WO2002088336A2 - Genmodifizierte yt zelllinie und ihre verwendung - Google Patents

Genmodifizierte yt zelllinie und ihre verwendung Download PDF

Info

Publication number
WO2002088336A2
WO2002088336A2 PCT/DE2002/001437 DE0201437W WO02088336A2 WO 2002088336 A2 WO2002088336 A2 WO 2002088336A2 DE 0201437 W DE0201437 W DE 0201437W WO 02088336 A2 WO02088336 A2 WO 02088336A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cell line
receptor
line according
cells
domain
Prior art date
Application number
PCT/DE2002/001437
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2002088336A3 (de
Inventor
Gabriele Pecher
Original Assignee
Gabriele Pecher
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Gabriele Pecher filed Critical Gabriele Pecher
Priority to US10/476,007 priority Critical patent/US20040120935A1/en
Priority to JP2002585617A priority patent/JP4184808B2/ja
Priority to EP02742682A priority patent/EP1383872B1/de
Priority to CA2445593A priority patent/CA2445593C/en
Priority to AT02742682T priority patent/ATE310805T1/de
Priority to DE50205030T priority patent/DE50205030D1/de
Publication of WO2002088336A2 publication Critical patent/WO2002088336A2/de
Publication of WO2002088336A3 publication Critical patent/WO2002088336A3/de

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4613—Natural-killer cells [NK or NK-T]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/46448—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
    • A61K39/464482—Carcinoembryonic antigen [CEA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/50—Colon
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Definitions

