UA125206C2 - Опосередковувана антитілом нейтралізація вірусу чікунгунья - Google Patents

Опосередковувана антитілом нейтралізація вірусу чікунгунья Download PDF

Info

Publication number
UA125206C2
UA125206C2 UAA201711061A UAA201711061A UA125206C2 UA 125206 C2 UA125206 C2 UA 125206C2 UA A201711061 A UAA201711061 A UA A201711061A UA A201711061 A UAA201711061 A UA A201711061A UA 125206 C2 UA125206 C2 UA 125206C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
sho
kim
shi
mkk
Prior art date
Application number
UAA201711061A
Other languages
English (en)
Inventor
Джеймс Е. Кроу
Скотт А. Сміт
Скотт А. Смит
Теренс Дермоді
Теренс Дермоди
Лорі Сілва
Лори Силва
Original Assignee
Вандербілт Юніверсіті
Вандербилт Юниверсити
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Вандербілт Юніверсіті, Вандербилт Юниверсити filed Critical Вандербілт Юніверсіті
Publication of UA125206C2 publication Critical patent/UA125206C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1081—Togaviridae, e.g. flavivirus, rubella virus, hog cholera virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
    • G01N2333/181—Alphaviruses or Group A arboviruses, e.g. sindbis, VEE, EEE, WEE or semliki forest virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)

Abstract

Винахід стосується антитіла, що зв'язує і нейтралізує вірус чікунгунья (CHIKV).

Description

За даною заявкою запитується пріоритет попередньої заявки США з серійним номером Мо 62/147354, поданої 14 квітня 2015 року, повний зміст якої включено в даний опис шляхом посилання.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Даний винахід був здійснений за підтримки уряду у формі грантів з номерами КОВ8 АІ103038,
Е32 АІ096833 і 054 АІ057157, виданих Маїййопаї! Іпзійшев5 ої Неакй. Уряд має певні права на винахід. 1. Галузь винаходу
Даний винахід належить, головним чином, до галузей медицини, інфекційних захворювань і імунології. Більш конкретно, винахід належить до антитіл, які нейтралізують вірус чікунгунья. 2. Рівень техніки
Вірус чікунгунья (СНІКМ) являє собою оболонковий вірус з позитивною змістовою РНК роду альфавірусів сімейства Тодамігдає, і він передається комарами Аеєеаевз. Зрілий віріон СНІКМ містить два глікопротеїни: Е1 і Е2, які утворюються з білка-попередника рб2-Е1 за допомогою протеолітичного розщеплення. Е2 функціонує при прикріпленні вірусу, у той час як Е!1 опосередковує злиття мембран для забезпечення входження вірусу (Кіейап еї а/, 2010). У людини інфекція СНІКМ викликає гарячку і біль у суглобах, який може бути важким і у деяких випадках триває роками (Зспійе еї а/, 2013; біззоКо еї а/, 2009; єгарієз еї а/., 2009). СНІКМ викликав спалахи у більшості регіонів Африки південніше Сахари, а також в частинах Азії,
Європи і Індійського і Тихого океанів. У грудні 2013 року відбулася перша передача СНІКМ у
Західній півкулі, причому автохтонні випадки були ідентифіковані на острові Святого Мартіна (СОС 2013). Вірус швидко поширився практично на всі острови Карибського моря, а також на
Центральну, Південну і Північну Америку. Повідомлялося про більше мільйона передбачуваних випадків СНІКМ у Західній півкулі менше ніж за рік, і була документально підтверджена ендемічна передача більше ніж в 40 країнах, у тому числі в США (СОС 2014). У цей час не існує ліцензованої вакцини або противірусної терапії для попередження або лікування інфекції
СНІКУ.
Хоча механізми захисного імунітету проти інфекції СНІКМ зрозумілі не до кінця, гуморальна відповідь контролює інфекцію і обмежує ушкодження тканин (Спи еї а/., 2013; НайПепдага еї а).
Зо 2014; Намтап еї а!/., 2013; Кат еїга/,, 20120; І ит ега/., 2013; Раї еї а/.,, 2013). Імунний у-глобулін людини нейтралізує інфекційність в клітинах, що культивуються, і перешкоджає захворюваності у мишей при введенні через аж до 24 годин після інокуляції вірусу (Соцаегс еї а/.,, 2009).
Описано декілька моноклональних антитіл (тАБр) миші, які нейтралізують інфекцію СНІКМ (Вгейіп еї а/,, 2008; Со еї а/., 2013; Мабвгіпоці еї а/., 2014; Раї еї а/!, 2013; Раї еї а! 2014), причому деякі мали ефективність при використанні у комбінації для лікування мишей або приматів, що не є людиною, після зараження СНІКМ (Раї еї а/.,, 2013; Раї еї а/.,, 2014). Для порівняння, була описана обмежена кількість тАб людини проти СНІКМ, широка більшість з яких демонструють помірну нейтралізуючу активність (Бопад еї а/., 2014; Нгіс еї а/., 2013; І ее еї а!., 2011; Земагаздан ега!., 2013; Мапег ега!., 2011).
СУТЬ ВИНАХОДУ
Таким чином, відповідно до даного винаходу передбачається спосіб виявлення інфекції вірусом чікунгунья у суб'єкта, що включає (а) приведення у контакт зразка від зазначеного суб'єкта з антитілом або фрагментом антитіла, що має послідовності СОМ парних важкого і легкого ланцюгів клонів з таблиць З і 4, відповідно; і (Б) виявлення глікопротеїну Е2 вірусу чікунгунья у зазначеному зразку по зв'язуванню зазначеного антитіла або фрагмента антитіла з
Е2 у зазначеному зразку. Зразок може являти собою рідину організму, таку як кров, мокротиння, слізна рідина, слина, слиз або сироватка, сеча або кал. Виявлення може включати ЕГІЗА, КІА або вестерн-блотинг. Крім того, спосіб може включати виконання стадій (а) і (Б) другий разі визначення зміни рівнів Е2 у порівнянні з першим аналізом. Антитіло може кодуватися парними варіабельними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 1, або може кодуватися варіабельними послідовностями легкого і важкого ланцюгів, що володіють 7095, 8095, 9095 або 9595 ідентичністю з парними варіабельними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 1, або може мати варіабельні послідовності легкого і важкого ланцюгів, що характеризуються парними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 2, або, що володіють 7095, 80905, 9090 або 9595 ідентичністю з парними послідовностями клонів з таблиці 2. Фрагмент антитіла може являти собою рекомбінантне антитіло 5СЕм (одноланцюжковий варіабельний фрагмент), Еар- фрагмент, Е(аб')»-фрагмент або Еу-фрагмент. Антитіло може являти собою Ідс-антитіло і/або химерне антитіло.
В іншому варіанті здійснення передбачається спосіб лікування суб'єкта, інфікованого бо вірусом чікунгунья, або зменшення імовірності інфікування суб'єкта що має ризик контактування з вірусом чікунгунья, що включає доставку зазначеному індивідууму антитіла або фрагмента антитіла, що мають послідовності СОК парних важкого і легкого ланцюгів клонів з таблиць З і 4, відповідно. Антитіло може кодуватися парними варіабельними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 1, або може кодуватися варіабельними послідовностями легкого і важкого ланцюгів, що володіють 7095, 8095, 9095 або 9595 ідентичністю з парними варіабельними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 1, або може мати варіабельні послідовності легкого і важкого ланцюгів, що характеризуються парними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 2, або, що володіють 7095, 8095, 9095 або 9595 ідентичністю з парними послідовностями клонів з таблиці 2. Фрагмент антитіла може являти собою рекомбінантне антитіло ЗсЕм (одноланцюжковий варіабельний фрагмент), Еар-фрагмент,
Кар')»--фрагмент або Еу-фрагмент. Антитіло може являти собою Ідс-антитіло і/або химерне антитіло. Антитіло або фрагмент антитіла можна вводити до інфікування або після інфікування.
Доставка може включати введення антитіла або фрагмента антитіла, або генетичну доставку за допомогою послідовності РНК або ДНК або вектора, що кодують антитіло або фрагмент антитіла.
У наступному варіанті здійснення передбачається моноклональне антитіло, де антитіло характеризується послідовностями СОЄ. парних важкого і легкого ланцюгів клонів з таблиць З і 4, відповідно. Антитіло може кодуватися парними варіабельними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 1, або може кодуватися варіабельними послідовностями легкого і важкого ланцюгів, що володіють 7095, 8095, 9095 або 9595 ідентичністю з парними варіабельними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 1, або може мати варіабельні послідовності легкого і важкого ланцюгів, що характеризуються парними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 2, або, що володіють 7095, 8095, 9095 або 9595 ідентичністю з парними послідовностями клонів з таблиці 2. Фрагмент антитіла може являти собою рекомбінантне антитіло ЗсЕм (одноланцюжковий варіабельний фрагмент), Раб-фрагмент, Е(аб')»-фрагмент або
Ем-фрагмент. Антитіло може являти собою химерне антитіло або біспецифічне антитіло, яке націлено на антиген вірусу чікунгунья, відмінний від глікопротеїну. Антитіло може являти собою
Іо. Крім того, антитіло або фрагмент антитіла містить пептид, що проникає в клітину, і/або являє собою інтраантитіло.
Зо Також передбачається гібридома або сконструйована клітина, що кодує антитіло або фрагмент антитіла, де антитіло або фрагмент антитіла характеризується послідовностями СОК парних важкого і легкого ланцюгів клонів з таблиць З і 4, відповідно. Антитіло або фрагмент антитіла може кодуватися парними варіабельними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 1, або може кодуватися варіабельними послідовностями легкого і важкого ланцюгів, що володіють 7095, 8095, 9095 або 9595 ідентичністю з парними варіабельними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 1, або може мати варіабельні послідовності легкого і важкого ланцюгів, що характеризуються парними послідовностями клонів, як зазначено в таблиці 2, або, що володіють 7095, 8095, 9095 або 9595 ідентичністю з парними послідовностями клонів з таблиці 2. Фрагмент антитіла може являти собою рекомбінантне антитіло 5СЕм (одноланцюжковий варіабельний фрагмент), Баб-фрагмент, Е(аб'я»-фрагмент або Ем-фрагмент. Антитіло може являти собою химерне антитіло і/або дО. Крім того, антитіло або фрагмент антитіла може містити пептид, що проникає в клітину, і/або являти собою інтраантитіло.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить пари варіабельних послідовностей важкого і легкого ланцюгів, вибрані з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 53/54, 55/56, 57/58, 59/60, 61/62, 63/64, 65/66, 67/68, 70/71, 72/13, тА/15, 76/77, 81/82, 83/84, 85/86, 87/88, 89/90, 91/92, 93/94, 95/96 і 97/98.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 103, 104 ї 105, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМ З 5ЕО ІО МО: 187, 188 і 189, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 106, 107 і 108, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 190, 191 і 192, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу 60 чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 109, 110 і
111, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 193, 194 і 195, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІО МО: 112, 1131 114, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОКІ З 5ЕО ІЮО МО: 196, 197 і 198, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКНаО2 ї СОКНЗ 5ЕО ІО МО: 115, 116 і 117, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 199, 200 і 201, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІО МО: 118, 1191 120, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 202, 203 і 204, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 121, 122 і 123, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОКІ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 205, 206 і 207, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 124, 1251 126, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 208, 209 і 210, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 130, 131 ї 132, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМ З 5ЕО ІЮО МО: 211, 212 і 213, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 ї СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 133, 134 і 135, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 214, 215 і 216, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІО МО: 136, 137 і 138, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 217, 218 1 219, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 139, 140 і 141, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ2 і СОКІ З 5ЕО ІО МО: 220, 271 і 222, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКНаО2 ї СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 151, 152 і 153, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 223, 224 і 225, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 154, 1551 156, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМ З 5ЕО ІО МО: 226, 227 і 228, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу 60 чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 157, 158 1
159, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 229, 230 і 231, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 160, 161 їі 162, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 232, 233 і 234, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІО МО: 163, 164 і 165, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОКІ 3 5ЕО ІЮО МО: 235, 236 і 237, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКНаО2 ї СОКНЗ 5ЕО ІО МО: 166, 167 і 168, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 238, 239 і 240, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІО МО: 169, 170 і 171, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 241, 242 і 243, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 172, 173 ї 174, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОКІ 2 і СОКІ З 5ЕО ІО МО: 244, 245 і 246, відповідно.
В одному варіанті здійснення виділене моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з глікопротеїном Е2 вірусу чікунгунья, містить амінокислотні послідовності СОКНІ, СОКН2 і СОКНЗ 5ЕО ІЮО МО: 175, 176 і 177, відповідно, і амінокислотні послідовності СОКІ 1, СОМКІ 2 і СОМКІ З 5ЕО ІО МО: 247, 248 14 249, відповідно.
Використання форми однини разом з терміном "що містить" у формулі винаходу і/або описі може означати "один", але також воно відповідає значенню "один або декілька", " щонайменше один" і "один або більше одного". Слово "приблизно" означає плюс або мінус 595 від зазначеної величини.
Передбачається, що будь-який спосіб або композиція, описані в даному описі, можуть бути здійснені за допомогою будь-якого іншого способу або композиції, описаних у даному описі. Інші завдання, ознаки і переваги даного винаходу стануть очевидними з наступного докладного опису. Однак слід розуміти, що докладний опис і конкретні приклади, хоча і вказують на конкретні варіанти здійснення винаходу, наведені тільки як ілюстрація, оскільки різні зміни і модифікації, що є частиною суті і обсягу винаходу, стануть зрозумілі фахівцям в даній галузі з даного докладного опису.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
Наступні креслення є частиною даного опису і включені для подальшої демонстрації визначених аспектів даного винаходу. Винахід може стати більш зрозумілим за допомогою одного або декількох з цих креслень у комбінації з докладним описом конкретних варіантів здійснення, описаних у даному описі.
Фіг. Т1А-С. Структурний аналіз залишків Е2, важливих для зв'язування тАБб. (Фіг. 1А)
Вирівнювання послідовностей Е2 зі штамів СНІКМ, використаних в цьому дослідженні. Назва штаму зазначена ліворуч (527, БО ІЮО МО: 1, номер доступу АЕ369024.2; 5115649, номер доступу 5О189061;1К2006 ОРУ1, номер доступу 00443544.2; 99659, номер доступу КоО451624;
КЗИО1, номер доступу НМО45797.1; МІ 64 ІБНЗ5, номер доступу НМО45786.1). Номера над послідовностями відповідають положенню амінокислот в зрілому білку Е2. Амінокислоти, ідентичні амінокислотам штаму 527, зазначені пунктирною лінією. Домени Е2, визначені з кристалічної структури гетеродимера Е2/ЕТ СНІКМ (Моз5 еї а)!., 2010), представлені на діаграмі над вирівнюванням послідовностей і кодуються кольором (синій: домен А, фіолетовий: Д- стрічковий з'єднувальний елемент, зелений: домен В, рожевий: домен С, темно-сірий: ділянки, не присутні в кристалічній структурі). Положення залишків, в яких заміна на аланін порушує бо зв'язування тАр, як визначають за допомогою аланін-сканувального мутагенезу, позначені точками, що кодуються кольором, над вирівнюванням для кожного конкретного антитіла.
Залишки, які впливають на зв'язування множини антитіл, зазначені квадратами, затіненими сірим кольором, причому чим більш темною є тінь сірого кольору, тим на більшу кількість антитіл впливає заміна на аланін даного залишку. (Фіг. 18) Положення залишків, необхідних для зв'язування тАб, картованих на кристалічній структурі зрілого глікопротеїнового комплексу оболонки (РОВ ІО 3М41). Показаний вигляд збоку стрічкового креслення одного гетеродимера
ЕЛ/Е2, причому Е1 забарвлений блакитним кольором, а домени Е2 забарвлені так, як на панелі
А. Бічні ланцюги амінокислот, необхідних для зв'язування антитіла, показані як форми, що заповнюють простір, і кодуються кольором для кожного з 20 індивідуальних антитіл згідно з легендою на панелі А. Залишки, які впливають на зв'язування множини антитіл, представлені у вигляді тіней сірого кольору, причому чим більш темною є тінь, тим на більшу кількість антитіл впливає заміна на аланін у даному залишку (легенда, показана ліворуч). (Фіг. 1С) Вигляд зверху гетеродимера Е1/Е2, поверненого на 902 відносно структури на фіг. 18.
Фіг. 2А-В. Механізм нейтралізації за допомогою тАб людини проти СНІКМ. (Фіг. 2А) Аналізи нейтралізації до і після прикріплення. МКР 5115649 (ї) інкубували з зазначеними тАБ (включаючи СНК-152, позитивне контрольне тАбБ) при 42С протягом 1 години перед додаванням до попередньо охолоджених клітин Мего, а вірус, що потім не зв'язався, вилучали за допомогою трьох промивань (до прикріплення; забарвлене коло), або (ії) їм дозволяли адсорбуватися на попередньо охолоджені клітини Мего при 47"С протягом 1 години, а потім додавали зазначені тАБб при 4"С протягом 1 години (після прикріплення; незабарвлені кола). (Фіг. 28) Аналіз ЕРЕУММО. МЕР 5115649 адсорбували на попередньо охолоджені клітини Мего при 42Сб протягом 1 години, а потім додавали зазначені тАбБ (включаючи СНК-152, позитивне контрольне тАБ миші) на 1 годину. Вірус, що не зв'язався, вилучали і клітини піддавали впливу середовища з низьким вмістом рН (рн 5,5; забарвлені кола) при 37"С протягом 2 хв для запуску злиття вірусу з плазматичною мембраною. Як негативний контроль клітини піддавали впливу середовища з нейтральним значенням рН (рн 7,4; незабарвлені кола) при 372С протягом 2 хв.
Як для фіг. 2А, так і для фіг. 28, клітини інкубували при 372С до 18 годин після інфікування і
СІЕР-позитивні клітини кількісно визначали з використанням флуоресцентної мікроскопії. Дані об'єднані для двох незалежних експериментів, кожний з яких проводився в трьох екземплярах.
Зо Фіг. ЗА-О. Терапія за допомогою тАб людини проти летальної інфекції СНІКМ у мишей //паг" . (Фіг. ЗА) Мишам вводили 50 мкг зазначеного специфічного до СНІКМ або контрольного тАбБ за допомогою внутрішньочеревинної ін'єкції за 24 години до летального зараження СНІКМ (л-3-6 мишей на досліджуване тАбБ). (Фіг. ЗВ) Мишам вводили 50 мкг зазначеного специфічного до
СНІКМ або контрольного тАбБ за допомогою внутрішньочеревинної ін'єкції через 24 години після летального зараження СНІКМ (п-4-6 мишей на досліджуване тАб). (Фіг. ЗС) Мишам вводили 250 мкг зазначеного специфічного до СНІКМ або контрольного тАБб за допомогою внутрішньочеревинної ін'єкції через 48 годин після летального зараження СНІКМ (п-7-10 мишей на досліджуване тАБ). (Фіг. 300) Мишам вводили 250 мкг зазначеної пари специфічних до СНІКМ тАб або контрольне тАБб за допомогою внутрішньочеревинної ін'єкції через 60 годин після летального зараження СНІКМ (л-8 мишей на досліджувану комбінацію тАб, за винятком 4)2142НІ1, для якої л.-3). Для монотерапії за допомогою 4921 або 4М12, вводили однократну дозу 500 мкг (п-4-5 мишей на досліджуване тАб).
Фіг. 4. Папульозний висип у період гострого проявлення. Індивідуум надійшов до дільничного терапевта з гарячкою (1022) тривалістю три доби з одночасним розвитком білатерального болю в суглобах ліктів і пальців і висипом. Лікар відзначив виступаючий, несверблячий, згасаючий папульозний висип (фотографія представлена на фіг.) на спині, груді і животі.
Фіг. 5. Ідентифікація груп конкуруючих тАбБ. Для віднесення тАбБ до груп конкуренції використовували кількісне конкурентне зв'язування з використанням біошарової інферометрії на основі Осіеї. Наконечники біосенсора з антитілами проти пента-Нів5, покриті іммобілізованим ектодоменом Е2 СНІКМ-ЇК2006 занурювали в лунки, що містили первинне тАб, а потім занурювали в лунки, що містили конкуруючі тАб. Показані величини являють собою відсоткове зв'язування конкуруючого тАб у присутності першого тАб (визначене за допомогою порівняння максимального сигналу конкуруючого тАБр, внесеного після першого комплексу тАб, з максимальним сигналом конкуруючого тАБ окремо). МАБ вважали високо конкуруючим за зв'язування з однією ділянкою, якщо максимальне зв'язування конкуруючого тАб знижувалося до «3095 від його зв'язування без конкуренції (чорні квадрати) або таким, що демонструє часткову конкуренцію, якщо зв'язування конкуруючого тАбБ знижувалося до «7095 від його зв'язування без конкуренції (сірі квадрати). МАЮ вважали неконкуруючими, якщо максимальне бо зв'язування конкуруючого тАр становило »7095 від його зв'язування без конкуренції (білі квадрати). Було ідентифіковано чотири групи конкурентного зв'язування, зазначених кольоровими рамками. Відповідні основні антигенні ділянки для тАб, виявлені за допомогою аланін-сканувального мутагенезу (таблиця 1 і фіг. 1ТА-С), узагальнено представлені в стовпчиках праворуч від матриці конкуренції. ОА вказує на домен А; ОВ вказує домен В, е вказує як на дугу 1, так і на дугу 2; МТ означає, що тестування не проводили; "не реагує" вказує на те, що тАб не реагувало з білками оболонки дикого типу; "без зниження" вказує на те, що тА зв'язувалося з білками Е дикого типу, однак ні для якого мутанта не було відзначено відтвореного зниження. Дані об'єднані для одного експерименту, причому для кожного тА окремо було декілька результатів зчитування і для тАр у комбінації з кожним конкуруючим антитілом був один результат зчитування.
Фіг. бА-Е. Картування епітопів тАБр проти СНІКМ високого розрізнення. (А) Конструювали бібліотеку аланін-сканувальних мутацій для білка оболонки СНІКМ, що охоплює 910 мутацій
Е2/Е1, де кожну амінокислоту індивідуально піддавали мутації на аланін. Кожна лунка кожного планшета, що є матрицею мутацій, містить один мутант з визначеною заміною. Представлені репрезентативні результати реактивності в 384-лунковому планшеті. В кожний планшет було включено вісім позитивних (Е2/ЕЇ дикого типу) і вісім негативних (що імітує трансфекція) контрольних лунок. (В) Для картування епітопів клітини НЕК-293Т людини, що експресують бібліотеку мутацій оболонки СНІКМ, досліджували відносно до імунореактивності з використанням МАр (МАр 40520, представлене в даному описі), що представляє інтерес, і кількісно визначали з використанням високопродуктивного протокового цитометра Іпіеїсуї.
Спочатку ідентифікували клони з реактивністю «3095 відносно Е2/Е1Т СНІКМ дикого типу, але у той самий час з »7095 реактивністю відносно до відмінного МАБ проти Е2/Е1 СНІКМ як ключових для зв'язування МАБ. (С) Мутація чотирьох індивідуальних залишків знижувала зв'язування 4020 (червоні стовпчики), але не впливала в значній мірі на зв'язування інших залежних від конформації МАБ (сірі стовпчики) або поліклонального антитіла кролика (ГРАБ, подарунок від
ІВТ Віозегмісе5). Стовпчики відповідають середньому значенню і діапазону для щонайменше двох повторюваних точок даних. (0) Епітопи нейтралізуючих МАБ з РКМТ5О «1000 нг/мл картовані на тривимірних кристалічних структурах Е2/Е1 (РОВ Епігу 2ХЕС). Усі епітопи, що нейтралізуються, картуються на відкритих дистальних відносно мембрани доменах Е2/Е1. Для
Зо ясності кожна індивідуальна гетеродимерна субодиниця Е2/Еї показана кольором, що відрізняється. Високоїмуногенні ділянки в доменах А і В Е2, які містять ключові залишки епітопів для множини МАБ, зображені червоним кольором на одиничній субодиниці Е2.
Фіг. 7. Структурний аналіз залишків Е2, важливих для зв'язування тАб, для антитіл, картованих на групах конкуренції. Положення залишків, необхідних для зв'язування тА людини або миші з різних груп конкуренції (фіг. ТА-С), картоване на кристалічній структурі ЕТ/Е2 (РОВ ІЮ 2ХЕВ). Просторова модель тримера Е1/Е2, в якій Е1 забарвлений білим кольором і кожний мономер Е2 забарвлений ясно-сірим, темно-сірим або чорним. Залишки, необхідні для зв'язування антитіла, кодуються кольором згідно з групою(ами) конкуренції, до якої вони належать. Червоним кольором зазначені залишки 0117 і 1121, які потрібні для зв'язування 5М23 і належать до групи конкуренції 1. Синім кольором зазначені залишки К80 і (5253, які потрібні для зв'язування за допомогою І0б або 5М16, і належать до групи конкуренції 2. Зеленим кольором зазначені 0184, 5185, 1190, М197, К198, 199, 209, 1210, Т212, ії 1217, які потрібні для зв'язування за допомогою СНК-285, СНК-88 або ЗА2, і належать до групи конкуренції 3.
Жовтогарячим кольором зазначений залишок НІ8, який потрібен для зв'язування 5РЕ19, і належить до групи конкуренції 4. Фіолетовим кольором зазначені залишки Е24, АЗЗ, І 34, КЗ6б,
М50, 063, Е100, Т155, які потрібні для зв'язування за допомогою 5М23, СНК-84 або СНК-141, і належать до груп конкуренції 1 і 2. Синьо-зеленим кольором зазначені залишки 758, 059, 060, 68, 174, 077, Т191, М193 ї К234, які потрібні для зв'язування за допомогою 1НІ12 і належать до груп конкуренції 2 і 3. Коричневим кольором зазначені залишки 071, які потрібні для зв'язування за допомогою СНК-84 і 1Н12, і належать до груп конкуренції 1, 2 і 3. Жовтим кольором зазначені залишки (158, 071, М72, 174, Р75, А7б, 077, 5118 і К119) які складають передбачуваний зв'язувальний рецептор домен (КВО), за винятком залишку 071, який належить до груп конкуренції 1, 2 і 3. На верхній панелі показаний загальний вигляд тримера, на середній панелі показаний вигляд збоку тримера під кутом 45 градусів по осі х відносно структури на верхній панелі, і на нижній панелі показаний вигляд збоку тримера під кутом 45 градусів по осі х відносно структури на середній панелі.
Фіг. 8. Механізм нейтралізації за допомогою двох тАБр людини проти СНІКУ, 2НІ1 або 4М12.
Аналізи нейтралізації до і після зв'язування. Репліконні частинки вірусу (МКР) СНІКМ штаму 5115649 (1) інкубували з зазначеними ітАб (2НІ1 або 4М12) перед додаванням до попередньо 60 охолоджених клітин Мего, а вірус, що потім не зв'язався, вилучали за допомогою трьох промивань (до прикріплення; забарвлене коло), або (2) їм дозволяли адсорбуватися на попередньо охолоджені клітини Мего, а потім додавали зазначені тАб (після прикріплення; незабарвлені кола). Ці тАБ здійснювали нейтралізацію при додаванні до або після прикріплення.
Фіг. 9. Модель гострого захворювання на мишах Вб. Продуковані СНО рекомбінантного антитіла, введені на 1 добу, знижують рівень вірусу в гомілковостопному суглобі у порівнянні з введенням контрольного антитіла на Ож-3. Експерименти проводили на мишах УМТ у віці 4 тижнів після підшкірної інокуляції 103 ФУО СНІКУМ-І К. Антитіла вводили на О1 і тканини збирали на
Ор для титрування за допомогою аналізу приглушення фокусоутворення.
Фіг. 10. Модель гострого захворювання на мишах Вб. тАб 4М12 проти СНКУ, продуковане в клітинах СНО, введене системно на З добу, знижує титр вірусу в гомілюовостопних суглобах.
Експерименти проводили у мишей УУТ у віці 4 тижнів після підшкірної інокуляції 10е3 ФУО
СНІКМ-І ЯК. Антитіла вводили на 0-3 і тканини збирали на 05 для титрування за допомогою аналізу приглушення фокусоутворення.
Фіг. 11. Модель хронічного захворювання на мишах Вб. тАб проти СНКУ, продуковані в
СНО, введені системно на З добу, знижують рівень геномних еквівалентів вірусу на 28 добу в гомілковостопних суглобах. Експерименти проводили у мишей М/Т у віці 4 тижнів після інокуляції 1бе3 ФУО СНІКМ-І ЕК. Антитіла (300 мкг) вводили О-3 і тканини збирали на ЮО-28 для аналізу за допомогою кЗТ-ПЛР.
Фіг. 12. Модель летального захворювання на мишах з нокаутом ІМЕМАВ. тАб проти СНКМ, продуковані в клітинах СНО, введені системно через 60 годин після інфікування, підсилюють виживаність. Експерименти проводили у мишей ІРМАК-/- у віці 4-5 тижнів після підшкірної інокуляції їб0е3з ФУ СНІКМ-ІЇК. Антитіла вводили через 60 годин після інфікування і спостерігали за смертністю протягом 21 доби.
Фіг. 13. Криві нейтралізації для продукованих гібридомою ("старих") або рекомбінантних ("нових") специфічних до СНІКМ тАБ. Криві нейтралізації будували для клітин ВНК21. 100 ФУО
СНІКМУ-Ї АК змішували з зазначеними тАб протягом 1 години при 372С, а потім додавали до клітин ВНК21. Інфікування визначали за допомогою аналізу приглушення фокусоутворення.
Фіг. 14. Напівмаксимальна ефективна інгібіторна концентрація (ЕСво; нг/мл) для
Зо продукованих гібридомою проти продукованих рекомбінантними клітинами СНО антитіл. Дані є подібними для продукованих гібридомою відносно рекомбінантних антитіл.
Фіг. 15. Вирівнювання амінокислот і нуклеотидів для генів, які кодують білки як Е1, так і Е2.
Номер доступу СепВапкК для білків наведений зі штамом вірусу. Представлені три штами для вірусів з прототипних груп: Східної, Центральної, Південної Африки (ЕС5А), два для Азії і один західно-африканський штам. Ці антитіла перехресно-реагують з всіма штамами.
ОПИС ІЛЮСТРАТИВНИХ ВАРІАНТІВ ЗДІЙСНЕННЯ
Автори винаходу виділили велику панель тАб людини, які нейтралізують інфекційність
СНІКМ в клітинній культурі і успішно лікували мишей //паг' (позбавлених рецепторів інтерферону типу І), яким була інокульована летальна доза СНІКУ, навіть при введенні тільки через 60 годин після інфікування. Вони ідентифікували домен А Е2 як основний антигенний центр для розпізнавання за допомогою ІптАбБ, які широко нейтралізують інфекцію СНІКМ з надвисокою активністю, і продемонстрували, що основним механізмом інгібування є відвертання злиття. Ці і інші аспекти винаходу описані більш докладно.
І. Чікунгунья і вірус чікунгунья
Хвороба чікунгунья являє собою інфекцію, що викликається вірусом чікунгунья. Вона характеризується раптовою гарячкою, що звичайно триває від двох до семи діб, і болем у суглобах, що звичайно триває тижні або місяці, але іноді роки. Рівень смертності становить небагато менше 1 на 1000, причому люди похилого віку мають більшу імовірність загинути.
Вірус передається людям двома видами комарів роду Аеєайез: А. а/рорісіиз і А. аедурії. Тварини, що є резервуаром вірусу, включають мавп, птахів, велику рогату худобу і гризунів. Це відрізняє його від денге, для якого хазяїнами є тільки примати.
Найкращим засобом попередження є загальний контроль комарів і уникнення укусів якими- небудь інфікованими комарами. Відсутнє відоме специфічне лікування, однак можна використовувати медикаментозну терапію для зменшення симптомів. Також можуть бути корисні спокій і введення рідин.
Інкубаційний період захворювання чікунгунья становить від двох до дванадцяти діб, звичайно від трьох до семи. Симптоми розвиваються у від 72 до 9795 інфікованих індивідуумів.
Симптоми включають раптовий початок, іноді двофазову гарячку, що звичайно триває від декількох діб до тижня, іноді аж до десяти діб, звичайно вище 3920 (102РЕ) і іноді сягаючу 4120 60 (1042РЕ), і виражений біль або скутість у суглобах, що звичайно триває тижні або місяці, але іноді триваючий роки. Також можуть бути присутнім висип (звичайно макулопапульозний), м'язовий біль, головний біль, втома, нудота або блювання. Може бути присутнім запалення очей у формі іридоцикліту або увеїту, і можуть зустрічатися осередки ушкодження в сітківці. Як правило, гарячка триває протягом двох діб, а потім різко раптово припиняється. Однак головний біль, безсоння і надзвичайний ступінь слабості тривають протягом періоду, що варіює, звичайно приблизно від п'яти до семи діб.
Спостереження останніх епідемій показали, що чікунгунья може викликати тривалі симптоми після гострої інфекції. В ході спалаху а Кеипіоп в 2006 році більше 5095 індивідуумів у віці вище 45 років повідомляли про тривалий біль у скелетних м'язах, причому аж до 6095 людей описували тривалий біль у суглобах через три роки після початкового інфікування. У дослідженні привезених випадків у Франції повідомлялося, що 5996 людей все ще страждали артралгією через два роки після гострої інфекції. Після локальної епідемії чікунгунья в Італії 6690 людей повідомляли про м'язовий біль, біль у суглобах або астенію через один рік після гострої інфекції. Тривалі симптоми не є повністю новим спостереженням; тривалий артрит спостерігали після спалаху в 1979 році. Звичайними прогностичними факторами тривалих симптомів є більш високий вік і попереднє ревматологічне захворювання. Причина цих хронічних симптомів у цей час не повністю відома. Маркери автоїмунного або ревматоїдного захворювання не були виявлені у людей, що повідомляли про хронічні симптоми. Однак, деякі дані, одержані для людини і з моделей на тваринах, вказують на те, що вірус чікунгунья може бути здатний викликати хронічні інфекції у хазяїна. Вірусний антиген був виявлений в біоптаті м'язів людей, що страждали рецидивним епізодом захворювання через три місяці після початкового виникнення. Крім того, вірусний антиген і РНК були виявлені в синовіальних макрофагах однієї людини в ході рецидиву скелетно-м'язового захворювання через 18 місяців після початкового інфікування. Декілька моделей на тваринах також показали, що вірус чікунгунья може призводити до персистувальних інфекцій. У моделі на мишах вірусна РНК виявлялася специфічно в асоційованій з суглобами тканині протягом щонайменше 16 тижнів після інокуляції і асоціювалася з хронічним синовітом. Аналогічно, в іншому дослідженні повідомлялося про виявлення репортерного гена вірусу в суглобній тканині мишей протягом тижнів після інокуляції.
У моделі на приматах, що не є людиною, було виявлено, що вірус чікунгунья персистує в
Зо селезінці протягом щонайменше шести тижнів.
Вірус чікунгунья являє собою альфавірус з геномом у вигляді позитивної одноланцюжкової
РНК розміром приблизно 11,6 т.п.н. Він є представником комплексу вірусів лісу Семліки і є близькоспорідненим вірусу ріки Росс, вірусу о'Н'онг-н'онг і вірусу лісу Семліки. У США він класифікується як патоген з категорією пріоритету С і робота з ним вимагає запобіжних заходів, відповідних до рівня біологічної безпеки ПП. Епітеліальні і ендотеліальні клітини людини, первинні фібробласти, і макрофаги, що походять з моноцитів, є пермісивними для вірусу чікунгунья /л міїто, і реплікація вірусу є високо цитопатичною, однак чутливою до інтерферону типу І і ІІ. /л мімо вірус чікунгунья очевидно реплікується у фібробластах, клітинах-попередниках скелетних м'язів і м'язових волокнах.
Вірус чікунгунья являє собою альфавірус, як і віруси, які викликають східний енцефаліт коней і західний енцефаліт коней. Чікунгунья звичайно поширюється через укуси комарів А. аедурії, однак недавнє дослідження у Разієиг Іпзійше в Парижі показало, що штами вірусу чікунгунья при спалаху Кешпіоп ІбІапа 2005-2006 року набули мутацію, яка сприяла передачі азіатськими тигровими комарами (А. а/рорісіив5).
Інфекція вірусом чікунгунья А. а/рорісіих була викликана точковою мутацією в генах оболонки вірусу (Е7). Посилена передача вірусу чікунгунья за допомогою А. а/рорісіиз могла означати збільшений ризик спалахів в інших областях, де є присутнім азіатський тигровий комар. Недавня епідемія в Ігалії, імовірно, передавалася А. а/рорісіих. В Африці чікунгунья поширюється за допомогою лісового циклу, в якому вірус по більшій частині знаходиться в інших приматах між спалахами у людини.
При інфікуванні вірусом чікунгунья фібробласти хазяїна продукують інтерферон 1 типу (альфа і бета). Миші, які позбавлені рецептора інтерферону альфа, гинуть протягом від двох до трьох діб при впливі 102 БУО вірусу чікунгунья, у той час як миші дикого типу виживають навіть при впливі 105 БУО вірусу. У той самий час миші, які мають частковий дефіцит інтерферону 1 типу (ІЕМ о/р -/-), мають м'яке ураження і мають такі симптоми, як м'язова слабість і летаргія.
Рапідоз еї а/. (2011) побачили подібні результати для живого ослабленого штаму СНІКМ181/25.
Однак замість загибелі, миші з дефіцитом інтерферону 1 типу (ІЕМ о/В -/-) тимчасово інвалідизувалися, і миші з частковим дефіцитом інтерферону 1 типу не мали ніяких проблем.
Було проведено декілька досліджень для пошуку компонентів каскаду інтерферону 1 типу, бо що лежать вище, залучених у відповідь хазяїна на інфекцію чікунгунья. Дотепер нікому не відомий специфічний для чікунгунья асоційований з патогеном молекулярний патерн. Проте, було виявлено, що важливим фактором є ІРЗ-1 - також відомий як Сагаїї, МАМЗ5 і МІЗА. В 2011 році М/пе єї аІ. виявили, що інгібування ІР5-1 знижувало фосфорилювання фактора З (ІКЕЗ), що регулює інтерферон, і продукування ІЄМ-р. В інших дослідженнях було виявлено, що ІКЕЗ і
ІКНЕ7 є важливими залежно від віку. Дорослі миші, які позбавлені обох з цих регуляторних факторів, гинуть при інфікуванні вірусом чікунгунья. Немовлята, з іншого боку, гинуть від вірусу, якщо вони мають дефіцит одного з цих факторів.
Чікунгунья протидіє відповіді інтерферону типу І за допомогою продукування М52, неструктурного білка, який здійснює деградацію ЕВРІ ії виключає здатність клітини-хазяїна транскрибувати ДНК. М52 перешкоджає каскаду передачі сигналу ЗАК-ЗТАТ і перешкоджає фосфорилюванню 5ТАТ.
Стандартні лабораторні тести на чікунгунья включають ЗТ-ПЛР, виділення вірусу і серологічні тести. Виділення вірусу забезпечує найбільш точний діагноз, однак його проведення віднімає від одного до двох тижнів і має проводитися в лабораторіях з рівнем ІП біологічної безпеки. Спосіб залучає вплив на конкретні клітинні лінії зразків з суцільної крові і ідентифікацію специфічних для вірусу чікунгунья відповідей. ЗТ-ПЛР з використанням гніздових пар праймерів використовують для ампліфікації декількох специфічних для чікунгунья генів з суцільної крові.
Результати можна одержати протягом від однієї до двох діб.
Серологічна діагностика вимагає більшої кількості крові, ніж інші способи, і в ній використовується аналіз ЕГІЗА для кількісного визначення рівнів специфічних для чікунгунья
ІЯМ. Для одержання результатів потрібно від двох до трьох діб, і можуть з'являтися помилковопозитивні результати при інфікуванні іншими спорідненими вірусами, такими як вірус о'Нонг-н'онг і вірус лісу Семліки.
Диференціальна діагностика може включати діагностику інфекцій іншими вірусами, що переносяться комарами, таким як вірус денге і грипу. Хронічна рецидивна поліартралгія виникає щонайменше у 2095 пацієнтів з чікунгунья через один рік після інфікування, у той час як при денге такі симптоми є нечастими.
У цей час специфічне лікування не доступно. Спроби пом'якшити симптоми включають застосування МЗАЇЮ, таких як напроксен або парацетамол (ацетамінофен), і рідин. Аспірин не
Зо рекомендується. У індивідуумів з артритом протягом більше ніж двох тижнів може використовуватися рибавірин. Ефект хлороквіну неочевидний. Очевидно, він не допомагає при гострому захворюванні, однак попередні дані вказують на те, що він може допомогти при хронічному артриті. Стероїди, очевидно, теж не є корисними.
Чікунгунья по більшій частині є присутньою в країнах, що розвиваються. Епідеміологія чікунгунья пов'язана з комарами, їх середовищем і поведінкою людини. Адаптація комарів до змінного клімату Північної Африки приблизно 5000 років тому змусила їх шукати середовище, де люди зберігали воду. Як наслідок поселення людини і середовище проживання комарів дуже близько зв'язані. У періоди епідемії люди є резервуарами вірусу. Іншим часом резервуарами служать мавпи, птахи і інші хребетні.
Описано три генотипи цього вірусу: західно-африканський, східно/центрально/південно- африканський і азіатський генотипи. Вибухова епідемія у Індійському океані в 2005 році їі на островах Тихого океану в 2011 році, а також у цей час в Америці, продовжують змінювати розподілення генотипів. 28 травня 2009 року в Спаподулаї Тгапд в Таїланді, де вірус є ендемічним, у місцевій лікарні вирішили провести кесарів розтин інфікованій чікунгунья вагітній хлопчиком жінці, Кпу/"апгиетйаї зМйітиеапод, 28 років, місцевій жительці Тгапо, для відвертання передачі від матері до плода.
Однак після народження дитини лікарі виявили, що дитина вже інфікована вірусом і помістили її у відділення інтенсивної терапії, оскільки інфекція залишила дитину нездатною самостійно дихати або пити молоко. Лікарі припустили, що вірус може бути здатний передаватися від
БО матері до плода, але без лабораторного підтвердження.
У грудні 2013 року чікунгунья була підтверджена на Карибському острові Святого Мартіна з 66 підтвердженими випадками і приблизно 181 передбачуваним випадком. Цей спалах є першим в Західній півкулі, коли захворювання поширилося до людини від популяції інфікованих комарів. До січня 2014 року, Рибіїс Неанп Адепсу ої Сапада повідомило, що випадки були підтверджені на британських Віргінських островах, Заїіпі-ВагйпеІету, СпцадеІоире, Ротіпіса,
Мапгіпідце, і французькій Гайані. У квітні 2014 року Сепіег5 Тог Оізеазе Сопігої апа Ргемепійп (СОС) також підтвердили чікунгунья в Домініканській республіці. До кінця квітня вона поширилася всього на 14 країн, включаючи Ямайку, Сент-Люсію, Сент-Кітс і Невіс, і Гаїті, де була оголошена епідемія.
До кінця травня 2014 року в США було описано понад десять привезених випадків вірусу від людей, що подорожують у Флориду з регіонів, де вірус є ендемічним. Штам чікунгунья, що поширився в США з Карибського басейну, легше всього поширюється А. аєдурії/. Існує побоювання, що цей штам чікунгунья може мутувати, щоб вектор А. а/рорісіибе став більш ефективним. Якщо ця мутація відбудеться, чікунгунья може стати більш небезпечним для охорони здоров'я США, оскільки А. а/рБорісіиз або азіатський тигровий комар більш широко розповсюджений в США і є більш агресивним, ніж А. аєдурії.
У червні 2014 року шість випадків вірусу було підтверджено в Бразилії: два в місті Кампінас штату Сан-Паулу. Ці шість випадків являли собою солдат бразильської армії, які недавно повернулися з Гаїті, де вони брали участь у спробах перетворення як членів Опйей Майопе еабіїїзайоп Мівв5іоп іп Наїйї. Інформація була офіційно випущена муніципалітетом Кампінаса, який вважає, що вжив відповідні дії.
На 16 червня 2014 року, у Флориді всього було 42 випадки. До 11 вересня 2014 року кількість описаних випадків у Пуерто-Ріко для цього року склала 1636. До 28 жовтня ця кількість зросла до 2974 підтверджених випадків з більше ніж 10000 передбачуваних. 17 червня 2014 року Оерагітепі ої Неакй опйісіаіє5 ої Ше 0.5. штату Міссісіпі підтвердив, що вони досліджують перший потенційний випадок в мешканця Міссісіпі який недавно подорожував на Гаїті. 19 червня 2014 року вірус поширився в Джорджію, США. 24 червня 2014 року був описаний випадок в Роіпсіапа, РОЇК Соипіу, Флорида, США. 25 червня 2014 року Неайй Оерагітепі ої Те 0.5. штату Арканзас підтвердив, що один індивідуум у штаті є носієм чікунгунья. 26 червня 2014 року випадок був описаний у мексиканському штаті Халіско. 17 липня 2014 року перший випадок чікунгунья, набутий в США, був описаний Сепіег5 ог різеазе Сопігої апа Ргемепіїоп у Флориді. З 2006 року, понад 200 випадків було описано в США, але тільки у людей, які подорожували в інші країни. Це є першим випадком, коли вірус був переданий комарами індивідууму на материку в США. 2 вересня 2014 року, Сепіег5 Тог Оізеазе
Сопігої апа Ргемепійоп повідомили, що відбулося сім підтверджених випадків чікунгунья в США у людей, які набули захворювання на місцевому рівні. 25 вересня 2014 року офіційні представники Сальвадору повідомили про більше ніж 30000 підтверджених випадків цієї нової епідемії. Ця нова епідемія також підсилюється на Ямайці і
Зо Барбадосі. Існує ризик, що туристи в цих країнах можуть привезти вірус у їхні власні країни. У листопаді 2014 року Бразилія описала локальну передачу відмінного штаму (генотипу) чікунгунья, який ніколи не документувався в Америці. Він являє собою африканський генотип, але, як не дивно, не було пояснено, чи є він південно-африканським або західно-африканським.
Новий генотип (в Америці) є більш важким, ніж азіатський генотип, який у цей час поширюється в Америці, і імунітет до одного генотипу не повідомляє імунітету до інших. Французька Полінезія входить до числа інших регіонів, в яких триває спалах. 7 листопада 2014 року було повідомлено про спалах чікунгунья в Мексиці, набутий за допомогою локальної передачі, у південному штаті Чьяпас. Спалах поширюється по узбережжю від границі з Гватемалою до сусіднього штату ОСахака. Органи охорони здоров'я повідомили про сукупну захворюваність, що становила 39 лабораторно підтверджених випадків (до кінця тижня 48). Не було описано випадків підозри. У січні 2015 в Колумбії відбувся 90481 описаний випадок чікунгунья.
ІЇ. Моноклональні антитіла і їх одержання
А. Загальні способи
Буде зрозуміло, що моноклональні антитіла, що зв'язуються з вірусом чікунгунья, мають декілька застосувань. Вони включають виготовлення діагностичних наборів для застосування для виявлення і діагностики інфекції вірусом чікунгунья, а також для її лікування. У цьому контексті можна зв'язувати такі антитіла з діагностичними або терапевтичними засобами, використовувати їх як засоби для вловлювання або конкуруючі агенти у конкурентному аналізі, або використовувати їх індивідуально без додавання додаткових пов'язаних з ними засобів.
Антитіла можуть бути мутантними або модифікованими, як додатково розглянуто нижче.
Способи одержання і охарактеризування антитіл добре відомі в даній галузі (див., наприклад,
Апііродієв: А І арогаїогу Мапиаї, Со 5ргіпд Нагбог І арогафогу, 1988; патент США 4196265).
