UA96922U - Спосіб підвищення впевненості у спортсменів - Google Patents

Abstract

Спосіб підвищення впевненості у спортсменів включає застосування психологічного тренінгу тривалістю 1,5 год. протягом 20 днів через добу. Додатково здійснюють його фармакологічну підтримку:гліцин - по одній таблетці тричі на добу;енеріон - по одній таблетці двічі на добу;новопасит - по 2,5 мл зранку і вдень, а також 5 мл безпосередньо перед сном.

Description

Х7 являє собою 5, б або 0; Хв являє собою 5 або відсутня;

Хв являє собою М, Т або К; та

Хе являє собою 0, М або У; СОовВ-І3 - Хі-Хо-Х3-Х.а-Хв-Хв-Х7-Хв-Хео (5ЕО І

Хіо являє собою У, о або |; Мо: 60),

Хії являє собою А, І або Н; де

Хіг являє собою 5 або відсутня; Хі являє собою 0;

Хіз являє собою Е або відсутня; Хг являє собою 0;

Хі« являє собою М або відсутня; та Хз являє собою 0, У або 5;

Хі5 являє собою М або відсутня; Ха являє собою "У, М, К або І;

СОвВ-І2 - Хі-Хо-Ха-Хі-Х5-Хе-Х7-Хв (ЗЕО ІЮ Мо: Х5 являє собою М, Т, 5 або Е; 59), Хв являє собою 5, У, М або МУ; де Х7 являє собою Р;

Хі являє собою У або 5; Хв являє собою МУ, Е, У, І або Р;

Хг2 являє собою А або Т; та

Хз являє собою 5 або А; Хе являє собою Т або 5.

Ха являє собою М, Н, 5 або 0; 2. Зв'язуючий білок за п. 1, де щонайменше один

Х5 являє собою РЕ, М або 5; СОР містить амінокислотну послідовність, вибрану

Хє являє собою У, О або |; з групи, що складається із:

Х7 являє собою Т, 5 або 0; та залишків 31-37 ЗЕО О Ме: 35 (СОРОНІ); залишків 50-66 ЗЕО ІО Мо: 45 (СОВ-Н2); залишків 52-67 ЗРО 1 Ме: 35 (СОА7Н); залишків 99-101 ЗЕО І Ме: 45 (СОВ-НЗ); залишків 100-108 5ЕО ІЮ Ме: 35 (СОВБ-НУЗ); залишків 24-34 5ЕО |Ю Ме: 46 (СОВ-11); " залишків 24-34 5ЕО ІО Ме: 36 (СОМ-І 1); залишків 50-56 ЗЕО ІЮ Мо: 46 (СОВ-12); залишків 50-56 5ЕО ІО Ме: 36 (СОКМК-І 2); залишків 89-97 ЗЕО ІЮ Мо: 46 (СОВ-І 3); залишків 89-97 5ЕО ІО Ме: 36 (СОРВ-1 3); ів 31-35 ЗЕО ІЮ Ме: 47 (СОВ-НІ й залишків 31-37 5ЕО ІЮ Ме: 37 (СОВ-НІ); залишків 31- 9: 47 (СОМ-НІ); залишків 52-67 ЗЕО ІЮ Ме: 37 (СОВ-Н2): залишків 50-66 5ЕО ІО Ме: 47 (СОВ-Н2); залишків 100-109 5ЕО ІО Ме: 37 (СОВ-НЗ); залишків 939-106 ЗЕО ТО Ме: 47 (СОР-НЗ); залишків 24-34 ЗЕО ІЮ Ме: 38 (СОР-І 1); залишків 24-34 5ЕО ІО Мо: 48 (СОМ-І 1); залишків 50-56 ЗЕО ІЮ Мо: З8 (СОВ-1 2); залишків 50-56 5ЕО ІО Мо: 48 (СОК-І 2); залишків 89-97 ЗЕО | Мо: 38 (СОВ-13); залишків 89-97 5ЕО ІО Ме: 48 (СОВ-1 3); залишків 31-35 ЗЕО ІЮ Мо: 39 (СОВ-НІ); залишків 31-35 5ЕО ІО Мо: 49 (СОВ-НТІ); залишків 50-66 5ЕО 10 Мо: 39 (СОР-Н2); залишків 50-66 ЗЕО ТО Ме: 49 (СОННА); залишків 99-106 ЗЕО ІО Ме: 39 (СОВ-НЗ); залишків 997111 ЗЕО 10 Ме: 49 (СОМ-НУ); залишків 24-34 ЗЕО ІО Ме: 40 (СОР-1 1); залишків 24-38 5ЕО ІО Мо: 50 (СОМ-І 1); залишків 50-56 5ЕО ІЮ Ме: 40 (СОВ-12); залишків 53-60 5ЕО ІО Мо: 50 (СОМ-І 2); залишків 89-97 ЗЕО ІЮ Ме. 40 (СОВ-І3): залишків 93-101 5ЕО ІО Ме: 50 (СОВ-Ї 3); залишків 31-35 ЗЕО ІО Ме: 41 (СОВ-НІ); залишків 31-37 ЗЕО 1О Ме: 51 (САУНІ); залишків 50-66 ЗЕО ІО Ме: 41 (СОВ-Н2); залишків 52-67 ЗЕО 1 Ме: 51 (СОННА); залишків 99-106 ЗЕО ІО Ме: 41 (СОВ-НЗ); залишків 100-109 ЗЕО 10 Ме: 51 (СОН-НУ); . І й залишків 24-34 5ЕО ІО Ме: 52 (СОВ-1 1); залишків 24-34 5ЕО ІО Ме: 42 (СОВ-1 1); . запишків 50-56 ЗЕО ІЮ Ме: 42 (СОВ-І 2); залишків 50-56 5ЕО ІО Ме: 52 (СОК-Ї 2); залишків 89-97 ЗЕО ІЮ Ме. 42 (СОВ-І3): залишків 89-97 5ЕО ІО Ме: 52 (СОВ-1 3); й щі й залишків 31-35 5ЕО ІО Ме: 53 (СОМ-НТІ); залишків 31-35 5БЕО ІО Ме: 43 (СОВ-НІ1); залишків 47-66 ЗЕО 10 Ме: 53 (СОВ-Н2); залишків 50-66 5ЕО МО Ме: 43 (СОМКН2); залишків 99-107 ЄЕО ІО Ме: 53 (СОВ-НЗ); залишків 99-106 5ЕО ІО Ме: 43 (СОВ-НЗ); . І й залишків 24-34 ЗЕО ІО Ме: 44 (СОР-1 1); залишків 24-34 5ЕО ІО Ме: 54 (СОМ-11); залишків 50-56 ЗЕО ІЮ Мо: 4 (СОВ-12); залишків 50-56 5ЕО ІО Ме: 54 (СОК-Ї 2); . й та залишків 89-97 5ЕО ІО Ме: 44 (СОБМ-І 3); й Й й Й залишків 31-35 ЗЕО ІО Ме: 45 (СОВ-НІ); залишків 89-97 5ЕО ІО Ме: 54 (СОВ-1 3). 3. Зв'язуючий білок за п. 1, де щонайменше три СОК, вибирають з набору варіабельних доменів СОК, виб- раних з групи, що включає: унтоа набір сон нн

Мн 104 СОВ-НІ1 Залишки 31-37 5ЕО ІЮО Мо: 35

Мн 104 СОВ-Н2 Залишки 52-67 5ЕО ІЮО Мо: 35

Мн 104 СОВ-НЗ Залишки 100-108 5ЕО ІО Мо: 35

Мі. 1оа набір сов нн

М. ра сови м. расові м. расовіз ун тАв набір сок нн ун ТАвСОВ-НІ ун Ав СОН ун тАв СОН

М. тА набір СО нн

МТА СОВИ

М. тА СО

М. тА СОВЗ унаювнаівсою 11111 ун лов сові ун ов совно ун ов сов-на

М. ов набір сов нн

М. тов сови м. тов сові м. тов совз ун зот набір сов нн ун зо совон нс совно ун от сова

М. зот набір сов нн

М. зт сови мі звт сові мі. зст сова ун БЕ8 набір сов нн ун БЕВ СОН ун БВ СОВчНа ун БВ СОВ-На мевЕВнавівсоя 1111

М. БЕВ СОЧІ м. БЕ ОВ м. БЕ СОВІЗ ун вЕт набір сов нн ун ВЕ! СОН. ун ВЕ! Совчна ун ВЕ! СоА-На

М. ВЕ! Набір сов нн

М. вЕТ СВ м. вЕТ Сова м. вЕ! СОВІЗ ун не навів сок нн уннесоваі уннесовне

УнІнесовіна

Мі. іне набір сов нн

Мін сови м.тнвсовіо

М. тнвсовіз унзам нав 11111 ун Ат СОН ун Ат совно ун Ат СоА-На

М. Ат: набір Сов нн

Мвт Со

МізАті сові

МізАтт соВЗ ун ава набір сок нн унава соні унава совчна

М. зва Набір сов нн мі ава сов м ава сова м ава совЗ ун тоз набір сов нн ун тов сон унтоз совно ун то сова мі 753 СОВ-11 Залишки 24-34 ЗЕО ІО Мо: 54

МІ 753 СОВ-12 Залишки 50-56 ЗЕО ІО Мо: 54

МІ 753 СОВ-І З Залишки 89-97 ЗЕО ІО Мо: 54. 4. Зв'язуючий білок за п. 3, що містить щонайме- нше два набори СОР варіабельних доменів. ЗЕО ІЮ Ме: 61 ЗЕО ІЮ Ме: 70 5. Зв'язуючий білок за п. 4, де вказані щонайме- й й нше два набори СОК варіабельних доменів ви- ЗБОЮ Ме: ба ЗБОЮ Ме: 71 бирають з групи, що складається з: 5ЕО ІЮ Мо: 63 5ЕО ІЮ Ме: 72 набору СО УН 104 та набору СО МІ 104; набору СОК МН ТАБ та набору СОВА МІ 1Аб; ЗЕО ІО Ме: 64 ЗЕО ІО Ме: 73 набору СО МН 108 СОР та набору СОК МІ 108; набору СОВ МН З3С7 та набору СОВ МІ 37; ЗБОЮ Ме: 65 ЗЕОЮ Ме: 74 набору СО МН 5Е8 та набору СОК МІ 5ЕВ8; . . набору СОВ УН ВЕ! та набору СОВ МІ 8ЕЇ1; ЗО о Ме: 66 ЗО о Ме: 75 набору СО МН 1Нб та набору СО МІ 1Нб В; 5ЗЕО І Ме: 67 5ЕО ІЮ Мо: 76 набору СОК МН ЗАТ11 та набору СОК МІ ЗА11; набору СО УН 484 та набору СОЕ МІ 484; та ЗЕО ІО Ме: 68 ЗБОЮ Ме: 77 набору СО МН 723 та набору СОЄ МІ 703. б. Зв'язуючий білок за будь-яким з пп. 1-5, що ЗБОЮ Ме: 69 та додатково містить людський акцепторний каркас. 5ЕО ІЮ Мо: 78. 7. Зв'язуючий білок за п. 6, де вказаний людський акцепторних каркас містить амінокиспотну послі; 9. Зв'язуючий білок за п. 8, який містить два варі- довність, виорану з групи, що складається з: абельні домени, та вказані два варіабельні доме- ни, які мають амінокислотні послідовності, вибра-

ЗЕОІО Ме:6 5ЕОІО Ме:19 5ЕОЮ Ме: 32 ні з групи, що складається з:

ЗЕО ІО Ме: 61 та ЗЕО ІО Мо: 62,

ЗЕО ПО Мо: 7 ЗБОІО Ме: 20 ЕОЮ Ме: 33 ЗЕО ІО Ме: 63 та БЕО ІЮ Ме: 64,

ЗЕО ІО Ме: 65 та ЗЕО ІО Мо: 66,

ЗБОЮ Ме: 8 ЗБОЮ Ме: 21 ЗБОЮ Мо: 34 5ЕО ІЮ Ме: 67 та ЗЕО ІЮ Ме: 68,

І І І ЗЕО ІО Ме: 69 та ЗЕО ІО Ме: 70,

ЗЕО ПО Ме: 9 ЗЕОІО Ме:22 ЗЕБЕОЮ Ме: 92 ЗЕО ІО Ме: 71 та ЗЕО І Ме: 72, 5ЕОІО Ме:10 БЕОІО Ме:23 БЕО Ю Ме: 93 ЗЕО ІО Ме: 73 та ЗЕО О Ме: 74,

ЗЕО ІО Ме: 75 та ЗЕО ІО Ме: 76,

ЗЕОІО Ме:11 5ЕОІО Мо:24 5ЕО Ю Мо: 94 ЗЕО ІО Ме: 77 та ЗЕО ІО Мо: 78 5ЗЕО ІО Ме: 67 та ЗЕО ІО Ме: 70, та 5ЕОІО Ме:12 5ЕОІО Мео:25 5ЕОЮ Ме: 95 ЗЕО ІЮ Мо: 69 та 5ЕО ІЮ Ме: 68. о о о 10. Зв'язуючий білок за п. 6 або 9, де вказаний

БО Ме 13 БЕОІО Ме 26 ЗЕОО Ме: 96 людський акцепторний каркас містить щонайме- 5ЕО!ІО Ме: 14 5ЕОІО Ме: 27 та нше одне амінокислотне заміщення у каркасному регіоні на ключовому залишку, та вказаний клю-

ЗБЕОІО Ме: 15 5ЕОІЮО Ме 28 5ЕБЕО ОО Мо: човий залишок вибирають з групи, що складаєть- ся із:

ЗБЕОІО Ме:16 5ЕОЇЮО Ме:29 97. залишку, суміжного із СОВ; 5ЕОІЮ Мо: 17 5ЕОІЮ Ме: 30 залишку сайту гліколізування;

Що Що рідкого залишку;

ФЗЕОЇО Мео:18 5ЕО ІО Мо: 31 залишку, здатного взаємодіяти із субодиницею ро людського 1-12; 8. Зв'язуючий білок за п. 1, який містить щонай- залишку, здатного взаємодіяти із СОК; менше один варіабельний домен, що має аміно- канонічного залишку; кислотну послідовність, вибрану з групи, що контактного залишку між варіабельним регіоном складається з: важкого ланцюга та варіабельним регіоном легко- го ланцюга; залишку у межах зони Верньє; та залишку в області, що перекривається між визна- ченим Споїпіа варіабельним СОК1 важкого лан- цюга та визначеним Кабатом каркасом першого важкого ланцюга.

11. Зв'язуючий білок за п. 10, де ключовий зали- ЗЕО ІО Мо: 86 та 5ЕО ІЮО Ме: 87, шок вибирають з групи, що складається з ЗН, 5Н, ЗЕО ІО Мо: 88 та 5ЕО ІО Ме: 89,

ТОН, 11Н, 12Н, 1ІЗН, 15Н, 16Н, 18Н, 19Н, 2ЗН, 5ЕО ІО Ме: 90 та 5ЕО ІЮО Ме: 91, 2АН, 25Н, ЗОН, 41Н, 44Н, 46Н, 49Н, 66Н, 68Н, 5ЕО ІО Ме: 98 та 5ЕО ІЮО Ме: 99, 71Н, 7ЗН, 74Н, 75Н, 76Н, 77Н, 78Н, 79Н, 81Н, 5ЕО ІО Ме: 100 та 5ЕО ІО Ме: 101, 82Н, 82АН, 82ВН, 82СН, 83Н, 84Н, 85Н, 86Н, 87Н, 5ЕО ІО Ме: 102 та 5ЕО ІЮ Ме: 103, 89Н, 93Н, 98Н, 108Н, 109Н, 11, 21, ЗІ, 71, 81, 91, 5ЕО ІО Ме: 104 та 5ЕО ІО Ме: 105, 101, 11, 12, 191, 151, 171, 191, 201, 211, 221, 5ЕО ІО Мо: 106 та 5ЕО ІО Мо: 107, та

ЗбІ, 411, 421, 431, 451, 461, 581, 601, 621, 631, 5ЕО ІО Ме: 108 та 5ЕО ІО Ме: 109. 671, 701, 731, 741, 771, 781, 791, 801, 831, 851, 15. Зв'язуючий білок за п. 11, який містить що- 871, 104. та 1061. найменше один варіабельний домен, що має 12. Зв'язуючий білок за п. 10, який є консенсус- амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що ним людським варіабельним доменом. складається з: 13. Зв'язуючий білок за п. б або 9, де вказаний людський акцепторний каркас містить, щонайме- нше, одне амінокислотне заміщення у каркасно- ЗЕОІО Ме:6б/ ЗЕОІО Ме:87 ЗБОЮ Ме: 102 му регіоні, де амінокислотна послідовність карка- ЄЕОО Ме 79 5ЕОІЮ Мо 88 5ЕОО Ме: 103 су має щонайменше 65 95 ідентичність із 7 7 7 послідовністю вказаного людського акцепторного ФЗЕОЇО Ме:80 5ЕОЇО Ме: 89 5ЕОЮ Мо: 104 каркасу та містить щонайменше 70 амінокислот- них залишків, ідентичних вказаному людському ЗЕО ІЮО Ме: 81 ЗЕОІО Ме: 90 5ЕОЮО Мо: 105 акцепторному каркасу. 14. Зв'язуючий білок за п. 1, який містить щонай- ЗЕОІО Ме82 ЗЕОІО Ме:91 ЗЕОЮ Ме: 106 менше один варіабельний домен, що має аміно- ФЕОО Ме 83 5ЕОЇО Ме:98 5ЕОЮ Мо 107 кислотну послідовність, вибрану з групи, що 7 7 7 складається з: 5ЕОІО Ме:84 5ЕОІО Ме:99 БЕО ІЮО Ме: 108, 5ЕОІО Мо: 85 5ЕОЇІО Ме: 100 та 5ЕОІО Ме:6б7 5ЕОІО Ме: 87 5ЕБЕО ОО (Мо: 5ЕОІО Ме: 86 ЗЕОЇІО Ме: 101 5ЕОО Ме: 109. 5ЕОІО Мо: 79 5ЕОІЮ Мо: 88 (102

ЗЕОІО Ме:80 5ЕОІО Ме: 89 5ЕБЕО ОО (Мо:

ЗЕОІО Ме:81 ЗЕОІО Ме:90 103 16. Зв'язуючий білок за будь-яким з пп. 1, 3, 5-8, , , , 10, 11, 13 та 14, який здатний зв'язувати мішень,

ЗЕОІО Ме82 ЗБОЮ Ме91 ЗБО 0 Ме вибрану з групи, що складається з ІІ-12 та 1-23. 5ЕО І Ме: 83 5ЕО І Ме: 98 104 17. Зв'язуючий білок за п. 16, здатний модулюва- ти біологічну функцію мішені, вибраної з групи, 5ЕОІО Мо: 84 5ЕОІО Мео:99 5ЕБЕО ОО (Мо: що складається з 1І--12 та 1-23. 18. Зв'язуючий білок за п. 16, здатний нейтралі-

ЗБОЮ Ме: 85 ЗЕО ОО Ме 105 зувати мішень, вибрану з групи, що складається з , , І/-12 та І--23.

ЗО Ме:86 100 БО о Ме 19. Зв'язуючий білок за п. 16, який має константу 5ЕО 0 Ме: 106 швидкості асоціації (Коп) зі вказаною мішенню, вибраною з групи, що складається з: щонаймен- 101 5ЕО ІО Ме: ше, приблизно, 102М'с!; щонайменше, приблиз- но, 109М"с"; щонайменше, приблизно, 102М'" с; 107 щонайменше, приблизно, 109М'с!; та щонайме-

ЗО Ю Ме: нше, приблизно, 109М"с", відповідно до вимірю-

Щі вань способом поверхневого плазмонного резо- 108 нансу. 20. Зв'язуючий білок за п. 16, який має константу та швидкості дисоціації (Кої) зі вказаною мішенню, вибраною з групи, що складається з: не більше,

ЗБО 10 Ме: приблизно, 10Зс"; не більше, ніж, приблизно, 10" 109 зс!; не більше, ніж, приблизно, 109с!; та не бі- " льше, ніж, приблизно, 109с7", відповідно до вимі- при цьому вказаний зв'язуючий білок переважно рювань способом поверхневого плазмонного ре- містить два варіабельні домени, які мають аміно- 21 Зв Я бі 16 - кислотні послідовності, вибрані з групи, що скла- - звязуючий білок за п. 19, який має константу дається з: дисоціації (Ко) зі вказаною мішенню, вибраною з

ФЕО ІЮ Мо: 67 та ЗЕО ІЮ Ме: 79 групи, що складається з: не більше, ніж, приблиз- 5ЕО Ір Мо: 80 та ЗЕО І Мо: 81. но, 107 М; не більше, ніж, приблизно, 1038 М; не

ЕО Ір Ме: 82 та ХЕО Ір Ме: 83 більше, ніж, приблизно, 109 М; не більше, ніж, 5ЕО Ір Мо: 84 та ЗЕО І Мо: 85 приблизно, 1079 М; не більше, ніж, приблизно, 10"

11 М; не більше, ніж, приблизно, 10712 М; та не антитіла додатково містить агент, вибраний з більше, ніж 10713 М. групи, що складається з: молекули імунної адге- 22. Зв'язуючий білок за п. 1, який існує у формі зії, радіофармацевтичного засобу, терапевтично- кристалу. го засобу та цитотоксичного засобу, при чому 23. Зв'язуючий білок за п. 22, де вказаний крис- вказаний агент переважно є візуалізуючим аген- тал є фармацевтичним кристалом з контрольо- том, вибраним з групи, що складається з радіоак- ваним вивільненням, що не містить носія. тивної мітки, ферменту, флуоресцентної мітки, 24. Зв'язуючий білок за п. 22, який має довший люмінесцентної мітки, біолюмінесцентної мітки, час напівжиття /л у/мо, ніж його розчинний аналог. магнітної мітки та біотину, а вказаний візуалізую- 25. Зв'язуючий білок за п. 22, який зберігає біоло- чий агент переважно є радіоактивною міткою, гічну активність. вибраною з групи, що складається з: ЗН, "С, 355, 26. Конструкція антитіла, яка містить зв'язуючий зоу, 99То, п, 125), 191), 177) у, 196Но та 153517, або білок за будь-яким з пп. 1-21, та додатково міс- вказаний агент є терапевтичним чи цитотоксич- тить лінкерний поліпептид або константний до- ним засобом, вибраним з групи, що складається мен імуноглобуліну, де вказаний зв'язуючий білок з: антиметаболіту, алкілуючого агента, антибіоти- вибирають з групи, що складається з: ка, фактора росту, цитокіну, анти-ангіогенного молекули імуноглобуліну, агента, антимітотичного засобу, антрацикліну, моноклонального антитіла, токсину та апоптичного засобу. химерного антитіла, 33. Кон'югат антитіла за п. 32, де вказаний зв'я-

СОвВ-імплантованого антитіла, зуючий білок має людський тип глікозування. олюдненого антитіла, 34. Кон'югат антитіла за п. 32, який існує у формі

Раб, кристалу. га», 35. Кон'югат антитіла за п. 34, де вказаний крис-

Кар)2г, тал є фармацевтичним кристалом з контрольо-

Ем, ваним вивільненням, що не містить носія. дисульфідно зв'язаного Ру, 36. Кон'югат білок за п. 34, що має довший час 5егм, напіврозпаду /л умо, ніж його розчинний аналог. однодоменного антитіла, 37. Кон'югат антитіла за п. 34, яка зберігає біоло- димерного антитіла, гічну активність. мультиспецифічного антитіла, 38. Ізольована нуклеїнова кислота, що кодує амі- подвійно-специфічного антитіла, та нокислотну послідовність зв'язуючого білка за біспецифічного антитіла будь-яким з пп. 1-21. або де вказаний зв'язуючий білок містить конста- 39. Ізольована нуклеїнова кислота, що кодує амі- нтний домен важкого ланцюга імуноглобуліну, що нокислотну послідовність конструкції антитіла за вибирають з групи, що складається з: п. 26. константного домену людського ІМ, 40. Ізольована нуклеїнова кислота, що кодує амі- константного домену людського ІдДС1 нокислотну послідовність кон'югату антитіла за п. константного домену людського ІдД2 32. константного домену людського (ДОЗ 41. Вектор, що містить ізольовану нуклеїнову константного домену людського ІДС кислоту за будь-яким з пп. 38-40. константного домену людського ІДЕ, 42. Вектор за п. 41, який вибирають з групи, що та складається з ркДНК, рт, рТТ3, рРЕЕВО5, рвм, константного домену людського ІдА, руУМ та рв3у. або де вказана конструкція антитіла містить конс- 43. Клітина-хазяїн, що містить вектор за п. 41 або тантний домен імуноглобуліну, що має амінокис- 42, яка є прокаріотною клітиною, переважно БЕ. лотну послідовність, вибрану з групи, що склада- Соїї, або еукаріотичною клітиною. ється 3: 44. Клітина-хазяїн за п. 43, де вказану еукаріоти-

ЗЕОІЮ МО чну клітину вибирають з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МОЗ протісту, тваринної клітини, рослинної клітини та

ЗЕО ІЮ МО: грибкової клітини, де бажано вказана еукаріотна та клітина є тваринною клітиною, вибраною з групи,

ЗЕО ІЮ МОБ. що складається з: клітини ссавців, клітини птахів 27. Конструкція антитіла за п. 26, де вказаний та клітини комах. зв'язуючий білок має людський тип глікозування. 45. Клітина-хазяїн за п. 43, яка є СНО клітиною, 28. Конструкція антитіла за п. 26, яка існує у фо- СО5 клітиною, дріжджовою клітиною, переважно рмі кристалу. басспаготусев сегеуізіає, або клітиною комах 29. Конструкція антитіла за п. 28, де вказаний 5. кристал є фармацевтичним кристалом з контро- 46. Спосіб продукування білка, здатного зв'язува- льованим вивільненням, що не містить носія. ти р40 субодиницю 1-12, що включає культиву- 30. Конструкція антитіла за п. 28, яка має довший вання клітини-хазяїна за будь-яким з пп. 43-45 у час напіврозпаду /п уїмо, ніж її розчинний аналог. культуральному середовищі за умов, достатніх 31. Конструкція антитіла за п. 28, яка зберігає для продукування зв'язуючого білка, здатного біологічну активність. зв'язувати р40 субодиницю 1-12. 32. Кон'югат антитіла, що містить конструкцію 47. Білок, одержаний відповідно до способу за п. антитіла, описану у п. 26, де вказаний кон'югат 46.

48. Композиція для вивільнення зв'язуючого біл- інгаляційних стероїдів, епінефрину або аналогу, ка, яка містить: цитокіну та антагоністу цитокіну. (а) склад, який містить кристалічний зв'язуючий 55. Застосування зв'язуючого білка за будь-яким білок за будь-яким з пп. 22-25, та інгредієнт; та з пп. 1-21 як агента для зниження активності (б) полімерний носій. людського 1І--12. 49. Композиція за п. 48, де вказаний полімерний 56. Застосування зв'язуючого білка за будь-яким носій вибирають з одного чи більше складових з пп. 1-21 для виготовлення лікарського засобу групи, що складається з: полі(акрилової кислоти), для зниження активності людського І1Ї--12. полі(ціаноакрилатів), полі(амінокислот), по- 57. Застосування зв'язуючого білка за будь-яким лі(ангідридів), полі(депсіпептидів), полі(естерів), з пп. 1-21 для виготовлення лікарського засобу полі(молочної кислоти), полі(кополімеру молочної для лікування розладу або захворювання, при та гліколевої кислот) або РІСА, полі(р- якому активність І--12 є шкідливою, причому вка- гідроксибутирату), полі(капролактону), по- заний розлад або захворювання вибирають з лі(діоксанону); полі(етиленгліколю), по- групи, що включає ревматоїдний артрит, остеоа- лі(гідроксипропіл)уметакриламіду, по- ртрит, ювенільний хронічний артрит, септичний ліКкоргано)фосфазену)|, полі(ортоефірів), артрит, артрит Лайма, псоріатичний артрит, реак- полі(вінілового спирту), полі(вінілпіролідону), ко- тивний артрит, спондилоартропатію, системний полімерів малеїнового ангідриду та алкілвініле- червоний вовчак, хворобу Крона, виразковий ко- теру, поліолів - блок-кополімерів поліоксіетилену літ, запальну хворобу кишечнику, інсулінозалеж- та поліоксипропілену, альбуміну, альгінату, це- ний цукровий діабет, тиреоїдит, астму, алергійні люлози та похідних целюлози, колагену, фібрину, хвороби, псоріаз, дерматичну склеродерму, хво- желатину, гіалуронової кислоти, олігосахаридів, робу "трансплантат проти хазяїна", відторгнення глікаміногліканів, сульфатованих полісахаридів, трансплантату органами, гостру чи хронічну імун- та їх сумішей та кополімерів. ну хворобу, пов'язану із трансплантацією органів, 50. Композиція за п. 48, де вказаний інгредієнт саркоїдоз, атеросклероз, синдром дисемінованої вибирають з групи, що складається з альбуміну, внутрішньосудинної коагуляції, хворобу Кавасакі, сахарози, трегалози, лактитолу, желатину, гідро- хворобу Грейва, нефротичний синдром, синдром ксипропіл-Д-циклодекстрину, метоксиполіетилен- хронічної втоми, грануломатоз Вегенера, пурпуру гліколю та поліетиленгліколю. Шенляйн-Геноха, мікроскопічний васкуліт нирок, 51. Композиція за будь-яким з пп. 48-50 для за- хронічний гострий гепатит, увеїт, септичний шок, стосування при лікуванні розладу у ссавців. токсичний шок, септичний синдром, кахексію, 52. Фармацевтична композиція, що має власти- інфекційні хвороби, інвазійні хвороби, синдром вості агента для зниження активності людського набутого імунодефіциту, гострий поперечний мівє-

І/-12, яка містить зв'язуючий білок за будь-яким з літ, хорею Хантінгтона, хворобу Паркінсона, хво- пп. 1-21 та фармацевтично прийнятний носій. робу Альцгеймера, інсульт, біліарний первинний 53. Фармацевтична композиція за п. 52, де вказа- цироз печінки, гемолітичну анемію, злоякісні пух- ний фармацевтично придатний носій виконує лини, серцеву недостатність, інфаркт міокарду, функції ад'юванту, корисного для збільшення хворобу Еддісона, спорадичний, полігландуляр- поглинання або дисперсії вказаного зв'язуючого ний дефіцит типу І та полігландулярний дефіцит білка, причому ад'ювантом переважно є гіалуро- типу ІЇ, синдром Шмідта, синдром респіраторного нідаза. дистресу дорослих (гострий), алопецію, кругову 54. Фармацевтична композиція за п. 52 або 53, алопецію, серонегативну артропатію, артропатію, що додатково містить наступний терапевтичний хворобу Рейтера, псоріатичну артропатію, вираз- засіб для лікування розладу, при якому актив- кову колічну артропатію, ентеропатичний синовіт, ність І--12 є шкідливою, переважно де вказаний хламідіоз, артропатію, пов'язану з ієрсинією та додатковий засіб вибирають з групи, що склада- сальмонелою, спондилоартропатію, атероматоз- ється з: терапевтичного засобу, радіофармацев- ну хворобу/артеріосклероз, атопічну алергію, тичного засобу, цитотоксичного засобу, інгібіторів аутоїмунну бульозну хворобу, вульгарний пемфі- ангіогенезу; інгібіторів кінази; блокаторів молекул гус, ексфоліативну пухирчатку, пемфігоїд, лінеа- костимуляції; блокаторів молекулярної адгезії; рний ІдДА дерматоз, аутоіїмунну гемолітичну ане- антицитокінових антитіліл або їх функціональних мію, Кумбс-позитивну гемолітичну анемію, набуту фрагментів; метотрексату; циклоспорину; рапа- злоякісну анемію, ювенільну злоякісну анемію, міцину; ЕК5О6; детектовної мітки або репортеру; міалгічний енцефаліт/синдром хронічної втомле- антагоністу ТМЕ; протиревматичного засобу; міо- ності, хронічний кандидоз шкіри та слизових обо- релаксанту, наркотичних, не-стероїдних протиза- лонок, гігантоклітинний артеріїт, первинний скле- пальних ліків (М5АЇ!ІО), анальгетику, анестетику, розуючий гепатит, кріптогенний аутоіїмунний снодійного засобу, місцевого анестетику, блока- гепатит, синдром набутого імунодефіциту, хворо- тору нервово-м'язової передачі, протимікробного би, пов'язані із набутим імунодефіцитом, гепатит засобу, протипсоріатичного засобу, кортикостеро- В, гепатит С, загальний змінний імунодефіцит їду, анаболічного стероїду, еритропоетіну, вакци- (загальну варіабельну гіпогаммаглобулінемію), нації, імуноглобуліну, імунодепресанту, гормону дилатаційну кардіоміопатію, безплідність жінок, росту, гормонозамісних ліків, радіофармацевтич- порушення овуляції, передчасне порушення ову- ного засобу, антидепресанту, нейролептику, сти- ляції, легеневий фіброз, кріптогенний фіброзую- мулюючого засобу, ліків від астми, бета-агоністу, чий альвеоліт, постзапальну інтерстеціальну ле- геневу хворобу, інтерстеціальний пневмоніт,

інтерстеціальну легеневу хворобу, пов'язану із аденокарциному, ектопічну систолу, комплексну хворобою з'єднувальної тканини, легеневу хво- СНІД-деменцію, алкогольний гепатит, алергійний робу, пов'язану із змішаною хворобою з'єднува- кон'юнктивіт, алергійний контактний дерматит, льної тканини, інтерстеціальну легеневу хворобу, алергійний риніт, відторгнення алотрансплантату, пов'язану із системною склеродермією, інтерсте- альфа-І-антитрипсінову недостатність, боковий ціальну легеневу хворобу, пов'язану із ревматої- амфіотрофічний склероз, анемію, стенокардію, дним артритом, легеневу хворобу, пов'язану із клітинну дистрофію переднього рогу спинного системним червоним вовчаком, легеневу хворо- мозку, анти СОЗ терапію, антифосфоліпідний бу, пов'язану із дерматоміозитом/поліміозитом, синдром, гіперчутливість до антирецепторів, аор- легеневу хворобу, пов'язану із хворобою Шегре- тальні та периферійні аневризми, розшарування на, легеневу хворобу, пов'язану із анкілозуючим аорти, підвищений артеріальний тиск, артеріоск- спондилітом, васкулітну дифузну легеневу хво- лероз, артеріовенозну фістулу, атаксію, фібриля- робу, легеневу хворобу, пов'язану із гемосидеро- цію передсердь (стабільну або конвульсивну), зом, медикаментозну інтерстеціальну легеневу тремтіння передсердь, атріовентрикулярну бло- хворобу, фіброз, радіаційний фіброз, облітерую- каду, В-клітинну лімфому, відторгнення кісних чий бронхіт, хронічну еозинофільну пневмонію, трансплантатів, відторгнення трансплантатів кіс- лімфоцитарну інфільтративну легеневу хворобу, ного мозку, блокаду пучка Гіса, лімфому Буркітта, постінфекційну інтерстеціальну легеневу хворо- опіки, серцеві аритмії, синдром «приголомшено- бу, подагричний артрит, аутоїмунний гепатит, го» серця, серцеві пухлини, кардіоміопатію, запа- аутоїмунний гепатит типу 1 (класичний аутоіїмун- льну реакцію на серцево-легеневий шунт, відтор- ний або ліпоїдний гепатит), аутоїмунний гепатит гнення хрящових трансплантатів, церебелярні типу 2 (анти-Г КМ позитивний гепатит), аутоїмунну кортикальні дегенерації, церебелярні розлади, опосередковану гіпоглікемію, резистентність до хаотичну або мультифокальну передсерцеву інсуліну типу В із акантокератодермією, гіпопара- тахікардію, розлади, викликані хіміотерапією, тиреоз, гостру імунопатологію, пов'язану із тран- хронічну мієлоцитарну лейкемію (СМ), хронічний сплантацією органів, хронічну імунопатологію, алкоголізм, хронічні запальні патології, хронічну пов'язану із трансплантацією органів, остеоарт- лимфоцитарну лейкемію (СІ), хронічну обструк- роз, первинний склерозуючий холангіт, псоріаз тивну легеневу хворобу (СОРО), хронічну саліци- типу 1, псоріаз типу 2, ідіопатичну лейкопенію, латну інтоксикацію, колоректальну карциному, аутоїмунну нейтропенію, ниркові хвороби МОБ, когнестивну серцеву недостатність, кон'юнктивіт, гломерулонефрити, мікроскопічний васкуліт ни- контактний дерматит, легеневе серце, хворобу рок, хворобу Лайма, дискоїдний червоний вовчак, коронарної артерії, хворобу Кройцфельда-Якоба, ідіопатичне безпліддя чоловіків або МОБ, аутої!- культурально-негативний сепсис, кистозний фіб- мунність сперми, розсіяний склероз (усі підтипи), роз, розлади, пов'язані із цитокіновою терапією, симпатичну офтальмію, легеневу гіпертензію, деменцію боксерів, демієлінізуючі хвороби, гемо- викликану хворобою з'єднувальної тканини, син- рагичну лихоманку денце, дерматит, дерматоло- дром Гудпасчера, легеневе проявлення нодозно- гічні стани, діабет, цукровий діабет, діабетичну го поліартриту, ревматичну лихоманку, ревматої- артеріосклеротичну хворобу, хворобу дифузних дний спондиліт, синдром Стілла, системну тілець Леві, дилатаційну когнестивну кардіоміо- склеродермію, синдром Шегрена, синдром Така- патію, розлади підкоркових вузлів, синдром Дау- ясу/артеріїт, аутоїмунну тромбоцитопенію, ідіопа- на у середньому віці, розлади рухів, викликані тичну тромбоцитопенію, аутоїмунну хворобу щи- ліками, які блокують допамінові рецептори цент- товидної залози, гіпертиреоїдоз, зобний ральної нервової системи, чутливість до ліків, аутоїмунний гіпотиреоз (тиреоїдит Хашимото), екзему, енцефаломієліт, ендокардит, ендокрино- атрофічний аутоїмунний гіпотиреоз, первинну патію, епіглотит, вірусну інфекцію Епштейна- мікседему, факогенний увеїт, первинний васкуліт, Барр, обмежений хворобливий набряк шкіри, гостре захворювання печінки, вітиліго, хронічні екстрапірамідні та мозочкові розлади, сімейний хвороби печінки, алкогольний цироз, алкогольне гемофагоцитний лімфогістіоцитоз, відторгнення ураження печінки, холестаз, ідіосинкратичну хво- імплантатів ембріонального тимусу, атаксію Фрі- робу печінки, медикаментозний гепатит, неалко- дрейха, функціональні периферійні артеріальні гольний стеатогепатит, алергію та астму, інфекції розлади, грибковий сепсис, газову гангрену, ви- стрептококів групи В (СВ5), психічні розлади (на- разку шлунку, гломерулонефрит, відторгнення приклад, депресію та шизофренію), хвороби, трансплантату будь-яким органу чи тканиною, опосередковані хелперами Тп2 типу та Тп1 типу, грамнегативний сепсис, грампозитивний сепсис, гострий та хронічний біль (різні типи болю), та грануломи, викликані міжклітинними організмами, такі види раку, як рак легенів, молочної залози, лейкоз ворсистих клітин, хворобу Галлерворде- шлунку, міхуру, товстої кишки, підшлункової за- на-Шпатца, тиреоїдит Хашимото, сінну лихоман- лози, яєчників, простати та прямої кишки та гема- ку, відторгнення серцевих трансплантатів, гемо- топоетичні злоякісні пухлини (лейкемія та лімфо- хроматоз, гемодіаліз, гемолітичний уремічний ма), Абета-ліпопротеїнемію, акроціаноз, гострі та синдром/тромболітичну тромбоцитопенічну пур- хронічні паразитарні та інфекційні процеси, гост- пуру, геморагію, гепатит, аритмії пучка Гіса, ВІЛ- ру лейкемію, гостру лимфобластну лейкемію інфекцію/ВІЛ невропатію, хворобу Ходжкіна, гіпе- (АГ), гостру мієлоїдну лейкемію (АМ), гостру ркінетичні розлади рухів, зверхчутливі реакції, або хронічну бактеріальну інфекцію, гострий пан- гіперчутливу пневмонію, підвищений тиск, гіпокі- креатит, гостру ниркову недостатність, атриальну нетичні розлади рухів, оцінку гіпоталамічно-

гіпофізарної та надниркової систем, ідіопатичну токсичність, трансплантати, травму/геморагію, хворобу Еддісона, ідіопатичний легеневий фіб- гіперчутливі реакції ІП типу, гіперчутливі реакції ІМ роз, цитотоксичність, опосередковану антитіла- типу, нестабільну стенокардію, уремію, уросеп- ми, астенію, дитячу спінальну м'язову атрофію, сис, кропивницю, порок серця, варикозні вени, запалення аорти, інфлуенцу А, вплив іонізуючого васкуліт, венозні хвороби, венозний тромбоз, випромінювання, іридоцикліт/увеїт/неврит зоро- фібриляцію шлуночків, вірусні та грибкові інфек- вого нерву, ішемічно-реперфузійне ураження, ції вітальний енцефаліт/аспетичний менінгіт, ішемічний інсульт, ювенільний ревматоїдний арт- вітальний гемофагоцитний синдром, синдром рит, ювенільну спінальну м'язову атрофію, сар- Верніке-Корсакофф, хворобу Вільсона, відторг- кому Капоші, відторгнення ниркових трансплан- нення ксенотрансплантатів будь-яким органом чи татів, легіонеллу, лейшманіоз, проказу, ураження тканиною. кортикоспінальної системи, ліпідему, відторгнен- 58. Застосування зв'язуючого білка за будь-яким ня трансплантатів печінки, лімфодему, малярію, з пп. 1-21 у комбінації із другим агентом, вибра- злоякісну лимфому, злоякісний гістіоцитоз, злоя- ним з групи, яка складається з буденозиду, епі- кісну меланому, менінгіт, менінгококемію, мета- дермального фактора росту, кортикостероїдів, болічну/діоматичну мігрені, мітохондріальний циклоспорину, сульфасалазину, аміносаліцила- мультисистемний розлад, змішану хворобу з'єд- тів, б-меркаптопурину, азатіопріну, метронідазо- нувальної тканини, моноклональну гаммапатію, лу, інгібіторів ліпоксигенази, мезаламіну, олсала- множинну мієлому, множинні системні дегенера- зину, балсалазиду, антиоксидантів, інгібіторів ції (Менцеля Дежеріна-Томаса, Шай-Драгера та тромбоксану, антагоністів І--1 рецептору, анти-1їЇ -

Мачадо-Джозефа), міастенію гравіс, 138 моноклональних антитіл, анти-ІЇ-б6 монокло- тусобасіепит аміит іпігасепшіаге, туберкульозну нальних антитіл, факторів росту, інгібіторів елас- бацилу, мієлодиспластичний синдром, інфаркт тази, піридиніл-імідазольних сполук, антитіл чи міокарду, ішемії міокарду, носоглоткову карцино- агоністів ТМЕ, СТ, 1С-1, 1-2, 1-6, 1-7, 1-8, 11-15, му, хронічну легеневу хворобу новонароджених, І/-16, 11-18, ЕМАРА-ЇЇ, ЯМ-С5Е, ЕРОЕ та РОСБЕ, ан- нефрит, нефроз, нейродегенеративні хвороби, титіл 02, СО03, 204, СсО8, с025, с028, СО30, нейрогенні і м'язові атрофії, нейтропенічну лихо- ср40, 2045, С069, 2090 або їх лігандів, метот- манку, неходжкінівську лімфому, оклюзію абдомі- рексату, циклоспорину, ЕК5БОб, рапаміцину, міко- нальної артерії та її відгалужень, оклюзивні арте- фенолят мофетилу, лефлуноміду, М5АЇЮ, ібу- ріальні хвороби, ОКТЗ3 терапію, орхіт/епідідіміс, профену, кортикостероїдів, преднізолону, орхіт/реверсної вазектомії, органомегалію, остео- інгібіторів фосфодіестерази, агоністів аденозину, пороз, відторгнення трансплантатів підшлункової протитромботичних засобів, додаткових інгібіто- залози, карциному підшлункової залози, пара- рів, адренергічних агентів, ІЕАК, МІК, ІКК, рзв, неопластичний синдром/гіперкальцемію злоякіс- МАР інгібіторів кінази, інгібіторів І--1Д конвертую- них пухлин, відторгнення трансплантату паращи- чого фермента, інгібіторів ТМЕо конвертуючого товідної залози, запалення тазових органів, фермента, інгібіторів Т-клітинної сигналізації, хронічний алергійний риніт, перікардіальну хво- інгібіторів металопротеїнази, сульфасалазину, робу, периферійну атеросклеротичну хворобу, азатіоприну, б-меркаптопурину, інгібіторів ангі- периферійні судинні розлади, перитоніт, злоякіс- отензин-конвертуючого фермента, розчинних ну анемію, пневмоцистну пневмонію, пневмонію, рецепторів цитокінів, розчинного рецептора р5о5 синдром РОЕМ5 (полінейропатію, органомега- ТМЕ, розчинного рецептора р75 ТМЕ, 5і!--1ВІ, 5іЇ- лію, ендокринопатію, моноклональну гаммапатію 1ВІЇ, 51/-6Е, протизапальних цитокінів, Ї--4, 1Ї-10, та синдром змін шкіри), постперфузійний синд- П/-11, 1-13 та ТОЕД. ром, постгемодіалізний синдром, прееклампоїї, 59. Застосування за п. 56 або 57, де лікарський синдром прогресуючого супрануклеолярного па- засіб вводять за способом, вибраним з паренте- ралічу, первинну легеневу гіпертензію, рентгено- рального, підшкірного, внутрішньом'язового, вну- терапію, феномен та хворобу Рейнауда, хворобу трішньовенного, внутрішньосуглобового, інтра-

Рейнауда, хворобу Рефсума, регулярну тахікар- бронхіального, інтраабдомінального, дію з вузькими комплексами ОК5, реноваскуляр- інтракапсулярного, внутрішньохрящового, внут- ну гіпертензію, реперфузійне ураження, рестрик- рішньопорожнинного введення у шлуночки голо- тивну кардіоміопатію, саркоми, склеродерму, вного мозку, внутрішньо порожнинного, інтраце- сенільну хорею, сенільну деменцію типу тілець ребрального, інтрацеребровентрикулярного, повидних клітин, відторгнення шкірою аллотранос- внутрішньошлункового, внутрішньопечінкового, плантатів, синдром змін шкіри, відторгнення тра- інтраміокардального, ендостального, внутрішньо- нсплантатів тонкої кишки, тверді пухлини, тазового, інтраперікардіального, інтраперитонеа- специфічні аритмії, спінальну атаксію, спіноцере- льного, інтраплеврального введення у простату, белярні дегенерації, стрептококовий міозит, стру- внутрішньолегеневого, інтраректального, внутрі- ктурні ураження мозочка, підгострий склерозую- шньониркового, інтраретинального, внутрішньос- чий паненцефаліт, сінкопе, сифіліс серцево- пінального, інтрасиновіального, інтраторакально- судинної системи, загальну анафілактичну реак- го, внутрішньоматкового, внутрішньоміхурового, цію, синдром системної запальної реакції, ювені- болюсного, вагінального, ректального, букально- льний ревматоїдний артрит Із системним почат- го, сублінгвального, інтраназального та трансде- ком, Т-клітинну або РАВ АГ, телеангіектазію, рмального способів. облітеруючий тромбоангіт, тромбоцитопенію,

Перехресне посилання на попередню заявку них захворюваннях та прозапальною активністю

У цій заявці заявлено пріоритет тимчасової ІЕМ-у, 1--12 може відігравати головну роль у пато- патентної заявки США Мо 60/695,679, поданої 30 логії, пов'язаній із багатьма аутоїмунними та запа- червня 2005 р. льними захворюваннями, такими, як ревматоїдний

Ця заявка є продовженням патентної заявки артрит (КА), розсіяний склероз (М5), псоріаз (РБ)

США Ме 09/534717, що була подана 24 березня та хвороба Хрону (СО). 2000 р. (видана як патент США номер 6,914,128) Люди, хворі на М5, продемонстрували збіль- під назвою "Людські антитіла, що зв'язують людсь- шення експресії І/-12, що документально підтвер- кі 1-12 та способи їх одержання". Ця патентна джено рівнями р40 ІРНК в бляшках гострого М5 заявка повністю та патенти, видані на її основі, (МУіпанадеп еї аї., (1995) У. Ехр. Мей. 182:1985- цим включені до цієї заявки шляхом посилання. 1996). Крім того, стимулювання ех мімо антигенп-

Посилання на угоду про спільні дослідження резентуючих клітин Т клітинами, що експресують

Вміст цієї заявки відповідає положенням угоди СО401, взятими від пацієнтів з М5, призводило до про спільні дослідження, що була укладена між збільшення продукування 1-12 порівняно із конт- "Ргоїєїп ЮОевідп Гарв, Іпс." та "АБроїйї Гарогаюгієв" рольними Т клітинами, що узгоджувалось із тим 14 грудня 2005 р., та спрямований на антитіла, спостереженням, що взаємодії СО40/С0401. є по- створені рекомбінантними способами. тужними індукторами 1-12. Підвищені рівні 1-12

Галузь винаходу р70 були детектовані у синовіальній рідині пацієн-

Даний винахід стосується зв'язуючих білків ІІ- тів з КА порівняно із здоровими пацієнтами конт- 12р40 і конкретно їх застосування для профілакти- рольних груп (Могіа еї аї. (1998) Ай, апа ки та/або лікування гострих та хронічних запаль- Апеийтаї. 41:306-314). Профіль експресії цитокіно- них хвороб. вої інформаційної рибонуклеїнової кислоти (ІРНК)

Передумови створення винаходу у синовіальній рідині КА визначав, головним чи-

Людський інтерлейкін-12 (1-12) є цитокіном, ном, цитокіни ТП! (Виспї еї аІ. (1996) Сіїп. Ехр. що має унікальну структуру та плейотропний Іттипої. 103:347-367). ІІ -12 також, очевидно, віді- ефект (Кобрауавзні, еї а). (1989) у. Ехр. Мед. грає важливу роль у патології, пов'язаній із хворо- 170:827-845; бедег, еї аі. (1993) Ргос. Маї). Асай. бою Крона. Підвищена експресія ІМЕ-у та 11-12

Зсі. 90:10188-10192, І іпд, еї а. (1995) У. Ехр. Мед. спостерігалась у кишковій слизовій оболонці паці- 154:116-127; Родіазкі, еї аї. (1992) Агсн. Віоспет. єнтів із цією хворобою (Раїв5 еї аї. (1994) У. Інтер-

Віорпуз. 294:230-237). 1І--12 відіграє головну роль у ферон Вев. 14:235-238; Рагопсені еї а. (1997) Ат. патології, пов'язаній із декількома захворювання- У. Раш. 150:823-832; Мопієієопе еї аї. (1997) ми, що включають імунні та запальні реакції. Савігоепі. 112:1169-1178, та Веїгтері еї аї. (1998)

Огляд 1І--12, його біологічної активності та ролі, яку Ат. У. Раш. 152:667-672). Профіль експресії цито- він відіграє у захворюванні, можна знайти у кіну Т клітин з власних пластинок слизової оболон-

Типепієгі, сх. (2003) Маї. Вем. Іттип. 3:133-146. За ки пацієнтів з СО є характеристикою, переважно, своєю структурою, 1-12 являє собою гетеродиме- відклику ТИ, включаючи значно підвищені рівні рний білок (відомий під назвою "білок р70"), що ІЕМ-у (Бивв, еї аї. (1996) у. Іттипої. 157:1261- містить субодиницю 35 кДа (р35) та субодиницю 1270). Більш того, зрізи тканин товстої кишки, взяті 40 кДа (р40), зв'язані дисульфідним містком. Гете- у пацієнтів з СО, демонструють надлишок макро- родимерний білок продукується, головним чином, фагів, що експресують ІГ-- 12, та Т клітин, що екс- антигенпрезентуючими клітинами, такими, як мо- пресують ІРМ-у (Раггопопі еї а. (1997) Ат. у. Рай. ноцити, макрофаги та дендровидні клітини. Ці ви- 150:823-832). ди клітин також секретують надлишок субодиниці П-23 є також гетеродимерним цитокіном та р40 по відношенню до субодиниці р70. Субодиниці належить до сімейства, що складається з п'яти раб та рЗ5 не зв'язані генетично, та ніколи не пові- таких гетеродимерних цитокинів, включаючи 1-12 домлялось про те, що вони мають біологічну акти- та 1-27 (Типспієгі еї аї., (2003) Іттипійу 19:641- вність, хоча гомодимер р40 може функціонувати як 644). І/-23 має ідентичність до такої субодиниці антагоніст І--12. р, як ІІ-12, проте він пов'язаний із субодиницею

З функціональної точки зору, 1І--12 відіграє го- р19 через дисульфідний зв'язок. Субодиниця р19 ловну роль у регулюванні рівноваги між антиген- структурно подібна до 1-6, гранулоцитарного ко- специфічними лімфоцитами Т хелперного типу 1 лонієстимулюючого фактора (0-С5Е), та субоди- (ТП) та типу 2 (Тп2). Клітини Тит та Тп2 обумов- ниці р35 ІІ-12. І/-23 продукується подібними типа- люють початок та розвиток аутоїмунних захворю- ми клітин, такими, як 1-12, а її рецептор вань, а 1-12 є необхідним у регулюванні дифере- експресується Т клітинами, МК клітинами та фаго- нціації та визрівання Тп1-лімфоцитів. Цитокіни, що цитними та дендровидними гематопоетичними вивільнюються клітинами ТпП!, є запальними та клітинами. І/-23 опосередковує передачу сигналів містять інтерферон гама (ІРМ-у), 1-2, та лімфоток- шляхом зв'язування гетеродимерного рецептора, син (І.Т). Клітини Тп2 секретують 1І--4, 1І--5, 1Ї--6, ТІ що містить І/-238. та ІІ -12бета1. Субодиниця І - та 1-13 для сприяння гуморальному імунітету, 12реїа1 також входить до складу рецептора 1-12, виникненню алергічних реакцій та імуносупресії. У що містить ІІ -120бета! та ІІ-12бета2. І/-23 має відповідності з перевагою реакцій ТИ в аутоїмун- сумісні функції перекривання із ІІ -12 (шляхом сти-

мулювання продукування ІЄМ-у, диференціації Тп1 субодиницю раб 11-12 (ПІ/-12р40). Переважно, ан- клітин та активації антигенпрезентуючих функцій титіла зв'язують 1-12 та/або 1-23. Переважно, дендровидних клітин), проте він селективно викли- антитіла здатні нейтралізувати 1-12 та/або 1-23. кає проліферацію Т клітин пам'яті (Орртапп еї а). Даний винахід забезпечує нове сімейство зв'язую- (2000) Іттипйу 13:715-725, Ратат, еї а). (2002) . чих білків, СОВ-імплантоване антитіла, олюднені

Іттипої. 168:5699-5708). антитіла та їх фрагменти, що здатні зв'язувати ІІ--

Роль 1-23 в аутоїмунному запаленні була час- 12р40, зв'язувати з високою афінністю та зв'язува- тково проаналізована у дослідженнях р19 нокау- ти та нейтралізувати 1-12 та/або 1-23. тованих мишей (Мигрпу сеї аї. 9. Ехр. Меа. Стислий опис винаходу 198:1951-1957; Сца єї аї. (2003) Майште 421:744- Даний винахід стосується І-12р40 зв'язуючих 748). Дослідження продемонстрували, що 1-23 білків, особливо антитіл, здатних зв'язувати субо- модулює імунний відклик на інфікування (див., диницю р40 людського ІЇ/-12 та субодиницю р40 наприклад, Рішпопеп, еї а. (2002) 9. Іттипої. людського 1-23. Додатково, даний винахід забез- 169:5673-5678; Вгорего, еї аї. (2002) 9. Іпіепегопе печує способи одержання та застосування І/--

СуюкКіпе Невз. 22:641-651; ЕїКіп5, єї аї. (2002) 12р40 зв'язуючих білків.

Іптесіоп. Іттипійу 70:1936-1948; Соорег, єї аї. Один аспект даного винаходу стосується зв'я- (2002) 9. Іттипої. 168:1322-1327). Вважається, що зуючого білка, який містить антиген-зв'язуючий

І/-23 задіяний в імунно-опосередкованих запаль- домен, здатний зв'язувати субодиницю раб 1-12. них хворобах (І апдгізп еїаІ. (2004) Іттипоіодісаї В одному втіленні, антиген-зв'язуючий домен міс-

АВеміємз 202: 96-105). тить, щонайменше, один СОК, що містить аміно-

Через роль, яку відіграє людський 1І--12 у бага- кислотну послідовність, вибрану з групи, яка скла- тій кількості людських розладів, були розроблені дається з: стратегії лікування, спрямовані на інгібування або СОВ-НІ. Хі-Хо-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7 (5ЕО ІО Ме: 55), протидію активності І--12. Зокрема, шукали анти- де; тіла, що зв'язують та нейтралізують 1І-12, як засо- Хі являє собою 0, К, Т або 5; би інгібування активності останніх. Деякими з най- Хг являє собою У, 5 або Т; більш ранніх антитіл були мишачі моноклональні Хз являє собою У, М, о, МУ, 5 або Е; антитіла (тАбБ), що секретуються гібридомами, Ха являє собою І або М; одержаними з лімфоцитів мишей, імунізованих ІІ - Х5 являє собою Н, о, Е або М; 12 (див., наприклад, бігорег еї аї., публікація Мо Хв являє собою У, або відсутня; та

МО 97/15327; Саїе|)у вії аІ., МУ0О9937682 Аг; Мешигаїй Х7 являє собою 5, або відсутня; еї а!., У. Ехр. Мей. 182:1281-1290 (1995); бисптатт СОВ-Н2О. Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Хо-Хв-Хе-Х10-Х11-Х12- еї аї., У. Іттипої. 26:934-938(1996)). Застосування Хіз-Хі4-Х15-Х16-Х17 Х18-Х19-Х2о іп мімо цих мишачих 1-12 антитіл обмежено через (ЗЕО ІО Мо: 56), де; проблеми, пов'язані із введенням мишачих антитіл Хі являє собою Н, 0, о, МУ, 5, У або ЕЕ; людям, такі, як короткий час напівжиття сироватки, Хг являє собою І або Е; неспроможність запускати певні функції людського Хз являє собою У, МУ, Г., 5, М, О або о; ефектору та активація небажаного імунного відк- Ха являє собою МУ, Р, Н, Т або 5; лику на мишачі антитіла у людини (реакція "люд- Хв являє собою 0, 0, Е, А або І; ського анти-мишачого антитіла" (НАМА)). Хв являє собою 0, б, 5, Т або М;

Одним з підходів для подолання проблем, по- Х7 являє собою 0, о, 5 або Р; в'язаних із застосуванням мишачих антитіл є ство- Хв являє собою К, М, 5, Е, Т або Н; рення повністю людських антитіл, таких, як описані Хе являє собою У, Т, Р, І або М; у Заїгеїй еї аї., публікація РСТ Мо УМО 00/56772 А1. Хіо являє собою У, М, Т, Н, К, 5 або о;

Інші підходи до подолання проблем, пов'язаних із Хії являє собою М або У; застосуванням повністю мишачих антитіл для лю- Хіг2 являє собою Р, М, А, О або 5; дей включали способи генної інженерії для ство- Хіз являє собою 5, Е, О або Р, рення антитіл, що є більш "людиноподібними". Хі« являє собою Г., К, 0, Т або У;

Наприклад, були одержані химерні антитіла, в яких Хіз являє собою К, Е, М, М, Е або А; варіабельні регіони ланцюгів антитіл мають миша- Хів являє собою 5, К, О, Р, або відсутня; че походження, константні області ланцюгів анти- Хі? являє собою 0, с, КЕ, або відсутня; тіл мають людське походження (Чипудпапе5, еї аї. Хів являє собою РЕ, або відсутня; (1990) Сапсег Нев5. 50:1495-1502; Вгомп еї аї. Хів являє собою О, або відсутня; та (1991) Ргос. Май. Асай. Осі. 88:2663-2667; Хго являє собою 0, або відсутня;

Кешерогоцдп еї аї. (1991) Ргої. Епдіпеег. 4:773- СОВ-НЗ. Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Хо-Хв-Хе-Х10-Х11-Х12- 783). Такі химерні антитіла до 1-12 також описані Хіз (ЗЕО ІО Мо: 57), де; у Регії евї а!., публікація РСТ Мо УУМО2002097048А2. Хі являє собою К, М або УУ;

Проте, через те, що ці химерні антитіла продов- Хг являє собою 0, Т, К, Р або Н; жують зберігати мишачі змінні ланцюгові послідо- Хз являє собою І, Р, РЕ, М або 0; вності, вони все ще можуть активувати небажану Ха являє собою РЕ, М, У, Е або А; імунну реакцію, реакцію людського анти-химерного Х5 являє собою 5, М, б, А або г; антитіла (НАСА), особливо у випадках тривалих Хе являє собою А, У, І, Е або М; періодів введення. Х7 являє собою М, А, 0, І. або Е;

У даній галузі існує потреба в антитілах з пок- Хв являє собою 0, М, У або МУ; ращеними властивостями, які здатні зв'язувати Хо являє собою У, О або М;

Хіо являє собою У, А, або відсутня; ну послідовність, вибрану з групи, що складається

Хії являє собою М, або відсутня; із залишків 31-37 5ЕБО ІО Мо: 35; залишків 52-67

Хіг являє собою 0 або відсутня; та ЗЕО ІО Мо: 35; залишків 100-108 5ЕО ІЮ Мо: 35;

Хіз являє собою У або відсутня; залишків 24-34 5ЕО ІО Ме: 36; залишків 50-56 5ЕО

СОВ-І1.. Хі-Хо-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хе-Х10-Х11-Х12- ІО Ме: 36; залишків 89-97 5БО ІЮО Ме: 36; залишків

Хіз-Х14-Хі5 (ЗЕО ІЮ Ме: 58), де: 31-37 5ЕО ІО Ме: 37; залишків 52-67 5ЕО І Ме: 37;

Хі являє собою К або г; залишків 100-109 5ЕО ІО Ме: 37; залишків 24-34

Х2 являє собою А; ЗЕО ІО Ме: 38; залишків 50-56 5БО ІЮО Мо: 38; за-

Хз являє собою 5; лишків 89-97 5ЕО ІЮО Ме: 38; залишків 31-35 5ЕО ІЮ

Ха являє собою О або Е; Мо: 39; залишків 50-66 5ЕО ІЮО Ме: 39; залишків 99-

Х5 являє собою 5 або М; 106 5ЕО ІО Мо: 39; залишків 24-34 5ЕО ІО Мо: 40;

Хв являє собою У або І; залишків 50-56 5ЕО ІО Ме: 40; залишків 89-97 5ЕО

Х7 являє собою 5, С або 0; ІО Ме: 40; залишків 31-35 5БО ІЮО Ме: 41; залишків

Хв являє собою М, Т або К; 50-66 5БО ІЮО Мо: 41; залишків 99-106 5ЕО ІЮО Мо:

Хо являє собою 0, М або У; 41; залишків 24-34 5ЕО ІО Ме: 42; залишків 50-56

Хіо являє собою У, Сб або; ЗЕО ІО Ме: 42; залишків 89-97 5БО ІЮО Мо: 42; за-

Хії являє собою А, І або Н; лишків 31-35 5ЕО ІЮО Ме: 43; залишків 50-66 5ЕО І

Хіг являє собою 5 або відсутня; Мо: 43; залишків 99-106 5БО ІЮО Ме: 43; залишків

Хіз являє собою Е або відсутня; 24-34 5БО ІО Ме: 44; залишків 50-56 5ЕО ІЮО Мо: 44;

Хі« являє собою М або відсутня; та залишків 89-97 5ЕО ІО Ме: 44; залишків 31-35 5ЕО

Хіз являє собою М або відсутня; ІО Ме: 45; залишків 50-66 5БО ІЮО Ме: 45; залишків

СОВ-12. Хі-Хо-Хз-Ха-Хв5-Хв-Х7-Хв (ЗБО 10 Ме: 99-101 5ЕО ІО Ме: 45; залишків 24-34 5ЕО ІО Мо: 59), де; 46; залишків 50-56 5ЕО ІО Ме: 46; залишків 89-97

Хі являє собою У або 5; ЗЕО ІО Ме: 46; залишків 31-35 5БО ІЮО Мо: 47; за-

Х2 являє собою А або Т; лишків 50-66 5ЕО ІЮО Ме: 47; залишків 99-106 5ЕО

Хз являє собою 5 або А; ІО Ме: 47; залишків 24-34 5БО ІЮО Ме: 48; залишків

Ха являє собою М, Н, 5 або 0; 50-56 5ЕО І Мо: 48; залишків 89-97 5ЕО ІЮ Ме: 48;

Х5 являє собою РЕ, М або 5; залишків 31-35 5ЕО ІО Ме: 49; залишків 50-66 5ЕО

Хе являє собою У, О або |; ІО Мо: 49; залишків 99-111 5ЕО ІО Ме: 49; залишків

Х7 являє собою Т, 5 або о; та 24-38 5БЕО ІО Ме: 50; залишків 53-60 5ЕО ІЮО Мо: 50;

Хв являє собою 5 або відсутня; залишків 93-101 5ЕО ІЮ Ме: 50; залишків 31-37 та ЗЕО ІО Ме: 51; залишків 52-67 5БО ІЮО Мо: 51; за-

СОВ-1І3. Хі-Х2-Хз3-Ха-Х5-Хв-Х7-Хв-Хо (ЗЕО ІЮ Мо: лишків 100-109 5ЕО ІО Ме: 51; залишків 24-34 5ЕО 60), де; ІО Ме: 52; залишків 50-56 5БО ІЮО Ме: 52; залишків

Хі являє собою 0; 89-97 5ЕО І Мо: 52; залишків 31-35 5ЕО ІЮ Ме: 53;

Хг2 являє собою 0); залишків 47-66 5ЕО ІЮО Ме: 53; залишків 99-107

Хз являє собою 0, У або 5; ЗЕО ІО Ме: 53; залишків 24-34 5БО ІЮО Мо: 54; за-

Ха являє собою У, М, К або І; лишків 50-56 5ЕО ІО Ме: 54; та залишків 89-97 5ЕО

Х5 являє собою М, Т, 5 або Е; ІО Мо: 54. У переважному втіленні, зв'язуючий бі-

Хв являє собою 5, У, М або МУ; лок містить, щонайменше, З СОК, вибраних з гру-

Х7 являє собою Р; пи, що включає послідовності, описані вище.

