WO2001068639A1 - Dihydropyrimidine-5-carboxylic acid esters and use thereof as medicaments against viral diseases - Google Patents

Dihydropyrimidine-5-carboxylic acid esters and use thereof as medicaments against viral diseases Download PDF

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WO2001068639A1
WO2001068639A1 PCT/EP2001/002441 EP0102441W WO0168639A1 WO 2001068639 A1 WO2001068639 A1 WO 2001068639A1 EP 0102441 W EP0102441 W EP 0102441W WO 0168639 A1 WO0168639 A1 WO 0168639A1
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formula
compounds
zero
salts
methyl
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PCT/EP2001/002441
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Siegfried Goldmann
Jürgen Stoltefuss
Ulrich Niewöhner
Karl-Heinz Schlemmer
Thomas Krämer
Arnold Paessens
Erwin Graef
Olaf Weber
Karl Deres
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Bayer Aktiengesellschaft
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond

Definitions

  • the present invention relates to new dihydropyrimidines, processes for their preparation and medicaments containing these dihydropyrimidines, in particular for the treatment and prophylaxis of hepatitis B virus infections.
  • the invention also relates to combinations of these dihydropyrimidines with other antiviral agents and, if appropriate, immunomodulators and medicaments containing these combinations, in particular for the treatment and prophylaxis of HBN infections such as hepatitis B.
  • the hepatitis B virus belongs to the Hepadna family. It causes an acute and / or a persistent-progressive, chronic illness. A variety of other clinical manifestations in the clinical picture are also caused by the hepatitis B virus - in particular chronic inflammation of the liver, cirrhosis of the liver and hepatocellular carcinoma. Furthermore, coinfection with the hepatitis delta virus can have a negative effect on the course of the disease.
  • interferon The only agents approved for the treatment of chronic hepatitis are interferon and lamivudine.
  • interferon is only moderately effective and has undesirable side effects;
  • lamivudine works well, resistance develops quickly during treatment, and rebound occurs in most cases after therapy is discontinued.
  • EP-PS 103 796 dihydropyrimidines are known, to which an effect influencing the circulation is attributed.
  • EP-A 169 712 describes substituted dihydropyrimidines as intermediates which can be oxidized to the corresponding pyrimidines.
  • WO 99/1438 relates to dihydropyrimidines which are said to be suitable for the treatment of cerebrovascular ischemia and pain.
  • WO 99/54312, 99/54326 and 99/54329 relate to dihydropyrimidines which are suitable for the treatment and prophylaxis of hepatitis.
  • the present invention relates to dihydropyrimidines of the formula
  • R 2 is methyl or ethyl
  • R 3 is a group of the formula -CH 2 -R 8 m -X n -R 9 ,
  • R 8 the group -CR 10 R n -
  • R 9 optionally branched C ! -C 4 alkyl, which may be substituted by azido,
  • R 10 is hydrogen, hydroxyl or methyl
  • R 11 is hydrogen or methyl
  • R 4 is hydrogen
  • R 5 pyridyl, which is substituted up to twice identical or different by halogen, or thiazolyl,
  • n zero or 1
  • Preferred compounds of the formulas (I) or (I a) according to the invention are those in which
  • R 2 is methyl or ethyl
  • R is a group of the formula -CH 2 -R m-Xn-R, wherein
  • R 9 is methyl, ethyl, n- or i-propyl, which can each be substituted by azido,
  • R 4 is hydrogen
  • R 5 pyrid-2-yl which is substituted in the 2-position by halogen or in the 2,4-position is identical or differently substituted by halogen, or thiazolyl,
  • n zero or 1
  • R 1 is phenyl which is disubstituted by fluorine, chlorine or bromine in the 2.4 or 3.4 position, identically or differently,
  • R 2 is methyl or ethyl
  • R 3 is a group of the formula -CH 2 -R 8 m -X n -R 9 , embedded image in which
  • R 9 is methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl or -C 2 H -azido,
  • R 5 pyrid-2-yl which is monosubstituted by fluorine or chlorine in the 2-position or is identical or different in the 2.4-position, or thiazolyl,
  • n zero or 1
  • R 3 contains at least one oxygen atom
  • R 1 is phenyl which is identical or different in the 2.4 position by fluorine, chlorine or
  • Bromine or in the 3.4 position is disubstituted by fluorine, R 2 is methyl or ethyl,
  • R 4 is hydrogen
  • R 5 is pyrid-2-yl which is monosubstituted by fluorine or chlorine in the 2-position or is disubstituted by fluorine in the 2.4-position, or thiazolyl, and
  • n zero or 1
  • the compounds of the invention can be in stereoisomeric forms, which are either like image and mirror image (enantiomers), or which are not like image and
  • the invention relates to both the enantiomers or diastereomers and their respective mixtures. Like the diastereomers, the racemic forms can be separated into the stereoisomerically uniform constituents in a manner known per se.
  • the compounds according to the invention include the isomers of the formulas (I) and (Ia) and mixtures thereof. If R 4 is hydrogen, the isomers (I) and (la) are in tautomeric equilibrium:
  • the compounds according to the invention can also be present as salts.
  • Physiologically acceptable salts are preferred in the context of the invention.
  • Physiologically acceptable salts can be salts of inorganic or organic
  • Salts of inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid or sulfuric acid, or salts of organic carboxylic or sulfonic acids such as acetic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, citric acid, tartaric acid, lactic acid, benzoic acid or methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, phenylsulfonic acid, toluenesulfonic acid or toluenesulfonic acid or toluenesulfonic acid or toluenesulfonic acid
  • Physiologically acceptable salts can also be metal or ammonium salts of the compounds according to the invention.
  • Z are particularly preferred.
  • the compounds of formula (I) according to the invention can be prepared by: [A] aldehydes of the formula
  • R 1 has the meaning given above
  • R 1 has the meaning given above
  • R »2 and ⁇ , ⁇ R, 3 have the meanings given above, and amidines of the formula (III) or with their salts (such as hydrochlorides or acetates)
  • R ) 5 has the meaning given above and
  • R. 1 1 3 J represents CrC 4 alkyl
  • a strong base preferably at temperatures of 20 to 150 ° C, optionally in the presence of inert organic solvents.
  • solvents are suitable as solvents.
  • solvents preferably include alcohols such as methanol, ethanol, isopropanol, ethers such as dioxane, diethyl ether, tetrahydrofuran, glycol monomethyl ether, glycol dimethyl ether, carboxylic acids such as glacial acetic acid, or Dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, acetonitrile, pyridine and hexamethylphosphoric triamide.
  • reaction temperatures can be varied over a wide range. In general, temperatures from 20 to 150 ° C, but preferably at the boiling point of the solvent.
  • the reaction can be carried out at normal pressure, but also at elevated pressure. Generally one works under normal pressure.
  • the reaction can be carried out with or without addition of base or acid; however, it is advisable to carry out the reaction in the presence of weaker acids, e.g. Acetic acid or formic acid.
  • weaker acids e.g. Acetic acid or formic acid.
  • aldehydes (II) used as starting materials are known or can be prepared by methods known from the literature [cf. T. D. Harris and G.P. Roth, J. Org. Chem. 44, 146 (1979), DE-OS 2 165 260, 2 401 665, Mijano et al., Chem. Abstr. 59, 13 929 c (1963), E. Adler and H.-D. Becker, Chem. Scand. 15, 849 (1961), E.P. Papadopoulos, M. Mardin and Ch. Issidoridis, J. Org. Chem. Soc. 78, 2543 (1956)].
  • the ylidene- ⁇ -keto esters (V) used as starting materials can be prepared by methods known from the literature [cf. G. Jones, "The Knoevenagel Condition” in Organic Reactions, Vol. XV, 204 ff. (1967)].
  • enaminocarboxylic acid esters (VI) and the imino ethers (VII) used as starting materials are known or can be prepared by methods known from the literature [cf. S.A. Glickman and A.C. Cope, J. Am. Chem. Soc. 67, 1017 (1945)].
  • ß-ketocarboxylic acid esters (TV) used as starting materials are known or can be prepared by methods known from the literature [e.g. BD Borrmann, "Implementation of Diketene with Alcohols, Phenols and Mercaptans” in “Methods of Organic Chemistry” (Houben-Weyl), Vol. VII / 4, 230 ff (1968); Y. Oikawa, K. Sugano and O. Yonemitsu, J. Org. Chem. 43, 2087 (1978)].
  • BD Borrmann "Implementation of Diketene with Alcohols, Phenols and Mercaptans” in “Methods of Organic Chemistry” (Houben-Weyl), Vol. VII / 4, 230 ff (1968); Y. Oikawa, K. Sugano and O. Yonemitsu, J. Org. Chem. 43, 2087 (1978)].
  • the compounds (VIII) are new; the invention therefore also relates to compounds of the formula (VIII).
  • the compounds according to the invention show a valuable, unforeseeable activity against viruses. Surprisingly, they are antiviral against hepatitis BV viruses (HBV) by causing an extremely strong reduction in the DNA of intra- and extracellular hepatitis B viruses.
  • the compounds according to the invention are therefore suitable for the treatment of virus-induced diseases, in particular acute and chronic persistent viral infections of HBV.
  • a chronic viral disease caused by HBV can lead to different severity of the clinical picture; As is well known, chronic hepatitis B virus infection in many cases leads to cirrhosis of the liver and / or hepatocellular carcinoma.
  • the treatment of acute and chronic viral infections that can lead to infectious hepatitis for example infections with hepatitis B viruses.
  • the compounds according to the invention are particularly suitable for the treatment of chronic hepatitis B infections and the treatment of acute and chronic hepatitis B virus infections.
  • the present invention includes pharmaceutical preparations which, in addition to non-toxic, inert pharmaceutically suitable excipients, contain one or more compounds of the formulas (I), (I a) or the example table or which consist of a or several active ingredients of the formulas (I) and (I a), and processes for the preparation of these preparations.
  • the active compounds of the formulas (I) and (I a) should be present in the pharmaceutical preparations listed above in a concentration of about 0.1 to 99.5, preferably of about 0.5 to 95,% by weight of the preparations his.
  • the pharmaceutical preparations listed above can also contain other active pharmaceutical ingredients.
  • One embodiment of the invention relates to combinations of A) at least one of the dihydropyrimidines defined above, B) at least one other antiviral agent other than A.
  • a particular embodiment of the invention relates to combinations A) above
  • Dihydropyrimidines B) HBV polymerase inhibitors and optionally C) immunomodulators.
  • Preferred immunomodulators C) include, for example, all interferons such as ⁇ , ⁇ and ⁇ interferons, in particular also ⁇ -2a and ⁇ -2b interferons, interleukins such as interleukin-2, polypeptides such as thymosin- ⁇ -1 and thymoctonan, imidazoquinoline, derivatives such as ®Levamisole, immunoglobulins and therapeutic vaccines.
  • interferons such as ⁇ , ⁇ and ⁇ interferons, in particular also ⁇ -2a and ⁇ -2b interferons, interleukins such as interleukin-2, polypeptides such as thymosin- ⁇ -1 and thymoctonan, imidazoquinoline, derivatives such as ®Levamisole, immunoglobulins and therapeutic vaccines.
  • the invention therefore also relates to these combinations for the treatment and prophylaxis of HBV infections and their use for the treatment of HBV-induced
  • HBV-induced diseases have valuable advantages compared to monotherapy with the individual compounds, namely mainly a synergistic antiviral
  • HBV polymerase inhibitors B for the purposes of the invention are substances which are described in the endogenous polymerase assay described below, which was described by Ph. A. Furman et al. in Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol. 36 (No. 12), 2688 (1992) lead to an inhibition of the formation of an HBV-DNA double strand in such a way that a maximum of 50% of the activity of the zero value results:
  • HBV virions from culture supernatants incorporate nucleoside 5'-triphosphates into the plus strand of HBV DNA in vitro.
  • nucleoside 5'-triphosphates into the plus strand of HBV DNA in vitro.
  • agarose gel electrophoresis the incorporation of [ ⁇ - 32 P] deoxynucleoside 5'-triphosphate into the 3.2 kb viral DNA product is observed in the presence and absence of a substance with potentially HBV polymerase-inhibiting properties , HBV virions are derived from the
  • Cell culture supernatant from HepG2.2.15 cells obtained by precipitation with polyethylene glycol and concentrated. 1 volume of clarified cell culture supernatant is mixed with V mit volume of an aqueous solution containing 50% by weight of 8000 polyethylene glycol and 0.6 M sodium chloride. The virions are sedimented by centrifugation at 2,500 x g / 15 minutes. The sediments are contained in 2 ml of buffer
  • Tris-HCl H 7.5
  • the samples can be frozen at -80 ° C.
  • Each reaction mixture 100 ⁇ l contains at least 10 5 HBV virions; 50 rnM Tris-HCl (p H 7.5); 300mM potassium chloride; 50mM magnesium chloride; 0.1% ®Nonident P-40 (non-ionic detergent from Boehringer Mannheim); 10 ⁇ M each of dATP, dGTP and dTTP; 10 ⁇ Ci [ 32 P] dCTP (3000 Ci / mmol; final concentration 33 nM) and 1 ⁇ M of the potential polymerase inhibitor in its triphosphorylated form.
  • samples are incubated at 37 ° C for one hour, and then the reaction is stopped by adding 50 nmM EDTA.
  • a 10% weight volume SDS solution (containing 10 g SDS per 90 ml water) is added to a final concentration of 1% by volume (based on total volume) and Proteinase K is added to added to a final concentration of 1 mg / ml.
  • samples are extracted with the same volume of phenol / chloroform / isoamyl alcohol (volume ratio 25: 24: 1) and the DNA is precipitated from the aqueous phase with ethanol.
  • An HBV polymerase inhibitor is present when a maximum of 50% of the activity of the negative control is present.
  • Preferred HBV polymerase inhibitors B) include, for example
  • L-FMAU 1 - (2-deoxy-2-fluoro-ß-L-arabinofuranosyl) -5-methyl-pyrimidine-2.4 (1H, 3H) -dione, cf. WO 99/05157, WO 99/05158 and US Pat. No. 5,753,789.
  • Another preferred embodiment of the invention relates to combinations of A) above dihydropyrimidines (I) or (Ia) and B) lamivudine.
  • HBV antiviral agents B include, for example, phenylpropenamides of the formula
  • R 1 and R 2 independently of one another are C 1 -C 4 -alkyl or, together with the nitrogen atom on which they are located, form a ring having 5 to 6 ring atoms which comprise carbon and / or oxygen,
  • R 3 to R 12 independently of one another are hydrogen, halogen, -CC 4 -alkyl, optionally substituted Cr -alkoxy, nitro, cyano or trifluoromethyl,
  • R 13 is hydrogen, CC 4 alkyl, -CC 7 -acyl or aralkyl and
  • AT-61 is the compound of the above formula wherein X is chlorine, A 1-piperidinyl and Y and Z are each phenyl.
  • Preferred immunomodulators C) include, for example, all interferons such as ⁇ , ⁇ and ⁇ interferons, in particular also ⁇ -2a and ⁇ -2b interferons, interleukins such as interleukin-2, polypeptides such as thymosin- ⁇ -1 and thymoctonan, imidazoquinoline, derivatives such as ®Levamisole, immunoglobulins and therapeutic vaccines.
  • Another preferred embodiment of the invention relates to combinations of A) above dihydropyrimidines (I) or (Ia), B) lamivudine and optionally C) interferon.
  • the antiviral activity of the compounds according to the invention against the hepatitis B virus was based on that of M.A. Seils et al., Proc. Natl. Acad. Be. 84, 1005-1009 (1987) and B.E. Korba et al., Antiviral Research 19, 55-70 (1992).
  • the antiviral tests were carried out in 96-well microtiter plates.
  • the first vertical row of the plate received only growth medium and HepG2.2.15 cells. It served as a virus control.
  • test compounds 50 mM were first dissolved in DMSO, further dilutions were made in the growth medium of HepG2.2.15.
