WO2003101493A1 - Composition administree par intraveineuse, son procede de production et sa preparation - Google Patents

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polylactic acid
composition
intravenous injection
fine particles
steroid
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Yutaka Mizushima
Tsutomu Ishihara
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Ltt Bio-Pharma Co., Ltd.
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Definitions

  • composition for intravenous injection its production method and its preparation
  • the present invention relates to a composition for intravenous injection, a method for producing the same, and a preparation thereof, and more particularly, to a composition for intravenous injection for targeting to a lesion site and sustained release of a drug, a method for producing the same, and a preparation thereof.
  • PGE1 prostaglandin El
  • lipo PGE1 prostanoid vascular wall target agent
  • the second generation of lipo PGE1 encapsulating PGE1 ester has excellent stability and encapsulation rate, and the effect is considerably higher than that of the first generation.
  • PGE1, PGI2, etc. as one of many drugs in polylactic acid-daricholic acid copolymer (PLGA) or polylactic acid fine particles (PLA).
  • DDS drug delivery system
  • the present invention provides an intravenous injection which is gradually degraded in place of fat microparticles, has a sufficient sustained release effect, has an excellent encapsulation rate like the second generation lipo PGE1, and has a sustained release effect at a lesion site.
  • a composition for use a method for producing the same, and a preparation thereof.
  • the composition for intravenous injection of the present invention comprises prostanoid or steroid encapsulated in PLGA or PLA fine particles, and lecithin or a similar surfactant is adsorbed on the surface of the PLGA or PLA fine particles. It comes from things.
  • the diameter of the PLGA or PLA microparticles is 50 to 500 nm, which is a preferable range in which the microparticles are easily taken into the lesion site. If it is less than 50 mn, it will be too small to enter the area other than the lesion, and if it is 500 to l, 000 nm or more, it will be too large to enter the lesion.
  • the prostanod is a prostanoic acid ester type prodrug that is easily encapsulated in PLGA or PLA microparticles, is chemically stable, and is easily converted to prostanoic acid in a living body.
  • the prostanoic acid ester type prodrug is one in which an alkyl ester (C1 to 10) is introduced at the 1-position of PGE1 and an acyl group (C2 to 5) is introduced at the 9-position.
  • the steroid is a steroid ester.
  • the steroid ester is a betamethasone or a similar steroid with an acetyl ester (C2-10) introduced at the 17th and 21st positions.
  • the method for producing the composition for intravenous injection of the present invention is characterized in that esterified prostanoic acid or esterified steroid and PLGA or PLA fine particles are mixed with an organic solvent such as dichloromethane or dimethyl sulfoxide (DMSO). Dissolve, Emulsification in water using an ultrasonic generator or a polytron stirrer using lecithin or a similar surfactant (pull mouth nick or the like) capable of making the diameter 50 to 500 mn.
  • the micelle of lecithin or similar surfactant is removed from the composition.
  • adsorbing the relecithin or a similar surfactant to the surface of the PLGA or PLA fine particles using an ultrasonic generator or a polytron stirrer is used.
  • the preparation for intravenous injection of the present invention comprises a stabilizer and an isotonic agent added to the composition for intravenous injection after freeze-drying, resuspending and administering the composition.
  • the composition for intravenous injection of the present invention further comprises a drug capable of sustained release while retaining biological activity in PLGA or PLA fine particles in cells such as phagocytic macrophages. It is.
  • the drug-encapsulated preparation comprises PLGA / PLA fine particles covered with a surfactant such as lecithin as described above, and prostanic acid ester or steroid ester encapsulated in the fine particles.
  • a surfactant such as lecithin as described above
  • prostanic acid ester or steroid ester encapsulated in the fine particles.
  • surfactants affect the state of emulsification, so changing the weight ratio of lecithin and PLGA / PLA microparticles during preparation or changing the strength of an emulsifying device such as an ultrasonic generator changes the particle size of the formulation. Can be controlled. Different granules are taken up by various lesion sites (pathological vascular walls, inflamed sites, cancerous tissues, and the reticuloendothelial system involved in the formation of pathological conditions).
