UA71388A - Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин - Google Patents

Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин Download PDF

Info

Publication number
UA71388A
UA71388A UA20031212602A UA20031212602A UA71388A UA 71388 A UA71388 A UA 71388A UA 20031212602 A UA20031212602 A UA 20031212602A UA 20031212602 A UA20031212602 A UA 20031212602A UA 71388 A UA71388 A UA 71388A
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
cells
suspension
brainstem
enrichment
neural cells
Prior art date
Application number
UA20031212602A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Inventor
Юрій Панасович Зозуля
Юрий Афанасьевич Зозуля
Микола Іванович Лісяний
Николай Иванович Лисяный
Лариса Дмитрівна Любич
Original Assignee
Інститут Нейрохірургії Імені Академіка А. П. Ромоданова Академії Медичних Наук України
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Інститут Нейрохірургії Імені Академіка А. П. Ромоданова Академії Медичних Наук України filed Critical Інститут Нейрохірургії Імені Академіка А. П. Ромоданова Академії Медичних Наук України
Priority to UA20031212602A priority Critical patent/UA71388A/uk
Publication of UA71388A publication Critical patent/UA71388A/uk

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин включає виділення клітин з ембріональної або неонатальної мозкової тканини, збагачення культуральної суспензії і нарощування кількості клітин. Збагачення суспензії стовбуровими нейральними клітинами досягають шляхом культивування вихідної клітинної суспензії у збідненому безсироватковому середовищі ДМЕМ. Нарощування кількості клітин досягають додаванням ретинолу ацетату.