  • the invention relates to a genetically modified YT cell line in which the genes have been brought from receptors and which, for. B. for the treatment and diagnosis of tumors, tumor metastases, autoimmune diseases, viral infections and for cleaning (purging) of blood stem cell preparations is suitable. Areas of application are medicine and the pharmaceutical industry.
  • the non-genetically modified cell line YT was first described by Yodoi et al. (Yodoi-J; Teshigawara-K; ⁇ ikaido-T; Fukui-K; ⁇ oma-T; Honjo-T; Takigawa-M; Sasaki-M; Minato- ⁇ ; Tsudo-M; et-al. TCGF (IL 2) -Receptor inducing factor (s).
  • IL 2 receptor a natural killer-like cell line (YT cells). J-Immunol. 1985 Mar; 134 (3): 1623-30). It was established from a patient's blood. This cell line is not able per se to specifically recognize and specifically lyse tumors or other target cells.
  • the aim of the invention is to achieve the recognition of tumor cells and other target cells via the gene transfer from specific receptors into the YT cell line. Another task is to enable the recognized target cells to be lysed with the newly created cell line.
  • the invention is implemented in accordance with the patent claims.
  • the cell line is genetically modified and can therefore be used in diagnosis and therapy. become.
  • genes for receptors that specifically recognize tumor cells or other target cells are introduced into the YT cell line by gene transfer.
  • These receptor constructs contain a domain which is produced from the recognizing part of an antibody and which specifically recognizes tumor cells or other target cells or their structures.
  • a signal chain, derived from the zeta chain of the human T cell receptor, is connected to this domain, which mediates the lysis activity.
  • the YT cell line is suitable for the gene transfer of receptors and receives new properties through the receptor transfer that z. B. consist in the detection and lysis of tumor cells and other target cells.
  • the new cell line is immortalized and therefore available indefinitely.
  • the cell line can be targeted against different tumor cells or other target cells by appropriate selection of the receptors.
  • a receptor was constructed that specifically recognizes the structure of carcinoembryonic antigen (CEA) on colon cancer cells.
  • CEA carcinoembryonic antigen
  • Fig. 1 shows the composition of the receptor that was brought into the YT cell line by gene transfer.
  • the essential components of the receptor consist of a specific single-chain Fv (scFv) fragment, which is produced from the variable regions of the humanized antibody BW431, which specifically recognizes structures of the CEA. This fragment is connected via a peptide linker to the zeta ( ⁇ ) chain of the human T cell receptor, which mediates the lysis activity.
  • scFv single-chain Fv
  • YT cell line equipped with this receptor by gene transfer was then tested for its lysis (killer) activity by intestinal (colon) tumor cells.
  • Fig. 2 shows that the receptor transfected YT cell line lyses the human colon carcinoma cell lines LS174T and SW1222 and the cell line MC32A, which has human CEA on the surface.
  • Fig. 3 shows that when the CEA-bearing MC32A tumor cells were applied to the mice together with the CEA-recognizing genetically modified YT cell line, tumor growth was delayed. The mice survived longer in comparison when a YT cell line transfected with irrelevant genes as a control was applied together with the tumor cells.
  • the genetically modified YT cell line can be used for the therapy of human CEA-bearing tumors by being applied directly into the tumor or into existing metastases or systemically intravenously.
  • the genetically modified YT cell line is recognized by the CEA on the tumors and lysed these tumor cells. Lysis is mediated by the signal chain "built into” the receptor.
  • the cell line can also be used to detect and lyse tumor cells in stem cell preparations or other preparations, or in diagnostics, if the cells according to the invention are appropriately labeled (for example with a dye or a radioactive substance), to find tumor cells and metastases after z.
  • the receptors are introduced N'-terminally by a signal peptide which is necessary for the expression of the receptors on the surface of the YT cells.
  • the receptors consist of a specific single-chain Fv (scFv) fragment, which is constructed from the variable regions of an antibody (in the example from the humanized CEA-specific antibody BW431) by linking via a flexible peptide linker, a spacer between scFv Fragment and cell membrane (in the example the Fc part of the human antibody (IgG-Fc)) and the signal-triggering part of the ⁇ chain of the human T-cell receptor complex.
  • scFv single-chain Fv
  • the YT cell line was modified by gene transfer with the receptor scBW431 -hFc ⁇ , which is specific for human CEA.
  • the cytotoxicity of these YT cells was tested against the cell line a) MC32A, which has human CEA on the surface, and the human colon carcinoma cell lines b) LS174T and c) SW 1222.
  • YT cells were also used as controls, which transfected either only with the empty vector (mock) or with the fusion receptor scPhOx-hFc ⁇ , which cannot recognize any structure on the tumor cells.
  • Nod / SCID mice MC32A tumor cells were injected under the skin together with CEA-specific YT cells (YT-scBW431-hFc ⁇ ) or phOx-specific YT cells (YT-scPhOx-hFc ⁇ ) or without YT cells ,
  • the YT cells used were previously inhibited in their further growth by ⁇ -radiation.
  • the figure shows a) the tumor growth and b) the survival rate after the cells were injected. Animals with a tumor larger than 1 cm 3 were killed according to animal welfare guidelines and were accordingly classified as dead.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft eine gentechnisch veränderte YT-Zelllinie, in die die Gene von Rezeptoren gebracht wurden und die z.B. zur Behandlung von Tumoren, Tumormetastasen, Virusinfektionen und zur Reinigung (Purging) von Blutstammzellpräparaten sowie zur Diagnostik geeignet ist. Anwendungsgebiete sind die Medizin und die pharmazeutische Industrie. Die Erfindung hat das Ziel, das Erkennen von Tumorzellen und anderen Zielzellen über den Gentransfer von spezifischen Rezeptoren in die YT-Zellinie, zu erreichen. Eine weitere Aufgabe besteht darin, mit der neu geschaffenen Zelllinie eine Lyse der erkannten Tumorzellen und anderer Zielzellen zu ermöglichen. Die erfindungsgemässe Zelllinie enthält ein oder mehrere Rezeptoren (bestehend aus variablen Regionen tumorspezifischer bzw. zielzellenspezifischer Antikörper (single chain Fv-Fragmente)) und ggf. einer Signalkette, die von der zeta-Kette des humanen T-Zellrezeptors abgeleitet ist.

