UA127311C2 - Нуклеїнова кислота, що кодує резистентність sm1 до оранжевої злакової галиці, і спосіб її застосування - Google Patents

Abstract

Винахід стосується нуклеїнових кислот, які кодують білки, пов'язані із резистентністю локусу Sm1 в пшениці, і застосування таких нуклеїнових кислот, зокрема для забезпечення або покращення резистентності до оранжевої злакової галиці (OWBM) в рослині.

Description

ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ:

Економічна значущість оранжевої злакової галиці.

Оранжева злакова галиця (ОМУВМ; Зйодіріовзів тозеПапа Сепіп) - це комаха, яка наносить значну економічну шкоду як м'якій (Тийїсит аевзіїмит), так і твердій пшениці (Тийїсит дит) в усіх основних зонах помірного клімату в світі, включаючи Північну Америку, Канаду, Європу та

Азію (Наїтіз вї аї, 2003). Крім м'якої пшениці Т. аєвіїмит, ОМ/ВМ демонструє відкладання яєць та виживання на поколіннях шістнадцяти інших видів Тийїсит (М/ізе еї аї, 2001), а також на житі, ячмені, і на певній кількості диких трав (7пепд, 1965). Шкода, як спричиняється личинками

ОМУВМ, виявляється у значних втратах врожаю через опадання квіток, деформацію зерна і зменшення питомої ваги; зерно також стає більш вразливим до грибкових інфекцій (ОакКієу, 1994) і зазнає зниження якості через зниження числа падіння Хагберга (МіПег апа Наїюп, 1960).

В Сполученому Королівстві втрати врожаю перевищили 30 мільйонів у 1993 (ОакКієу, 1994) і

Яб0 мільйонів у 2004, незважаючи на оприскування більше 500,000 гектарів пшениці інсектицидами (Оакієу еї аї, 2005). СнамаїІє єї а! (2015) продемонстрували, що взаємозв'язок між врожайністю та кількістю личинок є логарифмічним, що дозволяє припустити, що зниження врожаю було спричинено або ушкодженнями, спричиненими молодими личинками, що помирають на перших фазах розвитку, або активацією реакцій резистентності в рослині.

Життєвий цикл ОМ/ВМ (Апоп, 2016)

Личинки ОМ/ВМ перезимовують у грунті у вигляді коконів до руйнування діапаузи (70 днів при температурі менше 10 "С), а потім активовані личинки рухаються вгору на поверхню грунту.

Личинки засинають, як тільки опади зволожують грунт на глибину до 10 мм, а температура грунту піднімається вище 13" С Тривалість стадії лялечки змінюється залежно від температури, але зазвичай триває від 2 до 4 тижнів. Підвищення температури після опадів стимулює виділення дорослих особів лялечок. Незабаром після вилуплення, самки виділяють статевий феромон, який притягує самців, ідентифікований як (25, 75) -2,7-нонанділ дибутират (Стів еї а). 2000). Після спарювання на місці виникнення жіноча мошка відлітає в пошуках рослини-хазяїна.

Пшениця вражається ОМУ/ВМ тільки в тому різа, якщо яйцекладка самиць відбувається протягом виходу колосу із флатового листа до цвітіння - приблизно протягом 7 днів (ЕїПої апа Мапп, 1996).

Самки активні в сутінках, віддаючи перевагу теплим, спокійним, вологим вечорам, але вони живуть лише від З до 7 днів. Яйця відкладають окремо або невеликими групами (зазвичай від 1 до 6 яєць) в ямках, але самки, як правило, відкладають яйця там, де інші вже відклали яйце. У колосі до цвітіння відкладають у дев'ять разів більше яєць, ніж у колосі після цвітіння (Оіпа апа

Їатр, 1999), оскільки жіноча мошка притягується до летких сполук, що виділяються з колосу до цвітіння (ВіїКеї єї а. 2004). Яйця вилуплюються через 4-7 днів, личинки вповзають у квіточки і харчуються на поверхні зерен в стадії розвитку. Личинки продовжуватимуть годуватися від 2 до

З тижнів, а потім, після сильних дощів, випадають з колосу назад у грунт, утворюючи нові кокони, які можуть залишатися життєздатними в землі протягом 10 років або більше.

Хімічний контроль ОМ/ВМ

Контроль ОМУВМ у посівах пшениці може бути досягнутий шляхом розпилення хлорпірифосу (назва ІОРАС: О,О-диетил о О-3,5,б-трихлорпіридин-2-іл фосфоротиоат), який є фосфорорганічним пестицидом, що діє на нервову систему комах шляхом інгібування ацетилхолін естерази. На жаль, цей інсектицид вбиває тільки дорослу мошку і яйця, але не личинки в квітках пшениці і тому терміни нанесення розпилення є критичними. Розвиток феромонових пасток із використанням (25, 75) -2,7-нонанділ-дибутират (Вгисе єї аї. 2007) дозволяє фермерам легко оцінити рівень зараження мошками в межах своїх полів. Підрахунок галиці може бути використаний як частина оцінки ризику виробника для визначення того, чи слід здійснювати обприскування (пириик.аомааго.сот/мр-сопіепі/иріогаз/2014/05/ЛМНеаї-Віоз5от-

Мідаде-ВізкК-Аззез5тепі-СНнап. раї); однак, використання хлорпірифосу зараз заборонене у

Великобританії, починаючи з 1 квітня 2016 року (пір://сегеаів5.анаб.огу.ик/спіогруго5). ЄС також нещодавно знизив максимальний рівень залишків хлорпірифосу на всіх харчових культурах (Регламент Комісії (ЄС) 2016/60).

Біологічний контроль ОМ/ДВМ

Є цілий ряд природних нищівників ОМ/ВМ, але дані щодо їх ефективності обмежені (ЮОсапе еї а)ї, 2013), окрім паразитичної оси Масгодієпез репеїгап5, яка відіграє важливу роль у зниженні інвазій ОМУВМ у Західній Канаді (Огген єї а! 2009).

Механізми резистентності рослин до комах-шкідників

У рослинах було виявлено багато різних механізмів підвищення резистентності до комахоїдів (Маг еї аї, 2012), але вони, як правило, поділяються на три категорії:

1) Толерантність - полігенна ознака, яка дозволяє рослині витримувати або відновлюватися від пошкодження комахами, без негативного впливу на ріст або виживання комахи 2) Антиксеноз - непереважна реакція комах на резистентну рослину, викликану морфологією рослин (наприклад, трихоми) або хімічними факторами, які негативно впливають на поведінку комах, що часто призводить до уповільненого прийняття або прямої відмови. 3) Антибіоз (90 95 всіх описаних випадків резистентності комах) - резистентна рослина негативно впливає на життєвий цикл комахи через ступінь її виживання, розвитку або плодючості.

Багато випадків резистентності до комах за локусом кількісних ознак були генетично відображені в різних видах рослинних культур (Зтійй апа Сіетепі, 2012), але до теперішнього часу успішно клоновані лише кілька основних генів. До них відносяться: Мі-1.2 з томатів (Ноз5і еї а), 1998), Врни14 з рису (би еї аї, 2009) і Маї з дині (Оодітопі єї аїЇ. 2014), всі з яких були ідентифіковані як білки із сайтом зв'язування нуклеотидів і регіоном збагачених лейцином повторень (СС-МВ5-І ВВ), також відомі як СМІ. або не -ТІВ МВ5-І ВЕ (Меуєгз вї аї, 1999).

Генетична резистентність до ОМ/ВМ

Антиксеноз:

Для самиць злакової галиці існує принаймні три пункти поведінкової послідовності, що ведуть до яйцекладки, і які підлягають стримуванню: 1) локалізація і посадка на рослині, 2) прийняття рослини і ініціювання зондування і 3) остаточне ініціювання яйцекладки (СпПагаїагі єї аі, 2011). Явище стримування було продемонстровано Ламбом та ін. (2001, 2002, 2003), але його мультигенна природа та вплив на навколишнє середовище ускладнюють включення цього типу до програм селекції (Ссіагаїагі єї аІ. 2009а). Вважається, що самиці галиці використовують дрібномасштабні характеристики та поверхневі хімічні речовини, включаючи летючі речовини, для відбору місць яйцекладки на колосся пшениці (С1агаїаг!і еї аІ. 2011). Летючі сполуки, які вироблені стримуючими генотипами, принаймні на менш бажаних стадіях росту (наприклад, після-цвітіння), зменшують яйцекладки на переважних генотипах і можуть викликати у самиць самостійне відкладання яєць на потенційних ділянках закладання личинок (І атб еї аї. аї, 2011).

Не існує відомих морфологічних ознак, що враховують переваги для яйцекладки, крім невеликого ефекту відстані між колосками (Сіагаїагі єї аІ. 20095).

Антибіоз:

Пшениця захищає себе від личинок принаймні двома шляхами, і обидва з них пов'язані з підвищеним виробництвом фенольних кислот у оболонці насіння, що розвивається (біпод еї аї, 2000): 1) Місце для харчування підходить для личинок лише на ранній стадії розвитку насіння (біпд апа Гатр, 1999). Через десять днів після цвітіння все насіння стає антибіотиком щодо знов вилуплених личинок. Отже, личинки пшеничної галиці живляться сенсибілізованими молодими насінинами протягом 10-12 днів, починаючи з того часу, коли відбувається запилення (Оіпа апа

Ї атб, 1999). 2) Деякі генотипи пшениці виявляють гіперчутливу реакцію на поверхні насіння, яка вбиває личинок, що живляться (Гать єї аі. 2000), залишаючи так звані "пробки для рани". Ця гіперчутлива реакція швидко індукується живленням личинками (Оіпуд еї аїЇ. 2000) ї знижує виживання лічинок першого віку на 99595 (їатр еї а). 2000). МеКепгіє еї аї (2002) продемонстрували, що таку гіперчутливу відповідь контролював єдиним, частково домінуючий геном, який автори назвали бт1. Одним з прикладів, опублікованих Віаке та співавторами (2011), було визначено локус кількісних ознак (О5т.тві-1А) в сорті ярової пшениці Веєдег, що знизило інвазію ОМ/ВМ на 42 95 у ближній ізогенній лінії з локусами кількісних ознак і без них.

Локуси стійкості до антибіотиків ті:

Гать еї а! (2015) показали, що експресія 5ті-локусу може змінюватися в залежності від сортів пшениці, і автори вважають, що це може бути пов'язано зі швидкістю продукування та/лабо типами фенольних кислот, що утворюються на поверхні насіння після індукування резистентності (Оіпд єї аї. 2000). Її ать єї а! (2015) також відзначили, що успадкування 5ті1 не залежить від інших механізмів резистентності, наприклад, стримування яйцекладки.

Томас та співавтори (2005) нанесли локус 5т1 на коротке плече хромосоми 2В у пшениці і розробили пов'язаний, домінантний 5САНМаркер (М/МІ) для використання при відборі із застосуванням маркерів (МА5). Зовсім недавно Кавзза евї а! (2016) уточнили розташування бті- локусу і виявили, що ця геномна область у пшениці інвертована в порівнянні із геномами рису та Вгаспуродійт. Вони також припускали, що 5т1і може бути традиційно-резистентним геном стійкості до типу СО-МВ5-І ВЕ, але вони були лише здатні ідентифікувати резистентність одного з генів-кандидатів типу МВ-АВС у В. адівїаснуоп, і жоден не був знайдений на синтанічній ділянці бо в рисі. Казза єї а! (2016) також визначили два ОНП-маркери (Култ707 і Култб93), які могли б бути використані для прогнозування присутності 5т!і локусу в широкому діапазоні сортів пшениці, що свідчить про єдине походження для ті; проте ці маркери не були на 100 95 діагностичними.

Відтак, існує термінова потреба ідентифікувати досконалі маркери для 5т!1і через клонування та визначення послідовності локусу.

КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ

Фігура 1: представлення ВСАТ і ВСА2 показують відносне положення функціональних доменів, ідентифікованих за допомогою ІпіегтРгозсап: ((1) Суперспіраль; (2) МВ5-АВС; (3) І ВВ; (4) МАМ; (5) рКіназа; (6) РарО- подібний (також зветься домен основного білку сперми (М5Р)).

Фігура 2. Фізичне вирівнювання між скафолдами ВАС 715009 і ІМса5О М/сА:

М/а5СМУСАМО2 285 скафолд 14096 і ІМс5СМСАМО2 285 скафолд11627. ВОАС відноситься до гомологів генів ВСАА у сорті Спіпезе Зргіпу, анотованих у ВАС 715009.

Фігура 3. Скріншот з пристрою для інтегративного перегляду геноміки (ІМС), що показує вирівнювання геномної (д9ДНК-5ед) і транскриптомної (мРНК-зед) Шитіпа, читається в області клону ВАС 715009, що містить ВСОА 1.

ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

Заявник ідентифікував генетичний детермінізм, який управляє резистентністю ОМУВМ, і пропонує різні засоби для поліпшення або надання резистентності до ОМУВМ у рослинах.

Зокрема, заявник пропонує нуклеїнову кислоту, що кодує білок, пов'язаний з резистентністю локусу 5т!1 у пшениці, а також застосування цих нуклеїнових кислот.

Винахід також відноситься до конструктів, які можуть бути використані в якості трансгенних для отримання трансгенних рослин, які мають поліпшувати або надавати резистентності по відношенню до ізогенних рослин, які не містять зазначений трансген. Винахід відноситься до трансгенних рослин, що містять такі конструкти, і до способу отримання таких рослин.

Зрештою, також розкриті маркери способи інтрогресування локусу резистентності 5ті і спосіб ідентифікації цього локусу в рослинах.

В контексті цього винаходу рослина означає однодольну рослину, переважно зернову, зокрема з видів Тийїсит (пшениця), кукурудзи, рису, ячменю, сорго, проса, вівса, жита.

Пшениця є переважним зерновим відповідно до даного винаходу.

Відповідно до даного опису, дві рослини називаються "ізогенними" по відношенню до трансгену, якщо вони відрізняються в дуже незначній кількості локусів (менше 20, більш переважно менш ніж 10), і якщо одна несе трансген, а інша ні.

В одному з варіантів втілення винаходу представлена нуклеїнова кислота, що кодує білок, який забезпечує резистентність до оранжевої галиці пшениці, причому нуклеїнова кислота включає, принаймні, одну з групи, що складається з: а) Група 1: і. Нуклеїнова кислота, що включає послідовність 5ЕО ІЮО МО: 4 або 5, або і. Нуклеїнова кислота, що кодує амінокислотну послідовність, що включає послідовність

ЗЕО ІЮО МО: 6, або ії. Нуклеїнова кислота, що кодує амінокислотну послідовність, яка включає принаймні один мотив СС, один мотив МВ5-АНС і один мотив ВА, і де послідовність мотиву ВА має принаймні 82 95 ідентичності з фрагментом нуклеїнової кислоти, як зображено в послідовності

ЗЕО І МО: 8, або їм. Фрагмент будь-якої з нуклеїнових кислот і), ії) або ії) або м) фрагмент нуклеїнової кислоти з Б) ім, як зображено в послідовності ФЕО ІЮ МО: 8;

Б) Група 2: і. Нуклеїнова кислота, що включає послідовність 5ЕО ІЮО МО: 1 або 2, або і. Нуклеїнова кислота, що кодує амінокислотну послідовність, що включає послідовність

ЗЕО ІЮО МО: 3, або ії. Нуклеїнова кислота, що кодує амінокислотну послідовність, яка включає принаймні один мотив СС, один мотив МВ5-АНС і один мотив ВА, і де послідовність мотиву ВА має принаймні 78 95 ідентичності з фрагментом нуклеїнової кислоти, як зображено в послідовності

ЗЕО ІЮО МО: 7, або їм. Фрагмент будь-якої з нуклеїнових кислот і), ії) або іїї) або м) фрагмент нуклеїнової кислоти з а) ім, як зображено в послідовності ФЕО ІЮ МО: 7.

Нуклеїнові кислоти, що кодують аналог генів резистентності ВСА 1 їі ВОА 2, цілком корелюють з резистентністю ОМ/ВМ у рослинах і, більш конкретно, в пшениці. Кожна нуклеїнова кислота може бути використана окремо або в комбінації для поліпшення або надання резистентності рослині.

Як розкрито в цьому документі, послідовність БЕО ІЮО МО: З забезпечує білок ВСАТ пшениці, послідовність 5ЕО ІЮ МО: 1 забезпечує кодування геномної послідовності для ВОА 1, а послідовність ФЕО ІЮ МО: 2 забезпечує кодуючу послідовність пшениці (з розщепленої РНК або

КДНК), що є кодуючою для ВОА 1.

Аналогічним чином, послідовність 5ЕС І МО: б забезпечує білок пшениці ВИаА 2, послідовність 5ЕО ІЮ МО: 4 забезпечує геномну послідовність пшениці, що кодує НОСА 2, а послідовність ФЕО ІЮ МО: 5 забезпечує послідовність кодування пшениці, що є кодуючою для

ВО.

Винахід також стосується білка, кодованого нуклеїновою кислотою згідно винаходу, що включає групу 1 та / або групу 2, як визначено вище. У кращому варіанті здійснення винахід відноситься до послідовностей 5ЕО ІЮО МО: Зі 5ЕО ІЮО МО: 6.

Обидві білки ВСА складаються з доменів із СС (суперспіраль), нуклеотидно-зв'язуючими сайтами (МВ5-АНС) і із збагачених лейцином повторами (АР), а також із змінними амінокінцевими та карбоксикінцевими доменами (5Зекнумаїеї аї, 2015). Фігура 1 показує відносне розташування цих різних доменів на білках ВСАА 1 і ВОА 2.

Цікаво, що білок ВСА 2 також включає домен МАМ, домен р-кіназа і домен, подібний до

Радіо, який може бути введений в захисні системи рослин.

Різні ВСА характеризуються повногеномною ідентифікацією та генетичним картируванням.

Сотні ВВ5, що містять МВ5-І ВЕ, були ідентифіковані в різних рослинах, таких як Агарідорзвів, ячмінь, рис, кукурудза і сорго.

Для характеристики цих білків доступні багато різних пакетів програмного статку, що можуть прогнозувати положення різних мотивів (тобто СС, МВ, І ВЕ і кіназного домену) в поліпептиді, такі як, але не виключно, ІпіегРгтобсап (пере: // ммлу. ері.ас.иК/Іпіегрго/звагсп/вед-зеагсі), МЕМЕ (тете-в5ийе-.ог9, Вайеу та ЕІКап (1994)) або ріат 5сап.рі (БШу/ МАТКА). Загальне програмне забезпечення, що використовується для ідентифікації домену ВСАА та мотиву, також перераховані в 5еКпумаїеї аї, (2015).

Більш конкретно, ЇАВ- мотив НОСА 1 послідовності ЕС ІО МО: З відповідає фрагменту, визначеному положенням амінокислоти 599 по відношенню до положення амінокислоти 989, в той час як послідовність 5ЕО ІЮО МО: З включає 1435 амінокислот.

Зо ІЇАА- мотив КОСА 2 послідовності 5ЕО 10 МО: б відповідає фрагменту, визначеному положенням амінокислоти 1310 по відношенню до положення амінокислоти 1615 в той час як послідовність 5ЕО ІО МО: 6 включає 2303 амінокислоти.

Винахід також охоплює варіанти послідовностей нуклеїнової кислоти, що кодують варіантні білки ВОСА 1 або ВСА 2, що мають одну або більше делецій/ додавань або одне або більше заміщень порівняно з відповідною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: З або послідовністю 5ЕО ІО МО: 6, при збереженні функцій поліпшення або надання резистентності ОМУВМ. Варіантний білок ВА 1 буде містити принаймні один мотив СС, один МВ5-АНС і один мі ВВ, які кодуються нуклеїнової кислотою, що має принаймні 78, 79, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 або 99 95 ідентичності з послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 7.

Варіантний білок ВОСА 2 включатиме принаймні один мотив СС, один МВ5-АВС і один І ВВ, які кодують нуклеїновою кислотою із принаймні 82, 83, 84, 85, 90, 95, 96, 97, 98 або 99 95 ідентичності із послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 8. Варіантний білок НОСА 2 додатково включає домен кіназа.

Варіантна нуклеїнова кислота призначена для позначення природних варіантів, визначених в різних сортах, або ортологічних послідовностей, ідентифікованих в різних культурах. Варіанти також можуть відповідати модифікаціям, введеним мутагенезом в послідовність нуклеїнової кислоти. Такі модифікації можуть бути виконані рандомно або в певних сайтах. Для досягнення таких модифікацій відомі різні способи. Один із способів - на основі рандомного мутагенезу, наприклад, ТІ ТІМ (Ті еї а), 2003), перестановка ДНК (бієттег, 1994) або прицільна модифікація послідовності із застосуванням техніки розриву подвійних зв'язків, зокрема, але не виключно, ТАГЕМ5 (М/О2011072246) або СВІ5РЕ саз59 (М/О2013181440).

Варіантна нуклеїнова кислота може кодувати варіантний білок, якщо модифікація нуклеїнової кислоти утворює новий кодон, що веде до нової амінокислоти. Потім можливо виконувати скринінг модифікації, що веде до білку із зміненою конформацією, що сприяє більш ефективність патогенній резистентності.

Переважно із застосуванням таких засобів редагування геномів очікують генерування мутантів шляхом досягнення повних модифікацій доменів, наприклад, способом "заміни доменів", для подальшого покращення функції резистентності.

Послідовності нуклеїнових кислот можливо ідентифікувати за базами даних, шляхом 60 застосування програми ВІ А5ЗТМ (зокрема, програми ВІ АТМ 2.2.30; Аве єї аї, 1997; АйвепиЇ еї аі, 2005), переважно до послідовності 5ЕО ІО МО: 1, 2, 4 або із застосуванням наступних параметрів алгоритму:

Очікуваний поріг: 10

Довжина сегмента: 11

Максимальні спів падіння в діапазоні запиту: 0

Показник делеції: Існування 5, Існування 2.

Відсутні фільтри для областей низької складності

Нижче викладені фрагменти нуклеїнових кислот. Нуклеїнові кислоти, що є фрагментами згідно винаходу, включають принаймні 20, 50, 100, 200, 300, 500 - 1,000 рр нуклеїнових кислот згідно винаходу.

Нуклеїнову кислоту можна застосовувати в конструкції під операційно зв'язаним гетерологічним промотором, що також є аспектом згідно даного винаходу.

При застосуванні в даному винаході гетерологічний промотор - це промотор, який не походить від того ж виду, від якого походить нуклеїнова кислота, або промотор походить з того ж виду, з якого нуклеїнова кислота, однак, його модифіковано для одержання послідовності, відмінної від нативної.

Функціонально пов'язані засоби - це функціональний зв'язок між регуляторним елементом (промотором) і нуклегїновою кислотою, що дозволяє експресію нуклеїнової кислоти. Обидва елементи можуть бути відокремлені за послідовністю, що може підсилювати експресію нуклеїнових кислот - наприклад, інтрони.

В переважному варіанті втілення, в конструкції нуклеїнових кислот згідно винаходу нуклеїнову кислоту клонують нижче гетерологічного промотору, функціонального в клітині рослини.

Промотор, "активний в рослинах" - це промотор, що може стимулювати експресію гену, операційно зв'язаного із ним у клітині рослини.

Для експресії послідовність, яка є кодуючою для ВОА 1 або ВОСА 2, може бути наявна під контролем конститутивного, тканинно-специфічного, регульованого в процесі розвитку, індуцибельного або мейозного промотора.

Хоча деякі промотори можуть мати однаковий патерн регуляції при застосуванні в різних

Зо видах, часто переважним є застосування односім'ядольних промоторів у однодольних та дводольних промоторах дводольних рослин.

В переважному варіанті втілення така конструкт перебуває під контролем конститутивного промотора.

Приклади конститутивних промоторів, які можна застосовувати для експресії, включають промотор 355 або 195 (Кау евї аї, 1987), промотор актина рису (МеЕїЇгоу еї аї, 1990), промотор

РСАМ (Оерідпу- Тіз єї аї, 1992), промотор СУММ (Мегдадиег єї а. 1996), убіхітиновий промотор 1 кукурудзи (СПгізіїепзеп апа ОмпаїЇ, 1996), регулятивні послідовності Т-ДНК Адгобасієгійт

ТШштеїасієп5, включаючи маномінсинтазу, нопалінсинтазу, октопінсинтазу.

Більш переважно, промотори, застосовувані згідно винаходу, є тими, що експресовані через розвиток насіння, наприклад, промотор НММУУСі (глютенин з високою молекулярною масою) пшениці (Апдегзоп апа Стеєпе 1989; РоБбегіз евї аї., 1989), ваксі -, цеїн- або бронзові промотори кукурудзи, або промотори, розкриті в 5 20150007360, 05 20120011621, 005 20100306876, 05 20090307795 або 5 20070028327.

Можна застосовувати і інші придатні промотори. Це можуть бути індукований промотор, регульований розвитком промотор або тканинно-специфічний промотор, такий як лист- специфічний промотор, насіннєво-специфічний промотор, ВЕТІ- специфічний промотор тощо.

Численні тканинно-специфічні промотори описані в літературі, будь-який може застосовуватись.

Можна посилатися на промотори, розкриті у О520130024998.

Винахід також включає вектор, що включає конструкт нуклеїнової кислоти згідно винаходу.

Вектор, наприклад, плазмід, може застосовуватись для трансформації клітини-хазяїна.

Конструкт векторів для трансформації клітин-хазяїнів може бути втілена фахівцем з рівня техніки із застосуванням стандартних технологій.

Рішення щодо застосування вектора для трансформації клітини, а також щодо того, яку саме клітину застосовувати, залежить від обраного способу трансформації, а також від обраної клітини-хазяїна.

При застосуванні способу введення "голих" нуклеїнових кислоти вектор може бути мінімальною нуклеїновою кислотою, необхідною для забезпечення бажаного фенотипу, без потреби у додаткових послідовностях.

Можливі вектори включають плазмідні вектори Ті, шаттл-вектори, призначені в основному 60 для максимального виходу максимальної кількості копій, епісомальні вектори із вмістом мінімальних послідовностей, необхідних для однозначної реплікації при здійсненні трансформації, транспозонні вектори, включаючи можливі РНК - форми у генних послідовностях. Обрання векторів та способи їх конструкції загальновідомі фахівцям з рівня техніки, в цілому описані в загальних технічних довідниках (Миїї5 апа РаїІоопа, 1987).

Для інших способів трансформації, які вимагають вектора, обрання відповідного вектору є відносно простим, оскільки обмеження є мінімальними. Очевидними мінімальними ознаками вектора є те, що необхідну нуклеїнову кислоту вводять у відносно інтактному стані. Таким чином, будь-який вектор, що дозволяє одержати рослину із введеною ДНК - послідовністю, має бути прийнятним. Також будь-який вектор, що вводить практично інтактну РНК, яка може бути перетворена на стабільно-збережену ДНК - послідовність, має бути прийнятним.

Для способів трансформації в клітині рослини можна запропонувати способи прямого переносу таких генів, наприклад, пряма мікроінжекція у зародки рослини, вакуумна інфільтрація або електропорація, пряма преципітація за допомогою РЕС;. або бомбардуванням пушкою з часток, покритих плазмідною ДНК.

Переважно трансформувати рослинну клітину бактеріальним штамом, зокрема,

Адгобрасієгішт, зокрема, Аагорасієтішт іШтеїасієпе. Зокрема, можливо застосовувати спосіб, описаний Ізпідає! аї, (1996) для трансформації односім'ядольних.

Однак, переважними є будь-які додатково додані послідовності векторів, що забезпечують резистентність деградації фрагмента нуклеїнової кислоти, що підлягає введенню, що сприяє способу геномної інтеграції або забезпечує засоби для легкого обрання тих клітин або рослин, які фактично трансформовані. Це значно зменшує складнощі в обранні трансгенних рослин, придатних для застосування.

Вектор також може існувати, наприклад, у формі фага, плазміда або косміда. Конструкція таких векторів експресії для трансформації добре відома з рівня техніки, передбачає застосування стандартних технологій. Для прикладу можна зазначити способи, описані затргоок еї аї. (1989).

