WO2006001502A1

WO2006001502A1 - バトロキソビンを含有する悪性腫瘍局所浸潤抑制剤

Info

Publication number: WO2006001502A1
Application number: PCT/JP2005/012142
Authority: WO
Inventors: Hirobumi Senga; Yongling Wan; Lishui Chang
Original assignee: Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2004-06-24
Filing date: 2005-06-24
Publication date: 2006-01-05
Also published as: JP4673309B2; JPWO2006001502A1; RU2362582C2; EP1774976A4; AU2005257487A1; EP1774976A1; US20070104706A1; CA2571419A1; CN1980690B; US7691371B2; RU2007102570A; HK1106142A1; EP1774976B1; CN1980690A

Abstract

　バトロキソビンを含有することにより、悪性腫瘍局所浸潤を抑制することができる悪性腫瘍局所浸潤抑制剤、及び、悪性腫瘍組織の周囲にカプセル様組織を形成し又はその形成を促進することができる悪性腫瘍組織カプセル化剤を提供する。

Description

明細書

バトロキソビンを含有する悪性腫瘍局所浸潤抑制剤技術分野

本発明はバトロキソビンを含有することを特徴とする悪性腫瘍局所浸潤抑制剤及び悪性腫瘍組織力プセル化剤に関する。 · 背景技術

近年、悪性腫瘍の治療は外科的手術、放射線治療あるいは化学療法の進歩により、原発癌の除去に対する成功率が向上して、確実に進歩している。しかしながら、早期の悪性腫瘍であっても悪性腫瘍細胞が隣接組織 ·臓器へ局所浸潤し、散在していることはよく見られる。この場合、原発巣の悪性腫瘍組織を外科的に除去しても、残存している浸潤悪性腫瘍細胞により悪性腫瘍が再発し、結果として死亡する場合が少なくない。特に、被浸潤臓器が重要な臓器の場合は、浸潤悪性腫瘍細胞を正常組織と共に除去することができないため悪性腫瘍の再発率が高く、死亡率も高くなる。また、重要臓器に悪性腫瘍が発生した場合に、局所浸潤を回避すベく正常組織を含めた広範囲の組織を摘出すると、重要臓器の機能が喪失するという問題もあった。また、黒色腫、肺癌、肝癌及び脬癌などの悪性度の高い腫瘍は早期発見が難しく、腫瘍診断時には広範囲に悪性腫瘍の局所浸潤が認められ、手術治療を受けられないケースが非常に多い。

これらの悪性腫瘍の局所浸潤に対して、放射線治療は良好な結果を示していない。また、現在、臨床で使用されているアドリアマイシン（adriamycin) 等の化学療法剤は、そのほとんどが悪性腫瘍細胞を直接攻撃して薬効を発揮するものであるが、同時に正常細胞をもターゲットとするので、副作用が強く、臨床上の問題点になっているのが現実である。したがって、新しい悪性腫瘍局所浸潤抑制剤が望まれている。

ここで、悪性腫瘍の進行段階と局所浸潤とは下記の関係にあると一般的に考えられている。

( 1 ) 悪性腫瘍の早期段階では、細胞分裂による悪性腫瘍細胞の増殖が起こり、腫瘍が成長する。これは、異形成 (dysplasia)として観察される。この段階において、病理組織学的には増殖悪性腫瘍細胞は局所的に存在しており、周囲の正常組織とは明確に識別することができる。また、多くの場合、悪性腫瘍組の周囲に力プセル様組織が形成される。

力プセル様組織は、悪性腫瘍組織と正常組織との相互作用によって形成する結合組織であり、悪性腫瘍組織と正常組織との間を仕切り、あたかも悪性腫瘍組織をカプセルで包囲するように.見える組織である。カプセル様組織で包まれた悪性腫瘍は外科的手術による摘出が極めて容易であり、かつ、悪性腫瘍細胞の取りこぼしも少ないので、摘出後の悪性腫瘍の再発は殆どない。

