UA62175A - Method for determining the content of lead in the cells of the organs of an experimental animal - Google Patents

Method for determining the content of lead in the cells of the organs of an experimental animal Download PDF

Info

Publication number
UA62175A
UA62175A UA2003010195A UA2003010195A UA62175A UA 62175 A UA62175 A UA 62175A UA 2003010195 A UA2003010195 A UA 2003010195A UA 2003010195 A UA2003010195 A UA 2003010195A UA 62175 A UA62175 A UA 62175A
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
samples
solution
lead
organs
cells
Prior art date
Application number
UA2003010195A
Other languages
Ukrainian (uk)
Original Assignee
Ukrainian Res Inst Of Ind Medi
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ukrainian Res Inst Of Ind Medi filed Critical Ukrainian Res Inst Of Ind Medi
Priority to UA2003010195A priority Critical patent/UA62175A/en
Publication of UA62175A publication Critical patent/UA62175A/en

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

The proposed method for determining the content of lead in the cells of the organs of an experimental animal implies ultrahistochemical analysis of the tissues of the organs. The method consists in accomplishing, for 30 minutes, perfusion of the organs by using warm (+37 C) fixating solution (pH = 7.2) prepared, for temporary use, from 0.2 M coccadilate buffer solution (pH = 7.4 ... 7.6) containing (in percent by volume) 2.5 % of glutaric aldehyde, 4 % of paraform, and 3 % of potassium dichromate, then cutting out tissue samples of sizes 1.0 x 1.0 x 1.0 mm, fixating the samples in the said fixating solution two times at 4 C, each time for 12 hours, providing cytochemical reaction in the samples by treating the samples three times, each tome for 12 hours, in 3 % solution of potassium dichromate in coccadilate buffer solution (pH = 7.2), washing the samples three times, each time for 30 minutes, in the said buffer solution, fixating the samples, for 1 hour, in 1 % solution of osmium fouroxide in 0.2 M coccadilate buffer solution, dehydrating the samples in acetone, immersing the samples in epoxy resin, preparing ultra-thin sections of the tissues, and determining the content of lead in the cells from the formation, in the cells, polymorph granules of different sizes and precipitated particles by using a transmission electron microscope.

Description

Опис винаходуDescription of the invention

Винахід відноситься до медицини, а саме до мікроскопічної техніки (ультрагістохімії) і може бути 2 використаний для морфо-функціонального дослідження токсикокінетичних і токсикодинамічних процесів на клітинному і субклітинному рівнях, а також для морфологічної діагностики свинцевої інтоксикації в умовах експерименту.The invention relates to medicine, namely to microscopic techniques (ultrahistochemistry) and can be used for morpho-functional research of toxicokinetic and toxicodynamic processes at the cellular and subcellular levels, as well as for morphological diagnosis of lead intoxication under experimental conditions.

Найближчим до запропонованого способу є ультрагістохімічний метод Тімма (Гайер Г. Злектронная гистохимия: Пер. с нем. - М.: Мир, 1974. - 488 с. 70 Однак цей спосіб трудомісткий і не специфічний. Низька його специфічність обумовлена тим, що за допомогою реакції сульфід-срібла в тканинах і клітинах внутрішніх органів може виявлятись ціла низка важких металів (свинець, платина, срібло, золото, кадмій, мідь, кобальт, нікель, цинк, олово, ртуть та ін.) у вигляді загальної групи.The closest to the proposed method is Timm's ultrahistochemical method (Hayer G. Zlektronnaya histokhimiya: Trans. with German - M.: Mir, 1974. - 488 p. 70 However, this method is time-consuming and not specific. Its low specificity is due to the fact that with the help of a number of heavy metals (lead, platinum, silver, gold, cadmium, copper, cobalt, nickel, zinc, tin, mercury, etc.) can be detected in the tissues and cells of internal organs in the form of a general group.