Способи одержання моноклональних антитіл (МАБ), як правило, починаються аналогічно одержанню поліклональних антитіл. Першою стадією обох з цих способів є імунізація відповідного хазяїна або ідентифікація індивідуумів, які є імунними внаслідок попередньої природньої інфекції. Як добре відомо в даній галузі, дана композиція для імунізації може варіюватися по її імуногенності. Таким чином, часто є необхідним посилення імунної системи хазяїна, що може бути досягнуто шляхом зв'язування пептидного або поліпептидного імуногенв бо з носієм. Ілюстративними і переважними носіями є гемоціанін лімфи равлика (КІН) і бичачий сироватковий альбумін (ВЗА). Також як носії можна використовувати інші альбуміни, такі як овальбумін, сироватковий альбумін миші або сироватковий альбумін кролика. Засоби для кон'югації поліпептиду з білком-носієм добре відомі в даній галузі і включають глутаральдегід, м-малеімідобенкоїл-М-гідроксисукцинімідний ефір, карбодіїмід і біс-біазотований бензидин. Як також добре відомо в даній галузі, імуногенність конкретної імуногенної композиції може бути посилена з використанням неспецифічних імуностимуляторів імунної відповіді, відомих як ад'юванти. Ілюстративні і переважні ад'юванти включають повний ад'ювант Фрейнда (неспецифічний стимулятор імунної відповіді, що містить вбиті Мусобасіелит Шрегсиовів), неповний ад'ювант Фрейнда і ад'ювант на основі гідроксиду алюмінію.
Кількість імуногенної композиції, використовуваної для одержання поліклональних антитіл, варіюється залежно від природи імуногена, а також від тварини, використовуваної для імунізації Для доставки імуногена можна використовувати різні шляхи (підшкірний, внутрішньом'язовий, внутрішньошкірний, внутрішньовенний і внутрішньочеревинний).
Моніторинг продукування поліклональних антитіл можна здійснювати шляхом взяття зразка крові імунізованої тварини в різні моменти часу після імунізації. Також можна проводити другу посилюючу ін'єкцію. Процес посилення і титрування повторюють доти, поки не досягнуть придатного титру. Коли досягають бажаного рівня імуногенності, у імунізованої тварини можна проводити взяття крові і сироватку виділяти і зберігати, і/або тварину можна використовувати для одержання МАБ.
Після імунізації соматичні клітини, що володіють потенці«алом до продукування антитіл, зокрема В-лімфоцити (В-клітини), відбирають для застосування в протоколі одержання МАБбБ. Ці клітини можна одержувати шляхом біопсії з селезінки або лімфатичних вузлів, або з циркулюючої крові. Потім В-лімфоцити імунізованої тварини, що продукують антитіла, піддають злиттю з клітинами безсмертної лінії мієломи, як правило, того ж виду тварин, що і тварина, яку імунізували, або клітинами людини або химерними клітинами людини/миші. Мієломні клітинні лінії, придатні для застосування в методиках злиття для одержання гібридом, переважно є такими, що не продукують антитіла, що володіють високою ефективністю злиття, і що мають дефіцит ферментів, який робить їх нездатними рости у визначених селективних середовищах, які підтримують ріст тільки бажаних злитих клітин (гібридоми). Можна використовувати будь-які
Зо з ряду мієломних клітин, як відомо фахівцям у даній галузі (содіпо, рр. 65-66, 1986; СатррбеїЇ, рр. 75-83, 1984).
Способи одержання гібридів клітин, що продукують антитіла, селезінки або клітин лімфатичних вузлів і мієломних клітин звичайно включають змішування соматичних клітин з мієломними клітинами у співвідношенні 2:11, хоча це співвідношення може варіюватися від приблизно 20:1 до приблизно 1:1, відповідно, у присутності засобу або засобів (хімічних або електричних), які стимулюють злиття клітинних мембран. Способи злиття з використанням вірусу Сендай описані Копіег апа Міїсїеіп (1975; 1976), і способи злиття з використанням поліетиленгліколю (РЕС), такого як 3795 (06б./06.) РЕС, описані Сейег еї а/. (1977). Також є придатним використання способів злиття, що електрично індукується (Содіпд, рр. 71-74, 1986).
Методики злиття звичайно продукують життєздатні гібриди з низькою частотою приблизно від 1х1056 до 1х108. Однак це не є проблемою, оскільки життєздатні злиті гібриди відокремлюють від батьківських незлитих клітин (зокрема, незлитих клітин мієломи, які звичайно продовжують ділитися невизначено довго) шляхом культивування в селективному середовищі. Селективне середовище звичайно являє собою середовище, яке містить засіб, який блокує синтез нуклеотидів де лоуо в середовищі для культивування тканин. Ілюстративними і переважними засобами є аміноптерин, метотрексат і азасерин. Аміноптерин і метотрексат блокують синтез ае поуо як пуринів, так і піримідинів, у той час як азасерин блокує тільки синтез пуринів. Коли використовують аміноптерин або метотрексат, середовище доповнюють гіпоксантином і тимідином як джерело нуклеотидів (середовище НАТ). Коли використовують азасерин, середовище доповнюють гіпоксантином. Уабаїн додають, якщо джерелом В-клітин є трансформована вірусом Епштейна-Барр (ЕВМ) лінія В-клітин людини, для усунення трансформованих ЕВМУ ліній, які не злилися з мієломою.
Переважним селективним середовищем є НАТ або НАТ з уабаїном. В середовищі НАТ можуть вижити тільки клітини, здатні задіяти шляхи реутилізації нуклеотидів. Мієломні клітини мають дефект ключових ферментів реутилізаційного шляху, наприклад, гіпоксантинфосфорибозилтрансферази (НРЕТ), і вони не можуть вижити. В-клітини можуть задіяти цей шлях, однак вони мають обмежену тривалість життя в культурі і звичайно гинуть протягом приблизно двох тижнів. Таким чином, єдиними клітинами, які можуть вижити в селективному середовищі, є гібриди, утворені з клітин мієломи і В-клітин. Коли джерелом В- бо клітин, використовуваних для злиття, є лінія трансформованих ЕВМ В-клітин, як у цьому випадку, також для лікарської селекції гібридів можна використовувати уабаїн, оскільки трансформовані ЕВМ В-клітини є підданими знищенню цим лікарським засобом, у той час як використовуваний мієломний партнер вибирають так, щоб він був резистентним до уабаїну.
Культивування забезпечує популяцію гібридом, з яких відбирають специфічні гібридоми. Як правило, селекцію гібридом проводять шляхом культивування клітин за допомогою розведення до одиничних клонів у мікропланшетах для титрування з подальшим дослідженням супернатантів індивідуальних клонів (приблизно через від двох до трьох тижнів) відносно бажаної реактивності. Аналіз має бути чутливим, простим і швидким, такий як радіоїмунний аналіз, ферментний імуноаналіз, аналіз цитотоксичності, аналіз бляшкоутворення, дот-блотинг і т.п. Потім відібрані гібридоми піддають серійному розведенню і одиничні клітини сортують за допомогою протоково-цитометричного сортування і клонують в індивідуальні клітинні лінії, що продукують антитіла, і ці клони потім можна необмежено збільшувати в кількості з одержанням тА. Клітинні лінії можна досліджувати відносно продукування МАЄ двома основними шляхами.
Зразок гібридоми можна ін'єкувати (часто в черевну порожнину) тварини (наприклад, миші).
Необов'язково, тваринам попередньо вводять вуглеводень, особливо масла, такі як пристан (тетраметилпентадекан) перед ін'єкцією. Коли таким чином використовують гібридоми людини, є оптимальним ін'єкування мишам з імунодефіцитом, таким як миші ЗСІО, для відвертання відторгнення пухлини. У тварин після ін'єкції розвиваються пухлини, що секретують специфічне моноклональне антитіло, що продукується гібридом злитих клітин. Потім рідини організму тварини, такі як сироватка або асцитна рідина, можна відбирати для одержання МАБ у високій концентрації. Індивідуальні клітинні лінії також можна культивувати /л м/о, де МАВ природно секретуються в культуральне середовище, з яких їх можна одержувати без труда у високих концентраціях. Альтернативно гібридомні клітинні лінії людини можна використовувати /л уйго для одержання імуноглобулінів в клітинному супернатанті. Клітинні лінії можуть бути адаптовані для росту в безсироватковому середовищі для оптимізації можливості виділення моноклональних імуноглобулінів людини, що мають високу чистоту.
МА, продуковані будь-яким зі способів, можна очищати далі, якщо бажано, з використанням фільтрації, центрифугування і різних хроматографічних способів, таких як ЕРІ С або афінна хроматографія. Фрагменти моноклональних антитіл за винаходом можна
Зо одержувати з очищених моноклональних антитіл способами, які включають розщеплення ферментами, такими як пепсин або папаїн, і/або розщеплення дисульфідних зв'язків за допомогою хімічного відновлення. Альтернативно фрагменти моноклональних антитіл, охоплювані даним винаходом, можна синтезувати з використанням автоматизованого пристрою для синтезу пептидів.
Також передбачається, що для одержання моноклональних антитіл можна використовувати підхід молекулярного клонування. Для цього РНК можна виділяти з гібридомної лінії і гени антитіл одержувати за допомогою ЗТ-ПЛР і клонувати в експресуючий вектор для імуноглобулінів. Альтернативно з РНК, виділеної з клітинних ліній, одержують комбінаторні фагмідні бібліотеки імуноглобулінів, і фагміди, що експресують антитіла, відбирають за допомогою сортування з використанням вірусних антигенів. Переваги цього підходу над загальноприйнятими способами гібридом полягають у тому, що приблизно 107 антитіл можна продукувати і піддавати скринінгу за один раунд і що нової специфічності досягають за допомогою комбінування Н- і І -ланцюгів, що далі підвищує імовірність знаходження придатних антитіл.
Інші патенти США, кожний з яких включений як посилання, в яких описано одержання антитіл, придатних у рамках даного винаходу, включають патент США 5565332, в якому описано одержання химерних антитіл з використанням комбінаторного підходу; патент США 4816567, в якому описані рекомбінантні препарати імуноглобулінів; і патент США 4867973, в якому описані кон'югати антитіло-лікарський засіб.
В. Антитіла за даним винаходом
Антитіла згідно з даним винаходом можуть визначатися, у першому випадку, їх специфічністю зв'язування, яка в цьому випадку спрямована на глікопротеїн вірусу чікунгунья (СР). Фахівці в даній галузі, за допомогою оцінювання специфічності/афінності зв'язування даного антитіла з використанням способів, добре відомих фахівцям в даній галузі, можуть визначити, чи входять такі антитіла в обсяг даної формули винаходу. В одному аспекті передбачаються моноклональні антитіла, що мають парні СОК клонів з важких і легких ланцюгів, проілюстрованих в таблицях З і 4, відповідно. Такі антитіла можна одержувати з використанням клонів, описаних нижче в розділі "Приклади", з використанням способів, описаних у даному описі.
У другому аспекті антитіла можуть визначатися їхньою варіабельною послідовністю, яка включає додаткові "каркасні" ділянки. Вони надані в таблицях 1 і 2, в яких представлені або відображені повні варіабельні ділянки. Більше того, послідовності антитіл можна змінювати відносно цих послідовностей, необов'язково з використанням способів, більш докладно описаних нижче. Наприклад, послідовності нуклеїнових кислот можуть відрізнятися від послідовностей, зазначених вище, тим, що (а) варіабельні ділянки можуть бути відділені від константних доменів легкого і важкого ланцюгів, (Б) нуклеїнові кислоти можуть відрізнятися від нуклеїнових кислот, описаних вище, без впливу на залишки, що кодуються ними, (с) нуклеїнові кислоти можуть відрізнятися від нуклеїнових кислот, описаних вище, з даним відсотком гомології, наприклад, 7095, 7595, 8095, 8595, 9095, 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995, (4) нуклеїнові кислоти можуть відрізнятися від нуклеїнових кислот, описаних вище, здатністю гібридизуватися в умовах високої твердості, що ілюструються умовами низького вмісту солі і/або високої температури, забезпечуваних від приблизно 0,02 М до приблизно 0,15
М Масі при температурах від приблизно 502С до приблизно 702С, (є) амінокислоти можуть відрізнятися від амінокислот, зазначених вище, з даним відсотком гомології, наприклад, 8095, 8595, 9095, 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9696, 9795, 9895 або 9995, або (Її) амінокислоти можуть відрізнятися від амінокислот, зазначених вище, внаслідок допущення консервативних замін (розглянутих нижче). Кожне з вищевказаних положень застосовно до послідовностей нуклеїнових кислот, зазначених в таблиці 1, і амінокислотних послідовностей, наведених в таблиці 2.
С. Модифікація способами інженерії послідовностей антитіл
У різних варіантах здійснення можна вибирати модифікацію способами інженерії послідовностей ідентифікованих антитіл за різними причинами, такими як підвищена експресія, підвищена перехресна реактивність або знижене неспецифічне зв'язування. Нижче приводиться загальне обговорення відповідних способів модифікації антитіл способами інженерії.
Гібридоми можна культивувати, потім клітини можна піддавати лізису і екстрагувати тотальну РНК. Випадкові гексамери можна використовувати з КТ для одержання кДНК-копій
РНК, а потім можна проводити ПЛР з використанням мультиплексної суміші праймерів ПЛР, які приблизно будуть ампліфікувати усі послідовності генів варіабельних ділянок людини. Продукт
Зо ПЛР можна клонувати у вектор рОаєЕМ-ЇТ Еазу, а потім секвенувати за допомогою автоматизованого ДНК-секвенування з використанням стандартних праймерів для вектора.
Аналіз зв'язування і нейтралізації можна проводити з використанням антитіл, зібраних з супернатантів гібридом, і очищати за допомогою ЕРІ С з використанням колонок з білком о.
Рекомбінантні повнорозмірні Ід-антитіла можна одержувати шляхом субклонування ДНК Ем важкого і легкого ланцюгів з клонувального вектора у плазмідний вектор для дос, трансфікувати в клітини 293 Егеезіуіе або клітини СНО, і антитіла збирати і очищати з супернатанта клітин 293 або СНО.
Швидка доступність антитіла, що продукується в тій самій клітині-хазяїні і у тому самому процесі культивування клітин, що і кінцевий процес виробництва СМР, має потенціал до зниження тривалості програм розробки процесу. Їопла розробили загальний спосіб з використанням об'єднаних трансфектантів, вирощених в середовищі СОАСЕ, для швидкого продукування невеликих кількостей (аж до 50 г) антитіл в клітинах СНО. Хоча це є дещо більш повільним, ніж дійсна часова система, переваги включають більш високу концентрацію продукту і використання того самого хазяїна і процесу, що і у випадку клітинної лінії для продукування.
Приклад росту і продуктивності сукупностей 55-СНО, що експресують модельне антитіло, в одноразовому біореакторі: в культурі у одноразовому біореакторі у вигляді мішка (робочий об'єм 5 л), що працює в режимі періодичного культивування з підживленням, була досягнута концентрація антитіла 2 г/л в межах 9 тижнів після трансфекції.
Молекули антитіл включають фрагменти (такі як Е(ар'), Е(аб')г), які продукуються, наприклад, за допомогою протеолітичного розщеплення тАб, або одноланцюжкові імуноглобуліни, що продукуються, наприклад, рекомбінантними способами. Такі похідні антитіл є одновалентними. В одному варіанті здійснення такі фрагменти можна комбінувати один з одним або з іншими фрагментами антитіл або лігандами рецепторів з одержанням "химерних" зв'язувальних молекул. Важливо, що такі химерні молекули можуть містити замісники, здатні зв'язуватися з різними епітопами однієї молекули.
У споріднених варіантах здійснення антитіло являє собою похідне описаних антитіл, наприклад, антитіло, що містить послідовності СОК, ідентичні послідовностям СОК описаних антитіл (наприклад, химерного антитіла або антитіла з пересадженими СОК). Альтернативно може бути бажаним внесення модифікацій, таке як внесення консервативних змін у молекулу бо антитіла. При внесенні таких змін можна враховувати гідропатичний індекс амінокислот.
Важливість гідропатичного індексу амінокислот для повідомлення білку біологічної функції взаємодії загалом зрозуміла в даній галузі (Куїе апа Рооїїше, 1982). Є загальновизнаним, що відносний гідропатичний характер амінокислоти вносить вклад у вторинну структуру кінцевого білка, що у свою чергу визначає взаємодію білка з іншими молекулами, наприклад, ферментами, субстратами, рецепторами, ДНК, антитілами, антигенами і т.п.
Також в даній галузі зрозуміло, що заміну подібних амінокислот можна проводити ефективно на основі гідрофільності. В патенті США 4554101, включеного в даному описі як посилання, стверджується, що найбільша локальна середня гідрофільність білка, що визначається гідрофільністю його сусідніх амінокислот, корелює з біологічною властивістю білка. Як докладно описано в патенті США 4554101, амінокислотним залишкам були приписані наступні значення гідрофільності: основні амінокислоти: аргінін (-3,0), лізин (3,0) ії гістидин (-0,5); кислотні амінокислоти: аспартат (ї3,0 - 1), глутамат (43,0 - 1), аспарагін (140,2) і глутамін (0,2); гідрофільні неіонні амінокислоти: серин (0,3), аспарагін (0,2), глутамін (10,2) ії треонін (-0,4), що містять сірку самінокислоти: цистеїн (-1,0) і метіонін (-1,3); гідрофобні неароматичні амінокислоти: валін (-1,5), лейцин (-1,8), ізолейцин (-1,8), пролін (-0,5 - 1), аланін (-0,5) і гліцин (0); гідрофобні ароматичні амінокислоти: триптофан (-3,4), фенілаланін (-2,5) і тирозин (-2,3).
Зрозуміло, що амінокислота може бути замінена іншою амінокислотою, що має подібну гідрофобність, і може бути одержаний біологічно або імунологічно модифікований білок. При таких змінах переважною є заміна амінокислот, в яких величини гідрофільності знаходяться в межах -2, особливо переважною є заміна амінокислот з величиною в межах -1 і ще більше переважною є заміна амінокислот з величиною в межах --0,5.
Як описано вище, амінокислотні заміни звичайно основані на відносній подібності замісників бічних ланцюгів амінокислот, наприклад, їх гідрофобності, гідрофільності, заряді, розмірі і т.п.
Ілюстративні заміни, що враховують різні вищевказані характеристики, добре відомі фахівцям в даній галузі і включають: аргінін і лізин; глутамат і аспартат; серин і треонін; глутамін і аспарагін; і валін, лейцин і ізолейцин.
Даний винахід також належить до модифікації ізотипів. За допомогою модифікації Ес- ділянки для того, щоб вона мала ізотип, що відрізняється, можна забезпечувати різну функціональність. Наприклад, зміна в ІдбСі може підвищувати антитілозалежну клітинну
Зо цитотоксичність, перемикання на клас А може покращити розподілення в тканинах і перемикання на клас М може підвищити валентність.
Модифіковані антитіла можна одержувати будь-яким способом, відомим фахівцям в даній галузі, включаючи експресію стандартними молекулярно-біологічними способами або хімічний синтез поліпептидів. Способи рекомбінантної експресії описані в даному описі.
О. Одноланцюжкові антитіла
Одноланцюжковий варіабельний фрагмент (5сЕм) являє собою злиту конструкцію варіабельних ділянок важких і легких ланцюгів імуноглобулінів, зв'язаних коротким (звичайно серин, гліцин) лінкером. Ця химерна молекула зберігає специфічність вихідного імуноглобуліну, незважаючи на вилучення константних ділянок і внесення лінкерного пептиду. Ця модифікація звичайно залишає специфічність незміненою. Ці молекули історично створювали для полегшення фагового дисплея, коли є у високому ступені зручною експресія антигензв'язувального домена як єдиного пептиду. Альтернативно ЗсСЕм можна створювати безпосередньо з субклонованих важких і легких ланцюгів, що походять з гібридоми.
Одноланцюжкові варіабельні фрагменти позбавлені константної Ес-ділянки, що є присутньою у повних молекулах антитіл і таким чином, для очищення антитіл використовуються розповсюджені ділянки зв'язування (наприклад, білок А/0). Ці фрагменти часто можна очищати/імобілізувати з використанням білка Ї, оскільки білок Ї взаємодіє з варіабельною ділянкою легких ланцюгів каппа.
Гнучкі лінкери, як правило, складаються з амінокислотних залишків, що забезпечують спіраль і поворот, таких як аланін, серин і гліцин. Однак також можуть функціонувати інші залишки. Тапд еї а/. (1996) використовували фаговий дисплей як засіб швидкої селекції оптимізованих лінкерів для одноланцюжкових антитіл (5СЕм) з бібліотек білкових лінкерів. Була сконструйована випадкова бібліотека лінкерів, в якій гени для варіабельних доменів важкого і легкого ланцюгів були зв'язані сегментом, що кодує пептид з 18 амінокислот зі змінним складом.
Репертуар 5сЕм (приблизно 5х105 різних представників) був експонований на нитчастому фазі і підданий афінній селекції з використанням гаптену. Популяція відібраних варіантів демонструвала значне підвищення активності зв'язування, але зберігала значну різноманітність послідовностей. Скринінг 1054 індивідуальних варіантів як наслідок забезпечив каталітично активний ЗСЕм, який ефективно продукувався у розчинній формі. Аналіз послідовності виявив консервативний пролін в лінкері через два залишки після С-кінця Мн і множину залишків аргініну і проліну в інших положеннях як єдиних загальних ознак відібраних зв'язувальних структур.
Рекомбінантні антитіла за даним винаходом також можуть залучати послідовності або частини, які забезпечують димеризацію або мультимеризацію рецепторів. Такі послідовності включають послідовності, що походять з ІдА, які дозволяють утворювання мультимерів разом з
ЗУ-панцюгом. Іншим доменом мультимеризації є домен димеризації Саі4. В інших варіантах здійснення ланцюги можуть бути модифіковані такими засобами, як біотин/авідин, які дозволяють комбінування двох антитіл.
В окремих варіантах здійснення одноланцюжкове антитіло можна одержувати шляхом зв'язування легких і важких ланцюгів рецептора з використанням непептидного лінкера або хімічної структури. Як правило, легкі і важкі ланцюги продукують в різних клітинах, очищають, а потім зв'язують разом відповідним чином (тобто М-кінець важкого ланцюга зв'язаний з С-кінцем легкого ланцюга через відповідний хімічний місток).
Зшивальні реагенти використовують для формування молекулярних містків, які зв'язують функціональні групи двох різних молекул, наприклад, засобу, що стабілізує і коагулює. Однак передбачається, що можна створювати димери або мультимери одного аналога або гетеромерні комплекси, що складаються з різних аналогів. Для зв'язування двох різних сполук покроковим чином можна використовувати гетеробіфункціональні лінкери, які усувають небажане утворювання гомополімеру.
Ілюстративний гетеробіфункціональний зшивальний лінкер містить дві реакційноздатних групи: одна реагує з групою первинного аміну (наприклад, М-гідроксисукцинімід), а інша реагує з тіольною групою (наприклад, піридилдисульфід, малеїніміди, галогени і т.д.). Через реакційноздатну групу первинного аміну зшивальний лінкер може реагувати з залишком(ами) лізину на білку (наприклад, вибране антитіло або фрагмент) і через тіольну реакційноздатну групу зшивальний лінкер, вже зв'язаний з першим білком, реагує з залишком цистеїну (вільна сульфгідрильна група) іншого білка (наприклад, селективний агент).
Переважно використання зшивального лінкера, що володіє прийнятною стабільністю в крові.
Відомі численні типи лінкерів, що містять дисульфідний зв'язок, які можна успішно використовувати для кон'югації засобів, що націлюють, і терапевтичних/профілактичних засобів.
Зо Лінкери, які містять дисульфідний зв'язок, доступ до якого просторово утруднений, можуть виявитися такими, що забезпечують більш високу стабільність /л умо, перешкоджаючи вивільненню пептиду, що націлює, до досягнення ділянки дії. Таким чином, лінкери є однією групою зв'язувальних агентів.
Іншим зшивальним реагентом є ЗМРТ, який являє собою біфункціональний зшивальний лінкер, що містить дисульфідний зв'язок, доступ до якого "просторово утрудняє" сусіднє бензольне кільце і метильні групи. Вважають, що просторова перешкода доступу до дисульфідного зв'язку виконує функцію захисту зв'язку від атаки тіолатними аніонами, такими як глутатіон, які можуть бути присутніми в тканинах і крові, і, тим самим, допомагає перешкоджати розщепленню кон'югата до доставки зв'язаного засобу в задану ділянку.
Зшивальний реагент ЗМРТ, також як і багато інших зшивальних реагентів має здатність зшивати функціональні групи, такі як ЗН цистеїну або первинні аміни (наприклад, епсилон аміногрупа лізину). ІНШИЙ можливий тип зшивального лінкера включає гетеробіфункціональні фотореактивні фенілазиди, що містять розщеплюваний дисульфідний зв'язок, такі як сульфосукцинімідил-2-(п-азидосаліциламідо)етил-1,3'-дитіопропіонат. М- гідроксисукцинімідильна група реагує з первинними аміногрупами і фенілазид (при фотолізі) неселективно реагує з будь-яким амінокислотним залишком.
На додаток до зшивальних лінкерів, доступ до яких утруднений, також можна використовувати лінкери відповідно до даного винаходу можна використовувати лінкери, доступ до яких не утруднений. Інші придатні зшивальні лінкери, що не вважаються такими, що містять або утворюють дисульфід, доступ до якого утруднений, включають 5АТА, 5РОР і 2-імінотіолан (Уумамлглупс:ак 8. Тпогре, 1987). Використання таких зшивальних лінкерів добре зрозуміло в даній галузі. Інший варіант здійснення залучає використання гнучких лінкерів.
В патенті США 4680338 описані біфункціональні лінкери, придатні для одержання кон'югатів лігандів з аміновмісними полімерами і/або білками, особливо для одержання кон'югатів антитіл з хелаторами, лікарськими засобами, ферментами, що піддаються виявленню мітками і т.п. В патентах США 5141648 і 5563250 описані розщеплювані кон'югати, що містять нестійкий зв'язок, що розщеплюється в різних м'яких умовах. Цей лінкер є особливо придатним, оскільки засіб, що представляє інтерес, може бути зв'язаний безпосередньо з лінкером, причому розщеплення призводить до вивільнення активного засобу. Конкретні застосування включають додавання вільної аміно або вільної сульфгідрильної групи до білка, такого як антитіло або лікарський засіб.
В патенті США 5856456 описані пептидні лінкери для застосування для зв'язування поліпептидних компонентів для одержання злитих білків, наприклад, одноланцюжкових антитіл.
Лінкер має довжину аж до приблизно 50 амінокислот, містить щонайменше одну заряджену амінокислоту (переважно аргінін або лізин), за якою іде пролін, і характеризується більш високою стабільністю і зниженою агрегацією. В патенті США 5880270 описані аміноокси-вмісні лінкери, придатні для різних імунодіагностичних способів і способів розділення.
Е. Інтраантитіла
В конкретному варіанті здійснення антитіло являє собою рекомбінантне антитіло, яке є придатним для дії всередині клітини - такі антитіла відомі як "Інтраантитіла". Ці антитіла можуть перешкоджати функції мішені за допомогою різних механізмів, наприклад, за допомогою зміни внутрішньоклітинного транспорту білків, перешкоджання ферментативній функції і блокування взаємодій білок-білок або білок-ДНК. Багато в чому їхні структури імітують або подібні зі структурами одноланцюжкових і однодоменних антитіл, описаних вище. Дійсно, єдиний транскрипт/єдиний ланцюг є важливою ознакою, яка дозволяє внутрішньоклітинну експресію в клітині-мішені, а також робить транспорт білка через клітинні мембрани більш здійсненним.
Однак потрібні додаткові ознаки.
Двома основними обмеженнями, що впливають на реалізацію терапевтичного засобу на основі інтраантитіла, є доставка, включаючи націлювання в клітину/тканину і стабільність. Що стосується доставки, використовують різні підходи, такі як спрямована на тканину доставка, використання специфічних для типу клітин промоторів, доставка на вірусній основі і використання пептидів, що забезпечують клітинну проникність/транслокацію через мембрану.
Що стосується стабільності, підхід звичайно полягає або у скринінгу за допомогою перебору, включаючи способи, які залучають фаговий дисплей і можуть включати дозрівання послідовностей або розробку консенсусних послідовностей, або більш спрямовані модифікації, такі як вбудовування стабілізуючих послідовностей (наприклад, Ес-ділянок, послідовностей білків-шаперонів, лейцинових блискавок) і заміну/модифікацію дисульфіду.
Додатковою ознакою, яка може знадобитися для інтраантитіл, є сигнал для
Зо внутрішньоклітинного націлювання. Вектори, які можуть націлювати інтраантитіла (або інші білки) в субклітинні ділянки, такі як цитоплазма, ядро, мітохондрії і ЕК, були сконструйовані і є комерційно доступними (Іпмігодеп Согр.; Регвіс еї а/., 1997).
Внаслідок їхньої здатності входити в клітини, інтраантитіла мають додаткові застосування, які не можуть бути досягнуті за допомогою інших типів антитіл. У випадку антитіл за даним винаходом, здатність до взаємодії з цитоплазматичним доменом МОСІ1 в живій клітині може перешкоджати функціям, асоційованим з СО МИСІ, таким як функції передачі сигналу (зв'язування з іншими молекулами) або утворювання олігомеру. Зокрема, передбачається, що такі антитіла можна використовувати для інгібування утворювання димера МОСТІ.
Е. Очищення
У визначених варіантах здійснення антитіла за даним винаходом можуть бути очищеними.
Термін "очищений", як використовують у рамках винаходу, належить до композиції, ізольованої від інших компонентів, де білок очищений до будь-якого ступеня відносно його природного стану. Таким чином, очищений білок також належить до білка, вільного від середовища, в якому він може зустрічатися в природі. Коли використовують термін "по суті очищений" це позначення належить до композиції, в якій білок або пептид утворює основний компонент композиції, наприклад, становить приблизно 5095, приблизно 6095, приблизно 7095, приблизно 8095, приблизно 9095, приблизно 9595 або більше від білків в композиції.
Способи очищення білків добре відомі фахівцям в даній галузі. Ці способи залучають, на одному рівні попереднє фракціонування клітинного середовища на поліпептидні і неполіпептидні фракції. Після відділення поліпептиду від інших білків поліпептид, що представляє інтерес, можна далі очищати з використанням хроматографічних (Фі електрофоретичних способів для досягнення часткового або повного очищення (або очищення до однорідності). Аналітичними способами, особливо придатними для одержання чистого пептиду, є іонообмінна хроматографія, ексклюзійна хроматографія; поліакриламідний гель- електрофорез; ізоелектричне фокусування. Інші способи очищення білків включають преципітацію з сульфатом амонію, РЕС, антитіла і т.п. або теплову денатурацію, а потім центрифугування; гель-фільтрацію, обернено-фазову хроматографію, хроматографію з гідроксилапатитом і афінну хроматографію; і комбінації таких і інших способів.
При очищенні антитіла за даним винаходом може бути бажаною експресія поліпептиду в бо прокаріотичній або еукаріотичній експресуючій системі і екстракція білка з використанням денатурувальних умов. Поліпептид можна очищати від інших клітинних компонентів з використанням афінної колонки, з якою зв'язується мічена частина поліпептиду. Як загальновідомо в даній галузі, передбачається, що порядок проведення різних стадій очищення можна змінювати або що визначені стадії можна виключати і все ще досягати придатного способу одержання по суті очищеного білка або пептиду.
Часто повні антитіла фракціонують з використанням засобів (тобто білка А), які зв'язують Ес- частину антитіла. Альтернативно антигени можна використовувати для одночасного очищення і селекції відповідних антитіл. В таких способах часто використовується селективний засіб, зв'язаний з основою, такою як колонка, фільтр або гранули. Антитіла зв'язуються з основою, домішки вилучають (наприклад, змивають) і антитіла вивільняють шляхом застосування визначених умов (сіль, нагрівання і т.д.).
Різні способи кількісного визначення ступеня очищення білка або пептиду будуть відомі фахівцям в даній галузі з урахуванням даного винаходу. Вони включають, наприклад, визначення питомої активності активної фракції або оцінювання кількості поліпептидів в фракції за допомогою аналізу ЗОБ/РАСЕ. Іншим способом оцінювання чистоти фракції є обчислення питомої активності фракції, порівняння її з питомою активністю початкового екстракту і, таким чином, обчислення ступеня чистоти. Фактичні одиниці, використовувані для позначення величини активності, безумовно, залежать від конкретного способу аналізу, вибраного для відстеження очищення і того, чи демонструє білок, що експресується, або пептид, активність, що піддається виявленню.
Відомо, що міграція поліпептиду може варіюватися, іноді значно, залежно від умов
ЗО5Б/РАСЕ (Сараїді еї а/, 1977). Таким чином, буде зрозуміло, що в різних умовах електрофорезу гадана молекулярна маса очищених або частково очищених продуктів експресії може варіюватися.
ІП. Активна/пасивна імунізація і лікування/попередження інфекції чікунгунья
А. Складання і введення
Даний винахід належить до фармацевтичних композицій, що містять антитіла проти вірусу чікунгунья і антигени для їхнього одержання. Такі композиції містять профілактично або терапевтично ефективну кількість антитіла або його фрагмента, або пептидного імуногена, і
Зо фармацевтично прийнятний носій. У конкретному варіанті здійснення термін "фармацевтично прийнятний" означає схвалений регулювальним органом федерального уряду або уряду штату або наведений у Фармакопеї США або іншій загальновизнаній фармакопеї для застосування у тварин і більш конкретно у людини. Термін "носій" належить до розріджувача, ексципієнта або наповнювача, з якими вводять терапевтичний засіб. Такі фармацевтичні носії можуть являти собою стерильні рідини, такі як вода і масла, включаючи масла нафтового, тваринного, рослинного або синтетичного походження, такі як арахісова олія, соєва олія, мінеральне масло, кунжутна олія і т.п. Зокрема, вода є носієм, коли фармацевтичну композицію вводять внутрішньовенно. Також як рідкі носії можна використовувати сольові розчини і водні розчини декстрози і гліцерину, зокрема, для ін'єкційних розчинів. Інші придатні фармацевтичні ексципієнти включають крохмаль, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, борошно, крейду, силікагель, стеарат натрію, гліцерин моностеарат, тальк, хлорид натрію, сухе зняте молоко, гліцерин, пропілен гліколь, воду, етанол і т.п.
Якщо бажано, композиція також може містити невеликі кількості змочувальних засобів або емульгаторів або рн-буферних засобів. Ці композиції можуть мати форму розчинів, суспензій, емульсій, таблеток, пілюль, капсул, порошків, складів з уповільненим вивільненням і т.п.
Пероральні склади можуть включати стандартні носії, такі як маніт, лактоза, крохмаль, стеарат магнію, сахаринат натрію, целюлоза, магній карбонат, і т.д. фармацевтичної категорії. Приклади придатних фармацевтичних засобів описані в "Кетіпдіоп'є Рпаппасешііса! бсієпсе5". Такі композиції містять профілактично або терапевтично ефективну кількість антитіла або його фрагмента, переважно в очищеній формі, разом з придатною кількістю носія, щоб забезпечити форму для належного введення пацієнту. Склад повинен бути придатним для шляху введення, який може бути пероральним, внутрішньовенним, внутрішньоартеріальним, інтрабукальним, інтраназальним, здійснюваного через небулайзер, бронхіальну інгаляцію, або, який доставляється за допомогою механічної вентиляції.
Також передбачаються активні вакцини, де антитіла, подібні до антитіл, які описані, продукуються /п умо у суб'єкта, що має ризик інфекції чікунгунья. Послідовності для ЕЇ і Е2 наведені як БЕО ІЮ МО: 253-276 в списку послідовностей, що прикладається. Такі вакцини можна складати для парентерального введення, наприклад, складати для ін'єкції внутрішньошкірним, внутрішньовенним, внутрішньом'язовим, підшкірним або навіть бо внутрішньочеревинним шляхами. Передбачається введення внутрішньошкірним (р внутрішньом'язовим шляхами. Альтернативно вакцину можна вводити місцевим шляхом безпосередньо на слизову оболонку, наприклад, за допомогою назальних крапель, інгаляції або через небулайзер. Фармацевтично прийнятні солі включають кислі солі і солі, які утворені з неорганічними кислотами, наприклад, такими як хлористоводнева або фосфорна кислота, або з органічними кислотами, такими як оцтова, щавлева, виннокам'яна, мигдалева і т.п. Солі, утворені з вільними карбоксильними групами, також можуть походити з неорганічних основ, наприклад, таких як гідроксиди натрію, калію, амонію, кальцію або заліза, і таких органічних основ, як ізопропіламін, триметиламін, 2-етиламіноетанол, гістидин, прокаїн і т.п.
Пасивне перенесення антитіл, відомо як штучно набутий пасивний імунітет, звичайно залучає застосування внутрішньовенних або внутрішньом'язових ін'єкцій. Форми антитіла можуть являти собою плазму або сироватку крові людини або тварини, об'єднаний імуноглобулін для внутрішньовенного (ІМІС) або внутрішньом'язового (б) застосування, МІС або ІЗ людини з високим титром від імунізованих донорів або донорів, що видужують від захворювання, і моноклональні антитіла (МАБ). Такий імунітет звичайно триває тільки короткий період часу, а також існує потенційний ризик реакцій гіперчутливості і сироваткової хвороби, особливо внаслідок гамма-глобуліну, що походить не з людини. Однак пасивний імунітет забезпечує негайний захист. Антитіла можна складати в носії, придатному для ін'єкції, тобто, який стерильний і прохідний через голку шприца.
Як правило, інгредієнти композицій за винаходом надають або окремо, або змішаними разом в одиничній дозованій формі, наприклад, як сухий ліофілізований порошок або концентрат в герметично закритому контейнері, що не містить води, такому як ампула або саше, на яких зазначена кількість активної речовини. Коли композицію вводять за допомогою інфузії, її можна розподіляти з використанням пляшки для інфузії, що містить стерильну воду або сольовий розчин фармацевтичної категорії. Коли композицію вводять за допомогою ін'єкції, може бути надана ампула стерильної води для ін'єкцій або сольовий розчин, так щоб інгредієнти можна було змішати перед введенням.
Композиції за винаходом можна складати як нейтральні або сольові форми. Фармацевтично прийнятні солі включають солі, утворені з аніонами, такими як аніони хлористоводневої, фосфорної, оцтової, щавлевої, виннокам'яної кислот і т.д., і солі, утворені з катіонами, такими як катіони, утворені з гідроксиду натрію, калію, амонію, кальцію, заліза, ізопропіламіну, триєтиламіну, 2-етиламіноетанолу, гістидину, прокаїну і т.д.
ЇМ. Кон'югати антитіл
Антитіла за даним винаходом можуть бути зв'язані щонайменше з одним засобом з утворюванням кон'югата антитіл. Для підвищення ефективності молекул антитіл як діагностичних або лікарських засобів, є загальноприйнятим зшивання або ковалентне зв'язування або утворювання комплексу щонайменше з однією бажаною молекулою або частиною. Така молекула або частина може являти собою, але не обмежується ними, щонайменше одну ефекторну або репортерну молекулу. Ефекторні молекули включають молекули, що володіють бажаною активністю, наприклад, цитотоксичною активністю.
Необмежуючі приклади ефекторних молекул, які зв'язані з антитілами, включають токсини, протипухлинні засоби, терапевтичні ферменти, радіонукліди, противірусні засоби, хелатуючі агенти, цитокіни, фактори росту, і оліго- або полінуклеотиди. Напроти, репортерну молекулу визначають як будь-яку частину, яка може бути виявлена з використанням аналізу.
Необмежуючі приклади репортерних молекул, які кон'югують з антитілами, включають ферменти, радіоактивні мітки, гаптени, флуоресцентні мітки, фосфоресцентні молекули, хемілюмінесцентні молекули, хромофори, фотоафінні молекули, забарвлені частинки або ліганди, такі як біотин.
Кон'югати антитіл, як правило, є переважними для застосування як діагностичні засоби.
Антитільні діагностичні засоби, як правило, належать до двох класів: для застосування в діагностиці /л м/то, такій як різні імуноаналізи, і для застосування в протоколах діагностики /л умо, звичайно відомі як "візуалізація за допомогою антитіл". В даній галузі відомо багато придатних візуалізувальних засобів, також як і способів їх зв'язування з антитілами (див., наприклад, патенти США 5021236, 4938948 і 4472509). Використовувані візуалізувальні частини можуть являти собою парамагнітні іони, радіоактивні ізотопи, флуорохроми, що виявляються за допомогою ЯМР речовини і засоби рентгенографії.
У випадку парамагнітних іонів як приклади можуть бути згадані іони, такі як хром (ІІ), марганець (ІІ), залізо (1), залізо (ІІ), кобальт (Ії), нікель (Ії), мідь (ІІ), неодимій (ІІ), самарій (ІІ), ітербій (ІІІ), гадоліній (І), ванадій (І), тербій (ІІ), диспрозій (І), гольмій (ІП) і/або ербій (ІІ), причому особливо переважним є гадоліній. они, придатні в інших контекстах, таких як рентгенографія, включають, але не обмежуються ними, лантан (ІІ), золото (ІІ), свинець (ІЇ) їі особливо вісмут (ІП).
У випадку радіоактивних ізотопів для терапевтичного і/або діагностичного застосування, можуть бути згадані астат-", "вуглець, "хром, Збхлор, ""кобальт, "кобальт, мідь", 722Ец, галійб",
Зводень, йод!?З, йод!?», йод'З!, індій!!!, залізо, З"фосфор, реній'8б, реній'88, "зселен, З»сірка, технецій??т і/або ітрій?о. Часто 725 є переважним для застосування у визначених варіантах здійснення і технецій?от і/або індій!!! також часто є переважними внаслідок їхньої низької енергії і придатності для далекого виявлення. Радіоактивно мічені моноклональні антитіла за даним винаходом можна одержувати способами, добре відомими в даній галузі. Наприклад, моноклональні антитіла можна йодувати за допомогою контакту з йодидом натрію і/або калію і хімічним окисником, таким як гіпохлорит натрію або ферментативний окисник, такий як лактопероксидаза. Моноклональні антитіла за винаходом можуть бути міченими технеціємУт за допомогою процесу обміну лігандами, наприклад, за допомогою відновлення пертехнату розчином олова, хелатування відновленого технецію на колонці зерпадех і внесення антитіла у цю колонку. Альтернативно можна використовувати пряме мічення, наприклад, за допомогою інкубації пертехнату, відновника, такого як 5МСІ», буферного розчину, такого як розчин фталату натрію-калію і антитіла. Проміжні функціональні групи, які часто використовують для зв'язування радіоіїзотопів, які існують як іони металів, з антитілом, являють собою діетилентриамінпентаоцтову кислоту (ОТРА) або етилендіамінтетраоцтову кислоту (ЕЮОТА).
Флуоресцентні мітки, що передбачаються для застосування як кон'югати, включають АїЇеха 350, АіІєха 430, АМСА, ВОБІРМУ 630/650, ВОБІРМУ 650/665, ВОБІРУ-РІ, ВОБІРУ-НбОа, ВОБІРУ-
ТМА, ВОБІРУ-ТАХ, Сазсаде Віпє, СуЗ, Суб,б6-БАМ, флуоресцеїн ізотіоціанат, НЕХ, 6-9ОЕ,
Огедоп Стгеєп 488, Огедоп Стеєп 500, Огедоп Стеєп 514, Расіїс Вінє, ВЕС, ВНподатіпе Стееп,
ЕПпПодатіпе Кей, Кеподгарйіп, КОХ, ТАМКА, ТЕТ, тетраметилродамін і/або Техаз Кеад.
Іншим типом кон'югатів антитіл, що передбачаються в рамках даного винаходу, є кон'югати антитіл, призначені в основному для застосування /л уйто, де антитіло зв'язане з вторинним зв'язувальним лігандом і/або з ферментом (ферментною міткою), який буде утворювати забарвлений продукт при контакті з хромогенним субстратом. Приклади придатних ферментів включають уреазу, лужну фосфатазу, пероксидазу (хріну) або глюкозооксидазу. Переважними
Зо вторинними зв'язувальними лігандами є сполуки біотину, і авідину і стрептавідину.
Застосування таких міток добре відомо фахівцям в даній галузі і описано, наприклад, в патентах
США 3817837, 3850752, 3939350, 3996345, 4277437, 4275149 і 4366241.
Інший відомий спосіб сайт-специфічного зв'язування молекул з антитілами включає реакцію антитіл з афінними мітками на основі гаптенів. По суті, афінні мітки на основі гаптенів реагують з амінокислотами в антигензв'язувальному центрі, тим самим руйнуючи цю ділянку і блокуючи специфічну реакцію антигену. Однак це може не бути переважним, оскільки це призводить до втрати зв'язування антигену кон'югатом антитіла.
Молекули, що містять азидогрупи, також можна використовувати для утворювання ковалентних зв'язків з білками через реактивні нітренові проміжні сполуки, які утворюються під дією низькоіїнтенсивного ультрафіолетового світла (Роцег апа НаїІеу, 1983). Зокрема, 2- і 8- азидоаналоги пуринових нуклеотидів використовують як сайт-спрямовані фотозонди для ідентифікації білків, що зв'язують нуклеотиди, в неочищених клітинних екстрактах (Ожмеп5 8
Наїєу, 1987; Амепоп еї а/., 1985). 2- і 8-азидонуклеотиди також використовують для картування нуклеотидзв'язувальних доменів очищених білків (Кпаїооп еї а/., 1989; Кіпд еї а/., 1989; ОпоїаКіа еїа/., 1989), і їх можна використовувати як сполуки для зв'язування з антитілами.
У даній галузі відомо декілька способів приєднання або кон'югації антитіла з частиною, що кон'югується з ним. Деякі способи приєднання залучають застосування комплексу, що хелатує метал, з використанням, наприклад, органічного хелатуючого агента, такого як ангідрид діетилентриамінпентаоцтової кислоти (ОТРА); етилентриамінтетраоцтова кислота; М-хлор-п- толуолсульфонамід; і/або тетрахлор-Зо-бо-дифенілглікоурил-3, зв'язаного з антитілом (патенти
США 4472509 і 4938948). Моноклональні антитіла також можна піддавати реакції з ферментом у присутності агента реакції поєднання, такого як глутаральдегід або перйодат. Кон'югати з флуоресцеїновими маркерами одержують у присутності цих агентів реакції поєднання або за допомогою реакції з ізотіоціанатом. В патенті США 4938948, візуалізацію пухлин молочної залози здійснюють з використанням моноклональних антитіл і візуалізувальні частини, що піддаються виявленню, зв'язують з антитілом з використанням лінкерів, таких як метил-п- гідроксибензімідат або М-сукцинімідил-3-(4-гідроксифеніл)пропіонат.
В інших варіантах здійснення передбачається дериватизація імуноглобулінів за допомогою селективного внесення сульфгідрильних груп в Ес-ділянку імуноглобуліну з використанням умов бо реакції, які не змінюють антигензв'зувального центру антитіла. Описано, що кон'югати антитіл,
одержані по цій методології, демонструють покращену тривалість дії, специфічність і чутливість (патент США 5196066, включений у даний опис як посилання). Сайт-специфічне приєднання ефекторних або репортерних молекул, де репортерна або ефекторна молекула кон'югована з вуглеводним залишком Ес-ділянки, також описано в літературі (О'ЗНаппевззу еї а!/, 1987).
Описано, що цей підхід забезпечує діагностично і терапевтично перспективні антитіла, які у цей час проходять клінічне оцінювання.
