WO2005094856A1 - Preparation and therapeutic uses of plants and plant extracts in the hylocereus genus - Google Patents

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WO2005094856A1
WO2005094856A1 PCT/FR2005/000769 FR2005000769W WO2005094856A1 WO 2005094856 A1 WO2005094856 A1 WO 2005094856A1 FR 2005000769 W FR2005000769 W FR 2005000769W WO 2005094856 A1 WO2005094856 A1 WO 2005094856A1
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plant
extract
hylocereus
lithiasis
preparation
Prior art date
Application number
PCT/FR2005/000769
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French (fr)
Inventor
Albert Rakoto-Ratsimamanga
Suzanne Ratsimamanga-Urverg
Kiban Cheuk
Hary Christian Rabemanantsoa
Jean Provost
Daniel Reisdorf
Jérôme BECQUART
Original Assignee
Cephymed
Institut Malgache De Recherches Appliquees (Mra)
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    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/33—Cactaceae (Cactus family), e.g. pricklypear or Cereus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/04—Drugs for disorders of the urinary system for urolithiasis
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    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention describes the use of a plant or an extract of a plant of the genus Hylocereus as a medicament, in particular for the prevention or treatment of lithiasis or related pathology. It also relates to processes for obtaining such extracts and compositions, as well as to biological compositions and extracts with therapeutic activity, in particular endowed with an anti-lithiasic activity, derived from these plants, including the isolated active molecules. of these extracts.
  • lithiasis designates the disease characterized by the formation of insoluble solid deposits (or "stones") composed of chemical substances and localized in an excretory apparatus. The local concentration of these substances may be due to their excessive absorption, a lack of elimination and / or an anatomical defect. Lithiasis is therefore not a pathology as such but the consequence of pathologies which can be very diverse (nutritional, digestive, renal, bone, etc.)
  • the excretory devices where these stones can form are mainly: - the urinary system: urolithiasis - the bile ducts: vesicular lithiasis (biliary, common bile duct) and more rarely: - the salivary ducts: salivary lithiasis - the lacrimal ducts - the pancreatic duct
  • the two major lithiasis are urolithiasis (stones localized in the urinary tract) and vesicular lithiasis (stones localized in the gallbladder).
  • the overall prevalence of urolithiasis is 10% in the adult population (% of people who have had a stone in their lives) and is equivalent in industrialized countries (Europe, USA. Japan). The annual incidence is 2 per 1000 inhabitants in France; it is slightly higher in the United States (3/1000).
  • Known risk factors are male (sex ratio M / F: 2/1), age (with a peak at 40-50 years), diet (rich in calcium and animal proteins) and dehydration .
  • the composition of stones varies according to their majority compound: calcium oxalate (75%), calcium phosphate (15%), uric acid (6%), struvite (3%) and cystine (1%). Thus, 90% of the calculations analyzed are of the calcium type.
  • the overall prevalence of vesicular lithiasis is 10-15% in France and 10% in the USA.
  • the annual incidence is 2 per 1000 inhabitants in France and 3.5 / 1000 in the USA.
  • Risk factors are female (sex ratio M / F: 1/2), age (with a peak at 40-60 years), metabolic disorders (obesity, digestive and nutritional disorders) and hormonal changes ( pregnancy, menopause).
  • Cholesterol is the main component of gallbladder stones.
  • the object of the present invention is to overcome this deficit by providing an effective drug and compositions (curative and preventive), non-toxic, without side effect and well tolerated.
  • the present invention relates to the use of a plant or an extract of a plant of the genus Hylocereus as a medicament.
  • the invention also relates to the use of a plant or an extract of a plant of the genus Hylocereus for the preparation of a pharmaceutical composition intended for preventing or treating lithiasis or similar or related affections.
  • the present invention further relates to compositions or medicaments comprising a biologically active plant or extract of a plant of the genus Hylocereus, as well as methods for preventing and treating lithiasis or related pathologies by administration to humans. or the animal of these drugs or compositions.
  • the invention also provides methods for obtaining extracts from plants of interest as well as methods for extracting and purifying therapeutically active molecules from said extracts or plants.
  • the invention thus relates to a process for obtaining a therapeutically active product comprising the implementation of one or more steps of purification or treatment of a sample of a plant of the genus Hylocereus in order to obtain one or more therapeutically active fractions or molecules, having in particular anti-lithiasic activity.
  • Another object of the invention relates to a method of extracting at least one product which is therapeutically active (preferably having anti-lithiasic activity) from a sample of a plant of the genus Hylocereus comprising the steps following: a) preparation of an extract from a sample of Hylocereus, b) fractionation of said extract obtained at the end of step a) using separation methods, and optionally c) isolation of the or active products.
  • Another particular and preferred subject of the invention relates to a process for the preparation of an active extract comprising the following steps: (a) preparation of an extract of the plant by drying and crushing of the whole plant or of the roots of a plant of the genus Hylocereus, (a ') maceration or infusion of the extract obtained at the end of step (a) in osmosis water at a temperature of between 20 and 150 ° C. approximately, and (a ") one or more successive filtration (s) of all or part of the product of step (a ') to obtain an active extract.
  • additional processing steps can be carried out, in particular of concentration, sterilization, lyophilization and / or conditioning, etc., to improve the properties or the qualities of the active agent.
  • the invention also relates to all products capable of being obtained at the end of one of the stages of a process as defined above, characterized in that they are endowed with an anti-lithiasic activity in man or animal.
  • the invention also relates to the use of a product capable of being obtained at the end of one of the steps of a process as defined above, for the preparation of a medicament intended for prevention or treatment lithiasis or related pathology.
  • the present invention describes for the first time the use of a plant or an extract of a plant of the genus Hylocereus as a medicament.
  • the inventors have for the first time demonstrated the powerful anti-lithiasic properties of products obtained from a plant of the genus Hylocereus. These products are particularly active when used in humans or animals suffering from renal, vesicular or parotid lithiasis.
  • the present invention describes various examples of methods for obtaining a medicament and a product which are therapeutically active (preferably exhibiting anti-lithiasic activity) from a plant of the genus Hylocereus. It is understood that the invention encompasses any process capable of being implemented by a person skilled in the art making it possible to obtain a product having anti-lithiasic properties in humans or animals, from such a plant.
  • Plants of the genus Hylocereus are probably native to the Caribbean, widespread in Central America and Mexico and widely introduced as a garden plant in tropical countries. This genus, which includes about 24 species, is currently considered invasive in many ecosystems.
  • the present invention can be implemented from plants or plant extracts belonging to the genus Hylocereus (cactaceae), including those belonging to the related genera of Hylocereus, in particular: Phyllocereus Miq., Cephalocereus Pfeiff., Cephalophorus Lem., Cleistocactus Lem ., Echinocereus Engelm., Echinonictanthus Lem., Echinopsis Zuc. and Pilocereus Lem.
  • Hylocereus trigonus (Haw.) Safford providing the best activity in humans.
  • the identified synonyms of Hylocereus trigonus which can also be used in the context of the present invention are the following: Hylocereus trigonus (Haw) Safford, Hylocereus antiguensis, Hylocereus napoleonis, Hylocereus plumieri, Cereus triangonus, Cereus napoleonis and Cereus plumieri.
  • a process for obtaining a therapeutically active product according to the invention comprises the implementation of one or more purification steps from a sample of a plant of the genus Hylocereus in order to obtain a or more therapeutically active fractions or molecules.
  • active or active More particularly designates within the meaning of the invention a product, an extract, a fraction or a molecule having an anti-lithiasic activity.
  • active product designates any fraction or molecule isolated from a Hylocereus plant, exhibiting anti-lithiasic activity.
  • extract designates, in the broad sense, any preparation or complex mixture, more or less purified and / or enriched, derived from a plant of the genus Hylocereus. It may for example be a crude extract, for example an aqueous fraction or a dry extract soluble in water.
  • active molecule any active molecule isolated or identified initially from the plant, and optionally produced synthetically.
  • purification step should be understood to mean any treatment step making it possible to prepare, extract, fractionate, separate or isolate an active product, ie, a product having anti-lithiasic properties, in humans or 'animal.
  • the plant sample used can be chosen from the whole plant, the roots, the stem, the flowers, the seeds, the fruits or a mixture of these.
  • a particular method of extracting at least one therapeutically active product from a sample of a plant of the genus Hylocereus comprises the following steps: a) preparing an extract from a sample of Hylocereus, b) fractionation of said extract obtained at the end of step a) using separation methods, and optionally c) isolation of the active product (s).
  • Step a) of preparation of the extract can comprise a step during which the selected Hylocereus sample is dried, possibly ground.
  • step b) the crude extract thus obtained can be subjected to various treatments.
  • a solvent can be, for example, water, reverse osmosis, distilled water, double distilled water, alcohol (e.g. ethanol or butanol), etc.
  • the mixture is advantageously brought to a temperature of between 20 and 150 ° C approximately, preferably between 80 and 100 ° C approximately, depending on the solvent. It is advantageously brought to the boiling point of the solvent used.
  • a temperature zone favorable to maceration is between 25 and 40 ° C approximately.
  • a temperature zone favorable to infusion is between 80 and 100 ° C approximately depending on the solvents.
  • the extract can also (or alternatively) be treated for delipidation, for example with a lipophilic solvent such as petroleum ether, methylene chloride or chloroform.
  • a lipophilic solvent such as petroleum ether, methylene chloride or chloroform.
  • This delipidation step can also intervene later, and it is then preferably carried out by liquid-liquid extraction with one of the solvents mentioned above.
  • the delipidation can also be carried out from a dry extract according to the invention, using such a solvent.
  • the invention thus also relates to a method of extracting at least one product which is therapeutically active from a plant of the genus Hylocereus comprising at least one step of treating all or part of the plant with heat and / or with a solvent.
  • the extract can also be subjected to one or more successive stages of filtration. Filtration can be carried out using sieves, cellulose filters and / or nitrocellulose.
  • a particular preferred method for preparing a plant extract according to the invention comprises the following steps:
  • step (a ') maceration or infusion of the extract obtained at the end of step (a) in osmosis water at a temperature of between 20 and 150 ° C. approximately, and
  • the method further comprises the following steps:
  • the sterilization step (a '") can be carried out by passing through a membrane of approximately 0.22 ⁇ .
  • the concentration step (a "") can be carried out by evaporation of the aqueous phase and drying of the powder obtained, under vacuum and at a temperature preferably between 20 and 50 ° C., or can be carried out by lyophilization.
  • Lyophilization allows the conservation of fragile substances in an aqueous medium, the obtaining of chemical stability of certain products and the elimination of the solvent. It also facilitates subsequent solubilization.
  • a preferred process for preparing an active product according to the invention thus comprises the following steps:
  • step (a ') maceration or infusion of the extract obtained at the end of step (a) in osmosis water at a temperature between 20 and 150 ° C approximately, preferably between 25 and 100 ° C ,
  • step (a ) one or more successive filtrations of all or part of the product of step (a ') to obtain an active extract
  • the fractionation step makes it possible in particular to remove the residual contaminants and impurities, for example nucleic acids, toxins, etc., or to eliminate any cytotoxic compounds.
  • Step b) of fractionation can comprise one or more steps and can be implemented by means of different separation techniques known to those skilled in the art.
  • separation methods include precipitation / centrifugation, filtration, ultrafiltration and / or clarification of plant extracts of the genus Hylocereus.
  • the separation methods are preferably chosen from hydrophobic interaction liquid chromatography, hydrophilic interaction chromatography (HILIC), ion exchange chromatography and gel filtration chromatography, applied alone or in combination.
  • HILIC hydrophilic interaction chromatography
  • ion exchange chromatography ion exchange chromatography
  • gel filtration chromatography applied alone or in combination.
  • Such chromatography can be carried out on various supports (in particular column such as Duolite S861, Sephadex LH20, Aspartamide and Aspartamide SCX).
  • the fractionation is preferably followed by an analytical HPLC on column
  • Step b) of fractionation is preferably carried out by liquid column chromatography or by CPC (Centrifugal partition chromatography), said step b) being able to be repeated several times.
  • Step c) of isolation of the active product (s) is preferably carried out by HPLC and is preferably obtained by recovery of the HPLC eluates which are in the form of fractions.