В основу винаходу поставлено задачу розробити спосіб виявлення внутрішньоклітинного свинцю в органах 19 експериментальних тварин шляхом ультрагістохімічного дослідження тканин, такими хімічними реагентами і в такій послідовності, які забезпечать високу специфічність способу, стабілізацію свинцю у внутрішньоклітинних структурах при гістохімічній обробці зразків тканин, надійну і стабільну фіксацію клітинних ультраструктур для уникнення артефактів і зменшать трудомісткість способу.The invention is based on the task of developing a method for detecting intracellular lead in the organs of 19 experimental animals by ultrahistochemical examination of tissues, with such chemical reagents and in such a sequence that will ensure high specificity of the method, stabilization of lead in intracellular structures during histochemical processing of tissue samples, reliable and stable fixation of cellular ultrastructures to avoid artifacts and reduce the complexity of the method.

Поставлена задача досягається тим, що органи тварин, які підлягають дослідженню, послідовно обробляють необхідний час із підтримкою температурного режиму і рН хімічними препаратами і розчинами, приготовленими на основі 0,2 М кокаділатного буферу (рН 7,4-7,6) для послідуючого проведення гістохімічної реакції, виготовлення ультратонких зрізів і визначення в них під електронним мікроскопом наявності, або відсутності свинцю в тканинах піддослідних тварин.The task is achieved by the fact that the organs of the animals to be studied are successively treated for the necessary time with the maintenance of the temperature regime and pH with chemical preparations and solutions prepared on the basis of 0.2 M cocadylate buffer (pH 7.4-7.6) for the subsequent histochemical reaction, making ultrathin sections and determining the presence or absence of lead in the tissues of experimental animals under an electron microscope.

Спосіб здійснюється таким чином.The method is carried out as follows.

Піддослідних тварин, після введення їм в організм сполук свинцю різними способами наркотизують, роблять « розтин черевної і/або грудної порожнини і через канюлю, яку накладають на черевний або грудний відділ аорти, або катетер, який вводять у лівий шлуночок серця здійснюють перфузію органів на протязі ЗО хвилин теплим (ї377С) розчином фіксатору, який готують ех Їетроге на основі 0,2 М кокаділатного буферу з вмістом 2,595 по об'єму глютарового альдегіду, 496 параформу і 395 біхромату калію з кінцевим рН 7,2. Після цього вирізають із о органів, які підлягають дослідженню (печінка, нирки, головний мозок, селезінка та ін) шматочки тканин - розміром 1,0х1,0х1,0 мм, занурюють їх у свіжу порцію цього ж фіксатору. Шматочки фіксують по 12 годин при температурі ї4"С у двох свіжих порціях фіксатору, проводять цитохімічну реакцію, обробляючи шматочки тричі, -- по 12 годин у З9о розчині біхромату калію, який приготовлений на основі 0,2 М кокаділатного буферу з кінцевим с рН 7,2 при температурі 4"С і промивають тричі, по ЗО хвилин у 0,1 М кокаділатному буфері. Після цього шматочки фіксують 1 год в 195 розчині чотирьохокису осмію, зневожують у ацетонах, занурюють в епоксидну ее, смолу для їх ущільнення. Із залитих у смолу тканинних блоків за допомогою ультрамікротому типу І КВ ЇЇ готують ультратонкі зрізи, які досліджують за допомогою трансмісійного електронного мікроскопу типу ТЕМ 125К, або іншого аналогічного. «Experimental animals, after the introduction of lead compounds into their bodies, are anesthetized in various ways, an abdominal and/or thoracic cavity is dissected, and organs are perfused through a cannula placed on the abdominal or thoracic aorta, or a catheter inserted into the left ventricle of the heart 30 minutes with a warm (377C) fixative solution prepared by Yetroge on the basis of 0.2 M cocadylate buffer containing 2.595 by volume of glutaraldehyde, 496 of paraform and 395 of potassium dichromate with a final pH of 7.2. After that, pieces of tissue measuring 1.0x1.0x1.0 mm are cut from the organs to be examined (liver, kidneys, brain, spleen, etc.) and immersed in a fresh portion of the same fixative. The pieces are fixed for 12 hours at a temperature of 14"C in two fresh portions of the fixative, a cytochemical reaction is carried out by treating the pieces three times - for 12 hours in a 390% potassium dichromate solution prepared on the basis of 0.2 M cocadylate buffer with a final pH of 7 ,2 at a temperature of 4"C and washed three times for 30 minutes in 0.1 M cocadylate buffer. After that, the pieces are fixed for 1 hour in a 195 solution of osmium tetroxide, dehydrogenated in acetone, immersed in epoxy resin, resin for their sealing. Ultra-thin sections are prepared from the resin-embedded tissue blocks with the help of an ultramicrotome of type I KV HER, which are examined with the help of a transmission electron microscope of type TEM 125K, or another similar one. "