Хв являє собою МУ, Е, У, І або Р; та Більш переважно, З СОБК вибирають з наборів

Хе являє собою Т або 5. СОК з варіабельними регіонами, вибраними з гру-

Переважно, антиген-зв'язуючий домен містить, пи, що включає: щонайменше, один СОК, що містить амінокислот-

МнібанабрсОВ 11

МЕїба4набрсоВв

МНЛАвнабірсов 11111

МЕТАвбнабірсОВ 111 мняОвнабірсоВ 77771111

МОловнабрсов 77777771 11111111 умнзстнабрсОВ 77777711 11111111

МізвлнабрсОВ 777777777777777771111111111Ї111111111111111111111111111111111

УНБЕВнабірСОВ 77777771 11111111

МЕБЕВнабірСОВ 77777711 11111111 унвЕ набірСОВ 77777771 11111111

Ме8Е набрСОВ 77777771 11111111 уМнінвбнабрсоВ 77777771 ЇЇ

Мелнвбнабрсов 77777771 11111111 уМнЗАтТнабрсоВв 77777771 11111111

МЕзАТТтнабрСсОВ 77777771 уМнаванабрсОВ 77777711

МраванабрсОВ 77777711 11111111

МнусзнабрсОВ/////777777777777771111111111111111111111 та

МотезнабрсоВ 77777771 11111111

В одному втіленні, зв'язуючий білок за даним людський акцепторний каркас має, щонайменше, винаходом містить, щонайменше, два набори СОК одне амінокислотне заміщення у ключовому за- з варіабельними доменами. Більш переважно, два лишку каркасного регіону, де ключовий залишок набори СОЕК з варіабельними доменами вибира- вибирають з групи, що складається із залишку, ють з групи, що включає: МН 104 набір СОЕ та МІ. суміжного із СОК; залишку сайту гліколізування; 104 набір СОК; МН 1Аб6 набір СОЕ та МІ. 1А6 набір рідкий залишок; залишку, здатного взаємодіяти із

СО; МН 108 набір СОЕ та МІ 108 набір СО; МН одиницею р4і0 людського 1-12; а залишку, здатно- 307 набір СОЕ та МІ 307 набір СО; МН 5Е8 на- го взаємодіяти із СОЕ; канонічний залишок; конта- бір СОЕ та МІ 5Е8 набір СОК; МН 8Е1 набір СОВ ктний залишок між варіабельною ділянкою важкого та МІ. 8Е1 набір СО; МН 1НбЄ набір СОЕ та МІ 1н6 ланцюга та варіабельною ділянкою легкого ланцю- набір СОК; МН ЗА11 набір СОЕ та МІ. ЗА11 набір га; залишку у межах зони Верньє; та залишку в

СО; МН 484 набір СОЕ та У. 484 набір СОК; та області, що перекривається між визначеним

МН 703 набір СОЕ та МІ 7053 набір СОВ. СпоїШшіа варіабельним СОКІ важкого ланцюга та

В іншому втіленні, зв'язуючий білок, описаний визначеним Кабатом каркасом першого важкого вище, додатково містить людський акцепторний ланцюга. Переважно, ключовий залишок вибира- каркас. Переважно, людський акцепторний каркас ють з групи, що складається з ЗН, 5Н, ТОН, 11Н, містить амінокислотну послідовність, вибрану з 12Н, 1ЗН, 15Н, 16Н, 18Н, 19Н, 2ЗН, 24Н, 25Н, ЗОН, групи, що складається з: ЗЕО ІО Ме: 6; 5ЕБО ІЮО Мо: АН, 44Н, 46Н, 49Н, 66Н, 68Н, 71Н, 7ЗН, 74Н, 75Н, 7; 5ЕО ІЮО Ме: 8; 5ЕО ІЮО Ме: 9; 5ЕО ІЮО Ме: 10; 5ЕО 76Н, 77Н, 78Н, 79Н, 81Н, 82Н, 82АН, 82ВН, 82СН,

ІО Ме: 11; 5ЕО ІЮО Ме: 12; ЗЕО ІО Мо: 13; 5ЕО ІЮО Ме: 8ЗН, 84Н, 85Н, 86Н, 87Н, 89Н, 9З3Н, 98Н, 1О8Н, 14; 5ЕБЕО ІО Ме: 15; 5БО ІО Ме: 16; 5ЕО 10 Ме: 17; 109Н, 11,21, 31,71, 8,91, 101, 11,12, 13, 15, 5ЕО ІЮО Ме: 18; 5ЕО ІО Ме: 19; 5ЕО ІО Ме: 20; 5ЕО 171, 191, 201, 211, 221, 361, 411, 421, 431, 45І,

ІО Ме: 21; 5ЕО ІЮО Ме: 22; ЗЕО ІО Мо: 23; ЗЕО ІЮО Ме: 461, 581, 601, 621, 631, 671, 701, 731, 741, 771, 24; ЗБОЮ Ме: 25; 5БО ІЮО Ме: 26; 5ЕБЕО ІЮО Мо: 27; 781, 791, 801, 83, 851, 871, 1041 та 1061. Пере-

ЗЕО ІЮО Ме: 28; 5БО ІЮО Ме: 29; 5ЕО ІО Ме: 30; 5ЕО важно, людський акцепторний каркас містить, що-

ІО Ме: 31; 5ЕО ІО Ме: 32; 5БЕО ІЮО Ме: 33; 5ЕО ІЮО Мо: найменше, одне амінокислотне заміщення у кар- 34, 5БЕО ІЮО Мо: 92, 5БО ІО Мо: 93, 5ЕО ІЮО Мо: 94, касному регіоні, де амінокислотна послідовність

ЗЕО ІО Ме: 95, 5ЕО ІЮО Мо: 96 та 5БЕО ІЮО Мо: 97. має, щонайменше, 6595 ідентичність до послідов-

У переважному втіленні, зв'язуючий білок є ності вказаного людського акцепторного каркасу та

СОвВ-імплантованим антитілом або його антиген- містить, щонайменше, 70 амінокислотних залиш- зв'язуючою частиною, що здатні зв'язувати субо- ків, ідентичних вказаному людському акцепторно- диницю раб 1-12 або І/-23. Переважно, СОВ- му каркасу. імплатноване антитіло або його антиген-зв'язуюча У переважному втіленні, зв'язуючий білок є частина містять один чи більше СОРБ, описаних олюдненим оантитілом або його антиген- вище. Більш переважно, СОК-імплантоване анти- зв'язуючою частиною, що здатні зв'язувати субо- тіло або його антиген-зв'язуюча частина містять, диницю раб 1-12 або 1-23. Переважно, олюднене щонайменше, один варіабельний домен, що має антитіло або його антиген-зв'язуюча частина міс- амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що тить один чи більше СОЕ, описаних вище. Більш складається з: 5ЕО ІЮО Ме: 61; 5ЕО ІО Ме: 62; 5ЕО переважно, олюднене антитіло або його антиген-

ІО Ме: 63; 5БЕО ІО Ме: 64; 5ЕО ІО Мо: 65; 5ЕО ІЮО Мо: зв'язуюча частина містить три чи більше СОК, 66; 5Е6О ІО Ме: 67; 5БО ІЮО Мо: 68; 5БО ІЮО Мо: 69; описаних вище. Найбільш переважно, олюднене

ЗЕО ІЮО Ме: 70; 56 ІО Ме: 71; 5ЕО ІО Ме: 72; 5ЕО антитіло або його антиген-зв'язуюча частина міс-

ІО Ме: 73; 5БО ІО Ме: 74; БО ІО Ме: 75; 5БЕО ІЮО Мо: тить шість СОК, описаних вище. 76; 5ЕО ІО Ме: 77; та 5ЕО ІО Ме: 78. Найбільш пе- В іншому втіленні винаходу, що заявляється, реважно, СОБ-імплантоване антитіло або його олюднене антитіло або його антиген-зв'язуюча антиген-зв'язуюча частина містять два варіабельні частина містить, щонайменше, один варіабельний домени, вибрані з групи, що описана вище. Пере- домен, що має амінокислотну послідовність, виб- важно, СОК-імплантоване антитіло або його анти- рану з групи, що складається з ЗЕО ІО Ме: 79, БЗЕО ген-зв'язуюча частина містять людський акцептор- ІО Ме: 80, 5ЕО ІО Мо: 81, 5БЕО ІЮО Ме: 82, 5ЕО ІЮО Мо: ний каркас. Більш переважно, людський 83, 5БЕО ІЮО Мо: 84, 5ЕБО ІО Мо: 85, 5ЕБЕО ІЮО Мо: 86, акцепторний каркас є лише одним з людських ак- ЗЕО ІО Ме: 87, 5БЕО ОО Мо: 88, БО ІЮО Мо: 89, 5ЕО цепторних каркасів, описаних вище. ІО Ме: 90, 5ЕО ІО Мо: 91, 5ЕО ІЮО Мо: 98, 5ЕО ІЮО Мо:

У переважному втіленні, зв'язуючий білок є 99, 5БО ОО Ме: 100, БО ІО Ме: 101, 5ЕБЕО ІЮ Мо: олюдненим антитілом чи його антиген-зв'язуючою 102, АМО 5ЕО ІО Ме: 103, 5ЕО 10 Ме: 104, 5ЕО ІЮ частиною, що здатні зв'язувати субодиницю р40 ІІ - Ме: 105, 5ЕО ІО Ме: 106, 5ЕО І Ме. 107, 5ЕО І 12 або 1І--23. Переважно, олюднене антитіло чи Мо: 108 та 5ЕО ІО Ме: 109. Більш переважно, олю- його антиген-зв'язуюча частина містять один чи днене антитіло або його антиген-зв'язуюча части- більше СОК, описаних вище, що включені до варі- на містить два варіабельні домени, вибрані з гру- абельного домену людського антитіла людського пи, описаної вище. Найбільш переважно, акцепторного каркасу. Переважно, варіабельний олюднене антитіло або його антиген-зв'язуюча домен людського антитіла є консенсусним людсь- частина містить два варіабельні домени, де вказа- ким варіабельним доменом. Більш переважно, ні два варіабельні домени мають амінокислотні послідовності, вибрані з групи, що складається з що становить 10-77 М - 108 М; 109 М - 109 М; 109 М

ЗЕО ІО Мо: 67 та 5ЕО ІЮО Ме: 79, 5ЕО І Ме: 80 та -1079 М; 1079 - 1071 М; 10711 М - 10712 М; або 1072 -

ЗЕО ІО Ме: 81, 5ЕБЕО ІО Мо: 82 та 5ЕБЕО ІЮО Мо: 83, М 1073 М. Одне втілення даного винаходу забез-

ЗЕБЕО ІО Мо: 84 та 5ЕО ІЮО Мо: 85, 5ЕО ІО Мо: 86 та печує конструкцію антитіла, що містить будь-який

ЗЕО ІО Ме: 87, 5ЕБЕО ІО Мо: 88 та 5ЕБЕО ІЮО Мо: 89, зі зв'язуючих білків, описаних вище, та лінкерний

ЗБОЮ Мо: 90 та 5ЕО ІЮО Мо: 91, 5ЕО ІО Ме: 98 та поліпептид або імуноглобулін. У переважному вті-

ЗБОЮ Мо: 99, 5ЕО ІЮ Ме: 100 та 5ЕО ІО Ме: 101, ленні, конструкцію антитіла вибирають з групи, що

ЗБОЮ Ме: 102 та 5ЕО ІО Ме: 103, 5ЕО ІО Ме: 104 включає молекулу імуноглобуліну, моноклональне та 5ЕО ІЮ Ме: 105, 5БО ІЮ Мо: 106 та 5ЕО ІЮО Мо: антитіло, химерне антитіло, СОК-імплантоване 107, та БЕО ІЮО Мо: 108 та 5ЕО ІО Ме: 109. антитіло, олюднене антитіло, Раб, Рар", ЕК(ар)2, Ем,

У переважному втіленні, зв'язуючий білок, дисульфідно зв'язаний Ем, 5СсЕмМ, антитіло з одино- описаний вище, містить константний домен важко- чним доменом, біспецифічний рекомбінантний го ланцюга імуноглобуліну, вибраний з групи, що фрагмент, мультиспецифічне антитіло, подвійно- включає людський ІДМ константний домен, людсь- специфічне антитіло та біспецифічне антитіло. У кий ЇДО1 константний домен, людський дс2 конс- переважному втіленні, конструкція антитіла міс- тантний домен, людський ДОЗ константний домен, тить константний домен важкого ланцюга антитіла, людський ІдсС4 константний домен, людський ІДЕ вибраний з групи, що складається з людського ІМ константний домен, та людський ІА константний константного домену, людського І|ДО1 константно- домен. Більш переважно, зв'язуючий білок містить го домену, людського Ідбе2 константного домену,

ЗЕО ПО Ме: 2; 5ЕО ІЮО Ме: 3; 5ЕО ІО Мо: 4; та ЗЕО ІЮ людського (ДОЗ константного домену, людського

Мо: 5. Ід054 константного домену, людського ІДЕ констан-

Зв'язуючий білок за даним винаходом здатний тного домену та людського ІДА константного до- зв'язувати мішень, вибрану з групи, що складаєть- мену. Більш переважно, конструкція антитіла міс- ся з І/-12 та І--23. Переважно, зв'язуючий білок тить 5ЕО ІО Ме: 2; 5ЕБЕО ІЮО Ме: 3; 5БЕО ІЮ Мо: 4; та здатний до модулювання біологічної функції міше- ЗЕО ІО Мо: 5. В іншому втіленні, винахід забезпе- ні, вибраної з групи, що складається з 1І-12 та ІІ- чує кон'югат антитіла, що містить конструкцію ан- 23. Більш переважно, зв'язуючий білок здатний титіла, описану вище, та агент, вибраний з групи, нейтралізувати мішень, вибрану з групи, що скла- що складається з; імуноадгезійної молекули, ра- дається з 1-12 та І--23. діофармацевтичного засобу, терапевтичного за-

В одному втіленні, зв'язуючий білок за даним собу та цитотоксичного засобу. У переважному винаходом має константу швидкості асоціації (Коп) втіленні, радіофармацевтичний засіб вибирають з з 1--12 або І -23 у щонайменше, приблизно, 102М" групи, що складається з радіоактивної мітки, фер- тс"; щонайменше, приблизно, 109М"с"; щонайме- мента, флуоресцентної мітки, люмінесцентної міт- нше, приблизно, 102М"с!; щонайменше, приблиз- ки, біолюмінесцентної мітки, магнітної мітки та біо- но, 105 М"с"; або щонайменше, приблизно, 109М" тину. Більш переважно, радіоактивний засіб є 127, відповідно до вимірювань за допомогою пове- радіоактивною міткою, що вибирають з групи, яка рхневого плазмонного резонансу. Переважно, зв'- складається з: ЗН, МС, 855, 90, 99То 111д, 125), 191; язуючий білок за даним винаходом має константу 1п7ри, ї66Но, 153571, У переважному втіленні, тера- швидкості асоціації (Коп) з 1--12 або 1І--23, величи- певтичний або цитотоксичний засіб вибирають з на якої знаходиться у діапазоні від 102М'с" до групи, що складається з; антиметаболіту, алкілую- 103М7с; від 109МИс7 до 102М"с71; від 102М7с7 до чого агента, антибіотика, фактора росту, цитокіну, 105М7с7; або від 105МИс7! до 109М"с7", відповідно анти-ангіогенного агента, антрацикліну, токсину та до вимірювань способом поверхневого плазмон- апоптичного засобу. ного резонансу. В іншому втіленні, конструкція антитіла є глі-

В іншому втіленні, зв'язуючий білок за даним колізованою. Переважно, гліколізація є людським винаходом має константу швидкості дисоціації паттерном гліколізації. (Ко) з 1-12 або 1-23, що становить не більш, ніж, В іншому втіленні, зв'язуючий білок, конструк- приблизно 103с'!; не більш, ніж, приблизно 107с7; ція антитіла чи кон'югат антитіла, описані вище, не більш, ніж, приблизно 10с!; або не більш, ніж, існують у вигляді кристалу. Переважно, кристал є приблизно 105с!, відповідно до вимірювань за вільним від носія фармацевтичним кристалом з допомогою поверхневого плазмонного резонансу. контрольованим вивільненням. У переважному

Переважно, зв'язуючий білок за даним винаходом втіленні, кристалічний зв'язуючий білок, кристаліч- має константу швидкості дисоціації (Ко) з 1-12 на конструкція антитіла чи кристалічний кон'югат або 1-23 у 103с71-10с1; 1001-1056; або 1075с71- антитіла мають більший час напівжиття іп мімо, ніж 10627, відповідно до вимірювань способом повер- їх розчинний аналог. В іншому переважному вті- хневого плазмонного резонансу. ленні, кристалічний зв'язуючий білок, кристалічна

В іншому втіленні, зв'язуючий білок за даним конструкція антитіла чи кристалічний кон'югат ан- винаходом має константу дисоціації (Ко) до 11-12 титіла зберігають біологічну активність після крис- або 1І/-23, що становить не більш, ніж, приблизно талізації. 1077 М; не більш, ніж, приблизно 103 М; не більш, Один аспект даного винаходу стосується ізо- ніж, приблизно 107 М; не більш, ніж, приблизно 10: льованої нуклеїнової кислоти, що кодує будь-який

М; не більш, ніж, приблизно 107! М; не більш, зв'язуючий білок, конструкцію антитіла чи кон'югат ніж, приблизно 10712 М; не більш, ніж 1073 М. Пе- антитіла, описані вище. Додаткове втілення забез- реважно, зв'язуючий білок за даним винаходом печує вектор, що містить ізольовану нуклеїнову має константу дисоціації (Ко) до 1-12 або 1І-23, кислоту, описану вище, де вказаний вектор виби-

рають з групи, що складається з редДНК; рт тичний засіб для лікування розладу, при якому ІІ-- (Юигоснег еї аї., МисіІєїс Асідз Невзеагсп 2002, Мої 12 та/або І--23 активність є шкідливою. Переваж- 30, Мо.2); ртТЗ3 (рт з додатковим сайтом мно- но, додатковий засіб вибирають з групи, до складу жинного клонування; РЕРВО5 (Міги5піта, 5. та якої входять: терапевтичний засіб, радіоактивний

Мадаїа, 5., (1990) Мисієїс асійє Невеагсі Мої 18, препарат, цитотоксичний засіб, інгібітори ангіоге-

Мо. 17); РВМ; рум; та рВу. незу (включаючи анти-МЕСЕ антитіла або МЕСБ-

В іншому аспекті клітина-хазяїн трансформо- пастку, але не обмежуючись ними); інгібітори кіназ вана вектором, описаним вище. Переважно, кліти- (включаючи інгібітори КОЕ. та ТІЕ-2, але не обме- ною-хазяїном є прокаріотна клітина. Більш пере- жуючись ними); блокатори молекул костимуляції важно, клітиною-хазяїном є Е.Соїї. У зв'язаному (включаючи анти-В7.1, анти-87.2, СТІ А4-Ід, анти- втіленні клітиною-хазяїном є еукаріотна клітина. СР2О, але не обмежуючись ними); блокатори ад-

Переважно, еукаріотну клітину вибирають з групи, гезії молекул (включаючи анти-ЇІ ЕА-1 Арв, анти-Е//. що складається з протисту, тваринної клітини, ро- селектуючі Абр5, інгібітори малих молекул, але не слинної клітини та грибкової клітини. Більш пере- обмежуючись ними); анти-цитокінове антитіло або важно, клітиною-хазяїном є клітина ссавців, вклю- його функціональний фрагмент (включаючи анти- чаючи, але не обмежуючись наведеним, СНО та І--18, анти-ТМЕ, анти-І-6б/антитіла рецепторів ци-

СоО5; або грибкова клітина, така, як токіну, але не обмежуючись ними); метотрексат;

Засспаготусев сегемізіає; або клітина комаха, та- циклоспорін; рапаміцин; ЕК5БОб; детектовну мітку ка, як 519. або репортер; антагоніст ТМЕ; протиревматичний

Інший аспект даного винаходу забезпечує спо- засіб; міорелаксант, наркотик, нестероїдні проти- сіб одержання зв'язуючого білка, що зв'язує оди- запальні ліки (М5АЇ!О), анальгетик, анестетик, сно- ницю р40 1-12, що включає культивування будь- дійний засіб, місцевий анестетик, блокатор нерво- якої однієї клітини-хазяїна, що описана вище, у во-м'язової передачі, протимікробний агент, культуральному середовищі за умов, достатніх протипсоріазний агент, кортикостероїд, анаболіч- для продукування зв'язуючого білка, що зв'язує ний стероїд, еритропоетін, вакцинацію, імуногло- субодиницю р40 1-12. Інше втілення забезпечує булін, імунодепресант, гормон росту, гормоно- зв'язуючий білок, одержаний способом, описаним замісні ліки, радіофармацевтичний препарат, ан- вище. тидепресант, нейролептик, стимулятор, препарат

Одне втілення забезпечує композицію для ви- для лікування астми, бета-агоніст, інгаляційні сте- вільнення зв'язуючого білка, де вказана компози- роїди, епінефрін або аналог, цитокін та антагоніст ція містить склад, що, у свою чергу, містить крис- цитокіну. талічний зв'язуючий білок, кристалічну конструкцію В іншому аспекті, винахід забезпечує спосіб ін- антитіла або кристалічний кон'югат антитіла, як гібування активності людського 1-12 та/або люд- описано вище, та інгредієнт; та, щонайменше, ського І--23, що включає контактування людського один полімерний носій. Переважно, полімерний І--12 та/або людського 1І-23 зі зв'язуючим білком, носій є полімером, вибраним з одного чи більше описаний вище, таким чином, щоб інгібувати акти- полімерів групи, до складу якої входять: полі (ак- вність людського 1-12 та/або людського 1-23. У рилова кислота), полі (ціаноакрилати), полі (аміно- зв'язаному аспекті, винахід забезпечує спосіб інгі- кислоти), полі (ангідриди), полі (депсіпептид), полі бування активності людського 1-12 та/або людсь- (ефіри), полі (молочна кислота), полі (кополімер кого І--23 у людини, що страждає від розладу, при молочної та гліколевої кислот) або РІ СА, полі (р- якому активність 11-12 та/або 1І/-23 є шкідливою, гідроксибутират), полі (капролактон), полі (діокса- що включає введення людині зв'язуючого білка, нон); полі (етиленгліколь), полі (гідроксипропіл) описаного вище, таким чином, щоб інгібувати ак- метакриламід, полі Коргано)фосфазені, полі (ор- тивність людського 1-12 та/або. людського 1-23 у тоефіри), полі (віниловий спирт), полі (вінилпіролі- людини та досягнути лікування. Переважно, роз- дон), кополімери малеїнового ангідриду з алкілві- лад вибирають з групи, що включає артрит, остео- нил ефіром, поліоли - блок-кополімери артрит, ювенільний хронічний артрит, септичний поліоксиетилену та поліоксипропілену, альбумін, артрит, артрит Лайма, псоріатичний артрит, реак- альгінат, целюлоза та похідні целюлози, колаген, тивний артрит, спонділоартропатію, системний фібрин, желатин, гіалуронова кислота, олігосаха- червоний вовчак, хворобу Крона, виразковий коліт, риди, глікаміноглікани, сульфовані полісахариди, запальну хворобу кишечнику, інсулінозалежний їх суміші та кополімери. Переважно, інгредієнт цукровий діабет, тиреоідит, астму, алергійні хво- вибирають з групи, що складається і альбуміну, роби, псоріаз, дерматичну склеродерму, хворобу сахарози, трегалози, лактітолу, желатину, гідрок- "трансплантат проти хазяїна", відторгнення транс- сипропіл-Д-циклодекстрину, метоксиполіетиленглі- плантату органами, гостру чи хронічну імунну хво- колю та поліетиленгліколю. Інше втілення забез- робу пов'язану із трансплантацією органів, саркої- печує спосіб лікування ссавця, що включає стадію доз, атеросклероз, синдром дисемінованої введення ссавцеві ефективну кількість композиції, внутрішньосудинної коагуляції, хворобу Кавасакі, описаної вище. хворобу Грейва, нефротичний синдром, синдром

Винахід також забезпечує фармацевтичну хронічної втоми, грануломатоз Вегенера, пурпуру композицію, що містить зв'язуючий білок, констру- Шенляйн-Геноха, мікроскопічний васкуліт нирок, кцію антитіла або кон'югат антитіла, як описано хронічний гострий гепатит, увеїт, септичний шок, вище, та фармацевтично прийнятний носій. У до- токсичний шок, септичний синдром, кахексію, ін- датковому втіленні, фармацевтична композиція фекційні хвороби, інвазійні хвороби, синдром на- містить, щонайменше, один додатковий терапев- бутого імунодефіциту, гострий поперечний мієліт,

хорею Хантінгтона, хворобу Паркінсона, хворобу склероз (усі підтипи), симпатичну офтальмію, ле-

Альцгеймера, інсульт, біліарний первинний цироз геневу гіпертензію, пов'язану із хворобою з'єдну- печінки, гемолітичну анемію, злоякісні пухлини, вальної тканини, синдром Гудспатчера, легеневе серцеву недостатність, інфаркт міокарду, хворобу проявлення недозного поліартериту, ревматичну

Еддісона, спорадичні хвороби, полігландулярний атаку, анкілозуючий спондиліт, синдром Стілла, дефіцит типу | та полігландулярний дефіцит типу склеродермію, синдром Шегрена, синдром Такая-

Ії, синдром Шмідта, синдром респіраторного дис- су/артеріїт, аутоїмунну тромбоцитопенію, ідіопати- тресу дорослих (гострий), алопецію, кругову ало- чну тромбоцитопенію, аутоїмунну хворобу щито- пецію, серонегативну артропатію, артропатію, видної залози, гіпертіреоїдоз, зобний аутоїмунний хворобу Ройтера, псоріатичну артропатію, вираз- гіпотиреоз (тиреоїдит Хашимото), атрофічний кову артропатію, ентеропатичний синовіт, хламі- аутоїмунний гіпотиреоз, первинну миксидему, фа- діоз, артропатію пов'язану із єрсинією та сальмо- когенний увеїт, первинний васкуліт, гостре захво- нелою, спонділоартропатію, атероматозну рювання печінки вітиліго, хронічні хвороби печінки, хворобу/артеріосклероз, атопичну алергію, аутоі- алкогольний цироз, алкогольне ураження печінки, мунну буллезну хворобу, вульгарний пемфігус, холестаз, ідіосинкратичну хворобу печінки, гепа- ексфоліативну пухирчатку, пемфігоїд, лінеарний тит, викликаний ліками, неалкогольний стеатоге-

ІДА дерматоз, аутоїмунну гемолітичну анемію, Ку- патит, алергію та астму, інфекції стрептококів гру- мбо-позитивну гемолітичну анемію, набуту злоякі- пи В (585), психічні розлади (наприклад, депресію сну анемію, ювенільну злоякісну анемію, міалгіч- та шизофренію), хвороби, опосередковані Тп2/Тп1 ний енцефаліт/сландську хворобу, хронічний типами, гострий та хронічний біль (різні типи бо- кандидоз шкіри та слизових оболонок, гігантоклі- лю), та такі види раку, як рак легенів, молочної тинний артеріїт, первинний склерозуючий гепатит, залози, шлунку, міхуру, товстої кишки, підшлунко- кріптогенний аутоїмунний гепатит, синдром прид- вої залози, яєчників, простати та прямої кишки та баного імунодефіциту, хвороби, що пов'язані із гематопоетичні злоякісні пухлини (лейкемію та синдромом набутого імунодефіциту, гепатит В, лімфому), абеталіпопротеінемію, акроціаноз, гост- гепатит С, загальний змінний імунодефіцит (зага- рі та хронічні паразитарні та інфекційні процеси, льну змінну гіпогамаглобулінемію), ділатаційну гостру лейкемію, гостру лимфобластну лейкемію кардіоміопатію, безплідність жінок, порушення (АГ), гостру мієлоїдну лейкемію (АМУ), гостру або овуляції, передчасне порушення овуляції, легене- хронічну бактеріальну інфекцію, гострий панкреа- вий фіброз, кріпгогенний фіброзуючий альвеоліт, тит, гостру ниркову недостатність, аденокарцино- пост-запальну інтерстеціальну легеневу хворобу, ми, ектопічну систолу, що передається повітряним інтерстеціальний пневмонит, інтерстеціальну ле- шляхом, комплексну СНІД-деменцію, алкогольний геневу хворобу, пов'язану із хворобою з'єднуваль- гепатит, алергійний кон'юнктивит, алергійний кон- ної тканини, легеневу хворобу, пов'язану із зміша- тактний дерматит, алергійний риніт, відторгнення ною хворобою з'єднувальної тканини, алотрансплантату, альфа-І-антитрипсінову недо- інтерстеціальну легеневу хворобу, пов'язану із статність, боковий амфіотрофічний склероз, ане- системною склеродермією, інтерстеціальну леге- мію, стенокардію, клітинну дистрофію переднього неву хворобу, пов'язану із ревматоїдним артритом, рогу спинного мозку, анти-саз терапію, антифос- легеневу хворобу, пов'язану із системним черво- фоліпідний синдром, гіперчутливість до антиреце- ним вовчаком, легеневу хворобу, пов'язану із дер- пторів, аортальні та периферійні аневризми, роз- матоміозитом/поліміозитом, легеневу хворобу, шарування аорти, підвищений артеріальний тиск, пов'язану із хворобою Шегрена, легеневу хворобу, артеріосклероз, артеріовенозну фістулу, атаксію, пов'язану із анкілозуючим спондилоартритом, вас- фібриляцію передсердь (стабільну або конвульси- кулітну дифузну легеневу хворобу, легеневу хво- вну), тремтіння передсердь, атріовентрикулярну робу, пов'язану із гемосидерозом, викликану ліка- блокаду, В-клітинну лімфому, відторгнення кісних ми інтерстеціальну легеневу хвороба, фіброз, трансплантатів, відторгнення трансплантатів кіс- радіаційний фіброз, облітеруючий бронхіт, хроніч- ного мозку, блокаду пучка Гіса, лімфому Буркітта, ну ейзенофільну пневмонію, лимфоцитарну інфі- опіки, серцеві аритмії, синдром «приголомшеного» льтративну легеневу хворобу, постінфекційну ін- серця, серцеві пухлини, кардіоміопатію, запальну терстеціальну легеневу хворобу, подагричний реакцію на серцево-легеневий шунт, відторгнення артрит, аутоїмунний гепатит, аутоїмунний гепатит хрящових трансплантатів, церебеллярні кортика- типу-1 (класичний аутоїмунний або ліпоїдний гепа- льні дегенерації, церебеллярні розлади, хаотичну тит), аутоїмунний гепатит типу-2 (анти-ЇКМ пози- або мультифокальну передсерцеву тахікардію, тивний гепатит), аутоїмунно-опосередковану гіпог- розлади, викликані хіміотерапією, хронічну мієло- лікемію, резистентність до інсуліну типу В з цитарну лейкемію (СМ), хронічний алкоголізм, акантокератодермією, гіпопаратиреоз, гостру іму- хронічні запальні патології, хронічну лимфоцитар- нопатологію, пов'язану із трансплантацією органів, ну лейкемію (СІ), хронічну обструктивну легеневу хронічну імунопатологію, пов'язану із трансплан- хворобу (СОРОБ), хронічну саліцилатну інтоксика- тацією органів, остеоартроз, первинний склерозу- цію, колоректальну карциному, когнестивну серце- ючий холангіт, псоріаз типу 71, псоріаз типу 2, ву недостатність, кон'юнктивит, контактний дерма- ідіопатичну лейкопенію, аутоїмунну нейтропенію, тит, легеневе серце, хворобу коронарної артерії, ниркові хвороби МОБ, гломерулонефрити, мікро- хворобу Кройцфельда-Якоба, культурально- скопічний васкуліт нирок, хворобу Лайма, дискоїд- негативний сепсис, кистозний фіброз, розлади, ний червоний вовчак, ідіопатичне безпліддя чоло- пов'язані із цитокіновою терапією, деменцію бок- віків або МОБ, аутоіїмунність сперми, розсіяний серів, демієлінізуючі хвороби, геморагичну лихо-

манку денге, дерматит, дерматологічні стани, діа- ферійну атеросклеротичну хворобу, периферійні бет, цукровий діабет, діабетичну атеросклеротич- судинні розлади, перитоніт, злоякісну анемію, пне- ну хворобу, хворобу дифузних тілець Леві, ділата- вмоцистну пневмонію, пневмонію, синдром ційну когнестивну кардіоміопатію, розлади РОЕМЗ5 (полінейропатію, органомегалію, ендокри- підкоркових вузлів, Синдром Дауна у середньому нопатію, моноклональну гамапатію, та синдром віці, розлади рухів, що викликані ліками, які бло- змін шкіри), пост-перфузійний синдром, посткар- кують допамінові рецептори центральної нервової діотомний синдром, прееклампсії, синдрому про- системи, чутливість до ліків, екзему, енцефаломі- гресуючого супрануклеолярного паралічу, первин- єліт, ендокардит, ендокринопатію, епіглоттит, віру- ну легеневу гіпертензію, рентгенотерапію, сну інфекцію Епштейна-Барр, обмежений хвороб- феномен та хворобу Рейнауда, хворобу Рейнауда, ливий набряк шкіри, екстрапірамидні та мозочкові хворобу Рефсума, регулярну тахікардію з вузьки- розлади, сімейний гематофагоцитний лімфогістіо- ми комплексами ОМК5, реноваскулярну гіпертензію, цитоз, відторгнення імплантатів ембріонального реперфузійне ураження, рестриктивну кардіоміо- тимусу, атаксію Фрідріхса, функціональні перифе- патію, саркоми, склеродерму, сенільну хорею, се- рійні артеріальні розлади, грибковий сепсис, газо- нільну деменцію типу тілець Леві, серонегативні ву гангрену, виразку шлунку, гломерулонефрит, артропатії, шок, анемію серповидних клітин, відто- відторгнення трансплантату будь-якого органу чи ргнення алотрансплантатів шкірою, синдром змін тканини, грам-негативний сепсис, грам-позитивний шкіри, відторгнення трансплантатів тонкої кишки, сепсис, грануломи, викликані міжклітинними орга- тверді пухлини, специфічні аритмії, спінальну ата- нізмами, лейкоз ворсистих клітин, хворобу ксію, спіноцеребелярні дегенерації сітківки, стреп-

Галленвордена-Шпатца, тиреоїдит Хашимото, тококовий міозит, структурні ураження мозочку, сінну лихоманку, відторгнення серцевих транспла- підгострий склерозуючий паненцефаліт, сінкопе, нтатів, гемохроматоз, гемодіаліз, гемолітичний сифіліс серцево-судинної системи, загальну ана- уремічний синдром/тромболітичну тромбоцитопе- філактичну реакцію, синдром системної запальної нічну пурпуру, геморагію, гепатит (А), аритмії пучка реакції, ювенільний ревматоїдний артрит із систе-

Гіса, ВІЛ інфекцію/ВІЛ невропатію, хворобу Хо- мним початком, Т-клітинну або РАВ АЇ'Ї, телеангі- джкіна, гіперкінетичні розлади рухів, зверхчутливі ектазію, облітеруючий тромбоангіт, тромбоцито- реакції, гіперчутливу пневмонію, підвищений тиск, пенію, токсичність, трансплантати, гіпокінетичні розлади рухів, оцінку гіпоталамічно- травму/геморагію, гіперчутливі реакції ПІ типу, гі- гіпофізарної та надниркової системи, ідіопатичну перчутливі реакції ІМ типу, нестабільну стенокар- хворобу Еддісона, ідіопатичний легеневий фіброз, дію, уремію, уросепсис, кропивницю, порок серця, цитотоксичність, опосередкована антитілами, ас- варикозні вени, васкуліт, венозні хвороби, веноз- тенію, дитячу спінальну м'язову атрофію, запален- ний тромбоз, фібриляцію шлуночків, вірусні та ня аорти, інфлуенцу, вплив іонізуючого випромі- грибкові інфекції, вітальний енцефаліт/асептичний нювання, іридоцикліт/увеїт/неврит зорового нерва, менінгіт, вітальний гемофагоцитний синдром, син- ішемічно-реперфузійне ураження, ішемічний ін- дром Верніке-Корсакофф, хворобу Вільсона, від- сульт, ювенільний ревматоїдний артрит, ювеніль- торгнення ксенотрансплантатів будь-яким органом ну спінальну м'язову атрофію, саркому Капоші, чи тканиною. відторгнення ниркових трансплантатів, легіонеллу, В іншому аспекті, винахід забезпечує спосіб лейшманіоз, проказу, ураження кортикоспінальної лікування пацієнта, що страждає від розладу, при системи, ліпідему, відторгнення трансплантатів якому людський 1І--12 та/або людський 1-23 є шкі- печінки, лімфодему, малярію, злоякісну лимфому, дливими, що включає стадію введення будь-якого злоякісний гістіоцитоз, злоякісну меланому, менін- одного зв'язуючого білка, описаного вище, одно- гіт, менінгококкемію, метаболічні/ідіопатичні, міг- часно або після введення другого агента, як обго- рені, мітохондріальний мультисистемний розлад, ворювалося вище. У переважному втіленні, другий змішану хворобу з'єднувальної тканини, монокло- агент вибирають з групи, що складається з буде- нальну гамапатію, множинну мієлому, множинні нозиду, епідермального фактора росту, кортикос- системні дегенерації (Менцеля Дежеріна - Томаса тероїдів, циклоспоріну, сульфасалазіну, аміноса-

Шай-Драгера та Мачадо-Джозефа), міастенію гра- ліцилатів, б-меркаптопурину, азатіопріну, віс, тусобасієгйт амішт іпігасеїшШіаге, туберкульо- метронідазолу, інгібіторів ліпоксигенази, мезала- зну бацилу, мієлодиспластичний синдром, інфаркт міну, олсалазіну, балсалазіду, антиоксидантів, міокарду, ішемії міокарду, носоглоткову карцино- інгібіторів тромбоксану, антагоністів рецепторів ІІ-- му, хронічну легеневу хворобу новонароджених, 1, анти-І--ї моноклональних антитіл, анти-1ІЇ-6 мо- нефрит, нефроз, нейродегенеративні хвороби, ноклональних антитіл, факторів росту, інгібіторів нейрогенні і м'язові атрофії, нейтропенічну лихо- еластази, піридиніл-імідазольних сполук, антитіл манку, не-ходжкінівську лімфому, оклюзію абдомі- або агонистів ТМЕ, СТ, 1-1, 1-2, 1-6, 1-7, 1-8, 1 - нальної аорти та її відгалужень, оклюзивні артері- 15, 11-16, 1-18, ЕМАР-ЇЇ, (ХМ-С5Е, ЕСЕ, та РОСОБЕ, альні хвороби, оКІЗ терапію, орхіт/епідідімітіс, антитіл 202, СО3, 204, С08, С025, СО2г8, СОЗ30, орхіт/процедури вазектомії, органомегалію, остео- бра, 2045, 069, С090 або їх лігандів, метотре- пороз, відторгнення трансплантатів підшлункової ксату, циклоспоріну, ЕК5О6, рапаміцину, мікофе- залози, карциному підшлункової залози, паранео- нолят мофетілу, лефлуноміду, М5АЇ!Ю, ібупрофену, пластичний синдром/гіперкальцемію злоякісних кортикостероїдів, преднізолону, інгібіторів фосфо- пухлин, відторгнення трансплантату паращитовід- діестерази, агоністів аденозину, протитромботич- ної залози, запалення тазових органів, хронічний них засобів, додаткових інгібіторів, адренергічних алергійний риніт, перикардіальну хворобу, пери- агентів, ІБАК, МІК, ІКК, р38, МАР інгібіторів кінази,

інгібіторів ІЇ--1 конвертуючого фермента, інгібіторів ності, визначення, що надані у цій заявці, мають

ТМЕо конвертуючого фермента, інгібітори Т- перевагу над визначеннями, що наведені у будь- клітинної сигналізації, інгібіторів металопротеїна- якому словнику, та над визначеннями із зовнішніх зи, сульфасалазіну, азатіопріну, 6- джерел. Крім того, якщо іншого не вимагає кон- меркаптопурину, інгібіторів ангіотензин-1і- текст, терміни, наведені у однині, мають включати перетворюючого фермента, розчинних рецепторів множину, та навпаки. У цій заявці, вживання тер- цитокіну, розчинного ро5 ТМЕ рецептору, розчин- міну "або" означає "та/або", якщо не вказано інше. ного р75 ТМЕ рецептору, 51-18, 511 -1 ВІЇ, 81-68, Додатково, вживання терміну "включаючи", а та- протизапальних цитокінів, 1-4, 1-10, 1-11, 11-13 кож інших форм, таких, як "включає" та "включав", та ТОгр. є необмежуючим. Також, такі терміни, як "елемент"

У переважному втіленні, фармацевтичні ком- чи "компонент" охоплюють як елементи та компо- позиції, описані вище, вводять суб'єкту, щонайме- ненти, що містять одну складову, так і елементи та нше, одним способом, вибраним з парентерально- компоненти, що містять більш, ніж одну підскладо- го, підшкірного, внутрішньомязового, ву, якщо конкретно не вказано інше. внутрішньовенного, інтрабронхіального, інтрааб- Загалом, номенклатури, що вживаються у домінального, внутрішньосуглобового, внутріш- зв'язку із, або методи клітинної та тканинної куль- ньохрящового, внутрішньополосного, введення у тури, молекулярної біології, імунології, мікробіоло- шлуночки головного мозку, інтрацеребрального, гії, генетики та хімії та гібридизації білків та нуклеї- інтрацеребровентрикулярного, введення у товсту нових кислот, що описані у цій заявці, добре відомі кишку, інтрацервікального, внутрішньошлункового, з рівня техніки та широко використовуються у цій внутрішньопечінкового, інтраміокардального, ен- галузі Способи та методи за даним винаходом достального, внутрішньотазового, інтраперікардіа- загалом здійснюють відповідно до традиційних льного, інтраперітонеального, інтраплеврального, способів, добре відомих з рівня техніки, та як опи- введення у простату, внутрішньолегеневого, ін- сано у різноманітних загальних та більш конкрет- траректального, внутрішньониркового, інтрареті- них посиланнях, процитованих та обговорених у нального, внутрішньоспінального, інтрасіновіаль- цій заявці, якщо не вказано інше. Ферментні реак- ного, інтраторакального, внутрішньоматкового, ції та методи очищення здійснюють відповідно до внутрішньоміхурного, болюсного, вагінального, інструкцій виробника, як зазвичай виконують у цій ректального, букального, сублінгвального, інтра- галузі або як описано у цій заявці. Номенклатури, назального та трансдермального способів. що вживаються у зв'язку із, та лабораторні проце-

Один аспект даного винаходу забезпечує, що- дури та методи аналітичної хімії, синтетичної ор- найменше, одне 1-12 анти-ідіотипне антитіло до, ганічної хімії та медичної та фармацевтичної хімії, щонайменше, одного 1-12 зв'язуючого білка за описані у цій заявці, добре відомі з рівня техніки та даним винаходом. Анти-ідіотипне антитіло вклю- широко використовуються у цій галузі. Для хімічно- чає будь-яку молекулу, що містить білок або пеп- го синтезу, хімічних аналізів, одержання фармаце- тид, що містить, щонайменше, частину молекули втичних препаратів та складів, та доставки та ліку- імуноглобуліну, як, наприклад, але не обмежую- вання пацієнтів, використовують стандартні чись наведеним, один гіперваріабельний регіон методи. (СОР) важкого або легкого ланцюга або його лі- Для більш легкого розуміння даного винаходу, ганд-зв'язуюча частина, варіабельний регіон важ- деякі з термінів визначені нижче. кого або легкого ланцюга, константний регіон важ- Термін "поліпептид", як вживається у цій заяв- кого або легкого ланцюга, каркасний регіон, або ці, відноситься до будь-якого полімерного ланцюга будь-яка його частина, що можуть бути включені у амінокислоти. Терміни "пептид" та "білок" вжива- зв'язуючий білок за даним винаходом. ють як взаємозамінні із терміном поліпептид та

Детальний опис даного винаходу вони також відносяться до полімерного ланцюга

Даний винахід стосується ІІ-12р40 зв'язуючих амінокислоти. Термін "поліпептид" охоплює при- білків, особливо анти-ІІ-12р40 антитіл, або їх ан- родні або штучні білки, фрагменти білків та полі- тиген-зв'язуючих частин, що зв'язують 1І-12р40. пептидні аналоги протеїнового ланцюга. Поліпеп-

Різноманітні аспекти даного винаходу відносяться тид може бути мономерним чи полімерним. до антитіл та їх фрагментів, та їх фармацевтичних Термін "ізольований білок" чи "ізольований композицій, а також до нуклеїнових кислот, реком- поліпептид" означають білок чи поліпептид, що у бінантні вектори експресії та клітин- хазяєв для силу свого походження чи джерела походження не одержання таких антитіл та їх фрагментів. Спосо- пов'язаний із природно зв'язаними компонентами, би застосування антитіл за даним винаходом для супутніми у природному стані; він істотно вільний детектування людського ІІ-12р40, людського 1-12 від інших білків тих же видів; експресується кліти- та людського І/-23; для інгібування активності ною різних видів; або не зустрічається у природі. людського 1-12 та/або людського ІІ--23, їп міо чи Таким чином, поліпептид, що був хімічно синтезо- їп мімо; та для регулювання генної експресії також ваний чи синтезований у клітинній системі, що включені до даного винаходу. відрізняється від клітини, з якої він природно похо-

Якщо у цій заявці не вказано інше, то наукові дить, буде "ізольованим" від природно зв'язаних з та технічні терміни, що вживаються у зв'язку із ним компонентів. Білок може також вважатись іс- даним винаходом, повинні мати значення, що, тотно вільним від природно зв'язаних компонентів зазвичай, є зрозумілими для фахівців у цій галузі. шляхом ізоляції за допомогою методів очищення

Значення та обсяг термінів мають бути ясними, білків, добре відомих з рівня техніки. проте, у випадку будь-якої прихованої невизначе-

Термін "відновлення", як вживається у цій зая- (тп 11-12), що може бути одержаний стандартними вці, відноситься до процесу надання хімічним ви- способами рекомбінантної експресії. дам, таким, як поліпептид, істотно вільний від при- Термін "людський 1-23" (що у цій заявці наве- родно зв'язаних з ним компонентів, ізоляції, дений як абревіатура ПІ-23, або 1-23), як вжива- наприклад, з використанням методів очищення ється у цій заявці, включає гетеродимерний люд- білків, добре відомих з рівня техніки. ський цитокін, що належить до сімейства п'яти

Термін "людський 1-12" (що у цій заявці наве- таких гетеродимерних цитокінів, включаючи 1-12 дений як абревіатура ПІ--12, або 1-12), як вжива- та ІС-27 (Тіпснієїгі еї аї.,, (2003) Іттипйу 19:641- ється у цій заявці, включає людський цитокін, що 644). Термін включає гетеродимерний білок, що секретується, головним чином, антигенпрезентую- містить 19 КО субодиницю (р19) та 40 КО субоди- чими клітинами, такими, як моноцити, макрофаги ницю (р40) о зв'язані разом через дисульфідний та дендровидні клітини. Термін включає гетероди- місток Термін "людський 1-23" призначений для мерний білок, що містить 35 КО субодиницю (р35) включення рекомбінантного людського 1-23 (тА І - та 40 КО субодиницю (р40), що зв'язані разом че- 23), що може бути одержаний стандартними спо- рез дисульфідний місток. Гетеродимерний білок собами рекомбінантної експресії. наведено під назвою "р70 білок". Структура люд- Термін "ІС-12р40", що є ідентичним до "(І - ського 1-12 описана також у, наприклад, 23р40", та також має спрощену назву "р40", як

Корауазнпї, еї аІ. (1989) 9. Ехр Мей. 170:827-845; вживається у цій заявці, включає 40 КО субодини-

Зедег, єї а. (1993) Ргос. Маї). Асад. 5сі. 90:10188- цю людського цитокіну І--12 (р40) та 40 КО субо- 10192; І іпо, еї аІ. (1995) У. Ехр Мед. 154:116-127; диницю людського цитокіну ІІ-23. У Таблиці 1 на-

Роайавкі, ек аї. (1992) Агсп. Віоспет. Віорпувз. ведено амінокислотну послідовність І-12р40, 5ЕО 294:230-237. Термін "людський 1-12" призначений ІО Ме: 1, відому з рівня техніки. для включення рекомбінантного людського 1-12

Таблиця 1: Послідовність р40 субодиниці 1І-12 та 11-23 0 ПЕ ін шт послідовності 2020001... |72345678901234567890123456789012.... р субодиниця ІЇ-- МССНООГЕМІБУУЕЗМЕСОГ МА МУЕСККОМУМ 12 та П--23 МЕГОМ/КРОАРСЕМУМІ ТСОТРЕЕОСІТУТІ

БО5БЗЕМІ ОБОКТІ ТІОМКЕЕРООАСОУТСНК

СЕМ ЗНЗ ЦІ. НККЕОСІМУЗТОП КрОКЕР

КМКТЕРІ ВСЕАКМУЗОКЕТСУМ-ТТІЗТрІТ

ЕБМК5Б5КО5БОРОСМТССААТІ БАЕКМУКО

ОМКЕУЕУЗМЕСОЕОЗАСРААДЕЕБІ РІЕММУ

ВСАМНКІ КУЕМУТ5З5ЕРІВОПКРОРРКМ ОК

РІ ХМ5КОМЕМБУТЕХУРОТМУЗТРНІЗМУЕЗОТЕ

СМОМОСКОКВЕККОВУЕТОКТ5АТМІСВКМ

АБІЗМКАООКУУ5ЗЗМУЗЕМАВУРОБ "Біологічна активність", як вживається у цій за- реакції, що містить мічений "А" та антитіло, змен- явці, відноситься до усіх біологічних властивостей шить кількість міченого А, зв'язаного із антитілом. цитокіну. Біологічні властивості ІЇ/-12 включають, Термін "антитіло", як вживається у цій заявці, У але не обмежуються наведеними, зв'язуючий 1-12 широкому сенсі відноситься до будь-якої молекули рецептор; індукцію інтерферон-гама (ІРМ-у) секре- імуноглобуліну (4), що складається з чотирьох ції та регулювання балансу між антиген- поліпептидних ланцюгів, двох важких (Н) ланцюгів специфічним Т хелпером типу 1 (ТП1) та лімфоци- та двох легких (І) ланцюгів, або їх будь-якого фун- тами типу 2 (Тп2). Біологічні властивості 1-23 кціонального фрагменту, мутанту, варіанту чи по- включають, але не обмежуються наведеними, зв'- хідному, що зберігає необхідні зв'язуючі характе- язуючий І/-23 рецептор, індукцію продукування ристики епітопу по відношенню до молекули Ід.

ІРМ-у, ТИ! клітинну диференціацію та активацію Такі форми мутантів, варіантів або похідних анти- антиген-презентуючих функцій дендровидних клі- тіл відомі з рівня техніки. Необмежуючі втілення їх тин, та селективну індукцію проліферації Т клітин обговорені нижче. пам'яті. У повнорозмірному антитілі, кожен з важких

Термін "специфічне зв'язування", як вживаєть- ланцюгів містить варіабельний регіон важкого ла- ся у цій заявці, по відношенню до взаємодії анти- нцюга (що у цій заявці наведений як абревіатура тіла, білка чи пептиду з другим хімічним видом, НСМЕ або УН) та константний регіон важкого лан- означає, що взаємодія залежить від наявності кон- цюга. Константний регіон важкого ланцюга містить кретної структури (наприклад, антигенної детермі- три домени, СНІ, СН2 та СНЗ. Кожен з легких ла- нанти, чи епітопу) хімічного виду; наприклад, анти- нцюгів містить варіабельний регіон легкого ланцю- тіло розпізнає та зв'язує конкретну протеїнову га (що у цій заявці наведений як абревіатура (СУК структуру, а не білки взагалі. Якщо антитіло є спе- або МІ) та константний регіон легкого ланцюга. цифічним до епітопу "А", то наявність молекули, Константний регіон легкого ланцюга містить один що містить епітоп А (або вільний, немічений А), у СІ. Регіони МН та МГ. можуть бути додатково під- розділені на регіони гіперваріабельності, що ма-

ють назву гіперваріабельних регіонів (СОК), що домих як одноланцюговий Ем (з5сЕм); див., напри- розсіяні серед більш консервативних регіонів, що клад, Віга еї аїЇ. (1988) бсіепсе 242:423-426; та мають назву каркасних регіонів (ЕК). Кожен МН та Нивіоп еї аї. (1988) Ргос. Май. Асай. сі. ОБА

МІ. складається з трьох СОК та чотирьох ЕК, на- 85:5879-5883). Такі одноланцюгові антитіла також правлених від аміно-термінусу до карбокси- охоплюються терміном "антиген-зв'язуюча части- термінусу у наступному порядку: ЕК!Т, СОК'І, ЕКЗ, на" антитіла. Інші форми одноланцюгових антитіл,

СОК2, ЕКЗ, СОВЗ, ЕК4. Молекули імуноглобуліну такі, як димерні антитіла, також охоплені. Димерні можуть бути будь-якого типу (наприклад, дос, ІДЕ, антитіла є бівалентними, біспецифічними антиті-

ІОМ, 1ІдО, ІдАта Іду), класу (наприклад, Ід, ІдС2, лами, в яких МН та Мі домени експресуються у

ІДОЗ, ІДС, ІА та ІдАг) або підкласу. одному поліпептидному ланцюгу, проте з викорис-

Термін "антиген-зв'язуюча частина" антитіла танням лінкера, занадто короткого, щоб дозволити (або, спрощено, "частина антитіла"), як вживається спарювання між двома доменами у тому ж самому у цій заявці, відноситься до одного чи більше фра- ланцюгу, таким чином змушуючи домени спарюва- гментів антитіла, що зберігають здатність специ- тись з комплементарними доменами іншого лан- фічно зв'язувати антиген (наприклад, ПІ-12). Було цюга та створювати два антиген-зв'язуючі сайти показано, що антиген-зв'язуюча функція антитіла (див., наприклад, Ноїїдег, Р., еї аїЇ. (1993) Р'гос. може бути виконана фрагментами повнорозмірно- Май. Асад. Осі. ОБА 90:6444-6448; РоЦак, В.9., єї го антитіла. Такі втілення антитіл можуть також а. (1994) Бігписішге 2:1121-1123). Такі антиген- бути біспецифічними, подвійно-специфічними або зв'язуючі частини антитіл відомі з рівня техніки мульти-специфічними; специфічно зв'язувати два (Копіептапп апа Юиреї! еавз., Апіроду Епдіпеегіпоа чи більше різних антигенів. Приклади зв'язуючих (2001) 5рііпдег-МепПад. Мем Моїк. 790 рр. (ІЗВМ 3- фрагментів охоплюються терміном "антиген- 540-41354-5). зв'язуюча частина" антитіла (і) бар фрагмент, мо- Термін "конструкція антитіла", як вживається у новалентний фрагмент, що складається з МІ, МН, цій заявці, відноситься до поліпептиду, що містить

Сі. та СНІ доменів; (її) Е(ар)2 фрагмент, бівалент- один чи більше антиген-зв'язуючих частин за да- ний фрагмент, що містить два Бар фрагменти, ним винаходом, зв'язаних із лінкерним поліпепти- зв'язані дисульфідним містком у шарнірному регі- дом або константним доменом імуноглобуліну. оні; (ії) га фрагмент, що складається з МН та СНІ Лінкерні поліпептиди містять два чи більше аміно- доменів; (їм) Ем фрагмент, що складається з Мі та кислотних залишків, з'єднаних пептидними зв'яз-

МН доменів одного плеча антитіла, (м) 4ЗАБ фраг- ками, що використовуються для зв'язування однієї мент (Умага еї а!., (1989) Маштге 341:544-546, Міпгег чи більше антиген-зв'язуючих частин, такі лінкерні еї аІ.,, Публікація РСТ УМО 90/05144 А1, включені поліпептиди добре відомі з рівня техніки (див., до цієї заявки шляхом посилання), що містить наприклад, Ноїїїдег, Р., ек аї. (1993) Ргос. Ма). один варіабельний домен; та (мі) ізольований гіпе- Асай. сі. ОБА 90:6444-6448; РоЦак, В.у., єї а). рваріабельний регіон (СОК). Додатково, хоча два (1994) Біписішге 2:1121-1123). Константний домен домени Ем фрагмента, Мі. та УН, кодовані окреми- імуноглобуліну відноситься до константного доме- ми генами, вони можуть бути з'єднані з викорис- ну важкого чи легкого ланцюга. Амінокислотні пос- танням рекомбінантних способів, синтетичним лідовності константних доменів важкого та легкого лінкером, що надає їм змогу бути складеними як ланцюгів людського дО відомі з рівня техніки та один протеїновий ланцюг, де Мі та МН регіони наведені у Таблиці 2. спарені з утворенням моновалентних молекул (ві-

Таблиця 2: Послідовність константного домену важкого ланцюга та константного домену легкого ланцюга людського ідо 11 ЕЕН фнннневттт послідовності сво ит ння 2 щи константний регіон СІМКОУЕРЕРМТУМБУУМЗОАЇТ5ОМНТ

ЕРАМ'О5ЗОЇ УБІ55УУТМРБ5ЗІ ОТ

ОТМІСМУМАКРУМТКУОККМЕРКВСО

КТНТСРРОСРАРЕГ ССРБМУБІЕРРКР

КОТ МІЗКТРЕМУТСУУМОУМЗНЕОРЕМ

КЕМАИМОСМЕУНМАКТКРКЕЕО УМ

ТУКМУ5МІ ТМЕНОСУМ МОКЕУКСКУВ

МКАГРАРІЕКТІЗКАКСОРЕЕРОМУТІ.

РРЗІЬКЕЕМТКМОМІ ТС МКОЕМРБЗОЇ

АМЕМЖЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОО

ЗЕРІУВКІ ТМОКЗАУОО МУ ОМ

МНЕАГНМНУТОКБІ 5І РОК гама-1 СІУКОУРРЕРМТУМБУУМЗСАГТ5ОУНТ константний регіон ЕРАМІО55ОІ У5155УМТМРБЗББІ ОТ

ОТМІСЮУМНКРОМТКМОККМЕРКЗОСО

КТНТСРРСОРАРЕААСОРБЗМЕГЕРРКР

КОТІМІЗЕАТРЕМТСУУМОУЗНЕОРЕМ

КЕМАУУОСУЄЕМНМАКТКРКЕЕОХМ

ТУВУМ5МІ ТМ НОСУМ МОКЕУКСКУВ

МКАГРАРІЕКТІЗКАКОСОРКЕРОМУТІ

РРБЗ5КЕЕМТКМОМБІ ТСІМКОЕМРБЗОЇ

АМЕМЖЕЗБМОСОРЕММУКТТРРМІ О5ПО

ЗЕРГУБ5КІ ТМОКЗКУУОО МЕС

МНЕАЇ НМЯНУТОКБІ. БІ ЗРОК

Ід капла ЗЕОІО Мо: 4 ТМААРБМУРІЕРРБРЕОГ КЗОТАЗУМОСЇ.

ЕБМТЕОО5КОБТУ ВІ З5ТІТЛІ ЗКАБУ

ЕКНКМУАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМКО

ЕС константний регіон СИЗрЕУРОАМТУАМКАОЗЗРУКАСЄМ

ЕТТТРУКОЗММКУААБЗЗЧТІ БІ ТРЕОМУ

КЗНАЗУЗСОУТНЕОЗТМЕКТМАРТЕС

З

Додатково, антитіло чи його антиген-зв'язуюча мутацією іп мімо), наприклад, у СОК та у конкрет- частина можуть входити до складу більших моле- ному СОКЗ. Проте, термін "людське антитіло", як кул імунної адгезії, утворених шляхом ковалентної вживається у цій заявці, не призначений для чи нековалентної асоціації антитіла чи частини включення антитіл, в яких СОК послідовності, антитіла з одним чи більше білками або пептида- одержані із зародкових клітин інших видів ссавців, ми. Приклади таких молекул імунної адгезії вклю- таких, як миші, були імплантовані у людські карка- чають застосування активної зони стрептавідіну сні послідовності. для одержання тетрамерної молекули 5сЕУ Термін "рекомбінантне людське антитіло", як (Кірпуапом, 5.М., єї аі. (1995) Нитап Апіїбодієз апа вживається у цій заявці, призначено для включен-

Нуріідотаз 6:93-101) та застосування цистеїново- ня усіх людських антитіл, що одержані, експресо- го залишку, маркерного пептиду та С-термінальної вані, створені або ізольовані рекомбінантними полігістидинової мітки для одержання бівалентних способами, таких, як антитіла, експресовані з ви- та біотилінованих молекул 5сЕм (Кіргуапом, 5.М., користанням рекомбінантних векторів експресії, еї а). (1994) МОЇ. Іттипої. 31; 1047-1058). Частини трансфекованих у клітину-хазяїн (додатково опи- антитіл, такі, як Гар та (аб) фрагменти, можуть сані у Розділі ЇЇ С, наведеному нижче, антитіла, бути одержані з цілих антитіл шляхом використан- ізольовані з рекомбінантної комбінаторної бібліо- ня традиційних методик, таких, як дигестування теки людських антитіл (Ноодепроот Н.К., (1997) папаїну чи пепсину, відповідно, цілих антитіл. ТІВ Тесі. 15:62-70; Аггагу Н., апа Нідпзтіїн МУ.Е.,

Більш того, антитіла, частини антитіл та молекули (2002) Сіїп. Віоспет. 35:425-445; Саміопао ..М., імунної адгезії можуть бути одержані з викорис- апа Гатіск МУ. (2002) ВіоТесппідоез 29:128-145; танням стандартних рекомбінантних методик ДНК, Ноодепроот Н., апа Спатез Р. (2000) Іттипоіоду як описано у цій заявці. Тодау 21:371-378 ), антитіл, ізольованих з тварин "ІзЗольоване антитіло", як вживається у цій за- (наприклад, миші), що є трансгенними для генів явці, відноситься до антитіла, істотно вільного від людського імуноглобуліну (див., наприклад, Тауїог, інших антитіл, що мають різну антигенну специфі- Г. 0О., еї аї. (1992) Мисі. Асійз ВНез. 20:6287-6295; чність (наприклад, ізольоване антитіло, що спе- Кеїептапп 5-А., апа Стеєп І.Г. (2002) Сшигтепі цифічно зв'язує ПІЇ--12, є істотно вільним від анти- Оріпіоп іп Віоїесппоіоду 13:593-597; І ІШе М. еї а). тіл, що специфічно зв'язують антигени, інші, ніж (2000) Іттипоіоду Тодау 21:364-370) або антитіл,

МІС-12). Ізольоване антитіло, що специфічно зв'я- одержаних, експресованих, створених чи ізольо- зує ПІ--12 може, проте, мати перехресну актив- ваних будь-якими іншими способами, що включа- ність до інших антигенів, таких, як І--12 молекули ють сплайсінг послідовностей генів людського іму- від інших видів. Більш того, ізольоване антитіло ноглобуліну до інших ДНК послідовностей. Такі може бути істотно вільним від іншого клітинного рекомбінантні людські антитіла мають варіабельні матеріалу та/або хімічних препаратів. та константні регіони, одержані з послідовностей

Термін "людське антитіло", як вживається у цій імуноглобуліну людських зародкових клітин. У пе- заявці, призначене для включення антитіл, що вних втіленнях, проте, такі рекомбінантні людські мають варіабельні та константні регіони, одержані антитіла піддають мутагенезу іп міго (або, при ви- від послідовностей імуноглобуліну людських заро- користанні тварини, трансгенної для людських Ід дкових клітин. Людські антитіла за даним винахо- послідовностей, соматичного мутагенезу іп мімо) та дом можуть включати амінокислотні залишки, не тому амінокислотні послідовності МН та МІ. регіонів кодовані послідовностями імуноглобуліну людсь- рекомбінантних антитіл є послідовностями що, ких зародкових клітин (наприклад, мутації, що будучи одержаними з та родинними до послідов- включені шляхом рандомізованого або сайт- ностей МН та МІ людських зародкових клітин, мо- специфічного мутагенезу іп міго або соматичною жуть не існувати у природі у складі людських анти- цептор" відноситься до амінокислотної чи нуклеї- тіл зародкових клітин іп мімо. новокислотної послідовності антитіла, що забез-

Термін "химерне антитіло" відноситься до ан- печує чи кодує один чи більше каркасних регіонів титіл, що містять послідовності варіабельного ре- та константних регіонів. У конкретному втіленні, гіону важкого та легкого ланцюга одного виду та термін "акцептор" відноситься до амінокислотної послідовності константного регіону інших видів, чи нуклеїновокислотної послідовності людського таких, як антитіла, що мають мишачі варіабельні антитіла, що забезпечує чи кодує, щонайменше, регіони важкого та легкого ланцюгів, зв'язані із 8095, переважно, щонайменше, 8595, щонаймен- людськими константними регіонами. ше, 9095, щонайменше, 9595, щонайменше, 9890,

Термін "СОК-імплантоване антитіло" відно- або 10095 амінокислотних послідовностей одного ситься до антитіл, що містять послідовності варіа- чи більше каркасних регіонів. Відповідно до цього бельного регіону важкого та легкого ланцюга одно- втілення, акцептор можу містити, щонайменше, 1, го виду, але в яких послідовності одного чи більше щонайменше, 2, щонайменше, 3, щонайменше, 4,

СО регіонів МН та/або МІ. заміщені СОВ послідо- щонайменше, 5, або щонайменше, 10 амінокисло- вностями інших видів, таких, як антитіла, що ма- тних залишків, що не зустрічається (зустрічаються) ють мишачі варіабельні регіони важкого та легкого в одному чи більше конкретних положеннях люд- ланцюгів, де один чи більше мишачих СОЕ (на- ського антитіла. Каркасний регіон акцептора приклад, СОКЗ) був заміщений на людські СОК та/або константний регіон (константі регіони) акце- послідовності. птора можуть бути, наприклад, похідні чи одержані

Термін "олюднене антитіло" відноситься до з гену антитіл зародкових ліній клітин, гену зрілого антитіл, що містять послідовності варіабельного антитіла, функціонального антитіла (наприклад, регіону важкого та легкого ланцюгів не-людських антитіл, добре відомих з рівня техніки, антитіл, що видів (наприклад, миші) проте в яких, щонаймен- розробляють чи комерційно доступних антитіл). ше, частина МН та/або МІ. послідовності була за- Як вживається у цій заявці, термін "СОК" від- міщена таким чином, щоб бути більш "людинопо- носиться до гіперваріабельного регіону у межах дібною", тобто, більш подібною варіабельним варіабельних послідовностей антитіла. Існують послідовностям людських зародкових клітин. Од- три СОЕ в кожному варіабельному регіоні важкого ним видом олюднених антитіл є СОК- ланцюга та легкого ланцюга, що позначені як імплантоване антитіло, в якому людські СОК пос- СОМ, СОК2 та СОКЗ, для кожного з варіабельних лідовності введені у не-людські МН та МІ. послідо- регіонів. Термін "набір СОК", як вживається у цій вності для заміщення відповідних не-людських заявці, відноситься до групи з трьох СОК, що зу-

СОМ послідовностей. стрічаються у одному варіабельному регіоні, що

Терміни "Кабат нумерація", "Кабат визначен- здатний зв'язувати антиген. Точні межі цих СОН ня" та "Кабат маркірування" у цій заявці вживають були визначені різним чином відповідно до різних як взаємозамінні. Ці терміни, визнані в цій галузі, систем. Система, описана Кабатом (Кабаї еї аї., відносяться до системи нумерації амінокислотних Зедиепсев ої Ргоїєїп5 ої Іттипоіодіса! Іпіегеві залишків, що є більш варіабельними (тобто, гіпер- (Майопаї! Іпзійшевз ої Неакй, Ве Ппезаа, Ма. (1987) варіабельними), ніж інші амінокислотні залишки у та (1991)), не лише забезпечує однозначну систе- варіабельних регіонах важкого та легкого ланцюгів му нумерації залишків, застосовну до будь-якого антитіла, або в їх антиген-зв'язуючих частинах варіабельного регіону антитіла, але також забез- (Кабат еї а. (1971) Апп. МУ Асадй, 5сі. 190:382-391 печує точне визначення меж залишків трьох СОМ. та Кабат, Е.А., еї а). (1991) бедиєпсез ої Ргоїеїпв5 ої Ці СОК можуть мати назву Кабат-СОК. Споїпіа та

Ітітипоіодісаї Іпіегезі, РІКА Еайіоп, 0.5. Оераптепі співавтори (Споїпіа та Гевк, у. Мої. Віої. 196:901- ої Неаййп апа Нитап бегмісез, МІН Рибіїсайоп Мо. 917 (1987) та Спошіа еї аї., Маїшге 342:877-883 91-3242). Для варіабельного регіону важкого лан- (1989)) знайшли, що певні субфрагменти у межах цюга, гіперваріабельний регіон знаходиться у діа- Кабат-СОК приймають майже ідентичні пептидні пазоні від амінокислотних положень 31-35 для каркасні конформації, незважаючи на те, що вони

СОМ, амінокислотних положень 50-65 для СОК2, дуже відрізняються на рівні амінокислотної послі- та амінокислотних положень 95-102 для СОКЗ. довності. Ці субфрагменти позначені як 11,12 та

Для варіабельного регіону легкого ланцюга, гіпер- ЇЗ або НІ, Н2 та НЗ, де "І" та "Н" означають регіо- варіабельний регіон знаходиться у діапазоні від ни легкого ланцюга та важкого ланцюга, відповід- амінокислотних положень 24-34 для СОМ, аміно- но. Ці регіони можуть мати назву Споїпіа-СОВ, кислотних положень 50 -56 для СОК2, та аміноки- межі яких перекривають Кабат-СОБ. Інші визна- слотних положень 89-97 для СОКУ. чення меж СОК, що перекривають Кабат-СОВ,

Як вживається у цій заявці, терміни "акцептор" були описані Радіап (ЕАЗЕВ .). 9:133-139 (1995)) та та "акцепторне антитіло" відноситься до антитіла МассСайшт (9. Мої. Віо!. 262(5):732-45 (1996)). Про- чи нуклеїновокислотної послідовності, що забез- те інші визначення меж СОК можуть не дотриму- печує чи кодує, щонайменше, 8095, щонайменше, ватись суворо будь-якої з вищезазначених систем, 8595, щонайменше, 9095, щонайменше, 9595, що- але вони будуть, проте, перекривати Кабат-СОВ, найменше, 9895 або 10095 амінокислотних послі- хоча вони можуть бути скорочені чи подовжені у довностей одного чи більше каркасного регіонів. У світі прогнозування чи експериментальних даних деяких втіленнях, термін "акцептор" відноситься щодо того, що конкретні залишки або групи зали- до амінокислотної чи нуклеїновокислотної послі- шків або навіть всі СОБ не впливають значною довності антитіла, що забезпечує чи кодує конста- мірою на зв'язування антигенів. У способах, що нтний регіон(и). Ще в одному втіленні, термін "ак- використовують у цій заявці, можна застосовувати

СОР, визначені відповідно до будь-якої з цих сис- Як вживається у цій заявці, термін "каркас" чи тем, хоча переважними втіленнями є СОК, визна- "каркасна послідовність" відноситься до послідов- чені Кабат або Споїпіа. ностей, що залишились, варіабельного регіону,

Як вживається у цій заявці, термін "канонічний" мінус СОК. Через точне визначення СОК послідо- залишок відноситься до залишку у СОК або карка- вність може бути встановлена за допомогою різ- сі, що визначає конкретну канонічну СОК структу- них систем, значення каркасної послідовності під- ру, як визначено СПпоїпіа еї аїЇ. (9У. Мої. Віої. лягає відповідним різним інтерпретаціям. Шість 196:901-907 (1987); Споїйіа еї аї., 9. Мої. Віо|!. Сов (СОВ-11, -12 та -І3 легкого ланцюга та СОВ- 227:199 (1992), обидва включені до цієї заявки НТ, -Н2 та -НЗ важкого ланцюга) також розділяють шляхом посилання). У відповідності до Споїпіа еї каркасні регіони легкого ланцюга та важкого лан- аІ., критичні фрагменти СОЕ. багатьох антитіл ма- цюга на чотири субрегіони (ЕК1, ЕК2, ЕКЗ та ЕК4) ють майже ідентичні пептидні каркасні конформа- кожного ланцюга, в яких СОКІ розташований між ції, незважаючи на значні відмінності на рівні амі- ЕК та ЕК2, СОКО2 між ЕРК2 та ЕКЗ, а СОКЗ між нокислотної послідовності. Кожна канонічна ЕВЗ та ЕК4. Без вказання конкретних субрегіонів структура визначає, головним чином, набір торсій- як ЕК, ЕК2, ЕКЗ та ЕКА, каркасний регіон, як його них кутів пептидного каркасу для сусіднього сег- називають інші, представляє комбіновані ЕК у ме- менту амінокислотних залишків, що утворюють жах варіабельного регіону одного ланцюга імуног- петлю. лобуліну, що зустрічається у природі. Як вжива-

Як вживається у цій заявці, терміни "донор" та ється у цій заявці, ЕК представляє один з "донорське антитіло" відноситься до антитіла, що чотирьох субрегіонів, а ЕК представляє один чи забезпечує один чи більше СОК. У переважному більше з чотирьох субрегіонів, що утворюють кар- втіленні, донорське антитіло є антитілом з видів, касний регіон. що відрізняються від антитіла, з якого походять чи Акцепторь! послідовності людських важкого та були одержані каркасні регіони. У контексті олюд- легкого ланцюгів відомі з рівня техніки. В одному неного антитіла, термін "донорське антитіло" від- втіленні даного винаходу акцепторні послідовності носиться до не-олюдненого антитіла, що забезпе- людських важкого та легкого ланцюгів вибирають з чує один чи більше СОР. послідовностей, що описані у Таблиці З та Таблиці 4.

ТАБЛИЦЯ 3: АКЦЕПТОРНІ ПОСЛІДОВНОСТІ ВАЖКОГО ЛАНЦЮГУ

Г5ЕСІО Ме. 0 |Ділянкабілка |Послідовність/////11с1с1сСсС. вн нн 2

МОМ ііі ііі 5.5

МИ ін іній

ТУХСАК

91 |1МН2тоЛНеРвЯ |УУбОСТІМТУЗ000000017171ї1ї1сСсСсС

ЛИН ііі ові зів п пудев ня

ТУУСАВ

9117 |МНа-об/НоРвя (У/бОотТУТУБ 00000101717171с1сСсСсС1С

АННИ і повній

СЕТЕЗ

УХУСАК

90111010 |МНУЗЛоМНеРНЯ /МУСООТТМТУ58717171171171с1сСсСу

ОБТЕ5 й

МУУСАК

91111110 (МНУОЛНВЕРВЯ |МСОСТТМТУ55 000071717с1с1сСсКОш

ООТЕ5

ХУУСАК

Ге 1071110 |УнНевалНеРВЯ |МСОсТТУТУВВ 777717с7сСсСсСсСсСс/;.Со

СУТЕТ

19 МНІ1-18/)Н6 ЕВ2 МУВОАРСОСІ ЕМУМО

Пл ій кін

УУУСАК

Ге 1МНСВЛНОЕНЯ |МібОстІМТУВВ 01010111

ТАБЛИЦЯ 4: АКЦЕПТОРНІ ПОСЛІДОВНОСТІ ЛЕГКО ГО ЛАНЦЮГУ

СВЕСІВЩЕ 0 білянкабінка 000000 Поспідовність ет

І ІТ езовт во те3ава и ов012356789 . : Н т !