  • Increasing the encapsulation rate of a drug in a drug product can be achieved by increasing the lipophilicity of the drug by esterification. At that time, it is necessary to optimize the length of the alkyl or acyl chain to be introduced. Furthermore, by using microparticles of PLGA or PLA having different molecular weights, the controlled release rate of the drug can be controlled.
  • PK / PD pharmacokinetic and pharmacological action
  • the present invention uses PLGAZ PLA fine particles that are gradually degraded instead of fat fine particles, and provides a sufficient sustained release effect.
  • esterified steroids a preparation having an excellent encapsulation rate like the second-generation lipo PGE1 and having a sustained release effect at a lesion site, that is, an excellent target effect and a sustained release effect by the above composition Preparations that have both release effects can be prepared.
  • FIG. 1 is a diagram showing encapsulation rates of various drugs in PLGA fine particles prepared according to Example 1.
  • FIG. 2 is a diagram showing the release behavior of AS006 from the AS006-enclosed PLGA fine particles prepared according to Example 2.
  • FIG. 3 is a diagram showing the release behavior of BDP from BDP-encapsulated PLGA fine particles prepared according to Example 2.
  • FIG. 4 shows that each drug-encapsulated PLGA microparticle prepared according to Example 1 was 1 ° / p.
  • FIG. 4 is a graph showing the residual ratio of a drug to PLGA fine particles after suspension in an SDS aqueous solution or 80% FBS at 37 for 5 minutes.
  • FIG. 5 is a diagram showing the turbidity of PLGA fine particles when the PLGA fine particles prepared according to Example 2 were freeze-dried in the presence of each stabilizer and then resuspended in water.
  • FIG. 6 is a diagram showing the release behavior of AS006 when FLGA microparticles from which surface AS006 has been removed prepared according to Example 4 are lyophilized in 10% sucrose and resuspended in PBS containing 3% BSA. is there.
  • FIG. 7 is according to the second embodiment!
  • FIG. 3B is a diagram showing the release behavior of BDP when the prepared BDP-encapsulated PLGA microparticles are lyophilized in 10 ° / 0 sucrose and resuspended in PBS containing 3% BSA.
  • FIG. 8 is a diagram in which the uptake of macrophage cells by rhodamine-encapsulated PLGA microparticles prepared according to Example 1 and the cell persistence of the taken up rhodamine were observed over time with a fluorescence microscope.
  • FIG. 9 is a graph showing the inflammation-suppressing effect of BDP-containing PLGA fine particles prepared according to Example 2 on an arthritis model rat. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
  • the obtained microparticles were centrifuged at 13000 g for 10 minutes, and the drug contained in the supernatant and in the precipitate was quantified by HPLC.
  • HPLC was analyzed on a water / acetonitrile system using a C4 reversed-phase ram (Waters, Symmentry300) to measure absorption at 210 nm or 240 nm.
  • a drug as a prostanide, PGE1 and its carboxylic acid and its hydroxyl group are esterified AS006. (BDP) was used.
  • Example 1 The preparation prepared in Example 1 was suspended in 80% FBS ( ⁇ fetal serum) or 1% SDS aqueous solution, incubated at 37 ° C for 5 minutes, centrifuged at 13,000 g for 10 minutes, and precipitated. The amount of drug contained was quantified by HPLC.
  • the AS006-enclosed PLGA microparticles prepared in Example 2 were added at 1 ° /. Suspended in SDS, 5 After incubating at 37 ° C for 30 minutes, the plate was washed by centrifugation at 5000g for 10 minutes. The obtained fine particles were redispersed in a lecithin suspension while irradiating ultrasonic waves, and then the surface potential value of the fine particles was measured. The result showed that the surface potential value of the preparation prepared in Example 2 was -6.6 mV, but after addition of SDS, it was negatively changed to -57.2 mV, indicating that lecithin was desorbed from the surface. It was revealed.