Для транс формуючих бактерій вектор в цілому визначають як молекулу нуклеїнової кислоти, яка має елементи, що дозволяють підтримувати її в клітині-хазяїні (наприклад, походження реплікації, що працює в бактеріальній клітині-хазяїні).

Зо Винахід також стосується клітини-хазяїна, що містить принаймні конструкт нуклеїнової кислоти, що включає групу 1 і/або групу 2, як описано вище.

Рішення щодо застосування заданої клітини-хазяїна, або яку саме клітину-хазяїна застосовувати, залежить від способу трансформації.

Клітина-хазяїн може являти собою будь-яку прокаріотичну або еукаріотичну клітину. Будь- яка з великого числа доступних і добре відомих клітин-хазяїв може бути використана в практиці даного винаходу. Вибір конкретного хазяїна залежить від ряду факторів, визнаних в даній галузі техніки. До них відносяться, наприклад, сумісність з обраним вектором експресії, біо-безпекою і витратами. Корисні клітини-хазяїн включають такі бактерії, як Е.соїї р. або Адгобасієгійт.

Клітина рослини-хазяїна також може бути використана, зокрема, клітина односім'ядольних рослин, зокрема клітина рослин зернових, вибрана, зокрема, з групи, що складається з кукурудзи, пшениці, ячменю, переважно, пшениці.

Більш конкретно, клітина-хазяїн, використовувана при здійсненні винаходу, це Аагобасієгійт їмтеїасієпв, або Адгобасієетіит гпігодепев, згідно зі способом, описаним Цопцапіп еї а!., (1987).

У конкретному варіанті втілення зазначений конструкт нуклеїнової кислоти стабільно інтегрований в геном зазначеної клітини-хазяїна. Цей варіант здійснення є особливо цікавим для клітин-хазяїв рослини. Стабільна інтеграція всередині геному означає, що касета експресії може бути передана потомству зазначеної клітини-хазяїна після поділу.

Винахід також охоплює трансгенну рослину, що містить принаймні одну клітину, що містить конструкт нуклеїнової кислоти, як визначено вище, переважно стабільно інтегровану в межах свого геному.

Частина такої трансгенної рослини, зокрема плоди, насіння, зерно або пилок, що включає таку клітину або утворюється з такої клітини, також охоплюється цим винаходом.

Слід нагадати, що з однієї трансформованої рослинної клітини можна регенерувати цілу рослину. Таким чином, в подальшому аспекті даний винахід забезпечує трансгенні рослини або їх частини, включаючи касету експресії згідно винаходу. Регенерація може протікати відомими методами.

Насіння, що виростає шляхом запліднення з цієї рослини, також містить цей трансген в їх геномі.

Зазначена рослина або частина рослини згідно з винаходом може бути рослиною або її частиною з різних видів, зокрема, однодольних. Зазначена рослина переважно є зерновою рослиною.

Зазначену рослину переважно вибирають із групи, що складається з кукурудзи, рису, пшениці і ячменю. У переважному варіанті зазначена рослина є пшеницею.

Таким чином, винахід стосується, зокрема, трансгенної пшениці, що містить, принаймні, одну клітину, що включає конструкт нуклеїнової кислоти згідно винаходу, стабільно інтегровану в геномі.

У конкретному варіанті втілення зазначена рослина, зокрема зазначена пшениця, містить множину клітин що включають конструкт нуклеїнової кислоти згідно винаходу, стабільно інтегровану в геномі.. У цьому варіанті втілення, можливо, що деякі клітини зазначеної рослини не містять трансген.

В іншому варіанті втілення згаданий трансген, що включає конструкт нуклеїнової кислоти за винаходом, присутній у всіх клітинах зазначеної рослини, зокрема, в зазначеній пшениці.

В іншому варіанті втілення трансген вводиться в клітини рослин, такі, що тимчасово експресовані, або через генетичний конструкт, не інтегрований в геном. Таким чином, для тимчасової експресії можуть застосовуватись агро-інфільтрація або будь-які інші способи, такі як ін'єкція або розприскування.

Гібридні рослини, отримані схрещуванням рослин згідно винаходу, також утворюють частину винаходу, коли вони містять принаймні одну клітину, що містить касету експресії згідно винаходу.

Будь-яка рослина, як описано вище, може містити один або кілька трансгенів на додаток до касети згідно винаходу. Можна відзначити трансгени, які забезпечують чоловічу стерильність, чоловічу фертильність, резистентність до гербіциду (зокрема, гліфосат, глюфосинат, імідазолінон, сульфонілсечовина, І-фосфінотрицин, триазин, бензонітрил), резистентність до комах (зокрема, трансгени, що кодують токсин Васіїи5 Іигіпдієпвів), толерантність до водного стресу. Ці рослини можуть бути отримані шляхом схрещування зазначених рослин згідно винаходу з іншими рослинами, що містять зазначені трансгени. Альтернативно, рослини можуть бути спільно трансформовані з касетою експресії, що містить кілька різних трансгенів,

Зо включаючи трансген згідно винаходу.

Трансгенні рослини, що включать касету експресії згідно з винаходом, мають підвищену або покращену резистентність до ОМ/ВМ порівняно з контрольними рослинами, що відповідають нетрансгенним рослинам, що не включають зазначену касету експресії.

У цьому винаході резистентність до ОМУВМ вимірюється наступним чином: рослини вирощують в польових умовах і фенотипують на початку літа, як тільки феромонові пастки вказують на наявність мошки. Фенотипування здійснюють шляхом візуального огляду окремих квіток на принаймні 10 колосах з 10 окремих рослин, як правило, через чотири-п'ять тижнів після цвітіння, в молочній фазі. Рослина вважається резистентною, якщо в колосі немає личинок мошки. І навпаки, рослина є чутливою, якщо принаймні одна личинка спостерігається в межах відібраних проб.

Винахід відноситься до різних способів застосування рослин згідно даного винаходу. Більш конкретно, винахід відноситься до способу надання або поліпшення стійкості до ОМ/ВМ в рослині, що передбачає стадії, які включають: а) трансформацію принаймні клітини або тканини рослини вектором, що містить в якості трансгену конструкт нуклеїнової кислоти згідно винаходу. р) культивування клітини (клітин) або рослинної тканини, трансформованих для одержання трансгенної рослини, що включає, принаймні, клітину, яка містить у своєму геномі принаймні зазначений конструкт нуклеїнової кислоти, який відрізняється тим, що зазначена трансгенна рослина має знов набуту або покращену резистентність порівняно з рослиною, що не містить зазначену конструкт нуклеїнової кислоти.

Спосіб ідентифікації (тобто скринінгу, селекції) трансгенної рослини, яка може бути використана в селекційному (тобто селекційно-насінницькому) процесі для отримання рослини з покращеною або наданою резистентністю, яка включає етап ідентифікації в популяції рослин рослини, що містять конструкції нуклеїнових кислот, описані вище, також є частиною винаходу.

Таким чином, таким способом є спосіб іп міо, призначений для ідентифікації у популяції рослин тих, які несуть трансген згідно винаходу.

Процес селекції для отримання рослини з поліпшеною або знов наданою резистентністю виконують відомими в даній області техніки способами, шляхом схрещування, зворотного схрещування і стабілізування рослин, які мають підвищену або знов надану резистентність.

Спосіб ідентифікації рослини з поліпшеною або знову наданою резистентністю, що включає етап ідентифікації в популяції рослин, що містять конструкт нуклеїнової кислоти або трансген, як описано вище, також є частиною винаходу. Покращена або надана резистентність визначається після порівняння з ізогенними рослинами, які не містять конструкт нуклеїнової кислоти або трансген.

Передбачається, що трансгенна рослина з набутою резистентністю означає рослину, яка первісно є чутливою до ОМ/ВМ і являє собою резистентний фенотип після набуття трансгену шляхом трансформації або в процесі селекції. Трансгенна рослина з поліпшеною резистентністю - це рослина, яка первісно має резистентність до ОМУВМ внаслідок присутності принаймні одного стійкого локусу до ОМУВМ, і має більш ефективну резистентність або більш стійку резистентність після формування трансгену шляхом трансформації або в процесі селекції.

У конкретному варіанті селекцію або ідентифікацію здійснюють із використанням маркера, який є специфічним для трансгену. У цьому варіанті здійснення стадії селекції, таким чином, переважно передує стадія, що включає генотипування зазначеної популяції рослин.

У конкретному варіанті втілення стадії селекції передує стадія, що включає екстрагування

РНК з індивідуумів у зазначеній популяції.

У конкретному варіанті втілення стадії селекції передує стадія, що включає екстрагування білків з індивідуумів у зазначеній популяції.

У конкретному варіанті втілення зазначена популяція являє собою потомство, отримане від схрещування трансгенної рослини, причому зазначений трансген включає касету експресії, як описано вище, з лінією рослин, яка не містить зазначений трансген (лінія рослини-реципієнта).

У переважному варіанті втілення способи застосовуються для злаків, зокрема, рису, кукурудзи, пшениці, ячменю. Переважно, якщо зазначена рослина є пшеницею.

Винахід також охоплює маркери, що використовуються для ідентифікації локусу резистентності Зті у рослинах. Локус 5ті призначений позначати хромосомальний регіон, генетично пов'язаний та що містить гени резистентності до ОМУВМ. Більш конкретно, локус 5т!1 має хромосомний інтервал, визначений маркерами ОНП Уа сб9о57 32 і Ехсаїїриг с1787 1301 (Фігура 2). Таблиці 1А і 18 наводять деталі ДНК послідовностей, застосовуваних для розвитку

Зо кодомінантних ОНП і маркерів ПЛР в режимі реального часу відповідно, що були виконані заявником в дуже невеликому генетичному інтервалі 0.067 СМ для застосування у селекції за допомогою маркерів для локусу 5ті.

Використовуваний тут термін "маркер" відноситься до специфічної послідовності ДНК, ідентифікованої в геномі рослини, і яка може бути використана для визначення того, чи має рослина успадкувала певний фенотип або алель, що представляє інтерес, з батьківської рослини.

Маркер може включати кодуючу або некодуючу послідовність. Зокрема, згаданий маркер може бути фрагментом геномної послідовності ФЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІЮО МО: 4, що дозволяє виявити, відповідно, наявність або відсутність нуклеїнової кислоти, що кодує ВИаА 1, або наявність нуклеїнової кислоти, що кодує ВСАА 2 в рослині. Згаданий маркер також може представляти собою фрагмент відповідної кодуючої послідовності 5ЕО І МО: 2 або послідовності 5ХЕО ІЮ МО: 5.

Більш конкретно, маркер, застосовуваний для ідентифікації наявності або відсутності в геномі рослини нуклеїнової кислоти, що кодує НОСА 1, це фрагмент нуклеїнової кислоти, закодований пептидом, визначеним за мотивом І НЕ послідовності зЗЕО ІЮ МО: 3, зазначений фрагмент нуклеїнової кислоти має послідовність, як зображено у послідовності 5ЕО 10 МО: 7

Більш конкретно, маркер, застосовуваний для ідентифікації наявності або відсутності в геномі рослини нуклеїнової кислоти, що кодує ВСАА, це фрагмент нуклеїнової кислоти, закодований пептидом, визначеним за мотивом І НЕ послідовності зЗЕО ІЮ МО: 6, зазначений фрагмент нуклеїнової кислоти має послідовність, як зображено у послідовності 5ЕО ІО МО: 8.

Зокрема, маркери згідно винаходу також можуть застосовуватись як проба для ідентифікації та ізоляції ортологів генів, що кодують ВОЗА 1 і ВСА 2. Ортологи призначені позначати гени, які знаходять у різних видах, що мають спільних попередників, і Є кодуючими для білків, що виконують аналогічну функцію в рослині - в даному випадку, резистентність до ОМ/ВМ.

Більш конкретно, проба для ідентифікації та ізоляції в геномі рослини ортологів ВСА 1 зображена в послідовності 5ЕО ІО МО: 7, а проба для ідентифікації та ізоляції ортологів НОСА 2 зображена в послідовності ФЕО ІО МО: 8.

Для оцінки наявності або відсутності послідовності нуклеїнової кислоти у геномі рослини можуть застосовуватись будь-які способи з рівня техніки... Деякі з прийнятних способів включають, але не виключно, секвенування, гібридизацію, полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР), лігазну ланцюгову реакцію (ЛЛР).

Маркери згідно винаходу також можуть включати один або більше однонуклеотидних поліморфізмів або ОНП, ідентифікованих між двома різними чутливим та резистентними геномами. Також можливо ідентифікувати інерційно-делеційний поліморфізм (ІМОЕГ).

Даний маркер переважно локалізований у локусі 5ті Іосив, що включає і ВСА 1, і ВСА 2 нуклеїнові кислоти, зв'язані маркерами УУа с6957 32 і Ехсаїриг с1787(Фігура 2). Більш переважно, розкрито ОНП в маркерах (ідентифікованих за нуклеотидною послідовністю) для визначення в рослині, чи наявні будь-які рекомбінантні хромосомальні фрагменти, що зберігають Зті-алель, що надає резистентність ОМУВМ. В таблиці 1 наведені ДНК - послідовності як чутливих, так і резистентних алелів в пшениці.

Таблиця 1:

Послідовності маркерів:

А- Маркер, що демонструє однонуклеоїдний поліфоморфізм між резистентними та сенсибілізованими геномами пшениці.

М . . . - |Маркерна послідовність сенсибілізованих послідовність БЕО ІЮ МО: 9 Маркер послідовність БЕО ІЮ МО: 10 Маркер

Ма с6957 32 Ма с6957 32

С,ааспАСАаССААпАСпАААтТССАТттасасаАП| СасасаАСАаССААпАСпАААТТОСАТТТОасСаАЇ

ІСТ СсАААТатасАстТасАТТасатАстТасссо | ЦЧСИ,ТТСАААТтТатасСАСТасАТТСТОСТАСТОаС тса,ассатсатстатстоттодстатса саетсесссаеатсатсотатототтадатса послідовність ЗЕО ІО МО: 11 Маркер послідовність БЕО ІЮ МО: 12 Маркер

САТАТТСАТСААСААСЛАСЛАСТАТАСТСТОС | ЕХСаЇБиг с1787. 1301

САТАТТОАТаААСААСААСААаТтАТАСТИаТас сасСсАдасСсАасааАССАтТаССсАссатастос ССССААСССААСОСАССАТОССАСССТСасс дассаттТАТтата;тосатаАдсІСВССТатсдасСас да,7саттАТтаттатсСатТсАсАСТИатсАаСсас

АдадасссасаССасССАТАСАТОаССЯСТатад ААСАСОСОССОСССССАТАСАТОСОСТСТОСА

СОАСАТаСТОСТАИатТасСАаАдаСАССАИСАТСА ССАСАТОСТОСТАСТОСАСАССАССАССАТС

СССААСАТСТТаатТаАСаАТСААТТАТСААСААТ

АСССААДСАТСТССТаАдасАТА татосАдсстоассАааааСасАТА

ПОСЛІДОВНІСТЬ Ме: 13 Маркер 1 ПОСЛІДОВНІСТЬ Ме: 14 Маркер 1 аТАТОААДААаТАТаААААТАИСАСТТасттТатА!| ТАТСААААИТАТИААААТАаСАСТТасСттТа,атАТ татАаАСсСтТАСаст ТСТААСТАТАСАСТТА | «аТАВАССТАССО,ССТ ПІАЇСТААСТАТАСАСТТАС ,ТАААСАТАССАСАТаИАААТААСАТАССА ТААТАААСАТАССАСАТаАААТААСАТАССА

ПОСЛІДОВНІСТЬ Ме: 15 Маркер 2 ПОСЛІДОВНІСТЬ Ме: 16 Маркер 2

ТавасСААСАаСтТСААатТАССТТТТАТССТТТАСВА | ТАССТТТТАТОСТТСАСАТИАСТОСКСЯ ТОАСОИТо тастеватадоатТСатаААтТалдоІСІСсаТатасА| АТаААТаАаОЯІСТ Са ТасСАССТСАТТАССИТСО

СсСстТСАТТАаСОАаСасатасттадтосвадса їсоатастаатасааАСадАста,атасвАатА

ААСТТаТОСОАСаТАТИСТОСТСАсСаИлдтостос | ТастоСстСАааАТоСТоСТСАТатсАааТттТо тТСАТОТСАСОТТоТІваСОоатоСасСАСИаААА | гТТасоСса,атоСасСАСАААдАд,аСстовасАатоаА ссоса,васАдасА даИТт

М . . . . Маркерна послідовність сенсибілізованих вААСТ 11111111

ПОСЛІДОВНІСТЬ Ме: 17 Маркер З ПОСЛІДОВНІСТЬ Мо: 18 Маркер З

ТастосААСАасСТСААаТтАССТТТТАТССТТТАС | ТАССТТТТАТССТТСсАсАТаСТСОССЯТтавАдааТто дтастесаатадастоатаААтТадастоатасА| АТаДАталастоатасСАССТоАТТАСИаСИаТоаИ

СсСстТСАТТАаСОаАСасатасттоеАсСсаааса сатасттоесасасвАСсаААста,атаСсадат

ААСТТаТаСсОсСАаТтТАТИСТОоСтТСАааАТОСТОС | АТАИСТОСТСАСаАТОСТОСТСАТаТСАСааИТтт тТСАТОТСАСОТ ТотТтваСОоатоСасСАСаИААА | СТТаИЧССатоСасСАСААдААДастосасАатоа сссоСа,асАасА СААИТ АДСТ

ПОСЛІДОВНІСТЬ Ме: 19 Маркер 4 ПОСЛІДОВНІСТЬ Мо: 20 Маркер 4 тТастосААСАасСТСААаТтАССТТТТАТОСТІТАСЄ | ТАССТТТТАТССТТСсАсАТаСТСОССЯТтавАдааТто дтастесаатадастоатаААтТадастоатасА| АТаДАталастоатасСАССТоАТТАСИаСИаТоаИ

СсСстТСАТТАаСОСАСсасатастталдтсаасАаса| сатасттаствсСасАСсаАдАста,ата,асадат

ААСТТаТаСсОСАаТтТАТИСТОСТСАааАТОСТОС | АТАИСТОСТСАСаАТОСТОСТСАТаТСАСааИТтт тТсАТОаТСсАССТТТСоТТаваСсатоСОасСАССОААА | ста,ааоСатоСаСАСААААлаСстоааСАатоСа сссоСа,асАасА СААИТ АДСТ

ПОСЛІДОВНІСТЬ Ме: 21 Маркер 5 ПОСЛІДОВНІСТЬ Мо:22 Маркер 5

ССААдаТтатТАаТАТАСТОТАаСААастТТАТас| ССААХаТатТАатАТАСТСТАССААасСТТТАТОа ,СССААСТТТаСАТатТАаИаТААСТАААААСТає | СаССААСТТТасАТаТтАааИатААСТАААААСТаИа сІпПаААААдса,аттастаАСАсАасСсСтТасцаАТАТТ | асІіДСАААдАдсаттастаАСАаАассСтаасАТА

ССТСаСАСПАААССОАСАТастАааАатСАСТ| ПТОСТСаСАССАААССаАСАТаСТАасАаТСА

АСАТатТатТтаАААТТО СТАСАТатТОаТТаАААТТОа

В- Маркер, що показує наявність або відсутність в геномі рослини (Маркер ПЛР в режимі реального часу в генах ВОА) - - к Амплікон або послідовність тен | пеннеко | пеоемою етно

ПОСЛІДОВНІСТЬ ПОСЛІДОВНІСТЬ | ПОСЛІДОВНІСТЬ ПОйССАССТСАТО

МВ Мо: 23 Мо: 24 Мо:25 СТОСАСТОСАТССАТТОС 8000 Сса,аАдСсассасАс |ААСааАСаАСадА ТасАСТоаАТоС АТТТОСАТТОСТССТСОСС атаАТ ТасАДАТ АТТОа тт

ПОСЛІДОВНІСТЬ | ПОСЛІДОВНІСТЬ | ПОСЛІДОВНІСТЬ ДОССТС А АТСТО

Мв54 Мо: 27 Мо: 28 Мо:29 АТТСАССОССАССАССАС 4000 АСасСтТоСасСАДА| ААСААСОСААТАаС | ТаАдсСа,аааАСа СТСААСССОСТАТТСОСТТ

ААТСТаА ,ассттада дасСА стт

При застосуванні в описі термін "алель" (алелі) означає будь-яку одну або більше альтернативних форм гену в певному локусі. У диплоїді (або амфідиплоїдній клітині організму), алелі заданого гену розташовані у специфічній локації або локусі на хромосомі. Один алель наявний на кожній хромосомі пари гомологічних хромосом.

При посиланні на "рослину" або "рослини" слід розуміти також частини рослин (клітини, тканини або органи, насіннєві стручки, насінини, деякі частини, наприклад, коріння, листя, квіти, пилок, тощо), потомство рослин, які зберігають відмітні характеристики батьків. "Рослина" також стосується лінії, сорту, або рослини категорії еліта.

Винахід стосується способу ідентифікації рослити, резистентної до ОМ/ВМ, що включає локус 5т!1. Спосіб передбачає ідентифікацію резистентної до ОМ/ВМ рослини у порівнянні із рослиною, яка не містить нуклеїнової кислоти згідно винаходу, причому спосіб включає такі стадії: а) Ізоляція геномної послідовності ДНК або нуклеїнової кислоти РНК з рослини, і р) Ідентифікація наявності нуклеїнової кислоти згідно винаходу або наявності резистентних алелів і/або відсутності чутливих алелів маркеру в локусі 5ті.

В переважному варіанті втілення способи застосовують до зернових, зокрема, до рису, кукурудзи, пшениці, ячменю. В переважному випадку рослиною є пшениця.

Наявність або відсутність нуклеїнової кислоти у винаході ідентифікована маркером або фрагментом, одержаним з такої нуклеїнової кислоти. Спосіб може базуватися на ідентифікації наявності або однієї нуклеїнової кислоти, що кодує або ВСА 1, або ВОА 2, або наявності обох нуклеїнових кислот, що кодують СА 1 ВСАА 2 в резистентній рослині. Аналогічним чином, спосіб може базуватися на ідентифікації відсутності таких нуклеїнових кислот у чутливій рослині.

Маркери, що становлять предмет інтересу, у локусі Зті згідно даного винаходу, визначені

Зо ОНП Уа сб957 32 і Ехсаїїриг с1787 (Фігура 2), і вони пов'язані із резистентністю до 5т!1. Вираз "Маркери, зв'язані із резистентністю до 5ті" означає маркери, що демонструють поліморфізм

ДНК між резистентною рослиною та чутливою рослиною, або маркери, що ампліфікують ділянку

ДНК з резистентної рослини, яка відсутня у чутливій рослині. Переважно маркери у локусі 5т1 є маркерами, переліченими в таблиці 1. Більш переважно, маркери, що являють собою предмет дослідження, є ко-домінантними маркерами, зазначеними в Таблиці 1А. Кодомінантні маркери є більш інформативними, оскільки вони можуть визначати гетерозиготні рослини, які успадкували як резистентні, так і чутливі алелі, і є більш точними, оскільки неправильна ампліфікація ПЛР маркерів не може тлумачитися як чутлива, як може бути у випадку домінантних маркерів, таргетованих на резистентний алель.

Для оцінки наявності або відсутності ОНП можна застосовувати будь-який спосіб, відомий з рівня техніки. Деякі прийнятні способи включають, але не виключно, секвенування, гіоридизацію, полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР), лігазну ланцюгову реакцію (ЛЛР), і генотипування шляхом секвенування (ГШС), або їх комбінації.

Фахівцю з рівня техніки доступні різні способи на основі ПЛР. Зокрема, можливо використовувати спосіб ПЛР в режимі реального часту або спосіб КАБ5Р від КВіозсієпсе (со

Група, Тедаіпдіоп, МідаІезех, Сполучене Королівство).

Виконують послідовні раунди ампліфікації ПЛР для ампліфікування таргетованої послідовності (маркер) із застосуванням помічених флуоресценцією праймерів. Особливості випромінюваної флуоресценції використовують для ідентифікації алельної форми або форм (як у випадку із гетерозиготами), наявними в комбінації із вивчених ДНК.

При застосуванні в даному описі під праймером розуміють будь-яку нуклеїнову кислоту, що придатна для ініціювання синтезу зростаючої нуклеїнової кислоти у матрично-залежних процесах, таких як ПЛР. Як правило, праймери є олігонуклеотидами із 10 - ЗО нуклеотидами, але можна застосовувати і довші послідовності Праймери можна використовувати у дволанцюговій формі, хоча одно ланцюгова є переважною. Альтернативно, можна застосовувати проби нуклеїнової кислоти. Проби нуклеїнової кислоти включають будь-які нуклеїнові кислоти із принаймні 30 нуклеотидами, які можуть специфічно гібридизуватися при стандартних жорстких умовах із заданою нуклеїновою кислотою. Стандартні жорсткі умови включають умови для гібридизації, описані, наприклад, у ЗатргоокК єї а/.(1989), що можуть включати: 1) іммобілізацію фрагментів геномної ДНК рослини або бібліотеки ДНК на фільтрі 2) попередню гібридизацію фільтру протягом 1-2 годин при 65 "С у бх 550 5х реагенті Денхардта, 0.5 95 505 (додецилсульфат натрія) і 20 мг/мл денатурованого носія ДНК 3) додавання проби (помічена 4), інкубованої протягом 16 0 24 годин 5) промивання фільтра однократно протягом хвилин при 68 "С у бх 5550, 0.1 95 505 (додецилсульфат натрія) 6) промивання фільтру тричі (двічі протягом 30 хвилин у 30 мл і однократно протягом 10 хвилин у 500 мл) при 68 "С у 2х 550 0.1 95 505 (додецилсульфат натрія).

Зо Винахід також передбачає спосіб інтрогресування резистентності Зті в рослині, який передбачає стадії а) Схрещування першої резистентної рослини, що включає нуклеїнову кислоту згідно винаходу або резистентний алель, як зазначено в таблиці 1, із другою рослиною, який відрізняється тим, що друга рослина не включає нуклеїнову кислоту згідно винаходу або резистентний алель, як зазначено в Таблиці 1 р) Зворотне схрещування потомства зі стадії а) із зазначеною другою рослиною с) Ідентифікація і селекція на стадії БЮ) однієї або більше рослин, що включають нуклеїнову кислоту згідно винаходу або резистентний алель, як вказано в Таблиці 1, пов'язаний із резистентністю ОМ/ВМ.

При застосуванні в даному описі термін "інтрогресія" стосується фрагменту ДНК окремої рослини, який передають другій рослині. Більш конкретно, в межах першої задачі друга рослина є чутливою до ОМ/ВМ рослиною. Інтрогресія дозволяє одержати нову резистентну рослину із чутливої рослини шляхом переміщення від резистентної рослини до чутливої рослини хромосомального фрагменту, що включає нуклеїнову кислоту згідно винаходу. Трансфер зазначеної нуклеїнової кислоти ідентифікують маркерами згідно даного винаходу.

В межах другої задачі зазначена друга рослина є резистентною до ОМ/ВМ завдяки наявності в геномі принаймні одного локусу резистентності, що відрізняється від локусу 5т1. Інтрогресія локусу ті в зазначену другу рослину дозволяє поєднання локусу ті із іншими резистентними до ОМУВМ локусами. Такий процес добре відомий як "пірамідування генів" або "стекінг генів". У випадку генів резистентності стекінг покращує резистентність шляхом надання рослині підвищеної тривалості резистентності у порівнянні із рослиною, що має лише один локус резистентності.

В переважному варіанті втілення способи застосовують до зернових, зокрема, до рису, кукурудзи, пшениці, ячменю. Переважною рослиною пшениця

Винахід також стосується застосування нуклеїнової кислоти згідно винаходу або будь-якого фрагменту зазначеної нуклеїнової кислоти як засобу скринінгу для ідентифікації нової ліганд- пептидної взаємодії із білюом, закодованим нуклеїновою кислотою згідно винаходу.

