WO2005042004A1 - Utilisation du facteur de transcription sox9 pour le traitement de tumeurs exprimant l’antigene carcinoembryonnaire - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to the use of the transcription factor SOX9 in the context of the treatment of tumors expressing the carcinoembryonic antigen (CEA), and in particular colon cancer.
- CEA carcinoembryonic antigen
- 1 / carcinoembryonic antigen is a membrane glycoprotein related to the immunoglobulin superfamily. It is expressed in very small quantities in the mucosa of the normal colon, but is overexpressed in color carcinomas. - as well as - in - other carcinomas of endodermal origin, such as carcinomas of the lung , breast, prostate, or ovaries.
- ACE concentrations are used as a diagnostic and therapeutic monitoring tool for these tumors. Due to its overexpression on the surface of tumor cells, CEA is also a target for tumor immunotherapy. Antibodies to this antigen are used to kill the tumor cells that express it. It also appears that the carcinoembryonic antigen is involved in tumor progression and in the development of metastases. WIRTH et al. (Clin. Exp. Metastasis 19: 155-160, 2002) observed that a 50% decrease in the expression of ACE in colon cancer cells of the HT 29 line increases cell death by apoptosis, and decreases the ability of these cells to develop tumors and form metastases in mice lacking immune defense.
- Sox9 is a transcription factor of the SOX family (for: S ⁇ Y-related HMG box), having a DNA binding domain of HMG type (High-Mobility Group). It is strongly expressed in chondrocytes, and is involved in chondrogenesis, in particular by increasing the expression of type II collagen. It also appears to be involved in sexual differentiation, and is expressed significantly during the development of the testes.
- the inventors have observed that the SOX9 gene is strongly expressed throughout the epithelium of the digestive tract, from the stomach to the rectum, as well as in human tumor cells of intestinal and pulmonary origin. They set out to study the role of this transcription factor in these tissues. In this context, they transfected cells from a human intestinal adenocarcinoma with a DNA sequence expressing the SOX9 protein, and found that the resulting overexpression of SOX9 resulted in an inhibition of the expression of the carcinoembryonic antigen. , and a decrease in cell growth.
- the subject of the present invention is therefore the use of the transcription factor SOX9, or of a polynucleotide coding for said transcription factor, for obtaining a medicament intended for the treatment of tumors expressing the carcinoembryonic antigen, with exception of breast carcinomas sensitive to agonists of retinoic acid receptors.
- said medicament is intended for the treatment of colon cancer.
- in the case of the direct use of the SOX9 polypeptide it is possible to couple said polypeptide to a transducing peptide, giving it the capacity to penetrate inside a living cell, independently of the presence of specific transporters or receptors (Cf. for example: LINDGREN et al., Trends Pharmacol. Sci. 21 (3): 99-102, 2000; SCHWARZE and DOWDY, Trends Pharmacol. Sci. 21 (2): 45 -48, 2000; SCHWARZE
- said polynucleotide is placed in an expression cassette, under the control of appropriate sequences allowing the control of its expression in the targeted target cells.
- expression control sequences will be chosen, and in particular a promoter allowing preferential expression in the cells expressing the carcinoembryonic antigen. Examples include the promoter of the carcinoembryonic antigen (OKABE et al., J. Cancer Res. Clin. Oncol. 129 (6): 367-373, 2003; GOTO et al., Int. J.
- a modified vector to preferentially target the cells expressing the ACE, such as those described for example by KHARE et al. (Cancer Res. 61, 370-375, 2001), or by MARTIN et al. (J. Virol. 77 (4): 2753-2756, 2003).
- EXAMPLE 2 OVEREXPRESSION OF SOX9 IN INTESTINAL CANCER CELLS.
- the HT29CI16E cell line is a clone isolated from the HT29 line originating from a human intestinal adenocarcinoma which has the characteristics of goblet cells and expresses the carcinoembryonic antigen (VELCICH et al., Cell Growth Differ. 6 (6): 749 -757, 1995). When these cells are kept in culture at confluence, the quantity of carcinoembryonic antigen increases considerably.