Description

Genmodifizierte YT Zelllinie und ihre Verwendung
Beschreibung
Die Erfindung betrifft eine gentechnisch veränderte YT-Zelllinie, in die die Gene von Rezeptoren gebracht wurden und die z. B. zur Behandlung und zur Diagnostik von Tumoren, Tumormetastasen, Autoimmunerkrartkungen, Nirusinfektionen und zur Reinigung (Purging) von Blutstammzellpräparaten geeignet ist. Anwendungsgebiete sind die Medizin und die pharmazeutische Industrie.
Die nicht genetisch veränderte Zelllinie YT wurde erstmals beschrieben von Yodoi et al. (Yodoi- J; Teshigawara-K; Νikaido-T; Fukui-K; Νoma-T; Honjo-T; Takigawa-M; Sasaki-M; Minato-Ν; Tsudo-M; et-al. TCGF (IL 2)-receptor inducing factor(s). I. Regulation of IL 2 receptor on a natural killer-like cell line (YT cells). J-Immunol. 1985 Mar; 134(3): 1623-30). Sie wurde aus dem Blut eines Patienten etabliert. Diese Zellinie ist per se nicht in der Lage, Tumore oder andere Ziellzellen spezifisch zu erkennen und spezifisch zu lysieren.
Die Erfindung hat das Ziel, das Erkennen von Tumorzellen und anderen Zielzellen über den Gentransfer von spezifischen Rezeptoren in die YT-Zelllinie, zu erreichen. Eine weitere Aufgabe besteht darin, mit der neu geschaffenen Zelllinie eine Lyse der erkannten Zielzellen zu ermöglichen.
Die Erfindung wird gemäß den Patentansprüchen realisiert. Die Zelllinie wird gentechnisch verändert und kann dadurch in der Diagnose und in der Therapie verwendet. werden. Erfindungsgemäß werden Gene für Rezeptoren, die spezifisch Tumorzellen oder andere Zielzellen erkennen, per Gentransfer in die YT-Zelllinie eingebracht. Diese Rezeptorkonstrukte enthalten eine aus dem erkennenden Teil eines Antikörpers hergestellte Domäne, die Tumorzellen oder andere Zielzellen bzw. deren Strukturen spezifisch erkennt. Mit dieser Domäne ist eine Signalkette, abgeleitet aus der zeta-Kette des humanen T-Zellrezeptors, verbunden, die die Lyseaktivität vermittelt. Die Vorteile der Erfindung bestehen im folgenden:
- Die YT- Zellinie eignet sich für den Gentransfer von Rezeptoren und erhält durch den Rezeptorgentransfer neue Eigenschaften, die z. B. in der Erkennung und Lyse von Tumorzellen und anderen Zielzellen bestehen.
- Die neue Zelllinie ist immortalisiert und deshalb unbegrenzt verfügbar.
- Die Zelllinie läßt sich durch entsprechende Wahl der Rezeptoren gegen verschiedene Tumorzellen oder andere Zielzellen abrichten.
- Sie verliert auch durch gamma-Bestrahlung ihre Wirksamkeit nicht. Durch Bestrahlung wird ihre weitere Proliferation verhindert, die Killereigenschaften bleiben jedoch erhalten, so daß 1-2 Tage noch mit einer ausreichenden Rezeptorwirkung gerechnet werden kann.
Die Erfindung soll nachfolgend durch Ausführungsbeispiele näher erläutert werden.
Beispiel
Es wurde ein Rezeptor konstruiert, der spezifisch die Struktur Carcinoembryonales Antigen (CEA) auf Darmkrebszellen erkennt. Die Gene dieses Rezeptors wurden durch Elektoporation als Gentransferverfahren in die YT-Zelllinie gebracht.
Abb. 1 zeigt die Zusammensetzung des Rezeptors, der per Gentransfer in die YT-Zellinie gebracht wurde. Der Rezeptor besteht in seinen wesentlichen Bestandteilen aus einem spezifischen single-chain Fv (scFv) Fragment, das aus den variablen Regionen des humanisierten Antikörpers BW431, der spezifisch Strukturen des CEA erkennt, hergestellt ist. Dieses Fragment ist über einen Peptidlinker mit der zeta-(ζ)-Kette des humanen T-Zellrezeptors, die die Lyseaktivität vermittelt, verbunden.
