UA71388A - A method for preparing enriched suspension of brainstem neural cells - Google Patents
A method for preparing enriched suspension of brainstem neural cells Download PDFInfo
- Publication number
- UA71388A UA71388A UA20031212602A UA20031212602A UA71388A UA 71388 A UA71388 A UA 71388A UA 20031212602 A UA20031212602 A UA 20031212602A UA 20031212602 A UA20031212602 A UA 20031212602A UA 71388 A UA71388 A UA 71388A
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- cells
- suspension
- brainstem
- enrichment
- neural cells
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 title abstract description 5
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 title abstract 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 12
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 229960000342 retinol acetate Drugs 0.000 claims description 9
- QGNJRVVDBSJHIZ-QHLGVNSISA-N retinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C QGNJRVVDBSJHIZ-QHLGVNSISA-N 0.000 claims description 9
- 235000019173 retinyl acetate Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000011770 retinyl acetate Substances 0.000 claims description 9
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 abstract 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 abstract 1
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000011607 retinol Substances 0.000 abstract 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 6
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101100310622 Mus musculus Soga1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003059 ependyma Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 1
- 230000036403 neuro physiology Effects 0.000 description 1
- 210000003757 neuroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Винахід стосується біології а саме цитології (культури клітин) та суміжних дисциплін: нейробіології, 2 нейрофізіології і може бути застосований у медицині з метою лікування неврологічної та нейрохірургічної патології.The invention relates to biology, namely cytology (cell culture) and related disciplines: neurobiology, 2 neurophysiology and can be used in medicine to treat neurological and neurosurgical pathology.
Розроблено кілька способів отримання регіонарних стовбурових клітин нервової тканини у культурі клітин (1-4, 6, 7). Загальний принцип полягає в тому, що при додаванні ростових факторів у культуру клітин головного мозку відбувається поділ стовбурових клітин. Так, було виділено плюрипотентні нейрональні клітини з головного 70 її спинного мозку ембріона людини: клітини культивували у безсироватковому середовищі із додаванням факторів росту ЕСЕК, ПЕ і ЕСЕ, в результаті чого була отримана лінія нейральних клітин, яка культивувалась іп міго протягом 1 року і диференціювалась у нейрони, астроцити та олігодендроцити |2, 5). Клітини, виділені з ембріональної, неонатальної і зрілої ЦНС гризунів, проліферували у відповідь на ЕСЕ і ЕОБ-2, зберігаючи здатність диференціюватись у нейрони та глію |4). 12 Найбільш близьким до декларованого нами способу і обраного нами за прототип є спосіб Веп-Ниг Т. еї аї. (1998) |З). Автори механічно відділяли стріатум і епендіму головного мозку новонароджених щурів (1 дня).Several methods of obtaining regional stem cells of nervous tissue in cell culture have been developed (1-4, 6, 7). The general principle is that when growth factors are added to the culture of brain cells, stem cells divide. Thus, pluripotent neuronal cells were isolated from the brain and spinal cord of a human embryo: the cells were cultured in a serum-free medium with the addition of ESEK, PE and ESE growth factors, as a result of which a neural cell line was obtained, which was cultured i.p. migo for 1 year and differentiated into neurons, astrocytes and oligodendrocytes |2, 5). Cells isolated from the embryonic, neonatal and mature CNS of rodents proliferated in response to ESE and EOB-2, retaining the ability to differentiate into neurons and glia |4). 12 The closest to the method declared by us and chosen by us as a prototype is the method of Vep-Nig T. ei ai. (1998) |Z). The authors mechanically separated the striatum and ependyma of the brain of newborn rats (1 day old).
Тканину подрібнювали, переносили у середовище ДМЕМ/Р12 (1:1, | бе Тесппоіоду) і суспендували. Життєздатні клітини у кількості 1х109У переносили у культуральні фляги (Совіаг) у 20мл середовища ДМЕМ/Р12 із додаваннямThe tissue was minced, transferred to DMEM/P12 medium (1:1, | be Tesppoiod) and suspended. Viable cells in the amount of 1x109U were transferred to culture flasks (Soviag) in 20 ml of DMEM/P12 medium with the addition of
В27, 25мкг/мл бичачого інсуліну, 100мкг/мл трансферину, 2О0НМ прогестерону, бОмкМ путресцину, ЗОНМ селеніту натрію, 2онг/ммл ЕСЕ або 1Онг/мл РОБ-2. Кожних З дні половина культурального середовища оновлювалась.B27, 25mcg/ml bovine insulin, 100mcg/ml transferrin, 2O0NM progesterone, bOmcM putrescine, ZONM sodium selenite, 2ng/mml ESE or 1Ong/ml ROB-2. Half of the cultural environment was updated every 2 days.