- the T-Rex system Invitrogen was used to make HT29CI16E cells inducible with doxycycline.
- HT29CI16E cells are stably transfected with the plasmid pcDNA6 / TR (Invitrogen) which allows the repressor protein Tetracycline (tetR) to be expressed.
- the cells expressing tetR are then transfected with the plasmid pcDNA4 / TO (Invitrogen) into which has been introduced the nucleotide sequence coding for the SOX9 protein carrying on its N-terminal part a polypeptide corresponding to the FLAG epitope, and placed under the control of 'a promoter inducible to doxycycline.
- EXAMPLE 3 INHIBITION OF THE EXPRESSION OF THE ANTIGEN ⁇ CAl * CINOEMBRYONNATRE-PAR.-SOX9- Amount of messenger RNA of the carcinoembryonic antigen
- the amount of messenger RNA of the carcinoembryonic antigen present in the two clones B and D, cultivated for two days in the state of non-confluence in the absence and in the presence of doxycycline is estimated by RT-PCR using the following two primers: GGGCCACTGTCGGCATCATGATTGG (SEQ ID NO: 1) and TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC (SEQ ID NO: 2) which allow the amplification of a fragment of 131 base pairs corresponding to the carcinoembra
- the PCR conditions are: 30 seconds of denaturation at 95 ° C, 30 seconds of hybridization at 60 ° C, 1 minute of amplification at 72 ° C, 30 cycles.
- the results are presented in FIG. 4.
- the two clones B and D express less messenger RNA of the carcinoembryonic antigen.
- Amount of SOX9 and Carcinoembryonic Antigen Clone B of HT29CI16E cells is cultured for 5 days in a non-confluent state and for 23 days at confluence, in the presence and absence of doxycycline.
- Carcinoembryonic antigen is present in cells not treated with doxycycline, i.e. in cells containing little SOX9, and is absent in cells treated with doxycycline, i.e. in cells containing a higher amount of SOX9.
- the SOX9 protein carrying the Flag label is still present in the cells treated with doxycycline and absent in the untreated cells.
- Carcinoembryonic antigen is present in untreated cells at a much higher rate than after 5 days of culture in the absence of doxycycline. On the other hand, the carcinoembryonic antigen practically disappeared from the cultured cells for 23 days in the presence of doxycycline.
- EXAMPLE 4 INHIBITION OF CELL GROWTH BY SOX9 Clone B of HT29CI16E cells is cultured for 1, 2 and 3 days, in the presence and in the absence of doxycycline.
- clone B HT29CI16E cells are grown for 5 days in a non-confluent state. Cell growth is estimated by measuring the amount of total protein in the culture dish by the Bradford method. The results are presented in Figures 6 and 7.
- the amount of total protein is 2.6 mg.
- the clone B of the HT29CI16E cells is cultured for 5 days in a six-well culture dish in the presence (3 wells) or in the absence
- the results show that the inhibition of the growth of HT29CI16E cells originating from a Human intestinal adenocarcinoma and expressing the carcinoembryonic antigen when expression of the SOX9 protein is induced to doxycycline, is due at least in part to an increase in cellular apoptosis.
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Abstract
La présente invention est relative à l'utilisation d'une séquence d'acide nucléique codant pour la protéine SOX9 pour l'obtention d'un médicament. Ledit médicament est utilisable pour diminuer l'expression de l'antigène carcinoembryonnaire (ACE) et diminuer la progression tumorale et le développement de métastases, dans le cadre du traitement de tumeurs exprimant l'antigène carcinoembryonnaire, et notamment du cancer du colon.