М. Способи імунодетекції
У наступних варіантах здійснення даний винахід належить до способів імунодетекції для зв'язування, очищення, вилучення, кількісного визначення або іншого виявлення в цілому вірусу чікунгунья і асоційованих з ним антигенів. У той час як такі способи можна використовувати традиційним чином, іншим застосуванням є контроль якості і моніторинг вакцин і інших матеріалів, що містять вірус, де антитіла за даним винаходом можна використовувати для оцінювання кількості або цілісності (тобто довготривалої стабільності) антигенів НІ в вірусах.
Альтернативно способи можна використовувати для скринінгу різних антитіл відносно профілів придатної/бажаної реактивності.
Деякі способи імунодетекції включають твердофазовий імуноферментний аналіз (ЕГІЗА), радіоїмунний аналіз (КА), імунорадіометричний аналіз, флуороімуноаналіз, хемілюмінесцентний аналіз, біолюмінесцентний аналіз і вестерн-блотинг, серед інших. Зокрема, передбачається конкурентний аналіз для виявлення і кількісного визначення антитіл проти вірусу чікунгунья, спрямованих на конкретні епітопи паразитів в зразках. Стадії різних придатних способів імунодетекції описані в науковій літературі, наприклад, такій як ОооїїшШе апа Веп-7еем (1999), с1Шріє апа Саіапа (1993), Оє дадег еї а/. (1993) і МаКатига еї а/. (1987). Як правило, способи імуноблотинга включають одержання зразка, що приблизно містить вірус чікунгунья, і приведення у контакт зразка з першим антитілом відповідно до даного винаходу, у відповідних випадках, в умовах, ефективних для забезпечення утворювання імунокомплексів.
Ці способи включають способи очищення вірусу чікунгунья або родинних антигенів зі зразка.
Антитіло переважно зв'язують з твердою основою, наприклад, у формі матриксу колонки, і зразок, що приблизно містить вірус чікунгунья або антигенний компонент, наносять на іммобілізоване антитіло. Небажані компоненти змивають з колонки, залишаючи антиген вірусу
Зо чікунгунья в імунному комплексі з іммобілізованим антитілом, яке потім збирають шляхом вилучення організму або антигену з колонки.
Способи імунного зв'язування також включають способи виявлення і кількісного визначення вірусу чікунгунья або споріднених компонентів в зразку і виявлення і кількісне визначення яких- небудь імунних комплексів, що утворилися в процесі зв'язування. У цьому випадку можна одержати зразок, що приблизно містить вірус чікунгунья або його антигени, і привести зразок у контакт з антитілом, яке зв'язує вірус чікунгунья або його компоненти, а потім провести виявлення і кількісне визначення імунних комплексів, що утворилися в конкретних умовах. З погляду виявлення антигену біологічний зразок, що аналізується, може являти собою будь-який зразок, який приблизно містить вірус чікунгунья або антиген вірусу чікунгунья, такий як зріз або зразок тканини, екстракт гомогенізованої тканини, біологічна рідина, включаючи кров і сироватку, або секрет, такий як кал або сеча.
Приведення у контакт вибраного біологічного зразка з антитілом в ефективних умовах і протягом періоду часу, достатнього для забезпечення утворювання імунних комплексів (первинних імунних комплексів), звичайно є питанням простого додавання композиції антитіла до зразка і інкубації суміші протягом періоду часу, достатньо тривалого, щоб антитіла утворювали імунні комплекси, тобто зв'язувалися з вірусом чікунгунья або присутніми антигенами. Після цього композицію зразок-антитіло, таку як зріз тканини, планшет для ЕГІЗА, дот-блот або вестерн-блот, звичайно промивають для вилучення будь-яких неспецифічно зв'язаних типів антитіл, забезпечуючи виявлення тільки тих антитіл, які специфічно зв'язалися з первинними імунними комплексами.
Як правило, виявлення утворювання імунного комплексу добре відомо в даній галузі і може бути досягнуто з використанням численних підходів. Ці способи звичайно основані на виявленні мітки або маркера, такого як радіоактивні, флуоресцентні, біологічні і ферментні мітки. Патенти, що стосуються застосування таких міток, включають патенти США 3817837, 3850752, 3939350, 3996345, 4277437, 4275149 і 4366241. Безумовно, можуть бути знайдені додаткові переваги у використанні вторинного зв'язувального ліганду, такого як вторинне антитіло і/або ліганд- зв'язувальна система на основі біотину/авідину, як відомо в даній галузі.
Антитіло, використовуване для виявлення, може бути саме по собі зв'язано з міткою, що піддається виявленню, де як наслідок можна просто виявляти цю мітку, тим самим, дозволяючи бо визначати кількість первинних імунних комплексів в композиції. Альтернативно перше антитіло,
яке стає зв'язаним у первинних імунних комплексах, можна виявляти за допомогою другого зв'язувального ліганду, який володіє афінністю зв'язування з антитілом. У цих випадках другий зв'язувальний ліганд може бути зв'язаний з міткою, що піддається виявленню. Другий зв'язувальний ліганд сам по собі часто являє собою антитіло, яке, таким чином, може бути названо "вторинним" антитілом. Первинні імунні комплекси приводять у контакт з міченим вторинним зв'язувальним лігандом або антитілом в ефективних умовах і протягом періоду часу, достатнього для забезпечення утворювання вторинних імунних комплексів. Потім вторинні імунні комплекси звичайно промивають для вилучення яких-небудь неспецифічно зв'язаних мічених вторинних антитіл або лігандів, а потім виявляють мітку, що залишилася, у вторинних імунних комплексах.
Наступні способи включають виявлення первинних імунних комплексів за допомогою двостадійного підходу. Другий зв'язувальний ліганд, такий як антитіло, яке володіє афінністю зв'язування з антитілом, використовують для формування вторинних імунних комплексів, як описано вище. Після промивання вторинні імунні комплекси приводять у контакт з третім зв'язувальним лігандом або антитілом, які володіють афінністю зв'язування з вторинним антитілом, знову у ефективних умовах і протягом періоду часу, достатнього для забезпечення утворювання імунних комплексів (третинні імунні комплекси). Третій ліганд або антитіло зв'язані з міткою, що піддається виявленню, дозволяючи виявлення третинних імунних комплексів, що утворилися таким чином. Ця система може забезпечити посилення сигналу, якщо це бажано.
В одному способі імунодетекції використовується два різні антитіла. Перше біотинільоване антитіло використовують для виявлення антигену-мішені, а потім використовують друге антитіло для виявлення біотину, що знаходиться в комплексі. У цьому способі зразок, що підлягає дослідженню, спочатку інкубують в розчині, що містить антитіло першої стадії. Якщо антиген-мішень є присутнім, частина антитіла зв'язується з антигеном з утворюванням комплексу біотинільоване антитіло/антиген. Потім комплекс антитіло/антиген ампліфікують за допомогою інкубації в послідовних розчинах стрептавідину (або авідину), біотинільованої ДНК або комплементарної біотинільованої ДНК, причому на кожній стадії до комплексу антитіло/антиген додають додаткові ділянки біотину. Стадії ампліфікації повторюють доти, поки не досягнуть придатного рівня ампліфікації, і у цей момент часу зразок інкубують в розчині, що
Зо містить антитіло другої стадії проти біотину. Це антитіло другої стадії є міченим, наприклад, ферментом, який можна використовувати для виявлення присутності комплексу антитіло/"антиген за допомогою гістоензимології з використанням хромогенного субстрату. З використанням придатної ампліфікації можна одержувати кон'югат, який є макроскопічно видимим.
В іншому відомому способі імунодетекції використовується методологія імуно-ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція). Спосіб ПЛР є схожим зі способом Сапіог аж до інкубації з біотинільованою ДНК, однак замість використання множини раундів інкубації стрептавідину і біотинільованої ДНК, комплекс ДНК/біотин/стрептавідин/антитіло змивають з використанням буфера з низьким значенням рН або високим вмістом солі, який вивільняє антитіло. Потім одержаний розчин для промивання використовують для проведення реакції ПЛР з придатними праймерами з відповідними контролями. Щонайменше теоретично, неймовірну здатність до ампліфікації і специфічність ПЛР можна використовувати для виявлення однієї молекули антигену.
А. ЕПІЗА
Способи імуноаналізу, в їх найбільш простому і прямому значенні, являють собою аналізи зв'язування. Визначеними переважними способами імуноаналізу є різні типи твердофазового імуноферментного аналізу (ЕГІЗА) і радіоімунного аналізу (КІА), відомі в даній галузі. Також, зокрема, є придатним імуногістохімічне виявлення з використанням зрізів тканин. Однак буде добре зрозуміло, що виявлення не обмежується такими способами, і також можна
БО використовувати вестрн-блотинг, дот-блотинг, ЕАС5-аналіз і т.п.
В одному ілюстративному ЕГІ5А, антитіла за винаходом іммобілізують на вибраній поверхні, що володіє афінністю до білка, такій як полістироловий мікропланшет для титрування. Потім в лунки додають досліджувану композицію, що приблизно містить вірус чікунгунья або антиген вірусу чікунгунья. Після зв'язування і промивання для вилучення імунних комплексів, що неспецифічно зв'язалися, можна виявляти зв'язаний антиген. Виявлення можна здійснювати шляхом додавання іншого антитіла проти вірусу чікунгунья, яке зв'язане з міткою, що піддається виявленню. Цей тип ЕГІЗА являє собою простий "сендвіч-ЕГІЗА". Виявлення також можна здійснювати за допомогою додавання другого антитіла проти вірусу чікунгунья, а потім додавання третього антитіла, яке володіє афінністю зв'язування відносно другого антитіла, бо причому третє антитіло зв'язане з міткою, що піддається виявленню.
В іншому ілюстративному ЕГІЗА зразки, що приблизно містять вірус чікунгунья або антиген вірусу чікунгунья, іммобілізують на поверхні лунки, а потім приводять у контакт з антитілами проти вірусу чікунгунья за винаходом. Після зв'язування і промивання для вилучення неспецифічно зв'язаних імунних комплексів, проводять виявлення зв'язаних антитіл проти вірусу чікунгунья. Коли початкові антитіла проти вірусу чікунгунья зв'язані з міткою, що піддається виявленню, імунні комплекси можна виявляти прямо. Знову, імунні комплекси можна виявляти з використанням другого антитіла, яке володіє афінністю зв'язування з першим антитілом проти вірусу чікунгунья, причому друге антитіло зв'язане з міткою, що піддається виявленню.
Незалежно від використовуваного формату, ЕГІЗА володіють визначеними спільними ознаками, такими як нанесення, інкубація і зв'язування, промивання для вилучення компонентів, що неспецифічно зв'язалися, і виявлення зв'язаних імунних комплексів. Вони описані нижче.
При нанесенні на планшет або антигену, або антитіла, як правило, лунки планшета інкубують з розчином антигену або антитіла або протягом ночі, або протягом періоду, що становить визначену кількість годин. Потім лунки планшета промивають для вилучення неповністю адсорбованого матеріалу. На будь-які доступні поверхні лунок, що залишилися, потім "наносять" неспецифічний білок, який є антигенно нейтральним для досліджуваної антисироватки. Вони включають бичачий сироватковий альбумін (В5А), казеїн або розчини молочного порошку. Покриття дозволяє блокувати ділянки неспецифічної адсорбції на поверхні для іммобілізації, ії, таким чином, знижує фоновий сигнал, що викликається неспецифічним зв'язуванням антисироватки з поверхнею.
В ЕПІЗА, імовірно, більш традиційним є використання вторинних або третинних засобів для виявлення замість прямої процедури. Таким чином, після зв'язування білка або антитіла з лункою, покриття нереактивним матеріалом для зменшення фонового сигналу і промивання для вилучення незв'язаного матеріалу, поверхню, що іммобілізує, приводять у контакт з біологічним зразком, що підлягає дослідженню, в умовах, ефективних для забезпечення утворювання імунного комплексу (антиген/антитіло). Потім виявлення імунного комплексу вимагає міченого вторинного зв'язувального ліганду, або антитіла і вторинного зв'язувального ліганду, або антитіла разом з міченим третинним антитілом або третім зв'язувальним лігандом.
Зо "В умовах, ефективних для забезпечення утворювання імунного комплексу (антиген/антитіло)" означає, що умови переважно включають розведення антигенів і/або антитіл розчинами, такими як В5БА, бичачий гамма-глобулін (ВО) або фосфатно-сольовий буфер (РВБ)УТуеєеп. Ці засоби, що додаються, також мають тенденцію до сприяння зниженню неспецифічного фонового сигналу. "Придатні" умови також означають, що інкубацію проводять при температурі або протягом періоду часу, достатніх для забезпечення ефективного зв'язування. Стадії інкубації, як правило, тривають приблизно від 1 до 2 до 4 годин або близько до того, при температурах переважно порядку від 252С до 272С, або вони можуть тривати протягом ночі при приблизно 42С або близько до того.
Після всіх стадій інкубації в ЕГІЗА, піддану контакту поверхню промивають для вилучення матеріалу, що не утворив комплекс. Переважна методика промивання включає промивання розчином, таким як РВЗ/Тмеєеп або боратний буфер. Після утворювання специфічних імунних комплексів між досліджуваним зразком і матеріалом, що спочатку зв'язався, і подальшого промивання можна визначати наявність навіть малих кількостей імунних комплексів.
Для забезпечення засобів виявлення, друге або третє антитіло має зв'язану з ним мітку, що дозволяє виявлення. Переважно, вона являє собою фермент, який буде забезпечувати розвиток забарвлення при інкубації з відповідним хромогенним субстратом. Таким чином, наприклад, може бути бажаним приведення у контакт або інкубація першого і другого імунного комплексу з антитілом, кон'югованим з уреазою, глюкозооксидазою, лужною фосфатазою або пероксидазою, протягом періоду часу і в умовах, які сприяють проявленню подальшого утворювання імунного комплексу (наприклад, інкубація протягом 2 годин при кімнатній температурі в розчині, що містить РВ5, такому як РВ5-Гуееєп).
Після інкубації з міченим антитілом і після промивання для вилучення матеріалу, що не зв'язався, проводять кількісне визначення мітки, наприклад, за допомогою інкубації з хромогенним субстратом, таким як сечовина або бромкрезоловий фіолетовий, або 2,2'-азино-ді- (З-етил-бензтіазолін-6-сульфонова кислота (АВТ5), або Н2О», у випадку пероксидази як ферментної мітки. Потім проводять кількісне визначення за допомогою вимірювання ступеня забарвлення, що розвилося, наприклад, з використанням спектрофотометра видимого спектра.
В іншому варіанті здійснення даний винахід передбачає використання конкурентних бо форматів. Це, зокрема, є придатним для виявлення антитіл проти вірусу чікунгунья в зразку. У конкурентних аналізах невідому кількість сполуки, що аналізується, або антитіла визначають по його здатності витісняти відому кількість міченого антитіла або сполуки, що аналізується. Таким чином, втрата сигналу, що піддається кількісному визначенню, є ознакою кількості невідомого антитіла або сполуки, що аналізується, в зразку.
У рамках даного винаходу автори винаходу пропонують використовувати мічені моноклональні антитіла проти вірусу чікунгунья для визначення кількості антитіл проти вірусу чікунгунья в зразку. Основний формат включає приведення у контакт відомого моноклонального антитіла проти вірусу чікунгунья (зв'язаного з міткою, що піддається виявленню) з антигеном або частинкою вірусу чікунгунья. Антиген або організм вірусу чікунгунья переважно зв'язують з основою. Після зв'язування міченого моноклонального антитіла з основою додають зразок і інкубують в умовах, що дозволяють якому-небудь неміченому антитілу в зразку конкурувати з міченим моноклональним антитілом і, таким чином, витісняти його. За допомогою вимірювання або втраченої мітки, або мітки, що залишилася (і віднімання цієї кількості з вихідної кількості зв'язаної мітки), можна визначити, скільки неміченого антитіла зв'язано з основою і, таким чином, скільки антитіла було присутнім в зразку.
В. Вестерн-блотинг
Вестерн-блотинг (альтернативно імуноблотинг білків) являє собою аналітичний спосіб, використовуваний для виявлення конкретних білків в даному зразку гомогенату або екстракту тканини. В ньому використовується гель-електрофорез для розділення нативних і денатурованих білків по довжині поліпептиду (денатурувальні умови) або по 3-О структурі білка (нативні/не денатурувальні умови). Потім білки переносять на мембрану (як правило, нітроцелюлоза або РМОР), де їх досліджують (виявляють) 3 використанням антитіл, специфічних до білка-мішені.
Зразки можуть бути одержані з суцільної тканини або з клітинної культури. У більшості випадків солідні тканини спочатку руйнують механічно з використанням подрібнювача (для зразків великих об'ємів), з використанням гомогенізатора (менші об'єми) або за допомогою обробки ультразвуком. Клітини також можна руйнувати одним з описаних вище механічних способів. Однак слід зазначити, що бактерії, вірус або зразки навколишнього середовища можуть бути джерелом білка і, таким чином, вестерн-блотинг не обмежується тільки клітинними
Зо дослідженнями. Для сприяння лізису клітин і солюбілізації білків можна використовувати придатні детергенти, солі і буфери. Часто додають інгібітори протеаз і фосфатаз для відвертання розщеплення зразка його власними ферментами. Підготовку тканини часто проводять при холодних температурах щоб уникнути денатурації білків.
Білки зразка розділяють з використанням гель-електрофорезу. Розділення білків може бути здійснено по ізоелектричній точці (рі), молекулярній масі, електричному заряду або комбінації цих факторів. Характер розділення залежить від обробки зразка і природи гелю. Це є у високому ступені придатним способом визначення білка. Також можна використовувати двовимірний (2-0) гель, який розділяє білки з одного зразка у двох напрямках. Білки розділяються згідно з ізоелектричною точкою (значення рнН, при якому вони мають нейтральний сумарний заряд) у першому напрямку і згідно з їхньою молекулярною масою у другому напрямку.
Для одержання білків, доступних для виявлення антитілом, їх переміщають з гелю на мембрану, виготовлену з нітроцелюлози або полівінілідендифториду (РМОЕ). Мембрану поміщають над гелем і на нього поміщають стопку фільтрувального паперу. Усю стопку поміщають у буферний розчин, який переміщається нагору паперу за допомогою капілярної дії, залучаючи з собою білки. Інший спосіб перенесення білків називають електроблотингом, і в ньому використовується електричний струм для витягування білків з гелю на РМОЕ або нітроцелюлозну мембрану. Білки рухаються з гелю в мембрану, зберігаючи організацію, яку вони мали в гелі. У результаті цього процесу блотинга білки експонуються на тонкому поверхневому шарі для виявлення (див. нижче). Обидва типи мембрани вибирають внаслідок їхніх властивостей неспецифічного зв'язування білків (тобто зв'язують всі білки рівною мірою добре). Зв'язування білків основане на гідрофобній взаємодії, а також на зарядових взаємодіях між мембраною і білком. Нітроцелюлозні мембрани дешевше, ніж РМОЕ, однак вони значно більш крихкі і погано витримують повторне випробування. Однаковість і загальну ефективність перенесення білка з гелю на мембрану можна перевіряти за допомогою забарвлення мембрани кумасі брильянтовим синім або барвником Ропсеаи 5. Після перенесення виявлення білків проводять з використанням мічених первинних антитіл або немічених первинних антитіл з подальшим непрямим виявленням з використанням міченого білка А або вторинних мічених антитіл, що зв'язуються з Ес-ділянкою первинних антитіл. бо С. Імуногістохімія
Антитіла за даним винаходом також можна використовувати спільно як «зі свіжозамороженими, так і/або фіксованими формаліном залитими парафіном блоками тканин для дослідження за допомогою імуногістохімії (НС). Спосіб одержання блоків тканин з конкретних зразків успішно використовувався в попередніх дослідженнях за допомогою ІНС різних прогностичних факторів, і він добре відомий фахівцям в даній галузі (Вгом/п еї а/., 1990;
Арропаапго еї! а!., 1990; Айгеай еї а/., 1990).
У короткому викладенні, заморожені зрізи можна одержувати за допомогою регідратації 50 нг замороженої "розтертої" тканини при кімнатній температурі у фосфатно-сольовому буфері (РВ5) у невеликих пластмасових капсулах; осадження частинок за допомогою центрифугування; ресуспендування їх у в'язкому заливальному середовищі (ОСТ); перекидання капсули і/або знову осадження за допомогою центрифугування; швидкого заморожування в ізопентані, що має температуру -702С; розрізання пластмасової капсули і/або вилучення замороженого циліндра тканини; закріплення тканинного циліндра на патроні кріостата- мікротома; і/або проведення 25-50 послідовних зрізів з капсули. Альтернативно для серійного нарізання зрізів можна використовувати заморожені зразки тканин.
Довговічні зрізи можна одержувати подібним способом, що залучає регідратацію 50 мг зразка в пластмасовій мікроцентрифужній пробірці; осадження; ресуспендування в 1095 формаліну для фіксації протягом 4 годин; промивання/осадження; ресуспендування в теплому 2,595 агарі; осадження; охолодження в льодяній воді для застигання агару; вилучення блоку тканини/агару з пробірки; просочування і/або заливання блоку парафіном і/або проведення аж до 50 послідовних довговічних зрізів. Знову, цілі зразки тканини можна заміняти. р. Набори для імунодетекції
У наступних варіантах здійснення даний винахід належить до наборів для імунодетекції для застосування в способах імунодетекції описаних вище. Оскільки антитіла можна використовувати для виявлення вірусу чікунгунья або антигенів вірусу чікунгунья, антитіла можуть бути включені в набір. Таким чином, набори для імунодетекції включають у придатних контейнерах перше антитіло, яке зв'язується з вірусом чікунгунья або антигеном вірусу чікунгунья, і необов'язково реагент для імунодетекції.
У визначених варіантах здійснення антитіло проти вірусу чікунгунья може бути попередньо
Зо зв'язано з твердою основою, такою як матриця колонки і/або лунка планшета для мікротитрування. Реагенти для імунодетекції в наборі можуть мати кожну з множини форм, включаючи мітки, що піддаються виявленню, які асоційовані або зв'язані з даним антитілом.
Також передбачаються мітки, що піддаються виявленню, які асоційовані або зв'язані з вторинним зв'язувальним лігандом. Ілюстративні вторинні ліганди являють собою вторинні антитіла, які володіють афінністю зв'язування відносно першого антитіла.
Наступні придатні реагенти імунодетекції для застосування в наборах за даним винаходом включають двокомпонентний реагент, який містить вторинне антитіло, яке володіє афінністю зв'язування з першим антитілом, а також третє антитіло, яке володіє афінністю зв'язування з другим антитілом, причому третє антитіло зв'язане з міткою, що піддається виявленню. Як відзначалося вище, в даній галузі відомий ряд ілюстративних міток, і всі такі мітки можна використовувати в рамках даного винаходу.
Крім того, набори можуть містити придатним чином розподілену на аліквоти композицію вірусу чікунгунья або антигену вірусу чікунгунья, як мічених, так і немічених, які можна використовувати для одержання стандартної кривої для аналізу виявлення. Набори можуть містити кон'югати антитіло-мітка, або у повністю кон'югованій формі, або у формі проміжних сполук, або як окремі частини для кон'югації користувачем набору. Компоненти наборів можуть бути упаковані або у водних середовищах, або у ліофілізованій формі.
Контейнери набору, як правило, включають щонайменше один флакон, тест-пробірку, колбу, пляшку, шприц або інші контейнери, в які антитіло може бути поміщено або переважно придатним чином розподілене аліквотами. Набори за даним винаходом, як правило, включають засоби для вмісту антитіла, антигену і будь-які інші контейнери, що знаходяться поблизу один від одного в обмеженому просторі для комерційного продажу. Такі контейнери можуть включати інжекційно формівні або формівні литтям з роздуванням пластмасові контейнери, в яких утримуються бажані флакони.
МІ. Приклади
Наступні приклади включені для демонстрації переважних варіантів здійснення. Фахівцям в даній галузі має бути зрозуміло, що способи, описані в прикладах, які йдуть далі, відображають способи, розроблені авторами винаходу для належного застосування варіантів здійснення на практиці, і, таким чином, їх можна вважати такими, що складають переважні способи для його бо застосування на практиці. Однак фахівці в даній галузі повинні, в світлі даного винаходу,
зрозуміти, що багато змін можна вносити в конкретні варіанти здійснення, які описані, і все ще одержувати подібний або схожий результат без відхилення від суті і обсягу винаходу.
Приклад 1 - Матеріали і способи
Виділення тАр людини. РВМС одержували від людини через -5 років після документованої симптоматичної інфекції СНКМ в Шрі-Ланці. В-клітини трансформували в 384-лункових планшетах за допомогою ЕВМ у присутності Ср. Супернатанти одержаних В-клітинних лімфобластних ліній піддавали скринінгу відносно присутності специфічних до СНКМ людини зв'язувальних антитіл за допомогою ЕГІЗА з використанням живого вірусу СНІКМ вакцинного штаму 181/25 як антиген. Трансформовані В-клітини збирали і піддавали злиттю з мієломною клітинною лінією, розподіляли в планшети для культивування і збільшення в кількості, і піддавали селекції за допомогою вирощування в середовищі з гіпоксантином-аміноптерином- тимідином, що містило уабаїн. Гібридоми клонували за допомогою сортування одиничних клітин. Супернатанти клонованих гібридом, вирощених в безсироватковому середовищі, збирали, очищали і концентрували з очищеного середовища за допомогою хроматографії з білком 5.
Аналізи нейтралізації. Очищені білки тАбБ-ІдО досліджували відносно нейтралізуючої активності з використанням репліконних частинок (МКР) вірусу СНКМ або кожного з 4 живих вірусів чікунгунья, що відповідають різноманітному генетичному і географічному профілю. МАР
СНІКМ, які кодували СЕР, одержували шляхом розробки системи-помічника реплікона СНІКМ з трьох плазмід на основі плазміди, що містила повнорозмірну кКДНК геноної послідовності СНІКМ штаму 5115649 (СепВапк: зИ0189061.1), з використанням методологій клонування на основі
ПЛР. МЕР інкубували з розведеннями ІпАб, а потім інокулювали в моношари клітин Мего 81 на 18 години; інфіковані клітини і тотальні клітини (ідентифіковані з використанням ядерного маркера) ідентифікували з використанням флуоресцентної візуалізувальної системи. Для визначення охоплення і ефективності нейтралізації тАбБ автори винаходу використовували чотири репрезентативні живі штами вірусу з щонайменше одним репрезентативним штамом для кожного генотипу СНІКМУ, включаючи один прототипний вірус з кожного з трьох генотипів, а також штам поточного спалаху в Карибському басейні. Нейтралізуючу активність визначали з використанням тесту нейтралізації по приглушенню фокусоутворення. Серійні розведення
Зо очищених тАб людини інкубували з 100 фокусоутворювальними одиницями СНІКМ при 3720 протягом 1 години. Комплекси МАбБ-вірус додавали до клітин Мего в 96-лункових планшетах, а потім виявляли бляшки після фіксації клітин з використанням виявлення з імунопероксидазою і кількісно визначали з використанням аналізатора Іттипозрої 5.0.37 тасгоапаїугег (СейПшаг
Тесппоодіе5 14). Величини ЕС5о обчислювали з використанням нелінійного регресійного аналізу після порівняння з лунками, інокульованими СНІКМ під час відсутності антитіла.
ЕПЗА Е2. Рекомбінантний білок ектодомену Е2 СНІКМ (що відповідає штаму СНІКМ-І 2006) одержували в Є. со); і адсорбували на мікропланшети для титрування. Наносили тАБб людини, а потім проводили виявлення зв'язаних специфічних до СНКМ тАр з використанням кон'югованого з біотином антитіла кози проти ЇДдДО людини.
Конкурентний аналіз зв'язування. Автори винаходу ідентифікували групи антитіл, що зв'язуються з тією самою основною антигенною ділянкою, по конкуренції пар антитіл за зв'язування з білюом ектодомену Е2 СНІКМ-І К2006, що містить полігістидинову мітку, зв'язану з наконечником біосенсора Апіі-Репіа-Нів ріозепвзог іІїр (Еопебіо й18-5077) в біосенсорі Осієї Кеа
Біозепзог (ЕГопебіо).
Апланін-сканувальний мутагенез для картування епітопів. Експресуючу конструкцію для білка оболонки СНІКМ (штам 527, Опіргої Кеїегепсе ЖО89ОИХ5) з С-кінцевою міткою У5 піддавали аланін-сканувальному мутагенезу для одержання всебічної бібліотеки мутацій. Праймери конструювали для мутації кожного залишку в ділянках Е2, 6К і Е1 білків оболонки (залишки
У326-НІ1248 в структурному полібілку) на аланін; кодони аланіну піддавали мутації на серин.
Всього було одержано 910 мутантів білка оболонки СНІКМУ. Зниження зв'язування тАб з кожною конструкцією досліджували за допомогою імунофлуоресцентного зв'язувального аналізу з використанням клітинної флуоресценції, що виявляється з використанням високопродуктивного протокового цитометра.
Механізм нейтралізації. МАБ піддавали взаємодії з МЕР до або після зв'язування з клітинами
Мего 81, а потім клітини забарвлювали, візуалізували і аналізували, як описано для аналізів нейтралізації МКР, для визначення того, на якій стадії тАб демонстрували противірусний ефект. Аналізи злиття зсередини і злиття зовні проводили, як докладно описано в "Додаткових експериментальних методиках".
Дослідження захисту /л мімо у мишей. Мишей /паг" розводили в віваріях, що не мають бо патогенів, і експерименти по інфікуванню проводили в приміщеннях А-В5І- 3. Ін'єкції в подушечки стоп проводили під анестезією. Для досліджень профілактики тАб людини вводили за допомогою внутрішньочеревинної ін'єкції мишам //лаг" в віці б тижнів за 1 добу до підшкірної інокуляції в подушечку лапи за допомогою 10 ФУО СНІКМ-І К. Для терапевтичних досліджень 10
ФУО СНІКУ-Ї К доставляли за 24, 48 або 60 годин до введення однократної дози індивідуальних тАБ або комбінацій тАб людини в зазначених дозах.
Індивідуум і виділення клітин периферичної крові. В іншому здоровий індивідуум був наданий в жовтні 2006 року з інфекцією СНІКМ. Симптоми інфекції СНІКМ збіглися з поверненням зі Шрі-Ланки, що відвідується протягом одного року, в ході якого пацієнт проводив час на міських територіях (в основному Коломбо), і в сільській місцевості, включаючи тропічний ліс і прибережні зони. Пацієнт переніс множину укусів комах в ході відвідування, але у нього зберігався гарний стан здоров'я протягом перебування. Після повернення в США індивідуум надійшов до лікаря загальної практики з гарячкою (1022 (38,92С)), що тривала три доби.
Пацієнт повідомив про супутній розвиток двостороннього болю в суглобах ліктів і пальців і виступаючий несверблячий висип на спині і животі, що супроводжується загальним "болем в тілі" і головним болем. При надходженні він мав гарний вигляд і у нього не було гострого порушення. М'який, блідий, папульозний сип виступав на спині, грудях і животі (див. фіг. 4).
Відзначався м'який кон'юнктивіт. При обстеженні скелета відзначалися болісні опухлі пальці, коліна і лікті, на яких не було еритеми і випоту. М'язова сила і амплітуда рухів уражених суглобів були інтактними, однак рух в суглобах викликав біль.
Була взята кров на СВС, серологію і мазки на малярію, і пацієнт був відпущений. Кількість лейкоцитів становила 4,0х107 клітин/мм?, гематокрит становив 4195 їі кількість тромбоцитів становила 180000/мм3. Загальна кількість лімфоцитів становила 1,0х107 клітин/мм3. Мазки на малярію і серологічні тести були негативними, і пацієнту орієнтовно поставили діагноз вірусного захворювання невідомої етіології.
Пацієнт повернувся в клініку через два тижні, без гарячки, але з персистувальною артралгією, найбільше вираженою в пальцях. Пацієнт описував біль і скутість, що не покращилися і, можливо, що погіршилися відносно його попереднього відвідування. Пацієнт повідомив, що в регіоні його попереднього подорожі відбувався спалах чікунгунья. Була взята кров і відділена сироватка і відправлена в СОС для ПЛР і серологічного тестування, які
Зо підтвердили діагноз інфекції чікунгунья.
В квітні 2012 року через п'ять з половиною років після зазначеної інфекції, мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) виділили за допомогою розділення в градієнті щільності на
РісоїЇ без відомого впливу СНІКМ або інших артритогенних альфавірусів у проміжний період під час життя в США. Клітини піддавали кріозберіганню і зберігали в рідкому азоті до дослідження.
Протокол набору індивідуумів і взяття зразків крові був схвалений комісією з біомедицинської етики Опімегейу ої Мопій Сагоїїпа аї Спареї НІЇ ії Мапаегтрії Опімегейу Меадіса! Сепіег.
Одержання гібридом людини. Кріозбережені зразки РВМС розморожували швидко при 3720 і промивали перед трансформацією вірусом Епштейна-Барр, як описано (тії еї а/., 2012).
Культури інкубували при 372С з 595 СО» протягом 10 діб і піддавали скринінгу відносно присутності клітин, що секретують антитіла, специфічні до СНІКМ, в супернатанті з використанням аналізів нейтралізації МКР ії ЕГІЗА. Автори винаходу провели дві незалежні трансформації з використанням окремих аліквотів того самого зразка крові.
В першій трансформації автори винаходу одержали 3840 культур (10х384-лункових планшетів), що містили в середньому 42 трансформованих В-клітинних колонії на культуру з усього приблизно 161000 індивідуальних В-клітинних колоній. Для скринінгу антитіл, які демонструють нейтралізуючу активність проти СНІКМ в умовах В512, автори винаходу розробили високопродуктивний аналіз нейтралізації по зменшенню флуоресценції з використанням репліконних частинок (МКР) СНІКУ, які експресують зелений флуоресцентний білок, як репортер. МКР являють собою віріони, які експонують нативні вірусні глікопротеїни, але позбавлені повнорозмірного вірусного генома і, таким чином, нездатні давати інфекційне потомство (Мапаег Мееєп еїа/., 2012). Автори винаходу використовували УКР, одержані зі штаму 5115649 (Мотізоп еї а/, 2011), який був виділений в Шрі-Ланці в 2006 році. 5115649 є співпадаючим за часом зі штамом, який інфікував донора, і, імовірно, має дуже подібну послідовність. Із цього експерименту автори винаходу ідентифікували 160 В-клітинних культур, супернатанти яких опосередковували нейтралізацію з 9095 інгібуванням, що вказує на частоту 0,09996 вірус-специфічних В-клітин на всі В-клітини (41 на 1000). Усього 60 з цих ліній здійснювали інгібування на рівні »9895, і при вторинному скринінгу супернатанти 58 з 60 ліній містили антитіла, які зв'язувалися в ЕГІЗА з продукованим клітинною культурою СНІКМ (штам 181/25), іммобілізованого на планшеті для імуноаналізу. Автори винаходу відібрали 35 з 58 ліній бо з найбільш високою активністю нейтралізації і зв'язування для злиття гібридом, ідентифікували
22 гібридоми з супернатантами, що зв'язують вірус, після злиття і посіву, і успішно виділили 14 клонів для подальшого дослідження. У другій трансформації автори винаходу одержали 1536 культур (4х384-лункових планшета), що містять у середньому 38 трансформованих В-клітинних колоній на культуру з здогадно всього приблизно 58000 протестованих індивідуальних В- клітинних колоній, що вказує на частоту вірус-специфічних В-клітин 0,195 (знову «1 на 1000). У цьому експерименті вони використовували первинний скринінг зв'язування в ЕГІ5А зі штамом
СНІКМ 181/25 без попереднього тесту нейтралізації. Автори винаходу ідентифікували 60 ліній з сигналом оптичної густини в ЕГІ5А, що більше ніж у чотири рази перевищує фоновий рівень, відібрали 30 ліній В-клітин з найбільш високим сигналом оптичної густини в ЕГІ5ЗА для злиття, ідентифікували 18 гібридом з супернатантами, що зв'язують вірус, після злиття і посіву, і успішно виділили 16 клонів для подальшого дослідження.
Злиття з клітинами мієломи. Клітини з лунок з супернатантами, здатними нейтралізувати інфекційність СНІКМ, піддавали злиттю з несекретуючими клітинами мієломи НММАЗ2.5, як описано (Зтійй еї а/, 2012). Одержані гібридоми відбирали по росту в середовищі з гіпоксантином-аміноптерином-тимідином (НАТ), що містило уабаїн, біологічно клонували за допомогою ЕАС5З одиничних клітин з використанням клітинного сортувальника ЕАС5ЗАЇа ПІ (ВО
Віозсіепсевз) і збільшували в кількості.
Продукування і очищення тАб людини. Лунки, що містили гібридоми, що продукують антитіла, специфічні до СНІКМ, клонували за допомогою трьох раундів лімітувального розведення або з використанням пристрою СіоперРіх (МоїІесшаг Оемісе5) відповідно до інструкцій виробника. Після одержання індивідуальних клонів кожну гібридому збільшували в кількості до 5095 змикання моношару в 75-см2 колбах. Для експресії антитіл клітини збирали з використанням клітинного шкребка, промивали безсироватковим середовищем (СІВСО
Нубгідота-5ЕМ від Іпмігодеп, 12045084) і розділяли нарівно на чотири колби об'ємом 225 см? (Согпіпд, 431082), що містили 250 мл безсироваткового середовища. Клітини інкубували протягом 21 доби, а потім середовище очищали центрифугуванням і пропускали через 0,2-мкм стерильний фільтр. Антитіла очищали з очищеного середовища за допомогою хроматографії з білком С (СЕ ге 5сієпсе5, Ргоївіп С НР СоЇштпв5).
Клітини. Клітини ВНК-21 (АТС СС -10) підтримували в мінімальному підтримувальному
Зо середовищі альфа («МЕМ; бібсо), доповненого 1095 ембріональною телячою сироваткою (ЕВ5) і 1095 фосфатом триптози (Зідта). Клітини Мего 81 (АТС СС -81) підтримували в «МЕМ, доповненого 595 ЕВ5. Середовище всіх клітин доповнювали 0,29 мг/мл І -глутаміну (ірсо), 100
О/мл пеніциліну (сірсо), 100 мкг/мл стрептоміцину (сірсо) і 500 нг/мл амфотеріцину В. Клітини підтримували при 372С у зволоженій атмосфері з 595 СО».
Одержання плазмідних конструкцій МКР СНІКМ. Система-помічник реплікона СНІКМ з трьома плазмідами була одержана з плазміди, що містила повнорозмірну кКДНК геномної послідовності СНІКМ штаму 5115649 (СепВапк: зИ0О189061.1), з використанням методологій клонування на основі ПЛР. Геном реплікона СНІКМ конструювали з використанням двостадійного процесу, який залучав одержання проміжного клонувального вектора, в якому повнорозмірна структурна касета СНІКМ була замінена ділянкою множинного клонування (МО5). Посилений зелений флуоресцентний білок (есЕР) субклонували в ділянку множинного клонування цієї плазміди з одержанням рмнНа1ї (реплікон СНІКМ 5115649 еоБгрР).
Конструювання системи-помічника з двома плазмідами включало багатостадійний процес клонування, який залучав одержання плазміди-помічника з повнорозмірним структурним геном за допомогою вилучення основної частини (6891 нуклеотидів) неструктурної касети СНІКМ.
Повнорозмірну структурну касету далі підрозділяли на дві конструкції: рмнНзЗ8 (капсидний помічник СНІКМ 5115649), яка містила послідовність гена капсиду, за якою ішла унікальна ділянка рестрикції Амгії, і рМНЗ9 (глікопротеїновий помічник СНІКМ 5115649), яка містила делецію в рамці зчитування капсидного РНК-зв'язувального домену за якою ішла інтактна кодуюча послідовність глікопротеїну оболонки (ЕЗ3-Е1).
Продукування рекомбінантного рб2-Е1 СНІКМ. Плазміду, що містила рб2 СНІКМ (тобто ЕЗ
І(а-к.51-А64|-ЕЕ2 Га.к.51-ЕЗ3611|-лінкер з 16 амінокислот-Е1 (а.к.м1-0411), за якими ішла Нів-мітка) (Мо55 еї а/.,, 2010) трансфікували в клітини 293Е з використанням реагенту 2931Тесііп (Іпмігодеп).
Після інкубації протягом 72 годин супернатант вилучали і клітини культивували протягом додаткових 72 годин. Об'єднані супернатанти наносили на колонку з нікель-агарозними гранулами (Соїавіо) і елюювали імідазолом. Білок далі очищали з використанням колонки для гель-фільтрації Зирегдех 5200 (ЗЕ І Шїе Зсієепсе5). Фракції, що містили білок рб2-ЕЇ СНІКМ, поєднували, заморожували і зберігали при -8020.
Одержання вихідного матеріалу МКР, що походили з СНІКМ штаму 5115649. Вихідний бо матеріал МКР виділяли з рекомбінантних плазмід СНІКМ у сертифікованому приміщенні з З рівнем біологічної безпеки (В5І 3) у біологічних ламінарних шафах відповідно до протоколів, схвалених Мапаегрій Опімегейу ЮОерагітепі ої Епмігоптепі, Неакй, апа Заїефгу і Мапаегрік
Іпзійшіопа! Віозагеу СоптітіШее. Три плазміди репліконної системи 5115649 лінеаризували розщепленням за допомогою Мої-НЕ, очищали за допомогою екстракції фенолом- хлороформом, і використовували як матриці у реакціях транскрипції з використанням набору для транскрипції тМевззаде тМаспіпе 5Рб (ІПе Тесппоіодіеєбє) з одержанням кепірованих повнорозмірних РНК-транскриптів /л ийго. Транскрипти вірусної РНК вводили в клітини ВНК21 за допомогою електропорації з використанням пристрою для електропорації СепеРиїзег.
Культуральні супернатанти, що містили МЕР, збирали через 24 години після електропорації; супернатанти очищали за допомогою центрифугування при 855х9 протягом 20 хв, розділяли на аліквоти і зберігали при -802С. Вихідний матеріал МЕР оцінювали на компетентний відносно збільшення в кількості рекомбінантний вірус за допомогою серійного пасирування 2095 вихідного матеріалу і 1095 культурального супернатанта пасажу 1 з використанням клітин
Мего81, які досліджували відносно до цитопатичного ефекту (СРЕ) через 72 години після інфікування. Вихідні матеріали вважали такими, що пройшли цей тест на безпеку, коли СРЕ не виявлявся в останньому пасажі. Потім вихідний матеріал переміщали з лабораторії В5І 3.
Аналіз нейтралізації УКР і аналіз з репортером СЕР. Клітини Мего 81 (2,25х103 клітин/лунка) висівали в лунки 384-лункових планшетів і інкубували при 372С протягом 24 годин. Чистий супернатант гібридоми або серійні розведення очищених тАб інкубували з МКР при МОЇ -5 інфекційних одиниць/клітина в буфері для розведення вірусу (МОВ; середовище КРМІ, що містить 20 мМ НЕРЕЗ5, доповнений 195 ЕВ5) при 372С протягом 1 години, а потім адсорбували на клітини. Клітини інкубували при 372С протягом 18 годин, забарвлювали барвником Хехста для мічення ядер і візуалізували з використанням візуалізувальної системи ІтадехХргевв Місто
ХІІ (МоІесшаг Оемісе5) в Мапаегрій Нідп-Тпгоцдприї Зсогеєепіпд Расіїйу. Тотальні і інфіковані
СНІКМ клітини (маркіровані експресією СЕР) кількісно визначали з використанням програмного забезпечення МеїахХргев55 (МоїІесціаг Оемісев) у двох полях зору на лунку. Для кожного антитіла визначали величини ЕСво з 9595 довірчим інтервалом з використанням нелінійної регресії для апроксимації окремих логістичних кривих росту з використанням програми К віаїйізійс5 (К.С.
Теат, 2014).
Зо Вихідні матеріали вірусу, одержані як антиген для ЕГІ5А. Плазміду інфекційного клону для вакцинного штаму СНІКМ 181/25 (І емій еї а/,, 1986 і Маїпоци еї а/, 2013) лінеаризували за допомогою Мой-НЕ і транскрибували /7 уйго з використанням набору для транскрипції тМевзаде тМаспіпе 5Рб (Ше Тесппоіодіе5). Вірусну РНК вводили в клітини ВНК21 за допомогою електропорації. Культуральні супернатанти збирали через 24 години, очищали за допомогою центрифугування при 855х9 протягом 20 хв, розділяли на аліквоти і зберігали при - 8020.
ЕГІЗА для вловлювання вірусу для скринінгу гібридом. Зв'язування антитіла з вірусними частинками проводили за допомогою покриття планшетів для аналізу очищеним тАб миші
СНК-187 (Раї ега/., 2013), приготовленим в концентрації 1 мкг/мл у буфері для зв'язування 0,1 М
МагСО:з і 0,1 М Мансо», рН 9,3, яке використовували для нанесення на планшети для ЕГІЗА (Мипс 242757), і інкубували при 42С протягом ночі. Після інкубації планшетів протягом 1 години з блокувальним буфером (195 сухе молоко і 295 сироватка кози в РВ5 з Туєеп 20 |ІРВЗ-Т)І), планшети промивали п'ять разів за допомогою РВЗ-Т і інкубували з 25 мкл культурального супернатанта моношарів клітин ВНК21, інфікованих вакцинним штамом СНІКМ 181/25. Після інкубації при кімнатній температурі протягом 1 години планшети промивали десять разів РВ5, і додавали 10 мкл культурального супернатанта В-клітин до 25 мкл/лунка блокувального буфера.
Планшети інкубували при кімнатній температурі протягом 1 години, а потім промивали п'ять разів за допомогою РВ5З-Т. Вторинне антитіло, кон'юговане з лужною фосфатазою (антитіло кози проти Ес людини; Мегідіап І їе Зсіепсе, М/99008А) застосовували у розведенні 1:5000 в 25 мкл/лунка блокувального буфера і планшети інкубували при кімнатній температурі протягом 1 години. Після п'яти промивань за допомогою РВ5-Т, додавали розчин субстрату фосфатази (1 мг/мл субстрату фосфатази в 1 М Тті5 амінометані (Зідта, 509421) у кількості 25 мкл/лунка і планшети інкубували при кімнатній температурі протягом 2 годин, а потім визначали оптичну густину при 405 нм з використанням пристрою для зчитування планшетів Віоїек.
СНІКМ-специфічні контрольні тАбБ людини. У деяких аналізах як позитивні контролі використовували два раніше описані СНІКМ-специфічних тАр людини, 5Е10 ії 8810 (У/анег еї а!., 2011). Ці тАБ експресували в клітинах 293Е (Іпмігодеп) після трансфекції плазмідою (І опа), що експресує Ідс1, що містила кКДНК з оптимізованою послідовністю генів варіабельних ділянок антитіл 5Е10 і 8810 на основі послідовностей, наданих Спепд-І УМапуд і АІеззапага Магаїп (510) (бБіпдароге Іттипоіоду Меїмогк, А"ЗТАВ, 5іпдароге).