( 2 ) しかしながら、悪性腫瘍が進行するとカプセル様組織が消失し、悪性腫瘍組織から隣接する周囲の正常組織 ·器官への局所浸潤が起こり、悪性腫瘍の広範囲への拡散が起こる。この段階になると、外科的摘出による治療は困難となる。上記の悪性腫瘍の進行段階と局所浸潤との関係に鑑み、カプセル様組織の形成を促進することによる悪性腫瘍治療法の開発が臨床上有用であるとの考えが示唆されていた。しかしながら、実際には悪性腫瘍の局所浸潤のみに着目した悪性腫瘍周囲のカプセル様組織形成化の研究及びその形成促進薬剤の開発は行われていなかった（例えば、 Clin Expl Metastasis 7:277-282, 1989 を参照）。これは、当該技術分野において、悪性腫瘍の局所浸潤は、悪性腫瘍転移過程の一部であり、悪性腫瘍の転移を抑制する薬剤であれば局所浸潤も抑制することができると一般的に考えられていたためである。

ところが、最近になって、局所浸潤過程を含まない腫瘍転移の経路が多くの悪性腫瘍で発見された（例えば、 BMC Medicine, 2(9) :1-8, 2004 を参照）。例えば、局所浸潤はみられないが転移を起こす悪性腫瘍の存在を臨床的に確認した報告がある（例えば、 Vircho s Arch Pathol Anat 390: 121-126, 1981 及び Surgery Today 25: 369-372， 1995 を参照)。更に、悪性腫瘍の局所浸潤抑制には有効ではあるが転移には効果がなく、むしろ転移を促進する薬剤があることも報告されている（例えば、 Breast Cancer Res Treat 40:209-223, 1996 を 5参照）。逆に、悪性腫瘍の転移は抑制するが局所浸潤は抑制しない薬剤の in vivo実験の報告もある（例えば、 Clinical & Experimental Metastasis 19: 95-105, 2002 を参照)。これらの報告は、悪性腫瘍の局所浸潤過程は転移過程の中に組み込まれておらず、局所浸潤と転移とは別個の異なる過程により起こる現象であることを示唆している。 ■ -

• 前記の観点とは別に、悪性腫瘍と凝固線溶系との密接な関係が、数多くの基礎研究及び臨床研究により示唆されている。例えば、悪性腫瘍患者では、血漿フィブリノ一ゲンの増加、血液粘度の増加及び血液レオ口ジ一の異常等の凝固線溶系の異常により微小循環障害を引き起こすことが知られている。また、血漿フイブリノーゲンの増加又は悪性腫瘍細胞が自らフイブリノーゲンを分泌することにより、悪性腫瘍組織の細胞外マトリクスにフィプリノ一ゲン又はフイプリンの沈着が発生し、これが細胞外マトリクスの一員として悪性腫瘍細胞の増殖、浸潤及び転移に促進的な作用を果たしていることが報告されている（例えば、 Cancer Research 60:2033-2039, 2000、 Ann N Y Acad Sci 936:406-425, 2001 及び Blood 96:3302-3309， 2000を参照）。

かかる悪性腫瘍と凝固線溶系との関係に着目し、 Bothrops atrox moo eni の毒液に由来するトロンビン様セリンプロテア一ゼであるバトロキソビンが、他のトロンビン様セリンプロテア一ゼであるアンクロヅド（Ancrod)と同様に、悪性腫瘍の増殖及び転移を抑制することが報告されている（例えば、 Eur J Cancer 16 :919-923, 1980 を参照)。しかしながら、この報告では、悪性腫瘍増殖の抑制効果の指標として腫瘍重量を採用し、悪性腫瘍転移の指標として転移先臓器での転移巣数を採用しており、悪性腫瘍の局所浸潤については全く評価をしていない。また、悪性腫瘍の転移と凝固線溶系との関係については、フイブリノ一ゲン欠損マウスを用いた実験モデルにおいて、悪性腫瘍転移はフイブリノ一ゲン及びフィプリンに依存するが、悪性腫瘍の増殖及び局所浸潤はフイブリノ一ゲンに依存していないことが報告されている（例えば、 Blood 96 :3302 - 3309， 2000 を参照）。しかしながら、ノトロキソビンと悪性腫瘍の局所浸潤との関連性については何ら言及していない。発明の開示 .