Die mit diesem Rezeptor per Gentransfer ausgestattete YT-Zellinie wurde dann auf ihre Lyse (Killer)-aktivität von Darm (Kolon)-Tumorzellen hin getestet. Abb. 2 zeigt, dass die Rezeptorgentransfizierte YT-Zelllinie die humanen Kolonkarzinomzellinien LS174T und SW1222 sowie die Zellinie MC32A, die humanes CEA auf der Oberfäche hat, lysiert. Kontroll- YT-Zellen, in die das genannten spezifischen Rezeptorkonstrukt nicht hineingebracht wurde, sondern andere nicht relevante Gene (mock, scPhOx-hFcζ) waren nicht in der Lage, die Tumorzellen in einem nach üblichen Standardbedingungen ausgeführten 51Cr-Freisetzungsassay signifikant zu lysieren. Weiterhin wurde die Effektivität der Lyse von Tumoren durch die CEA-Rezeptorgentranfer modifizierte und in ihrer Proliferation durch Gamma-Bestrahlung gehemmte YT-Zelllinie in einem Maus-Tumor-Modell überprüft. Abb. 3 zeigt, dass wenn die CEA tragenden Tumorzellen MC32A zusammen mit der CEA-erkennenden genmodfizierten YT-Zelllinie den Mäusen appliziert wurden, ein Tumorwachstum verzögert wurde. Die Mäuse überlebten länger im Vergleich dazu, wenn eine mit nicht relevanten Genen als Kontrolle transfizierte YT-Zellinie zusammen mit den Tumorzellen appliziert wurde.
Die so genetisch veränderte YT-Zelllinie kann für die Therapie von menschlichen CEA- tragenden Tumoren angewendet angewendet werden, indem sie direkt in den Tumor oder in vorhandene Metastasen oder systemisch intravenös appliziert wird. Die genetisch veränderte YT- Zelllinie erkennt das CEA auf den Tumoren und lysiert diese Tumorzellen. Die Lyse wird vermittelt durch die in den Rezeptor "eingebaute" Signalkette. Die Zelllinie kann auch benutzt werden, um in Stammzellpräparaten oder anderen Präparaten Tumorzellen zu erkennen und zu lysieren, oder in der Diagnostik, wenn man die erfindungsgemäßen Zellen entsprechend markiert (z. B. mit einem Farbstoff oder einem radioaktiven Stoff), zum Auffinden von Tumorzellen und Metastasen nach z. B. intravenöser Applikation.
Legenden zu den Abbildungen:
Abbildung 1 - Schema der spezifischen Fusionsrezeptoren
Die Rezeptoren werden N'-terminal durch ein Signalpeptid, das für die Expression der Rezeptoren auf der Oberfläche der YT-Zellen notwendig ist, eingeleitet. Die Rezeptoren bestehen aus einem spezifischen single-chain-Fv- (scFv-) Fragment, das aus den variablen Regionen eines Antikörpers (im Beispiel vom humanisierten CEA-spezifischen Antikörper BW431) durch Verknüpfung über einen flexiblen Peptidlinker konstruiert ist, einem Distanzhalter zwischen scFv-Fragment und Zellmembran (im Beispiel der Fc-Teil vom humanen Antikörper (IgG-Fc)) und dem signalausiösenden Teil der ζ-Kette des humanen T-Zellrezeptor- komplexes.
Abbildung 2- 51Cr-Freisetzungsassay zur Bestimmung der Lyse von CEA- exprimierenden Tumorzelllinien durch YT-Zellen, in die durch Gentransfer der CEA-spezifische Fusionsrezeptor scBW431-hFcζ hineingebracht wurde
Die YT-Zellinie wurde durch Gentransfer mit dem Rezeptor scBW431 -hFcζ, der spezifisch für humanes CEA ist, modifiziert. Die Zytotoxizität dieser YT-Zellen wurden gegenüber der Zellliπie a) MC32A, die humanes CEA auf der Oberfläche hat, und den humanen Kolonkarzinomzelllinien b) LS174T und c) SW 1222 getestet.
Als Kontrollen wurden auch YT-Zellen eingesetzt, die entweder nur mit dem Leervektor {mock) oder mit dem Fusionsrezeptor scPhOx- hFcζ, der keine Struktur auf den Tumorzellen erkennen kann, transfiziert.
Abbildung 3 - Nod/SCID-Maus-Experiment
Am Tag 0 wurden Nod/SCID- äusen MC32A-Tumorzellen zusammen mit CEA-spezifischen YT- Zellen (YT-scBW431-hFcζ) oder phOx-spezifischen YT-Zellen (YT-scPhOx-hFcζ) oder ohne YT- Zellen unter die Haut injiziert. Die eingesetzten YT-Zellen wurden zuvor durch γ-Bestrahlung in ihrem weiteren Wachstum gehemmt. In der Abbildung wurden a) das Tumorwachstum und b) die Überlebensrate nach Injektion der Zellen angegeben. Tiere mit einem Tumor größer als 1 cm3 wurden It. Tierschutzrichtlinien getötet und entsprechend als tot eingestuft.