ЕСІ5А для тАБб, що зв'язується з білком Е2. Рекомбінантний білок ектодомену Е2 СНІКМ (що відповідає штаму СНІКМ-ІК2006) продукували в б. со/, як описано (Раї еї а/, 2013), і адсорбували на мікропланшети для титрування (100 мкл розчину білка Е2 2 мкг/мл в 01 М
МагСО», 0,1 М Мансо», і 0,195 МаМз ІрН 9,31) при 42С протягом ночі. Планшети ополіскували три рази за допомогою РВ5, що містив 0,0595 Тмееп-20, і інкубували при 372С протягом 1 години з блокувальним буфером (РВ5, 0,0595 Тмееп-20, і 295 мас./о6.) ВЗА). У лунки додавали первинне тА людини (розведене до 10 мкг/мл у блокувальному буфері) при кімнатній температурі на 1 годину. Планшети ополіскували три рази РВ5, що містить 0,0595 Тмжееп-20, і послідовно додавали вторинне антитіло (кон'юговане з біотином антитіло кози проти ДО людини (Н- і 1- ланцюги) з мінімальною перехресною реактивністю відносно білків сироватки миші (даск5оп
ІттипоВРезеагсії І арогаїогіе5), розведене 1/20000 блокувальним буфером), і кон'юговану зі стрептавідином пероксидазу хріну (розведену РВ5 з 0,05950 Тмееп-20; Месіог І арогайфогіе5), у кожному випадку при кімнатній температурі на 1 годину з ополіскуванням планшета між стадіями. Після ополіскування чотири рази за допомогою РВ5 планшети інкубували при кімнатній температурі з 100 мкл розчину хромогенного субстрату ТМВ (3,35,5'- тетраметилбензидин) (ЮШако) протягом 5 хв і реакцію зупиняли додаванням 2 Н Небо.
Інтенсивність забарвлення продукту визначали з використанням пристрою для зчитування планшетів для ЕГІЗА при оптичній густині 450 нм.
Вимірювання афінності за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. Взаємодії очищених тАб людини і білків СНІКМ аналізували кінетично з використанням пристрою Віасоге
Т100, як описано (Айвіїйп еї а/., 2012). Для інтактного до з розчинним рб2-ЕЇ СНІКУ, антитіла проти дО людини (СЕ І їїе 5сіепсе5) іммобілізували на чипі Зегіе5 5 СМ5 і використовували для вловлювання антитіл проти СНІКМ або контрольних антитіл (пи-МММ Е16). Рб2-ЕЇ1 СНІКМ інжектували над поверхнею зі швидкістю 65 мкл/хв протягом 180 с і дозволяли дисоціювати протягом 1000 с, а потім проводили регенерацію за допомогою З М Маосіг між циклами. Деякі антитіла не зв'язувалися з мономерним білком ЕЇ1, таким чином, автори винаходу протестували їх відносно зв'язування з МІ Р. Для кінетичних вимірювань з МІ Р СНІКМ, антитіла проти ДО миші (СЕ Їйе Зсіепсе5) іммобілізували для вловлювання групи антитіл миші проти СНІКМ з субнаномолярною афінністю, які у свою чергу використовували для вловлювання МІР. СНІКМ.
Зо ідо або Раб проти СНІКМ інжектували над поверхнею чипа зі швидкістю 65 мкл/хв протягом 180 с ії дозволяли їм дисоціювати протягом 1000 с, а потім колонку регенерували за допомогою 10 мм гліцину, рН 1,7, між циклами. Усі дані обробляли з використанням програмного забезпечення Віасоге ЕмаїЇцайоп Зоймаге (версії 1.1.1) і глобальної апроксимації Ленгмюра 1:1 для кривих. Результати одержували для щонайменше трьох незалежних експериментів.
Штами вірусу, використані для тестів нейтралізації за допомогою приглушення фокусоутворення. Для визначення охоплення і ефективності нейтралізації тАб, автори винаходу використовували чотири репрезентативні живі штами вірусу щонайменше з одним репрезентативним штамом для кожного генотипу СНІКМ, включаючи один прототипний вірус з кожного з трьох генотипів, а також штам поточного спалаху в Карибському басейні. Штам
ЇК2006 ОРУ1 (ІК) (східно/центрально/південно-африканський (ЕСЗА)| генотип СНІКМ) був наданий 5іерпеп Ніда5 (Маппанап, К5). Штам МІ 64 ІБН 35 (західно-африканський генотип) і штами КЗИ1 і 99659 (азіатський генотип; виділені в 2014 році від суб'єкта на Британських
Віргінських островах (Іапсіоні 5 Маїіадеге, 2014)) були надані Кобрегі Тез5п (Могій Кегтегепсе
Сепіег тог Етегдіпа Мігизез апа Атомігизез, Саїмезіоп, ТХ).
Тест нейтралізації за допомогою приглушення фокусоутворення (РКМТ) з інфекційним
СНІКМ. Серійні розведення очищених тАр людини інкубували з 100 фокусоутворювальними одиницями СНІКМ (ФУ) при 372С протягом 1 години. Комплекси МАбБ-вірус додавали до клітин
Мего в 96-лункових планшетах. Після інкубації протягом 90 хв на клітини нашаровували 195 (мас./0б.) метилцелюлозу в модифікованому середовищі Голка (МЕМ), доповненого 295 ЕВ5.
Клітини інкубували протягом 18 годин і фіксували 195 параформальдегідом в РВ5. Клітини інкубували послідовно з 500 нг/мл СНК-11 миші (Раї еї а/., 2013) і кон'югованим з пероксидазою хріну (НЕР) антитілом кози проти дос миші в РВ5, доповненого 0,195 сапоніном і 0,195 бичачим сироватковим альбуміном (ВБЗА). Інфіковані СНІКМ бляшки візуалізували з використанням субстрату пероксидази ТгиеВісе (КРІ) ії кількісно визначали з використанням аналізатора
ІтітипозЗрої 5.0.37 тасгоапаіулег (СейшШаг ТесппоЇодіе5 ЦЯ). Величини ЕСзо обчислювали з використанням нелінійного регресійного аналізу після порівняння з лунками, інокульованими
СНІКМ під час відсутності антитіла.
Конкурентний аналіз зв'язування на основі інтерферометрії біошару. Білок екгодомену Е2
СНІКУ-І К2006, що містить полігістидинову мітку (20 мкг/мл), іммобілізували на наконечниках бо біосенсора Апіі-Репіа-Нів (Гопебіо я18-5077) протягом 2 хв. Після визначення вихідного сигналу в кінетичному буфері (КВ, 1Х РВ5, 0,0195 В5А і 0,00295 Тмееп 20) протягом 1 хв, наконечники біосенсора занурювали в лунки, що містили первинне антитіло, у концентрації 100 мкг/мл на 5 хв, а потім занурювали в лунки, що містили конкуруючі тАб у концентрації 100 мкг/мл на 5 хв.
Відсоткове зв'язування конкуруючого тАБб у присутності першого тАб визначали за допомогою порівняння максимального сигналу конкуруючого ІтАб, доданого після початкового комплексу тА, до максимального сигналу конкуруючого тАб окремо. Антитіла вважали конкуруючими за зв'язування однієї ділянки, якщо максимальне зв'язування конкуруючого тАб знижувалося до «3095 відносно афінності зв'язування окремо. Антитіла вважали не конкуруючими, якщо максимальне зв'язування конкуруючого тАБб становило »7095 від неконкурентного зв'язування.
Рівень 30-709о5 неконкурентного зв'язування вважався проміжною конкуренцією.
Картування епітопів за допомогою мутагенезу. Експресуючу конструкцію білка оболонки
СНІКМ (штам 527, посилальний номер Опіргої 2О89УИХ5) з С-кінцевою міткою У5 піддавали аланін-сканувальному мутагенезу для одержання всебічної бібліотеки мутацій. Праймери конструювали для мутації кожного залишку в ділянках Е2, 6К і Е1 білків оболонки (залишки
УЗ326-НІ1248 у структурному полібілку) на аланін; кодони аланіну піддавали мутації на серин (Бопа еї а/,, 2014). Усього було одержано 910 мутантів білюка оболонки СНІКМ (охоплення 98,595), послідовність підтверджена, і їх упорядковували в 384-лункових планшетах. Клітини
НЕК-293Т трансфікували бібліотекою мутацій СНІКМ в 384-лункових планшетах і інкубували протягом 22 годин. Клітини фіксували 495 параформальдегідом (ЕІесігоп Місгозсору Зсіепсев5) в
РВ5 плюс кальцій і магній (РВ5ч/-) і забарвлювали очищеними тАБ у концентрації 0,25-1,0 мкг/мл або очищеними Еар-фрагментами в концентрації 2,5 мкг/мл, розведеними 1095 нормальною сироваткою кози (МО5; Зідта). Концентрації первинних антитіл визначали з використанням незалежної кривої титрування імунофлуоресценції проти білків оболонки СНІКМ дикого типу, щоб переконатися, що сигнали знаходяться в межах лінійного діапазону виявлення. Антитіла виявляли з використанням 3,75 мкг/мл кон'югованого з АїІехаНРіІног488 вторинного антитіла (Часкзоп ІттипоВезеагсі І арогафогіе5) в 1095 МО5. Клітини промивали два рази РВ5 без магнію і кальцію (РВ5 -/-) і ресуспендували в СеїЇ5ігіррег (Сеїдго) з 0,195 ВЗА (Зідта). Середню флуоресценцію клітин виявляли з використанням високопродуктивного протокового цитометра (НТЕС, Іпіеїйсу). Реактивність антитіл проти кожного мутантного клону обчислювали відносно реактивності білка дикого типу за допомогою віднімання сигналу із трансфікованих конструкцією, що імітує, контролів і нормалізації до сигналу контролів, трансфікованих конструкцією дикого типу. Амінокислоти ідентифікували як такі, що потрібні для зв'язування тАб, якщо відповідний аланіновий мутант не реагував з досліджуваним тАб, але реагував з іншими антитілами проти СНІКМ. Ця стратегія контр-скринінгу сприяє виключенню мутантів, які неправильно згорнуті або мають дефект експресії (Спгізіап еї а/., 2013, Раєз еї а), 2009 і беІмагазапй еї аї!., 2013). Амінокислоти, необхідні для зв'язування антитіл, візуалізували на кристалічній структурі білка оболонки СНІКМ (мономер РОВ ІЮ 2341 і тример РОВ ІО 22ХЕВ) з використанням програмного забезпечення РУМОЇ.
Аналізи нейтралізації до і після прикріплення. Клітини Мего 81 (АТС ССІ-81; -7,5х103 клітин/лунка) висівали в лунки 96-лункових планшетів і інкубували при 372С протягом «24 годин.
Для аналізів до прикріплення приготовляли розведення тАБб при 42С у буфері для розведення вірусу (МОВ) і попередньо інкубували з МАР при 42С протягом 1 години. До попередньо охолоджених клітин Мего 81 додавали комплекси антитіло-вірус при 42С протягом 1 години.
Неадсорбований вірус вилучали за допомогою трьох промивань МОВ і клітини інкубували в повному середовищі при 372С протягом 18 годин. Аналіз після прикріплення проводили аналогічним чином, за винятком того, що еквівалентну МОЇ МЕР спочатку адсорбували на клітинах Мего 81 при 42С протягом 1 години, МКР, що не зв'язалися, вилучали за допомогою трьох промивань буфером для розведення вірусу і клітини інкубували з попередньо охолодженим УМОВ, що містив серійні розведення тАбр при 42С протягом 1 години. тАб, що не зв'язалися, вилучали за допомогою трьох промивань МОВ і клітини інкубували в повному середовищі при 372С протягом 18 годин. Клітини забарвлювали, візуалізували і аналізували, як описано для аналізів нейтралізації МЕР, з чотирма полями зору на лунку з одержанням усього 8000-1000 клітин, проаналізованих відносно експресії СЕР, на зразок.
Аналізи інгібування злиття. Злиття вірусу з плазматичною мембраною оцінювали з використанням аналізу ЕРММО (Едмагаз 4. Вгомлп, 1986). Клітини Мего 81 (--3,75х103 клітин/лунка) висівали в лунки 96-лункових планшетів і інкубували при 372С протягом «24 годин. Клітини промивали один раз середовищем для зв'язування (КРМІ 1640, доповнене 1956 ЕВ5, 25 ММ
НЕРЕЗ |рН 7,4| їі 20 мМ МН:АСІ, для відвертання інфікування за допомогою ендосомального злиття) і інкубували в середовищі для зв'язування при 42С протягом 15 хв. Інокулят, що містить бо МЕР, розводили в середовищі для зв'язування і інкубували з клітинами при 42С протягом 1
Зо години. МКР, що не зв'язалися, вилучали за допомогою двох промивань середовищем для зв'язування. Серійні розведення тАб в МОВ інкубували з клітинами при 42С протягом 1 години і тАр, що не зв'язалися, вилучали за допомогою двох промивань МОВ. ЕРУМО індукували додаванням попередньо нагрітого середовища для злиття (КРМІ 1640, 195 ЕВ5, 25 мМ НЕРЕЗ5 і 30 ММ бурштинова кислота при рН 5,5) при 372С протягом 2 хв. У паралельних лунках додавали контрольне середовище (КРМІ 1640, 195 ЕВ5, 25 мМ НЕРЕЗ при рН 7,4) при 372С протягом двох хвилин. Середовище вилучали і клітини інкубували в ОМЕМ, доповненої 595 ЕВ5, 20 мМ
МНА:СІ (щоб переконатися, що інфекція відбувалася тільки за допомогою рН-залежного злиття плазматичних мембран) і 25 мМ НЕРЕЗ |рнН 7,41). Через 18 годин після інфікування клітини забарвлювали, візуалізували і аналізували, як описано, з двома полями зору на лунку з одержанням усього -800-1000 клітин, проаналізованих відносно експресії СЕР, на зразок.
Дослідження захисту /л м/мо на мишах. Це дослідження проводили в строгій відповідності з рекомендаціями Спіде їог Ше Саге ап О5е ої І арогайогу Апітаї!5 від Майіопаї! Іпзійшев ої Неакй.
Протоколи були схвалені Іпзійшіопа! Апіта! Саге апа Обе Соттійеє аї УУазпіпдіоп. Опімегейу
Зепоо! ої Медісіпе (Аззигапсе Митбрег: АЗ381-01). Мишей /паг" розводили в віваріях, що не мають патогенів, в Умахпіпоаїоп Опімегейу ЗсСпооЇ ої Меадісіпе, і експерименти по інфікуванню проводили в приміщеннях А-В5ІЇЗ при схваленні МУМазпіпдаоп Опімегейу Апіта! 5іцаіе5
Соттінее. Ін'єкції в подушечки лап проводили під анестезією, яку індукували і підтримували гідрохлоридом кетаміну і ксилазином. Для досліджень профілактики тАб людини вводили за допомогою внутрішньочеревинної ін'єкції мишам //лаг" у віці б тижнів за 1 добу до підшкірної інокуляції в подушечку лапи 10 ФУО СНІКМ-ІЇК, розведеного в НВО з 195 інактивованою нагріванням ЕВ5. Для терапевтичних досліджень 10 ФУО СНІКМ-Ї Е доставляли за 24, 48 або 60 годин до введення однократної дози індивідуальних тАр людини або їх комбінацій у визначених дозах.
Приклад 2 - результати
Виділення специфічних до СНІКМ тАб людини. Автори винаходу виділили панель тАб від одного суб'єкта, який набув інфекцію СНІКМ в Шрі-Ланці в 2006 році і надійшов з гарячкою, артралгією і висипом (фіг. 4). Клінічний перебіг, і трансформація В-клітин, і методики скринінгу представлені в Опіїпе Меїпоа5з. Вони трансформували В-клітини у двох окремих експериментах
Зо з одного зразка крові, взятого від донора через п'ять з половиною років після природньої інфекції. Вони спостерігали частоту вірус-специфічних В-клітин приблизно 1 на 1000 тотальних
В-клітин і одержали 30 стабільних гібридом з ліній В-клітин, що секретують антитіла, які зв'язувалися з вірусом. Панель тАб містила Ідс декількох підкласів з 24 ІдДС1, трьома /дс2 і двома ІдоЗ; один не визначався внаслідок поганого росту гібридоми (таблиця 5).
Оцінювання нейтралізації тАр. Вісімнадцять тАр продемонстрували активність нейтралізації проти репортерних частинок (УВР) азіатського штаму вірусу СНІКМ 5І15649-СЕР зі значеннями ЕСво«40 нг/мл, причому одинадцять продемонстрували надвисоку інгібіторну активність (визначену як величини ЕСво«10 нг/мл, таблиця 5). Чотири тАБ володіли слабкою інгібіторною активністю (значення ЕсСозо у діапазоні від 0,1 до 5 мкг/мл), і вісім з тАБб не володіли інгібіторною активністю при найбільш високих протестованих концентраціях (значення ЕС5о»10 мкг/мл).
Охоплення нейтралізуючої активності. Автори винаходу визначили значення ЕСв5о для кожного антитіла проти репрезентативних інфекційних штамів СНІКМ східно/центрально/південно-африканського (ЕС5А) генотипу (штам І К2006 ОРУ1 ЦІ КІ), західно- африканського генотипу (штам МІ 64 ІБН 35) і азіатського генотипу (штами КИ! ї 99659 (2014, карибський)ї) з використанням високопродуктивного тесту нейтралізації за допомогою приглушення фокусоутворення (РКМТ) (Раї еї а/., 2013). Двадцять п'ять тАб продемонстрували активність нейтралізації проти щонайменше одного штаму СНІКМ (значення ЕСвхо«10 мкг/мл), причому вісім тАб продемонстрували нейтралізацію в ефективному діапазоні (значення ЕСво 10-99 нг/мл) і тринадцять тАБбБ продемонстрували нейтралізацію в надефективному діапазоні (значення ЕСво«10 нг/мл) (таблиця 5). Для цілей порівняння автори винаходу також протестували раніше описані тАб людини 5Е10 їі 8810 проти вірусів усіх трьох генотипів, і в кожному випадку величини ЕСвзо становили 2100 нг/мл (діапазон 161-1337). У більшості випадків тАб, виділені авторами винаходу, продемонстрували відносно подібну нейтралізуючу активність проти вірусу всіх трьох генотипів. Шість тАб (284, 2НІ1, 4921, 4М12, 5М16 ї 9014) інгібували віруси всіх трьох генотипів з надвисокою активністю (значення ЕСво«10 нг/мл). Ці дані вказують на те, що у одного суб'єкта може сформуватися множина СНІКМ-специфічних антитіл, які є надефективними і такими, що володіють широкою нейтралізуючою здатністю.
Зв'язування з білком Е2. Білок Е2 СНІКМ є переважною мішенню гуморальних відповідей 60 миші (сопП еї а/., 2013; Її ит еї а/., 2013) примата, що не є людиною (Кат еї а/., 2014) і людини
(опа еїа!,, 2014; Кат еїа!,, 2012а; Кат еї а/., 2012р; Зеїмагадан еї а/., 2013). Автори винаходу протестували тАб людини відносно зв'язування з мономерною формою ектодомену білка Е2, що експресується в БЕ. со) (Раї еї а/., 2013). Дев'ять тАб міцно зв'язувалися з ектодоменом Е2, шість продемонстрували помірне зв'язування, одне зв'язувалося слабо і 14 не зв'язувалися вище фонового рівня (таблиця 5). Здатність зв'язувати очищений білок Е?2 /п уйго не корелювала безпосередньо з ефективністю нейтралізації (таблиця 5). Підгрупу з 17 тАр людини досліджували з використанням аналізу за допомогою поверхневого плазмонного резонансу відносно до зв'язування з білюом рб2-Еї1, що походить з клітин ссавців (Мо55 еї аї!., 2010). Усі тАБ зв'язувалися в нМ-діапазоні з величинами Ко від 0,5 до 20 нМ. Відмінності в кінетиці зв'язування не корелювали з антигенною специфічністю або функціональною активністю (таблиця 51).
Дослідження конкурентного зв'язування. Для ідентифікації антигенних ділянок, що не перекриваються, в рекомбінантному білку Е2, що розпізнається різними нейтралізуючими ІптАбБ, автори винаходу використовували кількісний аналіз конкурентного зв'язування. Для порівняння вони також оцінювали чотири раніше описаних тАБб миші (СНК-84, СНК-88, СНК-141 їі СНК-265) (Ра! еї а/, 2013) і раніше описане тАб людини 5Е10 (М/апцег еї а/,, 2011) (фіг.5). Профіль конкуренції був комплексним, однак було очевидно три основні групи конкуренції, які автори даного винаходу позначили як група 1 (червона рамка), група 2 (сині рамки) або група З (зелена рамка). Автори винаходу також визначили четверту групу, що містить одне тАр людини, 5Е19 (жовтогаряча рамка). Ці конкурентні дослідження вказують на те, що існує три основні антигенні ділянки, що розпізнаються СНІКМ-специфічними антитілами.
Картування епітопів з використанням аланін-сканувального мутагенезу. Автори винаходу використовували бібліотеку аланін-сканувального мутагенезу у поєднанні з клітинною експресією і протоковою цитометрією для ідентифікації амінокислот в білках Е2 і Е1 штаму
СНІКМ 527 (генотип ЕСЗА), необхідних для зв'язування антитіл (Бопд еї а/., 2014) (фіг. бА-БЕ).
Залишки, необхідні для зв'язування антитіла з глікопротетнами СНІКМ для підгрупи з 20 тА людини наведені в таблиці 6. Мутації, що впливають на зв'язування цих 20 тАБб, зазначені у вирівнюванні повнорозмірних послідовностей Е?2 штаму 527 і штамів, відповідних до всіх генотипів СНІКМ, які використовували в цьому дослідженні (фіг. ТА). Амінокислоти в Е2, які
Зо впливають на зв'язування, розташовані в основному у відкритих для розчинника ділянках доменів А і В і дугах 1 і 2 р-стрічкового з'єднувального елемента, який зв'язує домени А і В (Мо55 еї а, 2010) (фігю. 1А). Порівняння антигенних ділянок, ідентифікованих за допомогою експериментів по втраті зв'язування з використанням аланін-сканувального мутагенезу з конкурентним аналізом зв'язування (фіг. 5) продемонструвало, що групи конкуренції 1 і 2, головним чином, відповідали ділянкам в домені домен А і дугах, у той час група З відповідала ділянкам в домені В.
Структурний аналіз антигенних ділянок. З більшою і різноманітною кількістю поверхневих залишків в доменах А і В і дугах контактує щонайменше одне з тАб (фіг. 18-С). Дві основні антигенні ділянки в Е2 обумовлюють зв'язування множини тАб. Перша ділянка розташована в домені А між амінокислотами 58 і 80 і містить передбачуваний домен (КВО), що зв'язує рецептор (З!ип еї а/, 2014; Мо55 еї а/,, 2010). Друга ділянка розташована в домені В між амінокислотами 190 їі 215. Обидві ділянки послідовності виступають у напрямку від оболонки вірусу і розташовані поблизу вершини тримера Е2З2 (фіг. бА-БЕ і 7).
Механізм нейтралізації Автори винаходу провели аналізи нейтралізації до і після прикріплення з використанням тАр, що демонструють діапазон інгібіторної активності. Як і очікувалося, усі п'ять досліджених тАб ефективно нейтралізували інфекцію, коли їх попередньо інкубували з МЕР (фіг. 2А). Однак тА 488 не нейтралізувало УКР повністю навіть при високих концентраціях, що вказує на присутність частини віріонів СНІКМ, резистентних до цього тАб; цей патерн також спостерігали в аналізах з використанням життєздатних штамів СНІКМ, що відповідають трьом різним генотипам СНІКМ (дані не представлені). Напроти, тАбр ЗЕ23, 4921, 5М16 і 9014 повністю нейтралізували інфекцію при введенні до прикріплення. Усі п'ять тАб людини також нейтралізували інфекцію СНІКМ при додаванні після прикріплення, однак автори винаходу спостерігали три різні патерни активності (фіг. 2А). МАБ 488 було незручно здійснити нейтралізацію при додаванні після прикріплення і частка резистентних віріонів була більшою у порівнянні з часткою, спостережуваною після нейтралізації до прикріплення. МАр 9014 нейтралізувало МЕР з порівнянною ефективністю при додаванні як до, так і після прикріплення.
МАБ ЗЕ23, 49021 ії 5М16 продемонстрували повну нейтралізацію МКР, однак ефективність нейтралізації після прикріплення була більш низкою, ніж до прикріплення. тАб 2НІ і 4М12 також ефективно нейтралізували УРР при додаванні до або після прикріплення (фіг. 8).
Тестування в аналізі злиття зовні (ЕЕУМО) п'яти надефективно нейтралізуючих тАб (ЗЕ23, 488, 4921, 5М16 або 9014) показало, що всі вони інгібували злиття (Еджагах апа Вгомп, 1986).
Як і очікувалося, коли віріони, попередньо оброблені тАр, інкубували неперервно з середовищем, забуференим при нейтральному значенні рн, спостерігали від незначної інфекції
Б до її відсутності (фіг. 28). Під час відсутності обробки антитілом коротка імпульсна обробка кислотним рН-забуференим середовищем призводила до інфікування клітин, що вказувало на злиття між вірусною оболонкою і плазматичною мембраною. Примітно, що всі п'ять тАб людини інгібували злиття плазматичних мембран і інфікування, причому тАб 9014 продемонструвало найбільшу ефективність у цьому аналізі. Ці дослідження вказують на те, що надефективно нейтралізуючі тАБб блокують злиття СНІКМ.
Профілактика за допомогою МАБ /л м/о. Автори винаходу протестували підгрупу тАб, що демонструють різноманітні рівні активності нейтралізації (таблиця 7) у моделі летальної інфекції у мишей з високим імунодефіцитом Мпаг' у віці б тижнів. Мишам попередньо вводили однократну дозу 50 мкг (73 мг/кг) тАб людини проти СНІКМ або ізотипового контрольного тАб, специфічного до вірусу гарячки західного Ніла (М/ММ ПЕ16), за 24 години до підшкірної ін'єкції летальної дози СНІКМ-І К2006. Усі миші, яким вводили ізотипове контрольне тАБб, загинули від інфекції до 4 доби після інокуляції. Попередня обробка за допомогою ітАбр 488, 4921 або 5М16 повністю захищала мишей ІНМпаг", у той час як обробка за допомогою тАб ЗЕ23 або 9014 частково захищала інфікованих тварин з показниками виживаності 6790 (фіг. ЗА). Несподівано, тАбр 2012, яке мало слабку нейтралізацію /л м/го, захистило 8395 тварин.
Терапія МАБ після впливу /п у/уо. Мишам паг" інокулювали летальну дозу СНІКМ-І К2006, а потім вводили однократну дозу 50 мкг (73 мг/кг) репрезентативних тАб через 24 години після інокуляції вірусу. Терапевтичне введення цих тАбр забезпечило повний захист, у той час як ізотипове контрольне тАбБ не забезпечило захист (фіг. ЗВ). Для подальшого визначення терапевтичного вікна ефективності мишам па вводили однократну дозу 250 мкг (14 мг/кг) репрезентативних тАбр через 48 годин після зараження СНІКМУ-І К2006. Введення 5М16, 4021 і 488 захистило 8595, 5095 і 12,595 тварин, відповідно (фіг. ЗС). Примітно, що монотерапія 4М12 у подальший момент часу 60 годин захистила 10095 тварин при використанні в дозі 500 мкг (528 мг/кг) (фіг. 30). Ці дані показують, що тАБбБ людини можуть захищати від загибелі, що
Зо індукується СНІКМ, навіть зі значними інтервалами після розвитку інфекції.
Аналогічно проводили дослідження на мишах М/Т для оцінювання ефектів тАб людини на гострий і хронічний артрит СНІКМ. МАБ вводили на 1 або З добу після інфекції і вірусне навантаження або РНК аналізували на 03, 5 або 28 після інфекції. Залежно від досліджуваної тканини і часу як 1Н12, так 4/14 забезпечили найбільш значний вірологічний захист. 4М12 також забезпечило значний захист у цих аналізах.
Комбінована терапія тАб /л м/о. Враховуючи можливість селекції резистентності /л у/уо у тварин, яким вводять одне тАбр проти СНІКМ (Раї еї а/.,, 2013), автори винаходу досліджували, чи може комбінація двох тАб людини проти СНІКМ захистити від летального зараження. Вони вибрали пари нейтралізуючих тАБб на основі ефективності індивідуальних тАБб /л міго. Мишам
Мпа" вводили одну дозу комбінації (250 мкг кожного, усього «28 мг/кг) найбільш ефективних тАб через 60 годин після інокуляції. Хоча деякі комбінації тАбр (14921-42НІ| ї І49214-5М161) забезпечили невеликий захист або не забезпечили його, інші (492144М12)) призвели до показника виживаності 6395 у цей дуже пізній момент часу (фіг. 30). Таким чином, комбінована терапія тАБб захищала від летальної інфекції СНІКМ у мишей з високим імунодефіцитом навіть при введенні в межах від 24 до 36 годин до моменту, коли ці тварини гинуть. У цих умовах 4М12 діяло гірше в комбінації з 4921, ніж як монотерапія, хоча дозування 4М12 в експериментах з монотерапії (500 мкг) у два рази перевищувало дозування компонента 4М12 у комбінованій терапії (250 мкг).
Таблиця 51
Кінетика зв'язування антитіл людини проти СНІКМ з антигеном, що вимірюється за допомогою
ЗРА
Величини Ка, Ка, КО являють собою середні значення-стандартне відхилення. КО-Кала:
Не-(Іп(2ука)/6о.
Приклад З - Обговорення
Автори винаходу повідомили про виділення різноманітної панелі тАбБ людини, що зустрічаються в природі, від одного суб'єкта, більшість з яких розпізнають білок Е2 СНІКМ і демонструють виражену активність нейтралізації /л мито і терапевтичну ефективність /лп у//о. Як клас, більшість інгібіторних антитіл також демонстрували широку активність, що нейтралізує віруси всіх трьох генотипів СНІКМ, включаючи штам, що у цей час циркулює в Карибському басейні. Більшість тАбр людини, специфічних до СНІКМ, виділених в цьому дослідженні, нейтралізували вірус у концентраціях менше 100 нг/мл, і багато хто з них продемонстрували інгібіторну активність при менше ніж 10 нг/мл. Ця активність є більш високою, ніж спостерігалося авторами винаходу в попередніх дослідженнях тар людини проти інших патогенних вірусів людини, включаючи віруси грипу НІ, Н2, НЗ або Н5 (Нопо ега!., 2013; Кгайзе еї а!/., 2012; Ктгайзе ега!., 2011а; Ктаизе еї а/., 201160; Кгаизе ега/., 2010; Тпотбига еї а/., 2013; Ми ега)/., 2008), віруси денге (Меззег еїа/, 2014; Зтій еїа/., 201За; Зтій еї а/., 2014; тій еї а! 2013р; тій еї аї., 2012) і інші. Ефективність багатьох тАбБ людини проти СНІКМ є порівнянною або перевищує ефективність кращих у своєму класі нейтралізуючих тАб миші проти СНІКМ (Ропо еї а/., 2014;
Ес еї а/., 2013; Раї еї а/,, 2013; Мапег еї а/., 2011), які були одержані після кількаразової допоміжної імунізації і дозрівання афінності. Більшість інших нейтралізуючих тАб людини проти
СНІКМУ є істотно менш ефективними (Ропо еї а/., 2014; Зеїмагаздан ега!/., 2013; Манег еїа!., 2011).
Одне раніше описане специфічне до СНІКМ тАБб людини (ІМ-СКМО63) демонструє активність, порівнянну з активністю надефективних нейтралізуючих тАБб, описаних у даному описі (Бопд еї а!., 2014).
Автори винаходу виявили різноманіття патернів розпізнавання епітопу в Е2 різними протестованими нейтралізуючими тАр проти СНІКМ. Точне картування епітопу за допомогою заміщених аланіном глікопротеїнів СНІКМ продемонструвало, що розпізнавання цих структурних ділянок в Е2 асоційовано з опосередковуваною тАр нейтралізацією: домен А, який містить передбачуваний КВО (Зип еї а/., 2013; Мо55 еї а/.,, 2010), домен В, який контактує і екранує петлю злиття в Е1 (Мо55 еї а/., 2010), ії дуги 1 ї 2 Д-стрічкового з'єднувального елемента, який містить чутливу до кислот ділянку і зв'язує домени А і В (Мо55 еї а/,, 2010). Серед антитіл, картованих на епітопах Е2, основна частина (антитіла в групах конкуренції 1 ї 2) переважно розпізнавала ділянки в домені А і дуги 1 і 2, у той час як менша група (в групі конкуренції 3) розпізнавала ділянки в домені В. Ці дані вказують на те, що експоновані на поверхні ділянки в домені А і дуги є переважними антигенними ділянками, які індукують відповіді нейтралізуючих антитіл людини. Автори винаходу зробили висновок, що висококонсервативна ділянка в домені
А і дузі 2 може індукувати широко захищаючу імунну відповідь і служити привабливим кандидатом для сфокусованої на епітопі розробки вакцини.
Примітно, що практично чверть експонованих на поверхні залишків в ключових доменах Ег, як виявилося, зв'язується одним або декількома тАбБ від одного суб'єкта. Існування функціонально різноманітних способів зв'язування на основних антигенних центрах передбачається внаслідок двох спостережень: (а) деякі тАБр зв'язувалися з подібними епітопами, але демонстрували інгібіторну активність, яка варіювалася на декілька порядків величини, і (Б) кореляція між нейтралізуючою здатністю і афінністю зв'язування з білком Е2 була малою. Сім з найбільше ефективно нейтралізуючих тАр людини (2НІ1, ЗЕ23, 488, 4921, 4М12, 5М16 і 9014) інгібували інфекцію СНІКМ на стадії після прикріплення, імовірно, за допомогою відвертання рН-залежних структурних змін, які перешкоджають проникненню нуклеокапсиду в цитоплазму (Кієїїап еї а/., 2010).
Оскільки терапевтична ефективність у мишей очевидно прогнозує кінці лікування при інфекції, що індукується експериментально, і артриті у приматів, що не є людиною (Раї еї а)., 2013; Раї еї а/,, 2014), дані, представлені в даному описі, вказують на те, що профілактика людей за допомогою специфічних до СНІКМ тАбБ людини може відвернути інфекцію.
Враховуючи побоювання, що стосуються селекції резистентних варіантів при монотерапії (Раї еї а, 2013), може бути бажаною комбінована терапія з використанням надефективних нейтралізуючих антитіл, які націлені на різні ділянки Е2. Терапія може бути націлена на популяції пацієнтів, що мають значно збільшений ризик важкого захворювання, в ході спалахів,
Зо включаючи пацієнтів з наявними серйозними медичними станами (наприклад, вагітні жінки на пізніх строках, індивідууми з імунодефіцитом і літні індивідууми). Планується подальше клінічне тестування для визначення того, чи можуть нейтралізуючі тАбБ людини попереджати або пом'якшувати розвинене захворювання суглобів у людини.