  • the compounds according to the invention were generally pipetted into the second vertical test series of the microtiter plate in a test concentration of 100 ⁇ M (1st test concentration) and then diluted 2 ⁇ 10 -fold in wax medium plus 2% by weight fetal calf serum (volume 25 ⁇ l ).
  • Each well of the microtiter plate then received 225 ⁇ l of a HepG2.2.15 cell suspension (5 ⁇ 10 4 cells / ml) in growth medium plus 2% by weight of fetal calf serum.
  • the test mixture was incubated for 4 days at 37 ° C. and 5% CO 2 (v / v).
  • the supernatant was then aspirated and discarded, and the wells received 225 ⁇ l of freshly prepared growth medium.
  • the compounds according to the invention were each added again as a 10-fold concentrated solution in a volume of 25 ⁇ l. The batches were incubated for a further 4 days.
  • the HepG2.2.15 cells were examined for cytotoxic changes by light microscopy or by means of biochemical detection methods (e.g. Alamar blue staining or trypan blue staining).
  • the supernatants and / or cells were then harvested and sucked by means of a vacuum onto 96-well dot-blot chamber covered with nylon membrane (according to the manufacturer's instructions).
  • Substance-induced cytotoxic or cytostatic changes in the HepG2.2.15 cells were e.g. determined as changes in cell morphology by light microscopy. Such substance-induced changes in the HepG2.2.15 cells compared to untreated cells were e.g. visible as cell lysis, vacuolization or changed cell morphology. 50% cytotoxicity (Tox.-50) means that 50% of the cells have a morphology comparable to the corresponding cell control.
  • the tolerance of some of the compounds according to the invention was additionally tested on other host cells such as e.g. HeLa cells, primary peripheral blood cells of the
  • Human or transformed cell lines such as H-9 cells.
  • the intra- or extracellular supernatants of the He ⁇ G2.2.15 cells were denatured (1.5 M NaCl 0.5 N NaOH), neutralized (3 M NaCl / 0.5 M Tris HC1, pH 7.5) and washed (2 x SSC). Then the
  • Hepatitis B-specific DNA probes carried out, which were labeled with digoxigenin, purified and used for hybridization according to the manufacturer's instructions.
  • the prehybridization and hybridization took place in 5 x SSC, 1 x blocking reagent, 0.1% by weight N-lauroylsarcosine, 0.02% by weight SDS and 100 ⁇ g sperm DNA of the herring.
  • the pre-hybridization took place at 60 ° C for 30 minutes, the specific hybridization with 20 to 40 ng / ml of the digoxigenized, denatured HBV-specific DNA (14 hours, 60 ° C). The filters were then washed.
  • the filters were washed and prehybridized in a blocking reagent (according to the manufacturer's instructions). The mixture was then hybridized for 30 minutes with an anti-DIG antibody which was coupled with alkaline phosphatase. After a washing step, the substrate of the alkaline phosphatase, CSPD, was added, incubated with the filters for 5 minutes, then wrapped in plastic wrap and incubated at 37 ° C. for a further 15 minutes. The chemiluminescence of hepatitis B-specific DNA signals were visualized by exposing the filters to an X-ray film (incubation depending on signal strength: 10 minutes to 2 hours).
  • IC 50 inhibitory concentration 50%
  • the compounds according to the invention show an unforeseeable activity against viruses. Surprisingly, they have antiviral activity against hepatitis B (HBV) and are therefore suitable for the treatment of virus-induced diseases, in particular acute and chronic persistent viral infections of HBV.
  • HBV hepatitis B
  • a chronic viral disease caused by HBV can lead to different severity of the clinical picture; As is well known, chronic hepatitis B virus infection in many cases leads to cirrhosis of the liver and / or hepatocellular carcinoma.
  • the present invention includes pharmaceutical preparations which, in addition to non-toxic, inert pharmaceutically suitable excipients, contain one or more compounds (I) or (Ia) or a combination according to the invention, or which consist of one or more active compounds (I) or (Ia) or consist of a combination according to the invention.
  • the active ingredients (I) or (Ia) should be present in the pharmaceutical preparations listed above in a concentration of about 0.1 to 99.5% by weight, preferably about 0.5 to 95% by weight, of the total mixture his.
  • the pharmaceutical preparations listed above can also contain further active pharmaceutical ingredients.
  • the quantitative ratio of components A, B and optionally C of the combinations according to the invention can vary within wide limits; preferably it is 5 to 500 mg A / 10 to 1000 mg B, in particular 10 to 200 mg A / 20 to 400 mg B.
  • Component C which is optionally to be used, can be used in amounts of preferably 1 to 10 million, in particular 2 to 7 million I.U. (international units), applied approximately three times a week over a period of up to one year.
  • the compounds or combinations according to the invention should generally be present in the pharmaceutical preparations listed above in a concentration of about 0.1 to 99.5, preferably about 0.5 to 95,% by weight of the total mixture.
  • the preparation of the pharmaceutical preparations listed above can be carried out in a conventional manner by known methods, e.g. by mixing the active substance or substances with the carrier substance or substances.
  • the active ingredient (s) in total amounts of from about 0.5 to about 500, preferably from 1 to 100 mg / kg of body weight per 24 hours, if appropriate in Form of multiple doses to be administered to achieve the desired results.
  • a single dose contains the active ingredient (s) preferably in amounts of about 1 to about 80, in particular 1 to 30 mg / kg body weight.
  • the invention therefore furthermore relates to the compounds and combinations defined above for combating diseases.
  • the invention further relates to medicaments containing at least one of the compounds or combinations defined above and optionally one or more further pharmaceutical active ingredient (s).
  • the invention further relates to the use of the compounds and combinations defined above in the manufacture of a medicament for the treatment and prophylaxis of the diseases described above, preferably viral diseases, in particular hepatitis B.
  • Analog Troschuetz, R. et al., J. Heterocycl. Chem. 33, 1815-1821 (1996) 150 ml of diethylene glycol dimethyl ether, 47.68 g (0.261 mol) of 2,3,5-trichloropyridine, 2.0 g (0.005 mol) of tetraphenylphosphonium bromide, 4.0 g (0.024 mol) are finely powdered Potassium iodide and 75.0 g (0.838 mol) of copper (I) cyanide combined under nitrogen and stirred at reflux for 24 hours.
  • Potassium fluoride and 10 g of polyethylene glycol 8000 are mixed with 125 ml of DMSO and heated to 160 ° C. for 30 minutes. After cooling, the product is distilled off together with the DMSO under high vacuum, the distillate is added to water, extracted with toluene and dried over sodium sulfate. The product is further implemented as a toluene solution.
  • This compound was prepared in analogy to Example VII starting from 2-bromo-4-fluorobenzaldehyde and methyl acetoacetate.
  • Example 1 4- (2-chloro-4-fluorophene) -2- (3,5-difluoro-2-pyridinyl) -6- (isopropoxy-methyl) - 1,4-dihy dropyrimidine-5-carboxylic acid methyl ester

Abstract

Novel dihydropyrimidines of formula (I) or the isomeric form thereof (Ia) wherein R1 is dihalogenphenyl, R2 is methyl or ethyl, R3 is a group of formula -CH¿2-R?8m-Xn-R9, R4 is hydrogen, R5 is pyridyl substituted on at least two occasions in an identical or different manner by halogen, or thiazolyl. The invention also relates to combinations thereof with other antiviral agents, suitable for combating HBV infections.

Description

DIHYDROPYRIMIDIN-5-CARBONSÄUREESTER UND IHRE VERWENDUNG ALS ARZNEIMITTEL GEGEN VIRALE ERKRANKUNGENDIHYDROPYRIMIDIN-5-CARBONIC ACID ESTER AND THEIR USE AS A MEDICINE AGAINST VIRAL DISEASES
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Dihydropyrimidine, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie Arzneimittel enthaltend diese Dihydropyrimidine, insbesondere zur Behandlung und Prophylaxe von Hepatitis-B-Virus-Infektionen. Die Erfindung betrifft auch Kombinationen dieser Dihydropyrimidine mit anderen antiviralen Mitteln und gegebenenfalls Immunmodulatoren sowie Arzneimittel enthaltend diese Kombinationen, insbesondere zur Behandlung und Prophylaxe von HBN-Infektionen wie Hepatitis B.The present invention relates to new dihydropyrimidines, processes for their preparation and medicaments containing these dihydropyrimidines, in particular for the treatment and prophylaxis of hepatitis B virus infections. The invention also relates to combinations of these dihydropyrimidines with other antiviral agents and, if appropriate, immunomodulators and medicaments containing these combinations, in particular for the treatment and prophylaxis of HBN infections such as hepatitis B.
Das Hepatitis-B-Virus gehört zur Familie der Hepadna-Niren. Es verursacht eine akute und/oder eine peristent-progrediente, chronische Erkrankung. Vielfältige andere klinische Manifestationen im Krankheitsbild werden durch das Hepatitis-B-Virus mitverursacht - insbesondere chronische Leberentzündung, Leberzirrhose und hepatozelluläres Karzinom. Weiterhin kann eine Koinfektion mit dem Hepatitis-Delta- Virus den Krankheitsverlaufnegativ beeinflussen.The hepatitis B virus belongs to the Hepadna family. It causes an acute and / or a persistent-progressive, chronic illness. A variety of other clinical manifestations in the clinical picture are also caused by the hepatitis B virus - in particular chronic inflammation of the liver, cirrhosis of the liver and hepatocellular carcinoma. Furthermore, coinfection with the hepatitis delta virus can have a negative effect on the course of the disease.
Die einzigen für die Behandlung chronischer Hepatitis zugelassenen Mittel sind Interferon und Lamivudin. Allerdings ist Interferon nur mäßig wirksam und hat uner- wünschte Nebenwirkungen; Lamivudin ist zwar gut wirksam, aber unter Behandlung kommt es rasch zu einer Resistenzentwicklung, und nach Absetzen der Therapie erfolgt in den meisten Fällen ein Rebound-Effekt.The only agents approved for the treatment of chronic hepatitis are interferon and lamivudine. However, interferon is only moderately effective and has undesirable side effects; Although lamivudine works well, resistance develops quickly during treatment, and rebound occurs in most cases after therapy is discontinued.
Aus der EP-PS 103 796 sind Dihydropyrimidine bekannt, denen eine den Kreislauf beeinflussende Wirkung zugeschrieben wird. In der EP-A 169 712 werden substituierte Dihydropyrimidine als Zwischenprodukte beschrieben, die zu den entsprechenden Pyrimidinen oxidiert werden können. Die WO 99/1438 betrifft Dihydropyrimidine, die sich für die Behandlung von cerebrovasculärer Ischämie und von Schmerz eignen sollen. Die WO 99/54312, 99/54326 und 99/54329 betreffen Dihydropyrimidine, die sich zur Behandlung und Prophylaxe von Hepatitis eignen. Die vorliegende Erfindung betrifft Dihydropyrimidine der FormelFrom EP-PS 103 796 dihydropyrimidines are known, to which an effect influencing the circulation is attributed. EP-A 169 712 describes substituted dihydropyrimidines as intermediates which can be oxidized to the corresponding pyrimidines. WO 99/1438 relates to dihydropyrimidines which are said to be suitable for the treatment of cerebrovascular ischemia and pain. WO 99/54312, 99/54326 and 99/54329 relate to dihydropyrimidines which are suitable for the treatment and prophylaxis of hepatitis. The present invention relates to dihydropyrimidines of the formula
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bzw. deren isomerer Formor their isomeric form
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worin
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wherein
R1 Dihalogenphenyl,R 1 dihalophenyl,
R2 Methyl oder Ethyl,R 2 is methyl or ethyl,
R3 eine Gruppe der Formel -CH2-R8 m-Xn-R9,R 3 is a group of the formula -CH 2 -R 8 m -X n -R 9 ,
woπnembedded image in which
R8 die Gruppe -CR10Rn-R 8 the group -CR 10 R n -
X Sauerstoff,X oxygen,
R9 gegebenenfalls verzweigtes C!-C4-Alkyl, das durch Azido substituiert sein kann,R 9 optionally branched C ! -C 4 alkyl, which may be substituted by azido,
R10 Wasserstoff, Hydroxyl oder Methyl, R11 Wasserstoff oder Methyl,R 10 is hydrogen, hydroxyl or methyl, R 11 is hydrogen or methyl,
R4 Wasserstoff,R 4 is hydrogen,
R5 Pyridyl, das bis zu zweifach gleich oder verschieden durch Halogen substituiert ist, oder Thiazolyl,R 5 pyridyl, which is substituted up to twice identical or different by halogen, or thiazolyl,
m Null oder 1 undm zero or 1 and
n Null oder 1 bedeutenn means zero or 1
mit den Maßgaben, daßwith the provisos that
- R3 mindestens ein Sauerstoffatom enthält, n = 1 , wenn m = Null, und n = Null, wenn m = 1 und R10 = Hydroxyl,R 3 contains at least one oxygen atom, n = 1 if m = zero and n = zero if m = 1 and R 10 = hydroxyl,
und deren Salze.and their salts.
Bevorzugt sind erfindungsgemäße Verbindungen der Formeln (I) bzw. (I a), worinPreferred compounds of the formulas (I) or (I a) according to the invention are those in which
R1 2.4- oder 3.4-Dihalogenphenyl,R 1 2,4- or 3,4-dihalophenyl,
R2 Methyl oder Ethyl,R 2 is methyl or ethyl,
•5 S O • 5 SO
R eine Gruppe der Formel -CH2-R m-Xn-R , worinR is a group of the formula -CH 2 -R m-Xn-R, wherein
R >88 -CH2-, -CH(OH)- oder -C(OH)(CH3)- , X Sauerstoff,R> 8 8 -CH 2 -, -CH (OH) - or -C (OH) (CH 3 ) -, X oxygen,
R9 Methyl, Ethyl, n-oder i-Propyl, das jeweils durch Azido substituiert sein kann,R 9 is methyl, ethyl, n- or i-propyl, which can each be substituted by azido,
R4 Wasserstoff,R 4 is hydrogen,
R5 Pyrid-2-yl, das in 2-Position durch Halogen substituiert oder in 2.4-Position gleich oder verschieden durch Halogen substituiert ist, oder Thiazolyl,R 5 pyrid-2-yl which is substituted in the 2-position by halogen or in the 2,4-position is identical or differently substituted by halogen, or thiazolyl,
m Null oder 1 undm zero or 1 and
n Null oder 1 bedeutenn means zero or 1
mit den Maßgaben, daßwith the provisos that
R3 mindestens ein Sauerstoffatom enthält, - n = 1, wenn m = Null, und n = Null, wenn m = 1 und R10 = Hydroxyl,R 3 contains at least one oxygen atom, - n = 1 if m = zero, and n = zero if m = 1 and R 10 = hydroxyl,
und deren Salze.and their salts.
Besonders bevorzugt sind erfindungsgemäße Verbindungen der Formeln (I) bzw. (I a), worinCompounds according to the invention of the formulas (I) or (I a) are particularly preferred, wherein
R1 Phenyl, das in 2.4- oder 3.4-Position gleich oder verschieden durch Fluor, Chlor oder Brom disubstituiert ist,R 1 is phenyl which is disubstituted by fluorine, chlorine or bromine in the 2.4 or 3.4 position, identically or differently,
R2 Methyl oder Ethyl,R 2 is methyl or ethyl,
R3 eine Gruppe der Formel -CH2-R8 m-Xn-R9, woπnR 3 is a group of the formula -CH 2 -R 8 m -X n -R 9 , embedded image in which
R8 -CH2- , -CH(OH)- oder -C(OH)(CH3)- ,R 8 -CH 2 -, -CH (OH) - or -C (OH) (CH 3 ) -,
X Sauerstoff,X oxygen,
R9 Methyl, Ethyl, n-Propyl, i-Propyl oder -C2H -Azido,R 9 is methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl or -C 2 H -azido,
>4* Wasserstoff,> 4 * hydrogen,
R5 Pyrid-2-yl, das durch Fluor bzw. Chlor in 2-Position monosubstituiert oder in 2.4-Position gleich oder verschieden disubstituiert ist, oder Thiazolyl,R 5 pyrid-2-yl which is monosubstituted by fluorine or chlorine in the 2-position or is identical or different in the 2.4-position, or thiazolyl,
m Null oder 1 undm zero or 1 and
n Null oder 1 bedeutenn means zero or 1
mit den Maßgaben, daßwith the provisos that
- R3 mindestens ein Sauerstoffatom enthält,R 3 contains at least one oxygen atom,
- n = 1 , wenn m = Null, und- n = 1 if m = zero, and
- n = Null, wenn m = 1 und R10 = Hydroxyl,- n = zero if m = 1 and R 10 = hydroxyl,
und deren Salze.and their salts.