Description
UTILISATION DU FACTEUR DE TRANSCRIPTION SOX9 POUR LE TRAITEMENT DE TUMEURS EXPRIMANT L'ANTIGENE CARCINOEMBRYONNAIRE . La présente invention est relative à l'utilisation du facteur de transcription SOX9 dans le cadre du traitement de tumeurs exprimant l'antigène carcinoembryonnaire (ACE), et notamment du cancer du colon. 1/ antigène carcinoembryonnaire est une glycoprotéine membranaire apparentée à la superfamille des immunoglobulines. Il est exprimé en très faible quantité dans la muqueuse du colon normal, mais est surexprimé dans les carcinomes colo-^re taux.,—ainsi que--dans- d'autres- carcinomes d'origine endodermique, tels que les carcinomes du poumon, du sein, de la prostate, ou des ovaires. La détermination des concentrations sanguines en ACE est utilisée comme outil de diagnostic et de suivi thérapeutique de ces tumeurs. Du fait de sa surexpression à la surface des cellules tumorales, l'ACE constitue également une cible pour l'immunothérapie antitumorale. Des anticorps dirigés contre cet antigène sont utilisés pour éliminer les cellules tumorales qui l'expriment. Il apparaît également que l'antigène carcinoembryonnaire est impliqué dans la progression tumorale et dans le développement de métastases. WIRTH et al . (Clin. Exp. Metastasis 19 : 155-160, 2002) ont observé qu'une diminution de 50% de l'expression de l'ACE dans des cellules de cancer du colon de la lignée HT 29 augmente la mort cellulaire par apoptose, et diminue la capacité de ces cellules à développer des tumeurs et à former des métastases chez des souris dépourvues de défense immunitaires. Il apparaît donc souhaitable de disposer de moyens de diminuer l'expression de l'antigène carcinoembryonnaire dans les cellules tumorales, afin de permettre d' inhiber la croissance tumorale et de diminuer le développement de métastases. Sox9 est un facteur de transcription de la famille SOX (pour : SβY-related HMG box) , possédant un domaine de liaison à l'ADN de type HMG (High-Mobility Group) .
Il est fortement exprimé dans les chondrocytes, et est impliqué dans la chondrogenèse, notamment en augmentant l'expression du collagène de type II. Il apparaît également impliqué dans la différenciation sexuelle, et est exprimé de manière importante au cours du développement des testicules. Les mutations entraînant un déficit ou un dysfonctionnement de SOX9 se traduisent par une dysplasie campomélique, qui se manifeste par des déformations squelettiques importantes, et une inversion de sexe. AFONJA et al . , (Oncogène 21 :7850- 7860, 2002) ont récemment rapporté que SOX9 était également exprimé dans les tissus mammaires et rénaux, et que son e-xp-re-s-s-ion— -an-s— e~s—ee-1-l-u-les—rumo-r-aie-s- - de - e-a-nee-r—-mammai e- oestrogène dépendant sensibles à l'acide rétinoïque (lignée T- 47D) était augmentée par des agonistes des récepteurs de l'acide rétinoïque (RARs), entraînant une inhibition de la croissance cellulaire en retardant la transition entre la phase G0-G1 et la phase S du cycle cellulaire. Les Inventeurs ont observé que le gène SOX9 est fortement exprimé dans tout l'épithélium du tube digestif, depuis l'estomac jusqu'au rectum, ainsi que dans les cellules tumorales humaines d'origine intestinale et pulmonaire. Ils ont entrepris d' étudier le rôle de ce facteur de transcription dans ces tissus. Dans ce cadre, ils ont transfecté des cellules provenant d'un adénocarcinome intestinal humain par une séquence d'ADN exprimant la protéine SOX9, et ont constaté que la surexpression de SOX9 qui en résultait entraînait une inhibition de l'expression de l'antigène carcinoembryonnaire, et une diminution de la croissance cellulaire. La présente invention a ainsi pour objet l'utilisation du facteur de transcription SOX9, ou d'un polynucléotide codant pour ledit facteur de transcription, pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement de tumeurs exprimant l'antigène carcinoembryonnaire, à l'exception des carcinomes mammaires sensibles aux agonistes des récepteurs de l'acide rétinoïque.