  • the methods of production according to the invention comprise one or more intermediate stages of characterization and measurement or quantification of the active molecules contained in the products obtained at the end of the various stages.
  • the methods described above are preferably carried out using a plant of the species Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.
  • Another object of the invention relates to the product (s) capable of being obtained at the end of one of the steps of a process according to the invention as described above. , preferably at the end of one of the steps a ', a ", a'", a "", b or c, characterized in that it (s) is (are) endowed with anti-lithiasic activity, in humans or animals.
  • the physical characteristics of the active product (s) can be obtained by mass spectrometry (MALDI-TOF), infrared spectroscopy or nuclear magnetic resonance (NMR).
  • MALDI-TOF mass spectrometry
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • the anti-lithiasic activity can be evaluated for example by an in vitro test on stones isolated from patients.
  • Preferred products according to the invention obtained at the end of one of the steps of a method according to the invention, can be used as active principle (s) of a medicament intended for the prevention and / or in the treatment of lithiasis or related pathologies.
  • the invention can in particular be implemented to treat or prevent renal lithiasis and of the urinary tracts, vesicular lithiasis and of the biliary tracts, lithiasis of the main salivary glands (in particular parotidian, submandibular and sublingual) and lithiasis of the salivary glands accessories.
  • pathology related to lithiasis designates in particular the conditions resulting in excessive mineralization, the pathological calcification processes leading to the formation of calcified stones or nodules in an organ, the deposits of crystals (drop or tophus ), rheumatic inflammatory conditions, atheromatosis, chondrocalcinosis and sequential calcifications.
  • the invention also relates to a medicament and a pharmaceutical composition comprising one or more products according to the invention as described above.
  • the amounts of active extract used in the preparation of the pharmaceutical composition depend on the desired effect, the duration of the treatment and the route of administration used. They are generally between 100 and 1500 mg, preferably between 500 mg and 1200 mg of active extract per day. In general, the doctor will determine the appropriate dosage based on age, weight and all other factors specific to the subject to be treated.
  • the extract or the active product can be in the form of an aqueous solution (containing the unit doses in an amount suitable for the treatment of the lithiasis in question) in any suitable vehicle or excipient, for example of aqueous or hydro-alcoholic type, or alternatively in an isotonic or sterile vehicle which optionally contains dispersing agents and / or wetting agents compatible on the pharmacological level. It is also possible to associate the administration of the extract with other compounds capable of potentiating its action, such as another plant extract or another active molecule used in the treatment of lithiasis.
  • the pharmaceutical composition according to the invention thus comprises, in addition to the extract or the active product, pharmaceutically acceptable molecules chosen from other active substances such as anti-lithiasics, d 'other plant extracts and / or adjuvants, intended to be used in a combined, separate or sequential manner.
  • pharmaceutically acceptable molecules chosen from other active substances such as anti-lithiasics, d 'other plant extracts and / or adjuvants, intended to be used in a combined, separate or sequential manner.
  • the adjuvant can be chosen from any substance, any mixture, any solution, any buffer or any composition known to those skilled in the art, in particular any substance, any mixture, any solution, any buffer or any composition which can be used in the treatment of gallstone.
  • the adjuvant is preferably chosen from a diluent, a lubricant, a colorant, a coating, a varnish, a wetting product, a flavoring agent, a sweetener, a thickener, a stabilizer and an excipient.
  • a composition usable in the treatment of the lithiasis capable of being used as an adjuvant is for example a composition comprising citrate. It can also be another plant extract.
  • the adjuvant is moreover preferably packaged and administered separately from the composition comprising the plant extract or the active product according to the invention and / or at a separate injection site.
  • compositions or products according to the invention are appropriately packaged (tablet, pill, powder, capsule, cachet, granules, solution for injection, solution, suspension, emulsion, syrup, elixir, suppository, rectal capsule, etc.) to allow oral, enteral or parenteral administration, for example intravenous, intramuscular or subcutaneous administration, introduction into an intravenous infusion device or on the surface of a dialysis membrane, or even administration by a system implant allowing subcutaneous infusion.
  • the preferred route of administration is oral or enteral.
  • the active extract according to the invention is mixed with one or more inert diluents, such as starch, cellulose, sucrose , lactose or silica.
  • inert diluents such as starch, cellulose, sucrose , lactose or silica.
  • these compositions can also include substances other than diluents, for example one or more lubricants such as magnesium stearate or talc, a dye, a coating (dragees) or a varnish. Tablets, pills, powders, capsules, cachets and granules are preferred for oral administration.
  • compositions according to the invention intended to be administered orally and being in a liquid form may contain inert diluents such as water, ethanol, glycerol, vegetable oils or paraffin oil.
  • inert diluents such as water, ethanol, glycerol, vegetable oils or paraffin oil.
  • These compositions can also comprise substances other than diluents, such as, for example, wetting, sweetening, thickening, flavoring or stabilizing products.
  • the unit forms of administration are prepared in a conventional manner according to conventional techniques known to those skilled in the art, with the excipients commonly used in this field.
  • the compositions for rectal administration are preferably packaged in the form of suppositories or rectal capsules which contain, in addition to the active extract, excipients such as cocoa butter and / or semi-synthetic glycerides.
  • compositions based on plants or plant extracts belonging to the genus Hylocereus preferred according to the invention are in a form favorable to the protection and optimal assimilation of the principle (s) assets.
  • the invention also relates to a method for the preventive or curative treatment of a lithiasis or of a related pathology, by the administration to an affected subject, of an effective amount of a product, extract or composition according to the invention.
  • the drugs and compositions described above can in fact be used to prevent relapses of lithiasic affections or be prescribed as a preventive measure in subjects at risk.
  • the invention further relates to tools and kits intended for the implementation of one or the other of the methods as described above.
  • EXAMPLE 1 Preparation and use of a plant extract according to the invention in the context of a clinical trial.
  • aqueous extract prepared (as indicated below) from the roots or the whole plant Hylocereus trigonus (Haw.) Safford showed very marked renal and gallbladder anti-lithiasic activity, during the clinical study, described below. - below, performed in humans.
  • Roots or the whole plant Hylocereus trigonus (Haw.) Safford are dried in the open air, protected from light, or in a vacuum oven at 30 ° C, then finely ground.
  • the powder thus obtained is sieved using a 0.5 ⁇ m sieve.
  • the clinical trial involved 30 patients • renal lithiasis: 22 cases • vesicular lithiasis: 8 cases • 6 other patients (3 renal lithiasis and 3 vesicular lithiasis) constituting the controls, received for treatment only the absorption of 1.5 liters of water and this daily.
  • biochemical parameters were chosen to detect possible toxicity, hepatic and / or renal, as well as an incidence on the figured elements of the blood.
  • the lithiasis was highlighted and its evolution was followed by a series of ultrasounds performed 20 or 30 days apart during the duration of the treatment.
  • Control ultrasounds are preferably performed every 20 or 30 days depending on the progress of the calculations and the availability of the patient. For each patient, the treatment is stopped when the total disappearance of the lithiasis or the ineffectiveness of the treatment after a maximum of 150 days can be noted.
  • This example describes a particular process for the preparation of an extract according to the invention from the roots of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.
  • the roots are dried in the open air and protected from light, finely ground, sieved using a 0.5 ⁇ m sieve and the powder thus obtained undergoes the following treatment: a) maceration with stirring in l osmosis water at a temperature between 25 and 30 ° C for a time between 18 and 30 hours, b) vacuum filtration and recovery of the solution, c) sterilization of the solution by passage through a 0.22 micron membrane, d) evaporation of the aqueous phase under vacuum at a temperature between 30 and 40 ° C using a Buchi brand evaporator, and e) drying of the powder obtained under vacuum at a temperature between 25 and 40 ° vs.
  • Steps d) and e) of the process can be replaced by lyophilization.
  • This example describes another particular process for preparing an extract according to the invention from the roots of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.
  • the roots of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford are dried in the open air and protected from light, finely ground, sieved using a 0.5 ⁇ m sieve and the powder thus obtained undergoes the following treatment: a) infusion with stirring in osmosis water for a time between 10 and 15 minutes with a final temperature between 70 and 90 ° C (initial temperature 100 ° C), b) vacuum filtration and recovery of the solution, c) sterilization of the solution by passage over a 0.22 micron membrane, d) evaporation of the aqueous phase under vacuum at a temperature between 30 and 40 ° C. using a Buchi brand evaporator, and e) drying of the powder obtained under vacuum at a temperature between 25 and 40 ° C.
  • Steps d) and e) of the process can be replaced by lyophilization.
  • This example describes another particular process for the preparation of an extract according to the invention from the whole plant of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.
  • the whole plant of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford is dried in the open air and protected from light, finely ground, sieved using a 0.5 ⁇ m sieve and the powder thus obtained undergoes treatment.
  • Steps d) and e) of the process can be replaced by lyophilization.
  • EXAMPLE 5 Particular process for the preparation of a plant extract according to the invention This example describes another particular process for the preparation of an extract according to the invention from the whole plant of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.
  • Hylocereus trigonus (Haw.) Safford is dried in the open air and protected from light, finely ground, sieved using a 0.5 ⁇ m sieve and the powder thus obtained undergoes treatment. following: a) infusion with stirring in osmosis water for a time between 10 and 15 minutes with a final temperature between 70 and 90 ° C (initial temperature of 100 ° C), b) vacuum filtration and recovery of the solution, c) sterilization of the solution by passage over a 0.22 micron membrane, d) evaporation of the aqueous phase under vacuum at a temperature between 30 and 40 ° C. using a Buchi brand evaporator, and e) drying the powder obtained under vacuum at a temperature between 25 and 40 ° C.
  • Steps d) and e) of the process can be replaced by lyophilization.
  • Capsules are prepared according to the usual technique known to those skilled in the art. They include 250 mg of active extract and have the following composition:
  • Capsules are prepared according to the usual technique known to those skilled in the art. They include 250 mg of active extract and have the following composition:
  • EXAMPLE 8 Dissolving activity of Hylocereus trigonus preparations on human oxalo-calcic stones.
  • This example describes the demonstration of the dissolving activity of preparations based on Hylocereus trigonus on oxalocalcic calculi of the human type Id.
  • Preparations made from different batches of the plant Hylocereus trigonus and according to the method described in Example 3 give the samples Ht1, Ht2, Ht3 and Ht4. 22mg of each of these samples are dissolved in 10ml of Tris 40mM solution pH 6.5. References are prepared from plants traditionally used to treat kidney stones to give the JHJ, KB1 and KBf batches according to an equivalent process. A 3mM citrate solution, drug used to treat kidney stones, is also prepared in 40 mM Tris pH 6.5.
  • the table below collates the results of these weighings.
  • the dissolution of the stones over time (until the 68th day) is expressed as a percentage of weight loss (average of the 2 or 3 stones used per sample).
  • This example describes the demonstration of the dissolving activity of preparation based on Hylocereus trigonus on human cystinic stones.
  • the table below collates the results of these weighings.
  • the dissolution of stones over time (up to the 8 th week) is expressed as a percentage of weight loss.

Abstract

The invention relates to the use of a plant or an extract or isolated molecules of a plant in the Hylocereus genus as a medicament. The invention also relates to the use thereof in the preparation of compositions that are intended to prevent or treat lithiasis or a related disease. The invention further relates to methods of obtaining extracts or isolated molecules and the aforementioned compositions.

Description

PREPARATION ET UTILISATIONS THERAPEUTIQUES DE PLANTES ET EXTRAITS DE PLANTES DU GENRE HYLOCEREUS PREPARATION AND THERAPEUTIC USES OF PLANTS AND EXTRACTS FROM HYLOCERUS GENUS PLANTS
La présente invention décrit l'utilisation d'une plante ou d'un extrait d'une plante du genre Hylocereus comme médicament, notamment pour la prévention ou le traitement d'une lithiase ou pathologie apparentée. Elle porte par ailleurs sur des procédés d'obtention de tels extraits et compositions, ainsi que sur des compositions et extraits biologiques à activité thérapeutique, en particulier doués d'une activité anti-lithiasique, issus de ces plantes, y compris les molécules actives isolées de ces extraits.The present invention describes the use of a plant or an extract of a plant of the genus Hylocereus as a medicament, in particular for the prevention or treatment of lithiasis or related pathology. It also relates to processes for obtaining such extracts and compositions, as well as to biological compositions and extracts with therapeutic activity, in particular endowed with an anti-lithiasic activity, derived from these plants, including the isolated active molecules. of these extracts.
