous diol group of the antibody can be reacted, and a method using an endogenous dithiol group is preferable from the viewpoint of maintaining antibody activity.
  • the endogenous dithiol group of an antibody can be reacted with a maleimide group by reducing it to a thiol group.
  • the group can be used for the binding reaction with ribosomes (Martin, F.J., et al., Biochemistry, 20, 4229, 1981).
  • the thiol group of the Fc part of IgMs obtained by reducing the J chain under mild conditions is modified according to the method of Miller et al. (J. Biol. Chem., 257, 286, 1965). Use it to combine with.
  • F (a) Antibodies with thiol groups
  • the binding amount of the antibody to the ribosome is such that 0.1 mol% force is about 2 mol% per mol of maleimide phospholipid, preferably 0.1 to 1.6 mol%.
  • the ribosome is not particularly limited, but has a form in which the compound containing the polyalkylene glycol moiety is bound to the maleimidated lipid on the ribosome surface via a thioether bond.
  • the compound containing a polyalkylene glycol moiety include a compound having a polyethylene glycol group and capable of being thiolated at the terminal or a compound having a mercapto group at the terminal.
  • a compound in which a polyalkylene glycol group is bonded to triazine, and a compound in which the triazine is substituted with an amino acid or the like can be mentioned.
  • polyalkylene Even a compound having two glycol groups (double-stranded).
  • the amount of the compound containing the polyalkylene glycol moiety to the ribosome is not particularly limited, and may be excessively reacted with the remaining maleimidated lipid. 0. for all lipid 28-0. about 90 mol%, more preferably 0.1 28-0. 56 mol% of, 15 to 50 mole 0/0 degree for maleimide lipid, more preferably 15 it is about 30 mole 0/0, 0 for DPPC. 44 to:. L 45 mole 0/0 mm, more preferably 0.44 to 0 89 mole 0/0 approximately..
  • the polyalkylene glycol includes, for example, polyethylene glycol (PEG), polypropylene glycol and the like, preferably polyethylene glycol.
  • PEG polyethylene glycol
  • polypropylene glycol preferably polyethylene glycol.
  • a molecular weight of about 5,000 to 7,000 daltons is preferred, and a molecular weight of about 5,000 daltons is most preferred.
  • the compound containing the polyalkylene glycol moiety When the compound containing the polyalkylene glycol moiety has a form bonded to the maleimidated lipid on the ribosome surface via a thioether bond, the compound containing the polyalkylene glycol moiety usually has a thiol group. After the introduction, this compound is reacted with the maleimide group of the liposome to produce a liposome having a polyalkylene glycol bound thereto.
  • Dehydration condensation method Introducing pyridyldithiopropiol group into monomethoxypolyoxyethyleneamine with SPDP and further reducing; Introducing thiol group into monomethoxypolyoxyethyleneamine with iminothiolane Method: A method of binding an active ester of monomethoxypolyoxyethylene carboxylic acid and various thiolamines; a method of condensing a polyethylene glycol triazine derivative with thiolamine, and the like can be used.
  • a preferred embodiment of the present invention comprises an antibody and a polyalkylene glycol moiety.
  • a ribosome to which a compound is bound is used, and in order to produce this, first, a thiol antibody is reacted with a ribosome having a maleimide group in a neutral buffer.
  • a neutral buffer for example, 0.5 to 5.3 mg, preferably 0.5 to 4.5 mg, more preferably 1.2 to 2 mg of antibody per lOOmg of total lipid constituting the ribosome is bound, i.e.
  • maleimide relative group maleimide lipid 1 mol
  • 0.1 mol% force about 2 mol% extent preferably 0.1 to 1.6 mol 0/0, more preferably 0.4 to 0.7 moles 0/0 not good
  • the remaining maleimide group can be reacted with a compound containing a thiolated polyalkylene glycol moiety to produce a ribosome in which the antibody and the compound containing the polyalkylene glycol moiety are bound.
  • Mareimidi ⁇ fibrous base 15 mol, mol 0/0 to 50 mole 0/0, preferably 0.2 8-0 against 15-30 mole 0/0 (total lipids.
  • Examples of the drug in the present invention include diagnostic drugs and antitumor substances.
  • examples of the diagnostic agent include radioactive elements such as indiumum technesium; contrast agents such as gadolinium nyode.
  • the type of antitumor substance is not particularly limited, and examples thereof include doxorubicin (adriamycin), daunomycin, vinblastine, cisplatin, nedaplatin, 5-fluorouracil (5-FU).
  • Antitumor agents such as: Radioactive substances such as Rhodo 131; Toxins such as ricin ⁇ and diphtheria toxin; Antisense RNA; and pharmaceutically acceptable salts and derivatives thereof. These substances can be obtained by purchasing commercial products or appropriately producing them by known methods.
  • Examples of the pharmaceutically acceptable salt include salts with pharmaceutically acceptable polyanionic substances, for example, salts with citrate, tartrate, glutamate, and derivatives thereof. Is preferred.