Selon un mode de mise en œuvre préférée de la présente invention, ledit médicament est destiné au traitement du cancer du colon. Pour la mise en œuvre de la présente invention, dans le cas de l'utilisation directe du polypeptide SOX9, on peut coupler ledit polypeptide à un peptide transducteur, lui conférant la capacité de pénétrer à l'intérieur d'une cellule vivante, indépendamment de la présence de transporteurs ou de récepteurs spécifiques (Cf. par exemple : LINDGREN et al., Trends Pharmacol . Sci. 21(3) : 99-102, 2000 ; SCHWARZE et DOWDY, Trends Pharmacol. Sci. 21(2) : 45-48, 2000 ; SCHWARZE
-et- - -ai-^7——-T-r-e-nd-s-—-Ge-1-1-^ B-ol-,-- - -l-0-(-7-)--- - -2-9-0-2-9-5 2-Θ-0O—- PROCHIANTZ, Curr . Opin. Cell Biol. 12(4): 400-406, 2000 ; TAKENOBU et al., Mol. Cancer Ther. 1(12): 1043-1049, 2002). Pour la mise en œuvre de la présente invention dans le cas de l'utilisation d'un polynucléotide codant pour SOX9, on peut employer les vecteurs et les méthodes de transfert de gènes habituellement utilisés en thérapie génique, qui sont connus en eux-mêmes. Classiquement, ledit polynucléotide est placé dans une cassette d'expression, sous contrôle de séquences appropriées permettant le contrôle de son expression dans les cellules cibles visées. Avantageusement, on choisira des séquences de contrôle de l'expression, et notamment un promoteur permettant une expression préférentielle dans les cellules exprimant l'antigène carcinoembryonnaire. A titre d'exemples, on citera le promoteur de l'antigène carcinoembryonnaire (OKABE et al., J. Cancer Res. Clin. Oncol. 129(6) : 367-373, 2003 ; GOTO et al., Int. J. Cancer 94(3) : 414-419, 2001), une séquence consensus sur laquelle se fixe le facteur de transcription TCF-4 (KWONG et al., Oncogene 21(54) : 8340-8346, 2002 ; LIPINSKI et al., Mol. Ther. 4(4) : 365-371, 2001), et le promoteur de la cyclooxygenase-2 (YAMAMOTO et al., Mol. Ther. 3 : 385-394, 2001). La construction ainsi obtenue peut être administrée par l'une quelconque des méthodes, connues en elle-mêmes, qui sont utilisées en thérapie génique. A titre
d'exemples, on citera l'injection directe d'ADN nu, l'administration d'ADN encapsulé dans des liposomes ou associé à des protéines, ou l'utilisation de vecteurs viraux, par exemple de vecteurs dérivés de rétrovirus, de lentivirus, d' adénovirus, ou de virus associés aux adénovirus . Avantageusement, on pourra choisir un vecteur modifié pour cibler préferentiellement les cellules exprimant l'ACE, tels que ceux décrits par exemple par KHARE et al. (Cancer Res. 61, 370-375, 2001), ou par MARTIN et al. (J. Virol. 77(4) : 2753-2756, 2003). Selon un mode de mise en œuvre préféré de la présen-te i-n-ven-fe en-7- en peu-fc- u- -i-i-s-e- -SΘX-9-, - - ou un polynucléotide codant pour ledit facteur de transcription en association avec un autre traitement anti-tumoral. La présente invention sera mieux comprise à l'aide du complément d'information qui va suivre, qui se réfère à des exemples non-limitatifs illustrant la mise en évidence des propriétés de SOX9 sur des cellules cancéreuses intestinales exprimant l'antigène carcinoembryonnaire. EXEMPLE 1 : EXPRESSION DE SOX9 DANS L'EPITHELIUM DU TUBE DIGESTIF
Profil d'expression de sox9 dans l'intestin de souris 5 μg/puits d'extrait protéique mesurés par la méthode de Bradford et provenant de différents tissus du tube digestif (duodénum, jéjunum, iléum, cœcum, colon central, colon terminal) ont été déposés sur gel, puis analysés par transfert immunoélectrophorétique à l'aide d'anticorps dirigés contre SOX9. La quantité de protéine totale déposée sur le gel a été contrôlée à l'aide d'un anticorps dirigé contre la β-actine (la quantité de β-actine étant similaire dans tous les tissus et cellules) . Les résultats sont présentés dans la Figure 1. Les résultats montrent que la protéine SOX9 est fortement exprimée dans tout l'épithélium du tube digestif depuis l'estomac jusqu'au rectum.