З рівня техніки добре відомі способи ідентифікації взаємодії ліганд-білок, наприклад, дріжджові двогібридні системи (РієЇїд5 апа 5опа, 1989), або імунопреципітація.

Винахід також включає спосіб модифікації нуклеїнової кислоти згідно винаходу для покращення функції білку, закодованого нуклеїновою кислотою для покращення резистентності

ОМвМ.

Добре відомі способи модифікації геномної ДНК або "редагування геному", наприклад,

ТА ЕМ» (М/О2011072246) або СВІ5БРА Са59 (М/О2013181440).

Даний винахід також пропонує ділянки промоторів генів, що кодують білки, які забезпечують резистентність ОМ/ВМ відповідно до даного винаходу і включають послідовність із принаймні 80 95, переважно принаймні 85 95, білош переважно принаймні 9095, а найпереважніше - принаймні із 9595 ідентичності послідовності до послідовності трьох ділянок промоторів.

Процент ідентичності підраховують будь-якими способами аналізу послідовності, що відомий фахівцю з рівня техніки, зокрема, із використанням алгоритмів, таких як алгоритм Нідлмана-

Вунша. Процент ідентичності підраховують по всій довжині заданої послідовності.

В переважному варіанті втілення послідовність 5ЕО ІО МО: 31 або послідовність ФЕО ІЮ МО: 32, або будь-яка послідовність із принаймні 80 95, переважно принаймні 85 95, більш переважно принаймні 90 95, найпереважніше принаймні 95 95 ідентичності послідовності ФЕО ІЮО МО: 31 або послідовність 5ЕО ІЮ МО: 32 включають ділянку промотора гена, що кодує білок, який надає стійкості до ОМУВМ відповідно до винаходу. В переважному варіанті втілення винаходу послідовності ФЕСО ІЮ МО: 33 - 5ЕО ІЮО МО: 37 або будь-які послідовності із принаймні 80 95, переважно принаймні 85 96, переважніше принаймні 90 96, найпереважніше принаймні 95 95 ідентичності послідовностям 5ЕСО ІО МО: 33 - ІЮ МО: 37 включають ділянку промотора гена, що кодує білок, який надає резистентності ОМ/ВМ відповідно до винаходу.

ПРИКЛАДИ:

Приклад 1. Точне картування геномної ділянки, що включає локус 5ті

А: Точне картування на основі карт генетичних зв'язків:

Зті ген резистентності оранжевій галиці пшениці (ОМ/УВМ) було вперше картовано на коротке плече хромосоми 28 ру Тпотазв еї а! (2005) із застосуванням 558- маркерів, а його локалізоване положення нещодавно було уточнене Казза єї а! (2016). Однак, популяції, що застосовувалися для карт зчеплення, були відносно невеликими, тому роздільна здатність генетичних карт не є дуже високою. Як наслідок, винахідники мали обробити великі популяції Б2

Зо і додаткові ДНК - маркери для насичення ділянки з метою скринінгу нових випадків рекомбінації.

В цілому було розроблено 259 нових ОНП для аналізу рекомбінантних рослин, як описано нижче, для точного картування заданої ділянки та ідентифікації генів в локусі резистентності ті.

У 2011 році 4466 рослин Е2 були одержані шляхом самовідтворення кросів Е1 між сортами озимої пшениці із Великобританії Хі19 (чутливі) і ВКобідив (резистентні до ті). Такі зразки були генотиповані із 8 маркерами ОНП, що були точно розподілені між 12.3 СМ ї 41.3 сМ на генетичній карті хромосоми 2В для ідентифікації рекомбінантів на ділянці. Субпанель з 376 ліній була додатково генотипована із додатковим набором 42 маркерів ОНП для одержання більш детальної генетичної карти ділянки навколо локусу 5ті.

Після двох додаткових раундів самовідтворення рекомбінантних рослин Е2 із добором маркерів загалом 111 гомозиготних рекомбінантів Е4 були згенеровані на ділянці 5т1 в 285.

Такі рекомбінанти Е4 були генотиповані із додатковими 42 маркерами ОНП, як описано вище, фенотиповані протягом літа 2013 на резистентність до ОМ/ВМ в польових умовах.

Фенотипування здійснювали протягом 4-5 тижнів після цвітіння, в молочній фазі (Казза 6ї еї, 2016; БЕїйб5 еї аї, 2009), шляхом візуального інспектування окремих суцвіть на принаймні 10 колосах 10 окремих рослин родини 4. Родини НА із повною відсутністю личинок галиці в колосі були враховані як резистентні; якщо принаймні одна личинка була знайдена, всю родину Е4 вважали чутливою. Рівні враження галицею були високими, а локус 5ті картовано, без будь- яких неясностей, до генетичного інтервалу 0.49 СМ (визначено по 22 рекомбінантах з 4466 рослин Ег).

При дослідженні наявних приватних та публічних геномних ресурсів були ідентифіковані ще 186 ОНП в інтервалі 0.49 СМ або близько до нього. Такі додаткові маркери уможливлюють подальшу дискримінацію 22 рекомбінантних рослин і зниження генетичного інтервалу, що включає 5бт!1, тільки до 0.067 СМ. Подальший аналіз фізичної карти (див. Приклад 1: В) і послідовностей з транскриптомічного експерименту (див. Приклад 3) додає ще 23 додаткові

ОНП до ділянки, яка в цілому забезпечує 259 маркерів, тісно пов'язаних із локусом 5ті.

В: Точне картування на основі фізичних карт:

В якості геномних ресурсів для уможливлення фізичного картування локусу 5ті використовувалися як контиги хромосоми М/С (Те Іпіегпайопа! М/неаї Сепоте Зедиепсіпа

Сопзопішт (М/С) (2014), та і цільні зборки геномів ІМ/с450, Мао МА (доступні з червня 2016 з репозиторію ОНИ МУ,

Права межа інтервалу 5т1 була заякорена на контиг ІМ/С5 285:5245756 (11643 рр) із 21 маркерами ОНП на цьому контизі Три маркери ОНП (наприклад, Ехсаїїриг с1787 1301, зображений в послідовності ФЕО ІЮО МО: 10) підтвердили точковий розрив при рекомбінації на контизі ІММСе 285:5245756. Ліва межа була заякорена на контиг ІМС 285:5191992 (937 рр) єдиним ОНП (наприклад, Ма сб6957 32, зображений в послідовності ФБЕО ІЮ МО: 9).

Після вивільнення геномної послідовності пшениці "М/С50 МуСсА в цілому 93 маркери ОНП були заякорені на бажаній ділянці, на двох скафолдах: МсСеСМУСАМО2 285 скафолд14096 і

М,а5СМУСАМО2 285 С скафолд11627, що мають 675,277 рр і 2,720,717 рр по довжині відповідно. Генетичний порядок 93 маркерів ОНП у біпарентальній картирувальній популяції

Хі19 х Вобрідив відповідав фізичному положенню ОНП у скафолдах "М/С МСА". ОНП-Маркери

МУа сб957 32 і Ехсаїриг с1787 1301 обмежують кордони інтервалу 5ті! (Фігура 2) і визначають ділянку 941,325 рр на геномі "МУСеС М/пА Спіпезе Зрііпд (122,033 Бр на

ІМ/БЗСУУСАМО2 285 скафолд14096 і 819292 рр на ІМа5СМСАМО2 285 скафолд11627;

Фігура 2).

Паралельно, також була піддана скринінгу бібліотека Вепап ВАС, наявна в Центрі геномів рослин ІМАА СМВа (пер'//спгдми оцоизе.пга.т/). Вепап - це резистентний до галиці сорт озимої пшениці із Франції, ідентичний із КобБідиє на локусі 5т1, як визначено генотипуванням обох сортів 21 ОНП, розвинутими в інтервалі, визначеному М/а с6957 32 і Ехсаїїриг с1787 1301.

Бібліотека ВАС була піддана скринінгу чотирма маркерами ОНП, розташованими на контизі 285:5245756, і одним ОНП з кожного з п'яти контигів МУСеС поблизу до 285:5245756 (наприклад, 285:5157057, 285:5163033, 285.5191992, 285.5174837 і 285:5175242).

Був ідентифікований один клон ВАС (715009) довжиною 110 Кор, що включає праву межу локусу 5ті. Анотація цього клону ВАС виявила два гени-аналоги із стійкістю до хвороб: ВСА 1 і

ВОА 2, а також ген кінази багатого на цистеїн рецептора. ПЛР - маркери в режимі реального часу, виділені з послідовності двох генів ВСАА (Таблиця 18), були генотиповані на субпопуляції рекомбінантних рослин з картувальної популяції Хі19 х Вобрідиє, що підтвердили генетичне розташування і інтервалі.

Зо Ген ВОА 1 кодує білок із послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 3, а ген ВОА 2 білок з послідовністю

ЗЕО ІЮО МО: 6. Обидва білка мають мотиви СС, МВ5 і І ВВ класичних генів стійкості до СМІ., як показано на Фігурі 1. Цікаво, що позначення НОСА 2 виявило наявність додаткових доменів, які також можуть бути залучені для захисту рослин (тобто МАМ, р-кіназа і РарО- подібні домени).

Недавні дослідження стверджують, що ці "інтегровані домени" можуть виникати внаслідок злиття між МІ В (нуклеотид-зв'язуючий домен, багатий на лейцинові повтори), і що ці додаткові домени служать "приманками" для ефекторних білків, отриманих з патогенів; це уможливлює розпізнавання патогенезу (Заїтів єї а, 2016).

Аналіз ВІАБТ двох СДНК оБрідизАСА щодо повного набору даних МУСеО МаА ідентифікував регіон у межах ІМ/З5СУУСАМО2 285 скафолд11627 з відсотком ідентичності в межах від 78 до 82 95 для фрагментів розміром більше 700 рр. Більш конкретно, нуклеотиди 1,173 ії 968, що кодують І АВВ- домени ВСАА 1 і СА 2, відповідно, мають два ВІ А5Т- хіти кожного з них в інтервалі 141,193 рр в межах І М/ОЗСМУСАМО2 285 скафолд 11627 (тобто ВСА.СО1 і

ВОА.С52, показані в Фігурі 2). Відсотки ідентичності 77,81 і 77,27 для ВОА 1 і 81,75 і 80,75 для

ВОА 2 дозволяють припустити тандемне дуплікування двох спадкових генів ВаА.

Спостережуваний відсоток ідентичності істотно не відрізнявся від отриманих пізніше за допомогою аналізу ВІ АТ мРНК щодо всіх ІМ/с5С МСА (див. розділ "Диференційна експресія на рекомбінантних рослинах"). Не було виявлено більш високих відсотків ідентичності в геномі, що свідчить про спільне походження між ВОА 1 і ВОА 2 і кластером генів НОСА, ідентифікованих в М/а5СМСАМО2 285 скафолд11627 (тобто ВОСА.С51 і ВОСА.С52, показані на фігурі 2).

Фрагмент ІМУСа5СМУСАМ 02 285 скафолд11627, що залишається в інтервалі 5т!1, був анотований на основі оцінки МАКЕВ, а дані 57 / тАМАвтед використовувалися для перевірки якості анотації. Збережено тільки гени високої довіри (НС), що підтримуються функціональними позначеннями (Опіргої / Зугіз8ргої). 390 рр домену р-кінази ВОА 2 співпадали із процентом ідентичності 96.69 95 із кіназою, розташованою на точці рекомбінації на ІМ/С5СМУСАМ 02 285 скафолд11627. Кодомінантні маркери, перелічені в таблиці ТА, розташовані на домені р-кінази. Збагачений цистеїном рецептор кінази на кінці ВАС був картований зовні інтервалу (Фігура 2).

Процент ідентичності до інших кіназ, наявних у ІММСОСМУСАМ 02 285 скафолд11627, був нижчим 90 95. Такі дані дозволяють припустити спадкову перестановку на цій ділянці у резистентних до галиці лініях, із видаленням приблизно 600 т.н. між першими двома НОСА генами Спіпезе 5ріїпа (тобто, ВША.С51 і ВСА.С52, як показано на Фігурі 2) і цією кіназою.

Слід відзначити, що Каббза єї а! (2016) описують Вгадібд900870 ав а гіпотетичний ген- кандидат для 5т1, проте така генна послідовність ВСА не знайдена у заданому інтервалі, ідентифікованому у даному винаході.

Приклад 2: Секвенування Нобідив і Хі19

Було згенеровано 30 кратне геномне покриття Хі19 і Нобідив. Біоінформаційне картування

ОДНК зчитується до ІМа5СМУСАМО2 285 скафолд14096, мМ/а5СМУСАМ 02 285 скафолд11627, а послідовність ВАС підтверджує значні структурні відмінності на ділянці, що пояснює відсутність рекомбінантності. Як правило, відсутні зчитування ОДНК-5є49 від Хі19, картовані на послідовність ВАС Непап (Фігура 3). Як правило, жодна з ОДНК-5ед не зчитується з обБідиб5, які картовані на частину скафолд11627, локалізовану в інтервалі. Це вказує, що вміст гену у відповідних геномних ділянках чутливих та резистентних рослин дуже дивергентний, що, можливо, викликано локальними хромосомальними перебудовами. Нещодавно були опубліковані аналогічні структурні перебудови між референтними геномними послідовностями сорту Спіпезе Зргіпд і ділянкою, що містить ген резистентності до фузаріозу (ЕНПБІ1) (5спмувїдег єї а, 2016).

Приклад 3: Диференційна експресія на рекомбінантних рослинах

Завдяки основним структурним відмінностям між референсним геномом "Спіпезе Зргіпу і

Вепап в локусі 5т!, наступне дослідження полягало в секвенуванні транскріптоми з колосся пшениці 12 і 14 чутливих рослин, які були піддані рекомбінації дуже близько до локусу 5ті1, а також двох батьківських ліній Хі19 і Воріди5. Задача полягала в збиранні доказів експресії генів- кандидатів, ідентифікованих на ділянці, а також у перевірці наявності нових генів, які були відсутні у референсному геномі, але наявні в локусі ті. 25 обраних рослин, а також батьківські форми, були висіяні в полі, а окремі колоси були відібрані на сухому льоді, із наступною атакою галиці. З цих 25 зразків тканин була екстрагована мРНК, із застосуванням для секвенування спарених кінців із використанням секвенатора Шитіпа Нібед 2500, який був наданий зовнішнім сервісним провайдером: бегмісе Х5. Набори даних ВМА-56д Шитіпа, згенеровані на 25 лініях, були проаналізовані для повторного держання транскриптомної збірки. Ріди ВМА-5ед з кожної

Зо окремої лінії були знов картовані на цих нових транскриптомних збірках, а генна експресія з 12 резистентних ліній була порівняна із експресією 13 чутливих ліній для ідентифікації генів із різною експресією.

Перший скринінг був виконаний із послідовностей із різною експресією, вираженою в присутності 566 генів, які були анотовані із генами комах і були знайдені тільки в зразках чутливих рослин; таким чином, підтвердилося, що зразки колосся пшениці містили личинки галиці в стадії розвитку. Відтак, відсутність експресії генів в зразках резистентних рослин можна інтерпретувати як безпосередній ефект локусу резистентності 5т1.

Серед диференційно-експресованих генів рослин, 6 мали надекспресовані послідовності у резистентних лініях, а 21 були надекспресовані у чутливих лініях. Послідовність 27 зібраних контигів ЕТ використовувалася для аналізу ВІ АТ щодо послідовностей ІММ/С5С МуаА і ВАС для валидізації їх геномного положення. (Таблиця 2). Тільки 6 генів (3 надекспресовані і З недоекспресовані гени), загалом з 27, були картовані на заданому інтервалі (Таблиця 2). Решта контигів мала співпадіння ВІ А5Т із процентним відношенням ідентичності 297 95 по відношенню до ділянок на інших хромосомах пшениці або були більш фізично віддалені на хромосомі 28 (Таблиця 2).

Нижченаведена таблиця 2 демонструє хромосомальну локацію 27 диференційно- експресованих ЕТ, ідентифікованих між резистентними та чутливими рослинами, підданими аналізу РНК-секвенування. Нижче "к" означає надекспресію у резистентних лініях, а "-" означає надекспресію у чутливих лініях. ІМ/С50 М/СЧЯКА показує хіти на 285 для Е5Т1, ідентифіковані

М/С МСА контиги З і 6 ІМ/Я5СМУСАМО2 285 скафолд11627. Е5Т21 (2857) позначає більше 200 Мбайт/с з локусу 5т1. Е5Т22 (ВОА.ХІ19) анотують як білок ВСАА, він має 89 95 ідентичності до ВОА.С5І1 (Фігура 2).

ре рр єв із7 М/С МА ВАС715009

Е5Т2 | ж ЇЇ 77777771 5о11117711111лоояю 11111111

Е5Т4 | ж ЇЇ 77777717171717171717585 1ДЮюЮ7Ю7р7 9895 4 |777с7с7с;2

Е5Т5 | ж ЇЇ 77777777777717717171711750 71771110 ЇЇ

Е5Т7 | - Її БЮщЮКБКруУ/77717776АЄ ЇЇ лот ЇЇ 77777771.

Е5ТВ | - /!/ щ(«77/7/71777704 17771965 |Ї777777с7с2 у

Е5Т9 | - Ї! щЩщ6777177772АС 7 ЇЇ777119996 | щ-::; ГСК

Е5ТЛО | - ЇЇ ющКун/унсюИсггооооло8 111198 Ї|Ї77717сСс211 у

Е5ТЛІ Ї /- ЇЇ 77777771 404 71777711 9996 | 7777с7сИс20

Е5Т2 | /- ЇЇ .р7р7171717лАЄ ЇЇ 7975 2 Щ | щ

Е5ТІЗ | - ЇЇ .ЮКЮр7Юю7ю7ю771777зАЄ7 17111965 |Ї7777СсСс21С у

Е5Т14 | /- ЇЇ 777777771717171717177177047 17717111 9996|Ї1111111171 у

Е5Т5 | -- ! щБ 1 6855 | 8995

Е5Т6 | -(- ЇЇ щЩщ777771720 17975 2 Щ | щ 517 | - ЇЇ БЮБЮКБВ7 1604 11985 2 щЩ | щД

Е5ТІ8 | (- ЇЇ 71777 2В 17779996 | .777СсСс20 5119 | - ЇЇ ЮющЮКУуцу/ноутСслїгзої1лоо 171.

Е5Т2О | /- ЇЇ 77777717171777404 1177711 лоою |у

Е5Т2І | /- ЇЇ ..77.7.7ю7ю7171772в88 |7771717119996 | 77777172.

Е5Т22 | - | воАХИО 725 | 8996 |77777771717с721

Е5Т23 | /- ЇЇ 77171776 1777111 лоб |у

Е5Т24 | /- ЇЇ 77717177 9041 17111198 |Ї111111сСс21 у

Е5Т25 | /- ЇЇ 77171717 4А5 7111986 |Ї11117С7сСсСс2 у

Е5Т26 | /- ЇЇ 77717125 77771 лоб | 77777771 у

Е5Т27 | /- ЇЇ 77.7Ю7ЮЙ7м7 125 | 77 лоб | 77777771

Оскільки резистентність 5т1 була відзначена як частково домінантна (МеКепт?іе евї аї, 2002), наступні аналізи були сфокусовані на 6 надекспресованих генах. Серед цих кандидатів (ЕТ - 6 у Таблиці 2), З гени були розміщені на клоні ВАС(715009). Як очікувалося, ці 2 гени були відсутні у Хі19, і не було можливо картувати будь-які з ридів ХітТ9 АМА-564 до послідовності

ВАС. (Е5Т1 відповідає ВСА 1, а ЕТ З відповідає НОСА 2). І навпаки, не було можливо картувати будь-які З ридів Вобідив ВАМА-секвенування до фрагменту

ІМ/а5СМУСАМ 02 285 скафолду11627, що залишився в діапазоні. Інші три гени картовані із сильними ВГ А5Т хітами до хромосом 501 і585.

Приклад 4: Аналіз маркерів навколо локусу 5ті із застосуванням генетично-різноманітної панелі

Загалом були відібрані, 23,400 лінії серед кросів, сегрегованих для ті із 10 ОНП- маркерами, розподіленими вздовж локусу 5ті для пошуку екстра-рекомбінантів у заданій області Загалом було ідентифіковано 576 гіпотетичних рекомбінантів, які, разом з батьківськими лініями, були також генотиповані із двома маркерами ПЛР в режимі реального часу, виділеними з ВСА 1 їі ВОСА 2 (Таблиця 18) і 46 маркерами, що включають 24 ОНП з діапазону і 22 маркери, у щільно фланкуючій ділянці. Ці результати демонструють, що випадки рекомбінації не були встановлені між двома генами ВОСА, і рекомбінантні рослини не були знайдені на невеликій ділянці 0.067 см, ідентифіковані у біпарентальній картуючій популяції

Хі19 х Робідив. Відсутність рекомбінації на ділянці викликана відсутністю будь-якої гомології послідовності між резистентними та чутливими лініями. Крім того, всі лінії, що несуть два гени

Вобрідих ВСОА, поділяють гаплотип Кобідиє на основі 24 Маркерів у заданому інтервалі, що припускає єдине походження або спільного попередника для резистентного локусу 5т!1.

Серед 576 ліній було виділено суб-панель із 113 різноманітних ліній для аналізу фенотипу.

Така суб-панель містить багато рекомбінантних рослин різного генетичного походження для валідації будь-яких потенційно-ді«агностичних ОНП- маркерів. Всі рекомбінантні рослини та їх батьківські лінії були висіяні та генотиповані влітку 2014. Наявність двох генів ВИА завжди демонструвала те, що є 100 95- діагностичним щодо наявності 5т!1. З цих 24 маркерів в цьому діапазоні 5 були ідентифіковані як корелюючі із наявністю або відсутністю двох ВОА (Таблиця 1А), що робить їх ідеальними для селекції 5ті1-гену із застосуванням маркерів.

Приклад 5: Ідентифікація геномних областей, які мають промоторні мотиви промоторів для генів ВСАА! і ВСА2

Послідовність 715009 ВАС, що містить два гени НОСА, була подана до Т55Р (Прогнозування промоторів рослин (з використанням Недейе Ріапі ОВ, бБойбрету Іпс.)) з використанням алгоритму, реалізованого на сайті м/млу.ойреїту.сот.

Послідовності довільних 3000 рр вгору від сайту початку трансляції (Т55) двох генів, що є предметом розгляду і включають прогнозовані послідовності промоторів, є такими, як викладено в послідовності ХЕО ІЮ МО: 31 для НОАЇ і послідовності ХЕО ІЮ МО: 32 для НОА2. У межах цих 3000 Бр для обох генів були визначені додаткові ділянки прогнозованих промоторів, що включають ТАТА-бокс і сайти зв'язування фактора транскрипції.

Положення прогнозованих послідовностей промоторів у послідовності ФЕО ІО МО: 31 на основі алгоритму Т55Р, є такими:

Положення промотору 285 із ТАТА-бокс в положенні 251;

Положення промотору 1380 із ТАТА-бокс в положенні 1364;

Положення промотору 2609 із ТАТА-бокс на позиції 2591.

Положення прогнозованих послідовностей промоторів у послідовності ФЕО ІО МО: 32 на основі алгоритму Т55Р є наступними:

Положення промотору 942 із ТАТА-бокс в положенні 907;

Положення промотору 2475 із ТАТА-бокс в положенні 2461.

Приклад 6: Функціональне вивчення генів ВСАТ і ВНСА2

Функції генів ВСАТ ії ВСА2 можуть бути перевірені різними способами, добре відомими в даній галузі. Генетична трансформація сенсибілізованих сортів пшениці, які надекспресують

ВОАТ або ВОА?2 під різними промоторами, може бути отримана і перевірена на їх здатність забезпечувати резистентність ОМ/ВМ - резистентність у теплицях або в полі.

Валідація також може бути досягнута шляхом мутагенезу способами, відомими фахівцю в даній області техніки, з, наприклад, обробкою ЕМ5. Валідація включає одержання декількох незалежних мутантів "із втратою резистентності", отриманих від обробки ЕМ5 резистентних сортів пшениці, із подальшою ідентифікацією мутацій в гені-кандидаті; таким чином підтверджується функція резистентності гена. Наприклад, такий метод описаний Регуаппап єї а). (2013), і застосовується для ідентифікації гена стійкості до іржі пшениці 5Г33.

ПОСИЛАННЯ:

Аїїзепи! ЗЕ, Мадаєп ТІ, Зспанег АА, 7Напа у), 7папд 2, МіПег МУ, Гіртап 0) (1997) Сарреа

ВІ АТ апа РБІ-ВІ АТ: а пем/ депегаїйоп ої ргоївіп даїаразе зеагсп ргодгат». Мисівїс Асіа5 Везв. 25: 3389-3402

Аїйївспи! ЗЕ, МооНоп УС, Сей ЕМ, Адагмаїа В, Могадиїї5 А, Ззспанег АА, Ми УК (2005) Ргоївіп даїаразе звагспез ивзіпд сотровзййопанйу адіивіей зиб5ійшіоп таїйісе5. Те РЕВ5 дошгпаї 272: 5101-5109

Апдегзоп ОО, Стеепе ЕС (1989) ТНе сНагасієгігайоп апа сотрагаїме апаїувів ої підн- тоіесшіаг-меїдні дішепіп депе5 їот депотевз А апа В ої пехаріоіїй бгеад м пеаї. Тнеогеїїса! апа

Арріїєйд Сепеїйсз 77: 689-700

Апоп (2016) Огапде м/пеаї ріоз5от тідде. АНОВ Іпіоптайоп 5пеєї Ме 53 Буттег 2016 (пер //сегеа!5.апаб.огу. ик/)

Ваїєу ТІ. апа ЕІКап С (1994) Ріціпд а тіхішге тоавеї! Бу ехргеввіоп тахітігаїйоп 0 аїіз5сомег іп

Біороїутегв. Ргосеєдіпдв ої їпе Іпіегпайопа! Сопіегепсе оп ІпівїЇїдепі Зузієтв ог Моїіесшціаг Віоїоду 2: 28-36

Віжкей МА, Вгисе ТОА, Мапіп ОЇ, тан І Е, ОакКієу /), М/аднатвг І) (2004) Везропзез ої Тетаїе огапде м/пеаї ріоз5от тідде ю мпеаї рапісіє моїацев. доштаї ої Снетіса! Есоіоду 30: 1319-1328

БО ВіаКке МК, соидаага ВМ, М/еамег ОК, Зпептап 90, І аппіпд 5Р, МагошКа У, Хиє О, Мапіп УМ,

Таїреп ГЕ (2011) Ідепійсайоп ої а диапійаїйме ігаї Іосив ог гевівїапсе о Зйоаіріовів тозеїЇапа (Сепіп), Ше огапде упеаї Біоззот тідде, іп зргіпу у/пеаї. Ріапі Вгеєдіпд 130: 25-30

Вгисе ТУ, Ноорег АМ, Ігеіапа ГІ, допез ОТ, Мапіп ДЛ, Зтан ГЕ, ОакКієу У, Маднатз У (2007)

ОемеІортетпі ої а рпеготопе ігар топіогіпд зузієт ог огапде у/пеаї рБіозз5от тідде, Зподіріовів тозеїапа, іп їШе ОК. Резі Мападетепі апа 5сіепсе 63: 49-56

СНнамайе 5, Сепвзівег Е, Зап Мапйіп у Сботе С, Оє Ргопйа М (2015) Ргоїесійп ої м/іпіег мпеаї адаіїпвї огапде м/пеаї ріоз5от тідде, Зйоаіріовіє товзеїПапа (Сьепіп) (Оірієга: Сесідотуїдає): ейісасу ої іпзесіїсідез5 апа сийімаг гезівїапсе. Резі Мападетепі Зсієпсе 71: 783-790

СНгівіепзеп АН, Опаї! РН (1996) Орідийіп рготоїег-базейд месіогїв5 ог підп-Ієме! ехргезвіоп ої 5еіІестаріє апа/ог зстеепабіеМаркер депе5 іп топосоїуієдопоив ріапі5. Ттапздепіс Незеагспи 5: 213-218

Оерідпу-ТНіз 0, Ваупаї М, Азрагп Г, ОеєїІвепу М, агеїЇеї Е (1992) Тне сгисіїегіп депе Татіїу іп тадібн. Ріапі Моїесшіаг Віоіоду 20: 467-479

Оіпду Н, Гать ВУ (1999) Омірозйоп апа Іагма! евзтабіїзптепі ої Зпйодіріозі5 тозеїЇапа (Оірієга:

Сесідотуїідає) оп упеаї аї айегепі агоули 5іаде5. Те Сападіап Епіюотоіодіві 131: 475-481

Оіпа Н, Гать ВУ, Атез М (2000) Іпдисіріе ргодисійіоп ої рпепоїїс асід5 іп мпеаї апа апііріоїіс гезівїапсе (о Зпйоаіріозіз тозеПапа. доштаї ої Снетіса! Есоіоду 26: 969-985

Роапе УР, ОМеп 00, ЕПШой ВН, Напієу 5, Меегв 5 (2013) Бпоадіріовзі5 тозеїЇІапа (Сіепіп), огапде м/пеаї Біозвот тідде (Оірієга: Сесідотуїїдає). Іп "Віоіодіса! сопіго! ргодгаттевз іп Сапада 2001- 2012". Ед5 РО Мазоп 8 ОВ СіШезріє. Спаріег 39, рр 272-276

Родітопі С, Спомеїоп М, Рацдиеї У, Воцаіет А, Вепдаптапе А (2014) Тне Ма Іоси5 епсодев ог а СОС-МВ5-Ї ВЕ. ргоївїп Шаї сопієї5 гезівїапсе о Арпі5 доз5урії іптевіайоп апа А. доз55ур/7- теадіаїеа мігив гезібїапсе. Пе Ріапі доштаї 80: 993-1004

Ви В, 2папд М, Пи В, Ни У, МУеї У, ЗП 2, Не В, 2пи Г, Спеп В, Нап В, Не Са (2009) Ідепійісайноп апа сНнагасієгігайоп ої Ври14, а депе соп'егтіпу гезівтапсе Юю Ббгом/п ріапіпоррег іп гісе. Ргосеєдіпд5 ої Ше Маїйопа! Асадету ої бсіепсе5 ОБА 106: 22163-22168

Бої АН, Мапп І МУ/ (1996) Зивзсерійбіїйу ої гей вргіпд упеаї, Тийісицт аевіїмит І. су. Кагерума, дигіпа Неадіпд апа апіпезіз о датаде ру м/пеаї тідає, Зподіріозів тозеїїапа (Сепіп) (Оірієга:

Сесідотуїідає). Тне Сападіап Епюотоіодівї 128: 367-375

ЕПів ЗА, Вгисе ТА, Зтапй ГЕ, Мапіп ЗА, Зпаре у), Бей М (2009) Іпівдгаїєд тападетепі зігагедієв Тог магієїев юїегапі апа 5ивсеріїріє то мпеаї ріоззот тідде. НОСА рго/|есі герогі Мо. 451.

