UA44066C2 - Set for determining activity or concentration of cathepsin "g" in biological liquids - Google Patents
Set for determining activity or concentration of cathepsin "g" in biological liquids Download PDFInfo
- Publication number
- UA44066C2 UA44066C2 UA2001042261A UA200142261A UA44066C2 UA 44066 C2 UA44066 C2 UA 44066C2 UA 2001042261 A UA2001042261 A UA 2001042261A UA 200142261 A UA200142261 A UA 200142261A UA 44066 C2 UA44066 C2 UA 44066C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- cathepsin
- tablet
- concentration
- preparation
- proteinase
- Prior art date
Links
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 title claims description 15
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 title claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 claims abstract description 12
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 14
- 102000003902 Cathepsin C Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000267 Cathepsin C Proteins 0.000 claims description 13
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 3
- 230000001810 trypsinlike Effects 0.000 abstract description 3
- LKDMKWNDBAVNQZ-UHFFFAOYSA-N 4-[[1-[[1-[2-[[1-(4-nitroanilino)-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)NC(C)C(=O)NC(C)C(=O)N1CCCC1C(=O)NC(C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 LKDMKWNDBAVNQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 6
- 102000004173 Cathepsin G Human genes 0.000 abstract 6
- 108090000617 Cathepsin G Proteins 0.000 abstract 6
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 abstract 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 abstract 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000227 Chymases Proteins 0.000 description 3
- 102000003858 Chymases Human genes 0.000 description 3
- 101000793922 Homo sapiens Dipeptidyl peptidase 1 Proteins 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 102000053908 human CTSC Human genes 0.000 description 3
- 101000909983 Homo sapiens Chymase Proteins 0.000 description 2
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 2
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000002849 elastaseinhibitory effect Effects 0.000 description 2
- GTTYPHLDORACJW-UHFFFAOYSA-N nitric acid;sodium Chemical compound [Na].O[N+]([O-])=O GTTYPHLDORACJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- GEHMBYLTCISYNY-UHFFFAOYSA-N Ammonium sulfamate Chemical compound [NH4+].NS([O-])(=O)=O GEHMBYLTCISYNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102100024940 Cathepsin K Human genes 0.000 description 1
- 101710177066 Cathepsin O Proteins 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101710132772 Peroxidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 101000909986 Rattus norvegicus Chymase Proteins 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 description 1
- -1 azo compound Chemical class 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000011037 discontinuous sequential dilution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000003142 primary aromatic amines Chemical class 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Винахід відноситься до біохімії і може бути використано у біології та медицині для наукових досліджень для визначення концентрації катепсину б у людей імуноферментним способом, а також може бути використано в клінічній практиці для оцінки розвитку та контролю лікування серцево-судинних захворювань, патології нирок та інш.The invention relates to biochemistry and can be used in biology and medicine for scientific research to determine the concentration of cathepsin b in humans by the immunoenzymatic method, and can also be used in clinical practice to assess the development and control the treatment of cardiovascular diseases, kidney pathology, etc.
Відомий "Набір реактивів для визначення первинних ароматичних амінів у розчинах і біологічних рідинах" (див. Пат. РФ Мо2097762, 501М33/48, Аб1819/02), який містить у відповідних упаковках наважку трихлороцтової кислоти, яка при розчиненні у 5Омл дистильованої води дає розчин, що приводить до осаду білків, смужки паперу із натрієм азотнокислим, які призначені для утворення діазотуючого розчину безпосередньо перед аналізом (ех їетроге), наважку амонію сульфамінокислого, котра при розчиненні у 25мл дистильованої води дає розчин для зв'язування залишку натрію азотнокислого, розчин М-(1)- нафтилетилендіамінодигідрохлориду для утворення забарвленої азосполуки, смужки паперу, що містять 0,018мкмоль стандартного аміну, який аналізують. Використання набору дозволяє спростити проведення аналізу і підвищити його точність.The well-known "Set of reagents for the determination of primary aromatic amines in solutions and biological fluids" (see Pat. RF Mo2097762, 501M33/48, Ab1819/02), which contains in appropriate packages a weight of trichloroacetic acid, which when dissolved in 5 Oml of distilled water gives a solution , which leads to the precipitation of proteins, strips of paper with sodium nitric acid, which are intended for the formation of a diazotizing solution immediately before the analysis (ex iatroge), a weight of ammonium sulfamic acid, which, when dissolved in 25 ml of distilled water, gives a solution for binding the remaining sodium nitric acid, solution M -(1)- naphthylethylenediaminodihydrochloride to form a colored azo compound, strips of paper containing 0.018 μmol of the standard amine to be analyzed. Using the set allows you to simplify the analysis and increase its accuracy.