したがって、本発明は、悪性腫瘍の局所浸潤を抑制することができる新しい薬剤、及び、悪性腫瘍組織周辺にカプセル様組織を形成させ又はカプセル様組織の形成を促進することができる新しい薬剤を提供することを目的とする。

上記課題を解決するために、本発明者等は、インビボ.（in vivo) における悪性腫瘍の局所浸潤について鋭意研究を行つたところ、バトロキソビンが悪性腫瘍局所浸潤を抑制することができること、及び、悪性腫瘍組織の周囲にカプセル様組織を形成させ又はその形成を促進することができることを見出した。本発明は、この知見に基づいてなされたものである。

すなわち、本発明は、

( 1 ) バトロキソビンを含有することを特徴とする悪性腫瘍局所浸潤抑制剤、及び

( 2 ) バトロキソビンを含有することを特徴とする悪性腫瘍組織カプセル化剤に関するものである。図面の簡単な説明

図 1は、バトロキソビンを投与しない B16- BL6黒色腫担癌マウスの固形癌組織の顕微鏡写真である。

図 2は、バトロキソビンを投与した B16- BL6黒色腫担癌マウスの固形癌組織の顕微鏡写真である。 '

図 3は、バトロキソビンを投与しない LA795肺癌担癌マウスの固形癌組織の顕微鏡写真である。

図 4は、.バトロキソビンを投与した LA795肺癌担癌マウスの固形癌組織の顕微鏡写真である。発明を実施するための最良の形態 .

以下、本発明について詳細に説明する。

本発明の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤及び悪性腫瘍組織カプセル化剤は、パトロキソビンを有効成分として含有することを特徴とする。

ノトロキソビンは、 Bothrops atrox moo.jeni の毒液に由来するトロンビン様セリンプロテア一ゼである。ノトロキソビンは、フイブリノ一ゲンからフイブリノぺプチド A (fibrinopeptide A)のみを遊離し、 Des A フイブリン（フィブリン I ともいう）を生成する（例えば、 Thromb Haemost 36: 9-13, 1976及び Thromb Diath Haemorrh 45 Suppl :63-68， 1971 を参照）。また、バトロキソビンの一次構造は既に決定されている（例えば、 J Biol Chem 262(7) : 3132-3135, 1987 を参照)。

ノトロキソビンは、トロンビンと同様にセリンプロテアーゼである。しかしながら、ノトロキソビンは、フィプリノーゲンからフイブリノペプチド Aのみを遊離して Des Aフイブリンを生成するのに対し、トロンビンはフイブリノ一ゲンからフイブリノべプチド A及びフィプリノぺプチド Bを遊離してフィブリンを生成する点でトロンビンとは相違する。また、ノトロキソビンはフイブリノ一ゲン以外の血液凝固因子に作用しないが、トロンビンは他の血液凝固因子に作用する点でも相違する。

本発明に使用するバトロキソビンは天然物であってもよく、遺伝子組み換え製品であってもよい。

ノ 'トロキソビンは、それ自体公知物質であり、例えば、特公昭 5 7 - 1 0 7 1 8号公報（特許第 1 1 1 8 1 2 9号）に記載の方法にしたがい調製可能である。又は、市場（東菱薬品工業株式会社及びその子会社である Beijing Tobishi Pharmaceutical Co. , Ltd. , Beijing, China製）において容易に入手可能である。