Нієїд5 5, опа О (1989) А помеї депеїйс зузівет о аеїесі ргоївїп-ргоївіп іпіегасіїопв5. Маїшге 340: 245-246

СІагаїагі АН, Рох 51, тій МАН, Гать В.) (2009а) Оміроівіп аеєїетепсе іп 5ргіпа упеаї,

Тийїсцт аєвіїмит, адаіпвї огапде мпеаї ріозбзот тідде, Зйоаіріовів тозеїІапа: ітріїсайопв ог іппепапсе ої деїеітепсе. Епіотої!одіа Ехрегітепіаїїв5 еї Арріїсаїа 133: 74-83

Сагаїагі АН, Рох 51, тій МАН, Гатр В) (20095) Тне геїайоп5пір беймуеєп тогрпоіодісаї їайв ої Ше 5ргіпд м/пеаї б5ріке апа омірозйіоп Оеївтепсе 0 огапде мпеаї ріоз5от тіаде.

Епютоїодіа Ехрепітепіаї5 еї Арріїсаїа 132: 182-190

Спагаїагі АН, 5тійй МАН, Рох 5. Гать ВУ (2011) Моїанйе сотрошипав їот поп-ргеїеттейд мпеаї 5рікез5 гедисе омірозйіоп Бу Зйоадіріовіз тозеїІапа. Те Сападіап Епіотоіодівї 143: 388-391

Стів В, Співз С, КНнавкКіп С, Кіпд 5, ОМеп 00, КатіпевкКі І А, Гать РА, Веппеїйї А (2000) 5ех рпеготопе ої огапде м/пеаї Біоз5от тідде, Зйоаіріовів тозеїПапа. Магшпміззепзспайеп 87: 450- 454.

Натів МО, 5іцай 9у, Монап М, Маїг 5, Гать В, Вопііївсп О (2003) Стаззев апа даї! тіддев:

Ріапі деїтепзе апа іпзесі адаріайоп. Аппиаї! Немієм ої Епіотоїоду 48: 549-577

Івпіда М, Зайо Н, ОНіа 5, Нієї У, Котагі Т, Китабвнпіго Т (1996) Нідн ейісіепсу ігапвіогтаїйоп ої таї?е (7єа тауз І.) тедіаїтейд Бу Адгобасієтішт Шштеїасієп5. Маїшге Віоїесппоіоду, 14: 745-750

УдЧоцапіп Її, Сцуегспе Р, РатброиКкарап М, Тоцтпеиг С, Сазбзе ОеЇрай РЕ, Тошгпеце / (1987) зЗігисіиге ої Т-ДНК іп ріапів гедепегаїеай їтот гооїв ігапвіоптеай м/йй Адгобасівегцт пігодепе 5ігаїп

Ад4. МоїІесціаг апа Сепега! Сепеїїсв 206: 387-392

Казза МТ, Наав 5, 5спіієрнаке Е, І ем С, Мои ЕМ, Рогпіак С, Ктатег І, Регоміс О, Зпагре

АС, Бобрей РЕ, Косі М, М/ізе ІЇ, ЕРепуйскК Р, Вету 5, біттопав /), Ноцгсаде 0, бЗепейПан Р,

Риспнаїаїв І, Робеп 0, Еогвгівг у, Тпотавз В, Епеді МУ, Огаоп Е, Оацу С, МеСанйпеу СА (2016) А зайшгаїєд ОНП ІппКаде тар ог Ше огапде Біозбзот тідде гезізїтапсе депе ті. ТНеогеїїса! апа

Арріїєйд Сепеїйсз 129: 1507-1517

Кау НВ, Спап, А, баїу М, МеРнНегзоп (1987) Оиріїсайоп ої Самм 355 рготоїег послідовністьв стєаїез а зігопа еппапсег" ог ріапі депев. бсіепсе 236:1299-1302

Гать ВУ, МеКепліє ВІН, М/ізе ІЇ, ВаЖег РБ5, тій МАН (2000) Вевзівіапсе ю 5йоаіріовзів тозеїїапа (Оірієга: Сесідотуїйдає) іп 5ріїпд упеаї (Статіпеає). Те Сападіап Епіотоіодіві 132: 591-605

Гатр ВУ, Зтіїй МАН, М/ізе І, Сіаже Р, Сіаже У (2001) Омірозйоп деїегтепсе їо Зіоадіріовів тозейПапа (Оірієга: Сесідотуїдає): а 5оцгсе ої гевібвіапсе їТог дигит мпеаї (Статіпеає). Те

Сападіап Епіотоіодіві 133: 579-591

Їать ВУ, М/ізе , тій МАН, МеКепліе ВІН, Тпотаз У, ОМепй ОО (2002) Омірозйіоп деїетепсе адаїнві Зйоадіріовіз тозеїІапа (Оіріега: Сесідотуїїдає) іп 5ргіпда мпеаї (Статіпеає). Те 60 Сападіап Епіотоіодіві 134: 85-96

Їатр Ву, Бпанаг Р, тій МАН, МУізе І (2003) Омірозйоп ргеїегепсе апа оїйїврііпд репоптапсе ої а мпєаї тідде Зіподіріовів тозеїІапа (Сепіп) (Оіріега: Сесідотуїіідає) оп деГепадей апа Іез5 деїтепаєй м/Неаї ріапів. Епмігоптепіа! Епютоїоду 32: 414-420

Їатр ВУ, 5тйй МАН, УУізе І, МеКеплгіє ВІН (2015) Невзівіапсе ю мпеаї тідде (Оірієга:

Сесідотуїїдає) іп м/іпієї мйеаї апа Ше огідіп5 ої гевібвіапсе іп 5ргіпд мпеаї (Роасєає). Те

Сападіап Епіотоіодіві 1: 1-10.

МеЕїПоу 0, 2Напа МУ, Сао У, Ми В (1990) Ізоїайоп ої ап ейісієпі асііп рготоїег ог изе іп гісе

Тапеіоптаїйоп. ТнНе Ріапі Сеї! 2: 163-171

МекКеп?ліє ВІН, Ії ать ВУ, А!йпо Т, М/ізе ІЇ, Ваткег Р, ОГеп СО (2002) Іпнепапсе ої гезівтапсе Ю

У еаї тідде, Зйодіріовзі5 тозеїЇапа, іп 5ргіпд м/пеаї. Ріапі Вгеєдіпд 121: 383-388

Меуеєгз ВС, біскептап АМУ, МіснеІтоге ВМУ, бімагатакгізНнпап 5, Зобга! ВМУ, Моипу МО (1999)

Ріапі дізеазе гезібїапсе депе5 епсоде тетрбе!5 ої ап апсієпі апа аімегзе ргоївїп Тату м піп те писіеоїіде-біпаіпд зирепПатіїу. Те Ріапі доштпаї 20: 317-332.

МіПег В5, Наюп Р (1960) Тне датаде о мНеаї Кегпеіє сашзей Бу Те упеаї Біоззот тідає (Зподіріозі5 тозеїІапа). дошгпаї ої бсіеєпсе, оса 4. Адгісиниге 12: 391-398

Миїїв КВ, Раіоопа РЕА (1987) 5ресіїйс зупіпевів ої ДНК іп міїто міа а роїутегазе-саїаІуей сНаїп геасіоп. Меїподз іп Епгутоїоду 155:335-350

ОакКкієу УМ (1994) Огапде мпеаї ріоз5от тідде: а Іпегайшге геміем апа зигуеу ої Ше 1993 ошбгеак. Везеагсі Немієм Мо. 28, НаСА, Натіуп Ноизе, Нідпаоаїге НІЇ, Гопадоп, ОК

ОакКієу УМ, Таїрої С, Оуег С, Зеїї ММ, Егєег УВ5, Апдив МУ, Ваттей ОМ, Еецепвїт с, З5паре /),

Зауеєгз І, Вгисе ТОА, Зтап ГЕ, М/аднатв І (2005) Іпіведгаїєд сопігої ої м/пеаї ріоззот тідде: магівїу споісе, иве ої рпеготопе Ігарз апа ігеаїтепі Ійгезпоїдз. НОСА Ргоїіесі, Вероп 363

Оїгеп о, Еїон ВН, Напієу 5 (2009) Моп-паїїме іпзесів іп адгпісийиге: зігаїедієз 0 тападе Ше есопотіс апа епмігоптепіа! ітрасі ої м/пєаї тідоає, Зпоадіріозіз тозеїЇапа, іп бЗазКаїсНпемап.

Віоіодіса! Іпмазіоп5 11: 127-133

Репуаппап 5, Мооге У, АуїйШе М, Вапза! О, У/апд Х, Ниапо Г, Оеаї К, Шо М, К Міа депезв, епсодез Ше м/Неаї віт гиві гасе 0499. бсіепсе, 10.1126/1239028.

Вобреп 15, Тпотрзоп НО, Ріамеї! АВ (1989) Тіввйце-з5ресіїіс ехргезвіоп ої а мпеаї підп тоіесціаг меїдні дішепіп депе іп їапздепіс (обассо. Те Ріапі Сеї! 1: 569-578

Зо Возві М, Соддіп РІ, Міїїдап 5В, Кіаовзнпіап І, ШІтап ОЕ, У/їатвоп УМ (1998) Тне петаїйоде гезівтапсе депе Мі ої ютаїйо соп'егв гезівїапсе адаїіпві їпе роїаїю арпіа. Ргосеєдіпов ої Те Маїйопаї

Асадету ої Зсіеєпсе5 ОБА 95: 9750-9754 затргоок У, Егйївзсп ЕЕ, Мапіаїїз Т (1989) МоїІесшаг сіопіпд: а Іарогаюгу тапиаї. Соїа 5ргіпд

Натотг, Мем Моїк: Соїд 5ргіпд Натог І арогайогу Ргев5. загтів РЕ, Семік М, Оадда5 сії, дхопез Ура, Кгавзіїєма КМ (2016) Сотрагаїме апаїувів ої ріапі іттипегесеріог агспітесіиге5 ипсомегз ПпПовзіргоївіп5 ІїКеїу їагдеїей Бу раїййодепо. ВМО Віоіоду 14:68 зЗепмеїдег МУ, Бівїпег В, Машгіп 5, Миз5байтег Т, 5івдманй а, 7атіпі М, УипдгейНтвеїіег Е, сзгаїй! М,

Їеттепв М, Мауєг КЕХ, Вегдез Н, Адат С, Виегвітауг Н (2016) Зирргеззейд гесотрбіпайоп апа ипідне сапаїдаїе депев іп Ше аімегдепі паріоїуре епсодіпд ЕНПБІ, а та)|ог Ризагішт Ппеай рідні гезівїапсе Іосив іп мпеаї. Тнеогеїфса! апа Арріїєд Сепеїїйсв 129: 1607-1623 зекпуа! КМ, Ріпаспицап І, І ат І, М/апод Х, Сіошієг 5, Мои ЕМ (2015) рівзєазе гезізіапсе депе апаіюдв (ВИАЗв) іп Ріапів. Те Іпієегпайопа! дошгпа! ої МоІесшціаг бсіепсе5 16: 19248-19290 ті

СМ, Сієтепі 51 (2012) МоїІесшаг разев5 ої ріапі гезібїапсе о апйпгороде. Аппца! Вемієм/ ої

Епютоїіоду 57: 309-28

Зіеттег РОС (1994) ДНК 5ПиЇиніпу Бу гапдот тадтепіайоп апа геазбзетріу: по мйго гесотбріпайоп Тог тоїІесшаг емоі!шіоп. Ргосеєдіпа5 ої Ше Маїйопа! Асадету ої бсіепсе5 ОБА 91:110747-10751

ТІЇ ВУ, Соїреп Т, Тотра В, Еппо ІС, Содото СА, доппзоп УЕ, Неупоїдв 5Н, Непікой уа,

Стеепе ЕА, 5ієїп ММ, Сотаї І, Непікой 5 (2003) Нідн-їптомдприї ТІМ ог Типсіопа! депотісв.

Ріапі Рипсіїопа! Сепотісв: Мешоав апа Ргоїосоїв. Едйеа ру: Стоїєемжа(дЕ. Сійоп, МУ, Нитапа

Ргезв, 205-220

ТНе Іпіегпайопа! М/Неаї Сепоте бедиепсіпа Сопзопішт (ПМ,а5С) (2014) А спготозоте-разеєа адгай послідовність ої Ше Пехаріоіїд Бгеай м/неаї (Тиййсит аевімит) депоте. Зсієпсе 345, Ів5йе 6194

Тотавз у, Ріперега М, Реппег С, МеСайпеу С, Ацпу Т, УУізе І, МеСаїїшт В (2005)

Спгото5оте Іосайоп апаМмархерз ої 5ті: а депе ої мпеаї ШТаї сопайіоп5 апіїріоїіс гевівїапсе о огапде мпеаї рБіоззот тідде. МоІесшаг Вгеєдіпд 15: 183-192

Мегдадиег В, де КоснкКо А, Веаспу ВАМ, Рацдиеї С (1996) Ізоїайоп апа ехргезвіоп іп Мапздепіс тюбассо апа гісе ріапів5, "Е Те саззама меїп тозаїс міги5 (СМММ) рготоїег. Ріапі МоІесшаг Віоіоду 60 00 3171129-1139

Маг АВ, Раціга| МО, Антай Т, Вийгоо АА, Низзаїп В, Ідпасітийти 5, ЗНпапта Н С (2012)

Меспапівітз ої ріапі деїГепзе адаїпві іпзесі пегрміогев. Ріапі 5ідпаїїпуд є ВеНаміоишг 7: 1306-1320

Му/іве І, Гать В, тій М (2001) ботевіїсайоп ої мпеаїв (Статіпеає) апа ІНеїг зизсеріїбійу то

Петбімогу Бу Зіодіріовзів тозеїЇапа (Оірієга: Сесідотуідає). Те Сападіап Епіотоіодівї 133: 255- 67 2пепд 5 (1965) М/неаї Мідде. Веїйїпд: Адгісинигаї! Ргев5. «1105 ГІМАСАВАІМ ЕОВОРЕ «1205 НУКЛЕЇНОВА КИСЛОТА, ЩО КОДУЄ РЕЗИСТЕНТНІСТЬ 5МІ ДО ОРАНЖЕВОЇ

ЗлЛАКОВОЇ ГАЛИЦІ, І СПОСІБ її ЗАСТОСУВАННЯ «130» В373277 036620 «150» ЕР1Т6306334.0 -1515 2016-10-10 -160» 37 «170» Раїепіїп мегвіоп 3.5 -2105 1 «2115 8139 «212» ОМА «2135» Тиійсит аевімит «4005 1 амиспвнза сзасозсЗоє зазїсавВЕх стссВаКЕСс саке освосодезе 50 скаївсозчаїс ссасстовса зктасвосссс зсоаксвнах ассасактов ссссвіссає 150 пісвосааас сасссттктт тажхстсвасо зруазоЗзтака ссссасттзоз ксадватався 150 чттасятсво сваазссасст авакониссс вістводасс актествасс оЗзсавовта 280 зЗасзавовою стззовооє возазазато зссаооозах атохезасс втссакееско 300 тЕсздцсКс соодотодтя тоЗзіаааах паст стстсзааза вазававадас 360 свасзакстс сттттїсста сясаватскс сстстВвсст сохссзатує свое 420 стос сессзассоа зсжстссссс сстссвасяих Тогтассссє вссаоаЕ 480 зссссаваїс їсте есЕс сасваастсає зсссоцазеєс СсТсЕЕссст астссавацє 5340 ссвазастта саосазоЗст їсасовссЗо зааїстовов Єдоасстсссс авсоссвасх БОЮ ссаасстаоа Тс сває стсссссова стсотеастає сесодссЗота все ще птдссоатаст дадстссатс стставсвах осатстсозоз зтодсоасєса сзссазаає Ти атазастзаї їхозззазса зЗсзооссас соазацкакцо адосочевах позазосо 7 ароастоспоа соаосавссї дассссовао стоастсасаа тсссасвова савасодсов що вопвісозазе асаттаззоз зовсажетоє ксосттосате зададУєсвза сзтоакетає 00 осттстзоаса зазастсвоаах сісзсасаао зпасзассса осдассзвада зассстасх Зо ттозадозаї тсхосоасеї посссасаас аісозоЗаавс зсстадцасса ссср ссх 1020 тосостозає осодсзавоо завастоаво ассстооатс сазоасаваєє сс озКово 100 зо зісазозовс ссадосопоз Яссоачатоасо Ззсасваснос одозоаЗозсав ясасаксоке май пссозатссз асутсазсав сваслосвоє ассзствісо тозозоЗатас ооосвазава 15 тахозоостх отсстосвах зовосатсодо сазвасавав зоовасттав сосок зБО чдітоЗс9осо заасааосаа остоазвзоота аістссятсс ссодаєство оЗостссооа Мо зазасазсас естооов адтотасваа тоасссісаво ссдссавода абтсвоактох 1350 сацнстопо соассатаос Фіссозвосно вавсасовеса єсЕстоосаа дааовсастс ї1480 ткозаваста басазавово Зстссттод3 оззаааасас соозаєссоає осазсзоазся МБО сесстаувоєЄ ксцазаасаз батїсазксах сттстссоза стзатаоота зда твате 15650 стазаєтціє астсозовата сссасазстїї озабасєсобтоз адзавтзува задсогтад 1555 аїсассавао ївоаїаЗзїовї ствавсяастє стТагсазтктст гбасадатат сттатєсасса ї658а пЕстзоаесє осітзаєсої заодактсвоє сєтогаєстаа дастсзазвюо азікхозєао 17840 часєстссоця тозітсаозї саїітасаває ЄссЕстаКОс Стокса сєто віхсатадзеє іо тсцрозатссе свзоазастсатє стотастєта сстссевиос тасаєсєсся їссоктозав ї86а сстссссота озіттсаєсє піт скссо сус тнада сасееєсоце ссанаєеєсє 1920 тсаоцєсттат важсестататї заавіїсава зодасаєцас асіссвахех баса 1589 ттвттсссос аїтутродаз жсставоатх засатеєЗаєс соводісктоа савотоксса що засасазоата їзоїтотатс зісзоЗїт сзстазсвах абівататсх саозітсяата гц тодаясссва созтсасаої состоосасєї зсссттацоє хкастсестод вксоскадее 2150 астаостває сесаднни азасстосяс акодатктає саазаватав зовасєвссс 2228 зтажктестсао авчітактсах гзаїтзоса асслотавтк дтазадоасто дззазавсод 280 їзасазказоа садоувасттсє сесссваата стодасацає сзостоазеса зоїтсахкоох 2340 хсоїатїІсс зохасавтос скосасассв закататтсє савозстастк батссестаа 2400 їаїзовоїїс заїтзщістоз азсаєствсс заїтктодсєто асадатоуїкх вастотазтх 2450 засвасатся зозкодвост стодсасоса абаззавеста шсжксссада газаасооао 2520 зоасзпазесс їтзотовссас застотовсс ссадтвоста атосстосао сітосатаас 250 швттаствсвх зсадіатаво зістсктаЗє зсвазасаої ссзаозаєтста хстзоасаад 2540 засто ссЗасоцЗато сссаєстозах оізбвоасово дсзсеосвакх сзсаазесва 790 мнисатовісє асссасттоє ссссоуїтазт остоссовао ссттосазод сскоптата 50 зтоасацоза зїсастотоа зосзакааоє озуавестчо зе ссотах дазоовозаає 2820 таозатостс асттсасаза астасзасав пстстзатоз абоастасвоа сват 2880 пасвактсєкЕ саадаасєста сттастатас зсазостатат тсссазаєзао їспсесстке 2940 звасасодаса оїсссасоазаоа посзастосса фсзавоаЗУє асатасадцо сзатозізав зю спсадізссс аосзоавтссос ататозссяс стодакзазє соастоасса зазсвссате 3о5о сеасстассо аспфасаєза сааїїсазаз зсозааовсої дсзозасаса тодавтсасо зі20 аавісзаттаз сет отасав зессвозєх тсдажсттся ми естасвес тахтвасовх 3180 ааїзассцаз зїзаттасси бсасстаасї зїссяозата зсадазасою тзазавзстк 3240 аоціссзоазаз свазтоїсав додсавосая стоасоссссс паїстстаає авцістіходо ЗО засосазаао заоссеєтсс возі тозаз застосоаос тастаозаває згкооаєсте 33650 зазоавтзся асзвЕстоаи созассазсвЕ стсовосаєв тавтасвавех зас ска ЗА2О азакаїтстоа ссестсооода ссссадізоє азасаєстоЗ асзозактода пааосіавсах За5о тосстадада сасісвастт запозазаоу заваїсозоаа бастоссвої созааєсаєс ї540 щмиттоссес асстзоасвся Їстаттооза заоїїсавоє сзазсаватї одадтавоаоо зЗ500 засттзаза зостссоокс заасазатосє засттодаза сстоставсадо вестаттот 3650 пасвосовст стооаттесВ доваттоата сттєзгтоя адсаастуза заадотсава 3920 асасєвусзсо восісастзу сасвоаєтос азоаасатає кода саст стсвазоосе ЗО зсссзазавє стостазода дикатадах астсосазтав асдассотоз ссосстаєся за сессакессв асватстастс сазан ста стосастаєз задакозсес сасатєке Мк

Чесезтсттз астсостдаз астосвачоає зосстозаєс ви тсссхва че гаав що тестові пістосавоз зсохасоссте зсатахзсета асстоасово засто ща стастващс касосавост зсоасвсссо чїтахстса зассвісва зассатскЕ Зоо асосзІсуза ясссзозада совоатесє ссзайнстоє засатстаха сего хо що каасастссся чаїїссссво таїссозаса Ффосоасестоас соззаєставс тЕсваттсво в тхастстата сТсоаксоз аЗатстках поссаїсоааа бтадзаттахх саводассте 450 сороцаавіся стсттавикс тасваоагсаає ссзазаасса саааасїтсто озаздахова. 4530 одставоавос ассссазова ассавсозіх вісттостса збавозіох тдстссадсс 4380 дазоастасод стссоосова зсасресосс гестасвзава сстасааєва ккостасосе 4440 засостссто здсоузазеєе чсаздзооєса соссавутаа сасстссоса совосвассе щю севєсасстс зстстсазсс козісаєсав зстсваціє зсвасудаїт засос 4550 аттестсато ссватсаєти стстоссаас вівосзазає затастосах ссстядттої 4520 свасавс сіасасеєсс тодатаасєта даваїватсх сатсеча пешаєс 4680 савсжткоасс аїтсттатс зовосзесаа зазссоотоз зассовсоЗє дсзсахоао 4740 стосастсоа єссаїтосає Єтосаттсях саєссеєтов осадосозас засасаотоє АЮ «асоастсваї всссвасодО заслаодозой сесдавсовс асо ссє одазатех 850 ижтзоадіс ЯЕссаїста жстяастсст заказ совссатоя ссаосаетод 950 садатостс сосстодата стосясроса ассодозаза васттасєтає ккестасеся 4350 татсзтсцаєс зесттгказа сттсотато асорті сто сасєсссааах стататааа 5040 чазтваватах атасоссва жоєтаєсзас ззикестсає давітсаєкЕ оааістаткх УМО амісотосо акт посзоазаато сік тостоа ас стСКХ пззавлавзоє що зссосава астсацазта дадавшнню зсєтаЗ дсадоїссва застатасоє 5220 аадзаслово сажшксссх господа аесозоазаси сзосаєвтає ссхасеевов око чевоаввссва зассвітскс сеесесттод зстсЧастза завада єва сссзосссоЗ 5340 сесостестє Убоваттода ссззазоооо сссосссоас ссатсоовая озбасасасо 550 псеодсовсосє аооКоєжЕст ссавоссдає ссацтакюткє оздодтовас заз сотоа 540О тжосавовес асосатовос ассасасосх аозасєтсаих зоастооєсасє ссессксєссе Бк2О ассззактає зобисаооса псзататата засто стЕс ссссаваасе ВУТАКЕЕЕКх БО штсоадозта астстсвату састсатсоо стоуоваааї аобасазава асвссвовад 55463 твайатсаятас акскаОєтав саоааваазає тат кусто сабсиватта ассаотатад 200 жшЕстсссссо тпадусзаєао астоєсвасє зоасссаїєєв асссосттєт сагодавссї 550 сасозаовод аадваесокає сс юєкс сессосеєєс адосавоцає псрссає 2 ззцзаавтост стсовасоз плазайвавт сатастіссо сссадоесх оссестовоцо 58БО пеїзосадов боадсавссос ссадзосссс солавісєтая аесссссстє сао єс 5950 задзовоссса бадсссавдас сатадоовод суїсовсста засосасоза зазаєсссто Бр