  • both surface AS006s were released from the fine particles. Further, after the particles were washed by centrifugation, ultrasonic treatment was performed in the lecithin suspension, and the surface potential value was -6.3 mV, which was almost the same value as before addition of SDS. Therefore, it became clear that the PLGA fine particles having the AS006 encapsulated in the PLGA, the surface of which was covered with lecithin, could be prepared.
  • the suspension of PLGA fine particles prepared according to Example 2 was supplemented with 10% of a stabilizer, frozen with acetone / dry ice, and then freeze-dried.
  • the turbidity of the suspension when the dried PLGA microparticles were redispersed in water was measured with a spectrophotometer, and the particle size was measured with a dynamic light scattering meter.
  • the ASGA-containing PLGA fine particles prepared according to Example 4 and the BDP-containing PLGA fine particles prepared according to Example 2 were freeze-dried in 10% sucrose, and the residual drug amount and release behavior were measured in Example 2. It measured according to.
  • the PLGA fine particles freeze-dried with water only showed a decrease in turbidity due to the formation of aggregates, and the redispersibility was extremely low. Also, significant aggregation was observed when mannitol or PEG was added as a stabilizer. However, trehalose and sucrose maintained almost the same turbidity as before the freeze-drying treatment. As a result of measuring these particle diameters by light scattering, the average particle diameter (weight average value) of the fine particles that had not been freeze-dried was 319 mn, whereas that of the PLGA fine particles to which trehalose and sucrose were added was each.
  • Macrophages were collected from the abdominal cavity of mice stimulated by intraperitoneal administration of 1.5% 10% proteose peptone, inoculated at 100,000 cells / 48 well, and cultured for several days in RPMI1640 medium (containing 10% FBS). After the medium was replaced, PLGA microparticles containing the fluorescent dye rhodamine prepared according to Example 1 encapsulated as a drug model were added, and the mixture was incubated at 37 ° C for 1 hour and a half. After washing with PBS three times, after a predetermined time, the cells were fixed with a 4% neutral formalin solution, and the cells were observed with a fluorescence microscope (IX-70, Olympus).
  • the results showed that the macrophages were remarkably incorporated into the microparticles by encapsulating them in microparticles, as compared to the case where only rhodamine was added.
  • the medium was exchanged and incubated at 37 ° C. As a result, it was revealed that a considerable amount of rhodamine remained in the cells even after one week.
  • the adjuvant suspension containing 6 mg / ml dry M. Butyricum 100 1 was injected into the tail of the rat, and after 6 days, sustained by injecting 100 ⁇ l of 1% strength lagenin-containing saline into the plantar of the left foot An arthritis model rat was used (Y. Mizushima et.al., J. Pharm. Pharmac, 1972, 24, 781-785). Twenty-four hours after the administration of force lagenin, the BDP-containing PLGA preparation (50 ⁇ g / rat as betamethasone) prepared in Example 2 was administered via the tail vein, and the swelling of the feet was measured over time using a volume meter.
  • a rat administered subcutaneously with betamethasone phosphate having the same titer as a rat administered with PBS alone in the tail vein was used.
  • the swelling was strongly suppressed on the first day, but the inhibitory effect rapidly decreased thereafter.
  • the PLGA preparation containing BDP showed the same level of inhibitory effect as betamethasone phosphate on the first day, and it was clarified that swelling could be strongly suppressed for several days thereafter.