Через тиждень авторами було отримано чисельні кластери нейральних стовбурових клітин.A week later, the authors obtained numerous clusters of neural stem cells.
Згадані способи отримання регіонарних стовбурових клітин нервової тканини у культурі клітин (1-4, 6, 7, а також спосіб Веп-Ниг Т. еї а). (1998) |З) потребують, з одного боку, використання високоочищених реагентів і рекомбінантних ростових факторів іноземного виробництва, а з іншого - високотехнологічного устаткування, що 29 диктує високий кошторис таких досліджень і улоеможливлює широке застосування таких способів у клініці. «Mentioned methods of obtaining regional stem cells of nervous tissue in cell culture (1-4, 6, 7, as well as the Vep-Nig T. eyi method). (1998) |Z) require, on the one hand, the use of highly purified reagents and recombinant growth factors of foreign production, and on the other - high-tech equipment, which dictates the high cost of such studies and makes possible the wide application of such methods in the clinic. "
Завданням винаходу було створення способу отримання стовбурових нейральних клітин, який не вимагав би застосування ростових факторів, отриманих за рекомбінантною технологією, та специфічного обладнання, а також був відносно економічним, малозатратним і широкодоступним.The task of the invention was to create a method of obtaining neural stem cells, which would not require the use of growth factors obtained by recombinant technology and specific equipment, and was also relatively economical, low-cost and widely available.
Поставлене завдання було вирішене завдяки тому, що у способі отримання збагаченої суспензії стовбурових со нейральних клітин, який включає виділення клітин з ембріональної або неонатальної мозкової тканини, (ее) збагачення культуральної суспензії і нарощування кількості клітин, досягають збагачення суспензії стовбуровими нейральними клітинами шляхом культивування вихідної клітинної суспензії у збідненому без о сироватковому середовищі ДМЕМ, а нарощування кількості клітин досягають додаванням ретинола ацетату. ч--The task was solved thanks to the fact that in the method of obtaining an enriched suspension of neural stem cells, which includes the isolation of cells from embryonic or neonatal brain tissue, (ee) enrichment of the culture suspension and increasing the number of cells, the enrichment of the suspension with neural stem cells is achieved by cultivating the initial cellular suspension in serum-depleted DMEM medium, and increasing the number of cells is achieved by adding retinol acetate. h--
Спосіб відтворюють наступним чином: в стерильних умовах нативну мозкову тканину (ембріональну або неонатальну) переносять у фізіологічний розчин, звільняють від оболонок, переносять у середовище ДМЕМ і - суспендують шприцом з товстою голкою. Дають відстоятись Зхв і надосад переносять у скляні пеніцилінові флакони у кількості 2хХ109 клітин в мл. Кожних З дні половину культурального середовища оновлюють. На 4-5 добу від початку культивування в культуральне середовище додають ретинола ацетат (0,2мг/мл, АО "Київський « 20 вітамінний завод"). -вThe method is reproduced as follows: in sterile conditions, the native brain tissue (embryonic or neonatal) is transferred to a physiological solution, freed from the membranes, transferred to the DMEM medium and - suspended with a syringe with a thick needle. Zhv is allowed to settle and the supernatant is transferred to glass penicillin vials in the amount of 2xX109 cells per ml. Half of the cultural environment is renewed every day. On the 4th-5th day from the beginning of cultivation, retinol acetate (0.2 mg/ml, JSC "Kyivskyi "20 Vitamin Factory") is added to the culture medium. -in