ОВК ОММТОБРББСАУВЕСЕНАНКТ

СОЯ 000000000ВБЖКЯРНЯ 00000000 МИЮКРООВРКНУ 125 ВКА гНЗ ев тентів мн ДНУ Ко

Го ошнннннннодо я ппнн ВОМАУЖ 00

ВК ОКОООТКУЄКА ння їй фо ка Ен ОЕРУМІООЗРАТЯУЗРОЕНА ТЯ С! 28 с МаАКА Ева І СПРАКРОЗОБОВСТЕРТТОЗКОВЕ п ПО Кл А і 010 КАРВЯ 000000 РОООТКУВКА сш

САМКА ЕН 00000001 БОМТОБРББІВАВУЄЮВУНТЄ ії ЗУ В БМКА Но ї УХУХООКРЕКАРКВИУ і

ПИ ЛБАЖЯРНО 00000000 БУРБНЕБОБОЗОТОКТТВМОР нишшнн п я кВ НВ

БЖ 800 Я НЯ 00000001 БОООТКУЄКЯ сс. ! 30707077 ІБНКЯЕВі 77711711 БІЮМТОВРББУВАВУЄВВУТЕ за і ОЗяАЖКА гвЗ пізуеВАРВІОВОВО ТОРТ Ля ОР і і ШО що рутини КЗ - ой о 00. КЯРВЯ 001 БОООКУВКА нн

Як вживається у цій заявці, термін "ген антитіл Як вживається у цій заявці, термін "олюднене зародкових ліній клітин" або "генний фрагмент" антитіло" є варіантом, похідним, аналогом чи фра- відноситься до імуноглобулінової послідовності, гментом антитіла, що імуноспецифічно зв'язує що кодована не-лімфоїдними клітинами, що не антиген, що розглядається, та що містить каркас- були піддані процесу мутації, що призводить до ний регіон (ЕК), що має, головним чином, аміноки- генетичного ре аранжування та мутації для екс- слотну послідовність людського антитіла та гіпер- пресії конкретного імуноглобуліну. (Див., напри- варіабельний регіон (СОК), що має, головним клад, Зпаріго єї а. Ст. Вем. Іттипої!. 22(3): 183- чином, амінокислотну послідовність не-людського 200 (2002); МагесНа|цопів еї а!., Адм. Ехр. Меа. Віо1. антитіла. Як вживається у цій заявці, термін "голо- 484:13-30 (2001)). Одна з переваг, що забезпечу- вним чином" у контексті СОК відноситься до СОР, ються різними втіленнями даного винаходу, є ре- що має амінокислотну послідовність, яка має, що- зультатом визнання того, що гени антитіл зарод- найменше, 809565, переважно, щонайменше, 8595, кових ліній клітин є, більш вірогідно, генами зрілих щонайменше, 9095, щонайменше, 9595, щонайме- антитіл до структур консервативних незмінних нше, 9895 або, щонайменше, 9995 ідентичність до амінокислотних послідовностей, характерних для амінокислотної послідовності не-людського антиті- індивідів у виді, тому вони, менш вірогідно, мають ла СОК. Олюднене антитіло містить, головним бути визнані як такі, що походять зі стороннього чином, усі з, щонайменше, одного, а типово, двох, джерела, при терапевтичному використанні у цьо- варіабельних доменів (Раб, Рар", Е(ар)г2, Барс, Ем) му виді. в яких усі або, головним чином, усі СОК регіони

Як вживається у цій заявці, термін "ключові" відповідають регіонам не-людського імуноглобулі- залишки відноситься до певних залишків у межах нового (тобто, донорського антитіла) та усі або, варіабельного регіону, що мають більший вплив головним чином, усі каркасні регіони є регіонами на специфічність зв'язування та/або афінність ан- консенсусної послідовності людського імуноглобу- титіла, зокрема, олюдненого антитіла. Ключовий ліну. Переважно, олюднене антитіло також міс- залишок включає, проте не обмежується наведе- тить, щонайменше, частину константного регіону ними, один чи більше з наступних залишків: зали- імуноглобуліну (Ес), типово, людського імуногло- шок, суміжний із СОК, можливий сайт глікозилу- буліну. У деяких втіленнях, олюднене антитіло вання (може бути М- чи О-сайтом глікозилування), містить як легкий ланцюг, так і, щонайменше, варі- рідкий залишок, залишок, здатний взаємодіяти з абельний домен важкого ланцюга. Антитіло також антигеном, залишок, здатний взаємодіяти з СОР, може містити СНІ, шарнірні, СН2, СНЗ та СНА канонічний залишок, контактний залишок між варі- регіони важкого ланцюга. У деяких втіленнях, абельним регіоном важкого ланцюга та варіабель- олюднене антитіло містить тільки олюднений лег- ним регіоном легкого ланцюга, залишок у зоні Ве- кий ланцюг. У деяких втіленнях, олюднене антиті- рньєр та залишок у регіоні, що частково підпадає ло містить тільки олюднений важкий ланцюг. У під визначення Споїпіа СОКІ варіабельного важ- конкретних втіленнях, олюднене антитіло містить кого ланцюга та визначення Кабатом каркасу пер- тільки олюднений варіабельний домен легкого шого важкого ланцюга. ланцюга та/або олюдненого важкого ланцюга.

Олюднене антитіло може бути вибрано з будь- вання бластної проліферації людського фітоме- якого класу імуноглобулінів, включаючи ІМ, Ід, гаглютиніну у ФГА аналізі бластної індукції під дією

ІдО, ІдА та ІД4Е, та будь-якого ізотипу, включаючи, інтерферону-гама (див. Приклад 1.1.С) або інгібу- без обмеження, Ідс1, Ідо2, ДОЗ та ІдДс4. Олюдне- вання рецептора зв'язування в аналізі зв'язування не антитіло може містити послідовності з більш, рецептора людського 1-12 (див. також Заїнеїй еї ніж одного класу чи ізотипу, а конкретні константі а!І., публікація РСТ Мо МУО 00/56772 А1). домени можуть бути вибрані для оптимізації бажа- Термін "активність" включає такі активності, як них функцій ефектора з використанням методів, специфічне зв'язування/афінність антитілом анти- добре відомих з рівня техніки. гену, наприклад, анти-піІЇ-12 антитіло, що зв'язує

Каркасні та СОК регіони олюдненого антитіла І/-12 антиген та/або здатність до нейтралізації не повинні обов'язково відповідати батьківським антитіла, наприклад, анти-піЇ-12 антитіла, зв'язу- послідовностям, наприклад, СОК донорського ан- вання якого із ПІ-12 інгібує біологічну активність титіла або консенсусний каркас можуть бути муто- НПІ--12, наприклад, інгібування ФГА бластної про- вані шляхом заміщення, інсерції та/або делеції, ліферації чи інгібування зв'язування рецептора щонайменше, одного амінокислотного залишку людського 1І--12 в аналізі зв'язування рецептора чи таким чином, щоб СОЕ або каркасний залишок на в ФГА аналізі бластної індукції під впливом гама- цьому сайті не відповідав ані донорському антиті- інтерферону (див. Приклад 1.1.С). лу, ані консенсусному каркасу. У переважному Термін "епітоп" включає будь-яку поліпептидну втіленні, такі мутації, проте, не будуть екстенсив- детермінанту, здатну до специфічного зв'язування ними. Зазвичай, щонайменше, 8095, переважно, імуноглобулінового або Т-клітинного рецептору. У щонайменше, 8595, більш переважно, щонаймен- певних втіленнях, епітопні детермінанти включа- ше, 9095, та найбільш переважно, щонайменше, ють хімічно активні поверхневі угрупування моле- 9595 залишки олюдненого антитіла будуть відпові- кул, таких, як амінокислоти, бічні ланцюги цукрів, дати залишкам батьківським ЕЕ та СОЕ послідов- фосфорил або сульфонал та, у певних втіленнях, ностям. Як вживається у цій заявці, термін "консе- можуть мати тривимірні структурні характеристики, нсусний каркас" відноситься до каркасного регіону та/або специфічні зарядові характеристики. Епітоп у консенсусній послідовності імуноглобуліну. Як є регіоном антигену, зв'язаним із антитілом. У пев- вживається у цій заявці, термін "консенсусна пос- них втіленнях, вважають, що антитіло специфічно лідовність імуноглобуліну" відноситься до послідо- зв'язано із антигеном, коли він, переважно, визнає вності, утвореної з амінокислот (або нуклеотидів), його антиген-мішень у складній суміші білків що найбільш часто зустрічаються, сімейства ро- та/або макромолекул. динних імуноглобулінових послідовностей (Див., Термін "поверхневий плазмонний резонанс", наприклад, УмМіппакег, гот бепе5 0 Сіопе5 як вживається у цій заявці, відноситься до оптич- (мМепадздезеїїзспай, Умеіппеїт, Септапу 1987)). У ного явища, що дозволяє аналізувати біоспецифі- сімействі імуноглобулінів, кожне положення у кон- чну взаємодію у режимі реального часу шляхом сенсусній послідовності займає амінокислота, що детекції змін концентрацій білків у межах біосен- найбільш часто зустрічається у цьому положенні у сорної матриці, наприклад, з використанням сис- сімействі Якщо дві амінокислоти зустрічаються теми ВіАсоге (Рпагтасіа Віозепзог АВ, Оррзаїа, однаково часто, кожна з них може бути включена Змедеп апа Різсаїаужау, МУ). Подальші описи на- до консенсусної послідовності. ведені у 9Убп55оп, О., еї а). (1993) Апп. Віої. Сіїп.

Як вживається у цій заявці, зона "Верньє" від- 51:19-26; Обп55оп, Ш., еї аї. (1991) Віотесппіднев носиться до підмножини каркасних залишків, що 11:620-627; допп55оп, В., еї аІ. (1995) 9. Мо). можуть впорядковувати СОК структуру та точно Весодпії. 8:125-131; та допппз5оп, В., еї аї. (1991) регулювати відповідність до антигену, як описано у Апаї. Віоспет. 198:268-277.

Еооїе та Уміптег (1992, 9. Мої. Віо!Ї. 224:487-499, що Термін "Коп", як вживається у цій заявці, відно- включена до цієї заявки шляхом посилання). За- ситься до константи швидкості асоціації антитіла з лишки зони Верньє утворюють шар, що знахо- антигеном з утворенням комплексу антиті- диться під СОК та може впливати на структуру ло/антиген, відомого з рівня техніки.

СО та афінність антитіла. Термін "Кок", як вживається у цій заявці, відно-

Як вживається у цій заявці, термін "нейтралі- ситься до константи швидкості дисоціації антитіла зуючий" відноситься до нейтралізації біологічної з комплексу антитіло/антиген, відомого з рівня активності цитокіну, коли зв'язуючий білок специ- техніки. фічно зв'язує цитокін. Переважно, нейтралізуючий Термін "Ка", як вживається у цій заявці, відно- зв'язуючий білок є нейтралізуючим антитілом, зв'- ситься до константи дисоціації конкретної взаємо- язування якого з ПІЇ-12 та/або ПІ--23 призводить дії антитіло-антиген, як відомо з рівня техніки. до інгібування біологічної активності ПІІЇ-12 та/або Термін "мічений зв'язуючий білок" як вжива-

ПІС-23. Переважно, нейтралізуючий зв'язуючий ється у цій заявці, відноситься до білка, до якого білок зв'язує ПІЇ-12 та/або ПІ -23 та зменшує біо- включено мітку, що забезпечує ідентифікацію зв'я- логічну активність 1-12 та/або ПІІ-23, на, щонай- зуючого білка. Переважно, мітка є детектовним менше, приблизно, 2095, 4095, 6095, 8090, 8590 чи маркером, наприклад, включенням радіоактивно більше. Інгібування пПІІ--12 та/або ПІІ-23 за допомо- міченої амінокислоти або приєднанням до поліпе- гою нейтралізуючого зв'язуючого білка можна оці- птиду біотіонільних груп, що можуть бути детекто- нити шляхом вимірювання одного чи більше інди- вані за допомогою маркірованого авідіну (напри- каторів біологічної активності ПІ--12 та/або ПІ--23, клад, стрептавідіну, що містить флуоресцентний добре відомих з рівня техніки. Наприклад, інгібу- маркер, чи ферментної активності, що може бути детектована за допомогою оптичних чи колориме- Термін "ізольований полінуклеотид", як вжива- тричних способів). Приклади міток для поліпепти- ється у цій заявці, повинен означати полінуклетид дів включають, але не обмежуються наведеними, (наприклад, геномного, КДНК, або синтетичного такі: радіоїзотопи чи радіонукліди (наприклад, ЗН, походження, або деяку їх комбінацію) що, у силу 14, 855 в0у То, ТД, 125), 191), 177) у, 166н6о або свого походження, є "ізольованим полінуклеоти- 1535171); флуоресцентні мітки (наприклад, РІТС, дом": не пов'язаний із цілим чи частиною полінук- родамін, лантаноїдні фосфори), ферментні мітки леотиду, з яким "ізольований полінуклеотид" зу- (наприклад, пероксидазу хрону, люциферазу, луж- стрічається у природі; функціонально пов'язаний із ну фосфатазу); хемілюмінесцентні мітки; біоти- полінуклеотидом, з яким він не пов'язаний у при- нільні групи; попередньо визначені поліпептидні роді; або не зустрічається у природі як компонент епітопи, розпізнані вторинним репортером (напри- більшої послідовності. клад, лейцин-зіперні парні послідовності, сайти Термін "вектор", як вживається у цій заявці, ві- зв'язування для вторинних антитіл, домени зв'язу- дноситься до молекули нуклеїнової кислоти, що вання металів, епітопні мітки); та магнітні речови- здатна до транспортування іншої нуклеїнової кис- ни, такі, як хелати гадолінію. лоти, з якою він був зв'язаний. Один тип вектору є

Термін "кон'югат антитіл" відноситься до зв'я- "плазмідом", що відноситься до циркулярної по- зуючого білка, такого, як антитіло, хімічно зв'язано- двійно-ланцюгової петлі ДНК, в яку можуть бути го із другою хімічною групою, такою, як терапевти- ліговані додаткові ДНК сегменти. Іншим типом век- чний або цитотоксичний агент. Термін "агент" тору є вірусний вектор, де додаткові ДНК сегменти вживається у цій заявці для позначення хімічної можуть бути ліговані у вірусний геном. Деякі век- сполуки, суміші хімічних сполук, біологічної макро- тори здатні до автономної реплікації у клітину- молекули або екстракту, зробленого з біологічних хазяїн, у яку вони включені (наприклад, бактеріа- матеріалів. Переважно, терапевтичні або цитоток- льні вектори, що мають бактеріальне походження сичні агенти включають, не обмежуючись наведе- реплікації та епісомальні вектори ссавців). Інші ними, коклюшний токсин, таксол, цитохалазін В, вектори (наприклад, не-епісомальні вектори ссав- граміцидін О, бромід етидію, еметін, мітоміцин, ців) можуть бути поєднані у геномі клітині-хазятна етопозид, тенопозид, вінкрістін, вінбластін, колхі- після включення у клітину-хазяїн, та, таким чином, цин, доксорубіцин, даунорубіцин, дигідрокис ан- репліковані разом із геномом-хазяїном. Більш того, трацин діон, мітоксантрон, мітраміцин, актіноміцин деякі вектори здатні направляти експресію генів, з

Ор, 1-дегідротестостерон, глюкокортікоїди, прокаїн, якими вони функціонально зв'язані. Такі вектори тетракаїн, лідокаїн, пропранолол та піроміцин та їх мають у цій мають назву "рекомбінантні вектори аналоги чи гомологи. експресії" (або спрощено, "вектори експресії").

Терміни "кристалічний" та "кристалізований", Загалом, вектори експресії що застосовують у як вживається у цій заявці, відносяться до антиті- рекомбінантних ДНК методиках, часто існують у ла, або його антиген-зв'язуючої частини, що існує формі плазмід. У цій заявці, "плазмід" та "вектор" у формі кристалу. Кристали є однією з форм твер- можуть бути використані як взаємозамінні, оскіль- дого стану речовини, що відрізняється від інших ки плазмід є найбільш розповсюдженою формою форм, таких, як аморфний твердий стан чи рідкок- використання вектору. Проте, винахід призначе- ристалічний твердий стан. Кристали складаються ний для включення таких інших форм векторів з регулярних, повторюваних, тривимірних періоди- експресії, таких, як вірусні вектори (наприклад, чних структур атомів, іонів, молекул (наприклад, ретровіруси дефективної реплікації, аденовіруси білків, таких, як антитіла), або молекулярних ан- та адено-асоційовані віруси), що мають еквівален- самблів (наприклад, комплексів антиген/антитіло). тні функції.

Ці тривимірні періодичні структури впорядковані Термін "функціонально зв'язаний" відноситься відповідно до їх конкретних математичних співвід- до безпосереднього сусідства, де описані компо- ношень, що добре зрозумілі у цій галузі. Основна ненти знаходяться у співвідношенні, що дозволяє одиниця, чи будівельний блок, що повторюється у ним функціонувати за призначенням. Контрольна кристалі, має назву асиметричної одиниці. Повто- послідовність, що "функціонально зв'язана" із ко- рення асиметричної одиниці у системі, що відпові- дуючою послідовністю, легована таким чином, що дає наданій, добре визначені кристалографічній експресія кодуючої послідовності здійснюється за симетрії, забезпечує "одиничну комірку" кристалу. умов, що відповідають контрольним послідовнос-

Повторення одиничної комірки шляхом регулярних тям. "Функціонально зв'язані" послідовності вклю- трансляцій в усіх трьох вимірах забезпечує крис- чають як контрольні експресуючі послідовності, тал. Див. Сієеде, К. апа Оисгиїх, А. Ваїтей, суміжні із геном, що розглядається, так і контроль-

Стгузіайігайоп ої Мисієїс Асійб5 апа Рггоїєїп5, а ні експресуючі послідовності, що діють у ігапв-

Ргасіїса! Арргоасі, 2па єа., рр. 20 1-16, Охюга положенні або на відстані для контролювання ге-

Опімегейу Ргевв5, Мем ХогК, Мем Хоїк, (1999). ну, що розглядається. Термін "контрольні експре-

Термін "полінуклеотид", як вживається у цій суючі послідовності", як вживається у цій заявці, заявці, означає полімерну форму двох чи більше відноситься до полінуклеотидних послідовностей, нуклеотидів, рибонуклеотидів чи дезоксирибонук- необхідних для впливу на експресію та процесінг леотидів, або модифікованої форми будь-якого кодуючих послідовностей, до яких вони ліговані. типу нуклеотиду. Термін включає одно- та подвій- Контрольні експресуючі послідовності включають но-ланцюгові форми ДНК, але, переважно, подвій- відповідні послідовності початку та припинення но-ланцюгову ДНК. транскрипції, промотору та енхансеру; ефективні сигнали РНК процесингу, такі, як сигнали сплайсін-

гу та поліаденіляції; послідовності, що стабілізу- можуть бути здійснені відповідно до інструкцій ють цитоплазмові ІРНК; послідовності, що підси- виробника або так, як звичайно здійснюється у цій люють ефективність трансляції (тобто, Ко7ак кон- галузі, або як описано у цій заявці. Вищезазначені сенсусна послідовність); послідовності, що методи та процедури можуть бути, загалом, вико- підсилюють стійкість білка; та, за бажанням, послі- нані відповідно до традиційних способів, добре довності, що підсилюють секрецію білків. Природа відомих з рівня техніки та так, як описано у різно- таких контрольних послідовностей відрізняється манітних загальних та більш конкретних посилан- від організму хазяїна; у прокаріотів, контрольні нях, що процитовані та обговорені у цій заявці. послідовності яких загалом включають промотор, Див., наприклад, затюогоок еї аї. МоїІесшаг Сіопіпд: рібосомний зв'язуючий сайт та послідовність тер- А Іарогаїюгу Мапиа! (24 ейд., Соїй Оргіпд Нагрог мінатору транскрипції; у еукаріотах, загалом, такі І арогаїюгу Ргезв, Соїй бріїпд Наог, М.У. (1989)), контрольні послідовності включають промотори та що включена до цієї заявки шляхом посилання контрольні послідовності еукаріотів. Термін "конт- для будь-яких цілей. рольні послідовності" призначений для включення "Трансгенний організм", як відомо з рівня тех- компонентів, наявність яких є необхідною для екс- ніки, та як вживається у цій заявці, відноситься до пресії та процесингу, та можуть також включати організму, що має клітини, що містять транс ген, додаткові компоненти, присутність яких є корис- де транс ген вводять в організм, (або попередник ною, наприклад, лідерні послідовності та послідо- організму) експресує поліпептид, що не екс пресу- вності клітин, що зливаються. ється природно в організмі. "Трасген" є ДНК конс- "Трансформація", як визначено у цій заявці, труктом, що стабільно та функціонально інтегро- відноситься до будь-якого процесу, за допомогою ваний у геном клітини, з якої розвивається якого екзогенна ДНК надходить до клітини-хазяїна. трансгенний організм, направляючи експресію

Трансформація може відбуватись у природних чи кодованого генного продукту в одному чи більше штучних умовах, за допомогою різноманітних спо- клітинних типів або тканин трансгенного організму. собів, добре відомих з рівня техніки. Трансформа- Терміни "регулювати" та "модулювати" вжи- ція може залежати від будь-якого відомого спосо- вають як взаємозамінні, та, як вживається у цій бу інсерції сторонніх нуклеїновокислотних заявці, вони відносяться до зміни активності моле- послідовностей у прокаріотну чи еукаріотну кліти- кули, що розглядається (наприклад, біологічної ну-хазяїн. Вибраний спосіб заснований на клітині- активності ПІ--12). Модулювання може представ- хазяїні, що трансформується, та може включати, ляти собою збільшення чи зменшення величини але не обмежуватись наведеними, вірусну інфек- певної активності або функції молекули, що розг- цію, електропорацію, ліпофекцію та бомбардуван- лядається. Ілюстративні активності чи функції мо- ня частинками. Такі "трансформовані" клітини лекули включають, не обмежуючись наведеними, включають стабільно трансформовані клітини, в зв'язуючі характеристики, ферментативну актив- яких вставна ДНК здатна до реплікації або як пла- ність, активацію клітинних рецепторів та сигнальну змід, що автономно реплікує, або як частина хро- трансдукцію. мосоми-хазяїна. Вони також включають клітини, Відповідно, термін "модулятор", як вживається що тимчасово експресують вставну ДНК чи РНК у цій заявці, означає сполуку, здатну змінювати протягом обмеженого часу. активність або функцію молекули, що розгляда-

Термін "рекомбінантна клітина-хазяїн" (або, ється (наприклад, біологічну активність ПІІ--12). спрощено, "клітина-хазяїн"), як вживається у цій Наприклад, модулятор може спричиняти збіль- заявці, відноситься до клітини, в яку була введена шення чи зменшення величини певної активності екзогенна ДНК. Має бути зрозумілим, що такі тер- чи функції молекули порівняно із величиною акти- міни призначені для назви не тільки конкретної вності чи функції, що спостерігається у відсутності клітини суб'єкту, але для потомства такої клітини. модулятора. У певних втіленнях, модулятором є

Через те, що можуть відбуватись певні модифіка- інгібітор, що зменшує величину, щонайменше, ції у наступних поколіннях, викликані мутацією або однієї активності чи функції молекули. Ілюстратив- впливом оточуючого середовища, таке потомство, ні інгібітори включають, не обмежуючись наведе- фактично, буде ідентичним до батьківської кліти- ними, білки, пептиди, антитіла, реріїбодієв, вугле- ни, проте воно буде включено у межах визначення водні або невеликі органічні молекули. Реріїродієв терміну "клітина хазяїн", як вживається у цій заяв- описані, наприклад, у М/О 01/83525. ці. Переважно, клітини-хазяєва включають прока- Термін "агоніст", як вживається у цій заявці, ві- ріотні та еукаріотні клітини, вибрані з будь-яких дноситься до модулятору, що, при контакті з моле- видів життя. Переважні еукаріотні клітини включа- кулою, що розглядається, призводить до збіль- ють протісти, грибкові, рослинні та тваринні кліти- шення величини певної активності або функції ни. Найбільш переважно, клітини-хазяєва включа- молекули порівняно із величиною активності чи ють, не обмежуючись наведеними, прокаріотну функції, що спостерігається за відсутності агоніста. клітинну лінію Е.Соїї; тваринні клітинні лінії СНО, Конкретні агоністи, що розглядаються, можуть

НЕК 293 та СО5; клітинні лінії комах 519; та гриб- включати, не обмежуючись наведеними, 1-12 по- кові клітини Засспаготусез сегемівіає. ліпептиди або поліпептиди, нуклеїнові кислоти,

Для рекомбінантних ДНК, олігонуклеотидного вуглеводні або будь-які інші молекули, що зв'язу- синтезу та культивування та трансформації тка- ють ПІС-12. нинної культури можуть бути використані стандар- Термін "антагоніст" або "інгібітор", як вжива- тні методи, (наприклад, електропорація, ліпофек- ється у цій заявці, відноситься до модулятору, що цію). Ферментні реакції та методи очищення при контакті з молекулою, що розглядається,

спричиняє зменшення величини певної активності Напому еї аї, Апіїбодієз: А І арогаюгу Мапиаї, (Соїа чи функції молекули порівняно із величиною акти- Зрііпд Нагброг Іарогаїогу Ргез5, 2па ей. 1988); вності чи функції, що спостерігаються за відсутно- Наттет!івпа, еї аї., іп: Мопосіопа! Апіїбодієв апа Т- сті антагоніста. Конкретні антагоністи, що розгля- Сеїї Нубгідотаз 563-681 (ЕІземіег, М.У., 1981) (вка- даються, включають такі що блокують чи зані посилання цілком включені шляхом посилан- модулюють біологічну чи імунологічну активність ня). Термін "моноклональне антитіло", як вжива-

НІІ-12 та/або пПІ--23. Антагоністи та інгібітори ПІ-- ється у цій заявці, не обмежений антитілами, що 12 та/або пІ--23 можуть включати білки, нуклеїнові одержують за гибрідомною технологією. Термін кислоти, вуглеводні, або будь-які інші молекули, "моноклональне антитіло" відноситься до антитіла, що зв'язують ПІЇ--12 та/або ПІІ-23, але не обмежу- що одержують з одиночного клону, включаючи ються ними. будь-який еукаріотний, прокаріотний або фаговий

Як вживається у цій заявці, термін "ефективна клон, а не спосіб, за яким їх одержують. кількість" відноситься до кількості ліків, достатньої Способи одержання та скринінгу конкретних для зменшення або полегшення тяжкості та/або антитіл із використанням гибрідомних технологій є тривалості розладу або одного чи більше його стандартними та добре відомими у цій галузі. В симптомів, профілактики прогресії розладу, спри- одному втіленні, даний винахід забезпечує спосо- чинення регресії розладу, профілактики рецидивів, би генерування моноклональних антитіл, а також розвитку, початку або прогресії одного чи більше антитіл, що одержують способом, що включає ку- симптомів, пов'язаних з розладом, детекції розла- льтивування гибрідомних антитіл, що секретують ду, або підсилення чи покращення профілактично- антитіла за даним винаходом, де, переважно, гиб- го чи терапевтичного ефекту інших ліків (напри- рідому генерують шляхом злиття спленоцитів, клад, профілактичного чи терапевтичного агента). ізольованих з мишей, імунізованих антигеном за

Термін "проба", як вживається у цій заявці, ви- даним винаходом, з мієломними клітинами, та на- користовують у його найбільш широкому сенсі. ступного скринінгу гибрідом, що утворюються в "Біологічна проба", як вживається у цій заявці, результаті злиття гибрідомних клонів, що секрету- включає, не обмежуючись наведеними, будь-яку ють антитіла, здатні зв'язувати поліпептид за да- кількість речовини, взяту від живої істоти, або істо- ним винаходом (Див. Приклад 1.2). Стисло, миші ти, що була живою. Такі живі істоти включають, не можуть бути імунізовані І/-12 антигеном. У пере- обмежуючись наведеними, людей, мишей, щурів, важному втіленні, І--12 антиген вводять із ад'юва- мавп, собак, кроликів та інших тварин. Такі речо- нтом з метою одержання імунного відклику. Такі вини включають, не обмежуючись наведеними, ад'юванти включають повні чи неповні ад'юванти кров, сироватку, сечу, синовіальну рідину, клітини, Фройнда, КІВІ (мураміл-дипептиди) або ІЗСОМ органи, тканини, кісний мозок, лімфовузли та се- (імуностимулюючі комплекси). Такі ад'юванти мо- лезінку. жуть захищати поліпептид від швидкої дисперсії

І. Антитіла, що зв'язують людський ІІ -12р40. шляхом секвестрування його локальний осад, або

Один аспект даного винаходу забезпечує ізо- вони можуть містити речовини, що стимулюють льовані мишачі моноклональні атитіла, або їх ан- хазяїна секретувати фактори, що є хємотаксични- тиген-зв'язуючі частини, що зв'язують ІІ-12р40 з ми для макрофагів та інших компонентів імунної високою афінністю, низькою швидкістю дисоціації системи. Переважно, при введенні поліпептиду, та високою здатністю до нейтралізації. Другий ас- схема імунізації включатиме два чи більше вве- пект даного винаходу забезпечує химерні антиті- дення поліпептиду, що відбуватимуться протягом ла, що зв'язують І -12р40. Третій аспект даного двотижневого періоду. винаходу забезпечує СОК-імплантовані антитіла, Після імунізації тварини 1-12 антигеном, з неї або їх антиген-зв'язуючі частини, що зв'язують ІІ-- можуть бути одержані антитіла та/або антитіло- 12р40. Четвертий аспект даного винаходу забез- продукуючі клітини. Анти-ІЇ-12 антитіло-вмісну печує олюднені антитіла, або їх антиген-зв'язуючі сироватку одержують з тварини шляхом знекров- частини, що зв'язують ІІ-12р40. Переважно, анти- лення чи умертвіння. Сироватку можна використо- тіла або їх частини є ізольованими антитілами. вувати після її одержання з тварини, фракцію іму-

Переважно, антитіла за даним винаходом є нейт- ноглобуліну можна одержувати з сироватки, або ралізуючими людськими анти-1Ї-12 та/або людсь- анти-1ІЇ-12 антитіла можуть бути виділені з сирова- кими анти-І--23 антитілами. тки. Сироватка чи імуноглобулін, одержані таким

А. Спосіб одержання анти 1 -12р40 антитіл чином, є поліклональними, та мають, таким чином,

Антитіла за даним винаходом можуть бути різнотипні властивості. одержані за будь-яким методом з числа тих, що Після детекції імунного відклику, наприклад, відомі з рівня техніки. детекції антитіл, специфічних для антигену 1-12 у 1. Анти-І--12р40 моноклональні антитіла з ви- сироватці мишей, збирають селезінки мишей та користанням гибрідомної технології виділяють спленоцити. Потім спленоцити сплав-

Моноклональні антитіла можна одержувати за ляють за добре відомими методами для одержан- допомогою великої кількості методів, відомих з ня будь-яких придатних мієломних клітин, напри- рівня техніки, включаючи застосування гибрідом- клад, клітин з клітинної лінії 5Р20, доступних у них, рекомбінантних технологій та технологій фа- АТСС. Гибрідоми відбирають та клонують шляхом гового дисплею, або їх комбінацій. Наприклад, обмеженого розведення. Потім гибрідомні клони моноклональні антитіла можна одержувати з вико- аналізують способами, відомими з рівня техніки, ристанням гібридомних методів, включаючи такі, на наявність клітин, що секретують антитіла, здат- що відомі з рівня техніки та теорій, наприклад, з ні зв'язувати 1-12. Асцитна рідина, що, загалом,

містить високі рівні антитіл, може бути одержана тварин, описаних у Розділі 1, піддають скринінгу з шляхом імунізації мишей позитивними гибрідом- використанням антиген-специфічної проби на ге- ними клітинами. молітичні бляшки, де антиген 1-12, субодиниця ІЇ--

В іншому втіленні, антитіло-продукуючі імор- 12, або їх фрагмент, сполучені із червоними кров'- талізовані гибрідоми можна одержувати з імунізо- яними клітинами вівці за допомогою лінкеру, тако- ваної тварини. Після імунізації, тварину умертвля- го, як біотин, та використовують для ідентифікації ють, а В клітини селезінки сплавляють для однорідних клітин, що секретують антитіла, що одержання іморатлізованих мієломних клітин, як мають специфічність до 1-12. Після ідентифікації добре відомо з рівня техніки. Див., наприклад, антитіло-секретуючих клітин, що розглядаються,

Напож апа ІГапе, зирга. У переважному втіленні, варіабельні КДНК регіони важкого та легкого лан- мієломні клітини не секретують імуноглобулінові цюгів вилучають з клітин за допомогою поліпептиди (не-секретуюча клітинна лінія). Після ПЦР «зворотня транскрипція та ці варіабельні регі- сплавлення та відбору антибіотиків, гібридоми они можуть потім експресуватись у контексті від- піддають скринінгу з використанням 1-12, або їх повідних константних регіонів імуноглобуліну (на- частини, або 1-12, що експресують клітини. У пе- приклад, людських константних регіонів), У реважному втіленні, початковий скринінг прово- клітинах-хазяєвах ссавців, таких, як СО5 або СНО дять з використанням імуноферментного аналізу клітини. Кпітини-хазяєва, трансфектовані ампліфі- (ЕСІЗА) або радіоімуноаналізу (КІА), переважно, кованими імуноглобуліновими послідовностями,

ЕІЗА. Приклад ЕГІЗА скринінгу наведено у УМО одержаними з лімфоцитів, відібраними іп мімо, мо- 00/37504, що включена до цієї заявки шляхом по- жуть бути піддані додатковому аналізу та селекції силання. іп міо, наприклад, шляхом пеннінгу трансфекто-

Анти-І.-12р40 антитіло-продукуючі гибрідоми ваних клітин для ізоляції клітин, що експресують вибирають, клонують та піддають додатковому антитіла до 1-12. Ампліфіковані імуноглобуліно- скринінгу на предмет виявлення бажаних характе- вані послідовності додатково можуть бути оброб- ристик, включаючи стабільний ріст гибрідом, знач- лені способами "визрівання" афінності іп міо, а не продукування антитіл та бажані характеристики також іп міго, такими, як описані у публікації РСТ антитіл, як додатково обговорюється нижче. Гіб- УМО 97/29131 та публікації РСТУМО 00/56772 ридоми можуть бути культивовані та поширені іп З. Анти-І--12р40 моноклональні антитіла з ви- мімо у ізогенних тварин, у тварин, в яких відсутня користанням трансгенних тварин імунна система, наприклад, "голих" мишей, або у В іншому втіленні даного винаходу, антитіла клітинній культурі іп міго. Способи відбору, клону- одержують шляхом імунізації нелюдської тварини, вання та поширення гибрідом добре відомі фахів- що містить деякі або усі людські імуноглобулінові цям у цій галузі. локуси з І/-12 антигеном. У переважному втіленні,

У переважному втіленні, гибрідоми є мишачи- не-людською твариною є трансгенна миша ми гібридомами, як описано вище. В іншому пере- ХЕМОМОИШЗЕ, сконструйований мишачий штам, важному втіленні, гибрідоми одержують у нелюд- що містить більші фрагменти людських імуногло- ських, не-мишачих видах, таких, як щури, вівці, булінових локусів та якого не вистачає для проду- свині, цапи, велика рогата худоба або коні. В ін- кування мишачих антитіл. Див., наприклад, Стеєп шому втіленні, гибрідоми є людськими гибрідома- еї аі. Маште Сепеїйсе 7:13-21 (1994) та патенти ми, в яких людська не-секретуюча мієлома є спла- Сполучених Штатів 5,916,771, 5,939,598, вленою з людською клітиною, що експресує анти- 5,985,615, 5,998,209, 6,075,181, 6,091,001,

І/-12 антитіло. 6,114,598 та 6,130,364. Див. також УМО 91/10741,

Фрагменти антитіла, що розпізнають специфі- опублікований 25 липня 1991 р., УМО 94/02602, чні епітопи. можуть бути одержані за відомими опублікований З лютого 1994 р., М/О 96/34096 та методами. Наприклад, Раб та Е(ар)2 фрагменти за МО 96/33735, обидва опубліковані 31 жовтня 1996 даним винаходом можуть бути одержані шляхом р., УМО 98/16654, опублікований 23 квітня 1998 р., протеолітичного розщеплення молекул імуногло- УМО 98/24893, опублікований 11 вересня 1998 р., буліну, з використанням таких ферментів, як папа- МО 98/50433, опублікований 12 листопада 1998 р., їн (для одержання Бар фрагментів), або пепсин УМО 99/45031, опублікований 10 вересня 1999 р., (для одержання Р(ар)2 фрагментів). Р(ар)2 фраг- УМО 99/53049, опублікований 21 жовтня 1999 р., менти містять варіабельний регіон, константний УМО 00 09560, опублікований 24 лютого 2000 р. та регіон легкого ланцюга та СНІ домен важкого лан- УМО 00/037504, опублікований 29 червня 2000 р.. цюга. Трансгенна миша ХЕМОМОИЗЕ продукує по- 2. Анти-І--12р40 моноклональні антитіла з ви- дібний зрілим людський набір повністю людських користанням 5АМ антитіл, та генерує антиген-специфічні людські

В іншому аспекті за даним винаходом, реком- Маре. Трансеенна миша ХЕМОМОИЗЕ містить, бінантні антитіла одержують з однорідних, ізольо- приблизно, 8095 набору людських антитіл шляхом ваних лімфоцитів з використанням процедури, що введення ХАС фрагментів конфігурації лінії зарод- у рівні техніки має назву способу обраних антитіл кових клітин мегабазних розмірів людських локусів лімфоцитів (ЗАМ), як описано у патенті США Мо важких ланцюгів та х локусів легких ланцюгів. Див. 5,627,052, публікації РСТ УМО 92/02551 та Варсоск, Мепає еї аї., Майте Сепеїйсв 15:146-156 (1997),

У.5. еї а. (1996) Ргос. Май). Асад. сі. ОБА 93:7843- Сеєп апа дакороміїв У. Ехр. Мей. 188:483-495 7848. У цьому способі, одиночні клітини, що секре- (1998), описи яких включені до цієї заявки шляхом тують антитіла, що розглядаються, наприклад, посилання. лімфоцити, одержані з будь-якої з імунізованих

4. Анти-ІЇ-12 моноклональні антитіла з вико- Наприклад, антитіла за даним винаходом мо- ристанням рекомбінантних бібліотек антитіл жна також одержувати з використанням різних

Способи іп міго також можуть бути використані способів фагового дисплею, відомих з рівня техні- для одержання антитіл за даним винаходом, де ки. У способах фагового дисплею, функціональні бібліотеку антитіл піддають скринінгу для іденти- домени антитіла проявляються на поверхні фаго- фікації антитіл з бажаною специфічністю зв'язу- вих частинок, що переносять полінуклеотидні пос- вання. Способи такого скринінгу рекомбінантних лідовності, які їх кодують. Зокрема, такий фаг мо- бібліотек антитіл також відомі з рівня техніки та же бути використаний для проявлення антиген- включають способи, описані у, наприклад, І адпег зв'язуючих доменів, що експресуються з набору еї аі,, патент США Мо 5,223,409; Капо еї аї., публі- або комбінаторної бібліотеки антитіл (наприклад, кація РСТ Мо МО 92/18619; Юомег еї а!., публікація людських чи мишачих). Фагова експресія антиген-

РСТ Мо УМО 91/17271; Уміпіег еї аї!., публікація РСТ зв'язуючого домену, що зв'язує антиген, що розг-

Мо УМО 92/20791; Магкіапа еї аї., публікація РСТ Мо лядається, може бути відібрана або ідентифікова-

У 92/15679; Вгейіпо еї аї., публікація РСТ Мо УМО на за допомогою антигену, наприклад, з викорис- 93/01288; МеСайепу еї аї!., публікація РСТ Мо УМО танням міченого антигену або антигену, зв'язаного 92/01047; Сагтага еї аї., публікація РСТ Мо УМО чи зафіксованого на твердій поверхні чи основі. 92/09690; Рисиз еї аї., (1991) Віо/ГесппоІоду Фаги, що використовують у цих способах є, типо- 9:1370-1372; Нау сеї аїЇ. (1992) Нит Апіїроа во, нитковидними фагами, що містять Я та М1З

Нубідотав 3:81-85; Ниве єї аї. (1989) бсієпсе зв'язуючі домени, експресовані з фагу з доменами 246:1275-1281; МеоСанепу еї аї., Маїште (1990) антитіл РГар, Ем або дисульфідно зв'язаними Ру, 348:552-554; СіНнйНе єї аІ. (1993) ЕМВО у 12:725- рекомбінантно злитими з фаговим геном І! або 734; Наужіпз еї аї. (1992) У Мої Віо! 226:889-896; генним МІ білком. Приклади способів фагового

СіІасквоп еї аї. (1991) Маїште 352:624-628; Стат єї дисплею, що можуть бути застосовані для одер- аІ. (1992) РМАБ5 89:3576-3580; Са!їтай еї аї. (1991) жання антитіл за даним винаходом, включають

Віо/Гесппоіоду 9:1373-1377; Ноодепроот еї аї. приклади, описані у ВгіпКтап еї аї., 9. Іттипої. (1991) Мис Асіа Нез 19:4133-4137; та Ваграз еї аї. Меїщтоаз 182:41-50 (1995); Атез еї аї., у. Іттипої. (1991) РМАБ 88:7978-7982, публікація патентної Меїщйтоа5 184:177-186 (1995); Кешерогоцуй еї аї., заявки США Мо 20030186374, та публікація РСТ Мо Еицг. 9У. Іттипої. 24:952-958 (1994); Регївіс еї аї.,

МО 97/29131, вміст кожної з яких включено до цієї Сепе 187 9-18 (1997); Випоп еї аї., Адмапсев іп заявки шляхом посилання. Ітітипоїоду 57:191-280 (1994), РСТ заявці Мо

Рекомбінантна бібліотека антитіл може бути РСТ/5891/01134; РСТ публікаціях МУО 90/02809; одержана від суб'єкта, імунізованого 1-12 або 1-- МО 91/10737; МО 92/01047; МО 92/18619; МО 23, або частиною 1-12 або І/-23. Альтернативно, 93/11236; МО 95/15982; МО 95/20401; та патентах рекомбінантна бібліотека антитіл може бути одер- США МоМо 5,698,426; 5,223,409; 5,403,484; жана від нативного суб'єкту, тобто, такого, який не 5,580,717; 5,427,908; 5,750,753; 5,821,047; був імунізований 1-12 або ІІ-23, наприклад, така, 5,5/1,698; 5,427,908; 5,516,637; 5,780, 225; бібліотека людських антитіл, одержана від люди- 5,58,727; 5,733,743 та 5,969,108; кожна з яких ни, не імунізованої людськими 1І--12 або 1-23. Ан- цілком включена до цієї заявки шляхом посилання. титіла за даним винаходом відбирають шляхом Як описано у посиланнях, наведених вище, пі- скринінгу рекомбінантної бібліотеки антитіл пепти- сля фагової селекції, кодуючі регіони антитіла з дом, що містить людський 1І--12р40, відбираючи, фагу можуть бути ізольовані та використані для таким чином, такі антитіла, що розпізнають І- одержання цілих антитіл, включаючи людські ан- 12р40. Способи проведення такого скринінгу та титіла чи будь-який інший бажаний антиген- селекції добре відомі з рівня техніки, наприклад, як зв'язуючий фрагмент, та експресовані у будь- описано у посиланнях, наведених у розділі, що якому бажаному хазяїну, включаючи клітини ссав- передує цьому. Для відбору антитіл за даним ви- ців, клітини комах, рослинні клітини, дріжджі та находом, що мають конкретну афінність зв'язуван- бактерії, наприклад, як детально описано нижче. ня із ПІС-12, таких, як антитіла, що дисоціюють з Наприклад, можуть також бути застосовані методи людського 1-12 з конкретною константою швидко- рекомбінантного одержання Бар, Рар'та Р(ав)»2 сті Кох, може бути використаний відомий у цій галу- фрагментів з використанням способів, відомих з зі спосіб поверхневого плазмонного резонансу для рівня техніки, таких, як способи, описані у публіка- відбору антитіл, що мають бажану константу шви- ції РСТ УМО 92/22324; Мийпах еї а!., ВіоТесппіднев дкості Когм. Для відбору антитіл за даним винахо- 12(6):864-869 (1992); та замаї еї аї!., АОВІ 34:26-34 дом, що мають конкретну нейтралізуючу актив- (1995); та Вейцег еї аї., Зсієпсе 240:1041-1043 ність по відношенню до П1І--12, таких, як антитіла, (1988) (вказані посилання цілком включені шляхом що мають конкретну ІСво, можуть бути використані посилання). Приклади методів, що можуть бути стандартні способи оцінки інгібування активності застосовані для одержання однланцюгових Гу5 та

НІС-12, відомі з рівня техніки. антитіл, включають методи, описані у патентах

В одному аспекті, винахід стосується ізольо- США 4,946,778 та 5,258, 498; Нивоп еї аї., Мемоав5 ваного антитіла, або його антиген-зв'язуючої час- іп Еплутоіоду 203:46-88 (1991); 5Ни! еї аіІ., РМАБ5 тини, що зв'язує людський 1-12 та/або людський 90:7995-7999 (1993); та бКеїта еї аї., 9сієпсе

І/-23. Переважно, антитіло є нейтралізуючим ан- 240:1038-1040 (1988). титілом. У різноманітних втіленнях, антитіло є ре- Крім скринінгу рекомбінантних бібліотек анти- комбінантним антитілом або моноклональним ан- тіл способом фагового дисплею, для ідентифікації титілом. подвійно-специфічних антитіл за даним винаходом можуть бути застосовані інші методології скринінгу переважною у клітинах-хазяєвах ссавців, через те, великих комбінаторних бібліотек, відомі з рівня що такі еукаріотні клітини (та, зокрема, клітини техніки. Одним видом альтернативних систем екс- ссавців) мають більшу вірогідність зборки та сек- пресії є система, в якій рекомбінантна бібліотека реції належним чином згорнутого та імуноглобулі- антитіл експресується як РНК-протеїнові злиття, як ново активного антитіла. описано в публікації РСТ Ме УМО 98/31700 52051їаК Переважні клітини-хазяєва ссавців для екс- апа Корегі5, та у Корегі5, К.МУ. апа 5говіак, МУ. пресії рекомбінантних антитіл за даним винаходом (1997) Ргос. Май). Асай. 5сі. ОБА 94:12297-12302. У включають яєчники китайського хом'ячка (СНО цій системі, ковалентне злиття створене між ІРНК клітини) (включаючи апіт-СНоО клітини), описані у та пептидом чи білком, що кодує його шляхом тра- ОпПашб апа Спавіп, (1980) Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА нсляції іп міо синтетичних ІРНК, що переносять 77:4216-4220, які використовують з ОНЕК селекто- піроміцин, пептидний акцепторний антибіотик, на вним маркером, наприклад, як описано у К.. їх 3 термінус. Таким чином, конкретна ІРНК може Каштап апа Р.А. Знагр (1982) Мої. Віої. 159:601- бути збагачена зі складної суміші ІРНК (наприклад, 621), МБО мієломні клітини, СО5З клітини та 5Р2 комбінаторної бібліотеки), виходячи з властивос- клітини. При введенні рекомбінантних векторів тей кодованого пептиду чи білка, наприклад, анти- експресії що кодують гени антитіл, у клітини- тіла, чи його частини, таких, як зв'язування антиті- хазяєва ссавців, антитіла одержують шляхом ку- ла, чи його частини, із подвійно-специфічним льтивування клітин-хазяєв протягом періоду часу, антигеном. Нуклеїновокислотні послідовності, що достатнього для того, щоб дозволити експресію кодують антитіла, або їх частини, відновлені у ре- антитіл у клітинах-хазяєвах або, більш переважно, зультаті скринінгу таких бібліотек, можуть експре- секрецію антитіл у культуральне середовище, в суватись за допомогою рекомбінантних засобів, як якому зростають клітини-хазяєва. Антитіла можуть описано вище, (наприклад, у клітинах-хазяєвах бути відновлені з культурального середовища за ссавців) та, більш того, можуть бути піддані додат- допомогою стандартних способів очистки білків. ковому визріванню афінності або за допомогою Клітини-хазяєва можна також використовувати додаткових циклів скринінгу ІРНК-пептидних злит- молекули. Буде зрозумілим, що варіанти вищеза- тів, в яких визрівання були введені у первісно віді- значеної процедури знаходяться у межах обсягу брані послідовності (первісно відібрану послідов- даного винаходу. Наприклад, може бути бажаною ність), або за допомогою інших способів трансфекція клітини-хазяїна з ДНК, що кодує фун- визрівання афінності рекомбінантних антитіл іп кціональні фрагменти легкого ланцюга та/або важ- міо, як описано вище. кого ланцюга антитіла за даним винаходом. Також

В іншому підході, антитіла за даним винахо- для видалення деякої або усіх ДНК, що кодують дом можна також одержувати за допомогою спо- якусь чи обидва з легких та важких ланцюгів, що собів дріжджового дисплею, відомих з рівня техні- не є необхідними для зв'язування антигенів, що

Ки. У способах дріжджового дисплею розглядаються, можуть також бути використані використовують генетичні способи для зв'язування рекомбінантні ДНК технології. Молекули, що екс- доменів антитіл до клітинних стінок дріжджів та пресуються з таких усічених ДНК молекул, також проявлення них на поверхні дріжджів. Зокрема, охоплюються антитілами за даним винаходом. такі дріжджі можна використовувати для дисплею Додатково, можуть бути одержані біфункціональні антиген-зв'язуючих доменів, що експресуються з антитіла, в яких один важкий та один легкий лан- набору або комбінаторної бібліотеки антитіл (на- цюг є антитілом за даним винаходом, а інші легкий приклад, людських чи мишачих). Приклади таких та важкий ланцюги є специфічними для антигену, способів дріжджового дисплею, що можуть бути що відрізняється від антигенів, що розглядаються, використані для одержання антитіл за даним ви- шляхом поперечного зшивання антитіла за даним находом, включають способи, описані УМінгир, єї винаходом із другим антитілом за допомогою ста- аІ., патент США Мо 6,699,658, що включений до ндартних способів хімічного поперечного зшиван- цієї заявки шляхом посилання. ня.

В. Продукування рекомбінантних 11--12р40 ан- У переважній системі рекомбінантної експресії титіл антитіла, або його антиген-зв'язуючої частини за

Антитіла за даним винаходом можуть бути даним винаходом, вектор рекомбінантної експре- одержані за будь-яким методом, відомим з рівню сії, що кодує як важкий ланцюг антитіла, так і лег- техніки. Наприклад, експресія з клітин-хазяєв, де кий ланцюг антитіла, введений у апт-СНО клітини вектор(вектори) експресії, що кодує(кодують) важкі шляхом кальцій фосфат-опосередкованих транс- та легкі ланцюги, трансфекований (трансфековані) фекцій. У векторі рекомбінантної експресії, кожен з у клітину-хазяїн за стандартними методами. Різ- генів важкого та легкого ланцюгів антитіла функці- номанітні форми терміну "трансфекція" призначені онально зв'язаний із регуляторними елементами для охоплення величезної кількості методів, що СММУ енхансеру/ЛаміР промотору для запуску традиційно використовують для введення екзоген- високих рівнів генної транскрипції. Вектор реком- ної ДНК у прокаріотну чи еукаріотну клітину-хазяїн, бінантної експресії також переносить ген ОНЕРК, наприклад, електропорації, осадження фосфату що дозволяє селекцію СНО клітин, що були тран- кальцію, ОЕАЕ-декстран трансфекції та подібних сфектовані у векторі з використанням селек- методів. Хоча існує можливість експресії антитіл ції/ампліфікації метотрексату. Відібрані трансфор- за даним винаходом як в прокаріотних, так і в еу- манті клітини-хазяєва культивують для того, щоб каріотних клітинах-хазяєвах, експресія антитіл в дозволити експресію легкого та важкого ланцюгів еукаріотних клітинах є переважною, та найбільш антитіла, а інтактне антитіло відновлюють з куль-

турального середовища. Стандартні методи моле- культурному середовищі, доки не буде синтезова- кулярної біології використовують для одержання но рекомбінантне антитіло за даним винаходом. вектору рекомбінантної експресії, трансфекції клі- Спосіб може додатково включати ізоляцію реком- тин-хазяєв, селекції трансформантів, культиву- бінантного антитіла з культурального середовища. вання клітин-хазяєв та відновлення антитіла з ку- 1. Анти ІС-12р40 антитіла льтурального середовища. Додатково винахід Таблиця 5 є переліком амінокислотних послі- забезпечує спосіб синтезу рекомбінантного анти- довностей ділянок МН та МІ. переважних анти-піЇ - тіла за даним винаходом шляхом культивування 12р4б0 антитіл за даним винаходом. клітини-хазяїна за даним винаходом у придатному

Таблиця 5: Перелік амінокислотних послідовностей ділянок МН та МІ. блю Ділянаєта 00000000 |Послідввноь 1111111010111011123456789012345678901234567890

ОМТІКЕБОРОП ОРБОТІ ЗІ ТО5ЕБОГ

З ККЗУМСОУЗУУКОРБОКОЇ ЕУМГ АНІ

Ї зв УН 104 УЖОВОКУУМРБІ КІ ТІЗКОРЗАМО

МЕКІТ5МОТАОДАТУУСТВАСІНВАМ рмиусоствмтУ55

МН 104 СОВ- | Залишки 31-37

НІ ЗЕО ІЮ Ме: 35 кзУМмеУЗ

МН 104 СОК- |Запишки 52-67

Но ЗЕО ІЮ Ме: 35 НІИМОООКУУМРЗІ КУ

Запишки /100-

МН ОТ04 СОВ- |308 БО) Мо: /ВСІВЗАМОУ нЗ 35

ЗМУМТОТРКЕ МЗАСОКМУТІТСКАВ

О5УЗМОМАУУУООКРООБРКІУХА 36 мМ. 104 5ЗМЕХТОМРОВЕТО5ОУСТОЕТЕПВТМ

ЕАЕОГАМУЕСОООУМОРМТЕССООТК

ІЕІКВ

Залишки 24-34

М. 104 СОВ-11 5ЕО ІЮ Ме: 36 КАБОБЗУЗМОМА

Залишки 50-56 мі 104 СОВ-І2 5ЕО ІЮ Ме: 36 ХАБМЕКУТ

Залишки 89-97 м 104 СОоК-І З 5ЕО ІО Ме: 36 ООрУМЗРУУТ

ОМТ.КЕЗОРОЇПКРБОЗОТІ БІ ТОЗЕ5ОБ 5І ТВО МОМБУЛВОРБОКОЇ ЕУМІ АНІ 37 МН 1А6 МАМО СОМУУМРЗІ КБОСТІЗКОТЗАМ

ОМЕЇ ВІАТМОТАОТАТУУСАВЕТеММ

ХАМОУМСОСТ5УТУ55

Запишки 31-37

МН 1Аб СОВ-НІ ЗЕОО Ме: 37 т5ОомМоУ5

Шфіянням 1000000 ен

ГПО 1123а56789012345678901234567890

Залишки 52-67

МН 1Аб6 СОВБ-Н2 ЗЕО ІЮ Ме: 37 НІММОСОМУУМРБЕК5

Залишки 100-

МН ЛАВСОВБ-НЗ 109 КТЕУММУАМОУ

ЗЕ ІЮ Мо: 37

ЗМУМТОТРКР ГМ5АСОВБМТІТ СКАЗ

ОЗУЗМОМАУУГООКРООБРКІ УМА

МІ. 146 ЗМКУТОМРОКЕТООУОСТОЕТЕТІЗТ

МОАЕПІ АМУгСООБУМЗРУУТЕОСОСТ

КГЕІКК

Залишки 24-34

МІ. 1А6 СОВ-1 5ЕО І Ме: 38 КАБОБУЗМОМА

Запишки 50-56

МІ. 1А6 СОК-12 5ЕО І Ме: 38 ХАЗМНЕеХТ

Залишки 89-97

МІ. 146 СОК-ІЗ ЗЕО ІО Ме: 38 ООруУМЗРМТ

ОМОЇІ ОО5САЕЇ МКРОАБУКІЗСКАТО

УТЕЗБЛМЛЕМУКОКРОНОЇГ ЕУМОВИ

39 Ун108 РОБОБЗТМУМЕКЕКОКАТЕТАОТВЕМТ

АУМО! 551 Т5ЕОЗАУУУСАТККЕКОЇІ.

УМО стТТітУ55

МН 108 СОК- | Залишки 31-35 ни ЗЕО 1 Мо: 39 ВУМЕ

МН оО108 СОК- | Залишки 50-66

Но 5ЕО ІЮ Ме: 39 ОП РОЗОЗТМУМЕКЕКО

МН 108 СОК- | Залишки 99-106 нЗ 8ЕО І Мо: 39 ккгВОеГоу 5ЗІММТОТРКЕ ГУЗАСОКМТІТСКАЗО 5УМЗМОМАМУООКЗСОЗРКИ ІМУАБ

Мі. 108 МЕХМТСОМРОБЕТО5ОУСТОЕТЕТІЗТМ

ОРЕБІ АМУЕСОООУТЗРЕТЕОЗОТКІ.

ЕЇКВ

Залишки 24-34

МІ 108 СОК-А. 1 ЗЕО ІЮ Ме: 40 КАБОЗУЗМОМА

Залишки 50-56

Мі. 108 СрК12 5ЕО ІЮ Ме: 40 ЧАЗМКУТ

Залишки 89-97

М. 108 СОК-І З 5ЕО ІЮ Мо: 40 ОООУТ5РЕТ

ОМО ООБСАЕЇ МКРОАБУКІЗСКАТО

ЖТЕМОУУММЛЕМУКОАРОНОГ ЕУМІОСЕ

41 Ун 367 ЗНОБОЗТМУМЕКЕКОКАТЕТАЮ555

МТАММО! 55І Т5ЕОБАМУХУСАКККЕК оМмоУуСОостТоМТУ5о

МН 367 СОК- Залишки 31-35 ні ЗЕО Ю Ме: 41 оУМЕ

МН 3067 СОВ- Залишки 50-66

Но 5ЕО ІЮ Мо: 41 СЕЗНОЗОЗТМУМЕКЕКО

МН 367 СОВ- | Залишки 959-106 нЗ 5ЕО 10 Ме; 41 кеРвеМоу

Пс ст НИ НИ с НИ

О111111111101111123456789012345678901234507890

ЗІММТОТРКРЦ. МЗАСОКУТІТСКАВЗО

ЗМЗМОМАУУУООКРООЗРКИ УАЗ

Мі. 307 МКУТОМРОКЕТООУОТОЕТЕТІТТМ

ОАЕОГАУУРСОСЙОУББРУМЗЕСОСТК

ГЕЇКК

Залишки 24-34 м з57 СОК-1 1 5ЕО ІЮ Ме: 42 КАБОБУЗМНОМА

Запишки 50-56

МУ 367 СОВ-2 ЗЕО ІЮ Ме: 42 УАЗМЕХТ

Залишки 89-97

МІ 3657 СОВА З ЗЕО ІЮ Ме: 42 ОООУ5ЗРУУЗ

ОТОГМОЗОРЕЇ ККРОЕТУКІЗСКАБОУ

УН ЗЕТОУЗМНУУУКОАРОКОЇ КУУМОММІ

43 БЕВ МТЕТСЕРТУАООЕКСЕРАК5І ЕТ5А5

ТАМІ ОІММІ КМЕОТАТУЄСЗЕКЕУКА

ЕОМ сОосТ ТУ

Залишки 31-35

МН 5БЕВ СОВ-НІ 5ЕО ІО Мо: 43 рузМн

Залишки 50-66

МН 5ЗЕВ СОВ-НІ 5ЕО І Мо: 43 МІМТЕТОЕРТУАООвЕКО

Залишки 99-106

МН 5ЕВ СОВК-НЗ 5ЕО ІО Ме: 43 ЕЕУКАБОУ 5БІММТОЗРКЕ.МЗАСОВКМТІТСКАБО 5У5МІМАМ/УООКІ СОБРКИ ГИМАЗМ 44 МІ. 5ЕВ8 ЕХТОМРОКЕТОБОМОТОЕТЕТІМТМО

АЕОГАМУЕЄСОООУТЗРУТЕООСТКІ Е

Цех

Залишки 24-34

МІ 5ЕВ СОК-Ї1 ЗЕО ІЮ Ме: 44 КАБОЗМ5МОМА

Залишки 50-56

МІ. 5ЕВ СОК-АІ 2 ЗЕО ІЮ Ме: 44 ХАЗМКУТ

Залишки 89-97

МІ. 5ЕВ СОК-АІ З ЗЕО ІЮ Мо: 44 ООПУТ5РУТ

ЕМКІМЕБООСО МОРООЗНККІ ЗСААБ

СЕТЕБОУОМУУМУКОАРОКОГЕУМУМА

МН 8Е1 5І55655МІУХАОТУКОКЕТІЗКВОРМ

МТ РОМА ЕБЕОТАМУХУСАКМРУ

МсОосттУБ5

Залишки 31-35

Залишки 50-66

МН ЕТ СОК-Н2 5ЕО ІО Ме: 45 5ІЗ5О55МУХАОоТУКО

Залишки 99-101

МН 8ЕТ СОК-НЗ ЗЕО І Ме: 45 МРУ

ОММТО5ОКЕМ5ТЗМООВУ5МТСКА

БОММОТММАУМУООКРООБРКОПУВ аб МІ. 8Е1 АЗНКУЗОМРОКЕАЛОБОБОТОВЕТІ ТІВ

МУО5ЗЕОГАЕМЕСООУМ5УРІТЕОСО

ТК КА

Залишки 24-34

МІ 8Е1 СОК-1 1 5ЕО ІО Ме: 46 КАБОМУМОТММА баівнням 1000000 ее 0000 о 10111111111123456789012345678901234567890

Залишки 50-56

МІ. 8Е1 СОК- 2 5ЕО ІЮ Ме: 46 ЗАЗНКУ5

Мі ВЕ СОВАЗ Залишки 89:97. | одуМмвурРІТ

ЗЕО ІЮ Мо: 46

ЕМКІМЕБООСІ МОРОСБЕКІ 5САА5

СЕТЕБОУХОМУМУВОАРОКОГС ЕММА

47 УН 1Нне чУІЗ5О5ЗТІНУХАОТМКОКЕТІЗАОМРК

МТГРОМ55І ЕЗЕОТАМУУСАККНУУ

АМОУМСОСТ5УТУЗЗ

МН о 1Нб СОК- Залишки 31-35 ні ЗЕО І Ме: 47 руєму

МН оОТНб СОК- ) Залишки 50-66 но ФЕО ІЮ Ме: 47 ч15850551ІНХАОТМКО

МН о ї1Нб сСОоК- | Залишки 99-106 нЗ 5ЕОО Мо: 47 ВНУТАМОУ

ЗЕММТОТРКЕ СУБАСОВМТІТСКАВ

ОБУБМОМАУУУООКРООЗРКІ ГУМА

У 1н6 5БМЕУТОМУРОВЕТОТОМУСТОЕТЕТІВЗТ

МОАЕОГСАМУЕСОООУТЗРЕТРО5ОТК

Ії ЕК

Залишки 24-34

М. тн СОК-1 1 5ЕО ІЮ Ме: 48 КАБОЗУЗМОМА

Залишки 50-56

Мун СОкК-12 5ЕО ІО Ме: 48 ХАЗМНЕКУТ

Залишки 89-97

М тн СОоК-І З 5ЕОО Ме: 48 СООУТ5РЕТ

ЕМОГ ООБОСАОЇГЕКРОАБУКІ БСТА5

СЕМІКОТЕМНУУУКОВ РЕОСІ ЕУЛОКІ

МН ЗА11 ОРАМОНТКУОРКЕРОСКАТІТАОТЗЗМ

ТАХМІ 01551 ТЗЕОТАМУУСАКМСОКО

ГІММАМОУУУСОСТоУТУ55

МН ЗАТ СОК- 0 Залишки 31-35 ні ЗЕО І Ме: 49 оТЕМН

МН ЗАТ СОВ- )/Залишки 50-66

Но 5ЕО І Ме: 49 КІОРАМОНТКУОРКЕОО

МН ЗАТ СОК- | Залишки 99-111 нЗ 5ЗЕО ІЮ Ме: 49 МСОБСІ І ММАМОУ

ОМ ТО5РОБІ АМ5І СОКАТІЗСКАЗЕ

БМОМУСІЗЕММУЕООКРООРРКОЦУ

МІ. ЗА11 ААБМОС5ОМРАБЕБОВБОБОТОЕБІТІ

НРМЕЕОСТАМУЕСООЗКЕМРРТРОС

СТКІЕЇКАК

МІ ЗАТ1 СОК- | Залишки 24-38

ПИ 5ЕО ІЮ Ме: 50 КАБЗБЕЗУОМУСІЗЕММ

МІ ЗА11 СОВ- ) Залишки 53-60 із 8ЕО Ю Ме: 50 уААЗМОСЗ

МІ ЗА11 СОК- | Залишки 93-101 (З ЗЕО Ю Мо: 50 ОО5КЕМУРРТ

Г111111111011123456789012345678901234567890

ОМТІКЕБОРОЇІЇ КРЗОТІ 51151 50

ЗІ. ЗТЗОМОМЗУЛКОРБОКОЇ ЕМ АНІ

Ун ава МАМО О5УБМРБЗІ КБАВІТІЗКОТБАМ

ОМРІЛІАТМОТАОТАТУУСАКЕТАУМ

ХАМОУУМСОСТОУТУВЗ

Запишки 31-37

Ун 484 СОК-НІ1 ЄЕО ІЮ Ме: 51 т5ОомМоМУ5

Залишки 52-67

МН 4в4 СОВ-Н2 ЗЕО І Ме: 51 НІММ/ОСО5УБМРЗІ 5

Залишки /100- мУнава4сов-нНЗ 109 ЕТЕУМХАМОУ

ЗЕО О Мо: 51

ЗМУМТОТРКРІ ІУБАСОКУТМТСКАВ

ОБ5УЗМОМАУУЕООКРООБРКІ ГУМА

МІ. 484 ЗМКЕУТОМРОКЕТОБОМСТОЕТЕТІВТ

МОАЕОТГ АУУЕСООЮУМЗРУУТЕООСТ

КЕКВ

Залишки 24-34

М 484 СОВ-1 1 5ЕО І Ме: 527 КАБЗОЗУЗМОМА

Залишки 50-56

МІ 4в4 СОК-12 5ЕО ІЮ Ме 52 ХАБЗМКУТ

Залишки 89-97

МІ 4в4 СОКА З 5ЕО І Ме: 52 ООрУМБРУУТ

ЕМО ОО5САЕРУК5ЗОАЗУКІ ЗСТА5

СІ МІКОУУІНУУУКОВРЕОМІ СОУМІСУМІ

53 МН 753 РРЕМНСУЗЕУАРЕРООКАТМТАРТЗ5

МТАМІ НІ 55І ТЗЕОТАМУУСМРОЕГА

КУгОУУУуСОСстТТІ ТУ55

МН 7653 СОК- | Залишки 31-35

МА 763 СОК- | Залишки 47-66 но ЗЕОІЮ Ме: 53 УЛСУЛОРЕМСУЗЕХМАРЕЕОЮ

МА 763 СОВ- | Залишки 99-107 нЗ ЗЕОО Мо: 53 СЕГАКУКОУ

РІМ. 5О5РАТІ БМТРОЮ5ЗМУ5І 5СКА5

ОБІЗКМ.НУУУООКОНЕБРЕНІКУТО

МІ. 703 О5І5СІРЗВЕЗО5О5ОТОЕТІ 5ІМ5МЕ

ТЕОЕСМУЕСОО5ІЗМРІТЕСАСТКІЕ

ІК

Залишки 24-34

Мі 7653 СОВ-1 1 ЗЕОЮ Мо: 54 ВАБОБІЗКМІ Н

Залишки 50-56

МІ763СОВ42 БОЮ Ме 54 УТ505І5

Залишки 89-97 мі 753 СОК-1 3 5ЕО І Мо: 54 ОО5І5УУРІТ

Вищезазначені СОК послідовності анти-1Ї - по відношенню до П1Ї-12 або до ПІ--23, можуть 12р40 антитіла утворюють нове сімейство зв'я- бути використані стандартні, відомі з рівня техні- зуючих білків ІІ-12р40, ізольованих відповідно до ки, способи одержання зв'язуючих білків за даним цього винаходу, що містить поліпептиди, які міс- винаходом та оцінки 1--12 та/або 1-23 зв'язуючих тять СОЕ послідовності, вказані у Таблиці 6, на- та/або нейтралізуючих характеристик цих зв'язу- веденій нижче. Для одержання та селекції СОК ючих білків, включаючи способи, конкретно опи- за даним винаходом, що мають переважну І/-- сані у цій заявці, але не обмежуючись ними. 12р40 зв'язуючу та/або нейтралізуючу активність

Таблиця 6: Консенсусні І-12р40 СОК афінні ліганди (альтернативні залишки наведені під кожним амінокислотним положенням; - вказує на залишок, що може бути відсутній). сок Ідентифік | Консенсусна послідовність регіон атор послідов ностей

СОБ-НІ | 5ЕО ІВІХ, Хо Хз Х. Х5 Хв Х;

Мо: 55 р у у І Нн - -

Кк З У М б М 5 т т б Е

З М М

З

Е

Сок- ЗБО 10 | Хі Хо Хз Х. Х» Хв Х; Хв Хе Хо Хі Х42 Хіз Ха Хі Хв Хіт Хв Хо Хо н2 Ме: 56 НІММОООКММ М Р 5 КК -- -- -

ПЕ РОСОМТМ У М ЕК ЕВ ОО б І НЕ 555РТт АрроОоМмМмКко

М ЗТА ТРЕ ЇН о РТМ Ов 5ІМ тТМКк 5 УА Р чо Н 5 А

Кк о (Є сок Ідентифік | Консенсусна послідовність регіон атор послідов ностей

СОВ-НЗ ЗЕБЕО І0ІХ, ХХ, Хз Хі. Хв Хв Х; Хв Хе Хо Хі Хі» Хіз

Мо: 57 "ІВ ЗАМОМ - - - -

М'Т КМ М ХМ АМО мМ Ох

МК ЕМО 10 МА

РУБАНІ

НОЖА КК МЕ

СсОоК-11 5ЗЕО ІО Х. Х, Хз Хі Хо Хв Х; Ха Хе Хі Хі Хі» Хіз Хі Хі

Мо: 58 КА 5ЗО5М5МО0МА - - - - в Е МІ ТМ о І 5 ЕМ М ркх їн

СсОоВ-І?2 |5ЕО ОХ. Х» Хі Х; ХХ Х, Хв

Ме: 59 У А БМ АТ -

З ТАН МЗМО5 5 551 о

СОК-13 5ЕО ОХ, Х» Хз Х. Х5 Хв Х, Хе Хе

Ме; 60 000 ХМ 5РМТ

МТУ Е 5

Зк У

І ЕЕ М І

Р

2. Анти ІІ -12р40 химерні антитіла заявки шляхом посилання. Крім того, можуть бути

Химерне антитіло є молекулою, в якій різні ча- використані розроблені методи одержання "химе- стини антитіла походять від різних видів тварин, рних антитіл" (Могібзоп еї аї., 1984, Ргос. Маї). такі, як антитіла, що мають варіабельний регіон, Асад. 5сі. 81:851-855; Меибегодег єї а!., 1984, Майшге одержаний з мишачого моноклонального антитіла, 312:604-608; Такеда еї аї., 1985, Машге 314:452- та людський імуноглобуліновий константний регі- 454, що цілком включені до цієї заявки шляхом он. Способи одержання химерних антитіл відомі з посилання) шляхом сплайсінгу генів молекули рівня техніки та детально обговорюються у Прик- мишачого антитіла з відповідною специфічністю ладі 2.1. Див., наприклад, Моттізоп, Зсієпсе антигену разом із генами молекули людського ан- 229:1202 (1985); ОЇ еї аї., ВіоТесппідиев 4:214 титіла з відповідною біологічною активністю. (1986); СіШев еї аї., (1989) 9. Іттипої. Меїйоав» В одному втіленні, химерні антитіла за даним 125:1191-202; патенти США МоМе 5,807,715; винаходом одержують шляхом реплікації констан- 4,816,567; та 4,816,397, що цілком включені до цієї тного регіону важкого ланцюга мишачих монокло-

нальних анти людських 1-12 антитіл, описаних у Тому переважним є, щоб людський варіабельний розділі 1, на людський дДОС1 константний регіон. У каркас, який вибирають для заміщення мишачого конкретному втіленні, химерне антитіло за даним варіабельного каркасу, не кажучи вже про СОРК, винаходом містить варіабельний регіон важкого мав, щонайменше, 6595 ідентичність послідовності ланцюга (Мн), що містить амінокислотну послідов- з каркасом варіабельного регіону мишачого анти- ність ЗЕО ІЮО Ме: 35; 5БО ІЮ Ме: 37; 5БО ІЮО Мо: 39; тіла. Більш переважним є, щоб людський та ми-

ЗЕО ІЮО Ме: 41; 5Б6ЕО ІЮО Мо: 43; 5ЕО ІО Ме: 45; 5ЕО шачий варіабельні регіони, не кажучи вже про

ІО Ме: 47; 5ЕО ІО Мо: 49; 5ЕО ІО Мо: 51; або 5ЕО І СОК, мали, щонайменше, 7095 ідентичність послі-

Ме: 53 та варіабельний регіон легкого ланцюга (М), довності. Навіть більш переважним є те, щоб люд- що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І ський та мишачий варіабельні регіони, не кажучи

Ме: 36; 5ЕО ІО Ме: 38; 5БО ІЮ Ме: 40; 5ЕО ІЮО Мо: 42; вже про СОК, мали, щонайменше, 75905 ідентич-

ЗЕО ІЮО Ме: 44; 5Б6О ІЮО Мо: 46; 5ЕО ІО Ме: 48; 5ЕО ність послідовності. Найбільш переважним є те,

ІО Ме: 50; 5ЕО ІЮО Мо: 52; або 5ЕО ІО Мо: 54. щоб людський та мишачий варіабельні регіони, не 3. Анти І--12р40 СОК імплантовані антитіла кажучи вже про СОК, мали, щонайменше, 8095

СОВ-імплантовані антитіла за даним винахо- ідентичність послідовності. Способи одержання дом містять послідовності варіабельного регіону химерних антитіл відомі з рівня техніки та деталь- важкого та легкого ланцюгів людського антитіла, но обговорюються у Прикладі 2.2. (див. також ЕР де один чи більше СОЕ регіонів Мн та/або Мі замі- 239,400; публікацію РСТ М/О 91/09967; Патенти щені СОК послідовностями мишачих антитіл за США МоМо 5,225,539; 5,530,101; та 5,585,089), пок- даним винаходом. Каркасна послідовність будь- риття або повторне покриття (ЕР 592,106; ЕР якого людського антитіла може бути темплатою 519,596; Радіап, Моїіесшцаг Іттипоіоду 28(4/5):489- для СОК імплантування. Проте, заміщення нероз- 498 (1991); Зщапіска еї аї., Ргоїєїп Епдіпеегіпд галуженого ланцюга на такий каркас часто приз- 7(6):805-814 (1994); ВКодигКа єї аі., РМА5 91:969- водить до певної втрати афінності зв'язування із 973 (1994)), та тасування ланцюгів (Патент США антигеном. Чим більш гомологічним є людське Ме5,565,352). антитіло до вихідного мишачого антитіла, тим У конкретному втіленні винахід забезпечує меншою є вірогідність того, що комбінація миша- СОК імплантовані антитіла з Мн та/або Мі ланцю- чих СОК з людським каркасом призведе до спо- гами, як описано у Таблиці 7. творень у СОК, що можуть зменшувати афінність.