Ganz besonders bevorzugt sind erfindungsgemäße Verbindungen der Formeln (I) bzw. (I a), worinCompounds of the formulas (I) or (I a) according to the invention in which
R1 Phenyl, das in 2.4-Position gleich oder verschieden durch Fluor, Chlor bzw.R 1 is phenyl which is identical or different in the 2.4 position by fluorine, chlorine or
Brom oder in 3.4-Position durch Fluor disubstituiert ist, R2 Methyl oder Ethyl,Bromine or in the 3.4 position is disubstituted by fluorine, R 2 is methyl or ethyl,
R3 einen Rest aus der ReiheR 3 a remainder from the series
-CH2-(CH2)m-O-CH3, -CH2-(CH2)m-O-C2H5, -CH2-(CH2)m-O-n-C3H7, -CH2-(CH2)m-O-iso-C3H7, -CH2-(CH2)m-O-C2H4- Azido,-CH 2 - (CH 2 ) m -O-CH 3 , -CH 2 - (CH 2 ) m -OC 2 H 5 , -CH 2 - (CH 2 ) m -OnC 3 H 7 , -CH 2 - ( CH 2 ) m -O-iso-C 3 H 7 , -CH 2 - (CH 2 ) m -OC 2 H 4 - azido,
-CH2-CH(OH)-C2H5, -CH2-CH(OH)-iso-C3H7, -CH2-C(OH)(CH3)2,-CH 2 -CH (OH) -C 2 H 5 , -CH 2 -CH (OH) -iso-C 3 H 7 , -CH 2 -C (OH) (CH 3 ) 2 ,
R4 Wasserstoff,R 4 is hydrogen,
R5 Pyrid-2-yl, das durch Fluor bzw. Chlor in 2-Position monosubstituiert oder durch Fluor in 2.4-Position disubstituiert ist, oder Thiazolyl, undR 5 is pyrid-2-yl which is monosubstituted by fluorine or chlorine in the 2-position or is disubstituted by fluorine in the 2.4-position, or thiazolyl, and
m Null oder 1 bedeutenm means zero or 1
und deren Salze.and their salts.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in stereoisomeren Formen, die sich entweder wie Bild und Spiegelbild (Enantiomere), oder die sich nicht wie Bild undThe compounds of the invention can be in stereoisomeric forms, which are either like image and mirror image (enantiomers), or which are not like image and
Spiegelbild (Diastereomere) verhalten, existieren. Die Erfindung betrifft sowohl die Enantiomeren oder Diastereomeren und deren jeweilige Mischungen. Die Racemfor- men lassen sich ebenso wie die Diastereomeren in an sich bekannter Weise in die stereoisomer einheitlichen Bestandteile trennen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen schließen die Isomeren der Formeln (I) und (la) sowie deren Mischungen ein. Sofern R4 Wasserstoff ist, liegen die Isomeren (I) und (la) im tautomeren Gleichgewicht vor:Mirror image (diastereomers) behave, exist. The invention relates to both the enantiomers or diastereomers and their respective mixtures. Like the diastereomers, the racemic forms can be separated into the stereoisomerically uniform constituents in a manner known per se. The compounds according to the invention include the isomers of the formulas (I) and (Ia) and mixtures thereof. If R 4 is hydrogen, the isomers (I) and (la) are in tautomeric equilibrium:
Figure imgf000009_0001
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(I) (l a)(I) (l a)
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch als Salze vorliegen. Im Rahmen der Erfindung sind physiologisch unbedenkliche Salze bevorzugt.The compounds according to the invention can also be present as salts. Physiologically acceptable salts are preferred in the context of the invention.
Physiologisch unbedenkliche Salze können Salze anorganischer oder organischerPhysiologically acceptable salts can be salts of inorganic or organic
Säuren sein. Bevorzugt werden Salze anorganischer Säuren wie beispielsweise Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure oder Schwefelsäure, oder Salze organischer Carbon- oder Sulfonsäuren wie beispielsweise Essigsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Milchsäure, Benzoesäure oder Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Phenylsulfonsäure, Toluolsulfonsäure oderBe acids. Salts of inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid or sulfuric acid, or salts of organic carboxylic or sulfonic acids such as acetic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, citric acid, tartaric acid, lactic acid, benzoic acid or methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, phenylsulfonic acid, toluenesulfonic acid or toluenesulfonic acid or toluenesulfonic acid
Naphthalindisulfonsäure.Naphthalenedisulfonic.
Physiologisch unbedenkliche Salze können auch Metall- oder Ammoniumsalze der erfindungsgemäßen Verbindungen sein. Besonders bevorzugt sind z. B. Natrium-, Kalium-, Magnesium- oder Calciumsalze sowie Ammomumsalze, die von Ammoniak oder organischen Aminen, wie beispielsweise Ethylamin, Di- bzw. Triethyl- amin, Di- bzw. Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Arginin, Lysin, Ethylendiamin oder 2-Phenylethylamin abgeleitet sind.Physiologically acceptable salts can also be metal or ammonium salts of the compounds according to the invention. Z are particularly preferred. B. sodium, potassium, magnesium or calcium salts and ammonium salts of ammonia or organic amines, such as ethylamine, di- or triethylamine, di- or triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, arginine, lysine, ethylenediamine or 2-phenylethylamine are derived.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) können hergestellt werden, indem man [A] Aldehyde der FormelThe compounds of formula (I) according to the invention can be prepared by: [A] aldehydes of the formula
R'-CHO (LT),R'-CHO (LT),
worin R1 die oben angegebene Bedeutung hat,where R 1 has the meaning given above,
mit Amidinen der Formelwith amidines of the formula
,5 cx NH, 5 cx NH
R— Cr (HI),R— Cr (HI),
\\
NHNH
worin R5 die oben angegebene Bedeutung hat,where R 5 has the meaning given above,
oder mit deren Salzen (wie z.B. Hydrochloriden oder Acetaten)or with their salts (such as hydrochlorides or acetates)
und Verbindungen der Formeland compounds of the formula
R3-CO-CH2-COOR2 (IN),R 3 -CO-CH 2 -COOR 2 (IN),
worin R2 und R3 die oben angegebenen Bedeutungen besitzen,in which R 2 and R 3 have the meanings given above,
mit oder ohne Basen- oder Säurezusatz, vorzugsweise bei Temperaturen von 20 bis 150°C, gegebenenfalls in Gegenwart inerter organischer Lösemittel umsetzt,with or without addition of base or acid, preferably at temperatures from 20 to 150 ° C., optionally in the presence of inert organic solvents,
oderor
[B] Verbindungen der Formel
Figure imgf000011_0001
[B] Compounds of the formula
Figure imgf000011_0001
1 ^ worin R bis R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen,1 ^ wherein R to R have the meanings given above,
mit Amidinen der Formelwith amidines of the formula
Figure imgf000011_0002
worin R5 die oben angegebene Bedeutung hat,
Figure imgf000011_0002
where R 5 has the meaning given above,
oder mit deren Salzen (wie z.B. Hydrochloriden oder Acetaten)or with their salts (such as hydrochlorides or acetates)
mit oder ohne Basen- oder Säurezusatz, vorzugsweise bei Temperaturen von 20 bis 150°C, gegebenenfalls in Gegenwart inerter organischer Lösemittel umsetzt,with or without addition of base or acid, preferably at temperatures from 20 to 150 ° C., optionally in the presence of inert organic solvents,
oderor
[C] Aldehyde der Formel[C] Aldehydes of the formula
RJ-CHO (II),R J -CHO (II),
worin R1 die oben angegebene Bedeutung hat,where R 1 has the meaning given above,
mit Verbindungen der Formelwith compounds of the formula
R— C=C — COOR2 R - C = C - COOR 2
H (VI),H (VI),
NH,NH,
worin R »2 und ■, τ R,3 die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und Amidinen der Formel (III) oder mit deren Salzen (wie z.B. Hydrochloriden oder Acetaten)where R »2 and ■ , τ R, 3 have the meanings given above, and amidines of the formula (III) or with their salts (such as hydrochlorides or acetates)
mit oder ohne Basen- oder Säurezusatz, vorzugsweise bei Temperaturen von 20 biswith or without base or acid addition, preferably at temperatures from 20 to
150°C, gegebenenfalls in Gegenwart inerter organischer Lösemittel umsetzt oder150 ° C, optionally in the presence of inert organic solvents
[D] Aldehyde der Formel (II) mit Verbindungen der Formel (IV) und Iminoethern der Formel (VII)[D] aldehydes of the formula (II) with compounds of the formula (IV) and imino ethers of the formula (VII)
Figure imgf000012_0001
wonn
Figure imgf000012_0001
Wonn
R ) 5 die oben angegebene Bedeutung hat undR ) 5 has the meaning given above and
R . 113J für CrC4-Alkyl steht,R. 1 1 3 J represents CrC 4 alkyl,
in Gegenwart von Ammoniumsalzen mit oder ohne Basen- oder Säurezusatz, vorzugsweise bei Temperaturen von 20 bis 150°C, gegebenenfalls in Gegenwart inerter organischer Lösemittel umsetzt oder auchin the presence of ammonium salts with or without base or acid addition, preferably at temperatures of 20 to 150 ° C., optionally in the presence of inert organic solvents or else
[E] sofern m in R3 in Formel (I) Null ist, Verbindungen der Formel[E] if m in R 3 in formula (I) is zero, compounds of the formula
Figure imgf000012_0002
Figure imgf000012_0002
worin R , 1 , R τ 2 , R n4 u„n_d, R TΪ5 die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, mit Verbindungen der Formelwherein R, 1, R τ 2, R n4 u „n_d, RT Ϊ 5 have the meanings given above, with compounds of the formula
H-X-Ry (IX),HXR y (IX),
worin X und R9 die oben angegebenen Bedeutungen besitzen,wherein X and R 9 have the meanings given above,
bevorzugt in Gegenwart einer starken Base, vorzugsweise bei Temperaturen von 20 bis 150°C, gegebenenfalls in Gegenwart inerter organischer Lösemittel umsetzt.preferably in the presence of a strong base, preferably at temperatures of 20 to 150 ° C, optionally in the presence of inert organic solvents.
Die erfindungsgemäßen Verfahren können durch das folgende Formelschema beispielhaft erläutert werden:The methods according to the invention can be illustrated by the following formula scheme:
[A][A]
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Für alle Verfahrensvarianten A, B, C, D und E kommen als Lösemittel alle inerten organischen Lösemittel in Frage. Hierzu gehören vorzugsweise Alkohole wie Methanol, Ethanol, Isopropanol, Ether wie Dioxan, Diethylether, Tetrahydrofuran, Glykolmonomethylether, Glykoldimethylether, Carbonsäuren wie Eisessig, oder Dimethylforrnamid, Dimethylsulfoxid, Acetonitril, Pyridin und Hexamethyl- phosphorsäuretriamid.For all process variants A, B, C, D and E, all inert organic solvents are suitable as solvents. These preferably include alcohols such as methanol, ethanol, isopropanol, ethers such as dioxane, diethyl ether, tetrahydrofuran, glycol monomethyl ether, glycol dimethyl ether, carboxylic acids such as glacial acetic acid, or Dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, acetonitrile, pyridine and hexamethylphosphoric triamide.
Die Reaktionstemperaturen können in einem größeren Bereich variiert werden. Im allgemeinen arbeitet man bei Temperaturen von 20 bis 150°C, vorzugsweise jedoch bei der Siedetemperatur des jeweiligen Lösemittels.The reaction temperatures can be varied over a wide range. In general, temperatures from 20 to 150 ° C, but preferably at the boiling point of the solvent.
Die Umsetzung kann bei Normaldruck, aber auch bei erhöhtem Druck durchgeführt werden. Im allgemeinen arbeitet man unter Normaldruck.The reaction can be carried out at normal pressure, but also at elevated pressure. Generally one works under normal pressure.
Die Umsetzung kann mit oder ohne Basen- bzw. Säurezusatz durchgeführt werden; es empfiehlt sich jedoch, die Umsetzung in Gegenwart von schwächeren Säuren, wie z.B. Essigsäure oder Ameisensäure, durchzuführen.The reaction can be carried out with or without addition of base or acid; however, it is advisable to carry out the reaction in the presence of weaker acids, e.g. Acetic acid or formic acid.
Die als Ausgangsstoffe verwendeten Aldehyde (II) sind bekannt oder können nach literaturbekannten Methoden hergestellt werden [vgl. T.D. Harris und G. P. Roth, J. Org. Chem. 44, 146 (1979), DE-OS 2 165 260, 2 401 665, Mijano et al., Chem. Abstr. 59, 13 929 c (1963), E. Adler und H.-D. Becker, Chem. Scand. 15, 849 (1961), E. P. Papadopoulos, M. Mardin und Ch. Issidoridis, J. Org. Chem. Soc. 78, 2543 (1956)].The aldehydes (II) used as starting materials are known or can be prepared by methods known from the literature [cf. T. D. Harris and G.P. Roth, J. Org. Chem. 44, 146 (1979), DE-OS 2 165 260, 2 401 665, Mijano et al., Chem. Abstr. 59, 13 929 c (1963), E. Adler and H.-D. Becker, Chem. Scand. 15, 849 (1961), E.P. Papadopoulos, M. Mardin and Ch. Issidoridis, J. Org. Chem. Soc. 78, 2543 (1956)].
Die als Ausgangsstoffe verwendeten Yliden-ß-ketoester (V) können nach literaturbekannten Methoden hergestellt werden [vgl. G. Jones, „The Knoevenagel Conden- sation" in Organic Reactions, Vol. XV, 204 ff. (1967)].The ylidene-β-keto esters (V) used as starting materials can be prepared by methods known from the literature [cf. G. Jones, "The Knoevenagel Condition" in Organic Reactions, Vol. XV, 204 ff. (1967)].
Die als Ausgangsstoffe verwendeten Enaminocarbonsäureester (VI) und die Imino- ether (VII) sind bekannt oder können nach literaturbekannten Methoden hergestellt werden [vgl. S. A. Glickman and A. C. Cope, J. Am. Chem. Soc. 67, 1017 (1945)].The enaminocarboxylic acid esters (VI) and the imino ethers (VII) used as starting materials are known or can be prepared by methods known from the literature [cf. S.A. Glickman and A.C. Cope, J. Am. Chem. Soc. 67, 1017 (1945)].
Die als Ausgangsstoffe verwendeten ß-Ketocarbonsäureester (TV) sind bekannt oder können nach literaturbekannten Methoden hergestellt werden [z. B. D. Borrmann, „Umsetzung von Diketen mit Alkoholen, Phenolen und Mercaptanen" in "Methoden der Organischen Chemie" (Houben-Weyl), Vol. VII/4, 230 ff (1968); Y. Oikawa, K. Sugano und O. Yonemitsu, J. Org. Chem. 43, 2087 (1978)].The ß-ketocarboxylic acid esters (TV) used as starting materials are known or can be prepared by methods known from the literature [e.g. BD Borrmann, "Implementation of Diketene with Alcohols, Phenols and Mercaptans" in "Methods of Organic Chemistry" (Houben-Weyl), Vol. VII / 4, 230 ff (1968); Y. Oikawa, K. Sugano and O. Yonemitsu, J. Org. Chem. 43, 2087 (1978)].