  • the drug-containing ribosome to which the antibody is bound is obtained by a known method such as dehydration (WO8806441). ), A method of adding a stabilizer and using it as a liquid (Japanese Patent Laid-Open No. 64-9931), a freeze-drying method (Japanese Patent Laid-Open No. 64-9931), etc.
  • it can be administered to patients by methods such as intravascular or local administration.
  • the dose can be appropriately selected according to the type of antitumor substance of the active ingredient.
  • the amount of active ingredient is 50 mgZkg or less.
  • it can be used at 10 mgZkg or less, more preferably 5 mgZkg or less.
  • GAH antibody An antibody containing the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 1 to 6 in the sequence listing described in JP-A No. 5-304987 (Examples 1, 2, and 3) (hereinafter sometimes abbreviated as GAH antibody) is used as a piotin reagent. Piotin labeling was performed using (Amersham).
  • Paraffin sections of human ovarian cancer tissue obtained from National Cancer Center Central Hospital, Department of Pathology
  • non-cancerous part Ito and Tissue obtained from National Cancer Center, Central Hospital, Department of Pathology
  • BSA / PBS solution was soaked in a BSA / PBS solution at room temperature for 1 hour, it was reacted with a 100 / zg / ml piotinylated GAH antibody solution at 37 ° C for 2 hours.
  • the sections were washed with PBS, and reacted with 4 g / ml PerCP (Beridinine Chlorophyll Protein) -labeled streptavidin solution (Becton / Dickinsin) for 30 minutes under ice-cooling in the dark.
  • PerCP Beridinine Chlorophyll Protein
  • streptavidin solution Becton / Dickinsin
  • a human immunoglobulin (IgG) was used to prepare a pyotin ⁇ antibody in the same manner as in Example 1, and a human ovarian cancer tissue section was stained using a GAH antibody and a control antibody (FIG. 2).
  • IgG human immunoglobulin
  • FIG. 2 a control antibody
  • a human ovarian cancer tissue section was reacted with GAH antibody in the same manner as in Example 1 to determine the intensity of red fluorescence, and the positive and negative of the distribution.
  • FIG. 3 A: serous adenocarcinoma, B: endometrioid carcinoma, C: clear cell carcinoma, D: mucinous adenocarcinoma).
  • doxorubicin (DXR) (Kyowa Hakko) encapsulated ribosome was prepared.
  • a GAH antibody-binding ribosome was prepared by binding a thiolated GAH antibody to the DXR-encapsulated ribosome and further binding thiolated polyethylene glycol (PEG).
  • GAH antibody-binding ribosome has an effect of suppressing ovarian cancer cell growth.