Arrière-plan de l'inventionInvention background
Le terme de lithiase désigne la maladie caractérisée par la formation de dépôts solides insolubles (ou « calculs ») composés de substances chimiques et localisés dans un appareil excréteur. La concentration locale de ces substances peut être due à leur trop grande absorption, un défaut d'élimination et/ou un défaut anatomique. Les lithiases ne sont donc pas une pathologie en tant que telle mais la conséquence de pathologies qui peuvent être très diverses (nutritionnelles, digestives, rénales, osseuse, etc.)The term lithiasis designates the disease characterized by the formation of insoluble solid deposits (or "stones") composed of chemical substances and localized in an excretory apparatus. The local concentration of these substances may be due to their excessive absorption, a lack of elimination and / or an anatomical defect. Lithiasis is therefore not a pathology as such but the consequence of pathologies which can be very diverse (nutritional, digestive, renal, bone, etc.)
Dans le corps humain, les appareils excréteurs où peuvent se former ces calculs sont principalement : - l'appareil urinaire : lithiase urinaire - les voies biliaires : lithiase vésiculaire (biliaire, du cholédoque) et plus rarement : - les canaux salivaires : lithiase salivaire - les canaux lacrymaux - le canal pancréatiqueIn the human body, the excretory devices where these stones can form are mainly: - the urinary system: urolithiasis - the bile ducts: vesicular lithiasis (biliary, common bile duct) and more rarely: - the salivary ducts: salivary lithiasis - the lacrimal ducts - the pancreatic duct
Les deux lithiases majoritaires sont la lithiase urinaire (calculs localisés dans l'appareil urinaire) et la lithiase vésiculaire (calculs localisés dans la vésicule biliaire). La prévalence globale de la lithiase urinaire est de 10 % au sein de la population adulte (% de personnes qui ont eu un calcul dans leur vie) et est équivalente dans les pays industrialisés (Europe, USA. Japon). L'incidence annuelle est de 2 pour 1000 habitants en France ; elle est un peu plus élevée aux Etats-Unis (3/1000). Les facteurs de risque connus sont le sexe masculin (sexe ratio H/F : 2/1 ), l'âge (avec un pic à 40-50 ans), l'alimentation (riche en calcium et en protéines animales) et la déshydratation. La composition des calculs varie suivant leur composé majoritaire : oxalate de calcium (75%), phosphate de calcium (15%), acide urique (6%), struvite (3%) et la cystine (1 %). Ainsi, 90% des calculs analysés sont de type calcique.The two major lithiasis are urolithiasis (stones localized in the urinary tract) and vesicular lithiasis (stones localized in the gallbladder). The overall prevalence of urolithiasis is 10% in the adult population (% of people who have had a stone in their lives) and is equivalent in industrialized countries (Europe, USA. Japan). The annual incidence is 2 per 1000 inhabitants in France; it is slightly higher in the United States (3/1000). Known risk factors are male (sex ratio M / F: 2/1), age (with a peak at 40-50 years), diet (rich in calcium and animal proteins) and dehydration . The composition of stones varies according to their majority compound: calcium oxalate (75%), calcium phosphate (15%), uric acid (6%), struvite (3%) and cystine (1%). Thus, 90% of the calculations analyzed are of the calcium type.
La prévalence globale de la lithiase vésiculaire est de 10-15% en France et de 10% aux USA. L'incidence annuelle est de 2 pour 1000 habitants en France et de 3,5/1000 aux USA. Les facteurs de risques sont le sexe féminin (sexe ratio H/F : 1/2 ), l'âge (avec un pic à 40-60 ans), les troubles métaboliques (obésité, troubles digestifs et nutritionnels) et les modifications hormonales (grossesse, ménopause). Le cholestérol est le composant principal des calculs vésiculaires.The overall prevalence of vesicular lithiasis is 10-15% in France and 10% in the USA. The annual incidence is 2 per 1000 inhabitants in France and 3.5 / 1000 in the USA. Risk factors are female (sex ratio M / F: 1/2), age (with a peak at 40-60 years), metabolic disorders (obesity, digestive and nutritional disorders) and hormonal changes ( pregnancy, menopause). Cholesterol is the main component of gallbladder stones.
Les résultats obtenus dans le traitement des lithiases en général montrent que les rares spécialités pharmaceutiques existantes (citrate, par exemple pour les lithiases urinaires, et acides biliaires pour la lithiase vésiculaire) ne sont pas d'une efficacité suffisante ou sont mal tolérées. Finalement, le recours à la chirurgie pour la lithiase vésiculaire et à la lithotritie ou à la chirurgie pour les lithiases urinaires reste la solution courante qui présente des coûts élevés.The results obtained in the treatment of lithiasis in general show that the rare existing pharmaceutical specialties (citrate, for example for urinary lithiasis, and bile acids for vesicular lithiasis) are not of sufficient efficacy or are poorly tolerated. Finally, recourse to surgery for gallbladder stones and to lithotripsy or surgery for urinary stones remains the common solution which presents high costs.
L'objet de la présente invention est de pallier ce déficit en fournissant un médicament et des compositions efficaces (curatifs et préventifs), non toxiques, sans effet secondaire et bien tolérés.The object of the present invention is to overcome this deficit by providing an effective drug and compositions (curative and preventive), non-toxic, without side effect and well tolerated.
Résumé de l'inventionSummary of the invention
La présente invention se rapporte à l'utilisation d'une plante ou d'un extrait d'une plante du genre Hylocereus comme médicament. L'invention concerne également l'utilisation d'une plante ou d'un extrait d'une plante du genre Hylocereus pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou à traiter une lithiase ou des affections similaires ou apparentées.The present invention relates to the use of a plant or an extract of a plant of the genus Hylocereus as a medicament. The invention also relates to the use of a plant or an extract of a plant of the genus Hylocereus for the preparation of a pharmaceutical composition intended for preventing or treating lithiasis or similar or related affections.
La présente invention concerne par ailleurs des compositions ou médicaments comprenant une plante ou un extrait actif sur le plan biologique d'une plante du genre Hylocereus, ainsi que des méthodes permettant de prévenir et de traiter les lithiases ou pathologies apparentées par administration à l'homme ou l'animal de ces médicaments ou compositions.The present invention further relates to compositions or medicaments comprising a biologically active plant or extract of a plant of the genus Hylocereus, as well as methods for preventing and treating lithiasis or related pathologies by administration to humans. or the animal of these drugs or compositions.
L'invention fournit également des procédés permettant d'obtenir des extraits des plantes d'intérêt ainsi que des procédés d'extraction et de purification de molécules actives sur le plan thérapeutique à partir desdits extraits ou plantes.The invention also provides methods for obtaining extracts from plants of interest as well as methods for extracting and purifying therapeutically active molecules from said extracts or plants.
L'invention concerne ainsi un procédé d'obtention d'un produit actif sur le plan thérapeutique comprenant la mise en œuvre d'une ou de plusieurs étapes de purification ou de traitement d'un échantillon d'une plante du genre Hylocereus afin d'obtenir une ou plusieurs fractions ou molécules actives sur le plan thérapeutique, présentant en particulier une activité anti-lithiasique.The invention thus relates to a process for obtaining a therapeutically active product comprising the implementation of one or more steps of purification or treatment of a sample of a plant of the genus Hylocereus in order to obtain one or more therapeutically active fractions or molecules, having in particular anti-lithiasic activity.
Un autre objet de l'invention concerne un procédé d'extraction d'au moins un produit actif sur le plan thérapeutique (présentant de préférence une activité anti-lithiasique) à partir d'un échantillon d'une plante du genre Hylocereus comprenant les étapes suivantes : a) préparation d'un extrait à partir d'un échantillon d' Hylocereus, b) fractionnement dudit extrait obtenu à l'issue de l'étape a) à l'aide de méthodes de séparation, et éventuellement c) isolement du ou des produits actifs. Un autre objet particulier et préféré de l'invention concerne un procédé de préparation d'un extrait actif comprenant les étapes suivantes : (a) préparation d'un extrait de la plante par dessèchement et broyât de plante entière ou de racines d'une plante du genre Hylocereus, (a') macération ou infusion de l'extrait obtenu à l'issue de l'étape (a) dans de l'eau osmosée à une température comprise entre 20 et 150°C environ, et (a") une ou plusieurs filtration(s) successive(s) de tout ou partie du produit de l'étape (a') pour obtenir un extrait actif.Another object of the invention relates to a method of extracting at least one product which is therapeutically active (preferably having anti-lithiasic activity) from a sample of a plant of the genus Hylocereus comprising the steps following: a) preparation of an extract from a sample of Hylocereus, b) fractionation of said extract obtained at the end of step a) using separation methods, and optionally c) isolation of the or active products. Another particular and preferred subject of the invention relates to a process for the preparation of an active extract comprising the following steps: (a) preparation of an extract of the plant by drying and crushing of the whole plant or of the roots of a plant of the genus Hylocereus, (a ') maceration or infusion of the extract obtained at the end of step (a) in osmosis water at a temperature of between 20 and 150 ° C. approximately, and (a ") one or more successive filtration (s) of all or part of the product of step (a ') to obtain an active extract.
Selon des modes préférés de mise en œuvre, des étapes supplémentaires de traitement peuvent être réalisées, notamment de concentration, stérilisation, lyophilisation et/ou conditionnement, etc., pour améliorer les propriétés ou les qualités de l'agent actif.According to preferred modes of implementation, additional processing steps can be carried out, in particular of concentration, sterilization, lyophilization and / or conditioning, etc., to improve the properties or the qualities of the active agent.
L'invention concerne par ailleurs tous produits susceptibles d'être obtenus à l'issue de l'une des étapes d'un procédé tel que défini précédemment, caractérisés en ce qu'ils sont doués d'une activité anti-lithiasique chez l'homme ou l'animal.The invention also relates to all products capable of being obtained at the end of one of the stages of a process as defined above, characterized in that they are endowed with an anti-lithiasic activity in man or animal.
L'invention concerne également l'utilisation d'un produit susceptible d'être obtenu à l'issue de l'une des étapes d'un procédé tel que défini précédemment, pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement d'une lithiase ou d'une pathologie apparentée.The invention also relates to the use of a product capable of being obtained at the end of one of the steps of a process as defined above, for the preparation of a medicament intended for prevention or treatment lithiasis or related pathology.
Description détaillée de l'inventionDetailed description of the invention
La présente invention décrit pour la première fois l'utilisation d'une plante ou d'un extrait d'une plante du genre Hylocereus comme médicament.The present invention describes for the first time the use of a plant or an extract of a plant of the genus Hylocereus as a medicament.
Les inventeurs ont pour la première fois mis en évidence les puissantes propriétés anti-lithiasiques de produits obtenus à partir d'une plante du genre Hylocereus. Ces produits sont particulièrement actifs lorsqu'ils sont utilisés chez l'homme ou l'animal souffrant d'une lithiase rénale, vésiculaire ou parotidienne.The inventors have for the first time demonstrated the powerful anti-lithiasic properties of products obtained from a plant of the genus Hylocereus. These products are particularly active when used in humans or animals suffering from renal, vesicular or parotid lithiasis.
La présente invention décrit différents exemples de procédés d'obtention d'un médicament et d'un produit actifs sur le plan thérapeutique (présentant de préférence une activité anti-lithiasique) à partir d'une plante du genre Hylocereus. Il est entendu que l'invention englobe tout procédé susceptible d'être mis en œuvre par l'homme du métier permettant d'obtenir un produit présentant des propriétés anti-lithiasiques chez l'homme ou l'animal, à partir d'une telle plante.The present invention describes various examples of methods for obtaining a medicament and a product which are therapeutically active (preferably exhibiting anti-lithiasic activity) from a plant of the genus Hylocereus. It is understood that the invention encompasses any process capable of being implemented by a person skilled in the art making it possible to obtain a product having anti-lithiasic properties in humans or animals, from such a plant.