Die Verbindungen (VIII) sind neu; die Erfindung betrifft deshalb auch Verbindungen der Formel (VIII).The compounds (VIII) are new; the invention therefore also relates to compounds of the formula (VIII).
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen eine wertvolle, nicht vorhersehbare Wirkung gegen Viren. Sie sind überraschenderweise antiviral gegen Hepatitis-BViren (HBV) wirksam, indem sie eine außerordentlich starke Reduktion der DNA von intra- und extrazellulären Hepatitis-B-Viren verursachen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind somit zur Behandlung von virusinduzierten Erkrankungen, insbesondere von akut und chronisch persistenten Virusinfektionen des HBV geeignet. Eine chronische Viruserkrankung, hervorgerufen durch das HBV, kann zu unterschiedlich schweren Krankheitsbildern führen; bekanntermaßen führt die chronische Hepatitis B-Virusinfektion in vielen Fällen zur Leberzirrhose und/oder zum hepatozellulären Karzinom.The compounds according to the invention show a valuable, unforeseeable activity against viruses. Surprisingly, they are antiviral against hepatitis BV viruses (HBV) by causing an extremely strong reduction in the DNA of intra- and extracellular hepatitis B viruses. The compounds according to the invention are therefore suitable for the treatment of virus-induced diseases, in particular acute and chronic persistent viral infections of HBV. A chronic viral disease caused by HBV can lead to different severity of the clinical picture; As is well known, chronic hepatitis B virus infection in many cases leads to cirrhosis of the liver and / or hepatocellular carcinoma.
Als Indikationsgebiete für die erfindungsgemäßen Verbindungen können beispiels- weise genannt werden:Examples of indications for the compounds according to the invention are:
Die Behandlung von akuten und chronischen Virusinfektionen, die zu einer infektiösen Hepatitis führen können, beispielsweise die Infektionen mit Hepatitis-B- Viren. Besonders geeignet sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behand- hing von chronischen Hepatitis-B-Infektionen und die Behandlung von akuten und chronischen Hepatitis-B-Virusinfektionen.The treatment of acute and chronic viral infections that can lead to infectious hepatitis, for example infections with hepatitis B viruses. The compounds according to the invention are particularly suitable for the treatment of chronic hepatitis B infections and the treatment of acute and chronic hepatitis B virus infections.
Zur vorliegenden Erfindung gehören pharmazeutische Zubereitungen, die neben nichttoxischen, inerten pharmazeutisch geeigneten Trägerstoffen eine oder mehrere Verbin- düngen der Formeln (I), (I a) bzw. der Beispiel-Tabelle enthalten oder die aus einem oder mehreren Wirkstoffen der Formeln (I) und (I a) bestehen, sowie Verfahren zur Herstellung dieser Zubereitungen.The present invention includes pharmaceutical preparations which, in addition to non-toxic, inert pharmaceutically suitable excipients, contain one or more compounds of the formulas (I), (I a) or the example table or which consist of a or several active ingredients of the formulas (I) and (I a), and processes for the preparation of these preparations.
Die Wirkstoffe der Formeln (I) und (I a) sollen in den oben aufgeführten pharmazeu- tischen Zubereitungen in einer Konzentration von etwa 0,1 bis 99,5, vorzugsweise von etwa 0,5 bis 95, Gew.-% der Zubereitungen vorhanden sein.The active compounds of the formulas (I) and (I a) should be present in the pharmaceutical preparations listed above in a concentration of about 0.1 to 99.5, preferably of about 0.5 to 95,% by weight of the preparations his.
Die oben aufgeführten pharmazeutischen Zubereitungen können außer den Verbindungen der Formeln (I) und (I a) auch weitere pharmazeutische Wirkstoffe enthalten.In addition to the compounds of the formulas (I) and (I a), the pharmaceutical preparations listed above can also contain other active pharmaceutical ingredients.
Eine Ausführungsform der Erfindung betrifft Kombinationen von A) mindestens eines der oben definierten Dihydropyrimidine, B) mindestens eines von A verschiedenen anderen antiviralen Mittels.One embodiment of the invention relates to combinations of A) at least one of the dihydropyrimidines defined above, B) at least one other antiviral agent other than A.
Eine besondere Ausführungsform der Erfindung betrifft Kombinationen A) obigenA particular embodiment of the invention relates to combinations A) above
Dihydropyrimidinen, B) HBV-Polymerase-Inhibitoren und gegebenenfalls C) Immunmodulatoren.Dihydropyrimidines, B) HBV polymerase inhibitors and optionally C) immunomodulators.
Bevorzugte Immunmodulatoren C) umfassen beispielsweise sämtliche Interferone wie α-, ß- und γ-Interferone, insbesondere auch α-2a- und α-2b-Interferone, Interleukine wie Interleukin-2, Polypeptide wie Thymosin-α-1 und Thymoctonan, Imidazochinolin- derivate wie ®Levamisole, Immunglobuline und therapeutische Vaccine.Preferred immunomodulators C) include, for example, all interferons such as α, β and γ interferons, in particular also α-2a and α-2b interferons, interleukins such as interleukin-2, polypeptides such as thymosin-α-1 and thymoctonan, imidazoquinoline, derivatives such as ®Levamisole, immunoglobulins and therapeutic vaccines.
Die Erfindung betrifft also auch diese Kombinationen zur Behandlung und Prophylaxe von HBV-Infektionen sowie ihre Verwendung zur Behandlung HBV-induzierterThe invention therefore also relates to these combinations for the treatment and prophylaxis of HBV infections and their use for the treatment of HBV-induced
Erkrankungen.Diseases.
Die Verwendung der erfindungsgemäßen Kombmationen bietet bei der BehandlungThe use of the combinations according to the invention offers in the treatment
HBV-induzierter Erkrankungen wertvolle Vorteile im Vergleich zur Monotherapie mit den Einzelverbindungen, nämlich hauptsächlich eine synergistische antiviraleHBV-induced diseases have valuable advantages compared to monotherapy with the individual compounds, namely mainly a synergistic antiviral
Wirksamkeit, aber auch eine gute Verträglichkeit der erfindungsgemäßen Kombinati- onen im Bereich der Toxizität, bei der 50 % der Zellen überleben („Tox-50") - im Vergleich zur Tox-50 der Einzelkomponenten.Efficacy, but also a good tolerance of the combination according to the invention on in the area of toxicity, in which 50% of the cells survive ("Tox-50") - compared to the Tox-50 of the individual components.
Als HBV-Polymerase-Inhibitoren B im Sinne der Erfindung werden solche Stoffe bezeichnet, die im nachfolgend beschriebenen endogenen Polymerase-Assay, das von Ph. A. Furman et al. in Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol. 36 (No. 12), 2688 (1992) publiziert worden ist, zu einer Hemmung der Bildung eines HBV-DNA- Doppelstranges derart führen, dass sich maximal 50 % der Aktivität des Nullwerts ergeben:HBV polymerase inhibitors B for the purposes of the invention are substances which are described in the endogenous polymerase assay described below, which was described by Ph. A. Furman et al. in Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol. 36 (No. 12), 2688 (1992) lead to an inhibition of the formation of an HBV-DNA double strand in such a way that a maximum of 50% of the activity of the zero value results:
HBV-Virionen aus Kulturüberständen bauen in vitro Nucleosid-5'-triphosphate in den Plusstrang der HBV-DNA ein. Unter Verwendung von Agarosegel-Elektro- phorese wird der Einbau von [α-32P]-Deoxynucleosid-5'-triphosphat in das virale 3.2-kb DNA-Produkt in An- und Abwesenheit einer Substanz mit potentiell HBV- Polymerase-hemmenden Eigenschaften beobachtet. HBV-Virionen werden aus demHBV virions from culture supernatants incorporate nucleoside 5'-triphosphates into the plus strand of HBV DNA in vitro. Using agarose gel electrophoresis, the incorporation of [α- 32 P] deoxynucleoside 5'-triphosphate into the 3.2 kb viral DNA product is observed in the presence and absence of a substance with potentially HBV polymerase-inhibiting properties , HBV virions are derived from the
Zellkultur-Überstand von HepG2.2.15-Zellen durch Fällung mit Polyethylenglykol gewonnen und aufkonzentriert. 1 Volumenteil geklärter Zellkulturüberstand wird mit VΛ Volumenteil einer wässrigen Lösung enthaltend 50 Gew-% Polyethylenglykol 8000 und 0.6 M Kochsalz gemischt. Die Virionen werden durch Zentrifugieren bei 2,500 x g/15 Minuten sedimentiert. Die Sedimente werden in 2 ml Puffer enthaltendCell culture supernatant from HepG2.2.15 cells obtained by precipitation with polyethylene glycol and concentrated. 1 volume of clarified cell culture supernatant is mixed with V mit volume of an aqueous solution containing 50% by weight of 8000 polyethylene glycol and 0.6 M sodium chloride. The virions are sedimented by centrifugation at 2,500 x g / 15 minutes. The sediments are contained in 2 ml of buffer
0.05 M Tris-HCl ( H 7.5) resuspendiert und gegen den gleichen Puffer enthaltend 100 rnM Kaliumchlorid dialysiert. Die Proben können bei -80°C eingefroren werden. Jeder Reaktionsansatz (100 μl) enthält mindestens 105 HBV-Virionen; 50 rnM Tris- HCl (pH 7.5); 300mM Kaliumchlorid; 50mM Magnesiumchlorid; 0.1 % ®Nonident P-40 (nichtionisches Detergens der Fa. Boehringer Mannheim); je 10 μM dATP, dGTP und dTTP; 10 μCi [32P]dCTP (3000 Ci/mmol; Endkonzentration 33 nM) und 1 μM des potentiellen Polymerase-Inhibitors in seiner triphosphorylierten Form. Die Proben werden bei 37°C eine Stunde lang inkubiert, und dann wird die Reaktion durch Zugabe von 50 rnM EDTA gestoppt. Eine 10 %-ige Gewichtsvolumen-SDS- Lösung (enthaltend 10 g SDS pro 90 ml Wasser) wird bis zu einer Endkonzentration von 1 Vol.-% (bezogen auf Gesamtvolumen) zugegeben, und Proteinase K wird bis zu einer Endkonzentration von 1 mg/ml zugegeben. Nach Inkubation bei 37°C für eine Stunde werden Proben mit demselben Volumen Phenol/Chloroform/Isoamyl- alkohol (Volumen- Verhältnis 25:24:1) extrahiert, und aus der wässrigen Phase wird die DNA mit Ethanol gefallt. Das DNA-Pellet wird in 10 μl Gelpuffer (Lösung von 10.8 g Tris, 5.5 g Borsäure und 0.75 g EDTA in 1 Liter Wasser (= TBE-Puffer)) resuspendiert und durch Elektrophorese in einem Agarosegel getrennt. Das Gel wird entweder getrocknet oder die darin enthaltenen Nukleinsäuren mittels Southern- Transfertechnik auf eine Membran übertragen. Danach wird die Menge des gebildeten und markierten DNA-Doppelstranges im Verhältnis zur Negativkontrolle (= Endo-Pol-Reaktion ohne Substanz oder mit Kontrollsubstanz ohne Wirkung) bestimmt. Ein HBV-Polymerase-Inhibitor liegt dann vor, wenn maximal 50 % der Aktivität der Negativkontrolle vorliegen.Resuspend 0.05 M Tris-HCl ( H 7.5) and dialyze against the same buffer containing 100 rnM potassium chloride. The samples can be frozen at -80 ° C. Each reaction mixture (100 μl) contains at least 10 5 HBV virions; 50 rnM Tris-HCl (p H 7.5); 300mM potassium chloride; 50mM magnesium chloride; 0.1% ®Nonident P-40 (non-ionic detergent from Boehringer Mannheim); 10 μM each of dATP, dGTP and dTTP; 10 μCi [ 32 P] dCTP (3000 Ci / mmol; final concentration 33 nM) and 1 μM of the potential polymerase inhibitor in its triphosphorylated form. The samples are incubated at 37 ° C for one hour, and then the reaction is stopped by adding 50 nmM EDTA. A 10% weight volume SDS solution (containing 10 g SDS per 90 ml water) is added to a final concentration of 1% by volume (based on total volume) and Proteinase K is added to added to a final concentration of 1 mg / ml. After incubation at 37 ° C. for one hour, samples are extracted with the same volume of phenol / chloroform / isoamyl alcohol (volume ratio 25: 24: 1) and the DNA is precipitated from the aqueous phase with ethanol. The DNA pellet is resuspended in 10 μl gel buffer (solution of 10.8 g Tris, 5.5 g boric acid and 0.75 g EDTA in 1 liter water (= TBE buffer)) and separated by electrophoresis in an agarose gel. The gel is either dried or the nucleic acids contained therein are transferred to a membrane using the Southern transfer technique. Then the amount of the DNA double strand formed and labeled in relation to the negative control (= endo-pole reaction without substance or with control substance without effect) is determined. An HBV polymerase inhibitor is present when a maximum of 50% of the activity of the negative control is present.
Bevorzugte HBV-Polymerase-Inhibitoren B) umfassen beispielsweisePreferred HBV polymerase inhibitors B) include, for example
3TC = Lamivudin =3TC = Lamivudine =
= 4-Ammo-l-[(2R-cis)-2-(hydroxymethyl)-1.3-oxathiolan-5-yl]-pyrimidin-2(lH)-on, vgl. EP-PS 382 526 (= US-PS 5 047 407) und WO 91/11186 (= US-PS 5 204466);= 4-Ammo-l - [(2R-cis) -2- (hydroxymethyl) -1.3-oxathiolan-5-yl] pyrimidin-2 (1H) -one, cf. EP-PS 382 526 (= US-PS 5 047 407) and WO 91/11186 (= US-PS 5 204466);
Adefovir Dipivoxil =Adefovir Dipivoxil logo CNRS logo INIST
9- {2-[[Bis[(Pivaloyloxy)-methoxy]-phosphinyl]-methoxy]-ethyl} -adenin, vgl. EP-PS 481 214 (= US-PS 5 663 159 und 5 792 756), US-PS 4 724 233 und 4 808 716;9- {2 - [[bis [(pivaloyloxy) methoxy] phosphinyl] methoxy] ethyl} adenine, cf. EP-PS 481 214 (= US-PS 5 663 159 and 5 792 756), US-PS 4 724 233 and 4 808 716;
BMS 200475 = [lS-(l.α,3.α,4.ß)]-2-Amino-1.9-dihydro-9-[4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)-2- methylen-cyclopentyl]-6H-purin-6-on, vgl. EP-PS 481 754 (= US-PS 5 206 244 und 5 340 816), WO 98/09964 und 99/41275; Abacavir =BMS 200475 = [IS- (1.α, 3.α, 4.β)] - 2-amino-1.9-dihydro-9- [4-hydroxy-3- (hydroxymethyl) -2-methylene-cyclopentyl] -6H -purin-6-one, cf. EP-PS 481 754 (= US-PS 5 206 244 and 5 340 816), WO 98/09964 and 99/41275; Abacavir =
(-)-( 1 S-cis)-4-[2-Amino-6-(cyclopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyclopenten- 1 - methanol, vgl. EP-PS 349 242 (= US-PS 5 049 671) und EP-PS 434 450 (= US-PS 5 034 394);(-) - (1 S-cis) -4- [2-amino-6- (cyclopropylamino) -9H-purin-9-yl] -2-cyclopenten-1 - methanol, cf. EP-PS 349 242 (= US-PS 5 049 671) and EP-PS 434 450 (= US-PS 5 034 394);
FTC =FTC =
(2R-cis)-4-Ammo-5-fluor-l-[2-(hydroxymethyl)-1.3-oxathiolan-5-yl]-pyrimidin- 2(lH)-on, vgl. WO 92/14743 (= US-PS 5 204 466, 5 210 085, 5 539 116, 5 700 937, 5 728 575, 5 814 639, 5 827 727, 5 852 027, 5 892 025, 5 914 331, 5 914400) und WO 92/18517;(2R-cis) -4-Ammo-5-fluoro-l- [2- (hydroxymethyl) -1.3-oxathiolan-5-yl] pyrimidine-2 (1H) -one, cf. WO 92/14743 (= US-PS 5 204 466, 5 210 085, 5 539 116, 5 700 937, 5 728 575, 5 814 639, 5 827 727, 5 852 027, 5 892 025, 5 914 331, 5 914400) and WO 92/18517;
ß-L-FDDC =ß-L-FDDC =
5-(6-Amino-2-fluor-9H-purin-9-yl)-tetrahydro-2-furanmethanol, vgl. WO 94/27616 (= US-PS 5 627 160, 5 561 120,5 631 239 und 5 830 881);5- (6-Amino-2-fluoro-9H-purin-9-yl) tetrahydro-2-furanmethanol, cf. WO 94/27616 (= U.S. Patents 5,627,160, 5,561,120.5,631,239 and 5,830,881);
L-FMAU = 1 -(2-Deoxy-2-fluor-ß-L-arabinofuranosyl)-5-methyl-pyrimidin-2.4(lH, 3H)-dion, vgl. WO 99/05157, WO 99/05158 und US-PS 5 753 789.L-FMAU = 1 - (2-deoxy-2-fluoro-ß-L-arabinofuranosyl) -5-methyl-pyrimidine-2.4 (1H, 3H) -dione, cf. WO 99/05157, WO 99/05158 and US Pat. No. 5,753,789.