ЖЕК стЕсЄ косссттоса зоїтсессос стсосоасда ссосаЕтссс ссазацоссс Бобо соевтсзсово тсосазсасс затотазаєс оастстссасєс атоасцоссва стос 5128 лис соаксссакс Ззсаствіссс ссосісетоз ат атотосазоа 5150 козаассасс ссасстатав адтсатссст авсстсстст їістаактоа Єсапаїскка Без ззадотстсо сасатоатос зосадсвоксє зоасзосасва заїтоахазає поток таса БЮ ахацсссїІт состсатато зхостассої асааааеєття сааттокахх зсатсатате Б ксссесЕтоє ставаттазає авасозатає зстатетаса тікає бат юва БА сзаесацасна їзатазотта сзтазадоза созасстзаз заоззасдаз вітав АБО товста потазоасс ссозата актсвосст зостестова атвісводас 5540 соафссстаєт жссоєсткав есЕесссЕЄВ госпо стотддзава заєєтссвтє БО пазасстато засзаєвв стазаттсода зазкстестяє здозяаїсоз асодсозаза 5БББО сесттсосоз сссаозтосз созсттаада дастазаєсає єЄствазактоа єтстасотава 65788 ткаєсЕттої аататассєз тттатсватає їтоозаотаї ззаєЄєдавої тазазавааа в/о зтатааасоа осока сацЕс тсссатасає сствиююсоасє ссасстсосо сестосеєца 65845 татовсост сестсвціст састасзаос зазотасвоє коасесесова сзавасссас во зісосазвсст ассоосісас сстсосодаз оассстаєст оссостааєт асоодсазасо ОБО тссазодзає псасадосов аЕстсссаає содассовас сататадстс ссссоссо 7050 зстаоссаао зазстасвіс дсксасссос дзадазазах оссстадсвоа озсссоваса 7080 сааїассаса ссасостїса сзаитаттає ксостассаст тозастаасо авостапокох 7140 ттсасосає засосазата сттааодаєє заззосзаосо сосабатаза собаїтєва 2 астссєсвасавс ддааатаєтає їгїпоаоваз авадтозваттс тоїзсдаває сосоавсвес та5о тессодаВЕЄ сіотатаєсєї тазазасєтся засвіїїсєва завасаєвав сватскестод 7320 заастсзаас застава сіссссссав сзааїтасаа засастттої асзавастао 73850 засаскек звассозаааяа асааттккика зссасасзава сажкеесовза ззасадоаваа 7440 заастоваєс ссссзазахт стсттозодаа сассаасажт їкстовзааст сстозасада 7щю зіїсєзатасєз савасівїкї ствававіто созасзааїт стозазасає савсвутаси 7550 їздадявіса тозасаттсттї гратастсст овасадазат сусваассса засос о 7530 тазакктодо асаавітїссо базтастозаа сзазатттаа дазвстосва зззастоває 2680 заїттотозх аазтсазаса атттїталах стасовасажх Кукссватя зсаксаазазі 7740 цазававасзав пзазаазвоаа сасоваваав здзпацазаах ааїзазсзаа саздвазааа 700 водзазазаза йаазасзаваз дазлаааасво зсссзацаявс ставстзавус ссазавссоу 75 пласасссоу стоозасстх ссазоасаавст зстаїтазсх засуссто зсрассацах 7920 зпстассоса остаотцстх окжосдаста одствоаствоз асуаціїїтаз заатоатоах 7950 чтостасаст ахоаттитоа бозстязата асіастаєта зсодтаакоа статовтоат 8040 застасатаз сттоїостоо сочактазає ссааосчва дсвасатоата дтосасаєса ймюЮ зазатястас садсссачас бадассваук ктодактаа Іа «21052 «2115» 4308 «2125 ОМА «2135» ГПийсит аевімит «4005» 2 зтдссоцсво сазсЗасодс пдозссазоза зазазазаає саасодістЄ себе БО сасвавтсїс сежксстосст сесссвасас тсаастексс сЕссжтосжс соатсаяссоа що астстссссс їтстссвасат ктотассссс ассаоаустт зссссаавіє соте 15о сасвастсвї осссозаасс текессссст осіссзаває ссзааоастто сзасаваодс 240 хскКоечітодо азаїстотов сооссєсссс зассссяаст ссзаєствоз сессії 300 стцсссозу стсетасєтвс сесоссдото асодтсєє зтосоотоої заховодосо зо шсдзвасаста звсопаЗсаа сстооїісса ззасінстса сала таса озасазУтоу о сопапочісод зобдасаєєоз зозоадасоєс тостссткає ассрадпазої бозсвезатї 480 тата осазоазвєса сасссосас зазооусвас ссзаховссяа аа 540 ястссоОваво ваттстоасоа сттоостсах засассовод асхоасстаза совок сасЄ во сесбосасто засосопосза сподаваасто запассстю аіссазасва зїтссеказЕ що задвісзаса пастсввесо погасне дсооасасаає восодайоза сазасасаке 755 пошесолах ссзасотсав сазсаасвиє аосассоста Ссоцюадоа басоорсааа 750 авататодод сттаксстЗс захопосаєс заосааосяй зпйовооаасх аозосоєта 84О ссзасстоосо опсоавосляо савостовоЗ асодістсса Костсозат топос Зо зоззазасво састсоссто позадтотає зазєвесіс зазссоссва одазктсвох 50 таїсотассє дадсозвссас поасоїссозоа садязасасо асвієтсєв саадозцася 10290 сгістісазов статаєзава доозоастстх дозовазава свссооазасє сутосзасво 1050 асассссідо зостсозава сзазтаєсаохї савієккстос ораттзакао зсахєтааїт ЇМО зЗсаажтоата зСзссзазат зоазассєю сасосвахаа васстатсек сссвватзад 1203 зсоозозоса озаїєссазє дассасааст псозсстсзо гаостазатос сідсвасео 1250 саїзасодіх асосотасвла басзаопвістї ссзогосаа засаоїссав озаттатста 1320

ЗасаазааЯає Сссассоа гозатостса ссодатотос зесЗдодсас сосватєсосо ї359 засазатако зхооссвесс всетастстх зккзатаєво сесдавасіе сао оє 1445 потчтоаотоа сароацвеса стосуавося аказосвава асстоуОкке ссогатодяє 1505 чапзастода асодесасжи сасадваста саасвазссс таатовакоя єсасвосаох 1550 стосстоаса акбссєсаат засстостта статасасай осатаїтсос завтаоїсос 102 сесіїсавса совасачієє СасЗадосоа Кббсвоссо ваооотасає асацатоаВ: 16850 чатазасасєя акосссазса да косатат ззссзсекчо зіазатевах товссодаає їмо зссвсссас стаїсовсас зсасазсзає ссладаоптоа зоасососзо азвсзсатода 1800 зісаівазіс аобтазатцЕї осастаацієс зоЗісєсесрЗа атттсаїккс тасвестатх 155 в затодтзата ассозиаоутаз ссзссотсвс стазєсатсс ададтааєва азвасоотааа 1550 звоасттсзає сзоазасава соссавочоє ззасаастос Зїссссаакс сстазсадтс 1985 тес Зозато садаловаце соктссацат ттозаоласє збовостаєє задзоатаєоо 2040 дасссоанао заатосзастов ТїКозозвас слаасаксссо засасатата сааастагто 2 сатстзанах аїстоссссї содооавеКесЕ аоїзосавах зістодатай затоодаває 2150 стат їлозовсвст соасттозЗо заоаосоаааз сода тасєх дссазутодаа 2228 пксатсантх тоссесасст зосасвтіста сцзюоваазЕ тсазастаав сазвітоовх ав авизоцанос тладзааєх ссооісазає зазтосавскх одзазстУї досадоВасЕ 2349 актаттспзса зсоасістаой аїісссваза страт асссаозаоса ассзааааа 2400 зхісаззатакє сотосозасх састннаса заїхосаава аскатастодзо ссастккосв 350 зааоссвіжс зааааіїїос газооаїдас згадасаєстєє саотабокоа ссотозіс9с -5іа стаксастсс асстсаасвна св стова обзстостос ассосазаоа тзассєсвса ЗВО мекв ассттвастс Зстозваєто сааошсвосс уза состава 540 зстааатссс ссвасоазіск зсавовастаяа тассттасат зтастааксх засововасх КИ захсїїстаєс сазоїстоака саростасоа састтозеех атстсзавсе заїсдавоахо 750 саїсттосда зсссадастх зозацатодо даїстєссай дастосвасо себасассо 285 пихи осласє засссяцатЕ ссссаотаєс созасацосо сестоссраз астаасттса. зно ажтсацтітос їстахтзасво сстоозадас сстдотооса сСсозаатода ассвессаво 2940 часстсєсояза вавісоцЄтся совтікстасо зссвасссаа адассатава сс одЗаа ОО

Ззаказааста зазаосассс сяздзачосса зсоассясх тостсоасаа пока се Зоо спсаоссоааа стисоаостес зоховавтах зїсосстест бсзавосста сазсавекоає 120 тасассоасе ссср пдааохтасза зовїсатоавє азатаавсвесс стос цад 3180 саавіссссояс сасстсяаскс їсавоасстоаах свісзазестс вадттсцсва соцаттацех Зо їкоссатстх осєстозадс зссаозвасс добозазссв зсоососасо сватоастода з стсдажкссат тосвосса каса ссс згсовасзоз содасазвоазс зусоссвтса 3Б5а ассасоссса асодозасаа срадостозає зсстїтЗїо заеесссеї тозззааада 3450 сатоссосла застсвозах зододавою пос ксто здсадотсса заатеаїася 3480 сваоаасвнов фати есес тттктосвоз заосоадодзас зозасастата стік зо звсзозассо одссактст сстсстєєгто дастсозста зазааттоїв осссацоссо зЗщюЮ зсссастосх сстоЗастов вссаазадчод псссосссза стсатсодоо аатассвос 3550 шсоосовосо сазозозтоз саоосододсо здссосссадо зсссссоава сссссс 3720 в ссстссзоава сСстесааоуЗа осссасоосс саззссазтав Зазаосотсо асссвоасос 3780 зсдовоззат ссстоєтттс суксжЕсссє ттосоазкс оссустсЯє засоаєсокта зо тісссссово одесссоуєс ддсозоссоса асоссдатає сдаяуєтала азадзадтвї 39500 зазсозоатї зсоасстссс асдсатствдо зссовсссах стсесасосє сітка ї950 адоасккссст сопкстсасх зсазосавуа гахаастоса сісозасаза зсссосаїсу 4020 савсстатсз осттасссс зсодозасес стаїстассо стявстасоз сзавтаєсса 4050 зддзасосвс адосоцетєє сеспастоце ссоЗаскато тост зттссдоста ща пссзавазас стасассастс дстсосваза заоваєоссс саоесавцяєє созаєсзсвах чкдо дссасоїтсок дебтсасавс ссЗтеастодс посастаааее сазоктдовоЗз саасатотоЗ ІБ тосасаїсаз азатистасє заккссилдаст зоазвісазас: сазаїтва АЗОВ

-2105 З «2115 1435 «2125» РАТ «2135» ГПийсит аевімит «4005 З мек рго Аїа АТ аіа АТа Аа Ту Та бін о сує бух дко РКО Те хів і 5 о і ії

Баг Ре РН грец ні бу Заг вро Ра Суб сей маї бій Сук Баг Аа жо 25 30 рне рго чего Сув бек Уа Ап Аго ТВгоБев вго бе Зеб аа Ха Сух

БЖ 43 45

ТвВговгОо ТР Ага бек сСуз Рго Му бег Без веб вен Ні Аза ще сСув 50 55 50 рго біц рРго сво впе вго Аа бгОо Аго Рго ух Аїа Суб баг о буз Аїа 55 7 75 5 заг Ага вес Бі ї1е Сух Аз біу Ра кго Ахип РгОо Аза Зеб Ах Гео 5 чо 25

Ар мво АТа біу ев рго Аго АТ АСВ Уаі Тбк о рго Рго УуВі тТВгоУаї 300 на. ще

Узі Аго Аіз Уа! уді Уа! біу Ууді Аїй Заг Аз Аїа Аа Баг оБег їви 115 120 125

Уаї го був бей бер Те УВІ беи єТа АБА Куб Тгр Ага біу бБег бів 130 135 149

Аза її іч бід аАхр Узі Суз бБегоїіви ніх Ага біз а) Ар меж їв 45 що 155 що

Тут Аїй Зег о бег гує АБросіп бів Бег мів бує сіу біп Рго бак Ар 165 ща 175 чів бін хів ієй заг ібн бух бій спо Суб Ар сей АТа Ні Аа ї1е ї50 85 1 сів азросСув сви дер сів Бе збі вро Суб Аа Бі Суб сіу уз віх 195 що 205

ТУуб бец мух ів Се Ав Рго бег фу вйв Ага АБ Бім їі Був Аго 210 25 22о ів уз Аг бій беа азо о Аїа Аїа сів бій Ага Ага АБО Аго нія Уді

Та» 30 «35 240 чаї Аїа сів бег дея Уа? АБО Аа бек ожеє баг ТР дів Уві уаі ТВ 245 ЗО а

АБО ве біу цу5 бує Туг бі Аа Сує Рго Аа ма? РУ 118 ств бів 250 255 270 аа Сук сіу біз цем АгО Аїа сец зву Уа біу Біу бі: Аїа бек гує 275 280 285 їви ага уаії Уві бЗег їі Бей шіу РНе біу 5ІЖ бек обіж ух тТвк АВ 290 2595 00 їви Аїа тео бів Уа туго цу Су вгРО бій Уді із бух ої РБе 5ег за що 315 320 суз Ага Аа Тер АТа Таб Мех АТа зегобін обіп бух Ніз або тів бег 325 330 355 сіу муз сій Аїд ен іви уз АТа їі бій уз біу цец їво 5іУ би зо 345 150 цу ТВ овко бів РГО Уві 1 бів ТйК вк йвм бів зви бі Авй Ап 155 зо 355

Її бБег міх вени ів Аго Х16 Аз АК Сук ву Тів Уді Ї16 Ар АЙ 370 Зяж ЗВО

Тіе уз Мек біо ген тгр нія АТа хі бух рго ї16 РН РКО Ар бін 385 350 395 аю

Твгобів бек дга тів Бец о уді тве о тТне о тпг омаї ТвК обер Уві АТ Ав 805 юю 15 із Сух Зег ін Ні дп обіу тТук дія тТуг хек Ті РО Баг ев бог 420 425 430

Аіа су Бій Баг цу АБрОТуЄ ви АБробух ух ей вне УВІ Азрошіу 435 аз 45

Суз Бек ів дк УдДі бі тер обіу тпгоАіа Тв Ууаї А5В був Ск Ар 450 455 40 піУу нія Бго гео дій івип уві Зеб чаї аа єї Аа бе бів Ту суз 4Б5 ат 475 «5 сі Узі Уаі ТК осзіу Ар нів Сух сіб Аїд Хі 5ег боти Ап о Сву Ту 85 0 а

Рва Ага меж сін біб аа тер ода біж ні ве їТВг бух веб о біп бій що 505 510

Уві еп Меї дхп Аяр тує чего бек цец РГО Авр АБИ бег бек Аго те 535 БО 525

Сув іви веи туго Тагобег Ті Ре Бо Аа Бег о Аку го вне аа тие 530 535 545

АБОп Бек се Тг Агу 8 во баг АТа що бі туг їі бів о1у Авр 545 55 555 5650

Ахо Був Ага баг АЇв бій цій Уа) Аїд тТуг ажо Мія Беу АБр вух вен ах 570 545

Іїе Ар ако дкап Тіз Хі Аг Кго їі А5р о Аїа Ні АБИ Ап бе ув

АВ ЗНУ що чаї уз Тйг сСух Аг Тв оНі біу ті6 меж Ахп сій ен мех свй тук 595 50Ю 595 цу Заг Аго Бег Заг Ази Рв І16 Заг Тв обаг їв Ап Ар о АБИ Аа 510 515 ага

Аг Бег деп Туг Аго нія іен о уаї Ті6 бів Аа АБпоАго Ава б1у бує ваз 3 535 о

Звг оре аг о вго бід ТВгобеб та вух БАХ іу5 Бій Сей Ага вго Ага 545 а 555 зег бец тб оуаі Рйе біу 5ег аїа бій бі ліз Уві бго Ахр гей кує 6560 565 57

Зег Сух бій Бец Бей Аго уві веи Ар обев Кух То су ав АВ гей 575 БО 55 ага Ав осів Мів вец спів Мі Ї1і6 Туг був мер обем Ні во губ тТуг аа 55 00 іви дія беч біу др бек бБег Зег Був Тук ів дк Ага Мет іу вуз 705 7ХО 715 72а їв) Ні Су5 свои бів тТйг Бен Ар ів) го уз Ага був Те бів їв 725 7305 735 меа вго ма! біш ув! жів Бег гей Вго Ні це АТа нів Без дев о1У 740 745 750

Ку она ув ес Аєп гук ме) Сіу ух Ага туз ем бує бій вве го 755 5 705 хек дей бух Су АБИ сем обію таг уві Аза біу Уві хі6 Уа! Азв беє

ТО 75 тва два Баг біу вне сеу бій ей Мей Уа? Ні БО бу бій ву Ага Буг та та 795 ще

Маії уз Хіє тр Суб Бій рей тб бег Тйг АБО Суз ув Ап Щі Бе 8О5 БК 815

ФіУу Бек Бен хег Муз АТа Зів Сіп БуБ РБЄ Аа Був АБВ біу Те АБЮ щ20 8а5 ВІ

Твговго Уві Бі азр Ага б1іу Агу фен обег рез Ні РБе Ап Ап Тут щі 840 845

Звг бін біу фен їер Ні Су біб Ар АБр рко тТВгоРйе без ту Туг но 855 БО іви А5в Зег о мей вух ец бій оіу звг о геб бек бій Ре вко бух Ре що я7о 875 що

Аіа ух хек мец аАзв сіу сен бій бій мер Суб дей тТйг оту тнг Ахп зах що ща ії2в тег обі дія ар ви це) ій біУу вв Су5 Ага ге АКО АгОо Се що 905 о

Уві Туг цеч вуз Гео Хі БІШ Уа! Ні ви Аа АБО ви Ар вед Ту

З15 чай 25

Азов бу Авроіви рго губ сво бів ага ей Су сви Уаї уві біп бів з 335 ча '

Рго АгО РаЄ РгОо Бег хів Аг твг обі Аїд Без бго бух іво твг обег

З 255 Бо її бій Се ів Суз ШІУу біУу сен бій дв іо іх біу жів бів мех 70 75 сій іви вйе вує Ах бен Аго ій їів Аїд ен о абр бег так уві дей

Зо 5 що вгО) вуз Тйг хів Куб цей тго сі: АБ5р бій Аїа Куб ух нія РгО Був 395 що 30о5

Ага вро ТВгоУаІ Ті6 Бей їво Абр Бу уйї Уа АВ РКО АТ То 319 015 1050 діа тт АЇз Заг Узі вух Туг уві дія Зег Сух суб Аа Туг Авп 1025 що 1935

Ап оСуз туг Аз Ар Аза їви бі АКОо БУ їви бів Ага БеВг Су 1050 1045 3050 і зіп уві йР оРго бег Агоа бів бій баг о вго Рго го дго Бек обівй

Ма 3050 005 вм) АБО нів бій АТа бій Уа! Аг АБИ бі ев Аїд бе) РгГО бег

МО 1075 зо

Сух РМе іх АЇв РГО бів Аїа бі біб АТ АБр віх діа АКо Ахв 3о85 10990 ї10ч5 діа біу ве аАхр го без нів ей Ні бег Звк бек о Уві бів бір ще що 10

Аіз А5а ув ТР ОУВІ Бго бег Бо Меї рго дк біу бег фу б1ц що 2 25

Ууаї зи дів вне узі бід Ре бег вна бін вуб5 бує ніх АЇВв Аа 1130 135 мя іуз Ре го жів Бі бів біу Оу гей баг о біу бій Уа! бій Ахр 1145 з15а 1155 ту тве бів бі бій Баг їі РВЕ Рго Ре Суб б1у вуз аку бів 1180 1165 То сій зве Меї Суб зег Аа ви бБег Агу Аа біу АТа її ву бе 1175 1180 1385 іемізи бБіу Бег ТНК Куб ща їви тгр о вго Бек РгОо аАТа Ага Баг ца 11955 що

Бек тро уаі біу го суб Біу Аа АгО бо ТК ніх Ака іу У 1205 о 3215

Суз чего сіу 61у іу Аза б1у У біу Ага біу АТа Аїв АТЯ БІВ 1228 15255 1230

Зо сіУ го Аг ОА Бей оіу го Рго его Агу хаї Аг бух б РГО чиїх 1240 1245

Меї Аа бій тне 316 Ага Аг АКа Аго Рго Аг Ага ТІ СТВ ру 1250 1255 1950

Заг оїшу оре бек Ре бе бго фео Ак уві Ага 9 вне дія Так 1255 1270 1575 тії маї РВЕ РГО Ага біу РгОо АК оБег Ага Уві Аа таб о рго Ті 1289 1285 420

Ме вже ви ув їух був Туг о фух Ага біу Суб піу ви бго Сук 129Е 1300 і305

Уа тгв о АТа біу рго Баг Ага Аїд ей ізи А5рочаї Ага во Рго 1530 1315 1520 зве оУщі Заг їв сів Аїд 259 Туг Бек Суб Аїд Ага АїВ Бін Рго 1325 1330 ! 1315 дів баг бБіп Ро Хі б1у ей Бго Зег о Агу Бій іву без бек Аа 1340 1345 1330

АїЗ3 Ап тує ЗІу ух Суб бго Ага Аа Аа біп Аїа З1у сем РгО 355 1360 1355

ТВкосіу рго біу ні Узі Аїд обец РгО Ре Агу без Аїа бу ух 1379 1375 1380 іви Ні Ага бег гей діа бує ух АХА АТй їей Аа біу РВе 019 1385 1398 1395

Ні Ав тТйг отв охег бух Рва таб тТвг оСсуз дів сі біУу сей АБО 1400 1405 1510 «аг баг о біу йБіу ап мат то Сух ТНгГ баг Куз ЇЇ ви ів уд! 1415 14520 1425 зів ТВг о Ага баг о бег гео дар 1439 14315 «2105» 4 «2115» 10607 «2125 ОМА «2135» ГПийсит аевімит «400» 4 зкосодатою зсоодасасо сесосттаїс сахссстодос ссосаїтотса осозсасада що

Чезавасссс тстаспоссс стю осс азкестссскс сссзавссст сссасатссє 150 псссажсссз стсссттКсс сохссатоос соасасссяа ссзавесжеєх сода стас ї50 сеассвасссс сессссесссо затопоссазо ззозадаздо зсавоєюсосс заз 240 сопіспової Здсасуєсвоа здадаєсоасс зазіїооасо соозаксо9ї зазовдо8о9 зо чзоссдозодо саздісоссвза азссазсактс оссосодсса здадвоктоє савреосас 300 зсопаттозоо ссосасооса сааадссзаз зїсовоЗзвов зодаорссат сатсносааа 420 зсасасасес сестсатацс сроасаїїтах сутссосссо піст стоа заодоєсос ЩО шиеєсоассаз осасалоавіє ассдоїтсдсс соасссссс астассваєс дссоасвсо 548 сосассвсвс сстогсаєс соостттесЕ ссзссавозс асоазседасса засесате мщю шина тсос содатоєоад сасзасєсосо сспесасас сасассесскс зоссосатс 5Б5О зпасстсвасо бсассстсо пбссаосвос дсодссвос сессодтсоа сасосадаца 720 задсавзсає аастассоєє гзссодсасс аїоссатесс сесасуїсте агтсватооа тво зіпссазсає саасоатаєс вуссоасовс ссостацтато зссвакссає пзадозаака що атствсовод остозсасаЗк состаєстат заїсссовоз зовсссваяо садово оє Ба хосвассазії їсвстассза тоазадавосс засозссето стзастасда хсатацтоає ЗО тсосодосасо вазасозтоа саїїтатоїс даздосзато зкоасоааов зозаззаває го озсоссваса стаотастов зссаттеєтєс зссеазсовос тозсасааао восодаацся що савазазаса дбавовоасах ксосасоцвої їсзкасасає азозксароа сазаїковіх умо тоссавостт дазсооворах саоссаадцаї ссааодассо зссосзаса заводах 1500

Чесесссвоз создадісса сззазсаєсс сасозазода зостоєстуа дссстассаа ч26а ттсазазося ассобоосах снктсзасЄ саалазасахє чесбвееєсах ссазсавадяу 1329 зосзасзаох ассваєссвс асттозазвас зЕазвсасє засссаєаво каз тсо 13890 вітосодаса тезсажостес ксстесстто сесКксссЕ остасдасса сплав со 14540 пссстасаса їоїїтосаєо їтсасткосєє згтзаїтсаба стоїттатацає вттссватсї і1500 їтозадосат гсазацсссо здсзсзасоас асессоттса стсттасося Ттоксодасе її дідаїсвааса ттоссства зкісаазодає сзатвссото застссааво зазозазад: 15250 ссозазасзо ссазатасос созадотода Забсоасварво соаїссвадав осо 1650 заозссвасє ссазаодстоа созсатасає озбосстсаї ссатоацсакх осатоасасї 1740 стосасзаса сспаїтотсоса залодасакао задаасевза зозазсацса заосазє 1500 ззасазакоза аосватасск азавсттсаз зсозазазащос ттоазчасоа озаозосасх 1550 засадавода зозссоосах дозоовдсло оакссодсаспа псосаосісва саїсолоосє та2а зісзатоссу ссассвадосє Ззаздацосо озсестсосоа ссасоаосах пазсссвесо 1950 зачатовота зозвавсово досссс озооассааус зоаавозазах дстсзасасе 2040 засзЗсєстов зстацнвісЗї ссезаєсдосс отоавсса сессссозаа остоосатоу 2100 чівссососоа ссесоссозас состопссає зтоассоосоя заваавсаїх тастстозау 2150 чісцастата крссодссо схозстеасуї тассасово пасаїссаєє сазїтітодва 2220 пстоостато ссайсцоссо стасотоаї позсасатає зесастосх стоєсоссод 2280 скосзсотовх азастоворозс соїзавосеє оосатттоза азсУєсастЕк тЕссталата 2340 засзсазаса секшастоза сесасодсса ссосакстса зассавоассс позсасовсс 2400 скасстсста ассаазсеЗа свзоваїєсов зсвавїсода саїссвовіс асоасодох 2460 зЕтодссма осдсссоесЯта зозодсаттс засотастає базасоїтсса сазазадавза 2520 соутавсїаста засосстасс зосооастсо асасетсота са товсє авссзадов 258О сзаасвалоза дзсестозсе састоавсЯст одстсазацас осаостоавааа асостсада 20540 зессаазсвс Ффодсасвос зчсзоакстсє ассоаїсодос здозодаоаа Зсссозоваа Ре ссвасовавс стоувоасєсоаа сссудасаєс зссасстдає засос соасоадесоа го зчзаєссссєса таті сстсс стсстесасє ссоадаєтто сс ває таостасссе -82о цатасксасх страж с сустосзова аозісовсає зуаЕстаска сетссоазіка 850 чедсчістеї поосЗссато сстсесттх ссововаосє здасососіє своддатассо 25940 засісаасов тозпзсссоо зазсссоат ссспостсх заалесстеє ззвоссасато 3000 зассссяєса тоасоЗсова вістосазтоз асововсосо соваєтаєсс саїдасакод Б тззастосох сдасусадаах осадастада гсозсявоах Ззссааозата сесавуссве 3120 псосдазцоз доссзасово содсаєсаса здтасадост бтелозасвсс сесвассата 3150 сацстаксе аосодасссса асо осозсзссоу ссадавасся оаїстастсо 3740 тсороєстхса соссавідеє оососстїсо ззасостссо саладлаїтсто зстодассооо 3300 асдаосааст сазоососта стсвссоіса засос дозоо зассовсава ассасасто 33650 ссазадазсє азтоадсостоза сасазасссоу одосассастх стостоссод ас сас 3420 ддассоссвза дазасстоає зтозодлода тсстозодав сатастсаса савоєтсос зако сазассявсс зсссоїсасє затозасос зсдаостсах ссасзассто весозосате 3540 твзаццасзз азостасттоа аЗзстоктаац свостжжстт стттазката татататав: МщюЮ ахтатасостс стосататтс задзазазай тотасттозу аватоататає зодвасіїтса 36550 тсасєстоаат ззодастасте дааїаодсово соБшссЕТксх зсасссвсос тзоабсосає 3720 сахжтсттаз сссаттаказ пої стза тсттоаасаа созавтатеєє сстазватссс ЗК тасазасзаз ттажсттста зототттата птоохзсасс ашттїсасєс азаїтаааке 3540 шоафооЗіс сСтаєтоссас ассзаєстоса засзозасав сттосстстО асаатаоаав З тосастсвос спазазастї асазацтєса їїстосваса єзосадієта зосптодада з950 зозаватівзс хаоозсзоазо звохоасааї стаївоссто сассттовхз азазазвотах охо асттсссаса ааатазовос зозааотаса атасосаяав асоосаєтєкх сстсктотоа ЗО ззасзавасо чЕсткссКЯЄ даваасвзоаво сстаєстаст стос саеє зе сваса 43143 сестзатозс асаасаєтоє зстоактКек статті: тксстссете остовсстох Ав зсатосатао єстсотазес сЕСТоОКІСстХ зассеєссса їсакесссово сттосозааа 4260 ттвотовстс астаодессх звосотекасє асорсососс хестозоною дазатекосо 4320 тасттасскс зосатсаятє садтїтаосає тстсасвеса зассоазоався смт согає ЗБ тзсасотоції соосаксозса позїсоваос засозавасо сасосвасса тебе 440 засоспедос сдозозасєза ссвсасасяо додстоотсо сс соо ссоссогто 00 сдозодадоа зсодасстсс отесжсксоса осссошосся азосстсоає сасоозосоо 4550 згасастоко зесоасгисо созадєосса ссессоастсЗ аїствдасаз сазозвавов 4520 тазадасаса зсещсекова пзозасазая сосапозадяа сус досозовааа 4580 авозсодозо зассоосвдас зккосазас сзодатсоссо дсодововоя зозсао 4740 заспосзосо сота оїсодовнннІ дадоводоасо дасоводот: позах оє 4800 сах сс стстітакох ассдоостсо зтозактаєс тссстссс 45Бо сстстстоЄх же сКех жест сатК оззатстаох зосодозасяа збтаавоєсе 4950 свасаттаїї їсозаоасоас тазаатават атїтібосод азасссссва зкбозЗссо9ї 49850