本発明の対象となるのは悪性腫瘍である。悪性腫瘍は発生母組織により上皮性の悪性腫瘍と非上皮性の悪性腫瘍とに大別することができる。非上皮性の悪性腫瘍は更に、間葉系組織由来の悪性腫瘍、神経組織由来の悪性腫瘍及び未分化細胞の悪性腫瘍とに分類することができる。以下に、各悪性腫瘍の具体例を例示する。上皮性の悪性腫瘍

腺癌（腺上皮由来の癌腫であり、胃、腸、膝、気管、肺、乳腺、卵巣、子宮体、前立腺など、体の各所に発生するもので、ヒトの癌の 70〜80%を占めると推測される）、扁平上皮癌（重層扁平上皮由来、例えば表皮、口唇、舌、咽頭、食道、肛門、外陰、子宮頸部などの上皮組織に発生する癌、非小細胞肺癌に分類される肺扁平上皮癌)、基底細胞癌（皮膚及び付属器の基底細胞由来)、移行上皮癌（移行上皮由来、例えば膀胱癌)、肝細胞癌（肝実質細胞由来)、腎細胞癌（腎上皮由来)、胆管癌（胆管由来)、絨毛癌（胎盤上皮由来）非上皮性の悪性腫瘍

間葉系組織由来の悪性腫瘍

線維肉腫（結合組織及び線維組織由来)、脂肪肉腫（結合組織及び脂肪組織由来)、軟骨肉腫（結合組織及び軟骨組織由来)、骨肉腫（結合組織及び骨組織由来)、血管肉腫（血管由来)、リンパ管肉腫（リンパ管由来)、骨髄性白血病（造血細胞由来)、単球性白血病（造血細胞由来)、悪性リンパ腫（リンパ組織由来)、リンパ性白血病（リンパ組織由来)、形質細胞種（多発性骨髄腫）（リンパ組織由来)、ホジキン細胞（リンパ組織由来)、平滑筋肉腫（平滑筋由来)、横紋筋肉腫 (横紋筋由来）神経組織由来の悪性腫瘍 .. · 神経芽腫（神経芽由来)、髄芽細胞腫（髄芽細胞由来)、悪性星状膠細胞腫（星状膠細胞由来)、網膜芽腫（網膜芽細胞由来)、膠芽細胞腫（膠芽細胞由来)、悪性神経革 i腫（シュワン細胞由来)、黒色腫（神経外胚葉由来）未分化細胞の悪性腫瘍

悪性奇形腫（全能細胞由来)、腎芽腫（腎芽細胞由来)、肝芽腫（肝芽細胞由来)、混合腫瘍（複数種の細胞由来）本発明の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤及び悪性腫瘍組織力プセル化剤は、これらの悪性腫瘍の中で、上皮性の悪性腫瘍、及び、非上皮性の悪性腫瘍である神経組織由来の悪性腫瘍、特に黒色腫及び肺癌に対して優れた効果を発揮することができる。

悪性腫瘍の局所浸潤とは、腫瘍細胞が被膜を破り、周囲の脂肪組織や他の結合組織へ浸潤することをいい、広範浸潤（原発巣から連続的に他の臓器へ浸潤すること）とは区別される。

悪性腫瘍組織のカプセル化とは、悪性腫瘍組織の周囲にカプセル様組織を形成することをいう。カプセル様組織とは、悪性腫瘍組織と正常組織との相互作用によって形成する結合組織であり、悪性腫瘍組織と正常組織との間を仕切り、あたかも悪性腫瘍組織をカプセルで包囲するように見える組織をいう。