Недоліком відомого рішення є призначення набору тільки для визначення ароматичних амінів.The disadvantage of the known solution is the appointment of the kit only for the determination of aromatic amines.
Відомий також "Спосіб визначення активності протеїназ або їх інгібіторів в біологічних рідинах" (див.The "Method of determining the activity of proteinases or their inhibitors in biological fluids" is also known (see
Пат. РФ Ме1655991, С1201/37), який полягає у використанні полістиролових планшетів з імобілізованим маркерним ферментом, що комплексно пов'язаний із субстратом протеолітичної реакції, препарату протеїнази, детергенту для приготування миючої рідини, фосфатного буферу для приготування робочого розчину протеїнази, контрольного матеріалу і дослідних проб для аналізу, цитратного буферу, ортофенілендіаміну і гідропериту для виявлення залишкової активності маркерного ферменту.Stalemate. RF Me1655991, C1201/37), which consists in the use of polystyrene tablets with an immobilized marker enzyme that is complexly associated with the substrate of the proteolytic reaction, a proteinase preparation, a detergent for the preparation of a washing liquid, a phosphate buffer for the preparation of a working proteinase solution, a control material and experimental samples for analysis, citrate buffer, orthophenylenediamine and hydroperite to detect the residual activity of the marker enzyme.
Чутливість способу становить -1079-10719г,The sensitivity of the method is -1079-10719g,
Недоліком відомого способу є складність здійснення етапу підготовки; приготування комплексу маркерного ферменту та субстратного білка і його імобілізація на поверхні полістиролових планшетів, що потребує використання спеціальних реагентів, обладнання, високої кваліфікації оператора. Крім того, відомий спосіб не передбачає визначення концентрації катепсину 0.The disadvantage of the known method is the complexity of the preparation stage; preparation of a complex of marker enzyme and substrate protein and its immobilization on the surface of polystyrene tablets, which requires the use of special reagents, equipment, and high qualification of the operator. In addition, the known method does not involve determining the concentration of cathepsin 0.
Відомий також "Набір для визначення активності нетрипсиноподібних протеїназ (НП), хімази, еластазоінгібіторної активності со-1-інгібітора протеїназ (о-1-ІП) та рівня о-2-макроглобуліну (с-2-МГ) в біологічних рідинах" - прототип, який містить полістироловий планшет з імобілізованим маркерним ферментом, що комплексно пов'язаний із субстратом протеолітичної реакції препарат протеїнази, фосфатний буфер для приготування робочого розчину протеїнази, контрольного матеріалу і дослідних проб для аналізу, детергент для приготування миючої рідини, цитратний буфер, ортофенілендіамін і гідроперит для виявлення залишкової активності маркерного ферменту. У наборі для визначення хімази планшет імобілізований маркерним ферментом, який комплексно пов'язаний із субстратом білкової природи, що містить послідовність Рго-Рпе, у наборі для визначення о-2-МГ планшет імобілізований маркерним ферментом, який комплексно пов'язаний із протамінсульфатом, набір для визначення НП, хімази додатково містить 1мг інгібітору трипсину із сої (СІТ) для пригнічення активності трипсиноподібних протеїназ, набір для визначення с-2-МГ додатково містить Змг СІТ для пригнічення залишкової активності трипсину, у наборі для визначення еластазоінгібіторної активності о-1-ІП препаратом протеїнази є еластаза, усі компоненти надані у окремих упаковках при наступному складі компонентів: препарат протеїнази (трипсин - 1мг, еластаза - 2-6мкл), детергент - 0,75мл, фосфатний буфер - 12,5мл, цитратний буфер - бмл, ортофенілендіамін - 2мг або 1 таблетка, гідроперит - 1 таблетка, СІТ -1 або Змг, відповідно.Also known is "Set for determining the activity of non-trypsin-like proteinases (NP), chymase, elastase-inhibitory activity of c-1 proteinase inhibitor (o-1-IP) and the level of o-2-macroglobulin (c-2-MG) in biological fluids" - a prototype , which contains a polystyrene tablet with an immobilized marker enzyme that is complexly associated with the substrate of the proteolytic reaction, a proteinase preparation, a phosphate buffer for the preparation of a working proteinase solution, a control material and test samples for analysis, a detergent for the preparation of a washing liquid, a citrate buffer, orthophenylenediamine and hydroperite to detect the residual activity of the marker enzyme. In the kit for the determination of chymase, the tablet is immobilized with a marker enzyme, which is complexly associated with a substrate of protein nature, containing the sequence Pgo-Rpe, in the kit for the determination of o-2-MG, the tablet is immobilized with a marker enzyme, which is complexly associated with protamine sulfate, the kit for the determination of NP, chymase additionally contains 1 mg of soybean trypsin inhibitor (SIT) to inhibit the activity of trypsin-like proteinases, the kit for the determination of c-2-MG additionally contains Zmg of SIT for the inhibition of residual trypsin activity, in the kit for the determination of elastase inhibitory activity o-1-IP the proteinase preparation is elastase, all components are provided in separate packages with the following composition of components: proteinase preparation (trypsin - 1mg, elastase - 2-6μl), detergent - 0.75ml, phosphate buffer - 12.5ml, citrate buffer - bml, orthophenylenediamine - 2 mg or 1 tablet, hydroperit - 1 tablet, SIT -1 or Zmg, respectively.
Недоліком відомого набору є неспецифічність щодо визначення катепсину 0.The disadvantage of the known set is the lack of specificity for the determination of cathepsin 0.
В основу винаходу поставлена задача розробки набору, за допомогою якого можна специфічно визначати концентрацію катепсину С у біологічних рідинах людей.The invention is based on the task of developing a kit that can be used to specifically determine the concentration of cathepsin C in human biological fluids.
Ця задача вирішується тим, що у наборі для визначення концентрації катепсину с в біологічних рідинах, який містить імобілізований полістироловий планшет, препарат протеїнази, фосфатний буфер для приготування робочого розчину протеїнази, контрольного матеріалу і дослідних проб для аналізу, детергент для приготування миючої рідини, цитратний буфер, ортофенілендіамін і гідроперит для виявлення активності маркерного ферменту, усі компоненти подані в окремій упаковці при наступному складі; препарат протеїнази, фосфатний буфер - 12,5мл, детергент - 0,75мл, цитратний буфер - бмл, ортофенілендіамін - 2мг або 1 таблетка, гідроперит -1 таблетка, згідно винаходу: - планшет імобілізований антитілами проти катепсину С у концентрації 5мкг/мл; - у якості препарату протеїнази використовують катепсин с у кількості 0,008-0,025мГг; - набір додатково містить кон'югат антитіл проти катепсину С з маркерним ферментом у кількості 0,1-This task is solved by the fact that the kit for determining the concentration of cathepsin c in biological fluids, which contains an immobilized polystyrene tablet, a proteinase preparation, a phosphate buffer for preparing a working proteinase solution, a control material and test samples for analysis, a detergent for preparing a washing liquid, a citrate buffer , orthophenylenediamine and hydroperite to detect the activity of the marker enzyme, all components are presented in a separate package with the following composition; proteinase preparation, phosphate buffer - 12.5 ml, detergent - 0.75 ml, citrate buffer - bml, orthophenylenediamine - 2 mg or 1 tablet, hydroperite - 1 tablet, according to the invention: - tablet immobilized with antibodies against cathepsin C at a concentration of 5 μg/ml; - cathepsin C is used as a proteinase preparation in the amount of 0.008-0.025 mg; - the set additionally contains a conjugate of antibodies against cathepsin C with a marker enzyme in the amount of 0.1-
О,2мг або 0,025-1мл.About 2 mg or 0.025-1 ml.
