UA139049U - N-бензиламінометансульфокислота як протигрипозний агент - Google Patents

Abstract

N-Бензиламінометансульфокислота формули: як протигрипозний агент.

Description

М-Бензиламінометансульфокислота (ВпАМ5А) формули: / (в) ак / он (в) що проявляє певний рівень противірусної активності і може бути використана у фармацевтичній промисловості для розробки протигрипозних препаратів.

Грип є найбільш масовою інфекцією серед тих, що представляють значну соціально економічну проблему в міжнародному масштабі. Найважливішими його характеристиками є епідемічна природа та висока смертність, особливо в умовах пандемії. Незважаючи на успіхи, досягнуті в області хіміотерапії та вакцинопрофілактики грипу, він залишається важкоконтрольованою інфекцією внаслідок високої генетичної мінливості і ускладнень різної етіології після гострої стадії хвороби, які часто призводять до летального результату. Нові штами вірусів грипу, які постійно з'являються і циркулюють в людській популяції, є небезпечними патогенами людини. Сьогодні протокол лікування грипу, рекомендований ВООЗ, містить препарати двох груп: перші - похідні адамантанового ряду (амантадин, ремантадин), які є блокаторами М2- каналів і ефективні у відношенні тільки вірусів грипу А. До другої групи препаратів, ефективних у відношенні вірусів грипу А і В, відносять інгібітори нейрамінідазк (занамівір, озельтамівір) (див. М/НО (2010 Рергиагу) МУНО аСцідеїйпев ог РНаптасоіодісаї!

Мападетепі ої Рападетіс (НІМІ) 2009 Іпйцепла ап ооїШек ІпбПепла Мігпизе5. ОВІ: пОр/Лимли лупо,Іпу/свг/гезоигсев/рибріїсатопв/вміпейиш/пІп!І иве апії-мігаїзє20090820/еп/Іпдех. піті|.

На жаль, переважна більшість людських ізолятів вірусів грипу швидко набувають стійкості до дії обох груп протигрипозних препаратів - ремантадину, озельтамівіру (див. Вгідні В.А., ЗНау 0.,

Зпи В., Сох М.У., Кіїтом А.І. Адатапіапе гезізіапсе атопа іпїшепла А могизез ізоіїаїєд вапу дигіпд

Ше 2005-2006 іпїшепла зеазоп іп Ше Опаїєйд біаіез 3. Ат. Мед. Ав5ос. 2006. Мої. 295, М 8. Р. 891- 894. НОрз//дої.ога/10.1001/ата.295.8.00660020; Сурагемха ЇМ. Наудеп Б... М2 апа пешатіпідазе іппірпогв: апі-іпПЯшепга асіїмпу, тесНапівіт5 ої гевібїапсе апа сіїпіса! епесіїмепев5.

Іп: Каужшаока У, єайог. ІпїЯШепла мігоіоду: ситепі (орісз. Мутопанат, Опіпед Кіпддот: Саївіег

Рге55; 2006. Р. 169-202.

У 2013 році були оприлюднені результати, які свідчили про те, що використання інгібіторів нейрамінідази для лікування пацієнта, інфікованого стійким до препарату штамом грипу Н7МО, сприяло розмноженню та розповсюдженню саме стійкого штаму (Меп Н.-І.., МеКітт-Вгезснкіп у).

Ко) Г., Споу К.-Т., Мопд 0. 0. М., Снецпа Р. Р. Н., 7пои У., Ма І. Н., 7пи Н., МУербу В. у., Сцап У.,

М/ерзіег В. С., Реїгіза 9. 5. М. А Вевівіапсе о Мешгатіпідазе Іппірйоге Сопієїтед Бу ап Н2г92К

Мшаїйоп іп а Нитап Іпшепга Міги5 Н7МО Ізоїаїе Сап Ве МазкКеа бу а Міхеа В/К Міга! Роршіайоп. тВіо, 2013; 4 (4): - е00396-13. - Рибріївней оопіпе 2013 шу 16 Ассеб55 тод: пер//тбріо.азт.Ога/сопієпі/4/4/е00396-13.5НопП1.