  • the present invention it is possible to provide a preventive and Z or therapeutic agent for ovarian cancer that is effective against ovarian cancer in addition to gastric cancer, colon cancer, and breast cancer, due to the specific reactivity of the antibody.

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Abstract

　配列表の配列番号１から６のアミノ酸配列を含む抗体が、これまで知られている胃癌、大腸癌または乳癌等の癌種以外に、卵巣癌にも反応性がある抗体であり、卵巣癌組織特異的な診断薬および／または治療薬として有用であることを見出した。

Description

明 細 書
卵巣癌の診断および Zまたは治療薬
技術分野
[oooi] 本発明は、卵巣癌の診断および Zまたは治療薬に関するものである。
背景技術
[0002] 癌の診断および治療分野においては、十分な治療効果を得るとともに、治療薬によ る副作用を低減することを目的として、特定の癌細胞を標的としたターゲッティング療 法の研究が行われている。具体的には、癌化した細胞の表面に特異的に発現する 抗原を同定し、その抗原に対するモノクローナル抗体を取得し、当該モノクローナル 抗体を癌治療薬として用いる方法が挙げられる (非特許文献 1または非特許文献 2)
[0003] ターゲッティング療法に用いられるモノクローナル抗体としてはこれまでに多数報告 があるが、胃癌および大腸癌との反応性力 スクリーニングされたヒトモノクローナル 抗体である GAH抗体もその一例として挙げられる（特許文献 1)。
[0004] GAH抗体は、スクリーニングの際に用いられた胃癌および大腸癌の他に、乳癌に 対しても反応性を示すことが知られて ヽるが (特許文献 2)、肺癌に対しては反応性を 示さない。すなわち、種類の異なる癌との反応性を予測することは当業者でも困難で あり、これは、抗原に対する特異性が極めて高いモノクローナル抗体の性質に由来 するものであると考えられる。
[0005] 一方、 GAH抗体の抗原としては、ヒト非筋肉型ミオシン重鎖タイプ A (nmMHCA)が 同定されているが、当該抗原が卵巣癌組織に強く発現していることを示唆する報告 は、発明者の知る限りこれまでにない。
特許文献 1：特開平 5-304987号公報
特許文献 2：国際公開パンフレット WO03/009870号
非特許文献 1： Vogel C, Cobleigh MA, Eur J Cancer. 2001 Jan;37 Suppl 1:25-29 非特許文献 2 : J. Baselga, Clinical trials of Herceptin, Eur. J. Cancer 37 Suppl 1 (20 01) S18-24. 非特許文献 3 : HOSOKAWA S, Hybridoma And Hybridomics. vol 23, no 2 (2004): 1 09-120
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0006] 本発明の課題は、卵巣癌に対して有用な診断および Zまたは治療薬を提供するこ とにある。
課題を解決するための手段
[0007] 本発明者らは、配列表の配列番号 1から 6のいずれかに記載のアミノ酸配列を含む 抗体が、これまで知られている胃癌、大腸癌または乳癌等の癌種以外に、卵巣癌に も反応性がある抗体であり、卵巣癌組織特異的な診断および Zまたは治療薬として 有用であることを見出し、本発明を完成した。
[0008] すなわち本発明の要旨は以下の通りである。
1.配列表の配列番号 1から 6のいずれかに記載のアミノ酸配列を含む抗体を含有す る卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
2.抗体が、重鎖の超可変領域に、配列表の配列番号 1、 2および 3のアミノ酸配列を 含有し、軽鎖の超可変領域に、配列表の配列番号 4、 5および 6のアミノ酸配列を含 有するものである上記 1に記載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
3.抗体が、重鎖可変領域に配列表の配列番号 7のアミノ酸配列を含有し、軽鎖可変 領域に配列表の配列番号 8のアミノ酸配列を含有するものである上記 1または 2に記 載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
4.上記 1から 3のいずれかに記載の抗体と薬剤を内包するリボソームを含有する卵 巣癌の診断および Zまたは治療薬。
5.抗体が、チォエーテル基を介して、リボソームに結合している上記 4に記載の卵巣 癌の診断および Zまたは治療薬。
6.抗体が、チォエーテル基を介して、脂質末端の一部がマレイミド化されたリポソ一 ムに結合している上記 4または 5に記載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
7.抗体力 マレイミドィ匕脂質 1モルに対して 0. 1〜2モル％結合している上記 6に記 載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。 8.抗体が、 F(ab')フラグメントである上記 4から 7のいずれかに記載の卵巣癌の診断
2
および Zまたは治療薬。