悪性腫瘍組織の周囲にカプセル様組織を形成させることにより、悪性腫瘍の外科的治療の際には摘出範囲を少なくすることができるので手術を容易に行うことができる。更に、カプセル化により悪性腫瘍組織の完全摘出が容易になるので、結果として、取り残した残存浸潤悪性腫瘍細胞による腫瘍再発の予防をすることができる。また、重要臓器に悪性腫瘍が発生した場合でも、本発明によれば、悪性腫瘍組織の周囲にカプセル様組織を形成させることにより最小範囲での悪性腫瘍組織摘出が可能になるので、重要臓器の機能喪失を回避することができる。本発明の有効成分であるバトロキソビンが有する悪性腫瘍局所浸潤抑制作用と悪性腫瘍組織力プセル化作用との因果関係について、悪性腫瘍組織の力プセル化が認められなくても局所浸潤が抑制された例（下記実施例参照）があることから、悪性腫瘍組織のカプセル化は、悪性腫瘍局所浸潤抑制の必須要件ではないと考えられる。しかし、悪性腫瘍組織のカプセル化は、悪性腫瘍局所浸潤抑制に対して少なくとも促進的に働いていると考えられる。

本発明の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤及び悪性腫瘍組織力プセル化剤は、バトロキソビン単体からなるものであってもよく、その他の活性物質と組み合わせたものであってもよい。

その他の活性物質としては、フルォロウラシル（Fluorouracil). のような代謝拮抗剤、アドリアマイシンのような抗腫瘍抗生物質製剤、ダカルバジン (dacarbazine) のようなアルキル化剤、パクリ夕キセル (Paclitaxel) のような植物由来の制癌剤等が挙げられる。本発明の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤及び悪性腫瘍組織力プセル化剤の剤型としては、日局製剤総則にある剤型を適用でき、例えば直接体内に適用する注射剤（懸濁剤、乳剤を含む）；軟膏剤（油脂性軟膏、乳剤性軟膏（クリーム）、水溶性軟膏等を含む)、吸入剤、液剤（点眼剤、点鼻剤等を含む)、坐剤、貼付剤、パップ剤、ローション剤等の外用剤；又は、錠剤（糖衣、フィルム、膠衣を含む)、液剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤（細粒を含む)、丸剤、シロップ剤、トローチ剤等の内用剤等が挙げられる。これらの製剤は、日局製剤総則等に記載された方法で製剤化することができる。

また、本発明の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤及び悪性腫瘍組織カプセル化剤は、剤型に応じて医薬的に許容しうる固体状若しくは液体状の担体又は介入治療基材を含んでいてもよい。医薬的に許容しうる固体状若しくは液体状の担体としては、溶剤、安定化剤、保存剤、溶解補助剤、乳化剤、懸濁化剤、緩衝剤、等張化剤、着色剤、基剤、増粘剤、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、矯味剤等が挙げられる。

具体例としては、水及び、乳糖、白糖、果糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトールなどの糖'糖アルコール類、結晶セルロース、メチルセル口一ス、ェチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ビドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセル口ースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセル口一スアセテートサクシネート、カルメロ一ス、カルメロ一スカルシウム、カルメロ一スナトリウム、クロスカルメロ一スナトリウム、カルボキシメチルェチルセルロース、酢酸フ夕ル酸セルロースなどのセルロース及びその関連誘導体、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、アルファーイ匕デンプン、部分アルファ一化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルス夕一チナトリゥム、シクロデキストリン、プルランなどのデンプン及びその関連誘導体、カンテン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、セラヅク、トラガント、キサンタンガムなどの天然高分子（海草類、植物粘質物、タンパク質など)、ポリビニルピロリドン、アミノアルキルメ夕ァクリレ一トコポリマー、メタアクリル酸コポリマ一、カルボキシビ二ルポリマ一、ポリビニルアルコール、ジメチルポリシロキサンなどの合成高分子、ォリ一ブ油、カカオ脂、カルナウパロウ、牛脂、硬化油、ダイズ油、ゴマ油、ヅバキ油、パラ 'フィン、流動パラフィン、ミツロウ、白色ワセリン、ヤシ油、マイクロクリス夕リンワックスなどの油脂類、ステアリン酸、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、クェン酸トリエチル、トリァセチン、中鎖脂肪酸トリグリセリド、ハードフアット、ミリスチン酸ィソプロピルなどの脂肪酸及びその誘導体、グリセリン、ステアリルアルコール、セ夕ノール、プロピレングリコール、マクロゴールなどのアルコール及び多価アルコール、酸化亜鉛リン酸水素カルシウム、沈降炭酸カルシウム、合成ケィ酸アルミニウム、無水ケィ酸、カオリン、乾燥水酸ィ匕アルミニウムゲル、合成ヒドロタルサイト、酸化チタン、タルク、ベントナイト、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、硫酸アルミニウムカリウム、次没食子酸ビスマス、次サリチル酸ビスマス、乳酸カルシゥム、'重炭酸ナトリゥムなどの無機性物質及び金属塩化合物、ショ糖脂肪酸ェステル、ステアリン酸ポリオキシル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリォキシプロピレングリコ一ル、セスキォレイン酸ソルビ夕ン、トリオレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリソルべ一ト、モノステアリン酸グリセリン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴールなどの界面活性物質、色素、香料等が挙げられる。