При спостереженні в електронному мікроскопі свинець виявляють у вигляді поліморфних електронно-щільних З 70 гранул, або аморфних електронно-щільних депозитів які часто розташовуються у внутрішньоклітинних органах, с або безпосередньо в цитоплазмі клітин, які мають не високу електронну щільність. При наявності свинцю вWhen observed under an electron microscope, lead is detected in the form of polymorphic electron-dense C 70 granules, or amorphous electron-dense deposits that are often located in intracellular organs, c or directly in the cytoplasm of cells that do not have a high electron density. In the presence of lead in

Із» клітинах, його відкладення спостерігаються на внутрішніх мембранах і в матріксі мітохондрій, у складі ліпідних гранул, у фаголізосомах, залишкових тільцях, та в гранулах ліпофусцину. В окремих випадках (епітелій проксимальних відділків нефрону нирок) свинець виявляється у вигляді аморфного або мілкогранулярного електронно-щільного матеріалу у складі білкових тілець. б Спосіб пояснюється таким прикладом. ка Щуру вагою 200 г в черевну порожнину одноразово вводили 1,0 мл водного розчину ацетату свинцю в дозі 1/5 0 во (5 мг/100 г маси). Через 72 години, під ефірним наркозом щуру робили розтин грудної порожнини і - катетеризацію лівого шлуночку серця. Через катетер під тиском 20 мм рт.ст. на протязі ЗО хвилин здійснювали -і 20 перфузію внутрішніх органів щура теплим (ї372С) розчином фіксатору, який був приготовлений ех іетроге на основі 0,2 М кокаділатного буферу з вмістом 2,596 по об'єму глютарового альдегіду, 496 параформу і 390 сл біхромату калію з кінцевим рН 7,2. Виток крові здійснювався через попередньо накладену канюлю на нижню полу вену. Після цього виділяли печінку, з якої вирізали шматочки розміром 1,0х1,0х1,0 мм, занурювали їх у свіжу порцію фіксатору і витримували 12 годин, при температурі ї4"С, після чого робили зміну фіксатору і 99 продовжували фіксацію ще на протязі такого ж часу. Після фіксації, шматочки обробляли тричі по 12 годин у 390 в. розчині біхромату калію, приготовленого на 0,2 М кокаділазному буфері з кінцевим рН 7,2 при тій же температурі. Промивали тричі по 30 хвилин у 0,1 М розчині буферу, фіксували їх у 195 розчині чотирьохокису осмію на протязі 1 год, зневожували у ацетонах, занурювали у суміш Епон-Аралдит і залишали на 48 годин для полімеризації. З тканинних блоків за допомогою ультрамікротому КВ І готували ультратонкі зрізи, які 60 досліджували у трансмісійному електронному мікроскопі ТЕМ 125К. В гепатоцитах спостерігали накопичення свинцю в мітохондріях клітин у вигляді електронно-щільних, мілких гранул, розташованих на внутрішній поверхні внутрішніх мембран мітохондрій і їх внутрішньому матрікс, а також на зовнішній поверхні ліпідних внутрішньоклітинних крапель, у вигляді аморфного, електронно-щільного матеріалу та вторинних лізосомах, у складі гранул ліпофусцину. Запропонований спосіб виявлення внутрішньоклітинного свинцю в органах бо експериментальних тварин дає можливість спостерігати різний характер накопичення свинцю у внутрішньоклітинних структурах.From" cells, its deposits are observed on the inner membranes and in the matrix of mitochondria, in the composition of lipid granules, in phagolysosomes, residual bodies, and in granules of lipofuscin. In some cases (the epithelium of the proximal divisions of the nephron of the kidneys), lead is found in the form of an amorphous or fine-grained electron-dense material in the composition of protein bodies. b The method is explained by the following example. ka A rat weighing 200 g was once injected into the abdominal cavity with 1.0 ml of an aqueous solution of lead acetate at a dose of 1/50 vol (5 mg/100 g of mass). After 72 hours, under ether anesthesia, the rat underwent an autopsy of the chest cavity and catheterization of the left ventricle of the heart. Through the catheter under a pressure of 20 mm Hg. for 30 minutes, the internal organs of the rat were perfused with a warm (372C) fixative solution, which was prepared ex-ietroge on the basis of 0.2 M cocadylate buffer containing 2.596 by volume of glutaraldehyde, 496 of paraform and 390 ml of potassium dichromate with with a final pH of 7.2. Blood flow was carried out through a pre-imposed cannula on the inferior vena cava. After that, the liver was isolated, from which pieces 1.0x1.0x1.0 mm in size were cut out, immersed in a fresh portion of the fixative and kept for 12 hours at a temperature of 4°C, after which the fixative was changed and fixation was continued for the same period of time. time. After fixation, the slices were treated three times for 12 hours in a 390% potassium dichromate solution prepared in 0.2 M cocadylase buffer with a final pH of 7.2 at the same temperature. They were washed three times for 30 minutes in 0.1 M buffer solution , they were fixed in 195 osmium tetroxide solution for 1 hour, denatured in acetone, immersed in Epon-Araldite mixture and left for 48 hours for polymerization.Ultra-thin sections were prepared from the tissue blocks using a KV I ultramicrotome, which were examined in a transmission electron microscope. TEM 125 K. In hepatocytes, the accumulation of lead in the mitochondria of cells was observed in the form of electron-dense, small granules located on the inner surface of the inner membranes of mitochondria and their inner matrix ks, as well as on the outer surface of lipid intracellular droplets, in the form of amorphous, electron-dense material and secondary lysosomes, in the composition of lipofuscin granules. The proposed method of detecting intracellular lead in the organs of experimental animals makes it possible to observe the different nature of lead accumulation in intracellular structures.