Імобілізація планшету антитілами проти катепсину с у наборі для визначення концентрації катепсину С та додатковий вміст кон'югату антитіл проти катепсину сб з маркерним ферментом забезпечує специфічність визначення катепсину З імуноферментним методом. Необхідність використання імуноферментного методу обумовлено тим, що хімаза людини, на відміну від хімази щурів, має однакову субстратну специфічність з катепсином с, а інгібітори, які пригнічують хімазу людини, але не впливають на активність катепсину 0, не відомі.Immobilization of the tablet with antibodies against cathepsin c in the kit for determining the concentration of cathepsin C and the additional content of the conjugate of antibodies against cathepsin sb with a marker enzyme ensures the specificity of determining cathepsin C by the immunoenzymatic method. The need to use the immunoenzymatic method is due to the fact that human chymase, unlike rat chymase, has the same substrate specificity as cathepsin c, and inhibitors that inhibit human chymase, but do not affect the activity of cathepsin 0, are not known.
Вміст компонентів у запропонованому наборі забезпечує оптимальні умови для здійснення імуноферментаого способу оцінки концентрації катепсину С людини.The content of the components in the proposed set provides optimal conditions for the implementation of the immunoenzymatic method of assessing the concentration of human cathepsin C.
Дослідження по запропонованому наборові були проведені в Інституті терапії АМН України. Розрахунки комплектування наборів перевірено лабораторними іспитами.Studies on the proposed set were conducted at the Institute of Therapy of the Medical Academy of Ukraine. Calculations for the completion of sets have been verified by laboratory tests.
Набір складається із наступних компонентів: - Полістироловий планшет з імобілізованими антитілами проти катепсину С у концентрації 5мкг/мл. - Препарат протеїнази (катепсин с) - 0,008-0,025мг. - Фосфатний буфер для приготування робочого розчину протеїнази, контрольного матеріалу і дослідних проб для аналізу - 12,5мл. - Детергент для приготування миючої рідини, твін-20 - 0,75мл. - Кон'югат антитіл проти катепсину С з маркерним ферментом - 0,1-0,2мг або 0,025-1мл.The set consists of the following components: - Polystyrene tablet with immobilized antibodies against cathepsin C at a concentration of 5 μg/ml. - Proteinase drug (cathepsin c) - 0.008-0.025 mg. - Phosphate buffer for preparation of proteinase working solution, control material and experimental samples for analysis - 12.5 ml. - Detergent for preparation of washing liquid, twin-20 - 0.75 ml. - Conjugate of antibodies against cathepsin C with a marker enzyme - 0.1-0.2 mg or 0.025-1 ml.
- Цитратний буфер - бмл. - Ортофенілендіамін - 2мг або 1 таблетка. - Гідроперит для виявлення активності маркерного ферменту пероксидази - 1 таблетка.- Citrate buffer - bml. - Orthophenylenediamine - 2 mg or 1 tablet. - Hydroperit for detecting activity of marker enzyme peroxidase - 1 tablet.
Аналіз здійснюють за інструкцією, яка надається до набору.The analysis is carried out according to the instructions provided with the kit.
Приготування реагентів і матеріалів здійснюють таки чином: 1. Готують рідину для відмивання: 0,5мл детергенту додають до 1л дистильованої води. 2. Готують фосфатний буфер: рідину доводять до 250мл дистильованою водою і додають 0,25мМкл детергенту. 3. Відмивають планшет 2-3 рази дистильованою водою, яка містить детергент. 4. Готують контрольний матеріал шляхом послідовного розведення катепсину Сі за схемою згідно таблиці. 5. Готують розчин кон'югату додаванням 25мл фосфатного буферу. 6. Готують суміш для виявлення активності маркерного ферменту: цитратний буфер розводять у 2 рази дистильованою водою, додають ортофенілендіамін, гідроперит (готується суміш перед використанням).Preparation of reagents and materials is carried out in the following way: 1. Prepare liquid for washing: 0.5 ml of detergent is added to 1 liter of distilled water. 2. Prepare a phosphate buffer: bring the liquid to 250 ml with distilled water and add 0.25 ml of detergent. 3. Wash the tablet 2-3 times with distilled water containing a detergent. 4. Prepare the control material by successive dilution of cathepsin C according to the scheme according to the table. 5. Prepare the conjugate solution by adding 25 ml of phosphate buffer. 6. Prepare a mixture for detecting the activity of the marker enzyme: dilute the citrate buffer 2 times with distilled water, add orthophenylenediamine, hydroperite (the mixture is prepared before use).