Аміноалкансульфокислоти є важливим в прикладному відношенні класом М-,5-вмісних органічних сполук, інтерес до яких зумовлений їхніми специфічними фізико-хімічними властивостями (зокрема, значення рКа зазначених кислот знаходяться в фізіологічному інтервалі рН) (див. Хома Р.Е., Осадчий Л.Т., Длубовский Р.М. Аминометансульфокислота и ее

М-производнье -компонентьї буферньїх растворов Н. Гуда. Вісник ОНУ. Хімія. 2015. Т. 20, Мо 3.

С. 66-75) і широким спектром біологічної активності Відомо, що у М- похідних (амінометансульфокислоти) АМ5БА виявлена протипухлинна та опротивірусна дія (див.

МеєїаКапіап І.О, Напипуд М.Н. а-АтіпоаіКапезиМопіс Асідб. У. Огу. Спет. 1959. МоІ24,М 12.Р. 1943-1948).

М-похідні АМ5А, їх солі - біологічно активні сполуки, що проявляють антиміотичні, цитостатичні, бактерицидні властивості та можуть бути використані як бактерицидні і інсектицидні препарати (див. Стуагпом Р.6І., Каїаема О.М., Маштома О.Е., Мивіп В.7., АІчопбом

М.А. ВАеасіоп о ої 0 8- ітіпоаісойоїв ом/йН о би о аіохіде о Бупійебвів ої 00С(т)-(2-

НуагохуаіКуіатіпо)рпнепу(ізоргоруї)-теїапезиопіс асідв5. Вив5. У. Сеп. Спет. 2010. Мої. 80, М 4.

Р. 761-764). Деякі о-аміноалкансульфонові кислоти проявляють антистафілококову та

БО антифібрінолітичну активність (див. Еції А. СбоокК Е.5. Ргобіоїїс5. Апіізтарпуіососса! апа апійіргіпоїуїс асіїмціевз ої о-атіпо-апа о-дпапідіпоаіКапези піс асідв. /). Медіс. Снет. 1975. Мої. 18, М 5. Р 502-505. БО1:10.1021//т00239а013; Патент України на корисну модель ОА 127587.

МПК С07С 309/00 Амінометансульфокислота та її М-алкіловані похідні як антистафілакокові агенти. / Еннан А.А., Хома Р.Є., Гридіна Т.Л., Федчук А.С. Мо у 201802703; заявл. 16.03.2018; опубл. 10.08.2018, Бюл. Мо 15.).

Для АМ5А (І) та її М-метил- (ІІ), М-(2-гідрокси)етил- (ПП), М-трет-бутил (ІМ) ії М-бензил (М) похідних (у вигляді натрієвих солей) раніше була оцінена гостра токсичність на щурах-самцях при пероральному і парентеральному шляхах введеннях (див. Хома Р.Е., Зннан А.А., Гридина

Т.Л., Федчук А.С, Лозицкий В.П., Годован В.В., Антоненко П.Б. Синтез, структурьі, физико- химические характеристики и биологическая активность аминометансульфокислот. Матеріали

МІ Національного з'їзду фармацевтів "Фармація ХХІ століття: тенденції та перспективи". Харків, 13-16 вересня 2016. Т. 1. С. 54-55 За результатами дослідження солі сполуки !! при внутрішньочеревному введенні в дозі 2000 мг/кг віднесено до класу практично нетоксичних речовин. Пероральнє застосування Ма солей І - М у дозі 5000 мг/кг не викликало загибелі тварин, тобто досліджувані сполуки при цьому шляху введення віднесено до практично нетоксичних речовин.

Як референс-препарат до досліджуваної сполуки, протигрипозні властивості якої заявляються, був вибраний етил(ЗЕ, 48, 55)-5-аміно-4-ацетамідо-3-(пентан-З-ілокси)циклогекс- 1-ен-Ікарбоксилат (Озельтамівір, Таміфлю) (див. Державний реєстр лікарських засобів України.

ОВС пирулумлу.а.сот.ца.). Недоліками цієї сполуки є достатньо висока собівартість, багатостадійний синтез, можливі побічні дії в дитячій віковій групі і застосування у віковій групі після 5 років.

Дану сполуку вибрано найближчим аналогом.

Вибір аналога обумовлений загальними ознаками з корисною моделлю, що заявляється, - спільні структурні фрагменти (наявність амінного фрагменту), біологічна дія (протигрипозна активність).

В основі корисної моделі, що заявляється, поставлено задачу розширити спектр сполук, які мають певний рівень протигрипозної активності.