Eine weitere bevorzugte Ausführungsform der Erfindung betrifft Kombinationen von A) obigen Dihydropyrimidinen (I) bzw. (Ia) und B) Lamivudin.Another preferred embodiment of the invention relates to combinations of A) above dihydropyrimidines (I) or (Ia) and B) lamivudine.
Andere bevorzugte HBV-antivirale Mittel B umfassen z.B. Phenylpropenamide der Formel Other preferred HBV antiviral agents B include, for example, phenylpropenamides of the formula
Figure imgf000020_0001
woπn
Figure imgf000020_0001
embedded image in which
R1 und R2 unabhängig voneinander Cι-C4-Alkyl bedeuten oder zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie stehen, einen Ring mit 5 bis 6 Ringatomen, die Kohlenstoff und/oder Sauerstoff umfassen, bilden,R 1 and R 2 independently of one another are C 1 -C 4 -alkyl or, together with the nitrogen atom on which they are located, form a ring having 5 to 6 ring atoms which comprise carbon and / or oxygen,
R3 bis R12 unabhängig voneinander Wasserstoff, Halogen, Cι-C4-Alkyl, gegebenenfalls substituiertes Cr -Alkoxy, Nitro, Cyano oder Trifluormethyl,R 3 to R 12 independently of one another are hydrogen, halogen, -CC 4 -alkyl, optionally substituted Cr -alkoxy, nitro, cyano or trifluoromethyl,
R13 Wasserstoff, C C4-Alkyl, Cι-C7-Acyl oder Aralkyl undR 13 is hydrogen, CC 4 alkyl, -CC 7 -acyl or aralkyl and
X Halogen oder gegebenenfalls substituiertes Cι-C4-AlkylX halogen or optionally substituted -CC 4 alkyl
bedeuten,mean,
und deren Salze.and their salts.
Diese Phenylpropenamide und Verfahren zu ihrer Herstellung sind aus der WO 98/33501 bekannt, auf die hiermit zum Zwecke der Offenbarung Bezug genommen wird. AT-61 ist die Verbindung der obigen Formel, worin X Chlor, A 1-Piperidinyl und Y und Z jeweils Phenyl bedeuten. Bevorzugte Immunmodulatoren C) umfassen beispielsweise sämtliche Interferone wie α-, ß- und γ-Interferone, insbesondere auch α-2a- und α-2b-Interferone, Interleukine wie Interleukin-2, Polypeptide wie Thymosin-α-1 und Thymoctonan, Imidazochinolin- derivate wie ®Levamisole, Immunglobuline und therapeutische Vaccine.These phenylpropenamides and processes for their preparation are known from WO 98/33501, to which reference is hereby made for the purposes of the disclosure. AT-61 is the compound of the above formula wherein X is chlorine, A 1-piperidinyl and Y and Z are each phenyl. Preferred immunomodulators C) include, for example, all interferons such as α, β and γ interferons, in particular also α-2a and α-2b interferons, interleukins such as interleukin-2, polypeptides such as thymosin-α-1 and thymoctonan, imidazoquinoline, derivatives such as ®Levamisole, immunoglobulins and therapeutic vaccines.
Eine weitere bevorzugte Ausführungsform der Erfindung betrifft Kombinationen von A) obigen Dihydropyrimidinen (I) bzw. (Ia), B) Lamivudin und gegebenbenfalls C) Interferon.Another preferred embodiment of the invention relates to combinations of A) above dihydropyrimidines (I) or (Ia), B) lamivudine and optionally C) interferon.
Testbeschreibungtest Description
Die antivirale Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen gegen das Hepatitis- B-Virus wurde in Anlehnung an die von M.A. Seils et al., Proc. Natl. Acad. Sei. 84, 1005-1009 (1987) und B.E. Korba et al., Antiviral Research 19, 55-70 (1992) beschriebenen Methoden untersucht.The antiviral activity of the compounds according to the invention against the hepatitis B virus was based on that of M.A. Seils et al., Proc. Natl. Acad. Be. 84, 1005-1009 (1987) and B.E. Korba et al., Antiviral Research 19, 55-70 (1992).
Die antiviralen Tests wurden in 96-well-Mikrotiterplatten durchgeführt. Die erste vertikale Reihe der Platte erhielt nur Wachstumsmedium und HepG2.2.15-Zellen. Sie diente als Viruskontrolle.The antiviral tests were carried out in 96-well microtiter plates. The first vertical row of the plate received only growth medium and HepG2.2.15 cells. It served as a virus control.
Stammlösungen der Testverbindungen (50 mM) wurden zunächst in DMSO gelöst, weitere Verdünnungen wurden in Wachstumsmedium der HepG2.2.15 hergestellt. Die erfindungsgemäßen Verbindungen wurden in der Regel in einer Testkonzentration von 100 μM (1. Testkonzentration) jeweils in die zweite vertikale Testreihe der Mikrotiterplatte pipettiert und anschließend in Zweierschritten 210-fach in Wachsrumsmedium plus 2 Gew.-% fötales Kälberserum verdünnt (Volumen 25 μl).Stock solutions of the test compounds (50 mM) were first dissolved in DMSO, further dilutions were made in the growth medium of HepG2.2.15. The compounds according to the invention were generally pipetted into the second vertical test series of the microtiter plate in a test concentration of 100 μM (1st test concentration) and then diluted 2 × 10 -fold in wax medium plus 2% by weight fetal calf serum (volume 25 μl ).
Jeder Napf der Mikrotiterplatte erhielt dann 225 μl einer HepG2.2.15-Zellsuspension (5 x 104 Zellen/ml) in Wachstumsmedium plus 2 Gew.-% fötales Kälberserum. Der Testansatz wurde 4 Tage bei 37°C und 5 % CO2 (v/v) inkubiert. Anschließend wurde der Überstand abgesaugt und verworfen, und die Näpfe erhielten 225 μl frisch zubereitetes Wachstumsmedium. Die erfindungsgemäßen Verbindungen wurden jeweils erneut als 10-fach konzentrierte Lösung in einem Volumen von 25 μl zugefügt. Die Ansätze wurden weitere 4 Tage inkubiert.Each well of the microtiter plate then received 225 μl of a HepG2.2.15 cell suspension (5 × 10 4 cells / ml) in growth medium plus 2% by weight of fetal calf serum. The test mixture was incubated for 4 days at 37 ° C. and 5% CO 2 (v / v). The supernatant was then aspirated and discarded, and the wells received 225 μl of freshly prepared growth medium. The compounds according to the invention were each added again as a 10-fold concentrated solution in a volume of 25 μl. The batches were incubated for a further 4 days.
Vor der Ernte der Überstände zur Bestimmung des antiviralen Effektes wurden die HepG2.2.15-Zellen lichtmikroskopisch oder mittels biochemischer Nachweisverfahren (z.B. Alamar-Blue-Färbung oder Trypanblau-Färbung) auf zytotoxische Veränderungen untersucht.Before harvesting the supernatants to determine the antiviral effect, the HepG2.2.15 cells were examined for cytotoxic changes by light microscopy or by means of biochemical detection methods (e.g. Alamar blue staining or trypan blue staining).
Anschließend wurden die Überstände und/oder Zellen geerntet und mittels Vakuum auf mit Nylonmembran bespannten 96-Napf-Dot-Blot-Karnmern (entsprechend den Herstellerangaben) gesogen.The supernatants and / or cells were then harvested and sucked by means of a vacuum onto 96-well dot-blot chamber covered with nylon membrane (according to the manufacturer's instructions).
Zytotoxizitätsbestimmungcytotoxicity
Substanzinduzierte zytotoxische oder zytostatische Veränderungen der HepG2.2.15- Zellen wurden z.B. lichtmikroskopisch als Änderungen der Zellmorphologie ermittelt. Derartige Substanz-induzierte Veränderungen der HepG2.2.15-Zellen im Vergleich zu unbehandelten Zellen wurden z.B. als Zellyse, Vakuolisierung oder verän- derte Zellmorphologie sichtbar. 50 % Zytotoxizität (Tox.-50) bedeuten, dass 50 % der Zellen eine der entsprechenden Zellkontrolle vergleichbare Morphologie aufweisen.Substance-induced cytotoxic or cytostatic changes in the HepG2.2.15 cells were e.g. determined as changes in cell morphology by light microscopy. Such substance-induced changes in the HepG2.2.15 cells compared to untreated cells were e.g. visible as cell lysis, vacuolization or changed cell morphology. 50% cytotoxicity (Tox.-50) means that 50% of the cells have a morphology comparable to the corresponding cell control.
Die Verträglichkeit einiger der erfindungsgemäßen Verbindungen wurde zusätzlich auf anderen Wirtszellen wie z.B. HeLa-Zellen, primäre periphere Blutzellen desThe tolerance of some of the compounds according to the invention was additionally tested on other host cells such as e.g. HeLa cells, primary peripheral blood cells of the
Menschen oder transformierte Zellinien wie H-9-Zellen, getestet.Human or transformed cell lines such as H-9 cells.
Es konnten keine zytotoxischen Veränderungen bei Konzentrationen der erfindungsgemäßen Verbindungen von >10 μM festgestellt werden. Bestimmung der antiviralen WirkungNo cytotoxic changes were found at concentrations of the compounds according to the invention of> 10 μM. Determination of the antiviral effect
Nach Transfer der Überstände oder lysierten Zellen auf die Nylon-Membran der Blot-Apparatur (s.o.) wurden die intra- oder extrazellulären Überstände der HeρG2.2.15-Zellen denaturiert (1.5 M NaCl 0.5 N NaOH), neutralisiert (3 M NaCl/0.5 M Tris HC1, pH 7.5) und gewaschen (2 x SSC). Anschließend wurde dieAfter transfer of the supernatants or lysed cells to the nylon membrane of the blot apparatus (see above), the intra- or extracellular supernatants of the HeρG2.2.15 cells were denatured (1.5 M NaCl 0.5 N NaOH), neutralized (3 M NaCl / 0.5 M Tris HC1, pH 7.5) and washed (2 x SSC). Then the
DNA durch Inkubation der Filter bei 120°C 2-4 Stunden an die Membran gebacken.Baked DNA to the membrane by incubating the filters at 120 ° C for 2-4 hours.
Hybridisierung der DNAHybridization of the DNA
Der Nachweis der viralen DNA von den behandelten HepG2.2.15-Zellen auf den Nylonfiltern wurde in der Regel mit nichtradioaktiven, Digoxigenin-markiertenThe detection of the viral DNA from the treated HepG2.2.15 cells on the nylon filters was usually labeled with non-radioactive, digoxigenin
Hepatitis-B-spezifischen DNA-Sonden durchgeführt, die jeweils nach Herstellerangabe mit Digoxigenin markiert, gereinigt und zur Hybridisierung eingesetzt wurden.Hepatitis B-specific DNA probes carried out, which were labeled with digoxigenin, purified and used for hybridization according to the manufacturer's instructions.
Die Prähybridisierung und Hybridisierung erfolgten in 5 x SSC, 1 x Blockierungsreagenz, 0.1 Gew.-% N-Lauroylsarcosin, 0.02 Gew.-% SDS und 100 μg Sperma-DNA des Herings. Die Prähybridisierung erfolgte 30 Minuten bei 60°C, die spezifische Hybridisierung mit 20 bis 40 ng/ml der digoxigenierten, denaturierten HBV- spezifischen DNA (14 Stunden, 60°C). Anschließend wurden die Filter gewaschen.The prehybridization and hybridization took place in 5 x SSC, 1 x blocking reagent, 0.1% by weight N-lauroylsarcosine, 0.02% by weight SDS and 100 μg sperm DNA of the herring. The pre-hybridization took place at 60 ° C for 30 minutes, the specific hybridization with 20 to 40 ng / ml of the digoxigenized, denatured HBV-specific DNA (14 hours, 60 ° C). The filters were then washed.
Nachweis der HB V-DNA durch Digoxigenin- AntikörperDetection of HB V-DNA by digoxigenin antibodies
Der immunologische Nachweis der Digoxigenin-markierten DNA erfolgte nachThe immunological detection of the digoxigenin-labeled DNA was carried out after
Herstellerangaben:Product Information:
Die Filter wurden gewaschen und in einem Blockierungsreagenz (nach Herstellerangabe) prähybridisiert. Anschließend wurde mit einem Anti-DIG-Antikörper, der mit alkalischer Phosphatase gekoppelt war, 30 Minuten hybridisiert. Nach einem Waschschritt wurde das Substrat der alkalischen Phosphatase, CSPD, zugefügt, 5 Minuten mit den Filtern inkubiert, anschließend in Plastikfolie eingepackt und wei- tere 15 Minuten bei 37°C inkubiert. Die Chemilumineszenz der Hepatitis-B-spezifi- schen DNA-Signale wurde über eine Exposition der Filter auf einem Röntgenfilm sichtbar gemacht (Inkubation je nach Signalstärke: 10 Minuten bis 2 Stunden).The filters were washed and prehybridized in a blocking reagent (according to the manufacturer's instructions). The mixture was then hybridized for 30 minutes with an anti-DIG antibody which was coupled with alkaline phosphatase. After a washing step, the substrate of the alkaline phosphatase, CSPD, was added, incubated with the filters for 5 minutes, then wrapped in plastic wrap and incubated at 37 ° C. for a further 15 minutes. The chemiluminescence of hepatitis B-specific DNA signals were visualized by exposing the filters to an X-ray film (incubation depending on signal strength: 10 minutes to 2 hours).
Die halbmaximale Hemmkonzentration (IC50, inhibitorische Konzentration 50 %) wurde als die Konzentration bestimmt, bei der gegenüber einer unbehandelten Probe die intra- oder extrazelluläre Hepatitis-B-spezifische Bande durch die erfindungsgemäße Verbindung um 50 % reduziert wurde.The half-maximum inhibitory concentration (IC 50 , inhibitory concentration 50%) was determined as the concentration at which the intra- or extracellular hepatitis B-specific band was reduced by 50% compared to an untreated sample by the compound according to the invention.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen eine nicht vorhersehbare Wirkung gegen Viren. Sie sind überraschenderweise antiviral gegen Hepatitis B (HBV) wirksam und sind somit zur Behandlung von virusinduzierten Erkrankungen, insbesondere von akut und chronisch persistenten Virusinfektionen des HBV geeignet. Eine chronische Viruserkrankung, hervorgerufen durch das HBV, kann zu unterschiedlich schweren Krankheitsbildern führen; bekanntermaßen führt die chronische Hepatitis-B-Virusinfektion in vielen Fällen zur Leberzirrhose und/oder zum hepato- zellulären Karzinom.The compounds according to the invention show an unforeseeable activity against viruses. Surprisingly, they have antiviral activity against hepatitis B (HBV) and are therefore suitable for the treatment of virus-induced diseases, in particular acute and chronic persistent viral infections of HBV. A chronic viral disease caused by HBV can lead to different severity of the clinical picture; As is well known, chronic hepatitis B virus infection in many cases leads to cirrhosis of the liver and / or hepatocellular carcinoma.