Можливість проведення аналізу з використанням запропонованого набору наводиться у прикладах.The possibility of conducting an analysis using the proposed set is given in the examples.
Приклад 1. Визначення концентрації катепсину С м сироватці крові людини. 1. Окремо на титрувальній дошці готують дослідні зразки (п-40): зразки плазми/сироватки крові людини розводять у 250 разів фосфатним буфером, наприклад, шляхом послідовного розведення у 25 та 10 разів (до 9бО0мкл буферу додають 40мкл сироватки, потім до 180мкл буферу - 20мкл 1-го розведення сироватки). 2. Вносять у лунки титрувальної дошки контрольний матеріал, приготовлений згідно таблиці. 3. Вносять контрольний матеріал і дослідні зразки, які приготовлені згідно пп. 1, 2, у лунки відмитого планшета та інкубують при 37"С 1год. (реакція зв'язування антитіл з антигеном). 4. Відмивають планшет як вказано раніше. 5. Проводять реакцію зв'язування антигену (катепсину б) з кон'югатом антитіла-пероксидаза протягом 1Тгод. при 37"С. Кон'югат, який не зв'язався з антигеном відмивають як вказано раніше. 6. Готують 5095 сірчану кислоту (в набір не входить). 7. Визначають активність маркерного ферменту додаванням суміші, що приготовлена з цитратного буферу, ортофенілендіаміну та гідропериту. Інкубують до появи диференційного забарвлення. 8. Зупиняють реакцію додаванням по 5Омкл у лунку 5095 сірчаної кислоти. 9. Визначають оптичну щільність розчинів при 490нм за допомогою багатоканального мікроспектрофотометра. 10. Будують калібровану криву по результатам вимірювань контрольних зразків та розраховують концентрацію катепсину б за формулою: с- в2гб5о1000 (г/л) 1000000Example 1. Determination of the concentration of cathepsin C in human blood serum. 1. Separately on a titration board, test samples are prepared (p-40): human plasma/serum samples are diluted 250 times with phosphate buffer, for example, by sequential dilution of 25 and 10 times (add 40 μl of serum to 90 μl of buffer, then add 40 μl of buffer to 180 μl of buffer - 20 μl of the 1st serum dilution). 2. Put the control material prepared according to the table into the wells of the titration board. 3. Enter the control material and test samples, which are prepared in accordance with paragraphs 1, 2, into the wells of the washed tablet and incubate at 37"C for 1 hour (antibody-antigen binding reaction). 4. Wash the tablet as indicated earlier. 5. Carry out the antigen (cathepsin b) binding reaction with the conjugate peroxidase antibodies for 1 hour at 37"C. The conjugate that did not bind to the antigen is washed off as indicated earlier. 6. Prepare 5095 sulfuric acid (not included in the set). 7. Determine the activity of the marker enzyme by adding a mixture prepared from citrate buffer, orthophenylenediamine and hydroperite. Incubate until differential color appears. 8. The reaction is stopped by adding 5 µl of sulfuric acid to well 5095. 9. Determine the optical density of solutions at 490 nm using a multichannel microspectrophotometer. 10. Build a calibrated curve based on the results of measurements of control samples and calculate the concentration of cathepsin b according to the formula: с-в2гб5о1000 (g/l) 1000000
В - концентрація катепсину С, що визначена за каліброваною кривою,B is the concentration of cathepsin C determined by the calibration curve,
С - концентрація катепсину О в г/л, 250 - розведення зразків сироватки крові людини, 1000 - коефіцієнт перерахунку на 1л, 1000000 - коефіцієнт перерахунку у грами.C is the concentration of cathepsin O in g/l, 250 is the dilution of human blood serum samples, 1000 is the conversion factor for 1 liter, 1000000 is the conversion factor in grams.
ТаблицяTable
Підготовка контрольного матеріалу для визначення концентрації катепсину С 11177710 6 | .ющ 2000 2 2 щ- | 1иМм7/ | 05 2 Щ | б5Мм/ 8 | ЮК в00бо 7 | 77775777 | 77777705 | ОМ стандарту./7/Preparation of control material for determining the concentration of cathepsin C 11177710 6 | .yusch 2000 2 2 sh- | 1yMm7/ | 05 2 Sh | b5Mm/ 8 | Yuk v00bo 7 | 77775777 | 77777705 | OM standard./7/
Висновок: Вказаний приклад підтверджує можливість здійснення специфічного і високочутливого (107- 10797) способу визначення концентрації катепсину С людини, спрощення постановки аналізу за рахунок використання наборів.Conclusion: This example confirms the possibility of implementing a specific and highly sensitive (107-10797) method of determining the concentration of human cathepsin C, simplifying the analysis by using kits.