Поставлена задача була вирішена застосуванням ВпАМ5БА, отриманої нами за оригінальним способом (див. Патент України на корисну модель ОА 75340, МПК СО7С 309/00, 309/15 Спосіб одержання М-похідних амінометансульфонової кислоти. Хома Р.Є., Еннан А.А.-А.,

Короєва Л.В., Лаврека О.О., Гельмбольдт В.О. Ме и 201206510; заявл. 29.05.2012; опубл. 26.11.2012, Бюл. Мо 22) (реакції 1, 2) як протигрипозного агенту.

Кк зЗпАМНоЗ(СНоО я М яЗтно но т ТЙ В - 5 5 5 А

Кк

Ї

Кк й З «ЗОЗ -к.:3 ва н | х ра аа о) он

Кк Кк

Зо У (2) де Я - СеН5СН» (М).

Новим у корисній моделі є те, що отримана сполуки (ВпПАМ5А) загальної формули (в) р

ФІ; Й он (в) проявила певний рівень протигрипозної активності, порівняний з референс-препаратом (див. таблицю).

Причинно-наслідковий зв'язок між структурою об'єкта, протигрипозні властивості якої заявляються, та отриманим технічним результатом полягає у наступному: використання практично нетоксичної, відносно дешевої і легко синтезованої (у дві стадії) ВПАМ5А дозволяє отримувати певний рівень протигрипозної активності, порівняний з референс-препаратом озельтамівіром, який на даний час є фармацевтичним протигрипозним препаратом. Синтез

ВпАМ5А здійснювали за оригінальною методикою (див. Патент України на корисну модель ША 75340, МПК СО07С 309/00, 309/15 Спосіб одержання М-похідних амінометансульфонової кислоти. Хома Р.Є., Еннан А.А.-А., Короєва Л.В., Лаврека О0.0О., Гельмбольдт В.О. Мо и 201206510; заявл. 29.05.2012; олубл. 26.11.2012, Бюл. Мо 22).

Приклад 1.

Вплив препаратів на репродукцію вірусів грипу А/Гонконг/1/68 (НЗМ2) вивчали, використовуючи культуру тканини хоріоналантоїсних оболонок (ХАОС) 11-12 добових курячих ембріонів |Доклинические исследования лекарственньїх средств. Методические рекомендации:

Іред. А.В.Стефанові. - К.: Авиценна, 2002. - С.395-420; Мальцева А.И. Репродукция вирусов гриппа в культуре ткани ХАО, прикрепленной к скорлупе / А.И.Мальцева, В.Е.Аграновская,

Я.С.Шварцман // Лаб. Дело. - 1973. - Мо11. - С.689-690), оскільки цю культуру можна вважати найбільш наближеною до рівня цілого організму, яким є курячий ембріон.

Вплив препаратів на репродукцію вірусів грипу досліджували, розчинюючи на першому етапі хімічні сполуки у ДМСО (кінцева концентрація складала 1 95), а потім у глюкозо-желатиновому підтримуючому середовищі. Перед проведенням експериментів перевіряли рН розчинів досліджуваних препаратів і доводили цей показник до фізіологічного значення рН 7,2-7,4. Після доведення рН розчинів до фізіологічного значення визначали протигрипозну активність препаратів.

Вплив препаратів на репродукцію вірусів грипу досліджували, готуючи розведення вірусовмісної рідини на глюкозо-желатиновому середовищі, що містило досліджуваний препарат (дослід), або не містило цей препарат (контроль). Отриманими розведеннями інфікували фрагменти ХАОС, прикріпленими до шкарлупи та розміщеними у лунках полістиролових панелей.

Після термостатування протягом 24 годин при 37 "С в контрольних та дослідних зразках визначали титр інфекційного вірусу.

Титрування вірусу грипу після впливу на вірус досліджуваного препарату проводили на культурі тканини ХАО. Десятикратними розведеннями зразків інфікували фрагменти ХАО, розміщені в лунки полістиролових панелей. Після 48 годин термостатування при 37" визначали наявність вірусу в лунках зі результатами реакції гемаглютинації (РГА).

