WO1995021931A1 - Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations - Google Patents

Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations Download PDF

Info

Publication number
WO1995021931A1
WO1995021931A1 PCT/FR1995/000098 FR9500098W WO9521931A1 WO 1995021931 A1 WO1995021931 A1 WO 1995021931A1 FR 9500098 W FR9500098 W FR 9500098W WO 9521931 A1 WO9521931 A1 WO 9521931A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
nucleic acid
composition according
oligopeptide
transfer
nucleic acids
Prior art date
Application number
PCT/FR1995/000098
Other languages
English (en)
Inventor
Didier Bazile
Carole Emile
Claude Helene
Gilles Spenlehauer
Original Assignee
Rhone-Poulenc Rorer S.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rhone-Poulenc Rorer S.A. filed Critical Rhone-Poulenc Rorer S.A.
Priority to US08/687,551 priority Critical patent/US5856435A/en
Priority to JP7520999A priority patent/JPH09508530A/ja
Priority to AU15818/95A priority patent/AU1581895A/en
Priority to EP95907715A priority patent/EP0743984A1/fr
Publication of WO1995021931A1 publication Critical patent/WO1995021931A1/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6917—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a lipoprotein vesicle, e.g. HDL or LDL proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A61K9/5153—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation

Definitions

  • the present invention relates to compositions based on nucleic acids, their preparation and their use. More particularly, it relates to compositions comprising nucleic acids and oligopeptides and their use in gene therapy, in particular for the transfer of nucleic acids.
  • Gene therapy consists of correcting a deficiency or an abnormality (mutation, aberrant expression, etc.) by introducing genetic information into the affected cell or organ.
  • This genetic information can be introduced either in vitro into a cell extracted from the organ, the modified cell then being reintroduced into the organism, or directly in vivo into the appropriate tissue.
  • Various techniques have been described for the transfer of this genetic information, among which various transfection techniques involving DNA and DEAE-dextran complexes (Pagano et al., J. Virol.
  • viruses as vectors for gene transfer has emerged as a promising alternative to these physical transfection techniques.
  • retroviruses RSV, HMS, MMS, etc.
  • the HSV virus adeno-associated viruses
  • adenoviruses adenoviruses
  • nucleic acids prevent their passage through cell membranes. If it has been shown that naked nucleic acids are capable of crossing the plasma membrane ex vivo (see in particular application No. WO90 / 11092), the transfection efficiency remains quite low. In addition, naked nucleic acids have a short plasma half-life, due to their degradation by enzymes and their elimination through the urinary tract. Furthermore, if the recombinant viruses make it possible to improve the efficiency of transfer of nucleic acids, their use presents certain risks such as pathogenicity, transmission, replication, recombination, transformation, etc.
  • the present invention provides an advantageous solution to these various problems.
  • the Applicant has indeed shown that it is possible to form ion pairs between particular cationic oligopeptides and the phosphate groups of the nucleic acids, and that the complexes thus formed are stable, and are capable of penetrating cells or be encapsulated in transfer vectors such as liposomes, nanoparticles or low density lipoproteins (LDL) with high yields.
  • transfer vectors such as liposomes, nanoparticles or low density lipoproteins (LDL) with high yields.
  • a first object of the invention therefore resides in a composition comprising a nucleic acid and a cationic oligopeptide capable of forming secondary structures.
  • the term secondary structure designates peptides capable of adopting a particular spatial conformation under physiological conditions, in contrast to peptides which do not exhibit any particular organization of their primary structure.
  • the secondary structure can appear either in certain solvents, or in aqueous solution, or after complexation with the nucleic acid.
  • oligopeptides used in the context of the invention are capable of forming ⁇ helices or ⁇ sheets.
  • complexation of a nucleic acid with a polylysine has already been described in the prior art.
  • the complexation rate and the stability of the complex formed with polylysine are relatively low, and these complexes cannot be encapsulated in transfer vectors in a satisfactory manner (see examples).
  • the complexes according to the invention which involve cationic oligopeptides capable of forming secondary structures ( ⁇ helices, ⁇ sheets) exhibit high stability, can be obtained with yields close to 100%, and are capable of being encapsulated with high yields in transfer vectors.
  • the compositions of the invention can be used on cells extracted from the body (ex vivo) for their re-administration, or directly in vivo.
  • the oligopeptides used in the context of the present invention correspond to the formula (A 0 AyAyAo) n or (AoAyA ⁇ AyJn in which A Q is a hydrophobic amino acid, Ay is a hydrophilic amino acid, and n is a number integer greater than or equal to 4.
  • a Q is a hydrophobic amino acid
  • Ay is a hydrophilic amino acid
  • n is a number integer greater than or equal to 4.
  • the hydrophobic amino acid is chosen from leucine, valine, isoleucine and phenylalanine; and the hydrophilic amino acid is chosen from lysine, arginine and histidine.
  • the capacity of the oligopeptides to form secondary structures can be verified by circular dichroism or by NMR, as indicated in the examples.
  • the oligopeptide is chosen from oligopeptides of formula (LKKL) n, (LKLK) n, (LRRL) n, in which n is defined as above.
  • n can vary between 4 and 100, preferably between 10 and 50.
  • the value of n is adapted by a person skilled in the art depending on the length and the nature nucleic acid, oligopeptide composition, intended use, etc.
  • the respective proportions of the oligopeptide and of the nucleic acid are preferably determined so that the ratio of positive charges of the oligopeptide / negative charges of nucleic acid is equal or greater than 1 (this ratio is designated R in the examples).
  • R this ratio
  • the longer the nucleic acid the higher the number of positive charges provided by the oligopeptide to obtain a maximum effect. This can result either by the use of oligopeptides in which the value of n is higher, or by the use of higher quantities of oligopeptides, or even by both.
  • the oligopeptides used in the context of the present invention can be prepared by any technique known to a person skilled in the art. Preferably, they are synthesized chemically, using a peptide synthesizer, using any type of chemistry known to those skilled in the art (F-moc, T-boc, etc.). When the values of n are high, it is also possible to synthesize the oligopeptides into several fragments which are then assembled. Furthermore, according to the synthesis technique used (for example in the homogeneous phase), the oligopeptide obtained may not be a defined compound, but a mixture of oligopeptides having different lengths centered around an average. In this case, the value of n of the formula of the invention represents the average of the values of the n of the various constituents of the mixture. Appropriate synthetic methods are given in general molecular biology techniques and in the examples.
  • nucleic acid includes both deoxyribonucleic acids and ribonucleic acids. They may be sequences of natural or artificial origin, and in particular genomic DNA, cDNA, mRNA, tRNA, rRNA, hybrid sequences or synthetic v . Semi-synthetic sequences. These nucleic acids ⁇ ⁇ can ⁇ be of human, animal, vegetable, bacterial, viral, etc. origin. They can be obtained by any technique known to those skilled in the art, and in particular by screening of banks, by chemical synthesis, or also by mixed methods including chemical or enzymatic modification of sequences obtained by screening of banks. They can also be incorporated into vectors, such as plasmid vectors.
  • deoxyribonucleic acids With regard more particularly to deoxyribonucleic acids, they can be single or double stranded. These deoxyribonucleic acids can carry therapeutic genes, transcriptional regulatory sequences, antisense sequences, regions of binding to other cellular components, etc.
  • therapeutic gene is understood in particular any gene coding for one or more proteins (or peptide or polypeptide) having pharmacological activity. These can be enzymes, hormones, growth factors, lymphokines, apolipoproteins, etc.
  • antisense sequence is meant any sequence capable, directly or indirectly (after transcription into RNA) of reducing the expression levels of a desired protein, or even of suppressing them (EP 140 308).
  • Antisense also includes sequences encoding ribozymes, which are capable of selectively destroying target RNAs (EP 321,201).
  • RNA ribonucleic acids
  • they may be antisense RNAs capable of at least partially blocking the translation of target mRNAs (cellular, viral, bacterial, etc.); or also ribozymes or nucleic acids capable of binding to another nucleic acid by the formation of a triple helix.
  • compositions according to the invention can be used in vitro, ex vivo or in vivo.
  • in vitro they can make it possible to transfer to cell lines desired nucleic acid sequences, for example for the purpose of expressing a recombinant protein or an antisense activity, or for the purpose of inhibiting a protein, by fixation of said protein. protein on nucleic acid.
  • ex vivo they can be used for the therapeutic transfer of a nucleic acid into a cell originating from an organism, with a view to imparting to said cell new or enhanced properties, before its re-administration to an organism.
  • they can be used for direct administration of nucleic acid.
  • Another object of the invention therefore lies in the use of a cationic oligopeptide capable of forming secondary structures for the transfer of nucleic acids into cells. As indicated above, this transfer can be carried out in vitro, ex vivo or in vivo.
  • compositions according to the invention can make it possible to transfer nucleic acids into various types of cells.
  • these are animal cells, preferably human. They may in particular be hematopoietic, endothelial, myoblastic cells, etc. Furthermore, these can be both healthy cells and cells affected by dysfunctions (tumor, viral infection, etc.).
  • the invention also relates to a method for transferring a nucleic acid into a cell, characterized in that said cell is cultured in the presence of the nucleic acid and a cationic oligopeptide capable of forming secondary structures.
  • nucleic acid- oligopepti.de complexes of the present invention also allow the encapsulation of nucleic acids in transfer vectors with considerably improved yields.
  • nucleic acids can in fact be combined with appropriate carriers or drug vectors.
  • the encapsulation of nucleic acids in such transfer vectors makes it possible to protect them from serum nucleases, to facilitate their penetration into the cells where their pharmacological target is found, and to slow down their elimination.
  • the major difficulty limiting the use of these vectors lies in the low yields of nucleic acid encapsulation.
  • nucleic acid-oligopeptide complexes of the invention can be encapsulated in transfer vectors with high yields. More particularly, the encapsulation yields of the complexes of the invention in nanoparticles are greater than 50%, while they are less than 1% with naked nucleic acids, or with other oligopeptides which do not form secondary structures. (See examples).
  • Another object of the invention therefore lies in the use of a cationic oligopeptide capable of forming secondary structures for the encapsulation of nucleic acids in a transfer vector.
  • a subject of the invention is also the nucleic acid transfer vectors comprising a composition as defined above.
  • vectors which are biocompatible, biodegradable, hydrophobic and of protein or polymeric nature.
  • preferred vectors according to the invention are liposomes, nanoparticles or low density lipoproteins (LDL).
  • Liposomes are phospholipid vesicles with an internal aqueous phase in which nucleic acids can be encapsulated.
  • the synthesis of liposomes and their use for the transfer of nucleic acids is known in the prior art (WO91 / 06309, WO92 / 19752, WO92 / 19730).
  • the use of complexes according to the invention makes it possible to improve the efficiency of encapsulation of nucleic acids in liposomes.
  • Nanoparticles are small particles, generally less than 500 nm, capable of transporting or vectorizing an active ingredient (such as a nucleic acid) in cells or in the bloodstream.
  • the present invention also makes it possible to considerably improve the yields of encapsulation of nucleic acids in nanoparticles.
  • the nanoparticles according to the invention consist of polymers comprising a majority of degradable units such as polylactic acid, optionally copolymerized with polyethylene glycol.
  • Other polymers usable in the nanoparticles have been described in the prior art (see for example EP 275 796; EP 520 889).
  • the invention therefore also relates to a method of encapsulating nucleic acids in transfer vectors according to which the transfer vector or the constituent components, the nucleic acid and a cationic oligopeptide capable of forming secondary structures are brought into contact. , or optionally a nucleic acid - oligopeptide complex already formed, under conditions allowing the encapsulation of the nucleic acid in said transfer vector, then the transfer vector formed is recovered.
  • the method according to the invention is preferably applied for the preparation of liposomes, nanoparticles or low density lipoproteins.
  • the invention also relates to pharmaceutical compositions comprising a therapeutic nucleic acid and a cationic oligopeptide capable of forming secondary structures, optionally encapsulated in a transfer vector.
  • This oligopeptide was synthesized as a salt of trifluoroacetic acid using an Applied Biosystem 431A peptide synthesizer, on an HMP resin (Applied Biosystem) and according to an F-MOC strategy. After synthesis, the peptide was released from the resin by treatment for 90 minutes in the presence of a TFA / water solution 95/5 (v / v), precipitated by addition of tert-butyl methyl ether, then purified by reverse phase HPLC on a column. Cl 8 100 A (Biorad RSL). The purity of the peptide obtained is greater than 95% and its solubility in water by 50 mg ml.
  • This oligopeptide was synthesized in the form of a trifluoroacetic acid salt by following the protocol described above.
  • the purity of the peptide obtained is greater than 90% and its solubility in water of 100 mg / ml. It has been shown that the polytetrapeptide LKLK, not structured in water, adopts a conformation in ⁇ sheets in saline solution or in the presence of nucleic acids, due to the interaction between phosphates and amino groups. Along a ⁇ sheet, the distance separating 2 positive charges is 6.9 A, which is compatible with the 6.2 A separating 2 phosphate groups from a single-stranded nucleic acid. This conformation should therefore improve the stability of the complex.
  • This peptide (supplied by A. Brack, Center for Molecular Biophysics, La) is not structured in saline solution and was used as a control.
  • the polylysine used is of commercial origin. This peptide is not structured in saline solution and was used as a control.
  • Anti ras anti nucleic acids were prepared. These nucleic acids are oligonucleotides of 12 and 13 residues, synthesized by the company Eurogentec (Belgium). These oligonucleotides are directed against a sequence of the mutated ras mRNA at the twelfth codon.
  • the nucleic acids used are the antisense (AS-Val), its inverse (IN V- Val: the sequence is identical but oriented in the opposite direction), as well as the antisense of normal ras mRNA (AS-Gly) and that a control nucleic acid comprising 2 unpaired nucleotides in the middle of the sequence (AS-mut2).
  • the sequence of these nucleic acids is as follows:
  • the nucleic acid (d (Tp) 15T) is composed of 16 thymidines. It is of commercial origin (Pharmacia).
  • This example illustrates the formation of complexes between the antisense nucleic acids described in Example 2 and the oligopeptides described in Example 1, under different ionic strength and concentration conditions (all the nucleic acid concentrations are expressed as phosphate). H shows that very high complexation yields can be obtained, thus testifying to the stability of the complexes.
  • the A / AO value is determined, making it possible to evaluate the fraction of free nucleic acid and, by difference, the complexed fraction.
  • a ratio R 1, the concentration of oligopeptide expressed as lysine is therefore 10 " 4 M.
  • the nucleic acid (10 ⁇ 4 M) and the oligopeptide (variable concentration) were brought into contact in a 50 mM Tris-HCl buffer pH 7.4. The solution was then centrifuged, and the absorbance at 256 nm determined in the supernatant. For each value of the R ratio tested, the A / AO value is determined as above.
  • Example 4 Study of the encapsulation in a transfer vector of the nanoparticles.
  • This example illustrates the very advantageous properties of the complexes of the invention, allowing the encapsulation of nucleic acid in transfer vectors with very high yields.
  • Nanoparticles used are diblock copolymers consisting of a poly (D, L lactic acid) linked by an ester bond to a poly (ethylene glycol): PLAp (M) -PEG (N) where M and N are the average molecular weights (in kD) of PLA and PEG, respectively, and p, the percentage of L-lactic acid.
  • the 2 types of nanoparticles used are PLA50 (30) -PEG (2) and PLA50 (30) -PEG (5). These copolymers can be synthesized by any technique known to a person skilled in the art (see for example EP 520 889).
  • the nucleic acids were treated with phage T4 polynucleotide kinase (Biolabs) in the presence of ATP. ⁇ 32p (Amersham) in kinase buffer. After 30 min of incubation at 37 ° C., the nucleic acid was separated from the unreacted ATP by deposition on a Sephadex G25 column (Quick Spin) and centrifugation.
  • This example describes the encapsulation of the INV-Vall3 nucleic acid in a PLA5Q (30) -PEG (2) nanoparticle in the presence or absence of an oligopeptide (LKKL) 10 .
  • the polymer used (PLA50 (30) -PEG (2)) was dissolved in 1 ml of acetone at a concentration of 10 g 1.
  • the organic solution obtained was then poured dropwise into 5 ml of an aqueous solution (50 mM Tris-HCl buffer, pH 7.4), under The polymer insoluble in the water / acetone mixture precipitates in the form of nanoparticles, trapping the nucleic acid-oligopeptide complex, then the acetone is removed by evaporation under partial vacuum, to a final volume of 2.5 ml.
  • the nanoparticulate suspension was filtered through a Sartorius filter with a porosity of 1.2 ⁇ m, which acts as a screen for dispersion and injectability.
  • the encapsulation yield corresponds to the percentage of nucleic acid encapsulated in the nanoparticles, relative to the total amount of nucleic acid present at the start.
  • - LKKLn Propeller ⁇ synthesized in homogeneous phase in the form of a mixture of peptides of average molecular weight of 34900.
  • - LKLKn Sheet ⁇ synthesized in homogeneous phase in the form of a mixture of peptides of average molecular weight of 7400.
  • sphingosine a positively charged membrane lipid
  • the nucleic acid (d (Tp) 15T) was mixed with the oligopeptide in solution in water.
  • sphingosine it is dissolved in a water / ethanol mixture 50% v / v.
  • concentrations used are indicated in the table below. 100 ⁇ l of a polylactic acid solution (PLA50) dissolved in l acetone at a concentration of 20 g / 1 were added to the mixture, as well as 300 ⁇ l of pure acetone (final concentration in PLA50: 5 g / 1).
  • the mixture was poured drop by drop into a 2.5% (w / v) aqueous solution of pluronic F68 in order to precipitate the polymer in the form of a turbid nanoparticulate colloidal suspension.
  • the turbidity was appreciated by the eye.
  • the diameter of the nanoparticles (175 +/- 40 nm) was measured by quasi elastic scattering " of light on a BI 90 device (Brookhaven Instrument Corporation).
  • the acetone was then evaporated in vacuo for one hour.
  • the suspension was then filtered through an AP20 millipore filter (pore diameter: 1.5 ⁇ m), previously wetted with the 2.5% pluronic F68 solution.
  • the encapsulation yield has been determined and is reported in the table below.
  • This example illustrates the capacity of the compositions of the invention to transfer nucleic acids into cells.
  • Cells used The nucleic acid transfer tests described in this example were carried out on a cell line originating from a human bladder carcinoma, designated T24 / EJ accessible to ATCC. The cells were cultured in MEM-EAGLE medium ("minimum essential medium", Biological Industries) supplemented with L-glutamine ((5 mM), streptomycin (50 u / ml), penicillin (50 u / ml), in the presence 7% fetal calf serum decomplemented 30 min at 60 ° C.
  • MEM-EAGLE medium minimum essential medium
  • L-glutamine ((5 mM)
  • streptomycin 50 u / ml
  • penicillin 50 u / ml
  • the cells (1500 / well) were seeded in 96-well microplates, in the absence or presence of nucleic acid, whether or not encapsulated in nanoparticles, in a total volume of 100 ⁇ l. Each point was made in triplicate.
  • the nucleic acid concentration used was adjusted by dilution in water or by concentration by centrifugation for 1 hour at 12,000 rpm. In this case, the suspension is centrifuged, the pellet weighed and then the volume adjusted.
  • the efficiency of the transfer was determined by measuring the inhibition of cell proliferation induced by the antisense nucleic acid, after 72 or 96 hours of culture at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2. For this, 2 methods were used:

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

La présente invention concerne des compositions comprenant des acides nucléiques et des oligopeptides cationiques capables de former des structures secondaires, et leur utilisation en thérapeutique et en thérapie génique, notamment pour le transfert d'acides nucléiques dans les cellules.

Description

COMPOSITION CONTENANT DES ACIDES NUCLEIQUES- PREPARATION ET UTILISATIONS
La présente invention concerne des compositions à base d'acides nucléiques, leur préparation et leur utilisation. Plus particulièrement, elle concerne des compositions comprenant des acides nucléiques et des oligopeptides et leur utilisation en thérapie génique, notamment pour le transfert d'acides nucléiques.
La thérapie génique consiste à corriger une déficience ou une anormalité (mutation, expression aberrante, etc) par introduction d'une information génétique dans la cellule ou l'organe affecté. Cette information génétique peut être introduite soit in vitro dans une cellule extraite de l'organe, la cellule modifiée étant alors réintroduite dans l'organisme, soit directement in vivo dans le tissu approprié. Différentes techniques ont été décrites pour le transfert de cette information génétique, parmi lesquelles des techniques diverses de transfection impliquant des complexes d'ADN et de DEAE-dextran (Pagano et al., J.Virol. 1 (1967) 891), d'ADN et de protéines nucléaires (Kaneda et al., Science 243 (1989) 375), d'ADN et de lipides (Felgner et al., PNAS 84 (1987) 7413), l'emploi de liposomes (Fraley et al., J.Biol.Chem. 255 (1980) 10431), etc. Plus récemment, l'emploi de virus comme vecteurs pour le transfert de gènes est apparu comme une alternative prometteuse à ces techniques physiques de transfection. A cet égard, différents virus ont été testés pour leur capacité à infecter certaines populations cellulaires. En particulier, les rétrovirus (RSV, HMS, MMS, etc), le virus HSV, les virus adéno-associés, et les adénovirus.
Toutefois, les techniques développées jusqu'à présent ne permettent pas de résoudre de manière satisfaisante les difficultés liées au transfert de gènes dans les cellules et/ou l'organisme. En particulier, les problèmes liés à la pénétration de l'acide nucléique dans les cellules ne sont pas entièrement résolus. En effet, la nature polyanionique des acides nucléiques prévient leur passage à travers les membranes cellulaires. S'il a été montré que les acides nucléiques nus sont capables de traverser la membrane plasmique ex vivo (voir notamment la demande n° WO90/11092), l'efficacité de transfection reste assez faible. De plus, les acides nucléique nus ont une demi-vie plasmatique courte, en raison de leur dégradation par les enzymes et de leur élimination par les voies urinaires. Par ailleurs, si les virus recombinants permettent d'améliorer l'efficacité de transfert des acides nucléiques, leur emploi présente certains risques tels que la pathogénicité, la transmission, la réplication, la recombinaison, la transformation, etc.
La présente invention apporte une solution avantageuse à ces différents problèmes. La demanderesse a en effet montré qu'il est possible de former des paires d'ions entre des oligopeptides cationiques particuliers et les groupements phosphates des acides nucléiques, et que les complexes ainsi formés sont stables, et sont capables de pénétrer les cellules ou d'être encapsulés dans des vecteurs de transfert tels que des liposomes, des nanoparticules ou des lipoprotéines de faible densité (LDL) avec des rendements élevés.
Un premier objet de l'invention réside donc dans une composition comprenant un acide nucléique et un oligopeptide cationique capable de former des structures secondaires. Le terme structure secondaire désigne les peptides capables d'adopter une conformation spaciale particulière dans des conditions physiologiques, par opposition aux peptides ne présentant pas d'organisation particulière de leur structure primaire. La structure secondaire peut apparaître soit dans certains solvants, soit en solution aqueuse, soit après complexation avec l'acide nucléique.
Plus particulièrement, les oligopeptides utilisés dans le cadre de l'invention sont capables de former des hélices α ou des feuillets β.
La complexation d'un acide nucléique avec une polylysine a déjà été décrite dans l'art antérieur. Cependant, le taux de complexation et la stabilité du complexe formé avec la polylysine sont relativement faibles, et ces complexes ne peuvent être encapsulés dans des vecteurs de transfert de façon satisfaisante (voir exemples). Au contraire, les complexes selon l'invention, qui impliquent des oligopeptides cationiques capables de former des structures secondaires (hélices α, feuillets β) présentent une stabilité élevée, peuvent être obtenus avec des rendements proches de 100%, et sont capables d'être encapsulés avec des rendements élevés dans des vecteurs de transfert.
Ces complexes constituent donc des outils particulièrement avantageux pour le transfert d'acides nucléiques dans les cellules. Par ailleurs, selon la nature du vecteur de transfert utilisé, les compositions de l'invention peuvent être utilisées sur des cellules extraites de l'organisme (ex vivo) en vue de leur réadministration, ou directement in vivo. Plus particulièrement, les oligopeptides utilisés dans le cadre de la présente invention répondent à la formule (A0AyAyAo)n ou (AoAyAφAyJn dans laquelle AQ est un acide aminé hydrophobe, Ay est un acide aminé hydrophile, et n est un nombre entier supérieur ou égal à 4. La demanderesse a en effet montré que de tels oligopeptides sont capables, une fois complexés aux acides nucléiques, de former des structures secondaires qui stabilisent fortement lesdits complexes.
Plus préférentiellement, l'acide aminé hydrophobe est choisi parmi la leucine, la valine, l'isoleucine et la phénylalanine; et l'acide aminé hydrophile est choisi parmi la lysine, l'arginine et l'histidine.
La capacité des oligopeptides à former des structures secondaires peut être vérifiée par dichroïsme circulaire ou en RMN, comme indiqué dans les exemples.
Encore plus -préférentiel-ement, l'oligopeptide
Figure imgf000005_0001
est choisi parmi les oligopeptides de formule (LKKL)n, (LKLK)n, (LRRL)n, dans lesquelles n est défini comme précédemment.
D'une manière générale, dans les oligopeptides de l'invention, n peut varier entre 4 et 100, de préférence entre 10 et 50. La valeur de n est adaptée par l'homme du métier en fonction de la longueur et de la nature de l'acide nucléique, de la composition de l'oligopeptide, de l'utilisation recherchée, etc.
Pour obtenir un effet optimum des compositions de l'invention, les proportions respectives de l'oligopeptide et de l'acide nucléique sont de préférence déterminées de sorte que le rapport charges positives de l'oligopeptide / charges négatives de l'acide nucléique soit égal ou supérieur à 1 (ce rapport est désigné R dans les exemples). Ainsi, plus l'acide nucléique est long, plus le nombre de charges positives apporté par l'oligopeptide doit être élevé pour obtenir un effet maximum. Ceci peut se traduire soit par l'utilisation d'oligopeptides dans lesquels la valeur de n est plus élevée, soit par l'utilisation de quantités plus élevées d'oligopeptides, soit encore par les deux.
Les oligopeptides utilisés dans le cadre de la présente invention peuvent être préparés par toute technique connue de l'homme du métier. Préférentiellement, ils sont synthétisés par voie chimique, au moyen d'un synthétiseur de peptides, en utilisant tout type de chimie connue de l'homme du métier (F-moc, T-boc, etc). Lorsque les valeurs de n sont élevées, il est par ailleurs possible de synthétiser les oligopeptides en plusieurs fragments qui sont ensuite assemblés. Par ailleurs, selon la technique de synthèse utilisée (par exemple en phase homogène), l'oligopeptide obtenu peut être non pas un composé défini, mais un mélange d'oligopeptides ayant des longueurs différentes centrées autour d'une moyenne. Dans ce cas, la valeur de n de la formule de l'invention représente la moyenne des valeurs des n des différents constituants du mélange. Des méthodes de synthèse appropriées sont données dans les techniques générales de biologie moléculaire et dans les exemples.
Au sens de la présente invention, le terme acide nucléique comprend aussi bien les acides désoxyribonucléiques que les acides ribonucléiques. Il peut s'agir de séquences d'origine naturelle ou artificielle, et notamment d'ADN génomique, d'ADNc, d'ARNm, d'ARNt, d'ARNr, de séquences hybrides ou de séquences synthétiques vOU .semiηsynthétiques. Ces acides nucléiques Λ^peuvent^être d'origine humaine, animale, végétale, bactérienne, virale, etc. Ils peuvent être obtenus par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par criblage de banques, par synthèse chimique, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatiqe de séquences obtenues par criblage de banques. Ils peuvent par ailleurs être incorporés dans des vecteurs, tels que des vecteurs plasmidiques.
Concernant plus particulièrement les acides désoxyribonucléiques, ils peuvent être simple ou double brin. Ces acides désoxyribonucléiques peuvent porter des gènes thérapeutiques, des séquences régulatrices de la transcription, des séquences antisens, des régions de liaison à d'autres composants cellulaires, etc.
Au sens de l'invention, on entend par gène thérapeutique notamment tout gène codant pour une ou des protéines (ou peptide ou polypeptide) ayant une activité pharmacologique. Il peut s'agir d'enzymes, d'hormones, de facteurs de croissance, de lymphokines, d'apolipoprotéines, etc. Par séquence antisens, on entend toute séquence capable, directement ou indirectement (après transcription en ARN) de réduire les niveaux d'expression d'une protéine désirée, voire de les supprimer (EP 140 308). Les antisens comprennent également les séquences codant pour des ribozymes, qui sont capables de détruire sélectivement des ARN cibles (EP 321 201).
Concernant plus particulièrement les acides ribonucléiques (ARN), il peut s'agir d'ARN antisens, capables de bloquer au moins partiellement la traduction d'ARNm cibles (cellulaires, viraux, bactériens, etc); ou également de ribozymes ou d'acides nucléiques capables de se lier à un autre acide nucléique par formation d'une triple hélice.
Les compositions selon l'invention peuvent être utilisés in vitro, ex vivo ou in vivo. In vitro, elles peuvent permettre de transférer à des lignées cellulaires des séquences d'acides nucléiques désirées, par exemple dans le but d'exprimer une protéine recombinante ou une activité antisens, ou dans le but d'inhiber une protéine, par fixation de ladite protéine sur l'acide nucléique. Ex vivo, elles peuvent être utilisés pour le transfert thérapeutique d'un acide nucléique dans une cellule issue d'un organisme, en vue de conférer à ladite cellule des propriétés nouvelles eu renforcées, avant sa réadministration à un organisme. In vivo, elles peuvent être utilisés pour l'administration directe d'acide nucléique.
Un autre objet de l'invention réside donc dans l'utilisation d'un oligopeptide cationique capable de former des -rtructures secondaires pour le transfert d'acides nucléiques dans les cellules. Comme indiqué plus haut, ce transfert peut être effectué in vitro, ex vivo ou in vivo.
Les compositions selon l'invention peuvent permettre de transférer des acides nucléiques dans des types variés de cellules. Préférentiellement, il s'agit de cellules animales, de préférence humaine. Il peut s'agir notamment de cellules hématopoiétiques, endothéliales, myoblastiques, etc. Par ailleurs, il peut s'agir aussi bien de cellules saines que de cellules affectées par des dysfonctionnements (tumeur, infection virale, etc).
L'invention concerne également un procédé pour le transfert d'un acide nucléique dans une cellule caractérisé en ce que l'on cultive ladite cellule en présence de l'acide nucléique et d'un oligopeptide cationique capable de former des structures secondaires.
Par ailleurs, les complexes acide nucleique-oligopepti.de de la présente invention permettent également l'encapsulation des acides nucléiques dans des vecteurs de transfert avec des rendements considérablement améliorés. Pour diminuer les problèmes de stabilité et de pénétration dans les cellules, les acides nucléiques peuvent en effet été associés à des transporteurs ou à des vecteurs de médicament appropriés. L'encapsulation des acides nucléiques dans de tels vecteurs de transfert permet de les protéger des nucléases sériques, de faciliter leur pénétration dans les cellules où se trouve leur cible pharmacologique, et de ralentir leur élimination. Toutefois, la difficulté majeure limitant l'utilisation de ces vecteurs réside dans les faibles rendements d'encapsulation des acides nucléiques. La demanderesse a maintenant montré que les complexes acide nucléique-oligopeptides de l'invention peuvent être encapsulés dans des vecteurs de transfert avec des rendements élevés. Plus particulièrement, les rendements d'encapsulation des complexes de l'invention dans des nanoparticules sont supérieurs à 50%, alors qu'ils sont inférieurs à 1% avec des acides nucléiques nus, ou avec d'autres oligopeptides ne formant pas de structure secondaires (Cf exemples).
Un autre objet de l'invention réside donc dans l'utilisation d'un oligopeptide cationique capable de former des structures secondaires pour l'encapsulation d'acides nucléiques dans un vecteur de transfert.
L'invention a également pour objet les vecteurs de transfert d'acides nucléique comprenant une composition telle que définie ci-avant
Parmi les différents vecteurs de transfert, on préfère utiliser dans le cadre de la présente invention des vecteurs biocompatibles, biodégradables, hydrophobes et de nature protéique ou polymérique. En particulier, les vecteurs préférés selon l'invention sont les liposomes, les nanoparticules ou les lipoprotéines de faible densité (LDL).
Les liposomes sont des vésicules phospholipidiques comportant une phase aqueuse interne dans laquelle les acides nucléiques peuvent être encapsulés. La synthèse de liposomes et leur utilisation pour le transfert d'acides nucléiques est connue dans l'art antérieur (WO91/06309, WO92/19752, WO92/19730). L'utilisation de complexes selon l'invention permet d'améliorer l'efficacité d'encapsulation des acides nucléiques dans les liposomes.
Les nanoparticules sont des particules de petite dimension, généralement inférieure à 500 nm, capables de transporter ou de vectoriser un principe actif (tel qu'un acide nucléique) dans les cellules ou dans la circulation sanguine. La présente invention permet également d'améliorer considérablement les rendements d'encapsulation d'acides nucléiques dans des nanoparticules. Préférentiellement, les nanoparticules selon l'invention sont constituées par des polymères comportant une majorité de motifs dégradables tels que l'acide polylactique, éventuellement copolymérisé à du polyéthylène glycol. D'autres polymères utilisables dans la réalisation de nanoparticules ont été décrits dans l'art antérieur (voir par exemple EP 275 796; EP 520 889).
L'invention concerne donc également un procédé d'encapsulation d'acides nucléiques dans des vecteurs de transfert selon lequel on met en contact le vecteur de transfert ou les composants le constituant, l'acide nucléique et un oligopeptide cationique capable de former des structures secondaires, ou éventuellement un complexe acide nucléique - oligopeptide déjà formé, dans des conditions permettant l'encapsulation de l'acide nucléique dans ledit vecteur de transfert, puis on récupère le vecteur de transfert formé. Comme indiqué plus haut, le procédé selon l'invention est préférentiellement appliqué pour la préparation de liposomes, de nanoparticules ou de lipoprotéines de faible densité.
L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques comprenant un acide nucléique thérapeutique et un oligopeptide cationique capable de former des structures secondaires, éventuellement encapsulés dans un vecteur de transfert.
La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs.
Exemple 1 : Préparation des oligopeptides
Les trois oligopeptides suivants ont été synthétisés :
1.1. -(H)-(Leucine-Lysine-Lysine-Leucine)iQ-(OH) ou (LKKL) L.
Cet oligopeptide a été synthétisé sous forme de sel d'acide trifluoroacétique au moyen d'un synthétiseur de peptides Applied Biosystem 431A, sur une résine HMP (Applied Biosystem) et selon une stratégie F-MOC. Après la synthèse, le peptide a été libéré de la résine par traitement 90 minutes en présence d'une solution TFA/eau 95/5 (v/v), précipité par addition d'ether tertiobutylméthylique, puis purifié par HPLC phase inverse sur colonne Cl 8 100 A (Biorad RSL). La pureté du peptide obtenu est supérieure à 95 % et sa solubilité dans l'eau de 50 mg ml. Il a été montré que le polytétrapeptide LKKL, non structuré dans l'eau, adopte une conformation en hélice α en solution saline. Cette conformation devrait améliorer la stabilité du complexe par formation de paires d'ions entre les charges positives des lysines de l'oligopeptide et les phosphates ionisés à pH physiologique de l'acide nucléique. 1.2. -(H)-(Leucine-Lysine-Leucine-Lysine)|Q-(OH) ou (LKLK)|Q^