Zur vorliegenden Erfindung gehören pharmazeutische Zubereitungen, die neben nicht- toxischen, inerten pharmazeutisch geeigneten Trägerstoffen eine oder mehrere Verbin- düngen (I) bzw. (Ia) bzw. eine erfmdungsgemäße Kombination, enthalten oder die aus einem oder mehreren Wirkstoffen (I) bzw. (Ia) bzw. aus einer erfindungsgemäßen Kombination bestehen.The present invention includes pharmaceutical preparations which, in addition to non-toxic, inert pharmaceutically suitable excipients, contain one or more compounds (I) or (Ia) or a combination according to the invention, or which consist of one or more active compounds (I) or (Ia) or consist of a combination according to the invention.
Die Wirkstoffe (I) bzw. (Ia) sollen in den oben aufgeführten pharmazeutischen Zubereitungen in einer Konzentration von etwa 0,1 bis 99,5 Gew.-%, vorzugsweise von etwa 0,5 bis 95 Gew.-% der Gesamtmischung, vorhanden sein.The active ingredients (I) or (Ia) should be present in the pharmaceutical preparations listed above in a concentration of about 0.1 to 99.5% by weight, preferably about 0.5 to 95% by weight, of the total mixture his.
Die oben aufgeführten pharmazeutischen Zubereitungen können außer den Verbindungen (I) bzw. (Ia) auch weitere pharmazeutische Wirkstoffe enthalten. Das Mengenverhältnis der Komponenten A, B und gegebenenfalls C der erfindungsgemäßen Kombinationen kann innerhalb weiter Grenzen schwanken; vorzugsweise beträgt es 5 bis 500 mg A / 10 bis 1000 mg B, insbesondere 10 bis 200 mg A / 20 bis 400 mg B.In addition to the compounds (I) or (Ia), the pharmaceutical preparations listed above can also contain further active pharmaceutical ingredients. The quantitative ratio of components A, B and optionally C of the combinations according to the invention can vary within wide limits; preferably it is 5 to 500 mg A / 10 to 1000 mg B, in particular 10 to 200 mg A / 20 to 400 mg B.
Die gegebenenfalls mitzuverwendende Komponente C kann in Mengen von vorzugsweise 1 bis 10 Millionen, insbesondere 2 bis 7 Millionen I.E. (internationale Einheiten), etwa dreimal wöchentlich über einen Zeitraum bis zu einem Jahr angewandt werden.Component C, which is optionally to be used, can be used in amounts of preferably 1 to 10 million, in particular 2 to 7 million I.U. (international units), applied approximately three times a week over a period of up to one year.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen oder Kombinationen sollen in den oben aufgeführten pharmazeutischen Zubereitungen im allgemeinen in einer Konzentration von etwa 0,1 bis 99,5, vorzugsweise etwa 0,5 bis 95, Gew.-% der Gesamtmischung vorhanden sein.The compounds or combinations according to the invention should generally be present in the pharmaceutical preparations listed above in a concentration of about 0.1 to 99.5, preferably about 0.5 to 95,% by weight of the total mixture.
Die Herstellung der oben aufgeführten pharmazeutischen Zubereitungen kann auf übliche Weise nach bekannten Methoden, z.B. durch Mischen des oder der Wirkstoffe mit dem oder den Trägerstoffen, erfolgen.The preparation of the pharmaceutical preparations listed above can be carried out in a conventional manner by known methods, e.g. by mixing the active substance or substances with the carrier substance or substances.
Im allgemeinen hat es sich sowohl in der Human- als auch in der Veterinärmedizin als vorteilhaft erwiesen, den oder die erfindungsgemäßen Wirkstoffe in Gesamtmengen von etwa 0,5 bis etwa 500, vorzugsweise von 1 bis 100 mg/kg Körpergewicht je 24 Stunden, gegebenenfalls in Form mehrerer Einzelgaben, zur Erzielung der gewünschten Ergebnisse zu verabreichen. Eine Einzelgabe enthält den oder die Wirkstoffe vorzugsweise in Mengen von etwa 1 bis etwa 80, insbesondere 1 bis 30 mg/kg Körpergewicht. Es kann jedoch erforderlich sein, von den genannten Dosierungen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von der Art und dem Körpergewicht des zu behandelnden Objekts, der Art und der Schwere der Erkrankung, der Art der Zubereitung und der Applikation des Arzneimittels, sowie dem Zeitraum bzw. Intervall, innerhalb welchem die Verabreichung erfolgt. Weiterer Gegenstand der Erfindung sind daher die oben definierten Verbindungen und Kombinationen zur Bekämpfung von Erkrankungen.In general, it has proven to be advantageous in both human and veterinary medicine to use the active ingredient (s) according to the invention in total amounts of from about 0.5 to about 500, preferably from 1 to 100 mg / kg of body weight per 24 hours, if appropriate in Form of multiple doses to be administered to achieve the desired results. A single dose contains the active ingredient (s) preferably in amounts of about 1 to about 80, in particular 1 to 30 mg / kg body weight. However, it may be necessary to deviate from the doses mentioned, depending on the type and body weight of the object to be treated, the type and severity of the disease, the type of preparation and administration of the drug, and the period or Interval within which the administration takes place. The invention therefore furthermore relates to the compounds and combinations defined above for combating diseases.
Weiterer Gegenstand der Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend mindestens eine der oben definierten Verbindungen oder Kombinationen und gegebenenfalls einen oder mehrere weitere pharmazeutische(n) Wirkstoff(e).The invention further relates to medicaments containing at least one of the compounds or combinations defined above and optionally one or more further pharmaceutical active ingredient (s).
Weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung der oben definierten Verbindungen und Kombinationen bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und Prophylaxe der oben beschriebenen Erkrankungen, vorzugsweise von Viruserkrankungen, insbesondere von Hepatitis B.The invention further relates to the use of the compounds and combinations defined above in the manufacture of a medicament for the treatment and prophylaxis of the diseases described above, preferably viral diseases, in particular hepatitis B.
Die Prozentangaben der nachfolgenden Beispiele beziehen sich, sofern nicht anders angegeben, jeweils auf das Gewicht. Die Verhältnisse von Lösemitteln in Löse- mittelgemischen beziehen sich j eweils auf das Volumen. Unless stated otherwise, the percentages in the examples below relate to the weight. The ratios of solvents in solvent mixtures each relate to the volume.
BeispieleExamples
A. AusgangsverbindungenA. Starting compounds
Beispiel I 3-Fluorpyridin-N-oxidExample I 3-fluoropyridine N-oxide
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Zu einer Lösung von 11,10 g (114,324 mmol) 3-Fluorpyridin in 74,00 ml Essigsäure gibt man 22,20 ml H2O2 (30%ig) und läßt 7 Stunden bei 100°C Badtemperatur rühren. Danach wird bis auf 30 ml eingeengt, 30 ml Wasser zugefügt und wieder auf 30 ml eingeengt. Die Lösung wird mit Dichlormethan verrührt, durch Zugabe von K2CO3 basisch gestellt, getrennt, die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan ausgeschüttelt, getrocknet und eingeengt. Ausbeute: 11,5 g (88,9 %)22.20 ml of H 2 O 2 (30%) are added to a solution of 11.10 g (114.324 mmol) of 3-fluoropyridine in 74.00 ml of acetic acid and the mixture is stirred at a bath temperature of 100 ° C. for 7 hours. The mixture is then concentrated to 30 ml, 30 ml of water are added and the mixture is again concentrated to 30 ml. The solution is stirred with dichloromethane, made basic by adding K 2 CO 3 , separated, the aqueous phase is extracted twice with dichloromethane, dried and concentrated. Yield: 11.5 g (88.9%)
Fp.: 66-68°CMp .: 66-68 ° C
Beispiel II 2-Cyano-3-fluorpyridinExample II 2-Cyano-3-fluoropyridine
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5,20 g (45,980 mmol) der Verbindung aus Beispiel I werden in 50 ml Acetonitril gelöst. Unter Argon werden 13,70 g (138,092 mmol) Trimethylsilyrnitril zugegeben und langsam 12,80 ml Triethylamin zulaufen gelassen. Die Lösung wird 7 Stunden unter Rückfluß und danach über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Nach dem5.20 g (45.980 mmol) of the compound from Example I are dissolved in 50 ml of acetonitrile. 13.70 g (138.092 mmol) of trimethylsilonitrile are added under argon and 12.80 ml of triethylamine are slowly run in. The solution is stirred under reflux for 7 hours and then at room temperature overnight. After this
Einengen mit einer Wasserstrahlpumpe wird in Dichlormethan aufgenommen, zweimal mit 50 ml 2 N wäßriger Natriumcarbonatlösung geschüttelt, mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingeengt.Concentration with a water jet pump is taken up in dichloromethane, shaken twice with 50 ml of 2N aqueous sodium carbonate solution, washed with water, dried and concentrated.
Ausbeute (roh): 5,3 g (Öl)Yield (crude): 5.3 g (oil)
Säulenchromatographie: Methylenchlorid bis Methylenchlorid/Essigester (10:1)Column chromatography: methylene chloride to methylene chloride / ethyl acetate (10: 1)
Beispiel III 2-Amidino-3-fluo yridin-hydrochloridExample III 2-Amidino-3-fluoro yridine hydrochloride
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Eine Lösung von 10,30 g (84,355 mmol) der Verbindung aus Beispiel II in 30 mlA solution of 10.30 g (84.355 mmol) of the compound from Example II in 30 ml
Methanol wird mit einer Natriummethylat-Lösung aus 0,40 g (17,391 mmol) Natrium und 65 ml Methanol versetzt und 72 Stunden bei 20°C gerührt. 5,44 g (101,682 mmol) Ammoniumchlorid (pulverisiert) und 17,39 mmol (1,04 ml) Essigsäure werden zugegeben, 28 Stunden bei 40°C nachgerührt und abgekühlt. Es wird vom nicht löslichen Salz abgesaugt (1,78 g), eingeengt, mit Aceton eingeengt, anschließend mit Aceton verrührt, abgesaugt und gewaschen. Ausbeute: 10,6 g Fp.: * 150°C Zers.Methanol is mixed with a sodium methylate solution consisting of 0.40 g (17.391 mmol) sodium and 65 ml methanol and stirred at 20 ° C. for 72 hours. 5.44 g (101.682 mmol) ammonium chloride (powdered) and 17.39 mmol (1.04 ml) acetic acid are added, the mixture is stirred at 40 ° C. for 28 hours and cooled. It is suctioned off from the insoluble salt (1.78 g), concentrated, concentrated with acetone, then stirred with acetone, suction filtered and washed. Yield: 10.6 g mp: * 150 ° C dec.
Beispiel IV 2-Cyano-3,5-dichlor-pyridinExample IV 2-Cyano-3,5-dichloropyridine
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Methode 1:Method 1:
Eine Lösung von 26 g (0,158 mol) 3,5-Dichlor-pyridin-l-oxid (Johnson et al., J.Chem.Soc.B, 1967, 1211) in 80 ml Dichlormethan wird nacheinander mit 21,8 ml (0,174 mol) Trimethylsilylcyanid und 14,6 ml (0,158 mol) Dimethylcarbamid- säurechlorid versetzt und 48 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Es wird mit 100 ml einer 10 %igen wäßrigen Natriumhydrogencarbonat-Lösung versetzt und 10 Minuten intensiv gerührt. Nach Trennung der Phasen wird einmal mit Dichlormethan ausgeschüttelt; die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet und eingeengt.A solution of 26 g (0.158 mol) of 3,5-dichloropyridine-l-oxide (Johnson et al., J.Chem.Soc.B, 1967, 1211) in 80 ml of dichloromethane is added successively with 21.8 ml (0.174 mol) trimethylsilyl cyanide and 14.6 ml (0.158 mol) dimethylcarbamide acid chloride were added and the mixture was stirred at room temperature for 48 hours. 100 ml of a 10% aqueous sodium hydrogen carbonate solution are added and the mixture is stirred intensively for 10 minutes. After the phases have been separated, the mixture is shaken once with dichloromethane; the combined organic phases are dried and concentrated.
Der Rückstand wird mit Dichlormethan an Kieselgel chromatographiert und aus wenig Methanol umkristallisiert. Man erhält 11 g (40,2 %) 2-Cyano-3,5-dichlor-pyridin (Fp.: 102°C).The residue is chromatographed on silica gel with dichloromethane and recrystallized from a little methanol. 11 g (40.2%) of 2-cyano-3,5-dichloropyridine (mp: 102 ° C.) are obtained.
Methode 2:Method 2:
Analog Troschuetz, R. et al., J. Heterocycl. Chem. 33, 1815-1821 (1996) werden 150 ml Diethylenglykoldimethylether, 47,68 g (0,261 mol) 2,3,5-Trichlorpyridin, 2,0 g (0,005 mol) Tetraphenylphosphoniumbromid, 4,0 g (0,024 mol) feingepulvertes Kaliumiodid und 75,0 g (0,838 mol) Kupfer(I)cyanid unter Stickstoff zusammengegeben und 24 Stunden bei Rückfluss gerührt. Anschließend weitere 100 ml Diethylenglykoldimethylether, 2,0 g (0,005 mol) Tetraphenylphosphoniumbromid, 4,0 g (0,024 mol) feingepulvertes Kaliumiodid und 75 g (0,838 mol) Kupfer(I)cyanid hinzugegeben und man rührt weitere 89 Stunden bei Rückflußtemperatur. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird abgesaugt und das Filtrat destillativ weitgehend von Diethylenglykoldimethylether befreit. Der Rückstand wird in Toluol aufgenommen und mit einer wässrigen Lösung von Mohr'schem Salz- und dann mit wäßriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen (Peroxidtest). Dann wird mit Wasser frei von Diethylenglykoldimethylether gewaschen. Man filtriert über ®Cellit, trock- net das Filtrat über Magnesiumsulfat und engt die Lösung ein.Analog Troschuetz, R. et al., J. Heterocycl. Chem. 33, 1815-1821 (1996) 150 ml of diethylene glycol dimethyl ether, 47.68 g (0.261 mol) of 2,3,5-trichloropyridine, 2.0 g (0.005 mol) of tetraphenylphosphonium bromide, 4.0 g (0.024 mol) are finely powdered Potassium iodide and 75.0 g (0.838 mol) of copper (I) cyanide combined under nitrogen and stirred at reflux for 24 hours. Then another 100 ml of diethylene glycol dimethyl ether, 2.0 g (0.005 mol) of tetraphenylphosphonium bromide, 4.0 g (0.024 mol) of finely powdered potassium iodide and 75 g (0.838 mol) of copper (I) cyanide were added, and the mixture was stirred for a further 89 hours at the reflux temperature. After cooling to room temperature, the product is filtered off with suction and the filtrate is largely freed from diethylene glycol dimethyl ether by distillation. The residue is taken up in toluene and washed with an aqueous solution of Mohr's salt solution and then with an aqueous sodium hydrogen carbonate solution (peroxide test). Then it is washed free of diethylene glycol dimethyl ether with water. It is filtered through ®Cellit, the filtrate is dried over magnesium sulfate and the solution is concentrated.