9.リボソームが、ポリアルキレングリコール部分を含む化合物を結合している上記 4 に記載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
10.ポリアルキレングリコール部分を含む化合物力 リボソームに含まれるマレイミド 化脂質 1モルに対して 15〜50モル％結合している上記 9に記載の卵巣癌の診断お よび Zまたは治療薬。
11.ポリアルキレングリコール部分を含む化合物が 2つのポリアルキレングリコールを 有する化合物である上記 9または 10に記載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬
12.ポリアルキレングリコールが、ポリエチレングリコールである上記 9から 11のいず れかに記載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
13.ポジエチレングジコ一ノレ力 S、分子量 2000〜7000ダノレ卜ンである上記 12に記載 の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
14.薬剤が、抗腫瘍性物質である上記 4に記載の卵巣癌の治療薬。
発明の効果
[0009] 本発明によれば、卵巣癌に対して有用な診断および Zまたは治療薬を提供するこ とがでさる。
図面の簡単な説明
[0010] [図 1]ヒト卵巣癌患者組織 (A, C)およびヒト卵巣非癌部組織 (B, D)に対する GAH抗 体を用いた免疫組織染色像を示す。
[図 2]ヒト卵巣癌組織に対する GAH抗体 (A)及びヒ HgG抗体 (B)を用いた免疫組織 染色像を示す。
[図 3]漿液性腺癌 (A)、類内膜癌 (B)、淡明細胞癌 (C)およびムチン性腺癌 (D)の組織 型の卵巣癌に対する GAH抗体の染色像の代表例を示す。
[図 4]GAH抗体結合 DXR封入リボソームのヒト卵巣癌細胞に対する in vitroにおける 抗腫瘍効果を示す。縦軸はコントロール (薬剤濃度 0)に対する各処理濃度時の細胞 数の比 (％)を示す。横軸は抗体結合リボソームの濃度 (DXR濃度 ( g/ml)として）を示 す。
発明を実施するための最良の形態
[0011] 本発明において抗体とは、配列表の配列番号 1から 6のいずれかに記載のアミノ酸 配列を含むものをいい、好ましくは、重鎖の超可変領域に配列表の配列番号 1、 2お よび 3のアミノ酸配列を含み、軽鎖の超可変領域に配列表の配列番号 4、 5および 6 のアミノ酸配列を含むものが挙げられ、特に好ましくは、重鎖可変領域および軽鎖可 変領域が配列表の配列番号 7および 8のアミノ酸配列で表されるものが挙げられる。
[0012] ここで、超可変領域とは、免疫グロブリンの抗体としての特異性、抗原決定基と抗体 の結合親和性を決定するものであり、相補性決定部とも呼ばれる。従って、本発明に おいて、力かる超可変領域以外の領域は他の抗体由来であっても構わない。すなわ ち、これらの超可変領域を有する抗体は本発明の抗体に含まれると考えられる。
[0013] また、卵巣癌組織との反応性を損なわな 、範囲で一部のアミノ酸を置換、挿入、削 除あるいは追加する等の改変を行ったものも、本発明における抗体に含まれる。
[0014] 抗体としては、好ましくはモノクローナル抗体が挙げられ、特に好ましくはヒトモノクロ ーナル抗体が挙げられるが、これは本発明の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬 をヒトに投与する場合、異種動物の蛋白質ではない点で有利である。
[0015] ヒトモノクローナル抗体は、癌患者由来リンパ球とマウスミエローマ細胞とのハイプリ ドーマを作製し、上記の特定のアミノ酸配列を有するものを選択すること等によって 得ることができる。
[0016] ノヽイブリドーマは、 A. Imamらの方法 [Cancer Resarch 45, 263 (1985)〕に準じ て、まず、癌患者力 摘出された癌所属のリンパ節から、リンパ球を単離し、ポリェチ レングリコールを用いてマウスミエローマ細胞と融合して得られる。得られたノヽイブリド 一マの上清を用いて、バラフオルムアルデヒド固定した各種癌細胞株に対し、ェンザ ィムィムノアッセィにより陽性を示す抗体を産生するハイプリドーマを選択し、クロー- ングを行う。次に、ハイプリドーマの上清から、常法〔R. C. Duhamelら、 J. Immuno 1. Methods 31, 211 (1979)〕によりモノクローナル抗体を精製し、蛍光物質でラベ ルし、生癌細胞株、各種の赤血球、白血球等に対する反応性をフローサイトメトリー で検出することにより、生癌細胞株に対しては反応性を示す抗体を、赤血球、白血球 に対しては、反応性を示さない抗体を選別する。また、癌患者力 摘出される癌組織 力 単離される癌細胞、および同一患者の同一組織の非癌部力 単離される正常細 胞に対する反応性を比較して、癌細胞に、より多量の抗体が結合し、正常細胞には 反応がないか、もしくは健常人由来の抗体と同程度の反応性し力ない抗体を選別す る。
[0017] 力べして選別されたノヽイブリドーマが産生する抗体をコードする DNAの塩基配列は 、たとえば、以下の方法によって得られる。抗体産生ノ、イブリドーマから、チォシアン 酸グァ-ジン一塩化リチウム法〔Casaraら， DNA, 2, 329 (1983)〕で mRN Aを調製して 、オリゴ（dT)プライマーを用いてその cDNAライブラリーを作製する。次いで、 cDN Aに（dG)テーリングを行い、この dGテールにハイブリダィズするポリ Cと、既に遺伝 子が取得されて!ヽるヒト抗体重鎖遺伝子、軽鎖遺伝子の各々共通な配列部分をプロ ーブとして PCR法によって、抗体をコードする cDNAを増幅させる。その後、 DNAの 末端平滑化を行 、、電気泳動法によってゲル力も切りだした DNAを pUCl 19等のク ローニングベクターに挿入し、 Sangerらのジデォキシ法〔Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. A., 74, 5463 (1977)]によってその塩基配列が決定される。この塩基配列に基づいて 、上記特定のアミノ酸配列を有するものを選別できる。