ТАБЛИЦЯ 1
НУКЛЕОТИДНІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ садсатасаастастабАа,атставсаластаАа,сатаАдадАлдасстаавассто датаАддаатстоСстасСсАлдсасстсотааТТАСсАастТТТАССсАастАССаТАТО дастасатассАСА,сассєтєтацвАСАА,асаеастта,аАад,атавАтасаАтТасАТ 1812 ІСАССАСТТАСАААСОИТТАСАСАСАаСТАТаСАСАВААСТТоСАса,аасАцАатТо 2 важкий || АССАТСАССАСАЧСАСАСАСССаСсаАСТАСАСТСТАТАТОСЬССТОАСИадаС
СстТаАпАТСТаАСсАСАСсвасСататАТТАСТаАСОЯСОВАаАа,аТСТТоСада
АСТааТТАТТ ТСТАСТАСТАСТАСТАССЯСТАТОСАССОСТОТОСсСОаСаССАдв,ацА
СССсТаапТСсАССИТСТОСТСА
САСЯаСТатТОаСсСТОаАСТСАаСсСсасостоаа тато тасавассСсСАа,ссвасАада аватСАССАТСТОСТатТАСТаСОАЗаСАасСтТоСААСАТСОСЯа,САСАТТАТААТ 1ін12 стТАСАСТОСТАССАСССТасттоСАапСААСАаСССССАААСТОСТСАТСТАТО пегкий астТААСАССААТСОСИ,оССтТСАсапсатооСтаАсСаАТтототТаасСтТоСААдИТ З стааСсАССТоАдасстосСстааССАТСАСТОСОСТоСсАсастадааАТаАас;
СстТаАТТАТТАСТаССАаТоСТАТИАСАССАСССТОАаС,СТастісасатАТТСцва
СсасдаспаАССАААСсТаАсСатсстАс
ТАБЛИЦЯ 1
НУКЛЕОТИДНІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ саддідсадсіддідсааісідадісюадндаадааассідвдаєєтСАаастаАддаатстосСта
СААДССОСТТСТаСАТАСАИТТТСАСТАОСТАТТСТАТСААСТОСИСтТасСаАСАС 284 ,соооСстТавАСААХасасстадлатаадтааАтТааАТСаАСАССААСАСТОаС важкий пААСССААССТАТОСССАсСаАСсТсасСАаа,асАссата,атстстосттасАс 4
АССТСТатсСАССАСОСОСАТАТСТаСАСАТСАаСАаССТАААСЯСтТасацвАс
АСТаССОаТтТтТАТТАСТаТтТаСААСАТАТТАТОТТаАССТТТвССОСАСТТАТОСС
ССААСАСТАСТАСЬЯСТАТОСАСОТСТОСОСОаССАС садісююдсідасісадссасссісадсдісюддасссссдддсададдаїсассайс ТСТТаттотТа вАСИаСпАССТоСААСАТСИСИаАИТААТОССТаТтТАААТТаСТАССАСАТОСТОС 284 САСССААСИааСССССАААСТОСТОСТСТАТАСТААТААТСАОСОСЧСССТСАСаИ пегкий саАатосСстТаАССаАТТСсТСтТааСТоСАдатстааСАСсСстоАасстосстаас 5
САТСААТаСпАСТоСАСТотТадДасАтТадассСстТаАТТАТТАСТОТаСАаТтАТОС вАТаАСАОСССТОДОТООССССЯТТЯССОсТаттосаСосаАд,авАССААастТаАс
СатосСтТА
САсатасаастаатасасттасвдаСстАаатаААвАА,сСстааввассто датадссатстоСстТасСсАадсасатстааТтТАСАССТТТАССАСТТАТОСТАТС дастадастасаАдсАд,ассссСставАСААла,асасттад,атасАдтаасАтТасАТ ні САССАСТТАСААТаСТОАСАСААДАСТАТаСАСАСААХа ТТОСАа,аааСАсаАсТо важкий АССТТОАСААСАСАСАСАТССАСОАдаСАСАаССТАСАТОСЬСОССТОДОСааСОС
СстТаАСАТСТОАСаАСАСа,аассо ТТ ТАСТАСТаТаСаАСАСАТТТТОААТТТО сссаАсАТттатаатаатаасСАастастАСТОСАааТТСАТСТАССАССАСА
АСОАСАТОСАСОТСОТОСОССАСООааАСССТаТтСАССИТСТОСТСАССАА ас
САасастатастаАСстТсА,ассассстсАастаттасвасссСАпаАСАСАА
СаТСсАССАТСТОСТаСтТСтТасАлАаСАасСТоСААСАТТОСаААТСАТТАТОТА ні тоСстТОатТАССАаСАССТОССОаСпААСАССССССАААСТОСТСАТТТАТОАСА пегкий АТТАТАДЯСОАдСССтТоАатаАТТОСТаАССаАТСсТоТасстосСААатстас 7 са,асатсАдасСсАСсСстТавасСАТСАТСОСАСТОСАсСАСТаОааАСса,аАаасса
АТТАТТАСТаСОаСсСААСАТОСОАТАаСАСССТОАаС,СТаСсТатастАТтсаасСа вАСОаСАССААДаСТаАССаТтТоссСтТА
САсатасаастаатасастаавССсСАсаАдстааТаААасстсОпАСАС сст|атсссСстТсАССстТасСсаататсТСсААлатТалсассстСаСАаСАааАСтТТА ттАСТОССОаСсТасостоСсассаа,асоосССсавоААда,аасАтавАдатасАТТа
ЗЕ23 |пАСТатсТсТТАТАСТОСОапасСАССТАСТАСААСССОЯТОоССТоСАаАСаТо важкий | вАСТСАССОЯТаТсОсатапАСАСИТССААСААССАСТТСТОССТОАлаатТТад
АстотатадссассОСАаАС,СвастатТТАТТАСТатасСсасАСАТСТТАТТТ
СстТАТОАТОїСАСТОСТТАСТАСТАССТаАОаСсСТАСТТ ТаАСТОСТОСОВИаССАС ваААСССТааСТСАССОТСТОСТСА
САасастатастТаАСстТсАавАасССссСТСАСТОАСТатТатоСсССАапАСасАСА
СТСсАСТСТСсАССТОаТасСстТтоСАасСсАСТОЧАаСАаЙТСАССАаТОаТтСАСТАТС
ЗЕ2З САААСТОаСТТССАаСАСАААССТапАСААССАСССАСИаСССтТалдтТТТАТАС пегкий САСАСАСААСААдаСАСТОСТОСАССССТОСОСОиатСстТсАаасСтТосстТостТ
АсаватсААдвастассстаАСАСТатСАСАТаТАСАСССТаАлапАСадс,ас тТадСстТАТТАСТОССТаСТоСсАТТТТОСТОСТОТОСТОатоттоас,аСба,авА,ваС
АССААДОСТОАССаТатостТА
САсатасаастастасаатотасссвасасататосАдоостасаАссто сСстТахдаАСстотстатасаататстацаАТТСАССТТСАИТААСТАТаССАТО змо САСТаОСОСТОСЯасССсАс,СастоСАаОСААдсасвсастацдаотаватвасСАСТТАТ важкий АТОСТАТОАТОаСААСТААТААДАТАСТАТИаСАСАСТОССИСТОААла,СааССОАТТО 10
АССАТСТОСАСАСАСААТТССААСААСАСаИстТаТАТСТаСААИТОАДАСАасс тададасСсадасАСАСсвастататАТТАСТО ТаСсСОАасСацваТтОАСТАСИТТо тТтаАСТАСТвОсСасССАпаспсААСССТОаСТСсАССИаТСТОСТСА
Зб
ТАБЛИЦЯ 1
НУКЛЕОТИДНІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ
САСАТТатаОАТОАСССАаТтСсТоСАТОСТОССТатТСотТасСсАТСТатАасАсСАСА вАаТСАССАТСАССТТаССОСаасССАСТСАпАаСАТТСССАССТАТТТАААТТОа зМ23 СТАТСААСАСАААССАпапАААаТасссостТААааТСсстТаАТСТАТаСТАСАТОС пегкий АСсТттавАдА0аставааЙТоССАТСАССОЯСТсАла,ата,аСАа,атТасАТСТасваАсСА 11
САТТТСАСТСТСАССАТСАССАСТСТаСААССТОаААСАТТТТаСААСТТАСТА
СсТаТтСААСАСАСТТАСААТАСОЯИаСАТАТТСАСТ ТСаИаСССТасаАССААдА атТасАТАТСААДА сдестасластаатасадсаттасаастаАасаатаАдаАдАдасстааватосто сватАдаатстСсТасСАлдааСстсТапАааСАСТТССАаСАСТТАТОаСТтТАТС даставатасаАдСсАсасссставАСАдасастаХда,атасвАатасадаасСАс 4)/14 | САТОСССТатсТтт ТасТтТАСАЧТАААСТАСОСАСАЧАлАаИ тт оСА,ааасСАСаАСТО 12 важкий | АССАТТАССасСсасАСаААТССАСИаАХаСАСАСТ ТТАСАТаСЗААСстТалаСАсс
СстТОАпАТСТаАдапАСАСсасСсаттАттсотТатасаАаССсСсСтТАТТатАаТтА
СТАТОААСТаСТАТАССАССТТТТАСТАСТТ ТОАСТТОТаСОСИаССАсСаслААС
ССсТааТсСАССатТсТоСтТСА сдсасастатастаастоАаасста7асстосататтасаттосСТавпАСАатТСа
АТСАССАТСТОСТаСАСТаСААССАаСАаТаАСТТТОаТАСТТАТААСТАТОаТ 4914 СсТСсТТаСТАССАаСААСАСССАпасСсСААасССссСсССАААСТСАТОАТТТТТОАТ пегкий аТсАатТААТОСИасСССстТСАсСасо ТТ стТААТоаСстТСТоТаасСтТоСААДСсТоСТа 13 всСААСсАсСаассТССстТаАССАТСТОТОСОИСсТОоСсАасСастаАд,ааАСаАаастТТ
СТТАТТАСТаСАаСТоСТАТАСАДССОСОССАаСАСТОТотТАСсОВСаСа,асАаасА
ССАДССТОаАССаТтоСста сдестасластаатасасаттасатстадаТтАдаАддасставаасстСА атТаААдааТТосСтТасСААДЧИаСТТСТаСАТАСАСТТТСАСТАССТАТТСТАТСАА ставатТаСсвАСсАааасСССсТаАСАда,асасстАаатавАтавааАТасАТтСа 4)21 |АСАССААСАСтТапйаААСССААССТАтТассСАаа,ааАастсасСсаааАсааТтТта 14 важкий | ГОСТ СТОСТТаСАСАССТСОТаТСАССАСОССАТАТСТаСАСАТтСАаСАаССтТ
ААдАДСОиаСТОСИапйАСАСТаССаТтТТАТТАСТатТаСААСАТАТТАТаТтТтаАССТТТ сававапАаТТАТСаССААСАСТАСТАСаатТАТтасАсатстасааоСАСасяа
АСССТаСТСАССОТСТОСтТСА салатотатааТаАСсТсАасСсСсАссстсАста,атстасваАсссссвсавСАасОо ватТСАССАТСТОТТатсотТасвАа,аапАаСТоСААСАтТоаааАаТААТОСТатА дуг ААТТОСТАССАСЧАТасатТоССАапААСааСССсССАААСТОСТОСТСТАТАСТА пегкий АТАДАТСЛСаСОССССсТоАа,аСааатоССтТаАССаАтстсТаасСТсСААЛСТСТа 15 асСАССТСАДаССстТоССтТааССАТСААТасАстоСсАсастоталавАтТаАсаста
АТТАТТАСТОаТаСсСАСТАТИаИСОАТаАСсАаа,асСстТаАлатасосастава7ататтсСад сдаададассаадсідассцдіссіа сдсестасла,астаата7асааттасааСстадаатаАдаАдАда,асстававосто
АаТтТаААаатсТоСсТасСсААааТТоСасАТАСАТСОСТСАССТАААТТАТССИТОИ сАсТОССТаСадСсАасастосСтасАААдАдасАСТТаААтТасАатаасАватТТстТ 4АМ12 | вОАААСаТаААпАТасСОАААСАаТтстТАСИаСАСАЧААаТТоСАпааСАСААТС 16 важкий | ЛИСТ аДАССадапАСАСАТСТАТАСАСАСАасСсстТАСАтасвдастаасСАас стадатстТадавпАСсАСссасСаТатТАТТАТатТасСсААСАа,асАвастстас
АатАТаАТТасСсОаааАААатТасасАаатТавАСстТАСстасваоСАаасААсоСста7асєто
АССОТСТОСТСА садаастатасТаАсСТоАаТсТоСАТССТоСсСсТассСстТасАТСТатАасАСАС
ИПССИаТСАССАТСАСТТаССасцсаСААаТСАасСАСАТТАСАААТААТТТАСаИст
АМІ12 ватТАТСАаСАпАААССАасасАадаасоостадасасста4дТтсСстТАТаСААССТ пегкий СсСААТТТаСсАСАСТОСВатооСаТатСАдсаттсАа,ассасАа,атТасвАТСТаааА 17
САСААТТСАСТСОТСАСААТСсАаСАасСсстТасАассСстаААаАТТТТаСААСТТАТ
ТАСТатСстТАСАССАТААТАаТТАСССТоССАССЯТТОССОСССсОвьСасаАССАДа
СТасСАААТСААДА
ТАБЛИЦЯ 1
НУКЛЕОТИДНІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ
САсатасаастаатасастотасаастАватаААвАдАдасставаИосто атаАСАаТтТТоСстТасААпасАТСТаСатТАСАССТТСАССАСТТАСТТТАТОа
СсАСТаОСОСТаАСаАСАСасССССтТасАСААасАСТТалатааАТаСсСаАТААСТ 5М16 | ТАТССТастаатТаатТАаСССАТССТАСОСАССОСАаТТоСАсСаасСАСАСТО 18 важкий | АССАТаАССаАСаАСАСа ТоСасСспАССАСАСТСТАСАТОСАССТаАатаАС
СТОАСТТСТАААСАСАСЯСвССсСататАТТАСТатТасоАдаАдсатасссАссатт
СсСАТТаОСОАСОАСсссссСсттаАстоаТтавааСсСАсапААсоСстватсАСс
СТСТоСТСАССААДасСтТТСААаас
САсатасаастастасаатотасосссАасасататоСсасаставаАасто сстТалаАстотстатасдасстотТасАТТСАССТТСАСТАТИаТАТОСОССИТО
СсАСТОСОСТОСасССАСасСстоСАСаСААлсасвсастацалатасатавсСАаттТАТ 5014 ІАТаСААТОАТаСАТСТАДАСААТАСТАТОСАСАСТОоСатаАдАд,авассаАТТо 19 важкий | АССАТСТССАСАСАСААТТССАСИаААСАСИТТатАТСТаСАААТаААСАа СС тТаАвпАСТоОАСОАСАСс,васАататАТ тт тТатаспАпАпАТаСААТТОСТОаА
СсоСстТОААСсасааТаАСтТАСсСсСвсвасттааАСТАСТООаОаССАпааААССс
ТастосАСССОТСТОСТСА
СсАСАСТатТОаТОаАСТСАаТТТОСАТСОСТОСССатттасАТСТатАасСАСАСа вАаТСсАССАТСАСТТИССОПаСААпасСАсСАасСАТТАССАСТТАТОаТТААТТОа
БО14 СТАТСАИСАСААДАССАаапАААаССССтТАДаИстосСтТаАТТТАСОаСТАСАТОС пегкий АСТТТОСАААСТОСИааТоССАТСААССТТСАатТОасСАсСТасаАТАТаСОАСА 20
САТТТСАСТСТСАССАТСАИаСОИаТСТасСААССТаААСАТТТТаСААСАТАСТА
СТатСсААСАСАаТТАСАСТТТТОСТСИаААСОсСТ ТСИОСССААДаСаАССААССсТа
СААДАТСААДАС
САсатасаастаатасдсттасвастАсатаААсАдАдоостааватосто ватадАдасТсТоСТаСААХассстотаАпаСАССТТСААСААСААТасалдт
СсАаст,еаатТасСсапАСсАвасссставАСААлавсасСтталатавАдтаваАаасА 8018 | ТСаТтоССОаААСТТТОСААССССААССТАТаСАСААСАСТТОСАСИаасСАСАСІ 21 важкий | ТТСАСИАТСАССасСасАСОААТСТАСаАдаСАСАаТсТТотТапАасСтТОАССА вАСТОАДаАТСТаАСОСАСАСОЯСССОаТТТАТТТСТаТаСООСОСАСаТатсасАсоса састТаАСТОСОАТОСААТТайОаТТтТАСАСТТСТАСТТ ТаАСТТСТОСОВаССО сацпААСССстТастсАССаТтстосСтТсСА садвчасююдічасісл апа аСсССТСАСТаАСТИА Та ТССССАсСОсАсСапАСАсаТСАС
ТСТСАССТаттСстТассААСАСТапАасСАаТСсАССАаТтаАа4аТтТАСТАТССАААС 8с18 тастсСАаСАЧАААССТапАСААаСАСССАаааСАСТОАТТТАТАИ,ТОаСАА пегкий сСААСАААТТСОТОСТОСАСОЯССТОСССОСаТтстТсАсСастосстостававос 22 аСАААааСсТасссСстТОАСАСТатТоА,асТа,асасаасствАаааАсаАааСстаАа тТАТТАСТЯОССТОСТСТАСТСОТОСТОАТОаСТОТОСТ ТТоОСаСОаАдаСаАССА дастадсСатос
САсатасаастаатасасттассвастадаатТаААадАда,асоссававассто
ПатТаААаатоСТССтТасСсААВАСТТСТаСаАТАТАСИТТСАССОСАСААСТОСТатА 119 СсАСТаОСОСТасСаАСАвСассссСставАСААл,ават тост авАтТасадсаасАТ важкий СААСССТААСАСТОСТаТтСсТтСсААСТТоТасСссСАаААаТттсАсаасАаастсСІ ог
АССАТОАССАСИаСАСАСИаТССАТСАССАСААССТАСАТО СА ССТОАасСАИТт тТТаАдОАТСТОАСаАСАСсвассатСстТАТТАСТИАТаСаАСАСАаспСАСААСОАТ датТАаатасатТАТТАССТІ ТОСОасСТсАСасаААСССТасаТСАССИаТСТоСтТСА
СсАСАТттТатаатТаАСсТСАаТтсТоСАТОСТОоССТатттТасАТСТатТАаСАСАСА
САаТСсАССАТСАСТТИССОпасСААаТСсАСАаСАТТАССАССТАТТТАААТТОа 119 СТАТСАИЙСАААААССАЧаспсААДАасссстААастостТаАТСТАТаСтТасАТОС пегкий датттоаададатавватосСАТСААСОСТТОСсСатТааСАатТАаАТСТаСаАСА 24
САТТТСАСТСТСАССАТСАаСАаТСТасСААССТОаАдАаАТТТТаСААСТТАСТА
СсТатСсААСАСАаТтТТАСАСОаАсСсСсСсатавАсатсааССААСасАССААСаИТт
СОАСАТСАДА
ТАБЛИЦЯ 1
НУКЛЕОТИДНІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ
САсатасаастаастасалаттаатостТАСастааТаАААСССАСАСАСАСС
СсТСсАСОСТОАсСсТасаосттототасатТСТсАСТСАСТАТТАСТООСАИаТОаС статаваастТавАТоСОСТСАасссСсСАсаААА,вассставсАаа,атаастТасА 111 СТСАТТТАТТОССАТОАТОАТААаСаТстАСАаСССАТСТСТаАддОдасСАСас 25 важкий | ТТСАССАТСАССААССАСАССТОСОААААССАаатааТоСТТАСААТаАССАА
САТОСАСССТатаспйАСАСАасССАСАТАТТАСТаТтТасСАСАСАСТАТОАСТААА сасааоастТтАТСТАТаСТСАаассСтТАСТТТОААТАСТОЧСОаССАспСааААСС стасто
ССАТСТОСТаСАСТОСААССАСАСсАстТалсаттаатааТТАТААСТАТОаТСТ
ССТОаТАССААСААСАСССАпССАААаСССССАДАСТСАТСАТТТАТОАТОТ
НЕ СсАСТаАТССОаСССтТСАаасатТтСстТААТСОСТТСТСТасстоСААЛССТСТОаСС пегкий ААСАСЯСИАаССТоССТаАССАТСТСОТаОСОССТоСАСасСстТаАсаАСаАсасСтТаАтТ| 026
ТАТТАСТаСАССТСАТАТАСААДаСАССАССАСТСОТОС ТТ ТОоСаСасАсСааА
ССАДОСТОАССаИатостА саддіссадсідаїасадісіюадоасіададаадчааассюддасССстАатаААаатстостТ
ССААааТТТоСацсАТАСАСССТОСАСТОААТТАТССАТОСАСТОСОСТасаАСА 1М9 састоСтТапААААвассСстТАвАаатавАатасадаа т ТОАассСстТОААсАТаС важкий ТОААДАСААТСТАСаСАСАСААИа ТТ ССА,апаСАаАаТСАССАТОАдССадасцсА 27
САСАТСТАСАСАСАСАСССТАСАТОСАССТаАаТАаССтТаАвАТСТОАДОаСА
СсАСОССССатТСстТАТТАСТаТтТАСААСАСАТСАСИатСстТАСТАТССТТСОССОССАСТ
ТАТТСТаСАТАТОТТОАСТАСТаСОСсССАсСасААссстаатТто саддіссадсідаїдсавдчісюадаоасічададаадчааассіддаєС ТСаа Та ААсааТтстоста
СААСОЯаСТТСтТапАСОСАССТТСАаСАасСтТАТОТТАТСАОССТОСИСТасСаАСА 105 са7сссстТапАСААдса,аастаХдатааАатаваАдаОаАТтСАТоССТСТатттаа важкий ТАСАИСАААСТАСаСАСАСАААТТоСАасасСАСАатСАСИАТТАССасСасА 28
СОААТССАСОАдаСАСАаССТАСАТаСАС,ССТаАДаСсАасстаадааАТСТадсаА
СсАССОаССатсСтТАТТАСТОТаОСОАасСа,аааСассССАССТтТАТАТТАСААТОАТОС тТАСТОаТТАСАТТТТТОАСТАСТаОСсСсСССсАсаса,состасто
САсатасаастаатасасттавСсСстаАсатаААвАдАдоостаааАСсСтТо атаАлдаатстосСтТасСсАдвастСсТпАТТСАастТТАТТАССТСОТОСТИаТта
Ссасатвас,атасСсаАСсАсастоатайАСААсасстталдатаваАтТАаСАТасАТС 106 |сТСсСТТассСАСТОаСТААСАСАААСТАСИаСАСАСААИаТТоСаасАААсАстТо 29 важкий | АССАТТАСТАВО САСАТИаТССАСАДАСАСАСССТАТАТИОСААСТОАССАаСс тадаАдтоСсаАдапАСАСса,аассатТТАТТАСТОТаСОСОаСАсСАасАссватосс сттатаатастаатаАтТАаСТастТАСАатсТотТАСТАСОЯаТАТаСаАСОТоСТО сааСсСсАдаапАСССТааТСАССОТСТОСТСА
САсатасаастаатасастотасосссасасттасттосасстасавиаато
ЄСтТалдаАСстТаТатосстТатАСАасстотТасАТТСАССИТТАаТААСТАТОССАТОа одо дастадатоСасСсСАаАСТоСА,СааААса,асвсастасАставаТСТСААСТАТТ важкий АСТАСТАСТАССТОаТАСААСАТТСТАСаСАСАСТОСЯТОСАИСас,ССастТТо 0)
АССАТСТССаСАСАСААТТССААСААСАСаТсСтТатАТСТаСАААТОАДАСАасс тададаТсОААвАСАСааССаТатАТАТТАСТОТИСаАААаСсСасоСсаттсавса ,аСОаАСТТТаАСТАСТаОСОаССА,СасАаАСССтаатТСАССОаТТСТоСтТСА
САсастатастТаАСТСАаТСсТоСАаСсСАСсСсСсТатттТаттоСАаоасАА вАасССсАСССТоТОоСстТаСАа,авассАаТСАСАататТасСссАТСТАСТТАСОСС тастАТСААСАСАААССТаассСАаастосСАвасСТоСтТСАТСТАТОАТОаСАТ 2гА2 | ССААСАаааасССАСТааСАТСССАаСсСАсСаттсАатаа,аСсАаставатстава 81 легкий || АСАБАСТТСАСТСОТСАССАТСоДОаСАасССстТАалассСстаААаАТТТТасСАСТТТ
АТТАСТаТСАССАсССсатавСААСТОаСАаТтАСАСТІ "'ІТАаСССАС,СаааАССА
ААСТаСАСАТСААА
ТАБЛИЦЯ 1
НУКЛЕОТИДНІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ садса,атасластеста7асСса,аттасасаАаасасстаатАсАа,аостаасАаато
ССстТОАсСАСстотостатасАдасстстТасАТТСАССТТТаАТаТтТтТАТаССАТО сАСТаОСОатТОоСбааСААдастТоСАсапАА,ааса7аста,асАаатасста,асСАаатАТ 2б2 |ТАатТТапААТтАаатТасатТАаа,аСатТАасастАтТасСсааАСТСстТАТадАас,СаасСсСал6ттТ 32 важкий | САССАТСТОСАСАСАСААСасСссСсААпаААСТОССТатАТСТаСАААТТААСАСТ стАдадасСстдапАСАСаасСсСТТАТАТТАСТаТтасСсААдАдаСАТТСТОИаТТСОа сесАдатТтТАТСССаТтТАСОСатТАТОаСсСАСОЯСТОТОаааССААл,СасаАСОоСстаатТсСА
ССатсТосСтТСА сасастатааТаАстоАаасстосстсасстосссаттоСтацпАСАС,ТСА
СТСсАССАТСТОСТаСАСТаСААССАааСАаТаАСаИТтастТАСТТАТААСТАТО
ТСТоСТааТАССААСАаСАСССАСаСААДАаСССССАААСТСАТААТТТАТИаС 2б2 ф(їааТСАСТАсССсССсвассстоАасспватосстаал,асаеастсттаасСТоСААатТо 33 легкий | ГпИСААСАСсСсСаостосССстадсс,еатсттавастСсАвса7астадааАТаАас
СТОАТТАТТАСТаСАССТСАТАТаСАпИаСААСААСАДасвАТаИтсТСацсААСс тассАСсСААасТСАССатосСтА садсатасаастастасба,аттасАааСстАасатаААд,сААаасстаааассто атаАдааТСсТСсТасСАдаасСТСсТааТТАСАОСТТТААСАТСТАТОСТАТС дастасатассАСА,сассєтєтацвАСАА,асаеастта,аАад,атавАтасаАтТасАТ 2012 ІСАССОаСТТАСААТааТААСАСАААСТАТаСАСАСаАААСТоСАа,сааСАспАаТо з важкий | АССАТаАССАСАСАСАСАТОСАСаАасСсАСАасСсСтТАСАТОСААСТОДааАас
СстТаАаАТСТаАСсАСАСсСВваССсаТатАТТАСТаТаСаАпАССАСТТТОаОСОИаС
СААТТТТАСТАТОАТАТСТОаСОСОаССАд,асалссстааТСсАССаТСсТоСтТСА сасастатааТаАСТСАаТтСсТоСАсасСАсостаТатстта|атстоСАас,авацАА
АвАдаССАсоСстоттасСсАаассасСсАатСАсАаа,ататтАаСАааСацватАСТСА 2р12 состаатТАССАаСАЧААдАСсСстТаа,асСА,вастССАсастосСТСАТСТАТОССТ пегкий вСАТССААДАдАСсОВваСсСастайаСАТСССАЧАСАсаттсАаатассАатаватст 35 вапАСАСАСТТСАСТСТСАССАТСсАдаСАсАСстасАассСстаААаАтттасАа татАТТАСТатоАаСсТатттастТАССТоАССТОСЯСССТТОСаССААДСаСсАС
АССОАСтТОасСсАСАТТААА сасатасаастастасба,аттасасаАасасатстобАаа,асстааввАвато
ЄСтТОАОаАстотстатасАдасстСтТасАТТСАССТТСАСТААТТАТОаТТАТОа слатасатобасСсАадастоСАааСААл,асгаставАатаса7атаасСАатТтТАТ
ЗА2 |АТСАТАТОАТаСйААДаСААТАААТАСТАТаСАсАСстоСатадл,аавссСаАТТо зв важкий | АССАТСТССАСАСАСААТТССААСААСАСИаТТаТатАТСТасСАААТаААСАаСс таАдаАдаСстАдапАСАСссастататАТТАСТатасСсаАаАтТоАсАа,атТасвсиаАат
СсТосСтТАТаСтТТсссасААТТАТТАТАСАСАТТАСТТСТАСТАСТАСОаСТАТО салсаеаттаеасаассСАа,аасвАССсСТааТСАССаТСТоСтТСА саса,астатааТаАСТСАаТСсТоСАСТСОТОоССТаССсСсатСАСооСстасвАс,АС сса,ааССсТоСАТСтТоСтТасСсА9аатТСсТААтТсАсСсАа,асстоСстасСсатаатТАТТАСАТ
КУ АСААСТАТТТОСАТТОСТАССТасСАСАААССАасвааСАаТтСсТССАСАаСТоСтТ пегкий сСАТСТАТТТаСИаТТСоТААТСОСОЯССТОССОССЯВИТоСсСТаАСАваИттсАатас 37 сАдатааАТСАасССАСАСАТТТТАСАСТОААААТСАаСсАпАдатасАсвастад сОаАтаттасаасаТтТАТТАСТаСАТаСААДасСтТСтТАСАААСТОСТАССАССТТО аваСбСАдасаАСАСаАСТасАсАТТААДА садсатасластасАасаАаатстватсТАсастааТаАААСССАСАСАСАСС
СстТсАСОЯССТаАССТОТтоСсттототТапа ТТ СстТосАСТСАССАСТАСТОСАИаТад статасаСтасАтоСбатсАдассСССАааАААдаасставшАатаасттасАс 384 | ТСАТТІТАТТаСОаАТаАТОАТААаСастТАСАасСсССАТСТСТадАасСАасСАаастТ з8 важкий | САССАТСАССААСИаАСАССТОСАААААССАпаИтаа т СсСТТАССАТОАССААС
АТасАСССТОТасСАСАСТаССАСАТАТТАСТИа ТаСаСАСТОоСАССЯСаСТАСТ
АтаАТАСТАСаСТааСсСтТАТССАСОСДИСССсСТОАТаСтттастаттасавасс
ААдсапАСостааТСАССаТатстосСтТСА
ТАБЛИЦЯ 1
НУКЛЕОТИДНІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ сАаАТтта,атаатТаАСТСАаТТоСсАсАСстоссссесастататсттасасцАса апайсССАССАТСААСТасСАДатссСАасССАпАаТатТТТАТАССАСТОСААСА зва4 АТАДАДАСТАСТТАССТТастТАССАаСАСАААССАаапсАСАассТтоСТААССТ пегкий аСстТоСАТТТАСТаСаСАТСТаСССпАСААТОСЯИСЬСЯ С ТОССТаАССОСАТТСАС 39 тавслассватставаАСАСаАТТТСАСТСТСАССАТСАа,аСсАССсСсТасСсАцас
ТОаААСАТатассАсСТтТТАТТАСТатсСАасСААТАТТАТАСТАСТОСОаТАСАСТТ тпаеасСсдасаспАССААдасСТасАсАТСАдА садсатасаастастасба,атавассСА,асАСстаатаААасстСасАСАС сста7атосСстТсАсСстасадататстСААлатТаАдСсассстоСбасСсАаСАааАаТттТА тпАСсТассастаеасатобасСАааоооссбасааААдсавАтавАатацАТТа зЕ23 |асаАСТатсТоТТАТАСТасСаааСАССТАСТАСААСССЯТОССТоСАпСАатТо 40 важкий | 2АсСТтоАсоСсататосатапйАСАСаТССААаААССАСТТСТОССтТАваТтТаА
АСсСТоТатТаАдоСсасСсаСАсАСасСсаасСтТатТТАТТАСТатасСсАСАТСТТАТТТ
СстТАТОАТОасССсАаТтаатТтТАСТАСТАССТОАасСстТАСТТІТОАСТОСТаСаассСАС ,саААсСсСТааТСАССИаТСТОСтТСА садса,астатааТаАСТСАсадассСсТСАСТОАСсТатТатосоСАа,ааАспасАСА асТсАСТСТСАССТОТОаСТТОоСАаСАСТаСАаСАаТтСАССАИ,ТааТСАСТАТС
ЗЕ2З САААСтТасаТтТоСАаСАСАААССТапАСААССАСССАаа,асассстаАТТТАТАС пегкий САСАСАСААСААдаСАСТОСТОаСсСАССССТаССсСсватстсАвастосстостТ А
АдсаДаатсААлсастасссСстаАСАСТаТатСАаАтТатАСсАа,асСстадапАСаАцвас тТаАСТАТТАСТОССТОСТоСАТТТТОСТОСТатостастстссаса,вадаса
АССАДИАСТаАССаИТтоссСтТА сасатасаастастасба,аттасасаАасасатстобАаа,асстааввАвато
СсСстТОАаАСТСТОСТаТТСААдСсатТСстТавАТТСАССТТСсАааСпАтТатАТассСАТИ сАСТаОСОатТОоСасСАсСастоСАдса7асАда,асааотасаАа,атаватааССатТтТАТ
ЗН5 | ТПТТААСаАтТааАсСТтТААСАААТАТТАТОСАСАСОосСсатада,ааасСсСаАТТо до важкий | АССОИТСТОСАСАСаАСААТТССАпСААСАСССТатАТСТасСАААТОААААИаСС таАдаАХдатТоаАСаАСАссастасстАСстТАСТатТасСаАаАсАСсацвАТТОоСтТа
АССССаААСсСаСссатаАСстТАСссасспаста,асАСстТАСстассасасСА,вацвААСо
СТаСтТСАСССИТСТОСТСА сАааАстатааТаАСТСАатТсТоСАТОСТОССТатТотТасСАТСТатТАааАСпАСА
САаПТСАССАТСАСТТаССасасСААаТСсАСпАОаСАТТАССАСТТАТТТАААСТа
ЗНБ СТАТСАССАСАААССАпСАДАДаССССАААасСтТоСТСАТСТАТаСТАСАТОСС пегкий даттасСААДАДСТОСасСтоСССтТСААсаттсАаатасоАа,астааСТАТасаАСА 43
СААТТСАСТСТСАССАТСАИаТааТТсСТасСААССТаААСАТТТТаСААСАТАСТА
СТатТСсААСАСАаИТТАСАСТ ТТ ТоСТоОАдсаттсаасССАДавааАССАДИаИатТа
САААТОасАТА садсатасаастастасба,аттасасаАасасттаатАсАа,асстаасСАцвато
СсСстТОАОАСТСТОСТатасААССТоТасАТТСАТСТТТаАТОАТТАТаССАТИТ ястасатоба,ааСАдастСАсавААлссасставаатасватСТСАваИтАТТА
ЗІ21 аТТаСпААтТАаТаСпАААСАТтАасСсСстТАтТасСсасАсттатаддааассаАТТСА 44 важкий | ССАТСТССАСАСАСААСасСсСсААпААСТОССТатАТТТасСАААТОААСАИТтст авдадастадапАСАСссаассттатАТТАСТаТаТтТААААСАТСТТТАСО,ааатАС
САТАТТТТаАСТааТТтТААТасАТАТОАТтТАСТОСОСаоСбА,сапААсоСстаатсА
ССатсТосСтТСА сасастатааТаАСТСАаТТсТсАСсТоТоССТаСССатСсАСооСстаспАСАС ссааСсСстТоСсАТтСотоСтТасСсааатТтстТАаИтСсАпАаССТоСтТасСАААаТААТОаСАТ зі АСААСТАТТТОСАТТОаатТАССтТасСсАСААдаССАа,ааасСАаТсТоСАСАасСТоСстТ пегкий сСАТСТАТТТаСИаТтоТААТСОСОЯССТОССОССОЯССтТоССстТаАсАсСа,аттсАа,атас 45 сдатапАТсАааСАСАСаАТТТТАСАСТаААААТтСсАаСсАас,аАХатТапвАдаасСстТалд сОаАтаттасаасттТАТТАСТаСАТаСААДасСтТСтТАСАААСТоСтТоСадсаТатто ваССАдапйаАССАДасТасАААТСАдАА м
ТАБЛИЦЯ 1
НУКЛЕОТИДНІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ сасатасаастастасба,аттасавастАаватаААсАл,асста7ацватосто ватаАдааТоСССсТасСААвастСставйАСаАСАСССТСАаТТАСТАСИаСААТ сАСТТеСсСсТтассАас,ссабосСстацвАСсАда,асасттаАааставАтТапаАСАаА
ЗКІ1 |ТСАТСССТТТСТТТасСстТАСААСААТСТОСасСАСАСААДаттоСАаасасСАаАСТ 46 важкий | САССАТОАССаСаспсААСААТССАСОсАаСАСТаасСТАСАТапАаСасСАСАТТ
ТТАСАТОСАСТТаАаСаСТтАасСсСтТТАвАССтТадасАСАСа,аасССОаТАТАСТАСТИТ сссваавастТАСТАТОСТІСвссесасАасттСавассАСТАСссатттацвАсСат ставсваССАда,аа,аспАСССТааТСАССаТСТоСтТСА саса,астатааТаАстсА,асСсассстсАх,ататстасаасССА,сааСАсАс аватСАССАТСТОоСТаСсАСТаСОАдаСАаСТоСААСАТОССИвСсаСАсаТатТАТаА зк1і ТаТтТАААСТаатТАССАаСАаСТТССАспаААСАаСССССАААСТОСТСАТСТАТ пегкий сатААСААСААтТсаассєтАаасспа тост аАсСаАТСсТоТааСТоСААс 47 тотааСсАсстоАда,асстоСстааССАТСАСТОСОСТоСсАсастадацаАТаАС астаАТТАТТАСТасСсАатосСТАТаАСАаСсАссСстТадлатаатссавАатТстТ тса,апААСТОССОСАСсСЯСЯАа,СаТтСАССаТтссСтТА садсатасаастастасба,атавассСА,асАСстаатаААасстСасАсАС сстатосстаалсатасастатстаатТадСсТСАТтовсасАаТтАаААаТТТо тАсТОсСа,аСстасАТОоСЯССАаСССССАсСИааААлссспсастацвАа,атацАТТас 488 |ААДСТАТСТАТТАТААТИСОСАССАССТАСТАСААСССОТСССТСААалатСаА 48 важкий | КСТСАССАТАТОССТАСАСАСО, ТССААЧААСсСсАаа То тосСстаАава7астаАастТ
СстотТаАсСасСсСАСАЧаАСАСсссата,атстТАТтАСТаТаСсОсССссвасСасСААССТ
АсТатАаатосттосАаасСстабасСАаТТСАСТаатТАСТТСААТСТСОТОССвИаССс тасСАСсССТааТСсАССИаТСТОоСТСА сасатасаастастасба,аттасАаастаАаа,аСТаААаАдА,асстаавиавосто атаАдааТСсТСТасСААдаасСТСсТасТтТАСАТАТТТАССАДАТАТаСаТАТСА 4810 стасстасраАСАа,сассєтєтавАСААХ,ас,астта,а,атасатаааАтТацАТО важкий АаСасСТТАСААТаААААСАСАДАСТАТаСАаАаАдАа тТоСАасааСАпАатТСА 49
СсСсТТаАССАСАвАТасСАТССАССОСАХаСАСа,ааССтТАСАТОСАааСстТаласААСс таАВАТСТаАСаАСАСсвсассСатТАТАСТТОТИаТаСсОасАсАсСААдатотасттоа
Са,7асдатТАТАТТТАСТОСОааССАсСапААСССТастсАССОТСТОСТСА сАдса,аСсасАсапйАССААдастаАССатоСтТАААСТООССИЯааА,аасАССАдаст сАсСсатосСтТААсСстТааСспАпапАССААдаСТАсСатосСтТААтТаасосяАа 8Е22 авАССАдастаАССаТССТААААсСста,вСсасАсапАССААдасСтаАсСатос пегкий тТААСССОСОСАСОІЛАССААаСтТаАССатоссСтТААТаСССЯСТТСсТСАсСастосс 50 тосттасспаСАдАдастассстаАСАСсТатоасатасаА,аостадацАС авАдаастАатТАТТАСТаССТОИаТтСотТАСТСОТОСТОаАаТОосСТатаатттовасСа слааспАСсСАдасСстТаАССатссСтТАА саатотатаатаастоада,асстасєстосататстасатотостацвАСАИаТтос
АТСАССАТСТОоСТтТасСАСТасААсСсАХа,асАХатадс,аттастастТАТААСТАТОа од ТСТоСТааТАССААСААСАСССАпОСАААДаСССССАААСТСИТаАТТТАТОА пегкий татсастААТоСсЯаСССтТСАсСааАтТттотТаАсСсастстстаасСстоСААСТСТ 51 саСбААСсАсса,асстоосСтаАССАТСТОТОСОСТоСАсСастаАдс,саАСаАаас таАТТАТТАСТаССсСаСТСАТАТАССАССССОСАССОЯТоТОС!ССсСсватттсАааСацоя авапАСсСАдасСсТаАССаТтссСтСА сасатасаастестасба,аттаеасатстаАатаААадАлдасстаавасстСА атТаАдАдастТоСсТасСАДаасСтСсТасАТАСАССТТСАСААИаТтСАТСОСТАТОИаА
АТт,асатТасаАСсАасасссставАСААла,асасттаАаатасАатаааАтТацАТСА 9014 |АСАССААЧАСтТасОААСсСТААСТТАтТассСАасасаасСТСсАСсАаа,апАСсасттТат Бо важкий | СТТотоСсттасасАСАССТСОТатТСАсСалдСа,ааСаТтТАТСТасСАаАтоАаСсаасст
ААдАСООСЧСТаласАСАСтТасСсСАТТТАТТАСТИатТаС,аАаАсаАтТаАаТАТАИТИасС тТАСОСАТТОССЯТАСОЯаТатоСсатТасат ТТ ТаАСаАСТТСтТАСаатАТОС
АдсатставааССААда,аа,аспАСССТааТСАССаТсСТоСТСА
ТАБЛИЦЯ 2
БІЛКОВІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ
ОМОЇ МОБСАЕУККРИаАБУКУВСКАБИУЗЕТЗУ,ІЗМУВОАРИОСІ ЕМ МО 1Н12 важкий! У/ЛІ5ТУКамТОомМАОМЕОСАМТІТОТРАТТУУМЕЇ В5І А5ООТАМУМСАВМІ. 53
ЗЕТаМЕУУУМаМмОоУМмаОостІ МТУ
ОАМУМТОРРОУБ5БИаАРООАНМТІЗСТавоОмМмИаАОУМУнНУМОЇ ГГ РИТАРКІ М 1Н12 легкий | ОМТМАРБОМРОВЕЗавБкКБаИт5АБІ АІТаЇ ОАЕСЕАОУУСОЗУО55І БАБУ 54
Расваткі мі.
ОМОЇ МОБОа5ЗЕЇ ККРОАБУКУЗСКАБОУЗЕТЗУБІМУУВОАРООСРЕМУМО 284 важкий | МЛОТМТОаМРТМАООБГАОВЕМЕ5І ЮОТ5МТТАМІ ОІ55І КАСОТАУУУСАТУУМУ 55 ргумазУвОорУкамруУман
ОБМІ ТОРРБАБИТРООВМТІЗОСЗаа5ОМИавУРУМУУОМУРаИатАРКИ ЇМ 284 легкий | ТММОВРБСМРОВЕЗавзкБаИт5вАБІ АІМаЇ О5БЕОСЕАВОМУСАМУМ СОБІ ЗОВ 56
МмУга,аааткмМтміІ.
ОМОЇ МОБСАЕУККРИаАБУВУЗСКАЗОаУТЕТО5УаІБМУМВОАРИаОСІ ЕМ МО 2НІ важкий | МІЗТУМаОТММАОКЕОСВМТІ ТТЕТЗТЗТАММЕЇІ ВАВ А5О0ТАМУУСАВОГ 57
ЕЕРООСЗОСО5СУЗВАЕМОНМОМОоУМаТнатІі МТА
ОАММТОРРОМ5ААРООКМТІЗОЗавООМаИТмнимМвУММОНІ РИТАРКИ МО 2НІ легкий | МИКАРОМІРОВЕЗАБКОСАЗБАТІ СПИ ОТарЕАОММСОаТМОББ5І 5АММУБа 58 саткі мі.
ОМОЇ МОБОРОЇ МКРБЗОТІ БІ ТС5У55ОАЇ ВАЗУ СМ УВОРРОКаї ЕМ
ЗЕ23 важкий ІТ УБУБастУММРБІ ОБАМТУ5МОТ5КМНЕБІ ВІ МОЕМТААРААМУУСАВо 59
УугУравамУумі вмгрозмсостімтУо
ОАММТОЕРБІ ТУ5РОСТМТІ ТСА55ТаАМТ5ануРМУМРООКРООРРВАЇ| І
ЗЕ23 легкий | У9ТОМКНОМТРАНЕБОБІ ЇЇ СУКААЇ ТІ БОМОРЕВСЕАВМУМСТІІЇ НЕСТОСМУМЕ сааткітмі.
ОМОІ МОо5асааМУМОРОВ5БІ ВІ БСАУБаЕТЕЗМУАМНУУНОАРаКаИаї ом
З3М23 важкийї АМІУ УравмМкУМАОоБУКОаВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОУМ5І ВАЕОТАУУУСАВОИ 61 рум рума,оаті муз
РІММТО5РББІ БАБМООВМТІЗСНАБОБВІРОМІ МУМООКРОаКАРКМІ ІМАТ5
ЗМ23 легкий | ТІ ЕДОМРОВЕЗОаБабБатТОвЕТІ ТІ ОРЕОБАТУМСООБУМТИаєТРаРхаИТтк 62
МОІК
ОМОЇ МОБСАЕУККРОИББЗУКУВСКАБИСТО5ОТМАІЗМУВОАРИООСІ ЕМ МИ 4.14 важкий | 5ІРМЕАТУММАОКЕОСВІ ТІТАСЕЗТОТУМУМЕЇ 551 В5ЕОТАММЕСАБРУС 63
З5ММСУТТЕМУЕОРМС,ОСсТІ МТМ55
ОСОАМУТОРАБМЕСЕРООБІТІЗСТат55ОгаТтУМУУ5МУМООНРООАРКІ МІР 4.14 легкий | ОМОМАРОСМЗМАЕЗИавБКБОИмМтТАБІ ТІЗаг дАЕВСЕАВУУСВБУТВавтіІ Ма 64 саткі мі.
ОМОЇ МОБОа5ЗЕЇ ККРОАБУКУЗСКАБОУЗЕТЗУБІМУУВОАРООСРЕМУМО 4.21 важкий | МЛОТМТОМРТМАОСОБАОаВЕМЕ5І ОТЗМТТАМІ ОІ55І КАСОТАМУМСАТУУМ 65 ргмазУворУаморУМманаті ит
ОБММТОРРОУБатРООСМТІЗСВИО55МИа5МРУМИМУМОМУРОаИТАРКИ І У 4.21 легкий | ТММОВРБОМРОВЕБИаБКОИтвАБІ АІМОЇ ОБЕОЕАВУМСАУМ 0051 За
МмУгаааткітміІ.
ОМОЇ МОБСАЕУМККРИаАБУКУВСКМУБОМІІ 5КІ БУНМУУВОАРОКаИІ ЕМ МО 4М12 важкий) О5ЕНЕОСЕТУМУАОКРОСИСВІБІ ТЕОТ5ОІЕТАММЕЇ 551 55ЕОТАМУМСАТОС 67
Ем ЗМІССМОСУВММСОСсТІ ТУ
ОАММТО5РБОБІ РАБМООЮВМТІТСВАБЗОВІВММІ СМ МООКРОКАРЕВІ МИТ 4М12 легкий | БМ О5БаМРОВЕЗИаБазбатТЕНТІ ТІЗ5І ОРЕОБАТУМСІ ОНМОУРРТЕРОС ВИТ
КМЕїІК
ОМОЇ МОБСАЕУККРИАБУВУЗСКАЗОаИМУТЕТ5УЄМНУУВОАРООССІ ЕМУМ 5М16 важкий АІТУИРОСИавБРОМАРОБОСВІ ТМТООТЗАТТУМУМОІ 50 Т5КОТАМУУСАВН
САНВАВ5БІСТТРІ ОБМСОСТІ МТУ55АБЗЕК
ОМОІ МО5аСАУМОАСОН5БІ ВІ ЗСААБаєТЕЗМУаУнНМУУВОАРаКаИї ЕМ/М 5014 важкийї АМІММОСОКЕМУСОБУКОаВЕТІЗАОМЗАМТІ МІ ОММ5І АМООТАМУЕСАВ 70 рагРОРЕНООЮМОССІ ОМУУСОСТІ МТУ
ТАБЛИЦЯ 2
БІЛКОВІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ
ОТУМТОЕРББЗРЕАЗУСООаМТІТСВАВОБІЗБЗУМММУУООКРОаКАРКИ МАТ 5014 легкий | БО О5БИИМРОВЕБОБИамМОаТО ТІ ТІЗаг: ОРЕОБАТУМСОО5УЗЕРВТРОаОС 71
ТКУБЇїК
ОМОЇ МОБИАОУККРОБОУКУЗСКРОІССТЕМММаїявУУвВОАРИаОСІ ЕМУМ 8018 важкий! СІМРМЕИаТРТУСООБОСВАМТІТАВЕБТОЗТМУЕІГ ЕЕ ТА А5БООТАМУЕСАВНОИ 72
ВАВТАМТРМОЇ СІ ОЄМЕОЕєЕМмаТватІ МТУ55
ОТУММТОЕРБІ ТМБРОСТМТІ ТС5БАМЗИОАМТ5ОУМРММРООКРОаОАРВАГІ 8018 легкий | У5АЗМКЕБМТРАВЕБОБІ І СОКААЇ ТІ БИАОРЕВСЕАЕМУСІ МУЗСВИаИамММЕ 73 ссааткітМ
ОМОЇ МОБСАЕУККРИОАБУКУЗСКТЗаМТЕТОМЗУНУУВОАРООСЕЕМУМ 119 важкий | 0ВІМРМТЯУЗТЗАОКЕРОСАМТМТАОТ5ІЗТТУМЕЇ 551 АБОСТАМУУСАВЕ 74
ЕМОЗЗОСУУГ МУаОС,ТІ МТУ
ОЇММТО5РБОІБІ ЕАМаОе!МТІТСВАБОБІЗТ МІ МУ МООКРОаКАРКІ ПІМАА5 119 легкий | 5 ЕБИУРОВЕСИавзАОЗаИтоЕТІ ТІЗ5І ОРЕОБАТУУСООБМАТРУТтТРСЧОСТ 75
КМОІК
ОМОЇ МОБОР.ТІ МКРТОТІ ТІ ТОТЕБОББІ БІБСОМОМОСУМІВОРРОКАЇ ЕМ А 11 важкий | ММ СООКАМ5РБІ КОВІ ТІТКОТЗЕМОУМІ ТМТММОРМОТАТУМСАНЗМТ 76 касшлХаОАМЕЕУМаВаті М
ЗАМТАБІ ТІБИаЇ ОАЕОЕАОУУС55УТ555Т
ОМОЇ МОБСАЕМККРИаАБУКУЗСКУВИмМТтІ ТЕ БМНУУМАОАРОКОИГ ЕМ М 1МУ9 важкий | «СЕРЕРЕОСЕТІМАОКРОаВАМТМТЕОТЗАОТАМУМЕЇ 551 АБЕОТАМУУСТТ 78 роууУвазУузаУУрхмацаті м
ОМОЇ МОБСАЕУККРИаББЗУКУВСКАБОВТЕЗЗУМІЗМУКОАРИООСІ ЕУ МО 105 важкий СПР ЕЄСТАММАОКЕРОСАМТІТАОЕЗТОТАММЕЇ 551 А5БООТАМУМСАВНОСАО 79
ГмУуМмравамІе рУумсасоОсАї М
ОМОЇ МОБОРЕМККРИИТ5УКУЗСКАБОЕЗЕІЗБАМОМУВОАВНСОВІ ЕМ 106 важкий | МММАЗАМТММАОКЕВЕНМТІТВОМ5ОТМТАУМЕГ! Т5І В5ЕОТАММУСАДЕН в5РОоЗОССОБСУВІ УМаМмОоУМадатІ мтУ55
ОМОІ МО5асаІ МРРОСБІ ВІ БСТАБСЕТУЗММамеУМУвВОТРИаКаИї ЕММ 2А2 важкий | БТІЗТ55ИаВТЕМАОБМЕСАЕТІЗаОМ5КМТІ МІ ОММ5І АМЕОТАМУУСАКИ 81
РЕССаСрЕОУМУСОСТІ МТУ
ОАММТО5РАТІ 5І 5РЕЕВАТІ БСВАБОБМАЇМІ АММООКРООАРВА Мод 2А2 легкий | «МААТа РАНЕЗаЗава ТО ЕТ ТІ ЕРЕОБРЕАМУУСООВамимомМТада 82
ТКІ ЕК
ОМОІ Мосс МОРИВБІ ТІ БСААБИЕТЕОМУАМНУУНОАРОКИЇ ЕММА 2602 важкий | ІБМИУМЗИаБУСУАОЗМКОаВЕТІЗАОМАКМІ МІ ОІМ5І ВАЕОТАЇ УМСАКАЕ 83
МЕгаЕ ЗСсУсСМОоУМадаТті мтУ55
ОАММТОРРБО.АБагєРООБМТІВСТИа 550 5иМММБМ УООНРОКАРКИНЇ 202 пегкий | ТГАМТАВРБОМРЕНЕБОа5ЗКООИМТАБІ ТУБаЇ ОАЕСЕАВУМСТЗУАСММКОМ 84 гататкмтміІ.
ОМОЇ МОБСАЕУККРИаАБУКУВСКАБСОУЗЕМІМИ5УУАОАРИаОаІ ЕУ МИ 2012 важкий)! МЛІЗАУМамМТММАОКІ ОСАУТМТТОТ5Т5ТАММЕЇ В5І А5О0ОТАМУМСАВР 85
І МСЕРУМОМУСОСТІ УТУ55
ОАМУМТО5РИТІ ЗІ 5РОЕВАТІ БСВАЗОБУЗБЗОМЗАМУООКРООАРА У 2012 легкий | ВАБКАААСІРОВЕЗаБИабБатО ЕІ ТІЗАЕРЕОБАММУУСОЇ ГЕАТЗРРРЕСО
СТА БІК
ОМОЇ МО5аспаМУМОРОВ5БІ ВІ ЗБСААБаЄТЕЗМУУМЕМУВОАРИаКИї ЕМ/М
ЗА2 важкий | АМІЗМОСЗМКУМАрБУК.ИАЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАУУМСАНЬ 87
ЕМЕЗЗУСБОаМУУТОМЕМУМАМОУММСаРИТІ МТУ
ОАММТО5РІ 5І РУТРІЕРАБІЗСВОМОБІ І ВОТАУММІ ОМ М ОКРООБРОЇ.
ЗА2 легкий ПМ ЧСОМВАБаМРОВЕЗабБавАТОНЕТІ КІЗАМЕАЕОМаУУМСМОАГОТРТТ 88
ЕСОСТВІ БІК
ТАБЛИЦЯ 2
БІЛКОВІ ПОСЛІДОВНОСТІ ДЛЯ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК АНТИТІЛ
ОМОЇ ЕЕБОРТІ МКРТОТІ ТІ ТОБЕБаББІ Та ТМаУмІВОРРОКАГ ЕМ А 384 важкий ПММ О0ОКАМ5РБІ КЗАГТІТКОТ5КМОММІ ТМІГІММОРМОТАТУМСАНЗТО
УУр55аУВОАІ АгАМУусОстТІ МТМ55
ОЇММТОЕРОБРАМБІ СЕВАТІМСКЗВОВМІ УНЗММКММІ АМУМООКРОаОРР 384 легкий | МП ТММ АБАНОБаМРОНЕЗОЗИаБОИТО ТІ ТІЗ5І ОАЛЕОМАУМУСООМУБТР
УтТга,аОаткК ЕК
ОМОЇ МОБОРОЇ МКРБЗОТІ БІ ТС5У55ОАЇ ВАЗУ СМ УВОРРОКаї ЕМ
ЗЕ23 важкий ІТ УБУБастУММРБІ ОБАМТУ5МОТ5КМНЕБІ ВІ МОЕМТААРААМУУСАВо 91
УгУравамУмі 5ЕрзмсостімТУ5о
ОСОАММТОЕРБ.І ТМ5РИаСТМУТІ ТСА5З5ТадМТ5аниуРММРООКРОИОРРВАЇ! І
ЗЕ23 легкий | У9ТОМКНОМТРАНЕБОБІ ЇЇ СУКААЇ ТІ БОМОРЕВСЕАОММСТІ І НеЕаСМММЕ 92 сааткітмі.
МО МОо5аааМУМОРОВБІ ВІ 555 ТЕВММамнУуУМУвВОАРаТКаї ЕМ/М
ЗН5 важкий | АМІЕМОСУККУМарАУКавЕТУВОМОАМТІ МІ ЕМК5ОІ АМОСТААУУСАВ 93 рагРОРЕНООЮМОССІ ОМУУСОСТІ МТУ
ОТУМТО5РБОБІ БАБМООТМ ТІ СВАБОБІТ ЗМІ МУ МООКРОКАРКІ МАТ
ЗН5 легкий | 505 РОВЕЗИаБаМмаИтЕНЕТІ ТІБа ОРЕОБАТУУСОО5УЗЕРАТРасаТК 94
МЕМО
ОМОІ МОо5аспаІ мМОРИНБІ ВІ БСАТЗаРІЕОЮОУАМУМУВОА РОКИ ЕМ 3121 важкий СІБМУМЗОаМАМАВБВУКаИаТвВЕТІЗВОМАКМ5І МІ ЕММ5І ВАЕОТАГ УМСМУКОЇ. 95 умаУрітамаМоУМУуаості мтУ55
ОСОАМУМТО55І ЗІ РУИТРІЕРАБІЗСНЗВЗОБИ ОБМОУММІ ОМ М ОКРООБРО 3І21 легкий | ІМ аЗ5МАВАБамРОВЕЗОаЗаваторЕТІ КІЗВМЕАЕОМОУМУСМОАГОТРР
ТРСОСТКМЕїК
ОМОЇ МОБСАЕУККРИаБОЗУКУРСКАБООТІ БУМ ГПУУМАВАРООСІ ЕМ МО
ЗК11 важкий| ОПРЕРАТТІЗАОКЕОСВІ ТМТАЕЕЗТОТОММЕВТЕММОЇІ 55І АВРЕОТАМУМУ 97 сАдсасуУмазавззарха румусоса!тіУтУ55
ОАММТОРРБО5.М5аАРООВАМТІЗСТавООМИадамрмМУММоООІ РЕТАРКИ І
ЗК11 легкий | ХСМММАРЗИМРОВЕБИаб5КОаИатвАБІ АІТаЇ ОАДЕСЕАОМУСОБМОББІ 5015
СМгаТататТЕМТМІ.
ОМОЇ МОБОРОЇ МКРБОЕТІ 5І ТСАУЗарІСЗАЗЕММСУМВОРРИаКаЇ ЕМ 488 важкий | ОБІМУМОИ ТТ УМКРБІ КОАМТІБІ ОТ5КМОГБІ ВІ 55І ТАТОТОММУСАВАРТ
УС5РБОБСАМНУМЕМІ МмавВаИТті то
ОМОЇ МОБСОАЕБЕЇ ККРОАБУКУЗСКАБОИМІЕТКУСИІВУМ ВОАРООСІ ЕМ МИ
4810 важкий| МІБАММЕМТММАЕКЕРОСЕАМТІ ТТ ОАЗТОЗТАММЕЇІ ВМІ А5ОЮОТАМУЕСАВЕМ 100
МЕАЕМІ СУ ОЮСТІ МТУ
ОБММТОРАБУЗаБРООБІТІЗСТатовОМадУМУМУММООНнРОКАРКІ МІУ 9А11 легкий | ОМАМАРБОСІБОВЕЗавКБаИмтАБІ ТІБаі ОАЕСЕАОУУСОаУТ5ОМ5РУЕ5 101 саткі мі.