Cet oligopeptide a été synthétisé sous forme de sel d'acide trifluoroacétique en suivant le protocole décrit ci-dessus. La pureté du peptide obtenu est supérieure à 90% et sa solubilité dans l'eau de 100 mg/ml. Il a été montré que le polytétrapeptide LKLK, non structuré dans l'eau, adopte une conformation en feuillets β en solution saline ou en présence d'acides nucléiques, en raison de l'interaction entre phosphates et groupements aminés. Le long d'un feuillet β, la distance séparant 2 charges positives est de 6,9 A, ce qui est compatible avec les 6,2 A séparant 2 groupements phosphate d'un acide nucléique simple brin. Cette conformation devrait donc améliorer la stabilité du complexe.
Figure imgf000010_0001
Ce peptide (fourni par A. Brack, Centre de Biophysique Moléculaire, Orléans) n'est pas structuré en solution saline et a été utilisé comme contrôle.
1.4. Polylysine.
La polylysine utilisée est d'origine commerciale. Ce peptide n'est pas structuré en solution saline et a été utilisé comme contrôle.
Exemple 2 : Acides nucléiques utilisés
2.1. Acides nucléiques antisens anti-ras Vall2
Des acides nucléiques antisens anti ras ont été préparés. Ces acides nucléiques sont des oligonucléotides de 12 et 13 résidus, synthétisés par la société Eurogentec (Belgique). Ces oligonucléotides sont dirigés contre une séquence de l'ARNm de ras muté au niveau du douzième codon. Les acides nucléiques utilisés sont l'antisens (AS- Val), son inverse (IN V- Val : la séquence est identique mais orientée dans le sens inverse), ainsi que l'antisens de l'ARNm ras normal (AS-Gly) et qu'un acide nucléique témoin comportant 2 nucléotides non appariés au milieu de la séquence (AS-mut2). La séquences de ces acides nucléiques est la suivante :
3'-CGCGGCAGCCAC-5' (AS-Val12) 3'- GCGGCAGCCACAC-5' (AS-Val13) 3 ' -CACCGACGGCGC-5 ' (INV-Val12) 3 ' -CACACCGACGGCG- 5 ' ( INV-Val1 3 )
3 ' -CGCGGCCGCCAC- 5 ' ' (AS-Gly1 2 )
3 ' -CGCCGGAGCCAC- 5 ' AS-mut21 2 )
2.2. Acide nucléique (d(Tp)15T)
L'acide nucléique (d(Tp)15T) est composé de 16 thymidines. Il est d'origine commerciale (Pharmacia).
Exemple 3 : Etude de complexation
Cet exemple illustre la formation de complexes entre les acides nucléiques antisens décrits dans l'exemple 2 et les oligopeptides décrits dans l'exemple 1, dans différentes conditions de force ionique et de concentration (toutes les concentrations en acides nucléiques sont exprimées en phosphate). H montre que des rendements de complexation très élevés peuvent être obtenus, témoignant ainsi de la stabilité des complexes.
3.3. Complexation en tampon phosphate
L'acide nucléique (10~4 M exprimé en phosphate : Cp^osphate = 12 X Cacicie nucléique^ et l'oligopeptide (concentration variant entre 2.10"3, 10"4 et 2.10"^ exprimées en charges positives) ont été mis en contact dans un tampon phosphate 50 mM pH 7,4. La solution a ensuite été centrifugée, et rabsorbance (A) à 256 nm (maximum d'absorption des acides nucléiques) déterminée dans le surnageant. Pour chaque valeur du rapport R (Nombre de charges positives de l'oligopeptide / Nombre de charges négatives de l'acide nucléique) testée, la valeur A/AO est déterminée, permettant d'évaluer la fraction d'acide nucléique libre et, par différence, la fraction complexée. Pour un rapport R = 1, la concentration en oligopeptide exprimée en lysine est donc de 10"4 M.
Les résultats obtenus montrent que la fraction de complexe précipitant AS- Vall3/LKKLιo ou INV-Vall3/LKKL!0 est de 85 % pour un rapport R = 2. Pour un rapport R = 1, la fraction de complexe précipitant AS-Vall3/LKLK10 et INV- Vall3/LKLK10 est inférieure : 3Q %. Ces résultats peuvent s'expliquer par une compétition entre les phosphates du tampon et les phosphates de l'acide nucléique pour la formation du complexe. Ces résultats sont cependant supérieurs à ceux obtenus avec l'oligopeptide contrôle : 15 % de complexe INV-Vall3/PKKL10 précipitant seulement.
3.2. Complexation en tampon Tris-HCl
L'acide nucléique (10~4 M) et l'oligopeptide (concentration varriable) ont été mis en contact dans un tampon Tris-HCl 50 mM pH 7,4. La solution a ensuite été centrifugée, et l'absorbance à 256 nm déterminée dans le surnageant Pour chaque valeur du rapport R testée, la valeur A/AO est déterminée comme précédemment
Les résultats obtenus montrent que la fraction de complexe précipitant AS-
Vall3/LKKL10 et AS-Vall3/LKLK10 est de 100 % pour un rapport R = 1. Pour un rapport R = 2, la fraction de complexe précipitant AS-Vall3/LKL 10 est également de 100 %. Par ailleurs. 100 % de complexe précipitant AS-Vall3/LKKL10 ont également été obtenus avec une concentration d'acide nucléique de 2.10~ M et un rapport R = 1.
En revanche, en ce qui concerne le complexe AS-Vall3/PKKL10, seulement 70 % des acides nucléiques impliqués dans le complexe précipite ce qui démontre que l'affinité des oligopeptides selon l'invention est supérieure.
3.3. Complexation dans l'eau
Le protocole ci-dessus a été répété en remplaçant le tampon Tris-HCl par de l'eau. Les mêmes résultats ont été obtenus (100 % de complexation pour R = 1), démontrant l'affinité élevée des oligopeptides de l'invention pour les acides nucléiques.
3.4. Conclusions
L'ensemble de ces résultats démontre le rendement élevé de complexation des oligopeptides de l'invention aux acides nucléiques, et le fait que ce rendement est indépendant de la séquence et de la concentration de l'acide nucléique utilisé. Par ailleurs, comme le montre le tableau ci-après, l'étude des spectres dichroïques a permis de confirmer les structures secondaires adoptées par les oligopeptides cationiques utilisés, en solution ou après complexation. Peptide Tampon Phosphate -Tampon Phosphate Eau Eau / acide 50mM 50mM / NaCl 0.2M nucléique
LKKL hélice α hélice α non structuré hélice α
LKLK feuillet β feuillet β non structuré feuillet β
PKKL non structuré non structuré non structuré non structuré
Exemple 4 : Etude de l'encapsulation dans un vecteur de transfert les nanoparticules.
Cet exemple illustre les propriétés très avantageuses des complexes de l'invention, permettant l'encapsulation d'acide nucléique dans des vecteurs de transfert avec des rendements très élevés.
4.1. Nanoparticules utilisées : Les nanoparticules utilisées dans cet exemple sont des copolymères dibloc constituées d'un poly (D,L acide lactique) lié par une liaison ester à un poly (éthylène glycol) : PLAp(M)-PEG(N) où M et N sont respectivement les masses moléculaires moyennes (en kD) du PLA et du PEG, et p, le pourcentage d'acide L-lactique. Les 2 types de nanoparticules utilisés sont du PLA50(30)-PEG(2) et du PLA50(30)-PEG(5). Ces copolymères peuvent être synthétisés par toute technique connue de l'homme du métier (voir par exemple EP 520 889).
4.2. Marquage radioactif des acides nucléiques :
Les acides nucléiques ont été traités avec de la polynucléotide kinase du phage T4 (Biolabs) en présence d'ATP.γ32p (Amersham) dans un tampon kinase. Après 30 min d'incubation à 37°C, l'acide nucléique a été séparé de l'ATP n'ayant pas réagi par dépôt sur colonne Séphadex G25 (Quick Spin) et centrifugation.
4.3. Encapsulation de l'acide nucléique INV-Vall3
Cet exemple décrit l'encapsulation de l'acide nucléique INV-Vall3 dans une nanoparticule de PLA5Q(30)-PEG(2) en présence ou en l'absence d'oligopeptide (LKKL)10. Le polymère utilisé (PLA50(30)-PEG(2)) a été solubilisé dans 1 ml d'acétone à une concentration de 10 g 1. La dilution isotopique de l'acide nucléique (concentration finale 10" * M) a été ajoutée, puis l'oligopeptide (à une concentration telle que R = 1). La solution organique obtenue a ensuite été versée goutte à goutte dans 5 ml d'une solution aqueuse (tampon Tris-HCl 50 mM, pH 7,4), sous agitation. Le polymère insoluble dans le mélange eau/acétone précipite sous forme de nanoparticules, emprisonnant le complexe acide nucléique-oligopeptide. L'acétone a ensuite été éliminée par évaporation sous vide partiel, jusqu'à un volume final de 2,5 ml. Enfin, la suspension nanoparticulaire a été filtrée à travers un filtre Sartorius de porosité 1,2 μm, qui tient lieu de crible de dispersion et d'injectabilité.
Une expérience contrôle a été effectuée dans les mêmes conditions, mais en l'absence de l'oligopeptide (LKKL)ιo-
Les résultats obtenus montrent que le rendement d'encapsulation de INV-Vall3 dans la nanoparticule est de 56 % en présence de l'oligopeptide, et de 5 % seulement sans l'oligopeptide.
Le rendement d'encapsulation correspond au pourcentage d'acide nucléique encapsulé dans les nanoparticules, par rapport à la quantité totale d'acide nucléique présente au départ.
4.4. Encapsulation de l'acide nucléique (d(Tp)15T)
Le rendement d'encapsulation de l'acide nucléique (d(Tp)15T) (exemple 2.2.) dans une nanoparticule de PLA50 a été étudié, en présence des oligopeptides cationiques suivants :
- LKKLn Hélice α : synthétisé en phase homogène sous forme d'un mélange de peptides de poids moléculaire moyen de 34900. - LKLKn Feuillet β : synthétisé en phase homogène sous forme d'un mélange de peptides de poids moléculaire moyen de 7400.
- PKKLn Pas de structure secondaire
- Kn Pas de structure secondaire
ou de sphingosine (lipide membranaire chargé positivement). Pour cela, l'acide nucléique (d(Tp)15T) a été mélangé à l'oligopeptide en solution dans l'eau. En ce qui concerne la "sphingosine, elle est solubilisée dans un mélange eau/éthanol 50 % v/v. Les concentrations utilisées sont indiquées dans le tableau qui suit. 100 μl d'une solution d'acide polylactique (PLA50) solubilisée dans l'acétone à une concentration de 20 g/1 ont été ajoutés au mélange, ainsi que 300 μl d'acétone pure (concentration finale en PLA50 : 5 g/1). Après homogénéisation au vortex, le mélange a été versé goutte à goutte dans une solution aqueuse de pluronic F68 à 2,5 % (p/v) afin de précipiter le polymère sous forme d'une suspension colloïdale nanoparticulaire turbide. La turbidité a été appréciée à l'oeil. Le diamètre des nanoparticules (175 +/- 40 nm) a été mesuré par diffusion quasi élastique" de la lumière sur un appareil BI 90 (Brookhaven Instrument Corporation). L'acétone- a ensuite été évaporée sous vide pendant une heure. La suspension a ensuite été filtrée sur filtre millipore AP20 (diamètre des pores : 1,5 μm), préalablement mouillé avec la solution de pluronic F68 à 2,5 %. Le rendement d'encapsulation a été déterminé et est reporté dans le tableau qui suit.
Figure imgf000015_0001
Ces résultats montrent clairement que les oligopeptides de l'invention permettent d'encapsuler les acides nucléiques avecdes rendements nettement supérieurs à ceux obtenus avec des oligopeptides de l'art antérieur (polylysine) ou ne formant pas de structures secondaires (PKKL). Exemple 5 : Transfert d'acide nucléique dans les cellules
Cet exemple illustre la capacité des composition de l'invention à transférer des acides nucléiques dans les cellules.
5.1. Cellules utilisées : Les essais de transfert d'acide nucléique décrits dans cet exemple ont été effectués sur une lignée de cellules issue d'un carcinome vésical humain , désignée T24/EJ accessible à l'ATCC. Les cellules ont été cultivées dans un milieu MEM-EAGLE ("minimum essential médium", Biological Industries) supplémenté en L-glutamine ((5 mM), streptomycine (50 u/ml), pénicilline (50 u/ml), en présence de 7 % de sérum de veau foetal décomplémenté 30 min à 60°C.
5.2. Transfert des acides nucléiques : Les cellules (1500 / puits) ont été ensemencées dans des microplaques de 96 puits, en absence ou en présence d'acide nucléique, encapsulé ou non dans des nanoparticules, dans un volume total de 100 μl. Chaque point a été effectué en triple. La concentration en acide nucléique utilisée a été ajustée par dilution dans de l'eau ou par concentration par centrifugation 1 h à 12000 rpm. Dans ce cas, la suspension est centrifugée, le culot pesé puis le volume ajusté.
L'efficacité du transfert a été déterminée par mesure de rinhibition de la prolifération cellulaire induite par l'acide nucléique antisens, après 72 ou 96 heures de culture à 37°C en présence de 5 % de CO2. Pour cela, 2 méthodes ont été utilisées :
- Tout d'abord, rincorporation de thymidine tritiée, qui a été déterminée après addition de 2 μCi de 3H thymidine par puits. Après 6 heures d'incubation à l'étuve, les plaques ont été lavées au Skatron (Lier, Norvège), l'ADN recueilli sur un filtre, et chaque rondelle du filtre (correspondant à chaque puits de la plaque) placée dans du liquide à scintillation puis comptée au compteur (LKB Wallac 1211 Minibeta). Les résultats correspondent à la moyenne des valeurs obtenues dans chacun des 3 puits. - Ensuite, la prolifération cellulaire a été évaluée par comptage des cellules en cellule de Malassez. Pour cela, le surnageant a été éliminé, les cellules trypsinisées (10 min à 37°C), puis additionnées de milieu de culture avant d'être comptées.
Les résultats obtenus sont les suivants :
- AS-Vall2, nu, 30 μM 42 % d'inhibition - AS- Vall2/LKKL/nanoparticule, 100 nM (exprimé en antisens) .50 % d'inhibition
- nanoparticule blanche, même quantité de polymère < 5 % d'inhibition - AS-Vall2/LKKL/nanoparticule, 500 nM 95 % d'inhibition
Ces résultats démontrent clairement l'efficacité des compositions de l'invention pour le transfert d'acides nucléiques. De plus, ils montrent que l'acide nucléique transféré conserve ses propriétés fonctionnelles, dans le cas présent, son activité d'antisens.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition comprenant un acide nucléique et un oligopeptide cationique capable de former des structures secondaires.
2. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que l'oligopeptide est capable de former des hélices ou des feuillets β.
3. Composition selon la revendication 2 caractérisée en ce que l'oligopeptide répond à la formule (A0AyAyA0)n ou (AoAyAQAy)n dans laquelle AQ est un acide aminé hydrophobe, Ay est un acide aminé hydrophile, et n est un nombre entier supérieur ou égal à 4.
4. Composition selon la revendication 3 caractérisée en ce que l'acide aminé hydrophobe est choisi parmi la leucine, la valine, l'isoleucine et la phénylalanine.
5. Composition selon la revendication 3 caractérisée en ce que l'acide aminé hydrophile est choisi parmi la lysine, l'arginine et lliistidine.
6. Composition selon la revendication 3 caractérisée en ce que l'oligopeptide est choisi parmi (LKKL)n, (LKLK)n, (LRRL)n.
7. Composition selon la revendication 6 caractérisée en ce que n est compris entre 4 et 100, de préférence entre 10 et 50.
8. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que l'acide nucléique est un acide désoxyribonucléique.
9. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que l'acide nucléique est un acide ribonucléique.
10. Composition selon la revendication 8 ou 9 caractérisée en ce que l'acide nucléique est modifié chimiquement.
11. Composition selon la revendication 8 ou 9 caractérisée en ce que l'acide nucléique est un antisens.
12. Composition selon la revendication 8 caractérisée en ce que l'acide nucléique comporte un gène thérapeutique.
13. Composition selon l'une des revendications 8 à 12 caractérisée en ce que le rapport charges positives de Poligopeptide / charges négatives de l'acide nucléique est égal ou supérieur à 1.
14. Vecteur de transfert d'acides nucléique comprenant une composition selon l'une des revendications précédentes.
15. Vecteur de transfert selon la revendication 14 caractérisé en ce qu'il s'agit d'une nanoparticule, d'un liposome ou d'une lipoprotéine de faible densité.
16. Procédé d'encapsulation d'acides nucléiques dans des vecteurs de transfert caractérisé en ce que l'on met en contact le vecteur de transfert ou ces composants, l'acide nucléique et un oligopeptide cationique capable de former des structures secondaires, ou éventuellement un complexe acide nucléique-oligopeptide déjà formé, dans des conditions permettant -'encapsulation de l'acide nucléique dans ledit vecteur de transfert, puis on récupère le vecteur de transfert formé.
17. Procédé pour le transfert d'un acide nucléique dans une cellule caractérisé en ce que l'on cultive ladite cellule en présence de l'acide nucléique et d'un oligopeptide cationique capable de former des structures secondaires.
18. Utilisation d'un oligopeptide cationique capable de former des structures secondaires pour le transfert d'acides nucléiques dans les cellules.
19. Utilisation selon la revendication 18 pour le transfert in vitro, ex vivo ou in vivo.
20. Composition pharmaceutique comprenant un acide nucléique thérapeutique et un oligopeptide cationique capable de former des structures secondaires, éventuellement encapsulés dans un vecteur de transfert '
PCT/FR1995/000098 1994-02-08 1995-01-27 Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations WO1995021931A1 (fr)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/687,551 US5856435A (en) 1994-02-08 1995-01-27 Nucleic acid-containing composition, its preparation and use
JP7520999A JPH09508530A (ja) 1994-02-08 1995-01-27 核酸を含む組成物、その調製および使用
AU15818/95A AU1581895A (en) 1994-02-08 1995-01-27 Nucleic acid-containing composition, its preparation and use
EP95907715A EP0743984A1 (fr) 1994-02-08 1995-01-27 Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9401381A FR2715847B1 (fr) 1994-02-08 1994-02-08 Composition contenant des acides nucléiques, préparation et utilisations.
FR94/01381 1994-02-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1995021931A1 true WO1995021931A1 (fr) 1995-08-17