Détection de l'ARN messager de SOX9 2 μg/puits d'ARNs messagers (ARNm) isolés d'une lignée cellulaire de cancer pulmonaire humain (A549) et d'une lignée cellulaire de cancer du colon humain (SW480) ont été déposés sur gel, puis détectés en utilisant la technique de transfert de Northern à l'aide d'une sonde ADNc de SOX9. Les résultats sont présentés dans la Figure 2. Les résultats montrent que la protéine SOX9 est fortement exprimée dans les cellules tumorales humaines d'origine intestinale et pulmonaire.
Expression de la protéine SOX9 dans différentes lignées cellulaires de cancer du colon humain 1 μg/puits d'extrait protéique (mesuré par la méthode de Bradford) de différentes lignées cellulaires provenant de cancer du colon humain (LS174, DLD-1, HCT118, SW480, HT29CI16E) a été déposé sur gel, puis analysé par transfert immunoélectrophorétique à l'aide d'un anticorps dirigé contre S0X9. Les résultats sont présentés dans la Figure 3. Les résultats montrent que la protéine SOX9 est exprimée dans toutes les lignées cellulaires provenant de cancer du colon humain.
EXEMPLE 2 : SUREXPRESSION DE SOX9 DANS DES CELLULES CANCEREUSES INTESTINALES. La lignée cellulaire HT29CI16E est un clone isolé à partir de la lignée HT29 provenant d'un adénocarcinome intestinal humain qui possède les caractéristiques des cellules caliciformes et exprime l'antigène carcinoembryonnaire (VELCICH et al., Cell Growth Differ. 6(6) : 749-757, 1995). Lorsque ces cellules sont maintenues en culture à confluence, la quantité d'antigène carcinoembryonnaire augmente considérablement. Le système T-Rex (Invitrogen) a été utilisé pour rendre les cellules HT29CI16E inductibles à la doxycycline. Les cellules HT29CI16E sont transfectées de façon stable avec le plasmide pcDNA6/TR (Invitrogen) qui permet de faire exprimer la protéine répresseur Tétracycline (tetR) . Les
cellules exprimant tetR sont ensuite transfectées avec le plasmide pcDNA4/TO (Invitrogen) dans lequel a été introduit la séquence nucléotidique codant pour la protéine SOX9 portant sur sa partie N-terminale un polypeptide correspondant à l'épitope FLAG, et placée sous le contrôle d'un promoteur inductible à la doxycycline. Deux clones (clones B et D) des cellules HT29CI16E, transfectées, qui expriment la protéine SOX9 après induction à la doxycycline, sont sélectionnés par transfert immunoélectrophorétique à l'aide d'anticorps anti-FLAG. EXEMPLE 3 : INHIBITION DE L'EXPRESSION DE L'ANTIGENE ~CAl*CINOEMBRYONNATRE-PAR.