Застосування культивування клітин у збідненому безсироватковому середовищі ДМЕМ і при додаванні с ретинола ацетату супроводжувалось наступною кінетикою суспензійних культур попередників нейроклітин :з» (рис.1). При культивуванні клітин у безсироватковому середовищі ДМЕМ відбувалось зниження кількості клітин: У 1,5-2 рази на 5-7-у добу, в 3-4 рази - на 9-у добу. Кількість клітин продовжувала знижуватись до кінця спостереження (21 доба). Навпаки, при культивуванні клітин у середовищі ДМЕМ ретинола ацетат, котрий -1 вводили у поживне середовище на 5-у добу, значного зниження кількості клітин в культурі не відбувалось, їх кількість починала зростати з 7 дня культивування і збільшувалась на 9-12 день культивування в 2 і більше - разів, досягаючи початкової кількості клітин. Таким чином, додавання в культиваційне середовище ретинола сю ацетату сприяло виживанню і розмноженню клітин.The use of cell cultivation in a depleted serum-free DMEM medium and with the addition of retinol acetate was accompanied by the following kinetics of suspension cultures of neurocell precursors: c" (Fig. 1). During cultivation of cells in serum-free DMEM medium, the number of cells decreased: 1.5-2 times on the 5th-7th day, 3-4 times - on the 9th day. The number of cells continued to decrease until the end of observation (21 days). On the contrary, during the cultivation of cells in DMEM retinol acetate medium, which -1 was introduced into the nutrient medium on the 5th day, there was no significant decrease in the number of cells in the culture, their number began to increase from the 7th day of cultivation and increased on the 9-12th day of cultivation in 2 or more times, reaching the initial number of cells. Thus, the addition of retinol acetate to the culture medium promoted cell survival and proliferation.
Динаміка суспензійної культури нейроклітин у без сироватковому середовищі ДМЕМ і при додаванні со ретинола ацетату наведена на рис.1. «со Тривале спостереження за культивуванням іп міо нейроклітин з різних джерел (ембріональний мозок щура, кроля, людини, неонатальний мозок щура) показало, що на 9-у добу культивування у безсироватковому середовищі ДМЕМ відбувається зниження кількості клітин в 3-4 рази, що свідчить про те, що до цього терміну всі диференційовані клітини гинуть, а залишаються переважно тільки життєздатні переживаючі малодиференційовані або недиференційовані клітини, що належать до прогеніторних і стовбурових нейральних в» клітин. Додавання в культиваційне середовище ретинола ацетату стимулює проліферацію клітин-попередників і стовбурових клітин; відбувається зростання кількості клітин у 2-5 разів. Клітини, отримані зазначеним способом, зберігають свою поліпотентність і здатність до диференціювання іп мйго у нейробласти і гліальні во клітини.The dynamics of the suspension culture of neurons in the serum-free medium of DMEM and with the addition of retinol acetate is shown in Fig. 1. "so Long-term observation of the cultivation of ip myo neurons from different sources (embryonic rat, rabbit, human brain, neonatal rat brain) showed that on the 9th day of cultivation in the serum-free DMEM medium, the number of cells decreases by 3-4 times, which indicates about the fact that by this time all differentiated cells die, and mostly only viable surviving poorly differentiated or undifferentiated cells belonging to progenitor and stem neural cells remain. Addition of retinol acetate to the culture medium stimulates the proliferation of progenitor cells and stem cells; the number of cells increases by 2-5 times. Cells obtained by the specified method retain their polypotency and ability to differentiate into neuroblasts and glial cells.
Література: 1. Полтавцева Р.А., Марей М.В., Дубровина И.В. и др. Анализ развития стволовьїх нейральньїх клеток человека іп міго // Цитология. Суфоіоду. - 2001. - Т.43, Мо9. - С.884-885. 2. Вагаті К., 2пйао У., Оіа» Б.б., Гутап М.О. Сотрагізоп ої пецга! ргесигвог сеї Таїе іп зесопа ігітевіег ве Питап бБгаїп апа зріпаї сога // Меишгої. Кев. - 2000. - 23(2-3). -Р.260-6.Literature: 1. Poltavtseva R.A., Marai M.V., Dubrovyna I.V. et al. Analysis of the development of neural stem cells in humans and mice // Cytology. Suphoiod. - 2001. - T.43, Mo9. - P.884-885. 2. Vagati K., 2pyao U., Oia» B.b., Gutap M.O. Sotragisop oh petzga! rgesigvog sei Taiye ip zesopa igitevieg ve Pytap bBgaip apa zripai soga // Meishgoi. Kev. - 2000. - 23(2-3). -R.260-6.