介入治療としてはステント、人工血管等が挙げられる。

本発明の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤及び悪性腫瘍組織カプセル化剤の投与量は、通常、患者の体重、疾患の性質及び状態に依存して変化するが、例えば、成人に一日一回投与する場合、ノトロキソビンとして 1〜20 ノ Sトロキソビン単位 (Batroxobin Unit, 略して BU) である。

バトロキソビン単位は、ノロキソビンの酵素活性量を示す単位であり、 37°C で、標準ヒトクェン酸加血漿 0.3 mlにバトロキソビン溶液 0.1 mlを加えるとき、 19.0±0.2秒で凝固する活性量を 2 BUとするものである。

本発明の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤及び悪性腫瘍組織力プセル化剤の投与方法としては、ノ、"トロキソビンを適宜希釈して、点滴静脈内投与、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与又は局所投与することが好ましい。

ノトロキソビンのマウス、ラット、ゥサギ及びィヌに対する急性毒性（LD₅₀ (BU/kg) ) は以下の表 1 の通りである。急性毒性試験は、 Pharmacometrics (Oyoyakuri) 25:339-346,1983 に記載の方法にしたがい、ノトロキソビンの静脈内投与により評価した。バトロキソビンの急性毒性 (i.v. )

以下に実施例を示して具体的に説明するが、本発明は実施例により限定されるものではない。

[実施例 1 ] 黒色腫の局所浸潤に対するバトロキソビンの抑制効果

C57BL/6j マウス (Animal Institute of Academy of Medical Sciences, Beijing, China)で継代した局所浸潤性が高いマウス由来 B16-BL6悪性黒色腫細胞（固开癌細胞， Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing, China) を生理食塩水中に懸濁し、濃度 5 x l0⁶/mlの黒色腫細胞懸濁液を調製した。得られた黒色腫細胞懸濁液 0.2 mlを、 7週齢（体重 18〜20 g) の雄性 C57BL/6jマウスの右の側背部皮下へ接種し、担癌マゥスモデルを作製した。

作製した担癌マウスモデルを無作為に対照群（5 匹）とバトロキソビン群（10 匹）とに分け、投薬を行った。バトロキゾビン群では腫瘍細胞接種後 4 日から 20日まで隔日 1回 40 BU/kgバトロキソビンを腹腔内注射した。対照群ではパトロキソビンの代わりに同体積量の生理食塩水 (2 ml/kg) を腹腔内注射した。実験終了後（腫瘍接種後 20 日）に固形癌の腫瘍組織、周囲の皮膚及び筋肉を含む組織標本を採取し、ホルマリン固定後にパラフィン包埋し、へマトキシリン 'ェォシン染色標本を作製した。作製した標本を光学顕微鏡下で観察し、悪性腫瘍の局所浸潤に対するバトロキソビンの抑制効果を評価した。