Description

明細書
静脈注射用組成物、 その製造法およびその製剤 技術分野
本発明は、 静脈注射用組成物、 その製造法およびその製剤に関し、 詳しくは 病変部位へのターゲテイングと薬物徐放を目的とした静脈注射用組成物、 その 製造法およびその製剤に関する。 背景技術
従来、 プロスタグランジン El (PGEl)及び類似のプロスタノィドの血管壁タ ーゲット剤 （リポ PGE1) としては、 発明者の一人等が直径 200nmの脂肪微 粒子中に PGE1あるいはそのエステルを封入したものを開発し、 その一部は巿 販され、 いくつかの国で広く使用されている。
PGE1エステルを封入した第 2世代のリポ PGE1は安定性、 封入率に優れ、 効果は第 1世代に比較しかなり増した。
又、 これまで他の研究者の特許にもポリ乳酸-ダリコール酸共重合体 (PLGA) またはポリ乳酸微粒子 (PLA)に、 多数の薬剤のうちの一つとして PGE1、 PGI2 などを封入し、 それをドラッグデリパリ一システム（DDS)に応用した特許が提 出されている。
し力 し、 前記リポ PGE1はキャリアが易分解性であるため、 血管壁にターゲ ットされた後すぐに分解され主薬が遊離してしまい十分な徐放効果が得られな いという問題点があった。
又、 前記 PGE1、 PGI2などを封入し、 それを DDSに応用した技術において は、 PGE1、 PGI2 そのものは PLGA微粒子に封入されないという問題点があ つた。
本発明者らは、 粒子の封入率や生体内での薬物動態も考慮し、 PGE1 などの プロスタノイ ドのいかなるエステル体が最も適しているかを研究し、 また、 我 々の以前の発明では 200nmの微粒子で表面がレシチンで覆われているが、 粒 径ゃ界面活性剤も検討し、 その作成法を確立することを研究し、 同様にステロ イドにおいても、 いかなるエステル体が適しているかを検討し、 それらにより 最も優れた徐放性ターゲット製剤のプロスタノィド PLGA/PLA製剤あるいは ステロイ ド PLGA/PLA製剤を提供することを考えた。
そこで、 本発明は、 脂肪微粒子の代わりに徐々に分解され、 十分な徐放効果 が得られ、 また、 第 2世代リポ PGE1 と同様に封入率に優れ、 病変部位で徐放 効果を有する静脈注射用組成物、 その製造法およびその製剤を提供することを 目白勺とする。 · 発明の開示
前記目的を達成するために本発明の静脈注射用組成物は、 プロスタノィドぁ るいはステロイドを PLGAまたは PLA微粒子に封入し、 レシチンあるいは類 似界面活性剤を当該 PLGAまたは PLA微粒子の表面に吸着させたことからな る。
又、 PLGA、 PLAの微粒子の直径が 50〜 500nmであることが、 病変部位に 取り込まれやすい好適の範囲である。 50mn以下は小さすぎて病変部位以外に 入ってしまい、 500〜 l,000nm以上だと大きすぎて病変部位に入らないからで める。
前記プロスタノ ドが、 PLGAまたは PLA微粒子に封入されやすく、 化学 的に安定で、 しかも生体内でプロスタン酸に容易に変換されるプロスタン酸ェ ステル型プロドラッグであることが好適である。
前記プロスタン酸エステル型プロドラッグが、 PGE1 の 1位にアルキルエス テル (C1〜 10) と 9位にァシル基（C2〜 5)を導入したものであることが好適 である。
前記ステロイドが、 ステロイドエステルであることが好適である。
前記ステロイドエステルが、 ベタメサゾンや類似ステロイドの 17位及び 21 位目にァシルエステル （C2 〜 10) を導入したものであることが好適である。 又、 本発明の静脈注射用組成物の製造法は、 エステル化プロスタン酸あるい はエステル化ステロイドと PLGAまたは PLA微粒子をジクロロメタンあるい はジメチルスルホキシド（DMSO)で代表されるなどの有機溶媒などに溶解し、 前記 50〜 500mnの直径にすることができるレシチンあるいは類似界面活性剤 (プル口ニック等) を用い、 水中で、 超音波発生器あるいはポリ トロン攪拌機 などにて乳化することである。