Family

ID=9459869

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR1995/000098 WO1995021931A1 (fr) 1994-02-08 1995-01-27 Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations

Country Status (7)

Country Link
US (1) US5856435A (fr)
EP (1) EP0743984A1 (fr)
JP (1) JPH09508530A (fr)
AU (1) AU1581895A (fr)
CA (1) CA2182118A1 (fr)
FR (1) FR2715847B1 (fr)
WO (1) WO1995021931A1 (fr)

Cited By (115)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996041606A2 (fr) * 1995-06-08 1996-12-27 Therexsys Limited Compositions pharmaceutiques ameliorees utilisees pour la therapie genique
WO1997025070A2 (fr) * 1996-01-08 1997-07-17 Baylor College Of Medicine Peptides lipophiles destines a l'apport de macromolecules
WO1998033478A2 (fr) * 1997-01-30 1998-08-06 Zw Biomedical Research Ag Agents actifs a base d'arn et d'adn dans des nanoparticules
EP0904031A1 (fr) * 1996-05-29 1999-03-31 Cell Genesys, Inc. Polymeres/lipides cationiques servant de vehicules pour apporter de l'acide nucleique
WO2001011069A1 (fr) 1999-08-06 2001-02-15 Celltech R&D Limited Complexes de lipide congeles/decongeles et leur preparation
US6225456B1 (en) 1998-05-07 2001-05-01 University Technololy Corporation Ras suppressor SUR-5
WO2001068131A1 (fr) 2000-03-13 2001-09-20 Cornell Research Foundation, Inc. Inhibition de la migration des leucocytes et d'une inflammation par perturbation de cd99/hec2
US6441156B1 (en) 1998-12-30 2002-08-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Calcium channel compositions and methods of use thereof
WO2002070665A2 (fr) 2001-03-02 2002-09-12 The Rockefeller University Hybrides recombines d'allergenes a allergenicite reduite conservant l'immunogenicite des allergenes naturels
WO2002096928A2 (fr) * 2001-05-29 2002-12-05 Genethon Vecteur peptidique pour le transfert de molecules d'interêt dans des cellules eucaryotes
US6506889B1 (en) 1998-05-19 2003-01-14 University Technology Corporation Ras suppressor SUR-8 and related compositions and methods
US6531446B1 (en) * 1998-01-22 2003-03-11 Korea Advanced Institute Of Science And Technology Peptides having biological activity
WO2003063766A2 (fr) 2001-10-11 2003-08-07 Wyeth Holdings Corporation Nouvelle compositions immunogenes utilisees pour la prevention et le traitement de la meningococcie
US6638502B1 (en) 1997-04-28 2003-10-28 Gencell Sas Adenovirus-mediated intratumoral delivery of an angiogenesis antagonist for the treatment of tumors
US6667294B2 (en) 1995-11-09 2003-12-23 Microbiological Research Authority Microencapsulated DNA for vaccination and gene therapy
WO2004072254A2 (fr) 2003-02-10 2004-08-26 Rheogene Holdings, Inc Ligands de diacylhydrazine permettant de moduler l'expression de genes exogenes dans des systemes mammiferes par l'intermediaire d'un complexe recepteur a l'ecdysone
US6875606B1 (en) 1997-10-23 2005-04-05 The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs Human α-7 nicotinic receptor promoter
WO2006002161A2 (fr) 2004-06-18 2006-01-05 Duke University Modulateurs de recepteurs odorants
WO2006020071A2 (fr) 2004-07-16 2006-02-23 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Constructions vaccinales et combinaisons de vaccins conçues pour ameliorer l'etendue de la reaction immunitaire a diverses souches et variantes du vih
US7060442B2 (en) 2000-10-30 2006-06-13 Regents Of The University Of Michigan Modulators on Nod2 signaling
US7416726B2 (en) 2000-04-13 2008-08-26 The Rockefeller University Enhancement of antibody-mediated immune responses
US7432057B2 (en) 2004-01-30 2008-10-07 Michigan State University Genetic test for PSE-susceptible turkeys
WO2008153801A1 (fr) 2007-05-29 2008-12-18 Intrexon Corporation Ligands diacylhydrazine chiraux destinés à moduler l'expression de gènes exogènes par le biais d'un complexe récepteur de l'ecdysone
WO2008155397A2 (fr) 2007-06-20 2008-12-24 Galapagos N.V. Cibles et composés moléculaires utiles dans le traitement de maladies dégénératives des os et des articulations, et procédés pour les identifier
WO2009040443A1 (fr) 2007-09-28 2009-04-02 Biomay Ag Vaccins à base d'arn
WO2009045370A2 (fr) 2007-09-28 2009-04-09 Intrexon Corporation Constructions et bioréacteurs de commutation de gène théapeutique destinés à l'expression de molécules biothérapeutiques, et utilisation de ceux-ci
US7531326B2 (en) 2001-02-20 2009-05-12 Intrexon Corporation Chimeric retinoid X receptors and their use in a novel ecdysone receptor-based inducible gene expression system
WO2009082817A1 (fr) 2007-12-27 2009-07-09 Protiva Biotherapeutics, Inc. Silençage de l'expression de la polo-like kinase à l'aide d'un arn interférent
US7563879B2 (en) 2001-09-26 2009-07-21 Intrexon Corporation Leafhopper ecdysone receptor nucleic acids, polypeptides, and uses thereof
US7601508B2 (en) 2001-09-26 2009-10-13 Intrexon Corporation Whitefly ecdysone receptor polypeptide and methods
US7604798B2 (en) 2004-07-15 2009-10-20 Northwestern University Methods and compositions for importing nucleic acids into cell nuclei
WO2009129319A2 (fr) 2008-04-15 2009-10-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Réduction au silence de l'expression du gène csn5 au moyen d'arn interférant
US7666584B2 (en) 2005-09-01 2010-02-23 Philadelphia Health & Education Coporation Identification of a pin specific gene and protein (PIN-1) useful as a diagnostic treatment for prostate cancer
EP2214018A2 (fr) 2004-04-27 2010-08-04 Galapagos N.V. Procédés, agents, et analyses de criblage de composés permettant d'induire une differenciation de cellules mammaliennes non différenciés en ostéoblastes
US7776587B2 (en) 2000-03-22 2010-08-17 Intrexon Corporation Ecdysone receptor-based inducible gene expression system
WO2010094732A1 (fr) 2009-02-19 2010-08-26 Biofocus Dpi B.V. Procédé pour identifier des composés utiles pour diagnostiquer et traiter des maladies impliquant une inflammation
WO2010096561A1 (fr) 2009-02-18 2010-08-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Protéines gag du vih/vis de synthèse et leurs utilisations
WO2010094734A2 (fr) 2009-02-19 2010-08-26 Biofocus Dpi B.V. Procédés d'identification de composés utiles pour le diagnostic et le traitement de maladies liées à une inflammation
WO2010094733A2 (fr) 2009-02-19 2010-08-26 Biofocus Dpi B.V. Procédés d'identification de composés utiles pour le diagnostic et le traitement de maladies liées à une inflammation
US7785608B2 (en) 2002-08-30 2010-08-31 Wyeth Holdings Corporation Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
WO2010112569A1 (fr) 2009-03-31 2010-10-07 Robert Zimmermann Modulation de lipase de triglycérides d'adipose pour la prévention et le traitement d'une cachexie, d'une perte de poids et d'une atrophie musculaire et procédés de criblage s'y rapportant
WO2010115825A2 (fr) 2009-03-31 2010-10-14 Robert Zimmermann Modulation de l'adipose triglycéride lipase pour prévenir et traiter la cachexie, la perte de poids et l'atrophie musculaire et procédés de criblage à des fins d'identification
WO2010115841A1 (fr) 2009-04-01 2010-10-14 Galapagos Nv Procédés et moyens de traitement de l'arthrite
WO2010120374A2 (fr) 2009-04-17 2010-10-21 New York University Peptides ciblant les récepteurs de la famille du tnf et contrant l'action du tnf, compositions, méthodes et utilisations afférentes
EP2256197A1 (fr) 2004-06-14 2010-12-01 Galapagos N.V. Procédés d'identification, et composés utiles pour le traitement de maladies dégéneratives et inflammatoires
EP2267458A2 (fr) 2004-04-20 2010-12-29 Galapagos N.V. Methodes, compositions et analyse de composes destinees a inhiber la production d'une proteine beta-amyloide
EP2275558A2 (fr) 2001-02-20 2011-01-19 Intrexon Corporation Nouveaux récepteurs de mutant de substitution et leur utilisation dans un système d'expression de gènes inductibles à base de récepteur nucléaire
WO2011015572A1 (fr) 2009-08-03 2011-02-10 Galapagos Nv Cibles et composés moléculaires, et procédés pour leur identification utiles dans le traitement de maladies neurodégénératives
WO2011015573A1 (fr) 2009-08-03 2011-02-10 Galapagos Nv Cibles et composés moléculaires, et procédés pour les identifier, utiles dans le traitement de maladies neurodégénératives
EP2292088A1 (fr) 2004-04-30 2011-03-09 Intrexon Corporation Récepteurs de mutant et leur utilisation dans un système d'expression de gènes inductibles à base de récepteur nucléaire
EP2305824A1 (fr) 2000-10-03 2011-04-06 Intrexon Corporation Système de régulation de plusieurs gènes inductibles
EP2327786A2 (fr) 2005-02-02 2011-06-01 Intrexon Corporation Recombinases à sérine site-spécifiques et leurs procédés d'utilisation
EP2360474A2 (fr) 2004-06-21 2011-08-24 Galapagos N.V. Méthodes et moyens pour le traitement de l'ostéoarthrite
EP2360478A1 (fr) 2004-10-15 2011-08-24 Galapagos N.V. Cibles et composés moléculaires et procédés d'identification afferents utilisés dans le traitement de maladies de dégénérescence des articulations et de maladies inflammatoires
EP2360275A1 (fr) * 2000-11-15 2011-08-24 Minerva Biotechnologies Corporation Identifiants d'oligonucléotides
EP2392561A1 (fr) 2002-07-05 2011-12-07 Intrexon Corporation Ligands de alpha-acylaminokétone pour moduler l'expression de gènes exogènes via un complexe récepteur d'ecdysone
EP2395012A2 (fr) 2005-11-02 2011-12-14 Protiva Biotherapeutics Inc. Molécules d'ARNsi modifiées et leurs utilisations
WO2011160062A2 (fr) 2010-06-17 2011-12-22 The Usa As Represented By The Secretary, National Institutes Of Health Compositions et procédés pour traiter des affections inflammatoires
US8088382B2 (en) 2005-07-05 2012-01-03 Cornell Research Foundation, Inc. Methods of inhibiting transendothelial migration of neutrophils and monocytes with anti-CD99L2 antibodies
EP2402359A1 (fr) 2000-12-28 2012-01-04 Wyeth LLC Protéine de protection recombinante issue de Streptococcus pneumoniae
EP2460786A1 (fr) 2003-02-28 2012-06-06 Intrexon Corporation Ligands de diacylhydrazine biodisponibles pour moduler l'expression de gènes exogènes via un complexe récepteur d'ecdysone
WO2012076715A1 (fr) 2010-12-09 2012-06-14 Institut Pasteur Procédé à base de mgmt permettant d'obtenir une expression élevée de protéines recombinées
EP2492279A1 (fr) 2011-02-25 2012-08-29 Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. Procédé de sélection rapide d'immunogène par expression à la surface du lentivirus.
WO2012122025A2 (fr) 2011-03-04 2012-09-13 Intrexon Corporation Vecteurs exprimant une protéine de façon conditionnelle
US8298781B2 (en) 2007-05-08 2012-10-30 Duke University Compositions and methods for characterizing and regulating olfactory sensation
US8329669B2 (en) 2006-07-28 2012-12-11 Sanofi Composition and method for treatment of tumors
US8334272B2 (en) 2007-06-27 2012-12-18 Northwestern University Methods for nucleic acid transfer into cells
EP2546358A1 (fr) 2011-07-15 2013-01-16 Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. Procédés et réactifs pour un contrôle efficace de la progression du VIH
WO2013043720A1 (fr) 2011-09-20 2013-03-28 The University Of North Carolina At Chapel Hill Régulation de canaux sodiques par des protéines plunc
WO2013053765A1 (fr) 2011-10-11 2013-04-18 Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. Modèle animal non humain de lymphome du tissu lymphoïde associé aux muqueuses (malt)
WO2013075132A1 (fr) 2011-11-17 2013-05-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Compositions de commutateurs arn thérapeutiques et procédés d'utilisation
WO2013083847A2 (fr) 2011-12-09 2013-06-13 Institut Pasteur Immunoessai de dépistage multiplex
US8563001B2 (en) 2008-11-05 2013-10-22 Regents Of The University Of Minnesota Multicomponent immunogenic composition for the prevention of beta-hemolytic streptococcal (BHS) disease
US8574597B2 (en) 2006-12-22 2013-11-05 Wyeth Llc Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
EP2674483A1 (fr) 2007-10-08 2013-12-18 Intrexon Corporation Cellules dendritiques modifiées et utilisations pour le traitement du cancer
US8623831B2 (en) 2000-03-31 2014-01-07 Aventis Pharmaceuticals Inc. Nuclear factor κB inducing factor
EP2698377A1 (fr) 2012-08-17 2014-02-19 Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. Procédé de sélection rapide d'immunogène de variants de la GP-120 du VIH amélioré
WO2014139883A1 (fr) 2013-03-14 2014-09-18 Galapagos Nv Cibles et composés moléculaires, et méthodes utilisées pour les identifier, dans le cadre du traitement de la fibrose
WO2014139885A2 (fr) 2013-03-14 2014-09-18 Galapagos Nv Cibles et composés moléculaires, et procédés pour les identifier, utiles dans le traitement de maladies associées à une transition épithélio-mésenchymateuse
WO2014139884A2 (fr) 2013-03-14 2014-09-18 Galapagos Nv Cibles et composés moléculaires destinés au traitement de la fibrose, et méthodes utilisées pour les identifier
EP2816113A2 (fr) 2008-09-11 2014-12-24 Galapagos N.V. Procédés d'identification et composés utiles pour augmenter l'activité fonctionnelle et l'expression de surface cellulaire du régulateur de la conductance de trans-membrane de la fibrose kystique mutante associée à la mucoviscidose
US8986710B2 (en) 2012-03-09 2015-03-24 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US9035039B2 (en) 2011-12-22 2015-05-19 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing SMAD4
US9127024B2 (en) 2013-03-15 2015-09-08 Intrexon Corporation Boron-containing diacylhydrazines
US9186370B2 (en) 2010-03-19 2015-11-17 University Of South Alabama Methods and compositions for the treatment of cancer
US9249207B2 (en) 2001-02-20 2016-02-02 Intrexon Corporation Substitution mutant receptors and their use in an ecdysone receptor-based inducible gene expression system
WO2016054421A1 (fr) 2014-10-02 2016-04-07 Protiva Biotherapeutics, Inc Compositions et méthodes d'extinction de l'expression du gène du virus de l'hépatite b
WO2016127057A1 (fr) 2015-02-06 2016-08-11 The University Of North Carolina At Chapel Hill Cassettes optimisées d'expression génétique du facteur viii de coagulation humain et leur utilisation
US9458456B2 (en) 2011-04-01 2016-10-04 University Of South Alabama Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer
US9464291B2 (en) 2012-01-06 2016-10-11 University Of South Alabama Methods and compositions for the treatment of cancer
US9493540B2 (en) 2001-02-20 2016-11-15 Intrexon Corporation Ecdysone receptor/invertebrate retinoid X receptor-based inducible gene expression system
WO2016197132A1 (fr) 2015-06-04 2016-12-08 Protiva Biotherapeutics Inc. Traitement d'une infection à virus de l'hépatite b à de l'aide de crispr
EP3103458A1 (fr) 2015-06-12 2016-12-14 Chang Gung Memorial Hospital, Linkou Nouveaux polynucléotides et procédés pour inhiber des cellules cancéreuses
US9556240B2 (en) 2010-08-23 2017-01-31 Wyeth Llc Stable formulations of Neisseria meningitidis rLP2086 antigens
WO2017019891A2 (fr) 2015-07-29 2017-02-02 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions et méthodes de silençage de l'expression du gène du virus de l'hépatite b
WO2017062953A1 (fr) 2015-10-10 2017-04-13 Intrexon Corporation Contrôle thérapeutique amélioré de formes d'interleukine-12 déstabilisées sensibles à la protéolyse
WO2017147128A1 (fr) 2016-02-22 2017-08-31 The University Of North Carolina At Chapel Hill Inhibiteurs peptidiques de canaux calciques
US9757443B2 (en) 2010-09-10 2017-09-12 Wyeth Llc Non-lipidated variants of Neisseria meningitidis ORF2086 antigens
US9802987B2 (en) 2013-03-08 2017-10-31 Pfizer Inc. Immunogenic fusion polypeptides
US9822150B2 (en) 2013-09-08 2017-11-21 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
EP3284821A1 (fr) 2010-03-23 2018-02-21 Intrexon Corporation Vecteurs exprimant conditionnement des protéines thérapeutiques, cellules hôtes comprenant les vecteurs et leurs utilisations
US9944659B2 (en) 2014-09-17 2018-04-17 Intrexon Corporation Boron-containing diacylhydrazine compounds
WO2018089527A1 (fr) 2016-11-09 2018-05-17 Intrexon Corporation Constructions d'expression de frataxine
US10183070B2 (en) 2017-01-31 2019-01-22 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US10196429B2 (en) 2012-03-09 2019-02-05 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis composition and methods thereof
WO2019110817A1 (fr) 2017-12-08 2019-06-13 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Test de criblage bioluminescent pour détecter une cytolyse cellulaire
EP3539975A1 (fr) 2018-03-15 2019-09-18 Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron Micropeptides et leurs utilisations
US10513705B2 (en) 2013-05-28 2019-12-24 The Johns Hopkins University Aptamers for the treatment of sickle cell disease
WO2020032784A1 (fr) 2018-08-10 2020-02-13 주식회사 유틸렉스 Liaison du récepteur antigénique chimérique à hla-dr, et cellule car-t
WO2020185628A1 (fr) 2019-03-08 2020-09-17 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions de cd40l et procédés de régulation accordable
US10888611B2 (en) 2015-02-19 2021-01-12 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
WO2021142376A1 (fr) 2020-01-08 2021-07-15 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions et procédés pour la régulation accordable de la transcription
EP3885440A1 (fr) 2020-03-26 2021-09-29 Splicebio, S.L. Intéines divisées et leurs utilisations
US11396555B2 (en) 2014-03-05 2022-07-26 Eutilex Co., Ltd. Monoclonal antibody which specifically recognizes B cell lymphoma and use thereof
WO2023242436A1 (fr) 2022-06-17 2023-12-21 Danmarks Tekniske Universitet Vaccins antiallergiques à base d'allergènes consensus