Les plantes du genre Hylocereus sont probablement originaires des caraïbes, répandues en Amérique centrale et au Mexique et largement introduites comme plante de jardin dans les pays tropicaux. Ce genre, qui comprend environ 24 espèces, est actuellement considéré comme invasif dans de nombreux écosystèmes.Plants of the genus Hylocereus are probably native to the Caribbean, widespread in Central America and Mexico and widely introduced as a garden plant in tropical countries. This genus, which includes about 24 species, is currently considered invasive in many ecosystems.
La présente invention peut être mise en œuvre à partir de plantes ou extraits de plantes appartenant au genre Hylocereus (cactaceae), y compris celles appartenant aux genres apparentés de Hylocereus, notamment : Phyllocereus Miq., Cephalocereus Pfeiff., Cephalophorus Lem., Cleistocactus Lem., Echinocereus Engelm., Echinonictanthus Lem., Echinopsis Zuc. et Pilocereus Lem.The present invention can be implemented from plants or plant extracts belonging to the genus Hylocereus (cactaceae), including those belonging to the related genera of Hylocereus, in particular: Phyllocereus Miq., Cephalocereus Pfeiff., Cephalophorus Lem., Cleistocactus Lem ., Echinocereus Engelm., Echinonictanthus Lem., Echinopsis Zuc. and Pilocereus Lem.
Toutes les espèces et variétés de plantes appartenant aux genres Hylocereus peuvent être utilisées. Ainsi, des extraits de différents Hylocereus se sont montrés actifs dans le cadre de l'invention, l'espèce Hylocereus trigonus (Haw.) Safford fournissant la meilleure activité chez l'homme. Les synonymes identifiés d' Hylocereus trigonus pouvant également être utilisés dans le cadre de la présente invention sont les suivants : Hylocereus trigonus (Haw) Safford, Hylocereus antiguensis, Hylocereus napoleonis, Hylocereus plumieri, Cereus triangonus , Cereus napoleonis et Cereus plumieri. Un procédé d'obtention d'un produit actif sur le plan thérapeutique selon l'invention comprend la mise en œuvre d'une ou de plusieurs étapes de purification à partir d'un échantillon d'une plante du genre Hylocereus afin d'obtenir une ou plusieurs fractions ou molécules actives sur le plan thérapeutique.All species and varieties of plants belonging to the genera Hylocereus can be used. Thus, extracts of different Hylocereus have been shown to be active in the context of the invention, the species Hylocereus trigonus (Haw.) Safford providing the best activity in humans. The identified synonyms of Hylocereus trigonus which can also be used in the context of the present invention are the following: Hylocereus trigonus (Haw) Safford, Hylocereus antiguensis, Hylocereus napoleonis, Hylocereus plumieri, Cereus triangonus, Cereus napoleonis and Cereus plumieri. A process for obtaining a therapeutically active product according to the invention comprises the implementation of one or more purification steps from a sample of a plant of the genus Hylocereus in order to obtain a or more therapeutically active fractions or molecules.
Le terme "actif ou "active" désigne plus particulièrement au sens de l'invention un produit, un extrait, une fraction ou une molécule possédant une activité anti- lithiasique.The term "active or" active "more particularly designates within the meaning of the invention a product, an extract, a fraction or a molecule having an anti-lithiasic activity.
Le terme "produit actif désigne toute fraction ou molécule isolée d'une plante Hylocereus, présentant une activité anti-lithiasique.The term "active product" designates any fraction or molecule isolated from a Hylocereus plant, exhibiting anti-lithiasic activity.
Un "extrait" désigne, au sens large, toute préparation ou mélange complexe, plus ou moins purifié et/ou enrichi, dérivé d'une plante du genre Hylocereus. Il peut s'agir par exemple d'un extrait brut, par exemple d'une fraction aqueuse ou d'un extrait sec soluble dans l'eau.An "extract" designates, in the broad sense, any preparation or complex mixture, more or less purified and / or enriched, derived from a plant of the genus Hylocereus. It may for example be a crude extract, for example an aqueous fraction or a dry extract soluble in water.
Par "molécule active" on entend toute molécule active isolée ou identifiée initialement à partir de la plante, et éventuellement produite par voie synthétique.By "active molecule" is meant any active molecule isolated or identified initially from the plant, and optionally produced synthetically.
Par étape de purification, il faut entendre toute étape de traitement permettant de préparer, d'extraire, de fractionner, de séparer ou d'isoler un produit actif, i.e., un produit présentant des propriétés anti-lithiasiques, chez l'homme ou l'animal.The term “purification step” should be understood to mean any treatment step making it possible to prepare, extract, fractionate, separate or isolate an active product, ie, a product having anti-lithiasic properties, in humans or 'animal.
L'échantillon de plante mis en œuvre peut être choisi parmi la plante entière, les racines, la tige, les fleurs, les graines, les fruits ou un mélange de ceux-ci. Un procédé particulier d'extraction d'au moins un produit actif sur le plan thérapeutique à partir d'un échantillon d'une plante du genre Hylocereus comprend les étapes suivantes : a) préparation d'un extrait à partir d'un échantillon d' Hylocereus, b) fractionnement dudit extrait obtenu à l'issue de l'étape a) à l'aide de méthodes de séparation, et éventuellement c) isolement du ou des produits actifs.The plant sample used can be chosen from the whole plant, the roots, the stem, the flowers, the seeds, the fruits or a mixture of these. A particular method of extracting at least one therapeutically active product from a sample of a plant of the genus Hylocereus comprises the following steps: a) preparing an extract from a sample of Hylocereus, b) fractionation of said extract obtained at the end of step a) using separation methods, and optionally c) isolation of the active product (s).
L'étape a) de préparation de l'extrait peut comprendre une étape au cours de laquelle l'échantillon d'Hylocereus choisi est desséché, éventuellement broyé.Step a) of preparation of the extract can comprise a step during which the selected Hylocereus sample is dried, possibly ground.
L'utilisation d'une masse comprise entre environ 100 et 300 g de plante entière du genre Hylocereus ou d'une masse comprise entre environ 50 et 150 g de racines d'une telle plante, permet par exemple d'obtenir entre environ 10 et 30 g d'extrait desséché et éventuellement broyé de ladite plante ou desdites racines à l'issue de l'étape a). Préalablement à l'étape b), l'extrait brut ainsi obtenu peut être soumis à différents traitements. Ainsi, il peut être éventuellement mélangé à un solvant, le mélange résultant étant avantageusement chauffé lors d'une étape ultérieure afin de permettre une macération ou une infusion. Le solvant peut être par exemple de l'eau, de l'eau osmosée, de l'eau distillée, de l'eau bidistillée, de l'alcool (par ex. de l'éthanol ou du butanol), etc.The use of a mass of between approximately 100 and 300 g of a whole plant of the genus Hylocereus or of a mass of between approximately 50 and 150 g of the roots of such a plant, makes it possible for example to obtain between approximately 10 and 30 g of dried and optionally ground extract of said plant or said roots at the end of step a). Prior to step b), the crude extract thus obtained can be subjected to various treatments. Thus, it can optionally be mixed with a solvent, the resulting mixture being advantageously heated during a subsequent step in order to allow maceration or infusion. The solvent can be, for example, water, reverse osmosis, distilled water, double distilled water, alcohol (e.g. ethanol or butanol), etc.
Le mélange est avantageusement porté à une température comprise entre 20 et 150°C environ, de préférence entre 80 et 100°C environ, selon le solvant. Il est avantageusement porté à la température d'ebullition du solvant utilisé. Une zone de température favorable à la macération est comprise entre 25 et 40°C environ. Une zone de température favorable à l'infusion est comprise entre 80 et 100°C environ selon les solvants.The mixture is advantageously brought to a temperature of between 20 and 150 ° C approximately, preferably between 80 and 100 ° C approximately, depending on the solvent. It is advantageously brought to the boiling point of the solvent used. A temperature zone favorable to maceration is between 25 and 40 ° C approximately. A temperature zone favorable to infusion is between 80 and 100 ° C approximately depending on the solvents.
L'extrait peut également (ou alternativement) être traité pour delipidation, par exemple par un solvant lipophile tel que l'éther de pétrole, le chlorure de méthylène ou le chloroforme. Cette étape de delipidation peut également intervenir ultérieurement, et elle est alors de préférence réalisée par extraction liquide-liquide avec l'un des solvants mentionnés précédemment. La delipidation peut également être réalisée à partir d'un extrait sec selon l'invention, à l'aide d'un tel solvant.The extract can also (or alternatively) be treated for delipidation, for example with a lipophilic solvent such as petroleum ether, methylene chloride or chloroform. This delipidation step can also intervene later, and it is then preferably carried out by liquid-liquid extraction with one of the solvents mentioned above. The delipidation can also be carried out from a dry extract according to the invention, using such a solvent.
L'invention concerne ainsi également un procédé d'extraction d'au moins un produit actif sur le plan thérapeutique à partir d'une plante du genre Hylocereus comprenant au moins une étape de traitement de tout ou partie de la plante par la chaleur et/ou par un solvant.The invention thus also relates to a method of extracting at least one product which is therapeutically active from a plant of the genus Hylocereus comprising at least one step of treating all or part of the plant with heat and / or with a solvent.
L'extrait peut en outre être soumis à une ou plusieurs étapes successives de filtration. La filtration peut être réalisée à l'aide de tamis, de filtres de cellulose et/ou de nitrocellulose.The extract can also be subjected to one or more successive stages of filtration. Filtration can be carried out using sieves, cellulose filters and / or nitrocellulose.
Ainsi, un procédé préféré particulier de préparation d'un extrait de plante selon l'invention comprend les étapes suivantes :Thus, a particular preferred method for preparing a plant extract according to the invention comprises the following steps:
(a) préparation d'un extrait par dessèchement et broyât de plante entière ou de racines d'une plante du genre Hylocereus ,(a) preparation of an extract by drying and crushing of the whole plant or of the roots of a plant of the genus Hylocereus,
(a') macération ou infusion de l'extrait obtenu à l'issue de l'étape (a) dans de l'eau osmosée à une température comprise entre 20 et 150°C environ, et(a ') maceration or infusion of the extract obtained at the end of step (a) in osmosis water at a temperature of between 20 and 150 ° C. approximately, and
(a") une ou plusieurs étapes successives de filtration de tout ou partie du produit de l'étape (a') pour obtenir un extrait actif.(a ") one or more successive stages of filtration of all or part of the product of stage (a ') to obtain an active extract.
Dans une variante particulière, le procédé comprend en outre les étapes suivantes:In a particular variant, the method further comprises the following steps:
(a'") stérilisation du filtrat (partie soluble) obtenu à l'issue de l'étape (a"), et (a"") concentration ou lyophilisation de la préparation stérilisée.(a '") sterilization of the filtrate (soluble part) obtained at the end of step (a"), and (a "") concentration or lyophilization of the sterilized preparation.
L'étape de stérilisation (a'") peut être réalisée par un passage sur membrane d'environ 0,22μ. L'étape de concentration (a"") peut être réalisée par évaporation de la phase aqueuse et séchage de la poudre obtenue, sous vide et à une température de préférence comprise entre 20 et 50°C, ou peut être réalisée par lyophilisation.The sterilization step (a '") can be carried out by passing through a membrane of approximately 0.22 μ. The concentration step (a "") can be carried out by evaporation of the aqueous phase and drying of the powder obtained, under vacuum and at a temperature preferably between 20 and 50 ° C., or can be carried out by lyophilization.
La lyophilisation permet la conservation de substances fragiles en milieu aqueux, l'obtention d'une stabilité chimique de certains produits et l'élimination du solvant. Elle facilite en outre la solubilisation ultérieure.Lyophilization allows the conservation of fragile substances in an aqueous medium, the obtaining of chemical stability of certain products and the elimination of the solvent. It also facilitates subsequent solubilization.