ТАБЛИЦЯ 7: СОК імплантовані антитіла

ЗЕОІЮ Ме. |Ділянкабілка |Послідовність.///-:/ сс 11111111 1123456789012345678901234567890.ЮШО 61 уніба44 ЕМТІВЕБСРАГУКРТОТІ-ТІ.ТСТЕЗСЕВІ. (в) (МН2-ТО/ІНВ ЕВ) | ЗКЗУМСМВУМЛВОРРОКА! ЕМ АНІУМО (7) (МН2-Т0/ІНБ ЕВ?) 0 ООКУУМРБІ К5ВІ ТІЗКОТКМОУМІТМ (в) (МН2-70//НБ ЕКЗ) 0 ТММОРУОТАТУУСАВЕСТВЗАМОУМСО 9 Но-70/Не ВА) | сТТУТУ85 (3) (В3І)КЯ ЕВ) РІУМТО5РОЗВІ АУБІ СЕВАТІМСКАВО5 (24) (ВЗ/ЛКАЯ ЕВо) МЗМОМАУУООКРООРРКІ ПУ ТАЗМЕУ (в) (ВЗлКА ЕБЗ) ТОМРОВЕЗС5О5СТОЕТІ ТЗІ ОАЕОМ 28 во ка ЕЯ АМУУСОООУМ5РМТЕСОСТКУЕІКА 63 Ууніра42 ЕМТІКЕБОРМІМКРТЕТІСТІ ТСТУБОСЕВІС (10) (МНО-28/)Нб ЕВ1) | ЗКЗУМСУЗУМІВОРРОКАГ ЕМ АНІУМ/О (7) (МН2-70/ІНБ ЕН2) | ООКУУМРБІ КЗВІТІЗКОТКВОУМТМ (17) (МН2-26/ІНБ ЕКЗ) 00 ТММОРУЮТАТУУСАВЕСІВЗАМОУУУСО 9 МН2-70/ІНВЕВЯ) | сТТУТУВ8 ст) Ме Пктев з ЕІМММТОБРАТІ ЗУЗРСЕВАТІ ЗСКАВЗО5 ов) (ока во) У5МОМАМУООКРООАРКЦТУУАЗМНУ в) ока ЕВ) ТСІРАВЕЗС5СЗСТЕНТІ ТІЗ51О5ЕОРА ов Бак ЕВ) УУУСОООУМ5РУИТЕСОСТКУВІКА ун 1ра.З ЕМТІВЕЗСРАІУКРТОТІ ТІ ТСТЕЗОСЕБІ (в) (УНО-ТОГІНВ ЕВ) 0 | ЗКЗУМСУЗУЛВОРРОКАЇ ЕУМАНІУМТО (7) (МНО-7О/)НБ ЕВ) 00 О0КУУМРВІ К5РІ ТІЗКОТеКМОУМ ТМ (в) (МНО-7О/ІНВ ЕВ3) 0 ТММОРУОЮТАТУУСАКАСІВЗАМОУУУСО (9) МНО-ТОЛНВЕВЯ) 0 сТТУТУВ8 оп 15 КА ЕВ) ЕММТОЗ5РАТІ ЗМ5РОЕВАТІ ЗСКАЗО5 св) псужа нн) УЗМОМАМУООКРООАРВІ ПУУАЗМАУ св) ска ЕКЗ) ТСІРАВЕ5О5С5СТЕНТІ ТІЗ5І.ОЗЕОБА зе у МУУСООБУМ5РМТЕСОСТКУвІКА 67 УНАбІ ЕМТІВЕВСРАЇУКРТОТІТІСТСТЕБСЕВІ. (в) (МНО-ТО/ІНВ ЕРИ) | ЗТЗСМСУЗУЛВОРРОКАЇ ЕУМАНІММО (7) (МН2-70//НВ ЕК2) 00 СОМУУМРБІ К5ВІ ТІЗКОТВКМОУМІ ТМ (В) (МНО-70ІНО ВЗ) | ТММОРУЮТАТУУСАВАТВУМУАМОУУУ

З МНо-ТОЛНв ВА) | бОСТТУТУ55 68 МІ 1АвА ОІММТО5РОЗВІ АМ8І СЕВАТІМСКАБОВ (23) (ВЗ//КА ЕВ)

Са валка Ро, МУЗМОМАУУУООКРООРРКІУУАЗНЕУ ов) (взика ЕВ) ТОУРОВЕ5С5О5СТОЕТІ ТЗІ ОАЕОМ а вка ЕН АМУУСОООУМ5РМТЕСОСТКУЕІКА 69 УН АВ? ЕМТІКЕБСРМІУКРТЕТІ ТІ ТСТУЗОЕВІ (10) (МН2-26/)Нб ЕВ) | ЗТЗСМСУЗУМВОРРОКАЇ ЕУМСАНІМЛМО (7) (МН?-70/)Нб ЕВ2) 0 СОМУУМРВІ К5ВІ ТІЗКОТеКЗОУМі ТМ (13 (МНо-26/)Нб ЕВ3) 0 ТММОРМОТАТУУСАКВТЕУМУАМОУМ (9 (МНО-70//НО ЕРА) | СОСсТТУТУ55 ст пока ЕВ я ЕММТО5РАТІ ЗУЗРОЕВАТІ ЗСКАБО5

Св) уж ен, У5МОМАМТООКРООАРВІ ШУХУАЗМКУ о) (сука ЕВЗ) ТОСІРАВЕ5О5С5СТЕРЕТІ ТІЗ5ІО5ЕОРА зв) ОКА ЕВ МУУСООБУМ5РИТЕСССТКУЕІКВ

/ЗЕОІО Ме. |Ділянкабілка | Послідовність с. 11111111 1123456789012345678901234567890.-С 71 МН 8Е1.1 ЕМОСМЕЗОСОІ МОРООБІВКІ З5СААБОЕ (12) (МНЗ-72/)Н6 ЕК1) | ТЕБОУОМУМУВОАРОКОЇ ЕМУУС5І55О (13) (МНЗ-72/)Н6 ЕКг) З5МУХАВТУКОСВЕТІЗКООКМІ МІ о (14) (МНІЗ-72/)Н6 ЕКЗ) ММИБІЕКТЕОТАУУУСАКМеУУОСТТМУТ 9 МН2-7073)Н6 ЕБ4А Уві (30) Ми ек вві) ОІОМТО5РЕБІ ЗАБУСОВМУТІТСКАВЗОМ 81) п 1БІІКА ЕКО) МОТММАМУООКРЕКАРКЗИУЗАЗНЕХУ (32) Й 1БІУКА ЕКЗ) 5СУРЗКЕ5О5О5СТОЕТІ ТЗІ ОРЕ 26 ВІКА ЕВА АТУУСООУМВУРІ ТЕСОСТКМУЕІКК 73 МН 8Е1.2 ЕМОЇМЕБЗОСОІЇ МКРОСБІ ВІ ЗСААБОЕ (15) (МНЗ-21/ЛІН6 ЕК) ТЕБОМОМУМУКОАРОКОЇ ЕМ/У 551550 (16) (МНЗ-21/)ІН6 ЕКЗ) З5МУУАОТУКОКЕТІЗКОМАКМІСМО (17) (МНЗ-21/1Н6 ЕКЗ) МиМ5І КАЕОТАМУУСАКМРУУУСОСТТМТ 9 Н2г-707)Н6 ЕК) У55 (33) її Я ев я ПІОМТО5Р5ЗЗУЗАБУСОВУТІТСКАБОМ (з) (115//КА ЕВ) МСТММАМУООКРОКАРКІ ПУЗАЗНЕКУ (32) (С15/ЖКА ЕВЗ) 8ЗОМРЗВЕ5О5О5ОТОЕТІ ТІЗ5І ОРЕОЄ (26) (ВЗ/УКА ЕНЯ) АТУУСООУМ5УРІ ТЕССОСТКМУЕІКВ 75 МН 367.1 ЕМО! МОБОАЕУККРОЗЗУКУЗСКАВЗОО (18) (МНІ1-69/)Н6 ЕК) ТЕБОУМЛЕММКОАРОСОСІ ЕУУМОСЕЗН (19) (МНІ1-69/)Н6 ЕК) О5ОБ5ТМУМЕКЕКОКМТІТАОКЗТЗТАУМ (20) (МНІ1-697)Н6 ЕКЗ) ЕС55і К5ЕОТАУУУСАККеЕКОМО УМО (9) (МН2-70УН6 кА ОостТтУТУ55

Оз) М взмка вв о ОЇММТО5РОБІ АМБІ СЕВАТІМСКАЗОВ (24) (ВЗ//КА ЕК) М5МОМАМУООКРООРРКИ У УАЗНКУ (25) (ВЗ//КА ЕВЗ) ТОМРОКЕБОЗОБОСТОЕТІ ТІ ОЕМ 26 ВЗ/)КА ЕВА АМхХУСООру5ЗРУМЗЕСОСТКМЕІКК 77 МН 307.2 ЕМО МОБОАДЕМККРОАЗУКУЗСКАЗОУ (21) (МНІ1-18/)Н6 ЕК) ТЕТОЖУМЛЕУМУУКОАРОСОСІЄЕУУМОСЕЗН (19) (МНІТ-69/)Н6 ЕК2) О5БО5ТМУМЕКЕКОСКУТМТТОТЗТЗТАХ (22) (МНІ1-18/)Н6 ЕКЗ) МЕГК5БІ КБ5БВОТАМУУСАКЕКЕКОМОУУУ 9 МН2г-700Н6 ЕКА восттУТУБ5 ст) поіКл ЕВ я | ЕММТОЗРАТІ ХУ5РСЕВАТІ 5СКА5О5 (ов) (Г2/УКА ЕК) М5МОМАМГУООКРООАРВЦІУХАЗМНАХ (29) (С2//КА ЕВЗ) ТОСІРАВЕ5О5С5СТЕЕТІ ТІЗ5Г ОЗЕРА 28) ВЗКА БА УУУСОО0У55РМУЗЕСОСТКМЕІКК 67 МН 1А6.5 ЕМТІКЕБОРАІЇ МКРТОТІ ТІ ТСТЕ5ОБ5І (6) (МН2-70/9Н6 ЕВ) 5Т8ОМОМУЛЕОРРОКАЇ ЕУМІ АНІМЛА/О (7) (МН2-70/2Н6 гг) СОМУУМРЗІ КЗКІЛІЗКОТЗКМОММ ТМ (8) (МН2-70/)Н6 ЕКЗ) ТММОРМОТАТУУСАККТКУМХАМО МУ (9) МН2-70/)Н6 ЕКЯ) вОовТТУТУ55 то МІ. 1А6.5 ЕММТО5РАТІ 5У5РОЕВАТІ 5СКАВОВ8 (27) ((2/9К4 ЕК) (2в) (І2//КА ЕВ2) МЗМДМАМУООКРООАРКІ ПУМАЗМНКУ (29) (2/ІКА ЕВЗ) ТОІРАКР5О5О5ОТЕНЕТІ ТІЗБІ ОБЕОБГА 26 (В3КА ЕКО) МУУУСОООУМ5РУТЕОСОТКМЕКА /ЗЕОІО Мо. Ділянкабілка |Послідовність ССС 11111111 |123456789012345678901234567890.Н:БУ 69 МН 1А6.6 ЕМ'ТКЕБЗОРМІ МКРТЕТІТІ.ТСТУБОЕ5І. (10) (МН2г-26/ОН6 ЕК) ЗТЗОМОУБУМКОРРОКАЇ ЕУМІ АНІМУМО (7) (МН2-7Т0/УНб ЕК) СОМУУМРБІКВКІ ТІЗКОТЗКБОУМІ ТМ (1) (МН2І-267УН6 ЕКЗ) ТюІМОРМУОТАТУ"САКЕТЕУМУАМОУМУ

З МН2-70/3Н6 ЕК4 вОооТТУТУ5 3) У взка єв я ОІММТО5РОБІ АМ5І СЕВАТІМСКАЗО5 (24) (ВЗ/ІКА ЕКО) М5МЧОМАУМУООКРООРРКІ СУ МАЗМНКУ (25) (ВЗ/КА ЕКЗ) ТОМРОКЕБЗОБОБОТОБТІТІЗГОАЕВСМ 26 ВЗ/ІКА ЕВЯ) АМУУСаОрУМЗРМТЕООСТКМЕІКК 4. Анти І--12р40 олюднені антитіла мумли. порі. піт. пін. дом/епіге2-/диегу-їсві;

Олюднені антитіла є молекулами антитіл не- мли. аїсс.ога/рпаде/пав. піті мумлу. зсідезі соту; людських видів, що зв'язують бажаний антиген, що млум.арсат.соту/; має один чи більше гіперваріабельних регіонів мли. апіїродугезоцгсе.сот/опіїпесотр. Пі ті; (СОК) не-людських видів та каркасних регіонів мли. рибіїс.іазіасге. еди/.арошї.редго/гезеагсі (оо1ів5.п молекули людського імуноглобуліну. Відомі люд- Іті; мулу. тдеп.ипі-пеідеІрего.де/5Б/Л ТТ. Іті; ські Ід послідовності описані, наприклад, у мм. мптеєтап.сот/іттипоіоду/С Н-

ОоБ/Киру0Б5. піт; Перевірка цих проявлень дозволяє аналізува- мли. Тргагу Піпкдневіого/12429/Лттипе/Апіїроау. пі ти можливу роль залишків у функціонуванні мож- ті; ммлу.пАті.ого/дгапівзЛесіигев/1996/маб/; ливої імуноглобулінової послідовності, тобто, ана- млмли.ракп.сат.ас.ик/.ароші.тгс7/т- ікеітадез.піті; лізувати залишки, що впливають на можливість млмлу.апіїбодузоцгсе.соту/; потенційного імуноглобуліну зв'язувати його анти- тебр.Нагмага.еди/Віо! іпко/ттипоіоду. пітіммлм.їт ген. Таким чином, можуть відібрані ЕК залишки та типоіодуїїпКосот/; сполучені із консенсусними та імпортованими пос- рашрохмизі!.еди/.ароцї. псепіег/Іпаех.-ПІті; лідовностями таким чином, щоб досягти бажаних мли. ріотесп. ші. еди/.арошї. пеі/; характеристик антитіл, таких, як підвищена афін- млмли.реріо.сот/ра/340913/340913. піті-; ність до антигену-мішені (антигенів- млли.паї.изаа.дом/аміс/рирз/апіроау/; мішеней).Загалом, СОК залишки безпосередньо мумлм.т.епіте-и.асір/.арошуазинпію-/Еїїва. літі; та найбільш істотно задіяні у впливі на антигенне- мумли. ріодезідп.сот/габлиця.азр; зв'язування. Антитіла можуть бути олюднені за мли. іспеї ик/ахр/асз/даміез/Ліпкв. піті; допомогою множини методів, відомих з рівня тех- мли. ріотесп. ші. еди/. ароші.осі/ргоїосої. піті; ніки, наприклад, але не обмежуючись наведеними, мули. івас-пеїогд/віев део.піті; ахітік. т ипі- методів, описаних у Чопев еї аї., Майте 321:522 татбига.ае/.ароці.гек/АЕР-еігап.піті; (1986); Мегппоеуєп еї аї., Зсієпсе 239:1534 (1988)),

Бразегу.исі.Кип.пі/.ароці. |гаафвЛіпкві.пІті; Зітв еї аї., У. Іттипо!ї 151: 2296 (1993); Спощтіа млмли.гесар. ипі-на.де/лттипо.Юте. пи. еди/; апа Гевк, 9. Мої. Віої. 196:901 (1987), Сапег еї аї., мулу. тто-сре.сат.ас.ик/ті-дос/ри-Біїс/ МТ ВО. ті; Ргос. Май). Асад. осі Ш.5.А. 89:4285 (1992); Ргевіа мли р ипат.тх/міг/М тісе.піті; ес а), у. ІттипоЇї. 1512623 (1993), Радіап, ітд. спизс.1:8104/; МоІесшаг Іттипоіюду 28(4/5).489-498 (1991), мли. ріоспет.исі.ас. ик/.ароцї. тапіп/арз/Іпаеєх.пІті; Зщшапіска єї аї., Ргоїєїп Епдіпеегіпод 7(6):805-814 апіїроду.ракй. ас.ик/; (1994); Водизка. еї аі., РМАБ 91:969-973 (1994); ардеп.смт.(ати.едиЛарлумлиаврдеп.піті; Публікація РСТ УМО 91/09967, РСТ/: 0О598/16280, мули. ипі2гп.сп/.ароці. попеддег/АНОзет- 0596/18978, И591/09630, И5БО1/05939, іпаг/5ідео1.піті; 0594/01234, сав89/01334, саво1/01134, млмллу.стуві рорК.ас.ик/. ароші.ирс9о75/; авог/01755; МО90/14443, МмО90/14424, мулу. пітг. тгс.ас.ик/СС/ссаємд/ссаєма. піт; М/О90/14430, ЕР 229246, ЕР 592,106; ЕР 519,596, млмли.ракп.сат.ас.ик/.ароцї.тгс7/п- ЕР 239,00, патенти США МоМео 5,565,332, итапізайоп/ТАННР.піті; 5,723,323, 5,976,862, 5,824,514, 5,817,483, мли рі ипат.тх/міг/5їтгисіиШге/ваї аїт.піті; 5814476, 5763192, 5723323, 5,766886, 5,714,352, мумлм. ріовсі. тівзоцгі.еди/5ті(пор/Іпаех. піті; 6б,204,023, 6,180,370, 5,693,762, 5,530,101, ммли.сгуві.ріос.сат.ас.ик/.аро- ш.Гтоїїпа///ер- 5,585,089, 5,225,539; 4,816,567, кожна з яких пов- радез/Рері/вроКесп.піті; мали. |егіпі.делг ністю включена до цієї заявки шляхом посилання, годисів. піт; милу рагепів.рт.сот/Ют.пІті. Кабаї єї включаючи наведені у них посилання. аї., Зедиепсез ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві, С. Продукування антитіл та антитіл-

Ц.5. Оері. Неанп (1983), кожна з яких цілком вклю- продукуючих клітинних ліній чена до цієї заявки. Такі імпортовані послідовності Переважно, анти-ІЇ-12р40 антитіла за даним можуть бути використані для зменшення імуноген- винаходом проявляють високу здатність до змен- ності або зменшення, підсилення чи модифікації шення чи нейтралізації активності 1-12, напри- зв'язування, афінності, швидкості асоціації, швид- клад, як визначено у будь-якому з декількох аналі- кості дисоціації, авідності, специфічності, часу на- зів, проведених іп міо та іп мімо, відомих з рівня піврозпаду або будь-яких інших придатних харак- техніки (наприклад див. Приклад 1.1.2). Напри- теристик, відомих з рівня техніки. клад, ці антитіла нейтралізують викликане 1І-12-

Каркасні залишки у людських каркасних регіо- продукування інтерферону-гама ФГА бластоцита- нах можуть бути заміщені відповідними залишками ми, значення ІСзо яких знаходяться у діапазоні,

СОМ донорськими антитілами для зміни, переваж- щонайменше, приблизно 102 М, приблизно 10 М, но, покращення, антигенного зв'язування. Ці кар- або приблизно 1079 М. Переважно, анти-1ІІ-12р40 касні заміщення ідентифіковані способами, добре антитіла за даним винаходом також проявляють відомими з рівня техніки, наприклад, шляхом мо- високу здатність до зменшення чи нейтралізації делювання взаємодій СОК та каркасних залишків активності І--23. для визначення каркасних залишків, важливих для У переважних втіленнях, ізольоване антитіло, антигенного зв'язування та порівняння послідов- або його антиген-зв'язуюча частина, зв'язує люд- ностей для визначення нестандартних каркасних ський ІІ-12р40, де антитіло, або його антиген- залишків у конкретних положеннях. (Див., напри- зв'язуюча частина, дисоціює з людського І--12р40 клад, Оцееп еї аі., Патент США Мо 5,585,089; з константою швидкості Кої, що становить 0,1с7

Віесптапп еї аї!., Майшге 332:323 (1988), що повніс- або менше, як було визначено способом поверх- тю включені до цієї заявки). Тривимірні імуногло- невого плазмонного резонансу, або що інгібує ак- булінові модулі є загальнодоступними та відомі тивність людського 1-12 та/або людського 1-23 з фахівцям у цій галузі. Доступні комп'ютерні про- ЇСво що становить, приблизно, 1х10М або менше. грами, що ілюструють та виявляють ймовірні три- Альтернативно, антитіло, чи його антиген- вимірні конфірмаційні структури відібраних потен- зв'язуюча частина, може дисоціювати з людського ційних імуноглобулінових послідовностей. І.-12р40 з константою швидкості Кої, що стано- вить, приблизно, 1х102с! або менше, як було ви-

значено способом поверхневого плазмонного ре- визначають циркуляційний час напівжиття антитіл. зонансу, або може інгібувати активність людського Ще в одному втіленні щонайменше, один аміноки-

І/-12 та/або людського 1-23 з ІСзо, що становить, слотний залишок заміщений у константному регіо- приблизно, 1х107М або менше. Альтернативно, ні антитіла, наприклад, Ес регіоні антитіла, такому, антитіло, чи його антиген-зв'язуюча частина, може де функції ефектора антитіла змінені. дисоціювати з людського ІЇ/-12р40 з константою Одне втілення забезпечує мічений зв'язуючий швидкості Кої;, що становить, приблизно, 1х10с" білок, де антитіло або частина антитіла за даним або менше, як було визначено способом поверх- винаходом деріватизовані або зв'язані із іншою невого плазмонного резонансу, або може інгібува- функціональною молекулою (наприклад, іншим ти активність людського 1І--12 та/або людського ІЇ-- пептидом чи білком). Наприклад, мічений зв'язую- 23 з ІСво, що становить, приблизно, 1х103М або чий білок за даним винаходом може бути одержа- менше. Альтернативно, антитіло, чи його антиген- ний шляхом функціонального зв'язування із анти- зв'язуюча частина, може дисоціювати з людського тілом чи частиною антитіла даним винаходом

І.-12р40 з константою швидкості Кої, що стано- (шляхом хімічного зв'язування, генетичного злиття, вить, приблизно, 1х107с! або менше, як було ви- не ковалентної асоціації чи іншим чином) до однієї значено способом поверхневого плазмонного ре- чи більше молекулярних груп, таких, як інше анти- зонансу, або може інгібувати активність 1-12 тіло (наприклад, біспецифічне антитіло чи димер- та/або людського 1-23 з ІСво, Що становить, приб- не антитіло), детектовний агент, цитотоксичний лизно, 1хХ109М або менше. Альтернативно, антиті- агент, фармацевтичний агент, та/або білок чи пеп- ло, чи його антиген-зв'язуюча частина, може дисо- тид, що можуть опосередковувати асоціацію анти- ціювати з людського 1Ї/-12р40 з константою тіла чи частини антитіла з іншою молекулою (та- швидкості Коїх що становить, приблизно, 1х107с7 кою, як основний регіон стрепатвідіну чи або менше, як було визначено способом поверх- полігістидинова мітка). невого плазмонного резонансу, або може інгібува- Корисні детектовні агенти, за допомогою яких ти активність І--12 та/або людського 1-23 з ІСв5о можуть бути деріватизовані антитіло чи частина що становить, приблизно, 1х1079М або менше. антитіла за даним винаходом, включають флуоре-

Альтернативно, антитіло, чи його антиген- сцентні сполуки. Ілюстративні детектовні флуоре- зв'язуюча частина, може дисоціювати з людського сцентні агенти включають флуоресцеїн, флуорес-

І.-12р40 з константою швидкості Кої, що стано- цеїн ізотіоціанат, родамін, 5-диметиламін-1- вить, приблизно, 1х102с! або менше, як було ви- нафталінсульфоніл хлорид, фікоеритрін та подібні значено способом поверхневого плазмонного ре- агенти. Антитіло може також бути деріватизовано зонансу, або може інгібувати активність 1-12 за допомогою детектовних ферментів, таких, як та/або людського 1І--23 з ІСво, що становить, приб- лужна фосфатаза, пероксидаза хрону, глюкозна лизно, 1х10711М або менше. оксидаза та подібні. Коли антитіло деріватизовано

У певних втіленнях, антитіло містить констант- за допомогою детектовних ферментів, його детек- ний регіон важкого ланцюга, такий, як Ідс1, Ідс2, тують шляхом додавання додаткових реагентів, які

ІЧ3, ІдДС4, ІДА, ІЗЕ, І9М або ІдО константний регі- використовує фермент для одержання детекто- он. Переважно, константний регіон важкого ланцю- вного продукту реакції. Наприклад, коли присутній га є константним регіоном важкого ланцюга Ідс1 детектовний агент пероксидаза хрону, то дода- або константним регіоном важкого ланцюга Ідсі. вання пероксиду водню та діамінобензидіну приз-

Додатково, антитіло може містити константний водить до утворення забарвленого реакційного регіон легкого ланцюга, або каппа константний продукту, що є детектовним. Антитіло може також регіон легкого ланцюга, або лямбда константний бути деріватизовано за допомогою біотину та де- регіон легкого ланцюга. Переважно, антитіло міс- тектовано шляхом непрямого вимірювання зв'язу- тить каппа константний регіон легкого ланцюга. вання авідіну чи стрептавідіну.

Альтернативно, частиною антитіла може бути, Інше втілення даного винаходу забезпечує наприклад, Гар фрагмент чи Ем фрагмент одиноч- кристалічний зв'язуючий білок. Переважно, винахід ного ланцюга. стосується кристалів цілих анти-1ІІ-12р40 антитіл

Заміщення амінокислотних залишків у Ес час- та їх фрагментів, як описано у цій заявці, та скла- тині для зміни функцій ефектору антитіла відомі з дів та композицій, що містять такі кристали. В од- рівня техніки (М/іпіег, еї аі., патенти США МеМе ному втіленні, кристалічний зв'язуючий білок має 5,648,260; 5624821). Частина Ес антитіла опосере- більшу тривалість часу напівжиття іп мімо у порів- дковує декілька важливих функцій ефектору, на- нянні з розчинним протиіїоном зв'язуючого білка. В приклад, індукцію цитокіну, АОСС, фагоцитоз, іншому втіленні, зв'язуючий білок зберігає біологі- комплемент-залежну цитотоксичність (СОС) та чну активність після кристалізації. швидкість напіврозкладу/напівжиття антитіла та Кристалічний зв'язуючий білок за даним вина- комплексів антиген-антитіло. У деяких випадках, ці ходом можна одержувати відповідно до способів, функції ефектору є бажаними для терапевтичного відомих з рівня техніки, та описаних у УМО антитіла, проте в інших випадках вони можуть бу- 02072636, що включена до цієї заявки шляхом ти необов'язковими чи навіть шкідливими, в зале- посилання. жності від терапевтичних цілей. Певні людські ДО Інше втілення даного винаходу забезпечує глі- ізотипи, особливо ІдДС1 та ІдОЗ, опосередковують козилований зв'язуючий білок, де антитіло або

АОСС та СОС через зв'язування із Гсук5 та ком- його антиген-зв'язуюча частина містить один чи плементним С14, відповідно. Неонатальні Ес ре- більше вуглеводневих залишків. Білок, що утво- цептори (сп) є критичними компонентами, що рюється іп мімо, може бути підданий додатковій обробці, що відома як пост-трансляційна модифі- ни-хазяєва, в яких експресуються рекомбінантні кація. Зокрема, цукрові (глікозильні) можуть бути антитіла за даним винаходом для продукування додані ферментативним шляхом, цей процес ві- антитіла зміненим глікозилуванням. Див., напри- домий як глікозилування. Результуючі білки мають клад, Зпіеа5, К. Г. еї а. (2002) 9. Віої. Спет. ковалентно пов'язані олігоцукрові бічні ланцюги, 277:265733-26740; Отапа еї а. (1999) Маї. Віогесн. відомі як глікозиловані протеїни чи глікопротеїни. 17:176-1, а також, Європейський патент Ме: ЕР

Антитіла є глікопротеїнами з одним чи більше вуг- 1,176,195; РОСТ публікації М/о 03/035835;. УМО леводневими залишками у Ес домені, а також у 99/54342 80, кожна з яких включена до цієї заявки варіабельному домені. Вуглеводневі залишки у Ес шляхом посилання. домені мають важливий вплив на функції ефекто- Протеїнове глікозилування залежить від амі- ру Ес домену, та мінімальний вплив га зв'язування нокислотної послідовності протеїну, що розгляда- антигенів або час напівжиття антитіла (ЕК. Уепегів, ється, а також від клітини-хазяїна, в якій експресу-

Віоїесппої. Ргод. 21 (2005), рр. 11-16). Навпаки, ється білок. Різні організми можуть продукувати глікозилування варіабельного домену можу впли- різні ферменти глікозилування (наприклад, гліко- вати на активність антигенного зв'язування антиті- зилтрансферази та глікозидази), та мати різні суб- ла. Глікозилування у варіабельному домені може страти (нуклеотидні цукри). Через це, паттерн про- мати негативний вплив на зв'язуючи афінність теїнового глікозилування та композиція антитіл, ймовірно, через стеричні утруднення (Со, глікозильних залишків можуть відрізнятись в зале-

М.5., еї аї., Мої. Іттипої. (1993) 30:1361- 1367), жності від системи-хазяїну, в якій експресується або призводити до збільшення афінності антигену конкретний білок. Глікозильні залишки, корисні для (уУмаїйїск, 5.С., еї аІ., Ехр. Мей. (1988) 168:1099- винаходу, можуть включати, не обмежуючись на- 1109; Уугідні, А., еї аі., ЕМВО 4). (1991) 10:2717 веденими, глюкозу, галактозу, манному, фукозу, п- 2723). аацетилглюкозамін та саліцилову кислоту. Пере-

Один аспект даного винаходу направлений на важно, глікозильований зв'язуючий білок містить генерування мутантів сайту глікозилування, де О- глікозильні залишки, такі, що паттерн глікозилу- або М-зв'язаний сайт глікозилування зв'язуючого вання є людським. білка був мутований. Фахівець у цій галузі може Фахівцям у цій галузі відомо, що різне протеї- генерувати такі мутанти за допомогою стандарт- нове глікозилування може призводити до виник- них добре відомих технологій. Мутанти сайту глі- нення різних протеїнових характеристик. Напри- козилування, що зберігають біологічну активність, клад, ефективність терапевтичного білка, що але мають збільшену чи зменшену зв'язуючи акти- продукується у мікроорганізмі-хазяїні, такому, як вність, є іншим об'єктом даного винаходу. дріжджі, що був глікозилований з використанням

Ще в одному втіленні, глікозилування антитіла дріжджового ендогенного маршруту, може бути чи антиген-зв'язуючої частини за даним винахо- знижена порівняно із ефективністю того ж білка, дом, модифіковано. Наприклад, може бути одер- що експресується у клітині ссавців, такій, як СНО жано аглікозиловане антитіло (тобто, антитіло без клітинна лінія. Такі глікопротеїни можуть також глікозилування). Глікозилування може бути замі- бути імуногенними у людей та проявляти зменше- нено на, наприклад, зростання афінності антитіло ний час напівжиття іп мімо після введення. Специ- до антигену. Такі вуглеводневі модифікації можуть фічні рецептори у людей та інших тварин можуть бути здійснені шляхом, наприклад, зміни одного и розпізнавати конкретні глікозильні залишки та більше сайтів глікозилування у послідовності анти- промотувати швидкий вивід білка з кровообігу. Інші тіла. Наприклад, можуть бути зроблені одно чи несприятливі ефекти можуть включати зміни у більше амінокислотних заміщень, що можуть при- згортанні білка, розчинності, чутливості до проте- зводити до видалення одного чи більше сайтів аз, переносі, транспортуванні, компартменталіза- глікозилування варіабельного регіону для того, ції, секреції, розпізнаванні іншими білками чи фак- щоб таким чином видалити глікозилування на торами, антигенності чи алергійності. Відповідно, цьому сайті. Таке агліколизування може збільшу- фахівець, що практикує, може віддавати перевагу вати афінність антитіла до антигену. Такий підхід терапевтичному білка зі специфічним складом та детально описаний у публікації РСТ паттерном глікозилування, наприклад, складу та

М/О2003016466А2, та Патентах США /МоМо паттерну глікозилування, що ідентичні, або, що- 5,714,350 та 6,350,861, кожна з яких цілком вклю- найменше, подібні, тим, що продукуються у люд- чена до цієї заявки шляхом посилання. ський клітині або у видоспецифічних клітинах ба-

Додатково чи альтернативно, може бути оде- жаної тварини. ржано модифіковане антитіло за даним винахо- Експресія глікозилованих протеїнів, що відріз- дом, що має змінений тип глікозилування, таке, як няються від протеїнів клітини-хазяїна, може бути гипофукозильоване антитіло, що має зменшену досягнута шляхом генетичної модифікації клітини- кількість фукозильних залишків, або антитіло, що хазяїна для експресії гетерологічних ферментів має збільшені бісекторні СІСМАс структури. Було глікозилування. Використовуючи методи, відомі з показано, що такі змінені паттерни глікозилування рівня техніки, фахівець, що практикує, може одер- збільшують АОСС здатність антитіл. Такі вуглево- жувати антитіла або їх антиген-зв'язуючі частини, дневі модифікації можуть бути здійснені шляхом, що проявляють людське протеїнове глікозилуван- наприклад, експресії антитіла у клітині-хазяїні зі ня. Наприклад, штами дріжджів були генетично зміненим механізмом глікозилування. Клітини зі модифіковані для експресії ферментів глікозилу- зміненим механізмом глікозилування були описані вання, що не зустрічаються у природі, таким чи- у рівні техніки та можуть бути використані як кліти- ном, щоб ці глікозильовані протеїни (глікопротеї-

ни), що продукуються у цих штамах дріжджів, про- ціанат, родамін, дихлортріазініламін флуоресцеїн, являли протеїн глікозилування, ідентичний до про- дансил хлорид або фікоеритрін; приклад люмінес- теїну тваринних клітин, особливо тваринних клітин центного матеріалу включає люмінол; та приклади (патентні заявки США 20040018590 та придатних радіоактивних матеріалів включають 20020137134 та публікація РСТ УУМО2005100584 ЗН, б, 855, у, ато, 1, 125), 191), 177 у, 196но або

АЗ2). 15357.

Крім зв'язуючих білків, даний винахід додатко- Альтернативно до маркування антитіла, люд- во направлений на анти-ідіотипічне (анти-і«4) анти- ський 1-12 може бути проаналізований у біологіч- тіло, специфічне для таких зв'язуючих білків за них рідинах шляхом конкурентного імунного аналі- даним винаходом. Анти-Ій антитіло є антитілом, зу з використанням гпІЇ/-12 стандартів, мічених що розпізнає унікальні детермінанти, загалом зв'я- детектовною речовиною, та неміченого анти- зані із антиген-зв'язуючим регіоном іншого антиті- людського ІІ-12р40 антитіла. У цьому аналізі, спо- ла. Анти-ІЯ може бути одержано шляхом імунізації лучають біологічну пробу, мічені гпІ--12 стандарти тварини зв'язуючим білком або його СОК-вмиснимМ та анти-людське І-12р40 антитіло, та визначають регіоном. Імунізована тварина розпізнаватиме та кількість міченого гпІС-12 стандарту, зв'язаного із реагуватиме на ідіотипічні детермінанти імунізую- неміченим антитілом. Кількість людського 1-12 у чого антитіла та продукувати анти-їа антитіло. Ан- біологічній пробі є зворотно пропорційна кількості ти-Ій антитіло може також бути використано як міченого гпІ--12 стандарту, зв'язаного із анти-!1Ї - "іІмуноген" для індукування імунного відклику у ще 12р40 антитілом. Аналогічно, людський 1-23 може одної тварини, з продукуванням так званого анти- також бути проаналізований у біологічних рідинах анти-іа антитіла. за допомогою конкурентного імунного аналізу з

Додатково, фахівець у цій галузі оцінить, що використанням гппІ/-23 стандартів, мічених детек- білок, що розглядається, може бути експресова- товною речовиною та неміченого анти-людського ний з використанням бібліотеки клітин-хазяєв, ско- І--12р40 антитіла. нструйованих методами генетичної інженерії, для Антитіла та частини антитіл за даним винахо- експресії різноманітних ферментів глікозилування, дом переважно, здатні нейтралізувати активність щоб ця клітина-хазяїн, що входить до складу біб- людського 1-12 та/або людського 1-23 як іп міо, ліотеки, продукувала бажаний з різними паттер- так і іп мімо Відповідно, такі антитіла та їх частини нами глікозилування. Дослідник може потім відіб- за даним винаходом можуть бути використані для рати та ізолювати бажаний білок за допомогою інгібування активності ПІЇ-12 та/або ПІГ-23, напри- конкретних нових паттернів глікозилування. Пере- клад, у клітинній культурі, що містить ПІІ--12 та/або важно, білок, що має конкретно відібраний новий НІ--23, у людей чи у інших тварин, що мають 1-12 паттерн глікозилування, проявляє покращені чи та/або ПІ--23, за якими перехресно реагує антитіло змінені біологічні властивості. за даним винаходом. В одному втіленні, винахід р. Застосування Анти-1ІІ-12р40 антитіл забезпечує спосіб інгібування активності ПІ/-12

Через здатність до зв'язування людських І! - та/або пПІС-23, що включає контактування ПІІ--12 12р40, анти-людських 1/-12р40, антитіла, або їх та/або пПІ-23 з антитілом або його частиною за частини за даним винаходом, можуть бути засто- даним винаходом, таким чином, щоб інгібувати совані для детекції І/-12 та/або людського 1-23 активність ПІ--12 та/або ПІ/-23. Наприклад, у клі- (наприклад, у біологічній пробі, такі, як сироватка тинній культурі, що містить, або прогнозується, що чи плазма), з використанням традиційного імунно- містить ПІ--12 та/або ПІ--23, антитіло чи його час- го аналізу, такого, як твердофазні імуноферментні тина за даним винаходом можуть бути додані до аналізи (ЕГІ5А), або радіоіїмунний аналіз (КІА) або культурального середовища для інгібування акти- імуногістохімічне дослідження тканин. Винахід за- вності ПІ--12 та/або ПІ--23 у культурі. безпечує спосіб детекції І--12 та/або людського ІІ-- В іншому втіленні, винахід забезпечує спосіб 23 у біологічній пробі, що включає контактування зниження активності ПІЇ-12 та/або ПІ--23 у суб'єк- біологічної проби з антитілом, або частиною анти- та, переважно у суб'єкта, що страждає від хвороби тіла за даним винаходом та детекції або антитіла чи розладу, в яких активність 1-12 або 1-23 є шкі- (або частини антитіла), зв'язаного із ІЇ/-12 та/або дливою. Винахід забезпечує способи зниження ІІ - людським 1І--23, або незв'язаного антитіла (або 12 та/або 1-23 активності у суб'єкта, що страждає частини антитіла), щоб детектувати таким чином від таких хвороби чи розладу, цей спосіб включає

І/-12 та/"або людський 1-23 у біологічній пробі. введення суб'єкту антитіла чи його частини за да-

Антитіло безпосередньо чи опосередковано помі- ним винаходом таким чином, щоб знизити актив- чають детектовною речовиною для сприяння де- ність 1-12 та/або І--23 у суб'єкта. Переважно, ІЇІ- текції зв'язаного чи незв'язаного антитіла. Придат- 12 є людським 1-12, ІЇ-23 є людським 1-23, а су- ні детектовні речовини включають різні ферменти, б'єкт є людиною. Альтернативно, суб'єкт може простетичні групи, флуоресцентні матеріали, лю- бути ссавцем, що експресує 1-12 та/або 1-23, з мінесцентні матеріали та радіоактивні матеріали. якими здатно зв'язуватись антитіло за даним ви-

Приклади придатних ферментів включають перок- находом. Додатково, суб'єкт можу бути ссавцем, сидазу хрону, лужну фосфатазу, р-галактозидазу до якого були введені 1-12 та/або 1-23 (напри- або ацетилхолінестеразу; приклади придатних клад, шляхом введення 1-12 та/або 1-23 або комплексів простетичних груп включають стрепта- шляхом експресії І/-12 та/або 1-23 трансгену). відін/біотін та аїдін/біотин; приклади придатних Антитіло за даним винаходом може бути введено флуоресцентних матеріалів включають людині в терапевтичних цілях. Додатково, антитіло умбелліферон, флуоресцеїн, флуоресцеїн ізотіо- за даним винаходом може бути введено не-

людському ссавцю, що експресує 1-12 та/або 1 - будь-якій та усі розчинники, дисперсійні середо- 23, з якими здатно зв'язуватись антитіло, у вете- вища, покриття, антибактеріальні та протигрибкові ринарних цілях або як тваринна модель людської агенти, ізотонічні агенти та агенти, що уповільню- хвороби. В залежності від останньої, такі тваринні ють поглинання, та інші носії, що є фізіологічно моделі можуть бути корисними для оцінки терапе- сумісними. Приклади фармацевтично придатних втичної ефективності антитіл за даним винаходом носіїв включають один чи більше з носіїв - воду, (наприклад, тестування дозувань та періодів вве- сольовий розчин, фосфатний буферний сольовий дення). розчин, декстрозу, гліцерин, етанол та інш., а та-

Як вживається у цій заявці, термін "розлад, кож їх комбінації. У багатьох випадках, буде пере- при якому активність 1-12 та/або 1--23 є шкідли- важним включення до композиції ізотонічних аген- вою" призначений для включення хвороб та інших тів, наприклад, цукрів, полі спиртів, таких, як розладів, в яких було показано, чи прогнозується, маннітол, сорбітом, або хлорид натрію. Фармацев- що наявність ІЇ/-12 та/або І/-23 у суб'єкта, що тично придатні носії можуть додатково включати страждає від розладу, або відповідає за патофізі- незначні кількості допоміжних речовин, таких, як ологію розладу, або є фактором, що робить внесок зволожуючі або емульгуючи агенти, консерванти у погіршення розладу. Відповідно, розлад, при чи буфери, що збільшують час зберігання чи ефе- якому активність 1-12 та/або 1-23 є шкідливою, є ктивність антитіла або його частини. розладом, для якого очікується, що зниження ак- Відомі різні системи доставки, що можуть бути тивності І--12 та/або І/-23 полегшить симптоми використані для введення одного чи більше анти- та/або прогресію розладу. Свідченнями наявності тіл даним винаходом або комбінації одного чи бі- таких розладів можуть бути, наприклад, збільшен- льше антитіл за даним винаходом та профілактич- ня концентрації 1-12 та/або 1-23 у біологічній рі- ного агента чи терапевтичного агента, що корисні дині суб'єкта що страждає від розладу (напри- для профілактики, контролю, лікування або пок- клад, збільшення концентрації 1-12 та/або 1-23 у ращення розладу чи одного чи більше його симп- сироватці, плазмі, синовіальній рідині та інш. суб'- томів, наприклад, капсулювання у ліпосомах, мік- єкта), що може бути детектовано, наприклад, за рочастки, мікрокапсули, рекомбінантні клітини, допомогою анти-ІЇ-12р40 антитіла, як описано здатні експресувати антитіло або фрагмент анти- вище. Не обмежуючі приклади розладів, які можна тіла, рецептор-опосередкований ендоцитоз (див., лікувати антитілами за даним винаходом, включа- наприклад, УМми апа УМи, 9. Вісі. Спет. 262:4429- ють розлади, що обговорюються у розділі, наве- 4432 (1987)), конструювання нуклеїнової кислоти денім нижче, що стосується фармацевтичних ком- як частки ретровірусного чи іншого вектору та інш. позицій антитіл за даним винаходом. Способи введення профілактичного чи терапевти-

О. Фармацевтична композиція чного агента за даним винаходом включають, не

Винахід також забезпечує фармацевтичні ком- обмежуючись наведеними, парентеральне вве- позиції, що містять антитіло, або його антиген- дення (наприклад, інтрадермальне, внутрішньо- зв'язуючу частину за даним винаходом та фарма- мязове, інтраперітонеальне, внутрішньовенне та цевтично придатний носій. Фармацевтичні компо- підшкірне), епідуральне введення, внутрішньопух- зиції що містять антитіла за даним винаходом линне введення та введення через слизові оболо- призначені для застосування для, не обмежуючись нки, (наприклад, інтраназальне та пероральне). наведеним, діагностики, детектування або моніто- Додатково, може бути застосовано легеневе вве- рингу розладу, для профілактики, лікування, конт- дення, наприклад, шляхом використання інгалято- ролю або полегшення розладу чи одного чи біль- ру або небулайзеру, та складів з аерозольним ше його симптомів, та/(або для дослідження. У агентом. Див., наприклад, патенти США МеМо 6, конкретному втіленні, композиція містить одне чи 019,968, 5,985,320, 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, більше антитіл за даним винаходом. В іншому вті- 5,855,913, 5,290,540, та 4,880,078; та публікації ленні, фармацевтична композиція містить одне чи РСТ МеоМео УЛ 92/19244, УМО 97/32572, МО більше антитіл за даним винаходом та один чи 97/44013, МО 98/31346, та МО 99/66903, кожна з більше профілактичних або терапевтичних агентів, яких цілком включена до цієї заявки шляхом поси- що відрізняються від антитіл за даним винаходом, лання. В одному втіленні, антитіло за даним вина- для лікування розладу, в якому активність 1-12 ходом, комбінаційну терапію або композицію за та/або І/-23 є шкідливою. Переважно, відомо, що даним винаходом вводять з використанням техно- профілактичні чи терапевтичні агенти є корисними, логії легеневого введення ліків АЇКегте5 АЇКФ або були корисними, або використовуються у да- (АІкептев, Іпс., Сатрбгідде, Мав55.). У конкретному ний час для профілактики, лікування, контролю, втіленні, профілактичні чи терапевтичні агенти за або покращення розладу або одного чи більше даним винаходом вводять внутрішньом'язово, його симптомів. Відповідно до цих втілень, компо- внутрішньовенно, внутрішньопухлинно, перораль- зиція може додатково містити носій, розріджувач но, інтраназально, легенево чи підшкірно. Профі- чи наповнювач. лактичні чи терапевтичні агенти можуть бути вве-

Антитіла та частини антитіл за даним винахо- денні традиційним шляхом, наприклад, шляхом дом можуть бути включені до складу фармацевти- вливання чи болюсної ін'єкції, шляхом поглинання чних композицій, придатних для введення суб'єкту. через епітеліальні чи слизово-шкірні покрови (на-

Типово, фармацевтична композиція містить анти- приклад, слизову оболонку ротової порожнини, тіло або його частину за даним винаходом та фа- ректальну слизову оболонку та кишкову слизову рмацевтично придатний носій. Як вживається у цій оболонку, та інш.) та можуть бути введені разом з заявці, "фармацевтично придатний носій" включає іншими біологічно активними агентами. Введення та таким, що біорозпадається. Ще в одному вті- може бути системним чи місцевим. ленні, система з контрольованим чи уповільненим

У конкретному втіленні, може бути бажаним вивільненням може бути поміщена близько до місцеве введення профілактичних чи терапевтич- профілактичної чи терапевтичної мішені, таким них агентів за даним винаходом у зоні, що потре- чином вимагаючи тільки частину від загальної до- бує лікування; цього можна досягнути, наприклад, зи (див. наприклад, Соойбзоп, у Медісаї але не обмежуючись цим, локальним вливанням, Арріїсайопв ої Сопігоїїєа Неїєазе, зирга, мої. 2, рр. ін'єкцією, або за допомогою імплантату, де вказа- 115-138 (1984)). ний імплантат зроблений з пористого чи непорис- Системи з контрольованим вивільненням були того матеріалу, включаючи мембрани та матриці, обговорені в огляді іапдег (1990, бЗБсієепсе такі, як сіла стикові мембрани, полімери, волокни- 249:1527-1533). Для одержання складів з уповіль- сті матриці (наприклад, Тіззце!Ф), або колагенові неним вивільненням, що містять один чи більше матриці. В одному втіленні, ефективну кількість терапевтичних агентів за даним винаходом мо- одного чи більше антагоністів антитіл за даним жуть бути використані будь-які методи, відомі фа- винаходом вводять місцево в уражену зону суб'єк- хівцям у цій галузі. Див., наприклад, Патент США ту для профілактики, лікування, контролю та/або Ме 4,526,938, Публікацію РСТ УМО 91/05548, Публі- покращення розладу або його симптомів. В іншому кацію РОСТ УУО 96/20698, Міпуд сеї аї., 1996, втіленні, ефективну кількість одного чи більше "Інташтога! Надіоіїттипої(Шегарну ої а Нитап антитіл за даним винаходом вводять місцево в Соіоп Сапсег Хеподгай Овіпд а Зивіаіпед-НеЇІєазе уражену зону в комбінації з ефективною кількістю Се", Вадіоїпегару апа Опсоіоду 39:179-189, опа однієї чи більше терапій (наприклад, одного чи еї аі!., 1995, "Апіюбоду Меаїасей Гипд Тагдейпа ої більше профілактичних чи терапевтичних агентів), Гопоа-Сігошайпо Етиівіопе", РОА Оошгпа! ої що відрізняються від антитіла за даним винаходом РПпагтасешіса! бсіепсе апа Тесппоіоду 50:372-397, суб'єкта, для профілактики, лікування, контролю Сіеек еї а)ї., 1997, "Віодедгадабіє Роїутегс Сагпегв та/або покращення розладу чи його одного чи бі- тюг а ВЕС Апіїрбоду ог Сагаіїомазсшаг Арріїсайоп", льше симптомів. Рго. ІпгІ. бутр. Сопігої!. Неї. Віоасі. Маїег. 24:853-

В іншому втіленні, профілактичний чи терапе- 854, та їат еї аї., 1997, "Місгоепсарзшіайоп ої втичний агент може бути доставлений у системі з Аесотбріпапі Нитапілей Мопосіопа! Апіроду г контрольованим вивільненням чи уповільненим І оса! Оєїїмегу", Ргос. Іпг!. Зутр. Сопігої! Веї!. Віоасі. вивільненням. В одному втіленні, для досягнення Маїег. 24:759- 760, кожна з яких цілком включена контрольованого чи уповільненого вивільнення до цієї заявки шляхом посилання. може бути використаний насос (див. І апдег, зирга; У конкретному втіленні, якщо композиція за

Зейоп, 1987, САС Сп. Неї. Віотей. Епд. 14:20; даним винаходом є нуклеїновою кислотою, що

Виспмаїа еї аї., 1980, Бигдегу 88:507; Зацаек еї аї., кодує профілактичний чи терапевтичний агент, 1989, М. Епоі. У. Мед. 321:574). В іншому втіленні, нуклеїнова кислота може бути введена іп мімо для для досягнення контрольованого чи уповільненого сприяння експресії її кодованого профілактичного вивільнення терапій за даним винаходом можуть чи терапевтичного агента, шляхом конструювання бути використані полімерні матеріали (див., на- її як частини відповідного вектору експресії нуклеї- приклад, Медіса! Арріїсаноп5 ої СопігоПеа Кеїеазе, нової кислоти та введення її таким чином, щоб

Ї апдег апа М/ізе (едв».), САС Ргез., Воса Найшп, Ріа. вона стала внутрішньоклітинною, наприклад, шля- (1974); Сопігоїїєа Огид Віоамайаріїйу, Огид Ргодисі хом використання ретровірусного вектору (див.

Оезідп апа Репогтапсе, бтоїєп апа Ваї (еав.), Патент США Ме 4,980,286), або шляхом прямої

УМіеу, Мем хХогк (1984); Напдег апа Реррав, 1983, ін'єкції, або шляхом використання бомбардування

У., Масготої. сі. Нем. Масготої. Спет. 23:61; мікрочастками (наприклад, генної пушки; Віоїївііс, див., також, ему єї аї., 1985, бсієпсе 228:190; Оиропі), або покриття ліпідів або рецепторів клі-

Оитіпд єї аї., 1989, Апп. Мешгої. 25:351; Ножмага єї тинної поверхні агентів тансфекції, або шляхом її аі!., 1989, 9. Меийгозигу. 71:105); патент США Ме введення у зв'язок гомеобокс-подібного пептиду, 5,679,377; патент США Мо 5,916,597; патент США що, як відомо, входить у ядро (див., наприклад,

Мо 5,912,015; патент США Мо 5,989,463; Патент «Зої еї аї., 1991, Ргос. Май. Асай. Осі. ОА

США Мо 5,128,326; Публікацію РСТ Мо. УМО 88:1864-1868). Альтернативно, нуклеїнова кислота 99/15154; та Публікацію РОСТ Мо УМО 99/20253. може бути введена внутрішньоклітинно та включе-

Приклади полімерів, що використовують у складах на у клітину-хазяїн ДНК для експресії шляхом го- з уповільненим вивільненням включають, не об- мологічної рекомбінації. межуючись наведеними, полі(2-гідроксиетил мета- Фармацевтична композиція за даним винахо- крилат), полі(метилметакрилат), полі(акрилову дом складена так, щоб бути сумісною із її запла- кислоту), співполімери етилену та вінілацетату, нованим способом введення. Приклади способів полі(метакрилову кислота), полігліколіди (РІ), введення включають, не обмежуючись наведени- поліангідриди, полі(М-вінілпіролідон), по- ми, парентеральне, наприклад, внутрішньовенне, лі(віниловий спирт), поліакриламід, по- інтрадермальне, підшкірне, пероральне, інтрана- лі(етиленгліколь), полілактиди (РГА), співполімери зальне (наприклад, інгаляцію), черезшкірне (на- молочної та гліколевої кислот (РІ СА), та поліо- приклад, місцеве), введення через слизову оболо- ртоефіри. У переважному втіленні, полімер, що нку, та ректальне введення. У конкретному використовують у складі з уповільненим вивіль- втіленні, композиція складена відповідно до стан- ненням, є інертним, вільним від домішок, що ви- дартних процедур як фармацевтична композиція, миваються, придатним до зберігання, стерильним адаптована для внутрішньовенного, підшкірного,

внутрішньм'язового, перорального, інтраназально- фармацевтично придатними наповнювачами, та- го або місцевого введення людським істотам. Ти- кими, як в'яжучі речовини (наприклад, пептизова- пово, композиціями для внутрішньовенного вве- ний кукурудзяний крохмаль, полівінилпіролідон, дення є розчини у стерильному ізотонічному або гідроксипропіл метилцелюлоза); наповнювачі водному буфері. За необхідністю, композиція може (наприклад, лактоза, мікрокристалічна целюлоза також включати агент солюбілізації та місцевий або кислий фосфат кальцію), любриканти (напри- анестетик, такий, як лігнокаїн, для полегшення клад, стеарат магнію, тальк чи кремнезем), агенти болю у місці ін'єкції. розпаду (наприклад, картопляний крохмаль чи

Якщо композиції за даним винаходом мають натрій крохмаль гліколят); або зволожувачі (на- бути введені місцево, то вони можуть бути складе- приклад, натрій лаурил сульфат). Таблетки мо- ні у формі мазі, крему, черезшкірного пластиру, жуть бути покриті способами, добре відомими з лосьйону, гелю, шампуню, спрею, аерозолю, роз- рівня техніки. Рідкі препарати для перорального чину, емульсії або іншої форми, добре відомої введення можуть мати форму, але не обмежують- фахівцю у цій галузі. Див., наприклад, Кетіпдіоп'5 ся цим, розчинів, сиропів чи суспензій, або вони

РПаптасешіса! Зсієпсез апа Іпігодисйоп о /(ю можуть бути представлені у вигляді сухого продук-

РПпаптасешіса! Оозаде Еоптв, 19(п ей., Маск Риб. ту для розведення водою чи іншою придатною

Со., Еазіоп, Ра. (1995). Для форм дозування, що основою перед вживанням. Такі рідкі препарати не розпиляються, типово використовують в'язкі, можуть бути одержані традиційними шляхами з напівтверді та тверді форми, що містять носій та такими фапмацевтично придатними добавками, як один чи більше наповнювачів, придатних для міс- суспендуючі агенти (наприклад, сироп сорбітолу, цевого застосування, що мають динамічну в'яз- похідні целюлози або гідрогенізовані їстівні жири); кість переважно, більшу за динамічну в'язкість емульгатори (наприклад, лецитін чи гуміарабік); води. Придатні склади включають, без обмеження, не-водні основи (наприклад, мигдальна олія, жирні розчини, суспензії, емульсії, креми, мазі, порошки, ефіри, етиловий спирт, або фракціоновані рослин- лініменти, мазі та подібне, які, за бажанням, сте- ні олії); та консерванти (наприклад, метил чи про- рилізують чи змішують з допоміжними агентами піл-п-гідроксибензоати або сорбінова кислота). (наприклад, консервантами, стабілізаторами, зво- Препарати можуть також містити буферні солі, ложувачами, буферами чи солями) для того, щоб ароматизатори, барвники та підсолоджувачі, якщо змінювати властивості, такі, як, наприклад, осмо- це доцільно. Препарати для перорального вве- тичний тиск. Інші придатні форми дозування для дення можуть бути придатним чином складені для місцевого застосування включають аерозольні повільного вивільнення, контрольованого вивіль- препарати, що розпилюються, де активний інгреді- нення або уповільненого уповільнення профілак- єнт, переважно, у комбінації з твердим чи рідким тичного або терапевтичного агента (профілактич- носієм, упакований у суміші зі стисненою леткою них чи терапевтичних агентів). речовиною (наприклад, газоподібним пропелен- Спосіб за даним винаходом може включати том, таким, як фреон) або у пульверизатор. Зво- легеневе введення, наприклад, шляхом викорис- ложувачі чи гігроскопічні речовини можуть також, тання інгалятору чи небулайзеру, композиції, до за бажанням, додаватись у фармацевтичні компо- складу якої входить аерозольний агент. Див., на- зиції та форми дозування. Приклади таких додат- приклад, Патенти США МоМо 6,019,968, 5,985,320, кових інгредієнтів добре відомі з рівня техніки. 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, 5,855,913,

Якщо спосіб за даним винаходом включає ін- 5,290,540 та 4,880,078; та публікації РСТ МоМео УМО траназальне введення композиції, то остання мо- 9219244, МО 97/32572, УМО 97/44013, МО же бути складена у формі аерозолю, спрею, тума- 98/31346, та М/О 99/66903, кожна з яких повністю ну чи у формі крапель. Зокрема, профілактичні включена до цієї заявки шляхом посилання. У кон- або терапевтичні агенти для застосування відпо- кретному втіленні, антитіло за даним винаходом, відно до даного винаходу можуть бути доставлені комбінаційну терапію, та/або композицію за даним стандартним чином у формі аерозольного спрею, винаходом вводять за допомогою технології для представленим герметичними упаковками або доставки ліків у легені АІкегте5 АЇКФ (АїКептев, небулайзером, з використанням придатного про- Іпс., Сатргідде, Мазв.). пеленту (наприклад, дихлордифторметану, три- Спосіб за даним винаходом може включати хлорфторметану, дихлортетрафторетанує, диок- введення композиції, складеної для парентераль- сиду вуглецю або іншого придатного газу). У ного введення шляхом ін'єкції (наприклад, болюс- випадку стисненого аерозолю, стандартні лікарські ної ін'єкції або безперервного вливання). Склади форми можуть бути визначені шляхом забезпе- для ін'єкцій можуть бути представлені у стандарт- чення клапану для доставки дозованої кількості. ній лікарській формі (наприклад, в ампулах чи в

Капсули та балончики (що складаються з, напри- мульти-дозуючих контейнерах) з додаванням кон- клад, желатину) для використання в інгаляторі чи серванту. Композиції можуть бути в таких формах, інсуффляторі, можуть мати у своєму складі суміш як суспензії, розчини чи емульсії в масляних чи порошків сполуки та придатної порошкоподібної водних основах, та можуть містити складові ком- основи, такої, як лактоза чи крохмаль. позиції, такі, як суспендуючі, стабілізуючі та/або

Якщо спосіб за даним винаходом включає пе- диспергуючі агенти. Альтернативно, активний інг- роральне введення, то композиції можуть бути редієнт може бути у формі порошку для розведен- складені у формі таблеток, капсул, саше, деІсарв, ня придатною основою (наприклад, стерильною розчинів, суспензій та інш. Таблетки чи капсули водою, вільною від пірогенів) перед вживанням. можуть бути одержані традиційними способами, з Способи за даним винаходом можуть додатково включати введення композиції, складеної як пре- протягом 5 годин, протягом З годин, або протягом парати для депонування. Такі склади тривалої дії 1 години після відновлення. В альтернативному можуть бути введені шляхом імплантування (на- втіленні, один чи більше профілактичних чи тера- приклад, підшкріно чи внутрішньомязово) або певтичних агентів або фармацевтичні композиції шляхом внутрішньом'язової ін'єкції. Таким чином, за даним винаходом постачають у рідкій формі у наприклад, композиції можуть бути складені з при- герметичному контейнері, зі вказанням кількості та датними полімерними чи гідрофобними матеріа- концентрації агента. Переважно, рідку форму ком- лами (наприклад, як емульсія у придатній олії) або позиції для введення постачають у герметичному іон-обмінні смоли, або як обмежено розчинні похі- контейнері, у кількості, щонайменше, 0,25 мг/мл, дні (наприклад, як обмежено розчинна сіль). більш переважно, щонайменше, 0,5 мг/мл, щонай-

Способи за даним винаходом охоплюють ком- менше, 1 мг/мл, щонайменше, 2,5 мг/мл, щонай- позиції, складені як нейтральні форми чи у формі менше, 5 мг/мл, щонайменше, 8 мг/мл, щонайме- солей. Фармацевтично придатні солі включають нше, 10 мг/мл, щонайменше, 15 мг/кг, такі, що були утворені з аніонами, такими, як аніо- щонайменше, 25 мг/мл, щонайменше, 50 мг/мл, ни, одержані з соляної, фосфорної, оцтової, щав- щонайменше, 75 мг/мл або, щонайменше, 100 левої, винної кислот та інш., та такі, що були утво- мг/мл. Рідку форму потрібно зберігати при темпе- рені з катіонами, такими, як катіони, одержані з ратурі від 27С до 8"С в оригінальному контейнері. натрію, калію, амонію, кальцію, гідроксидів заліза, Антитіла та частини антитіл за даним винахо- ізопропіламіну, тріетиламіну, 2-етиламіноетанолу, дом можуть бути включені до складу фармацевти- гістидину, прокаїну та інш. чної композиції, придатної для парентерального

Загалом, інгредієнти композицій постачають введення. Переважно, антитіло чи його частини або окремо або у суміші у стандартній лікарській одержуватимуть як розчин для ін'єкцій, що містить формі, наприклад, як сухий ліофілізований поро- 0,1-250 мг/мл антитіла. Розчин для ін'єкцій може шок або безводний концентрат у герметичному складатись з рідкої чи ліофілізованої стандартної контейнері, такому, як ампула чи пакет-саше, вка- форми у кременевій чи осмоленій віалі, ампулі або зуючи кількість активного агента. Якщо режим попередньо набраному шприці. Буфером може введення є вливання, то композиція може бути бути І-гістидин (1-50 мМ), оптимально 5-10 мМ, розподілена у судині для вливань, що містить сте- при рН 5,0-7,0 (оптимальне рН 6,0). Інші придатні рильну воду чи сольовий розчин фармацевтичного буфери включають, але не обмежується наведе- ступеню чистоти. Якщо режимом вливань є ін'єкції, ними, сукцинат натрію, цитрат натрію, фосфат то може бути забезпечена ампула стерильної води натрію чи фосфат кальцію. Хлорид натрію може для ін'єкцій, або сольовим розчином, таким чином, бути використаний для модифікації токсичності щоб інгредієнти могли бути змішані перед введен- розчину при концентрації 0-300 мМ (оптимально, ням. 150 мМ для рідкої стандартної лікарської форми).