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1116424A (zh) * 1993-09-20 1996-02-07 钟渊化学工业株式会社 3-氨基-2-羟基-1-丙醇衍生物的制备方法
US7008776B1 (en) * 1996-12-06 2006-03-07 Aventis Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for effecting the levels of high density lipoprotein (HDL) cholesterol and apolipoprotein AI very low density lipoprotein (VLDL) cholesterol and low density lipoprotein (LDL) cholesterol
AP1313A (en) 1996-12-06 2004-10-04 Aventis Pharma Inc Polypeptides encoded by a human lipase-like gene, composition and method.
US6254890B1 (en) * 1997-12-12 2001-07-03 Massachusetts Institute Of Technology Sub-100nm biodegradable polymer spheres capable of transporting and releasing nucleic acids
US6958148B1 (en) * 1998-01-20 2005-10-25 Pericor Science, Inc. Linkage of agents to body tissue using microparticles and transglutaminase
US7070807B2 (en) 1999-12-29 2006-07-04 Mixson A James Branched histidine copolymers and methods for using same
US7163695B2 (en) 1999-12-29 2007-01-16 Mixson A James Histidine copolymer and methods for using same
JP4987205B2 (ja) * 2000-03-03 2012-07-25 ジェネトロニクス， インコーポレイテッド 遺伝子送達用核酸製剤および使用方法
FR2818981A1 (fr) * 2001-01-03 2002-07-05 Synt Em Peptides amphipathiques et leur utilisation pour le transfert de substances d'interet dans les cellules
US20040023910A1 (en) * 2001-09-28 2004-02-05 Zhiming Zhang Use of cyr61 in the treatment and diagnosis of human uterine leiomyomas
US7465708B2 (en) 2002-11-25 2008-12-16 Mixson A James Branched cationic copolymers and methods for antimicrobial use
US7091185B2 (en) * 2003-02-24 2006-08-15 Dow Global Technologies Inc. Periodic antimicrobial peptides
US8124598B2 (en) 2006-09-14 2012-02-28 Sharon Sageman 7-keto DHEA for psychiatric use
JP2010536373A (ja) 2007-08-23 2010-12-02 イントレキソン コーポレーション 疾患を診断するための方法および組成物
US20100160274A1 (en) * 2007-09-07 2010-06-24 Sharon Sageman 7-KETO DHEA for Psychiatric Use
BRPI0817009A2 (pt) * 2007-09-17 2014-10-07 Rohm & Haas Sistema de expressão de gene para a expressão controlável de resposta ao etileno em uma célula de planta, composição, e, métodos para produzir uma planta transgênica, e para modular sensibilidade ao etileno em uma planta.

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0424688A2 (fr) * 1989-09-28 1991-05-02 Iowa State University Research Foundation, Inc. Méthode synergique pour la transformation de cellules hôtes
WO1991017773A2 (fr) * 1990-05-18 1991-11-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh Nouveaux conjugues de proteines et de polycations
WO1992022651A1 (fr) * 1991-06-14 1992-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Inhibition par oligonucleotide anti-sens de l'oncogene ras
WO1993007892A1 (fr) * 1991-10-16 1993-04-29 The Children's Hospital Of Philadelphia Composition et traitement utilisant des peptides biologiquement actifs et un antibiotique

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5187260A (en) * 1988-09-06 1993-02-16 Sharifa Karali Process for the preparation of a high purity protamine-DNA complex and process for use of same
US5354844A (en) * 1989-03-16 1994-10-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Protein-polycation conjugates
US5585479A (en) * 1992-07-24 1996-12-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Antisense oligonucleotides directed against human ELAM-I RNA
US5670347A (en) * 1994-05-11 1997-09-23 Amba Biosciences Llc Peptide-mediated gene transfer

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0424688A2 (fr) * 1989-09-28 1991-05-02 Iowa State University Research Foundation, Inc. Méthode synergique pour la transformation de cellules hôtes
WO1991017773A2 (fr) * 1990-05-18 1991-11-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh Nouveaux conjugues de proteines et de polycations
WO1992022651A1 (fr) * 1991-06-14 1992-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Inhibition par oligonucleotide anti-sens de l'oncogene ras
WO1993007892A1 (fr) * 1991-10-16 1993-04-29 The Children's Hospital Of Philadelphia Composition et traitement utilisant des peptides biologiquement actifs et un antibiotique

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ERITJA, R. ET AL.: "Synthesis of defined peptide-oligonucleotide hybrids containing a nuclear transport signal sequence", TETRAHEDRON, vol. 47, OXFORD GB, pages 4113 *
LEGENDRE, J.-Y. ET AL.: "Cyclic amphipathic peptide-DNA complexes mediate high-efficiency transfection of adherent mammalian cells", PROC. NATL. ACAD. SCI. U. S. A. (1993), 90(3), 893-7 *
WAGNER, E. ET AL.: "Transferrin-polycation-DNA complexes: the effect of polycations on the structure of the complex and DNA delivery to cells", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF USA, vol. 88, WASHINGTON US, pages 4255 *