Технічний результат 1. Можливість специфічного визначення концентрації катепсину С людини імуноферментним методом. 2. Висока чутливість аналізу: 10-г, 3. Спрощення проведення аналізу.Technical result 1. The possibility of specific determination of the concentration of human cathepsin C by immunoenzymatic method. 2. High sensitivity of the analysis: 10 g, 3. Simplification of the analysis.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2001042261A UA44066C2 (en) | 2001-04-05 | 2001-04-05 | Set for determining activity or concentration of cathepsin "g" in biological liquids |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2001042261A UA44066C2 (en) | 2001-04-05 | 2001-04-05 | Set for determining activity or concentration of cathepsin "g" in biological liquids |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA44066C2 true UA44066C2 (en) | 2004-05-17 |
Family
ID=74166055
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2001042261A UA44066C2 (en) | 2001-04-05 | 2001-04-05 | Set for determining activity or concentration of cathepsin "g" in biological liquids |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA44066C2 (en) |
-
2001
- 2001-04-05 UA UA2001042261A patent/UA44066C2/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9470686B2 (en) | Combination hepatitis C virus antigen and antibody detection method | |
| CN105785043A (en) | Kit for quantitatively detecting AFP-L3% | |
| CN101533011A (en) | A Japanese blood fluke ovum antibody magnetic particle EILSA detecting method | |
| CN101180405A (en) | Method of analyzing enzyme | |
| US20090111091A1 (en) | Specimen pretreatment liquid, kit for measuring virus, and method for detecting virus | |
| CN104634970B (en) | For detecting the test kit of platelet-activating factor acetylhydro-lase and its preparing and application | |
| JP4197393B2 (en) | Test method for IgA nephropathy | |
| US6242197B1 (en) | Use of urinary trypsin inhibitor for the diagnosis of the onset of AIDS | |
| CN108445215A (en) | A kind of kit and preparation method quantitatively detecting myeloperoxidase | |
| RU2417375C2 (en) | Method and set for immune-enzyme assay of functional activity of human complement component c3 | |
| JPWO1999050663A6 (en) | Testing methods for IgA nephropathy | |
| CN106353505B (en) | ApoE kits based on catalyzed signal amplification | |
| Devani et al. | Kallikrein-kinin system activation in Crohn's disease: differences in intestinal and systemic markers | |
| RU2380707C1 (en) | Method and set for immunoenzyme assay of functional activity of component c3 of human complement by alternative pathway of activation | |
| UA44066C2 (en) | Set for determining activity or concentration of cathepsin "g" in biological liquids | |
| WO1998005970A1 (en) | Method for examining chronic rejection reactions following organ transplantation and method for determining urine components | |
| CA2518961A1 (en) | Methods of measuring the ability of a test compound to inactivate a biological target in cells of a subject | |
| CN102721819B (en) | Competitive inhibitory enzyme-linked immunoassay kit of adiponectin and method | |
| CN103852579B (en) | A kind of human serum A β quantitative detecting method | |
| JP3540675B2 (en) | Specific binding assay using methyl orange | |
| UA66517A (en) | Set for determining the activity of metalloelostase in biological liquids | |
| Heidtmann et al. | Assay of complexed alpha 1-antichymotrypsin in plasma | |
| RU2425383C1 (en) | METHOD AND KIT FOR IMMUNE-ENZYME FUNCTIONAL ACTIVITY ASSAY ON C1r2s2 SUBCOMPONENTS OF FIRST COMPONENT OF HUMAN COMPLEMENT | |
| RU2413224C1 (en) | METHOD AND SET FOR ELISA DETERMINATION OF FUNCTIONAL ACTIVITY OF HUMAN COMPLEMENT COMPONENT C1q | |
| UA46357A (en) | KIT FOR DETERMINATION OF CALPAINE ACTIVITY IN BIOLOGICAL LIQUIDS |