ОМОЇ МО5Оа5ЕЇ ККРОАБУКІ БСКАБСОУ ТЕТЗНРММУУНОА РОСС ЕУМ 9014 важкий| СУМІМТКТОМІ ТМАОСЕТОаВЕМЕ5І ОТОМАТАМІ ОІ5СІ КАЕОТАІМУСАВОЕ 102
УузаУозУаМмЕнавзЕрорЕамоуУмуаостімтУв
ТАБЛИЦЯ З
ПОСЛІДОВНОСТІ СОК ВАЖКОГО ЛАНЦЮГА
Я СОоВнІ1 Ссовнг СсовнЗ 103 104 105 вУБЕТ5У5 ІОТМТОаМР АТУУМО мазУпОВрУУОаМОМ
СУТЕТ5УВ ІБТУМООТ АВОРЕЕРРОЮСЬСОБСУЗАРІМОНМОМОМ за же об пон
ЗЕ2З 112 113 114 115 116 117 ват5етгУА ЗІРМЕАТУ АБРУСЗЗММСМУТТЕМУБОГ 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159
СЕТЕЗММУМ ІБУОСЗМК АВБЕМЕЗЗУСБОМУУТОМЕМУМАМОМ
163 164 165 166 167 168 169 170 1/1 172 173 174 175 176 177 178 179 180
ТАБЛИЦЯ З
ПОСЛІДОВНОСТІ СОК ВАЖКОГО ЛАНЦЮГА
Я СОоВнІ1 Ссовнг СсовнЗ 181 182 183 184 185 186
ТАБЛИЦЯ 4
ПОСЛІДОВНОСТІ СОК ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА
187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198
ОБІРБУ АТ5 вОБУМТаїЕтТ 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 2217 228 223 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249
ТАБЛИЦЯ 4
ПОСЛІДОВНОСТІ СОМ ЛЕГКОГО ЛАНЦЮГА
250 251 252
ТАБЛИЦЯ 5
ХАРАКТЕРИСТИКИ СПЕЦИФІЧНИХ ДО ВІРУСУ ЧІКУНГУНЬЯ МОНОКЛОНАЛЬНИХ АНТИТІЛ
ЛЮДИНИ
' Нейтралізація МКР СНІКМ ото дннеюе ММ ТЕН ВК тАбБ!' Підклас Ід з еккодоменом Е2 ланцюг Х/к2 ЕСрво у нг/мл» (10 мкг/мл)з я. (9595 довірчий інтервалі 4м2 0 0йов277/7/7// Їк | 7777-7777 8ілої
ПЕ ГТУ З КРТ НЯ РУЛОНИ ПОХОООООО НО КОН НГУ НО
193Маз3 0 0юб!7777/|Їк7 | 777777 -7777111117111111 2511
ПЕТ ВИ КТ НИ ЕН ПО ПОН ТЕ НЕ: жа ЕЕ ПОН 384 0йбо3777/ Їк/ | 777/-/ 11111111 146020 (ов! Їх | 7777-7771 9560-1601 11105 (юбі ЇХ 77777777 - 77711117 1380-1701 117106 0Пйбооз3 ЇХ | 7777777 - 11111101 52го0ійлоо-вво 0 2215 (МТ (мб 77777171 - 11111117 4600(2400-9,500)|.ЙЩ 1ме/0юв?7/7/7/7/7/ Їк Її! 777-171
ТАБЛИЦЯ 5
ХАРАКТЕРИСТИКИ СПЕЦИФІЧНИХ ДО ВІРУСУ ЧІКУНГУНЬЯ МОНОКЛОНАЛЬНИХ АНТИТІЛ
ЛЮДИНИ
' Нейтралізація МКР СНІКМ тАр Підклас ІД з ектодоменом Е2 ланцюг Х/к2 З ЕСво у нг/мл? (10 мкг/мл) Ди (9595 довірчий інтервалі пи Тл Тех ПНЯ КУЛЯ ПОН КО ЗО пи: ТИ КТех ПО УЛ ПОН КО ЗО 1212аб2 Фа! ЇХ Її -1111171Ї1111111111х 212 (юс! Їк/ Її -1111Ї11111111111 с сНнкКо5амиші о бМюб2с////Їк ЇЇ 7777-1771 32 "Порядок антитіл відображає рівень ступеня і охоплення ефективності антитіл в аналізах нейтралізації проти клінічних ізолятів СНІКМ різних генотипів. гІзотип, підтип імуноглобуліну і використання легкого ланцюга визначали за допомогою
ЕГІЗА. МТ означає не досліджували внаслідок поганого росту В-клітинної лінії. 3(-- позначає, що не піддається виявленню зв'язування (ОЮ «0,1); (ї/-) позначає слабке зв'язування (ОО 0,31-0,4991; (їж) позначає помірне зв'язування (ОО 0,5-0,991; (їяж--) позначає сильне зв'язування ОО 21,0). «Показані величини відповідають об'єднаним даним двох або більше незалежних експериментів. "Концентрація (нг/мл), при якій 5095 нейтралізувалося (ЕСзо). (») вказує на те, що величина
ЕСво перевищує найбільш високу досліджену концентрацію тАБ (10 мкг/мл). М.О.-не проводили.
ТАБЛИЦЯ 6
ОСНОВНІ АНТИГЕННІ ДІЛЯНКИ СПЕЦИФІЧНИХ ДО ВІРУСУ ЧІКУНГУНЬЯ МОНОКЛОНАЛЬНИХ
АНТИТІЛ ЛЮДИНИ
Група конкурентного Залишки Е2, для яких тбаАрб! зв'язування для було відзначено знижене очищеного білка Е22 Домен Е23 зм'язування при заміні на аланін 1111284 | Низькезв'язування | Беззниженняйй | - 1114921 | Низькезв'язування | Беззниження./-/ | - 71171719014.7777.17771717171717112 1111110 | Беззниження.:/|Ї.СС7-ссСсСсСсС у т58, 059, 060, Нб8, 071,
К2г34 й нНбваг, Муб64, НбВ8, НО,
М/64, 071, НВО, 1116,
М171, 0184, 1190, М193,
М197, 8198, 199, 4209,
Ві МЗЕ Ар ОВ, Дуга 210, К215, К234, У242,
І255
ТАБЛИЦЯ 6
ОСНОВНІ АНТИГЕННІ ДІЛЯНКИ СПЕЦИФІЧНИХ ДО ВІРУСУ ЧІКУНГУНЬЯ МОНОКЛОНАЛЬНИХ
АНТИТІЛ ЛЮДИНИ
Група конкурентного Залишки Е2, для яких тбаАрб! зв'язування для було відзначено знижене очищеного білка Е22 Домен Е23 зм'язування при заміні на аланін рбо, 868, 298, НІ170, 11115014 7771777171717171711211111110 | Беззниження.:|/|Ї.77- сс ' 063, Му64, 165, ВВ80, 1121, 11773847 17777711 МТ 1 777777717111ов1111171717111 1711111 м1920195..ШЩГ 7117174887777771777717171717171121111110 17111 Беззниження.:/|ЇСС7ССс7-ссСсСсСсС у 74620171 мМТ | 777777171717171710в 77171711 0174, 8198, У199, К2ї5 ві 17711111 МТ | Беззниження.:|/|Ї77с7- су
І190, 8198, 199, с209, 13160 вав вВЗ6б, Нбг, 880, 0146,
Н2г56 11174107 МТ | 0 Беззниження.:/|ЇС-СССсСсС . 059, М/235, А11, М74, "Порядок антитіл відображає рівень ступеня і охоплення ефективності антитіл в аналізах нейтралізації проти клінічних ізолятів СНІКМ різних генотипів. гПоказані величини відповідають об'єднаним даним для двох незалежних експериментів.
Низьке зв'язування вказує на неповне зв'язування тАб з Е2 на біосенсорі для оцінювання конкуренції. МТ вказує не тестували, оскільки АБ не зв'язувало ектодомен Е2 в ЕГІЗА; МОБ Аб вказує на недостатнє надання ітАБ.
ЗНе реагує вказує на те, що тАБб не реагувало проти білків оболонки дикого типу і не могло тестуватися в цій системі. Без зниження вказує на те, що тАбр зв'язувалося з білками Е дикого типу, однак не відзначалося відтвореного зниження для якого-небудь мутанта. ЮА вказує на домен А; ОВ вказує на домен В; Дуга вказує або на дугу 1, або на дугу 2, або на обидві з них. «Залишки, ідентифікували за допомогою контактів з тАб при попередньому відновленні кріо-
ЕМ. 5О0
ТАБЛИЦЯ 7
ЕФЕКТИВНІСТЬ І ОХОПЛЕННЯ НЕЙТРАЛІЗАЦІЇ ІМ МІТЕВО МОНОКЛОНАЛЬНИХ АНТИТІЛ
ЛЮДИНИ, СПЕЦИФІЧНИХ ДО ВІРУСУ ЧІКУНГУНЬЯ
ЕСво, нг/мл: (9595 довірчий інтервал)
Західно- генотип
Штам І К2006 Карибський штам 9,064 (2,911- 6,187 оснкл5амишії | 77771111 "Порядок антитіл відображає рівень ступеня і охоплення ефективності антитіл в аналізах нейтралізації проти клінічних ізолятів СНІКМ різних генотипів. гКонцентрація (нг/мл) при якій 5095 вірусу нейтралізувалося (ЕС5о). (») вказує на те, що величина ЕСзо перевищує найбільш високу досліджену концентрацію тА (10 мкг/мл).
М.О.-не проводилося.
Усі композиції і способи, описані і заявлені в даному описі, можна одержувати і проводити без зайвого експериментування з огляду на даний винахід. У той час як композиції і способи за даним винаходом описані з погляду переважних варіантів здійснення, фахівцям в даній галузі буде зрозуміло, що можна вносити зміни в композиції і способи і у стадії або послідовність стадій способу, описаного в даному описі, без відхилення від ідеї, суті і обсягу винаходу. Більш конкретно, буде зрозуміло, що визначені засоби, які є як хімічно, так і фізіологічно спорідненими, можуть заміняти засоби, описані в даному описі, досягаючи таких самих або подібних результатів. Усі такі подібні заміни і модифікації, очевидні фахівцям в даній галузі вважаються такими, що є частиною суті, обсягу і ідеї винаходу, як визначено в формулі винаходу, що прикладається.
МІ. ПОСИЛАННЯ
Наступні посилання прямо включені в даний опис як посилання в тому обсязі, в якому вони забезпечують ілюстративні деталі методик або інші деталі, додаткові до деталей, описаних в даному описі. "Апіїбодієв: А І арбогаюгту Мапиаї!," Сода бргіпуд Натог Ргезв, Сода бргіпа Нагброг, МУ, 1988.
Арропаап?о ега!., Ат. У. Редіаїг. Нетатю!. Опсо!., 12(4), 480-489, 1990.
Айгеєа ега!., Агер. биго., 125(1), 107-113, 1990.
АїШепоп еї а/!., Віої. ої Нергодисіоп, Заг, 155-171, 1985.
А!цвійп еї а!ї., Ріо Раїштоая 8, е1002930, 2012.
Вгепіп, еї а/., Мігоїюду 371:185-195, 2008.
Вгомп еїа!., у. Іттипої!. Меїб., 12:;130(1),:111-121, 1990.
Сатррбреїї, /лл Мопосіопа! Апіроду Тесппо!оду, Гарогаюгту ТесРпідцевз іп Віоспетізну апа
Мо!іесиїаг Віоіоду, Мої. 13, Вигдеп апа Моп Кпіррепбега, Еа5. рр. 75-83, Атв5іегдат, ЕіІб5емієг, 1984.
Сараїйаі еїга/., Віоспет. Віорпув. Нез. Сотт., 74(2):425-433, 1977.
СОС, Спікипдипуа іп Ше Атеїїсаз. (Айапіа, СА: 05 ЮОерайтепі ої Неайй апіа Нитап зЗегмісев). могпіа-міде-меб аї сас.дом/спікипдипуа/део/атетгісав.піті, 2014.
СОС, Спікипдипуа міги5 (АМапіа, СА: 05 ЮОераптепі ої Неайй апа Нитап 5егмісев). мопа- м/іде-мебр аї садс.дом/теадіа/геІвєазевз/2013/р1218-спікопдипуав. піті, 2013.
СНітізіап ега/., Ргос Маї! Асай 5сі О 5 А, 110:18662-18667, 2013.
Спи ега!., Оєсірпегіпу їйе ргоїесіїме гоїе ої адаріїме іттипіну ю СНІКМ/ВЕЗ а помеї! сапаїідате массіпе адаінві Спікипдипуа іп (пе АТ129 тоизе тоді. Массіпе 31:3353-3360, 2013.
Соцаегс еї аї/., у. Іптесії. Рів. 200, 516-523, 2009. ре дадег ег а! бетіп. Мис!. Меа. 23(2), 165-179, 1993.
Ооїакіа еї а/!., У. Віо!. Спет., 264, 20638-20642, 1989.
Зо ооїїне апа Веп-2еєм, Меїпоаз Мо!. Віо!., 109,:215-237, 1999.
Едмжагаз 8 Вгом/п, У. (зеп. Міко!. 67 ( РІ 2), 377-380, 1986.
Едмагаз еї а!., у). Суп. Мігої. 67 ( РІ 2), 377-380, 1986.
Еопа ега/!., у. Мігоі. 88:14364-14379, 2014.
Ес еї аї., у. Іптесі. рів. 207:319-322, 2013.
Сепег ег а! ботаїйс Се// Сепеї., 3:231-236, 1977.
Соп ега!., Сііп. Іттипої. 149:487-497, 2013. стіріз апа Саіапа, Нит. Раїйої!. 24(12), 1271-1285, 1993.
Сюио егаї., осі. Тапвзі. Меа. 3:99 гаво, 2001.
Наїепадаго, еї а/., у). Мігої. 88:13333-13343, 2014.
Намтап егаї/., у. Міго!. 87, 13878-13888, 2013.
Нопа егаї., у. Мігоі. 87:12471-12480, 2013.
Кат ега/., ЕМВО Мої. Меа. 4, 330-343, 20126.
Кат егаї/., 9. Міо. 86, 13005-13015, 2012а.
Кат ега)/., Ріоз Опе 9, е95647, 2014.
Крнаюоп еї аї.,, Апп. ої Меигооду, 26, 210-219, 1989.
Ківіїап еї а/., Мігивев 2:796-825, 2010.
Кіпа еї а/., У. Віо!. Снпет., 269, 10210-10218, 1989.
Копіег апа Міївівїп, Битг. У. Іттипої!., 6, 511-519, 1976.
Копіег апа Міївівїп, Мате, 256, 495-497, 1975.
Кташзе ега/., у. Іттипої!. 187:3704-3711, 20116.
Кташзе еїаї/., у. Мігої. 843127-3130, 2010.
Кташзе егаї/!., у. Мігої. 85:10905-10908, 201т1а.
Кташзе егаї/., у. Мігої. 86:6334-6340, 2012.
Куїє апа Оооїїне, ./. Мо!. Віо!., 157(1):105-132, 1982.
І апсіоці є МаІадеге, Етего Іптесі бі 20, 2014.
І еє ега)!., Ріо5 Раїпод. 7:е1002390, 2011.
І емійїї ега/., Массіпе 4, 157-162, 1986. ит ега)/., у). Іттипої!. 190:6295-6302, 2013.
Маїпои еї а/., Мбіо 4, 2013. бо Мавтгіпоці еїа/., Мігоїоду 464-465, 111-117, 2014.
Меззег еї а/., Ргос. Маї). Асад. 5сі. 0. 5. А. 111:1939-1944, 2014.
Могтізоп еїа!., Ат .) Раїної, 178:32-40, 2011.
МаКатига еї а/, /ї Еплуте Іттипоаззауз: Неїегодепесриз апа Нотодепесрив бувіетв,
Спаріег 27, 1987.
ОЗпаппеззу еї аї!., . Іттип. Меїй., 99, 153-161, 1987.
Раєз егаї., ). Ат. Спет. 5ос., 131:6952-6954, 2009.
Раї еї а!., у. Міго!. 88:8213-8226, 2014.
Ра! ега/., Ріоз Раїпоя 9, е1003312, 2013.
Регвзіс ега/,, Сепе 1871, 1997
Ропцег апа Наї!єу, Меїй. Епгутої!., 91, 613-633, 1983.
Ветіпдіюоп'є Рпаптасеціїса! бсіепсев, 15Ій Еа., 3:624-652, 1990.
А.С. Теат, А Рошпадаїйоп Гог еіаїївіїса! Сотршиійпу, Міеппа, А!ивійа, 2014. зЗепіЦе еї а!., Ріоз Меді. Тгор. Оів. 7:62137, 2013. зЗеїмагазан ега/., Ріоз Меді. Тгор. Оів. 7:62423, 2013. зЗіззоко еї а!., Ріоз Меді. Тор. Рів. З'є389, 2009. зЗтій еї а)/., у. Міго!. 86, 2665-2675, 2012.
Зтіїй еї а/!., у. Міго!. 88, 12233-12241, 2014. зЗтій еї а)/., у. Міго!., 86:2665-2675, 2012. зЗтійй еїаї., Мбіо 4, е00873-00813, 201За. зЗтій еї а)/.,, у. Іп'тесі. ів. 207, 1898-1908, 20136.
Зіарієз еї а/., Сіїп. Іп'єсі. Оів., 49, 942-948, 2009. зип еїа!., ЕІе, 2:'600435, 2013. зип еї а)!., у. біегоїа Віоснет., 26(1):83-92, 1987. зЗип еїаї., у. Міго!., 88:2035-2046, 2014.
Тапо ега/!., У. Віої. Снпет., 271:28324-28330, 1996.
Тнотбиго еї а/., у. Сііп. Іпмеві., 123:4405-4409, 2013.
Патент США 3817837
Патент США 3850752
Патент США 3939350
Ко) Патент США 3996345
Патент США 4196265
Патент США 4275149
Патент США 4277437
Патент США 4366241
Патент США 4472509
Патент США 4554101
Патент США 4680338
Патент США 4816567
Патент США 4867973
Патент США 4938948
Патент США 5021236
Патент США 5141648
Патент США 5196066
Патент США 5563250
Патент США 5565332
Патент США 5856456
Патент США 5880270
Мапаег Мееп егї а/., Апіт Неайй Нез Нем, 13:1-9, 2012.
Мо55 еї а/., Маїште, 468:709-712, 2010.
Мо55 еї а/., Маїштге, 468:709-712, 2010.
Мапег еї аї., у). Іттипої!., 186:3258-3264, 2011.
Мапег еї аї., у). Іттипої!., 186:3258-3264, 2011.
ММамлтгупсгак в Тпогре, Іп: /ттипосопіидаїез, Апіроду Сопиидаїез п Надіоітадіпа Апа
Тпегару Ої Сапсег!, Моде! (Еа.), МУ, Охгога Опімегейу Ргезв, 28, 1987.
Уи еїга!., Майте 455:532-536, 2008.
а щі 13851 5едоевсе БІК
СПВКОК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ: «4105 Мапа нЯ Ух улізеевіку «12ах ОПОСЕРЕДКОВАНА ДНТИТІЛОМ НЕЙТРАЛІЗАЦІЯ ВІРУСУ ЧІТКУ УНЬЯ «13; ЗУБ Т РРО «ій» це езузау, А спуї» дя -Ва- 18
Івах ІБ хіба» Взсенсій мебзіов 3.5 «ка» 3 «5335 Ях3 «ВлаУ БОЮК хз ВІрує чмікумгумеа ках 3
Бек оїВе вує АБр Ав Ре йхи Мві Ту су АВ ТР ОАгРИ РГО Ту лев ї 5 18 35 ліз МЕ; Сує Био дер Су Ту щі піу Ні б5еб бу» ні бек ба У 8 Ж КІ діа ен і Ат Ів ба дз він дів тВе дер б3Ж ВК мем тує Ще
Се ча 45 ів Маї баб іно В: Бі іу їі» Б1у ТвВе дер одер бек Ні да ТР
Ба КУ ба
ТНК уз зни агро Тує Вес Ажр ода Ні Ті Бго віза Азр дій іУ МЕ щ жа 75 що дів еїу цем бе Уві дра зве Заг дів бео сухо ТВ Дів ТР Бу тве ча ах
Ме біу Нік бе біс меми дід дев Суб рго вух щік біз ТВе фен о тве 188 їй: Ме
Ук ІУ ВМе тнк ойзв Баг Ар орУз КІФ Бе Мі Чек осух ТВ Ніє Рга 1 ї25 Те вве ніх Між др ого Кго Уві Щі8 ШІУ АК Обі зу фе Ні бек АРЕ 33 135 за
« ЖВІ? 11853 бодневсе МівкіпЕ
Без бій Ні Бі Буз Зі фей рео Су5 56 отТає Тук Мі бій бек Ай 145 358 155 зе
Аіа Аза пн дів жи бін їі 033 Уві Ні Меї Рез обго Азо Тис рго 655 373 їх
АквоАбЕ ТНК фею Мем обеє ші пів ем 53у деп Уа Ух Бі Те Уді 158 зв 198 ап бек бій їВк Уві леви Ту бух Су Ап Суб бу БІР Хе? АБ Ти їх зро 245 «іу бер ХІЇ8 Те Тве Ахо фм5 Уві зе Ам два Су бух Уві дер Ба
Зо щі5 з
Суз Ні5 Азіз Аза уві ТВеойши Ніз фу ме ТРр обі Ту Аа бек орга 355 38 235 ча івур УВІ ро йакк дк АЇВ о Зі) це бі АВ АТ Оу Бі ух зів ніх рас 5 Ух
ТІ рБо Бе во фен дів дей МВі їй обу Ме мві веб ме дДіз МК лю лев 7а дхпоРка Тве уні Тис Тек 01у бує два бів о уді ЗІ Мек сер о сев Тує 275 за Кеш
Бро аз ній Рго ТНеоБец іч беє Тук др бегб Меж чіу 5; 613 бро ща Я зав
Аа Тує біп 03 біз тгромві Тег Ні фуз вуз ів чаї Уві беу ТВ
З 315 зЗУй чаї Бе Те Бім Бім ен ів маф о тяе їгродіу дев ай Біб Бво тує яко За Зах
Ж Ту Тр бо ія іо баб Аза дз щіу ТВге діа Мі (Фіу Ні Рго зав за КТ;
Мі бів тра тіє фреш Тук Туб Ту б фев зує Бе ве о Меє ТВе ма 355 зев 05 в 2019 1161 Зедцепсов Г15Т1ВБ
Уупі Уві мві 5Зсе Маї Аїз бБеє Бйе їі без сви заг Мет уві Біу МеЖ
РЕ 35 з дів Уві Щіу Мек Сує Мек Су» Ата держ Аг Аг; Сух Тів Таб обро Тув зах За З чав іч ви Те овКоез б3іу Азз зве маі Вго Бне еф ву Бго фей Се СУх 485 Би те гух Ті дев ТК ліз Кух вів ту
УЖ. «Ах «31» 378 «3 ДНК «ах ШЕручна: послідом ть «вх «223у Сумнтетизний оліговуклевтид «8505 кезкнійсавс свКсвсартя кераясівав кідазравес стресі: ерікавнкіє 50 тссівсвзавв сохстЕріка свассеузкс срохаснвіа їсавсховиЕ св аВНсЄ 328 «ссдазсаав зЕсїТнавтн взсвннаєве вісарозсї: зсазанеєка саснквихаК їі55 дсзсаряасх їссавнвсзв звісассзсс восзсоанасв свессворНс сасавіст83 245 аткваксіва деЗЕсстВен еКстЕВсЕВо ВевНссБТВЕ азттаскдене дав за тесвористк ВКЕАККТЄКВ стосжвккво тесндіВіри асдіссдвар ссзарвНасє За с«тЕввсвсси Беїесеса ЗУВ «дах В «2135 3 «Аа» НК «ІЗ» штучні чослідовві ст» «ЖУВУ «ба» пинжотизний зпігонуклеотид «В3йх 3 «ЗНДЕЧЕКВК ївестісввес вессісаККр єстрешнссє саррисявад вибовссВКх 5
Кесківтвски дизЕсВветс свасатсвав поза аїа зтвізсаств штани 328 схжссавЕна сарсссссва астссісвкс бахадтвася ссваєсввсс сссврвнихс Іа з УВІ? 13851 бедцелс» рі5сіпЕ сетвассввї сстетвнеїс сазвтєтввс асстсавест ссгіКвосВі сВСТВЕКеХ ав квожствнори втнавестве іБаїкасфне савссстаїв асвасввеєкї ВаЯКЕсте св за ктаттскксв кзЕквассе зстреевке са за х2їа» я «2315 315 «2жах ДНК «2135 Штучна песпідовмішть «ЯТЙУ «й23» Синтетичний олігонуклеотняа «ЗОйх й дссіснвт»а авижєксств сварновост вевіасвкЕе ссастанота же ЗаЄ 5 тенківодес арессстри зоаарЕКок: Варівраїное ЗТНвеККвИа сжсзаюакє і призавсссва сскатносєв вкассїсвсоа везсвЕІТкЕ УсТКЕТесіК рЕакаксжсХ і вісассасвя сетаїсікса натсвЕсває ствзакрете квщасастує скат кає зак тЕОдезасаї аєтакрттра сокствнеок зкстасскис защастасьв сереновнає зе
ВЕСТИ ЕКИС В ЗЕ
«ах 5 хи1їУ 383 хяїй» ДК хХїЗ» Штучна послідовність» «ЕВ» «а5х синтетичний злігонуклеотих «вх 5 сактстисвс ївВСтеВЕеК апостоанов сетиржВссє селЕКкаКаВ Ех а зеКІВКссТв вка всКх севсатсвов зба Есеви базах ка совка 128 «саввивквя сссссвазес ссфоскскаї вставав зновнеостє евидЕКсссї ЕЕ касокзвіїесї своеї ссва ністивевоє Беввестесс ЗдЕссаткаа сЕИВсСссеЦ 8 меткевваке зеВссваКта Месія Кесв Квітки васв зсаносквак ткнесиітве ЗО ін ннсв навврессаз ресваскаутео сів ЗХ «83 є «8335 Я «33» ДНК хх» Щтучна зослідоавість а 2а17 ЗЛЕ бедоевсв річне еле «833» Синтетечний оліганукаеатих «айвх Є саррідсвиєс фкрішканіс греЕаВесктЕан вКявсдааро СТВИЕКесо аКІДоВЕКІЄ а зестщсввее снКстроКІВ сасстіжасє зВсТесдика кеарсткеВх веваєсвВКее 335 єстршикаВи ВЕКікиВнЇВ явна їВи ассансаскї зсазідніва сасаввохВЕ 3ке довсаназку їссзкквсвЕ звісасстТЕ асваєвдана сатссасвак свгакокво Ке5з зхнваАстна висБестивО астваєває апрвссвжее векасткови век За вВиТЕтссср вБарасівсао срЕсовсаде ЕсеБастсса вржжсайскеа сСевЕєвсаВе за
Басатнааск Котвнввеса свриасвстю Вссаковист сековдиВаК є ща «га 7 «яїіх 38 «3 ДНК «яї3У Штучна. преладавністе «ЛЕВ «Айах шичтетичний Ояйгонуклеотив «385 У «ВЕСТ све Храстсарсс векстєввтв сеїнорвесЄ сзнрасавна вртсассвх ка тоствокобк данровнисїс сезасасещнв азісаїтаїв фаз стовта ссадевосес 3-8 совяреасаю «сессвааск сс ввВх васзаєтиха акодаєссстс зржваткес їй дасевастт ствсскссаз всстннсвсв созиссвссо СЕДЕСВКоВІ сржвстссаю 24а зотедривсв вносив тЗ тсастрсвВНиа всасроввів яоВЕссІКаЕ сЕсСКВТеВКа зви фгткрЕсврак шквссовЕєо йвесМтста З «ау «ліз З «вай ДЕ «МИ» Вручзна пррелідсТевнаістіх хх кад Ух СануєтТИчНийЙ олігонуклеотад «сайах 5 садвіксвис ЗЕ сввЕс жЕвсссаККА сіКвІннвЕс слЕскрасво сет «а зсствсавки зстозарінв сиссстссво звсввевВих ЗК свиКЕ КіКНВесВ: 1585 пвессссеси кнааняянсї якенівнат: вкязссрісх сбвізвсвВ вові но і585 в З917 ЗівБі 5еавенив БІК асивссквк сосфссавак бепанісвсс еВІсКНівЕ асасріссва вавсесаєтю дей
КселіжавЕ іївавсксфЕс васснссвса дасвсваств Метактеасіїв ідкраквії З тХакжіствіжв зтавсарівл Кізстастає страксстаст овасісктТя векосевеКа й в:сствиЕса Кен В ЗВ «23а» З «8319 57 «Аля ДЖ «2335 Шручна послідовність
ЕЙ жи» Синтетичний плігонУкАєотка кава» З сприскрЕви трасксакиа вссбтоастн векекієссс свеиввжвас зон Ба акстджвстт ссидсвствЕ прсовресвсс зктрекеваиї втскваТК вжессивсав ї2а аззсссввас авсспссєзЕ вессстнві: тТасвеєвсвв асмнаареа екс ї8ва сєждессвЕї ЗсїсавЕеКс сеткставвк втсзавеств состеасвс вксзвасЕта зай сввсссвани апрарврохва сі таствс стрекессакї пів ЕВНЕв сс За кисрнавнка совенекнво «века 327 «Ох їй «83їх Зх «тійх ДНК «5335 Штучна песлідонність «йгах «йИ3х Синтетичний оліговуклоратид «вай» 35 «аккідшсаввс ЗЕиКесавкє тновЕведес МТЕНТсгаве стИрНаЙКе ЄсТДаЕВКТе 5 їссівївсан Тс тВДект сєвесКЕсав застяінеса ТВеВсТВЕВ кедесандсЕ ха ссвиясваки висівдаєси китвисанії зізІвБІаки «твваадква сзавісвах хяВ свЕНїссв брааврЕЄКи ЗіКсвссВіЄ фскзкараєз зітссавзнва сасрсквиах ай сгІдсвавкна зсзнестнях авссвевдає зсввсквкве вісн варокикас зва їзексскев зетвсткееК ссзрарнваєс сствкксоасев їсежестра зай «тій заз ЗА а 2937 зіаі бециевке Ге «іл ДНК «ЖУ3: Штучна послідовмість
Фо «айха сбивтетнчний опігонуклеотид «аа» ді васвіккіше іквессввЕх теоВЕсткс офісне Вї стдузикнеи санакесакс а вісвевствсс Вкрссавіса навсаїтсес австакттва зстТЕВтатса всозЕеея о рекзеанесе стазедессї ваїстатреї зсозіссвско седазаетвк воски зо «Еясісавктя всавкневакс срвиасзвах бісаєскстося ссаксаєсак феквесвавскї КещІ взааатттта саастїаста сівксавсак австасваєта среквахвів сах тесвие зай «стовиассВ садтвнатат папа За «тла» 15 «й» 37 «23» ДНК «21» тучна тослідоввікть кяха» «283» Свнтетичний олігонуклеовтид «а8а» 5 саваїрсвис вЕбоснніє ЗБНрВствак Кіравраавє сівнокссїх висвазавасе а хестнканиьв сестри сассїссзне зофтвевеса сВретввВ Бсвасаввс 158 пхлвнасавв несттенів вВеасевнаввс звоасссоств Се снетас звсввастає їха нізсававит сссзввисан Зсссгасвасї зсовсррвов аасссвсенд свсввіткає 2ч4а зтжнлаєстаа всввсствав абсткаевас зсввосЕЕтЕ асКТКснЕо КВСссИАЄ зна звжкзЕкакка фїкавекеска гесдасско таскаскітв астіссвквЕ зсоневавеє ЗБ ска жевссд ТсжесКе хв «а» 13 хяЛж» ЯК 2385 ДЕ «ЗІ3» Вжучнва послідов сть сах
ФЖУ4» бватоетизщниВ зпігонукловтидй «АВО» 33 сврЕсЕвтЕи Трястсавсс ТВесксснівВ КІБренЕКє струасзикс кврсвосВкє «о
Кукінсвске кавоссвеесВв беастеквех вскіаркааєсх зтвістскЕВ кеассанова 58 а 2817 З156і Зедиевсе зії пр сасєсавЕсс зарсссссвс ветсакнате ттїввівкса різвіседес сксавивЕТЕ 350 тктваїсвеї Кстстрввесїс сазвїставс засасввест ссоствассак сЕстивисс зо сарвстроаювх зсренаскке такт есЕвс евкіссвата сазневнсан «зе зво
Кисвкарвна ссвеанстяво сержсеже 327 «2їах їй «Ах ЗХ «13 ДНК сива» Штучна восліднність «аж «ай» Сичтевтичний олігонуютотид «чай» 14 сВЕЖІретво грЕжрсаміс ТвКНтстдак ттравивальс піжневссже актщазвКхї 5
Ксстрсапри сіксівнвій савіїсаєт ароквіїєста єсаветюрекх дсраєввксє 125 ссіжизсазш вЕссІваній ваксевкаіки ассявсаєса всегікншав сесавесів. ЗО всссвВеЕасВ ссдкЗЕеВсК ВЕК тескереаєа секс сосках. 255 сівсвваєса сени ствза веаствноває асішксВк вітаєтиївс засакзикаї Зав кЕжНасетЕЕ кежнраніса фскссавває паесбасвноа бревсвЕскЕ вкВсеВсквЕ зе асстунко кевжккссс З ЗК «дах ЗУ «8131: 33
Феаїй: ДНК к3і3х фтучна посліду сть «од «гай» Синтетичний овігонуклевтий хава» 35 свАКствТни тиасксВавоо всестісвибВ свинка ссвенІаниВ квісвссаке 53
УКТКЕТЖСВ кЕЗВЖКВЕСКс саасвтсвЕК авКааКссте таазстврІй севИиасдате 328 схавназснк сессствавкЕ селах зееваєваксс зренесскіїс вевежксскї зна кассвайтст стврстссаа втісівнсовасс тезвестссс свЕосаккаа фкрасессаВ Аа хскнавиВіК засіяні ка КЕзскиївсв вІакриваї всвдествав таассді сив зве
ЕМИТТЄВВсЕ вЗвоБассза всЕвассвКє Кіа 333 а 283» 1951 бецдуейпся 1355ї88 «зах 15 «З3іх ЗВО «ай дик «213х Щтучна послідовність «их «23 бичтетечний олігенвуклеотий «кавах ЗЕ сзаБХвсВис среквсавЕк їКврЕсінав кедазраввс сКЕВЕАкСсЄ вЕтваєсвдто а
Жссжвсавив СКтссврвіа сетсстсвкї аваткаксск кеЗВссевАЄ вовасанисх 8 сствраазви вассінавік касі ссідвасвів заратдесяа засадтстає 185 всасвЕазрї сссзвинсан авісавсств асскзвиасая свістаєана яасндслтеє АВ зідкзЕссра всарествак КІсікзекає всЕнвеснОвх асізжтрЕнє засавеаКЕе зав тасхоксвіа звакіннвеи аавіноакк: квсїВсствБа Весариваає сскнвксасо З вВіжссесЕоа ща «ква» 37 їі» А «332 ДНК «т33» йтузна послідовність
Фей» «22» СИНТЕТИЧНИЙ слігонуклвотиА ема» 37 сарествтвв траистсакес есаїсиесс стросскрсаї стеЕсвеевва саровесеє ва азмиасківкс кресввЕкса квесвсксвва васаакткав всїнакакся возеаавска 122 якиаснрекс перавсвесь вакметакрва зиск сроввантви виксссвтха ува звісно всзневеис вира савав КОТ а свиссвІан сствоаВесї га назняттсів савсітаїха ствісктасав сві лесстюссеє ВЕС СВЕ зЗ5а вежквссазве свквааксав а 323 ка» ЗВ ки: 88 хз ДЕК «3» Штучна послідовністі «ВО «ВаЙх бивтеатичняй опігонуклетугий «НУ І квант Есаве ТЕНЕвКавкс ФфКеЕККІдас КІдазвраврс сткеЕКоскє аріквнавіє Ба а ВУ 31851 бецдцелсв 351 Е
Жтсетвсаввв сетствквіа сактхтжсаєк арікастіта ффсВсХвЕВї вевасвниес І1-а ссіврзсивк весгідарік рабресраєа вста сств вінетввтад сссніссїає ІйВ всассвЕсарі сеспрвнсвк зсхожесаке ассдаскаса «виссовсовас свои тсхае 28 зсвкасстко віщасстває їМстіазврає крос евЕ вікзехис вавиваквсс За квосскїїсса Єівввасває секосіїщає Морткренсс авЕнванкосї вЕжсвеснЕс зей
Жхсеспсявсва векхсоалевк За «дій» 38 «а3х сх3а» ДНК «5135 Штучяз послідовність «аййх «3й3х димтетичний олітовуклеотид кадах З «анитвсанс ЗБиїрсавкс тррееоасне нтрИкссаве серЕняЕВІЄ сстеакЗеке Ба
Тестдтвсав свістнраєт сассстсвиї втвсанВсв збсаствних ссвссопивех Ії2а сЕЗЕЖСВЯКЕ ВЕСТКрОЕКЕ ВЕТВрОЗрЕК віатрквАати ЯТЕщНИТсКвВя зе астає 8 яЕаластств ТЕВадКВссК са созїс фосвесваса азбіссвекза хкасвіквіає зав «стрсдевіяз асвроствав сврісрЯсиВс всвроавівх аг ТЕжис макзвасвКа за ахжесжвасс ствазсреки кряссасвве вессікрасх сс сся веКЗасссти БІ
Кк сксвієк сктса Х75 «аівх 25 «23 З «в1йх ДНК «213» Штучва послідсовніксть ххх «ДЕ)Х КВмуєТИЧчНиЙ ОЛЯ ОВпухнвоТид «ау Я саквсквівЕ фбкзстжвеКт кросабсскосс севоТврсак ссреввЕлва севЗвУсВо ща зссасктвох нквсоввиса язвсвікавсо зестбахеїха зсівніаєса всаревссв 120
Кррасвассс стапретест вактїасрек зовіссавтї ТрезаавівЕ вЕтоссатса 185 авЕКТсанткЕ всектвкВа сдкнасиввах тксастстка ссаксансви ствсвВаскї М канатів сзеасаїасіа стетсоаасаю зКіїасовЕе Жфсстскває ЩЕТскреєва ЗО а заіУ ЛОБІ працюпсв БУЄ кивазссазка срвзазксав ас ла хів 73 хіх КЕ «ІЙ ДНК «І3з Штузна послідовність хеВх «й23х КинтетеЗний опігсовуклесєтид «вах г саврішсвЕс івБКЕсКеввс БКвЕЕсісзв КІВавваввс стреКЕсстє кюТкзакніє а есгжродврс сскетКиаЕК сабсстісавс авсавіжреа гсВерУкевЕКе ксвапаКвеє 28 «ксткрасвав вЕстїдвети васвинедис Віск ажва все аах сконаВеостах ї88 вЕсВОКВСВ їссЗзЕявояк зКЕсасване ессксднвсв вакстеасвав своввієє ВОЗІ тідезЕКува ссараєствак зссінвоввс ведеесижек ВК СОКвтвХ веБВеВКИЄ 38 веврещніва стссвасвсв ЗККшкоБККВ свекесквех фКрасеіст» дрвссвнкова 368 зеслішкеса сскЕСжсетК зяї «еій» З «3115 335 «5125 ДК «813» нУчна поглідовність ха «23» Сквтетичний зліковмуклеотни «аа» жа сававсжкрікр тевестсадеа кесстсастк зетесЕкс сзвКаравво веКоаесеете У зе ссзасвикив зросрїсвос закраєтасє асссавахів вріжссврове Іа егвасстЕЕнсо звосвсссав явсастнВі: зесзЕсрсаа воазсваяеь стсстядасе 3і9а пствкескиї ЖексВиЕсТс сстссттвЕВ ввсвазроїд ссестрасакт вісвзвеївеВ ав пвЕссіваив зсвавЕсЕва віахтастяи стввкстаєт ства ТЕтИВеВе За каЕснларнва сс скас свт 325 «03 5 «32 АБУ «ЗХ» ДЕК «Ай» Штучна послідавні т ках»
з зах ЦЗО) бедуевсе її «ЖВУх Кинмтотканкя Зніговуклестид «аа 73 гакктесвес ішксвеврик: еВ іКз БІдазвавЕс ссревкостє зЕжкначнвЕє В ссстюсавва скКсїнрата Басів кзсавсістя тТасасєіввиї онасенися їз кствврасвак вЕстКевети ввевивесив йсвасеста зсвстеВкАе стсваостсх 388 рессвнавев" ібсзвкрсар ВКжсассасв вассаввиаса сктссаєсвВе сасаазостає «38 зідквессве рсевікквак зістивовас асвкниссніех вкбзскоКе: яававанняє Зо васквтеніа рідвеквіса сЕКТКввщих свЕшраєкос іврісассве сессієсв зу «Що ХА «43 ОХ «8352 ДИК «ті35» ЩШЩуузна послідовність ха» «323» Синтетичний сліговуклеотид «Зав ой саМатЕвТКе ТЕВстоаККс ксептестес сТКЕТквсаЄ скЕтаАвава саквдксане ов жкквскощсс ккроесзвков каЕевіквЕс все аз асідніаєса всаважнеєв зга ввизазвссс севансієсії кВіссзмвех всабссввЕ ТеваквЕКеВ вЕЕсскВісВ зча азниІксовхе всвекавакс коеевсакаї стевспевсв ссвкеваєве схвсавесе лай
БазвеіжкКи савекіасів ківксвасве веж асввев сесскевнає віксриссаай зва
Жваавссаане тЕраєвієви а З «238» 35 «й ЗБЕ «ЯКІ» ДЕ «533» ВеУЧНА. ОСАД «0» «Ей бантетичний блігонуклевтид «запах ях «чзкитдсваєс фНЕХвсввЕх КЕЕТссТасв ствихвеває ссвсасавас сетер ве ассЕБсВСЕТ ВЕК КЕВЕКЕ стек ісврі зіхВетЕван ТкЕрЕТиіКве сінях 158 савспсссве кзаанесссї кезніБноС веасссвВУКх есівирасеа Зм све 188
Класанкссаї стстезвакав сзЕиетовст айсгассвавр зсассіссва вазвссввети а
ДТссЕтасаа фвзссвеєвВь девакосквон весасавске св К февевсанї зав а 8817 33053 бБезшвов ЗБИВ зфастаази водЕВНстає стВідкіІсар вЕстВекІІК засвстиока совка ЗВ
СТЕК зб «зїйх 5 «ТЕХ с7а «ах ДК «ах Штучна послідевність «5хйх «ЗІах бинтетнчний олігонукавотва «авйх хе кеакстсств с жтрваивс вкВсактвах Кір еввІх втавствівЕ стостовве а свасваєнесс савноеаиввє сспогивскк жона зікесасіна кервексбса 355
КЕТІ тсТя зісвотісіє фвпсіссвею Бсфнксався свесстжес жессатстсї ке крвстссазвЕ сікареасвое вЕсіЖВІКаАЄ Квехвсарок сазсвкасвав савсарсаєх 258 «ТЕН ЕсК вокианнаає свввоївакс вісста 276 «еїбх 8 «ай МК «5322 ДНК «3» Штучна послідовність «Ка» сйй3» Сивтетичняий олібонуклевтид «4052 77 какніскакє фкріасвекс трЕжистивЕ пінзавВвадс сбрЕниссіс веЕкиваните 5 ісктЕсвоави тссррака сзосиїсаст вазстаєссвз ТроасстеЕкеЕ вескзсависє 328 ссірхзазав йесізраикв зірваний сКбхраєкссти азвакресна васавиеоаєх зва
БсевіІврапях тссавивсве ввісвссаївВ вессоекиася сеїскавнвз сесввестах ва асвдавстнв ктавсстЕЗи ЗЕстраваас всввсснтсї зсбасквсає засавзссав Зо ксстастнєс кстїснвЕнак стастсквва тасвтераєї зсткнаксса двнаапссв БІ ве заз «а3ах я «Ж» 53 хз ДНК хх» тучна песлідсаність «ах 6б а 28317 ЦІ беднелсе фїакїпК «й» сСяктетичний одігануклеотай сказ 88 сВрвієсвис КдЕЇВСоВіс Їднресівар ясвавразво СТКрЕККексІ ВдікваниТе а тсстнсайин сс стлкВск сассттсав: акствевЕїа гсавстквВї ВерасаЕдес 3 ссївевсавр вастевавік ратвекаеко абсакоссіс СВІ тінвіас весзваєстає Зх коасзрасаї єсспрексае зессасваке зссвкрнасв закссовсВаи свозвкстає 248 зсЕКВесква веансствак зіствасвас ворсові я аствссдтнс БаБЕДЕсНС зва сгвЕстакает зсазбінакви таріврікає ак інасх астоведсса вЕвВКосстВ Зав хе зе3 «ах я «аі ЗВ «йї25 ДНК «213» Штучна послідовність «ой «йа32 Скнтатичний оліговуклеотид «аа З саНнірсяво сВНівВсВВКсо знапростряй вівзавзваяс стрянвесес затраанекх ща фесптдеваке стоствракт свдссткаі впдстскиске преаксвкве всквсаваєх аа «ків нсзас десі на КК ВІЧЕ И ВСЕ СВЖЕ севекЕсква кесванк фах 180 визсакзакс бссекиваве прієсвсевік зсявакеаєсв пиісствсава сесвЕсских жеай
ІЗ М КУ : СЕК З акввазктна стввеєсіКав зсссваквас всввекріх вітав вБевварсає ще сЕЕБсссокЕ ВІЗЕКорККВ красевесвє сасввссісї зетасвесвї звесвхкїни хва внсесзавена состввтсве ср екся Ки «їх 35 «а» аа «ді2У ДНК «813» Штучна послідовність ас: «йа5т Синтетичний слігонуклевтидй «айй» ЗВ сВЕВКяссНс брати сантс свеноввиВо ЗБврЕсссве ссвевВЕВІс сссранясхв Ба
ХескрїасвеЕ «кскессвкаех сассвкакс азстаївнса сдарстЕвКЕ схЕеевВасх 125 скендванивВ квосрЕВИСН вЕСсіКкавсу астантаєте віарівнізи часа скве ідо з з 1305 Бебик МІК псвластіся фрракнвсср вібсвесвьк фїссреарасв збКккенова сВсВссВКях 24 стінсазвівз зсаввссівве прїсваоамас всдросвтек астастаївс веванвсс Зв фЕжсвеквасВ астїтраєста сівррЕЄКаК ВкаасееКне СстзсквКее сЕса Ба хі таз 53 х12» ДНК та щтучнів песлідоевість хЕ8О» хлйЗ» оСантетичний олігонуклеютид омах З сарескруки срасксанеє ссввссасе ссДІсТіжНЬ стсезвиДдеа авЕЯскВеє ЗО сессії дсз крвсквеса ознквкквся зісівсїКав єствакатсв асакваасся 128 вЕсспрЕекс сеанс еет гас ТНевеї шов ввиссассКВ свієссаро і858 зирчксеккв сані фдирасаває сссЗссокса сві адкав сстаВавоє з; казнаїккто свв фаїа «ствісвисви свтввсовзВсї рЕсавкасве КХТЕвЕссаК зва ваБзссавас сТреарахсваЗ а ЗА. «їх 35 «ах За «2 ДНК «13: Цтучка послІДОВНІСТЬ
Фо «223» Хинтетвчний свігонукавотид «вк» 3 «снЕдіясаве ТЕисвсаВі: ТевБпЕанає стБетнсане Сівщеавиіє сссдеасяске ща зжетКтвсвн сот ствЕаїВ сасстткрає абібакрося трозсткевх спрЕсВиКе Я) скожкиаавв коїтрЕаків вЕХсвсВвеЄ ЗКіакстква відні скаквехВЕ 35 нсІрЕастекв фресок вірсассакк Тксзкввасв зоевисаарав стксскВКаЕ аа сідсвазкта зізрістрав абсткваває асЕвосткат вібяаєкиве анапреее зва хБЯСтсврЕК зЕкізЕсвКи МівскеТасв кзскіІстрЕк сховане кокевсвех 35 вІсжссека 389 казах 3 «кІх ЗБ а 917 3385 беднепсй ГЗК киїйх ДВК «2» учня поспудевнікте «лай «253 Суктетичния опігонуклеотид «ОйУ 33 сваксїівтве твасіспреє ісхорсквев ссокрес сфнаасанеє здтсясоаКе ща
Жссжисаств наассансак фкасесівнО звЕсатавеск атдїссесте втассавсва 128 твсссадиса заепосксо асісвтанії саїневнсВ скВВЕеКВоК сІЄсВЕКВЕКе їжи сстивВЕсвсВ КС ТНЕскк свавсстнЕх васасвфнссє ссстувссвх стктвивеке аа «акисікавк візитна ТівЕкастрс всстсетаїи свишсвасяа сазвеатвко зва
Тіскразаків реассеввВї снсовіоета за «ій» 34 «831 ОМ? «38 ДНК «233» Штучна послідовність кий» «й?» Синтетичний одігонуклеутна «дяй» 8 савЕтнсавс тррїнсаксс свжЗвстврак втраанзаксе сішкевесіє зварні а
Текіжсваки стократ сеядестіває вкстакриез ссзисівввУ вскВсвевес 12 сетвкВсакю КЕсТкранів пвірвеовви віхзнсвоке зсзвівекає сзсазаєтає ї8а невсакааес кссзнршсВв ввоусасевун ассасарасв сакссаєван свсарсствх зо зібЕВасТтиа крайсствав втсївзсвас зсдессвквх абкаствїве Евдассасте За хЕБиРЕВЗАХ ХКЕВстаївВе Закстнивио свавнвассс свЕссвссвІ Єссеса 357 «ій 35 «33 ЗІ «4425 ДЕК «2335 Штучна послідовність «ах «Ах Сязтетичний злігомуклеттив «зах 35 хвЕаксівтив свастсаві: фесадноаес СЕС Х стссавнева авдаресасо Ба ктсісіхиса ввдксаніса дамідєтаре провевтаст савссжевив ссаксаяа х278 кекряссаве сСтссоНКВеХ ссфсвесжає весисаксса завовиесне кеВеВтсеса хва а ВТ? 31853 Бедюеася БАКА квсарвітса нідксзиквя ВЕСТЕкеаєв васєссастє фсвосвісєви садазстнрвав 74 состава її сідсвисота ЇкЗететсав сів НсВ соски Тсс ВеСпЕТсвЕх ЗВ свевиваєвс касквиарик фай ЗИ «йїа» 35 «У» «иїйУ ДНК «йї3» Штучна послідовність «ВЕВх «883» бунтетичний оліговуклевзтид «а8йх За «авнівсавс фвиїорсавіс зврввнанно вірніссавес схвЕКВавОсе соецмадасте ва сесккжтвсав ссКетриаєе свссттсаих Вася ка СЕКТ Е секс за «сІанасваве сВсівравсн КРІднсеВіК піетсасати асвшаввова Свезтастає ї8й дсанаскссв брзавнесся асїсассвсс сссвдарасв актІссвавза свсрвітнтає 78а стрсаввіве зсвЕсствав сротвавиас всристетКе аіастдтвс вакнфсвеоє зва івкиаКЕстЕ сестзкввікс корокавткв такзсараке асбфкіева ктасвескате Ма шасвісівяи кхссавежас «сїквісвес віск соскев за «віях 5 «зії Лк ха» ДЕК «212 шЩтузма послідовність «вах «сх» СекзЕтТичнНий олігонуклеєтид «Ба» ОХ тхВЕЖКІЖХоВ кракксеріє Бссвекитек строк кс» пессідвзва дкодеоекке 55 віхксстнсовз коса вадсекески скідкоаєта мабвсавста БІбКиВіІЕЕ вч са:стдсвда вассавнисе зЕсіссвВсЗв стіссхрахся аікжеввнЕКс гзафсрЕКке їха
Тссрексє стквсаюви садові мрайсансса саракстєве ЗВстезааако 2ча звсаревтви езкистнявявз ТріїкоЕЖКї сзкжЕаскрса ТЕсвадевиї повавскесх БІОГ зссассіКсе косаавЕвас ЗоВаСТВНя ЗБК 35 «зах ЗВ «Жіїх ЗУ а 017 31951 беднейсе Бізе хиі2У ДНК яхі35 тузна послідовність «АВ» «ШИ3х бинтетичний свігонуклестий «ОВУ Зх саретвсвдс срБаднацтс ТрЕТсстасв скінвіжааах спвсвкванво сопевовоке 5а зкскнісосї фбсїввВЕ: сбсасісвсс зскветнвак гквотврікви Сіда сКЕ 128 савсстссаю дазвЕнсскх Визв стк всастісвікЕ зсЇщкваква свабванвоне у5е тасввсссаї спсікзвшнв сві свсос вісвосвавв зсвссессва зайковиркв ха шТОсТтвссв ЖкЗесВвасаї краксствіК васвесвсга саїзіїаств Тревсвсее хво а:свасбасх актракзекар товестакеви вЕиВессікИ ЗБЕ КоЄ дк хе савренвося ТЕрфісвосех сфсстсв 387 яв ща тах 85 кааиз ДВК ст Щтузма послідовність й» ст2а» Синтетичний олігануклевтияд хара» 39 сидакідіни твасксвиїї фссврасісс ссввссиквї СІТЖЕвЕсаа деавдвосаєсс 65 зксазсівсв звіссавсса павхВттета тассастсса зсавідаеває стека в кЕвтасслво зрасвосзви всзвеєЄтеЄк апссбиоскса КВОТ квЕє акстксскиа 385 квакссякиа тесстрассв вкісантве: зеякеКствВ пЕВсаКаАТКЕ Сас ТО аісвдознсс Крсаввеїва зкаїтвтоЕсв ВЕТКактасї втсавеавка КЕВкаркасЕ За секс ВсЇ ЇтррссваЕи вЗсезвВвехА ява снва 33 «ія: За сеї ЗВІ «пи» ДНК «лах втучна послідовність «и «У» Синтятичвий олігонуклестВа «айах 4 сакрідсвие СКК свВЕтс шеноссавна сфірвіваашс «ТКовВидеі СКОБ З всствсавів їсксаарівв скссстсеєрвс врозокавІх ЗКІлессввеи сІБЕВКССВс ї3а а за1У 13063 Беоднюмсю ікіпЕ савссесссв реЗаЕКНАТХ веастВКаєї ЕДЗСТНІСЕ сфбокавков вЕясвостне 158
Квсзаксосвї сестссвкав їсвакісасс рідесвріяк асвсяїссах даассвотЕе АВ тЕССтВаЗНБЕ ЇЕИВСТСЄВЕХ виссросвса ваєрсврети Кстактаєтв сведеватех ха їзЕсїстабв аїрисзвеїви їкасжаскВво сфвзвеквеКЄ Ктрасісств вияви Виа 65 зсссіввІса сертстоско в ЗЕЗ «кіз чу «шщії5 5х?