Картина, що спостерігається в електронному мікроскопі пояснюється фотознімками (фіг. 1, фіг. 2, фіг. З, фіг. 4).The picture observed in the electron microscope is explained by photographs (Fig. 1, Fig. 2, Fig. C, Fig. 4).

На фіг 1 представлено накопичення свинцю в мітохондрії гепатоциту у вигляді надто мілких електронно-щільних гранул, які розташовані практично на всій внутрішній поверхні її зовнішньої мембрани та у вигляді великих, округлої форми гранул, які розташовані на одному з полюсів внутрішнього матріксу мітохондрії (вказано стрілкою).Fig. 1 shows the accumulation of lead in hepatocyte mitochondria in the form of very small electron-dense granules that are located on almost the entire inner surface of its outer membrane and in the form of large, rounded granules that are located at one of the poles of the inner matrix of the mitochondrion (indicated by an arrow) .

На фіг. 2 представлено накопичення свинцю в різних за характером пошкодженнях мітохондріях гепатоцитів. 7/0 Одна з мітохондрій, яка має надто просвітлений матрікс і порушені крісти, з окремими їх вакуолізованими фрагментами практично не містить свинцю. Інша мітохондрія (вказано стрілкою) містить велику кількість свинцю, який розташовується у внутрішньому матріксі у вигляді мілкогранулярного та електронно-щільного аморфного матеріалу наряду з різнокаліберними, поліморфними електронно-щільними гранулами.In fig. 2 shows the accumulation of lead in mitochondria of hepatocytes with different types of damage. 7/0 One of the mitochondria, which has an overly enlightened matrix and broken cristae, with their separate vacuolated fragments, practically does not contain lead. Another mitochondrion (indicated by an arrow) contains a large amount of lead, which is located in the internal matrix in the form of fine-grained and electron-dense amorphous material along with various caliber, polymorphic electron-dense granules.