[0018] 抗体は、遺伝子工学的な手法により作製することもできる。この場合の手法としては 、特に限定されるものではないが、以下の手法が挙げられる。本抗体を産生するハイ ブリドーマを牛胎児血清含有 eRDF、 RPMI 1640培養液等を用いて培養するか、 または、上記の特定の超可変領域を含む可変領域をコードする DNAにさらに重鎖 および軽鎖の定常領域をコードする DNAが夫々連結された遺伝子をィ匕学合成し、 その遺伝子の発現を可能とする公知の種々の発現ベクター、例えば、動物細胞にお ける発現ベクターとして、 PKCRH2〔三品ら、 Nature, 307, 605 (1984)〕から特開平 5- 304987号公報の図 1または図 2に示した手順で構築することができる pKCR( A E)Z Hと pKCRDに挿入し、 CHO細胞（チャイニーズハイスター卵巣細胞）等の宿主中 で発現させること〖こより得ることができる。例えば、重鎖遺伝子の両端に Hindlll部位 を付カ卩したものを pKCR( Δ Ε) /Ηの Hindlll部位に挿入し、またこのプラスミドの Sal I部位に DHFR遺伝子等の選択マーカー遺伝子を挿入する。一方、軽鎖遺伝子の 両端には EcoRI部位を付カ卩したものを pKCRDの EcoRI部位に挿入し、さらにこの プラスミドの Sail部位にも DHFR遺伝子を挿入する。両プラスミドを CHOdhfr- [Urla ub G. & Chasin L.A., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 77, 4216 (1980)〕等の細胞にリ ン酸カルシウム法で導入し、ヌクレオチドを含まない a MEM培養液等で増殖する細 胞から、さらに抗体を産生する細胞を選別することによって得ることができる。抗体は 、これらの細胞を培養した培養液から、プロテイン Aをセル口ファイン、ァガロース等の 支持体に結合させたカラム等に吸着し、溶出させること等によって精製される。
[0019] 抗体の重鎖および軽鎖の定常領域の塩基配列は、例えば Nucleic Acids Resea rch 14, 1779 (1986) , The Journal of Biological Chemistry 257, 1516 (19 82)および Cell 22, 197 (1980)に記載のものと同じ配列を有するものでよい。
[0020] 抗体は、全長抗体 (抗体全体)、抗体断片 (抗体フラグメント、例えば、 Fab'、 F(ab')
2
、 scFv (—本鎖抗体)等)、誘導体化抗体または修飾化抗体等を包含しており、最も 広義に解釈しなければならないが、もっとも好ましくは F(ab')フラグメントが挙げられる
2
[0021] 抗体は、単独で用いても良ぐ薬剤等と複合ィ匕して用いても良い。薬剤と抗体を複 合化する場合は、抗体と直接結合する方法、スぺーサーを介して薬剤と結合する方 法、薬剤を封入したリボソームと抗体を結合する方法等が挙げられるが、好ましくは 薬剤を封入したリボソームと抗体を結合する方法が挙げられる。
[0022] 本発明においてリボソームとは、例えば、天然レシチン (例えば、卵黄レシチン、大 豆レシチン）ゃジパルミトイルフォスファチジルコリン（DPPC)、ジミリストイルフォスフ ァチジルコリン（DMPC)、ジステアロイルフォスファチジルコリン（DSPC)、ジォレオ ィルフォスファチジルコリン（DOPC)、ジミリストイルフォスファチジルエタノールァミン (DMPE)、ジパルミトイルフォスファチジルエタノールァミン（DPPE)、ジォレオイル フォスファチジルエタノールァミン（DOPE)、ジパルミトイルフォスファチジン酸（DPP A)、ジパルミトイルフオファチジルグリセロール（DPPG)、ジミリストイルフォスファチジ ン酸 (DMPA)等のリン脂質、スフインゴ糖脂質、グリセ口糖脂質等の糖脂質、脂肪酸 、両親媒性ジアルキルジメチルアンモ -ゥム (dialkyl dimethylammnonium amphiphiles )、ポリグリセロールアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル等（Lipo some Technology, 2nd edition, vol.1, 141, 1993)、アルキルグリコシド、アルキルメチ ルグルカミド、アルキルシュ一クロースエステル、ジアルキルポリオキシエチレンエー テル、ジアルキルポリグリセロールエーテル等（Liposome Technology, 2nd edition, v ol.l, 141, 1993)、ポリオキシエチレン ポリ乳酸等の両親媒性ブロック共重合体等（ 特表平 6-508831号公報)等の脂質によって構成される力 これらに限定されることは ない。これらの脂質は単独で、または 2種以上を組み合わせて用いることができ、さら にコレステロール等の非極性物質、 DC— chol (3 β - [Ν- (Ν',Ν'- dimethylaminoethyl) carbamoyllcholesterol)等のコレステロール誘導体と組み合わせ用いてもよ！、。