Мюосвосос ассоссксва лакююсзана сосссттазє зтатсатссо завіїсвкад 5040 ктазстазоаза астазазваса ааттзоасває сазстоасст сетавеюос тастсоцася 5100 зсопїтооцсата аоссаасоцо сосссвоасах косоєсзатста атодоаїсоа сег сада 5160 зстзатассс зсаЕдасає ксставтїай іосвстсао сзабстаєов зосзаєваєта 5229 зассазссва їтводаксотсо засзакетст ссесстсте гаксссясоо сасотаусса БЕ їхаактуктоас сет сатозавата стасовосає осавоцехоо састуассто 53450 зІакактазоз сстадетастє Зззасєтатча зтохаосасе дазатааєто сао 540 тІздозвоїтах стеобоосатх ссасттасат стаз касас бататаскех атстатсвавй АБО тасттссаїта сзаттцатоз сттатоозає асаєсазктакх содасостос восссососх зо їтсссаалоо агазссваоо свзоусадовта осазсавсва содзавеєтов поза єтося 5580 сттосасасЄ опстатсяЧес заяотасоата сетазпатоє аасзЕскеаЯ сового сає 5540 їсзаоазаЗх тостсассао їТосзакакх сестссаова засзасаєте їсассзсоата 5 дасаззакас сапасоасає сасяаоаада кактастоаЗкє тассвсзадс зассассвцс 550 атасссазта кствосаво ссагозвова зсазатаєво сзазвозасто оазосзавта 5820 саззавсвоаєт сазссзасана тасвзаскіст засовватає тозазозації зсізакессє хо тостатаата сзтсттсссва сіток сао зсасвеестої тосатсєсєяо татаївоссоа 5940 дзазастата єсаїсттоза ооавоатака звсозазсазї зач астов азаїстсате БЮ засосассва сяраозазоаз заваатоЗаз астоссяазоа зстаттїкоа сасосттоїс 5БОБО зусзішека їбатссавси хаїазасока дастатвоса асвтасикх охастатосо БІО тасаісаса срзіасатаа таїсаїттаса їссвавссса бадазоаона сс таай БІО чівакадажєт асєстсвава посозіасод сетестяаса авоктваксо жстотессс 52 сзваскквоса псосаасаба сЄсвастаєв ссозасвока бсозаєтає осалотосавз БЮ тстсттасжх акастодасх ззаоаяскасє стассксса єстсвоаваккЕ хааостЕске 5350 сКасаїзстоа жстссакаї тозостаат сзвссзавоаса сатагтатсас ссосазааза 5 задавссаво сасадотохс сасстсовох отаїстсксо астосттста стаасататї ЧНО тасваоказс зтзсзасаос зссатосатс ссазавсв саїосзатах ствзаваєасх 554 судавасаст їдазатстадаат чсзасвосСао саассаккосс ассоватакк псегатстс НН зааасЕсаєї осаїтстессваї стабозоста дзасасавст Зсстоватото зсваЗтоТсс БББО тсзсаваєЗЕ їассстоває сттсстадта ссбсасхкх ассвзатови созасаЗ 65728 сісссозекс ассовасасвз асуодвастахт хоссасссаж ЕКосзоватєс сссвастоЗа пу тЕодасвост їастовсстс Тосассстов заоїтогсоє сазЗаазасєтоа стзаводато БО зтатсасіаа сстооаавоа ттоссвзосас тсастакЕсе стссетотає зтссвосааа 600

Зазатасаза зстзатсатт єтсдазоєсе Ззаасатттс тестова та товоє що хсводзтасва совастосва стат зооазазаоє засоасссває сбісзсвова 70293 їсвадставод сгбсаатостї саслааодао засавтахтоз ссоєсттс зосоосатто 7080 адаасетасс соасоїссав дадзахкеста озаслаєтод дасвсссст даїассоаа 7150 засатовсх ссаосітоса зватстосак хсасовазас стоїтвосавоа стстссвота Та аадісватот зазаадаоєвз датасвоїса зосаадзлодо сЗосстоавса пазавасвод Т250 атосозксса зозозаацах дсассавоасє зтотаакано созасваассх осааттстаа зо засаадлаїс тоадозаЗаї атаззосаза абостоцкод сазсстассї зосоосаета 7380 зпаасстоіс азасосєссао дазатєсссто пдатааєтоюо зосзоссаса пвотостолою 7440 засятозаає їсводстеса оаатестасяк содтозавїс сабсвасово сазсстаота 7500 заєссастах зазаосовоса засавто ко засзацацта знисєсоадса дасваясває 7553 асаїовосса заадалааоа зсаїсваадсс зіїкааоавао соласазостї осваттатов У засаадаціє содтоосвас тстсадєсса сісаатодта сорасссттто тестассато 680 яса каск сясасікеє ссстсткоа созасетеса жтавсавескеКЕ стосссвса 77405 сааївасацє бзаасаїтаод ссзбсассав сектозасЕї таїсттасає тозсостаса то сЕстсссавда тодасосовї Сіотосаазоа стссаїтосї сазоасласао зазссдадод 7850 дазозасова їазаттвокс атататзїкх аазаспстстосе стадатосаа аваїаїаїсс ТЕЙ акзаааїттс зсазатобод засаїсстта ес савс даодаоззоса засада АТ звасттсавас стодсосвао зх соссваоо чаассдаоаяа ссссотоосоа ЯсосеЧчеЕтоо ОО ззазастаас аадосасоцї їктассесЗї азоадозасах дотасчаєтх зазасатавса що твоасасттас аївсїистоз зассабсасє сааоїсссавх даттєсяааї огасасаатї 8160 зиставсасс аівіттсчатс аїашстесто садаїцоттає Кестсззата гатасасада 8220 тоховзсваєс саватцїтаст забвахасак застстоваа зіаксавоса заїісаотоа 8280 кссводоса стаовісаса єасавстцава їсазстосата стоасасвссї азвавтксадов 8340 сзоахтвІсс зазастазсс сааваїтіск Сствастесе отаке сесзівсука ка0о таїдоатасах ссковІТЇїх асуастзодї заловааста зсатковсаз аваоссвоце 8450 тост свза шттссотатс козЕсестаа зісасодавс сасстатсах возттссаса 550 єстассзаза застчеастоо зазассваада зоходассва авабзатсвх сасозак 58 завсататєес їстсстсттв аціпизатає кетестсте сстсваоваз дадовасокес 540 зоазастацзестї зосозоазоас вазацдслоса коазізЕтав асісоїваза ассозаосса КУ тсасаавасва Кто свВово бззсававао їсОосвосво скютасода заст таса 8750 зуузтатсоттс ттткастаст ззісавЕтока ттктстокст зтатттскса сахттасвах во казаатстоє зстатоасаа аісдтсоаїї ктаїсвовсс зсісасазао зазрдодавоє 85 тассасдаац авоастесаєс застасзооо астсовідах азосваєстся зсвосоауЕх о ссвтазвсстх сзїтаактаєвс ссассазаз сс восЯо стає астоссасув водо пестсосаво завтасахоаю зоасвсазодо зоаостсатс тесЗєсваао вазсдавасо Зоо сектасістас схсолатата С Зкаснкад задсстєзає зазсатаєта саоЗїсакта чІ12о асісістїстї атозсстоаса хссаводатат зіозатзакх садсатсака свістовсаа Іво атасостост асабтсвстх зтзассосво атозатстка созасссоах саоссдасох 9240 зЕтасваває свісазаозо асттетцноЗз осссавастсз сскжсвсасс ксеосзадода 3300 адсстВвІ зсаістазає зтазавссад ссавсвтасєе зстозатаао восатозесцс 5350 стазааїтсвс сзассттзикх ссзсссазає екс Засаттзаса сатзааасви 455 возіїоїсаз зодаавсасао сазаїзато сзсаакесво асстостса ста то АБО асссзаавст заассттсак ккстсттоса атазесатак стаетатесх сххоасдата зо тстсосвово потасатасс пссвоазасає зсзозсаата дссзоатаєс заасаааєє 600 засзктата зкессоосЯє зисадіїтата зазасозсов ссорівасах оозастасте ЗБ с-нжхакасто аватоїсіса сададаакте ассвадстодю саабаззадї ассссссоє 720 аїттссзтоа акаїтатзатт аївсаєасавї сісвосстсє стстттттоЗ дотик ЗУБ тссааоізчїх добабастст зоадааоссех атосоассзас сБКатоата засвастааа якщо застодесоа азаошккосє засвоузоссю одатасксст соасасовааас созсасоса пос опзадісасста затцтонтоа застосаїта зоаатототод зсзавдассо аавасзааво) забо ссстосатта зооакеєсає ссаховосто задозастао зазстовоах сазозавату 10020 зесестатетс ссозссазтс азааадсста зоїстосвзоад сазосажестї соїсвскеКе що тахастзаах сстосавскє сс сСасавтївося Ттсадссста зсаваєстех цк

Чісазаттто таїсвасаїв псовтїоассто їазсовссоза сосадтаасєх засоссетах 30200 сти тса озозадстої оасзксвняса ттсїстсадЄ пзаїссовсс стсоаадстоє 10250 оЗзїїсоаїстї газассвааоз азозадцвсої соатастоєсє осадаєдаєс васааоасоо їща32о зсоазссссах свактсвас аїавітсатоа асваовасав осатазтоо соодссваес 103850 зацдазассях дссассутас тссадасуєх зснтотсок дасастатса дсосаядаоа 10440 севсассосс атасакасой тотозсозса состсстаок дсзоаасасс асасассс 10500 авоаїсттоз товозвісаве їтаїсавоазах саїсзасух здсосаавосо даси о 1550 їтїсатаваої осатстесса вісосатата ссасуттаоа зозсва 10607 «21055 «2115 6912 «2125 ОМА «2135» ГПийсит аевімит «4005 5 зиоозхоз осподасасо сосостітЯкс согссстю ссосатоєса оссовсасава во охтвазввсссс хстоасоаоссс стгтоозсесе ассстссссс сссаааєссст сссасаєсеє ї20 шсоссотссса сптскссттссс сотссатаає сзасосссаз ссавасвессї зсодастоде 15о0 сегсодсссс сесссссссо затооссзво ззозадааозо асаводсоаєс заздавоассо 240 соЧіспдЗаої осасассроз дозааєсосс ав давса саоватсоах зазавоозао Зо зоассозводо соадісоссза аассадсакс сссоеса зозоазієає свадсзсосе 3650 зсоастоназ ссосасєдеосв сазвооссово зссолозаза заоазссве соісвосаза 420 псососцєсс жсстсВтоос хоосатттаї соссасско оЖЕЕсЕстоЗ алоодесохс 450 чаїссодсоа сосасаадатс збо соадсстссус зстоссвакс зссрчасатса 540 споассасас ссттатсосс соассксст ссассазавс авсодсодесса асссоїтс БО зосодоссас сосакотово саїпатсосо седїссасає сасоасссстс доссоссате 6ББО засстсаасо ссвсссітоЗ зсссадсадє зосозссвос соїсоокса чдастосазада 720 заосавоасас застзссоїх стассовсасєс ахассовсс сссосатех зіхсзатода Уа аїоссазсас саасдатасс звоатсозсдас ссстатсвав абодстоасод ссабттсасу 84о пссозквазо адассзасоа ссакастдає сасваєсато едасесос Зсатазаоає 9500 чатоасаттх: ахоїсовадо ссабовідах сзадазоваа пзаабоасах бозсаста9у зей зесзаоссаї тегтсзссов совоствзасв сазаозосоа азосасаваяа оазозцаавава ї10о посасссоса содадухєсаєв сасвсвазає звадасааах соасссасса засттодата їо80 зазассзаосс аазасссяао зассдеасосо сазсазазад зак ттодасоада 149 зуссасвада састссасова азасозвакто сстоазессх ассватетоа авоасаассує М2о0 посаксспаєст совЕссзаза завіса ктстасссвас адозоктосаа савотахтсва 125 пссосаскто аовосактса восасоцдєсс асдаоєпаєс їсоосоктодз оцасатодса 355 тЕїсааєстї годадосаєї савдасссоо сасаасцаса соссоїссає їстбасосає 13580 тестооаста спассвасає сєсссстава босавозасє забзссаєоа асо 1449 аапзчашсє тразосвсодс саазЗзтасасс одчадосочаЗ асодсаавос пеесавоао ї5Ю ссзаосдозса воавссвастс сазозктвас засатаєзкоа зкоссссвіє сахозсаєто Т560 сатазсзесє свсатазсає дама їсосаа завада ой дазасоазода зазасоаси 1520 зцсзатциса зосаватоза псаатаєста овосттсааз сзазпавностї бозваєдодо 1680

Чвоадсодста ззасааодав зассодсакто задозоЗаво сссбосвоваа осадстсоає 1740 зіссаоосса ссзатсцссосє сассвавосо аазоозоазсва ссстсосоах сатдаосота 1500 пасттсісоа ззасзазтза ззазасовцо зсстооства сатооЗтаєс зсасосссос 150 тоадассаста оссасзсоасєс досовузава асажетатссе счаводісцо сао 1950 в цассастоцс сосок со зсозцавсоЯх ссасссатєсї тозадасєсоз сто квос 1988 поссостоос асозївовсо готатвксвс созссетаєь ассодсасЯє додасатов9о 2040 стаззсосас доссассоса сстсвоавсса дассседцаса созссссасс тсстовссва 2400 всдазсзааз Єссодасаза ссовасатсс Ззассососо зіодазссов ссттаоосес 2150 чсвоатеїсаад сососоасас пососадчатє їстассотсо досададааоця пваосссазо 22 сзассватод зоссствисє созсссож пісоссоєсє досавосссоа созсозсода еВ зводїсоваса тозаєсваст пестссовїї аососемсєс сашфноассах дассесссх 2349 їссододавас тодатосоєтх ссявовтасс озасссаазов зідпадахтессо пазасттвоа В жсссоаскос тазаостекс созоссасах зазссссасс атосЗодсоза пахстодако А засзавосос дсоозастаєс статозсато зсзавстоахо ссозасвсода хосазастов 2520 зісорасзаоа тоїсавоваї аїтсвасса сесотоаадо заоссватоо зсздсассас 2580 зазстасавис тсозоавосЯЄ сессзассЯях осазстатст тассватссє затодсаве о зоасозасоссо зссодавоєсс вовтстаєстс зесоазсстс асоссватоз тазсосске кю зЧазасасісс освазазтєст застоассоадй засозоасвос ссазавацсосх азессаккЕх 750 шип тозвао сазечзникаа озссасцсї здссазаааоє стассоїва осасявассс а85о0 здпосассаст сесастоссо зоасБсссото содаєсаєсз зазазвсстоз сабо оо 2880 зисстеазоов фаїтавсксес всааостсеЄ ссоораєсває сасссатсос таахазаоєв 2340 сасззвастса тсасовесх сассоаосвзї стазаодата зазазазхсоз восвасодад 3000 песептосоасва ссасстстсю ссетазвсосє сассодадцава тазссзсаса садапостоо 3050 зсеоїстсаос содсвсоссо стосодадаз зозахаоасс тс псоаосесадо оо ссразасстс дасоасозадй содакокаєсє осозісосоа кесопдяосЯ ссвісавссоє 3180 зсоавістцодй саосавозода аозсводає чсодсоЗсох спсдаозаа аодсоадвоаоо 3-50 задасоосаїс чссозїоооа дадзазоатас сссзстастая стовтаске атоодатаса а тсзататоаса зкзттоасаоє ссотостс ссзвацювта ассаводсза сваооаєваєа ЗЗБо дсавсзасод авзаєсовсоза тессскстї осатоктосє зссадісааа зсасотосіїх з420 задасззлас вістївасов озаїсастса азаовУуттчЕ свссазвя зоїакесоє 34858 хссбозозає йасасістса ссасоуїбзаайс давогоссао атозозстаї азозаоасоЕ 1540 стат ттас сасаооєваї таїсаодсвата ксосаотаєс сасаадсса сзоздазося з500 заатасаотла зозасснююа здсзаатасза засаосктос савасааатає застїстоде 160 зпзозізстца лдвасавокаєт застає табваєвасс тісссазе тостсзоаса Зх тіста тос вісттветах ахзсссвова ззстамєта ссттзазоза взасзтвасо ЗУко задсазкоаца гтостоваду їстсаєсазї дсвссзасзо зозаадваза закодцавасї 3850 пссазавост астттсзасає осстаксзах абозосатда гссавсасає двозсогаоде о таїддсвата атуттіїоа статоасодто сабсвасаєча сасатчатат саттаєвісс заБО заздтссазсво авовоаваскт состзавока атзевасєтатє стсазазвоаває потасаастх 4020 тстзасазоо ссвоКсоех зессстссва стос тоа сзасататас застасасса ао8О осасотатсо застаєсосз здхосоатсЕ сттосттата стодаєстуза чаостосето 4140 сестессатсІ сасвотєтаа зстхесссоо агастдаїттс кссзтаєєса одостваєсва 42 і ссавцевсає птЗссастсо сааазааазо зассазосає зопгзасаса сласддсасе ч-50 шктосатст савзасваВх осоататста зазасасєтоо заазсасисза азтзазкаса 4553 зсазтзцсаоа ссаттссаїс затв састстсозза зсткакквса сетссохсха ЗБ позозтовоа сазаастоєсс сзасічаса оокоєсстса сазватоєтає сстозахсту 4440 сстлотоста ссзетттате зозбсовїтсо аодсаектске ссоаїїсасє дзасасавко 450 чаестаттоас сасссаєтсто свозаєсссс засітдчааєко засвасттає тоасстсожю 4550 аксссоадао тогсоссадз зозастоста авоопатовіа ссзотївасст пдазаваєсо 48520 ссзоасастса стуттсєустс сттатасцкс садосазацаз зтасзозаєє ааїсаїкоє яко чзазоассодва састттстас ссссовотах сесазастса оототодатов астосаоста 4740 зІЧЕттсада заззовосваї ясссаатєстт сасвозакса аостадцеєттх сзасостсвс 4809 зайвоцядлас аотатчаєсо тост тавс дасаїтовоз асстетстза сухссадава 4850 акттстосяаа тТааттацвс аозсссстаЯе оссозїозазс атаастекса оостасацаа 550 їстодсвітса сразаостех Свосавостс сстаоказно ссаплтоїтааа зададсводї 4980 акооітозою заоаопотодо сссоосвоза азасвосата сзабссовзоз озаззатося Мо тсвавзасаєо їзатазосЗа авсадсстоса зссстовзавас задаосєстов зоаазоатата ке зздсазваєі стоотдосаой КІтосссвас осастазоз асстассзаз согссвадаа 5160 амистдоза саассподає зоссасадах зстоздозає абпдааттса застосвава 5720 тсмсаЕсоз тбазватссат садстозасав сстаоставаа тсастятава зададсвовє 5880 агавстозасє авшжзутатов сссопоосадає азасзасато тозоссозой дпададатака 5340 тсавоссатї тазозасєов асвасстоса аїтоїтоваас заовотссоп ходсвастсх 5400 сапетсаттіс заїдоазвоваз сзагадсаво Зазасітїсва асосодтоса зов са 5450 посавссозо вастісціво созосастокх созоааостз зсазоазазда здзасвїсва КО захзоасства содвопзадсаз запсдосаєо озсасєсазас їсоабодадає созадссві: 555 зсавасазтє сСсосаозода асводаватс оосаосоото зоатасдоаада оз есвов 5540

Зссзстсаса зазовозода адцітоссосо азозаостос аїсзаєтася оодовексавЕ БОЮ патазоасзаї їсозсадсоаа оіїсгосаає стісотазта басопосавсся зазсаттоїо 5УБо сзостаатто Зстастоасса сузакстсос вазазватаса їоовасасва соодоаЗее ква аІсттсоссв засвоатооа ососотосє тасессозах атахтосае содааасске 5850 заїзавсата ктасаватов ахсттотоза сттдаїкоос совсотокка сзаватсатс 5540 зашвиюастї зскозоаосте азаєсвсстї сасасстсос виибавасс сзитетасах БО ссарасаєяа зассзоссаа савіаттостсо заїаадаоса бозасосстаа зассоссдах 506о суха ссааасттає сістссозсЗ стаасвсвта ззасадяЗат стассзааооо 5120 асасзайцеах асатассцсс вазтатика зсасвасзасс воазкатсова садоаїтткоас БІО чеоіїтаві: стовдсогаоє зассаєзада ахозстозссо обсвасотодо стастіссох БЕЗО

Ттоїостоава тотсссасва зозасстатї одзастдоасяз ставазаєта засоззазоа 5 тхоастоасво засстоазата гісстсосас даваєсазсв состаооазах сзстадатох БО зЗзссзазаєса саттзадатоа табазцасазо сассозвася заадЗссста баставодЗах БагО оссвіссата заствозова астзоааост задаїсааза завсаїссск атстессцає БЮ сазісавааво осстазотєх псацсядоє аїссттзоза зстосцасає саасастсте БЮ тсообоЗаєс созвссстсов Зстасрастс зссстозас саадозадоаа пасассУоє БО0О тасстасара їЗассвасаа зЗасооахтеЗс ссассоасаї ксзасасатє захозасавз БОоБО засазатата остотоасєовсс авоссвазао зссаєвсає сахестєсяа зсоаткасеєє 5Уг2О чссатавсасє тассвоасоаса зашщнкоосоа ссоассатаса стасСсоротаков со Тсте БУБо стазтзсяоа дсассвосат сасссвачає сттоаотоазоа бсаажсвтса здав с Б8А3О пасатоаосса одозсадасаа За соає обообосатс тоссзасєсос віза ксася 5900 зтадазозої ай 8312 «2105 6 «2115» 2303 «2125» РАТ «2135» ГПийсит аевімит «4005 6

Мет Ага Меї біу біу ТВг оАгЯ Аа (ву Маї Ага Рго тТга Рго ліз СУБ

Я 5 16 15 сія ага ні у Уа! вух вго бец сСує сіу вго Ре сіу Аза жів ву 20 25 30

Его вго бій ТВгбоїец го Ні го Аза Аго Рго тТвговго РНе Рго У 35 48 45

Ні піу Ага Ага бго Аїа бій без се Ага Аа біу Аго аг о вга Рго 5О КІ БО

Вго Рго Ага Мет Аїа Ех Кух уз сує АЖр у АТд Рго Ага фу Рго то 75 о

Ага заг обів сСуз ТНг оРго бін бі їі6 Аїда Буб бе Ар Аїа сін баг 85 по З5

Уаї уз Ага Аго б1У АгО АгО Аза Уа! Аа бух ТВг о дяВ Ті Аа Аа що 105 ЦО

Аїї ух Аг жа! Аза бій Аго АТа Аїа Хе 210 Аза Аа АгО Ні вуз 115 120 125

Аа біз Уа? бін бів руб біз АТ Хі Уві бегогух АТа АКу Аа бе 130 35 140 іїен мет Аїа біу тів Су5 Аго Рго вБгО бу Ре Заг сіу аго Аїа Уді 145 ї150 155 150

Зіу вго АіВ Бег ТВг о Аго бег ойег уві 18 Аго Рго Рго ні Сух бів 155 170 175 аг орго тТагоЗаг Ага тТВготТвВкК Рго гео) баг о Рго йіу Бе го Бго Рг 150 355 МО

Агу нів ар бі бів тТвпг ага ве с1у Ру ек Рг ае Уві баг Меї 155 юю 20

Ті Аа вгО бек ТНЕ РГО Агу Рго яег АТа Уа Тіе АЖВ фен Аа Уві 210 215 20 тТвк о рец сіу Баг Зег бер біу О1у аку Рго Заг Уа! Сів Ме сів за 725 230 215 24

Мух бів Аїа АГРО Без рго Бе тнг о біу ТВгомМет Ро зег го ака чаї ах 25 255

Меч Рйе Абр сіу Меї Рго тТНгОоРгОо ТВге жів Рго УТ Ар Ар РГО тТуг 260 285 7 бів АБробіу Суб біу бів РБе ТР АТЗ АБр сію біб Аа АБ Авр Аго г7З ка 285 аїв або тТук А5ронНія сіу А5р Бек Тгр Ні ОЇ дев Ав Ар отв тує 290 255 КІ

Уаї бі сіу Ар обіу Ар осів біз біз Аго Ап Азо Уві Або хів баг 305 Зо 315 З2а маї бій Рго цей РМе іє Абр бі во ТВгобіІй Аго Аїв бів АТа сів 335 330 335

Му уз Ага ух ваг жі Аго Таб обег заг Туб ТВ біп А5р обі Авр 340 345 159

Був мес тів Сує біп Аза тго Меї бій Хі Зегобіп Або о Рго Ага Тг 355 360 365 сіу діа біп бій губ біу Хі6 уаї Ре о тгр отв о дго Ууаї Ні Бук ТВг 370 375 зо вне ніх біз Аг ух ви Ве бій РРО Туб бій РМ бів Зег Ай Ага 385 390 395 405

Фу Ті біу хек ші бій Буб5 Аго тер обед вне їі біп бій бі) Суз «05 я 415 дкп вух Тут біп Аїа АтТа Бе Сі) Звг Уа бів Аза Ага рРго Ууді Бас 420 аг 430 піу їв сіу а) біу АБр Мехз Аїй Ре Сів его бви сів Аа Ре груз 435 440 445

Аій Аго Ні Авап АБр оте вго Ре твг фев твг нія Су тгроптйг Має 550 455 450 ї12 Ап їв Суз РгО вуз Ре ух Акробій Туг Ага біШ Мей сів Ага 465 47й 475 8

Муз Ага б1у ви вуз тк о АТа уз тТук АТа сіу Б1у Ту Ар осіу віц 485 490 455 діа вве гу ва Рго Ак біу гу ТВг АБИ 5ег гук УШІ Аво Ар Тв