Un procédé préféré de préparation d'un produit actif selon l'invention comprend ainsi les étapes suivantes :A preferred process for preparing an active product according to the invention thus comprises the following steps:
(a) préparation d'un extrait par dessèchement et broyât de plante entière ou de racines d'une plante du genre Hylocereus ,(a) preparation of an extract by drying and crushing of the whole plant or of the roots of a plant of the genus Hylocereus,
(a') macération ou infusion de l'extrait obtenu à l'issue de l'étape (a) dans de l'eau osmosée à une température comprise entre 20 et 150°C environ, de préférence comprise entre 25 et 100°C,(a ') maceration or infusion of the extract obtained at the end of step (a) in osmosis water at a temperature between 20 and 150 ° C approximately, preferably between 25 and 100 ° C ,
(a") une ou plusieurs filtrations successives de tout ou partie du produit de l'étape (a') pour obtenir un extrait actif,(a ") one or more successive filtrations of all or part of the product of step (a ') to obtain an active extract,
(a'") éventuellement, stérilisation du filtrat (partie soluble) obtenu à l'issue de l'étape (a"), (a"") éventuellement, concentration ou lyophilisation de la préparation stérilisée,(a '") possibly, sterilization of the filtrate (soluble part) obtained at the end of step (a"), (a "") optionally, concentration or freeze-drying of the sterilized preparation,
(b) fractionnement d'une partie du mélange obtenu à l'issue de l'étape (a"), (a'") ou (a""), et(b) fractionation of part of the mixture obtained at the end of step (a "), (a '") or (a ""), and
(c) récupération d'au moins un produit actif.(c) recovery of at least one active product.
L'étape de fractionnement permet notamment d'éliminer les contaminants et impuretés résiduels, par exemple des acides nucléiques, des toxines, etc., ou d'éliminer les éventuels composés cytotoxiques.The fractionation step makes it possible in particular to remove the residual contaminants and impurities, for example nucleic acids, toxins, etc., or to eliminate any cytotoxic compounds.
L'étape b) de fractionnement peut comprendre une ou plusieurs étapes et peut être mise en œuvre au moyen de différentes techniques de séparation connues de l'homme du métier. Des exemples typiques de méthodes de séparation comprennent notamment les précipitations/centrifugations, filtrations, ultrafiltrations et/ou clarifications d'extraits de plantes du genre Hylocereus. Les méthodes de séparation sont de préférence choisies parmi la chromatographie liquide par interaction hydrophobe, la chromatographie d'interaction hydrophile (HILIC), la chromatographie d'échange d'ions et la chromatographie de gel filtration, appliquées seules ou de façon combinée. Une telle chromatographie peut être réalisée sur différents supports (en particulier colonne telle que Duolite S861 , Sephadex LH20, Aspartamide et Aspartamide SCX). Le fractionnement est de préférence suivi d'une CLHP analytique sur colonneStep b) of fractionation can comprise one or more steps and can be implemented by means of different separation techniques known to those skilled in the art. Typical examples of separation methods include precipitation / centrifugation, filtration, ultrafiltration and / or clarification of plant extracts of the genus Hylocereus. The separation methods are preferably chosen from hydrophobic interaction liquid chromatography, hydrophilic interaction chromatography (HILIC), ion exchange chromatography and gel filtration chromatography, applied alone or in combination. Such chromatography can be carried out on various supports (in particular column such as Duolite S861, Sephadex LH20, Aspartamide and Aspartamide SCX). The fractionation is preferably followed by an analytical HPLC on column
L'étape b) de fractionnement est de préférence réalisée par chromatographie liquide sur colonne ou par CPC (Centrifugal partition chromatography), ladite étape b) pouvant être répétée plusieurs fois.Step b) of fractionation is preferably carried out by liquid column chromatography or by CPC (Centrifugal partition chromatography), said step b) being able to be repeated several times.
L'étape c) d'isolement du ou des produits actifs est de préférence réalisée par CLHP et est de préférence obtenue par récupération des éluats de la CLHP se présentant sous la forme de fractions.Step c) of isolation of the active product (s) is preferably carried out by HPLC and is preferably obtained by recovery of the HPLC eluates which are in the form of fractions.
Ces méthodes permettent une production efficace et reproductible de produits actifs selon l'invention. Chacune des étapes du procédé décrit ci-dessus peut être contrôlée par des méthodes analytiques incluant la HPLC ou la chromatographie en couches minces (CCM). De manière préférée, les méthodes d'obtention selon l'invention comprennent une ou plusieurs étapes intermédiaires de caractérisation et de mesure ou de quantification des molécules actives contenues dans les produits obtenus à l'issue des différentes étapes.These methods allow efficient and reproducible production of active products according to the invention. Each of the process steps described above can be controlled by analytical methods including HPLC or thin layer chromatography (TLC). Preferably, the methods of production according to the invention comprise one or more intermediate stages of characterization and measurement or quantification of the active molecules contained in the products obtained at the end of the various stages.
Les procédés décrits ci-dessus sont préférentiellement réalisés à l'aide d'une plante de l'espèce Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.The methods described above are preferably carried out using a plant of the species Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.
Un autre objet de l'invention concerne le ou les produit(s) susceptible(s) d'être obtenu(s) à l'issue de l'une des étapes d'un procédé selon l'invention tel que décrit ci-dessus, de préférence à l'issue de l'une des étapes a', a", a'", a"", b ou c, caractérisé(s) en ce qu'il(s) est (sont) doué(s) d'une activité anti-lithiasique, chez l'homme ou l'animal.Another object of the invention relates to the product (s) capable of being obtained at the end of one of the steps of a process according to the invention as described above. , preferably at the end of one of the steps a ', a ", a'", a "", b or c, characterized in that it (s) is (are) endowed with anti-lithiasic activity, in humans or animals.
Les caractéristiques physiques du ou des produits actifs peuvent être obtenues par spectrométrie de masse (MALDI-TOF), spectroscopie infra-rouge ou résonance magnétique nucléaire (RMN). L'activité anti-lithiasique peut être évaluée par exemple par un test in vitro sur calculs isolés de patients.The physical characteristics of the active product (s) can be obtained by mass spectrometry (MALDI-TOF), infrared spectroscopy or nuclear magnetic resonance (NMR). The anti-lithiasic activity can be evaluated for example by an in vitro test on stones isolated from patients.
Des produits préférés selon l'invention, obtenus à l'issue de l'une des étapes d'un procédé selon l'invention, peuvent être utilisés comme principe(s) actif(s) d'un médicament destiné à la prévention et/ou au traitement d'une lithiase ou de pathologies apparentées.Preferred products according to the invention, obtained at the end of one of the steps of a method according to the invention, can be used as active principle (s) of a medicament intended for the prevention and / or in the treatment of lithiasis or related pathologies.
L'invention peut notamment être mise en œuvre pour traiter ou prévenir la lithiase rénale et des voies urinaires, la lithiase vésiculaire et des voies biliaires, la lithiase des glandes salivaires principales (notamment parotidiennes, sous maxillaires et sublinguales) et la lithiase des glandes salivaires accessoires.The invention can in particular be implemented to treat or prevent renal lithiasis and of the urinary tracts, vesicular lithiasis and of the biliary tracts, lithiasis of the main salivary glands (in particular parotidian, submandibular and sublingual) and lithiasis of the salivary glands accessories.
Au sens de l'invention, le terme pathologie apparentée à la lithiase désigne notamment les affections entraînant une minéralisation excessive, les processus de calcification pathologiques conduisant à la formation de calculs ou de nodules calcifiés dans un organe, les dépôts de cristaux (goutte ou tophus), les affections inflammatoires rhumatismales, l'athéromatose, la chondrocalcinose et les calcifications séquellaires.Within the meaning of the invention, the term pathology related to lithiasis designates in particular the conditions resulting in excessive mineralization, the pathological calcification processes leading to the formation of calcified stones or nodules in an organ, the deposits of crystals (drop or tophus ), rheumatic inflammatory conditions, atheromatosis, chondrocalcinosis and sequential calcifications.
L'invention concerne également un médicament et une composition pharmaceutique comprenant un ou plusieurs produits selon l'invention tels que décrits ci-dessus.The invention also relates to a medicament and a pharmaceutical composition comprising one or more products according to the invention as described above.
Les quantités d'extrait actif utilisées dans la préparation de la composition pharmaceutique dépendent de l'effet recherché, de la durée du traitement et de la voie d'administration utilisée. Elles sont généralement comprises entre 100 et 1500 mg, de préférence entre 500 mg et 1200 mg d'extrait actif par jour. D'une façon générale, le médecin déterminera la posologie appropriée en fonction de l'âge, du poids et de tous les autres facteurs propres au sujet à traiter.The amounts of active extract used in the preparation of the pharmaceutical composition depend on the desired effect, the duration of the treatment and the route of administration used. They are generally between 100 and 1500 mg, preferably between 500 mg and 1200 mg of active extract per day. In general, the doctor will determine the appropriate dosage based on age, weight and all other factors specific to the subject to be treated.
Dans les composition et utilisations de l'invention, l'extrait ou le produit actif peut se présenter sous forme de solution aqueuse (contenant les doses unitaires en quantité adaptée au traitement de la lithiase en cause) dans tout véhicule ou excipient adapté, par exemple de type aqueux ou hydro-alcoolique, ou encore dans un véhicule isotonique ou stérile qui contient éventuellement des agents de dispersion et/ou des mouillants compatibles sur le plan pharmacologique. Il est également envisageable d'associer l'administration de l'extrait avec d'autres composés capables de potentialiser son action, tels qu'un autre extrait végétal ou une autre molécule active utilisée dans le traitement de la lithiase.In the compositions and uses of the invention, the extract or the active product can be in the form of an aqueous solution (containing the unit doses in an amount suitable for the treatment of the lithiasis in question) in any suitable vehicle or excipient, for example of aqueous or hydro-alcoholic type, or alternatively in an isotonic or sterile vehicle which optionally contains dispersing agents and / or wetting agents compatible on the pharmacological level. It is also possible to associate the administration of the extract with other compounds capable of potentiating its action, such as another plant extract or another active molecule used in the treatment of lithiasis.
Dans une variante particulière de mise en œuvre, la composition pharmaceutique selon l'invention comprend ainsi, outre l'extrait ou le produit actif, des molécules acceptables sur le plan pharmaceutique choisies parmi d'autres substances actives tels que des anti-lithiasiques, d'autres extraits végétaux et/ou des adjuvants, destinées à être utilisées de façon combinée, séparée ou séquentielle.In a particular variant of implementation, the pharmaceutical composition according to the invention thus comprises, in addition to the extract or the active product, pharmaceutically acceptable molecules chosen from other active substances such as anti-lithiasics, d 'other plant extracts and / or adjuvants, intended to be used in a combined, separate or sequential manner.
L'adjuvant peut être choisi parmi toute substance, tout mélange, toute solution, tout tampon ou toute composition connus de l'homme du métier en particulier toute substance, tout mélange, toute solution, tout tampon ou toute composition utilisable dans le traitement de la lithiase. L'adjuvant est de préférence choisi parmi un diluant, un lubrifiant, un colorant, un enrobage, un vernis, un produit mouillant, un aromatisant, un édulcorant, un épaississant, un stabilisant et un excipient. Il est avantageusement choisi parmi le stéarate de magnésium, le talc, l'amidon, la cellulose, le saccharose, le lactose, la silice, l'eau, l'éthanol, le glycérol, les huiles végétales, l'huile de paraffine, le beurre de cacao, des glycérides semi-synthétiques. Une composition utilisable dans le traitement de la lithiase susceptible d'être utilisée comme adjuvant est par exemple une composition comprenant du citrate. Il peut également s'agir d'un autre extrait de plante. L'adjuvant est par ailleurs de préférence conditionné et administré de façon séparée par rapport à la composition comprenant l'extrait végétal ou le produit actif selon l'invention et/ou au niveau d'un site d'injection distinct.The adjuvant can be chosen from any substance, any mixture, any solution, any buffer or any composition known to those skilled in the art, in particular any substance, any mixture, any solution, any buffer or any composition which can be used in the treatment of gallstone. The adjuvant is preferably chosen from a diluent, a lubricant, a colorant, a coating, a varnish, a wetting product, a flavoring agent, a sweetener, a thickener, a stabilizer and an excipient. It is advantageously chosen from magnesium stearate, talc, starch, cellulose, sucrose, lactose, silica, water, ethanol, glycerol, vegetable oils, paraffin oil, cocoa butter, semi-synthetic glycerides. A composition usable in the treatment of the lithiasis capable of being used as an adjuvant is for example a composition comprising citrate. It can also be another plant extract. The adjuvant is moreover preferably packaged and administered separately from the composition comprising the plant extract or the active product according to the invention and / or at a separate injection site.