Claims

Patentansprüche
1. YT-Zelllinie, die durch Gentransfer modifiziert ist und zur Therapie und zur Diagnose von menschlichen und tierischen Erkrankungen verwendet wird, dadurch gekennzeichnet, dass ein oder mehrere Rezeptorgene, die die Zielzellen erkennen, und ggf. weitere Gene in die Zelllinie eingebracht sind.
2. YT-Zelllinie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Rezeptor eine Erkennungs- Domäne enthält, die Strukturen auf Zielzellen erkennt.
3. YT-Zelllinie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Rezeptor eine Domäne enthält, die Strukturen auf Tumorzellen erkennt.
4. YT-Zelllinie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Rezeptor eine Domäne enthält, die Strukturen auf virusinfizierten Zellen erkennt.
5. YT-Zelllinie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Rezeptor eine Domäne enthält, die Strukturen auf autoimmunreaktiven Immunzellen erkennt.
6. Zelllinie nach Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, dass die Rezeptordomäne aus variablen Regionen tumor- oder Zielzeilen-spezifischer Antikörper (single chain Fv- Fragmente) besteht.
7. Zelllinie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der eingebrachte Rezeptor zusätzlich eine Signalkette, die in der Lage ist, ein Signal zur Auslösung der zytolytischer Aktivität der Zelllinie YT zu vermitteln, enthält.
8. Zelllinie, dadurch gekennzeichnet, dass die Signalkette des eingebrachten Rezeptors von der zeta-Kette des humanen T-Zellrezeptors abgeleitet ist.
9. Zelllinie, dadurch gekennzeichnet, dass die Signalkette des eingebrachten Rezeptors über eine Verbindungsdomäne mit der Erkennungsdomäne verbunden ist.
10. Zelllinie, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindungsdomäne von dem humanen IgG-Fc- Teil abgeleitet ist.
11. Zelllinie nach Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass die Rezeptordomänen spezifisch an die humanen Tumorantigene Carcinoembryonales Antigen CEA, Muzin oder CD33 binden
12. Zelllinie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet dass sie zur Vermeidung weiterer Proliferation gamma-bestrahlt wird.
13. Zellinie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass in diese Zelllinie zusätzlich ein oder mehrere Suizidgene eingebracht werden, durch die die Zelllinie gegenüber bestimmten Medikamenten/Chemotherapeutika/Substanzen sensibel gemacht wird.
14. Zelllinie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Gene für das Rezeptorkonstrukt bzw. die Rezeptorkonstrukte und ggf. das Suizidgen bzw. die Suizidgene durch Elektroporation in die Zellinie eingebracht sind.
15. Zelllinie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie mit einem Färb- oder radioaktiven Stoff markiert ist.
PCT/DE2002/001437 2001-04-28 2002-04-18 Genmodifizierte yt zelllinie und ihre verwendung WO2002088336A2 (de)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10/476,007 US20040120935A1 (en) 2001-04-28 2002-04-18 Genetically modified yt cell line and use thereof
JP2002585617A JP4184808B2 (ja) 2001-04-28 2002-04-18 遺伝子改変されたｙｔ細胞系及びその使用
EP02742682A EP1383872B1 (de) 2001-04-28 2002-04-18 Genmodifizierte yt zelllinie und ihre verwendung
CA2445593A CA2445593C (en) 2001-04-28 2002-04-18 Genetically modified yt cell line and use thereof
AT02742682T ATE310805T1 (de) 2001-04-28 2002-04-18 Genmodifizierte yt zelllinie und ihre verwendung
DE50205030T DE50205030D1 (de) 2001-04-28 2002-04-18 Genmodifizierte yt zelllinie und ihre verwendung

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10121113A DE10121113A1 (de) 2001-04-28 2001-04-28 Genmodifizierte YT Zelllinie und ihre Verwendung
DE10121113.9 2001-04-28