( 1 ) 顕微鏡による観察

図 1に対照群の顕微鏡像（倍率 X200倍）を示す。図 2にバトロキソビン群の顕微鏡像（倍率 X 100倍）を示す（上図：腫瘍組織周囲のカプセル化像、下図：腫瘍組織周囲のカプセル化像（別のマウス））。

対照群では、黒色腫細胞（T ) と周囲の皮膚または筋肉（M) とが密接に接着し、黒色腫組織と筋肉とが殆ど分離できない状態となっていた（図 1 )。これはカプセル様組織が形成していないことを示している。

一方、ノトロキソビン群では、黒色腫細胞 ( T ) と筋肉（M) との間にカプセル様組織（結合組織）が見られた。かかるカプセル様組織の存在のため黒色腫細胞（T ) の浸潤は制限され、皮下結合組織及び脇腹筋への局所浸潤はほとんど見られなかった。（図 2、上図及び下図）。また、ノ 'トロキソビン群では、カプセル様組織が存在するため、黒色腫組織と周囲の皮膚及び筋肉との密接な接着が起こらず、腫瘍組織を皮膚及び筋肉から容易に分離することができ、丸ごと摘出することができた。

( 2 ) 局所浸潤の定量的評価

黒色腫細胞の局所浸潤を、脇腹筋層への局所浸潤の有無（局所浸潤有：陽性）により評価した。更に、黒色腫組織周囲のカプセル様組織の有無（カプセル様組織有：陽性）についても評価した。結果を表 2に示す。表 2 . 皮下移植した B16-BL6黒色腫の局所浸潤に対するバトロキソビンの抑制効果

*:P<0.05; 対照群との比較表 2より、対照とバトロキソビン群との間に、局所浸潤抑制及びカプセル様組織形成に関して明らかな有意差が認められた。これらの結果より、バトロキソビンは、黒色腫の局所浸潤を効果的に抑制することができること、及び、黒色腫組織の周囲に力プセル様組織を形成させ又はその形成を促進することができることが理解される。

[実施例 2 ]肺癌の局所浸潤に対するバトロキソビンの抑制効果

雄性 T739 マウス (Animal Institute of Academy of Medical Sciences, Beijing, China)で継代した局所浸潤性が高いマウス由来 LA795肺線癌細胞（固开癌細胞， Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing, China)を生理

3 食塩水中に懸濁し、濃度 5 xl0⁶/mlの肺癌細胞懸濁液を調製した。得られた肺癌細胞懸濁液 0.2 mlを、 7週齢（体重 18〜20 g) 雄性 T739マウスの右の側背部皮下へ接種し、肺癌担癌マウスモデルを作製した。

作製した肺癌担癌マウスモデルを無作為に対照群（18 匹）とバトロキソビン群（18匹）とに分け、投薬を行った。バトロキソビン群では腫瘍細胞接種後 2 日から 18日まで隔日 1回 40 BU/kgバトロキソビンを筋肉内注射した。対照群ではバトロキソビンの代わりに同体積量の生理食塩水 (2 ml/kg) を筋肉内注射した。実験終了後（腫瘍接種後 19 日）に固形癌の腫瘍組織、周囲の皮膚及び筋肉を含む組織標本を採取し、ホルマリン固定後にパラフィン包埋し、へマトキシリン ·ェォシン染色標本を作製した。作製した標本を光学顕微鏡下で観察し、悪性腫瘍の局所浸潤に対するバトロキソビンの抑制効果を評価した。

( 1 )顕微鏡による観察

図 3に対照群の顕微鏡像（倍率 X 200倍）を示す。図 4にバトロキゾビン群の顕微鏡像（倍率 X 100倍）を示す（上図：癌組織周囲のカプセル化像、下図：癌組織周囲のカプセル化像（別のマウス））。

'対照群では、肺癌細胞（T ) と周囲の筋肉（M) とが密接に混ざり、肺癌固形癌組織と筋肉とが殆ど分離できない状態となっていた（図 3 )。これはカプセル様組織が形成していないことを示している。