З. Веп-Ниг Т., Кодівіег В., Мигтау К. ей аіЇ. Сгомій апа їТаїе оїРБЗА-МСАМ-- ргесигвоге ої (Пе розіпаїйа!Z. Vep-Nig T., Kodivieg V., Mygtau K. ey aiY. Sgomii apa iTaie oiRBZA-MSAM-- rgesigvoge oi (Pe rozipaiia!
Ьгаїп // 9. ої Мепгозсіепсе. - 1998. - 18(15):5777-5788. 4. Саїдже! М.А. Не Х., ММУйКіе М. еї а). Огоуп Тасіоге гедшайе (Те зигмімаЇ апа Тафе ої сеїЇз дегімей їот питап пеигозрпегез // Маї.Віоїесп. -2001. - 19(5). - Р.475-9. 5. Сагрепіег М.К., Сці Х., Ни 2.М. еї а). Іп мійго ехрапзіоп ої а тийроїепі рорршайоп ої питап пеигаї! ргодепіг сеїЇв // Ехр.Меигої. - 1999. - М.158, М.2, - Р.265-278. б. Сіссоїїпі Б. Ідепійісайоп о ої бус о дізпсі їурез ої тиШроїепі пецга! ргесигвоге ї(Шаї арреаг зедпепіану дигіпда СМ5 аемеіортепі // Мої. СеїЇ Мешйговсі. - 2001. - 17(5). - Р.895-907. 7. допе К.К., Нале! Т.б., МиПег Т. ей аї. Зіпдіе Тасіоге дігесі (Ше айегепііайоп ої в8віет сеїЇв їот 7/0 їїпе тегаїЇ апа адиїк сепіга! пегуоив зузіет // депез апа демеортепі - 1996. - 10:3129-3140. 120,09 з - '52НТ-- Я 15 ж--к-Ьайп // 9. ой Мепгозсиепсе. - 1998. - 18(15):5777-5788. 4. Saige! MA. Not Kh., MMUyKie M. ei a). Ogoup Tasioge gedshaye (Te zygmimaY apa Tafe oi seiYiz degimey iot pitap peigozrpeges // Mai.Vioiesp. -2001. - 19(5). - R.475-9. 5. Sagrepieg M.K., Sci H., Ny 2 .M. ei a). Ip myo ekhrapsiop oi a tiiroiepi rorrshaiop oi pitap peigai! rgodepig seiYiv // Ehr. Meigoi. - 1999. - M.158, M.2, - R.265-278. b. Sissoiipi B. Idepiyisayop o oi bus o dizpsi yurez oi tiSroiepi petzga! rgesigvoge i(Shai arrreag zedpepianu digipda CM5 aemeiortepi // Moi. Seyi Meshygovsi. - 2001. - 17(5). - R.895-907. 7. dope K.K., Nale! T.b., MyPeg T. ey ai. Zipdie Tasioge digesi (She ayegepiiaiop oi v8viet seiYiv iot 7/0 iyepe tegaiY apa adiik sepiga! peguoiv zuziet // depez apa demeortepi - 1996. - 10:3129-3140. 120.09 z - '52NT-- I 15 f--k-
Е 100,00 - не ще - У в КЕ ій -- ДМЕМЭ 100.00 - not yet - У КЕ ий -- DMEM
Б вооо|-- шо - и ох. (п-т) н. и у ж 000 2. --. й... вия охB wow|-- what - and oh. (p-t) n. and in the same 000 2. --. y... via oh
ІН зе х 8 "IN ze x 8 "
ВО афОЮ не --IN AFOYU not --
Е - 8 -- ДМЕМ ж 5 2000 - ши - пе - ке) о 1 З 5 7 9 12 19 26 я добаE - 8 -- DMEM z 5 2000 - shi - pe - ke) o 1 Z 5 7 9 12 19 26 i doba
Рис. 1Fig. 1
Динаціка суспензійної культури нейроклітин у безсироватковоцу середовищі ДМЕМDynamics of suspension culture of neurons in serum-free DMEM medium
І при додаванні ретинола ацетатуAnd with the addition of retinol acetate
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA20031212602A UA71388A (en) | 2003-12-26 | 2003-12-26 | A method for preparing enriched suspension of brainstem neural cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA20031212602A UA71388A (en) | 2003-12-26 | 2003-12-26 | A method for preparing enriched suspension of brainstem neural cells |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA71388A true UA71388A (en) | 2004-11-15 |
Family
ID=74282557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA20031212602A UA71388A (en) | 2003-12-26 | 2003-12-26 | A method for preparing enriched suspension of brainstem neural cells |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA71388A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8592208B2 (en) | 2006-03-07 | 2013-11-26 | Geeta Shroff | Methods of expanding human embryonic stem cells |
-
2003
- 2003-12-26 UA UA20031212602A patent/UA71388A/en unknown
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8592208B2 (en) | 2006-03-07 | 2013-11-26 | Geeta Shroff | Methods of expanding human embryonic stem cells |