Фжійз ДЕК «Е13з тузма поклідовнасть
ЗО сах сТй32 Синтеуихний овібпнуклевтид -айох 43 саквсівінк бдастсозвра дессбсастбе астотвїссс савражжрає авхсастеке а ассінсвохі сов В сроавісвсс зиірвТсВвої ацосазмкти все вВесВе ї28 азасєташас зассасссав кроксінаіК їнівавеасав звсавсаввсоВ стоствас 358 сеїквсксВНК Кожсаввстс сстостевви ВЕсачноств ссстдасвск вксарвівта 24 сароствани зсвадосква сів аствос скрекссяс стві сиві сві зав нсвнавЕва ссавдстнає свисстя Зх? «3» 45 «ТЕХ дух «зах ДНК «хі3х бтучна послідов єти хх жк «239 Синтетичний здітовуклаєтид з ви саквікракс Квінке с вок авис ВіднїссаК: сквЕКВЕКОК котЕаКВеКе 5а
Тссівсксав скіскрврасї своЄєсісзвЕ втекацивсв писк ожкеВх: совосвреЕсх ї28 псависасве вдотивавтв потнвссрік акехваси Зівнавстаз ваватвесву 1895 квеквсвссв Кравваксся аімеассвжко тсозивваса втіїпевнрав соска во стЕНаЗисВе засрествак вессвасвах Зоре ТВКог зсхвекріви Вар Зав зтжсствасє сснвасвсвя інаккасеноО крок ствиах зственисса вкваассстВ зав всвссвісю ситеа 375 а лаї? зі19кі бедиенся Бібіпе «щі» 45 «Яї За «Вих ДИК «йї3. Штучна посвідваністе «ах «Й8Уг Синткунчмий саогбонукАЛааТиД, «аа 85 санастківк івастсзики сосвеєкес кінКскксах стртарввиа сасавЕсясе 58 звісасксвск вексазвісв ква касс ЗВЕЖаККЇаа зстрнїасса возданнсся 125 вЕаазаксст свазветесї саїстатасе зсзкєсавжї тдсававкак векеспстеов 188 зЕиїтсався всавтявсса кренасанаа фісветстса ссвтсввХЕВ ЕСсдсВасеХ Ва вааракіск сазсаївска сіртсвеєве вевЕївсавЕХ грісссквває дебсвнесвв ЗО гЕпассвавА тТвканатвява ха 382 «гійх 4 «лаз 7 «212» ДВК «тай» Втучна паспудаекет» «ХВ» хХйЗУ Свнтитичний олігонуклеотид «шах яв «авеХосаре КвЕкесаніє ТЕКоенавес МХваквсавс сівксакви сствараске во хесткївсаа ссіствжаі сайїкЕрає каїкаївдеска сррасінвЕї ссврсваксї їх ксарелавив востевиои ввІКісаврнї зксзесівнра зізкідиаза сатанссках 188 вевнвухсїв свазиБисовВ архвесакс Кссзиввака зсвссзаваав сксссівтах 24ча їтвноайсва ясерієсквак аксівзевас зосеВссТКВХ атжкасхНтиХ авааватиїх зва тасивфивек застає їкріавівка явткЗетаех вЕЕвссВЕНЕ «все зва аседекко св ЗУ «аб 45 «83їх 337 «2їаУ ДНК «235 Штучна послідовність «ий» ха83» Кинтуетичний ояїговуклеотВд а жаху 3851 Зедиевся їі5іпвЕ «аа 5 «хваксівіре зрасісввкс ВкКсвефсвлє сівсссовісєв «ссстввава весно В зкстссткса ввтстаніса варссіссте свазрізвів взсвсааста дра ківЕ 158
Ттвсстрсзва зрссвкврох ВЕсіссвсав стссквасеє вксіБнаКх хвакеЕвКНеє тя жесквЕВесс сікасаретк саріднсані квасадиса стат асан 348 здсгрекснЕ зВЕВсіКарка ТЕКСТ НЕВЕКІ ЖВткхвогисх фЖсвавстєї зсвавексеєї з3а8 ксвасвіжсв вссавкррає сазеесвиза аКавай Зх? «їх 6 «2 ма «Из ДНК «33 Штучна послідовність «ВІЙ «2235 Синтатизмий оліговнукдвотид «ад» пе сени трсавс тТЕНТВсВККс КЕЕБНстрваК КтнВакваки ссвЕкісстс вЕжваниккс в сспсівсвавн стуствваная свосстсвит їастаснвав тсасКТвВиК ВекВоКрЕКе та ссжАвасадв ВЕсттвакте кЗіКедасяк атесвусосте Всїтжвствс васвакефее зна сзсайзант їссавивсзв зсгсвссвія зссвовеаав азіссвонве саствнктає реа акррансвсв сахжкеасвії миасттявах якестжвЕас ссварваєвое вЕссвквеас зва тастжкрски вквЕесаесу»в КЕ КесКрв вагісквЕсв астТасвеЕеЕ вас за виссававиВ сестниїсво секс са зва «2185 43 «1ї» За «иї2» ДЕК «13» еучна воспідавністіх
ЕФ
«23» сКимт'єжичний олігонуклаотад «ах 4 санеЕсрвішк фкзсковзвес восстсаксв сствЕднссп содевсакав ВЕТсяССяКО а тТекжвеаски везвсввоКс свесвіско: веврвієати асвбаваєтв віассвисяе їжи сет2свеЕЗа сваоссссва всїсстсвіє фасркааса зоажсвисс стсавневтє Іа скївнссявІ ЖсТЄсКрККЇс салехствЕс абсетоввсті ссостввсКкак сасівнреке АВ савеоіваив есварества срастаствєс серісстаке зсавсакссж вавтквЕ ев За з 2817 Зі бедуєпса Бір кЕВЕЕСТЇВсВ КЗАСтЕЖКаС КЕЮЕЖКСВОК ЩККОКВ 33а хв3а» ай кіз Ва ка» ДНЕ «835» Штучні пеаслідоквійть хаща» «ййЗ» шввтТетичНний плігонукавотно каша» як савЕКНсаве КрЕКЕсакіс вЕесссавка стоБТиеаве сіксвваває себВККОСТВ ве апвіксвске КЕ серксвра сіссвсеях актзказикї Кскастновя стввакссве 128 сврессссар красне весчрікрах веизантаккї Зіка Ев вас етає і859 касавросгву «ссссвзнан бокавтсаєс зівтссскаи вовевкссвза вавассаве 748 тесстданрс ване тТсТст взссвссася шасасвЕнТК стае тасКи ТесвсЕЕВсЕ зва ссазвсствсо вЕзиКсстїс сзвотвовса ВІбсВсТвеЕ воКісзаїсХ СоВЕЕЕССКЕ а ндевссскнВ ЇсасовЕстс ста 384 хх 4 «Віз 554 «ях ДЕК «йї3х Штучна послідовність «бУЙх «ЖА3и Суинтетизний зафеовнуклестид «вах ще саке ЗЕс ТЕКОВсЗЕКс Ткваксїдвв сівба сТМЕВКсеСКС сеткваквї є В їсоствсавши сКссТввіса саїакжтасх ааасаКнека зсавтсвнсї яквЕнсанасє аа спхдкнзкаси ВЕсЇКНаККе БЕТКИВаКЕВ яТбсаВСВсВХ асазсвайва сасвавстах зи кзЕзезакс кссакввсвв звісвссЕТв веспвсвватв свіссаскак сапвесскає за зсвезнстка низассінвіа вісіваєваєс всквссвкаї астісівсво вакзкавае зва
ТЕЕКЕсВсвЕ ЗЕІНІаКеТа ствАоЕскВи ВиаассеКАВ ПОЗОВ сКИВ ЗА «жівх 5 «їх Зав «242 ДНК «їі3з йучна послідовність «28»
В 2917 аб. Беочепсе Бі9ї1пр «аа» СЕВвтТетичний злігонуклестиу чаш Уй сарвсїріни кеЕЗстсанив всоссісВсїя зсівініссс савнавирвас веб асесе й зссініїсти ссаасзехко арсарісасє знівайтеасє зессваавуе вітссарсар у2а завсстевас зввсвсстве вроастнаЕх звівктрсаз нсожнкаНаее сісти аср ІВй сктвсссвнЕ Ккїсарвеїс сессії крок вихвеанасто сксхивеВ весЗВКЕВеВ хай садсстраки зпранвстиа ніассвствс стеВістаєє ствВсраов росте За «іа Б «аТїМ 331 «Зах ДИ ки» штучна послідовність «лах «53» Синтетичний оліговуклвотид «ча» щі
Кз жеи жквасксавосс ТЕ ссЕЕ етвритсте сІВКВовНеЄ даксарсате 585 кссБнсакте кВассансви івасвіКенЕ всітасааст Вісі сстк деассвасВа Не с«всскзжкса звиксссква зсксвтвате саїдесЕжсд стантіснрвеєс сксаврдає 185
Уктнассниї кстсфрніс сайрістрЕс аасасвиест сесжрассат стсткрроте ХВ саржсіване зсвзвЕссва сіастаківс дисісзвтаєв ссаксваєсвї стодссвекї 388
Косвнсвкев крассавано вассвиоки а У «1845 52 «йЯзїх 359 «а3їх НК «МІ» Штучна посзідевність «8282 -йй3» Синтетизний олісовуквеотид хви 3 сані СКБІКсяВКо КроБКстЕВО сфваававво стводикоке арена 58 тектвсвани Зк скврвасз свсєктїсвса заксамессів тивактввиї неввсанясхо ща сегдивсВазе висКхваВто кзїкрвасви зисваєвссв зресквеква сожвасєтає їж кессВеаКсї ссасвекаов ВЕКТдЕсіКе тесктнвасв соїствисви весрЕсиий 24а сквсавахкв ковккстана вЕссвавваєс астдссаткЕ зІбаствтвє рававвівар ї88 тагзатнвІт зсЕвЕКсеВк зЕновкиіКІ сЕІВКЕТСЕ Єікзсваскх севоветаєе хБо а ау ЗВО бБецзцртое ГУ5Кпе. васяїстишв дсгаавежає ссїднісвос вістесков ча «185 53 «ах ПІВ «хійх БІЛОК «х13з Штучна послідовність сайУх СМмНижетиучнай ЗегТИД «а ЖІ піп уФі БІЙ Кзи ма бія беб в31у йТа ін УВІ Бу ух БгРо б дів
ХЕ 5 318 ї5
Жабо уаі Муз УВі Хоб Сук бух АІа ет бі Туб бек бве ТР бак Тує
ХО 5 Кг,
ХУ її 5ее Тер омаі дер біл Аа бро віу віп йТу ва 036 тр Мех
Зх за ЧЕ 51 ТРа ів баб Тег туго Куб Бі тує ТВрРОбІа Туб Аів бій Ба бве ща 55 Ба віп обі дев оУаії Те З16 їйк ТВе оАхо Те оБго Аз ТК ОУВе мМа3 тує 73 75 ща
Мак біз ес дей ав зов др боб Ав Ар оте діа ай Те Туб Су й за ве дів Аг чні бу бег ім ТВйб о О3уУ Ту РВЕ тує Тує ТуБ Тує Тує З3у ї8а їй: їе
Важ о Адкв УВІ тТеробіу зіб З1у ТНК обец о маф Тв Уві ек бек . 315 КК. ї25 квійах А «Юлі «жа» БІЛОК «ЕКМУХ ЩщтТучва поеслідевизкткх
ТО тайУх Синтетичний пипз'яд «Арх ЧА а 3517 БІОБІ Зедуепсе Кір
Зіпб аАЗа Мві маїі Те дів Бко ргро баг Уупі бЗег БІу діа го Біх ів 1 5 18 ї5
Агро уві те її Щег осСез Твб біу баб оЗеб Боб Аба тів біу іа др рас, 25 за
Ту ази ак ніх Тс тТук Бій бец фев РКО біу Тр Аіа РРО Буз тен 35 до 45 іжер Т1е Тує і А«п о Твг Ай Арк без бе о БІ1у мві Бека Ачо Абе Бл я 55 во
Богові Беб бує бе о Біу ївеб о 5еє Дів баб вом вів фе Те Біу веб
БЕ 7й 75 о вів діа зіз Абробіз Азв Ахр тує Тук буз вій Жеб Туг аеро щеє 566 за Зк їви Баг оліз зеб ові Рез Бі Бім бі Твгб бух без Твб Уві гву ї8а 185 їз «ах 55 «ах 335 «їй БЛОК «2155 Цтузма поспцювність «Тай «733 Синувтнчний пептид, «ах Б
Фа мі Бл оїка Уді бій беє О1у бер Бім феб бук фу» Бко 51 діва 1 5 1а 15
Жак Мі ух Уві 5ег Сук іму вів бак о Біу Туг Чер РНа тає Баг оїує за 15 за ем Щ12 А Те Уі АР БІВ АЇз Бре (іу бів БІ Бго о б3в тб Мох
ДА де НЯ
ЩіУ Тев Ті др оїВе Ази те біб дев РКО ТвВе тує дів дій Аза рве ха Мк КЗ
Аіз б3іу Ага Ре уві влйе 5еб ін др Тйе баб о маф тик Те дів Тут 5 КЗ Ук ва а 23815 1306 Хедмепсе Гї5ТЇ ів бів біз жЖеє бег іже ких Абе Чіу Акр о ТНе Аза узі Туб о Тук Сух ж за 25 діа Те отує ТуРр уві АБр ів їв оіу Чегб Тук АгЕ Яіп Ар оТує Тук зва 185 іт біу МаеЖ Азов уаі Тер п1у Ах
З
«ій» Вб «м А «2» БІД «л13У тучви паслідавніктіх ха» «Ий3» бимтетичний певтид «53» 55 піп беб маі Бен Те Бій бро Бео бер Аїв ее «Чіу Те рго БіУу Чій з 5 їв їх декоуаї ТР Ої1і2 бак бух баб З1у О3у бек обоє Аа хів біу Зоб Дей за 35 за га Маї Ази Тео Туб бій Меф чаї Кго 515 ТВе дів Бго туз фен іву хе за 45 іо тує ТК АВ да Бі дгЕ Без бек обу Уді Рез Авройев бе Хек що ще їй іу Чер фу ба о діу Тве баб віз ЗР ївм дій 16 Ах Біу дев 033 ах та ув зе
Заг обі) ар Бім Аа Акротуб Тук бує Аза УВ1і Ткр обов Аво Хек ге як за ск
Щог ЗіУ дгк тер очаі Бе біб Біу шіу їйб їв маї ТР оУуді сви ї8й 385 зе «Ах 57 «Зх ЗУ сід БІЙ «вах цітузнае песлігність т 28317 31065) бедиюмев МІЗКІВ «и» «225У Сивтетичний пептид «ах 5У
Зі» мзі біай ісец УМІ Бій йеє діу дій біб маї суз уз Ре Щіу діз ї 5 ії 5
Хек Ма) Аги Уві бев Пух іує Аїй Бе біу Туб ТВ о БВе Твб о бег тує 38 35 Б (1у Хі лег о Жгр Уві дгЕ біб Аїз вро біу щів Б1у Кем ові тер Меї ай 45
Щіу Тев Тів бек оїйе Тут Дхп бі ар Їй Ах Ту Аза біб бух ВВЕ кВ ще Ба іп бін йгд Мві їй без те Ве Бій Те бек їве Жве Тйб Аза тує ка 7 75 що
Вес піз фе» Аг АгЖ сен Абе ойек Ав др Тв Віа хаіф Туб Туб бук за 95
Аіз Ага бар вва бів Ве рго Біу в5ра о Сує бег 01у щу Беб Сух Тує 158 155 Тї5 егойгв Ре їі Туб бів нії Абе Ав Ме Азв о маї Тер О3у ніх іу
І в ї35
Чи ке май їМг оупі бок обек Дів Яег 158 ї55 «8135 58 «11 318 «40 БЕЖ «Ві5з Штучна послідоввість «РІ х «ай» Сизтетичний певтид «а» 55 зів Аза ак уві Те Бій бро без бег Мві ве дід Афз БРо БІТу сів 3 5 18 т в Ода 18 бедоєепов ісівв іу« чаї ТВК ї118 Бег? Суб бебобіу беб щегк бе Аа їЇЗе Біу Ам НІЄ
Тугє маф баг їв Тубє Щів НіЗ во рБо у ТВ Афа Беб їуз ве їву
Ка 36 35
Ї16є Тут вза дп Туб фіух зБи Бра баб маї ХТО Бр дер Абе вве Бе
Кг УЗ а дів бвгорух бег бЗіу дів Бе о біа їйб це) БІу ТБ Її Б1у Сем «й тА Ух яв
ТВе Біу 83р ій Аза Ахротує Туб бух б3у ТВе тео Ар о бек Бек Гей жо за Бк загс Аза заз маї Ре Біу біу зіж ТК осувх Кей т Уві щяш
М зву Зо «ій» Ба «а21їх 355 ха» БІЛЕ «135 Штучна послідовність «жах сеаУ» Сентетичний пептид сих Ж цін маї бів фе) мві Зіб баб Зі Бго Бім вн уні ух ри Заг АФу)
І х ї15 то
Твк іже одер орео тТве суч баб о маї Боб о5ег АВ ІВ Бей дк ек ОодРуУ с ХВ 38
Зак отТук Тук Тер ші Теромві аг цій Ббо Вгообіу іже ЩІУ гец І ще 45
ТРБ ІЗ ВЛуУ ТР оУу бак тує бе Біф Бу ТБ тут Тує Ахв РКО 56
За зу кВ ї«ц бів хаб оАгв оМВі Твгома) бег Мі 05 ТВб ще? Бух йза Мія Во
Щ ККЗ 75 Ес.
Вега ад кКец Аа жег Ма) Тве Аза Аів Авровіа Аіа маф ТУБ Тує но ча п5 а 2817 1105: бзедцеох ОУН Е уз діа Аги Яег оїув РБе тТуб Ахо Б1у бек біу тує Тує Тує без Зеб 185 155 3138
Туе йфе Ахр бек їв пу Щів біу тве обебз Узі ТВ ма) 5ег бек хлів ка каїїх І189 «айв БІЖЖ «3155 Штучна поплідоаністів «ВХ «2335 Синтетачний яеиптвд «аа КИ
З Аїз мзі Уві Та бів бів РКО Зоб дви Твб о Маї Хвг Бгто Ту Ту ї 5 18 15 їнк ах ївВвоїзе Те Су А1а 5ов Хеб Тве о БІУ Від Маї твгб бек бід а я за
Ні тує бго Ап тер бле бів ціб іуб ББо біу ів реа вго Аг АЗв 3 - 45 їй її Ту бер тк Ар о аза букс нів ей гр Тве Рео АїВ дек вве о
ЗегоЗім Бекон ін БІу Мі уз Аїв Аза ву ТНБ оієв Зек АБО МВ ве та Б 88
Щів без ЗІ)» аБроБІв Аїа АБротТує Туб бух бе фе) Ні ойе 4іу щу
ЗУ за а
Уві маії мВі Бе бі» сіу ЯІЇу ТВК гук гея Те МВІ ву 38 ї155 «лаз к2І35 15 «кій» БІЛОЮ «13Ую цтучна пуслідовність «а аа Синтетичний пехтад а св; здівжь беаценся БІЖИ «зви «ії іа Уа ів ієз мМаі біап бег 01 щу Біу Маі чні БМ бго о1у Аг 3 5 15 ї5
Мет іен Абе їв о БеБ бує від Уву бек оБіу КБе Таб рве 5? деп тує а їв За дів МеХ ЩІ5 тро о Уаф Аби бій АЗа Рго іу уз 51іу івцп АЗОВ тер уві
АВ 45 дів узі Її Тгр о Тує Ахробіу Заг йзй бує Тук туго діа Азродек Узі
Б. у 55
Муз Б3Уу ЗгЕй ра тає їі беб АгРЕ Аз ока его огбух Аза ТК ем тук 3 та т хе іжи Бій Уві дзп б5еб вва АброАза віз дер оте іш ма3 Тує Тур бух ча зу
Аїа Акв Біу Аз Туг ві із АБр о Тує Тгр 31 Б БІу То бер Уві з88 55 Уа
Твгочай баб Хе 145 «аї0х 5; «а» За «30» БІЛОЮ «ІЗ» ЩНучна пислідсвиЗк ть «а сИй3У Жинтетичний пептид «АЙ: БЕ вро їзе Ма Меб ТвРобія БР о ВгОо бом бе бе Жег Аза беє Уаі у ї 5 35 до «щроаго Маі їВб ів сег осСу» беж вів бебі Зо хіж беа биБ Тує
З 25 за ім ази тей тує бів бій рух ко Фі їм; Аа го вуз УВІ Мви 1ЇК
Ко 58 45 а 2817 І3061 Зкозелов Х5ТіпЕ їук дї1в ТвВе Жеє ТР овз 030 Аза бі уні РКО ее дер Бе Бек у а Зх Бе «ев пін вве БРу ТиРБодев Ре тТВге офїец ТАБ ОТ1о Тве 5Зег фін) Бій бро
Ге То ТУ ха 51з Ар вве дія Тр тує Ту сує біл бій бек Тує дей Тс о біу тів 85 а ЗЕ
Ро ТвВе вве Бім Бго 53уУ Те бух ме3З дер Щ38 ух та5 385 «2185 53 кеЩїз 498 «ЯЗ БІЛОЮ «тах Штучна послядевність «И2ВУ «йй3» Синтетичний пептид «ай 53 чіп заз іп із Уві Бій 5ег сію дів 51 ма3 їук ух рко бі бак ії 5 ке 5
Хег Узі уз Уві бек Кух (у Аза бек Біу бу Таб бек Зее Те Тук зв 25 за дів Тв Зеб їгромаії Абе іп АЗа Рго Біу ів біу вен бій те Мек їх 38 а5
ТУ б3іу виг Зіе бує заз не дів тТвге Маф Ай тує та їй вуб вне ца 55 ва біл біх Агк бен Те Хіо Тйг Аза АБО біб бвео ЗВ Баг ТР Уві тує 78 75 за
Мої Бім іеч Зжг бе? ме) Ага 5еєб ів Ахроївг віа ай Тук Бне бух 85 за 55 дів Бек ореа ук су 5ае 5ог Меж доп Сук Ту Те Те рве Туб Тук кое 395 ї18
Не Ар БВе трр обі бів біу тів їзиа уаі ТР о УВІ Зевобає
ЩА іа зач з аб1? ії Зедчепсе БІ5ТіпК каш аа хКЩїх ЗИ садах БОК кХ1йУ тучна послідовність «их «ІЗ» Севтетичний пептид хана БЖ
Зіп Аїа маї Уві Тиб бів рго АЇз ек маї Ре бі ВНе бро 51 а
Х В їв 35 ев Ії ТВ отів бЗркобух ТП Я3У ТВе бек 5еб АВ о РВе БІу Тв отук за КХ Б
Аха Тук Уа йег о тїкротТує Біб бів ні Бее біу бій віз Бго Гуго без 3» за 45
Мей Ті Рне Ахромві Зеб да АгроББо беє Сі Уві бек Аза дгя ба
КІЗ. 5 Ба бе" бу бив огуз Хв ім деп Тк Аді ве фе ТР ож бек ФРУ Кеш «5 та 75 5о віз вів Біб Азр сії ліз вер тує ТУ Су. ве обає Тук ТВ Зеб оїу ве За З
БЕБОТВК Бей тує Сіу Б3іу аху ТВк Бук рен Тне Уві зей 39 ще «их 55 ких ЗХ «жах БІДОЮ «2ЩУх Штучна послідовні єть «аЇйх «23» Синтетичний сеЧтгиа «аз Ох бів Уві Бі» зи ма3 бій Беб біу зе осів фей» бух мк рга 01у Аза ї х 18 15
Р М бус УуБі Вже Суз вує ДІ 5Вг о а1у Тук бек Не ТВ бек Туб й ха
Зоя? З30і Зедзенсе КЖККЯИК бее Хі деп Ткр Мі АгРк Чіп дів Бго йіу біп б1у Рго бів бр меж
За 5 сіу тео ожхів Азов о їве Аха Те ові зп ве ТНК тує Ав бів АБро вне за у Оу діз йіу бер Бво маі бе бег мем Ав ТР бек уві Те Твеб А1в Тує 58 78 та за бій ї1їс Зеє 5еб веб фу Аз» ім дер оте Аїз ув) тую Туб Кух як ча 5
Аїв ТВК тує Ту? узі Аброгев терошію его тук вк (ія Авротук Туб ча з 315
Бім Ум Ахв узі Тер Б3у Мі Ту тт офе) Мі Те ОУЗІ баробек ке 3-ха ї75 «21йх 55 «ТЕ ЩО «кита» БІЛОЮ «13» Штучна послід еть «лох «23» бвмігичний пептид «Ох в
Шімй бек узі Уві Те бів бро Бео зЗиб Уві бек Чім Те РРО БУ ся
Х 5 їй їх
Бі Ма) їве 312 бог бує бак ЩІіу О3у ес бе Ах 312 бім Баг Ач а 5 3
Бго Уві два ТероТує бів Меж Уві Бко Біу Таб діва РКО бує еп о їву дб чк їеи Лук ТВ ОолБп дсп БІВ АБ оБКо 5еє щіу Уа1 Бго ар Абв ОБВе бек 5 жк ве
Зім Зег бух бек обіу Тве 5ет Аїв бик рам АЗа те Ап обІу веб Філ 7 Ж ча з хі? ЗБ Заріяпсв ЯКЕ ек БІБ Або біб Аза Айр отує Туб о Сух дід маі ТРр о Абр А его хв 55 За За
Хве ІМ дей Тер оУайі бе БІТу біж БІУ ТВе Ку сео Те оУаК беу і8а їх 118 «а» в «311 15 «лізу БІЛ «1Ух Вмучна послідовність «4205 «323» Синтетичний пптгид «айоз Є? Й бів уві бів бом маЗф Зі бек Біу діа біб У) фу мбу5 вто щу дз ї У 15 иа его уаї уз Уві Зеб Сує бу Уді Бек Зі Ту 115 Бей 5БР бух Ай зе 35 38 те Мві Ні їгроУугі Абе ів Віа го Чіу Гуз БІ фе ій Тер Ме ща з
Зі БІ бок біб АгЕ бів АброБІіу бів Те Уві Туг Аза Щі уз БКе
КІ 55 ви
Вій Біу АЖ БІ Бабофжи ТВеОбім дев т о зек Ї18 пів те дія тує ти т 55 меж дак ке Бе БеР фу ее ве 03 Ачв о їВе лів мах Тук тук су 85 28 ВЕ «за їйгоіж а1у вве тгр за Ме ї1в біу біу Ах Чіу Уві дз тує їй Зв ще
Тер о сіу бій бБіу Твеої2у уві Таб Ма) Бек Зв 315 ЕяКЕні «ах 558 «ЛЕ У ххій» БІЛОК «33» Щучна гослідови іст «их з 281? 13061 Хедценсв Б35ХіНЕ «235 Синтетичний пептид «йдах БВ пів діз мзі Мві Та сів бек оБко бе Заг рев РРО дів баб Маї Щіу ї 5 38 їх
Ар аг оУві БТ їз ТР ОСу5 дгЕ дів баг бій др їжа гад Кей Куй 28 ї5 К3З шва БІУ Тр оТує бів бів ух бро біу бух Аза Рго бі) ака бен Те
Зк за як
Туб БіуУ те его Ахи во ій хор ЗІ Узі Рго Заг Абе Бе беє в) 5а БЕ БА ее піу баб одщіу пе о біц Ре Те Без ке жі бек бе ви се го 55 КК Ух зв
Зі АВ рве Аїз Тв тує Туб Су без бій Мія дов Бев оТує БРо ррга ву За с
Кг бе б1у Агреобіу ТВгогує Уві БІ: Зіе кує ї0о їж «30» 83 ххіз ЗБ ква БЕЛОК «иа» тучна послідовна кох «ЛО «ЙДИ» Синтетичний пептид; «ка 55
Біп Майї ів ів мві бів бек щіу Аіз Зі ді іух фуз Бго Біу дів
З в ї8 15 его Ущі вся Уві Зоб Суб мує із бяк Му Тує Тане БУ ТВе Хеб Тує хо рах за
Ре о Меї Ні Тер Маї ди дій Ата вка бі бів БР веб бів тероМеах ща Зх ліз їі Таб тує вео ові біж Зіу Хек Бро бек їуб Аіз Бго бів вве кВ У о а 5837 31851 бБидуявев ЗІЗКІАЕ
Бій Біу дев йей ТР оМеї їй дхройер ТВе 5ае дів Те ТНе маі Туг
БЕ ЩЕ ві 88
Мат АЗО фею бе Аа Бен ТР ек Бузх Аз тв? дів Мві їх тує Суз що пе
Дів дер бік Аза Ні девоХаг тів О1у Тве Таб оБго о мви дзе 5ве Тер 188 Вк 118
Зіу шів Фіу Тйпгбобви Уві ТвбоМа) бок бек АЗа щеб Бе гух 315 125 Щ25 «фі 78 «21 395 «ваз БІЖЖ «21 штучна послідовність ках «2» Синтетичний пептвд каяа» 78
Щіп Узі бій бец маї дів беб б3іу БІУ двома Уві ів АБ О01у Аг ї 5 за 15 пек ква дгЕ усм его Суз вів Аїа бек фу Ве їве Ре бек Мет Туг хо РЕЯ за
Бім Уві Ні Тер Ма) Ар бій Аза бго фу Бу Біу ее б3в Ткромві 3 БІ) вх
Аа чаї їів Тер Ахп йБр ОІХ бе» уз О1а Лук тує «Ф1у АБО бек мії
В 5 Ба куб Чік дея БНе їНгб її Боб дви Ав дп бос дек Ав о їВе меш Тує ве за їв яв сви бів Мої ал бек ігв Абв Мазі Азв Аза о їВеК АЇя Уві тТуб ме Сух дк За 5 ліз ага би З1іу тій вго АброРРО ЩІ Аби о О1у Апв тує 01 Ш31у ву їва 185 БК з 2817 13051 ЗвБареяко БУКВ дав оту? тРробіу бів оБіу тб оС» мві їв бах баб За 115 іх ї55 «сах иа ЗИ «зай БІЛОК та13з Внучма послідощнасть
АХ
«хоЗа3з синтетичний пойтед «аз 95 бій твкомаї Маї Те бів Ре Рго бве фе Бра ре Аза зак оУві 5іу 1 х їа 15 авроб1і» чаї Таб ті ТНбоСуз АгРЕ Ав Агв о бІЗ Зев Іі йеб бек Туб 7а аз а узі в5й їгроїує ів бі» вух Рг піу їж вів РгО уч їжв о бе 11Е 46 45
Чув ДІ ТР ОЖеаР бас сез БІЙ бек о сіу Уді Вго Зес дгрорНе Бог о1у ще Ук 56 аб ціу туго б1іу ТНе бар Ве те рев ТВ Хів Зеб Ф3Зу ев бів ге
ВЕ а Тк в
Зін дв бе Аїв ТВг оте Ту Сує Фів бів 5еум Туг Бе ре Рго АгЕ 85 що З
ТР оце БІуУ Ли Біу ТВ бує ха) 3 Хе бує їра зЗи5 кій» 73 хе231їз 357
Кай БІДОК «їх Втучна послідовність «бхах «ай3х Сивтетечний пептид кАВах їх ій май Фів бво Уві йій хе? Ф1іУ Аза бів» УВі бує іх Рго Я1У 5еб ія КУ їй ке з ВУ 33551 бездмепся віщі
Зее о мві бух маї бак був ух Бо баг обіу щіу Трб РНе йзхп Аха Ай 78 В КІ біу Їїе бегоТвр Уаі Аг Бій дій Рго Бім шій біу сеч ШЕ тео Ме 35 «З 45
Віу зі 36 жаї бро аа Ва Оу ТИР обо ТКе Туг Б3у ів лев РВе а х В бій біу ден Уві їбг дів ТИР оАЇа АБВ Бі Хег тн беб тТве Уж вне ів бій бец тТвг Агр оде аАсн о Яегб АБО Ахр отв діа Уві тує Ре су»
За за ЗБ дів дев 3у ваги тав о діз Узі Таб орРео Меб ів рей 5ІімМ Кен вій вве ї15а 155 її
ТУк Бре ар оБрйа їср Зі» Абе о біу Те Кеб Уні ве У») 5ес бек 115 125 325 «хі» 73 «ах ЗБ. ке125 БІК «аЩі3х фтучня посліденвість хаеах «Іи3 СивтЕтичний вептид «чаах 755 віп тТве уаїф жеі ТР бів бі реко ек ої Тк омаії Жеб Бго о біу щіу 3 5 ї8 її
Твеомаф тб обо Тв бу ет АЗа еп ощеко зі дів У«і Ве 5Зве Акрв їй 25 а
Туг Тук Бго Ава Тра бле Чі піп бух Без щіу іп 413 Рго АКв олій
З «а 45 мво їла Ту Хек Аін хаб дев Бу вве оЖек Тероїве Веб АїВ Аг ВВЕ а
Маг сім Зекбоїни Бей БІ у ву Дів Афів ем ТЕ ев зве 51У дів ща та Ук Зв а 2017 13063 Яедиепсе БізБівЕ 18 Рго «ії Ар 1 й18 біш Тус Тугб Сух й Маї Туг Зав обі Аа 35 ща 95 пІіу мві зі ВМе 031; бу БІУ ТВгоїу5 Без тре хаз за 35 «іх 75 «хіх 335 «дао БІЛОК кіз Шеучна послідовністе «еВ «ЖЗ3х СинткунчнНий ВейТЯд «ак та піп У бів хв уаї Зій 5ег біу Аза пів Мар ух уз го сіу 812
З 5 18 ЕВ цеб чаї Ку чі Звук Су уз ТИ" 5ве іу Тук Тве Бве ТВе Ахровевй 28 25 за ще уві НІ Тр Уаї Агвобій Аза ге біу ів Б1іу Бк 010 Ткр о МеЖ 35 яа 55
ЗУ АК 11 ва вва АВ ЗВе Біу Маї Жабо же Бе Аза З3В о Кух РВЕ 5а 5 Ба
Вів Бі бге маі Таб Мах Ве о Абе дер Таб Бек 11 его Таб о ТВе тує
БЕ то 25 йо
Мек шій із бе его веи йед бек дер АЗр ТвЄ АЗв о маї Тує Ту Сух ще 55
Адіз АРВ 1: бій аз Азв о бекє бек о 015 Ту Туб їни Тбо Щіу вів Му 3855 118
Ти фе мак Те ух сег бяк 115 «-8ах тк «83112 87
Ві» БІЛОК «215 Щуучма лослідсанясть а 2917 33553 бедуєпсв і5ве «лах «ах бимтеатичний пептид «зах 75 вів її чаї чаї Те бій 5ет го шак о бег обом Ве Аіа бек Уві і 3 5 3 ї5 д5в одск маї Те бів ТВе Су5 дек Аза бер обіва бек оїфв 5еб Те Ту 28 25 За зем Аа Тр о Туб бів Бій бух Бео бі бух іа Бго су їв бею її за 45
Туг дів Аів беб баб ів ів деб обіу Уві Рг бегоагв рве і сію
КЕ ші «а
МегоАгЕ ЗР обіх Тв о Ахр Рів Те Баа Тл діє бек баб ген ців вго ще 7 й ха
Фі Ач о РБо дів тТВе Тут Тує Су» Б3Й іп Зек Тек йгр п га Тгбр
Те Ре біт ій 53іу Твйб їм Маі АБроїв Бук зав 15 «аа У «Елі» 52 кяи БІЛОК клії» Вітучна язслідовиЯ ст» хКиВ» «КЗ» Кимуєтичний пептид «Яивах 7 меча бів Бо о маї іп бес Фіу бео тТвб омеу Маі фу го тає ів ї 5 ї5 15
ТР обем ТВе кец Те Сув ТР ОБНе Зеб йіу Бра баб о сец 58 Хів бе -і1у маї Бі уаї Ф1у тТкр о ї312 кр Бі БРО рго Бім куб Аз без» БІЙ
ЕЗЯ до со з зах ІЗ 5едпепсов Сі5сіпВ
ТР офву Щі іїсц діє Тук о їброазр вази дер огу5 АБЕ ТУг беб ро ща ще Бе іем Куб баг ойга фен ТАГ ОТіе ТВе рух Де Тк Бек біб дев пів Узі 5 та 7У 8
УЗ) Шию їй Мей ТВбоАка Меї Ар Вт Уа) АбротТве дій ТАБ о Тук Те я ча ЗЕ
СУБ Аз НіЗ Жегс Мей Тс фу Яіу (1у Аза 118 Туб віу бій ві тує 398 185 їЕ
РКВе БІМ тує їкр о біу 03В бі Тв беб ж 1258 хіх 7? «і1іх Во «3 ВІДО «8і5» Штучна послідовність «Жах «Я3Ух Синтетичний пептид «чад У
Бго бек бго Дів цем Зм Вб Акр обЗек Яр уві пі Біу тує дя Тук
Кя зу 5 15
Уаїф чек їбв о їук бій Зіа Міб Рро й3іу Куб дів ре мух беац їе Те
Ту дер Мві те Аз одер Бго зек о біу Уаії дек ода дев Не перо дія 35 А За
Бек фуз Ваг діз дви їВК дів ев іец їн їі 5аБ бЗіу сер Бій Дів 5 5 Ба зе Ар ів дів др отук Ту Сус ер обре Тук Тк овак зов 5еб Те
ЗЕ З у В «аб» У «-3іх З «2і3У БЕНОК «213х Штучна послідовність «ЯВИ»
а 2837 1Б35З сЗепцепсв БІ5іВЕ хай» Севтетичний пептид «ща В «ів уві ій ев уві бій б5еб Щіу ліз іш аз бу» Бу рке О3у Аїв ї 5 19 15
Зюе мві бує Узі бег о Сух бух Ма) баб о біу Туєб ТК фев Тк об3о Кв)
Хет Мет Ні їгр Уві Аг ців ЇВ Бго 51 бу Б3іу Бех біо Тв мех ве за Зх
Шіу біу рне 532й рго бі дев О3у Б те ї3о Тук діз ій ух РВЕ та щь Би біп ЩіуУ АгвоУві ТвВе ме Те обБ) Ахр ТР беб йбв Ар о ТвгОАТа Тук
Ба я 75 Бім
Веб бів Кри бе беБ оф; йги бек біч Ар о ївбовівз маї Тук тТук дух хе За 5 ївР Тебе йзротів уаі Туб Туб агРж 5ег а1у бе був 5ет дім Туг Маї 88 185 ет)
Ззв о тук їв о шіу дів Ту тре ви уві «дах 78 «о З «ка» УЛ заІ35 Штучна послідовність «АВ тей3е Синтеувений пептид «виз ТЗ
Ба млі Бій бен усі сів бе» Бі ді Фіз Жві фу бух про зу 5оє
Кі 5 їв 15 хаб маі Суб уз) бек бух бух Аза чек БІ АбБоївг вне Зак бег Тук ха 35 й
МВі Кі Бек їгр Уві дги бів діа Рго З1У ФВ Бім їв 530 Тер) МеХ
В У а Заї7 ї3953 бедценся ВБТУКіпЕ
Віж діж їі Що Бро брм Бра Фіу ТБ АБа б5п тує Аза ів Був Бе
Ж че зіз осі Агк Уа їВК Бе Те АЇа АхВ Бім Бегб Таб бек о Тве АїВа Тук
ВЕ З 5 88
Жес сій їв; бкк бер оіем Ан бег а5В Ахр тег оАзійа Маї Тубє тТук Сух їх за 5 дів АгЕ 03іу діа бів ев тує Ту й» Аве б1у баб Б31у Туб Шія РБе їпа 15 318 дер оту їгв віх віз біу іа івм уві 115 125 «їх 335 таз ВІК «13» Штучна послідоввість хяхОХ ху шивтетичний пептид «ках Ва
Бім май сів оівц ма) О1й бек Щі вро 031; Маіф фу 1уб Рг БІуУ Тве 3 Ч 13 і5 бек Ма) ук Ууйі Чек буз Гуз Азфа Шек О1у Віа бег Ре Уїа Зак баг їй ТУ 35 бів мі Оіє тбр о Уві БЕ о сФія йів Аг» Ту бій дб оіжв пім тТев їв 5 483 45
ЗЛУ Ткроїзів Уві Улі АЗз Беб Ада» й5в ТВР Ап тую Віа бів уз БНе
ТУй У ща бгЕйФ Зіз Авк о Уаі ТР ОЇ1іЄ ТВе АгРБ АБО Мей боб їВе дув ТНК одіа Ту ок та 75 ва
Межі жи ТВ бек ім ду Жег б) АБЕ ТВе він унії тує тує Сук зи Зк з 3917 3363 Бесуваке КЕКС К ліз Аїв біо Ні5 АкЖ баг вро бух боб Біу ЩІу АхроБеє Сух Тук бе ї158 55 уже зво Зук тув вім мех одкромаі їкробім Зп оду ве їву баї ТВе хаі 35 328 У
ЩИКОВаИ
ККЗ
«их Ві «е3іх ЗІ кжІх БІЛОК «213 Штучна пропідевніств «Зах «5ТїУ бичтетичний пептид «тах 81 віп о маі Зіб ев Уві біз 50 Біх Я3У б1у ем Маї рез Брго віу зіу і х За ї5
З фей ся фен яеК су5 Те дій бек ві БВе їв чаї еко Ав тує т З та
Пік Мет беб о їБр Уві АкЕойій Тс рго Біу Бує б3у ївз ша теВ Уєі за Ах
Жак оте 51» За Те 5ев хв" біу Аг о Тве бве тує А1а АзроХек Уві. а 55 а біз Біб Аге Бе Тк зі Заг Б1у Ар ойза беб фух ви Те рве тек та 75 за
БМлаи бів Мет ди Хег фе йгеЕ Уаф м дев ТБ вів маіф Туб їуб Кух 85 За 55 дів вух (ТУ Вгп Бпе Б1іу 231уУ Або бле дн) Тує тро обіу ців ау ве 18 і85 ще ів У Те Уві бак Уве ци «гіах ва «ЗА НУ в зчі17 11863 Яеоаценсюк ІК ТпД «125 БІЛОК «23» тумна песлідонвість хиИВУ хийЗзУ шентитТичНий вет хаб» МХ іп вів уві меЗ Те бів Бе Вго дів ТВк фев баг ів бек вро щу ї 5 за 15 піз Ас Аїз Тг оц бак бух Ав дів бек бів Хе? узі Аза Тв тує го Ку 38 ісч Афе о Тев тТуг бій б) Буб5 бро біу 53іа діа бе Аби о бви бец Ще її ча а
Туг дер діз ЧЕК АБ о бге Аїв ТР ОФ1іу Х1іа Рус дів АгРВ ОББе бег пів 58 55 ка
Зеє біу бак піу Ве азв вВЄ ТВ Бе) ТвВе Хі бек овег рем оєіц рез
БУ В ТБ КЗ
Фіз 85р оБпе КІВ Уві Туб Тує Смх дп За дек 91у Ап Тер обі Тук вх За ких
Таб вне 53іу БІЛ БТУу Те о фує газ 3 13 їі 158 ТЯ ках ма ха Зах «вах БІНОК «81 Штучна песліден сті «22ах «ай» Синтетнччий педтид «ЗОИ» 55 ін Уві Фін без Уві Бі беє бі ЗУ ІуУ вом мар 53 го Бім дгж
ІН 5 3й ка
Баг офжев Тве рем зак Су Аза дів ок біу Рів ТБг о БВе др омай те а ях 38
Аіз Меж Мі Тгр Уа Аге від діа реа (ім вуз 51» ев Фів їкрозаї до 33 а 251 395) бедиенвся Зав 418 біу Ще 5ве тео оджй Зоб оБіу Хеб Уві е1їу Ту АЇЗ бр его мех
ЗВ 55 5
Ку 51у АгЕ РВЕ ТВ ОТів бее КЕ Абе Акп АД Вуз Ахе бик Мемотує 85 та 75 яв кем ові їі дей дек зем АК Аза Я) АтротТвВе дів без Ту Тує Сув ва ЗЕ
Ма фу дів вве тер о РВе щЩіУ ЗМ ев бек обфіу тує О1у Меб Азр Уві здо Зх 318