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2002088336A2 true WO2002088336A2 (de) 2002-11-07
WO2002088336A3 WO2002088336A3 (de) 2003-04-03

Family

ID=7683238

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/DE2002/001437 WO2002088336A2 (de) 2001-04-28 2002-04-18 Genmodifizierte yt zelllinie und ihre verwendung

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20040120935A1 (de)
EP (1) EP1383872B1 (de)
JP (1) JP4184808B2 (de)
AT (1) ATE310805T1 (de)
CA (1) CA2445593C (de)
DE (2) DE10121113A1 (de)
WO (1) WO2002088336A2 (de)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013026429A1 (de) * 2010-09-03 2013-02-28 Gabriele Pecher Neue verwendung einer yt-zelllinie zur therapie von malignen erkrankungen und virusinfektionen sowie zur produktion von interferon gamma
WO2016169542A3 (de) * 2015-04-22 2016-12-15 Gabriele Pecher Chimärer antigenrezeptor (car) zur krebsimmuntherapie

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0313739B8 (pt) 2002-08-13 2021-07-27 N Dia Inc método para detectar infiltração de líquido amniótico em secreções vaginais e dispositivo para realizar um método de detecção
JP6465812B2 (ja) 2013-01-02 2019-02-06 キアゲン・サイエンシズ・エル・エル・シー 妊婦において分娩までの時間を予測するための方法
US10935555B2 (en) 2016-12-22 2021-03-02 Qiagen Sciences, Llc Determining candidate for induction of labor
US10656164B2 (en) 2016-12-22 2020-05-19 Qiagen Sciences, Llc Screening asymptomatic pregnant woman for preterm birth
WO2018129199A1 (en) 2017-01-04 2018-07-12 Nova Southeastern University Natural killer (nk) cells expressing an antigen-specific functional t cell receptor (tcr) complex, methods for production thereof, and methods for therapeutic use thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995030014A1 (en) * 1994-05-02 1995-11-09 Ciba-Geigy Ag Bifunctional protein, preparation and use
WO1997015669A1 (en) * 1995-10-24 1997-05-01 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric receptor genes and cells transformed therewith
WO2000023573A2 (en) * 1998-10-20 2000-04-27 City Of Hope Cd20-specific redirected t cells and their use in cellular immunotherapy of cd20+ malignancies

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2263205T3 (es) * 1997-04-30 2006-12-01 Hans Klingemann Estirpes celulares citoliticas naturales y metodos de uso.

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995030014A1 (en) * 1994-05-02 1995-11-09 Ciba-Geigy Ag Bifunctional protein, preparation and use
WO1997015669A1 (en) * 1995-10-24 1997-05-01 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric receptor genes and cells transformed therewith
WO2000023573A2 (en) * 1998-10-20 2000-04-27 City Of Hope Cd20-specific redirected t cells and their use in cellular immunotherapy of cd20+ malignancies

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KLINGEMANN H-G ET AL: "DEVELOPMENT OF NK-92 CELLS FOR IMMUNOTHERAPY OF MALIGNANCIES" JOURNAL OF IMMUNOTHERAPY, RAVEN PRESS, NEW YORK, US, Bd. 23, Nr. 5, September 2000 (2000-09), Seite 604 XP008009924 ISSN: 1053-8550 *
SCHIRRMANN THOMAS ET AL: "Tumor-specific targeting of a cell line with natural killer cell activity by asialoglycoprotein receptor gene transfer." CANCER IMMUNOLOGY IMMUNOTHERAPY, Bd. 50, Nr. 10, Dezember 2001 (2001-12), Seiten 549-556, XP002226419 ISSN: 0340-7004 *
YODOI J ET AL: "T CELL GROWTH FACTOR INTERLEUKIN 2-RECEPTOR-INDUCING FACTORS 1. REGULATION OF INTERLEUKIN 2 RECEPTOR ON A NATURAL KILLER-LIKE CELL LINE YT CELLS" JOURNAL OF IMMUNOLOGY, Bd. 134, Nr. 3, 1985, Seiten 1623-1630, XP002226418 ISSN: 0022-1767 in der Anmeldung erw{hnt *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013026429A1 (de) * 2010-09-03 2013-02-28 Gabriele Pecher Neue verwendung einer yt-zelllinie zur therapie von malignen erkrankungen und virusinfektionen sowie zur produktion von interferon gamma
WO2016169542A3 (de) * 2015-04-22 2016-12-15 Gabriele Pecher Chimärer antigenrezeptor (car) zur krebsimmuntherapie