| US8900861B2 (en) | 2006-03-07 | 2014-12-02 | Geeta Shroff | Method for storing a preparation of human embryonic stem cells |
| US9134299B2 (en) | 2006-03-07 | 2015-09-15 | Geeta Shroff | Method of isolating human embryonic stem cells in minimal essential medium |
| US9383349B2 (en) | 2006-03-07 | 2016-07-05 | Geeta Shroff | Method of partially differentiating hES cells |
| US9482660B2 (en) | 2006-03-07 | 2016-11-01 | Geeta Shroff | Compositions comprising human embryonic stem cells and their derivatives, methods of use, and methods of preparation |
| US9488643B2 (en) | 2006-03-07 | 2016-11-08 | Geeta Shroff | Compositions comprising human embryonic stem cells and their derivatives, methods of use, and methods of preparation |
| US9804151B2 (en) | 2006-03-07 | 2017-10-31 | Geeta Shroff | Compositions comprising human embryonic stem cells and their derivatives, methods of use, and methods of preparation |
| US10545135B2 (en) | 2006-03-07 | 2020-01-28 | Geeta Shroff | Compositions comprising human embryonic stem cells and their derivatives, methods of use, and methods of preparation |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2194016T5 (en) | BIOLOGICAL FACTORS AND NEURAL GERMINAL CELLS. | |
| JP2022078245A (en) | Method for differentiating pluripotent cell | |
| AU2013221839B2 (en) | Feeder-free method for culture of bovine and porcine spermatogonial stem cells | |
| US20150147301A1 (en) | Methods and compositions of producing patient-specific multipotent neuronal stem cells | |
| JPH10509319A (en) | In vitro induction of dopaminergic cells | |
| CN103146649A (en) | Neural stem cells | |
| WO2018221918A1 (en) | Composition and method for culturing organoids | |
| Walsh et al. | Human central nervous system tissue culture: a historical review and examination of recent advances | |
| US20120052577A1 (en) | Culture system for stem cell propagation and neural and oligodendrocyte specification | |
| CN101124319B (en) | Neural stem cells | |
| Wang et al. | A new method of isolating spinal motor neurons from fetal mouse | |
| UA71388A (en) | A method for preparing enriched suspension of brainstem neural cells | |
| CN101186900B (en) | Process for producing retinal neurocyte and retinal neurocyte produced by the process | |
| Kuznetsova et al. | Human adult retinal pigment epithelial cells as potential cell source for retina recovery | |
| Juurlink et al. | Differentiation capabilities of mouse optic stalk in isolation of its immediate in vivo environment | |
| KR101613677B1 (en) | Composition for differentiating stem cells to neural precursor cells, and method using the same | |
| CN112592883A (en) | Mouse pancreas organoid culture medium and application thereof | |
| KR101705698B1 (en) | Composition of medium for glial cell cultivation of mouse and method of mouse glial cell differentiation | |
| US20070232534A1 (en) | Compound for promoting the growth of neural cells | |
| EP1834952A1 (en) | Compound for promoting the growth of neural cells | |
| KR100797143B1 (en) | Process for producing tissue cell from pluripotent stem cell derived from iris pigment epithelial cell of animal and tissue cell obtained by the process | |
| WO2013130075A1 (en) | Culture system for stem cell propagation and neural and oligodendrocyte specification in microgravity | |
| Tao et al. | Culture and identification of monoclonal neural stem cells derived from cerebral cortex | |
| CN112553160B (en) | Method and culture medium for chemically inducing cortical neurons | |
| CN101768569B (en) | Nerve cell inducer and application thereof |