さらに、 前記の製造法により製造した組成物のレシチンあるいは類似界面活 性剤 （これらに主薬が多く含まれる場合あり） を組成物から除去した後、 レシ チンあるいは類似界面活性剤のミセルを当該組成物の水懸濁液中に加え、 超音 波発生器あるいはポリ トロン攪拌機などにて、 再ぴレシチンあるいは類似界面 活性剤を PLGAまたは PLA微粒子の表面に吸着させることである。
又、 本発明の静脈注射用製剤は、 前記静脈注射用組成物を凍結乾燥処理した 後再懸濁し投与ができるために加える安定剤及ぴ等張剤からなるものである。 なお、 本発明の静脈注射用組成物は、 さらに、 貪食作用のあるマクロファー ジ等の細胞内で、 生物活性を保持したまま徐放可能な薬物を PLGAまたは PLA微粒子に封入したことからなるものである。
本発明の静脈注射用組成物、 いいかえれば薬物封入製剤は、 前記のようにレ シチン等の界面活性剤に覆われた PLGA/PLA微粒子と当該微粒子に封入され たプロスタン酸エステルあるいはステロイ ドエステルからなるが、 この微粒子 を製剤として利用するためには、 微粒子の表面物性 ·粒径 ·薬物の封入率及び 放出挙動などを制御することが重要である。
表面物性は、 レシチンに加え、 類似の界面活性剤を利用することで制御可能 である。 また、 界面活性剤は乳化状態に影響を及ぼすので、 調製時のレシチン と PLGA/PLA微粒子の重量比を変えたり、 超音波発生器などの乳化装置の強 度などを変えることで製剤の粒径を制御できる。 各種病変部位 （病的血管壁、 炎症部位、 癌組織、 病的状態の形成に関与する細網内皮系） にどの粒経が取り 込まれるかがそれぞれ異なる。
薬物の製剤への封入率を高めるには、 薬物のエステル化によりその脂溶性を 高めることで可能となる。 また、 その際、 導入するアルキルやァシル鎖の長さ を最適化する必要がある。 更に、 異なる分子量の PLGAや PLA微粒子を利用 することで薬物の徐放速度の制御ができる。 開発した製剤の評価を行なうため には、 PK/PD (薬物動態や薬理作用） の検討に適した in vitro あるいは動物 (in vivo) モデルを構築する必要がある。
前記のように、 本発明は、 脂肪微粒子の代わりに徐々に分解される PLGA Z PLA微粒子を用いたものであり、 十分な徐放効果が得られるものである。 また 、 エステル化したステロイ ドを利用することで、 第 2世代リポ PGE1 と同様に 封入率に優れ、 病変部位で徐放効果を有した製剤、 即ち、 前記組成により、 す ぐれたターゲット効果および徐放効果の両方を有する製剤が調製されるもので める。 図面の簡単な説明
図 1は、 実施例 1に従い調製した PLGA微粒子への様々な薬物の封入率を示 す図である。
図 2は、 実施例 2に従レ、調製した AS006封入 PLGA微粒子からの AS006の 放出挙動を示す図である。
図 3は、 実施例 2に従い調製した BDP封入 PLGA微粒子からの BDPの放 出挙動を示す図である。
図 4は、 実施例 1に従い調製した各薬物封入 PLGA微粒子を 1°/。SDS水溶液 あるいは 80%FBS中に 37でで 5分間懸濁放置した後の薬物の PLGA微粒子へ の残存率を示した図である。
図 5は、 実施例 2に従い調製した PLGA微粒子を各安定剤存在下で凍結乾燥 後、 水にて再懸濁した時の PLGA微粒子の濁度を示した図である。
図 6は、 実施例 4に従い調製した表層の AS006を除去した FLGA微粒子を 、 10%スクロース中で凍結乾燥し 3%BSA含有 PBS 中で再懸濁した時の AS006の放出挙動を示した図である。
図 7は、 実施例 2に従！/、調製した BDP封入 PLGA微粒子を、 10°/0スクロ一 ス中で凍結乾燥し 3%BSA含有 PBS中で再懸濁した時の BDPの放出挙動を示 した図である。