-SOX9- Quantité d'ARN messager de l'antigène carcinoembryonnaire La quantité d'ARN messager de l'antigène carcinoembryonnaire présent dans les deux clones B et D, cultivés pendant deux jours à l'état de non-confluence en absence et en présence de doxycycline, est estimée par RT-PCR en utilisant les deux amorces suivantes : GGGCCACTGTCGGCATCATGATTGG (SEQ ID NO : 1) et TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC (SEQ ID NO : 2) qui permettent l'amplification d'un fragment de 131 paires de bases correspondant à l'antigène carcinoembryonnaire. Les conditions de PCR sont : 30 secondes de dénaturation à 95°C, 30 secondes d'hybridation à 60°C, 1 minute d'amplification à 72°C, 30 cycles. Les résultats sont présentés dans la Figure 4. + = présence de doxycycline - = absence de doxycycline En présence de doxycycline, c'est à dire en conditions de surexpression de SOX9, les deux clones B et D expriment moins d'ARN messager de l'antigène carcinoembryonnaire. Quantité de SOX9 et d' antigène carcinoembryonnaire Le clone B des cellules HT29CI16E est cultivé pendant 5 jours à l'état de non-confluence et pendant
23 jours à confluence, en présence et en absence de doxycycline. Par transfert immunoélectrophorétique à l'aide d'anticorps anti-FLAG et anti-antigène carcinoembryonaire, la quantité de protéine SOX9 ainsi que celle de l'antigène carcinoembryonnaire ont été évaluées. Les résultats sont présentés dans la Figure 5. + = présence de doxycycline - = absence de doxycycline Après maintien des cellules en culture pendant 5 jours à l'état de non-confluence, la protéine SOX9 portant 1—é-ti-q-u-e-tte—F-l-ag—es-fe— -r-é-sen-fee—-a-n-s-—le-s—eei1-uies trai-tées -à--ia- doxycycline et absente dans les cellules non traitées. L' antigène carcinoembryonnaire est présent dans les cellules non traitées à la doxycycline, c'est-à-dire dans les cellules contenant peu de SOX9, et est absent dans les cellules traitées à la doxycycline, c'est-à-dire dans les cellules contenant une quantité plus importante de SOX9. Après maintien des cellules en culture pendant 23 jours à l'état de confluence, la protéine SOX9 portant l'étiquette Flag est toujours présente dans les cellules traitées à la doxycycline et absente dans les cellules non traitées. L'antigène carcinoembryonnaire est présent dans les cellules non-traitées à un taux bien plus élevé qu'après 5 jours de culture en absence de doxycycline. En revanche, l'antigène carcinoembryonnaire a pratiquement disparu des cellules cultivées pendant 23 jours en présence de doxycycline . Ces résultats montrent que la sur-expression de la protéine S0X9 diminue l'expression de l'antigène carcinoembryonnaire dans les cellules HT29CI16E provenant d'un adénocarcinome intestinal humain.