[0023] リボソームの製造方法は、特に限定されず、当業者に利用可能な方法はいずれも 適用可能である。また、リボソームの形態も特に限定されず、いかなる形態であっても よい。例えば、ガラス壁に付着させた脂質薄膜に水溶液を加え、機械的振盪を加え て形成するマルチラメラリボソーム（ML V)；超音波処理法、エタノール注入法、フレ ンチプレス法により得られるスモールュ-ラメラリボソーム（SUV)；界面活性剤除去 法、逆相蒸発法 (リボソーム、砂本順三ら、南江堂、 1998)、 MLVを均一孔径を有す るメンブランから加圧により押し出すイクストゥルージョン法等によって得られるラージ ュ-ラメラリボソーム（LUV)のいずれであってもよい（Liposome Technology, 2nd edit ion, vol.1, 141, 1993)。リボソームの粒径は、例えば、 300nm以下、好ましくは 30力 ら 200nm程度である。
[0024] 本発明において薬剤をリボソームに導入する方法は、特に限定されず、当業者に 利用可能な方法はいずれも適用可能である。例えば、リボソーム形成時に水溶液と して添加してリボソーム内部に封入してもよい。また、リボソーム形成後、ベジクル内 外に pH勾配等の濃度勾配を形成し、このポテンシャルを駆動力としてイオンィ匕可能 な抗腫瘍性物質をリボソーム内部に取り込ませる方法（Cancer Res., 49, 5922, 1989; BBA, 455, 269, 1976)等を用いることができる。
[0025] 本発明において抗体をリボソームに結合させる方法は、特に限定されるものではな いが、抗体をリボソームの表面に結合させることが好ましぐ精製抗体に疎水性の物 質を結合させ、リボソームに挿入する方法、ホスファチジルエタノールァミンと抗体と をダルタールで架橋させる方法等がある力 好適には、抗体にチオール基を付与し た後、リボソームのマレイミド基と該チオールィ匕抗体とを反応させることによって、リポ ソームを抗体で修飾する方法が挙げられる。抗体へのチオール基の付与は、抗体の アミノ基に対して、蛋白質のチオールィ匕に通常用いる N-スクシンィミジル- 3-(2-ピリジ ルジチォ）プロピネート（SPDP) (Carlsson, J., et al.， Biochem. J" 173, 723, 1978) やイミノチオラン、メルカプトアルキルイミデート（Traut, R.R., et al.， Biochemistry, 12, 3266, 1973)等の化合物を反応させる方法により行なうことができる。
[0026] また、抗体由来のィォゥ含有基、すなわち、抗体の内在性ジオール基を反応させる こともでき、抗体活性の維持の点から内在性ジチオール基を用いる方法は好適であ る。抗体の内在性ジチオール基は、それを還元してチオール基とすることによりマレ イミド基と反応させることができる。例えば、 IgGを用いる場合はペプシン等の酵素で F(ab' )化し、さらにジチオスレィトール等で還元して得られる Fa に生じるチオール
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基をリボソームとの結合反応に利用することができる（Martin, F.J., et al.， Biochemistr y, 20, 4229, 1981)。 IgMの場合には、ミラーらの方法 (J. Biol. Chem., 257, 286, 196 5)に準じ、緩和な条件で J鎖を還元して得られる IgMsの Fc部分のチオール基をリポ ノームとの結合に利用すればよ 、。特開平 5-304987号公報に記載された GAH抗体 を用いる場合には、 F(a ）を用いることが好適である。チオール基が付与された抗体
2
等の蛋白質とマレイミド基を含むリボソームとの結合は、通常には、中性の緩衝液 (p
H6. 5〜7. 5)中で 2〜16時間反応させることにより達成される。
[0027] 本発明においてリボソームに対する抗体の結合量は、マレイミドィ匕脂質 1モルに対 して、 0. 1モル％力 約 2モル％程度が挙げられる力 好ましくは 0. 1〜1. 6モル％
、より好ましくは 0. 4〜0. 7モル0 /0が挙げられる。
[0028] 本発明にお!/、てリボソームは、特に限定されるものではな 、が、上記ポリアルキレン グリコール部分を含む化合物がリボソーム表面のマレイミド化脂質にチォエーテル結 合を介して結合した形態を有して 、ることが好ま 、。ポリアルキレングリコール部分 を含む化合物としては、ポリエチレングリコール基を有し、末端にチオールィ匕可能な 化合物または末端にメルカプト基を有する化合物を挙げることができる。具体的には 、例えば、ポリアルキレングリコール基をトリァジンに結合したィ匕合物、さらに該トリアジ ンがアミノ酸等により置換されたィ匕合物を挙げることができる。この際、ポリアルキレン グリコール基を 2つ有する化合物（2本鎖)であってもよ 、。
[0029] 本発明においてリボソームに対するポリアルキレングリコール部分を含む化合物の 結合量は、特に限定されず、残存マレイミド化脂質に対して過剰に反応させてもよい 力 ポリアルキレングリコールの好ましい結合量としては、全脂質に対して 0. 28-0. 90モル％程度、より好ましくは 0. 28-0. 56モル％程度、マレイミド化脂質に対して は 15〜50モル0 /0程度、より好ましくは 15〜30モル0 /0程度であり、 DPPCに対して 0 . 44〜： L 45モル0 /0程度、より好ましくは 0. 44〜0. 89モル0 /0程度である。
[0030] 本発明においてポリアルキレングリコールとは、例えば、ポリエチレングリコール（PE G)、ポリプロピレングリコール等が挙げられる力 好ましくはポリエチレングリコールが 挙げられる。ポリエチレングリコールを用いる場合には、分子量が 2, 000〜7, 000ダ ルトン程度のものが好ましぐ約 5, 000ダルトン程度のものが最も好ましい。