図 8は、 実施例 1に従い調製したローダミン封入 PLGA微粒子のマクロファ ージ細胞の取り込みとその取り込まれたローダミンの細胞残留性を経時的に蛍 光顕微鏡で観察した図である。 図 9は、 実施例 2に従い調製した BDP含有 PLGA微粒子の関節炎モデルラ ットへの炎症抑制効果を示した図である。 発明を実施するための最良の形態
以下に本発明の実施例について記述する。
(実施例 1) PLGA/PLA製剤作成法
PLGA (和光）あるいは PLA (和光） 100mg、 卵黄レシチン（和光） 10mg及び薬 物 （0.5mg) を 1ml ジクロロメタン中に溶解し、 氷浴により冷却しながら PolytronPT-2100 ( Kinematica)あるいは超音波発生器（ TOMY)で攪拌した 25ml の蒸留水中に、 27G の針を通してゆつくりと滴下した。 そのまま攪拌を 10分間続けた後、 スターラーにて室温で 2時間攪拌を続け、 ジクロロメタンを 留去した。 得られた微粒子は、 限外ろ過（アミコン、 centriprepYM-10)で濃縮 しゲルろ過（フアルマシア、 PD-10)により精製した。 得られた微粒子を 13000g で 10分遠心し、 上清中及び沈殿中に含まれる薬物を HPLCにより定量した。 HPLCは、 水/ァセトニトリル系で C4逆相力ラム（Waters, Symmentry300)を 用い 210nmあるいは 240nmの吸収を測定する系で解析した。 薬物としては、 プロスタノィ ドとして、 PGE1 及びそのカルボン酸と水酸基をエステル化した AS006, ステロイ ドとして、 ハイ ドロコルチゾン ·酢酸ハイ ドロコルチゾン · 酪酸プロピオン酸ハイ ドロコルチゾン（HBP) .ベタメサゾン ·ジプロピオン酸 ベタメサゾン（BDP)を用いた。
結果は図 1に示したように、 PGE1 はほとんど封入させることができなかつ たのに対し、 エステル体である AS006においては、 封入率が顕著に高くなつた 。 また、 ハイドロコルチゾンとべサメサゾンはほとんど封入させることができ なかったのに対し、 そのエステル体である HBPと BDPにおいては、 封入率が 顕著に高くなつた。 '
(実施例 2)
PLGA (和光）あるいは PLA (和光） 30mg、 卵黄レシチン（和光） 3mg及ぴ AS006あるいは BDP (lmg) を 1mlジクロロメタン中に溶解し、 実施例 1 と 同様の方法により微粒子を調製した。 得られた微粒子を蒸留水、 PBS あるいは 3%BSA含有 PBS中に懸濁し、 所定時間後 13000gで 10分遠心し、 沈殿中に 含まれる AS006あるいは BDPを HPLCにより定量した。
結果は図 2示したように、 37 °Cの水あるいは PBS中では、 11日にわたり徐 々に AS006が放出され、 また、 37での 3%BSAを含んだ PBS中では、 4日に わたり AS006が放出され、 プロスタノィドが微粒子から徐放されることが明ら かになつた。
4 °Cの水中でインキュベートした場合には、 10 日後でもほとんど AS006の 放出が確認されず、 また、 4 °Cの 3%BSAを含んだ PBS中でも、 初期に 30%程 度が一度に放出されたが、 その後は極めて緩やかな放出挙動を示した。 よって 、 この微粒子は 4 °Cの水懸濁液中で安定な製剤であることが明らかになった。 さらに、 図 3に示したように、 BDPも 37。じの 3 % BSA含有 PBS中で、 AS006と同様の徐放挙動をとることが明らかになった。
(実施例 3)
実施例 1にて調製した製剤を 80%FBS (ゥシ胎児血清） あるいは 1%SDS水 溶液中に懸濁し、 37 °Cで 5分ィンキュベートした後、 13,000gで 10分遠心し 、 沈殿中に含まれる薬物量を HPLCにより定量した。