ЗО 5 5ів

Ага АБр Аїа 5ег баг меж Аа фе) Ні Ар о тТНг і ви Ні Акр о Мет мех 515 520 55

Заг обіп був Ав жа! Ага Ап біз уз уз ага сій бек аа Біу Кух 530 535 5 біп Меї уз біп Тук о бву бів гей бій Тйгофух губ ву сів Меї біц 545 5З50 555 зво сіз дія дій груз дб Аго уз 31 бі Мах Біб біб бі Узі Аго бів 555 570 575

Ага іп сен Ар оті біб Аїя їі Абл Аа Аа тг фу АТ уз 01 58О 585 ЗО

Уві Аїд іп Аївз їі Ммеб ЗвгкБ Узі Ахроівю баг Куб Меї бек Пій ув 595 БО 505

ТВг о аАго Аа тгв огез Аїз їгроуді Рго ага Аїа Аго ТгроАЇа дія «1уУ 510 615 620 ніх маї Рго Аїа Аго вує ТАг Ре її Мен вух ма! СТУ Сух Ул! Аїа 525 вк Ба5 56 сіу ага Тер бви Су Суб АГо Аго іх ас Рго вне її бец сів Аїа 545 БУ 6555 піу Суз уа! Заг біу Ага Тго Аго АБО О1у ага Уві Суб аго тТго ге

БО 565 657

Суб Суз а Ні АТа Акр Меї сіу іец АБ Аа Ага Бго Рго Ні Бец 75 ВО 585

Ага вго біу Рго АБр отак Тйге о Рго баг оРго Авр бій ТВг Агро ага їв 590 Бох тю ага тТвгоАжап Ага тТВК о Бег обіу бБег Агу біу біу Уаї СТУ ви Аго Рга 705 7 715 7270

Аїв уві сбіп Аїа Аго 5іУу дів Аа бів їі бек тТг оУуаї сіу бів Тв 725 730 735

ЗО уз го іш бі Бго Меї уз рго бій Рго АБО го біу Уді ліз 740 745 750

Уаї Тгр бій Бго Ар о сіу Ахр о біу бі) Хі Ахи Межб Ар офец ів вго 755 760 785

Бго їі Бег АЇз Заг о іецй біж Аа Меї Аїд бег їву бБег ші бух Кей 770 775 то дкв аіа івен сів Ар о Тве сій без вуз азр оси їі Ако вух ви б1у 785 790 795 во

Заг Ага йец о їен іуб ген бег біш рго Ні бів Рго Ага Ні Аа Ав 8о05 БК 15

Аго Хі Тер Мат А5п біз АТа АК бій бу Заг отук АБроМет Уді Ай 820 25 30

Сух маї Ар АТа Ах Аа Ар тТга ї18 АБроіу5 МеЖ Звг о Аго І1е ВЕ 835 що 45 іух рРго Ага Ууаі уз бін лій Ап біу Ага тТуг Мі Аг Тук бух сво 855 БО біз Бег уді рго баг асо Аїа Аїа Маї іви Аїа хів Бго Мет уві Уді 855 8 75 8850 с1у Ар АЇа бу АК ух вго АБроїей ву Уа бу сей Ні АЇа Ап 885 БТ 835 сіу Бі АТа Рае бів ТВгОоіеу Ага фу Ав без ХЕ АБО втЯ АБа бів 00 5 З 5іп сей уз діз сео епе Уа! Уа! бі маї 0іу біж тів Оу уз ТВ 915 520 325

Твг Бей Аа уз Б Це ТЕ Ага бій ні5 уз вго бі Ні Ні Ре 30 535 540 ув Суз Аго Аїа вве уаії АгО ТВг Аїд вуз вух РгГО АБр Мет Аг Ага 545 359 355 чо

Її ви Аго БЗег тів зе Аїв бій маї Ага во дхробіп вго рго Уді з05 970 975

Аїа адза сій Ууаі! нія біб бе) їі Ні Ахробе) тТвг оби Ні фен уз 2850 Зах 5

АБріує Ага Уаії С1у Аїа Аїа січ Аа Суз Аа АТа їі бегоівв їв

ЗУ 1000 ще

ТВгоАка б5іуУу Ага Аго їіе ТР о тВг о ніз біу біу то бег бег АгО 1015 1020

Рго діз Ага Ага Сух біу бій біу уаі Азр ен Ага Бей бБег Ага 025 1030 1035

Рга пбіу РРО їу5 Рго Ага Ага Ага баг Біу Суб АЇа АТа Уді ліз що 1045 ща

Уді Аго сім ага Ні ага аг бек її Тгрочаї Аїа Агов оіу 1055 НЯ 1055 бі б1у Аа Аа Аїа тгр обі біб бів біу с1у Сіу АгО Ага Аго 1970 305 1085О

Ага Аго Тгр осів Агб Ага о Туг о вВпе їі Ті8 тів А5р о Ав ва тер 105 мк 1895

Аво ТВг о Бегоуа! тТгр о АБроуаі АВ Аа АгОо Аа РНЕ ргОо бух бі цю 13105 МЛ

Авп бій біу чего Аке іа Уа! оте о тТвг отак бій те бів Ар ма 1415 3129 1125

Аїд іво Аа Сух Сух тТук бій баг обу Туг Узі іви Бу5 мех бій 1135 її нія бец ек бій бег Ні его Аго Бін їад Бе те о бБег Аїа уд 1145 1150 1155

РНе ага Зак біу біз бів нів бек ніз нів уд! щу бій ма! вга 1560 1165 1573

Авробіш тів ї16 Агу аго Суз Аа біу їв Рго бі Аа Зв Те 1375 1щщо 1185

Бег їі6 Баг бак уаї сви Аїд баг ніх біу Січ Аїй А5а тт Уа! 1150 1195 1200 муз Ажп тТгтробіо сій Ті сів Ап обег беу БгО Таб Аа тТве ОтТВе 205 12510 1215 заг Бр оіз жів ву муз бін Уа бе) хів вве Суб Тук Ахий бег 1220 1225 1230

Кец РгГО аг о Суз уді бій ТВг о сСух фе ізо» Ні ре) о обег їі тТуг 1235 1740 1245 го бі) Аза туго УВІ їі8 фено вух Бір Ар о їТе тТВго вух оТа тро 1259 1755 1260 чаї АТа іш Оу ївь їі бБег Аїд РГО ТВг обіц іух бій ув мех 1965 1275 1275 сії Хі Аа Ага бек тує Ре о АБр о Меб ре ма? бЗег о меї сіу мех ї2во 1285 1250 їі бій Мі їі АБр Уві Аво тує Б1у Ап Ахо Ууаї ву Туг Туг 1255 1300 1305

Зів Уві Ні нів Меї узі Ніх АБО Її її ТВг обек о фу Баг їїє 15о 1315 13520 зів сів Аб5а РНе уаі бує Уа їі Ар отуг Звгобій Аго аа Уві 1325 1330 1335

Ага вве Бак оаба ух ха! 5аг Ага бен бек їзу бій Ве сі с1у що 1345 1350 ів о тиг о Тук АТ ТВ ОтТве рго Ай Аго хів сій бе) о Зег о бів Уві 1355 зво 1:55

Ага бБег беи Аїд Туг Тнгобіу ей ух заг Суб ву рРго бек ї1е 13793 1575 ї138о

Заг бів Ве вбуб ви Ген пев Ууаі ке тіє ви Ні (іє тео дів 1355 13950 в

Ав ошій бго бек о таг о Су Ма! ТБг Аг був вуз бух дяп бів Аа 1400 1405 1430 сіп уді ТвВг оСу5 Ап обіу ТВг о Ууаї НІ бви Рг уз біп мех Аго 1415 іо 15475

Суз ви муз Ні Се біц о тТве о бен бі Хі АБ Ат ТАК Уві дід 1435 1435 140

Аїа Хів Бго Баг Авр хів Ууйі Ні5 сецу Ага баг оїец еп Ні їв) 3445 1450 313455 дга ей біу б1у Біу ТАК ОСТ Кей РГО Ар Ууаі ТНг о біу ха? Кем 1460 1555 1470

ТВ оАха омаї ТР ОСец Ай іви оБго бек АТЗ Аа Тйг о Беу во Ар 1475 1480 1485

Ажроег баг Бек щег Рго Ар Зег ібн Аз ТВк Мет бів сей ен 1455 1495 1500 бге рго 31е Суз агу Зі Рго Аха їго Хі 01у бій Бей Те Ар 05 1510 3515 ец су Х16 Гео зуб Узі та! Узі дго бів дев їв Ага АБо АБ; 150 1525 1530

Ті бек зп без бі Аг Бен РКО АТБ мен ТР ОУаі оцей хег цен 1535 ї5430 1545

Туг УВІ То зій дго Аа їйг о біб бец Хе Хі Ра біб Аа су 1550 1555 ї550

АЇа Рйє Бег АЇЗ сей бій Су Рпе сін Ре АгУ Сух біу біз їе9 1555 їх 1575

Біпофен мес вне сів біб бі Аа Меб рго Ахй ве нів Ага у1е 15850 ї585 1590

Мух іез сіу ре деп о АТа Ні дух Б1у сіб бів Тук АБО АгОо Ся

Зо 16500 1555 їжи Зег щіу 316 бів АБа фей бег АвВ Уві б1їв бів Хе его оТу 1510 18515 18520

Ті тів біу вів Аа вго біу Аз Азробім нії Ав вБе бів 41 3525 і530 1535 дід бін Зег аіз Ре мМеб суб Аїд Уа! бег був Се Заг бег вух 1640 1545 1550

Уві хаг о уді бу АК АВ Ахро Мет Уві біб біз Бій бБіх ТУ фей 1855 їБ55О 1585

Аїа Бів фуз Бій Ар оУаї її Ага бів руб ар АїяЯ бек Ага нів 1570 1075 їй маії жіе ек обі бій Рго Аїва Хі Меб був біп бій Бег бів бін 18585 1590 1695

Ар жіє іу5 бів Ах Аїда біу біу Зег фен бго Бак о бі в бух 1700 тих ТО авпобеи бек А5ап Уві зіп бій ів баг о Біу Хі твг о біу чаї дів 1715 їУхО 125 тТве шіу Ав сій бі ніх бін їі бій віз Аза бів Зег лі сви їла 735 1740

Меї ув бег омаї бег сії бів оБго ббгобу5 уві ТВго ї1в уз б1у 45 1755 ТУ

Аїа Ав Мет УЗІ Сів біп біу тує бі его АВ ар сув зіп нів їлю 1755 1770

УІ Баг Ага біб Бу5 Абе Уг! бек Зег Ні Бе Ага бегобіц бів 1775 1950 1755

Бго Аа ів У вує біп бів бег оіу біу А5п бег бій Ре її 1799 1795 1800 сіп тт о Аго бек АБи бек їх бій Твг оЗек АБломаі оУді бій 01у 1505 1цо З515 іви бак бі Азп Ага біб із Аго бі Біу Аїа уві біу бів муз! чо 18:35 1538

Ап обух іш Бій бів Ака біп АЗп обег ів АТ зо сі фу Заг 1555 їв4о 15455

Бек мех АБО жів бух іви мя бів їТе січ АТа ів ТАБ д5н дей ї850 38555 1555

Ре дія ші сій бБів ух мазі БіУ Заг о біу біу тук о біш Ахрохаї 1555 1870 1575

Туг дко Ав ТВг ніх ух біу шій аійш Узі АЖ маї ру5 бух сей 18550 18585 1850 ніх бів фев бів біу сви АЗр о Аво уз бій вбБо дв Заг бі вве 1555 Не 1905

Ага Азп о фбец Ага АВАа їі дга Ні іп АБ Уді маї Ага бен ї1е що 15 155

Піу Туг Суз Ні Біц дет Аго Бу ух Туг Меє Зі нія суб біу 1525 1830 1935 сій їси бів вйе Аїа уз Бін мех бів Аго Уді бе Суб Ве и 1340 1945 1955 тТуг мет ніх біу біу Заг бер аАБр бух Ні їі Так о Ар обію бек 3855 1960 1965

Суз Бій фей АБр о їгр орго ТБ о Су туб уз її Хі уз біш так 7 1375 що бух віз біу еп дай нія бец ніх тТВго5еаг бів біУу уз вго Її 1985 1990 1995 бец ні ім АБИ їі Бу рго Аа АБИ Ті ів) бе) Ахр обу бер 2900 зх що меж твго Рго бух Ті із АЗр бе біу кеу Баг обу вец Уйі Баг 2915 2020 8085

Бек ТВкК ем тТвк нів ух тТВг о біз жів Ууді ух сіу тТВг сі біу 2039 2035 2940

ТЧук Меє Рго рго бі: Тує Уді Акродав іх бій Хі6 бег АБ фу» 2045 29259 5055

Ме ази Уаі Ре Баг ве біу Уаї Ухі Т1е Ї15 ух Меб мех АТа 2О5о0 2055 2070 бСіу Ахй мі біу туг вне БЕ Су: Аїд біб меє зако Ні бух БД 2075 2050 зах

Ре ів сій їви чаї Тгобуз АБпотгроузі уз Я Мви бе тв"

О9о 2095 2100 іш го 0іу Туг бег Баг нів біб тТпг оАвр Мак ген біу узі т 2105 21О 235 аго сук УВІ сіц їТе АТа зец Аго Суз Уа! Азроїуб5 АБр о АгО Авт 21720 25125 2130

УЖ Агу РГО Суб Хі вух дер ма? Уаї Ніз біш їви дій бів вен з135 2140 2145 соч Аа бін Ті вух ух Меї бек ісу Бег Бак Аби бій Баг рух 2158 2155 2180 сту без о бег оїез сіп Ай Бек о Ті сей аАго баг Су АБО ОтТВг АБ 2165 3178 5475 ї18 Мен о бБегоУві ахровгОо Те о із бір ев Аго вве омаі РН бі

Іво 2155 ті

Га Ага був шіц ТНг о Бег сух Суз бец бій мМеї тТаго Ай бух ТВг з «200 2205 бі бі РНа ЇР6 дій Ра Аа ті ібу Мах АБЗ Бу Ащп Був Тук 2-10 2815 222О

Заг оУВі Ага Бго зЗвег осів й Таг Мет вго Рго Сув бек АгОо Ага в 2825 8 2235

Ту а! маї Уйі ТВ оїез его АїТа бій бів АїВ Аа Рго Бго тут аЯВ 2245 же5О

Мет Аго Сув АБроАхр Мет беи фей Узі бій его їбг о бек Ї18 таг 2435 ва са вій АБВ ви оТУу вів Хіе дки о туг Бій сів ке вве др уві Аа 227 ат 2280 ка Аіа АЩІ ух ма! Узі Азро Уві Узї МНі5 фен рко 18 АЇїа Тут ааК5 ге 2295

Уа Тйг вв шої 2300 «2105 7 «2115 1173 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» Ргобе І ВА ВОА 1 «4005 7 сатозазтса козаєсвоїт затоєсотаї задтссаоає сессоваттх састєстаса БО їстаїїзаїо згзатзассо азоатазтстас сеасстоад стасссдода сзасяоаавс 120 потззазаст садіссаза засаазтоаєс зазоосваоє зостесаєсс сосок 150 зсзаксЕтто одаоїосаоз здааоссакх созпасттоз адаактакоя остоаставоа 40

ЧЕостоцаїс тозазовзато саакзаєссо зооддассзає аїсстсоваса сататасвад що стасстосятс твзазатаєст зоассстсодо зассссяотв осазатаєст ззабаззаки 35 зчазваостас за: таЗа засзстсрає ссозоозада созаваєсов овтаєтасся 450 воза сса сват тасс ссвсставса сзсстветоо зазаоаїтсвя остааасвзаа Б сороддсаззоа звавосіїаз зоаИстссоЗ ссзаасввах зсаасткоца Застокацеа --

Чазчккакка стоасвосоа ссстодатес стооваєсвя ЧчрюссашЕк пзазсавстЕ 600 зазавацісз адататозко созастсаст зоасасвовх зсвадвасах ассзвасса БО стттсаавод ссвЕтсазаз Зежтоставоа ззіаситноа атастссвих воазтоассх 72й

Фрсосстак састссаткх сязсавітат сстзамнис їоітосаст созазатдає 78 сссасактис ттооїтатсх газастсосто звастосаао зсаосстово їсавттессх 540 заптттастз адіссстсда соЗзсстосза давсітотосс Єтасатаїтає їваєстовсо що давства сстаставо сстотосваоЗ стасовсост та татстї савасєтавіє Зо пазоатссамс стЗзсоЗакЕх зоастстзоаза захозозаєс ссссвазасх зсзасцста 1020 тосстсотод тосазсаосс садаттсссс зоакаїссова садосостєх оссозааста ока ассєсаватсс заїїастста сої сто завзаєсіко зсоросаєсца забодаасто 1150 тесазацасс сссоооазає састеткаа се 1173 -2105» 8 «2115» 968 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» Ргоре Ї ВА НИХ 2

«400» 8 зсосаїсаса соотасатоа татсаїттзса тосвавесса їзозадаова состава 50 пїзатачахт акстслзаза шосооіасоаа сг стаасв зЗзУссватся ке ссс 120 сапестдосо окасзасата тосавстаса ссзосасата ссозасте ссаватосод 180 тстсстастє атастозаст озадацетас єтоссттсса Ксісаозоєе базостске 240 содатаства стстссататх стодостовт сазссвадса саїтвсуцісвс гсосзавада З0о запаавссадо сасвацінтс сасстсоацх зсаїстстсо аїїосттста севаєвтатх ЗО засасостзаас зтізсвзасозс ассозіозсаїс гтссазався паїосдатах стовазсасєх 421 тосазаєвсї кцааатазах шсаасвоїає своссакусс аїсозататх зутсатстє чо дозосетЕ: осакстссої стзоовоцсо одасваоаваєт осстцатота асзоддєатсс 540 тсасанатеї бассствавї сітсстацто стоссастіх астззасває ссоаосанх БО стсссрасес астоззсасяа атдозастах тоссасссатх гтасававес сесзастовой що тезмасаост тастозсстс тТосаттссва авоїттоїсех сасалавсто стзадодато 720 атаїсвотаа сстдозавца сСтоссзосає ксаствест сіссттоєас акссзосааа Та здзваїтасаоз зстзатсайк ттсоааосса вас состстсовоа ет соаох ЩО їсадотосод тозастосау стоажаєссс здозаоовос заїтосссваї сктсасаодда 900 їсазоставда сстсватост сасазадоао засзасаїаз хсексеестї засоасаєоа ЗО здаассто ЗБЕ 2105 9 «2115» 92 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МаїКегУУа сб957 328 «4005» 9 снеюасзасс засасавакх ссасттодсо зісоастсваа св астоє зктстсогає 50 тоссоасосс асо ксссчастоє со 2 «2105 10 «2115» 92 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МаїКегУУа сб957 325 «400» 10 саеюаєвасєс зададазаахх ссатссоцосо ассесссаза сфосастеає асстсокас ща тассотсосс Яке стоахс кесттаВстТої со в «2105 11 «2115 215 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МаїКег Ехсаїїриг с17878 «400» 11 сатастоато азсазоваса зохзїацївх ссозссазає сзадооаєсса сассассосо що скссвоосес сасостогсо созсостоїс зососвадво зсодсессаєс сатасакосо 120 чт засозс атастсстаЗз сосзодосає своасатсасс салоавіїсткв асодзатсаа 1650 тсяссадилвя їтобтсвасо споссвоадос дата 215 «210512 «2115 215 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МаїКег Ехсаїїриг с1787 13015 «400» 12 скататсато засааочася вобахаасек осозссавоає сашщнювасса соссвссоТо 5 стссаоЗсЯє тасцтіцисо тавсастокс засгосавова псоососсос савівсатосо 120 спсотозсоас асостсстяо сосаовосає сзасассасс савовтстто отозазхсаа 180

Ів сзазаа ас сЗасо споассаоцес поата 215 «210513 «211» 94 «2125 ОМА «213» штучна послідовність «220» «223» Маїкег 18

«4005» 13

Фсатозааво сзтозаваєз зсзстКост зтатцтазас стасолітк стааствтво БО асттазЗтаза сатассасак ззаааасах всса 54 «2105» 14 «211» 96 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МаїКег 15 «400» 14 тахсвадажтї актозаватао састтоастта сабоїззасс тасоЯеєтас хзастатаов БО сттаотлатая засатассас аідзазтвас атасса що «210515 «2115176 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» Маїкег 28 «4005» 15 тасссзасва стсадаекхвсс тІїтатсст сазатастсо зтозаоєсає зваховосте БО зтасазсстсз ствосозсаЗ сотої товс созасоласт тотосозатя тостссєсав 128 овісстсстс агосаоааих ксттовсоах ссосвсодаа осссоаосаос зов 176

Зо «210516 «2115160 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МаїКег 25 «400» 16 їасскхттах ссттсвоавкз стсоотавай гсакоадатоа дассахасас ств тносо Бо теза затасосаса засо чизсо захасестсс сзззатссх сстсатса хо заст юш сепїссосас заажщастсоо саоассоаавх 15 «210517 «2115176 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МаїКкег ЗА

«400» 17 тостсваєво сссавокзсс тсттатсстї тасоасостсю псозооїсох пазїовосіс БО

Зсквсєстсв їсвопсозсоо ососпітовісє соЗзасозаєт татосЗаоцта тастсєстсаа 128 чаїсстсстіс зкоїсаЧчайї хсстоосоах ссосасовав осссоадсвас дозах 176 «210518 «2115160 «212» ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МагїКег 35 «4005 18 ївсстткак ссехтсвовато стедоасоадо ссвтозактоа соссзсосас стсазєсвоса БО тсозозас Чатасопрасо засітотосо аотатостсє ксадавессї ссрсатцєся 120 ач сттво сезїссесасє заззостсов саотсозвих ів «2105» 19 «2115176 «212» ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МаїКкег АВ «4005 19 тостсавсавоа стсзацівсє ссетатссту кзозсостсо птозозисЯє пдакоавоасте 5

ЧЕосасстса сСсзосорасоо отапесзЗатс соазсоазасе сотосозака тостесЕсай 159

Заїсстсстс асоїсвоЗЕх їстїтоосозх ссосасоозаа зессоцсзас возах 175 «210» 20 «2115 160 «212» ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МаїКег 45 «400» 20 тасстсстає сстісвзозсо стсоодтозоЗ ссасдаатов зассехасас сісакеаоКо 50 тсодаташї затосоозсо засттеакасо зосатастсе ссводатесх сстсвіоіса 120

Чаіїсіїво ссзїссосас вазазстсо саоаїсозаве 15 «2105 21 «2115» 144 «212» ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» МаїКкег 58

«400» 21 ссазатасса пбатастєста позаостста тосзссавст сбесасоїаа оказстаная во змстодпаїзаз заозЕтеаста авсаоазсєста затаєесте жсСоазани здзасазтаскад 120 длоєсаство ахотоєтова ахта в «-2105» 22 «2115 144 «212» ОМА 213» Штучна послідовність «2020» «223» МаїКег 55 «4005» 22 ссвадсасєта озтакасєсєста доазазсссса ркоссавсх стосатокво дезасталав БО астоцосоза задостасєто зсвозусето засаїтсстс дсзсозвасє зуасакоссав ї2а заотсастзо асосцїтова асо 144 «-2105» 23 -211516 «212» ОМА 213» Штучна послідовність «2020» «223» МВ51 8000 Ргітег Е «400» 23 сорасодсося сода 15 «-210» 24 «2115 20 «212» ОМА 213» Штучна послідовність «2020» «223» МВ51 8000 Ргітег В «400» 24

Що засоваєнає дзабосааях В «-2105 25 -211516 «212» ОМА «213» штучна послідовність «2020» «223» МВ51 8000 Ргоре МОВ «400» 25 теазассєсзає ссахко іб

«-2105» 26 «-2115 55 «212» ОМА 213» Штучна послідовність «2020» «223» МВ51 8000 Атріїсоп ог таткег зедиепсе «400» 26 сочасодсоса сасзасосто застсватсс акхосассс саїтсаксвх сах 55 «-2105 27 -211519 «212» ОМА 213» Штучна послідовність «2020» «223» МВ54 4000 Ргітег Е «4005» 27 асостссоса зазатстоа 19

«-210» 28 «2115 21 «212» ОМА 213» Штучна послідовність

«2020» «223» МВ54 4000 Ргітег В «400» 28 засавсозває звоасоссхтзЗа З -ї «-210» 29 -211515 «212» ОМА «213» штучна послідовність «2020» «223» МВ54 4000 Ргоре МОВ

«400» 29 тдЗассззЗзаас Часи їх «210» 30 «-2115 57 «212» ОМА 213» Штучна послідовність «2020» «223» МВ54 4000 Атріїсоп ог таїКег зедиепсе «400» 30 зсостссаса задавістоає сєзассоодас озосаастса заосастаєє сао ХУ «2105 31 -2115 3000 «2125 ОМА «2135» ГПийсит аевімит «4005 31