[0031] 上記ポリアルキレングリコール部分を含む化合物がリボソーム表面のマレイミド化脂 質にチォエーテル結合を介して結合した形態を有している場合には、通常、ポリアル キレングリコール部分を含む化合物にチオール基を導入した後、この化合物をリポソ ームのマレイミド基と反応させることにより、ポリアルキレングリコールを結合させたリポ ソームを製造することができる。
[0032] チオール基が導入されたポリアルキレングリコール部分を含む化合物の製造には、 ポリアルキレングリコールとしてポリエチレングリコールを用いる場合には、例えば、モ ノメトキシポリオキシエチレンァミンと各種チオールカルボン酸とを脱水縮合する方法 ；モノメトキシポリオキシエチレンァミンに SPDPでピリジルジチォプロピオ-ル基を導 入し、さらに還元する方法;モノメトキシポリオキシエチレンァミンにイミノチオランによ りチオール基を導入する方法；モノメトキシポリオキシエチレンカルボン酸の活性エス テルと各種チオールアミンを結合させる方法；ポリエチレングリコールトリァジン誘導 体をチオールァミンと縮合する方法等を利用することができる。さらに具体的には、 2, 4-ビス（ポチエチレングリコール) -6-クロ口- S-トリアジン (活性化 PEG2 (生化学工業 株式会社製) )をシスチンと反応させ、さらに還元してシスティン結合活性ィ匕 PEG2を 得ることができる。
[0033] 本発明の好ましい実施態様では、抗体およびポリアルキレングリコール部分を含む 化合物とが結合されたリボソームが使用され、これを製造するためには、まず、マレイ ミド基を有するリボソームに対して中性の緩衝液中でチオールィ匕抗体を反応させる。 例えば、リボソームを構成する全脂質 lOOmgあたり 0. 5〜5. 3mg、好ましくは 0. 5 〜4. 5mg、より好ましくは 1. 2〜2mgの抗体が結合するように、すなわちチオール化 抗体をマレイミド基 (マレイミド化脂質） 1モルに対して、 0. 1モル％力 約 2モル％程 度、好ましくは 0. 1〜1. 6モル0 /0、より好ましくは 0. 4〜0. 7モル0 /0反応させればよ い。ついで、残存しているマレイミド基に対してチオール化ポリアルキレングリコール 部分を含む化合物を反応させ、抗体とポリアルキレングリコール部分を含む化合物と が結合したリボソームを製造することができ、具体的には、マレイミドィ匕脂質基 1モル に対して、 15モル0 /0から 50モル0 /0、好ましくは 15〜30モル0 /0 (全脂質に対して 0. 2 8〜0. 90モノレ0 /0、好ましく ίま 0. 28〜0. 56モノレ0 /0、 DPPCを用!ヽる場合に ίま、 DPP Cに対して 0. 44〜： L 45モノレ0 /0、好ましくは 0. 44〜0. 89モノレ0 /0)のチ才ーノレィ匕ポ リアルキレングリコール部分を含む化合物を加え、抗体とポリアルキレングリコール部 分を含む化合物が結合したリボソームを製造することができる。
[0034] 本発明にお ヽて薬剤とは、診断薬または抗腫瘍性物質が挙げられる。
[0035] 本発明にお 、て診断薬とは、インジユームゃテクネシユウムなどの放射性元素;ガド リニュームゃョードなどの造影剤などが挙げられる。
[0036] 本発明にお 、て抗腫瘍性物質とは、種類は特に限定されな 、が、例えば、ドキソル ビシン（アドリアマイシン）、ダウノマイシン、ビンブラスチン、シスプラチン、ネダプラチ ン、 5—フルォロウラシル（5— FU)等の抗腫瘍剤 (抗癌剤）；ョード 131などの放射性 物質；リシン Α、ジフテリアトキシン等の毒素；アンチセンス RNA；並びにそれらの薬学 的に許容し得る塩および誘導体等を用いることができる。これらの物質は、市販品を 購入するか、または、それぞれ公知の方法により適宜製造することにより得ることがで きる。
[0037] 上記の薬学的に許容し得る塩としては、薬学的に許容し得る多価陰イオン性物質と の塩、例えば、クェン酸塩、酒石酸塩、グルタミン酸塩、およびそれらの誘導体との塩 が好ましい。
[0038] 抗体が結合した薬剤含有リボソームは、公知の方法、例えば脱水法 (WO8806441 号公報）、安定化剤を加え液剤として用いる方法 (特開昭 64-9931号公報）、凍結乾 燥法 (特開昭 64-9931号公報)等により製剤化することができ、卵巣癌の診断および Zまたは治療のために、血管内投与、局所投与等の方法で患者に投与することがで きる。投与量は有効成分の抗腫瘍性物質の種類に応じて適宜選択することができる 力 例えばドキソルビシンを封入したリボソームを卵巣癌の治療のために投与する場 合には、有効成分量として 50mgZkg以下、好ましくは lOmgZkg以下、より好ましく は 5mgZkg以下で用いることができる。
実施例
[0039] 以下、実施例に基づき本発明を具体的に説明するが、本発明はその要旨を超えな い限り以下の実施例に限定されるものではない。
[0040] 実施例 1
特開平 5-304987号公報（実施例 1、 2、 3)に記載の配列表の配列番号 1から 6のアミ ノ酸配列を含む抗体 (以下、 GAH抗体と略すこともある）にピオチンィ匕試薬 (アマシャ ム社製)を用いてピオチンィ匕標識を行った。ヒト卵巣癌組織 (国立がんセンター中央 病院病理部より入手)及び周辺の非癌部糸且織（国立がんセンター中央病院病理部よ り入手)のパラフィン切片を脱パラフィン処理し、 5%- BSA/PBS溶液に室温で 1時間 浸してブロッキングを行った後、 100 /z g/mlのピオチン化 GAH抗体溶液と 37°Cで 2時 間反応させた。切片を PBSで洗浄し、 4 g/mlの PerCP (ベリジニンクロロフィルプロ ティン)標識ストレプトアビジン溶液 (Becton/Dickinsin社製）と遮光下、氷冷中で 30分 間反応させた。 GAH抗体の卵巣癌組織切片に対する反応性は、蛍光顕微鏡を用い 、励起波長 490nmにおける 680nmの PerCPの赤色蛍光として検出した。