一方、バトロキソビン群では、肺癌細胞（T ) と筋肉（M) との間にカプセル様組織（結合組織）が見られた。かかるカプセル様組織の存在のため肺癌細胞 ( T ) の浸潤は制限され、皮下結合組織及び脇腹筋への局所浸潤はほとんど見られなかった。具体的には、図 4上図の右上にあるのは肺癌固形癌細胞（T) であり、カプセル様組織を挟んで写真の真ん中に斜めになつている組織は筋肉組織 (M) である。図 4下図の上から半分が肺癌固形癌組織（T ) であり、下の方は筋肉組織 (M) である。その癌組織と筋肉組織の間にカプセル様組織が見られる。また、バトロキソビン群では、カプセル様組織が存在するため、癌組織と周囲の皮膚及び筋肉との密接な接着が起こらず、癌組織を皮膚及び筋肉から容易に分離することができ、丸ごと摘出することができた。

( 2 ) 局所浸潤の定量的評価

肺癌細胞の局所浸潤を、脇腹筋層への局所浸潤の有無（局所浸潤有：陽性）により評価した。更に、肺癌組織周囲のカプセル様組織の有無（カプセル様組織有：陽性）についても評価した。結果を表 3に示す。表 3 . 皮下移植した LA795肺癌の局所浸潤に対するバトロキソビンの抑制効果

*:Pく 0.05、対照群との比較表 3より、対照群とバトロキソビン群との間に、局所浸潤抑制及びカプセル様組織形成に関して明らかな有意差が認められた。これらの結果より、パトロキソビンは、肺癌の局所浸潤を効果的に抑制することができること、及び、黒色腫組織の周囲に力プセル様組織を形成させ又はその形成を促進することができることが理解される。産業上の利用可能性

本発明は、前述の実施例で示されるように、悪性腫瘍の局所浸潤を効果的に抑制すること、及び、悪性腫瘍組織の周囲にカプセル様組織を形成させ又はその形成を促進することができる。そのため、悪性腫瘍の外科的治療の際には局所浸潤の抑制により摘出範囲を少なくすることができるので手術を容易に行うことができる。更に、悪性腫瘍組織の周囲にカプセル様組織を形成させることができるので、悪性腫瘍組織の完全摘出に貢献でき、従来の不完全な摘出を原因とする残存浸潤悪性腫瘍細胞による腫瘍再発の予防にも有利に使用することができる。また、放射線照射治療の際には放射線照射範囲を少なくすることができるので被爆線量を減量することができる。

したがって、本発明は、悪性腫瘍局所浸潤抑制剤及び悪性腫瘍組織カプセル化剤として利用可能である。

6

Claims

請求の範囲

1 . ノ'トロキソビンを含有することを特徴とする悪性腫瘍局所浸潤抑制剤。

2 . 悪性腫瘍が上皮性悪性腫瘍である、請求項 1に記載の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤。

3 . 悪性腫瘍が非上皮性悪性腫瘍である、請求項 1に記載の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤。

4 . 悪性腫瘍が神経組織由来の悪性腫瘍である、請求項 1に記載の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤。

5 . 悪性腫瘍が黒色腫又は肺癌である、請求項 1に記載の悪性腫瘍局所浸潤抑制剤。

6 . パトロキソビンを含有することを特徴とする悪性腫瘍組織カプセル化剤。

7 . 悪性腫瘍が上皮性悪性腫瘍である、請求項 6に記載の悪性腫瘍組織カプセル化剤。

8 . 悪性腫瘍が非上皮性悪性腫瘍である、請求項 6に記載の悪性腫瘍組織力プセル化剤。

9 . 悪性腫瘍が神経組織由来の悪性腫瘍である、請求項 6に記載の悪性腫瘍組織カプセル化剤。

1 0 . 悪性腫瘍が黒色腫又は肺癌である、請求項 6に記載の悪性腫瘍組織力プセル化剤。

7