Les compositions ou produits selon l'invention sont conditionnés de manière appropriée (comprimé, pilule, poudre, gélule, cachet, granulés, solution injectable, solution, suspension, émulsion, sirop, élixir, suppositoire, capsule rectale, etc.) pour permettre une administration orale, enterale ou encore une administration parentérale, par exemple une administration intraveineuse, intra musculaire ou sous cutanée, l'introduction dans un dispositif de perfusion intraveineuse ou à la surface d'une membrane de dialyse, ou bien encore une administration par un système d'implant permettant la perfusion sous-cutanée. La voie d'administration préférée est la voie orale ou enterale.The compositions or products according to the invention are appropriately packaged (tablet, pill, powder, capsule, cachet, granules, solution for injection, solution, suspension, emulsion, syrup, elixir, suppository, rectal capsule, etc.) to allow oral, enteral or parenteral administration, for example intravenous, intramuscular or subcutaneous administration, introduction into an intravenous infusion device or on the surface of a dialysis membrane, or even administration by a system implant allowing subcutaneous infusion. The preferred route of administration is oral or enteral.
Dans les compositions selon l'invention destinées à être administrées par voie orale et se présentant sous une forme solide, l'extrait actif selon l'invention est mélangé à un ou plusieurs diluants inertes, tels que l'amidon, la cellulose, le saccharose, le lactose ou la silice. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que des diluants, par exemple un ou plusieurs lubrifiants tels que le stéarate de magnésium ou le talc, un colorant, un enrobage (dragées) ou un vernis. Les comprimés, pilules, poudres, gélules, cachets et granulés sont préférés pour une administration par voie orale. Dans les compositions selon l'invention destinées à être administrées par voie orale et se présentant sous une forme liquide, des solutions, des suspensions, des émulsions, des sirops et des élixirs acceptables sur le plan pharmaceutique peuvent contenir des diluants inertes tels que l'eau, l'éthanol, le glycérol, les huiles végétales ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent comprendre en outre des substances autres que les diluants, comme par exemple des produits mouillants, édulcorants, épaississants, aromatisants ou stabilisants. Il est également possible d'administrer les produits ou compositions selon l'invention par voie rectale. Dans ce cas, les formes unitaires d'administration sont préparées de manière conventionnelle selon les techniques classiques connues de l'homme du métier, avec les excipients couramment utilisés dans ce domaine. Les compositions pour administration rectale sont de préférence conditionnées sous forme de suppositoires ou de capsules rectales qui contiennent outre l'extrait actif, des excipients tels que le beurre de cacao et/ou des glycérides semi-synthétiques.In the compositions according to the invention intended to be administered by the oral route and being in a solid form, the active extract according to the invention is mixed with one or more inert diluents, such as starch, cellulose, sucrose , lactose or silica. These compositions can also include substances other than diluents, for example one or more lubricants such as magnesium stearate or talc, a dye, a coating (dragees) or a varnish. Tablets, pills, powders, capsules, cachets and granules are preferred for oral administration. In the compositions according to the invention intended to be administered orally and being in a liquid form, solutions, suspensions, emulsions, syrups and elixirs which are acceptable from a pharmaceutical point of view may contain inert diluents such as water, ethanol, glycerol, vegetable oils or paraffin oil. These compositions can also comprise substances other than diluents, such as, for example, wetting, sweetening, thickening, flavoring or stabilizing products. It is also possible to administer the products or compositions according to the invention rectally. In this case, the unit forms of administration are prepared in a conventional manner according to conventional techniques known to those skilled in the art, with the excipients commonly used in this field. The compositions for rectal administration are preferably packaged in the form of suppositories or rectal capsules which contain, in addition to the active extract, excipients such as cocoa butter and / or semi-synthetic glycerides.
Quelle que soit la voie d'administration choisie, des compositions à base de plantes ou d'extraits de plantes appartenant au genre Hylocereus préférées selon l'invention se présentent sous une forme favorable à la protection et à l'assimilation optimale du ou des principes actifs.Whatever the route of administration chosen, compositions based on plants or plant extracts belonging to the genus Hylocereus preferred according to the invention are in a form favorable to the protection and optimal assimilation of the principle (s) assets.
L'invention concerne également une méthode de traitement préventif ou curatif d'une lithiase ou d'une pathologie apparentée, par l'administration à un sujet atteint, d'une quantité efficace d'un produit, extrait ou composition selon l'invention.The invention also relates to a method for the preventive or curative treatment of a lithiasis or of a related pathology, by the administration to an affected subject, of an effective amount of a product, extract or composition according to the invention.
Les médicaments et compositions décrits ci-dessus peuvent en effet être utilisés pour éviter les rechutes des affections lithiasiques ou être prescrits à titre préventif chez les sujets à risque.The drugs and compositions described above can in fact be used to prevent relapses of lithiasic affections or be prescribed as a preventive measure in subjects at risk.
L'invention concerne par ailleurs des outils et kits destinés à la mise en œuvre de l'une ou l'autre des méthodes telles que décrites ci-dessus.The invention further relates to tools and kits intended for the implementation of one or the other of the methods as described above.
D'autres aspects et propriétés avantageuses de l'invention sont illustrés dans les exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs.Other advantageous aspects and properties of the invention are illustrated in the examples which follow, which should be considered as illustrative and not limiting.
EXEMPLES EXEMPLE 1 : Préparation et utilisation d'un extrait végétal selon l'invention dans le cadre d'un essai clinique.EXAMPLES EXAMPLE 1 Preparation and use of a plant extract according to the invention in the context of a clinical trial.
L'extrait aqueux préparé (comme indiqué ci-dessous) à partir des racines ou de la plante entière Hylocereus trigonus (Haw.) Safford a montré une activité anti- lithiasique rénale et vésiculaire très marquée, lors de l'étude clinique, décrite ci- dessous, réalisée chez l'homme.The aqueous extract prepared (as indicated below) from the roots or the whole plant Hylocereus trigonus (Haw.) Safford showed very marked renal and gallbladder anti-lithiasic activity, during the clinical study, described below. - below, performed in humans.
Essai clinique réalisé à partir d'un produit antilithiasique selon l'inventionClinical trial carried out using an antilithiasis product according to the invention
Procédé de préparation de l'extrait :Process for preparing the extract:
Des racines ou la plante entière Hylocereus trigonus (Haw.) Safford sont séchées à l'air libre, à l'abri de la lumière, ou dans une étuve sous vide à 30°C, puis broyées finement. La poudre ainsi obtenue est tamisée à l'aide d'un tamis 0,5μm .Roots or the whole plant Hylocereus trigonus (Haw.) Safford are dried in the open air, protected from light, or in a vacuum oven at 30 ° C, then finely ground. The powder thus obtained is sieved using a 0.5 μm sieve.
20 grammes de poudre tamisée sont mis à macérer sous agitation mécanique pendant 24 heures à 30°C ou infusés dans 1 ,5 litres d'eau distillée à 100°C, pendant 15mn. Après filtration sous vide ou centrifugation, l'insoluble est éliminé, la solution aqueuse est passée sur membrane 0.22μm pour stérilisation puis lyophilisée.20 grams of sieved powder are macerated with mechanical stirring for 24 hours at 30 ° C or infused in 1.5 liters of distilled water at 100 ° C for 15 minutes. After vacuum filtration or centrifugation, the insoluble material is eliminated, the aqueous solution is passed through a 0.22 μm membrane for sterilization and then lyophilized.
Entre 1 ,2 et 1 ,4 grammes d'extrait sec de couleur crème sont obtenus. Cet extrait constitue le médicament utilisé dans l'essai clinique chez l'homme. La forme utilisée chez l'homme est soit une solution aqueuse dosée à 1 gramme par litre, soit des gélules dosées à 250 milligrammes d'extrait actif ou des comprimés dosés à 250 milligrammes d'extrait actif.Between 1, 2 and 1, 4 grams of dry extract of cream color are obtained. This extract is the medicine used in the human clinical trial. The form used in humans is either an aqueous solution dosed at 1 gram per liter, or capsules dosed with 250 milligrams of active extract or tablets dosed with 250 milligrams of active extract.
L'essai clinique a porté sur 30 malades • lithiase rénale : 22 cas • lithiase vésiculaire: 8 cas • 6 autres malades (3 lithiases rénales et 3 lithiases vesiculaires) constituant les contrôles, n'ont reçu pour traitement que l'absorption de 1 ,5 litres d'eau et ce quotidiennement.The clinical trial involved 30 patients • renal lithiasis: 22 cases • vesicular lithiasis: 8 cases • 6 other patients (3 renal lithiasis and 3 vesicular lithiasis) constituting the controls, received for treatment only the absorption of 1.5 liters of water and this daily.
Le protocole de l'essai clinique, commun aux deux formes de lithiases a été le suivant:The clinical trial protocol, common to the two forms of lithiasis, was as follows:
Jour J0 :Day D0:
- observation complète du patient- complete observation of the patient
- bilans sanguin et urinaire en contrôlant les paramètres suivants:- blood and urine tests by controlling the following parameters:
bilan sanguin uricémie créatininémie calcium urée protéinémie phosphore ALAT ASAT gamma GT numération formule sanguine hématocriteblood test uricemia creatininaemia calcium urea proteinemia phosphorus ALAT ASAT gamma GT blood count hematocrit
bilan urinaire glucosurie protéinurie densité et pH nitrites corps cétoniques hématies, leucocytes bilirubinurie culot urinaire recherche de cristaux d'urates et d'oxalate de calcium recherche de différents types de cellules (épithéliales, granuleuses, hématies et leucocytes) recherche de bactériesurine assessment glucosuria proteinuria density and pH nitrites ketone bodies red cells, leukocytes bilirubinuria urine pellet search for urate crystals and calcium oxalate search for different types of cells (epithelial, granular, red blood cells and leukocytes) search for bacteria
Ces paramètres biochimiques ont été choisis pour détecter une toxicité éventuelle, hépatique et /ou rénale, ainsi qu'une incidence sur les éléments figurés du sang.These biochemical parameters were chosen to detect possible toxicity, hepatic and / or renal, as well as an incidence on the figured elements of the blood.
Mise en évidence de la lithiaseDemonstration of lithiasis
La lithiase a été mise en évidence et son évolution a été suivie par une série d'échographies réalisée à 20 ou 30 jours d'intervalle pendant la durée du traitement.The lithiasis was highlighted and its evolution was followed by a series of ultrasounds performed 20 or 30 days apart during the duration of the treatment.
Jour JI :DAY:
A la suite des résultats du bilan médical, notamment la détection et la mesure des lithiases, leurs localisations et l'évaluation de l'épaisseur des parois rénales et vesiculaires (appréciation d'un état inflammatoire), le traitement suivant est proposé :Following the results of the medical check-up, in particular the detection and measurement of lithiasis, their locations and the evaluation of the thickness of the renal and vesicular walls (assessment of an inflammatory state), the following treatment is proposed:
1 ,2 litre de préparation aqueuse contenant 1 ,2 grammes de l'extrait actif défini selon l'invention et correspondant à 30 grammes de racines ou de plante entière.1.2 liters of aqueous preparation containing 1.2 grams of the active extract defined according to the invention and corresponding to 30 grams of roots or whole plant.
Traitement appliqué journellement pendant toute la durée de l'essai.Treatment applied daily for the duration of the test.
Les échographies de contrôle sont effectuées préférentiellement tous les 20 ou 30 jours selon l'évolution des calculs et la disponibilité du malade. Pour chaque malade, le traitement est arrêté lorsque la disparition totale de la lithiase ou l'inefficacité du traitement après un maximum de 150 jours peut être constatée.Control ultrasounds are preferably performed every 20 or 30 days depending on the progress of the calculations and the availability of the patient. For each patient, the treatment is stopped when the total disappearance of the lithiasis or the ineffectiveness of the treatment after a maximum of 150 days can be noted.
RESULTATSRESULTS
I ] LITHIASE RENALE (22 cas plus 3 témoins) , voir tableau 1I] RENAL LITHIASIS (22 cases plus 3 controls), see table 1
16 cas de disparition 5 cas de diminution 1 cas d'échec 3 cas témoins : ( pas de modification significative de la lithiase)16 cases of disappearance 5 cases of reduction 1 case of failure 3 control cases: (no significant change in lithiasis)
Lithiase rénale ( 25 cas) Tableau 1Renal lithiasis (25 cases) Table 1
RG = rein gauche RD = rein droitRG = left kidney RD = right kidney
Tableau 1Table 1
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] LITHIASE VESICULAIRE ( 8 cas plus 3 témoins) , voir tableau 2] VESICULAR LITHIASIS (8 cases plus 3 controls), see table 2
- 5 cas de disparition - 3 cas de diminution nette - 3 cas témoins : ( pas de modification significative de la lithiase).- 5 cases of disappearance - 3 cases of net decrease - 3 control cases: (no significant modification of lithiasis).