На фіг. З представлено накопичення свинцю в жирових включеннях гепатоцитів, яке відбувається за рахунок /5 взаємодії сполук свинцю з ліпідами. Мілкогранулярний електронно-щільний матеріал в ліпідних краплях розташовується переважно по їх краю.In fig. The accumulation of lead in fatty inclusions of hepatocytes, which occurs due to the interaction of lead compounds with lipids, is presented. Fine-grained electron-dense material in lipid droplets is located mainly along their edges.

На фіг. 4 представлено накопичення свинцю у складі осміфільних мембран мієліноподібних тілець, які розташовані в просвіті жовчних капілярів у вигляді мілких електронно-щільних гранул.In fig. 4 shows the accumulation of lead in the composition of osmophilic membranes of myelin-like bodies, which are located in the lumen of bile capillaries in the form of small electron-dense granules.

Спосіб дає можливість вивчати на клітинному і субклітинному рівнях організації живої системи токсикокінетичні характеристики і токсикодинаміку впливу свинцю і його сполук на живий організм при його екзогенному впливі в умовах токсикологічного експерименту, що вкрай необхідно для визначення механізмів біологічної дії свинцю на живий організм, розробки сучасних уявлень про морфогенез і патогенез свинцевих уражень, а також розробки способів діагностики, засобів та методів патогенетичної профілактики і лікування сатурнізму.The method makes it possible to study at the cellular and subcellular levels of the organization of a living system the toxicokinetic characteristics and toxicodynamics of the influence of lead and its compounds on a living organism under its exogenous influence in the conditions of a toxicological experiment, which is extremely necessary for determining the mechanisms of biological action of lead on a living organism, developing modern ideas about morphogenesis and pathogenesis of lead lesions, as well as development of diagnostic methods, means and methods of pathogenetic prevention and treatment of saturnism.

Claims (1)

« Формула винаходу Спосіб виявлення внутрішньоклітинного свинцю ов органах експериментальних тварин шляхом ю зо ультрагістохімічного дослідження тканин, який відрізняється тим, що попередньо протягом 30 хвилин проводять перфузію органів теплим (4372) розчином фіксатора з кінцевим рН 7,2, приготованого ех Їетроге на основі 0,2. ї- М кокаділатного буфера (рН 7,4-7,6) з вмістом по об'єму 2,5 906 глютарового альдегіду, 4 95 параформу та З 90 «-- біхромату калію, потім вирізають шматочки тканин розміром 1,0 х 1,0 х 1,0 мм, фіксують двічі, по 12 годин, при температурі 4"С у свіжих порціях цього ж фіксатора, проводять цитохімічну реакцію, обробляючи шматочки с тричі, по 12 годин, у З 95 розчині біхромату калію, приготованого на 0,2 М кокаділатному буфері (рН 7,2), со після чого промивають тричі по 30 хвилин у цьому ж буфері, фіксують 1 годину в 1 95 розчині чотириокису осмію на 0,2 М кокаділатному буфері, зневоднюють у ацетонах, занурюють в епоксидну смолу, готують ультратонкі зрізи тканин та визначають наявність вмісту свинцю по утворенню в клітинах поліморфних, різного розміру електронно-щільних гранул і депозитів за допомогою трансмісійного електронного мікроскопа. «The formula of the invention is the method of detecting intracellular lead in the organs of experimental animals by means of ultrahistochemical examination of tissues, which is distinguished by the fact that the organs are first perfused for 30 minutes with a warm (4372) fixative solution with a final pH of 7.2, prepared by Yetroge's experiment on the basis of 0, 2. 1 M of cocadylate buffer (pH 7.4-7.6) with a volume content of 2.5 906 glutaraldehyde, 4 95 paraform and C 90 "-- potassium dichromate, then cut out pieces of tissue 1.0 x 1 ,0 x 1.0 mm, fix twice, for 12 hours, at a temperature of 4"C in fresh portions of the same fixative, carry out a cytochemical reaction, treating the pieces three times, for 12 hours, in a 95 solution of potassium dichromate, prepared at 0 .2 M cocadylate buffer (pH 7.2), after which they are washed three times for 30 minutes each in the same buffer, fixed for 1 hour in 1 95 osmium tetroxide solution in 0.2 M cocadylate buffer, dehydrated in acetone, immersed in epoxy resin , prepare ultrathin sections of tissues and determine the presence of lead content by the formation of polymorphic, electron-dense granules of various sizes and deposits in the cells using a transmission electron microscope. -- . и? (о) іме) - -і сл 60 б5. and? (o) name) - -i sl 60 b5
UA2003010195A 2003-01-08 2003-01-08 Method for determining the content of lead in the cells of the organs of an experimental animal UA62175A (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA2003010195A UA62175A (en) 2003-01-08 2003-01-08 Method for determining the content of lead in the cells of the organs of an experimental animal