Чісстасоцда стазастстсє соЗсєтатаї адасаїсода даопствах окнивмоїсс бо тобаттадоао чахасссоов сацссозаєстє осатасаїсх їссоосстає тозавсосов 128 азаєсасадцва стісавввсєє содсссясоє ссоцасооца сістссстта сотоозадає ї8о заосстоосо зтссооасає татактжест ссстссцівас свастссато тааассстав о сиІстстссооа їоїстатата аассодазай ззіцожестї зозаздадссоа тсвсаваїає ЗО заксатасса їсабсвоадєта остсствочо ктаасеєст асуатстсох зоасвовісаз 3650 стсттатасх асасататсє Єсавтаттва Хсвавсасця зубок Тасстсваєс 420 ззоадчосіє пазсстовах зазасастота ес астоєтасса їхсазсставо Во асдеасвядт сопрассссс їасссозаає ссоссфих гоасвссовс агтовсост 540 зсактовово тс ссогсастих саоозсссдах сс еса втсоассався щю зсассЯаїсса фесоадаєт тжтстссссо забава сте хост соає азс ББО їосоооссяв ттсоастевт саїстаозоє зозісоасао стасассссї паоссассвов 72О їсшешттсоа ааасссодває хасасоцсоі зтаїттоасоа зозстїзатс сесдасодає 780 їсврессестіЗї дссзадаосо ссодасватс асозсовосвз соцсстазає став що асвлаттстса ддазсатсвіс сстозааєао ссссодатстї зааїссодваа садок є зо тосссавоов сораоураха зассссоїсєс сосадюесяє атастсаєсо посоотааос ЗБ созазсасзоа кхстсасстсЕ фоовазссвз зтавссссоо сесссссодає ссататссод 1059 жа созхстосас вессссдадс садісозавсс адоставосї ссцотлатоо 1охо засткассос свсоовсвакє сесесавсяєт соссстттоо сояасатаєто ааїксаесва Мо адтстстстс тттаттзода дастстоооає совастатах ссодсстозо гадазосао 12500 осдасоааси зваїтїсоактає ссвсссвоаса сссастїсаї соссасооїс дасоакткаа 1259 ссозсВятТаст тзастїтовс сссааадата тсдцасватає дозсуасває осводвовсо Ма тзсзаазасс ассостсата оопсоЗтоов содссасстс стсятасоаї ататасасод 1380 їтовсастсс Завоодаасс засшщсовсо зоосаосоза оратавсссє счнюаодав ізо адвосваваса гооЗсаксте сосок соесі ссалоассссв ссвсаїсаах зссажссссо їщКю параєатсс оддасаосасс дазаззоває засасссстоз гсзазссвсс кесзаасВщю 1550 ссвзоазсадоас сасоассцевоа хастсооваз додпасваста стасааєсссс тесазацаєа 1628 воесталисст сазсзасвас оавксквасо сосстравоз Кссзосвоаа саке ї15850 саваасозсоз сісатодсса соодсаваасо сстосасвад азосазвдвос застава 1740 сзассвоЗзаїх бтоставаєоо асводтодас сазовтсста ассассоваа засасповсх ї15о08 сопассасссс восввазоає атавсосооса савстодста ссхсзасста адслосцвова іо ссзаазносас асавссосвас зїссосасвс састасЗЗїс сазазсноса зЗазавакас 1929 зкідззодзоавс ассстсваацеє стсоососза содісастааа соїсзавїса пове стод 1959 тоссааоїсс засазоїссс засстойтса асосасзаза восазстсва зестатсоо 2040 сесаддссасє заасіспатс звссотвєзЗа захтзасцих астсссвова пзасоосаав 2100 асятасєсватє зозопзасосс одвіскссяа зсвавоусдає содбсосоко ссодавасаай 2160 тозачадаоц сосстачесв ззазасесссс ссссвозоса сзасвотасо зксцатсосе ХО сстассатасє азассасвос вагтазватст їсотассссс зовсссвата асссв 725О тстатаасас аїтвазоасстс ссодотато авестасаза свасасстіс тасавзаєує 2340 «вваасосава дессавастс зсттодсссас сусестзасо зїбассссєся дахазссвия 2408 ззатетсасо хсвісоакас аттсссстса тасоотавасс сассаєскас таасоддаєа 7460 зассасзїсо астззаїттсс зсосоотааа ссаїтацоєс звсассвото зевтвстсає 257 псстасотас вапоссоває ссстесссса плосодавак сзтасавсто ссвазаєаос 2589 зваїтсатоса сосставтсва тассттоака тозсасссаа стзхтсвває вссвастово Ме чааїссасасє кастксісда сазсаїсоост задассасса зоотссдаєс зораасетіх 27 вишсссвасто тспобосЄсаз аассдосова гобсовотяао аазасЄсссва астегасеєе 2750 їадосодата осзасаосовоа зсзаповзаса соатеавЕесе асссваав дазсссте 282й зЗзасопасзота зазссстаст сстцсттозає сзататтцає зататадаїта осасзааоцацї 28580 завістасся ссрацатсвоя здаоостзавс сстводвост засстас асо то 34 їттаїсстас оодаствадваєс сстіссодтх абаїзаосає созахяозаї садодетаса 39000 «2105 32 -2115 3000 «2125 ОМА «2135» ГПийсит аевімит «4005 32 сте ссяї: їзаксстата кесисаося діаосцаоих сКадастанаа сасастоста во сизисазнає ассостаосо соЗгсаєса свимсоста стаєтсаєто таосстВЕсв 120 посвацссзу озозасеста зізотазсах зсстаозаозса звазсосаста стаствозає 150 зктатстоса соска стсассосо стастеєтає ссазсвссза сах «й здассстсоє хастастлав ассстотота тазоаотКЕес ссїзоставтв сеастасоов що азассатаос їстсастстс саєзназато КЕсСтастстза засосттаса зеплпаїтласх зо зсасвааатсс тастсзвосас асесЕссссЕ зосстастай доайлостасс час татата 420 соаасосс зісталааса сстасрзастса зозодстосає застсогсає з соєта 45 зоасттсссоз дозавстЗї: засссвката спосте єксє зассзадаєт сстсавтад 540 зтоскстата їстазазатї атактїавастї осоросаєюі сассаяєЄтавт чбазвовато ОО совоасазоос ооссооссає сдазоїтсава Ззоостсастх сссаосзаоє ттасосзаса ооо тасзоастсас зсостссса підаосстоє зсассшадї асвостсаса сясстсессає 78О ізаксааес асстокттає асоуасасстс старссатта завовосова осотавсате тва всгоїтовасоо тїааозтазс всасасоаЕх єзаЗТтасї лавзасаттто зоатоктаса 40 чксосаосаза сКтосттсаа затсасстсто стосдстоєЄта сесовоатосо сстесестса зо азатозасасє зазззатасє зсзасаєнсс сосотодссав гсвсдатадчес атассавоїх яБО ткасцеаветЕ їсцдасовосх їтозаксєтаєс сзозаттхавя ззасаздаота кессавасатх 1020 тем соосав тсзатзасас сстоатакесє свааітсаЄк ставстст осасдацася 1080 їазосатаса сссавоадаса сататетвах стїссадсса асстатавтос зссодаосах і140 птосабтохао стсзааїтто застатосає збівавасасєє тапазавссс аква хота 1200 тазазатавс сазасовасс стат гТтсвавасїї засасзасак Тсстоктате 1250 стассттчаєс встазЗааакх кїЗлаавас ззсазазазс засооататс зас 1359 бавзацтвзоса сестссссас созазасасс аздсітахка сЗадавостс сеозссоа їво чазасттата сссвадссто сессааатоа Засазваавтї стассвсоцрос атоїковтоє 148 сетссатов каотасосоа ауїттсатаз зіжїсяоаса азутатадах їтТастазазу ЩО їїзазазасса ататсксваа Текстосоос соаотовсчи сдасадЗока сссцасатсс ї5БО зктсссатст сттосатодоа асствадсах Зсазссаатоу всзсататсє звакеессай 1528 ссазтттата сСрастааао сатотоссто гзасссазат тотовозас зїаасесся 1659 їтотововас ссоасатїсс зазавааосз тоссзааесє везацієвта сзатссосх 1749 асттстакас таїовсовка осстскетоа сан сстсо абасаєкстс сосзавасся 1500 тотдоасаотх стессвітос саатосазтос заїсваєтов тоасовосвес света 1850 ссвФщсіс їсааотлоаєс авсаастест ссосоксвато раса сстсксзаве 19550 астстастсс зазсасстос зссатдосає зчасавасіх засвотачіє хЕсадосато їзао в сесссесссс сатасєтоаса зІстєвссва соззаіасс сазсотавос аксстсаоау мо сваастасоса стестоітта оасадзазодаво зазаєтазсє псаасааусєс сесотавосх 00 тозаптаотс аїсатасосс їісакссссє ссатіатосо сазаасвата ак ссвсає 21650

Чседазазвсса соваовавсс абоовтсатс сапдазаосє чоавіїїсвао савзаївае во сеєстотзає звосатостс сСадастссст зсссцактаций ссастевеет сестгтовке те при сснюв адттозоаах атостесаст трсостсса ССС сттоа сасостсахе 2340 спзсзізасса сатссаскс сІстссозаЄ зсододааєс озааастса сеговасса 200 зксозїсаао сттсобсзас ссаїастсоо схзтосоасоа восзісвова сесаксє зящо зстсівтваа затссасзваза вайастазях бозодаасоє зїсозасаса свовотокаа явЖа поустассто дпзоастосса засотассоє зоатозсвесс доастоссва гпасатессє 2550

Фісзосовоо зхадзаоооа застої оссвасессо задососвая доастстазає 25 зосозтзаах стосоавоаса засаяїсотоа адозозааця ззазатазаа зассаваатов ню віссвкиаоо ссаззцорах соаассснио сватстоаУє садовівава свое БО їозсвїсоса датасассто сасосассса таїстасссс зтатсооос засасатово 28520 зоастоїтсоої сззїсоввоє засно сс тоазаа сссзчстова сс о зно чсозссраєс затвассато ссотісцстс ооїсУкказ ззоосто азасзессао 2540 стсвзозатас єсстатасоя атттадогоє зодаатитоа созохаєтах тастосовис 3а0ю -2105» 33 «2115 2750 «2125 ОМА «2135» ГПийсит аевімит «4005» 33 та стзївІв зассоззава часоЗїст здажшнюсоа ссвсвассяс авісатаєса 5 тсватацаста осссстводо Ксбазсстст асоакстсоє зоївозісна стстецхаесх 129 асасататст ссазсаства ссавосвстоа аокаодасЄ сасстсваєє задо 159 звасстоааї ззасвутата ссссттосте астаттасса ссазсстава зсасасавах зай содаасессс тасссозоає ссоссопаККс бЄрасассзає акхозсесех ссасковово зо мЕтсістава хсожсоскУх садосттозх осот тса атсзссався асвсесвксса 350 подсоадаст кксетссссо овсазатєстї тахакісооє Застесасас тосдоадесва 429 тхсоасітоді саїстповос зозжєссасяо ствсоссссї доссасєсада сЄсвовітсоа ВО заасстовяс їасасоазсза аташлесоЗз ззасттчаїс Засвоват ксоосестах з4о жсводадса ссодасвзатс асдасодвоса соазсстадає стоїтаксою асазккстся 500 зЗаасаїсатс сстовавіво ссссодатст азаксосодав саоцітакає сасссавода що сззазозаїта завссссотсс сосаооссає атастсзксо осоотоозасє созвасасадо 723 їстсасстст отозвзаосса дсаассссоо ссссесззасє їСататссуз Сто тво свасстоасвс ассессовлає сватсовасс аодстацеаст ссоотзатоа звосттассоєс 40 тасоовсвЕс тбссзасаст соссскетов созсатокка забєсвєтаа вессесссе о зи поїтасоз оосестосоас совастатах ссозсстовоа гоодавоасвоа дсдпасоалоз юю захтсемюс ссвссслоєв сесасттсах тоссасзаєс засозсссва ссоаасесеасе охо тавассстазс тссазазчаїта ЕсозсЗотає зазсдасзвх зсводааасо тасвоадаасс Зоо звссопстсата осдасозсолпа соазссвсстс стсатаєсзватє ататвсасоя счасвостсе 1450 чазодпзазсс затоосцасо адзосзасода зуаїаасссс їсоораодаз задсязааса 1200 зщасасстЕ свосоетсосє ссадоссссо ссасаєслях ассосссссо задав зе спрласаотоєс сазозодаах зсадссстоаз гсаовссасс стсзаасвою сс 13559 «касастоачора састтодааа Зврасавста сасвисссосс сссвзадако ззатзазссї їз садсзатозс давттсодсо Косстоаауа тгссадторга савітсостх сазосодсод і440 сЕсатдассз соосзазата сстосасаво задсаадзоє зосстзавос сазссводах 1500

Ттостадєда зсадотозає сазвзатссто оссассозаа аЗїзсозаст сеассвсссс 15850 здезавнню атасосоацся саастоадста сстсаасста засацозода ссазазасає 152о асазоссовс зіссосвсвс састасоцвсс саазасаоса здааозятсає атоазовпас 1550 аксстсзаше стсодсосаа їодїсатаза соїсадоїса ддозсдскоо тоссзвотсс 1745 зодсзастссс васєстазся зсоЗасазад засластсаа дестаєтсва сссазвоссяс 1503 заастсзс зассосаса ааттзасеах зстсссадаз бФазооасааа асатассвах 1550 здацазтцеєс Зззаєстісав зсаавасоас собісутаса ссодавасєвза соадоадавоє 15255 сзїствцтса здазассссс ссссвовоса савзсаостаєсв зссовісеасс ссбассатає ї58О азассасвосє застала ссесзссссс зозсссвзака псссададос їссаїтавсас 2343 в зєзавосстс сосовотасо азістазсаза Євасасстїс гасвзазаєої садососава 2100

Явсвассс зктаавсссас сасСтстаасо згтостттса даїтвассааз завазоєсасв гів їсасєсцотос аїтсссссса тТаспосзаєс сассоїсіє сазасодрато зассасасса о астазистсс зсоїодтзаа ссаїттасосс засвссазбто абтахастсвс зсстасакас я задассоавс сесстсссста задсудазах сабзсааста ссодвогвос аавудїсвідеся 2340 тасстаїтсав таттєтовка ствасатссва стактсодас вссзастово пзвоїссосос аю тостЕстсоо СакассоЗсь зддатсасса чоштссоацє адозасстії зосссвасто 24650 соотоєсяз зассоосооа ссісодасво звшоФфосссоа астотасціс таосодаєо 2520 чтазсзцоза йсазвзодаса сзатусьих асссаоуєсс задссскеєс датодапцта Ж5БО ааассстаст сстасттоз тазсзіїдаї захзівозта здтасазоває зозвістасса 25 совЗзаєсвов дацоствавс сстзоввосє зоасстатаки зсоасєтаїко кос стас а заастазаас сстссдассх аїтаївоасас сопватапод: задає таса 75 «210» 34 в2

«2115 1637 «2125 ОМА «2135» ГПийсит аевімит «400» 34 згасдатата сасасадтвсй асастесоаз зпзаассват зосаасоавов сазсозааоа БО їавсссстсЗ созодозваву сазазсацню осохскесоа свїсостсса звассссосса 120 сатсєсаатасє Фессссоваз автовтссезЗза сачтоассзаа задозаєвсяа зсестоаєса 150 поссасстес заоасздассо дасзодссас зссододатає ктодаваоз асзастасає 540 зассссстсс азадаїоаоОа бавозсстсао саззвсова кгс стоззоЗесе Зо затозазвсва стсосттсаа дсвасочостс асоазссасчай сазаззтасєсх псасаодаво зо сазовосвос гтазапссаа ссапаатето стааєоовса боСодассав дасесєооес 428 зссозазаої асодаєтсва ссассссвос завюоосаїта сосдосасза стос 45О0 свасстзаос воовузасся ааадсасвса зсссозсоєс сосасассає тасоцієсза 540

Ччасзосяаов адазсасаєу ааозодсаєс стсавосстє оадсосзаїтзо ссатазасоє що сазассвщоо асостодтас саваїссвос застсссаах стозісваєсо псдасзавовоє 5БО щчитсвацзсс татїттсацссс авоссзсава стсвассвас соторозаве гаасооувесЕ Тай сссацавоса соЗзсавазев тассзатада озасассозоя тсіїтсаваса звосовесоВ УВО ткохокоссоа Ззаввсзатав аззоаоцсох стзассавов пвессессєссєс сазаасасаа щі свохасодес зассоссссх ассатазсзза ссасазсває бзадїіїктсЗ басссссада що сссацізатс саЗвозсісс атсазсасаїта азасстссос суотатозає стясазаєаї о сасстестасє зазактотсво чкосзавозс сазатісаїх зесссассоє тставсоце 1029 пстссснпаЄ дассазазаий ТОїсвсосса ссоратосатх сесстсатас захзасссас 10859 сакстостаз собозтанас сасокковсх застає содтлавсса гтаозссаве 1143 ассзотсата састсвсоєс сасотасвад зсесчавескс тсссстадво сопзааатсає кю асвлостосса здадсапсаво ссзсосатосє стахсзасях сстЗататаа сзжссваста 1255 їжхсоовсасс вассощюас ссосастос стестсоцтах зсозоствод цісассвооу що їссовтсвпй засстттазс ссзастатса зпісїсзаавс соосоватсх соззахаЗао5 ї3БО пЕсссозаст отосоаєстад осозасєовта асасозоаса зоздасасов са тасс 1440 сащшттсоЗЗа сесістсраї созоаасваза ссстастесх астзаттва такспатоах їм ахозатазіа сазазвоатаза сСтзссасоа заїсзузааво пстазасссї зоазаастаоє іо статуєтаєо акті сссстасоЗа стававссст ссодссвата тадосассая 1528 зізадаттац за таса 1537 2105 35 «2115 410 «2125 ОМА «2135» ГПийсит аевімит

«4005» 35 тосстаєсяз їаіхттовата кзасавтссда статісоЗає зссвастово задсссос БО тастсєсссоо тататсоасх зодамсассвз азотссовїс здозассте зосссвасто 120 їспотоїсаз зассзоасода сссрщетао аодассссва астотосеє своосодахо цю обазсаоово асвазодаса свакОкессє асссвоЗЕкс зоосесстс задово о завссстастх сстостоах баабастзах сатасовата зіасзадаої зааїстаєса 300 созпаїсада Запеставає сстівщовавдост зоасстасаєю асоаттеєта тес тає 150 здастаазаєс сстссоУЄсх зізїзоовсас сдавтаосах сазаостаса 410 «2105» 36 «2115» 2094 «2125 ОМА «2135» ГПийсит аевімит «4005» 36 асасазаваа тассасваса соссоЗосос сатіїсзсЗа сасатосса заст сатов о асЕктсозко заттттТодаЄ ттастваває бтазазаєвоу затбастстсва сазжскєса 198 псзаїсзаєтв асассстоох зсссоузаахк сажсставії ксткосасда засствазся 10 токасссзаз Чеасвсатаке спис ксса ассзасетат асосастоза зсататасах «40

Чозастсзза сетовасизЕ зсзсасаааа торсстадаза зсссзоїтаа табатазада ЗО тазссзазсо зассстаки кссссссаза азттазсасз асасісстат сасістатох їБо тдасастзозв зассстткоз ззосаатавоа зоодсвасоза свжсвіка сссстаадої 420

Часвсяссс схвссоааоа сассадасте озгіосозова стссоаЗзех зказоавос аа тзтасссава сстоссссаа асоозсвиа заїтікаєсіа сцосятотта зізссосссс 540 зкозіаотат осовавакикс атоазіїкся засзазстат оц таста ззаїїївава БО зссакотаїс стсазаєаккто сузссзазто зсоасвосаз зас товс абссаїтссе 560 акітсттоаса сровасства зсаєфваєс забовсасає ябтбїовамкх сспассавате 220 гататосасєт зазосатота сстотавієс зазтскасоз двасоєтавє аксасстав 780 цавссспаса ттссзайаав засятзссвйаа атстазкавак сатохчакас сасхостсх ай автаасавтсат дакаосстст ЕКоазтотосс стсватасвВЕ кстссосвав псссатаає ще вихтсттссз стоссваїас акоасавісаз стзатсова савтсатари ватсестсвод ЗО сетстсззаї зоссласавс жсстетстаї сзїатвсаєє тааЕстстс адатаєтста 1020 стссзаавсас стосассато осасоодосая встідасвах зассттсавда са остсї 1050 ссссесатаєє сзсваїтстса ссзаковоло сасссааіах зассаєссес завосадста 149 сасастисто стЕзосвзазо зааозазакь озстасваса атсестсоєа азсткааах о адїсвісато сосстесвих сестссвета тосославає засни зсзссозад ТБ ассосазаов зассатоове саїтстзооаа аабсвщеятх: сазосвавах заїєстеста 1329 твдтазвосат оса ссср саа гтоассасже СЕСКСссК вказа ї1380 тїсавоїсоа овататастс састтоассоЗ їссаксктссте стмкатосе сатсорасата 1450 дісатксса стесттстсс дазсисовоо завосозаова сссатсттоз яссастовЕ їі сазасттсак содтссатає ссооаїтосоа зсоазаасаєс возакссаке азесекеска 1550 тзазазссас зазазаваст зпохсовоза вії соаз сасаєаозаї пгазооо9єо 16528 сстадчовок: зссаззсака ссосоцтчас всссооасто асозтовсат сессцтсвос 1580 часзатасаа соззапвотЯ сробассваох гсгоозодосо сададчоєтєх авасдосов 1748 пазЕссосоя зЗасосзсакс зсіоаззазоЗ авозасачат зазапяссяля асозаессво 1509 ївоадтсавод сдасоцаїїх дососааттх озоссаодаї зазостоїса засстоасах 155 засазасасо сствоавсоса сссатаєсто сессзвІа ззасвасата ково ащах мо сдассадесо засо ссза пассокєсда шесосссотс созоссоадат гесоосасс ї985о пажсзатвас сатоссЯккс зстсоаЕсеє ссзаЗзутода сссозавсУє ссаастасва 2040 акрстсткакх зсозатттва зтосоооазах асозсаласта стактаксоє во Оча -2105 37 «2115» 540 «212» ОМА «2135» ГПийсит аевімит «4005» 37 їстїстахтзаз затсасавав зазастадох гГозвозасоє сісозасаса хзоавосотай Ко папесасста сзазстосса звсетассвс песо с зозссовсов сова 120 шсавосовоав асабавазоав зоаатакттах зссвУєсста зазасосавЗа вастствайс 150 виевковзає стосевавса засаєсчзиов зосзоозаца зорадатаава дассаватоа 740 асссооівоо кСашосооззах овасссзосо сазтесвивх саддатвава стос ою тзасатозса засесоссто засесассса татстасссс віасооаос засататово зо зовкзїсвзакх сацісоооЗзс зассовзасе зкжктозака сссостеа сазана 450 ствассватс ззтавссато ссаЕксостє зассаттав затоки падсокссва Зо стосазатас ссттататоз зсссавотос сдазасастоз срвотастає саткосоває 540

Claims (1)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Ізольована нуклеїнова кислота, яка кодує білок, що забезпечує резистентність до оранжевої злакової галиці (ОМУВМ), яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота належить до однієї з груп, до якої входять: а) група 1: ї) нуклеїнова кислота, що включає послідовність 5ЕО ІЮО МО: 4 або 5, або і) нуклеїнова кислота, що кодує амінокислотну послідовність, що включає послідовність 5ЕО ІЮ МО: 6, або ії) нуклеїнова кислота, що кодує амінокислотну послідовність, яка включає принаймні один мотив СС, один мотив МВ5ЗАКС і один мотив І КК, причому послідовність, що кодує мотив І КК,

має принаймні 82 95 ідентичності із фрагментом нуклеїнової кислоти, як зображено у послідовності 5ЕО ІЮ МО: 8, або їм) фрагмент нуклеїнової кислоти, як зображено у послідовності ЗЕО ІЮО МО: 8, р) група 2: ї) нуклеїнова кислота, що включає послідовність 5ЕО ІЮО МО: 1 або 2, або і) нуклеїнова кислота, що кодує амінокислотну послідовність, що включає послідовність 5ЕО ІЮ МО: 3, або ії) нуклеїнова кислота, що кодує амінокислотну послідовність, яка включає принаймні один мотив СС, один мотив МВ5-АКС і один мотив І КК, причому послідовність, що кодує мотив І КК, має принаймні 78 95 ідентичності із фрагментом нуклеїнової кислоти, як зображено у послідовності 5ЕО ІЮ МО: 7, або їм) фрагмент нуклеїнової кислоти, як зображено у послідовності 5ЕО ІЮ МО: 7.

2. Ізольована амінокислотна послідовність, закодована нуклеїновою кислотою за п. 1.

3. Конструкт нуклеїнової кислоти, що включає нуклеїнову кислоту за п. 1, який відрізняється тим, що зазначена нуклеїнова кислота клонована нижче гетерологічного промотору, що є функціональним в клітині рослини. «онструкт нуклеїнової кислоти за п. 3.

5. Клітина-хазяїн, що включає принаймні конструкт нуклеїнової кислоти за п. 3.

6. Трансгенна рослина або частина трансгенної рослини, що включає принаймні одну клітину за п. 5.

7. Трансгенна рослина за п. 6, яка відрізняється тим, що рослина є пшеницею.

8. Спосіб забезпечення або покращення резистентності до оранжевої злакової галиці (ОМУВМ) в рослині, який включає такі стадії: а) трансформація принаймні клітини рослини або тканини рослини із вектором, що включає як трансген конструкт нуклеїнової кислоти за п. 3; р) культивація клітини (клітин) або тканини рослин, які трансформуються для генерації трансгенної рослини, що включає принаймні клітину, в геномі якої наявний принаймні зазначений конструкт нуклеїнової кислоти, який відрізняється тим, що зазначена трансгенна рослина виявляє знов набуту або покращену резистентність у порівнянні із рослиною, що не Зо включає такий конструкт нуклеїнової кислоти.

9. Спосіб ідентифікації трансгенної рослини, що може застосовуватися в процесі селекції для одержання рослини із знов набутою або покращеною резистентністю, що включає стадію ідентифікації у популяції рослин тих рослин, які включають конструкт нуклеїнової кислоти за п.

З.

10. Спосіб за будь-яким з пп. 8 або 9, який відрізняється тим, що зазначена рослина належить до злакових.

11. Спосіб за п. 10, де зазначена злакова рослина являє собою пшеницю.

12. Маркер у локусі 5іт1, визначений маркерами Ма с6б957 32 і Ехсаїїриг с1787 1301, де зазначений маркер Ууа с6957 32 являє собою ЗЕО ІЮ МО: 9 або 5ЕО ІЮО МО: 10, і зазначений маркер Ехсаїїриг с1787 1301 являє собою 5ЕО ІЮО МО: 11 або 5ЕО ІО МО: 12, цільної збірки геномів ІМС (УС МУОА") геном Спіпезе Зргіпо, і пов'язаний із резистентністю до 5т!1.

13. Маркер за п. 12, вибраний серед ЗЕО ІЮ МО: 9, 11, 13, 15, 17,19121.

14. Спосіб ідентифікації рослини, резистентної до оранжевої злакової галиці (ОМУВМ), у порівнянні із рослинами, що не включають нуклеїнову кислоту за п. 1, який відрізняється тим, що включає стадії: а) ізоляція геномної послідовності ДНК або нуклеїнової кислоти РНК, і р) ідентифікація наявності нуклеїнової кислоти за п. 1 або наявності резистентних алелів і/або відсутності чутливих алелів маркера у локусі 5т1, визначеного маркерами М/а с6б957 32 і Ехсаїїбиг с1787 1301, де зазначений маркер Ууа с6957 32 являє собою 5ЕО ІЮО МО: 9 або 5ЕО ІО МО: 10, і зазначений маркер Ехсаїїриг с1787 1301 являє собою 5ЕО ІЮО МО: 11 або 5ЕО ІО МО: 12, цільної збірки геномів ІМС (ІМС МА") геном Спіпезе Зргіпа.

15. Спосіб за п. 14, який відрізняється тим, що резистентні алелі є послідовностями ЗЕО ІЮ МО: 9, 11, 13, 15, 17, 19 і 21.

16. Застосування послідовності ЗЕО ІЮ МО: 7 або послідовності ЗЕО ІЮ МО: 8 як проби для ідентифікації та ізоляції ортологів генів НСА7 або НРСАг, що є кодуючими відносно послідовності зЗЕО ІЮ МО: З і послідовності зХЕО ІЮ МО: 6 у геномі рослини.

17. Застосування нуклеїнової кислоти за п. 1 або фрагмента зазначеної нуклеїнової кислоти як засобу скринінгу для ідентифікації ліганд-пептиду, що взаємодіє із білком, кодованим нуклеїновою кислотою за п. 1.

18. Спосіб модифікації нуклеїнової кислоти за п. 1, який покращує функцію білка, кодованого зазначеною нуклеїновою кислотою, і покращує резистентність до оранжевої злакової галиці (ОМУВМ). БЕ І т ї . КУ

Фіг. 1 шк, ї ї ї ї ї ї ї ї ї ї ї ї ї ї ї ї х . саму І фони ОО фроенеуи МУК ВЕБ ЯУКНІ в і ці У я : Ці х і НУ х : 15 т і І 5 : 1 т : пої х і пі х х : жі: ої З схо да ЕЕ МН, с КЕ ВВ КЕ і Б і пкх Пд Внне хо п. Тк. ЯНА пк Ь: о и он і. : У і ЖЕ : с : ОЇ У КЕ; ші Моди ху кткм МЕТ КА х її х її Х ХЕ

:

1. В 1 її 1 ЩЕ Р іа їй

Фіг. 2

Фіг. 2 х КЕ "хі х х. х й Ех Кк Е х дк х хх. їхя Т ж щ. ХЕ й х їх КУ ОКО М ПИ ПритиЕ ПИЛИДМИ КИ І Її КОЖ ХМК пк М пита РО БОфОЕККХАХ ше ооо ОО ПЕН ОБЛ ЗХ І с ЖЖ ї ї шо о : ще ОКХ ПУБТЖЖАКХ ЖЖ ІМ . КІЖКЕКеХ ХВО пп З с ! : КОЖ ХХ ПІ в ЇХ ТИВ : ОБЖ ЖММУХХММ 1 ї г їх х ск Орос при ХО ! АК З я ОБОХ КОМ жк Как Ци і : ТАЖ ОК КМ й ї ше. і 1 ЖЖ КЕККК М МОЖЕ В ї К ши о я і Зк ХК х х КЕ З ї я З сс п ЩІ ПО ВККВ В ММ ОО с о. і ЯН я ТОКІО - ї КЕ ЕЕ п : ГОНОК СНУ : ОБОХ ПВ ДИ ї ша нн ї Не КАК : МКК ри ї ГО ХМК ОК К о х я х ОО ПТК КК ПІВ ТОГО ПЕ оев и : ТОЖ ЖЕК Що СЕ пт І БОЖЕ дея ЖЕ с РОБЛЖММКУ п ши ї РОМОМ ЕХМ парти дя ї я ЕВ КА АМКУ АААН КК КР ААААА ХО ле х - з ж Ж 5 КЕ М Ох х мок жОх ря

Фіг. З