結果は図 4に示すように、 1%SDSの存在下あるいは 80%FBS中では、 10〜 20%程度の AS006しか残存していなかった。 AS006に対する PLGAの重量比 を高めるなど調製条件を変えてもこの分布の割合は変化しなかったことから、 AS006 においては PLGA層よりレシチン層への親和性が高いことが明らかに なった。 また、 BSAの濃度依存的にその残存率が減少することがわかった。 一 方、 ステロイド誘導体である BDPや他の薬物においては、 SDS の添加によつ ても 80%以上が PLGA内に残存しており、 薬物が PLGA内に分布しているこ とが明らかになった。
(実施例 4)
実施例 2にて調製した AS006封入 PLGA微粒子を 1°/。SDS中に懸濁し、 5 分間 37 °Cでィンキュベート後 5000gで 10分遠心洗浄した。 得られた微粒子を レシチン懸濁液中で超音波照射をしながら再分散させ、 その後微粒子の表面電 位値を測定した。 結果は、 実施例 2 で調製した製剤の表面電位値が- 6.6mVであったのに対し 、 SDS添加後には- 57.2mVと大きく負に変化したことから、 レシチンが表面か ら脱着したことが明らかになった。 また、 その際実施例 3で示したように表層 の AS006も共に微粒子から遊離されている。 さらに微粒子の遠心洗浄後、 レシ チン懸濁液中で超音波処理することで、 表面電位値が- 6.3mVと SDS添加前の 値とほぼ同じ値になった。 よって、 レシチンにより表面を覆われ、 かつ、 PLGA内部に封入された AS006を有した PLGA微粒子が調製できたことが明 らかになつた。
(実施例 5)
実施例 2に従い調製した PLGA微粒子の懸濁液中に 10%の安定化剤を添カロ し、 ァセトン/ドライアイスで凍結後、 凍結乾燥処理をおこなった。 乾燥した PLGA微粒子を水で再分散した時の懸濁液の濁度を分光光度計で、 粒径を動的 光散乱計で測定した。 また、 実施例 4に従い調製した AS006含有 PLGA微粒 子及ぴ実施例 2に従!/、調製した BDP含有 PLGA微粒子を 10%スクロース中で 凍結乾燥処理し、 薬物残存量 ·放出挙動を実施例 2に従い測定した。
結果は図 5に示したように、 水のみ（添加剤なし）で凍結乾燥した PLGA微粒 子では、 凝集体形成による濁度低下が認められ再分散性が著しく低かった。 ま た、 マンニトールや PEG を安定剤として添加した場合でも、 有意な凝集が認 められた。 しかし、 トレハロース及びスクロースにおいてはほぼ凍結乾燥処理 前と同じ程度の濁度が維持されていた。 これらの粒径を光散乱により測定した 結果、 凍結乾燥処理をしていない微粒子の平均粒径（重量平均値）が 319mnで あつたのに対し、 トレハロース ·スクロースを添加した PLGA微粒子ではそれ ぞれ 381mn、 398nm えられ、 多少の凝集があるものの、 再分散性が高い微粒 子がえられたことがわかった。 さらに、 図 6及び図 Ίに示すように、 3%BSA含有 PBS中での AS006ある いは BDP の放出挙動を測定した結果、 凍結乾燥処理の有無に関わらず同様の 放出挙動をとっており、 凍結乾燥による徐放への影響がないことが明らかにな つ 7こ。
(実施例 6)
10 %プロテオースペプトンを 1.5ml腹腔内投与して刺激したマウスの腹腔か らマクロファージを採取し、 100,000cells/48wellで播種し RPMI1640培地 (FBS10 %含む）により数日培養した。 培地交換後、 実施例 1に従い調製した蛍 光色素のローダミンを薬物モデルとして封入した PLGA微粒子を添加し、 1時 間半 37 °Cでィンキュベートした。 PBSで 3回洗浄し、 所定時間後細胞を 4 % 中性ホルマリン溶液で固定し蛍光顕微鏡（IX-70、 オリンパス）により細胞を観 察した。
結果は図 8 に示したように、 ローダミンのみを添カ卩した場合に比べ微粒子に 封入することで顕著にマクロファージに取り込まれることがわかった。 また、 微粒子の取り込み後、 培地交換を行い 37 °Cでィンキュベートした結果、 1週間 後においても細胞内に相当量のローダミンが残存し続けていることが明らかに なった。