Man erhält 18,0 g (40,0 %) 2-Cyano-3,5-dichlorpyridin. Beispiel V 2-Cyano-3,5-difluor-pyridin18.0 g (40.0%) of 2-cyano-3,5-dichloropyridine are obtained. Example V 2-Cyano-3,5-difluoropyridine
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50 g (0,29 mol) 2-Cyano-3,5-dichlorρyridin aus Beispiel IV, 33,6 g (0,58 mol)50 g (0.29 mol) of 2-cyano-3,5-dichloropyridine from Example IV, 33.6 g (0.58 mol)
Kaliumfluorid und 10 g Polyethylengykol 8000 werden mit 125 ml DMSO versetzt und 30 Minuten auf 160°C erhitzt. Nach Abkühlung wird das Produkt zusammen mit dem DMSO im Hochvakuum abdestilliert, das Destillat auf Wasser gegeben, mit Toluol extrahiert und über Natriumsulfat getrocknet. Das Produkt wird als Toluol- lösung weiter umgesetzt.Potassium fluoride and 10 g of polyethylene glycol 8000 are mixed with 125 ml of DMSO and heated to 160 ° C. for 30 minutes. After cooling, the product is distilled off together with the DMSO under high vacuum, the distillate is added to water, extracted with toluene and dried over sodium sulfate. The product is further implemented as a toluene solution.
Rf-Wert: 0,43 (Cyclohexan/Essigester = 7:3)Rf value: 0.43 (cyclohexane / ethyl acetate = 7: 3)
Beispiel VI 3 ,5-Difiuor-2-pyridincarboximidamid-HydrochloridExample VI 3, 5-Difiuor-2-pyridinecarboximidamide hydrochloride
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Zu einer auf 0 bis 5°C gekühlten Suspension von 33,4 g (0,624 mol) Ammoniumchlorid in 1 1 Toluol werden 328 ml Trimethylaluminium (2 M in Hexan, 0,624 mol) getropft; die Mischung wird bei Raumtemperatur gerührt, bis die Methanentwicklung beendet ist. Danach wird die toluolische Lösung von 2-Cyano-3,5-dichlor-pyridin aus Beispiel V zugetropft und anschließend über Nacht bei 80°C nachgerührt. Nach Kühlung auf 0 bis -5°C wird Methanol bis zum Ende der Gasentwicklung zugetropft, die Salze abgesaugt und zweimal mit wenig Methanol gewaschen. Das Lösungsmittel wird abgezogen, der Rückstand in 500 ml Dichlormethan/Methanol (9:1) gelöst und nochmals von anorganischen Salzen abgesaugt. Nach Abziehen des Lösungsmittels verbleiben 23,6 g (39,1 %) 3,5-Difluor-2-pyridincarboximidamid- Hydrochlorid (Fp.:183°C).328 ml of trimethylaluminum (2 M in hexane, 0.624 mol) are added dropwise to a suspension of 33.4 g (0.624 mol) of ammonium chloride in 1 l of toluene, cooled to 0 to 5 ° C .; the mixture is stirred at room temperature until methane evolution has ceased. The toluene solution of 2-cyano-3,5-dichloropyridine from Example V is then added dropwise and the mixture is subsequently stirred at 80 ° C. overnight. After cooling to 0 to -5 ° C., methanol is added dropwise until the evolution of gas has ended, the salts are suctioned off and washed twice with a little methanol. The solvent is drawn off, the residue is dissolved in 500 ml of dichloromethane / methanol (9: 1) and suctioned off again from inorganic salts. After subtracting the Solvents remain 23.6 g (39.1%) of 3,5-difluoro-2-pyridinecarboximidamide hydrochloride (mp: 183 ° C).
1H-NMR (DMSO-D6):1H-NMR (DMSO-D 6 ):
8,3-8,45 (m, 1H) ppm; 8,8 (d, J = 2 Hz, 1H) ppm; 9,7 (s, breit, 4H) ppm.8.3-8.45 (m, 1H) ppm; 8.8 (d, J = 2 Hz, 1H) ppm; 9.7 (s, broad, 4H) ppm.
Beispiel VII 2-Acetyl-3-(2-chlor-4-fluorphenyl)-acrylsäuremethylesterExample VII 2-Acetyl-3- (2-chloro-4-fluorophenyl) acrylic acid methyl ester
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Eine Lösung von 50 g (315 mmol) 2-Chlor-4-fiuor-benzaldehyd und 36,6 g (315 mmol) Acetessigsäuremethylester in 150 ml Isopropanol wird mit 1,7 ml Piperidinacetat versetzt. Nach Rühren über Nacht bei Raumtemperatur wird mit Dichlormethan verdünnt, mit Wasser ausgeschüttelt und die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Das Produkt wird roh als cis/trans-Gemisch weiter umgesetzt. A solution of 50 g (315 mmol) of 2-chloro-4-fiuorobenzaldehyde and 36.6 g (315 mmol) of methyl acetoacetate in 150 ml of isopropanol is mixed with 1.7 ml of piperidine acetate. After stirring overnight at room temperature, the mixture is diluted with dichloromethane, extracted with water and the organic phase is dried over sodium sulfate and concentrated. The product is further converted raw as a cis / trans mixture.
Beispiel VIIIExample VIII
2-Acetyl-3-(2-brom-4-fluorphenyl)-acrylsäuremethylester2-Acetyl-3- (2-bromo-4-fluorophenyl) -acrylic acid methyl ester
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Diese Verbindung wurde in Analogie zu Beispiel VII ausgehend von 2-Brom-4- fluorbenzaldehyd und Acetessigsäuremethylester hergestellt.This compound was prepared in analogy to Example VII starting from 2-bromo-4-fluorobenzaldehyde and methyl acetoacetate.
Beispiel IX IsopropoxyacetessigsäuremethylesterExample IX Methyl isopropoxyacetoacetate
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Figure imgf000032_0002
8 g (200 mmol) 60 %-iges Natriumhydrid in Mineralöl werden unter Argon in 150 ml THF suspendiert und mit einer Lösung von 6,01 g (100 mmol) Isopropanol in 50 ml THF tropfenweise unter leichter Kühlung versetzt. Nach 1 -stündigem Nach- rühren wird eine Lösung von 15,06 g (100 mmol) Chloracetessigsäuremethylester in 50 ml THF zugetropft, wobei die Temperatur auf 45°C ansteigen darf. Es wird über Nacht gerührt, tropfenweise unter Eiskühlung mit 100 ml 10 %-iger Essigsäure versetzt und unter vermindertem Druck vom THF befreit. Der Rückstand wird in Dichlormethan aufgenommen, die resultierende Lösung mit gesättigter wäßriger8 g (200 mmol) of 60% sodium hydride in mineral oil are suspended in 150 ml of THF under argon and a solution of 6.01 g (100 mmol) of isopropanol in 50 ml of THF is added dropwise with gentle cooling. After stirring for 1 hour, a solution of 15.06 g (100 mmol) of methyl chloroacetoacetate in 50 ml of THF is added dropwise, the temperature being allowed to rise to 45 ° C. The mixture is stirred overnight, 100 ml of 10% acetic acid are added dropwise while cooling with ice and the THF is removed under reduced pressure. The residue is taken up in dichloromethane, the resulting solution with saturated aqueous
Natriumchlorid-Lösung ausgeschüttelt, die organische Phase getrocknet und eingeengt. Die Reinigung erfolgt über eine Kieselgelsäule mit Toluol Essigester-Gemi- schen. Man erhält 10,2 g (58,6 %) farbloses Öl. Beispiel XShaken out sodium chloride solution, the organic phase dried and concentrated. The purification is carried out on a silica gel column with toluene-ethyl acetate mixtures. 10.2 g (58.6%) of colorless oil are obtained. Example X
4-(2-Brom-4-fluorphenyl)-2-(3,5-difluorpyridin-2-yl)-l,4-dihydro-6-methyl- pyrimidin-5-carbonsäuremethylester4- (2-Bromo-4-fluorophenyl) -2- (3,5-difluoropyridin-2-yl) -1, 4-dihydro-6-methyl-pyrimidine-5-carboxylic acid methyl ester
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Eine Lösung von 6,02 g (20 mmol) 2-Acetyl-3-(2-brom-4-fluorphenyl)-acrylsäure- methylester (Beispiel VIII), 3,87 g (20 mmol) 3,5-Difluor-2-pyridincarboximidamid- hydrochlorid (Beispiel VI) und 1,64 g (20 mmol) Natriumacetat in 120 ml Isopropanol wird 6 Stunden unter leichtem Rückfluss erhitzt. Nach Abkühlen wird eingeengt, der Rückstand in 100 ml I N Salzsäure und Diethylether gelöst, dieA solution of 6.02 g (20 mmol) of 2-acetyl-3- (2-bromo-4-fluorophenyl) acrylic acid methyl ester (Example VIII), 3.87 g (20 mmol) of 3,5-difluoro-2 -pyridinecarboximidamide hydrochloride (Example VI) and 1.64 g (20 mmol) sodium acetate in 120 ml isopropanol is heated under gentle reflux for 6 hours. After cooling, the mixture is concentrated and the residue is dissolved in 100 ml of 1N hydrochloric acid and diethyl ether, which
Phasen getrennt und die organische Phase zweimal mit je 30 ml I N Salzsäure extrahiert. Die vereinigten wässrigen Phasen werden mit wässrigem Ammoniak basisch gestellt, zweimal mit Ethylacetat extrahiert, die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird über eine Kieselgelsäule mit Dichlormethan/Ethylacetat (10:1) als Laufmittel chromato- graphiert und durch Kristallisation aus Diethylether weiter gereinigt. Ausbeute: 5,92 g (67,2 % d.Th.) Fp.: 123-126°CPhases separated and the organic phase extracted twice with 30 ml of IN hydrochloric acid. The combined aqueous phases are made basic with aqueous ammonia, extracted twice with ethyl acetate, the organic phase is dried over sodium sulfate and concentrated. The residue is chromatographed on a silica gel column using dichloromethane / ethyl acetate (10: 1) as the eluent and further purified by crystallization from diethyl ether. Yield: 5.92 g (67.2% of theory) mp: 123-126 ° C
Beispiel XIExample XI
4-(2-Brom-4-fluo henyl)-6-brommethyl-2-(3,5-difluoφyridin-2-yl)-l,4-dihydro- pyrimidin-5-carbonsäuremethylester
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4- (2-Bromo-4-fluo-henyl) -6-bromomethyl-2- (3,5-difluoropyridin-2-yl) -l, 4-dihydropyrimidine-5-carboxylic acid methyl ester
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1,8 g (4,089 mmol) 4-(2-Brom-4-fluorphenyl)-2-(3,5-difluor-pyridin-2-yl)-l,4- dihydro-6-methyl-pyrimidin-5-carbonsäuremethylester (Beispiel X) werden in 50 ml Dichlormethan gelöst und mit 0,8 g (4,5 mmol) N-Bromsuccinimid versetzt, 2 Stunden zum leichten Sieden erhitzt, abgekühlt und eingeengt. Nach grober Reinigung über eine Kieselgelsäule erhält man 1,4 g (66 %) leicht gelbe Kristalle vom Schmelzpunkt 115 bis 116°C.1.8 g (4.089 mmol) 4- (2-bromo-4-fluorophenyl) -2- (3,5-difluoropyridin-2-yl) -1, 4-dihydro-6-methyl-pyrimidin-5- carboxylic acid methyl ester (Example X) are dissolved in 50 ml dichloromethane and mixed with 0.8 g (4.5 mmol) of N-bromosuccinimide, heated to gentle boiling for 2 hours, cooled and concentrated. After rough cleaning on a silica gel column, 1.4 g (66%) of slightly yellow crystals with a melting point of 115 to 116 ° C. are obtained.
Beispiel XII 4-(2-Brom-4-fluoφhenyl)-6-brommethyl-2-(3,5-difluoφyridin-2-yl)- 1 ,4-dihydro-pyrimidin-5 -carbonsäuremethylesterExample XII 4- (2-bromo-4-fluoro-phenyl) -6-bromomethyl-2- (3,5-difluoro-pyridin-2-yl) -1,4-dihydro-pyrimidine-5-carboxylic acid methyl ester
Figure imgf000034_0002
Figure imgf000034_0002
Eine Lösung von 1,8 g (4,089 mmol) 4-(2-Brom-4-fiuoφhenyl)-2-(3,5-difluor- pyridin-2-yl)-l,4-dihydro-6-methyl-pyrimidin-5-carbonsäuremethylester in 50 ml Dichlormethan wird mit 0,8 g (4,5 mmol) N-Bromsuccinimid versetzt, 2 Stunden zum leichten Sieden erhitzt, abgekühlt und eingeengt. Nach grober Reinigung über eine Kieselgelsäule erhält man 1,4 g (66 %) leicht gelbe Kristalle vom Schmelzpunkt 115 - 116°C. B. HerstellungsbeispieleA solution of 1.8 g (4.089 mmol) of 4- (2-bromo-4-fiuoφhenyl) -2- (3,5-difluoropyridin-2-yl) -1, 4-dihydro-6-methyl-pyrimidine Methyl -5-carboxylic acid in 50 ml dichloromethane is mixed with 0.8 g (4.5 mmol) N-bromosuccinimide, heated to gentle boiling for 2 hours, cooled and concentrated. After rough cleaning on a silica gel column, 1.4 g (66%) of slightly yellow crystals with a melting point of 115-116 ° C. are obtained. B. Production examples
Beispiel 1 4-(2-Chlor-4-fluoφhenyl)-2-(3,5-difluor-2-pyridinyl)-6-(isopropoxy- methyl)- 1 ,4-dihy dropyrimidin- 5 -carbonsäuremethy lesterExample 1 4- (2-chloro-4-fluorophene) -2- (3,5-difluoro-2-pyridinyl) -6- (isopropoxy-methyl) - 1,4-dihy dropyrimidine-5-carboxylic acid methyl ester
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Eine Lösung von 348,4 mg (2,0 mmol) der Verbindung aus Beispiel VIII in 20 ml Methanol wird mit 317,1 mg (2,0 mmol) 2-Chlor-4-fluorbenzaldehyd und 554,5 mgA solution of 348.4 mg (2.0 mmol) of the compound from Example VIII in 20 ml of methanol is mixed with 317.1 mg (2.0 mmol) of 2-chloro-4-fluorobenzaldehyde and 554.5 mg
(2,0 mmol) der Verbindung aus Beispiel VI (als Bis-acetat) versetzt und 16 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlen wird eingeengt, der Rückstand in Ethylacetat und verdünnter wäßriger Ammoniak-Lösung aufgenommen, die organische Phase mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Das Rohpro- dukt wird durch Kristallisation aus Diethylether gereinigt.(2.0 mmol) of the compound from Example VI (as bis-acetate) were added and the mixture was heated under reflux for 16 hours. After cooling, the mixture is concentrated, the residue is taken up in ethyl acetate and dilute aqueous ammonia solution, the organic phase is washed with water, dried over sodium sulfate and concentrated. The crude product is purified by crystallization from diethyl ether.
Ausbeute: 50 mg (5,5% d.Th.) Fp.: 152-153°CYield: 50 mg (5.5% of theory) mp: 152-153 ° C
Die in der folgenden Tabelle aufgeführten Herstellungsbeispiele wurden in analoger Weise hergestellt.
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Figure imgf000037_0001
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The preparation examples listed in the following table were prepared in an analogous manner.
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Figure imgf000044_0001
Die Wirkdaten sind für einige erfindungsgemäße Verbindungen in der nachfolgenden Tabelle aufgeführt:The active data for some compounds according to the invention are listed in the table below:
Figure imgf000045_0001
Figure imgf000045_0001
Die Behandlung der Hepatitis-B-Virus produzierenden HepG2.2.15-Zellen mit den erfindungsgemäßen Verbindungen führte überraschenderweise zu einer Reduktion intra- und/oder extrazellulärer viraler DNA. The treatment of the hepatitis B virus-producing HepG2.2.15 cells with the compounds according to the invention surprisingly led to a reduction in intra- and / or extracellular viral DNA.