Зокрема, винахід також забезпечує один чи бі- У ліофілізовану стандартну лікарську форму мо- льше профілактичних чи терапевтичних агентів, жуть бути включені кріопротектори, головним чи- або фармацевтичних агентів за даним винаходом, ном, 0-1095 сахарози (оптимально, 0,5-1,0905). Інші упаковані у герметичний контейнер, такий, як ам- придатні кріопротектори включають трегалозу та пула або саше, зі вказанням кількості агента. В лактозу. У ліофілізовану стандартну лікарську фо- одному втіленні, один чи більше профілактичних рму можуть бути наповнювачі, головним чином, 1- чи терапевтичних агентів, або фармацевтичні 1095 маннітолу (оптимально 2-495). Наповнювачі композиції за даним винаходом постачають як можуть бути використані як у рідкій, так і у ліофілі- сухий стерилізований ліофілізований порошок чи зованій формах дозування, головним чином, 1-50 безводний концентрат у герметичному контейнері, ММ С-метіоніну (оптимально, 5-10 мМ). Інші прида- що можуть бути відновлені (наприклад, водою чи тні наповнювачі включають гліцин, аргінін, та мо- сольовим розчином) до відповідної концентрації жуть бути включені як 0-0,0595 полісорбат-80 (оп- для введення суб'єкту. Переважно, один чи більше тимально 0,005-0,0195). Додаткові поверхнево- профілактичних чи терапевтичних агентів або фа- активні речовини включають, не обмежуючись рмацевтичні композиції за даним винаходом пос- наведеними, полісорбат 20 та поверхнево-активні тачають як сухий стерильний ліофілізований по- речовини ВКІ). Фармацевтична композиція, що рошок у герметичному контейнері у стандартній містить антитіла та частини антитіл за даним ви- лікарській формі, що становить, щонайменше, 5 находом, одержана як розчин для ін'єкцій для па- мг, більш переважно, щонайменше, 10 мг, щонай- рентерального введення, може додатково містити менше, 15 мг, щонайменше, 25 мг, щонайменше, агент, корисний як ад'ювант, такий, як агенти, що мг, щонайменше, 45 мг, щонайменше, 50 мг, використовують для збільшення поглинання, або щонайменше, 75 мг, або щонайменше, 100 мг. дисперсії терапевтичного білка (наприклад, анти-

Ліофілізовані профілактичні чи терапевтичні аген- тіло). Особливо корисним ад'ювантом є гіалуроні- ти або фармацевтичні композиції за даним вина- даза, така, як НуїепехФ (рекомбінантна людська ходом потрібно зберігати при температурі від 2"С ап гіалуронідаза). Додавання гіалуронідази до ро- до 8"С в оригінальних контейнерах, та профілак- зчину для ін'єкцій покращує біонакопичення люди- тичні чи терапевтичні агенти або фармацевтичні ни після парентерального введення, особливо композиції за даним винаходом мають бути вве- підшкірного введення. Це також дозволяє вводити дені протягом 1 тижня, переважно, протягом 5 більші об'єми в одному місці введення (тобто, бі- днів, протягом 72 годин, протягом 48 годин, протя- льші за 1 мл), з меншим болем та дискомфортом, гом 24 годин, протягом 12 годин, протягом 6 годин, та мінімальною інцидентністю місцевих реакцій на введення (див. УМО2004078140, 052006104968, сульовані системи доставки. Можуть бути викори- що включена до цієї заявки шляхом посилання). стані біосумісні полімери, що біорозпадаються,

Композиції за даним винаходом можуть бути у такі, як етиленвініл ацетат, поліангідриди, полігіл- різних формах. Ці форми включають, наприклад, колева кислота, колаген, поліортоефіри та полімо- рідкі, напівтверді та тверді стандартні лікарські лочна кислота. Багато способів одержання таких форми, такі, як рідкі розчини (наприклад, розчини складів запатентовано чи загальновідомо з рівня для ін'єкцій та вливань), дисперсії чи суспензії, техніки. Див., наприклад, бивіаіїпейа апа СопігоїІєй таблетки, пігулки, порошки, ліпосоми та супозито- ВеІєазе Огпид Оеєїїмегу бувіетв, 9.8. Нобіпзоп, еєд., рії. Переважно форма залежить від запланованого Магсеї! Оеккег, Іпс., Мем Могк, 1978. режиму введення та терапевтичного застосування. У певних втіленнях, антитіло або його частина

Типові переважні композиції знаходяться у формі за даним винаходом можуть бути введені парен- розчинів для ін'єкцій або вливань, такі, як компо- терально, наприклад, з інертним розріджувачем чи зиції, подібні до композицій, що використовують їстівний носій, що засвоюється. Сполука (та, за для пасивної імунізації людей іншими антитілами. бажанням, інші інгредієнти) можуть також бути

Переважним режимом введення є парентеральний включені у желатинову капсулу з твердим чи м'я- (наприклад, внутрішньовенний, підшкірний, інтра- ким покриттям, спресовані у таблетку або включе- перітонеальний, внутрішньом'язовий). У переваж- ні безпосередньо у раціон харчування суб'єкта. ному втіленні, антитіло вводять шляхом внутріш- Для перорального терапевтичного застосування, ньовенного вливання або ін'єкції В іншому сполуки можуть бути включені з наповнювачами та переважному втіленні, антитіло вводять шляхом використані у формі таблеток для ковтання, таб- внутрішньом'язової чи підшкірної ін'єкції. леток для розсмоктування, пастилок, капсул, елік-

Терапевтичні композиції типово мають бути сирів, суспензій, сиропів, облаток, та інш. Для вве- стерильними за умов виробництва та зберігання. дення сполуки за даним винаходом іншим чином,

Композиція може бути складена як розчин, мікро- ніж паретнеральне введення, може бути необхід- емульсія, дисперсія, ліпосома чи інша впорядко- ним покриття сполуки, або сумісне введення спо- вана структура, придатна для високої концентрації луки з матеріалом, що попереджає її інактивацію. ліків. Стерильні розчини для ін'єкцій можуть бути Допоміжні активні сполуки також можуть бути одержані шляхом включення активної сполуки включені у композиції. У певних втіленнях, антиті- (тобто, антитіла чи його частини) у необхідній кіль- ло або його частину за даним винаходом сполу- кості у відповідному розчиннику з одним чи комбі- чають у складі композиції з, та/або введені разом нацією інгредієнтів, перелічених вище, у разі необ- із одним чи більше терапевтичним агентом, корис- хідності, Кк! наступною стерилізацією ним для лікування розладів, в яких активність 1-12 фільтруванням. Загалом, дисперсії одержують є шкідливою. Наприклад, анти-піЇ-12 антитіло або шляхом включення активної сполуки у стерильний його частина за даним винаходом можуть бути носій, що містить основне дисперсійне середови- сполучені у складі композиції 3, та/або введені ще, та необхідні інші інгредієнти з тих, що перелі- разом із одним чи більше додаткових антитіл, що чені вище. У випадку стерильних, ліофілізованих зв'язують інші мішені (наприклад антитіла, що зв'- порошків для одержання стерильних розчинів для язують інші цитокіни, або що зв'язують молекули ін'єкцій, переважними способами одержання є су- клітинної поверхні). Додатково, одне чи більше шіння у вакуумі та сушіння розпиленням, що приз- антитіл за даним винаходом можуть бути викорис- водять до утворення порошку активного інгредієн- тані у комбінації з двома чи більше вищезазначе- та плюс будь-який додатковий бажаний інгредієнт ними терапевтичними агентами. Такі комбінаційні з попередньо стерільно-відфільтрованого його терапії можуть корисно використовувати більш розчину. Належну текучість розчину можна збері- низькі дози введених терапевтичних агентів, таким гати, наприклад, шляхом використання такого пок- чином уникаючи можливої токсичності чи усклад- риття, як лецитін, шляхом зберігання необхідного нень, пов'язаних із різними мототерапіями. розміру частинок у дисперсії та шляхом викорис- У певних втіленнях, до ІЇ/-12 або його фраг- тання поверхнево-активних речовин. Пролонгова- мент пов'язані із носієм, що подовжує час напів- не поглинання композицій для ін'єкцій може бути життя, відомий з рівня техніки. Такі носії включа- досягнуто шляхом включення у композицію агента, ють, не обмежуючись наведеними, Ес домен, що уповільнює поглинання, наприклад, моностеа- поліетиленгліколь та декстран. Такі носії описані, ратних солей та желатину. наприклад, у патентній заявці США Мо 09/428,082

Антитіла та частини антитіл за даним винахо- та опубліковані у заявці РСТ Мо МУО 99/25044, що дом можуть бути введені різними способами, ві- включені до цієї заявки для усіх цілей. домими з рівня техніки, хоча для багатьох терапе- У конкретному втіленні, нуклеїновокислотні втичних застосувань, переважним послідовності, що містять нуклеотидні послідовно- маршрутом/режимом введення є підшкірна ін'єк- сті, що кодують антитіло за даним винаходом або ція, внутрішньовенна ін'єкція чи вливання. Як буде інший профілактичний чи терапевтичний агент за оцінено фахівцем у цій галузі, маршрут та/або ре- даним винаходом вводять для лікування, профіла- жим введення будуть відрізнятись в залежності від ктики, контролю або покращення розладу або од- бажаних результатів. У певних втіленнях, активна ного чи більше його симптомів, шляхом генної те- сполука може бути одержана з носієм, що захищає рапії. Генна терапія відноситься до терапії, яку її від швидкого вивільнення, наприклад, у формі проводять шляхом введення суб'єкту нуклеїнової складу з контрольованим вивільненням, включаю- кислоти, що була експресована чи може бути екс- чи імплантати, черезшкірні пластири та мікрокап- пресована. У цьому втіленні даного винаходу, нук-

леїнові кислоти продукують їх кодоване антитіло хворобу, хронічний кандидоз шкіри та слизових або профілактичний чи терапевтичний агент за оболонок, гігантоклітинний артеріїт, первинний даним винаходом, що опосередковує профілакти- склерозуючий гепатит, кріптогенний аутоімунний чний чи терапевтичний ефект. гепатит, синдром набутого імунодефіциту, хворо-

Будь-який зі способів генної терапії, відомий з би, пов'язані із синдромом набутого імунодефіци- рівня техніки, може бути використаний відповідно ту, гепатит В, гепатит С, загальний змінний імуно- до даного винаходу. Загальні огляди способів ген- дефіцит(загальну змінну гіпогамаглобулінемію), ної терапії описані у соїазрієї! єї аї., 1993, Сііпісаї ділатаційну кардіоміопатію, безплідність жінок,

РПпагтасу 12:488-505; УМи апа УМи, 1991, Віотштегару порушення овуляції, передчасне порушення ову- 3:87-95; ТоІвіо5Ппем, 1993, Апп. Неу. РНаптасої. ляції, легеневий фіброз, кріптогенний фіброзуючий

Тохісо!ї. 32:573-596; МиїйПдап, Зсіеєпсе 260:926- 932 альвеоліт, пост-запальну інтерстеціальну легеневу (1993); та Могдап апа Апаегзоп, 1993, Апп. Неу. хворобу, інтерстеціальний пневмонит, інтерстеціа-

Віоспет. 62:191-217; Мау, 1993, ТІВТЕСН льну легеневу хворобу, пов'язану із хворобою 11(5):155-215. Способи зазвичай відомих з рівня з'єднувальної тканини, хворобу легенів, пов'язану техніки рекомбінантних ДНК технологій, що можуть із змішаною хворобою з'єднувальної тканини, інте- бути використані, описані у А!,Кзибеї еї аї., (єадв.), рстеціальну легеневу хворобу, пов'язану із систе-

Сшитепі Ргоїосоїє іп МоїІесшаг Віоіоду, допп. УМієу мною склеродермією, інтерстеціальну легеневу апа 5опз5, МУ (1993); та Кгіедіег, зепе Тгапвтег апа хворобу, пов'язану із ревматоїдним артритом, хво-

Ехргезвіоп, А Іарогаїгу Мапиа!, 5іосКоп Ргевв, робу легенів, пов'язану із системним червоним

МУ (1990). Детальний опис способів генної терапії вовчаком, хворобу легенів, пов'язану із дермато- наведено у О520050042664 А1, що включена до міозитом/поліміозитом, хворобу легенів, пов'язану цієї заявки шляхом посилання. із хворобою Шегрена, хворобу легенів, пов'язану із

Інтерлейкін 12 відіграє критичну роль у пато- анкілозуючим спондилоартритом, васкулітну ди- логії, пов'язаній із багатою кількістю хвороб, що фузну легеневу хворобу, хворобу легенів, пов'яза- задіють імунні та запальні елементи. Ці хвороби ну із гемосидерозом, спричинену ліками інтерсте- включають, не обмежуючись наведеними, ревма- ціальну легеневу хворобу, фіброз, радіаційний тоїдний артрит, остеоартрит, ювенільний хроніч- фіброз, облітеруючий бронхіт, хронічну ейзенофі- ний артрит, септичний артрит, артрит Лайма, псо- льну пневмонію, лимфоцитарну інфільтративну ріатичний артрит, реактивний артрит, легеневу хворобу, постінфекційну інтерстеціальну спонділоартропатію, системний червоний вовчак, легеневу хворобу, подагричний артрит, аутоіїмун- хворобу Крона, виразковий коліт, запальну хворо- ний гепатит, аутоїмунний гепатит типу 1 (класич- бу кишечнику, інсулінозалежний цукровий діабет, ний аутоїмунний або люпоїдний гепатит), аутоіму- тиреоідит, астму, алергійні хвороби, псоріаз, дер- нний гепатит типу 2 (анти-ЇКМ позитивний матичну склеродерму, хворобу "трансплантат про- гепатит), аутоїмунну опосередковану гіпоглікемію, ти хазяїна", відторгнення трансплантату органами, резистентність до інсуліну типу В з акантокерато- гостру чи хронічну імунну хворобу пов'язану із дермією, гіпопаратіреоз, гостру імунопатологію, трансплантацією органів, саркоїдоз, атеросклероз, пов'язану із трансплантацією органів, хронічну синдром дисемінованої внутрішньосудинної коагу- імунопатологію, пов'язану із трансплантацією ор- ляції, хворобу Кавасакі, хворобу Грейва, нефроти- ганів, остеоартроз, первинний склерозуючий хола- чний синдром, синдром хронічної втоми, грануло- нгіт, псоріаз типу 1, псоріаз типу 2, ідіопатичну матоз Вегенера, пурпуру Шенляйн-Геноха, лейкопенію, аутоїмунну нейтропенію, ниркові хво- мікроскопічний васкуліт нирок, хронічний гострий роби МОБ, гломерулонефрити, мікроскопічний гепатит, увеїт, септичний шок, токсичний шок, сеп- васкуліт нирок, хворобу Лайма, дискоїдний черво- тичний синдром, кахексію, інфекційні хвороби, ін- ний вовчак, ідіопатичне безпліддя чоловіків, або вазійні хвороби, синдром набутого імунодефіциту, МО5, аутоїмунність сперми, розсіяний склероз (всі гострий поперечний мієліт, хорею Хантінгтона, підтипи), симпатичну офтальмію, легеневу гіпер- хворобу Паркінсона, хворобу Альцгеймера, ін- тензію спричинену хворобою з'єднувальної ткани- сульт, біліарний первинний цироз печінки, гемолі- ни, синдром Гудспатчера, легеневе проявлення тичну анемію, злоякісні пухлини, серцеву недоста- недозного поліартериту, ревматичну атаку, анкі- тність, інфаркт міокарду, хворобу Еддісона, лозуючий спондиліт, синдром Стілла, склеродер- спорадичні хвороби, полігландулярний дефіцит мію, синдром Шегрена, синдром Такаясу/артеріїт, типу | та полігландулярний дефіцит типу ІІ, синд- аутоїмунну тромбоцитопенію, ідіопатичну тромбо- ром Шмідта, синдром респіраторного дистресу цитопенію, аутоїмунну хворобу щитовидної залози, дорослих (гострий), алопецію, кругову алопецію, гіпертиреоїдоз, зобний аутоїмунний гіпотиреоз серонегативну артропатію, артропатію, хворобу (тиреоїдит Хашимото), атрофічний аутоіїмунний

Ройтера, рзогіайс артропатію, виразкову артропа- гіпотиреоз, первинну миксидему, факогенний уве- тію, ентеропатичний синовіт, хламідіоз, пов'язану їт, первинний васкуліт, гостре захворювання печін- із єрсинією та сальмонелою артропатію, спонділо- ки вітиліго, хронічні хвороби печінки, алкогольний артропатію, атероматозну хворобу/артеріосклероз, цироз, алкогольне ураження печінки, холестаз, атопичну алергію, аутоїмунну буллезну хворобу, ідіосинкратичну хворобу печінки, медикаментозний вульгарний пемфігус, езксфоліативну пухирчатку, гепатит, неалкогольний стеатогепатит, алергію та пемфігоїд, лінеарний ІДА дерматоз, аутоіїмунну астму, інфекції стрептококів групи В (СВ5), психіч- гемолітичну анемію, Кумбс-позитивну гемолітичну ні розлади (наприклад, депресію та шизофренію), анемію, набуту злоякісну анемію, ювенільну злоя- хвороби, опосередковані хеллерами Тп2 типу та кісну анемію, міалгічний енцефаліт/сландську ТИ1 типу, гострий та хронічний біль (різні типи бо-

лю), та такі види раку, як рак легенів, молочної лейкоз ворсистих клітин, хворобу Галленвордена- залози, шлунку, міхуру, товстої кишки, підшлунко- Шпатца, тиреоїдит Хашимото, сінну лихоманку, вої залози, яєчників, простати та прямої кишки та відторгнення серцевих трансплантатів, гемохро- гематопоетичні злоякісні пухлини (лейкемія та лі- матоз, гемодіаліз, гемолітичний уремічний синд- мфома), абеталіпопротеінемію, акроціаноз, гострі ром/тромболітичну тромбоцитопенічну пурпуру, та хронічні паразитарні та інфекційні процеси, гос- геморагію, гепатит (А), аритмії пучка Гіса, ВІЛ ін- тру лейкемію, гостру лимфобластну лейкемію фекцію/ВІЛ невропатію, хворобу Ходжкіна, гіперкі- (АГ), гостру мієлоїдну лейкемію (АМУ), гостру або нетичні розлади рухів, зверхчутливі реакції, гіпер- хронічну бактеріальну інфекцію, гострий панкреа- чутливу пневмонію, підвищений тиск, гіпокінетичні тит, гостру ниркову недостатність, аденокарцино- розлади рухів, оцінку гіпоталамічно-гіпофізарної та ми, що передається повітряним шляхом ектопічну надниркової системи, ідіопатичну хворобу Еддісо- систолу, комплексну СНІД-деменцію, алкогольний на, ідіопатичну риїтопагу фіброз, цитотоксичність, гепатит, алергійний кон'юнктивит, алергійний кон- опосередковану антитілами, астенію, дитячу спі- тактний дерматит, алергійний риніт, відторгнення нальну м'язову атрофію, запалення аорти, інфлу- алло трансплантату, альфа-І-антитрипсінову не- енцу, вплив іонізуючого випромінювання, іридоци- достатність, боковий амфіотрофічний склероз, кліт/'увеїт/неврит зорового нерву, ішемічно- анемію, стенокардію, клітинну дистрофію перед- реперфузійне ураження ішемічний інсульт, ювені- нього рогу спинного мозку, анти саз терапію, ан- льний ревматоїдний артрит, ювенільну спінальну тифосфоліпідний синдром, гіперчутливість до ан- м'язову атрофію, саркому Капоші, відторгнення тирецепторів, аортальні та периферійні ниркових трансплантатів, легіонеллу, лейшманіоз, аневризми, розшарування аорти, підвищений ар- проказу, ураження кортикоспінальної системи, теріальний тиск, артеріосклероз, артеріовенозну ліпідему, відторгнення трансплантатів печінки, фістулу, атаксію, фібриляцію передсердь (стабі- лімфодему, малярію, злоякісну лимфому, злоякіс- льну або конвульсивну), тремтіння передсердь, ний гістіоцитоз, злоякісну меланому, менінгіт, ме- атріовентрикулярну блокаду, В клітинну лімфому, нінгококксемію, метаболічну/ідіопатичну, мігрені, відторгнення кісних трансплантатів, відторгнення мітохондріальний мультисистемний розлад, змі- трансплантатів кісного мозку, блокаду пучка Гіса, шану хворобу з'єднувальної тканини, моноклона- лімфому Буркітта, опіки, серцеві аритмії, синдром льну гамапатію, множинну мієлому, множинні сис- «приголомшеного» серця, серцеві пухлини, карді- темні дегенерації (Менцеля Дежеріна-Томаса оміопатію, запальну реакцію на серцево- Шай-Драгерата Мачадо-Джозефа), міастенію гра- легеневий шунт, відторгнення хрящових транс- віс, тусобасієгйт амійт іпігасеїШіаге, туберкульо- плантатів, церебеллярні кортикальні дегенерації, зну бацилу, мієлодиспластичний синдром, інфаркт церебеллярні розлади, хаотичну або мультифока- міокарду, ішемії міокарду, носоглоткову карцино- льну передсерцеву тахікардію, розлади, викликані му, хронічну легеневу хворобу новонароджених, хіміотерапією хронічну мієлоцитарну лейкемію нефрит, нефроз, нейродегенеративні хвороби, (СМ), хронічний алкоголізм, хронічні запальні нейрогенні | м'язові атрофії, нейтропенічну лихо- патології, хронічну лимфоцитарну лейкемію (СГ), манку, не-ходжкінівську лімфому, оклюзію абдомі- хронічну обструктивну легеневу хворобу (СОРО), нальної аортиту її відгалужень, оклюзивні артеріа- хронічну саліцилатну інтоксикацію, колоректальну льні хвороби, оКІЗ терапію, орхіт/епідідімітіс, карциному, когнестивну серцеву недостатність, орхіт/процедури вазектомії, органомегалію, остео- кон'юнктивит, контактний дерматит, легеневе сер- пороз, відторгнення трансплантатів підшлункової це, хворобу коронарної артерії, хворобу Крой- залози, карциному підшлункової залози, паранео- цфельда-Якоба, культурально-негативний сепсис, пластичний синдром/гіперкальцемію злоякісних кистозний фіброз, розлади, пов'язані із цитокіно- пухлин, відторгнення трансплантату паращитовід- вою терапією, деменцію боксерів, демієлінізуючі ної залози, запалення тазових органів, хронічний хвороби, геморагичну лихоманку денге, дерматит, алергійний риніт, перикардіальну хворобу, пери- дерматологичні стани, діабет, цукровий діабет, ферійну атеросклеротичну хворобу, периферійні діабетичну атеросклеротичну хворобу, хворобу судинні розлади, перитоніт, злоякісну анемію, пне- дифузних тілець Леві, ділатаційну когнестивну вмоцистну пневмонію, пневмонію, синдром кардіоміопатію, розлади підкоркових вузлів, синд- РОЕМЗ5 (полінейропатію, органомегалію, ендокри- ром Дауна у середньому віці, розлади рухів, що нопатію, моноклональну гамапатію, апа синдром викликані ліками, які блокують допамінові рецеп- змін шкіри), пост-перфузійний синдром, посткар- тори центральної нервової системи, чутливість до діотомний синдром, прееклампсії, синдром про- ліків, екзему, енцефаломієліт, ендокардит, ендок- гресуючого супрануклеолярного паралічу, первин- ринопатію, епіглоттит, вірусну інфекцію Епштейна- ну легеневу гіпертензію, рентгенотерапію,

Барр, обмежений хворобливий набряк шкіри, екст- феномен та хворобу Рейнауда, хворобу Рейнауда, рапірамидні та мозочкові розлади, сімейний гема- хворобу Рефсума, регулярну тахікардію з вузьки- тофагоцитний лімфогістіоцитоз, відторгнення ім- ми комплексами ОМК5, реноваскулярну гіпертензію, плантатів ембріонального тимусу, атаксію реперфузійне ураження, рестриктивну кардіоміо-

Фрідріхса, функціональні периферійні артеріальні патію, саркоми, склеродерму, сенільну хорею, се- розлади, грибковий сепсис, газову гангрену, вира- нільну деменцію типу тілець Леві, серонегативні зку шлунку, гломерулонефрит, відторгнення тран- артропатії, шок, анемію серповидних клітин, відто- сплантату будь-якого органу чи тканини грам- ргнення алотрансплантату шкірою, синдром змін негативний сепсис, грам-позитивний сепсис, гра- шкіри, відторгнення трансплантатів тонкої кишки, нуломи, викликані міжклітинними організмами, тверді пухлини, специфічні аритмії, спінальну ата-

ксію, спіноцеребелярні дегенерації сітківки, стреп- бінація є такою, що утворена композиція може тококковий міозит, структурні ураження мозочку, виконувати заплановану для неї функцію. підгострий склерозуючий паненцефаліт, сінкопе, Зв'язуючі білки, описані у цій заявці, можуть сифіліс серцево-судинної системи, загальну ана- бути застосовані у комбінації з додатковими тера- філактичну реакцію, синдром системної запальної певтичними агентами, такими, як, анти-ревматичні реакції, ювенільний ревматоїдний артрит із систе- лікию, що модифікують протікання хвороби мним початком, Т-клітинну або РАВ АГ, телеангі- (ОМАКО) або не-стероїдні протизапальні ліки ектазію, облітеруючий тромбоангіт, тромбоцито- (МАО), або стероїд, або будь-яка їх комбінація. пенію, токсичність, трансплантати, Переважними прикладами ОМАКО є гідроксихло- травму/геморагію, гіперчутливі реакції ПІ типу, гі- рокін, лефлуномід, метотрексат, парентеральне перчутливі реакції ІМ типу, нестабільну стенокар- золото, пероральне золото та сульфасалазін. Пе- дію, уремію, уросепсис, кропивницю, порок серця, реважні приклади нестероїдних протизапальних варикозні вени, васкуліт, венозні хвороби, веноз- ліків, що також мають назву МЗАІЮО5, включають ний тромбоз, фібриляцію шлуночків, вірусні та ліки, подібні до ібупрофену. Іншими переважними грибкові інфекції, вітальний енцефаліт/асептичний комбінаціями є кортикостероїди, включаючи пред- менінгіт, вітальний гемофагоцитний синдром, син- нізолон; добре відомі побічні ефекти вживання дром Верніке-Корсакофф, хворобу Вільсона, від- стероїдів можуть бути зменшені чи навіть знищені торгнення ксенотрансплантатів будь-яким органом шляхом зниження дози стероїдів, необхідною для чи тканиною, (див. Регій єї а. Публікація РСТ Ме лікування пацієнтів, у комбінації з анти-І--12 анти-

МО2002097048 Аг, І еопага еї аї., Публікація РСТ тілами за даним винаходом. Не обмежуючі прик-

Мо М/О9524918 А1, та Заїгейа еї аї., Публікація РСТ лади терапевтичних агентів для лікування ревма-

Мо МУО00/56772 А1). тоїдного артриту, з яким можуть бути сполучені

Антитіла та частини антитіл за даним винахо- антитіло, або частина антитіла за даним винахо- дом можуть бути застосовані для лікування людей, дом, включають такі: протизапальні ліки, що приг- що страждають від аутоїмунних хвороб, зокрема, нічують активність цитокінів (СЗАЇІО); антитіла до пов'язаних із запаленням, включаючи анкілозую- або антагоністи інших людських цитокінів або фак- чий спондиліт, алергію, аутоімунний діабет, аутої- торів росту, наприклад, ТМЕ, СТ, 1С-1, 1-2, 1-3, І - мунний увеїт. Переважно, антитіла за даним вина- 4, 1-5, 1-6, 11 -7, 11 -8, 11-15, 11-16, 11-18, 11-21, 1 - ходом або їх антиген-зв'язуючі частини 23, інтерферони, ЕМАР-ЇЇ, СМ-С5Е, РОЕ та РОСБЕ. застосовують для лікування ревматоїдного артри- Антитіла за даним винаходом, або їх антиген- ту, хвороби Крона, розсіяного склерозу, інсуліно- зв'язуючі частини, можуть бути сполучені з антиті- залежного цукрового діабету та псоріазу. лами до молекул клітинної поверхні, такими, як

Антитіло або частина антитіла за даним вина- сСр2г, СОо3, Сра4, Ср8, Ср25, СОр2гв8в, СбОз30, С0ра40, ходом також можуть бути введені з одним чи бі- сра5, с069, сО80 (8в7.1), с086 (87.2), С090, льше додатковими терапевтичними агентами, ко- СТІ А або інші ліганди, включаючи СО154 (др39 рисними для лікування аутоїмунних та запальних або СО401). хвороб. Переважні комбінації терапевтичних агентів

Антитіла за даним винаходом, або їх антиген- можуть бути задіяні у різних моментах аутоімун- зв'язуючі частини можуть бути використані самі по ному та наступному запальному каскаді; переважні собі або у комбінації для лікування таких хвороб. приклади включають ТМЕ антагоністи, такі, як роз-

Має бути зрозумілим, що антитіла за даним вина- чинні ро55 або р75 ТМЕ рецептори, їх похідні, ходом або їх антиген-зв'язуючі частини можуть (р75ТМЕАТЯсС; 0 (Епргем) або р55ТМЕРтдо бути використані самі по собі або у комбінації з (Сепегсер), химерні, олюднені чи людські ТМЕ додатковим агентом, наприклад, терапевтичним антитіла чи їх фрагменти, включаючи інфліксімаб агентом, вказаний додатковий агент відбирають (Ветісадет, доппбоп апа доппзоп; описаний у фахівці для запланованих цілей. Наприклад, дода- патенті США Мо 5,656,272, що включений до цієї тковий агент може бути терапевтичним агентом, заявки шляхом посилання), СОР571 (олюднене визнаним в рівні техніки як корисний для лікування моноклональне анти-ТМЕ-альфа Ідс4 антитіло), хвороби чи стану, які лікує антитіло за даним ви- СОР 870 (фрагмент олюдненого моноклонального находом. Додатковий агент також може бути аген- анти-ТМЕ-альфа антитіла), та анти-ТМЕ адр том, що роблять позитивний внесок у терапевтич- (Реріесп), СМТО 148 (голімумаб; Медагех апа ну композицію, наприклад, агентом, що впливає на Сепіосог, див. УМО 02/12502), та адалімумаб в'язкість композиції. (НитігаФ Арроїй Іарогаїогієх, людське анти-ТМЕ

Додатково має бути зрозуміло, що комбінації, ТАБ, описане у патенті США 6,090,382 як О2ЕТ7). які призначені для включення у даний винахід, є Додаткові ТМЕ антитіла, що можуть бути викорис- комбінаціями, корисними для запланованих цілей. тані у винаході, описані у патентах США МоеМе

Агенти, наведені нижче, є ілюстративними для 6,593,458; 6,498,237; 6,451,983; та 6,448,380, кож- таких цілей та не призначені для того, щоб бути на з яких включена до цієї заявки шляхом поси- обмеженими. Комбінаціями, що є частиною даного лання. Інші комбінації, що включають інгібітори винаходу, можуть бути антитіла за даним винахо- ТМЕо; конвертуючого фермента (ТАСЕ); 1І--1 інгібі- дом та, щонайменше, один додатковий агент, виб- тори (інгібітори Інтерлейкін-1-конвертуючого фер- раний з наведених нижче. Комбінація може також мента, ІІ-1ВА та інш.), можуть бути ефективними з включати більш, ніж один додатковий агент, на- тих же причин. Інші переважні комбінації включа- приклад, два чи три додаткових агенти, якщо ком- ють Інтерлейкін 11. Ще одна переважна комбіна- ція, що відіграє важливу роль в аутоіїмунному відк-

лику, що може функціонувати паралельно, в зале- включають метотрексат або лефлуномід та, у ви- жності від або разом із функцією 1--12; особливо падку помірного чи тяжкого ревматоїдного артри- переважними є 1-18 антагоністи, що включають ту, циклоспорін.

І/-18 антитіла чи розчинні І--18 рецептори, або ІЇІ-- Необмежуючі додаткові агенти, що також мо- 18 зв'язуючі білки. Було показано, що 1І--12 та 1-18 жуть бути використані у комбінації з 1-12 або 1-23 мають функції, що перекриваються, але такі, що антитілом, або його антиген-зв'язуючою частиною, відрізняються, та комбінації антагоністів до них для лікування ревматоїдного артриту включають, обох будуть найбільш ефективними. Ще однією не обмежуючись наведеними, такі агенти: нестеро- переважною комбінацією є невиснажені анти-СО4 їдні протизапальні ліки (МЗА!0); протизапальні інгібітори. Ще одні переважні комбінації включають ліки, що пригнічують активність цитокінів (СЗА!ІЮ); антагоністів ко-стимулюючого маршруту СО80 С ОР-571/ВАХ-10-3356 (олюднене анти-ТМЕсо ан- (87.1) або СО086 (87.2), включаючи антитіла, роз- титіло; СеШесп/Вауег); сАг/Інфліксімаб (химерне чинні рецептори або антагоністичні ліганди. анти-ТМЕос антитіло; Сепіосог); 75 КкатМчеЕв-

Антитіла за даним винаходом, або їх антиген- ІдС/етанерцепт (75 КО ТМЕ рецептор-ДО злитий зв'язуючі частини можуть також бути сполучені із білок; Іммунекс; див., наприклад, Агйпгйі5 та агентами, такими, як метотрексат, 6-МР, азатіопрі- Впешитаїйівт (1994) Мої. 37, 5295; у. Іпмеві. Мед. ну сульфасалазін, месалазін, олсалазіну хлоро- (1996) Мої. 44, 235А); 55 Катме-ідс (55 КО ТМЕ хін/гідроксихлорокін, пенцилламін, ауротіомалат рецептор-ІдС злитий білок; Нойтапп-І аВоспе); (внутрішньомязово чи перорально), азатіопрін, ІОЕС-СЕ9.1/58 210396 (невиснажене приматизо- кохіцин, кортикостероїди (перорально, шляхом ване анти-СО4 антитіло; ІОЕС/ЗтійпКіїпе; див., інгаляції чи ін'єкції), агоністу бета-2 адренорецеп- наприклад, Агілгій5 та Впеитаїййєт (1995) Мої. 38, тора (сальбутамол, тербуталін, салметерал), ксан- 5185); АВ 486-ІІ -2 та/або САВ 389-1Ї -2 (ІІ -2 злиті тіни (теофілін, амінфіллін), кромоглікат, недокро- білки; Сераген; див., наприклад, Агійгйй5 та міл, кетотіфен, іпратропій та оксітропій, Впеитаїівт (1993) Мої. 36, 1223); анти-Тас (олюд- циклоспорін, ЕК5О6, рапаміцин, мікофенолят мо- нене-ІІ-2Ве; Ргоївїп Оєзідп І арв/Воспе); 1І-4 (про- фетілу, лефлуномід, МЗАЮ, наприклад, ібупро- тизапальний цитокін; ОМАХ/5спегіпа); 1-10 (5СН фен, кортикостероїди, такі, як преднізолон, інгібі- 52000; рекомбінантний 1-10, протизапальний ци- тори фосфодіестерази, агоністи аденозину, токін; ОМАХ/5спегіпа); 1--4; 11-10 та/або 1-4 агоні- протитромботичні засоби, додаткові інгібітори, сти (наприклад, агоністичні антитіла); 1--1ВА (ре- адренергічні агенти, агенти, що перешкоджають цептори 1-1 антагоністи; Бупегдеп/Атдеп); передачі сигналів прозапальних цитокінів, таких, ананікру (Кіпегеєв/Атдеп); ТМЕ-рр/5-ТМЕ (розчин- як ТМЕс: або 1-1 (наприклад, ІКАК, МІК, ІКК, рзв ний ТМЕ зв'язуючий білок; див., наприклад, Ап або МАР інгібітори кінази), інгібітори І--1Д конвер- та ЕПептаїйзт (1996) Мої. 39, Мо. 9 (додаток), туючого фермента, інгібітори ТМЕРо конветруючого 5284; Атег. 9. РНПувіої. - Неапй апа Сігсшайюгу фермента (ТАСЕ,), інгібітори Т-клітинної сигналіза- РНувіоюду (1995) МоІ. 268, рр. 37-42); НУ73401 ції, такі, як інгібітори кінази, інгібітори металопро- (інгібітор фосфодіестерази Типу ІМ; див., напри- теїнази, сульфасалазін, азатіопрін, б- клад, Агіпгйі5 та КПпештаїйівзт (1996) Мої. 39, Мо. 9 меркаптопурини, інгібітори ангіотензин-І1- (додаток), 5282); МК-966 (інгібітор СОХ-2; див., перетворюючого фермента, розчинні рецептори наприклад, Агіпгйй5 та КПпеитаїйізт (1996) Мої. 39, цитокінів та їх похідних (наприклад, розчинні роб Мо. 9 (додаток), 581); ілопрост (див., наприклад, або р75 ТМЕ рецептори та похідні р/5ТМЕРІДО Аппйі5 та Епештаїйізт (1996) Мої. 39, Мо. 9 (дода- (Епргеїм та ро5ТМЕКІдо (Гепегсерю), 51--1 ВІ, 51ІІ- ток), 582); метотрексат; талідомід (див., напри- 1ВІЇ, 51/-6К), протизапальні цитокіни (наприклад, клад, Агіпгйі5 та КПпештаїйівзт (1996) Мої. 39, Мо. 9 1-4, 1-10, 11-11, 11-13 апа ТОЕр), целесоксіб, фо- (додаток), 5282) та ліки, зв'язані із трамадолом лієва кислота, гідроксихлорокін сульфат, рофецо- (наприклад, СеІдеп); лефлуномід (протизапальний ксіб, етанерцепт, інфліксімаб, напроксен, валь- засіб та цитокінів; див., наприклад, Агіпгйі5 та децоксіб, сульфасалазін, метилпреднізолон, Апейтаїівт (1996) Мої. 39, Мо. 9 (додаток), 5131; мелоксікам, метилпреднізолону ацетат, натрію Іпйаттайоп Незеагсіп (1996) Мої. 45, рр. 103-107); ауротіомалат, аспірін, тріамцинолону ацетонід, ігапехатіс асій (інгібітор активації плазміногенів; пропоксифену напсілат/(апап, фолат, набуметон, див., наприклад, Агіпгїі5 та Кпеитаїієт (1996) Мої. діклофенак, піроксикам, етодолак, натрію дикло- 39, Мо. 9 (додаток), 5284); Т-614 (інгібітор цитокі- фенак, оксапрозін, оксикодон Ппсі, гідрокодон бітар- нів; див., наприклад, Аппгйй5 та Кпешитаїізт (1996) трат/апап, натрію диклофенак/мізопростол, фен- Мої. 39, Мо. 9 (додаток), 5282); простагландін Е1 таніл, ананікру, людський рекомбінант, трамадол (див., наприклад, Агіпгій5 та КПештаїййвт (1996) псІ, сальзалат, суліндак, ціанокобала- Мої. 39, Мо. 9 (додаток), 5282); тенідап (нестероїд- мінла/піридоксин, ацетамінофен, натрію алендро- ні протизапальні ліки; див., наприклад, Агпійпгійй5 та нат, преднізолон, морфіну сульфат, лідокаїну гід- Апейтаїівт (1996) Мої. 39, Мо. 9 (додакок), 5280); рохлорид, індометацин, глюказомін напроксен (нестероїдні протизапальні ліки; див., сульф/хондроїтін, амітриптілін Ппсі, сульфадіазін, наприклад, Мешцйго Нероїгї (1996) Мої. 7, рр. 1209- оксикодон Ппсі/ацетомінафен, олопатадін пс, мізо- 1213); мелоксікам (нестероїдні протизапальні лі- простол, натрію напроксен, омепразол, циклофо- ки); ібупрофен (нестероїдні протизапальні ліки); сфамід, рітуксимаб, І--1 ТААР, МВА, СТІ А4-ІС, І - піроксікам (нестероїдні протизапальні ліки); дікло- 18 ВР, анти-1І--18, анти-І. 15, ВІВВ-796, 5С1ІО-469, фенак (нестероїдні протизапальні ліки); індоме-

МХ-702, АМО-548, МХ-740, рофлуміласт, ІС-485, тацин (нестероїдні протизапальні ліки); сульфаса-

СОС-801, та ммезопрам. Переважні комбінації лазін (див., наприклад, Апйгйй5 та Кпеитаїв5т

(1996) Мої. 39, Мо. 9 (додаток), 5281); азатіопрін ксимаб; І--1 ТААР; МВА; СТІ А4-І2; 11-18 ВР; АВТ- (див., наприклад, Ап апа АНпешйтаїізт (1996) 874; АВТ-325 (анти-ІЇ 18); анти-ІЇ 15; ВІНВ-796;

Мої. 39, Мо. 9 (додаток), 5281); інгібітор ІСЕ (інгібі- ЗСІО-469; МХ-702; АМОа-548; УХ-740; рофлуміласт; тор ферментного інтерлейкін-1р конвертуючого ІС-485; СОС-801; та мезопрам. В іншому втіленні, фермента); 2ар-70 та/або інгібітор ІсК (інгібітор І/-12 або 1-23 антитіло, або його антиген- тирозин кінази 7гар-70 або Іск); інгібітор МЕСЕ зв'язуючу частину вводять для лікування розладу, та/або інгібітор МЕСБ-К (інгібітори васкулярного пов'язаного із 1-12 або 1-23, у комбінації з одним ендотеліального клітинного фактора росту або з вищезазначених агентів, для лікування ревмато- рецептора васкулярного ендотеліального клітин- їдного артриту. ного фактора росту; інгібітори ангіогенезу); корти- Не обмежуючі приклади терапевтичних агентів костероїдні протизапальні ліки (наприклад, для лікування запальної хвороби кишечнику, з 58203580); інгібітори ТМЕ-конвертази; анти-1Ї-12 якими антитіло, або частина антитіла за даним антитіла; анти-іІ -18 антитіла; інтерлейкін-11 (див., винаходом, можуть бути сполучені, включають наприклад, Айніїйв апа Впеитаїйївт (1996) Мо. 39, такі: буденозид; епідермальний фактор росту; кор-

Мо. 9 (додаток), 5296); інтерлейкін-13 (див., напри- тикостероїди; циклоспорін, сульфасалазін; аміно- клад, АЙ апа Апештаїйївт (1996) Мої. 39, Мо. 9 саліцилати; б-меркаптопурин; азатіопрін; метроні- (додаток), 5308); інгібітори інтерлейкіну-17 (див., дазол; інгібітори ліпоксигенази; мезаламін; наприклад, Апнійв апа Анейтаїйізт (1996) Мої. 39, олсалазін; балсалазід; антиоксиданти; інгібітори

Мо. 9 (додаток), 5120); золото; пеніцилламін; хло- тромбоксану; антагоністи І--1 рецептору; анти-1/- рокін; хлорамбуцил; гідроксихлорокін; циклоспорін; 1р моноклональні антитіла; анти-І--6 моноклона- циклофосфамід; загальне лімфоїдне опроміню- льні антитіла; фактори росту; інгібітори еластаз; вання; анти-тимоцитний глобулін; анти-СРА анти- піридиніл-імідазольні сполуки; антитіла до або тіла; СО5-токсини; пептиди та колаген для перо- антагоністи інших людських цитокінів чи факторів рального введення; динатрію лобензаріт; цитокін- росту, наприклад, ТМЕ, СТ, 1-1, 1-2, 1-6, 1-7, І - регулюючі агенти (СКА5) НР228 та НРАбб6 8, 11-15, 11-16, 11-17, 1-18, ЕМАР-ЇЇ, М-С5Е, РОБ, (Ношойпеп РНаптасеціїсаї!5, Іпс.); ІСАМ-1 антисми- та РООЕ. Антитіла за даним винаходом, або їх слові фосфоротіоатні оліго-дезоксинуклеотиди антиген-зв'язуючі частини можуть бути сполучені із (БІВ 2302; Ізіз Рпаптасешіса!в5, Іпс.); розчинний антитілами до молекул клітинної поверхні, такими, комплементний рецептор 1 (ТР10; Т СеїЇ Зсіепсев, як С02, С03, 204, С08, 2025, 2028, С030, С040,

Іпс.); преднізон; органотеїн; глікозаміноглікан полі- сра45, с069, С090 або їх лігандами. Антитіла за сульфат; міноциклін; анти-І2К антитіла; мишачі даним винаходом, або їх антиген-зв'язуючі части- та ботанічні ліпіди (жирні кислоти з риб'ячого жиру ни, можуть також бути сполучені із агентами, та- та олії рослинного насіння; див., наприклад, кими, як метотрексат, циклоспорін, ЕК5БОб, рапамі-

Оеїиса єї аІ. (1995) Апейт. Оів. Сіп. Мопйп Ат. цин, мікофенолят мофетілу, лефлуномід, МАЮ, 21:759-777); ауранофін; фенілбутазон; меклофе- наприклад, ібупрофен, кортикостероїдами, такими, намова кислота; флуфенамінова кислота; внутрі- як преднізолон, інгібіторами фосфодіестерази, шньовенний імуноглобулін; цілейтон; азарібін; мі- агоністами аденозину, протитромботичними засо- кофенолова кислота (К5-61443); такролімус (ЕК- бами, додатковими інгібіторами, адренергічними 506); сіролімус (рапаміцин); аміпрілоза (терафек- агентами, агентами, що перешкоджають передачі тін); кладрібін (2-хлородезоксиаденозін); метотре- сигналів прозапальними цитокінами, такими, як ксат; противовирусні засоби; та імуностимулятори. ТМЕс; або 1-1 (наприклад, ІРАК, МІК, ІКК, р38 або

В одному втіленні, І--12 антитіло, чи його ан- МАР інгібітори кінази), інгібітори І--1 конвертуючо- тиген-зв'язуючу частину вводять у комбінації з од- го фермента, інгібітори ТМЕо. конвертуючого фе- ним з наступних агентів для лікування ревматоїд- рмента, інгібітори Т-клітинної сигналізації, такі, як ного артриту: низькомолекулярний інгібітор КОК інгібітори кінази, інгібітори металопротеїнази, су- (АВТ-123), низькомолекулярний інгібітор Тів-2; льфасалазін, азатіопрін, б-меркаптопурин, інгібіто- метотрексат; преднізон; целецоксіб; фолієва кис- ри ангіотензин-І-перетворюючого фермента, роз- лота; гідроксихлорокін сульфат; рофецоксіб; ета- чинні рецептори цитокінів та їх похідні (наприклад, нерцепт; інфліксімаб; лефлуномід; напроксен; розчинні р55 або р75 ТМЕ рецептори, 51І--ІВІ, 81І-- вальдецоксіб; сульфасалазін; метилпреднізолон; ІВІЇ, БІ/-6Е) та протизапальні цитокіни (наприклад, ібупрофену; мелоксікам; метилпреднізолону аце- І. -4, 11-10, 1-11, 1-13 та ТОД). тат; ауротіомалат натрію; аспірін; азатіопрін; тріа- Переважні приклади терапевтичних агентів мцинолон ацетонід; пропксіфен напсилат/апап; для лікування хвороби Крона, в яких можуть бути фолат; набуметон; диклофенак; піроксикам; ето- сполучені антитіло або антиген-зв'язуюча частина, долак; диклофенак натрію; оксапрозін; оксикодон включають такі: ТМЕ антагоністи, наприклад, анти- сі; гідрокодон бітартрат/апап; диклофенак на- ТМЕ антитіла, 0О2Е7 (публікація РСТ Мо. УМО трію/мізопростол; фентаніл; ананікру, людську 97/29131; НОМІВА), СА2 (ВЕМІСАОЕ), СОР. 571, рекомбіновану; трамадол Псі; сальзалат; суліндак; ТМЕВ-Ід конструкти, (р75ТМЕкКІдДо (ЕМВКЕГ) та ціанокобаламін/а/пірідоксин; ацетомінафен; на- ро5ТМЕвІЧДО (ЕМЕВСЕРТ)) інгібітори та РОЕ4 трію алендронат; преднізолон; морфін сульфат; інгібітори. Антитіла за даним винаходом, або їх лідокаїн гідрохлорид; індометацин; глюкозамін антиген-зв'язуючі частини можуть бути сполучені із сульфат/хондроїтін; циклоспоріне; амітриптілін пої; кортикостероїдами, наприклад, буденозидом та сульфадіазін; оксикодон псі/ацетамінофен; олопа- дексаметазоном. Антитіла за даним винаходом, тадін псі; мізопростол; натрію напроксен; омепра- або їх антиген-зв'язуючі частини, можуть також зол; мікофенолят мофетілу; циклофосфамід; ріту- бути сполучені із такими агентами, як сульфасала-

зін, 5-аміносаліцилова кислота чи олсалазін, та агентами, що перешкоджають розповсюдженню агентами. Що перешкоджають синтезу чи дії про- сигналів прозапальними цитокінами, такими, як запальних цитокінів, таких, як 1-1, наприклад, інгі- ТМЕо; або 1-1 (наприклад, ІРАК, МІК, ІКК, р38 або біторів І--1 конвертуючого фермента та ІІ-1га. МАР інгібітори кінази), інгібіторами І(/-1Д конвер-

Антитіла за даним винаходом, або їх антиген- туючого фермента, інгібіторами ТАСЕ, інгібіторами зв'язуючі частини можуть також бути використані із Т-клітинної сигналізації, такими, як інгібітори кіна- інгібіторами Т-клітинної сигналізації, наприклад, зи, інгібітори металопротеїнази, сульфасалазін, тирозиновими інгібіторрами кінази 6- азатіопрін, б-меркаптопурини, інгібіторами ангіоте- меркаптопуринів. Антитіла за даним винаходом, нзин-І-перетворюючого фермента, розчинними або їх антиген-зв'язуючі частини можуть бути спо- рецепторами цитокінів та їх похідними (наприклад, лучені із І--11. Антитіла за даним винаходом, або розчинними рецепторами ТМЕ р55 або р75, 51І- їх антиген-зв'язуючі частини можуть бути сполуче- 1АЇ, 51/-1ВІЇ, 5І/-6К) та протизапальними цитокі- ні із мезаламіном, преднізоном, азатіопріном, мер- нами (наприклад, І.-4, 11-10, 11-13 та ТОД). каптопурином, інфліксімабом, метилпреднізолону Переважні приклади терапевтичних агентів натрій сукцинатом, сідіфеноксилат/атроп сульфа- для лікування розсіяного склерозу, в яких антитіло том, лоперамід гідрохлоридом, метотрексатом, чи його антиген-зв'язуюча частина можуть бути омепразолом, фолатом, ципрофлоксаци- сполучені таким чином, щоб включати інтерферон- ном/декстрозою-водою, гідрокодон бітартра- В, наприклад, ІЕМртТа та ІЕМД1б; копаксон, корти- том/апап, тетрациклін гідрохлоридом, флуоцина- костероїди, інгібітори капсази, наприклад, інгібіто- нідом, метронідазолом, тімерозалом/борною ри капсази-1, інгібітори 1-1, інгібітори ТМЕ, та ан- кислотою, холестираміном/сахарозою, ципрофло- титіла до СО40 ліганду та до СОВО. ксацин гідрохлоридом, гіосциамін сульфатом, ме- Антитіла за даним винаходом, або їх антиген- перідин гідрохлоридом, мідазолам гідрохлоридом, зв'язуючі частини, можуть також бути сполучені із оксикКодон псі/ацетамінофеном, прометазін гідро- агентами, такими як алемтузумаб, дронабінол, хлоридом, фосфатом натрію, сульфометоксазо- унімед, даклізумаб, мітоксантрон, ксаліпроден лом/гріметопрімом, целецоксібом, полікарбофі- гідрохлорид, фампрідін, глатірамер ацетат, ната- лом, пропоксифен напсилатом, гідрокортизоном, лізумаб, сіннабідол, а-імунокін ММ5О3, АВВ- мультивітамінами, динатрію балсалазідом, кодеїн 215062, АпегдіХ.М5, антагоністи рецепторів хемо- фосфатом/апап, колесевеламом Псі, ціанокобала- кіну, ВВЕ-2778, калагуалін, СРІ-1189, ГЕМ (міток- міном, фолієвою кислотою, левофлоксацином, сантрон, інкапсульований у ліпосоми), ТНС.СВО метилпреднізолоном, наталізумабом та інтерфе- (агоніст каннабіноїдів) МВР-8298, мезопрам (інгібі- роном-тама. | | тор РОЕ4), ММА-715, рецептор анти-ІІ -6 антитіла,

Не-обмежуючі приклади терапевтичних агентів неуровакс, пірфенідон аллотрап 1258 (ВОР-1258), для лікування розсіяного склерозу антитілом чи ЗТМЕ-В1, талампанель, теріфлуномід, ТОЕ-бета?г, частиною антитіла за даним винаходом, що мо- тіплімотід, антагоністи МІА-4 (наприклад, ТЕ- жуть бути сполучені, включають такі: кортикосте- 14035, МІ А4 ультрахалер, антегран-ЕГ АІМ/біоген), циклофосфамід; циклоспоріне; метотрексат; 4- Необмежуючі приклади терапевтичних агентів амінопіридин; тізанідін; інтерферон-рта (АМОМЕХ; для лікування стенокардії, з якими можуть бути

Віодеп); інтерферон-р1р (ВЕТАБЕРОМ; сполучені антитіло, чи частина антитіла за даним

Спігоп/Вепех); інтерферон о-п3) (Інтерферон винаходом, включають такі: аспірін, нітрогліцерин, зсіепсез/Рціїтоїо), інтерферон-о ізосорбід мононітрат, метопролол сукцинат, ате- (Аїаумаззегтапп/дапа»)), інтерферон ВТА-ІЕ нолол, метопролол тартрат, амлодіпін безілат, (Зегопо/Лппаіе Тпегареціїс5), пегінтерферон є 26 ділтіазем гідрохлорид, ізосорбід динітрат, клопідо- (Епгоп/Зспегіпд-Ріоиди), кополімер 1 (Сор-1; грель бісульфат, ніфедіпін, кальцію аторвастатін,

СОРАХОМЕ; Тема Рпагтасецшіїса! Іпдивіпев, Іпс.); калію хлорид, фуросемід, сімвастатін, верапаміл гіпербаричний кисень; внутрішньовенний імуног- Неї, дігоксін, пропанолол гідрохлорид, карведоліл, лобулін; клабрібін; антитіла до або антагоністи лізінопріл, спіронолактон, гідрохлортаїзід, ена- інших людських цитокінів або факторів росту та їх лапріл малеат, надолол, раміпріл, натрію енокса- рецепторів, наприклад, ТМЕ, СТ, 1-1, П/-2, 1-6, 1 - парін, натрію гепарін, вальсартан, соталолу гідро- 7, 1-8, 1-23, 1-15, 11-16, І/-18, ЕМАР-ІЇ, ЄМ-С5Е, хлорид, фенофібрат, езетіміб, буметанід, калію

ЕСЕ та РОСБЕ. Антитіла за даним винаходом, або лозартан, лізінопріл/гідрохлоротіазід, фелодіпін, їх антиген-зв'язуючі частини, можуть бути сполу- каптопріл, бісопролол фумарат. чені із антитілами до молекул клітинної поверхні, Необмежуючі приклади терапевтичних агентів такими, як СО2, СО3, С0р4, СО8, С019, СО020, для лікування анкілозуючого спонділоартриту, з

СО25, СО28, СО30, С040, СОр4Б5, СОб69, СОВ80, якими можуть бути сполучені антитіло, чи частина сОв86, С090 або їх лігандами. Антитіла за даним антитіла за даним винаходом, включають такі: винаходом, або їх антиген-зв'язуючі частини, мо- ібупрофен, диклофенак та мізопростол, напрок- жуть бути сполучені з агентами, такими, як метот- сен, мелоксікам, індометацин, диклофенак, це- рексат, циклоспорін, ЕК5О6, рапаміцин, мікофено- лецоксіб, рофецоксіб, сульфасалазін, метотрек- лят мофетілу, лефлуномід, МАЮ, наприклад, сат, азатіопрін, міноциклін, преднізон, етанерцепт, ібупрофен, кортикостероїдами, такими, як предні- інфліксімаб. золон, інгібіторами фосфодіестерази, агоністами Необмежуючі приклади терапевтичних агентів аденозину, протитромботичними засобами, додат- для лікування астми, з якими можуть бути сполу- ковими інгібіторами, адренергічними агентами, чені антитіло, чи частина антитіла за даним вина-

ходом, включають такі: альбутерол, сальмете- натрій сукцинат, лоразепам, фуросемід, лізіноспо- рол/флутіказон, натрій монтелюкаст, флутіказон рін, нітрогліцерин, спіронолактон, циклофосфамід, пропіонат, будезонід, преднізон, сальметерол ксі- іпратропій бромид, актіноміцин а, альтеплазу, нафоат, левальбутерол Ппсі, альбутерол суль- флутіказон пропіонат, левофлоксацин, метапроте- фат/іпратропій, преднізолон натрій фосфат, тріа- нерол сульфат, морфіну сульфат, оксикодон Псі, мцинолон ацетонід, беклометазон діпропіонат, калію хлорид, тріамцинолон ацетонід, такролімус іпратропій бромид, азітроміцин, пірбутерол ацетат, безводний, кальцій, інтерферон-альфа, метотрек- преднізолону, теофілін безводний, метилпредні- сат, мікофенолят мофетілу, інтерферон-гама-1р. золону натрій сукцинат, кларітроміцин, зафірлу- Необмежуючі приклади терапевтичних агентів каст, формотерол фумарат, протигрипозну вакци- для лікування інфаркту міокарду, з якими можуть ну, метилпреднізолон, амоксіциллін тригідрат, бути сполучені антитіло, чи частина антитіла за флунізолід, протиалергійні ін'єкції, натрій кромолін, даним винаходом, включають такі: аспірін, нітрог- фексофенадін гідрохлорид, флунізолід/ментол, ліцерин, метопролол тартрат, еноксапарін, натрію амоксіциллін/клавуналат, левофлоксацин, інгаля- гепарін, клопідогрель бісульфат, карведілол, ате- тор, гуаіїфенезін, дексаметазон натрій фосфат, нолол, морфіну сульфат, метопролол сукцинат, моксіфлоксацин Псі, доксіциклін гіклат, гуаіїфене- варфарін натрій, лізіноспорін, ізосорбід мононіт- зін/а-меторфан, р-ефедрін/сод/хлорфенір, гатіф- рат, дигоксин, фуросемід, сімвастатін, ламіпріл, локсацин, цетирізін гідрохлорид, мометазон фуро- тенектеплазу, еналапріл малеат, торсемід, рета- ат, сальметерол ксінафоат, репгопаїаге, вазу, лозартанкалію, хінапріл псі/тад сагьо, буме- цефалексін, ре/гідрокодон/хлорфенір, цетирізин танід, альтеплазу, еналапрілат, аміодарон гідро- псі/псевдоефед, фенілефрін/сод/прометазін, коде- хлорид, тірофібан ПпсіІ т-Ппуагаїе, ділтіазем ін/прометазін, цефпрозіл, дексаметазон, гуаіїфене- гідрохлорид, каптопріл, ірбсартан, вальсартан, зін/лсевдоефедрін, хлорфенірамін/гідрокодон, не- пропранолол гідрохлорид, фозінапрілнатрій, лідо- докроміл натрій, тербуталін сульфат, епінефрін, каїн гідрохлорид, ептіфібатід, цефазолін натрій, метилпреднізолону, метапротенерол сульфат. атропін сульфат, амінокапронову кислоту, спіро-

Необмежуючі приклади терапевтичних агентів нолактон, інтерферон, соталол гідрохлорид, калію для лікування СОРО, з якими можуть бути сполу- хлорид, докузат натрій, добутамін Ппсі, альпразо- чені антитіло, чи частина антитіла за даним вина- лам, правастатін натрій, аторвастатін кальцій, мі- ходом, включають такі: альбутерол суль- дозолам гідрохлорид, меперідін гідрохлорид, ізо- фат/іпратропій, іпратропій бромид, сорбід дінітрат, епінефрін, допамін гідрохлорид, сальметерол/флутіказон, альбутерол, сальмете- бівалірудін, розувастатін, езетіміб/сімвастатін, рол ксінафоат, флутіказон пропіонат, преднізон, авасіміб, каріпорід. теофілін безводний, метилпреднізолон натрій сук- Необмежуючі приклади терапевтичних агентів цинат, натрію монтелюкаст, будезонід, формоте- для лікування псоріазу, з якими можуть бути спо- рол фумарат, тріамцинолон ацетонід, левофлок- лучені антитіло, чи частина антитіла за даним ви- сацин, гуаіфенезін, азітроміцин, беклометазон находом, включають такі: низькомолекулярний дипропіонат, левальбутерол Ппсі, флунізолід, на- інгібітор КОЕ (АВТ-123), низькомолекулярний інгі- трію цетріаксон, амоксіциллін тригідрат, гатіфлок- бітор Тіе-2, кальціпотрієн, клобетазолу пропіонат, сацин, зафірлукаст, амоксіциллін/клавуналат, тріамцинолону ацетонід, галобетазолу пропіонат, флунізолід/ментол, хпорфенірамін/гідрокодон, тазаротен, метотрексат, флуоцинанід, бетамета- метапротенерол сульфат, метилпреднізолону, зону діпроп доповнений, флуоціналону ацетонід, мометазон фуроат, п-ефедрін/сод/хлорфенір, пір- ацитретін, деггярний шампунь, бетаметазону ва- бутерол ацетат, п-ефедрін/лоратадін, тербуталін лерат, мометазон фуроат, кетоконазол, сульфат, тіотропій бромид, (К,К)-формотерол, ргатохіпе/флуоцинолон, гідрокортизону валерат,

ТОААТ, ціломіласт, рофлуміласт. флурандренолід, сечовину, бетаметазон, клобета-

Необмежуючі приклади терапевтичних агентів золу пропіонат/емолл, флутіказону пропіонат, азі- для лікування вірусу гепатиту С (НСУМ), з якими троміцин, гідрокортизон, зволожуючий склад, фо- можуть бути сполучені антитіло, чи частина анти- лієву кислоту, дезонід, пімекролімус, дьоготь, тіла за даним винаходом, включають такі: Інтер- діфлоразону діацетат, етанерцепт фолат, молочну ферон-альфа-2а, Інтерферон-альфа-2Б, Інтерфе- кислоту, метоксален, Ппс/вісмут субгал/2пох/резор, рон-альфа соп1, Інтерферон-альфа-п1, метилпреднізолону ацетат, преднізон, засіб проти пегільований інтерферон-альфа-2а, пегільований засмаги, гальцінонід, саліцилову кислоту, антра- інтерферон-альфа-2р, рібавірін, пегінтерферон лін, клокортолон півалат, вугільний екстракт, дьо- аіга-25 «ж рібавірін, урсодеоксихолеву кислоту, глі- готь/саліцилову кислоту, дьоготь/саліцилову кис- церризін, тимальфазін, максамін, МХ-497 та будь- поту/сірку, дезоксиметазон, діазепам, які сполуки, що використовують для лікування пом'якшувач, флуоцинонід/пом'якшувач, мінера-

НОМ шляхом впливу на такі мішені: НСМ полімера- льну олію/касторову олію/па лакт, мінеральну зу, НСМ протеазу, НСМ геліказу, НСМ ІКЕ5 (сайт олію/кокосову олію, гас/ізопропіл міристат, проза- внутрішньої посадки рибосому). лен, саліцилову кислоту, мило/гтрібромсалан, тіме-

Необмежуючі приклади терапевтичних агентів розал/борну кислоту, целецоксіб, інфліксімаб, цик- для лікування ідіопатичного фіброзу легенів, з лоспоріне, алефацепт, ефалізумабр, такролімус, якими можуть бути сполучені антитіло, чи частина пімекролімус, РОМА, ОМВ, сульфасалазіну. антитіла за даним винаходом: преднізон, азатіо- Необмежуючі приклади терапевтичних агентів пріну, альбутерол, колхіцин, альбутерол сульфат, для лікування псоріатичного артриту, з якими мо- дигоксин, гама інтерферон, метилпреднізолону жуть бути сполучені антитіло, чи частина антитіла за даним винаходом, включають такі: метотрексат, твом антитіл СТІ А-4-ІдДо або анти-В7, сімейством етанерцепт, рофецоксіб, целесоксіб, фолієву кис- антитіл анти-РО-і. Антитіла за даним винаходом лоту, сульфасалазіну, напроксен, лефлуномід, або їх антиген-зв'язуючі частини можуть бути спо- метилпреднізолону ацетат, індометацин, гідрокси- лучені із І--11 або анти-цитокіновими антитілами, хлорокін сульфат, преднізон, суліндак, бетамета- наприклад, фонотолізумабом (анти-ІЄМд антиті- зон діпроп доповнений, інфліксімаб, метотрексат, лом), або рецепторами антитіл до рецепторів, на- фолат, тріамцинолон ацетонід, диклофенак, діме- приклад, антитіла до рецептора 1-6 та антитіл до тилсульфоксид, піроксікам, диклофенак натрій, молекул В-клітинної поверхні. Антитіла за даним кетопрофен, мелоксікам, метилпреднізолон, набу- винаходом або їх антиген-зв'язуючі частини мо- метон, натрію толметін, кальціпотрієн, циклоспо- жуть також бути використані з ГОР. 394 (абетімус), рін, диклофенак натрій/мізопростол, флуоцинанід, агентами, що виснажують чи інактивують В- глюкозаміну сульфат, ауротіомалат натрію, гідро- клітини, наприклад, рітуксімаб (анти-СО20 антиті- кодон бітартрат/арар, ібупрофен, натрію різедро- ло), лімфостат-В (анти-ВІу5 антитіло), антагоніс- нат, сульфадіазін, тіогуанан, вальдецоксіб, але- тами ТМЕ, наприклад, анти-ТМЕ антитілами, 02Е7 фацепт, ефалізумаб. (Публікація РСТ Мо. УМО 97/29131; НОМІКА), СА?

Необмежуючі приклади терапевтичних агентів (ВЕМІСАОЕ), СОР 571, ТМЕВ-Ід конструктами, для лікування рестенозу, з якими можуть бути (р75ТМЕКкІДО (ЕМВКЕГ) та ро5ТМЕКкІДО сполучені антитіло, чи частина антитіла за даним (ЕМЕАСЕРТ)). винаходом, включають такі: сіролімус, паклітаксел, Фармацевтичні композиції за даним винахо- еверолімус, такролімус, АВТ-578, ецетамінофен. дом можуть включати "терапевтично ефективну

Необмежуючі приклади терапевтичних агентів кількість" або "профілактично ефективну кількість" для лікування ішіасу, з якими можуть бути сполу- антитіла або його частини за даним винаходом. чені антитіло, чи частина антитіла за даним вина- "Терапевтично ефективну кількість" відноситься до ходом, включають такі: гідрокодон бітартрат/апап, кількості, що ефективна, у дозах та протягом пері- рофецоксіб, циклобензапрін псі, метилпреднізо- одів необхідного часу, для досягнення бажаного лон, напроксен, ібупрофен, оксикодон терапевтичного результату. Терапевтично ефек- псі/"ацетомінафен, целецоксіб, вальдецоксіб, ме- тивна кількість антитіла або його частини може тилпреднізолону ацетат, преднізон, кодеїн фос- бути визначена фахівцем у цій галузі та може роз- фат/апап, трамадол Псі/(ацетамінофен, метаксо- різнятись в залежності від таких факторів, як стан лон, мелоксікам, метокарбамол, лідокаїн хвороби, вік, стать та вага особи, та від здатності гідрохлорид, диклофенак натрій, габапентін, дек- антитіла або його частини викликати бажану реак- саметазон, карізопродол, кеторолак трометамін, цію в особи. Терапевтично ефективна кількість є індометацин, ацетамінофен, діазепам, набуметон, також кількістю, де токсичні чи шкідливі ефекти оксикодон о Псі, тізанідін ПпсІ, диклофенак на- антитіла, або частини антитіла, компенсуються трію/мізопростол, пропоксифен напсилат/апап, терапевтично корисними ефектами. "Профілакти- аза/оксикод/оксикодон іег, ібупрофену/гідрокодон чно ефективна кількість" відноситься до кількості, рії, трамадол Псі, етедолак, пропоксифен Псі, аміт- що ефективна, у дозах та протягом періодів необ- риптілін псі, карізопродоопфенадрін цитрат, тема- хідного часу, для досягнення бажаного профілак- зепам. тичного результату. Типово, оскільки профілактич-

Переважні приклади терапевтичних агентів ні дози використовують до суб'єктів до початку для лікування системного червоного вовчаку (5 Е хвороби або на її ранніх стадіях, то профілактично (люпусу)), з якими можуть бути сполучені антитіло, ефективна кількість буде меншою за терапевтично чи частина антитіла за даним винаходом, включа- ефективну кількість. ють такі: М5А!Ю5, наприклад, диклофенак, напрок- Схеми дозувань можуть бути врегульовані з сен, ібупрофен, піроксікам, індометацин; інгібітори метою забезпечення оптимальної бажаної реакції

СОХ2, наприклад, целецоксіб, рофецоксіб, валь- (наприклад, терапевтичної чи профілактичної реа- децоксіб; протималярійні засоби, наприклад, гід- кції). Наприклад, можуть бути введені однократні роксихлорокін; стероїди, наприклад, преднізон, болюсні вливання, декілька розділених доз можуть преднізолон, буденозид, дексаметазон; цитоток- бути введені протягом часу, або доза може бути сичні засоби, наприклад, азатіопрін, циклофосфа- пропорційно зменшена чи збільшена, в залежності мід, мікофенолят мофетілу, метотрексат; інгібітори від тяжкості терапевтичної ситуації. Це особливо

РОЕ4 або інгібітор синтезу пуринів, наприклад, корисно для складання парентеральних компози- целлсепт. Антитіла за даним винаходом або їх цій у стандартній лікарській формі з метою легкос- антиген-зв'язуючі частини можуть також бути спо- ті введення та однорідності дозувань. Стандартна лучені з такими агентами, як сульфасалазін, 5- лікарська форма, як вживається у цій заявці, від- аміносаліцилова кислота, олсалазін, імуран та носиться до фізично дискретних форм, придатних агенти, що перешкоджають синтезу, продукуванню як єдині дози для ссавців, що мають лікуватись; чи дії прозапальних цитокінів, таких, як 1-1, на- кожна стандартна лікарська форма, що містить приклад, інгібітори капсази, подібні інгібіторам І- попередньо визначену кількість активної сполуки, 18 конвертуючого фермента та ІІ-1га. Антитіла за розраховану для одержання бажаного терапевти- даним винаходом або їх антиген-зв'язуючі частини чного ефекту, разом із необхідним фармацевтич- можуть також бути використані з інгібіторами Т- ним носієм. Характеристики стандартних лікарсь- клітинної сигналізації, наприклад, інгібіторами ти- ких форм за даним винаходом аге аїісіаїва Бу та розинкінази; або молекулами, направленими на безпосередньо залежать від (а) унікальних харак- молекули Т-клітинної активації, наприклад, сімейс- теристик активної сполуки та конкретного терапев-

тичного або профілактичного ефекту, що має бути тилінованого рекомбінантного очищеного людсь- досягнутий, та (б) обмежень, що притаманні скла- кого І/-12 р70 розводили до 100 нг/мл у РВ5, що данню сполук у цій галузі, таких, як активна сполу- містив 0,195 В5А та додавали до кожної лунки та ка для лікування сенситивності у пацієнті. інкубували протягом 1 години при кімнатній темпе-

Ілюстративний не обмежуючий діапазон тера- ратурі. Планшети тричі промивали РВ5, що містив певтично чи профілактично ефективної кількості 00595 ПГлуеєп-20. Стрептавідін НКР (Ріегсе ж антитіла або його частини за даним винаходом 21126, КосКіапа, ІС.) розводили 1:20000 у РВ5, що становить 0,1-20 мг/кг, більш переважно, 1-10 містив 0,195 ВБА; 50 мкл/лунку добавляли, та інку- мг/кг. Необхідно зауважити, що значення дозувань бували планшети протягом 1 години при кімнатній можуть варіюватись в залежності від виду та тяж- температурі. Планшети тричі промивали РВ5, що кості стану, що має бути полегшений. Додатково, містив 0,0595 Тууееп-20. П'ятдесят мікролітрів роз- необхідно розуміти, що для кожного конкретного чину ТМВ (Зідта Ж Т0440, 51. І оці5, МО.) додавали суб'єкту мають бути встановлені конкретні схеми до кожної лунки та інкубували протягом 10 хвилин дозувань протягом деякого часу, в залежності від при кімнатній температурі. Реакцію припиняли потреб пацієнта та професійної думки особи, що шляхом додавання 1М сірчаної кислоти. Показники вводить чи контролю введення композицій, та діа- з планшетів знімали спектрофотометрично при пазонів дозувань, вказаних у цій заявці тільки в довжині хвилі у 450 нм. ілюстративних цілях, та не призначених для обме- Приклад 1.1.А.2: ЕГІЗА для оцінки здатності ження обсягу чи здійснення композицій, що заяв- І/-12 р70 або 1-12 р40 конкурувати зі зв'язуван- ляються. ням анти-людських 1І--12 антитіл із І--12 р70

Фахівець у цій галузі легко зрозуміє, що інші Планшета ЕГІЗА (Согпіпд Совіаг, Асіоп, МА) придатні модифікації та адаптації способів за да- покривали 5мкг/мл Ес специфічного козлячого ан- ним винаходом, що описані у цій заявці, є очевид- ти-мишачого дос (Ріегсе Ж 31170, Коскога, ІС) у ними та можуть бути зроблені за допомогою при- РВ5 (50 мкл/лунка) всю ніч при 4 градусах Цель- датних еквівалентів, не виходячи за межі даного сію. Планшети однократно промивали РВ5-- 0,0590 винаходу або втілень, описаних у цій заявці. Зро- Тмееп-20. Планшети блокували шляхом додаван- бивши детальний опис даного винаходу, це буде ня РВ5н-1095 порошкового молока протягом 1 го- більш зрозуміло шляхом посилання на наступні дини при кімнатній температурі. Планшети тричі приклади, що включені тільки в ілюстративних промивали після блокування РВ5-0,0595. Тшмееп- цілях та не призначені для обмеження даного ви- 20. находу. Приклад 1.1.А 2(а): Протокол ЕГІЗА конкуру-

Приклади вання 1ІІ-12 р70

Приклад 1: Синтез та ізоляція анти-людського Мишачу сироватку або гібридомні супернанан-

І/-12 моноклональних антитіл ти розводили у РВ5, що містив 0,190 В5А (Зідта,

Приклад 1.1: Аналізи для визначення анти- ЗІ. Гоціз, МО.) в залежності від прогнозованого людських 1-12 антитіл титру антитіл. Біотилінований рекомбінантний

Протягом Прикладу 1 для визначення та хара- очищений людський 1/-12 р70 одержували як ктеристики анти людських 1І--12 антитіл були вико- втричі більш концентрований (3х) штам при 0,1 ристані такі аналізи, якщо не вказано інше. мкг/мл РВ5, що містив 0,195 ВБА. Рекомбінантний

Приклад 1.1.А: ЕГІЗА очищений людський 1ІЇ/-12 р7/0 одержували при

Твердофазні імуноферментні аналізи (ЕГІЗА) різних концентраціях у діапазоні від 01 до 10 для скринінгу антитіл, що зв'язують людські 1-12, мкг/мл у РВ5, що містив 0,190 ВБА. Рівні об'єми були проведені наступним чином. (75мкл) кожного з наступних розчинів змішували:

Приклад 1.1.А.1:. ЕГІЗБА для детекції анти- розведена мишача сироватка або гібридомні супе- людських 1-12 антитіл до 1-12 р70 рнатанти, біотинільований рекомбінантний очище-

Планшети ЕГІЗА (Согпіпд Совіаг, Асіоп, МА) ний людський 1-12 р70, та рекомбінантний очи- покривали 50 мкл/лунка 5мкг/мл Ес специфічного щений людський І/-12 р70. П'ятдесят мікролітрів козлячого анти-мишачого ІдсС (Ріегсе й 31170, цієї суміші додавали до покритих планшетів ЕГІЗА,

Косктога, І.) у фосфатно-буферному сольовому описаних вище та інкубували протягом 1 години розчині (РВ5) всю ніч при 4 градусах Цельсію. при кімнатній температурі. Лунки тричі промивали

Планшети однократно промивали РВ5, що містив РВ5, що містив 0,05950 Туееп-20. Стрептавідін НКР 0,0595 Тмеєп-20. Планшети блокували шляхом (Ріегсе Ж 21126, КосКіапа, І.) розводили 1:20000 у додавання 200 мкл/лунка блокуючого розчину, РВ5, що містив 0,196 ВБА; додавали 50 мкл/лунку, розведеного до 295 у РВ5З (Віокай 4170-6404, та інкубували планшети протягом 1 години при

Негсшев5, СА.) протягом 1 години при кімнатній кімнатній температурі. Планшети тричі промивали температурі Планшети однократно промивали РВ5, що містив 0,0595 Тмееп-20. П'ятдесят мікро- після блокування РВ5, що містив 0,0595 Тмееп-20. літрів розчину ТМВ (Зідта Ж Т0440, 51. І оці5, МО.)