また、 PLGA微粒子の代わりに PLA微粒子を用いて同様の検討を行い、 同 様の結果が得られた。
(実施例 7)
6mg/mlの乾燥 M.Butyricum含有アジュパンド懸濁液 100 1をラットの尾 根部に注射し、 6日後左足の足底に 1%力ラゲニン含有生理食塩水を 100 μ 1投 与することで持続性関節炎モデルラットとした （Y.Mizushima et.al., J.Pharm. Pharmac, 1972, 24, 781-785) 。 力ラゲニン投与 24時間後、 実施例 2にて調 製した BDP含有 PLGA製剤（ベタメサゾンとして 50 μ g/ラット）を尾静脈よ り投与し、 足の腫れをボリュームメーターにて経時的に測定した。 対照として 、 PBS のみを尾静脈投与したラットと同力価のリン酸べタメサゾンを皮下投与 したラットを用いた。 結果は図 9に示したように、 リン酸べタメサゾンを投与した時には 1 日目に 強く腫れを抑制していたが、 その後急激に抑制効果が弱くなつた。 一方 BDP 含有 PLGA製剤では、 1 日目はリン酸べタメサゾンと同程度の抑制効果を示し 、 その後数日間にわたり強く腫れを抑制できることが明らかになつた。

Claims

請求の範囲
1 プロスタノイドあるいはステロイ ドを、 ポリ乳酸-ダリコール酸共重合 体またはポリ乳酸微粒子に封入し、 レシチンあるいは類似界面活性剤を当該ポ リ乳酸-ダリコール酸共重合体またはポリ乳酸微粒子の表面に吸着させたことか らなることを特徴とする静脈注射用組成物。
2 前記ポリ乳酸-グリコ一ル酸共重合体、 ポリ乳酸微粒子の直径が 50〜 500nmであることを特徵とする請求の範囲第 1項記載の静脈注射用組成物。
3 前記プロスタノイ ドが、 ポリ乳酸-グリコ一ル酸共重合体またはポリ乳 酸に封入されやすく、 化学的に安定で、 しかも生体内でプロスタン酸に容易に 変換されるプロスタン酸エステル型プロドラッグであることを特徴とする請求 の範囲第 1項記載の静脈注射用組成物。
4 前記プロスタン酸エステル型プロドラッグが、 プロスタグランジン E1 の 1位にアルキルエステルと 9位にァシル基を導入したものであることを 特徴とする請求の範囲第 1項又は 3記載の静脈注射用組成物。
5 前記ステロイ ドが、 ステロイ ドエステルであることを特徴とする請求 の範囲第 1項記載の静脈注射用組成物。
6 前記ステロイ ドエステルが、 ベタメサゾンゃ類似ステ口ィ ドの 17位 及び 21位にァシルエステルを導入したものであることを特徴とする請求の範 囲第 1項又は 5記載の静脈注射用組成物。
7 エステル化プロスタン酸あるいはエステル化ステロイ ドとポリ乳酸-グ リコール酸共重合体またはポリ乳酸をジクロロメタンあるいはジメチルスルホ キシドで代表される有機溶媒に溶解し、 前記 50〜 500nmの直径にすることが できるレシチンあるいは類似界面活性剤を用い、 水中で乳化することを特徴と する静脈注射用組成物の製造法。
8 前記請求の範囲第 7項記載の製造法により製造した組成物のレシチン あるいは類似界面活性剤を組成物から除去した後、 レシチンあるいは類似界面 活性剤のミセルを組成物の水懸濁液中に加え、 再びレシチンあるいは類似界面 活性剤をポリ乳酸-グリコール酸共重合体またはポリ乳酸微粒子の表面に吸着さ せることを特徴とする静脈注射用組成物の製造法。
9 前記静脈注射用組成物を凍結乾燥処理した後再懸濁し投与ができるた めに加える安定剤及び等張剤からなることを特徴とする静 注射用製剤。
1 0 前記安定剤がトレハロースまたはスクロースであることを特徴とす る請求の範囲第 9項記載の静脈注射用製剤。
1 1 貪食作用のあるマクロファージ等の細胞内で、 生物活性を保持した まま徐放可能な薬物をポリ乳酸-グリコ一ル酸共重合体またはポリ乳酸微粒子に 封入したことからなることを特徴とする請求の範囲第 1項記載の静脈注射用組 成物。
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