Розрахунок ТІД5о в експериментах іп міїто проводили за методом Кербера в модифікації

Ашмаріна |Ашмарин И.П. Вьічислениє ЕдДво при малом числе подопьітньїх животньх /

Зо И.П.Ашмарин // Ж. микробиол. - 1959. - Мо 2. - С. 102-108) за формулою: 19ТІДво--Ї -4(5-0,5), де І - початкове розведення у досліді; а- різниця між послідовними 19 розведень; 5- сума пропорцій тест-об'єктів, які дали позитивний результат.

Статистичну значущість антивірусної дії в культурі тканини визначали за допомогою непараметричного критерію знаків (Гублер Е.В., Генкин А.А. Застосування непараметричних критеріїв статистики в медико-біологічних дослідженнях. - Л., 1973.

Отримані результати (табл.1) свідчать, про те, що ВпАМ5А в кінцевій концентрації 10 ммоль/л (що становить 201,25 мкг/мл) статистично значущо пригнічує репродукцію вірусу грипу людини А/Гонконг/1/68 (НЗМ2) на культурі тканини ХАОС на 4,08 ТаТіІДв»о порівняно з контролем.

Референс-препарат (осельтамівір) в кінцевій концентрації 10 ммоль/л (що становить 410 мкг/мл) пригнічував репродукцію вірусу на 4,07 1аТІДво. Тобто, протигрипозна активність

ВпАМ5А на культурі тканини ХАОС аналогічна до дії референс-препарату.

Приклад 2.

Вплив ВпАМ5БА і референс-препарату на репродукцію вірусу грипу А/РА/8/34 (НІМІ) визначали культурі клітин тканини ХАОС аналогічно до Прикладу 1.

По відношенню до вірусу грипу А/РА/8/34 (НІМІ) активність ВпАМ5А була нижчою. Цей препарат пригнічує репродукцію тільки на 1,67 ТОТІД»о у порівнянні з контролем. Тоді як референс-препарат гальмував репродукцію цього штаму вірусу на 4,07 1аТІДво у порівнянні з контролем. Тобто дія досліджуваного препарату була у два рази нижчою за референс- препарат.

Приклад 3.

Вплив препаратів на позаклітинний вірус грипу А/РН/8/34 (НІМІ) визначали наступним чином. Вірусовмісну рідину розводили до 107 на глюкозо-желатиновому середовищі, яке містило (дослід), або не містило (контроль) препарат. Після цього зразки витримували при 4 "С на протязі 20 годин, потім 2 години при 37 "С і в них визначали інфекційний титр, інфікуючи десятикратними розведеннями фрагменти тканини ХАО прикріпленими до шкаралупи та розташованими у полістирольних панелях. Після 48 годин термостатування при 37" визначали титр вірусу в РГА. |Доклинические исследования лекарственньїх средств. бо Методические рекомендации: Іред. А.В.Стефанові. - К.: Авиценна, 2002. - С.395-420; Мальцева

А.М. Репродукция вирусов гриппа в культуре ткани ХАО, прикрепленной к скорлупе /

А.И.Мальцева, В.Е.Аграновская, Я.С.Шварцман // Лаб. Дело. - 1973. - Мо 11. - С.689-690)1.

Отримані результати свідчать, що на даній експериментальній моделі ВпАМ5А проявив незначний вплив на позаклітинний вірус грипу в досліджуваних концентраціях на відміну від референс-препарат, який зовсім не виявляв віруліцидних властивостей, не впливаючи на позаклітинний вірус.

Таблиця

Противірусна активність ВПАМ5А по відношенню до вірусів грипу А/Гонконг/1/68 (НЗМ2) і

А/РНА/В/ЗА (НІМІ) на тканинній культурі ХАОС у порівнянні з референс-препаратом (озельтамівіром)

Молярна маса, АТатіІД»о

МТВ, мольл

ВпАМ5А 201,25 4,08--0,5 1,6750,43 0,6720,3 4,07-0,562 | 40740,5 | -0,1740,3 "АТатІДьо(1) - середній показник пригнічення вірусної репродукції штаму А/Гонконг/1/68 (НЗМ2); 7" А1Т9ТІДьо(2) - середній показник пригнічення вірусної репродукції штаму А/РА/8/34 (НІМІ); ""А1Т9ТІДво(3) - середній показник впливу на позаклітинний вірус А/Р Н/8/34 (НІМІ).

Claims (1)

1. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ М-Бензиламінометансульфокислота формули: / (в) ле Її / он (в) як протигрипозний агент.