Tableau 2Table 2
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3] LITHIASE PAROTIDIENNE ( 2 cas) voir tableau 33] PAROTIDIAN LITHIASIS (2 cases) see table 3
Tableau 3Table 3
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REMARQUES :NOTES:
1 ) Préalablement à l'essai clinique, la toxicité sur l'animal a été déterminée sur la souris et le rat. Les résultats en toxicité aiguë n'ont pas mis en évidence de létalité au maximum de capacité d'absorption orale des animaux. Par ailleurs aucun signe de toxicité chronique n'est apparu.1) Prior to the clinical trial, the toxicity on animals was determined in mice and rats. The acute toxicity results did not show lethality to the maximum of oral absorption capacity of the animals. Furthermore, no sign of chronic toxicity appeared.
2) L'ensemble des analyses sanguines et urinaires n'a pas montré d'incidence, ni sur les fonctions hépatiques et rénales, ni sur les éléments figurés du sang et l'hématocrite. La tolérance générale du produit a été excellente y compris sur une longue durée. En particulier il n'a pas été observé d'effet secondaire. EXEMPLE 2 : Procédé particulier de préparation d'un extrait végétal selon l'invention2) All the blood and urine analyzes did not show any impact, either on the hepatic and renal functions, or on the figured elements of the blood and the hematocrit. The general tolerance of the product has been excellent even over a long period. In particular, no side effects were observed. EXAMPLE 2 Particular process for the preparation of a plant extract according to the invention
Cet exemple décrit un procédé particulier de préparation d'un extrait selon l'invention à partir de racines d' Hylocereus trigonus (Haw.) Safford .This example describes a particular process for the preparation of an extract according to the invention from the roots of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.
Les racines sont séchées à l'air libre et à l'abri de la lumière, broyées finement, tamisées à l'aide d'un tamis 0.5 μm et la poudre ainsi obtenue subit le traitement suivant: a) macération sous agitation dans de l'eau osmosée à une température comprise entre 25 et 30°C pendant un temps compris entre 18 et 30 heures, b) filtration sous vide et récupération de la solution, c) stérilisation de la solution par passage sur membrane de 0,22 micron, d) évaporation de la phase aqueuse sous vide à une température comprise entre 30 et 40°C à l'aide d'un évaporateur de marque Buchi, et e) séchage de la poudre obtenue sous vide à une température comprise entre 25 et 40°C.The roots are dried in the open air and protected from light, finely ground, sieved using a 0.5 μm sieve and the powder thus obtained undergoes the following treatment: a) maceration with stirring in l osmosis water at a temperature between 25 and 30 ° C for a time between 18 and 30 hours, b) vacuum filtration and recovery of the solution, c) sterilization of the solution by passage through a 0.22 micron membrane, d) evaporation of the aqueous phase under vacuum at a temperature between 30 and 40 ° C using a Buchi brand evaporator, and e) drying of the powder obtained under vacuum at a temperature between 25 and 40 ° vs.
Les étapes d) et e) du procédé peuvent être remplacées par une lyophilisation.Steps d) and e) of the process can be replaced by lyophilization.
EXEMPLE 3 : Procédé particulier de préparation d'un extrait végétal selon l'inventionEXAMPLE 3 Particular process for the preparation of a plant extract according to the invention
Cet exemple décrit un autre procédé particulier de préparation d'un extrait selon l'invention à partir de racines d' Hylocereus trigonus (Haw.) Safford .Les racines d' Hylocereus trigonus (Haw.) Safford sont séchées à l'air libre et à l'abri de la lumière, broyées finement, tamisées à l'aide d'un tamis 0.5 μm et la poudre ainsi obtenue subit le traitement suivant: a) infusion sous agitation dans de l'eau osmosée pendant un temps compris entre 10 et 15 minutes avec une température finale comprise entre 70 et 90°C (température initiale 100°C), b) filtration sous vide et récupération de la solution, c) stérilisation de la solution par passage sur membrane de 0,22 micron, d) évaporation de la phase aqueuse sous vide à une température comprise entre 30 et 40°C à l'aide d'un évaporateur de marque Buchi, et e) séchage de la poudre obtenue sous vide à une température comprise entre 25 et 40°C.This example describes another particular process for preparing an extract according to the invention from the roots of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford. The roots of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford are dried in the open air and protected from light, finely ground, sieved using a 0.5 μm sieve and the powder thus obtained undergoes the following treatment: a) infusion with stirring in osmosis water for a time between 10 and 15 minutes with a final temperature between 70 and 90 ° C (initial temperature 100 ° C), b) vacuum filtration and recovery of the solution, c) sterilization of the solution by passage over a 0.22 micron membrane, d) evaporation of the aqueous phase under vacuum at a temperature between 30 and 40 ° C. using a Buchi brand evaporator, and e) drying of the powder obtained under vacuum at a temperature between 25 and 40 ° C.
Les étapes d) et e) du procédé peuvent être remplacées par une lyophilisation.Steps d) and e) of the process can be replaced by lyophilization.
EXEMPLE 4 : Procédé particulier de préparation d'un extrait végétal selon l'inventionEXAMPLE 4 Particular process for the preparation of a plant extract according to the invention
Cet exemple décrit un autre procédé particulier de préparation d'un extrait selon l'invention à partir de la plante entière d' Hylocereus trigonus (Haw.) Safford . La plante entière d' Hylocereus trigonus (Haw.) Safford est séchée à l'air libre et à l'abri de la lumière, broyée finement, tamisée à l'aide d'un tamis 0.5 μm et la poudre ainsi obtenue subit le traitement suivant : a) macération sous agitation dans de l'eau osmosée à une température comprise entre 25 et 30°C pendant un temps compris entre 18 et 30 heures, b) filtration sous vide et récupération de la solution, c) stérilisation de la solution par passage sur membrane de 0,22 micron, d) évaporation de la phase aqueuse sous vide à une température comprise entre 30 et 40°C à l'aide d'un évaporateur de marque Buchi, et e) séchage de la poudre obtenue sous vide à une température comprise entre 25 et 40°C.This example describes another particular process for the preparation of an extract according to the invention from the whole plant of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford. The whole plant of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford is dried in the open air and protected from light, finely ground, sieved using a 0.5 μm sieve and the powder thus obtained undergoes treatment. following: a) maceration with stirring in osmosis water at a temperature between 25 and 30 ° C for a time between 18 and 30 hours, b) vacuum filtration and recovery of the solution, c) sterilization of the solution by passing over a 0.22 micron membrane, d) evaporation of the aqueous phase under vacuum at a temperature between 30 and 40 ° C using a Buchi brand evaporator, and e) drying of the powder obtained under vacuum at a temperature between 25 and 40 ° C.
Les étapes d) et e) du procédé peuvent être remplacées par une lyophilisation.Steps d) and e) of the process can be replaced by lyophilization.
EXEMPLE 5 : Procédé particulier de préparation d'un extrait végétal selon l'invention Cet exemple décrit un autre procédé particulier de préparation d'un extrait selon l'invention à partir de la plante entière d' Hylocereus trigonus (Haw.) Safford .EXAMPLE 5 Particular process for the preparation of a plant extract according to the invention This example describes another particular process for the preparation of an extract according to the invention from the whole plant of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.
La plante entière d' Hylocereus trigonus (Haw.) Safford est séchée à l'air libre et à l'abri de la lumière, broyée finement, tamisée à l'aide d'un tamis 0.5 μm et la poudre ainsi obtenue subit le traitement suivant : a) infusion sous agitation dans de l'eau osmosée pendant un temps compris entre 10 et 15 minutes avec une température finale comprise entre 70 et 90°C (température initiale de 100°C), b) filtration sous vide et récupération de la solution, c) stérilisation de la solution par passage sur membrane de 0,22 micron, d) évaporation de la phase aqueuse sous vide à une température comprise entre 30 et 40°C à l'aide d'un évaporateur de marque Buchi, et e) séchage de la poudre obtenue sous vide à une température comprise entre 25 et 40°C.The whole plant of Hylocereus trigonus (Haw.) Safford is dried in the open air and protected from light, finely ground, sieved using a 0.5 μm sieve and the powder thus obtained undergoes treatment. following: a) infusion with stirring in osmosis water for a time between 10 and 15 minutes with a final temperature between 70 and 90 ° C (initial temperature of 100 ° C), b) vacuum filtration and recovery of the solution, c) sterilization of the solution by passage over a 0.22 micron membrane, d) evaporation of the aqueous phase under vacuum at a temperature between 30 and 40 ° C. using a Buchi brand evaporator, and e) drying the powder obtained under vacuum at a temperature between 25 and 40 ° C.
Les étapes d) et e) du procédé peuvent être remplacées par une lyophilisation.Steps d) and e) of the process can be replaced by lyophilization.
EXEMPLE 6 : Procédé particulier de préparation d'un extrait végétal selon l'inventionEXAMPLE 6 Special Process for the Preparation of a Plant Extract According to the Invention
Des gélules sont préparées selon la technique habituelle connue de l'homme du métier. Elles comprennent 250 mg d'extrait actif et ont la composition suivante :Capsules are prepared according to the usual technique known to those skilled in the art. They include 250 mg of active extract and have the following composition:
- Extrait actif 250 mg - Cellulose 18 mg - Lactose 55 mg - Silice colloïdale 1 mg - Carboxyméthylamidon sodique 10 mg - Talc 10 mg - Stéarate de magnésium 1 mg EXEMPLE 7 : Procédé particulier de préparation d'un extrait végétal selon l'invention- Active extract 250 mg - Cellulose 18 mg - Lactose 55 mg - Colloidal silica 1 mg - Carboxymethyl starch sodium 10 mg - Talc 10 mg - Magnesium stearate 1 mg EXAMPLE 7 Special process for preparing a plant extract according to the invention
Des gélules sont préparées selon la technique habituelle connue de l'homme du métier. Elles comprennent 250 mg d'extrait actif et ont la composition suivante :Capsules are prepared according to the usual technique known to those skilled in the art. They include 250 mg of active extract and have the following composition:
- Extrait actif 250 mg - Lactose 104 mg - Cellulose 40 mg - Polyvidone 10 mg - Carboxyméthylamidon sodique 22 mg - Talc 10 mg - Stéarate de magnésium 2 mg - Silice colloïdale 2 mg - Mélange d'hydroxyméthylcellulose, glycérine, oxyde de titane ( 72 - 3,5 - 24, 5 ) q.s.p. 1 comprimé pellicule terminé à 445 mg.- Active extract 250 mg - Lactose 104 mg - Cellulose 40 mg - Polyvidone 10 mg - Carboxymethyl starch sodium 22 mg - Talc 10 mg - Magnesium stearate 2 mg - Colloidal silica 2 mg - Mixture of hydroxymethylcellulose, glycerin, titanium oxide (72 - 3.5 - 24.5) qs 1 film-coated tablet finished at 445 mg.
EXEMPLE 8 : Activité dissolvante de préparations d'Hylocereus trigonus sur des calculs humains oxalo-calcigues.EXAMPLE 8 Dissolving activity of Hylocereus trigonus preparations on human oxalo-calcic stones.
Cet exemple décrit la mise en évidence de l'activité dissolvante de préparations à base d'Hylocereus trigonus sur des calculs humains oxalo- calciques de type Id.This example describes the demonstration of the dissolving activity of preparations based on Hylocereus trigonus on oxalocalcic calculi of the human type Id.