Cited By (233)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996041606A3 (fr) * 1995-06-08 1997-05-22 Therexsys Ltd Compositions pharmaceutiques ameliorees utilisees pour la therapie genique
WO1996041606A2 (fr) * 1995-06-08 1996-12-27 Therexsys Limited Compositions pharmaceutiques ameliorees utilisees pour la therapie genique
EP0862419B2 (fr) † 1995-11-09 2010-11-17 Microbiological Research Authority Adn microencapsule s'appliquant dans des procedes de vaccination et de therapie genique
US6667294B2 (en) 1995-11-09 2003-12-23 Microbiological Research Authority Microencapsulated DNA for vaccination and gene therapy
US6344436B1 (en) 1996-01-08 2002-02-05 Baylor College Of Medicine Lipophilic peptides for macromolecule delivery
WO1997025070A2 (fr) * 1996-01-08 1997-07-17 Baylor College Of Medicine Peptides lipophiles destines a l'apport de macromolecules
WO1997025070A3 (fr) * 1996-01-08 1997-10-30 Baylor College Medicine Peptides lipophiles destines a l'apport de macromolecules
EP0904031A1 (fr) * 1996-05-29 1999-03-31 Cell Genesys, Inc. Polymeres/lipides cationiques servant de vehicules pour apporter de l'acide nucleique
EP0904031A4 (fr) * 1996-05-29 2002-05-02 Cell Genesys Inc Polymeres/lipides cationiques servant de vehicules pour apporter de l'acide nucleique
WO1998033478A3 (fr) * 1997-01-30 1998-12-10 Robert Gurny Agents actifs a base d'arn et d'adn dans des nanoparticules
WO1998033478A2 (fr) * 1997-01-30 1998-08-06 Zw Biomedical Research Ag Agents actifs a base d'arn et d'adn dans des nanoparticules
EP0860167A1 (fr) * 1997-01-30 1998-08-26 Robert Gurny Agents actifs dérivés de l'ADN et de l'ARN inclus dans des nanoparticules
US6638502B1 (en) 1997-04-28 2003-10-28 Gencell Sas Adenovirus-mediated intratumoral delivery of an angiogenesis antagonist for the treatment of tumors
US6875606B1 (en) 1997-10-23 2005-04-05 The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs Human α-7 nicotinic receptor promoter
US7572580B2 (en) 1997-10-23 2009-08-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs Promoter variants of the alpha-7 nicotinic acetylcholine receptor
US6531446B1 (en) * 1998-01-22 2003-03-11 Korea Advanced Institute Of Science And Technology Peptides having biological activity
US6225456B1 (en) 1998-05-07 2001-05-01 University Technololy Corporation Ras suppressor SUR-5
US6506889B1 (en) 1998-05-19 2003-01-14 University Technology Corporation Ras suppressor SUR-8 and related compositions and methods
US6441156B1 (en) 1998-12-30 2002-08-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Calcium channel compositions and methods of use thereof
US6979724B2 (en) * 1998-12-30 2005-12-27 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Calcium channel proteins
WO2001011069A1 (fr) 1999-08-06 2001-02-15 Celltech R&D Limited Complexes de lipide congeles/decongeles et leur preparation
WO2001068131A1 (fr) 2000-03-13 2001-09-20 Cornell Research Foundation, Inc. Inhibition de la migration des leucocytes et d'une inflammation par perturbation de cd99/hec2
US7776587B2 (en) 2000-03-22 2010-08-17 Intrexon Corporation Ecdysone receptor-based inducible gene expression system
US8822754B2 (en) 2000-03-22 2014-09-02 Intrexon Corporation Ecdysone receptor-based inducible gene expression system
US8202718B2 (en) 2000-03-22 2012-06-19 Intrexon Corporation Ecdysone receptor-based inducible gene expression system
US7807417B2 (en) 2000-03-22 2010-10-05 Intrexon Corporation Ecdysone receptor-based inducible gene expression system
US8642739B2 (en) 2000-03-31 2014-02-04 Aventis Pharmaceuticals Inc. Nuclear factor κB inducing factor
US8623831B2 (en) 2000-03-31 2014-01-07 Aventis Pharmaceuticals Inc. Nuclear factor κB inducing factor
US7416726B2 (en) 2000-04-13 2008-08-26 The Rockefeller University Enhancement of antibody-mediated immune responses
EP2264072A1 (fr) 2000-04-13 2010-12-22 The Rockefeller University Amélioration de la réponse cytotoxique à médiation d'anticorps.
EP2305824A1 (fr) 2000-10-03 2011-04-06 Intrexon Corporation Système de régulation de plusieurs gènes inductibles
US7060442B2 (en) 2000-10-30 2006-06-13 Regents Of The University Of Michigan Modulators on Nod2 signaling
US7375086B2 (en) 2000-10-30 2008-05-20 The Regents Of The University Of Michigan Modulators of Nod2 signaling
EP2360275A1 (fr) * 2000-11-15 2011-08-24 Minerva Biotechnologies Corporation Identifiants d'oligonucléotides
EP2402359A1 (fr) 2000-12-28 2012-01-04 Wyeth LLC Protéine de protection recombinante issue de Streptococcus pneumoniae
US9322026B2 (en) 2001-02-20 2016-04-26 Intrexon Corporation Substitution mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system
EP2374891A2 (fr) 2001-02-20 2011-10-12 Intrexon Corporation Récepteurs de rétinoïde chimérique X et leur utilisation dans un nouveau système d'expression de gènes inductibles à base de récepteur nucléaire
US8691527B2 (en) 2001-02-20 2014-04-08 Intrexon Corporation Substitution mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system
US8669051B2 (en) 2001-02-20 2014-03-11 Intrexon Corporation Substitution mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system
US9029152B2 (en) 2001-02-20 2015-05-12 Rheogene, Inc. Substitution mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system
US10087231B2 (en) 2001-02-20 2018-10-02 Intrexon Corporation Substitution mutant receptors and their use in an ecdysone receptor-based inducible gene expression system
US8715959B2 (en) 2001-02-20 2014-05-06 Intrexon Corporation Substitution mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system
US8598409B2 (en) 2001-02-20 2013-12-03 Intrexon Corporation Non-human organism comprising a gene expression modulation system encoding a chimeric retinoid X receptor
US9493540B2 (en) 2001-02-20 2016-11-15 Intrexon Corporation Ecdysone receptor/invertebrate retinoid X receptor-based inducible gene expression system
US8236556B2 (en) 2001-02-20 2012-08-07 Intrexon Corporation Method of modulating gene expression using an ecdysone receptor-based inducible gene expression system
EP2275558A2 (fr) 2001-02-20 2011-01-19 Intrexon Corporation Nouveaux récepteurs de mutant de substitution et leur utilisation dans un système d'expression de gènes inductibles à base de récepteur nucléaire
US10190124B2 (en) 2001-02-20 2019-01-29 Intrexon Corporation Substitution mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system
US9249207B2 (en) 2001-02-20 2016-02-02 Intrexon Corporation Substitution mutant receptors and their use in an ecdysone receptor-based inducible gene expression system
US7531326B2 (en) 2001-02-20 2009-05-12 Intrexon Corporation Chimeric retinoid X receptors and their use in a novel ecdysone receptor-based inducible gene expression system
EP3470520A2 (fr) 2001-02-20 2019-04-17 Intrexon Corporation Nouveaux récepteurs de mutant de substitution et leur utilisation dans un système d'expression de gènes inductibles à base de récepteur nucléaire
WO2002070665A2 (fr) 2001-03-02 2002-09-12 The Rockefeller University Hybrides recombines d'allergenes a allergenicite reduite conservant l'immunogenicite des allergenes naturels
WO2002096928A2 (fr) * 2001-05-29 2002-12-05 Genethon Vecteur peptidique pour le transfert de molecules d'interêt dans des cellules eucaryotes
FR2825364A1 (fr) * 2001-05-29 2002-12-06 Genethon Iii Vecteur peptiidique pour le transfert d'acides nucleiques dans des cellules eucaryotes
WO2002096928A3 (fr) * 2001-05-29 2004-02-26 Genethon Vecteur peptidique pour le transfert de molecules d'interêt dans des cellules eucaryotes
US8030067B2 (en) 2001-09-26 2011-10-04 Intrexon Corporation Whitefly ecdysone receptor nucleic acids, polypeptides, and uses thereof
US7563879B2 (en) 2001-09-26 2009-07-21 Intrexon Corporation Leafhopper ecdysone receptor nucleic acids, polypeptides, and uses thereof
US7829676B2 (en) 2001-09-26 2010-11-09 Intrexon Corporation Whitefly ecdysone receptor antibody
US8021878B2 (en) 2001-09-26 2011-09-20 Intrexon Corporation Leafhopper ecdysone receptor nucleic acids, polypeptides, and uses thereof
US8497093B2 (en) 2001-09-26 2013-07-30 Intrexon Corporation Leafhopper ecdysone receptor nucleic acids, polypeptides, and uses thereof
US7919269B2 (en) 2001-09-26 2011-04-05 Intrexon Corporation Whitefly ecdysone receptor nucleic acids, polypeptides, and uses thereof
US9063140B2 (en) 2001-09-26 2015-06-23 Intrexon Corporation Whitefly ecdysone receptor nucleic acids, polypeptides, and uses thereof
US7601508B2 (en) 2001-09-26 2009-10-13 Intrexon Corporation Whitefly ecdysone receptor polypeptide and methods
US8680249B2 (en) 2001-09-26 2014-03-25 Intrexon Corporation Leafthopper ecdysone receptor nucleic acids, polypeptides, and uses thereof
US10300122B2 (en) 2001-10-11 2019-05-28 Wyeth Holdings Llc Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
EP2341063A2 (fr) 2001-10-11 2011-07-06 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
WO2003063766A2 (fr) 2001-10-11 2003-08-07 Wyeth Holdings Corporation Nouvelle compositions immunogenes utilisees pour la prevention et le traitement de la meningococcie
US9757444B2 (en) 2001-10-11 2017-09-12 Wyeth Holdings Llc Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
US8563006B2 (en) 2001-10-11 2013-10-22 Wyeth Holdings Corporation Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
US9107873B2 (en) 2001-10-11 2015-08-18 Wyeth Holdings Llc Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
US9132182B2 (en) 2001-10-11 2015-09-15 Wyeth Holdings Llc Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
US11116829B2 (en) 2001-10-11 2021-09-14 Wyeth Holdings Llc Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
US8563007B1 (en) 2001-10-11 2013-10-22 Wyeth Holdings Corporation Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
US8101194B2 (en) 2001-10-11 2012-01-24 Wyeth Llc Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
US9168293B2 (en) 2001-10-11 2015-10-27 Wyeth Holdings Llc Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
EP2332961A2 (fr) 2001-10-11 2011-06-15 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP2341062A2 (fr) 2001-10-11 2011-07-06 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP2371837A1 (fr) 2001-10-11 2011-10-05 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP2343308A2 (fr) 2001-10-11 2011-07-13 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP2348036A2 (fr) 2001-10-11 2011-07-27 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP2348034A2 (fr) 2001-10-11 2011-07-27 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP2348035A2 (fr) 2001-10-11 2011-07-27 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP2351767A2 (fr) 2001-10-11 2011-08-03 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
US9623101B2 (en) 2001-10-11 2017-04-18 Wyeth Holdings Llc Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
EP2371838A1 (fr) 2001-10-11 2011-10-05 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP2371836A1 (fr) 2001-10-11 2011-10-05 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP3199539A1 (fr) 2001-10-11 2017-08-02 Wyeth Holdings LLC Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP2366707A1 (fr) 2001-10-11 2011-09-21 Wyeth Holdings Corporation Nouvelles compositions immunogènes pour la prévention et le traitement de la méningite à méningocoques
EP2392561A1 (fr) 2002-07-05 2011-12-07 Intrexon Corporation Ligands de alpha-acylaminokétone pour moduler l'expression de gènes exogènes via un complexe récepteur d'ecdysone
US7785608B2 (en) 2002-08-30 2010-08-31 Wyeth Holdings Corporation Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
EP2455375A2 (fr) 2003-02-10 2012-05-23 Intrexon Corporation Ligands de diacylhydrazine pour moduler l'expression de gènes exogènes dans des systèmes mammifères via un complexe récepteur d'ecdysone
US7851220B2 (en) 2003-02-10 2010-12-14 Intrexon Corporation Diacylhydrazine ligands for modulating the expression of exogenous genes in mammalian systems via an ecdysone receptor complex
US9272986B2 (en) 2003-02-10 2016-03-01 Intrexon Corporation Diacylhydrazine ligands for modulating the expression of exogenous genes in mammalian systems via an ecdysone receptor complex
WO2004072254A2 (fr) 2003-02-10 2004-08-26 Rheogene Holdings, Inc Ligands de diacylhydrazine permettant de moduler l'expression de genes exogenes dans des systemes mammiferes par l'intermediaire d'un complexe recepteur a l'ecdysone
US8524948B2 (en) 2003-02-28 2013-09-03 Intrexon Corporation Bioavailable diacylhydrazine ligands for modulating the expression of exogenous genes via an ecdysone receptor complex
US9255273B2 (en) 2003-02-28 2016-02-09 Intrexon Corporation Bioavailable diacylhydrazine ligands for modulating the expression of exogenous genes via an ecdysone receptor complex
US9359289B2 (en) 2003-02-28 2016-06-07 Intrexon Corporation Bioavailable diacylhydrazine ligands for modulating the expression of exogenous genes via an ecdysone receptor complex
US9102648B1 (en) 2003-02-28 2015-08-11 Intrexon Corporation Bioavailable diacylhydrazine ligands for modulating the expression of exogenous genes via an ecdysone receptor complex
EP2463269A1 (fr) 2003-02-28 2012-06-13 Intrexon Corporation Ligands de diacylhydrazine biodisponibles pour moduler l'expression de gènes exogènes via un complexe récepteur d'ecdysone
US9169210B2 (en) 2003-02-28 2015-10-27 Intrexon Corporation Bioavailable diacylhydrazine ligands for modulating the expression of exogenous genes via an ecdysone receptor complex
EP2460786A1 (fr) 2003-02-28 2012-06-06 Intrexon Corporation Ligands de diacylhydrazine biodisponibles pour moduler l'expression de gènes exogènes via un complexe récepteur d'ecdysone
US7432057B2 (en) 2004-01-30 2008-10-07 Michigan State University Genetic test for PSE-susceptible turkeys
EP2267458A2 (fr) 2004-04-20 2010-12-29 Galapagos N.V. Methodes, compositions et analyse de composes destinees a inhiber la production d'une proteine beta-amyloide
EP2270513A2 (fr) 2004-04-20 2011-01-05 Galapagos N.V. Méthodes, compositions et analyse de composés destinées à inhiber la production d'une protéine béta-amyloide
EP2214018A2 (fr) 2004-04-27 2010-08-04 Galapagos N.V. Procédés, agents, et analyses de criblage de composés permettant d'induire une differenciation de cellules mammaliennes non différenciés en ostéoblastes
EP2259063A2 (fr) 2004-04-27 2010-12-08 Galapagos N.V. Procédés, agents, et analyses de criblage de composés permettant d'induire une differenciation de cellules mammaliennes non différenciés en ostéoblastes
US7935510B2 (en) 2004-04-30 2011-05-03 Intrexon Corporation Mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system
US8076454B2 (en) 2004-04-30 2011-12-13 Intrexon Corporation Mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system
EP3000317A1 (fr) 2004-04-30 2016-03-30 Intrexon Corporation Récepteurs de mutant et leur utilisation dans un système d'expression de gènes inductibles à base de récepteur nucléaire
EP2292088A1 (fr) 2004-04-30 2011-03-09 Intrexon Corporation Récepteurs de mutant et leur utilisation dans un système d'expression de gènes inductibles à base de récepteur nucléaire
EP3219204A1 (fr) 2004-04-30 2017-09-20 Intrexon Corporation Récepteurs de mutant et leur utilisation dans un système d'expression de gènes inductibles à base de récepteur nucléaire
US9163256B2 (en) 2004-04-30 2015-10-20 Intrexon Corporation Mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system
EP2256197A1 (fr) 2004-06-14 2010-12-01 Galapagos N.V. Procédés d'identification, et composés utiles pour le traitement de maladies dégéneratives et inflammatoires
EP2270160A1 (fr) 2004-06-14 2011-01-05 Galapagos N.V. Procédés d'identification, et composés utiles pour le traitement de maladies dégéneratives et inflammatoires
EP2256198A1 (fr) 2004-06-14 2010-12-01 Galapagos N.V. Procédés d'identification, et composés utiles pour le traitement de maladies dégénératives et inflammatoires
WO2006002161A2 (fr) 2004-06-18 2006-01-05 Duke University Modulateurs de recepteurs odorants
EP2360474A2 (fr) 2004-06-21 2011-08-24 Galapagos N.V. Méthodes et moyens pour le traitement de l'ostéoarthrite
EP2386856A2 (fr) 2004-06-21 2011-11-16 Galapagos N.V. Procédés et moyens pour le traitement de l'arthrose
US7604798B2 (en) 2004-07-15 2009-10-20 Northwestern University Methods and compositions for importing nucleic acids into cell nuclei