EXEMPLE 4 : INHIBITION DE LA CROISSANCE CELLULAIRE PAR SOX9 Le clone B des cellules HT29CI16E est cultivé pendant 1, 2 et 3 jours, en présence et en absence de doxycycline. Dans une autre série d'expérience, le clone B
des cellules HT29CI16E est cultivé pendant 5 jours à l'état de non-confluence. La croissance cellulaire est estimée en mesurant la quantité de protéines totales dans la boîte de culture par la méthode de Bradford. Les résultats sont présentés dans les Figures 6 et 7. + = présence de doxycycline - = absence de doxycycline abscisse = durée de la culture (jours) ordonnée == quantité de protéines totales par bo-î-te—de—c-ui-t-u-re—(-mg-)- Après 1 jour de culture, il y a 0,25 mg de protéines en absence de doxycycline et 0,24 mg en présence de doxycycline. Après 2 jours de culture, il y a 0,38 mg de protéines en absence de doxycycline et 0,34 mg en présence de doxycycline. Après 3 jours de culture, il y a 0,58 mg de protéines en absence de doxycycline et 0,48 mg en présence de doxycycline. Après 5 jours à l'état de non-confluence, en absence de doxycycline, la quantité de protéines totales cellulaires est de 4 mg. Lorsqu'on induit l'expression de
SOX9 à la doxycycline, la quantité de protéines totales est de 2,6 mg. Dans une autre série d'expérience, le clone B des cellules HT29CI16E est cultivé pendant 5 jours dans une boîte de culture de six puits en présence (3 puits) ou en absence
(3 puits) de doxycycline. Les cellules sont ensemencées à raison de 2xl05 cellules/puits. Après 5 jours, les cellules sont marquées au cristal violet (marquage de l'ADN) . Les résultats sont représentés dans la Figure 8A. En présence de doxycycline, une diminution significative du marquage de l'ADN est observée par rapport à celui du clone B cultivé en absence de doxycycline. Afin de quantifier la quantité de cellules, après coloration au cristal violet, les cellules sont solubilisées au SDS puis la densité optique est mesurée à 570 nm. Les
résultats sont exprimés en pourcentage du clone B non induit par la doxycycline. Les résultats sont représentés dans la Figure 8B. + = présence de doxycycline - = absence de doxycycline En présence de doxycycline, c'est à dire en conditions de surexpression de S0X9, une diminution d'environ 40% de la prolifération cellulaire est observée par rapport à celle du clone B cultivé en absence de doxycyline. Ces résultats montrent que l'expression de la protéine SOX9 diminue la croissance cellulaire des cellules HT-2-9G-I-l-β-E— -r-ov-en-a-n-t——u- —a-dé-n-ee-a-r-ein-ome—in esti-n-ai- -humain et exprimant l'antigène carcinoembryonnaire. EXEMPLE 5 : AUGMENTATION DE L'APOPTOSE CELLULAIRE PAR SOX9 Le clone B des cellules HT29CI16E est cultivé pendant 4 jours, en présence et en absence de doxycycline. L' apoptose cellulaire est mise en évidence en utilisant le DeadEnd Corimetric TUNEL System (Promega) . Les résultats sont présentés dans la Figure 9. → = présence de cellules apoptotiques Après 4 jours, en présence de doxycycline, une augmentation significative du nombre de cellules apoptotiques est observée par rapport au clone B cultivé en absence de doxycycline . Afin de réaliser une étude statistique, le nombre de cellules totales par champs de microscope (n=4), ainsi que le nombre de cellules en apoptose par champ (n=22) ont été déterminés dans les deux conditions (absence ou présence de doxycycline) . Les résultats sont présentés dans le Tableau 1 ci-dessous.
Claims
REVENDICATIONS 1) Utilisation du facteur de transcription SOX9, ou d'une séquence d'acide nucléique codant pour ledit facteur de transcription pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement de tumeurs exprimant l'antigène carcinoembryonnaire, à l'exception des carcinomes mammaires sensibles aux agonistes des récepteurs de l'acide rétinoïque. 2) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit médicament est destiné au traitement du cancer du colon.
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-
2004
- 2004-10-26 WO PCT/FR2004/002751 patent/WO2005042004A1/fr not_active Ceased
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AFONJA OLUBUNMI ET AL: "RAR agonists stimulate SOX9 gene expression in breast cancer cell lines: evidence for a role in retinoid-mediated growth inhibition.", ONCOGENE. 7 NOV 2002, vol. 21, no. 51, 7 November 2002 (2002-11-07), pages 7850 - 7860, XP002283558, ISSN: 0950-9232 * |
| PAUL RONJON ET AL: "Potential use of Sox9 gene therapy for intervertebral degenerative disc disease.", SPINE. 15 APR 2003, vol. 28, no. 8, 15 April 2003 (2003-04-15), pages 755 - 763, XP008031326, ISSN: 1528-1159 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2861307B1 (fr) | 2006-02-03 |
| FR2861307A1 (fr) | 2005-04-29 |
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