П'ятдесят мікролітрів на лунку мишачої сиро- додавали у кожну лунку та інкубували протягом 10 ватки або гібридомних супернатантів розводили у хвилин при кімнатній температурі. Реакцію припи-

РВ5, що містив 0,195 альбуміну бичачої сироватки няли шляхом додавання 1М сірчаної кислоти. По- (ВБА) (Зідта, 5. Гоці5, МО.) та додавали до казники з планшетів знімали спектрофотометрич- планшету ЕГІЗА, що був приготований, як описано но при довжині хвилі у 450 нм. вище, та інкубували протягом 1 години при кімнат- Приклад 1.1.А 2(Б): Протокол ЕГІЗА конкуру- ній температурі. Лунки тричі промивали РВ5, що вання 1-12 р40 містив 0,0595 Тулгееп-20. П'ятдесят мікролітрів біо-

Мишачу сироватку або гібридомні супернатан- Очищені антитіла розводили сольовим розчином з ти розводили у РВ5, що містив 0,190 В5А (Зідта, буфером НЕРЕЗ для зв'язування по всій специфі-

ЗІ. Гоціз, МО.) в залежності від прогнозованого чній реакційній поверхні козлячого анти-мишачого титру антитіл. Біотилінований рекомбінантний до. Мишачі антитіла, що повинні були зв'язатись очищений людський 1/-12 р70 одержували як як ліганд (25 мкг/мл) вприскували у реакційні мат- втричі більш концентрований (3х) штам при 0,1 риці при швидкості потоку у 5 мкл/хв. Константи мкг/мл у РВ5, що містив 0,195 ВБ5А. Рекомбінант- швидкості асоціації та дисоціації, Коп (одиниця ви- ний очищений людський 1-12 р40 одержували при мірювання МС") та Кої (одиниця вимірювання с") різних концентраціях у діапазоні від 01 до 10 визначали при безперервній швидкості потоку у 25 мкг/мл у РВ5, що містив 0,195 В5А. Рівні об'єми (75 мкл/хв. Константи швидкості одержували шляхом мкг) кожного з наступних розчинів змішували: роз- здійснення кінетичних вимірювань зв'язування при ведену мишачу сироватку або гібридомні суперна- десяти різних концентраціях антигенів у діапазоні танти, біотилінований рекомбінантний очищений 10-200 нМ. Константу рівноваги дисоціації (одини- людський 1-12 р70, рекомбінантний очищений ця вимірювання М) реакції між мишачими антиті- людський 1-12 р40. П'ятдесят мікролітрів цієї су- лами та рекомбінантним очищеним людським І-- міші додавали до покритих планшетів ЕГІЗА та 12 р70 або рекомбінантним очищеним людським інкубували протягом 1 години при кімнатній темпе- І--12 р40 потім розраховували з кінетичних конс- ратурі. Лунки тричі промивали РВ5, що містив тант швидкості за наступною формулою: 005956 ПГлуееп-20. Стрептавідін НКР (Ріегсе ж Ко-Кой/Коп. Зв'язування реєстрували як функцію 21126, КосКіапа, І-.) розводили 1:20000 у РВ5, що часу та розраховували кінетичні константи швид- містив 0,190 ВЗА; додавали 50 мкл/лунку, та інку- кості. У цьому аналізі можна вимірювати значення бували планшети протягом 1 години при кімнатній швидкостей асоціації до 109 М'"с" та швидкостей температурі. Планшети тричі промивали РВ5, що дисоціації до 10 с, містив 0,0595 Туееп-20. П'ятдесят мікролітрів роз- Приклад 1.1.С: Функціональна активність анти- чину ТМВ (Зідта Ж 0440, 51. І оці5, МО.) додавали людських 1-12 антитіл до кожної лунки та інкубували протягом 10 хвили- Для вивчення функціональної активності анти- ни при кімнатній температурі. Реакцію припиняли людських 1-12 антитіл за даним винаходом, анти- шляхом додавання 1М сірчаної кислоти. Показники тіла використовували у наступних аналізах для з планшетів знімали спектрофотометрично при вимірювання здатності антитіл інгібувати актив- довжині хвилі у 450 нм. ність І--12.

Приклад 1.1.8: Визначення афінності за допо- Приклад 1.1.0 1: Одержання людських ФГА- могою технології ВІАСОКЕ активованих лімфобластів

Аналіз ВІАСОКЕ (Віасоге, Іпс, Різсаїажау, МУ) Людські периферійні кров'яні мононуклеари визначає афінність антитіл шляхом кінетичних (РВМО) були ізольовані з Іеикорас, взятих від здо- вимірювань констант асоціації та дисоціації. Зв'я- рового донору за допомогою градієнтного центри- зування антитіл із рекомбінантним очищеним люд- фугування РісоїІ-Нурадие протягом 45 хвилин при ським 1/-12 р70 або рекомбінантним очищеним 1500 об/хв, як описано у Сигтепі РгоїосоЇ5 у людським 1-12 р40 визначали за допомогою вимі- Ітітипоїоду, Опії 7.1. РВМС на поверхні розділу рювань, заснованих на поверхневому плазмонно- між водним кров'яним розчином та лімфоцитарним му резонансі з використанням приладу ВіасогефФ розділюючим середовищем збирали та тричі про- 3000 (ВіасогеФ АВ, Оррзаїа, Зм'едеп) з проточним мивали сольовим фосфатно-буферним розчином

НВО-ЕР (10 мМ НЕРЕЗ |рН 7,4|, 150 мМ масі, 3 (РВ5) шляхом центрифугування протягом 15 хви-

ММ ЕОТА, та 0,005965 поверхнево-активного Р20) лин при 1500 об/хв для видалення частинок Фі- при 25"С. Усі хімічні реагенти одержували у колл-пак.

ВіасогеФ АВ (Оррзаїа, Зу/едеп) або іншим чином з РВМС потім активували для утворення лім- різних джерел, як описано у тексті. Приблизно фобластів, як описано у Ситепі Ргоюсої5 у 5000 ВО козлячого антимишачого ІдС, (Геу), фра- Ітлітипоіоду, Опії 6.16. Промиті РВМСО ресуспенду- гмент-специфічного поліклонального антитіла вали при 0,5-1х109 клітин/мл у повному середови- (Ріегсе Віоїесппоіоду Іпс, Боскгога, І-) розводили у щі КРМІ (середовище КРМІ 1640, 1095 ембріона- мМ ацетату натрію (рН 4,5) та безпосередньо льної бичачої сироватки (ЕВ5), 100 О/мл імобілізували поперек СМ5 біосенсорного чіпу для пеніциліну, 100 мкг/мл стрептоміцину), з додаван- досліджень з використанням стандартного набору ням 0,01 мг/мл ФГА-Р (зідта 218754, ЗІ. І оці5, для амінного зв'язування відповідно до інструкцій МО) та культивували при 37"С в атмосфері 595 виробника та процедур при 25 мкг/мл. Групи, що СО». Через чотири дня клітинні культури повторно не прореагували, на поверхні біосенсору, блоку- висіювали при 1х109 клітин/мл у культуральних вали етаноламіном. Модифіковану поверхню кар- середовищах з 0,01 мг/мл ФГА-Р та 50 Ц/мл реко- боксиметилдекстрану у проточній комірці 2 та 4 мбінантного людського 1-2 (ВЕ та О бузіет5 й202- використовували як реакційну поверхню. Не мо- І-, Міппеароїїз, МІМІ.). Клітини інкубували при 377С дифікований карбоксиметилдекстран без козлячо- протягом 24 годин, промивали повним середови- го анти-мишачого ІдС у проточній комірці 1 та З щем ЕРМІ, а потім заморожували у 9595 ЕВ5, 590 використовували як реперну поверхню. Для про- МО при 1х107 клітин/мл. ведення кінетичного аналізу, рівняння швидкостей, Приклад 1.1.0 2: Аналіз індукції ІЕМ-у ФГА одержані з 1:1 моделі зв'язування Ленгмюра, ада- бластами: інгібування активності людського 1-12 птували одночасно для фаз асоціації та дисоціації Аналіз здатності анти-людських 1-12 антитіл програмного забезпечення Віаема|Іцайоп 4.0.1. до інгібування індукованим людським 1-12 проду-

кування ІЕМ-у ФГА бластів проводили наступним гою ЕСІЗА людського ІРМ-у (К та О 5Бувієт5 чином. Різні концентрації імунізованих мишачої Саноів50). сироватки, мишачої гібридомної надосадової ріди- Приклад 1.2: Синтез анти-людських 1-12 мо- ни або очищених анти-людських 1-12 антитіл по- ноклональних антитіл передньо інкубували протягом однієї години при Анти-людські І/-12 мишачі моноклональні ан- 37 градусах С з 400 пг/мл рекомбінантного очище- титіла одержували наступним чином: ного людського 1-12 р70 у 100 мкл повного сере- Приклад 1.2.А: Імунізація мишей людським І - довища КРМІ у планшеті з мікротитром (О-дно, 96- 12 антигеном лунок, Совіаг). ФГА бласти, ізольовані, як описано Двадцять мікрограм рекомбінантного очище- вище, однократно промивали та повторно суспен- ного людського 1-12 р70, що був змішаний із пов- дували у повному середовищі КРМІ до досягнення ним ад'ювантом Фройнда (КоскКІапа клітинної густини у 1х107 клітин/мл. ФГА бласти Іттипоспетіса!5, (зірегізміШе, РА) вприскували (100 мкл 1х109 клітин/мл) додавали до антитіла підшкірно п'яти Ва!/р/С у віці 6-8 тижнів та мишам 5 плюс суміш рекомбінантних очищених людських Ауу день 1. У дні 24, 38, та 49, двадцять мікрограм

І/-12 р70 (кінцева концентрація 1-12 р70 станови- рекомбінантного очищеного людського 1-12 р70б, ла 200 пг/мл) та інкубували протягом 18 годин при змішаного із ад'ювантом для імунного аналізу 37 градусах С Після інкубації, 150 мкл надосадко- (Оіадеп, МаІепсіа, СА) вприскували підшкірно цим вої рідини, вільної від клітин, видаляли з кожної же 5 ВаІр/С та мишам 5 А). У день 84, або день лунки, а рівень продукованого людського ІЕМ-у 112, або день 144, мишам внутрішньовенно вприс- вимірювали за допомогою ЕГІБА людського ІЕМ-у кували 10 мкг рекомбінантного очищеного людсь- (В та О бузіетв СаїйоіІЕ50). кого 1-12 р70 або 2 мкг рекомбінантного очищено-

Приклад 1.1.С 3: Аналіз індукці ІЕМ-у ФГА бла- го людського 1-12 рі40 (Кк та 0 зузіветв, стами: інгібування активності 1-12 яванських ма- Міппеароїїв, ММ). как (супо) Приклад 1.2.8: Синтез гібридоми

Аналіз здатності анти-людських ІІ-12 антитіл Спленоцити, одержані від імунізованих мишей, до інгібування індукованим 1-12 яванських макак описані у Прикладі 1.2.А, були злиті з клітинами продукування ІЕМ-у ФГА бластами проводили на- ЗР2Ю-Ад-14 у співвідношенні 5:1 згідно до тради- ступним чином. Різні концентрації імунізованої ційного способу, описаного у Копіег, о. апа міївтеїп мишачої сироватки, мишачої гібридомної надосад- 1975, Маїмшге, 256:495 для синтезу гібридом. Про- кової рідини або очищених анти-людських ІЇІ-12 дукти злиття поміщали у планшетах на 96 лунок у антитіл попередньо інкубували протягом однієї селекційні середовища, що містили азасерін та години при 37 градусах С з 150 пг/мл рекомбінант- гіпоксантін при густину клітин селезінки у 2,5х105 ного очищеного супо 1-12 р70 у 100 мкл повного на лунку. Через сім-десять днів після злиття спос- середовища ЕРМІ у планшеті з мікротитром (0- терігали макроскопічні гібридомні колонії. Супер- дно, 96-лунок, Совіаг). ФГА бласти були ізольова- натанти з кожної лунки, що містили гібридомні ко- ні, як описано вище, однократно промивали та лонії, аналізували за допомогою БШЗА на повторно суспендували у повному середовищі наявність антитіл до І--12 р70 (як описано у Прик-

ВРМІ до досягнення клітинної густини у 1х107 клі- ладі 111.А.1). Супернатанти, в яких підтвердилось тин/мл. ФГА бласти (100 мкл 1х107 клітин/мл) до- зв'язування 1-12 р70 потім аналізували для ви- давали до антитіло плюс суміш рекомбінантних значення рі40-специфічності за допомогою конку- супо 1-12 р70 становила 75мкг/мл) та інкубували У Прикладі 1.1.А.2). Супернатанти, що проявили протягом 18 годин при 37 градусах С. Після інку- І/-12 ра0-специфічну активність, потім аналізува- бації, 150 мкл надосадкової рідини, вільної від ли щодо здатності до нейтралізації ІІ -12 в аналізі клітин, видаляли з кожної лунки, та рівень проду- ФГА бластів до ІРМ-у (як описано у Прикладі кованого людського ІЄМ-у вимірювали за допомо- 1.1.6).

Таблиця 8

Дані щодо злиття та скринінгу після імунізацій мишей людським 1-12

Мишачий штам, | Кількість | Кількість лунок, де Кількість анти Кількість кло-| Кількість р40 | Кількість суб- використаний | покритих | відбулось зростан- П-12 клонів нів р40- нейтралізуючих| клонованих для злиття лунок ня специфічних клонів клонів пн Шш ши шшни ин ли сти

Ваб/с-3 | 480 | 457. | 50 | пз | 6 | 5

Приклад 1.2.С: Визначення та характеристика 1.2.8 та 1.2.С, та здатні зв'язувати 1-12 р40, конк- анти-людських І-12р40 моноклональних антитіл ретно та особливо такі, що мають значення ІСво в

Антитіла, що продукують гібридоми та зв'язу- аналізі ФГА бластів у 12 нМ або менш, ніж 12 нМ, ють 1-12, синтезовані відповідно до Прикладів були розмножені та клоновані шляхом обмеженого протеїнової А афінної хроматографії, як описано у розведення. Напом, БЕ. апа Іапе, 0. 1988 "Апііродієв: А

Гібридомні клітини були розвинені у середо- Гарогаюгу Маппиа!". Здатність очищених тАб інгі- вищах, що містили 1095 Іом/у (дб ембріональної біувати активність ІЇ/-12 визначали за допомогою бичачої сироватки (Нусіопе 25НЗО151, І одап, ОТ). аналізу ФГА бластів, як описано у Прикладах 1.1.0

У середньому, 250 мл кожних гібридомних супер- 2 та 1.1.2 3. У Таблиці 9 показані значення ІСво, натантів (одержаних з клональної популяції) зби- одержані з аналізу бластів ФГА для десяти монок- рали, концентрували та очищували за допомогою лональних антитіл.

Таблиця 9

Нейтралізація 11-12 анти І-12р40 мишачими моноклональними антитілами пн и СИ: ПОЯ ПООЄ ТА ПО

Афінності зв'язування моноклональних анти- кладі 1.1.8. У Таблиці 10 показано афінність де- тіл із рекомбінантним очищеним людським 1-12 сяти моноклональних антитіл, описаних вище для р70 визначали за допомогою поверхневого плаз- людського 1-12 р7б0. монного резонансу (ВіасогеФ), як описано у При-

Таблиця 10

Афінність анти І--12р40 мишачих моноклональних антитіл для 11-12 р70

Приклад 1.2.С.1:Видоспецифічність мишачих 122000 у РВ5, що містив 0,195 ВБА; 50 мкл/лунка моноклональних анти-людських ІІ-12р40 антитіл додавали, та інкубували планшети протягом 1 го-

Для визначення того, чи визнають десять мо- дини при кімнатній температурі. П'ятдесят мікролі- ноклональних антитіл, описані вище, мишачу ІІ - трів розчину ТМВ (Зідта Ж Т0440, 51. І оці5, МО.) 12, провели два аналізи ЕГІЗА. По-перше, був додавали до кожної лунки та інкубували протягом проведений прямий аналіз ЕГІЗА шляхом безпо- 10 хвилин при кімнатній температурі. Реакцію при- середнього покривання планшетів ЕГІ5ЗА з 5 пиняли шляхом додавання 2М сірчаної кислоти. мкг/мл рекомбінантних очищених мишачих 1-12 Показники з планшетів знімали спектрофотомет- (Рергоїесп). Мишачі-анти-людські І--12 р40 тАБб рично при довжині хвилі у 450 нм. одержували при різних концентраціях у діапазоні По-друге, був проведений непрямий аналіз від З до 200 нг/мл у РВ5, що містить 0,195 ВБА ЕСІЗА шляхом покриття планшетів ЕГІЗА 5мкг/мл (бідта, 5. оці5, МО). 50 мкл кожного розведення козлячого антимишачого дсСс, с фрагмент- антитіла додавали до покритих планшетів ЕГІЗА специфічного антитіла (Ріегсе Ж 31170, КосКіапа, та інкубували протягом 1 години при кімнатній те- ІУ. Мишачі анти-людські 1-12 р40 тАБ одержува- мпературі. Лунки тричі промивали РВ5, що містив ли при різних концентраціях у діапазоні від 0,1 до 00596 Гмееп-20. Анти-мишаче ІДС-НКР антитіло 100 нг/мл у РВ5, що містив 0,195 ВЗА; 50 мкл кож- (КЖ та О ЖНнНАРО07, Міппеароїї5, ММ) розводили ного розведення антитіла додавали до покритих планшетів ЕГІ5А та інкубували протягом 1 години 21126, КосКіапа, ІС.) розводили 1:20000 у РВ5, що при кімнатній температурі. Лунки тричі промивали містив 0,195 ВБА; додавали 50 мкл/лунку та інку-

РВ5, що містив 0,0595 Тмееп-20. Рекомбінантні бували планшети протягом 1 години при кімнатній очищені мишачі І/-12 (Ргергоїесп) розводили до температурі. Планшети тричі промивали РВ5, що 0,2 мк/мл у РВ5, що містив 0,195 В5А; до планше- містив 0,0595 Тууееп-20. П'ятдесят мікролітрів роз- тів додавали 50 мкл/лунка та інкубували протягом чину ТМВ додавали до кожної лунки та інкубували 1 години при кімнатній температурі. Лунки тричі протягом 10 хвилин при кімнатній температурі. промивали РВ5, що містив 0,0595 Тмееп-20. Біо- Реакцію припиняли шляхом додавання 2М сірчаної тинільоване анти-мишаче 1-12 антитіло (К тао й кислоти. Показники з планшетів знімали спектро-

ВАРА419) розводили до 0,2 мкг/мл у РВ5, що містив фотометрично при довжині хвилі у 450 нм. 0,195 ВБА; 50 додавали мкл/лунку, та інкубували Результати прямого та непрямого аналізів планшети протягом 1 години при кімнатній темпе- ЕСІЗА, що були проведені на десяти моноклона- ратурі. Лунки тричі промивали РВ5, що містив льних антитілах, наведені у Таблиці 11. 005956 ПГлуееп-20. Стрептавідін НКР (Ріегсе ж

Таблиця 11

Зв'язування анти 1-12 мишачих моноклональних антитіл із мишачим 1-12р40

Приклад 1.2.0: Визначення амінокислотної по- зворотного праймерів (Рептепіаз іІйе зЗсіепсев, слідовності варіабельного регіону для кожного Напомег МО). Послідовності варіабельних важких мишачого анти-людського 1-12 р40 тАб або варіабельних легких ланцюгів десяти монок-

Для кожного визначення амінокислотної послі- лональних антитіл, що описані у Прикладі 1.2.С, довності, приблизно 10х109 гібридомних клітин наведені у Таблиці 1. були ізольовані шляхом центрифугування та об- Приклад 2: Рекомбінантні анти-людські ІІ-- роблені для ізоляції загальної кількості РНК за 12р4аб0 антитіла допомогою Тті2о! (Сірсо ВНАЇ/ЛІпмігодеп, Сапвбрай, Приклад 2.1: Конструювання та експресія ре-

СА.) відповідно до інструкцій виробника. Загальну комбінантних химерних анти людських 1І-12р40

РНК піддавали синтезу першого ланцюга ДНК з антитіл використанням системи для синтезу першого лан- ДНК-кодуючий константний регіон важкого ла- цюга "Зирегзсгірі Ріг5і-Зігапа Бупійпезів Зувієт" нцюга мишачих анти-людських І--12р40 монокло- (Іпийгодеп, Сагізрайд, СА) у відповідності до інстру- нальних антитіл 3057, 8Е1, 1А6б та 104 заміщали кцій виробника. Оїїдо(аТт) використовували для КДНК фрагментом, що кодує константний регіон початку синтезу першого ланцюга для селекції людського ІДО1, що містить 2 амінокислотні мута- полі(А)" РНК. Продукт першого ланцюга кКДНК по- ції у шарнірному регіоні, шляхом гомологічної ре- тім ампліфікували за допомогою ПЦР з праймера- комбінації у бактерій. Ці мутації є заміщеннями ми, розробленими для ампліфікації варіабельних лейцин-аланін у положенні 234 (БО нумерація) та регіонів мишачого імуноглобуліну (Ід-Ргітег Зеїв, заміщенням лейцин-аланін у положенні 235 (І ипа

Момадеп, Мадізоп, УМ). ПЦР продукти розчиняли в еї аї,, 1991, 9. Іттипої., 147:2657). Константний агарозному гелі, видаляли, очищували та потім регіон легкого ланцюга кожного з цих антитіл був субклонували за допомогою набору "ТОРО заміщений людським каппа константним регіоном.

СіІопіпд' у вектор рс2.1-ТОРО (Іпмігодеп, Повнорозмірні химерні антитіла тимчасово екс-

Сагізрад, СА) та трансформували у ТОР10 хімічно пресували у СО5 клітини шляхом сумісної транс- компетентні Е. соїї (Іпийгодеп, Сагізрай, СА). Для фекції легкого та важкого ланцюгів химерних ідентифікації клонів, що містили інсерт, здійсню- КДНК, лігованих у плазмід експресії рвоз вали ПЦР колонії для трансформантів. Плазмідну (Мігивпіта апа Мадайа, Мисієїс Асіаз Резеагсп

ДНК ізолювали з клонів, що містили інсерт, за до- 1990, Мої 18, руд 5322), що містив сигнальну послі- помогою набору "ОІАргер Міпіргер" (Оіадеп, довність МЕРІ ЗУМ-РГМАІПКОМОС (БО 10 Мо:

МаїІепсіа, СА). Інсерти у плазмідах секвентували в 110) важкого ланцюга та сигнальну послідовність обох ланцюгах для визначення ДНК послідовнос- МОМЕеЕМРАОІГ ОСІ ГІМУЄРОБАКС (5ЕО 10 Мо: 111) тей варіабельних важких або варіабельних легких легкого ланцюга. ланцюгів з використанням М13 прямого та М13

Клітинні супернатнанти, що містили рекомбі- сефарозної хроматографії, а зв'язане антитіло нантне химерне антитіло, були очищені за допо- елюювали шляхом додавання кислотного буферу. могою Протеїн А сефарозної хроматографії, а зв'- Антитіла нейтралізували та піддавали діалізу у язане антитіло елюювали шляхом додавання РВ5. кислотного буферу. Антитіла нейтралізували та Очищені химерні анти-людські І--12 монокло- піддавали діалізу у РВ5. нальні антитіла потім перевіряли щодо їх здатності

КДНК важкого ланцюга, що кодує химерні 307 до інгібування продукування ІЕМ-у, індукованих ІГ-- (описані вище) ко-трансфектували з кКДНК химер- 12, за допомогою ФГА бластів, як описано у Прик- ного легкого ланцюга 104 (обидва з яких були лі- ладах 1.1.0 2 та 1.1.23. У Таблиці 12 наведені говані у рРВО5 вектор) у СО5 клітинах. Клітинні значення ІСвхо, одержані з аналізу бластів ФГА для супернатанти, що містили рекомбінантне химерне п'яти химерних антитіл. антитіло, були очищені за допомогою Протеїн А

Таблиця 12

Нейтралізація 1-12 анти!/-12 химерними антитілами

Приклад 2.2: Конструювання та експресія (одержаного з веб-сайту МОВІ) для кожного 3' кін-

СОВ-імплантованих анти- людських 11І-12р40 ан- ця. титіл Приклад 2.2.2; Конструювання сок-

СОВ-імплантовані анти-людські 1-12 антитіла імплантованих антитіл синтезували наступним чином Іп віїйсо конструйовані СОК-імплантовані анти-

Приклад 2.2.1: Відбір каркасів людських анти- тіла, описані вище були сконструйовані де помо з тіл використанням олігонуклеотидів. Для кожного ва-

Кожна генна послідовність мишачих варіабе- ріабельного регіону КДНК, 6 олігонуклеотидів, кож- льних важких та легких ланцюгів (як описано у ний з яких складався з 60-80 нуклеотидів, були

Таблиці 3) була лінеарізована окремо по відно- розроблені для взаємного перекривання 20-ма шенню до варіабельного важкого ланцюга зарод- нуклеотидами на 5' та/або 3' кінці кожного олігону- кових колоній клітин людського імуноглобуліну 44 клеотиду. У реакції гібридизації, сполучали усі 6 або послідовностей варіабельного легкого ланцю- олігонуклеотидів, кип'ятили, та гібридизували у га зародкових колоній клітин 46 (одержаних з присутності аМТР. Потім додавали ДНК полімера- вебсайту МОВІ Ід Віаві зу І, великий (Кленова) фрагмент (Мем/ Епдіапа пЕрулумли. порі. піт. піп дом/ідріазиугеїіпемеїд.піті.). з Віоїаре ЯМО210, Вемепеу, МА.) для заповнення використанням програмного забезпечення "Месіог гепів у, приблизно, 40Бр, між олігонуклеотидами,

МТ". Послідовності людських варіабельних доме- що перекривались. Потім проводили ПЦР для ам- нів, що мають найбільшу загальну гомологію із пліфікації всього гену варіабельного регіону з ви- вихідними мишачими послідовностями (а також користанням двох крайніх праймерів, що містили найбільшу гомологію у положеннях, що, як відомо, послідовності, що виступали, комплементарні до є важливими для зв'язування антигенів) (Му/еІ5спої, сайту множинного клонування у модифікованому

М. апа Кгайизв5, У. Мешпоаз Іп МоїІесшаг Віоіоду, Мої векторі рВО5 (Міг2и5піта, 5. апа Мадаїа, 5., (1990) 207) були відібрані для кожної послідовності важ- Мисієїс асіаз Незеагсі Мої! 18, Мо. 17)). кого та легкого ланцюгів для забезпечення каркас- Продукти ПЦР, одержані з кожного набору них (БУМ) 1, 2 та З послідовностей для СОК- КДНК, відділяли на агарозному гелі, а смугу, що імплантації. Ідентифікацію придатного ЕМ/4 регіону відповідала прогнозованому розміру кКДНК варіа- людських варіабельних важкого та легкого ланцю- бельного регіону виділяли та очищували. Варіабе- га (також відомого як "з'єднуючий" регіон) прово- льний важкий регіон вводили у каркас фрагмента дили шляхом окремої лінеаризації кожного ЕМУ4 КДНК, що кодував константний регіон людського регіону мишачого важкого та легкого ланцюга за ІДО1, який містив 2 амінокислотні мутації (ЗЕО ІЮ допомогою з'єднуючих послідовностей важкого Ме: 3) у шарнірному регіоні, шляхом гомологічної ланцюга зародкових ліній клітин людського імуног- рекомбінації у бактеріях. Цими мутаціями є замі- лобуліну 6 та легкого ланцюга зародкових ліній щення лейцин-аланін у положенні 234 (БО нуме- клітин 5 у базі даних МСВІ. Іп віїсо конструкцію рація) за заміщення лейцин-аланін у положенні повних СОК-імплантованих антитіл здійснювали 235 (Гипа еї аї., 1991, 9. Іттипої., 147:2657). Варі- шляхом заміщення СОК послідовностей людсько- абельний регіон легкого ланцюга вводили у каркас го варіабельного домену (одержаного з веб-сайту людського каппа константного регіону (ЗЕО ІО Мо:

МСВІ) з мишачими СОК-послідовностями (одер- 4) шляхом гомологічної рекомбінації. Колонії бак- жаними з гібридом) з додаванням ЕМ/4 регіону терій ізолювали, а плазмідні ДНК екстрагували;

КДНК інсерти секвенували повністю. Правильні

СОвВ-імплантовані важкі та легкі ланцюги, що від- піддавали діалізу у РВ5. Дев'ять СОК- повідали кожному з антитіл, ко-трансфекутвали у імплантованих антитіл описані у Таблиці 5. клітини СО5 для тимчасового продукування пов- Здатність очищених СОК-імплантованих анти- норозмірних СОК-імплантованих анти-людських тіл до інгібування активності 1-12 була визначена

І/-12 антитіл. Для 1Аб, рво5 вектори, що містили за допомогою аналізів бластів ФГА, як описано у

КДНК імплантованого важкого ланцюга 1Аб та Прикладах 1.1.С 2 та 1.1.С 3. Афінності зв'язуван-

КДНК імплантованого легкого ланцюга 104, були ня очищених СОК-імплантованих антитіл до реко- ко--рансфековані у СО5 клітини (послідовність мбінантного очищеного людського 1І-12р70 визна- легкого ланцюга 1Аб, коли була імплантована, чали за допомогою поверхневого плазмонного була ідентична до послідовності легкого ланцюга резонансу (Віасогеф)), як описано у Прикладі 1.1.8. 104). Клітинні супернатанти, що містять рекомбі- У Таблиці 13 наведені значення ІСзо, одержані з нантне химерне антитіло, очищували за допомо- аналізів бластів ФГА, а афінність дев'яти СОВ- гою Протеїн А сефарозної хроматографії, а зв'яза- імплантованих антитіл описано у Таблиці 7 для не антитіло елюювали шляхом додавання людського 1ІІ--12р70 та І--12р70 яванських макак. кислотного буферу. Антитіла нейтралізували та

Таблиця 13

Нейтралізація 11-12 анти І-12р40 СОК-імплантованими антитілами та афінність анти-І--12р40 СОкК-імплантованих антитіл для людських та супо І--12р7о0 антитіла антитіла

Швидкістьасоціаці(1/М'є) | Бах | 0 | дохо | бижіої | 3105 | Тзхі

Швидкістьдисоціації(1/с) | 8710" | 0 | 905 | ї4х10" | 5Ббхо5 | похо

Ковфм) 77777771. 101 | 022 | 023 | 043 | 0,078

АМ,ІСво(нМ)Ниї-12 7777777 | 28 | 0 | 056 | 024 | 19 | 059

ДАМ ІСво(нМ)Супої-12 | 46 | 0 | 12 | 07 | 11 | ола

Приклад 2.3: Конструювання олюднених анти- клад, від мутацій, інерцій, або делецій залишків, людських 1-12 антитіл конструюють з родових структурних темплат та

Олюднення анти-людських 1-12 антитіл про- енергії, вдосконалених для забезпечення відпо- водили наступним чином. відності вже перенесених модельних координат.

Приклад 2.3.1: Моделювання гомології за до- Ця розрахункова протеїнова структура може бути помогою СОК-імплантованих антитіл додатково вдосконалена чи застосована безпосе-

Моделювання гомології використовували для редньо у модельних дослідженнях. З даної заявки ідентифікації залишків, унікальних для послідов- має бути очевидним, що якість модельної структу- ностей мишачих антитіл, що, як прогнозується, є ри визначають шляхом точності розбіжностей між критичними для структури антидетермінанти анти- реперним білком та білком-мішенню та точності, з тіла (СОК). якою здійснено лінеаризацію послідовностей.

Моделювання гомології є комп'ютерним спо- Для мишачих послідовностей 1А6, 8Е1 та 104, собом, в якому для білка генерують приблизні для ідентифікації придатних реперних структур тривимірні координати. Джерелом вихідних коор- застосовували комбінацію пошуку ВІ А5Т та візуа- динат та направляючою для їх подальшого удо- льного контролю. Реперною структурою, вибраною сконалення є другий білок, що є реперним, для для 1Аб та 104, була РОВ положення 1УКН. Для якого відомі тривимірні координати та послідов- 8ЗЕ1, реперною структурою важкого ланцюга була ність якого пов'язана із послідовністю першого РОВ положення 1Р13, а репером легкого ланцюга білка. Співвідношення між послідовностями двох була 1МЕХ. Ідентичність послідовностей у 2595 білків використовують для одержання відповіднос- між реперними та амінокислотними послідовнос- ті між реперним білком та білком, для якого коор- тями вважається мінімальною необхідною для динати є бажаними, білком-мішенню. Первинні спроби гомологічного моделювання. Лінеаризації послідовності реперного білка та білка-мішені лі- послідовностей створювали вручну, а модельні неаризують із координатами ідентичних частин координати створювали за допомогою програми двох білків, які переносять безпосередньо від ре- Уаскаї! (див. Реїгеу, О., Хіапо, 7., Тапо, С.І.., Хів, Ї., перного протеїну до протеїну-мішені. Координати Сітреїем, М., Міго5, Т., Зою, С.5., соїайзтйй- для частин двох білків, що не співпадають, напри- ЕРізсптап, 5., КегпуїзКу, А., ЗспіІеззіпдег, А., еї аї.

2003. Овіпд тиіріє зігосішге аіїдптепів, Таві тоадеї мишачого залишку в олюдненому антитілі (тобто,

Бийаїпо, апа епегодеїйс апаїувів іп й гесодпйоп для мутації у вихідний вид). апа потоіоду тоавеїїпд. Ргоїєїпе 53 (Зиррі. 6): 430- Дослідження комп'ютерної моделі призвело до 435). припущення, що в антитілі ТАб.1, залишки 1, 12,

Первинні послідовності мишачого та людсько- 36 та І 67 легкого ланцюга (104.1 МКВ3З) є важли- го каркасних регіонів вибраних антитіл мають зна- вим контактом між СОР та, тому, передбачається, чну ідентичність. Положення залишків, що відріз- що мишачі залишки мають бути збережені у цьому няються, є кандидатами для включення мишачого положенні. У випадку 104.1, залишки НІ та НУ8 залишку в олюднену послідовність для зберігання важкого ланцюга (104.1 МН2-70), а також 2 та І 67 ефективності зв'язування мишачого антитіла, що легкого ланцюга (104.1 МКВ3З) були ідентифіковані спостерігається. Перелік каркасних залишків, що як положення для мутації у вихідний вид. відрізняються у людських та мишачих послідовно- Приклад 2.3.2: Синтез гібридних антитіл стях, створювали вручну. Для визначення корисного впливу на СОК-

Вірогідність того, що даний каркасний залишок імплантований ланцюг (МН, МІ. або обидва з них) може впливати на зв'язуючи властивості антитіла, каркасних мутацій до вихідного виду, були сконс- залежить від його близькості до СОК залишків. труйовані "гібридні" антитіла шляхом спарювання

Тому за допомогою модельних структур, залишки, СОвВ-імплантованих Н або Г/ ланцюгів із відповід- що відрізняються у мишачих та людських послідо- ними химерними мишачими Н або ГІ ланцюгами з вностях, розподіляли по типам відповідно до відс- наступною ко-трансфекцією у СО5 клітини. У Таб- тані від них до будь-якого атому у СОЕК. Ті залиш- лиці 14 наведені МН та Мі. амінокислотні послідов- ки, що знаходились у межах до 4.5 А до будь-якого ності гібридних антитіл 1Аб6.3, 1А6.4, 1А6.7, 1А6.8,

СОР атому, ідентифікували як найбільш важливі 104.Ата 104.5. та рекомендували як кандидатів для зберігання

Таблиця 14: Амінокислотні послідовності гібридних антитіл

ЗЕОІО Ме. |Ділянкабілка | Послідовність///7111111111С 00111111 1123456789012345678901234567890.Й.-:Ч (10) (МН2-26/ІН6 ЕК) ЗТЗОМОМУЗУЛКОРРОКАЇ ЕУМСАНІМАМО (7 (МН2-70/3НВ ЕКЗ) СОМУУМРБІ-К5ЕІ ТІЗКОТЗКБОУМІТМ п (МН2-26/4Н6 ЕКЗ) ТММОРМОТАТУУСАВЕТЕУМХАМО УМ 2) МН2г-70/Н6 ЕВ4 вОостТУТУ55

ЗУМУММТОТРКЕГ М5АСОКМТІТСКАЗО5

НИ і

ТОМРОРЕТОБОУСТОЕТЕТІЗТМОАЕОІ.

АМУБСОООУМЗРУУТЕСОСТКІ ЕІКК кон ІНШ

ЗІ5ОМОМЗУЛКОРБЗОКОЇ ЕУМІ АНІМУМО 37 МН 1А6.4 СОМУУМРБІ КО ТІЗКОТЗАМОМЕСКІА

ТМОТАЮТАТУУСАВЕТЕУМУАМОУМУСО

ОТ5УТУЗ5 ст) 12 У ЕММТО5РАТІ ЗМ8РОСЕВАТІ ЗСКАЗО5 (28) (С2//Ка ЕВ2) М8МОМАМУУООКРООАРВЦ ТУХАЗМВУ (29) (І2//Ка ЕВЗ) ТОІРАКЕ5О5О5ОТЕЕТІ ТІ55І ОБЕОБА 26) (В3//КА ЕК) МУХУСООрУМеРМУТЕСОСТКМЕКА

ОМТІКЕБОРОЇІКРООТІ 5СТОБЕ5СЕБІ. 5ТЗОМОУВУМКОРЗОСКОГЕУМІ АНІММО 37 МН 1А6.7 СОМУУМРЗІ.КЗОЇТІЗКОТ5КМОМРІ КІА

ТУМОТАОТАТУУСАККТеЕММУАМОУМІСО оТЗУТУ55 оз) взмкя. що ОІММТО8РОЗВІ АУБІ СЕКАТІМСКАВО5 (24) (ВЗ/УКА ЕВ) МЗМОМАУМУООКРООРРКИ УМ АЗМНКУ (25) (ВЗ/ЛКА ЕКЗ) ТОМРОВЕ5О5О5СТОЕТІТІЗ5ІОАЕОМ 26 взка ЕБА АМчУУСООПОУМЗРУУТЕОССТКМЕІКК 67 МН 166.8 ЕМТКЕБОРАГЇМКРТОТІТІТСТЕБОЕ5І, (6) (МН2-703Н ЕК) 5Т5БОМСУБУЛКОРРОКАЇЕУМЦ АНІМЛЛЮ (7) (МН2-7019Н6 ЕК) СОМУУМРЗСКЗАСТІЗКОТЗКМОУМСТМ (8) (МН2г-70/ІН6 ЕКЗ) ТМЯІМОРМОТАТУУСАККТЕММУАМО УУУ 98) (мнН2г-70Н ЕКА4 сОосттУТУЗ5

ЗМУМТОТРКЕЇ І МЗАСОБКМТІТСКАБОВ

М5МОМАУМЕООКРООБРКИ ІУУАВЗМВУ 38 МІ. 1Аб.8 ТОМРОВЕТОБОМОТОРЕТЕТІЗТМОАЕОІ.

АМУЕСООПУМЗРУУТРОСОТКІ БІКА

65 УН 104.4 ЕМ'П/КЕБОРАЇ МКРТОТІ ТІ ТСТЕБОЕБІ. (6) (МНІ-700Н6 ЕК) ЗКЗММОМУБУМКОРРОКАГЕУМІ АНІУУУО (7) (МН2-70/9УН6 ЕК) ООКУУМРБІ КК ТІЗКОТЗКМОУМІ ТМ (8) (МН2-70/ІН6 ЕВЗ) ТММОРМОТАТУУСАВАСІВЗАМОМУСО 9) (МН2г-709Н6 ЕКЯ) оТТУТУ55

ЗУУММТОТРКЕ У5АСОКМТІТСКАБОВ 36 Мі 1р44 М5МОМАУМХООКРООБРКИ ІУМАВМКУ й ТОУРОКЕТОБОМОСТОЕТЕИІЗТУКАЕОГА

МУЕСООВУМЗРУТЕОСОТКІ БІКК

ОМТІКЕБОРОПГ ОРЗОТІ ІТС.

ЕКБУМОМУЗУМКОРЗОКОСЇ ЕМ АНІУУО

МН 104.5 ООКУУМРБІКОАТІЗКОРЗАМОМЕСКІТ

ЗМОТАРААТУУСТеКОІКЗАМОУМСОО

Т5МТУ5З

Оз) (вва ев З ОІММТО5РОЗВІ АУВІ СЕВАТІМСКАЗО5 ій 4 вз/ка ЕВо МВМОМАУУУДОКРООРРКИ ТУМАЗМВУ (зе) (ВЗ лука ГРЗ) ТОУРОВЕ5О5С5ОТОЕТІ ТІЗ5І ОДЕОМ 28 вЗ/Ка ЕРА АМУУСООрУМ5РУТЕОСОТКМЕ КК

Гібридні антитіла очищували за допомогою СОВ-імплантованих тАб (Приклад 2.3.1) для ви-

Протеїн А афінної хроматографії (Приклад 1.2.С) значення змін активності та афінності, що відно- та аналізували активність за допомогою ФГА бла- сяться до конкретного ланцюга МН або Мі. Так чи стного аналізу, описаного у Прикладах 1.1.С2 та інше, олюднений ланцюг МН або Мі. є оптималь- 1.1.23. Кінетичні вимірювання здійснювали за до- ним, та був проаналізований за допомогою спосо- помогою ВіАсоге, як описано у Прикладі 1.1.8. У бів, описаних у Прикладі 2.3.1. У деяких випадках,

Таблиці 15 наведені значення Ко та ІСзо гібридних залишки, що не знаходились у межах відстані у 4.5 антитіл. Дані щодо активності та афінності, одер- А? від будь-якого атому СОР, додатково піддавали жані за допомогою гібридних тАБб порівнювали із мутаціям до вихідного виду. даними, одержаними за допомогою відповідних

Таблиця 15

Нейтралізація 1-12 анти-ІІ-12р40 гібридними антитілами та афінність анти-іІІ -12р40 гібридних антитіл 104.4 104.5 1Аб.З 1А6.4 1А6.7 1А6.8

Швидкість асоціації (1/М:с 2,8х105 1,9х105 1,1х105

Швидкість дисоціації (1/с 2,1х1075 3,1х105 2,8х107 тх10

КО (нм) 0,074

АУ.ІСво(нМ) пиїС-12 0,053 0,068

АХ. ІСво(нМ) супо 1-12 0049 | 72 | 035 | 0,06

Приклад 2.3.3: Конструювання каркасних му- Для створення олюднених антитіл у СОК- тацій до вихідного виду у СОК-імплантованих ан- імплантовані антитіла були введені каркасні мута- титілах ції до вихідного виду з використанням мутагенних праймерів та набору "ОцікСпапде Мийні 5йе- тивних клонів за допомогою набору "Оіадеп

Оігесієй Миїадепевзів" (Змнаїйадепе Я200513, їа Махіргер" (Оіадеп, МаІепсіа, СА), а варіабельні та

Чопа, СА) відповідно до інструкцій виробника. Для константні регіони секвентували повністю. кожного з СОР-імплантатів були сконструйовані Як описано вище, декілька додаткових комбі- різні комбінації мутацій до вихідного виду для ви- націй мутацій до вихідного виду були сконструйо- значення відносної важливості кожного залишку. вані для кожного з СОК-імплантованих антитіл.

Легкий ланцюг 1А6.1 МКВЗ варіант 1 (І11-0--55, 12- Характеристику синтезованих олюднених антитіл,

І-М, Г36-У-Е, 167-5-»у), 104.1 МКВ3З варіант 2 як описано вище, здійснювали, як описано нижче у (11-0-5, 136-М-Е, 167-5-»у), 104.1 МКВ3 варі- Прикладі 2.3.4. ант 3 (11-0-»5, 167-5-»у), 104.1 МКВЗ варіант 4 Приклад 2.3.4. Експресія та характеристика (Г2-І-М, 167-95-57), та 104.1 МКВ3З варіант 5 (І 67- олюдненихантитіл о 8-У). Важкий ланцюг 104.1 МН2-70 варіант 1 (Н1- Вектори експресії РВО5 (див. Приклади 2.1 та

Е»О, НеЗ3-А-ОТ), та 104.1 МН2-70 варіант 2(Н93- 0 ркасні мутації до та, хідного виду, були ма:

ОТ). Мутовані одно ланцюгові ДНК були потім трансфектовані у СО5 клітини для тимчасового уаноформовані в ультракомпетентні г важа. продукування повнорозмірних олюднених антитіл. й ос. Для визначення клонів, що мали лажа- Амінокислотні послідовності МН та Мі регіонів ні мутації, здійснювали секвенування колоній на олюднених антитіл наведені у Таблиці 16. трансформантах. Плазмідні ДНК ізолювали з пози-

Таблиця 16: Послідовності олюднених антитіл

Г5ЕОІЮ Ме. |Ділянкабілка |Послідовність 11

ПО 1123456789012345678901234567890.:С:/ К2К.С є) Мнто неви) | ЕМТІАЕВСРАГУКРТОТІ ТІ ТСТЕВОРВІ ТВО (7) (УН2-ТОІНе ЕН) МОСУ5БУМКОРРОКАЇ ЕМ АНІМЛОСОМУУМР (в) (МН ТОЛІНе ЕВ) 5ІК5ВІ ТІЗКОТЗКМОММІТМТММОРМОТАТУ 9) МН2-ТОІНе ЕКА) ХСАВВТЕУМХАМОУУМООСТТУТМ55 5УММТО5РОБІАМ5І СЕКАТІМСКАЗОВЗУЗМО 79 МІ 1АбвЗ МАУУРООКРООРРКІ ПУХАЗМВУТОУРОРЕ5 й О5СУСТОЕТІ ІЗ ОЛЕОМАМУУСООрУМОР

МТЕОООБТКМЕІКА

ЕМТ.КЕЗОРАЇ МКРТОТІ ТІ ТСТЕБОгБІ ЗКУ мн 104.6 МОУЗУМКОРРОКАГЕУМЛ АНІУМ/ЮООКУХУМРО й ІЇК5АТІЗКОТЗКМОУМІ ТМТММОРМОТАТУУ

СТАКОСІКЗАМОМУУСОСТТУТУЗО

ОМУМТОЗРОЗБІ АМ5І СЕВАТІМСКАВОЗУ5М

В мі 41604,6 ОМАМУУООКРООРРКІ ПУХАЗМКУТОМУРОВЕ і ЗО5БУСТОЕТ ІЗ ОАЕОМАУУУСООВОоХМ

РМТЕООСТКМЕІКАК

ЕМТІВЕБСРАЇМКРТОТІ ТІ ТСТЕ5ОЕБІ ВКМ ун 104.7 МОМБУЛКОРРОКАЇ ЕУМ АНІУМОООКУУМР5 й І К5КСТІБКОТ5КМОУМІ ТМТММОРМОТАТУУ

СТеЕКСІКБАМОУМУУСОСТТУТУВЗ

РУММТО5БРОЗБІ АМ5І СЕКАТІМСКАБОВУЗМ

Мі 104.7 ОМАМ/УООКРООРРКІ ПУМАЗНКУТОМРОКЕ " ЗОо5ОХУОТОРТІТІ55Г ОАЕОМАУУУСсОврУМЗ

РМУТЕСООСТКМЕІКА

ЕМТІКЕЗОРАІЇМКРТОТІ ТІ ТСТЕ5ОЕ5І ККУ ун 1048 МОМЗУЛКОРРОКАЇ ЕУМ АНІММОСОКУУМР5 7 СКЗАСТІЗКОТЗКМОУМІ ТМТММОРМОТАТУХ

СТВВСІВЗАМОМУСОСТТУТМ55 рІММТО5РОБІ АМ5І СЕВАТІМСКАбОВМЗМО ен ИН й О5О5ОТОЕТІТІЗ5І ОДЕОМАМУУСООрУМОР

УУТЕОСОСТКМЕІКВ

ЕМТ.РЕБЗОРАЇУКРТОТІЛІТСТЕ5ОСЕБІ ККУ ун 104.9 МОМБУЛКОРРОКАЇ ЕМ АНІУМОВОКИУМР5 й СК5АГТІБКОТ5КМОММІ ТМТММОРМОТАТУУ

СТеЕВСІКЗАМОУУМСОСТТУТУ55

ОММТО5РОЗБІ АУБІ СЕКАТІМСКАВОВУЗМО вт Мі 1049 МАМУООКРООРРКИ ІУУАЗМЕУТОМРОВЕ5 й О5ОМОСТОРТІ ТІЗ5І ОАЛЕОМАУУУСООВУМ5Р

МТЕСОСТКМБІКВ

Г8ЕОІО Ме. |Ділянкабілка |Послідовність.///-/:// 50. 1001 123456789012345678901234567890

ЕМКІМЕБОООІ МОРОЗІ КІ ЗСААЗОЕТЕ5О 88 МН 8Е1.3 УОМУМЛ/КОАРОКОЇ ЕУУМА5ІЗБ5 ОМА й ТМКОКЕТІЗКрОКМТСМСОММ5І КТЕОТАМУ

УСАКМРУМСОСТТУТУБ5

ОІММТО5РБЗБІ ЗАБМСООКУ ТТ СКАВОММОТМ

МІ ВЕ13 МАУМХМООКРЕКАРКЗИУ5ЗАЗНЕХЗОСУРОВЕ5 й о5БОБОСТОЕТІТІЗБІ ОРЕОБАТУУСООУМУР

ІТЕСОСТКМвІКА

ЕМО! МОБСАЕУККРОАБУКУМЗСКАТОУ ТЕМО ун 3с7.3 УМЕМУВОАРСОСІ ЕМУМОСЕЗНОЗОЗТМУМ

Й ЕКЕКОКУТМТАОЗЗТМТАММЕЇ АЗСКЗООТА

МУУСАКЕВЕКОСМОУМСОСТТУТУ55

ЕІММТО5РАТІ 5М5РОЕКАТІ ЗСКАБОВУЗМНО мі 3673 МАМГТООКРООАРЕ! ПУХУАЗМВУТОМРОВЕ5 й О5ОБОТЕЕТІ ТІЗБГО5ЕОБАМУУСОООУ55Р

М5ЕООСТКМБІКК

Амінокислотні положення, що мутували до вихідного виду у МН та МІ СОВ-імплантованих антитіл, на- ведені у Таблиці 17.

Табницв ТИ Мутокані до вихідного виду амінокиевотв. присутні шо опюдмевих знтятіпах (Назвавнтнтив Мун уУУН ОО 0 Му КО 00000000

ТТАб.З і відбутн ОБО і ! | ам ! гра уся !

ГЕ ОНА БНАУ І

ГІБЯУ НІК І

НЕ ее і відбутнЕ м що ПІДУ у

С8Е1З ін плоду : ! ІНОЗ г А, ! ! ! ее : онзют-хм ПВА В ! ! НТ Те А і : ! НІВ :

Клітинні супернатанти, що містили олюднені антитіл із рекомбінантними очищеними людськими антитіла, очищували так, як описано у Прикладі І--12р70 визначали за допомогою ВіАсоге, як опи- 1.2.С. Здатність очищених олюднених антитіл до сано у Прикладі 1.1.8. У Таблиці 18 наведені зна- нейтралізації 1-12 іп міго визначали за допомогою чення ІСзо, одержані з ФГА бластного аналізу, та

ФГА бластного аналізу, як описано у Прикладах значення Ко, одержані з ВіАсоге. 1.1.62 та 1.1.С23. Афінності зв'язування очищених

Таблиця 18

Нейтралізація 1-12 анти-І.-12р40 олюдненими антитілами та афінність антм-1І-12р40 олюднених антитіл 104.6 104.7 104.8 104.9 1А6.9 8Е1.3 37.3

Швидкість асоціації (1/М:с 4,8х105 12х105 | 5,3х105 | 3,5х105 | 1,3х105 | 7,8х105

Швидкість дисоціації (1/с їохто3 | Т,5х10

КО (нм)

АУ.ІСво(нМ) пш--12 0,014 0,095 0,035

ДАЕСетснН і НЕСЕ ай вій вай й вай тні тні тні тні тні тні

Приклад 2.4: Синтез додаткових олюднених Олюднення варіабельних регіонів мишачих анти-людських 1-12 антитіл моноклональних антитіл ЗЕ! та 1Аб проводили, в основному, відповідно до процедури Опееп, С, єї аі., Ргос. Май. Асай. Осі. ОБА 86: 10029-10033 руйована молекулярна модель варіабельних регі- (1989). По-перше, визначали людські М сегменти, онів 8ЕЇ за допомогою комп'ютерних програм що мали значну гомологію із МН або МГ. амінокис- АМВОО та ЕМСАО (Гемійї, М. 9. Мої. Віо!. 168: 595- лотними послідовностями мишачих моноклональ- 620 (1983)) Потім, виходячи з пошуків гомології них антитіл. По-друге, послідовності гіперваріабе- щодо послідовностей людських М та у сегментів, льного регіону (СОМ) разом із каркасними були відібрані МН сегмент НАЗО!1 (Оее, Т., єї аї., 9. амінокислотами, важливими для зберігання струк- Ехр. Мей. 175: 831-842 (1992)) та У сегмент 9УН4А тур СОЕ, імплантували у вибрані людські каркасні (Рамеїси, .М., єї аї., Сеї! 27: 583-591 (1981)) для послідовності. Додатково, людські каркасні аміно- забезпечення каркасів для 8Е1.4, 8Е1.5 та 8Е1.6 кислоти, які були визначені як рідкі у відповідні варіабельних регіонів важкого ланцюга. Для 8Е1.4, підгрупі М регіону, були заміщені консенсусними ЗЕ1.5 та 8Е1.6 варіабельних регіонів легкого лан- амінокислотами для зниження потенційної імуно- цюга, використовували МГ. сегмент НК137 (Вепіеу, генності. Одержані в результаті олюднені монок- О.Г, апа карріне, Т.Н., СеїІ 32: 181-189 (1983)) та У лональні антитіла були експресовані у клітинах, сегмент УКа2 (Ніеїег, РА, еї аї., у. Віої. Спет. 257: очищені та характеризовані так. Як описано вище. 1516-1522 (1982)). Ідентичність амінокислотних

Олюднені моноклональні антитіла 8Е1.4, каркасів ЗВЕ1 МН та акцепторних людських НАЗО1 8ЗЕ1.5, 8Е1.6, 1А6.10, 1А6.11 та 1А6.12 синтезува- та Унаі сегментів становила 84595, тоді як ідентич- ли наступним чином. ність між 8ЕЇ Мі та акцепторними людськими

Приклад 2.4.1: Синтез олюднених моноклона- НКІ137 апа укКаА сегментами с 6795. Акцепторні по- льних антитіл ЗЕ1.4, 8Е1.5, ЗЕ1.6 слідовності важкого та легкого ланцюгів людського

Для олюднення 8Е1 варіабельних регіонів, ка- антитіла, використані для синтезу додаткових ркаси людського М регіону, що були використані як олюднених анти-людських 1-12 антитіл, наведені акцептори для СОЕ або 8Е1, вибирали, виходячи з у Таблиці 19 та 20. гомології послідовностей. По-перше, була сконст-

Таблиця 19: Акцепторні послідовності важкого ланцюга, використані для додаткових олюднених антитіл

ЗЕСОІО Ме. |Ділянкабілка Послідовність. 001123456789012345678901234567890

ЕН МОНА ЕВ СУТІНЕБОРАУКРТО ТТ ТОТІУВЕВ

МвОЛІНА ЕВ2 УМЕОРРОКАГЕУМ А

ЕСТІЗБКОТЗБКМОУУТМТУММОРМОТАТ

ЕІ Мбомня ЕКЗ УУСАВ

МбОЛІНа ЕВА УМвОСТІУТУ55

ЕН НАЗОТНА ЕВ ЕМОСУЕБОССІМОРОСБІНІ ВСДАБО

46 00101010 НАЗОМОНА ЕВ МЛ/ВОАРОКСІ ЕМУУЗ 17 НАЗО1ЛІНА ЕВЗ КЕТІЗКОМАКМБІ М ОММЗІКАЕОТАМ

УХСАВ

95000000 | НАЗОТЛІНА ЕКА МСОостІУТМ55

Таблиця 20: Акцептор легкого ланцюга, використаний для додаткових олюднених антитіл вві Ме. |Ділянкабілка |Послідовність 01 1 1123456789012345678901234567890

ПАЗВЛКА ЕВ ПІОМТО5РБЗБІ БАЗМООБМТІТС 34000000 1 П-ЗВЛКА ЕВ? УУМООКРОКАРКІ ШУ ав П-ЗВЛІКА ЕВЗ сугенівоБоБОТоТЕТІВБІОРЕСІА (260 Н-ЗВЛІКА ЕБА ЕОСОТКМЕЇКА 300000 | НКІЗ7ЛКА ВІ ПІОМТО5РББІ БАБУСОКМУТІТС

НК137//К4 ЕВ2 М/ЕООКРОКАРКБИУ 32 НКІЗ7//КА ЕВЗ СМРІКЕЗОЗОБОТОЕТІ ЛІЗІ ОРЕСЕ

АТУУС

2600 |НКІЗ7ІКА ВА ЕОООТКМЕЇКВ.

Приклад 2.4.2 : Конструкція 8Е1.4, 8Е1.5 та Олігонуклеотиди гібридизували та збирали за до-

ЗЕ1.6 антитіл помогою системи "Ехрапі Нідп Ріаеійу РСК

Гени варіабельних регіонів важкого та легкого зЗувіет" (Боспе Оіадповіїсь Согрогайоп, ланцюгів були сконструйовані та ампліфіковані з Іпаіапароїї5, ІМ), з одержанням повнорозмірного використанням, приблизно, 30 синтетичних оліго- продукту. Одержаний в результаті продукт амплі- нуклеотидів, що перекриваються, довжина яких фікували шляхом полімеразної ланцюгової реакції знаходиться у діапазоні, приблизно, від 20 до 40 (ПЦР) за допомогою системи "Ехрапа Нідп Ріаешу основ, за опублікованим способом (Коийага, .-М., РСЕ Зузіет". ПЦР-ампліфіковані фрагменти були еї аї., Мисієїс Асій5 Невз. 32: М/176-М180 (2004)). гель-очищені, дигестовані за допомогою Мін! та

Хваї, та гель-очищені, та субклоновані, відповідно, довностей ОУН та УК людських колоній клітин, від- у модифікованій формі Ма1.О.Т (Соїе, М.5., вї аї., повідно. Послідовність сигнальних пептидів в

У. Іттипої. 159: 3613-3621 (1997); та див. нижче) олюдненому МН міні екзоні являла собою та рук (Со, М.5., евї аї., У. Іттипої!. 148: 1149-1154 МЕРОСЇІ ЗУМІ РІ МАП'КОаМОС (5ЕО ІО Мо: 110), а в (1992)). олюднених МУ. міні-екзонах -

У каркасних положеннях, в яких комп'ютерні МОМеМРАОГ ГО ГГ УМЕРОЗАКОС (ЗЕБО ІО Мо: 111). моделі передбачали значний контакт з СОЕК, амі- Гени 8Е1.4, 8Е1.5 та 8Е1.6 МН та Мі. були сконс- нокислоти з мишачих М регіонів були заміщені ори- труйовані шляхом зборки синтетичних олігонукле- гінальними людськими каркасними амінокислота- отидів, що перекриваються, та ПЦР способів, доб- ми. Це було здійснено на залишку 49 для важких ре відомих з рівня техніки. ланцюгів 8ЗЕ1.4 та 8Е1.5, та додатково, на залишку Приклад 2.4.3: Синтез олюднених моноклона- 74 важкого ланцюга 8Е1.6. Для легких ланцюгів льних антитіл ТАб.10,1А6.11 та 1А6.12

ЗЕ1.5 та ЗЕ1.6, заміщені були зроблені на залишку Для олюднення 1Аб6.10, 1А6.11 та 1Аб6.12 варі- 46, та, додатково, на залишку 60 для 8Е1.5. Карка- абельних регіонів, був застосований загальний сні залишки, що рідко зустрічались в відповідних підхід, забезпечений у даному винаході. По- положеннях підгруп людського М регіону, були за- перше, була сконструйована молекулярна модель міщені людськими консенсусними амінокислотами 1А6 варіабельних регіонів за допомогою комп'юте- у цих положеннях. Це було зроблено у залишку 78 рних програм АВМОО та ЕМСАО (ГГ емій, М., у. Мої. для обох важких ланцюгів 8Е1.5 та 8Е1.6, та у за- Віо!. 168: 595-620 (1983)). Потім, виходячи з пошу- лишку 36 для легких ланцюгів ЗЕ1.5 та 8Е1.6. ків гомології по відношенню до послідовностей

Сайт-спрямований мутагенез синтетичних М- людських М та У сегментів, МН сегмент МбО генів був здійснений з використанням набору (Зспгоєдег, 9Уг., Н.МУ. апа УУапд, 9.М., Ргос. Маї). "ОсцікСпапде |! Зпйе-Оігесієй Миїадепезів Кі Асад. 5сі. ОБА 87: 6146-6150 (1990)) та )У сегмент (бігаїадепе, Га доПа, СА), відповідно до рекомен- УнаА (Вамеїсни, .).М., еї аї., Се! 27: 583-591 (1981)) дацій виробника. Специфічні мутації у гені ЗЕ1.6 були вибрані для забезпечення каркасів для варі-

МН були створені шляхом мутагенезу олігонуклео- абельних регіонів 1А6.10 та 1А6.12 важкого лан- тидів та способів ПЦР, добре відомих з рівня тех- цюга. Для 1А6.10, 1А6.11 та 1А6.12 варіабельних ніки. Стадію ПЦР здійснювали за допомогою регіонів легкого ланцюга, були використані МІ. сег- "РшюОйга НЕ ОМА Роїутегазе" (5ігагадепе), відпо- мент 1ПІ-ЗА (МапНеїтег"-Гогу, А., еї аї., У. Ехр. Мед. відно до рекомендацій виробника, шляхом інкубу- 174: 1639-1652 (1991)) та У сегмент УКаА (Ніегтег, вання при 957"С протягом 30 секунд з наступним Р.А., єї аї., У. Віої. Спет. 257: 1516-1522 (1982)). проведенням 18 циклів при 957С протягом 30 се- Ідентичність каркасних амінокислот між ТАб МУН та кунд, 557С протягом 1 хвилин та 68"С протягом 1 акцепторними людськими МбО та ОНА сегментами хвилини, з наступною інкубацією при 68"С протя- становила 74905, тоді як ідентичність між 1А6 Мі. та гом 7 хвилин. Після дігестії за допомогою Орпі, Е. акцепторними людськими ІІІ-3ЕК та УКА сегментами соїї штаму хімічно компетентні клітини "ТОР1О0" становила 7195. Послідовності антитіл генерували, (Іпийгодеп Согрогаїйоп, Сагізрайд, СА) трансформу- як описано у Прикладі 2.3.3. вали невеликою частиною ПЦР продукту. Мініпреп У каркасних положеннях, в яких комп'ютерна

ДНК з перевіреною послідовністю дігестували за модель передбачала значний контакт із СОЕ, амі- допомогою Мін! та Хвраї, а утворений в результаті нокислоти з мишачих М регіонів були заміщені на рестрикційний фрагмент. Що містив мутований вихідні людські каркасні амінокислоти. Це було

ЗЕ1.6 МН ген, був субклонований у модифікований здійснено на залишку 68 для важких ланцюгів рма1.0.Тї вектор експресії, описаний нижче. 1А6.10, 1А6.11 та 1А6.12. Для легких ланцюгів,

Аналогічно, специфічні мутації у гені ЗВЕ1.5 МІ. заміщення були здійснені у залишках 36 та 67 для були створені з використанням мутагенез них олі- 1А6.11 та 1Аб6.12, та, додатково, у залишку 60 для гомерних та ПЦР способів, добре відомих з рівня 1А6.12. Каркасні залишки, що рідко зустрічались у техніки. Стадію ПЦР здійснювали, як описано ви- їх відповідних положеннях у відповідних підгрупах ще з наступним дігестуванням за допомогою Мівої людського М регіону, були заміщені людськими та Храї, одержаний в результаті рестрикційний консенсусними амінокислотами в цих положеннях. фрагмент був субклонований у вектор експресії Це було здійснено у залишках 10, 46, 83, 84, 86 та рУК. Мутації перевіряли шляхом нуклеотидного 87 важкого ланцюга, та у залишку 62 легких лан- секвенування. цюгів ТАб.10, ТАб.11 та 1А6.12. Сайт-спрямований

Гени, що кодували олюднені МН або Мі, були мутагенез був виконаний за допомогою мутаген- розроблені як міні-екзони, що включали сигнальні них олігомерів та ПЦР способу, як описано вище. пептиди, сигнали донорів сплайсованих фрагмен- Амінокислотні послідовності одержаних у ре- тів та відповідні рестрикційні ферментні сайти для зультаті регіонів МН та МІ. синтезованих додатко- наступного клонування у вектор експресії ссавців. вих олюднених анти-1І--12 антитіл наведені у Таб-

Сигнали донорів сплайсованих фрагментів у МН та лиці 21.

МІ. міні-екзонах були одержані з відповідних послі-

Таблиця 21: Послідовності додаткових олюднених антитіл

Г5ЕОІО Ме. |Ділянкабілка |Послідовність 111111

ГО 1и123456789012345678901234567890.Й.:ШЧ

ЕМП КЕБОРСІЇ МКРТОТІ ТІСТІ МОБ 5

Т5ОМОУЗУЛКОРРОКОЇЕУМ АНМММОО

МН 1Аб6.10 ОМУУМРБІ КО ТІЗКОТЗКМОУМІ КЕТВМ

ОРМОТАТУУСАККТКУМУАМОУУУСОСТІ.

УтУ55

РІОМТО5РБЗБІ БАЗМОДРЕМТІТСКАБОЗМУ

МІ 1Ав0 ЗМОМАМУООКРОКАРКІ ПУМАЗМКУТО

Й МРОКЕБОБОХУОТОЕТЕТІЗ5СОРЕПІАТУХ

СОООУМЗРУМТЕСОСТКМЕЇКК

ЕМТКЕЗОРОСІУКРТОТІ ТІ. ТСТІ ХОБІ 5

ТЗОМСУЗУЛКОРРОКОЇ ЕМ АНІММОС

МН 1дб6.11 ОМУХМРЗІ КБОГСТІЗКОТЗКМОУМІ КІТВМ

ВРУОТАТУУСАВКТЕУММХАМОУУУСОСТІ.

УТУЗ5

РІОМТО5РБ5УБІ БАБМОРЕМТІТСКАЗОВМ 101 МІ. 1АвЛІ ЗМОМАМУСОКРОКАРКІ У АЗМКУТО

МРУЗВЕБО5ОУОТОЕТЕТІЗІЦОРЕОІАТУХ

СОООУМЗРУМИТЕСССТКУЄІКВ і

ЕМТЕКЕБОРОЇ МКРТОТІ ЛІ ТСТІ МСЕ 5

Т5ОМОУЗУЛКОРРОКОЇ ЕУ/ АНІМАЛОО

МН 1Аб6.12 ОМУУМРЗСКОГСТІЗКОТЗКМОУМІ КОТОМ

ОРМОТАТУУСАККЕТКУМУАМОУУУСОСТІ.

УТ

ПІОМТОЗРЗБІ БАБМОДЮКМТІТСКАЗОВУ

МІ 1А642 ЗМОМАМРООКРОКАРК И ІУХАЗМКУТО

МРОКЕ5О5ОСУСТОЕТЕТІЗБІОРЕОІАТУУ

СсООбУМЗРУУТЕСОСТКУВІКК

ЕМО! МЕБОСОІ МОРООБІ КІ ЗСААБОБТ

МН 8Е1.4 ЕБОМОММУУУМКОАРОКОЇ ЕМ/УАБІЗБ5О55

МУУАОТМКОКЕТІЗКОМАКМТІ МСОММ5І.

КАЕОТАМУУСАКМРУУУСОСТІ ТЗ

ПІОМТО5РБІБІ БАЗМООКМ ТТ СКАБОММ

МІ 8Е1А СТММАУУМООКРОКАРКСІ ІУЗАБЗНКУВО

МРБКЕБ5О5О5ОТОЕТІ ТІЗБІОРЕОБАТУУ

СООУМ5УРІТЕСОСТКМЕ КА

ЕМО МЕЗО МОРОСБІ КІ ЗСААЗОЕТ

С:

МІУУАОТМКОВЕТІЗВОМАКМТІ МІОМІ.