EP2397490A1 (fr) 2004-07-16 2011-12-21 THE UNITED STATES OF AMERICA, represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Constructions de vaccins et combinaisons de vaccins conçus pour améliorer l'étendue de la réponse immunitaire de différentes souches et variantes du VIH
WO2006020071A2 (fr) 2004-07-16 2006-02-23 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Constructions vaccinales et combinaisons de vaccins conçues pour ameliorer l'etendue de la reaction immunitaire a diverses souches et variantes du vih
EP2360478A1 (fr) 2004-10-15 2011-08-24 Galapagos N.V. Cibles et composés moléculaires et procédés d'identification afferents utilisés dans le traitement de maladies de dégénérescence des articulations et de maladies inflammatoires
EP2327786A2 (fr) 2005-02-02 2011-06-01 Intrexon Corporation Recombinases à sérine site-spécifiques et leurs procédés d'utilisation
EP3112457A1 (fr) 2005-02-02 2017-01-04 Intrexon Corporation Recombinases à sérine spécifiques à un site et procédés d'utilisation de celles-ci
US8088382B2 (en) 2005-07-05 2012-01-03 Cornell Research Foundation, Inc. Methods of inhibiting transendothelial migration of neutrophils and monocytes with anti-CD99L2 antibodies
US7666584B2 (en) 2005-09-01 2010-02-23 Philadelphia Health & Education Coporation Identification of a pin specific gene and protein (PIN-1) useful as a diagnostic treatment for prostate cancer
EP2395012A2 (fr) 2005-11-02 2011-12-14 Protiva Biotherapeutics Inc. Molécules d'ARNsi modifiées et leurs utilisations
US8329669B2 (en) 2006-07-28 2012-12-11 Sanofi Composition and method for treatment of tumors
US8574597B2 (en) 2006-12-22 2013-11-05 Wyeth Llc Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
US8298781B2 (en) 2007-05-08 2012-10-30 Duke University Compositions and methods for characterizing and regulating olfactory sensation
EP3357904A1 (fr) 2007-05-29 2018-08-08 Intrexon Corporation Ligands diacylhydrazine chiraux destinés à moduler l'expression de gènes exogènes par le biais d'un complexe récepteur de l'ecdysone
WO2008153801A1 (fr) 2007-05-29 2008-12-18 Intrexon Corporation Ligands diacylhydrazine chiraux destinés à moduler l'expression de gènes exogènes par le biais d'un complexe récepteur de l'ecdysone
WO2008155397A2 (fr) 2007-06-20 2008-12-24 Galapagos N.V. Cibles et composés moléculaires utiles dans le traitement de maladies dégénératives des os et des articulations, et procédés pour les identifier
EP2565649A1 (fr) 2007-06-20 2013-03-06 Galapagos N.V. Cibles et composes moleculaires utiles dans les traitment de maladies de degeneratives des os et des articulations, et procedes pour les identifier
US8334272B2 (en) 2007-06-27 2012-12-18 Northwestern University Methods for nucleic acid transfer into cells
WO2009045370A2 (fr) 2007-09-28 2009-04-09 Intrexon Corporation Constructions et bioréacteurs de commutation de gène théapeutique destinés à l'expression de molécules biothérapeutiques, et utilisation de ceux-ci
WO2009040443A1 (fr) 2007-09-28 2009-04-02 Biomay Ag Vaccins à base d'arn
US11020477B2 (en) 2007-09-28 2021-06-01 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh RNA vaccines
US9724430B2 (en) 2007-09-28 2017-08-08 Intrexon Corporation Therapeutic gene-switch constructs and bioreactors for the expression of biotherapeutic molecules, and uses thereof
EP2674483A1 (fr) 2007-10-08 2013-12-18 Intrexon Corporation Cellules dendritiques modifiées et utilisations pour le traitement du cancer
WO2009082817A1 (fr) 2007-12-27 2009-07-09 Protiva Biotherapeutics, Inc. Silençage de l'expression de la polo-like kinase à l'aide d'un arn interférent
EP2770057A1 (fr) 2008-04-15 2014-08-27 Protiva Biotherapeutics Inc. Silençage de l'expression du gène CSN5 au moyen d'ARN interférant
WO2009129319A2 (fr) 2008-04-15 2009-10-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Réduction au silence de l'expression du gène csn5 au moyen d'arn interférant
EP2816113A2 (fr) 2008-09-11 2014-12-24 Galapagos N.V. Procédés d'identification et composés utiles pour augmenter l'activité fonctionnelle et l'expression de surface cellulaire du régulateur de la conductance de trans-membrane de la fibrose kystique mutante associée à la mucoviscidose
US8563001B2 (en) 2008-11-05 2013-10-22 Regents Of The University Of Minnesota Multicomponent immunogenic composition for the prevention of beta-hemolytic streptococcal (BHS) disease
US9127050B2 (en) 2008-11-05 2015-09-08 Regents Of The University Of Minnesota Multicomponent immunogenic composition for the prevention of beta-hemolytic streptococcal (BHS) disease
WO2010096561A1 (fr) 2009-02-18 2010-08-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Protéines gag du vih/vis de synthèse et leurs utilisations
WO2010094732A1 (fr) 2009-02-19 2010-08-26 Biofocus Dpi B.V. Procédé pour identifier des composés utiles pour diagnostiquer et traiter des maladies impliquant une inflammation
WO2010094734A2 (fr) 2009-02-19 2010-08-26 Biofocus Dpi B.V. Procédés d'identification de composés utiles pour le diagnostic et le traitement de maladies liées à une inflammation
WO2010094733A2 (fr) 2009-02-19 2010-08-26 Biofocus Dpi B.V. Procédés d'identification de composés utiles pour le diagnostic et le traitement de maladies liées à une inflammation
WO2010115825A2 (fr) 2009-03-31 2010-10-14 Robert Zimmermann Modulation de l'adipose triglycéride lipase pour prévenir et traiter la cachexie, la perte de poids et l'atrophie musculaire et procédés de criblage à des fins d'identification
WO2010112569A1 (fr) 2009-03-31 2010-10-07 Robert Zimmermann Modulation de lipase de triglycérides d'adipose pour la prévention et le traitement d'une cachexie, d'une perte de poids et d'une atrophie musculaire et procédés de criblage s'y rapportant
EP3043179A1 (fr) 2009-04-01 2016-07-13 Galapagos N.V. Procédés et moyens de traitement de l'arthrite
WO2010115841A1 (fr) 2009-04-01 2010-10-14 Galapagos Nv Procédés et moyens de traitement de l'arthrite
WO2010120374A2 (fr) 2009-04-17 2010-10-21 New York University Peptides ciblant les récepteurs de la famille du tnf et contrant l'action du tnf, compositions, méthodes et utilisations afférentes
WO2011015573A1 (fr) 2009-08-03 2011-02-10 Galapagos Nv Cibles et composés moléculaires, et procédés pour les identifier, utiles dans le traitement de maladies neurodégénératives
WO2011015572A1 (fr) 2009-08-03 2011-02-10 Galapagos Nv Cibles et composés moléculaires, et procédés pour leur identification utiles dans le traitement de maladies neurodégénératives
US9540647B2 (en) 2010-03-19 2017-01-10 University Of South Alabama Methods and compositions for the treatment of cancer
US9186370B2 (en) 2010-03-19 2015-11-17 University Of South Alabama Methods and compositions for the treatment of cancer
EP3284821A1 (fr) 2010-03-23 2018-02-21 Intrexon Corporation Vecteurs exprimant conditionnement des protéines thérapeutiques, cellules hôtes comprenant les vecteurs et leurs utilisations
WO2011160062A2 (fr) 2010-06-17 2011-12-22 The Usa As Represented By The Secretary, National Institutes Of Health Compositions et procédés pour traiter des affections inflammatoires
US9556240B2 (en) 2010-08-23 2017-01-31 Wyeth Llc Stable formulations of Neisseria meningitidis rLP2086 antigens
US10512681B2 (en) 2010-09-10 2019-12-24 Wyeth Llc Non-lipidated variants of Neisseria meningitidis ORF2086 antigens
US9757443B2 (en) 2010-09-10 2017-09-12 Wyeth Llc Non-lipidated variants of Neisseria meningitidis ORF2086 antigens
US11077180B2 (en) 2010-09-10 2021-08-03 Wyeth Llc Non-lipidated variants of Neisseria meningitidis ORF2086 antigens
EP3202897A1 (fr) 2010-12-09 2017-08-09 Institut Pasteur Procédé de type mgmt pour obtenir un rendement élevé d'expression de protéine recombinante
WO2012076715A1 (fr) 2010-12-09 2012-06-14 Institut Pasteur Procédé à base de mgmt permettant d'obtenir une expression élevée de protéines recombinées
EP2492279A1 (fr) 2011-02-25 2012-08-29 Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. Procédé de sélection rapide d'immunogène par expression à la surface du lentivirus.
WO2012113921A1 (fr) 2011-02-25 2012-08-30 Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A. Procédé de sélection rapide de variants de la gp-120 du vih
EP3450568A2 (fr) 2011-03-04 2019-03-06 Intrexon Corporation Vecteurs exprimant une protéine de manière conditionnelle
WO2012122025A2 (fr) 2011-03-04 2012-09-13 Intrexon Corporation Vecteurs exprimant une protéine de façon conditionnelle
US9458456B2 (en) 2011-04-01 2016-10-04 University Of South Alabama Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer
EP2546358A1 (fr) 2011-07-15 2013-01-16 Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. Procédés et réactifs pour un contrôle efficace de la progression du VIH
WO2013010906A2 (fr) 2011-07-15 2013-01-24 Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A. Procédés et réactifs pour maîtriser efficacement la progression du vih
WO2013043720A1 (fr) 2011-09-20 2013-03-28 The University Of North Carolina At Chapel Hill Régulation de canaux sodiques par des protéines plunc
WO2013053765A1 (fr) 2011-10-11 2013-04-18 Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. Modèle animal non humain de lymphome du tissu lymphoïde associé aux muqueuses (malt)
WO2013075132A1 (fr) 2011-11-17 2013-05-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Compositions de commutateurs arn thérapeutiques et procédés d'utilisation
WO2013083847A2 (fr) 2011-12-09 2013-06-13 Institut Pasteur Immunoessai de dépistage multiplex
US10197562B2 (en) 2011-12-09 2019-02-05 Institut Pasteur Multiplex immuno screening assay
US10352930B2 (en) 2011-12-09 2019-07-16 Institut Pasteur Multiplex immuno screening assay
US9638692B2 (en) 2011-12-09 2017-05-02 Institut Pasteur Multiplex immuno screening assay
US9035039B2 (en) 2011-12-22 2015-05-19 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing SMAD4
US9464291B2 (en) 2012-01-06 2016-10-11 University Of South Alabama Methods and compositions for the treatment of cancer
US8986710B2 (en) 2012-03-09 2015-03-24 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US9724402B2 (en) 2012-03-09 2017-08-08 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis composition and methods thereof
US9561269B2 (en) 2012-03-09 2017-02-07 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US11472850B2 (en) 2012-03-09 2022-10-18 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis composition and methods thereof
US10196429B2 (en) 2012-03-09 2019-02-05 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis composition and methods thereof
US10829521B2 (en) 2012-03-09 2020-11-10 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis composition and methods thereof
US10550159B2 (en) 2012-03-09 2020-02-04 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis composition and methods thereof
EP2698377A1 (fr) 2012-08-17 2014-02-19 Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. Procédé de sélection rapide d'immunogène de variants de la GP-120 du VIH amélioré
WO2014027082A1 (fr) 2012-08-17 2014-02-20 Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A. Procédé amélioré de sélection rapide d'immunogène pour variants de gp120 du vih
US9802987B2 (en) 2013-03-08 2017-10-31 Pfizer Inc. Immunogenic fusion polypeptides
WO2014139884A2 (fr) 2013-03-14 2014-09-18 Galapagos Nv Cibles et composés moléculaires destinés au traitement de la fibrose, et méthodes utilisées pour les identifier
WO2014139885A2 (fr) 2013-03-14 2014-09-18 Galapagos Nv Cibles et composés moléculaires, et procédés pour les identifier, utiles dans le traitement de maladies associées à une transition épithélio-mésenchymateuse
WO2014139883A1 (fr) 2013-03-14 2014-09-18 Galapagos Nv Cibles et composés moléculaires, et méthodes utilisées pour les identifier, dans le cadre du traitement de la fibrose
US9127024B2 (en) 2013-03-15 2015-09-08 Intrexon Corporation Boron-containing diacylhydrazines
US9512148B2 (en) 2013-03-15 2016-12-06 Intrexon Corporation Boron-containing diacylhydrazines
US10851119B2 (en) 2013-03-15 2020-12-01 Intrexon Corporation Boron-containing diacylhydrazines
US10464951B2 (en) 2013-03-15 2019-11-05 Intrexon Corporation Boron-containing diacylhydrazines
US10513705B2 (en) 2013-05-28 2019-12-24 The Johns Hopkins University Aptamers for the treatment of sickle cell disease
US11214804B2 (en) 2013-05-28 2022-01-04 The Johns Hopkins University Aptamers for the treatment of sickle cell disease
US10899802B2 (en) 2013-09-08 2021-01-26 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US11680087B2 (en) 2013-09-08 2023-06-20 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US9822150B2 (en) 2013-09-08 2017-11-21 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US11396555B2 (en) 2014-03-05 2022-07-26 Eutilex Co., Ltd. Monoclonal antibody which specifically recognizes B cell lymphoma and use thereof
US10570158B2 (en) 2014-09-17 2020-02-25 Intrexon Corporation Boron-containing diacylhydrazine compounds
US9944659B2 (en) 2014-09-17 2018-04-17 Intrexon Corporation Boron-containing diacylhydrazine compounds
WO2016054421A1 (fr) 2014-10-02 2016-04-07 Protiva Biotherapeutics, Inc Compositions et méthodes d'extinction de l'expression du gène du virus de l'hépatite b
EP3611186A1 (fr) 2015-02-06 2020-02-19 The University of North Carolina at Chapel Hill Cassettes optimisées d'expression génétique du facteur viii de coagulation humain et leur utilisation
WO2016127057A1 (fr) 2015-02-06 2016-08-11 The University Of North Carolina At Chapel Hill Cassettes optimisées d'expression génétique du facteur viii de coagulation humain et leur utilisation
US10888611B2 (en) 2015-02-19 2021-01-12 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
WO2016197132A1 (fr) 2015-06-04 2016-12-08 Protiva Biotherapeutics Inc. Traitement d'une infection à virus de l'hépatite b à de l'aide de crispr
EP3103458A1 (fr) 2015-06-12 2016-12-14 Chang Gung Memorial Hospital, Linkou Nouveaux polynucléotides et procédés pour inhiber des cellules cancéreuses
WO2017019891A2 (fr) 2015-07-29 2017-02-02 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions et méthodes de silençage de l'expression du gène du virus de l'hépatite b
WO2017062953A1 (fr) 2015-10-10 2017-04-13 Intrexon Corporation Contrôle thérapeutique amélioré de formes d'interleukine-12 déstabilisées sensibles à la protéolyse
WO2017147128A1 (fr) 2016-02-22 2017-08-31 The University Of North Carolina At Chapel Hill Inhibiteurs peptidiques de canaux calciques
WO2018089527A1 (fr) 2016-11-09 2018-05-17 Intrexon Corporation Constructions d'expression de frataxine
US10543267B2 (en) 2017-01-31 2020-01-28 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US11730800B2 (en) 2017-01-31 2023-08-22 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US10813989B2 (en) 2017-01-31 2020-10-27 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US10183070B2 (en) 2017-01-31 2019-01-22 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
WO2019110817A1 (fr) 2017-12-08 2019-06-13 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Test de criblage bioluminescent pour détecter une cytolyse cellulaire
US11858972B2 (en) 2018-03-15 2024-01-02 Fundació Privada Institut D'investigació Oncològica De Vall Hebron Micropeptides and uses thereof
EP3539975A1 (fr) 2018-03-15 2019-09-18 Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron Micropeptides et leurs utilisations
WO2019175376A1 (fr) 2018-03-15 2019-09-19 Fundació Privada Institut D'investigació Oncològica De Vall Hebron Micropeptides et leurs utilisations
WO2020032784A1 (fr) 2018-08-10 2020-02-13 주식회사 유틸렉스 Liaison du récepteur antigénique chimérique à hla-dr, et cellule car-t
US11013765B2 (en) 2018-08-10 2021-05-25 Eutilex Co., Ltd. Chimeric antigen receptor that binds HLA-DR and CAR-T cell
US11951130B2 (en) 2018-08-10 2024-04-09 Eutilex Co., Ltd. Chimeric antigen receptor that binds HLA-DR and CAR-T cell
WO2020185628A1 (fr) 2019-03-08 2020-09-17 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions de cd40l et procédés de régulation accordable
WO2021142376A1 (fr) 2020-01-08 2021-07-15 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions et procédés pour la régulation accordable de la transcription
WO2021191447A1 (fr) 2020-03-26 2021-09-30 Splicebio, S.L. Intéines divisées et leurs utilisations
EP3885440A1 (fr) 2020-03-26 2021-09-29 Splicebio, S.L. Intéines divisées et leurs utilisations
WO2023242436A1 (fr) 2022-06-17 2023-12-21 Danmarks Tekniske Universitet Vaccins antiallergiques à base d'allergènes consensus