Description

Опис винаходу
Винахід стосується біології а саме цитології (культури клітин) та суміжних дисциплін: нейробіології, 2 нейрофізіології і може бути застосований у медицині з метою лікування неврологічної та нейрохірургічної патології.
Розроблено кілька способів отримання регіонарних стовбурових клітин нервової тканини у культурі клітин (1-4, 6, 7). Загальний принцип полягає в тому, що при додаванні ростових факторів у культуру клітин головного мозку відбувається поділ стовбурових клітин. Так, було виділено плюрипотентні нейрональні клітини з головного 70 її спинного мозку ембріона людини: клітини культивували у безсироватковому середовищі із додаванням факторів росту ЕСЕК, ПЕ і ЕСЕ, в результаті чого була отримана лінія нейральних клітин, яка культивувалась іп міго протягом 1 року і диференціювалась у нейрони, астроцити та олігодендроцити |2, 5). Клітини, виділені з ембріональної, неонатальної і зрілої ЦНС гризунів, проліферували у відповідь на ЕСЕ і ЕОБ-2, зберігаючи здатність диференціюватись у нейрони та глію |4). 12 Найбільш близьким до декларованого нами способу і обраного нами за прототип є спосіб Веп-Ниг Т. еї аї. (1998) |З). Автори механічно відділяли стріатум і епендіму головного мозку новонароджених щурів (1 дня).
Тканину подрібнювали, переносили у середовище ДМЕМ/Р12 (1:1, | бе Тесппоіоду) і суспендували. Життєздатні клітини у кількості 1х109У переносили у культуральні фляги (Совіаг) у 20мл середовища ДМЕМ/Р12 із додаванням
В27, 25мкг/мл бичачого інсуліну, 100мкг/мл трансферину, 2О0НМ прогестерону, бОмкМ путресцину, ЗОНМ селеніту натрію, 2онг/ммл ЕСЕ або 1Онг/мл РОБ-2. Кожних З дні половина культурального середовища оновлювалась.
Через тиждень авторами було отримано чисельні кластери нейральних стовбурових клітин.
Згадані способи отримання регіонарних стовбурових клітин нервової тканини у культурі клітин (1-4, 6, 7, а також спосіб Веп-Ниг Т. еї а). (1998) |З) потребують, з одного боку, використання високоочищених реагентів і рекомбінантних ростових факторів іноземного виробництва, а з іншого - високотехнологічного устаткування, що 29 диктує високий кошторис таких досліджень і улоеможливлює широке застосування таких способів у клініці. «
Завданням винаходу було створення способу отримання стовбурових нейральних клітин, який не вимагав би застосування ростових факторів, отриманих за рекомбінантною технологією, та специфічного обладнання, а також був відносно економічним, малозатратним і широкодоступним.
Поставлене завдання було вирішене завдяки тому, що у способі отримання збагаченої суспензії стовбурових со нейральних клітин, який включає виділення клітин з ембріональної або неонатальної мозкової тканини, (ее) збагачення культуральної суспензії і нарощування кількості клітин, досягають збагачення суспензії стовбуровими нейральними клітинами шляхом культивування вихідної клітинної суспензії у збідненому без о сироватковому середовищі ДМЕМ, а нарощування кількості клітин досягають додаванням ретинола ацетату. ч--
Спосіб відтворюють наступним чином: в стерильних умовах нативну мозкову тканину (ембріональну або неонатальну) переносять у фізіологічний розчин, звільняють від оболонок, переносять у середовище ДМЕМ і - суспендують шприцом з товстою голкою. Дають відстоятись Зхв і надосад переносять у скляні пеніцилінові флакони у кількості 2хХ109 клітин в мл. Кожних З дні половину культурального середовища оновлюють. На 4-5 добу від початку культивування в культуральне середовище додають ретинола ацетат (0,2мг/мл, АО "Київський « 20 вітамінний завод"). -в
Застосування культивування клітин у збідненому безсироватковому середовищі ДМЕМ і при додаванні с ретинола ацетату супроводжувалось наступною кінетикою суспензійних культур попередників нейроклітин :з» (рис.1). При культивуванні клітин у безсироватковому середовищі ДМЕМ відбувалось зниження кількості клітин: У 1,5-2 рази на 5-7-у добу, в 3-4 рази - на 9-у добу. Кількість клітин продовжувала знижуватись до кінця спостереження (21 доба). Навпаки, при культивуванні клітин у середовищі ДМЕМ ретинола ацетат, котрий -1 вводили у поживне середовище на 5-у добу, значного зниження кількості клітин в культурі не відбувалось, їх кількість починала зростати з 7 дня культивування і збільшувалась на 9-12 день культивування в 2 і більше - разів, досягаючи початкової кількості клітин. Таким чином, додавання в культиваційне середовище ретинола сю ацетату сприяло виживанню і розмноженню клітин.
Динаміка суспензійної культури нейроклітин у без сироватковому середовищі ДМЕМ і при додаванні со ретинола ацетату наведена на рис.1. «со Тривале спостереження за культивуванням іп міо нейроклітин з різних джерел (ембріональний мозок щура, кроля, людини, неонатальний мозок щура) показало, що на 9-у добу культивування у безсироватковому середовищі ДМЕМ відбувається зниження кількості клітин в 3-4 рази, що свідчить про те, що до цього терміну всі диференційовані клітини гинуть, а залишаються переважно тільки життєздатні переживаючі малодиференційовані або недиференційовані клітини, що належать до прогеніторних і стовбурових нейральних в» клітин. Додавання в культиваційне середовище ретинола ацетату стимулює проліферацію клітин-попередників і стовбурових клітин; відбувається зростання кількості клітин у 2-5 разів. Клітини, отримані зазначеним способом, зберігають свою поліпотентність і здатність до диференціювання іп мйго у нейробласти і гліальні во клітини.
Література: 1. Полтавцева Р.А., Марей М.В., Дубровина И.В. и др. Анализ развития стволовьїх нейральньїх клеток человека іп міго // Цитология. Суфоіоду. - 2001. - Т.43, Мо9. - С.884-885. 2. Вагаті К., 2пйао У., Оіа» Б.б., Гутап М.О. Сотрагізоп ої пецга! ргесигвог сеї Таїе іп зесопа ігітевіег ве Питап бБгаїп апа зріпаї сога // Меишгої. Кев. - 2000. - 23(2-3). -Р.260-6.
З. Веп-Ниг Т., Кодівіег В., Мигтау К. ей аіЇ. Сгомій апа їТаїе оїРБЗА-МСАМ-- ргесигвоге ої (Пе розіпаїйа!
Ьгаїп // 9. ої Мепгозсіепсе. - 1998. - 18(15):5777-5788. 4. Саїдже! М.А. Не Х., ММУйКіе М. еї а). Огоуп Тасіоге гедшайе (Те зигмімаЇ апа Тафе ої сеїЇз дегімей їот питап пеигозрпегез // Маї.Віоїесп. -2001. - 19(5). - Р.475-9. 5. Сагрепіег М.К., Сці Х., Ни 2.М. еї а). Іп мійго ехрапзіоп ої а тийроїепі рорршайоп ої питап пеигаї! ргодепіг сеїЇв // Ехр.Меигої. - 1999. - М.158, М.2, - Р.265-278. б. Сіссоїїпі Б. Ідепійісайоп о ої бус о дізпсі їурез ої тиШроїепі пецга! ргесигвоге ї(Шаї арреаг зедпепіану дигіпда СМ5 аемеіортепі // Мої. СеїЇ Мешйговсі. - 2001. - 17(5). - Р.895-907. 7. допе К.К., Нале! Т.б., МиПег Т. ей аї. Зіпдіе Тасіоге дігесі (Ше айегепііайоп ої в8віет сеїЇв їот 7/0 їїпе тегаїЇ апа адиїк сепіга! пегуоив зузіет // депез апа демеортепі - 1996. - 10:3129-3140. 120,09 з - '52НТ-- Я 15 ж--к-
Е 100,00 - не ще - У в КЕ ій -- ДМЕМ
Б вооо|-- шо - и ох. (п-т) н. и у ж 000 2. --. й... вия ох
ІН зе х 8 "
ВО афОЮ не --
Е - 8 -- ДМЕМ ж 5 2000 - ши - пе - ке) о 1 З 5 7 9 12 19 26 я доба
Рис. 1
Динаціка суспензійної культури нейроклітин у безсироватковоцу середовищі ДМЕМ
І при додаванні ретинола ацетату