ВАЕОТАМУУСАВМРУУУСОСТІ УТУ55

ОМТОЗРБЗБІ БАЗМООКМТІТСКАБОМУ

107 МІ. 8Е1.5 СТММАМ/УООКРОКАРКОС ІУ5АВЗНКУВО

УМРОКЕБОБОБОТОЕТІ ТЗІ ОРЕОРАТУ

ХСООУМЗУРІ ТЕСОСТКМЕІКА

ЕМО! МЕЗОООСІ МОРОЗІ КІ ЗСААБОБТ

СНИ сс:

Ії МІУУАОТУКОКЕТІЗКОАКМТІ МІ ОМ

КАЕОТАМУУСАКМРУУУСОСТІ МТУ

РІОМТО5РБЗБІ БАБМОЮКУТІТСКАБОМУ

МІ 8Е1,6 СТММАМУООКРОКАРКСІ ІУЗАЗНКУЗО й МРУВЕЗО5ЗОЗСТОЕТІТІЗ5ІОРЕОБАТУУ

СООУМЗУРІ.ТЕОСОТКМБІКК

Каркасні амінокислотні положення, що були мутовані, наведені у Таблиці 22.

Таблиця 22: Положення каркасних мутацій в додаткових олюднених антитілах

НАвА - б І675-У нев А - о наз т- Кк нВа М -1

Нав М - 5

НВМ 2 У й

НАбА- о 621- БЕ нев - о 167 5-2 У незт-к

НВ М - наб м -» 5

НВ? М-» М

НІВА - о (60 5-0 нев -о 1621-х» Е

Не т-к 67 5- У нВа М -х1.

НВ М -» 5

Не? М-х м нт -т 46 5-0 н785-т 46 5-0 во 5-0 нта Мм- о 1465-00

НТ 5-т

Приклад 2.4.4: Експресія додаткових олюдне- (5Зігаїадепе), як описано вище. Після дігестування них антитіл або РСЕ генерування продукту за допомогою Мпеї

Аллотип гену людського гама-1 константного та Еаді, одержаний у результаті рестрикційний регіону у плазміді експресії рмМа1.О.ТІ був модифі- фрагмент був субклонований у модифікований кований з С1т (7,а) у 7, не-а аллотип. Спосіб ПЦР рма1.0О0.Тї вектор експресії описаний вище, що перекривання та продовження (Нідиспі, К., у ""СК містив 0356Е та І 358М мутації та Мне! сайт у ін-

ТесПппоЇоду: Рііпсіріеє апа Арріїсайопе ог ОМА троні між шарнірним та СН2 екзонами. Мутації

Атрійїсайноп", біосКкіюп Ргезз, Мем ок (1989), рр. перевіряли шляхом нуклеотидного секвенування. 61-70) був використаний для здійснення амінокис- Амінокислотні послідовності олюднених МН та лотних заміщень 0356Е та І 358М (пронумерова- МІ. міні-екзонів наведені у Таблиці 21. Одержані в них відповідно до ЄЮ вказівника Кабаї, Е.А., єї аї., результаті М генні фрагменти були клоновані, від- "Ведипепсез ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві", 5" повідно, у модифіковану форму рма1.О.Тї та рук. еа., Майопа! Іпвійшев ої Неаййй, ВеШезаа, МО Клітинну лінію людських нирок 293Т/17 (1991)), з використанням праймерів мутагенезу. (Атегпісап Туре Сиїйште СоїІесіп, Мапаззив, МА)

Стадію ПЦР здійснювали за допомогою набору зберігали у ОМЕМ (Середовищі Ігла, модифікова- для сайт-спрямованого мутагенезу "ОцікСпапде ІІ" ному за Дульбекко) (Віому/пінакег, У/аікегеміПе, МО), (Зігаїадепе). Після дігестування або РСЕ. генеру- що містив 1095 ембріональної бичачої сироватки вання продукту за допомогою 5ІЇїЇ та Еаді, одержа- (ЕВ5) (НуСіопе, Годап, ОТ), 0,1 мМ МЕМ замінної ний у результаті рестрикційний фрагмент був суб- амінокислоти (Іпмігодеп Согрогайоп) та 2 мМ 1/- клонований у модифіковану форму рма1.о.ті глутаміну (Іпмігодеп Согрогаїййоп), що у цій заявці вектору експресії, що містив Мпеї! сайт рестрикції у має назву середовища 293, при 37"С в 7,595 СО» інтроні між шарнірним та СН2 екзонами. інкубаторі. Для експресії та очищення моноклона-

Мутації у гені константного регіону нижнього льних антитіл після тимчасової трансфекції, кліти- шарнірного регіоні гама-1 були також синтезовані ни 293Т/17 інкубували у ОМЕМ, що містив 1095 шляхом сайт-спрямованого мутагенезу. Конкретні ЕВ5 з низьким вмістом Іде (НусСіопе), 0,1 мМ МЕМ амінокислотні заміщення І234А та 1235А (прону- замінної амінокислоти та 2 мМ І-глутаміну, що у меровані відповідно до ЄЮ покажчика Кабаї, Е.А., цій заявці має назву середовища 293 з низьким еї аІ-) були одержані за допомогою мутагенезних вмістом ІдО. олігонуклеотидів. Стадію ПЦР здійснювали за до- Тимчасову трансфекцію клітин 293Т/17 прово- помогою за допомогою набору для сайт- дили з використанням Ліпофектаміну 2000 спрямованого мутагенезу "ОцікСпапде И" (Іпийгодеп Согрогаййоп) відповідно до рекомендацій виробника. Приблизно 2х10" клітин на одну тран- терігали рівні експресії, що становили, приблизно, сфекцію поміщали у Т-175 колбу у 50 мл середо- 30-50 мкг/мл. Проби, що були позитивними, очи- вища 293 та вирощували усю ніч до досягнення щували так, як описано вище. конфлуентності. Наступного дня, 35 мкг плазміду Приклад 2.4.5: Очищення додаткових олюдне- легкого ланцюга та 35 мкг плазміду важкого лан- них антитіл цюга сполучали з 3,75 мл гібридомного-5ЕМ Моноклональні антитіла 8Е1.4, 8Е1.5 та 8Е1.6 (НБЕМ) (Сіте Тесппоїодіеєз, КоскКміШе, МО). В окре- ІДСб1/к очищували з виснажених культуральних мій пробірці, 175 мкл реагенту Ліпофекгамін 2000 супернатантів за допомогою Протеїн А сефарозної та 3,75 мл НЗЕМ сполучали та інкубували протя- колонки наступним чином. Культуральні суперна- гом 5 хвилин при кімнатній температурі. 3,75 мл танти з тимчасових трансфекцій збирали шляхом суміші Ліпофектамін 2000-Н5ЕМ обережно пере- центрифугування та стерильно фільтрували. рн мішували із 3,75 мл суміші ДНК-Н5ЕМ та інкубува- відфільтрованих супернатантів регулювали шля- ли при кімнатній температурі протягом 20 хвилин. хом додавання 1/50 об'єму 1 М цитрату натрію, рн

Середовище, що покривало клітини 2931/17, ви- 7,0. Супернатанти пропускали через 1 мл колонку даляли та заміщали середовищем 293 з низьким "НіТтар Ргоїєїп А НР" (СЕ НеаїШсаге Віо-5сієпсев5 вмістом до 293, а потім комплекси Ліпофектамін- Согрогаїййоп, Різсаїажау, МУ), яку попередньо врів-

ДНК додавали по краплям у клітини, обережно новажували 20 мМ цитрату натрію, 150 мМ масі, перемішували шляхом обертання, а клітини інку- рН 7,0. Колонку промивали тим самим буфером, а бували протягом 7 днів при 37"С у 7,595 СОз інку- зв'язане антитіло елюювали 20 мМ цитрату на- баторі перед тим, як зібрати супернатанти. Тимча- трію, рН 3,5. Після нейтралізації шляхом додаван- сові трансфектанти, що продукували 8Е1.4, 8Е1.5 ня 1/50 об'єму 1,5 М цитрату натрію, рН 6,5, поєд- та 8Е1.6, одержували, як описано вище. нані фракції антитіл концентрували до «0,5-1,0

Експресію олюднених ЗЕ1.4, 8Е1.5 та 8Е1.6 мг/мл з використанням 15 мл відцентрового фільт- антитіл вимірювали за допомогою сендвічового рувального пристрою "Атісоп ОКга-15" (30000 да- аналізу ЕГІЗА. Планшети Махізогр ЕГІЗА (Мипс льтон МУУСО) (МіПроге Согрогайоп, Ведтога, МА).

МаїЇде Іпіегпайкопа!ї, Коспезіег, МУ) покривали на Потім проби піддавали стерилізаційному фільтру- всю ніч при 4"С 100 мкл/лунка при розведенні ванню з використанням 0,2 мкм шприцевого філь- 111000 АЯіпіРиге специфічними поліклональними тру "Асгодізєс" із мембраною "НТ Тийтгуп" (Раї антитілами козлячого анти-людського ІдС Есу- Согрогацйоп, Еабві Ніїї5, МУ). Концентрації очищених ланцюга (Часкзоп ІттипоКезеагсп І арогайюгіев5, антитіл визначали за допомогою УФ спектроскопії

Іпс., МУезі Сгоме, РА) в 0,2 М натрій карбонат- шляхом вимірювання поглинання при 280 нм (1 бікарбонатному буфері, рН 9,4, промивали проми- мг/мле1,4 Агво). вним буфером (РВ5, що містив 0,195 Тууееп 20), та 5О5-РАСЕ аналіз (методом електрофорезу у блокували протягом 1 години при кімнатній темпе- поліакриламідному гелі з додецилсульфатом на- ратурі 300 мкл/лунка блокуючим буфером трію) за невідновлюючих умов показав, що антиті- "БирегВіоск" у ТВ5 (Ріегсе Спетісаи! Сотрапу, ла мали молекулярну масу у, приблизно, 150-160

Коскога, І. Після промивання промивним буфе- КО. Аналіз за відновлюючих умов показав, що ан- ром, проби, що містили 8Е1.4, 8Е1.5 або 8Е1.6, титіла містили важкий ланцюг з молекулярною відповідно розводили у буфері ЕГІЗА (РВ5, що масою у, приблизно, 50 КО, та легкий ланцюг з містив 195 ВБА та 0,195 Туееп 20), та 100 молекулярною масою у, приблизно, 25 КО. Чисто- мкл/лунка були нанесені на планшети ЕГІЗА. Як та антитіл становила більш, ніж 95905. стандарт використовували олюднене Ідс1/к анти- Приклад 2.4.6: Характеристика додаткових тіло даклізумаб (РОЇ. ВіоРпагта, Іпс.). Після інку- олюднених антитіл за допомогою конкурентного бування планшет протягом 1 години при кімнатній аналізу ЕГІЗА температурі та промивання промивним буфером, Планшети "Махізогр ЕГСІЗА" (Маїде Мипс зв'язані антитіла детектували з використанням 100 Іпегпайопа!) покривали на усю ніч при 4"С 100 мкл/лунка розведення 1:1000 НЕР-кон'югованих мкл/лунка 1,0 мкг/мл людського І--12 у 0,2 М на- специфічних поліклональних антитіл козлячого трій карбонат-бікарбонатному буфері, рн 9,4, про- анти-людського каппа легкого ланцюга (Зошйпет мивали промивним буфером (РВ5, що містив 0,190

Віоїесппоіоду Авзосіацез, Іпс., Віппіпдапат, А). Тмееп 20), та блокували протягом 1 години при

Після інкубування протягом 1 години при кімнатній кімнатній температурі 300 мкл/лунка блокуючим температурі та промивання промивним буфером, буфером "ЗирегВіоск" у ТВ5 (Ріегсе СПпетісаї! проявлення забарвлення здійснювали шляхом Сотрапу). Після промивання промивним буфе- додавання 100 мкл/лунка АВТ5 пероксидазного ром, суміш біотинильованого 8Е1 (кінцева концен- субстрату/пероксидазного розчину В (КРІ., Іпс., трація 0,8 мкг/мл) та додавали конкурентне анти-

Сайпегзриго, МО). Після інкубування протягом 7 тіло (8ЕЇ, або 8Е1.4, або 8Е1.5, або 8Е1.6) у хвилин при кімнатній температурі, проявлення подвійній кількості, починаючи з кінцевої концент- забарвлення припиняли шляхом додавання 50 рації у 100 мкг/мл та серійно З3-кратного розведе- мкл/лунка 2950 щавлевої кислоти. Поглинання вимі- ного) у 100 мкл/лунка буферу ЕГІ5А. Як ізотипний рювали при 415 нм за допомогою мікропланшетно- контроль, 100 мкл/лунка використовували 100 го рідера МегзаМмах (МоіІесшаг Оемісез5 Согрогайоп, мкг/мл моноклональних антитіл мишачого Ідс1/к

Биппумаїе, СА). Культуральні супернатанти, одер- (Мига?9) або олюдненого ІдС1/к (Нига7?9) у бу- жані від тимчасово трансфектованих клітин фері ЕГІ5А. Як неконкурентний контроль, викорис- 293Т/17 аналізували за допомогою ЕГІЗА щодо товували 100 мкг/лунка буферу ЕГІЗА. Після інку- продукування 8Е1.4, 8Е1.5 та 8Е1.6. Типово спос- бування планшет протягом 1 години при кімнатній температурі, та промивання промивним буфером, шляхом додавання 50 мкл/лунка 290 щавлевої зв'язані антитіла детектували з використанням 100 кислоти. Поглинання вимірювали при 415 нм. мкл/лунка 1 мкг/мл НКР-кон'югованого стрептаві- Афінність ЗЕ1.4, 8Е1.5 та 8Е1.6 до людського діну (Ріегсе Спетіса! Сотрапу) у буфері ЕГІБА. І/-12 аналізували за допомогою конкурентного

Після інкубування протягом 1 години при кімнатній аналізу ЕГІЗА, як описано вище. З біотинільова- температурі, та промивання промивним буфером, ним 8Е1 конкурували як 8ЕЇ1, так і три олюднені було здійснено проявлення забарвлення шляхом версії, в залежності від концентрацій. У Таблиці 23 додавання с 100 мкл/лунка АВТ5 пероксидазного наведені значення ІСхо 8Е1, 8Е1.4, 8Е1.5 та 8Е1.6, субстрату/пероксидазного розчину В (КРІ., Іпс.)- одержані за допомогою комп'ютерного програмно-

Після інкубування протягом 5 хвилин при кімнатній го забезпечення "ОгарпРай Р'гізт" (СгарпРай температурі проявлення забарвлення припиняли Боймаге Іпс., Зап Оієдо, СА).

Таблиця 23

Зв'язуючі властивості ЗЕ1.4, 8Е1.5 та 8Е1.6 антитіл

Значення, що представляють ІСво (мкг/мл), бу- гою Протеїн А афінної хроматографії, як описано у ли необхідні для конкурування із 0,8 (мкг/мл) біо- Прикладах 2.2.2 та 1.2.С, відповідно. Ці очищені тинільованим 8Е1 антитілом. тАбр були охарактеризовані за значеннями ІСво та

Антитіла 1Аб.10, 1Аб.11, 1А6.12, 8Е1.4 та Ко відповідно до Прикладів 1.1.8 та 1.1.0 2. У

ЗЕ1.5 також були синтезовані з використанням Таблиці 24 показані зв'язуючі властивості 1Аб6.10, способів, описаних у Прикладі 2.3. Антитіла були 1Аб.11, 1Аб6.12, 8Е1.4 та 8Е1.5. експресовані у СО5 клітини та очищені за допомо-

Таблиця 24

Кінетичні параметри та параметри активності додаткових олюднених антитіл

АМІСво(нМ)пи-12 | 05 |Данівідсутн| 0,088 | 12 | 8 4 |Дані відсутні)

У даний винахід цілююом включені шляхом по- І арогаюгу Ргев5, МУ. Моїв. 1-3. (ІЗВМ 0-87969-309- силання методи, добре відомі у галузі молекуляр- б). ної біології. Ці методи включають, але не обмежу- ММіппаскег, БЕ. Бгот Сбепе5 То Сіопев: ються наведеними, методи, описані у таких Іпігодисіоп То бепе Тесппорду (1987) УСН публікаціях: Рибіїзпеге, МУ (у перекладі Ног:5ї ІрбеІдашйв5). 634

А!йзицреї, Е.М. еї аї., ейв., Зпоп Ргоїосоїв5 Іп рр. (ІЗВМ 0-89573-614-4).

МоїІесшаг Віоіоду (40 Еа. 1999) удопп Умієу апа Посилання:

Бопв, МУ. (ІЗВМ 0-471-32938-Х). Патенти США и апа М/еїпег єдз., Сіопіпд апа Ехргезвіоп 4,816,397,

Месіогз Того (епе Бипсіоп о Апаїузів (2001) 4,816,567,

ВіоТесппіднез Ргевз5. УУезірогоцудй, МА. 298 рр. 4,880,078; (ІЗВМ 1-881299-21-Х). 5,985,309,

Копіептапп апа Оиреі! еа5з., Антитіло 5,223,409;

Епдіпеегппд (2001) Зрііпдег-Мепад. Мем/ Хогк. 790 5,225,539; рр. (ІЗВМ 3-540-41354-5). 5,258,498;

ОЯ, МУ. та 5.8. Ріітгозе, Ргіпсіріе5 ої Сепе 5,290,540,

Мапіршаїйоп: Ап Іпігодисіоп То Сепеїйс Епдіпеегіпд 5,290,540, (За Ба. 1985) Віаскме!й оЗсіепійс Рибіісайопв, 5,403,484;

Вовіоп. З5щшаїез іп Місгобріоіоду; М.2:409 рр. (ІЗВМ 0- 5,427,908; 632-01318-4). 5,516,637;

ЗатрбгоокК, 9. еї а. едв., МоїІесшаг Сіопіпд: А 5,530,101;

І арогаюгу Маппаї! (24 Еа. 1989) Со бргіпд Нагбог 5,571,698; 5,580,717;

5,585,089, УМО 00/56772 А1 5,658,727; МО 91/17271, 5,693,762, МО 92/09690, 5,714,352, МО9937682 Аг, 5,723,323, МО 92/15679, 5,733,743 МО 92/01047, 5,750,753; МО 2002097048 Аг, 5,766,886, МО 9524918 А1, 5,780,225; РСТ/а891/01134, 5,817,483, МО 99/25044, 5,821,047; МО 97/29131, 5,824,514, МО 98/31700, 5,855,913, МО 99/15154; 5,874,064, МО 99/20253, 5,934,272, МО 92/19244, 5,939,598, МО 92/19244, 5,969,108; МО 00/37504, 5,976,862, МО 00/56772, 5,985,320, МО 91/05548, 5,985,309, МО 91/09967, 5,985,615, МО 91/09967; 5,998,209, МО 92/02551; 5,624,821 МО 92/22324; 5,723,323, МО 96/20698, 5,763,192, МО 97/29131; 5,814,476, МО 01/83525; 6,075,181, МО 2003016466 Аг, 6,091,001, МО 2005100584 А2; 6,114,598 МО 03/035835; 6,130,364 МО 90/02809, 6,180,370, РСТ/О591/05939, 6,204,023, РСТ/О591/09630, 6,350,861, РСТ/О594/01234, 5,585,089, РСТ/О596/18978, 6,914,128 РСТ/О598/16280, 4,526,938, МО 92/20791, 4,980,286, МО 90/05144 А1; 5,912,015; МО 00 09560, 4,946,778, МО 00/037504, 5,916,597; МО 02072636, 5,128,326; МО 91/10737, 5,565,352); МО 91/10741, 5,679,377; МО 92/01047, 5,989,463; МО 92/18619, 5,225,539; МО 93/11236, 5,565,332, МО 94/02602, 5,698,426; МО 95/15982, 5,714,350, МО 95/20401, 5,807,715, МО 96/33735, 6,019,968, МО 96/34096 6,019,968, МО 97/32572, 5,627,052, МО 97/32572, 5,916,771, МО 97/44013, 5,648,260, МО 97/44013, 6,699,658, МО 98/16654,

Патентна заявка США МО 98/24893, 09/428,082 МО 98/31346,

Патентна публікація США МО 98/31346, 20020137134, МО 98/50433, 20040018590, МО 99/45031, 20030186374, МО 99/53049, 20050042664 А! МО 99/543428,

О52006104968 МО 99/66903,

Іноземні патенти МО 99/66903,

МО 97/115327, МО 90/14424,

МО 90/14430, Еооїе апа Му/іпіег (1992), у. Мої. Віо!. 224:487-

МО 90/14443, 499,

МмОг2004078140, Еиснз еї а!. (1991) Віо/Тесппоіоду 9:1370-1372,

Європейські патенти МоеМо: Еизв5, еї а!., (1996) У Іттипої. 157:1261-1270,

ЕР 229,246, Сатай еї аї. (1991) Віо/Тесппоіоду 9:1373-

ЕР 239,400, 1377,

ЕР 239,400; Сієде, В. апа Юисгиїх, А. Ваїтей, СтугіайПгайоп

ЕР 519,596, ог Мисієїс Асіа5 апа Ргоїеїпв, а Ргасіїса! Арргоаси,

ЕР 519,596; гпа єа., рр. 20 1-16, Охюга Опімегейу Ргев5, Мем

ЕР 592,106; ХогКк, Мем Хогк, (1999),

ЕР 592,106; СіШіеб5 еї аї., (1989) 9. Іттипої. Меїпоаз

ЕР 1,176,195; 125:191-202, сав89/01334, Соадзрієї! еї аї., 1993, Сіїпіса! Рнаптасу 12:488- сав91/01134, 505; авог/01755; Сюооазоп, іп Медіса! Арріїсанйопе5 ої СопігоїІєй

Інші посилання: Веїєазе, зирга, мої. 2, рр. 115-138 (1984),

Атез 6вї аї., У. Іттипої. МеїШйоав» 184:177-186 Стат еї а. (1992) РМАБ5 89:3576-3580, (1995), Стеєп апа дакоброміїв 9). Ехр. Мед. 188:483-495

Вабрсоск, 4.5. єї аї. (1996) Ргос. Маї!. Асад. 5сі. (1998),

О5А 93:7843-7848, Стееп еїаї. Мате Сепеїйсв 7:13-21 (1994)

Вагбаз еї аї. (1991) РМАБ 88:7978-7982, сн: ега!. (1993) ЕМВО у 12:725-734,

Вепіеу, О.Г, апа Каррі», Т.Н., СеїІ 32: 181-189 Наттетїівпо, еї аІ.: Мопосіопа! Апіїродієв апа тТ- (1983), Сеїї Нуріідотав 563-681 (ЕІвемієг, М.У., 1981),

Ве!тері єї а!. (1998) Ат. У Рай 152:667-672, Напом еї аї., Апіродіев: А ІГарогаюгу Мапааї,

Вецег еї аІ., Зсіепсе 240:1041-1043 (1988), (Соїа бріїпд Нагтогтг І арогайогу Ргев5, 2па єд. 1988),

Віга еї а. (1988) бсіеєпсе 242:423-426, Нажкіпз еї а. (1992) У Мої Віо! 226:889-896

Вгейіпод еї аі. Публікація РСТ Ме УМО 93/01288, Нау еї аї. (1992) Нит Апіїбоа Нубгідотавх 3:81-

ВігіпКтап еї аї., У. Іттипої. МешШоавз 182:41-50 85, (1995), Нієїсег, РА, вї аї., 9. Вісі. Спет. 257: 1516-1522

Вгорего, еї аІ. (2002) 9. Іпепегопе СуюкКіпе (1982),

Вев. 22:641-651, Нідисні, В., іп "РОСА Тесппоіоду: Рііпсірієв апа

Вгом/п еї аї. (1991) Ргос. Маї). Асай. 95бі. Арріїсайопе ог ОМА Аптріїййсайоп", 5іоскіоп Ргевзв, 88:2663-2667, Мем хогк (1989), рр. 61-70),

Висні еї а!., (1996) Сіїіп. Ехр. Іттипої. 103:347- Ноїдетг, Р., еї аі. (1993) Ргос. Май. Асай. 5сбі. 367, БА 90:6444-6448,

Виспмаїа еї а!., 1980, Зигдегу 88:507; Ноодепроот еї а). (1991) Мис Асій Вев

Випоп еї аї., Адмапсез іп Іттипоіоду 57:191- 19:4133-4137, 280 (1994), Ноодепроот Н.Н., (1997) ТІВ Тесп. 15:62-70;

Сапег еї аї. Рос. Май. Асай. сі. Ц.5.А. Алагу Н., апа Ніднеті УУ.Е., (2002) Сіїп. 89:4285 (1992); Віоспет. 35:425-445;

Спощшіа апа Гезк, У. Мої. Віої. 196:901-917 Схаміопдо 9У.М., апа Таптск ОМ. (2002) (1987), ВіоТесппідоез 29:128-145;

Спопіа єї аї., 9У. Мої. Віої. 227:799 (1992), Ноодепроот Н., апа Спатев5 Р. (2000)

Спопіа єї аї., Мате 342:877-883 (1989), Ітітипоїоду Тодау 21:371-378,

Сіасквоп еї аї. (1991) Маште 352:624-628, Номага еї а!., 1989, 9. Меиговиго. 71:105);

СіІееК еї аї., 1997, "Віодедгадаріє Роутегс Низе еї а. (1989) 5сіепсе 246:1275-1281,

Сапієтз г а БЕСЕ Апіроду тюг Сагаїомазсшаг Низюп еї аї. (1988) Ргос. МаїЇ. Асай. бсі. ОБА

Арріїсайоп", Рго. Іпгї. бутр. СопігоіІ. Неї. Віоасі. 85:5879-5883,

Маїег. 24:853-854, Нигогп еї а!ї., МешШоав іп Еплутоіоду 203:46-88

Со, М.5., єї аїЇ., 9У. Іттипої. 148: 1149-1154 (1991); (1992), УЧ"оппп5оп, В., еї аї. (1991) Апаї. Віоспет.

Со, М.5., еї аї., Мої. Іттипої. (1993) 30:1361- 198:268-277. 1367, щ"опп5зоп, В., еї а). (1995) У. Мої. Несоодпії.

Соїє, М.5., еї аї., У. Іттипої. 159: 3613-3621 8:125-131, (1997), «Зої еї аїІ.,, 1991, Ргос. Май. Асад. сі. ОА

Соорет, вї аї. (2002) 9. Іттипої!. 168:1322-1327, 88:1864-1868,

Спа еї аї. (2003) Маштге 421:744-748, Чопез еї а!., Маште 321:522 (1986); биспта!т еї аї., У Іттипої. 26:934- 938(1996), Убп5зоп, Ц., еї аі. (1993) Апп. Віої!. Сіїп. 51:19-

Оитіпао еї а!., 1989, Апп. Мешйгої. 25:351; 26; Убп55оп,

ОигосНег еї аї., Мисієїс Асійє Незеагсі 2002, Успоупапв, єї аі. (1990) Сапсег Невз. 50:1495-

Мо! 30, Мо.2, 1502,

ЕКіпв, еї аї. (2002) Іп'есйоп Іттипіу 70:1936- Каваї еї а. (1971) Апп. МУ Асад, 5сі. 190:382- 1948, 391,

Еаїв еї аї. (1994) ) Іпіепегопе ВНев. 14:235-238; Каваї, Е.А., єї аї. (1991) бедиепсев ої Ргоївїп5 ої Іттипоодіса! Іпієте5і Би Еайоп, 0.5.

Оерагтепі ої Неакп апа Нитап Зегуісе5, публіка- Міпд еї а!., 1996, "Інгаштогаї ція МІН Ме 91-3242, Вадіоіттипоїпегарпу ої а Нитап СоЇоп Сапсег

Капа егаї. Публікація РСТ Мо. УМО 92/18619, Хеподгай Овіпд а Бивіаіпей-НеІєазе /- Се",

КеПегптапп 5-А., апа Стгеєп І.Г. (2002) Сштепі Вадіоїпегару апа ОпсоіІоду 39:179-189,

Оріпіоп іп Віотесппоіоду 13:593-597, ОЇ егаї., ВіоТесппідиез 4:214 (1986);

Кешерогоцо| еї аї. (1991) Ргої. Епдіпеег. 4:773- Огее, Т., еї аі., У. Ехр. Мед. 175:831-842 (1992), 783, Орртаптп еї аї. (2000) Іттипіу 13:715-725,

Кешеброгоцан еї аї., Еиг. У. Іттипої. 24:952-958 Радіап (РГАЗЕВ У. 9:133-139 (1995), (1994), Радіап, Моїіесшаг Іттипоіоду 28(4/5):489-498

Кірпуапом, 5.М., еї аї. (1994) Мої. Іттипої. (1991), 31:1047-1058, Раптат, еї аї. (2002) 9У. Іттипої. 168:5699-

Кірпуапом, 5.М., єї а. (1995) Нитап Апіїродієв 5708, апа Нубіідотавз 6:93-101, Ратопсні еї а. (1997) Ат. У). Рай. 150:823-832,

Кобрауазвзні, єї а!. (1989) У Ехр Мей 170:827-845; Регзіс єї аі!., Сепе 187 9-18 (1997),

Копіег, Сх. апа Міївієїп 1975, Майте, 256:495, Реїгеу, 0О., Хіапо, 2., Тапо, С.І., Хіє, І,

Копіевптапп апа Оире! ейв.,, Апіроду Сітреїем, М., Міго5, Т., Зою, С.5., соїайзтйй-

Епдіпеегппд (2001) Зрііпдег-Мепад. Мем/ Хогк. 790 Еівсптап, 5., Кегпуї5Ку, А., Зспіеззіпдег, А., еї аї. рр. (І58М 3-540-41354-5), 2003. Овіпд тийіріє вігисішге аїдптепів, тазі тоде!

Ї адпег еї аі. Патент США Ме 5,223,409, рийаїпо, апа епегдейс апаїузів іп й гесодпійоп

Їат еї аї, 1997, "Місгоепсарзціайоп ої апа потоіоду тоаеїїпд. Ргоїєїпе 53 (Зиррі. 6): 430-

Весотбріпапі Нитапілей Мопосіопа! Апіроду ог 435),

Ї оса! Оєїїмегу", Ргос. ІпгІ. Зутр. Сопіго! Веї. Віоасі. Рітопеп, еї аї. (2002) 9. Іттипої. 169:5673-

Маїег. 24:759-760, 5678,

Ї апдег (1990), Зсіеєпсе 249:1527-1533, Роаіазкі, еї аї. (1992) Агсп. Віоспет. Віорпувз.

Іапогівй еї аї. (2004) Іттипоіодіса! Неміємв 294:230-237, 202: 96-105, Роїзак, В.у., єї аІ. (1994) Біписіште 2:1121-1123,

Ї емій, М., 9. Мої. Віо!. 168: 595-620 (1983), Ргезіа еї аї., у. Іттипої. 151:2623 (1993),

Ї ему вї аі!., 1985, 5сіеєпсе 228:190; Онееп, С., єї аї., Ргос. Май). Асад. осі. ОБА 86:

І їпо, еї а. (1995) У Ехр Меа 154:116-127; 10029-10033 (1989),

І їШе М. еї а)ї. (2000) Іттипоіоду Тодау 21:364- А. УЧенегів, Віотесппої. Ргод. 21 (2005), рр. 11- 370, 16,

Гипа ег аї., 1991, 9. Іттипої., 147:2657, А.). Каштап апа Р.А. Знагр (1982) Мої. Віо!.

МассСайшт (У Мої Віої! 262(5):732-45 (1996), 159:601-621),

Маппеїтег-Гогу, А., еї аї., 9). Ехр. Мей. 174: Вапдег апа Реррав, 1983, 9у., Масготої. 5боі. 1639-1652 (1991), Веу. Масготої. Спет. 23:61;

Магеспнаї|опіз еї а!., Зам Ехр Меа Віої. 484:13-30 Вамеїсни, ..М., еї аї., СеїІ 27: 583-591 (1981), (2001), Ветіпдіоп'є РІаптасешіса! Зсіепсе5 апа

МесСагйепу еї а!., Майшге (1990) 348:552-554, Іпігодисіоп Юю РНаптасешііса! Юозаде Еогтв, 19

Меайїса! Арріїсайопе ої Сопігоїей АеіІеавзе, ед., Маск Риб. Со., Еазюп, Ра. (1995),

Ї апдег апа М/ізе (єдв.), СВО Ргев., Воса Наюп, Ріа. Аіесптапп еї аї., Маїшге 332:323 (1988), (1974); Сопігоїїєа Огид Віоамайаріїйу, Огид Ргодисі Вобрегів, А.М. апа 52овіак, УМ. (1997) Ргос.

Оезідп апа Репогтапсе, Маї). Асад. Зсі. ОБА 94:12297-12302,

Мепае сеї аї. Маште Сзепейсв 15:146-156 Водизка. еї аІ., РМА5 91:969-973 (1994); (1997), ВоціМага, 9.-М., еї аї., Мисієїс Асіайз Нев. З2:

Мі2и5піта апа Мадаїа, Мисієїс Асіаз Везеагсп МУ176-М/180 (2004), 1990, Мо! 18, род 53922, запцдек еї а!., 1989, М. Епої. 9. Мед. 321:574,

МігивПпіта, 5. апа Мадайїа, 5., (1990) Мисівїс Замаї еї аІ., АУВІ 34:26-34 (1995), асіаз Незеагсі Мої 18, Мо. 17, Зепгоєдетг, г, НМУ. апа Мапо, 9.М., Ргос. Маї).

МопієїЇєопе єї аї., (1997) Савігоеєпі. 112:1169- Асад. Осі. ОБА 87: 6146-6150 (1990), 1178, Зейег, еї аї. (1993) Ргос. Май. Асай. 5бі.

Могдап апа Ападегзоп, 1993, Апп. ем. 90:10188-10192,

Віоспет. 62:191-217; Мау, 1993, ТІВТЕСН 11 (5): Зейпоп, 1987, СВО сії. Неї. Віотед. Епод. 14:20; 155-215, ЗПаріго єї аї., Стії. Вем. Іттипої. 22(3): 183-200

Моїйа еї аї., (1998) Ап. апа АНейийтаї. 41:306- (2002), 314, Зпівій5, А. ГГ. еї а). (2002) 9. ВіоЇ. Спет.

Моїтізоп еї аї., 1984, Ргос. Май). Асай. 95сбі. 277:265733-26740, 81:851-855, Зпи еїа),, РМАБ5 90:7995-7999 (1993);

Могтізоп, Зсіепсе 229:1202 (1985), Зітзв еї аї., у. Іттипої. 151: 2296 (1993);

Миїїдап, Зсієпсе 260:926-932 (1993); ЗКеїта вї а!., Зсіеєпсе 240:1038-1040 (1988).

Миїїпах еї аї., ВіоТесппідоез 12(6):864-869 Зтоїеп апа Ваї! (єдв.), УМіІєу, Мем могк (1984); (1992), опо єї аї., 1995, "Апіроду Меадіагєй Гипд

Мигрпу еї аї. У Ехр Мей 198:1951-1957; Тагдейпуд ої Гопд- Сігсшайпуд ЄЕтиївіопе", РОА

Мешибегодег" еї а!., 1984, Маштге 312:604-608, Уоштаї ої Рпаптасеціїса! Зсіепсе апа Тесппоіоду

Мешгаїйй еї аї., У Ехр. Меа 182:1281-1290 (1995), 50:372-397,

Зщшапіска еї аї., Ргоїєїп Епдіпеегіпо 7(6):805- Мага еї а!., (1989) Майшге 341:544-546, 814 (1994); МуеівсНоОї, М. апа Кгайе5, 9. Меїйпоав5 Іп зивіаіїпей апа СопігоПей Неїєазе Огид Оевїїмегу МоїІесшаг Віоіоду, Мої! 207,

Зувіетв5, У.А. Нобріпзоп, ей., Магсе! Оеккег, Іпс., Міпанадеп еї аї., (1995) У Ехр. Мей. 182:1985-

Мем Хоїк, 1978. 1996,

Такеда еї а1!., 1985, Маште 314:452-454 М/іппакег, Еот Сепез |се) Сіопев5

Тауюг, Г. 0., еї аї. (1992) Мисі. Асій5 Вев. (МепадздезеїЇІзснай, М/еіппєїт, Септапу 1987), 20:6287-6295, Умгідні, А., ег аІ., ЕМВО У. (1991) 10:2717 2723,

Тоі5ю5Пем, 1993, Апп. Нем. Рпаптасої. Тохісо). Ми апа уми, 1991, Віоїегару 3:87-95; 32:573-596; Ми апа уми, 9. Віої. Спет. 262:4429-4432

Типепівгі еї аї., (2003) Іттипіу 19:641-644, (1987).

Типепієгі, сх. (2003) Маї. НАеу. Іттип. 3:133-146, Незважаючи на те, що вище був наведений

М., еї а. (1991) Віоїеснппіднев 11:620-627, ряд втілень та ознак, фахівці у даній галузі зрозу-

Отапа є! а!. (1999) Маї. Віоїесн. 17:176-1, міють, що модифікації та варіації втілень та ознак,

Опацшб апа Спавіп, (1980) Ргос. Маї!. Асад. 5сі. описаних вище, можуть бути здійснені без виходу

О5А 77:4216-4220, за межі даного опису або винаходу, як визначено у

Мептоеуєп евї аі!., Зсієпсе 239:1534 (1988)), формулі винаходу, що додається. Кожна з публі- ммаїїїск, 5.С., еї аіІ., Ехр. Мед. (1988) 168:1099- кацій, наведених у цій заявці, включена до неї 1109, шляхом посилання.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1105 Лейсі, Сюзан ЕЕ.

Фанг, Емма

Белк, Джонатан П.

Діксон, Річард У.

Рогуска, Майкл

Хінтон, Пол Р.

Кумар, Шанкар «120» Зв'язуючи білки ІІ-12/РА0 «1305 7825 05 РІ «140» має бути призначена «141» 2006-05-29 -1505 05 60/6595,679 «1515 2005-06-30 «-160з: 111 «170» РасепсІп версія 3.3 -2105 1 «2115» 326 «-212з РЕТ «213» людина розумна «7220» «2215 ПЕПТИД «222» (1)..(326) «223» Послідовність р4і0 субодиниці І1-12 та ІІ-23 «4005 1

Меє Сув Нів біп Сіп їец Уа! І1іе бек Ттр Рпе Бех Теп Уаї Рре ей 1 5 10 15

Авр Гей Уаї Аїа чІ1іїе Ткр бій еп о пув Був Авр оУаї Тут Уа1ї Уаї сій зо

Ге АБр Ттр Тут Рго АБр А1Зїа Рко біу сі. Мес Уаї уаії тей ТП Сув а5

Авр ТІ Рго січ сій Авр сі1у Іч11е Тк Ткр Тк Бей Авр о біп бех бек

БО 55 во бі Ммаії теп с1іу бек с1іу Ппув ТПх їеп Тбг І1а сіп Уаі Пув 011 РБбе 65 70 75 во сіу АБр Аза сіу сіп Тут Тк Сув Нів Був сі1у сіу сій Уаі Геч бег 85 30 935

Нів бек тей Гец Іецй Те Нів був Пув бій Авр с1у І1е Тгр Бет ТП 100 105 110

Авр І1е Пец Гув АБр біп Пув бій Ркто Був Авп був ТПх Рре Іецй Агд 115 120 125

Сув б1п Аїа пуб АБп Тут Бех С1у Аку РПе ТПптІ Сув Ткр Ттр Гей ТПг 130 135 140

ТПк о І1е бех Трт Авр Пеш Трт Рре бек Уа! Ппув бек бек Акад с1у Бех 145 150 155 160 бек АБвр Рго сіп біу Уаї ТПг Сув б1у Аїа А1їа ТПг Гей бек Ата сій 165 170 175

Аку мМмаї Ах б1у Авр АБп Пув бій Туг бі Тук бБех Уаї січ Сув біп 180 185 190

Сі АБр Бек Атїа Сує Рго Аїа А1їа сій Сі бек Тїей Рго І1е сій Уаї 195 200 205

Меє Уаї Авр Аїа уаї Нів Ппув їец ув Тук сі АвБп Тук ТПг бек бек 210 215 220

Рпе Рпе І1їе Аху Авр чІ1е І1е Пув Ркго Авр Рго Рго Був АБп ІТеч с1п 225 230 235 240 цей Ппув Рго Пейп Гук Авігп бек Агуд б5іп УМаі Сі Уаї бек Тгр бій тук 245 250 255

Рго АБр ТП Ткр бек ТПх Рго Нів бек Тук Рпе бех Гей ТПк Рре Сув 260 265 270 уаї сбіп уаі сіп сіу Ппув Бек Ппув Акд бій Ппув Ппув Авр АкчЯч Уаї Рре 275 280 285

ТПт АБр МПув ТпПтх Бек А1їа ТПк Уаії І1е Сув Агуд Пув Авп Аїа бБет І1е 290 295 300 бек Маї Агуд Аїа сбіп Авр Аку Тут Тук бБет бек бек Тгтр бек бій Тгр 305 310 315 320

Аіа бет Ууаі Рко Сув бБег 325 «2105 22 «211» 330 «212» РЕТ «213» штучний «2205 «223» Послідовність константного регіону людського Ід гама-1 «4005 2

А1їа бек ТПх Ппув с1у Рко Бех Уаі! Ріе Рпе Пец Аза Рко бек Бек Гув 1 5 10 15 бЗек ТП бек сіу сіу Тк Азїа Ата Пец с1у Суб Те Уа1і Був АБр Тук сто)

Рпе Рко сій Рко Уа1ї Тік Уа! бех Ткр Авп бек с1у Аїа їец Тк Бек сіу Уаї Нів ТПжк Рпе Рко Аї1а Уа1ї Іїей Сіп бек бек сіу Іеи Тук бег

БО 55 6о

Тїеп Бег бек Уаі Уаі1і ТП Уаїі Рко Бек Бех Бек Гей сіу ТПк біп Тік 65 70 75 о

Тут І1еєе Сув Авп Уаї Авп Нів пуб Рго бек Авп Тк о Ппув Уаї Авр Був 85 90 з5 пув Ммаї сій Рко Був бек Сув Авр Пув ТПх Нів ТП Сув Рго Рго Су 100 1065 110

Рхто АТїа Рго бій Гей Ппей сіу с1у Рго Бех Ма1 Рпе Цей Роре Рго Рто 115 120 125

Пув Рго Пув АБр ТПк Гей Мес Т1е Бек Ако ТП Рко сій Уа1ї ТпК Сув 130 135 140 уаї уаї уаї АБр Уа1і Бек Нів бій Авр Рго бій Уа1і Цув Рпе Авп Тгр 145 150 155 160 тук Уаї Авр сп1у Маї сій Уаіїії Нів АвБп А1їа Гув ТПг оПпув Рго Ахд бій 165 170 175

Сі сСіп тух Авпобек Тіт Тут Аку Уаї Уа1ї бек Уаі цей ТПг Уаї Гей 180 185 190

Нів біп Авр Тгр еп Авп сіу Був бій Тук Був Сув МПув Уаії Бетх Авп 195 200 205 їПув Аїа Пец Рко Аїа Рго І1ї1е бій Пув ТПх Іїе Бех Пув Аїа Ггув 01у 210 215 220 біп Рго Акд бій Рго біп уаї Тук Тпк Гец Ркго Рго бек АтЯ бій сій 225 230 235 240

Меє Тбг Ппув АвБп о сСіп Уа! бБехт їецп ТП Сув Пец Уаї Пув 01іу Рпе Туг 245 250 255

Рко Бек Авр І1їе Аїа уУа1ї бій Ттр б1ц бех Авп сіу біп Ркго сій Авп 260 265 270

АБп Тут Пув ТПк ТПт Рко Ркто Уаї Гей АБр Бек Авр біу Бек Рпе РБе 275 280 285

Тез Тухк Бех Пув тей Трг о Уаї Авр Був бек Аку Тгр бі1іп біп 01у Авп 290 295 00 уаї Рре Бек Сув Бех уаі1і Месє Нів бій Аза Ге Нів Авп о Нів Тук ТПк 305 310 315 20 сіп Був Бек Ім бех теп бек рго с1у Був за5 330 «2105 3 «2115» 330 «212 РЕТ «213» штучний «220» «223» Послідовність оконстантного регіону людського мутантного ІЧ гама-1 «-400О0» 3

А1їа бЗет ТпПх Був б1у Ркго Бек Ма1і Рбе Рго Ппезй Аза Ркго бет бек Гув

1 5 10 15

Зек Тих бек сіу с1у ТрІ Аза А1їа їей біу Сув тей Уа1 ГСув АБр тТукг

Зо

Рпе Рко Сі Рко Уаїі ТПк Уаії бек Ткр Авп бек сС1у Аїа Гей Тр 5бехг с1і1у Уа1ї Нів ТПк Рпе Рго А1ї1а Уа1 Пеш б1іп бек бек б1у Тєц Тук 5екг 60

Тец Бех бек Ууаї Уа1 ТПх Уа1ї Рго Бех бек Бет Пецп с1у Тк біп ТіПх 65 70 75 во

Тух тТ1е Сув Авп Уаі Авп о Нів Був Рхто бБет Авп Тк пуб Уаії Авр Гув 85 90 25

Ппув уа1і бій Рко Пув Бех Сув Авр був ТПх Нів ТОК Суб Рхго Рго Сув 100 105 110

Рго Аза Рко с1ц Аза Аа б1іу С1у Рхо Бек Уа1і Рре тей Рпе Рго Рго 115 120 125

Був Рхто Пув Авр ТпПх тТеш Мес І1е бегт Ату ТТ Рко сій Уаї Тік Сув 130 135 140

Ууа1ї уаї Уаї Авр Уа1і Вет нів с1п Авр Рго Сі Уаії тув Рпе Авп Тгр 145 150 155 160

Тух уаії Авр сіу уа1і Сіш Маї Нів Авп Аїа Ппув ТБПх Ппув Рко Акд бій 165 170 175 сій сіп Тук Авп обет ТПх Тук Акуд Уаї Уа! бек Уа1ї! тей ТПх Уаї Гей 180 185 1950

Нів біп Авр Ткр тей Авп осіу Був бій Тук Ппув Сув Був Уа1і БбБет Авп 195 200 205 пцув Аіїа їец Рко Аіїа Рко І1е Сі Був Трх І1е бек Пув Аїа пув 01У 210 215 220 біп Рго Акд бій Рго сіп уаі Туг ТПуроГей Рго Рго бек Агуд бій с01ц 225 230 235 240

Меє ТрПк Пув Авпобіп Уаії Бек Гей ТпПх Сув Гей Уаі цПув сіу РПпе тТУхХ 245 250 255

Рго бек Авр т1іе А1а уаі бій Тр бій бек Авп о б1іу біп Рго б1і4 Авп 280 265 270

АвпоТук Ппув ТПх ТП о Рко Рхо Уаі це Авр Бек Авр біу бБет Рпе РПе 275 280 285

Тецп Тут Бех Ппув Пеш ТПпх Уаії АБвр ув Бек Ага Тер біп біп 01у Авп 290 295 300 уа1і1 Рре бек Суб бек Ма1ї Мес Нів сій Аза ге Нібв Авп оНів Тук Тк 305 310 315 320 сіп Був Бек тей бег Тец Бек Рго 51у Гув 325 330 -2105 4 «211» 106 «2122 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Послідовність константного регіону людського Ід Каппа «або» 4

ТрПг оуаі Аїа А1їа Рко бек Уа1|і Рпрпе І1е Рое Рго Рго Бек АвБр 01 сіп 1 5 10 15

ІТец Ппув Бех б1у ТПх А1їа бех Уа1і Уаї Сув еп Гей АБп АБп о Ре Туг зо

Рго Аку сій Аза Ппув Уаі сСіп Ткр Пув Маії Авр Авп о А1а Гей сіп бек а5 с1у Авп бек біп б1іц бек Уа1і ТіК сій біп Авр бек Пув Авр Бек Тіг

БО 55 бо

Тук Бек Пец бет бек ТПт Гей Тбу Те бБехт Був Атїа Авр Тук січ Був 65 70 75 30 нів Ппув уаї Тут А1їа Сув біц Уаї ТПх Нів біп сіу Пецй бек бетх Рто

85 90 95 уаї тПІ пуБ Бек Рпе Авп Агу с1іу бі Сув 100 105 «2105 5 «211» 105 «-2125 РЕТ «2132» Штучний «220» «223» Послідовність контсантного регіону людського 14д лямбда «4005 5 біп Рго Був Аїа Аза Ргто Бех Ма1і Тік Гей Рпе Рко Рхто бех бБет 01и 1 5 10 15 бій Бей сіп Аза АвпоГув А1ї1а Тпх Гецш Ма1ї Суб пен Іїе бек Авр Рре

Тук Рко сі1іу А1їа Уа1ї Тік Ууаї Аза Тер Пув А1ї1а Авр бек бек Рко Уа1 аб5 пув А1ї1а б1у уУа1і сіц ТПжЕ Тру ТБПг Рко Ззехт Гув біп бет АБп Авп о Був

БО ь бо тут А1а А1а бехт бек Тух Гей бек тей Трх Рко с1іц сіп Тхр Гуз Бек 65 70 75 80

Нів Аку бек Тук бек Сув біп Уа! Трх Нів бій С1іу бек Трх Уа1ї С1ій 85 90 95 пув ТПк о Уа1ії Аза Рго Тпх бій Сув бек 100 105 «2105 16 «2115 30 «212» РЕТ «213» людина розумна «220» -2215» ПЕПТИД «222» (1)..(30) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 6 сі Уаї Тк теп Аку бій бек сіу Рхто Аїа пецш Уа! Пув Рго Тк сіп 1 5 10 15

ТП Гпецш ТБПт Гей Тк о Сув ТБПг о Рре бек біу Рре Бех Гей бег

Зо «2105 М/7 «2115 14 «212» РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» РПЕПТИД «222» (1)..(15) 223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 Д Б7

Тур І1е Аку сСіп Рго Рко с1у Пув Аї1а Пе Сі Ткр Гей А1а 1 5 10 «2105» 8 «211» 32 «212» РЕТ «213» Людина розумна «2205 «2721» ПЕПТИД «222» (1)..(32) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 8

Ак Тец Тік чІ1е Бех Гув Авр ТП бек Тув АвБп обіп Уа1! уаї Гем тТбкК 1 5 10 15

Мес ТпПтг Авп оМесє Авр о Рто Уа! Авр Тк А1їа ТПпу Тук Тук Сув Аза Атгд 20 25 Зо «2105 З «2115 11 «212» РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ЦПЕПТИД «-222» (1)..(11) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського)

«4002 3

Ттгр сіу сіп с1у ТПт ТПг оУа1ї ТПк Уа1ї бек 5ег 1 5 10 «210» 10 «211» 30 «2125 2 РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПпПЕПТИД «2225 (1)..(30) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 10 сій Уа1ї Тбх те Ппув сій бБет сС1іу Рхто Уаі Гечш Уаі Пув Рго Тк с1и 1 5 10 15

ТП опец Тк оТеп Тік Сув Тіт о Уа1ї бек сіу Рпе бек Гец Бег

Зо «2105 11 «2115 32 «212» РЕТ «213» Людина розумна «220» «2212» ПЕПТИД «222» (1)..(32) «4005 11

Ах Пец ТПт І1е бек Був Авр Тр Бек Тув бек Сіп Уа1ї Уа1ї Ге Тбг 1 Б 10 15

Мес Тпкг Авп Меб Авр Рко Уаі Авр ТП Аза ТПк Тук Тук Сув Аїа АхдФ 20 25 30 «2105 12 «211» 30 «-212» РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» РПЕПТИД «2222 (1)..(30)

«223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 12

Сі Уаї біп тїєш Уаї Сі Бех сіу сіу с1у Пец Уа1! біп Рго с1у 01У 1 Б 10 15

Бек цей Агкд їец бек Сув Аіїа А1їа бек с1іу Рре ТБх Рпе бег «2105 13 «-2115 14 «212» РКТ «213» Людина розумна «2205» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(15) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «-4005 13

ТЕр Уаі1 Акуд біп Аїа Ргто с1у Пув с1у їеп сі Ткр Уа1 -Ш1У 1 5 10 «210» 14 «2115 32 «212» РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПпЕПТИД «222» (1)..(32) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 14

Ак Рпе Тпх І1е бек Ак АБр Авр Бек Пув Авп обБет тей Туг Ге с1п 1 5 10 15

Меж Авообек Гей Пув ТПх с010 АвБр Тіт Аза уаї Тук Тук Сув Аїа АгдФ 20 25 30 «2105 15 211» 30 «212» РЕТ «213» Людина розумна

«221» ПпПЕПТИД «222» (1)..4130) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005» 15 сіц Уа1 біп тец Ууаї Сі бек сіу сі1у с1у тес Ууаї Гув Рго с1у с1у 1 5 10 15 бБет Ге Акч Гец Бех Суб А1а АлЛа бек с1іу Рре ТПх Ре 5ег зо «210» 16 «211» 14 «212» РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(14) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «400» 16

Ткр уа1ї Агу біп Аза Рго б1у Пув біу Гей бій Тктр Уа1ї бек 1 5 10 «2105 117 «-2115 32 «2125 РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(32) «273» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «400» 17

Ах Рпе ТПх Т1іе Бех Ату Авр Авп Аїа їув Авп бек пей Тухк Ппеч біп 1 5 10 15

Мес Авп Бех Ппеш Ак А1їа сії Авр Тк Атїа Уаії Тук Ттук Сув Аї1а Ахгд 20 25 30 «2105 18 «211» 30 «2122 РЕТ «213» Людина розумна

«221» ПЕПТИД «222» (1)..(30) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «400» 18 бі Уа1і! біп теп Уа! біп бек сбіу Аїа біц Уа1і пПув Був Рко сбіу бег 1 Б 10 15 бек уаії пуб "а1і Бек Сув Пув Аїа Бек с1у с1у Тк РБе 5екг

Зо «2105 19 «2115 14 «2122 РЕТ «2135 Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(14) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 19

Тер Уаї Аку біп Аїа Рго сіу біп с1іу Пец бій Ткгр Меє с01у 1 5 10 «2105 20 «2115 32 «2125 РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД 2225 (1)..(32) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 20

Ака уаї тп І1е ТП Аза Авр Був бек Тіт бек Тр Аїа Тут Меє сій 1 5 10 15

Гей бек бек Гей Акуд Бек б51п Авр ТОПг А1ї1а Уаї Ту Тут Сув Аії1а Аг4д 20 25 Зо «-2105 21 «-2115 30 «212» РБЕтТ

«213» Людина розумна «2212 ПпЕНТИД «222» (1)..(30) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 21 біц Ууаї біп теп Уаї сіп бек сіу Аїа бі Уаї Ппув Пув Рко с1Уу А1а 1 Б 10 15 бек Уаї Пув "а1! бек СуБ БПув Аза бек с1у Тух Трк Рпе ТіПг «2105 22 «2115» 32 «2125 РЕТ «213» Людина розумна «2202» «2212 ПпЕПТИД «222» (1)..(32) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 щД К 22

Аку уаї Ттбтг оМеє Ту тТпПх АБр тт бек ТПт Бех ТПх А1ї1а Тук Меє сіийм 1 і) 10 15

Те Агу бек Гец Агку Бех АБр АвБр ТПт Атїа Уа1! Тухк Туг Сув Аїа Ахд 20 25 зо «2105 23 «-2115» 23 «2125 РЕТ «213» Людина розумна «220» «-221» ПЕПТИД «2225 (1)..(23) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «4005 23

Авр І1е Уа1 Меє ТБк біп бБех Рго Акр бБегт тей Атїа Уа1і бек Гей с01Уу 1 5 10 15 біз АгЧч Аїа Тк І1е Ап Сув

«2105 24 «2115» 15 «212» РЕТ «213» Людина розумна «2202» «22125 ПЕПТИД «222» (1)..(15) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «400» 24

Ткр Тук біп біп Був Рго біу біп Рко Рго гув Пеп Теип І1е Тук 1 5 10 15 «210» 25 -2115 32 «212» РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(32) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «-4005 25 сі1іу Ммаії Рко Авр Аку Рре Бек сіу бек біу бБет С1іу ТПк Авр Рре Тіг 1 5 10 15

Печш ТПЕ І1е бек бек Пейп біп Аїа сіц Авр Уаі Аїа уа1ї Тук Тук Сув 20 25 ехо) «210» 26 -2115 11 «212» РЕтТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..111) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «4005 26

РПпе сіу с1у с1у ТпПхт Був Уа! 01 І116е Ппув Акд 1 5 10

«2105 127 «-2115 23 «2125 РЕТ «2135 Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (12)..(23) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) -4005 27 сій т1е Уаї Меєс ТП о біп беїх Рко А1їа ТПт Іец Бех Уаі Бек Рго б1у 1 Б 10 15 сід Ак Аїа ТП о Пец бек Сув «2105 28 «-2115» 15 «212» РЕТ «213» Людигна розумна «220» «221» ПпЕПТИД «222» (1)..(15) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) -4005 28

Ткр Тут біп біп Пув Рхо с1у С1іп Аїа Рко Ак Тїейп Тецй І1е Тухк 1 5 10 15 «2105 29 «2115 З32 «2125 РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(32) «2235» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «4005 29 сіу Т1е Рго Аї1а Ахку Рпе бек біу бек 51у бек 51іу ТпПк бій Рпе тТіг 1 5 10 15 тей ТпПт І1е бек бет Пеп біп бек сіц Авр Рпе Аїа Уа1і Тук Тук Сув о) «2105 30 «-2115 23 «2122 РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(23) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «4005 30

Авр І1е Сіп Меє Тпк о СсСіп бек Ркго Бек бек пецш Бек Аза Бек Уаї СФ1у 1 5 10 15

Авр Акз Уа1ї1 Трх І1їе ТПх Сув 20 «-2105 31 «2711» 15 «212 РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «2225» (1)..(15) «223» Акцепторна послідовність легкого лакцюга (людського) «4005 31

Тер Тукх біп біп Пув Рко 51 Пув Аїа РгІо Гув бек Пец І1е Туг 1 5 10 15 «-2105 32 «211» 32 «212» РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(32) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «-4005 32 сіу Маї Рхто Бек Акгуд Робе бБетх біу Бех сіу Бех с1у ТПг Авр Рпе Тіг 1 5 10 15 пец ТпПтІ І1їе бек бек Гей біп Ркго сій Авр Рпе А1їа Тк о тТук Тук Сув «210» 33 «2115 23 «212» РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПпЕПТИД «222» (1)..(23) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «400» 33

Авр ч11е біп Меє ТПпк о біп бБет Рго бек Бек Уа1і бек Аїа бек Уа1 с1Уу 1 5 10 15

Авр Аку уаї Тк о І1е Тк Сув 20 «210» 34 «211» 15 «2125» РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(15) «2235 Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «34005 34

Ткр Тут біп сіп Гув Рко с1іу ГубБ А1їа Рго Був Гей леї Те Тухг 1 Б 10 15 «-2105 55 «-211» 119 «2125 РЕТ -213» Миша «2205» «2215 ПЕПТИД «222» (1)..(119) «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 104 «4005 35 сіп уаі1і Тк Те Ппув сі Бех біу Рко сіу ч11е їец сбіп Рго бек сіп

1 5 10 15

ТПт Пец бек Теп Тік о Сув бек Рпе бек сіу Рре бек Геш Акуд Був Бек уаїії Меє с1у Уа! Бек Тер І1е Агу Сіп Рко бек с1у Був б1у їеч сій

Ттгр тей Азїа Нів І1е Тут Тгр Авр Авр Авр Пув Тук Туг Авп Рго бег 5О0 5БЬ 60 їечп ув бек Акуд Пемш ТПг т11е бек Гув Авр Рхто Бех Аку Авп о сіп Уа1 65 70 75 80

Рпе Геч пув ІчІ1е ТП бек Уаї Авр ТПх А1їа Авр Аїа А1їа Тру Тух Тук 85 90 95

Сув ТПг Ак Агу с1іу т11е Аху бек Аза Месє Авр Тух Ткр с1у біп с01У 100 105 110

Тіт бек Уаі тПг Уа1ї! бек бек 115 «-2105» 36 «2115 108 «212» РЕТ «213» Миша «220» «2215 ПЕПТИД «222» (1)..(108) «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 104 «асо» 36

Бек Уаї Уаі Мес тТпх біп ТП Рго Пув Рпе еп Іец Уаї бек Аїа С01У 1 5 10 15

Авр Акая Уаії Тк І1е ТПт Сув Гув Аїа Бех біп бек Уа1ї! бек Авп Авр 20 25 30 уаї Аї1а Тктр Тух сбіп біп пув Рко с1у сіп Бех Рго Пув Гец Іец Т1е 35 40 45

Тук Тух А1їа бБеїх АвБп Аку Тут ТПт с1іу Уаі Рхго АБр Акд Рпе ТіПх сіу

5О 55 6о

Бек с1у Тук б1у ТПх АвБр Рпе ТІПк Ре І1е І1е бек ТПк уаї Агу А1а 65 70 75 во сій Авр Теп А1їа Уаії Тухк Рпе Сув б1п біп Авр Тук АБп Бех Рго Ттр 85 90 95

ТПг Ррпе с1у с1у с1у ТП ПуБ Гей б1ц І1е гув АгдФ 100 105 «2105 37 «2115» 120 «212» РЕТ «213» Миша «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(120) «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 1А6 «4005 37 сіп Уа1! ТПпк Бей Гув сій бек б1іу Рко с1у Іїе Гей Ппув Рго Бек біп 1 5 10 15

ТПкЕ рей бек пес ТП Суб Бех Рре Бек с1у Рре Бетг Гечп бек ТНК бех

Зо с1у Меє с1у Уа1і бек Тгр І1іє Ахку біп Рго бек біу Пув С1у Іеп Сі

Тер тей Азїа Нів І1е Тер Ткр Авр б1у Авр Авп Туг Туг АвБп Рхго Бех 5О 55 бо пе Ппув бек біп Гей ТПт І1е бБетг ГуБ АБр ТіБг бБег Аку Авп сіп Ууаї 65 70 75 во

Рпе тей Акуд І1е Азїа ТПу Ууаї Авр ТПк Аза АБр ТПт Аза Тк Тут Туг 85 90 35

Сув А1а Акту Ак Тут Ага Уа1і Авп Тут Аїа Мес Авр Тут Тгтр с1у Ссіп 100 105 110 сі1у ТпПк бек Уа1і тТПх Уаї бек бек

115 120 «2105» 38 «211» 108 «2122 РЕТ «213» Миша «220» «-221» ПЕПТИД «222» (1)..(108) «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 1А6 «-4005» 38 бек Ма1 Уаї Меє ТП обіп ТП о Рко ПувБ Рпе Гей Пец Уаї Зек Аза (щ1УуУ 1 5 10 15

Авр Акчач уаії тПх І1е Трк Сув Пув Аї1а беїт Сіп бек Уаї бек АБп Авр

Ууаї А1ї1а Ткр Рре сСіп біп Пув Рго сіу біп Бек Рго Іув Геч Ієц І1е а5

Тухк Тут А1а Бех Авп Аку Тугт ТПІ сіу Уаї Рго Авр Агд Рбе ТПх с(1У

БО 55 бо бек сіу Тук б1іу Трк Авр Рпе ТПУ Рре Тапх Т1іе бек Тіт Уаї сіп А1т1а 65 70 75 8о с10 Авр еп АТїа Уа1ї Тук Рре Сув бі1іп б1іп Авр Тух АвБпобек Ркго Ттр 85 90 95

Тік Ре сі1у с1у с1у Тк Ппув теп сії Т1е Був АгЧд6 100 105 «-2105 39 -211» 117 «2125 РЕТ «213» Миша «220» «221» ПЕПТИД «222» (11)..(117) «223» Амінокислотна послідовність регіону МН 108 «-4005 39 сіп Уаї біп теп біп сСіп бБег сіу А1їа сі тей Меє Ггув Рго сі1у А1а 1 5 10 15 бек уа1ї1ї цувБ І1е бек Сув пув А1а ТПк сіу Тук ТП Роре бек бБет Тут

Ткгр І1їе сій Ткр Уаі Ппув сіп Аку Рго сбіу Нів с1у вп бій Тгр І1е аб 5 сіу Авр Іїе Гей Рго б1у бехт біу бек ТПг АБп Тут Авп обі Гув РБе 6о0

Пув Авр Ппув А1ї1а ТПх Рбе ТПІ Аза АБр Трг бек Рре Авп ТПх АїТа Тукг 65 70 75 І2до)

Меє сіп Гей бек бек Гей ТП бек сій Авр бБехт А1ї1а Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95

А1тїа тпк о Аку Агу Рпе Акд сіу Пец АБр Тут Тгр сіу біп с1у ТПї тТбг 100 105 110

Те ТрПг Ууаї Бек Бег 115 «210» 40 «211» 108 «212» РЕТ «2135 Миша «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(108) «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 108 «4005 40 век І1е Уа1і Меє Тпк сіп ТПї Рко ув Рре Тей Гей Уаі бБексг Аїа с01У 1 5 10 15

АвБр Агу Маї Тк І1їе ТПпПг Сув ув А1їа Бех Сіп Бек Уаії бетх Авп Авр 20 25 30 уаї1ї Аїа Тер Тук с1іп сСіп ув бек с1у біп бек Рко Пув теп Тец І1е 35 40 а5

Тут Тут Аїа Бех Авп Акуд Тут Тпх с1іу Уаї Рго АвБр Аху Рпе ТПх с01у

БО 55 60 бек сС1у Тук с1у Тпг АБр Рре Тік РПе ТПт І1їе бек ТПт Ууаї Ссіп Ркго 65 70 75 80 с1п Авр пеш Аїа Уа1ї Туг Рбе Сув біп сСіп Авр Тух ТПх Бек Рго Рпе 85 Зо 95

ТПг о Рпе сіу Бек сі1іу ТП Ппув Пец бі І1е Пув АхкЧдФ 100 105 -2105 41 «-2115 117 «2125 РЕТ «2135 Миша «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(117) «223» Амінокислотна послідовність регіону УНН 307 «400» 41 сіп Уаї с1іп те біп сбіп бет с01у А1а бій Тецп Меє Гув Ркго б1у Аїа 1 Б 10 15 бек уУаї Гув І1е бек Сув їув Аїа ТП с01у Тук ТПт Рре Авп Авр Туг зо

Ткр І1е біц Тер Маі Пув б1п Агу Рго біу Нів сіу Те сій Ткр І1е а5 с1у с1у Рпе бек Нів Сіу бек сіу бек ТПт АБп о Тух Авп бій Пцув Ріе

БО 55 бо

Був с1у пув АТїа тБг Рпе ТПкК А1їа АБр Бех Бех бех АвБп ТТ Аа Тукг 65 70 75 во

Мес сіп гей бек бек Гей ТПт бет біц АБр бетї А1їа Уа1і Тух Тух Сув 85 90 95

А1їа Ах Аху Аху Рпе Атгу с01у Меї Авр Тут Тктр бі1у біп с1у ТПу век 100 105 110 уа1їії ТпЕ уаї бек бек

«210» 42 «2115» 108 «212» РЕТ «213» Миша «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(108) «223» Амінокислотна послідовність регіону Уї 3с7 «4005» 42 бБет Ііїе уаї Меє Ттрх с1іп Тр Рко ПпубБ Ре Тез Гей Уаї Бек А1їа с01Уу 1 5 10 15

Авр Ах уаії Тс тТ1іе ТПпх Сув Ггув Аїа Бех сіп бек Уаі1і бек Авп Авр

Зо

Ууа1і Аіїа Тер Тут сіп сбіп Ппув Ркго біу біп бек Рго Пув Пец Ппей І1е тут Тут А1ї1а бек Авп Акту Тут ТПк с1іу Уа1і Рго Авр Акуд Рпе Ток с01у

БО 55 60

Зек с1у Тук с1у Тіт Авр Рпе ТПт РіПе ТПк І1е ТП ТпІ Уаї біп Аїа 65 70 75 во сі Авр теч Аїа Уа1ї Тук Рре Сув біп біп Авр Тут бек Бек Рго Тгр 85 зо 95 зек Рпе сіу сіу б1у ТПк пув Пец сіц І1е ув АкдФ 100 105 «210» 43 «2115 117 «212» РЕТ «213» Миша «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(117) «223» Амінокислотна послідовність регіону Ж УН 5Е8 «-4005 43 б1іп ї11е б1іп Тїец Уаі1ї біп бек 51у Рко 51ій Геп Ппув Гув Рго б1у 51чЧ 1 5 10 15

ТПк о Уа1і Ппув Т1е бек Сув пув Аїа бек с5іу Тук бек Рре ТПк Авр тукх бек Меє Нів Ткр Уа1 Пув сіп Аїа Рго с1у ув с1у Гей Ппув Ткр Меєс

АБвр Тгр І1їе Авп ТПК бі тп о с1у бі Рко ТпПк Тух Аза Авр Авр Ре 5О 55 60

Ппув б1у Ак Рре А1їа Ріре бет ей б1іш ТПк Бех А1ї1а бек ТПт А1а Туг 65 70 75 80

Геп сіп ТІ1е Авп АвпоТїєец Був Авп обі Авр ТОП АТа ТПх Тут Рпе Сув 85 90 95 бек АгЧ Аку Аху Туг Агу Аїа РБе Авр Тут Ткр б1у біп б1у ТПхк тіг 100 105 110 тей ТіК Уа1і Бек Бех 115 Й «2105 44 «-2115 108 «212з: РЕТ «213» Миша «220» «2215 ПЕПТИД «222» (1)..(108) «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 5ЕВ8 «4005» 44

Бех І1е Уаї Мес Тбк Сіп бек Рко Пув РпПе Іїец Тец Уа1! бек Аїа 01У 1 5 10 15

Авр Акту уа1ї ТБпт І1їе Тпс оСув Був А1а бек біп бек Уа1і бек АБп АБр 20 25 30 уа1ї Аїа Тер Тут біп біп пув їейп сбіу сіп бек Рко Був Гей Гец І1е 35 40 а5

Тут Тут А1їа бБетг АвБп Аку Тут ТПх біу а1і Рго Авр Аку Рбе ТПг 501УуУ 50 55 бо бек с1у Тук с1у ТПк АБр Ррбе Тк Рібе ТПт І1Т1е АБп Тк оУаї сіп А1а 65 70 75 80 сій АвБр тей Азїа Уа1! Тут Роре СуБ біп сіп Авр Туг ТПЕ бек Ркго Туг 85 90 95

Тік Рпе с1у б1у с1у ТПх Гув гей 011 І1е 51п АкдФ 100 105 -2105 Ж Х45 «211» 112 -212» РЕТ «213» Миша «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(112) «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 8Е1 «4005» 45 бій Уа! Ппув Іво Уаї сій бехт біу сіу с1у Геп Уа1і! сіп Рго сі1у с1Уу 1 Б 10 15 бехт Аку ув Пец бек Сув А1а А1їа Бех С1у Рре ТПг Рібе Бек Авр Тук сіу Мес Уа1! Тер Уаї Аку с1іп Аїа Рко сіу Гув сі1у Пец сії Ткр Уа1