Also Published As

Publication number Publication date
US5856435A (en) 1999-01-05
AU1581895A (en) 1995-08-29
CA2182118A1 (fr) 1995-08-17
EP0743984A1 (fr) 1996-11-27
FR2715847B1 (fr) 1996-04-12
JPH09508530A (ja) 1997-09-02
FR2715847A1 (fr) 1995-08-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO1995021931A1 (fr) Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations
CA2194797C (fr) Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations
Wang et al. Design of multifunctional non-viral gene vectors to overcome physiological barriers: dilemmas and strategies
JP4796063B2 (ja) 治療薬を送達するための方法および物
EP1513506B1 (fr) Systeme de vectorisation comprenant des nanoparticules de taille homogene d&#39;au moins un polymere et d&#39;au moins un polysaccharide charge positivement et son procede de preparation
US20100285111A1 (en) Self-assembling micelle-like nanoparticles for systemic gene delivery
FR2730637A1 (fr) Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations
Cheng et al. The effect of guanidinylation of PEGylated poly (2-aminoethyl methacrylate) on the systemic delivery of siRNA
Chiarantini et al. Comparison of novel delivery systems for antisense peptide nucleic acids
Li et al. Recent developments of polymeric delivery systems in gene therapeutics
WO1998034648A1 (fr) Formulation de particules agent(s) de transfection cationique(s)/acides nucleiques stabilisees
Vlasov Starlike branched and hyperbranched biodegradable polymer systems as DNA carriers
CN114642734A (zh) 药物及siRNA共递送纳米复合物及其制备方法与应用
FR2724935A1 (fr) Compositions nanoparticulaires contenant des derives nucleotidiques, leur preparation et leur emploi en therapeutique
Haidar NanoDentistry: Perspectives on the role of NanoBiotechnology in biomaterials, pharmaceutics and BioDental tissue engineering
Delas Formulation and stabilization of colloidal polyelectrolyte complexes of chitosan and siRNA
WO1998017693A1 (fr) Composition contenant du chitosan
KR102013908B1 (ko) 변형 지방산 인지질 및 양이온성 폴리펩티드 컨쥬게이트를 포함하는 핵산 전달용 조성물
WO1998029557A1 (fr) Conjugues d&#39;un vecteur particulaire et d&#39;oligonucleotides, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant
CN111704705A (zh) 一种嵌段聚合物及其制备方法以及一种载药囊泡和靶向载药囊泡
MOFFATT et al. ENHANCED TARGETING OF POLYETHYLENIMINE (PEI)-BASED TUMOR-SPECIFIC ANTISENSE NANO-OLIGONUCLEOTIDES (TANOL) IN CANCER THERAPY

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AM AU BB BG BR BY CA CN CZ EE FI GE HU JP KE KG KP KR KZ LK LR LT LV MD MG MN MW MX NO NZ PL RO RU SD SI SK TJ TT UA US UZ VN

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): KE MW SD SZ AT BE CH DE DK ES FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE BF BJ CF CG CI CM GA GN ML MR NE SN TD TG

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2182118

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1995907715

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 08687551

Country of ref document: US

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1995907715

Country of ref document: EP

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Ref document number: 1995907715

Country of ref document: EP