[0041] その結果を図 1に示す。 A及び Cに示すように卵巣癌組織切片では GAH陽性である 明確な赤色染色像が見られたが、 B及び Dの非癌部組織では GAH抗体の反応は認 められず、赤色染色像は見られなかった。
[0042] 実施例 2
対照用抗体として、ヒト免疫グロブリン (IgG)を用いて実施例 1と同様にピオチンィ匕 抗体を作製し、 GAH抗体及び対照抗体を用いてヒト卵巣癌組織切片を染色した (図 2)。 [0043] その結果、 GAH抗体で認められた赤色染色像に示されるような、強 ヽ陽性反応（ 赤色染色）は対照抗体では検出されな力 た。
[0044] 実施例 3
ヒト卵巣癌組織切片に対して、実施例 1と同様に GAH抗体を反応させ赤色蛍光の 強度、ならびに分布カゝら陽性、陰性を判断した。
[0045] その結果、 GAH抗体は 62例のヒト卵巣癌組織切片中 57例を陽性の赤色に染色し た。代表例を図 3 (A:漿液性腺癌、 B :類内膜癌、 C :淡明細胞癌、 D :ムチン性腺癌） に示す。
[0046] 以上より、 GAH抗体はヒト卵巣癌組織に対して特異的に反応することが明らかとな つた o
[0047] 実施例 4
WO00/64413号公報（実施例 1)に記載の方法に準じて、ドキソルビシン (DXR) (協 和発酵社)封入リボソームを作製した。得られた DXR封入リボソームにチオールィ匕し た GAH抗体を結合させ、さらにチオールィ匕したポリエチレングリコール (PEG)を結合 さることで、 GAH抗体結合リボソームを作製した。
[0048] ヒト卵巣癌細胞 ES— 2 (ATCC NO.CRL-1978)を用い上記抗体結合ィムノリポソ一 ムの in vitroにおける抗腫瘍効果を検討した。細胞培養プレートに播種した細胞株に 、抗体結合リボソームを図 4に示す濃度 (DXR濃度 ( g/ml)として表示)で添加した。 48時間培養した後、薬剤を除去し、 MTT法 (Green, L. M., et al. J. Immunol. Method s 70:257-268, 1984)により細胞数を測定した。
[0049] その結果、抗体結合リボソームの添加濃度が増加するに従って細胞数が減少した
[0050] 以上より、 GAH抗体結合リボソームには、卵巣癌細胞増殖の抑制効果があることが 明らかとなった。
産業上の利用可能性
[0051] 本発明によれば、抗体の特異的反応性により、胃癌、大腸癌、乳癌に加え、卵巣癌 に対しても有効な卵巣癌の予防および Zまたは治療薬が提供可能である。
[0052] なお、本出願は、 日本特許出願 特願 2004— 269757号を優先権主張して出願 されたものである。

Claims

請求の範囲
[I] 配列表の配列番号 1から 6の 、ずれかに記載のアミノ酸配列を含む抗体を含有する 卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
[2] 抗体が、重鎖の超可変領域に、配列表の配列番号 1、 2および 3のアミノ酸配列を含 有し、軽鎖の超可変領域に、配列表の配列番号 4、 5および 6のアミノ酸配列を含有 するものである請求項 1に記載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
[3] 抗体が、重鎖可変領域に配列表の配列番号 7のアミノ酸配列を含有し、軽鎖可変領 域に配列表の配列番号 8のアミノ酸配列を含有するものである請求項 1または 2に記 載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
[4] 請求項 1から 3のいずれかに記載の抗体と薬剤を内包するリボソームを含有する卵巣 癌の診断および Zまたは治療薬。
[5] 抗体が、チォエーテル基を介して、リボソームに結合している請求項 4に記載の卵巣 癌の診断および Zまたは治療薬。
[6] 抗体が、チォエーテル基を介して、脂質末端の一部がマレイミドィ匕されたリボソーム に結合している請求項 4または 5に記載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
[7] 抗体力 マレイミドィ匕脂質 1モルに対して 0. 1〜2モル％結合している請求項 6に記 載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
[8] 抗体が、 F(ab')フラグメントである請求項 4から 7のいずれかに記載の卵巣癌の診断
2
および Zまたは治療薬。
[9] リボソームが、ポリアルキレングリコール部分を含む化合物を結合している請求項 4に 記載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
[10] ポリアルキレングリコール部分を含む化合物力 リボソームに含まれるマレイミド化脂 質 1モルに対して 15〜50モル％結合している請求項 9に記載の卵巣癌の診断およ び Zまたは治療薬。
[II] ポリアルキレングリコール部分を含む化合物が 2つのポリアルキレングリコールを有す る化合物である請求項 9または 10に記載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
[12] ポリアルキレングリコール力 ポリエチレングリコールである請求項 9から 11のいずれ かに記載の卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
[13] ポリエチレングリコール力 分子量 2000〜7000ダルトンである請求項 12に記載の 卵巣癌の診断および Zまたは治療薬。
[14] 薬剤が、抗腫瘍性物質である請求項 4に記載の卵巣癌の治療薬。
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