Des préparations faites à partir de lots différents de la plante Hylocereus trigonus et selon le procédé décrit dans l'exemple 3 donnent les échantillons Ht1 , Ht2, Ht3 et Ht4. 22mg de chacun de ces échantillons sont solubilisés dans 10ml de solution Tris 40mM pH6,5. Des références sont préparées à partir de plantes utilisées traditionnellement pour traiter la lithiase rénale pour donner les lots JHJ, KB1 et KBf selon un procédé équivalent. Une solution de citrate 3mM, médicament utilisé pour traiter les lithiases rénales, est également préparée dans du Tris 40 mM pH 6,5.Preparations made from different batches of the plant Hylocereus trigonus and according to the method described in Example 3 give the samples Ht1, Ht2, Ht3 and Ht4. 22mg of each of these samples are dissolved in 10ml of Tris 40mM solution pH 6.5. References are prepared from plants traditionally used to treat kidney stones to give the JHJ, KB1 and KBf batches according to an equivalent process. A 3mM citrate solution, drug used to treat kidney stones, is also prepared in 40 mM Tris pH 6.5.
Des calculs humains oxalo-calciques sont soigneusement sélectionnés et mis en incubation sous agitation douce et à température ambiante dans chacune de ces solutions. A des temps régulièrement espacés (2 semaines), les calculs sont prélevés, rincés à l'eau distillée et pesés après séchage sur une balance de précision (d=0,05 mg).Oxalo-calcium human stones are carefully selected and incubated with gentle shaking and at room temperature in each of these solutions. At regularly spaced times (2 weeks), the stones are removed, rinsed with distilled water and weighed after drying on a precision balance (d = 0.05 mg).
Le tableau ci dessous rassemble les résultats de ces pesées. La dissolution des calculs dans le temps (jusqu'au 68ième jour) est exprimée en pourcentage de perte de poids (moyenne des 2 ou 3 calculs utilisés par échantillon).The table below collates the results of these weighings. The dissolution of the stones over time (until the 68th day) is expressed as a percentage of weight loss (average of the 2 or 3 stones used per sample).
Figure imgf000027_0001
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EXEMPLE 9 : Activité dissolvante de préparations d'Hylocereus trigonus sur des calculs humains cystiniguesEXAMPLE 9 Dissolving activity of Hylocereus trigonus preparations on human cystine stones
Cet exemple décrit la mise en évidence de l'activité dissolvante de préparation à base d'Hylocereus trigonus sur des calculs humains de type cystiniques.This example describes the demonstration of the dissolving activity of preparation based on Hylocereus trigonus on human cystinic stones.
Une préparation de la plante Hylocereus trigonus selon le procédé décrit dans l'exemple 3 donne l'échantillon « Ht ». 44mg de ce lot sont solubilisés dans 20ml d'eau distillée. Quatre calculs humains cystiniques du même donneur sont soigneusement sélectionnés et mis en incubation sous agitation douce et à température ambiante dans 10ml de préparation « Ht » ou dans 10ml d'eau distillée comme contrôle. A des temps régulièrement espacés (2 semaines), les calculs sont prélevés, rincés à l'eau distillée et pesés après séchage sur une balance de précision (d=0,05 mg).A preparation of the plant Hylocereus trigonus according to the method described in Example 3 gives the sample "Ht". 44mg of this batch are dissolved in 20ml of distilled water. Four human cystinic stones from the same donor are carefully selected and incubated with gentle shaking and at room temperature in 10 ml of preparation "Ht" or in 10 ml of distilled water as a control. At regularly spaced times (2 weeks), the stones are removed, rinsed with distilled water and weighed after drying on a precision balance (d = 0.05 mg).
Le tableau ci dessous rassemble les résultats de ces pesées. La dissolution des calculs dans le temps (jusqu'à la 8ιeme semaine) est exprimée en pourcentage de perte de poids.The table below collates the results of these weighings. The dissolution of stones over time (up to the 8 th week) is expressed as a percentage of weight loss.
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000028_0001

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'une plante ou d'un extrait d'une plante du genre Hylocereus pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou à traiter la lithiase ou une pathologie apparentée choisie parmi les affections entraînant une minéralisation excessive, un processus de calcification pathologique conduisant à la formation de calculs ou de nodules calcifiés dans un organe, un dépôt de cristaux, une affection inflammatoire rhumatismale, l'athéromatose, la chondrocalcinose et une calcification séquellaire.1. Use of a plant or an extract of a plant of the genus Hylocereus for the preparation of a pharmaceutical composition intended for preventing or treating lithiasis or a related pathology chosen from among the conditions resulting in excessive mineralization, a process pathological calcification leading to the formation of calcified stones or nodules in an organ, a deposit of crystals, a rheumatic inflammatory disease, atheromatosis, chondrocalcinosis and a sequential calcification.
2. Utilisation selon la revendication 1 , caractérisée en ce que la lithiase est la lithiase rénale et des voies urinaires, la lithiase vésiculaire et des voies biliaires, la lithiase des glandes salivaires principales, la lithiase des glandes salivaires accessoires, la lithiase parotidienne, sous-maxillaire ou sublinguale.2. Use according to claim 1, characterized in that the lithiasis is the renal lithiasis and of the urinary tracts, the vesicular lithiasis and of the biliary tracts, the lithiasis of the principal salivary glands, the lithiasis of the accessory salivary glands, the lithiasis parotid, under -maxillary or sublingual.
3. Utilisation selon la revendication 1 , caractérisée en ce que le dépôt de cristaux est la goutte (tophus).3. Use according to claim 1, characterized in that the deposit of crystals is gout (tophus).
4. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait provient d'un échantillon de la plante choisi parmi la plante entière, les racines, la tige, les fleurs, les graines et les fruits.4. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the extract comes from a sample of the plant chosen from the whole plant, the roots, the stem, the flowers, the seeds and the fruits.
5. Utilisation selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'extrait est une fraction aqueuse ou un extrait sec soluble dans l'eau.5. Use according to claim 4, characterized in that the extract is an aqueous fraction or a dry extract soluble in water.
6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 3 à 7, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique comprend en outre des molécules acceptables sur le plan pharmaceutique choisies parmi d'autres substances actives et des adjuvants.6. Use according to any one of claims 3 to 7, characterized in that the pharmaceutical composition also comprises pharmaceutically acceptable molecules chosen from other active substances and adjuvants.
7. Utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que l'adjuvant est choisi parmi un diluant, un lubrifiant, un colorant, un enrobage, un vernis, un produit mouillant, un aromatisant, un edulcorant, un épaississant, un stabilisant et un excipient.7. Use according to claim 6, characterized in that the adjuvant is chosen from a diluent, a lubricant, a dye, a coating, a varnish, a wetting product, flavoring, sweetening, thickening, stabilizing and excipient.
8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que l'adjuvant est choisi parmi le stéarate de magnésium, le talc, l'amidon, la cellulose, le saccharose, le lactose, la silice, l'eau, l'éthanol, le glycérol, les huiles végétales, l'huile de paraffine, le beurre de cacao, des glycérides semi-synthétiques.8. Use according to claim 7, characterized in that the adjuvant is chosen from magnesium stearate, talc, starch, cellulose, sucrose, lactose, silica, water, ethanol, glycerol, vegetable oils, paraffin oil, cocoa butter, semi-synthetic glycerides.
9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la plante ou l'extrait de plante utilisé appartient à l'espèce Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.9. Use according to any one of the preceding claims, characterized in that the plant or plant extract used belongs to the species Hylocereus trigonus (Haw.) Safford.
10. Procédé d'obtention d'un produit doué d'une activité anti-lithiasique comprenant la mise en œuvre d'une ou de plusieurs étapes de purification à partir d'un échantillon d'une plante du genre Hylocereus afin d'obtenir une ou plusieurs fractions ou molécules actives sur le plan thérapeutique.10. A process for obtaining a product endowed with an anti-lithiasic activity comprising the implementation of one or more purification steps from a sample of a plant of the genus Hylocereus in order to obtain a or more therapeutically active fractions or molecules.
11. Procédé d'extraction d'au moins un produit doué d'une activité anti- lithiasique à partir d'un échantillon d'une plante du genre Hylocereus comprenant les étapes suivantes : a) préparation d'un extrait à partir d'un échantillon d'Hylocereus, b) fractionnement dudit extrait obtenu à l'issue de l'étape a) à l'aide de méthodes de séparation, et éventuellement c) isolement du ou des produits actifs.11. A method of extracting at least one product endowed with anti-lithiasic activity from a sample of a plant of the genus Hylocereus comprising the following steps: a) preparation of an extract from a Hylocereus sample, b) fractionation of said extract obtained at the end of step a) using separation methods, and optionally c) isolation of the active product (s).
12. Procédé selon la revendication 10 ou 11 , caractérisé en ce que l'échantillon de la plante est choisi parmi la plante entière, la tige, les racines, les fleurs, les graines et les fruits.12. Method according to claim 10 or 11, characterized in that the sample of the plant is chosen from the whole plant, the stem, the roots, the flowers, the seeds and the fruits.
13. Procédé selon la revendication 11 ou 12, caractérisé en ce que l'étape a) de préparation de l'extrait comprend une étape au cours de laquelle l'échantillon de la plante est desséché, éventuellement broyé puis mélangé à un solvant, le mélange résultant étant chauffé lors d'une étape ultérieure, de préférence porté à la température d'ebullition du solvant.13. Method according to claim 11 or 12, characterized in that step a) of preparation of the extract comprises a step during which the sample of the plant is dried, optionally ground and then mixed with a solvent, the resulting mixture being heated in a subsequent step, preferably brought to the boiling point of the solvent.
14. Procédé d'obtention d'une préparation douée d'une activité anti- lithiasique à partir de la plante ou de racines d'une plante du genre Hylocereus, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :14. Method for obtaining a preparation endowed with an anti-lithiasic activity from the plant or roots of a plant of the genus Hylocereus, characterized in that it comprises the following stages:
(a) préparation d'un extrait par dessèchement et broyât de plante entière ou de racines d'une plante du genre Hylocereus ,(a) preparation of an extract by drying and crushing of the whole plant or of the roots of a plant of the genus Hylocereus,
(a') macération ou infusion de l'extrait obtenu à l'issue de l'étape (a) dans de l'eau osmosée à une température comprise entre 20 et 150CC environ, et(a ′) maceration or infusion of the extract obtained at the end of step (a) in osmosis water at a temperature between approximately 20 and 150 ° C. , and
(a") une ou plusieurs filtration(s) successive(s) de tout ou partie du produit de l'étape (a'), pour obtenir une préparation active.(a ") one or more successive filtration (s) of all or part of the product of step (a '), to obtain an active preparation.
15. Procédé selon la revendication 14, comprenant en outre les étapes suivantes :15. The method of claim 14, further comprising the following steps:
(a'") stérilisation du filtrat (partie soluble) obtenu à l'issue de l'étape (a"), et (a"") concentration de la préparation ainsi stérilisée.(a '") sterilization of the filtrate (soluble part) obtained at the end of step (a"), and (a "") concentration of the preparation thus sterilized.
16. Procédé selon la revendication 14 ou 15, caractérisé en ce qu'il comprend en outre les étapes suivantes: (b) fractionnement d'une partie au moins de la préparation, et (c) récupération d'au moins une fraction active.16. The method of claim 14 or 15, characterized in that it further comprises the following steps: (b) fractionation of at least part of the preparation, and (c) recovery of at least one active fraction.
17. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'étape de concentration (a"") est réalisée par évaporation de la phase aqueuse et séchage de la poudre obtenue, sous vide.17. The method of claim 15, characterized in that the concentration step (a "") is carried out by evaporation of the aqueous phase and drying of the powder obtained, under vacuum.
18. Procédé selon la revendication 17, caractérisé en ce que l'étape (a"") est réalisée à une température comprise entre 20 et 50°C.18. The method of claim 17, characterized in that step (a "") is carried out at a temperature between 20 and 50 ° C.
19. Procédé selon la revendication 15, caractérisée en ce que l'étape de concentration (a"") est réalisée par lyophilisation. 19. Method according to claim 15, characterized in that the concentration step (a "") is carried out by lyophilization.
20. Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que le fractionnement est réalisé par chromatographie liquide ou par CPC.20. The method of claim 16, characterized in that the fractionation is carried out by liquid chromatography or by CPC.
21. Utilisation d'un produit obtenu à l'issue de l'une des étapes d'un procédé selon l'une des revendications 10 à 20, pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement d'une pathologie choisie parmi la lithiase et une pathologie apparentée. 21. Use of a product obtained at the end of one of the steps of a process according to one of claims 10 to 20, for the preparation of a medicament intended for the prevention or the treatment of a pathology chosen from lithiasis and a related pathology.
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