Claims

Patentansprüche claims
1. Dihydropyrimidine der Formel1. Dihydropyrimidines of the formula
Figure imgf000046_0001
Figure imgf000046_0001
bzw. deren isomerer Formor their isomeric form
Figure imgf000046_0002
worin
Figure imgf000046_0002
wherein
R1 Dihalogenphenyl,R 1 dihalophenyl,
R2 Methyl oder Ethyl,R 2 is methyl or ethyl,
R3 eine Gruppe der Formel -CH2-R8m-Xn-R9 R 3 is a group of the formula -CH 2 -R 8 mX n -R 9
worinwherein
R8 die Gruppe -CR10Rn-,R 8 the group -CR 10 R n -,
X Sauerstoff,X oxygen,
R9 gegebenenfalls verzweigtes C1-C4-Alkyl, das durch Azido substituiert sein kann, R10 Wasserstoff, Hydroxyl oder Methyl,R 9 optionally branched C 1 -C 4 alkyl, which may be substituted by azido, R 10 is hydrogen, hydroxyl or methyl,
R11 Wasserstoff oder Methyl,R 11 is hydrogen or methyl,
R4 Wasserstoff,R 4 is hydrogen,
R5 Pyridyl, das bis zu zweifach gleich oder verschieden durch Halogen substituiert ist, oder Thiazolyl,R 5 pyridyl, which is substituted up to twice identical or different by halogen, or thiazolyl,
m Null oder 1 undm zero or 1 and
n Null oder 1 bedeutenn means zero or 1
mit den Maßgaben, daßwith the provisos that
R3 mindestens ein Sauerstoffatom enthält, n = 1, wenn m = Null, und n = Null, wenn m = 1 und R10 = Hydroxyl,R 3 contains at least one oxygen atom, n = 1 if m = zero, and n = zero if m = 1 and R 10 = hydroxyl,
und deren Salze.and their salts.
2. Dihydropyrimidine nach Anspruch 1 , worin2. Dihydropyrimidines according to claim 1, wherein
R1 2.4- oder 3.4-Dihalogenphenyl,R 1 2,4- or 3,4-dihalophenyl,
R2 Methyl oder Ethyl,R 2 is methyl or ethyl,
R3 eine Gruppe der Formel -CH2-R8 m-Xπ-R9,R 3 is a group of the formula -CH 2 -R 8 m -X π -R 9 ,
worin R8 -CH2- , -CH(OH)- oder -C(OH)(CH3)- ,wherein R 8 -CH 2 -, -CH (OH) - or -C (OH) (CH 3 ) -,
X Sauerstoff,X oxygen,
R9 Methyl, Ethyl, n-oder i-Propyl, das jeweils durch Azido substituiert sein kann,R 9 is methyl, ethyl, n- or i-propyl, which can each be substituted by azido,
R >*4 Wasserstoff,R> * 4 hydrogen,
R5 Pyrid-2-yl, das in 2-Position durch Halogen substituiert oder in 2.4- Position gleich oder verschieden durch Halogen substituiert ist, oder Thiazolyl,R 5 pyrid-2-yl which is substituted in the 2-position by halogen or in the 2.4-position is identical or differently substituted by halogen, or thiazolyl,
m Null oder 1 undm zero or 1 and
n Null oder 1 bedeutenn means zero or 1
mit den Maßgaben, daßwith the provisos that
R3 mindestens ein Sauerstoffatom enthält, n = 1, wenn m = Null, und n = Null, wenn m = 1 und R10 = Hydroxyl,R 3 contains at least one oxygen atom, n = 1 if m = zero, and n = zero if m = 1 and R 10 = hydroxyl,
und deren Salze.and their salts.
3. Dihydropyrimidine nach Anspruch 1, worin3. Dihydropyrimidines according to claim 1, wherein
R1 Phenyl, das in 2.4- oder 3.4-Position gleich oder verschieden durch Fluor, Chlor oder Brom disubstituiert ist, R2 Methyl oder Ethyl,R 1 is phenyl which is disubstituted by fluorine, chlorine or bromine in the 2.4 or 3.4 position, identically or differently, R 2 is methyl or ethyl,
R3 eine Gruppe der Formel -CH2-R8 m-Xn-R9,R 3 is a group of the formula -CH 2 -R 8 m -X n -R 9 ,
worinwherein
R8 -CH2- , -CH(OH)- oder -C(OH)(CH3)- ,R 8 -CH 2 -, -CH (OH) - or -C (OH) (CH 3 ) -,
X Sauerstoff,X oxygen,
R9 Methyl, Ethyl, n-Propyl, i-Propyl oder C2H4-Azido,R 9 is methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl or C 2 H 4 -azido,
R4 Wasserstoff,R 4 is hydrogen,
R5 Pyrid-2-yl, das durch Fluor bzw. Chlor in 2-Position monosubstituiert oder in 2.4-Position gleich oder verschieden disubstituiert ist, oder Thiazolyl,R 5 pyrid-2-yl which is monosubstituted by fluorine or chlorine in the 2-position or is identical or different in the 2.4-position, or thiazolyl,
m Null oder 1 undm zero or 1 and
n Null oder 1 bedeutenn means zero or 1
mit den Maßgaben, daßwith the provisos that
R3 mindestens ein Sauerstoffatom enthält, n = 1 , wenn m = Null, und n = Null, wenn m = 1 und R10 = Hydroxyl,R 3 contains at least one oxygen atom, n = 1 if m = zero, and n = zero if m = 1 and R 10 = hydroxyl,
und deren Salze. and their salts.
4. Dihydropyrimidine nach Anspruch 1 , worin4. Dihydropyrimidines according to claim 1, wherein
R1 Phenyl, das in 2.4-Position gleich oder verschieden durch Fluor, Chlor bzw. Brom oder in 3.4-Position durch Fluor disubstituiert ist,R 1 is phenyl which is disubstituted by fluorine, chlorine or bromine in the 2.4 position, the same or different, or by fluorine in the 3.4 position,
R2 Methyl oder Ethyl,R 2 is methyl or ethyl,
R3 einen Rest aus der ReiheR 3 a remainder from the series
-CH2-(CH2)m-O-CH3,-CH 2 - (CH 2 ) m -O-CH 3 ,
-CH2-(CH2)m-O-C2H5,-CH 2 - (CH 2 ) m -OC 2 H 5 ,
-CH2-(CH2)m-O-n-C3H7,-CH 2 - (CH 2 ) m -OnC 3 H 7 ,
-CH2-(CH2)m-O-iso-C3H7,-CH 2 - (CH 2 ) m -O-iso-C 3 H 7 ,
-CH2-(CH2)m-O-C2H4-Azido, -CH2-CH(OH)-C2H5,-CH 2 - (CH 2 ) m -OC 2 H 4 -azido, -CH 2 -CH (OH) -C 2 H 5 ,
-CH2-CH(OH)-iso-C3H7,-CH 2 -CH (OH) -iso-C 3 H 7 ,
-CH2-C(OH)(CH3)2,-CH 2 -C (OH) (CH 3 ) 2 ,
R ,44 Wasserstoff,R, 4 4 hydrogen,
R5 Pyrid-2-yl, das durch Fluor bzw. Chlor in 2-Position monosubstituiert oder durch Fluor in 2.4-Position disubstituiert ist, oder Thiazolyl, undR 5 is pyrid-2-yl which is monosubstituted by fluorine or chlorine in the 2-position or is disubstituted by fluorine in the 2.4-position, or thiazolyl, and
m Null oder 1 bedeuten,m is zero or 1,
und deren Salze.and their salts.
5. Verbindungen der Beispiele 1, 4, 7, 11, 26, 38 und 41.5. Compounds of Examples 1, 4, 7, 11, 26, 38 and 41.
6. Verfahren zur Herstellung der Dihydropyrimidine nach Ansprüchen 1 bis 5, wonach man [A] Aldehyde der Formel6. A process for the preparation of the dihydropyrimidines according to Claims 1 to 5, after which [A] aldehydes of the formula
R'-CHO (II),R'-CHO (II),
worin R1 die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebene Bedeutung hat,wherein R 1 has the meaning given in claims 1 to 5,
mit Amidinen der Formelwith amidines of the formula
Figure imgf000051_0001
worin R5 die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebene Bedeutung hat,
Figure imgf000051_0001
wherein R 5 has the meaning given in claims 1 to 5,
oder mit deren Salzenor with their salts
und Verbindungen der Formeland compounds of the formula
R3-CO-CH2-COOR2 (TV),R 3 -CO-CH 2 -COOR 2 (TV),
worin R2 und R3 die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebenen Bedeutungen besitzen,in which R 2 and R 3 have the meanings given in Claims 1 to 5,
umsetzt oderimplements or
[B] Verbindungen der Formel[B] Compounds of the formula
Figure imgf000051_0002
worin R1, R2 und R3 die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebenen Bedeutungen besitzen,
Figure imgf000051_0002
in which R 1 , R 2 and R 3 have the meanings given in Claims 1 to 5,
mit Amidinen der Formelwith amidines of the formula
Figure imgf000052_0001
worin R5 die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebene Bedeutung hat,
Figure imgf000052_0001
wherein R 5 has the meaning given in claims 1 to 5,
oder mit deren Salzen umsetzt oderor with their salts or
[C] Aldehyde der Formel[C] Aldehydes of the formula
R'-CHO (II),R'-CHO (II),
worin R1 die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebene Bedeutung hat,wherein R 1 has the meaning given in claims 1 to 5,
mit Verbindungen der Formelwith compounds of the formula
R3— C=C — COOR2 R 3 - C = C - COOR 2
H (VI),H (VI),
NH2 NH 2
worin R und R die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebenen Bedeutungen besitzen,wherein R and R have the meanings given in claims 1 to 5,
und Amidinen der Formel (IJI) oder mit deren Salzen umsetztand amidines of the formula (IJI) or with their salts
oder [D] Aldehyde der Formel (II) mit Verbindungen der Formel (IV) und Iminoethern der Formel (VII)or [D] aldehydes of the formula (II) with compounds of the formula (IV) and imino ethers of the formula (VII)
Figure imgf000053_0001
woπn
Figure imgf000053_0001
embedded image in which
R5 die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebene Bedeutung hat undR 5 has the meaning given in claims 1 to 5 and
R , 113J für Cι-C4-Alkyl steht,R 1 1 3 J represents C 1 -C 4 -alkyl,
in Gegenwart von Ammoniumsalzen umsetzt oder auchin the presence of ammonium salts or
[E] sofern m in R3 in Formel (I) Null ist, Verbindungen der Formel[E] if m in R 3 in formula (I) is zero, compounds of the formula
Figure imgf000053_0002
wonn
Figure imgf000053_0002
Wonn
R1, R2, R4 und R5 die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebenen Bedeutungen besitzen, mit Verbindungen der FormelR 1 , R 2 , R 4 and R 5 have the meanings given in claims 1 to 5, with compounds of the formula
H-X-R9 (IX),HXR 9 (IX),
worin X und R9 die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebenen Bedeutungen besitzen, umsetzt.wherein X and R 9 have the meanings given in claims 1 to 5, implemented.
7. Verbindungen der Formel
Figure imgf000054_0001
woπn7. Compounds of the formula
Figure imgf000054_0001
embedded image in which
R , R , R und R die in den Ansprüchen 1 bis 5 angegebenen Bedeutungen besitzen.R, R, R and R have the meanings given in claims 1 to 5.
8. Verbindungen nach Ansprüchen 1 bis 5 zur Bekämpfung von Erkrankungen.8. Compounds according to claims 1 to 5 for combating diseases.
9. Arzneimittel, enthaltend mindestens eine Verbindung nach Ansprüchen 1 bis 5 und gegebenenfalls weitere pharmazeutische Wirkstoffe.9. Medicament containing at least one compound according to claims 1 to 5 and optionally further active pharmaceutical ingredients.
10. Verwendung von Verbindungen der Ansprüche 1 bis 5 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und Prophylaxe von Viruserkrankungen.10. Use of compounds of claims 1 to 5 for the manufacture of a medicament for the treatment and prophylaxis of viral diseases.
11. Verwendung von Verbindungen der Ansprüche 1 bis 5 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und Prophylaxe von Hepatitis-B-Infektionen.11. Use of compounds of claims 1 to 5 for the manufacture of a medicament for the treatment and prophylaxis of hepatitis B infections.
12. Kombinationen12. Combinations
A) mindestens eines Dihydropyrimidins nach Ansprüchen 1 bis 5,A) at least one dihydropyrimidine according to claims 1 to 5,
B) mindestens eines von A verschiedenen HBV-antiviralen Mittels und gegebebnenfallsB) at least one HBV antiviral agent different from A and, if appropriate
C) mindestens eines Immunmodulators. C) at least one immunomodulator.
13. Kombinationen nach Anspruch 12, worin die Komponente B ein HBV- Polymerase-Inhibitor ist.13. Combinations according to claim 12, wherein component B is an HBV polymerase inhibitor.
14. Kombinationen nach Anspruch 12, worin die Komponente B Lamivudin ist.14. Combinations according to claim 12, wherein component B is lamivudine.
15. Kombinationen nach Anspruch 12, worin die Komponente B aus den Verbindungen der Formel15. Combinations according to claim 12, wherein component B consists of the compounds of the formula
Figure imgf000055_0001
worin
Figure imgf000055_0001
wherein
R1 und R2 unabhängig voneinander C1-C4-Alkyl bedeuten oder zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie stehen, einen Ring mit 5 bis 6 Ringatomen, die Kohlenstoff und/oder Sauerstoff umfassen, bilden,R 1 and R 2 independently of one another are C 1 -C 4 -alkyl or, together with the nitrogen atom on which they are located, form a ring having 5 to 6 ring atoms which comprise carbon and / or oxygen,
R3-R12 unabhängig voneinander Wasserstoff, Halogen, C1-C4-Alkyl, gegebenenfalls substituiertes CrC4-Alkoxy, Nitro, Cyano oder Trifluor- methyl,R 3 -R 12 independently of one another are hydrogen, halogen, C 1 -C 4 alkyl, optionally substituted CrC 4 alkoxy, nitro, cyano or trifluoromethyl,
R13 Wasserstoff, C C4-Alkyl, C C7-Acyl oder Aralkyl undR 13 is hydrogen, CC 4 alkyl, CC 7 acyl or aralkyl and
X Halogen oder gegebenenfalls substituiertes C1-C4-AlkylX halogen or optionally substituted C 1 -C 4 alkyl
bedeuten, und deren Salzen ausgewählt ist.mean, and whose salts are selected.
16. Kombinationen nach Anspruch 15 , worin16. Combinations according to claim 15, wherein
X Chlor, A 1-Piperidinyl und Y und Z jeweils Phenyl bedeuten.X is chlorine, A 1-piperidinyl and Y and Z are each phenyl.
17. Kombinationen nach Ansprüchen 12 bis 15, worin der Irnmunmodulator C Interferone enthält.17. Combinations according to claims 12 to 15, wherein the immune modulator C contains interferons.
18. Kombinationen von A) Dihydropyrimidinen nach Ansprüchen 1 bis 5, B) Lamivudin und gegebenenfalls C) Interferon.18. Combinations of A) dihydropyrimidines according to Claims 1 to 5, B) lamivudine and optionally C) interferon.
19. Verfahren zur Herstellung der Kombinationen nach Ansprüchen 12 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß man die Komponenten A und B in geeigneter19. A method for producing the combinations according to claims 12 to 18, characterized in that components A and B are suitable
Weise kombiniert oder herrichtet.Wise combined or prepared.
20. Kombinationen nach Ansprüchen 12 bis 18 zur Bekämpfung von Erkrankungen.20. Combinations according to claims 12 to 18 for combating diseases.
21. Arzneimittel, enthaltend mindestens eine Kombination gemäß Ansprüchen 12 bis 18 und gegebenenfalls weitere pharmazeutische Wirkstoffe.21. Medicament containing at least one combination according to claims 12 to 18 and optionally further active pharmaceutical ingredients.
22. Verwendung von Kombinationen der Ansprüche 12 bis 18 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und Prophylaxe von Viruserkrankungen.22. Use of combinations of claims 12 to 18 for the manufacture of a medicament for the treatment and prophylaxis of viral diseases.
23. Verwendung von Kombinationen der Ansprüche 12 bis 18 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und Prophylaxe von Hepatitis-B-Infektionen. 23. Use of combinations of claims 12 to 18 for the manufacture of a medicament for the treatment and prophylaxis of hepatitis B infections.
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