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA2003010195A UA62175A (en) 2003-01-08 2003-01-08 Method for determining the content of lead in the cells of the organs of an experimental animal

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA62175A true UA62175A (en) 2003-12-15

Family

ID=34391520

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UA2003010195A UA62175A (en) 2003-01-08 2003-01-08 Method for determining the content of lead in the cells of the organs of an experimental animal

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA62175A (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104406962A (en) * 2014-11-24 2015-03-11 苏州东辰林达检测技术有限公司 Kit for quickly detecting lead ion in water sample and use method of kit

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104406962A (en) * 2014-11-24 2015-03-11 苏州东辰林达检测技术有限公司 Kit for quickly detecting lead ion in water sample and use method of kit

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Whiting et al. Experimental cyclosporin A nephrotoxicity.
White The dense bodies of human platelets: inherent electron opacity of the serotonin storage particles
Johansson-Sjöbeck et al. The effect of cadmium on the hematology and on the activity of δ-aminolevulinic acid dehydratase (ALA-D) in blood and hematopoietic tissues of the flounder, Pleuronectes flesus L.
Yoffey A contribution to the study of the comparative histology and physiology of the spleen, with reference chiefly to its cellular constituents: I. in fishes
Haugaa et al. Early bedside detection of ischemia and rejection in liver transplants by microdialysis
Hamid Histopathological effects of pesticide-cholopyrifos on kidney in albino rats
Read et al. Evaluation of zuclopenthixol acetate to decrease handling stress in wapiti
Keeling et al. The enhancement of paraquat toxicity in rats by 85% oxygen: lethality and cell-specific lung damage
UA62175A (en) Method for determining the content of lead in the cells of the organs of an experimental animal
Yoshida et al. A repeated dose 90-day oral toxicity study of cyflumetofen, a novel acaricide, in rats
Lindahl et al. Effects of short-term exposure of Leuciscus rutilus L.(Pisces) to phenylmercuric hydroxide
Kawamura et al. Histological changes in rat embryonic blood cells as a possible mechanism for ventricular septal defects produced by an N‐phenylimide herbicide
Wendelaar Bonga The effect of prolactin on kidney structure of the euryhaline teleost Gasterosteus aculeatus during adaptation to fresh water
Albanus et al. Forty days oral toxicity of 2, 6‐cis‐diphenylhexamethylcyclotetrasiloxane (KABI 1774) in beagle dogs with special reference to effects on the male reproductive system
Pritchard et al. Renal handling of the polar DDT metabolite DDA (2, 2-bis [p-chlorophenyl] acetic acid) by marine fish
Klockars et al. The relationship of lysozyme to the nephropathy in chloroleukemic rats and the effects of lysozyme loading on normal rat kidneys
Berg et al. Toxicity studies with the blue-green alga Oscillatoria agardhii from two eutrophic Norwegian lakes
Hamir et al. Acid fast inclusions in tissues of dogs dosed with lead
Berg et al. Effects of Oscillatoria agardhii-toxins on blood pressure and isolated organ preparations
CN109452261A (en) A kind of specimen preserving liquid and preparation method thereof
Venter An in ovo investigation of the cellular effects of the heavy metals cadmium and chromium alone and in combination
US4594237A (en) Method for testing chemical and biological substances
KR102563528B1 (en) Solution composition for liquid based cytology of cervical cancer
Nazarov et al. The study of chronic toxicity of L-ascorbate 1-(2-hydroxyethyl)-4, 6-dimethyl-1, 2-dihydropyrimidine-2-one
Youson Absorption and transport of ferritin and exogenous horseradish peroxidase in the opisthonephric kidney of the sea lamprey: II. The tubular nephron