Also Published As

Publication number Publication date
EP1383872B1 (de) 2005-11-23
DE50205030D1 (de) 2005-12-29
DE10121113A1 (de) 2002-10-31
CA2445593C (en) 2013-07-09
ATE310805T1 (de) 2005-12-15
JP2004528036A (ja) 2004-09-16
US20040120935A1 (en) 2004-06-24
CA2445593A1 (en) 2002-11-07
EP1383872A2 (de) 2004-01-28
JP4184808B2 (ja) 2008-11-19
WO2002088336A3 (de) 2003-04-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wahl et al. Asynchronous therapy restores motor control by rewiring of the rat corticospinal tract after stroke
EP1115427B1 (de) Verwendung von tumorzellen zeitversetzt in kombination mit intakten antikörpern zur immunisierung
DE69621918T4 (de) Medikamente zur behandlung von autoimmunerkrankungen mit interferon-tau
DE19725586C2 (de) Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper
Chirivi et al. Interleukin 1 receptor antagonist inhibits the augmentation of metastasis induced by interleukin 1 or lipopolysaccharide in a human melanoma/nude mouse system
DE69628838T2 (de) Chemokin bindendes protein und verfahren zu seiner verwendung
DE60304835T3 (de) Ein herpes simplex virus komplex
CN101657215A (zh) 在诊断和治疗类风湿性关节炎中使用的包含抗-cd6单克隆抗体的药物组合物
EP1383872B1 (de) Genmodifizierte yt zelllinie und ihre verwendung
EP1171587B1 (de) Peptid aus antigen muc-1 zur auslösung einer immunreaktion gegen tumorzellen
DE19751587A1 (de) Onkogen- oder virusgesteuerte Expressionssysteme
DE69723580T2 (de) Impfstoff gegen metastasierenden kolorektalkrebs.
EP2979704A1 (de) Peptide des Desmoglein 3 bei Pemphigus vulgaris
WO2002087611A2 (de) Mittel humanen ursprungs zur vakzination gegen gd2-positive tumore
DE19859115A1 (de) Verwendung von Tumorzellen zeitversetzt in Kombination mit intakten Antikörpern zur Immunisierung
DE19835633C1 (de) Induktion einer Tumorimmunität durch Redirektion von Tumorzellen gegen Antigen-präsentierende Zellen
EP1257293A2 (de) Immunmodulatorisch wirksame zusammensetzungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
DE10048710A1 (de) Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung und Prophylaxe von humanen Tumoren, die das Tumorantigen Muzin und/oder das Carcinoembryonale Antigen (CEA) exprimieren und ihre Verwendung
DE19640733A1 (de) Verfahren zur Hemmung der unbegrenzten Profileration, Tumorbildung oder Metastasierung CD30 Antigen exprimierender Zellen
WO2004006950A2 (de) Verwendung von cd152, pd-1 und btla zur behandlung von autoimmunkrankheiten und entzündungen
DE69822779T2 (de) Peptid aus humanem Interleukin-2 zur Steigerung der Vasopermeabilität und dessen Immunkonjugate
WO2000014215A1 (de) Verfahren zur selektion von peptiden für zielgerichteten pharma- und markertransport und peptide damit entdeckt
WO2003050499A2 (de) Verwendung eines markierten liganden mit spezifität für das humane cd4-molekül
Henry et al. Improved monoclonal antibody tumor/background ratios with exchange transfusions
Schirmacher et al. 1025 THE ROLE OF TH1/TH2 LYMPHOCYTES IN MURINE HEPATITIS VIRUS STRAIN 3 (MHV-3) INFECTION. M. Pone. S.

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DK DM DZ EC EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NO NZ OM PH PL PT RO RU SD SE SG SI SK SL TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): GH GM KE LS MW MZ SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2002585617

Country of ref document: JP

Ref document number: 2445593

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2002742682

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 10476007

Country of ref document: US

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2002742682

Country of ref document: EP

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 2002742682

Country of ref document: EP