Claims (1)

  1. « Формула винаходу зо Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин, що включає виділення клітин з ембріональної або неонатальної мозкової тканини, збагачення культуральної суспензії і нарощування кількості со клітин, який відрізняється тим, що збагачення суспензії стовбуровими нейральними клітинами досягають со шляхом культивування вихідної клітинної суспензії у збідненому безсироватковому середовищі ДМЕМ, а нарощування кількості клітин досягають додаванням ретинолу ацетату. -- шо , , , ш. і - Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2004, М 11, 15.11.2004. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. « ші с ;»
    -І - (95) о 50 ІЧ е)
    60 б5
UA20031212602A 2003-12-26 2003-12-26 Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин UA71388A (uk)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA20031212602A UA71388A (uk) 2003-12-26 2003-12-26 Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA20031212602A UA71388A (uk) 2003-12-26 2003-12-26 Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA71388A true UA71388A (uk) 2004-11-15

Family

ID=74282557

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UA20031212602A UA71388A (uk) 2003-12-26 2003-12-26 Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA71388A (uk)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8592208B2 (en) 2006-03-07 2013-11-26 Geeta Shroff Methods of expanding human embryonic stem cells

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8592208B2 (en) 2006-03-07 2013-11-26 Geeta Shroff Methods of expanding human embryonic stem cells
US8900861B2 (en) 2006-03-07 2014-12-02 Geeta Shroff Method for storing a preparation of human embryonic stem cells
US9134299B2 (en) 2006-03-07 2015-09-15 Geeta Shroff Method of isolating human embryonic stem cells in minimal essential medium
US9383349B2 (en) 2006-03-07 2016-07-05 Geeta Shroff Method of partially differentiating hES cells
US9482660B2 (en) 2006-03-07 2016-11-01 Geeta Shroff Compositions comprising human embryonic stem cells and their derivatives, methods of use, and methods of preparation
US9488643B2 (en) 2006-03-07 2016-11-08 Geeta Shroff Compositions comprising human embryonic stem cells and their derivatives, methods of use, and methods of preparation
US9804151B2 (en) 2006-03-07 2017-10-31 Geeta Shroff Compositions comprising human embryonic stem cells and their derivatives, methods of use, and methods of preparation
US10545135B2 (en) 2006-03-07 2020-01-28 Geeta Shroff Compositions comprising human embryonic stem cells and their derivatives, methods of use, and methods of preparation

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2194016T5 (es) Factores biologicos y celulas germinales neurales.
AU2013221839B2 (en) Feeder-free method for culture of bovine and porcine spermatogonial stem cells
CN103146649A (zh) 神经干细胞
Yang et al. A novel approach for amplification and purification of mouse oligodendrocyte progenitor cells
WO2018221918A1 (ko) 오가노이드 배양을 위한 조성물 및 방법
Walsh et al. Human central nervous system tissue culture: a historical review and examination of recent advances
CN101124319B (zh) 神经干细胞
Wang et al. A new method of isolating spinal motor neurons from fetal mouse
CN109983118A (zh) 以rna通过干细胞分化诱导肝细胞
UA71388A (uk) Спосіб отримання збагаченої суспензії стовбурових нейральних клітин
CN101186900B (zh) 一种由源于虹彩组织的神经干细胞生产网膜神经细胞的方法
Kuznetsova et al. Human adult retinal pigment epithelial cells as potential cell source for retina recovery
CN112553160B (zh) 一种化学诱导皮质神经元的方法及培养基
EP1834952B1 (en) Compound for promoting the growth of neural cells
KR101705698B1 (ko) 마우스의 신경교세포 배양용 배지 조성물 및 마우스 신경교세포의 분화를 유도하는 방법
US7585892B2 (en) Compound for promoting the growth of neural cells
KR100797143B1 (ko) 동물의 홍채색소 상피세포 유래의 다능성 간세포로부터조직세포를 생산하는 방법, 및 그 방법에 의해 얻어지는조직세포
WO2013130075A1 (en) Culture system for stem cell propagation and neural and oligodendrocyte specification in microgravity
Tao et al. Culture and identification of monoclonal neural stem cells derived from cerebral cortex
CN101768569B (zh) 一种神经细胞诱导剂及其应用
Bottenstein Environmental influences on cells in culture
Zheng-min et al. Effects of different concentrations of recombinant human erythropoietin on proliferation of neural stem cells cultured in vitro
WO2003078585A2 (en) Compositions and methods for primate neural cell production
Caviedes et al. Methods for cell therapy
Wu et al. Evaluating effects of gypenosides and soyasaponins on differentiation of neural stem cells as an in vitro model