А1а Бек І1е Бек Бет б1іу бет бБегт АБп Ііе Тухк Тут А1їа АБр ТПкК Уаї1 5О 5ь 6о

Пув Б1у Атч Рпе ТПтІ І1е бБет Аку Авр Авр Рго АБпоАБп ТК о Бей РПе 65 70 75 80 теп біп Мес Ак бек Ппей Акуд бек 01 Авр Тр Азла Меє Туг Тук Сув 85 90 95

А1а Аку АБпоРко Тук Тер бі1у біп с1у ТпПх ТПх пец Тпт Уаії бек бег 100 105 110

«2105» 546 «211» 108 «2125 РЕТ «213» Миша «2205» «221» ПпЕПТИД «222» (1)... (108) «223» Амінокислотна послідовність регіону УТ 8Е1 «4005 46

Авр І1е Уа1ї Меє Тк о біп бек сб1п Ггув Робе Меє бек ТПу бек Уаї 01у 1 5 10 15

АБр Аку Уаії бек Уа1і ТПг оСув Був Аїа Бек б51іп АБвп оуа1ї с1у ТПрт АвБп уаї А1т1а Тер Тук біп сіп Був Рко біу біп бек Рго ТувБ с1у Гей І1е

Тут Бек Аїа Бек Нів Ак Тух бек сіу Уа1ї Рго Авр Акд Рпе Аїа С1У

БО 55 бо

Зек с1у Бек сіу ТіПх АБр Рпе ТБг Пец ТП І1е бек Авп Уа1і сіп бекг 65 70 75 во бій Авр пей Аза бій Тук Рбе СувБ сіп б1іп Тук Авп бБет Тухк Рго Гей 85 Зо 95

ТПк Ре с1у с1у біу ТПг Пув Пей 010 теп пув Ахд 100 105 «210» 47 -2115 117 «2125 РЕТ «213» Миша «220» 2215 ПЕПТИД «222» (1)..(117) «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 1Н6 «4005 47 сі Маї цПув тей уУаї сій бек сіу біу 5щ1у Пец Уаї біп Ркго сіу 01Уу 1 Б 10 15 бек Акуд Пув їей Бек Сув А1ї1а Аїа бек Сіу Рпе ТПг Рібе бет Авр Туг сі1іу Меє Уаї Ткр Ма1ї Аку біп Аіїа Ркго с1у Пув с1у Пец сій Ткр Уа1

А1їа Тук І1е беї бек бі1у Бех бек ТПї І1е Нів Тут Аїа Авр Тік Меє 60 тТув с1у Акад Рре тТрт І12е бек Агу Авр Авп Рго пуб Авп о ТпПх Гей Ре 65 7о 75 во

Бпеч біп Меї бек бек Гей Акуд бек 51 Авр ТПЕ А1їа Месб Тук Тук Сув 85 90 95

А1а Аку Аку Нів Туг Тук А1їа Мес Авр Тут Тгтр сіу біп сіу ТіПк бекг 100 105 110 уа1ї Тк Уаії Бек бег 115 «210» 48 -211» 108 «212» РЕТ «213» Миша «2205» «2215 ПЕПТИД «222» (1)..(108) «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 186 «-4005 48 бет РпПе Уа1ї Меє ТПх біп ТПт Рго Гув Рбе Пец Іей Уаі1і Бек А1Т1а с1Уу 1 Б 10 15

Авр Аку Уаі ТпПт т11е ТПк Сув Пув Аїа бек Ссіп бек Уаї бек Авп Авр 20 25 зо

Ууаї Аїа Ткр Тут біп сіп Гув Рхто біу сіп бБег Рко Гув Гей Гей І1е 35 40 45

Тут Тук АТїа Бек АБп Агу Тут ТНПІ біу Уаі Рко АБр Аку Рпе ТІ 01У 50 55 60

ТтТПт обіу Тут сіу ТПх Авр Рбе ТПх Ре ТОПх І1е Бек ТП Уаї сбіп А1а 65 70 75 во сСіш Авр тец А1а Уа1ї Тук Рпе Сув 510 б1іп Авр Тук ТпПх бех Рко РПе 85 90 95

ТіПх впе с1у Бек с1у ТПк ПпуБ Гей сій Т1е цув Акд 100 105 «210» 49 «211» 122 «-212з РЕТ «213» Миша «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(122) «223» Амінокислотна послідовність регіону УН ЗА11 «400» а49 сі Уаі сіп Пец біп біп бехт с1у А1ї1а Авр Гей бій Був Ркго сіу А1а 1 Б 10 15 бек Уа1ї Ппув Пец Бех Сув Тіт Аїа бет с1у Робе Авп ч11е Був Авр ТПх

Рпе Месє Ні Тер Маї Пув С1іп Аку Рко бій б1іп с1у Гей с1ц Тгр І1е6 с1у Аку т11е АБр Рго А1їа АБп сіу НівБ ТПг о ПувБ Тук АвБр Ркго ГуБ Ріпе

БО 55 бо с1іп с1у пув Аїа ТПх І1е ТП діа Авр ТК о бек бек АБп Тіт А1а Тухг 65 70 75 во

Тен біп реп Баг бех Пец ТПг бек біц Авр Тйт А1їа Уа! Тук Тук Сув 85 90 95

А1їа Ак Тер с1іу біп Рів біу Гец Гей Тур АБп оАїа Мес АБр Туг Тгр 100 105 110 сіу біп с1у Тік бек уа1ї Тіт Уаї бек бек 115 120

«2105» 150 «21155 112 «2125 РЕТ «213» Миша «220» «221» ПпЕПТИД «222» (1)..(112) «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ. ЗА11 «4005» 50

Авр І1еє Уаї Іеч Тру Сіп бет Ркго с1іу Бек Гец Аїа Уаї Бек їецп С1УуУ 1 5 10 15

Сіп Аку Аїа Ту ї1е бек Сув Аку Аїа бек біц бек Маї АБр АБп Туг с1у ч11е Бех РіПе Мес Авп Ттр Рпе бір сбіп Був Рго с1у біп Рго Рхто пув теч Іїеч І1е Тук Аїа А1їа бек Авпо сіп сіу бек с1іу Уаї Рго А1а

БО 55 бо

Аку ВпПе бек сСіу Бех сіу Бек сіу Тіт Авр Рпе бех Гей Авр І1е Нів 65 70 75 во

Ркго Меє б1іц біц Авр Авр ТПг А1зїа Месє Тух Рпе Сув біп сіп Бек Гув 85 0 35 бі Ууаї Рко Рко Тпх Рпе сіу б1у сіу ТПт пув Гей Сій чІ1е Пув Ак4д 100 105 110 «2105 51 «211» 120 «2125» РЕТ «213» Миша «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(120) «223» Амінокислотна послідовність регіону МН 484 «400 51 сіп уаї тік їец ГПув Сі бБег с1іу Рко сіу ч116є Гей Ппув Ркго Бех біп 1 5 10 15

ТП о Тец бек теп Тік Сув бек тей бек сіу Роре бех Гей бек Тіт бек сіу Меє сіу Уа1і бек Ткр І1е Ак Сіп Рко бек С1у Гув с1у еп С1й

ТЕр еп АтТа Нів Іїе Тгр Тгр АБр Сіу Авр бБеї Тук Бех Авп Рко Бек 60

Теш Аку Бек Ак Геп ТПу ч116єе Бек Аку Авр ТПх Бек Аг Авп біп Уаї1 65 70 75 80

Ре пей Акуд Т1е Аза ТП оУаії АБр ТйШг Аза Авр Тк Аза Ту Туг Тукг 85 90 95

Сув А1ї1а Ахку Аку ТБг Ако Уаі Авп отут Аїа Мес АБр Тує Тгр с1у сіб 100 105 110 с1у ТП Бех Уа1ї ТПк Уа1ї! Бег Бег 115 120 «2105 52 -2115 108 «2125 РЕТ «2135 Миша «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(108) «223» Амінокислотна послідовність регіону Уї, 484 «-4005 Д 52

Бех уа1 Уаі Меє Тпк о біп Тіт Рго Пув Рпе Пец Пец Уаії бек Аїа 01Уу 1 5 10 15

Авр Ак Уа1ї Тпт о Меє ТП Сув Був А1їа бБет сіп бек Уа1ї Бех Авп Авр 20 25 30 уа1ї А1ї1а Ткр Рпе сбі1іп біп Ппув Рхо б5іу біп бет Рко Був Геч Гей І1е 35 40 а5

Тухкх Тух Аїа бек Авп о Аку Тук ТПх бсіу Маії Рко Авр Аху Ре Тіт б1Уу 50 55 бо бек с1у Тук с1у ТПх АвБр Рпе ТПх Рпе ТПк І1їе бек ТПхк Уа! б1п А1а 65 70 75 о

Січ Авр Бей Азїа Уа1ї Тухк Рпе Сув біп сіп АБр Тут АБвп бек Рго Ттгр а5 90 95

ТіПг оРБе сіу б1іу сіу ТПг пув Гей Сі І1е пув Акад 100 105 «-2105 БК«53 «211» 118 «2125 РЕТ «213» Миша «220» «221» ПпЕПТИД «222» (1)..(118) «223» Амінокислотна послідовність регіону МН 703 «4005 ч(53 сій Уаї сіп еп біп біп Бех б1у Аї1а сій Рбе Уа! Аку бек с1і1у А1а 1 5 10 15 бек Маї Ппув Ппей бек Сув ТПтІ А1їа бех с1у тей Авп Т1е Пув Ар тТуг

Тут І1е Нів Ткр Ууаї Ппув Сіп Агу Рко сіц біп Уа1! Гей Авр Ттр І1є сіу Ткр ч11е Авр Рго сіц Авп о сі1іу Тук Бех сі Тук Аїа Рко Ага РПе

БО 55 бо біп Авр Був Аза ТПт Месє Тру Аїта Авр Тіт бек бБег Ап оТОПх Аза Тукг 65 70 75 во

Теч Нів Пей Бех бет Гей ТПх бек бій Авр ТПх Аїа Уа1ї! Тук Тук Сув 95 90 5

Авп о Рко сіу бій теп А1ї1а Акуд Тут Рпе Авр Тух Тктр сіу сіп біу ТПг 100 105 110

ТВк Гей ТПх уаї бек бек

«2105 54 «211» 108 «2122 РЕТ «213» Миша «2202» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(108) «223» Амінокислотна послідовність регіону У 703 «4005 54

Авр Т1е Уаї тей бек сіп бек Рко Аїа ТП Гей Бех уУаї ТпПк Рго С01У 1 5 10 15

Авр бек уаї бек ТІецй Бех Субв Аку А1іа Бек біп бек І1е бек Пув АвБп 20 25 Зо

Тїец Нів Тгр Тут біп біп Був бек Нів бій бек Рго Ак Іеи Іецй І1е 35 40 45

Ппув Тук ТПг бек піп Бех І1е Бех С1у І1е Рго бБег Ак9д Рпе бек 01Уу 5О0 55 бо бет с1у Бек СсС1у ТПхт Авр Рпе ТП Гей бек І1е Авп Бех Уа1і сі ТПг 65 70 75 80 січ Авр Рбе с1у Меє Тут Рпе Сув біп біп бек І1е бек Тгр Рхго Гей 90 95

Тік оРпе с1у Аїа сп1у Тбг пуб Ге біц Ге пув Агд 100 105 «2105 Д ЦДДЬ5 «2115 7 «212 РЕТ «213» Штучна «220» «223» Консенсусна амінокислотна послідовність гіперваріабельного домену 11-12 рі0 афінно-лігандного мишачого Ід «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(1) «223» Хаа- Авр, Ппув, ТПх, Бек

«221» ПЕПТИД «222» (2)..:2) «223» Хаа- Тут, бек, Тік «220» «221» ПЕПпПТИД «222» (3)..(3) «223» Хаа- Тук, Уа1, сі1у, Тер, бек, РіГе «220» «221» ПЕПТИД «222 (2)..(4) 223» Хаа- І1е, Меє «2205» «221» ПЕПТИД «222» (5)..(5) «223» Хаа- Нів, с01у, 51ц, Уаї1 «220» «221» ПЕПТИД -2225» (6)..(6) «223» Хаа- Уаі або відсутній «220» «2212» ПЕПТИД «222» (7)..(7) «223» Хаа- Зек або відсутній -4005 ЩД 5 55

Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Ххаа 1 5 «2105 56 «2115 20 «2125 РЕТ «213» Штучний «2205 «223» консенсусна амінокислотна послідовність гіперваріабельного домену ІЇ-12 940 афінно-лігандного мишачого ІдЧС «2205» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(11) -223» Хаа - Нів, Авр, С1у, Тер, Бек, Тух, Ахд «220» «22125 ПЕПТИД «222» (2)..(2) «223» Хаа - І1е, РПе

«2212» ПЕПТИД «222» (3)..(3) «223» Хаа - Тух, Ттр, Теч, бБег, Авп, Авр, 01Уу «220» «2212» ПЕПТИД «222» (4)..(4) «223» Хаа - Тгр, Рко, Нів, ТПг, 5ег «220» «2215 ПЕПТИД «222 (5)..(5) «223» Хаа - Авр, сСіу, сСіц, АТїа, Пе «220» «2215 ПЕПТИД «222» (6)... (6) -223» Хаа - Авр, сС1у, бек, ТІПх, АБпП «220» «221» ПЕПТИД «2225 (7)..(7) 223» Хаа - АБр, сбіу, век, Ркго «220» «221» ПЕПТИД «222» (8)..(8) «223» Хаа - Пув, Авп, Бех, сі, ТОПх, Нів «220» «221» ПЕПТИД «222» (9)..(9) 223» Хаа - Тух, ТПг, Рго, І1е, АБвп «220» «221» ПЕПТИД «222» (10)..(10) «223» Хаа - Тук, Авп, ТПх, Нів, Пув, Зет, с01Уу «220» «221» ПЕПТИД «2225 (11)..(11) 223» Хаа - Авп, Туг «220» «2215 ПЕПТИД «222» (12)..5(12) 223» Хаа - Рго, АвБп, Аза, Авр, 5екг «220» «221» ПЕПТИД «222» (13)..(13) «223» Хаа «- бек, біц, Авр, Ро «220» «2212 ПЕПТИД «222» (14)..(14)

«223» Хаа - ГПем, ПБПув, Авр, ТПг, Тух «220» «221» ПЕПТИД «222» (15)..(15) «223» Хаа - Ппув, РПпе, Уаі1ї, Месє, Агкд, А1а «220» «221» ПЕПТИД «222» (16)..(16) «223» Хаа - бБег, Муз, Сіп, Рго, або відсутній «220» «221» ПЕПТИД «222» (17)..(17) «223» Хаа - Авр, бі1у, Аку, або відсутній «220» «221» ПЕПТИД «222» (18)..(18) «223» Хаа - Рпе, або відсутній «220» «221» ПЕПТИД «2225 (19)..(19) «223» Хаа - Сбіп, або відсутній «220» «2212» ПЕПТИД «222» (20)..(20) «223» Хаа - Авр, або відсутній «400 56

Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хага Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5 10 15

Хаа Хаа Хаа Хаа «2105 57 «-2115 13 -212»» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Консенсуснка амінокислотна послідовність гіперваріабельного домену ІЇ-12 р40 афінно-лігандного мишачого Ід «220» «221» ПпЕПТИД «222» (1)..(1) «223» Хаа- Ак, Авп, Тгр

«221» ПЕПТИД «222» (2)..(2) 223» Хаа- сі1у, ТіПг, Акч, Ркго, Нів «220» «221» ПЕПТИД «222» (3)..(3) «223» Хаак І1е, Ак, РПе, Тук, сіп «220» «2215 ПЕПТИД «222» (4)..(4) 223» Хаа- Аку, Ма1і,Тут, Рпе, А1їа «220» «221» ПЕПТИД «2225 (5)..(5) «223» Хаа- бек, Авп, с1у, Аіїа, Акад «220» «221» ПЕПТИД «222» (6)..(6) 223» Хаа- А1а, Тук, Пей, РПе, Меє «220» «221» ПЕПТИД «2225 (7)..(7) «223» Хаа- Меє, А1ї1а, Авр, їемч, Ре «220» «221» ПЕПТИД «222» (8)... (8) 223» Хаа- Авр, Меє, Тук, Тгр «220» «221» ПЕПТИД «222» (9)..(9) 223» Хаа- Тут, АБр, Авп «220» «221» ПЕПТИД «222» (10)..(10) «223» Хаа- Туг, Аіїа, або відсутній «2205 «221» ПЕПТИД «222» (11)..(11) «223» Хаа- Меї, або відсутній «220» «221» ПЕПТИД «2222 (12)..(12) 223» Хаа- Авр, або відсутній «220» «2212 Р ПЕПТИД

«222» (13)..(13) «223» Хаа- Туг, або відсутній «А0О0» 57

Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5 10 «210» 58 «2115» 15 «-2125 РЕТ «-213» Штучний «220» «2232 Консенсусна амінокислотна послідовність гіперваріабельного домену ІІ1-12 р40 афінно-лігандного мишачого Ідс «220» «221» ПЕПТИД -222» (1).. (1) «223» Хаа - Пуз або Агд «220» «221» ПЕПТИД «2225 (2)..(2) «-223» Хаа - Аїа «220» «221» ПЕПТИД «222» (3)..(3) «223» Хаа - вет «220» «221» ПЕПТИД «222» (4)..(4) «223» Хаа - біп, сіц «220» «221» ПЕПТИД «222» (5)..(5) «223» Хаа - Бет, Аваоп «220» «221» ПЕПТИД «222» (6)..(5) «223» Хаа - Уаї, Те «220» «221» ПЕПТИД «222» (7)..57) 223» Хаа - Бек, с1у, Авр «220» «221» ПЕПТИД «222» (8)..(8)

«223» Хаа - Авп, ТПх, Гув «221» ПЕПТИД «222» (9)..(9) «223» Хаа я Авр, Авп, Туг «220» «221» ПЕПТИД «222» (10)..(10) «223» Хаа - Уа1, с1У, Теч «220» «221» ПЕПТИД 222» (11)..(11) -223» Хаа - А1їа, І1е, Нів «220» «221» ПЕПТИД «222» (12)..(12) «223» Хаа - бек, або відсутній «220» «221» ПЕПТИД «222» (13)..(13) «223» Хаа - Рпе, або відсутній «2205 «221» ПЕПТИД «222» (14)..(145) «223» Хаа - Меї, або відсутній «220» «221» ПЕПТИД «222» (15)..(15) «223» Хаа - Авп, або відсутній «400» 58

Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаз Хаа Хава Хаа Хаа Хай 1 5 10 15 «210» 59 «21155 8 «212» РЕТ «213» Штучний «220» -223» Мойве ІдсС Сопвепвив І1-12р4а0 СОКБ агтіпісу 1ідчапа ашіпо асій вецдцепсе «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(1) «223» Хаа - Тук, бек

«2212 ПЕПТИД «2225 (2)..4(2) «223» Хаа - Аіїа, ТПхг «220» «221» ПЕПТИД «222» (3)..(3) 223» Хаа - Бех, Аїа «220» «221» ПЕПТИД «222» (4а4)..(4) -223» Хаа з Авп, Нів, бех,сіп «220» «221» ПЕПТИД «222» (5)..(5) -223» Хаа - АкЧд, Авп, бек «220» «221» ПЕПТИД «222» (6)..(6) «223» Хаа - Тут, сіп, ІТ1е «220» «221» ПЕПТИД «222» (7)..(7) «223» Хаа - Тпг, бек, 01У «220» 221» ПЕПТИД «222» (8)..(8) «223» Хаа - бек, або відсутній «4005 59

Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хга Хаа 1 5 «-2105 «60 «2112 59 «-2125 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Консенсусна амінокислотна послідовність гіперваріабельного домену ІІ-12 р40 афінно-лігандного мишачого Ід «220» «221» ПЕПТИД «222 (1)..(1) «223» Хаа - сіп

«221» ПЕПТИД «222» (2)..(2) «223» Хаа - сіп «220» «221» ПЕПТИД «222» (3)... (3) «223» Хаа - Авр, Тух, век «2205 «221» ПЕПТИД «222 (4)..(4) «223» Хаа - Тут, Авп, Пув, ТІ1е «2205» «221» ПЕПТИД «232» (5)..(5) «2235» Хаа « АБвп, Тік, бек, б1ц «220» «2215» ПпПЕПпПтТИД «-222» (6)..(6) 223» Хва - бетг, Туг, Ма1ї, Тгр «220» «2215» ПЕПТИД «222» (7)..(7) «223» Хаа - Рко «2205 «221» ПЕПТИД «222» (8)..(8) 223» Хаа - Ткр, РПе, Тук, Бец, Рго «2205» «221» ПЕПТИД «222» (9)..4(9) «223» Хаа - ТПкг, Бек «400» 60

Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хва Хаа Хаг 1 5 «210» ві «211» 119 «212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 104.1 «-400з» 61 біч Уа1 Ту рей Акту бі бек с1у Рго Аїа пеш уУаї Пув Рго ТПг сіп

1 Б 10 15

ТП Тецп ТП Пей ТБк о Сув ТБбу Рпе бек с1іу Рпе бек Ппем бет Пув бБекг

Зо

Ууа1ї Меє сту Уаї бек Тур І1ї1е Акд біп Ркго Ркго сі1іу Ппув Аіїа Гей бій

Тер теп АТа Нів І1е Тух Ткр Авр Авр Авр Ппув Тук Тух Авп Рго бекх 6о

Теп ГПув бек Ак Ппей ТПкх ІЗїе Бек Був Авр ТПт бек Туз Авп біп Уаї 65 7о0 75 во уаї Пец Тіт Мес ТпПх Авп о Месє Авр Рко Уаї Авр Тіт Ата Тік Тут Тук 85 зо з5

Сув Аза Акд Акуд с2іу І1е Акуд Бек А1їа Меїг Авр Тук Тктр с1у сіп сС1у 100 105 110

Тк о ТПх о Уаї Тпк Уа1! Бех бек 115 -2105» лЛ62 «211» 108 -212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ, 104.1 «4005 К562

Авр т1е Уа1ї Мес тб о біп бБет Рго Авр бек Течш Аїа Уа1ї бек Гей 01Уу 1 5 10 15 сі Аку Аза ТК оІ1е Авп оСув лув А1їа бек біп бех Уа1і бек Авп Авр 20 25 Зо уаї Аїа Ткр Тут сбіп біп Пув Рго с1у сіп Рко Рго Пув Печп Гей І1е 35 40 45

Тут Тут Аїа бек Авп Акч Тук ТртІ біу Уа1ї Рко Авр Акд Рбе бех 01У

БО 55 6о

Зек сіу бех сіу ТпПх АБр РПе ТПх Тей ТП оІ1е бек бек Ппеч біп Аза 65 70 75 80 а1ц Авр уаї А1їа Уаї Тут Тут Сув біп біп Авр Тук Авп бек Рхко Ткгр во 90 95

Тахо Ре сіу с1у с1у ТПк Був Уа1і бі чІ1е Гув АкдФ 100 105 «210» 63 «2115 119 «212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна гослідовність регісну УН 104.2 «4005 63

Сі уаї ТпПт Геї тув бій Бек с01у Рго Уаі1ї тей Уаї Грув Рко ТтТПх б1и 1 Б 10 15

ТПг Те ТПх пес Тпк о Сув ТП Уа1ї бек б1іу Ре Бек Гечп бек БПув бег зо уаї Месє с1і1у Уаї бек Тгр т12е Аку біп рхо Ркго сі1у був Аїа Тед Ти а5

ТЕр Іеч Аїа Нів тТ1іе Тук Ттр Авр Авр Авр Пув Тук Тук Авп Рго бекг

БО 55 Бо

Ттеч Ппув бет Ах еп ТПт І1їев бЗет пуб АБвр ТПг бек Був Бек с1п Уаї 65 70 75 8о

Уаї Ппеш ТПу Меє тТПх АвпоМес Авр Рхо Уаії Авр ТП Аза Тр Тук Тух 85 90 95

Сув Аїа Аку Аку сіу Іі Ахуд Бек А1їа Меє Авр Тухк Ттр С1у б1іп 01У 100 105 110

Тік тТПпх Уаї торг о Ууаї бех бек 115 «210» 64 «-2115 108 «212 РЕТ

«213» Штучний «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 104.2 «4005» 6564 січ І1е Уаї Меє тб сіп бек Рко Аза ТПпт Пец бех Уаі Бех Рго сФ1Уу 1 5 10 15 б1Ч Агу А1а ТБт Гец бег Сув Був А1їа бек сб1іп бек Уаії бек Авп оАвр уа1ї А1а Тер Тут сіп сСіп ув Ркго сіу Сіп АтТа Рко АкЧ ІТей Іей Іїє а5

Тут Тут Аіїа бек АБп Акуд Тук ТПІ с1іу І1е Рко Аї1а АкЧч Ре Бех 0Щ1Уу 60 бек п1у бек спіу Тпг Сіп Ре ТБПк о Тепп ТПт І1е бек бек Гецп сіп 5ег 65 70 75 8о сі Авр Рпе Аїа Уаї Тухкх Тух Сув біп біп АБр Тук АБпобет Рко Ттр 85 Зо 35

Три Ре с1у с1у с1у ТП Ппув Уаії піц ї11е цув Акд 100 105 «210» 65655 «-211» 119 «212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 10р4.3 «400» 165 сій уаї ТП Гей Агу біц Бек б01у Рго Аїа Гец уаії Гув Рго ТГК о біп 1 Б 10 15

Так гей ТП їєц Ту Сув Тк о Рре бек сС1у Рпе Бех Геї бетї Пув бБег 20 25 Зо уаї Мес сіу уаї бег Тер ІчІ1е Ак біп Рго Рго сбіу ПпувБ Аїа їІецй б51ц 35 40 аб

Тгр Пец Аза Нів І1е Тук Тер Авр Авр Авр пув Тут Тук Авп Ркго 5ег 50 55 бо

Тез Пув Бех Ак Пец Тіт І1е бек Пув Авр ТОК бек Ппув Авп бсіп Уа1 65 70 75 во уаїії Пецш Тпх Мес ТрПг о Авп Меє Авр Рго уаі Авр ТПк Аїа Тпх Тук Тук 85 90 95

Сув Аза Аку Аку с1у І1е Аку бек АЗїа Меє АБр Тут Тктр с1у піп с01У 100 105 110

ТпПІ ТпПт Уаі Тк Уаі бек бег 115 «2105 66 «2711» 108 «2125 РЕТ «213» Штучний «2205» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 104.3 «400» 6566 бій ТІТ1е уУаї Меє Тк сСіп Бех Ркго А1а ТБт Гей бек Уа! бек Рго с01у 1 5 10 15 бій Аку Атїа Тпт тей бек Сув Пув А1їа Бек біп Бек Уа1! бек Авп АБр уаї Аї1а Тгр Тух Ссіп біп Пув Ркго с1у біп Аза Рго Агкд Тецш Іец І1е тук Тук А1їа бек Авп Аку Тук ТП с1у чІ1е Рго Аіїа Акуд Рпе Бек С01У 5О 55 60

Бек с1у Бек сіу Тк 01 Рре ТПтх Гей ТПг І1е Бек бек Ге сіп бег 65 70 75 во січ Авр Ре Аза Уа)! Тух Тух Сув сбіп біп Авр Тук Авп бек Ркго Ттр 85 90 95

ТпПг вБпе сіу сі1у с1у ТПг пув Уаї сій ч11е пув Агд9 100 105

«2105 67 «211» 120 «2122 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 1А6.1 «34005 67 біц Ма1 Тк теп Акуд сіц бек сіу Рго Аїа Тейп Уа1і! Ппув Рго ТПт с1п 1 5 10 15

ТП ге тп Пец Тру Суб ТПх Рре бек б1у Рпе Бех ІТєп бек Тіт бек сіу Мес сіу уаї бек Тктр ІчІ1е Аку б01п Рко Рко б1у гув Аїа Тецй с1ц

Ткр Пец Атїа Ніє І1е Тер ТЕр Авр с01у Авр Авп Тук Тук Авп Ркго Бек бо

Гей пув бек Ак Гей Тбт І1їе Бек Пув Авр ТПт Бек Ппув Авп біп Уаї1 65 70 75 во уаі Пец ТП Меє ТПтІ АвБп оМеє Авр о Рго Уаї Авр ТпПг Аїа ТП Тух Тукг 85 90 95

Сув Аза Акту Ак Тпх Ахуд Уаї Азп оТут Аза Мес Авр Тут Ттр сіу с1г 100 105 110 атїу ТП ТПк оУаії Трт Уаї бек бБег 115 120 «210» 658 «211» 108 «212» РЕТ «213» Штучний «-2205 «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ, 1А6.1 «400» 68

Авр І1е Уаї Меє ТпПІ біп бек Рко Авр бБег Гей А1їа Уаї бек Ге 0Щ1У 1 Б 10 15 біч Аку Аза ТБт І1е Авп о СуБ пуб А1їа бек Сіп бек Уаі1і Бек Авп Авр

Зо уаї Аї1а Ткгр Тух біп СсСіп ТуБ Рко сіу біп Рго Рго Пув Гей їечп І1е

Тух Тухк А1ї1а Бех Авп Аку Тук ТПт б1у Маії Рко Авр Агуд Рпе бек 01у бо бек бі1у бек Сіу Тіп Авр Рбе ТПт Пецп ТП Іїе бех Бек Ге Сіп А1Та 65 70 75 во бій Авр Уаії А1їа УМа1і Тут Тут Сув біп біп Авр Тух Авп бех Рго Тутр 85 90 95

ТБрІ Рпе сі1у сбіу сі1у ТпПК Пув Уаї сі чІ1е Гув АкдФ 100 105 «-2105 69 «2115 120 «212» РКТ «213» Штучний «-220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 1А6.2 «4005 69 сі УуУаї ТК тей Ппув сії бБет сіу Рго Уаії Гей Маії Ппув Рго ТПпх бій 1 5 10 15

ТПк Гей ТБ Те ТК Сув Тпх Уа1і! бек с1у Рпе Бек Іевй бБет ТІПх 5ех 20 25 30 сіу Меє с1у уа1 Бех Ттр т11е Акуд біп Рго Рго біу їув Аїа Гей с1и 35 40 45

Ткр Геч А1їа нів І1е Тер Тгр АБр б1у АБр АБп Тут Тук Авп Рко бег

БО 55 бо

Гей Був бек Акд Гей Тік Ії1е бегт Пув Авр ТПг бБет Пув Бек сіп Уаї 65 70 75 во

УуУаї теп ТПУ Мес Ту Авп Меє Авр Рто Уа1і Авр ТПт Азїа Тпк Тухк Туг в5 90 35

Сув Аїа Аку Аку ТПт Акд Уаі Авп Тут Азїа Мес Авр Тух Тктр С1у Ссіп 100 105 110 с1у ТП ТП Уаї Тру Уаї бек бек 115 120 «210» 170 -2115 108 «212» РЕТ «213» Штучний «2205» «223» Амінокислотна послідовність регіону Уї. 1А6.2 «4005 70 сі ТІ1е Уа1 Меє Тпх біп Бек Ркго Аіїа ТПх Пец бек Уаії Бек Рго 01у 1 Б 10 15 бій Ак Аїа ТБт о Тей бек Сув Пув Аїа Бех Сіп бек Уаі1і бек Авп Авр уаї Аїа Ттр Тук біп біп пув Ркго б1у біп Аїа Ргко Акд4 Пешй Геч Ії

Тух тут Аїа бек Авп Аку Тут ТПх піу І1е Рго Азїа Агу Рре бек 01У 5О 55 бо

Бех сіу Бек сіу ТпПх бі Рре ТПх Пец ТПг о Т1е бек бех Теч сСіп б5ег 65 70 75 80 сій АвБр Рпе Аза Уа1і! Тук Тук Сув біп сіп Авр Тух Авп бех Рко ТЕтр в5 90 95

ТЬПт Рпе сіу сіу біу ТП Був Ма1і бій І11е Пув Аг4д 100 105 «2105 71 «211» 112 «2125» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 8Е1.1 «4005 71 сій Уаї сі1іп Гей Уа1! 514 бек с1у с1у б1у пес Уа1і сіп Рго бі1іу Щ1У 1 Б 10 15

Бег теп АкЯ4 Іейп Бек Сув А1ї1а А1їа бек біу Рпе ТП Рпе Бех Авр Туг

Зо сіу Меє Ууа1 Тер Уаї Атд сСіп Аза Рко сб1у Був б1у теп сі Ткр Уаї1 сіу бек І1е бек бек сіу бек Бек Авп І1іе Тук Тут А1їа Авр ТПх Уаї

БО 55 6о

Пув с1у АкЯ4 Робе Тру Т12е Бех Акуд Авр АБр бек Пув Авп бек Гей Туг 65 70 75 во

Тез біп Меє АБп Бек Пеп Пув ТБ бі Авр ТБт Аїа Уаії Тук Тук Сув 85 90 95

А1а Агу Авп Рко Тух Ттр біу біп с1іу ТПт ТПх Уа1ї ТПх Уаї Бек бек 100 105 110 «2105 72 «211» 108 «2122 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ ВЕ1.1 «4005 ДЦ :72

Авр І1е сіп Меє ТпПт біп Бех Рко Бех бек теп бек Азїа Бех Уаї с1у 1 Б 10 15

Авр Акч Уаії ТпПх І1е ТПк Сув Пув А1ї1а бек сіп Авп Уа1! сіу ТПхк Авп 20 25 о) уа1ї Аїа Ткр Тук сбіп сіп Ппув Рко сій Пув А1тї1а Рго Пув бБет ТІєцй Т1е 35 40 45

Тук бек А1ї1а бек Нів Аку Тук бБет с1у Уаіїі Рго бек Агу Рпе бек 01У 5О 5ББ 60 бек сіу бек біу ТП Авр Рре Таї Ппей ТПт І1е бек бек Гецп сіп Ркго 65 70 75 во сі Авр Ре Аіїа ТП Тук Тук Сув біп біп Тук Авп бек Тух Рго Іец 85 90 95

Тпт Рпе с1у сіу сіу тПпх Був Уаі сі чІ1е Був АгФ6 100 105 «2105 273 «2115» 112 «212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МН 8Е1.2 «4005 73

Стіи уаї с1іп Ппейп уа! сій бек а1у с1у сі1іу Гец аї ув Рко с1у с1у 1 5 10 15 бЗет Пец Ак Пец бек Сув А1їа Аїа бек с01у Рпе Ті Рпе Бек Авр Тукг сіу Меє Уа! Тктр Уаі Акд бі1іп Аїа Рхго с1у Пув б1у Іей сій Ткр Маї1 беїт бБет І1е бек бек Сіу бБет бек АБп оІ1е Тут Тут Аіїа Авр ТПг Уаї 6о пув с1у Ату Рпе ТпПкт Т1іе бек Акуд Авр Авп Ата пув Авп бек Пец Тух 65 7о 75 8о

Теч біп Меє Авп обет Теп Аку Аза бі Авр ТОх Аїа Уаї Тух Тук Сув 85 90 95

А1а Аг АБпоБко Тут Ттр сС1у с1іп с1у ТПт Тк оУа1! ТТ Уаї бек бег 100 105 110 «2105 Жл74 «-211» 108 «212» РЕТ «2135 Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону Уї 8Е1.2 «4005 ЩД 74

Авр І1іе біп Меє ТПух біп бек Рко бек бек Уа1і Бех А1ї1а Бек Уа1! С1У 1 5 10 15

Авр Ак Уа! ТПпх І1е ТП Сув ув Аїа бек Сбіп АБп оуаї сС1у ТК Авп уа1ї А1їа Ткр Тух біп сіп Гув Рго с1у Ппув Аіїа Рго Пув Геч Геч І1е тТук бек Аза бетх Нів Аг Тух бек с1у УМаії Рко Бех Акду Рре бек с1у 5О 55 6о0 бек С1у бек с(1у Трт АБр Рре ТП Гей ТБПт о І1е бек бБет Ге С1іп Ркго 65 70 75 во бій АБр Рпе АтТа ТПу Тухк Тут Сув біп сіп Туг АБп бек Тух Ркго Гей 85 зо 95

ТПк Ре сіу с1іу с1іу Тпг Пув Уа1! бі І1е Гу АгдФ 100 105 «2105 .Д75 «-21155 117 «2125 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 307.1 «4005 Д :775 ат Ууаї сіп Пеп Уа1ї біп бек с1у Аїа с1шп Уаї Пув Пув Рко с01у Бег 1 5 10 15 бек уаї Ппув Уа1і бек Сув Пув Аїа Бех с1у с1у ТПх РБбБе Бек Ар Туг 20 25 30

Ткр ч1ї1е бій Ткр Уаі Аку б5іп Аза Рко сіу сіп біу рей сії Ткр Мес 35 40 45 ст1у с1у Рпе бек Нів сСіу Бех сіу Бех Тпкх Авп Тук Авп Осії Був Рре бо

Пув с1у Аку Ууаї Тк І1е Тк діа АБр Гув бек Тіт бек Так А1їа туг 65 70 75 во

Меє сій Те бех бек Тец Акуд бек сі Авр ТОхт А1а Ууа1ї Тук Тук Сув 85 90 95

А1а Аку Агуд Акад Рре Акуд сіу Мес Авр Тут Ттр с1у сбіп с01іу ТПг о тоПг 100 105 110 уаї ТП Уа1ї бек бБег 115 «210» 176 «211» 108 «2125 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 307.1 «2005 76

Авр І1а Уа1ї Месє ТП сіп бБег Ркго Авр бек тей А1їа Уаі1ї Бек Гей сіу 1 5 10 15 сі Аку Аїа ТП о т1е АБп оСув Був Аіа бет біп бек Уаії бБег Авп Авр уаї Аїа Ткр Тухк біп сіп пув Рго сіу сіп Рко Рхто Гув Гечп Тец І1е

Тух Тут А1їа Бех Авп Аку Тут ТП с01у Уаії Рко Авр АкЧд Рпе Бех (1У

БО 55 6о бБетх с1у бек біу ТП АБр Рпе Тіт Те Ту І1е Бек бег Пец біп А1а 65 70 75 во

Сі Авр Уаї Аїа Ууа1ї тук Тут Сув біп Сіп Авр Тут Зек бек Рхго Ткр в5 90 35 бет Рпе сіу б1у сіу Тк Пув Ууаї бій І1е Гув АгкдФ 100 105 «2105/7177 «211» 117 «212» РЕТ «213» Штучний

«223» Амінокислотна послідовність регіону УН 307.2 «-4005 Й Д 77 сі Уа! сіп Гецп Уа1ї біп бек с1у Аї1а січ Уаї цПув Пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 бЗет Уаї Пув Уа1 Бек Сув БуБ А1їа Бек с1у Тук ТПг Рпе Трт Ар Тух

Ткр т116е 01 Тер Уа1 Аку Сіп Аза Рко б1іу біп с1у їейп бій Тер Меб а5 ат1у сіу Рбе бек Нів сп1у бек бсіу Бек ТПпПт АБп Тут АБп Січ Пув Рре

БО 55 60 пув с1у Акч Уа1 ТрПг Мес ТПг тк АвБр Тк о бБет ТПт Бек ТПІ А1Та Туг 65 70 75 во

Мес сі теп Ахкд бек ГПей Акуд бех Авр АвБр Тіт А1їа уаї Тут Тук Сув 85 90 95

А1а АгЧ Ако Аку Рпе Акуд сіу Меб Авр Тут Тгтр ш01у біп сС1у Тк ТЕГ 100 105 110

Ууаї Тпк Уа1ї Бек бек 115 «2105 78 «2115 108 «2122 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 307.2 «4005 78 сі І1е Уа! Меє ТтТпх біп бек Ркго Аіїа ТПг Гей бек Уаї бек Рхо с01У 1 5 10 15 сій Ак А1їа Тк о Тец бек Сув Був Азїа бег сСіп Бек Уа1 бек Авп Авр 20 25 Зо

Ууа1і1 Аїа Тктр Тух біп біп був Ркто біу сбіп Аза Рго Ат Те Іецй Ііїє 35 40 45

Тут Тух А1ї1а Бек АБп Агу Тук ТпПхІ с1у ч11е Рго А1а Агу Рпе бех щЩ1уУ 50 55 бо бек с1у Бек с1у Тік сій Рре ТПг Тецй ТпПт І16є Бек Бех Гей біп Бех 65 70 75 во січ АБр Рпе А1їа Маії Тук Тут Сув біп сіп Авр Туг Бек бек Рго Ттр 85 90 935

Бек Рпе сіу сіу с1у ТПх Ппув Уа1і бій чІ1е був АгдФ 100 105 «-2105 789 «211» 108 «212» РЕтТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 1А6.9 «4005 Д 79 бек Ма1 Маї Меє тру сіп бек Рко Авр бек Пец А1їа Уаі Бех тецп ШЩ1Уу 1 5 10 15 біц Ага Аїа ТОпт І1е Авп оСув пув Аїа бек Сіп бек уаі бек Авп Авр уа1 Аїа Ткр Рпе сіп б1п Пув Рго с1у біп Ркго Рко Іув Гей Геч І1е2 а5 тут Тук А1їа бек Авп Акуд Тух Тр с01у уаї Рго Авр Аку Рре Бех Щ1У

БО 55 бо

Бет с1іу Тут с1у ТпПг АБр РОПе ТПх Тез ТПт І1е бек бек Гей біп А1а 65 70 75 во сій Авр Уаї Аїа Уаї Тук Тук Сув біп сіп Авр Тут Авп бек Рго Ттр 85 90 35

ТП Ре сі1у сіу с1у Тпх Пув уаі1 біц І11е Пув АхЧдФ 100 105 «210» 80 «2115 119

«2122 РЕТ «2135 Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 104.6 «4005 80 сі уа1! Тк тец Агу сі бБет б1іу Ркго АТа Гей Уаї їув Рго трЕ сіп 1 5 10 15

ТІ Пеш ТПтх теп ТП о Сув Трт РБе бек с1у Рре бек Тейп бек Пув бег

Зо

Уаї Меє сіу Ма! Бек Ткр І1е Аку біп Рго Рго 01у ГувБ Ала Гей с1и

Тер Гец АтТа Нів І1е Тук Тур Авр Авр Авр Гув Тук Тут Авп Рго бег бо їПечп пуБ бехт Акуд Ппей ТПї І1їе бек Гув АБр Тіх бек Куб АБп СсСіп Ууаї 65 70 75 во

Ууаіїії Печ ТПт Мес Трг АБп о Мес АБр Рко Уаї Авр ТПх Аїа Трх Тук Тук 85 90 5

Сув Тік Акуд Акуд с1іу Т1е Аку Бек Аїа Меє Авр Тух Тер с1у сіп щЩ1У 100 105 110

Тпт ТпПк оУа1! Тк оУа1ї бек 5ех 115 «2105 81 «2115 108 «212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ, 104.6 «4005 81

Авр Уаії Уаї Мес ТП осіп Бек Рго Авр б5Бет Те Аїа Уаї бек Гей Шу 1 5 10 15 сій Аку Аїа ТПх І1е АБп оСувБ Був А1їа Бек біп бег Уаї бек Авп Авр 20 25 Зо уаї Аїа Ткр Тук біп сіп пув Рко сіу сіп Ркго Ркго Пцув Тей Пец Те 35 40 45

Тухк Тут А1їа бек АбБп Аку Туг ТПг о сіу Уаі Рко Авр Аку Рпе Бех 51Уу

БО 55 60 бек сі1у Тук сС1у ТБПі АБр РПе ТПІ Гецш Трт І1е бек бет Гецп сСіп АТа 65 70 75 во бі Авр уаї Аї1а Уа1ї Тук Тук Сув с1іп бі1іп Авр Тут АБп бек Рхго Ттгр 85 90 35

Тпх Рпе с1у сіу сс1у ТПт Ггув уаї сії І1е був АкдФ 100 105 «2105 82 «211» 119 «2125 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 104.7 «4005 82 сід уаї1ї ТП Гей Акуд бі бек сіу Рко Атїа Пец уа1ї Тув Рго ТрК сіп 1 5 10 15

ТПх Гей ТП о Тїей ТОх Сув ТПх Робе бек б1іу Рбе бек тей Акуд Пув бек уаї Меє сіу Уа1і Бек Тгр 112 Акуд біп Рго Рхто сСіу ув Аїа їєц б1ц зБ 40 45

Ткр Пец Аїа Нів І1є Тук Ткр АБр АБр АБр Пув Тук Тут Авп Рко бег

БО 55 бо пес пув Бек Агуд Тейп ТПкт ТІ1е бех Ппув Авр ТПх бек Гув АвБп о Сіп Уаї 65 7а 75 Іео)

Ууаї Ге тру Мес ТПу Авп Мес АБр Рго Уаї Авр Тк Аїа Тіт Тук Туг 85 90 95

Сув ТПк Аку Аку С1у ч11е Аку Бех А1їа Мес Авр Тут Тгр сіу біп С1Уу 100 105 110

ТПх тк уаї ТОК оМа1ї бек бек -2105 83 -2115 108 «212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону Уї, 104.7 «4005 83

Авр уа1 Маї Мес Ті біп Бех Рко Авр бех Гей Аї1а Уаї бек Гей 01у 1 5 10 15 січ Ага Азїа тТрт І1е АБп о Сув Пув Ата бех біп бек Уаії бехт Авп Ар уаїі А1а Тттр Тух біп сіп Ппув Рго сіу Сіп Ркго Рго пуб ей Ієцй І1е тут Тут Аїа бек Авп Акуд Тут ТПх сіу уаїії Рко Авр Акд Робе бек 01Уу

БО 5Б бо бек с1у Тух сп1у ТпПт Авр Рпе ТПт Пец ТрПг І1е бЗет бек Гей біп А1а 65 70 75 во сі АБр уаі АТа Уа1і Тук Тут Сув біп б1іп АвБр Тут АБп бек Рго Тгр 85 90 95

ТПЕ Ре б1у с1у с1у тТпПх Пцув Уа1і сій т1е ПцПув Ага 100 105 «2105 84 «-2115» 119 «212 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 104.8 «4005 84 сіш уа1 ТтПх Гецш Аку сі бек с1іу Ркто Аїа Гец Уа1 Пув Рко ТПкК с1іп 1 5 10 15

ТП Гецп ТпПх Гей Тк о Сув ТпПт Ррбе бек б1іу Рпе бек Гей Аку Пув Бекг

Зо уаї Меє сіу Уаі Бек Тур І1е Аку сіп Рко Рго 5іу ПпПув Аїа ПГецй сій а 45

Тгр Гей Аза Нів ТІ1е Тук Тгр Авр Авр Авр Пує Тук Тух Авп Ркго бекхг 5О 55 60

Гей ГПуБ бек Аку Гей ТПї І1е Бек Гув Авр ТПхг бек Пув АБп біп Уаї 65 7о 75 во уаїії еп Тр Меє Тіт АБп Меб Авр Рко Уа1 Авр ТПІ Аїа тПт Туг Туг 85 30 95

Сув ТПкх Ака Аку б1у Т1іе Ако бет Аїа Мес Авр Тут Тгтр біу біп щЩ1У 100 105 110

ТПт о ТтТПх Уа! Тіт Уаї Бек бег 115 «210» 85 «-2115 108 «2125 РЕТ «2135 Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 104.8 «4005 85

Авр чІ1е Уа1і Мес Ту біп бек Рго Авр бБеїх Іейп А1їа Уаії бек Гей с1у 1 5 10 15

Сі Аку Аза ТпКкоІ1іе Авп Сув Був А1їа бек Сіп бек Уа1ї бек Авп Авр 20 25 Зо уа1ї А1ї1а Тгр Тук біп сбіп Тув Ркго б01у б5іп Рго Рго Пув Гей Тем І1е 35 40 45

Тут тут А1ї1а бек Авп Акад Тук ТПт б51у Уаії Рго Авр Акад Рпе Бек 01у

БО 55 бо бек сіу бек сіу ТПтІ АБр Рое ТПтх Гей ТПтІ І1е Бег бет ГТец біп А1а 65 70 75 8о сій Авр Уа! Аїа Уа1ї Тук Тух Сув біп біп Авр Тук Авп бек Рко Ткр 85 90 95

ТПх Рпе сі1у сі1іу с1у ТПх пув уаї сіц ч11е Був АкдФ 100 105 «210» 86 «211» 119 «212» РЕТ «2135 Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 104.9 «400» 86 стіп Уаі тТпПт Тед Аку сій бек сб1іу Рко Аї1а Пец Уа1і Ппув Рхо ТПх сіп 1 Б 10 15

ТПх Гец ТПк тей ТОК Сув Тбт Рпе Бек Сс1у Ре Бек тей Аху Був Бех 20 25 Зо уаї Меєс сіу уаї бек Ттр І1е Акуд 5іп Рко Рго с1у Був А1ї1а Гей с1ц 35 40 а5

Ткр Ге Аза Нів І1е Тук Ттр Авр Авр Авр тТув Тук Тут Авп Рхо Бех

БО 55 бо

Тецй Пув бек Акд Пец ТПг І1е бек ПпуБ Авр ТПт бек тувБ Авп Сіп Маї 65 70 75 во

Ууаї Ппей ТПтІ Меб ТПпх Авп Мес Авр Рхо Уаі Авр ТПг Аїа Три Тук Тут о 95

Сув ТПт Аку Ах біу ч11е Ату бех Аза Мес Авр Тук Ттр сі1іу сіп с1у 100 105 110

ТБх Ток оУаї Тбх Уа1ї Бєх бек 115 -2105 87 «211» 108 «2122 РКТ «213» Штучний

«223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 104.9 «4005 87

Авр І1е уа1ї Меє Тк біп Бех Рго Авр бБет Пец Азїа уа1і бек Пец Щ1У 1 5 10 15 січ АкЯ А1їа ТО о І1е АБоп оСув Пув Аїа бек біп бек Уаії бек Авп Авр уа1і А1а Тер Тук біп б1іп Пув Рго сіу сіп Рко Рхго Пув Гей Пец І1е тук Тут Аїа Бек Авп Акуд Тут ТПпк сіу Уа1і Рко Авр Акуду Рре Бек Щ0Ш1У

Бо 55 бо бек с1у Тук с1у ТПпх Авр Рпе ТПх Тецп ТПт Іїе бек бет теп сіп А1а 65 70 75 во бі АвБвр уаі Аї1а Уаі Тут Тук Сув сіп біп АБр тут Авп бек Рго Ттр 85 90 5

ТП Рпе сі1у с01у п1у ТП пув уаї сій т1е Гув АгдФ 100 105 «2105 88 «2115» 112 «212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 8Е1.3 «4005 88 сі Маї Пув рей Уаї бі бек сіу сіу с1у Пец Уаї сіп Рко с1у 01у 1 5 10 15 зек рей Акд тей Бех Сув Аїа А1ї1а бек сіу Рпе ТПт Рпе бБет Авр Тукг 20 25 30 сіу Мес Уаї Ткр Уаї Агу сбіп Азїа Рго с1у ПпуБ с01у Те сій Тгр Уаї 35 40 45

А1їа Бек І1їе Бех Бек сіу Бек бек АБп І1е Тук Тухкх А1а АБр ТіК Уаї

БО 55 6о цув п1у Ак Рпе ТПт І1е Бек Аку Авр АБр Бех Гув Авп о ТПк о Ппей Тукг 65 70 75 во теп сіп Мес Авп бетх Теп Був ТПк сій Авр ТПт А1та Уаї Тухк Тук Сув 85 90 95

А1їа Аг АвпоРко Тук Ттр с01у сСіп с1у ТпПк Тргт о Уаї Тк Уа1ї бек Бех 100 105 110 «2105 89 «211» 108 «212» РЕТ «213» Штучний «2205» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 8Е1.3 «4005 89

Авр Ііе уаї Мес ТОК о біп бБег Рко Бек бек Гец бехг Аіїа Бек Уаії "ТУ 1 5 10 15

АБр Агу Уаї Тк І1е ТП оСув ПувБ Атїа Бек сіп Авп уа1 СсС1іу Три Авп 20 25 30 уа1ї А1а Ткр Тут біп б1п Пув Рко с1ц Гув АлЛа Рко Тув бек Тез І1їе 35 40 аБ

Тухк бек А1а бек Нів Аху Туг Бех сіу Ма1 Рко бек Акуд Рпе Бех 0Ш1У

БО 5Ь бо бек с1у Бек бсіу Так АБр Рпе ТП Гей ТПх І1їе бек Бех їєчй б1п Рго 65 76 75 во сі Авр Рпе Аїіїа ТПт Тук Тук Сув біп с1п Тут Авп бетк Тут Рго Іец 90 95

ТПг о Рпе сіу сі1у с1у ТПк Був Уа1ї с1ц ІчІ1е Пув Агд 100 105 «2105 90 «-2115 117 «212» РЕТ «213» Штучний

«223» Вмінокислотна послідовність регіону УН 307.3 «4005 90 січ Ууаї с1п Пец Уаї Сіп Бех с1у А1ї1а сії Уаії Пув Пув Рко с1у А1а 1 5 10 15 бек Уа1 Пув Уаїії Бек Сув пуб Аїа ТПх сіу Тук ТПг Рпе АБп АБр Туг 20 25 Зо

Ткр тіе бі Тер Уаї Аку біп Аїа Рко с0іу біп с1у Гей бі Тгр Меєб 35 40 45 сіу сС1іу Рпе бек Нів СсС1у Бех Сіу Бех Тік Авп Тук Авп біц Гу5 РБе

БО 55 60 їув с1у Акад Уа1 ТБбу Меє ТІ А1а АвБр бБет бек ТПк АвБп ТПх Аїа Тут 65 70 75 50

Меє сій Тїеч Аку бег Іецй Аку бех АБр АвБр ТПг Аза Ууаї Тут Тук Сув 90 95

А1а Аку Аку Агу Рпе Акоу біу Мес АБр Тут Тгр б1у біп с1у ТіПх Тіг 100 105 110 уа1їії тік Уаї Бех Бег 115 -2105 91 «2115 108 «212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ. 367.3 «4005 91 бі ч11е Маї Меє ТПк біп бБексг Рко А1їа ТПт Гец бек Уаї Бек Рго 1Уу 1 Б 10 15 січ Аку Аза Тк Те бет Сув Гув А1ї1а бет біп бек Уа1їі бек Авп Авр зо уа1ї Аїа Тер Ту Сбіп б1іп Був Рго біу сбіп А1а Рго Акд Геви Гпем Т1е а5

Тук Тут Аза бек АБп Акуд Тут ТП б1у Ма1ії Рко АБр Акуд Робе бек 01У 50 55 бо бек сіу бек с1іу ТПх бій Рре Тпт Гей ТПт І1е бех бек Тед біп бек 65 70 75 во сій Ар Рпе Аїа Уаї Туг Тут Сув сіп сіп Авр Тух бек бек Ртго Ткр 85 0 25 бЗек РБе сі1у б1у с01у ТПх Ппув Уаї 010 чІ1е Гув Акуд 100 105 «2105 92 «211» 30 «2122 РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..:(30) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 1392 сіп Ууаї тк Гей Ака бі Бек с1іу Рко Аїа Гей Уаї Тув Рхго ТіК сСіп 1 5 10 15

Так реп Тк Те Тк о Сув Тпг Ге Тут сіу РПпе бек Іеї бех «2105» 93 «2115» 11 «212» РЕТ «213» Людина розумна «2205» «221» ПЕПТИД «2222 (1)..(11) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «-4005 93

Тктр сіу біп с1у Тбх Гей Уа! ТБПт Уаї Бек бек 1 Б 10 «2105» -(94

«-2115 30 «212» РЕТ «213» Людина розумна «2205 «221» ПЕПтТИД «2222» (1)..(30) «223» Акцепторна послідовність важкого ланцюга (людського) «а00О0» 984 бій аї біп Пей Уа1ії бій бек сіу сіу с1у Пей Уаі сбіп Рго щ1у 0.Щ1Уу 1 5 10 15 век Гей Ату Гей бек Сув Аїа А1а Бек сіу Рпе ТПх Ріе бек «2105 АД95 «-2115 11 «-2125» РЕТ «213» Людина розумна «220» «-2215» ПЕПТИД «2225 (1)..(11) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «4005 95

Ткр с1у сіп сі1іу Тпйжх Пе Уаї! Тіт Уаї Бек бег 1 5 10 «2105 96 «-211» 32 «2122» РЕТ «213» Людина розумна «2205» «2215» ПЕПТИД «222» (1)..(32) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «400» 96 сі1у Маї Рго бек Атуд І1е Бек сі1у бек сСіу бек с1іу Трх Авр Рре ТЕГ 1 5 10 15

Рпе ТПт І1е бет бБет Ппецй біп Рго сій Авр тч11іе А1їа тТрПк Тук Тук Сув 20 25 зо

«2105 97 «2115 15 «212» РЕТ «213» Людина розумна «220» «221» ПЕПТИД «222» (1)..(15) «223» Акцепторна послідовність легкого ланцюга (людського) «4005 97

Тер Ре сіп біп Пув Рго с1у Ппув Аіїіа Рко Пув бек Гей І1е Туг 1 Б 10 15 «-2105 98 «211» 120 «212 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіонууНн 1А6.10 «4005 128

Сі Уа1ї! Тк о Ппеп Аку піц бех п1у Рко бі1іу Гец Уаї пув Рхо ТПКг біп 1 5 10 15

ТпПЕ рей ТПт Геп ТБх Сув ТПт їец Тух б1у Рпе Бек Гей бетг ТІПг бек

Зо с1у Меє біу Уаії бБег Тур Іч11є6 Аку біп Рго Рко с1у пув Ш1у Геп 01

Тер Гец Атїа Нів І1е Тер Ткгр Авр біу Авр Авп Тут Тут Авп Рго бег

БО 55 бо

Теп пув Бех біп Пес Тр І1е бБет Пув Авр ТП бек Гув Авзп біп Уаї 65 70 75 80

Уаіїії Пец Пув бе ТпПт Бех Уаї Авр Рко Уаі Авр ТПпк Аіїа Так Тухк Тує 85 90 95

Сув А1а Ахку Аху ТПк Акуд Уаі Авп Тут Аза Мес Авр Тут Тктр 01у біп 100 105 110 сі1у ТПтІ Гей Уа1і Тк Уа1! Бек Бех

115 120 «-2105 959 «2115 108 «2122 РЕТ «213» Штучний 220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 1А6.10 «00» 99

АБр І1е сіп Мес Тпху біп бет Рко Бех бек Гей бек Аза бек Уаіїі б1у 1 5 10 15

Авр Ах Уаі ТтТПх Іле тТПх Сув пув А1їа бБегт сіп бБет Уаі1ї бег Авп Авр

Зо уаї Атїа Ткр тТук сіп біп Пув Рго сС1у Був Аїа Рко ГувБ Геї Пец І1е

Тут Тухт Аїа бБет Авп Ак Тут ТпПх сіу Уаі Рко Авр Ак9д Рпе бБег с1у

БО 55 І-9)

Бек сі1у Тут с1у ТВ Авр РПе ТПк Ріє Тк т1еє Бек бет Гей СсСіп рРко 65 70 75 во сі Авр Іїе Аїа ТПт Тук Туг Сув біп біп Авр Тук Авп о бек Рго Ткгр 85 90 95

Тік о Бпе сіу с1у сіу ТПк Ппув уа1ї с01ї0 Т12е Був АкдФ 100 105 «-2105 100 «2115 120 «212» РЕТ «2135 Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 1А6.11 «400» 100 бі Уа1ї ТОК Теп Аку бі бех с1іу Рхо сіу Печп Уа! цув Рго Трк сіп 1 Б 10 15

ТПЕ Гец тру Гец ТПт Сув ТПх Тец Тук с1у Рре Бек Іє6й Бек ТПх 5бег 20 25 зо сі1у Месє сіу Ууаі1 Бек Тктр чІ1е АкЧч біп Рхо Рго б1у Пув с1у Гей с1ц 35 40 45

Тер еп Атїа Нів Т1е Тгтр Ткр Авр с1у Авр Авп оТухк Тук Авп Рго бБег

БО 55 60

Тїеч Пув бек СсСіп Гец ТПг І1е Бех Пув Авр ТПх бех Пув Авп о сіп Уаї 65 70 75 во уаї тей Пув теп Тис о беїт Уа1і АБр Рко Уаї АБвр ТПІ Азїа Тк тТук Тух 85 90 95

Сув А1а Акгу Агу ТПг Агу Уаі Авп Тут А1Зїа Мес Авр Тук Тктр С1у біп 100 105 119 с1у ТпПг Ге Уа1ї Трг оУаї Бех бек 115 120 «2105 101 «211» 108 «2125» РЕтТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіонуміІ, 1А6.11 «-4005 101

Авр т1е біп Мес тп Сіп бек Рко Бек бБет Гей Бек А1їа бек уаї сіу 1 5 10 15

Авр Ак Уаїі Тк Ті Ту Сув пуб Аза бек біп бек Уа1 Бек Авп Авр

Зо уаі А1а Тер Тук Ссіп біп пув Рко с1у пув АтТа Рго ПуБ Гей тей І1е

Тук Туг А1їа Бек Авп Агу Тут ТПх сі1у Уа1 Рго бек Аку Рпе бех щу

БО 55 бо

Зек сіу Тук б1у ТПх АБр Рпе ТПу Рпе ТПт І1е бек бек Пец біп Рко 65 70 75 во сій Авр ч11е Аїа ТП Тут Тук Сув біп іп АБр Тук АвБп о бек Рко Ткр

85 90 95

ТПг Ре с1у сі1у сі1у Тк пув Уа1! Сі І12 Гув АтхФ 100 105 «2105 102 «2115 120 «212» РЕТ «213» Штучний «2205 «223» Амінокислотна послідовність регіону УН 1А6.12 «400» 102

Сіи Уаї трх Іей Акд сій бет біу Рко с1у тей Уаії Тув Рхго Тржх сіп 1 Б 10 15

ТПг о Теп Тпт Тїецй ТПу Сув ТПт Пец Тут с1у Рів бек їей бек ТіК бБег сіу Месє сіу УуУаї бек Тер чІ1е Агу біп Рко Рго с1у Іув С1у Гей с1ц а5

Тер теп А1тїа нів І1е Тер Тгр Авр с1у Авр Авп Тук Тут Авп орто Бех бо

Тїеи пув бек бсіп Гец ТПрх І1е бек Пув Авр Тік бек їув Авп сіп Уаї1 65 70 75 во уаї реп Ппув Гей ТПЕ бек Уаї Авр Рго Уаії Авр ТПпг Аїа ТПг Тук Туг 85 9о 35

Сув А1а Аху Аку Тпкт Аку Уа1! Авоп о Туг Аза Мес АБр Туг Тгр С1у сіп 100 105 110 сіу тТпПк Пец Уаї ТП Уаї бек бБег 115 120 2105 103 «-211» 108 «212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ, 1А6.12

«-4005 103

Авр І1е сіп Мес Тр Сіп бБег Рго бЗеїх бек Гей вет Аї1а бек Уаі СШ1У 1 5 10 15

Авр Ак Ма1! ТтТПпПт о І1е ТПх Сув гув Аіїа Бек біп бек Уа1їі бек Авп Авр уа1ї Аза Ткр Рбе сіп б1іп ув Рко с1у ув Атїа Рко їув Тез Іец Іїе

Тут Тут А1ї1а бек АвБп Аку Тухк ТПУ піу Маії Рко Авр Аку Рбе Бек 01уУ 60 бек с1у Тухк с1у ТПт Авр Рпе ТП РПпе ТПт І1е бек бех Пец біп Рко 65 70 75 во січ Авзр ч112е Аїа Тк Тук Тух Сув біп біп Авр Тук Авп бек ркго Тгтр 85 90 95

ТПтІ Рпе б1у с1іу сіу ТП цув Уа1ї січ І1е Гув Ах4д 100 105 «210» 104 «2115 112 «2125 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіонумН ВЕ1.4 «400» 104 бі Уа1 б1п Пец Уа1і бій Бех сіу сі1у с1у їеч Уаї біп Рко с1у 01У 1 5 10 15 бЗетх Ппей АкЯд Іец бех Сув А1ї1а Аі1їа Бек с1у Рпре ТПУ Рпе бек Аво Туг 20 25 30 сС1у Меє уа1 Ткр Уа1! Аку біп А1а Рго б1у ГПув с1у тей сій Тко МУаї 35 40 45

А1їа бек І1е Бех бБетх с1у Бек бек Авп о І1е Тут Тук А1їа Авр ТІПх Уаї1

БО 55 6о пув с1іу Агу Рбе ТПх І1е бетгт Аку Авр Авп Аїа Ппув Авп оТПт Гей Тухг

65 70 75 во

Геч біп Мес АБп о Бек їеч Аку Аа сій Авр ТБт Аїа Ууаї Тук Тухк Сув 85 90 з5

Аїа Аку АвпоРто Тух Тер б1у сіп сі1у ТБПх Ге уаї Трт Уаї бек Бех 100 105 110 «-2105 105 «211» 108 «2122 РЕТ «2132 Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ, 8Е1.4 «400» 105

Авр ї11е біп Мес ТП о біп Бех Рго Бетї бек Пец Бек Атїа бек Уа1! 1Уу 1 5 10 15

Авр Аку Уа1і Тах І1е ТК Сув ПуБ А1а бек біп АвБп Уа1ії сС1у ТрЕ Авп о) уа1ї А1ї1а Тгр Тух біп сбіп Ппув Рго б1у Ппув Аїа Рхо пуб сіу Тей І1е

Тук бВет А1їа Бех Нів Агу Туг Бех біу Уа1 Рго Бек Агд РПпе бБет 01У

БО 55 бо бек сі1у бек сіу тТПк Авр РпПе Трх Тецй ТИХ І1е бек Бех Гей біп РхОо 65 70 75 во бі Авр Ре Аза ТПг о Тут Ту Сув біп біп тут Авп бек Тут Ро Гей 85 90 95

Тік Ре сіу сіу С1у ТпПх Ппув Уа! сі ІчІ1е Пув Аг4д 100 105 «2105 106 «211» 112 «2125 РЕТ «213» Штучний «220» «9223» Амінокислотна послідовність регіону УН 851.5

«4005 106 сі Уаі1 сіп Ів уаї бій бек сі1у Сіу сіу пе Уа1ї СсСіп Рго сіу 01у 1 5 10 15 бБет теп Аку Гей бек Сув Аїа А1а Бек сіу Рбе ТПт Ре Бек Авр Туг сіу Меє Уаї! Ткр уУаї Ату сбіп Аза Рго с1у Гув сС1іу Те сіц Ткр Уаї1 а5

А1їа бек Ії бек бек сіу Бек Бех Авп І1е Тук Тут Аїа Авр ТіПг Уаї 60 пув с1у Ак Рре Тпг І1е бБех Ак АБр АБп о А1їа пуб АБп о ТБт Гей Туг 65 70 75 80 рей біп Месб Авп о бек Ппеч Аку А1їа с1ц Авр ТП Азїа Уаі Туг Тук Сув 85 90 95

Аза АкЧ АБп о РКо Тут Ттр сіу біп 51у ТБбг Гецп Уа1ї ТП Уаї БбБет Бек 100 105 110 «2105 107 «2115 108 «2125 РЕТ «213» Штучний «2205 «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ, 81.5 «4005 107

Авр Іч1І1є сі1іп Меє Трк біп бек Рко Бех бек Пец бБет Аїа бек Уа1і С1УуУ 1 5 10 15

Авр Аку уаї ТП о І1е ТП Сув Ппув Аїа Бек сСіп АБп о Уа1і с1у ТПхХ Авп 20 25 30

Уаї Аїа Ткр тук б1іп біп Пув Рго сіу Пув Аіїа Ркго їув с1у Ге І1є 35 40 45

Тук Бех Аїа бек Нів Аку Тут бек сіу Уа1 Рко Авр Акд Рпе Ззек 01У

БО 55 бо бек с1і1у бек сіу ТПк Авр Рре ТПтї їецп ТПтІ І1е Бек бек Гей біп Рго

65 70 75 во сі Авр РПе Аїа Тіт Тук Тут Сув Сіп сіп Тух Авп бек Тук Рго їеч 85 90 95

ТтТПЕ Рпе с1у с1у сіу ТпПг Ппув Уаї сіц І16 Ппув Акд 100 105 «-210» 108 «211» 112 «212» РЕТ «213» Штучний «220» «223» Амінокислотна послідовність регіону МН 8Е1.6 «4005» 108 сій Маї біп еп Уа1ї сій бек сбіу с1у біу Ге Уаї б01п Рко 01у 01Уу 1 5 10 15

Зек цей АкЯд Пец бек Суб Аїа Аза бек сіу Рбе тТПк Ріре бБег АБр Туг сі1іу Меє Ууа1 Тгр Уаї Акд біп Аїа Рко сСі1у Був 01у їеип бій Тгр Уаї 25

А1їа бет І1їе бек Бех сіу Бек Бех Авп ТІ1іе Тут Тут А1їа Авр Тк Уа! 5О 55 6о

Тув сб1у Аку Рпе ТртІ Іїе Бех Акуд Авр Авр Аїа Пув Авп ТПх Геч Туг 65 70 75 80

Без сіп Меє Авп обет Ітец Аку Аїа б1іц Авр ТПх Атїа 7аї Тук Тук Сув 85 з0 95

А1тїа Агу АБпоРко Тук Тгр сіу біп б1у Тих Гей Уаіїі ТПх Уа1і бек бБег 100 105 110 «2105 109 «211» 108 «212» РЕТ «9213» Штучний «2205 «223» Амінокислотна послідовність регіону МІ 8Е1.6

«4005 109

Авр чІ1е біп Меє ТПу б1іп бек Рго бех бЗеїт Гей бек А1їа бек Уа1 біу 1 Б 10 15

Авр Аху уаїії Тк І1е тТпк оСув Був Аіїа бБех Сіп Авп Уаї сіу ТК Авп уаї Аїа Тур Тух сіп сіп пув Рхто сіу Пув АТа Ркго Пув с1у Ієч Ії1е

Тух Бек А1ї1а Бек Нів Акуд Тук бек біу Ма1ї Рго Бех Ахка Рпе бех 01У бо бек бі1у Бек 01у Тіт Авр Рпе ТПт Пец Тпх І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 сій Авр РПе Аїа ТП о Тук Тук Сув біп іп Тук Авп бек Тук Рко ТІей 85 90 95

ТБг Рпе сіу біу сіу ТПх Ппув Уаі біз т1іе був Акуду 100 105 «210» 110 «-2115 19 «2125 РЕТ «213» Штучний «220» «723» Сигнальна послідовність важкого ланцюга (людського) «4005 110

Меє сі вВре сСі1у Ппей бВех Ткр цей Рпе Геп Уаі Аїа І1е Тем Пув (1У 1 5 16 15 уаї с1п Сув «2105 111 «2115 22 2125 РЕТ «213» Штучний «220» «223» Сигнальна послідовність легкого ланцюга (людського) «400» 111

Меє Авр Меє Атуд Уа! Рхто Аіїа сіп цеш Гей сіу Ппешп Ппей тей Гец Тур 1 5 10 15

РПпе Рго 51у бек Ак Суб

Комп'ютерна верстка 0. Гапоненко Підписне Тираж 23 прим.

Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна

ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601