Тер обЗію бій сі ТЕР ово Маі Те Маї беробее 315 1295 «аі05 Я «Ії ТВ «4?» БІТ «і5 Штучна паслідовність
СО КЯ
«Жа3и СХинтотичнай поцутяд «аб: Я щі Аз Уа Уві їйм осіб рез Ре озек дій бек обі вве обро О3у БІЙ ї З за 15 стевромаі їйБ о їїе его Суб Тк б)1у ТВе ет бек Азр Ууді ЩІУ баб тує 28 25 за ди Тує ма3 5ег Ткротук вів бій мія без Біу вуз дій реа фуз Ми її 435 55
Те їж Ту Аіз Мі Те о Акр Абе Кто бек біу Уві бо са АК Ве 3: 55 ща зак обіу бик вух ек іу йхо Таб дів рт фен ТВг УВІ Зоб ові БЕ 7 х5 ча біп віза іс азр біб дів Ав тує Туг Суд Те Щек Ту Аїд бі ва ве за 5 й 2917 ЗБ Сномевсв БВ деп вуз дав Уві бе О1уУ Тпг обі ТАЄ Бу» Уві Те баз) цес ща за5 315 «їз 85 «їх Щр «їй БІЛОК «213 Штучна послідовність «вах «тах ЖичнтетичнмЯ пезтид «ах 85 ві) маф ів фев уві бів бог оіу ді віц мі був фу Бко 5і1У дів 4 5 3 їх
Зеє чаф Бут Уві Зве осСуз іує ді бек Бір Туб Жвге РО Аа Те Туб а 25 за
Зі Ї1їє баб тро Уві Агв чіп АЗа РРО БіУ бів б1іу фрез пів Тер Меї 48 45 «іУ ТеРрогіє баб Аїа Тук Ап б1іу за ТВе дя тТугб ваза Зо фу Крем «В ща З ій бІУ Ага Ммві тТве Мек Уви ТВ Аз Таб оЗеб ТВ 5еб ТВКОдІВ тУк а а Та ва меж Б); ев оагж баг бер Або Зевс обзор дер Те Аза мв3і Тук бук Сух я а 95 аіз аг го а Тер о б3у іа РА Туг Туг йбр 118 Тв ощу іа біу зав зах І
ТВе без аї Твг о Уві бек ок 345 хай й «віїМ ЗИд «їй» БІК «їм ЩШтучнИ послідовність хи» «3» гбумтетичний пептид «Зах ВЕ а 29517 11983 Кедиейсе Гі5Тіпв зів Аза маї маі ТвР о бій баб о Рге Щіу ТК мед беє ів дюб Бго 51 ї 5 318 І 15 із Ага віз ТВгб без бек Су БВ о Аіз зе о) бек маї деко обаг Б1У а рез за їже бак ойіа Ткротує дій бій Бузх без Фіу бій Аза реа Аєв о фва ев
Зх 4й 45
Із Тук Біу АЗз дес огуз Ага від діа бі т) вго Або АбвОоББа бат
За 5 я 51Їу Бек ві бе ім ТБе Абе бле Так оф) ТВе Бі Явг Абв обом сію
Е та Ух ха
Бко зіз й Ре Аза УВК тує тує См БІВ Бем Ве Аїд ТК ее вва
Мо за з го бро Ве Ф1у бій бу Тве дея бе: бій Ще ув їв 185 «ЩІВУ Я? «Еїіх 155 «їй БУНЖ «йї3х Штузма послідовність «ах «ф33х: Кинтаеувнмий гпвіТд «ащах 7 дів уві біпоіяу Уаї фа его бі Б31у У ма уні бів бро б1іу Ав ї 5 та я
Бек фо: АБЕОіец беб Су» віз Аза бек аіу Ве тВе Ве хе Аби тТук
КІЗ Кз за чзі Мех Фів те Уві Ага оо Аів вго б1у уз Зіу із 013 Бр маії ча «5 ліз Упі ів баб Тук Ав ШЕУ Чегб Аз" ух Туб Ту йІВ й5рохве мні ща Б 88
Муз ОІу аг вве Твг ІЗ) баб Агро дзо аб бек туз ав Їле дев Тук ув 75 ща а зВаи ЗУ) бедценсе КікінЕ ісв сів Мей деп бер озеу дск АЇа бів Або Те дій Маї Тує ТуБ Су ях зе У дів дек баг бі) їгрозіз бЗеб баб о Тук Зі Хеб біб Аа Туб Туб Те ке Зах ів ав те РНе Тук Тує Тугє за Мет Азш о Уаій Тер ПТУ Ре РУ Таб оїви
ЗХ 125 КЗ
Уа Те Уві бек 5 їза «аа» 85 ктІї» 3175 «аз БІЛОК ках» Штучні послідовність «лих «аз семтетичний пептид «ща» НЕ ів Ага мазі маї Те ів бдюе бро вен жаб Кен обро Мах їве бе» щїу і 5 та її
Пій бро дій лег тів бек бух ДРЕ Зег Абп пів его общви ем АК щу
КІ в За її5 Акр о Туг джи Туб кям Азр отр Ту сво БР губ вро бі Бій ай ка ча Зх
Кг; бів ів ем ів Тує баб б)іу бек доб дги Аіз его біу Ма ргбо «а 5 5
Дер АРК РНЕ бек ПУ Жег о О1у Зек діа ТВ о АЖр о ББе Таг іш вух 318 ща та 7З 5
Зег дев омві «із Аіз біз дв о мві «(ж аї Ту тує Суб МЕ 3 Дід 85 що ЗЕ їз «Фіп Те Бге ТвВе Тве Бе бі ій Бі вт дев о феи біз ї3фе бух їі2а за5 Ів воза? 361 бедоєплсов ГАЇ аД «а» Мо «8315 ЗВ кяаез БРЕЛОК «ЕІ дтучна спеслідовніст» «ЛЛВУ хай» Синтетичний пептид; «а58з Во
Вів уві дій іви 01 033 Бек Біу Вес Так оісз Маї їуб Бго Тв» ій ї 5 М 35
Зрг оре тве Сем їТвб о Суз Беб о впе беб о сіу ВАЗ баб сви Таб їде Твг ї8 5 З піу Маф Твг ча) 01У тгр 331 Абе 4 ого го піу фуз АЇа вяе ів
З за я
ТРК о бец діз без біо тус Тр Або джр або Бух дек о Тук бее бує бак ва
Мем гук бек АР Моз Ве їіє Тнб бу» А5р ОТВе бек їв Авп вій маї ак З т5 Я чаї ви ТАБ МКК ВР Аа Меж дер рез Уві Ар ТїпбоАіа їВе Туб Ту
ЗЕ За зе
СУ Ат нів тек ТвБ оБТу Тубє Тук Ар обек 5ве біжу тує Агбвозіу дів їй їх 338 ев Акр дів БВе Аза ма) тер біу БІВ Зіу ТНгофв; УВІ Тве ув) Зее ка КЗ ї25 заг «518» За «ІЗ 3 «йібх БІК «33 йтучна послідовність «202 «лей» сСУнтШатканий пептку «де» ва до?) хіх бедмиевсв Бізе іїве 5іп їі8 Уа маї Те бій рБе рге Ака Бек оБго ді Уа) бебозцеи 01у 3 ву та КК
Бій агЕ Аза тагбоїф? АБ бук бух 5вг о бек о бій бек уаї зем Тут Мів 28 ря Б, бе дал Аве бух Ап отТук іви Ді Тгротує Біл обів бу вро БІУ ів 3 за 45
Бко Бго дз бе ік 318 бує Тер Ада бек Аза Ас ів бе іу МІ ко йзр Аг Рів ек о біу зок бі бак Бір їЗе др РНе Те обви Те 8 а їк я
Кіє Мег о бБеє ви бій дже БТ дероуві біз маі ТУуб Тук бСу5 ЗИ ій 855 КІ Зк
Туг Тук бекб ТВ? орга тує ТЕР ОВМе 51у бів й3іу ТИР вух ге ЗВ тів 85 185 118 їх «а: 83 «їз 3 кед» БІЛОК «ФІЗ тучна послідовність
Ед яХІДй» синтетичний пептид «абах 53
Бій Уві сій бе мнЬ ів боб біу вка біу бери М3 бує рго чое й5р ї їх ув ї5
Твб овен баг оце ТНК бух ев уаї его бег дер ді фу Абшд обов Аве
Маг отТуК Ту тТрробту Те; о Ухі АгРробів Рго вро Ту ух ІМ бен 3 яв дк
Тв ЗІ ХУ Тео узі баб туб бюм віх ЗЇуУ Те зує тує дхп ве дек 5а 55 ве з 2917 О6БІ бедчевсв Кї51пв шви бій бек дев уаї їВб Уві 5Зег За) Аз ТВе Бег вуз Аяй Ні Не 55 га ув Ез барв огей Акк ін дев ек Уві Те Аза Аза Ар Діз бій Уаї Ту тує
За За
Сух діа деко Жеб Ту БВ Тут Ахр бі 5ее у Туб Тук Тут ів Заг ща зх її
Тук Вре дер Зак Ткробіу діа Піу ТНК фей оугі ТЯБ Ма) ев сет
У ї2а 125 «кій» 5 «12 лав «838 БЕЖ «2335 Щтучне пюоглідовність ре 88025» Сянтетучний вечйтид хе» за
Зів Аїв мві мазі Те бів 513 бро беб бно ТвВроУузі дег Бго Біу щЩіу ї с. 18 15
ТМ УДЕ ТВ ем тТвК Су Аа 5еб деб тТВК б1іу діа У) таб беє Щ3у
З ЇВ За
НІХ Ту Рг Ах Тео БВе бій бій бу» різ» бБіу біб бгз Бго йгбж АЗа
ЗЕ зо вх вем їів Тук бек ТВ Аз зп гу Ні Ба Тер Так орг Атба дев вне ща по а его ців зер оіжи сечо ші Уві вуз Авта Дій іжу) ТВгоцем бек Ар мВ їх та 25 ве іп Бго іч Ахродіз дів ва Ту ТУР Суй ред іев Мі Кв БІУ 51 ще за 5 чаї Уві мі вне біт Біу Чіу ТНБ ої ев Те Маю еу 180 ів в 8817 3аБі 5ебоеаке Ск каз З «8313 35 вай БУКЖ 833» йуучна жилідовніств ха «803 Свнтетичний пентий «аяа» 53 біп узі біпогец маї дів щеб біу 5іу щіб уві ув) бій рго ХУ дк 1 Е їв їх век ори деЕ Ген Зав обу ек ТИ о Зеб б1х РВе Твг о Бва Ага Мет тує ха Ки ЗВ
Щ1у Мої Ні Тер оМаії Аби Бі Аів Бга О1уУ мух Біу їеб бБа їбромаї
Зк НІ 35 дів Узі Іі Ве дей єв піу мазі фує уз Тук Туг Ф1У АБр ві хаї
Ба 55 ка іук БІіУ Агро Біо тТВе Маі 5еб АК Ар ода 5еб Ав Ах Ве овен отТук те 7 а іец Бін МЕЖ фу зов зем дек Уа) АБродбр ТР о Аза із тує Туб Сух ях 55 Зо
Дін дк Аки біу 18 ро др о Бга БІВ АРЕ ЗЕУ Ав оТук біу Фі ки
За за5 зів
Ав Тук Тгр біш ій щіу ТВР ов Маі тб узі бак ек ї35 125 325 «вх 98 «віз 3 «21Із БІДОК «2135 Штучна поснідовність «дІвх
Ф«лИ3У Семтетичний пейтид «аа: 54
Фів те Уві Мві Те єі1в баг мб Зеб бевб ге лю» діа 5еб мі Бу ї х 38 3 а ЗЕ; ЗМ Бедивосе Біятіпе ах ївг Уві 3ЗвВе іє б осСуз ВК дій Хек бій о беє ЇіЗв ТБрожеє Тує га 25 в. еп Ач ТгроТук ій бів їх Рез о йіу губ іа Ра фу цви їец Щі
З за «5
ТУк діз їВК зве его іец бій ев Зіу ер Бго беє Аг ВНе ек 035 щи 55 Ба
Зек БІіу тує щіу ТВР Обі) праве таб се) т дів 5еб БЮ Бе іа Кг 55 НЕЗ. 75 КК. біш Аза Ре дія Те оту тує суч бів бій Зебк Тук бек ве вро Ага я ща З5
Тв орве щіУ бів Біу ТВе дух УВІ 1 Ме Ах зо Зак «їх ЗЕ «я3іх аа «дїжи БІДЮК «2135 Штучна посВідДОВНІЄютТьЬ тей» «2232 сСмитетичний пептид «вда» с
Фів Уа Бій їси маї ція чек обіу іх щі бе) Мві зів вео БУ АГЕ 1 5 а їх цем ром Агрж оіец беє Су дів Кг беб б3іу Ве ВЕБ ВБе Ав Ар оту
КЗ Кз За
Ма мет тує тб оУузі Ага БІЙ дів вгБо З1у ух пі їж бій тер У 35 за 45 хаб осі Ті беб Тгроахо бЗеб біу 5зЗа їії65 дія Тук вій до Зег Уві 5а щи а ув піу Агв о Рпе Те тів бек лк Або йха Дів бе Аза баг бер тує 55 тв Ух 85 ій Бін Ме Ас бик оіви др АїБ бін йвроїве Дія ев оту" Тує Суб ща з5 а 2037 ЗВ) Зедиемвке БІУКІЕ
Мі ух Ар іви Туб БІЇуУ Ту Ак жів зей Тебе Щ3у Авий біу Туг 45 ї883 зах 338
Туг Тер ші бів біу їйе рей оуі Те омаі 5еб бек ї3а «Ех ЗВ
ФІ ЛІ
«82: ЕЖИОК «аї32 Штучна послідовність
Вих хааух Синтетичний пейтад піз Аїа Уді Узі Те бій баг о5ек ев бер офво рРе5 уаї Тиб о Бго біду 1 х за ї5 іа РКО Аїз Ха ів Зв бух АГРБ баг Хер бій 5ев бен фев Бій беж за я За
Вп обі тТук Ажа туго см Ар їв оТжв Вей віп Бук Рео Бі ій 5егб рез 45
Бо 5іЗ рей вн Ж) Зук мем біу бе» Ай дрЕ Вів бе? бБіу Уві вро 6 55 «8
Авв дек бе Хек Б1у Бек іму Зег ОБУ ТВе од вве ТвК о Беф куб 516 я Та 7 ха
Хеаг Аби мві 8із Віа біб Ач» Уві БіУу гаї тує ту» бух Меє бів 5ів 85 за 5 їни БІЙ ЗБе обго Бро Те Бйе біу пін біу ТНК Бу Уві Фів 3е фу т88 та 48 «а ЗУ «виз ща етї2: БТЯЖ -ВЖ3» дтузна пеплідовність кох «й Сянтєтичнай поптид а Вій 1395 бЗецдуюпся Г35БіпЕ «83йх З бів маз зів ев омаф Бій оЗеє біу А)із Бім уеі ух вуж рко Фу баг
З 5 18 15
Ме" Маїі Бук Уці ро сух цує АЇа бек БЖу АВ отТпБ їз Бек оТук тук 28 25 за
Зі їе Їгб Тга Майї ДББойек Аза бро йіу бій біу геч бій тез Мей ї5 35 до біх іп ї15 138 рр Ера Ка Аза Тбе ТВг ї)6 бек Аза бів Бух Вве 58 Ну 58 бів 5іу Абд рем Таб Меб ТР о Афа біб Фів бек о їве 5еб Тк щу Тук
В а 75 ща
Мет БВ АгЕ ТвйВ рве тТУК Мет АБробец баб его реи дея Бка 3 Або 85 За що
Те Аїз Уві Туб Тугє Су дів фу біжу Тук Тук Бім Бех Оіу 5ег о Зег з88 385 3
ЗІ1У дер тує б3у фев АвБроуді Тер обі Зла б1у Твт гео) уві Таб Уві 315 28 35 бог бе їй «ва» о8 «в» 332 «В1Яз КІ хіх» Щвучна пюослідоаність ха «Ві» Синтетичний пептид «аа» 8 зів діа чаї уаі Те ві» рго Роз баг узі бок ЗТу Аївз Бе біу ій ї 5 їй 15
АгЕ Ул) ТВгОожЖів бе» суз ТВе о біуУ бе бек бегб а5а їі а1у Аїа біу їй 25 й з ав? зав 5еЯенгам КЕНЕ
Туг дхр Зі дев ТРр оту бів бій сем ба З1уУ ТВе Аза Ро Був ви 49 де іви ЖХіє Тук бБіу дза Азп Ай Агд ори бек БІУ УВІ Бо дер АКр вне 5; Бе 58
Щег біу баб цух 5егб піу ТВе Зо д3За его їви Аза тів Те БІУ ву «в 7в 75 Же зів дів Біцш дз о з3іб АЇз АБротує Туб Суб бів 582 Туг йбр Бек Баг 85 ча зх іжв о зек о біу бЗег бі чаї ВБе оіу ТР О03у ТВ» піч маі ТВгоУді ві 182 зв 134 хів З ха3з 398 «їй БІЛОК «213» Штучна послідовність «238» «ІАЗУ бинтетичний пептид хиба 85 пін Уві Бій іо Уві бів 5ає Віу Бго оїу вет уді Ку Вго Бек 01 ї 5 15 5
Тег и бек цею» ТВ Сук Дій уві Зв» бі бр обек З ЩІУ Хег ге
Бжг Біне тук ігр піу Тео їіє АРе Бр рко Вго Б3у уз щі бе ЗХи 35 ав КЗ
Згр о Це бу 5ег її Туб зТккК аз Бі ТК ОТНе Ту Туг уз рт) бек за З 5 іеч бух Ха дев о мЗ) ТБ 316 ве іер о йер їВе бек фу два обЗій ВЕБ а 75 ка его іжв АР їво бек 5ае дец ТР АВ о їве дуб Так бБіу МаЗ Туб Тук 85 За щу бух Віа др вів вро Твб о Тук сух ев обео ЗР Ба бух Дів Уукі ІЗ зв й за а 281 1195851 Зедмепсв 3153іНе
Тер о Тук Бе ха із ТРробіу АгвоБфу Таб обва Уаф те Ма) беБ 5ег ко ха 325 «з1йх 4850 «аз І ката БІЛОК «231 Втучна послідовність «285 «ІЗ Свнтєтичний пептид «вах 198 біпомаф пів із уві бій 5еб зі АЇз 53 Бей дує у ВКо яз Аза й 5 їя ке
Зев уаї кух Уаї зебр бух ух АЗа баб БІу тує Їф6 РБз Тве фу Тук аа ах зе зЗім їі баб тво Кеи вбЖ Зі Афа Рг Біу біп о(3у фез ій Тео Уві 38 45
Фу Тер фіе бек Ата Туг Аха 010 Аза Таб Аза Туб Аза ін Гув Бе «З В 5 «Фів біу ягЕ Мві Те о б8в тТКе о тТнб дв о АЗЇа бек о тве 5ее Таб одів тує
У 73 7 8
ВЕх пі» ве; дб дя феб о АБе бог АзЗр др Тег дій Маі тую віюш Су
БІ а р діа йго Бім узі Тер о Бне Аза БЕ тує їіфв Тук о тТктробіу бів бру Тве 188 385 ура
Мгц чаї Тпбоуаї Зеробає 335 «аз Ла «вї3з й «вій БІК «из Штучма послідовність
КкеВ» хЯАУ» СемтІєтичНий певжид а га ЗІБ бадувпев Зі соди біп бек зад маї Твг бій Бго Аа Зв о Уді ве ЄЇТУу бер Рро фу ІЙ ї 5 за Зк ово ї1е тТваЄ їі щегбобуз ївк Бім Те бек о 5ее дер чаї у лі Ту 28 ФУ За в ту баі беб тез Те Бій іп нік вро Біу Суб іа РБо Бу Во «ЦІ Я хмві Кі Туг йбр Уві вів зап дей Бео Бебопіу Ті беб АзроАгЕ вне 8 5 «8
Же Зі Зег гу ОЗЕР ЩІу дп Таб оАіа Бек овви Те ї18 5ек ау Ки
БЕ та її В «нкАїЇв 01» ар БІ Аа до Тук тув бух Б3іу дев отув Пвб жжкК Аз)
Зо 5 аз дек оБко Уві Ре бек щіу Б1у тТве обух їв ТВе Ма) фев 150 їх зе «із ЗА? ха 333 каз БИ Ж «233 уучна послідовність «ихОх «ТЯМ Синтетичний пептид «Ба» ЇВ5 із Маї біп іа Маї бій За" біу Заг бів мем ух ім РРО БРТу діф ї 5 ЗА ї5
Заг омаі Куб ви бек оСуз бу5 дія Жек о біу Тугє ТОР о бне Тве Хвге нів 8 5 за
Бго Меж Ап ТвроМВЯі Аг Щіп Аїз Бго Бі бій БІ Бем Зк Тгр Мох
Ка «р ак ім тк ЖТе Або ТНгофу5 ТВгобіу дм іо Тв тує Аза бів біу ?ае а 155 ве
В ДВІ 31953 Зециєвсв віяла
Твг о біу дер бра Уві Врж Чет осям АБе тб оЗеб Мві дев ої Аїа Тут
ЕЕ 78 75 ха ів Фі їі бек обім іен ув Дія пІб Ахо о Твб Аза Щі Тук тує Сух як за З вів АгЕ йзв пін Туб бек об1іу Ту держак Узі БІЖ маї Ре Акв Фу чав зв Тра так орВе аз Абр Ре Тугв О1у МеК Ар о уні кр обім бів бі таб ев зх 128 125
Мзі ТвВгоМаі баб Хег 138 «яв ЛЯХ хіх 8 «ах БІЛ «335 Щеучва послідовність «дов «23» Синтетичний пептид «Яво» ЯЗ
Еф Тук бер рве Тр о5ек Туг Бу ї 5 «ваз ТУ «вії 8 хай БІНОК «21 ШуУучне послідовність хйдах «хошах Синтетичний пептид «а» ї54
Ті бег Та тує Су Б1У тТук Те і 5 «Ве 285 «їх З хай» БІЛ «21» Штучна послідовність ха» «ЛИ» самтетичНий пептид а ЗО ЗІБ1 бедеепсв 15 Е кара» 1955
Аїд агро Уаь іс баг бів уВе Зіу Туб РЕ тує тує Туб Тук туго ЩУ ї 5 та ІВ
Мат азам «к»зизх 15 «2115 8 ках БІДОК «йтах Штучна послідовність «22 «ла3У имуєтичний. пептид «ай:
Чіу Тує бе РН Те бак Тупобаг і 5 «іа» 185
СКЗ хай» БІЛОК «35» тучна послідсввість ках клі» жететичний пептид
ХА ЗИ
Т18 Ар тве да їй обі Ах бро
З 5 «їх За8
ИН НИ
«Майн БІЛОК «ат Штузна посвідвеність тагах ха» Сину тизмий пептид «Ах ВВ діа Тве Туг о Туб маї Або ім Те ЗФ1у баб Тує дено сій Аха тує Тук
З 5 ї5 ї5 «їу МеЖ Аква чаї а в ло? ХІб63 бедченсе Кі5КіВре «Зах За «жі» й «ваз БІЛОК «ТІ» Штучна послідов ст» ка» ххх Снитетичний пептид каб» ЗАЗ
ОЇ ту ве орав Те хег Ту 1У ї 5 «аївУ 315 хЕВіх 8 кій ВІЛОК «ліз» цжучка послідоввість
ЕІ
«ейУх Хинтетичний пептид «вах й їі бек їнБ Тур айва біМ джр о Тве
ЩІ 5 «аїа: З «ах 28
ДИ: БІЛ «ЖАХ» штузма воєвідовність «іах «йд3» СинтетизниВ пептид «аа ЗЕ діз аРЕ Азр о вйе пів бі Бго біУ АБ сує Заг ОбІЇу Б1у Баг Су Туг 1 5 18 ї5 его ак рве є тує сів Ні да Азв Ме дар Уві
Без КЗЗ «аа» 115 «і» З «822 КІТ гаї» штучне послідовність «ВІВ «22» Сивчтетечняй пеитид «а» 137 а заїу ЗіБ) 5ециенйсе Бі«сіпЕ 5ве дв Аів фе АК жає Де о беб Тур те і 5 ї8 «ВІВ ОК «І «л3йх БІЛІЖ «513 Штучна поклідовністе «йЙх «ВА СимтетТиЗнНиЙ Велтид. «ча 313 маї 5еб Ту" Бак ЩіУу Лу Те 3 5 ка» Іа яки»
КЕ» БІНОК «235» штучна послідовність «ЖЕО» «Ії сСевтеЕтичний пептид «аа» 314 діз акЕ Заг оТуг Рне Туб др обі Беб зу Тук Тут Тук мяз Бек Тур ї Б їв їх
ТВ АБО ет іх 11 «Ах 8 «ЗИ БІЛОК «Ж13х тузма побвіданчість «ДОУК» хе23У сСинтетТнУмий пелтВа кава» 15
ЯІу Ве твк оБле 5ег Аква Тук Аїд ї я «Зах ЗІ «333 х 133: БІЛЖ «233» Штучна послідавмісте «хх а 2817 3351 Зедцепзсе Біт «ка35 бвнтетичний лап тид «зи» 315 фі ТероТугб Абробіу 5еб Аза фуз ї 5 «3аУ мо «ах з «32» МІЛОЖ «3132 Штучна лослідовність «ли «й?» Снитетичний пептид
Ох 37 діз дре Зіу й5р Тут Угі іпь Авротуг ї 5 «ІМ 355 «хіх 8 «125 БІНОК «ві5х Штучна послідовність кхааВУ «их СМетятичниИй пептид «чавх З ім йіу те дек обне ТвБ о Тук ДЗ
З 5 «Зх З св3їх й тяій» БІЛЮЖ «ТІ» Штучна послідовність расу я хи» Синтетичний пежтиж ем 58
Зав" ТіФ ро мі віж дів ТБг Узі
В. ї «иій» 458 «аа 35 ей БИВЖ «ей втухна поегбглідванісєть «ях
З зйх7 БІО83 чедцевсв Бі «вхйх Синтетичний пептид хаб» ї2а
Аів дек оБко тує Сук бек Бек Ме АБИ Су ТуК о їВе ТКгоБне Тук Туг 3 5 15 15 вве ахр ВВЕ «зі8У 383 «їх З к2125 БІДОК «2135 Штучна послідсвніств «ах «І3х сСичтетичний чепткд «вайх ЗА 51У Туг бат РО ТВ ОБВе Туг бер 3 5 «ТЗ 352 «2319 5 «Ії ВІЛЮК «213» ЦШтучни послідовмістю «й» «8233 сСецтетичний пептид сао ОТ
Тв Ах» ТБг оди Те біу дя Бго ї 5 «218 323 «23 8 «ї3х БІДОЄ «ЛУ Штучна посвідевнієсть «дІйх «ЖІ35 Сумтетичний пептид сю: 83
Аіа Інь отук Тук о ма3і Ар ої Тер ов1у б5еє Тук Агробівй Ар отТук Туг і Х 15 КУ
Щіу меї аз жа
У а 2В1У ЗОБІ бЗедцепсв же іпЕ «215 125 «211 8 кла» БІДОЄ «иа» Штучна послідовність «иа» «3 бинт тизний пептид «аа» 154
Оу Туб КЗ Без бок бух фер баг 3 5 -Еїйх 375 «Ку ж «5 БІЛОК «ДІ» йтучня поолідовниєст» кг» «ха Синтетичний пед ков» 355 з ві агЕ Бі дер обі Б) Тв? 1 іа «хї1аз 355 кивіх ік кій БІЛОК «хІї5У Втучна послідовність «5385 «ЕА3» бинтетичний фептед «пах 358 дів Таб БІ віх вве Тер Явгб омМеї Бі сіу с1іу Аба Біу маф дбротує 3 з 18 15 «ЛУ З «хіх й ках БиЕОК «ІЗ В учна плідність «ех «ах синте нУнНий Велтед «вв» 27
ПЩу туго твг обве тн бХжб о Тук рве 1 5 а зи3? зайві Зедрепсе Мі5ЕЯлЕ хіх ЗВ чкїїх З «212» БІЛОК «135 Штучна послідовність «ЗО
Кхй3» буктетичний апптий «авдх ЗУВ
ТаР оТує Вго Б3у Бім Біу баб вВКо х 5 «дах ЗВ «ех ХЬ «3153 БІНОК «813 тучма послідовність кг» «ех» Синтетичний пептид «айх 195 вій ака бБіу Аза Мі АРК о Зеб Їів іу ТВКОТВе БР їву длрожег ї Бу 1 ї5 «в3йх 3 «3їх В ках БІЛОК хжїах штучна послідовиікчь «23 бвмуєтичний пептид «вах 15
Зі вве ТК ОРБе бог Мет Тугб Фу
У В хІтаз З киіх Я «ам ВІК «2315 Штучна послідовна сті» «КВ х «Я бинтетизний пептид «Зх 353
Уха Тер дев Аз БіУ его вує 613 1 5 з 583 ЩаБ5І Зедцилсе ВІЗКА «кааУ З клі» їй «ла» БЕК «313 Штучна послідовність ххх «и235 Кимтетичний яватид «аВах діа АгЕ Ах Ф1у 32 рго дзрорро о Аг В3Ж АНИ тує ім щ3іу беу й 5 315 в
Ахротує «їх 133 «23їх 8 «їй БІЛ «8433 йтучмиа зсеслідзевність ява каїа» Синтетумний пейтид «ай З
Зіу біу Тит Бае Ах Аєп доп біуУ ї 5 «їв» 138 хЕїі» 8 «12» БІК ххаЗУ днучна поелідовн км «ЕВ «ЕйУ» Синтетичний пептид «ФО 38
Їіє Уі Рго бай вва біу ТК овго
Хх Ко «хїаУ 535 «хїїх а кий БІЛОК «133 Штучна послідовність «ЕТйх «ах СиИнтетичмиу З ИД зв 2517 11051 бБециенсе Мікбіпк «во 335 діа йекобіу агв о тТВе Лів Уві Те ро меж бій гемо біу вв фр Ре 3 5 за ї5
Туг Бне дб5р рРАг 78 «га» ЮК «віз Я «ЕІ БІЛОК «15» Штучна послідовність «лийУ «яй» СВиЗшТичНий ВЕпТид хавах Зб
Бі тує рт ває тТне Ар АБ ет й 5 «ах 337 «їх 8 кжійх БІЛОК «2і5х Ручна послідовність кВ «и3х КинтитиУний пептяй «айах 35
Ї1їе Аза Яга Ах ЗВроБіуУ Ма) беб 3 5 тей» В «115 15 хай» ВІК «833» Штучна песлідоввісті» «УВУ «а3У Сентетичний вейтид ен ї3х лів аск ін б) дев Ар о беє баб біу Тук оТук БЕН і З Ко «йі5з 338 зе33х 15 «вай БІЛОК «211 бтузма послідовність в 2817 10653 Чейчейнсв фі5гівЕ хи» аихУ Сиитетимний лертид «5» 335 -1у вве 5ег бе шек Ще Зеє біу чаї Оу ї 5 їв «ІВ ЗАВ «33 хлі8з БВ «3 Штучна паслідовність «20» «25» КинуєтТИчНИийЙ септИд «ЗВО» Лав
Ті Тут тгроазр зв дк гу»
З х «гі 3483 «23: 38 «2143 БІЛОК «233» Штучма послідовність «Тех «2215 Сивнтетичнай пейтид чаах 341 дів ніх бек Мей ЇНе о фуз біу віу ів Ті Туз 5Іх щів Азв тує ВЕ 3 В 38 ї5
Яім Тук «із» 145 сві хай БІЖЖ «їх Вжучмна послідовність «иах «ижах сСвитетичний пептяд «кава а ді Ту ТЕ се) тв зи зи ве а 2817 За Зедеевса 15; «Вій 43 «в» ОВ «аз» БІЛОК «і5» тузна послідзаність «й «г2їз Синтетичний пайптид «дай» 145
Бпе біз го 33 Акр БІ Бім Тве «Мах 154 «АЮ ІБ «ЖИ» БІДОЮ
ХЕ» Вучна послідовнУєсте «ЕЙ» «о3их ЗДдІнНТаУтичнНИЙ ТТИД «Зах Лад
ТВе Ткг вер бій Уді Зуб Туб Абд багобіу его туб баб осіу тТук Уві ї 5 18 її
Ах оїук «Зав зах «їх 8 «о щлЖ «2335 штучна послідовність «ЗД «25» Синтетичний пептид «зва» 185
Бі АР ТР Ба беб обеє Тує ма) ть (м «іх В «її 5 «аа БИК «2 Штузма послідовність хи» хАЛВХ Синтетичний петбтид «Ява ЛАВ а БІЙ а) 5едмансов Бієбівв їі Ї1іє ро мем Бе бі ТБг діа х 5 «Та» 147 же» В «813з БІК «23» штучна послідоввіть «758» «?т2їУ сСунтетичний пептид «505 3 ліз аск ві дія бів їв тує Ту дов дав йіу щеб О1у тує ІТів вве ї 5 їй 15
Ав тує «да» 345 «В» Х «135 КІЖЖ 2432 ЩУчна послідоаня сто «ІВ «823У сСивтатичняй поятид «ах За
Щі вне ек вва діє бек жек АХ 3 5 «385 За «233 5 «зІ3» БІДОК «ах бтучва послідаовніст «ий «айух рмтатнчний пиггИд «ав 149 тів чі Уві Аза бек дій Акп ТВг ї х «2185 1585 «ХХ» 83 «жах БІК «33» тучна послідовність осо а 2817 ЗіОАії бедиенке ІК КІВВ «йаМе шинтетТнаней тет «аа ЗВ діа діа ів Ні» йгв обег Бго Су» бек біу бі або о5еє Сув туго зяб ї Б 18 15 їеч Тук тТук Віу МеЖ дур Ма
Ко «ках 15 «231» В «гії БІЛ
Фа» Штучна послідсвиа сть ко «Фах» Синтетичний пейтид «нки 15
Зі вве їйе Майї вк дхв туго Ту ї 5 «ай» 155 «СИМ В хяїаУ БЕК «ЗУ учив послідов
ХЛ» «03» Жиктетичний пептид «з Зх
Ті жег о ТНК знпРобик ЗУ АК Те
З 1 «війг ЗА «13» 43 «а БІЛОК сво Штучна послідовність каз» хиййхУ Свитетичний повптид «евх їх діа рух Щі Вге БМе 51уУ БІ1У Азровнє йброТух
Х В їЗ ки». ЗА «ква 8 к дат; заз Зеццовся БІС ххіїз» БІЛОК «ІЗ» Штучна послідовність
ХВ
«Ї33З бамтятичний ЧУТИ ха» Та і вве ТК вре дзр Мі Тук дів ї х аа Ух тії 8 5212 БІЩЖ «2335 штучна послідовність касах «аж жЖинтвтнУний рептид «наз 155
Ї12 бек ТББ дав щи ФІ1уУ бив Ммаї і БІ «ех 58 «жі їЕ «ва» БІДЮК «813 Шнучна послідовністю «йгВх «Ва3У симтетгизний впептид «щюйо 5 діз уз діа риє Тер орпе ді 61 рез баг о шіу Туб бі Ме Асроуві 3 5 за 35 «аа лу «ах 8 «аа БЕЛОК «Я3их Щерчна послідовність «жгВХх «йа3У жимтетиЗниВ тн
Уа ЗУ
Оіу Тук век вва Аза ї3к тук ЩІ1У 3 5 «дих 585 «віх ск а лаз? 31853 Зедвейсе БізКіпЕ «яійх БІЛОК «33 втУузМма проклідовність
ТОЛЯ
«33 Бинт уУВУНИВ пеиТед ха: 15В
Іі. г дів тує АБа біу дев Те
ВУ х «кзаах 353 «г3їх 12 «зах БІЛОК «21» Штумнв послідаєне іт «828» хижа» бевитетячний пепжад ках 155 дів Вга вио ін Тео ім 83 ББе Тує тук ар їїТа ї 5 за «ий ї88 кхІ3У 8 ххій» БІК ххі3У дтучна песлідовність «аДех «Еа5х СнимтячУчний пептид киева х дев
Вб кце Тк овБе Зое ба Тук усі я к хЕвЩих ЗІ хі кЗїЯ» ВБІК хи штучна заслідсантсть хЕЖВХ «ІЗ Скнтетичний пептид «аа ОХ їі Зег о Тує Ар 01 ог два Бук 3 5 «Вам 35 «т3їх 2 з Ви 185) зроцемлсв Біле «жі25 БІЛОК «ЯЗ» Штучна песлідовнікть «Тай хиеа3х Син ОУгТичнНИЙ пептид «що ЗБ дів Аг чек фа їгробіє жегоЗее Туг Зі бек обіу аа Туб тує ТВе х М 15 ї5 дер отТУК вне тує Тук тує дів Меї Бр Маї ач «НЯ х їБА кві їв «35 БІЛОК «315 Штучна послідовність «ахах «ах бинтетичний палптид «а» 153 зім Рпе бе ів Так оїае тив ді маі тТвг їх к за «аа» Ба «ХХ кі» БІЛОК «335 Шнучаа послідовністю -а23» Синтетичний запкид «ах ЛА їі тує ТК Аз; Азр дев кух ї х «ваз 155 «ах ках БІЛОК «313У Вітучнв послідовність «тих «233 бинтотваннй пЕвтед «Ой СМ яів Ні бен Тве о щіу Тук Тук АБВ бог же біу ТуБ АгБв обі ів це) 3 5 18 35 з 2017 110581 Шеомевсе Сі івв дів дів вве Аза маї «8305 365 «2312 й «8125 БЕЛОК «1» Штучна послідовність «лах «пла» КВиТетичний паетгтид хабах Таб жве Аа дів зв; АгРЕ бек Аке о жек тує Тує ії 5 15 «ЗІЗ 187 «ВІ У «Аа БІЛОК «13» Штучна послідовність «ЕВ тай» Синтатечний попу хай ЗБ ува Бек Зук Ма Фі Щіу ТАК 13 х «зах 58 «ка1іх 13 «313 БІЛОК «3 Штучна твзолідан іти «ка» «523» Симтетизний пептид «ав: За дів Агя лег тує Рйз Туб Ах о біу биг оЗіу Тук Тур о Туг Бен о бег тує
У У 18 їх
Бра Азо бек «їй З с х хай ВУЖ «й335 шуєчне послідовність а 88317 ІБ бедценсе 1155105 киах «Ж33» бимтетичний пейтТЯд «абвх Те віуУ Баш тТвгОвнЄ дра меж Тут щу і г ка» В «Хіфе 8 «щі2з БЕЖ «зА35 Штучна послідовність тихше «83 Синтетачний пеойптяд «аа» 12а тів рве ай Ар у ЧНІ УЗ ух ї їх «яїах 17 «ях ВВ «ЗІ БЕДОК «Ра» бтучна посліді стх «ЯЖЕХ «шах бивтетичнив певтид сні» 1 лів г йбр біу о вго АБО Вго 01 Арв обі дяротуб БУ у бай ї 5 Ку 5
Аха Тук «вах 373 «іх 8 «ят3х БІЛОК «53» Ятучна посафден т» «аЕйх «ТЖи3» бантетичний пептид «соавх 173
Фіу вне І РБе Або ди тує дів і х а 28137 13051 йдедуейся ВХ ХаВ «ЕХ 47 «їх З «125 БІЛОК «135 Бтучня послідовність хи теаІх ШинувтичниИ пентид чех УЗ її баб тер о Ахи бЗеб оБІіу дж Т)в 3 Е «ліва тА «ях 17 «хх БІ «дії штучна посвіданасть «ЙоЯКх «та3» сивтетизний пептид «вий» 378
Заї був АБа ям Тує Чім Тур АзЗО їі сво Твг ООКу Аха фу Тук Ар
ВЯ зу 18 15
Тур ках 5 «а» й «ій БІЛОК «243У птучнв послідовність ках Х «ВУ СиВтнтичниЙй пЕйтид «вах 75
ЗКУ ар ОТ із Беб тує Тубє 3 ії 5 «аа лу «їх В «вах БІНОК «2335 Штучна послідов» «йІЙх «ке» щимтстиУний пептид «аа» 75 в'я; хів) вдови Кі іпй
Ті Тв Вго ре Бах дій тїВК оте
І їх «МІ ЛУ
ФІ: тій БТЯЮК «3335 йухна черлідоаність
ЗВ ай» Сеивтетичниий поптид аа 377 тк дів Уві Тує Туг Сук АІа І1у Ту Туг Тук афу Бег біу ек 50 ї х із 35
Віу АБв отже вБіу їн Ар Уві а «зах Тл «ях 18 «38 БІЖК «2335 Штучна послідавністе «ЕТЙХ «яй3У бимустичний чептид «зах 178
Зіу др Бег їі» ау бек аг о 5ег Ве Тур ї 5 їа «иа 479 «31» сій БУЛ «ВАЗ» тУчне послідовність «ехо «224 Жинтетичний пептид «аа» 75
Те Ту Тує дя БІУ Тв ТВе ї 5 сейШх БИЙ «ах В «віз БІК «А» йтучна посвідовність «ха»
в 3817 ї10а53 Хвеазейнсе СИ «й2352 сСУинтатичний поптид «8822 1885 дів аге дів го Їде ТУуК сж» зоре бго ек оБеб бух Аія УЗ) ніх Тк і 5 38 35
Жук Бре Ахп ге й «ла» 83 «а» В «кла БІЛОК «Ах» штучна послідовв сть «0 «ай» щемтетичний пептид кеВ» Б щу Тут їі Вна Тве КУ5 Туєб б1у 3 КІ «85 3 «ії: 5 «ліз БІЛОК «313з цтучма послідовність «ІВ» «б 3: пинтетичний зд «ера: 82
Ті баб дів Ту д5а м дев Те 3 З кий» 1855 «хіх каз ІК «33» штучна паслідовність хаІВх «йи3х бинтятачний пейнткд сх 3853
Аїв Яги бій Уві їгр Ве Аїів біб Ту Бі тує і 5 18 «38 ВА «хіїх З а жі? ЗіВКі 5ециенсе сіжіпе «тай БІЛОК «Т3ї3: Цкузна послідювнасть «й х
Фйй3» бинтетечнив пептид лей» ЩА
О3фу Ту ТР РНЕ ТКг Бек НІ рр 1 5 «23» 385 -53їз 8 «аа» штучна послідзеність «их «ї53» сСянтетичнвий пептид «ах 385
Хі а5а Те ру ТНК о віу аа Ге ї 5 «хаВх 56 «ік ЗЕ «хз КІЛОК «Жі5з штучна послідовність «385 «хи3х Квнтетичний пептид «ев» їщБ ді АРЕ Ачо бів тує ев щіу Туг ЯБробеє маї щіу мі ре дек вІу
ІН ту 15 її сег оБво ав ах Ве Туг б3у меж АщУ мМ 2 зх ках 87 ях З кі БІЛОК «233х Жтузчна посяїдовніктим
Кая. 28232 сивтетнУМмий пептид, «ка» Ії зар оБоє ба 1 сбіу дів Акротую да 1 хЯ а 2837 31653 Зедеевсо БІК «дів» зб «У З «342 ВІМЩЖ «йі35 Штучна послідодність «ТПУ «23» синтетичний поптид «850 35
ФУ Ат Ве ї хх ЗВ зи 33 хаїйз БЕНОК ха1їз Штучна послідовність хадВх хаЯаУ Свнтетичний пептид «Зах ї85
Пій бек Тук АЖо баб бе кец бек АКз Яее Ма)
З В ку «дих За «міх «3» БІЛОЮ «33» Штучна послідовнієть «ДІВ ка23У Симтеатичний аптид «880 МВ
Заг обе йеа 18 Зіу бебодяп Вго їх 5 «мах 131 «иМїх 3 «зх БІДОК «135 Штучна послідовність «МИ за3 Сивтетичний пепчтвд «дадвз 183
ТБ оаза АЗИ і з 3917 З3ЙБЖ бедиенсв БІБ пр «Вій Б «23 3 «іа ВІНОК «23132 Штучна послідовність «ВХ кааЗ» Синтетичний пекти кава» 302 дів уві тТРройЗБ Аби Заг офву бе бі йгЕ оїКр Ма3 ї х їз «аа» 355 «Х3їУ В кі БІОК «13» Штучна послідовність «ВЕУ «35» пивтетичний пептид «кюх Зх ес бес ди Хі б1у Аби Між Ту
І В
«ж3іах 495 «ії 5 «йїїх БІЛОК «233» Жтучка поспідавмісте сфОде «иа» Сумтутичний пептид «ва» 338
Ач Ат тТуг 3 «зах ВЖК «ж3їїх 4 «да» БІЛОК «і3У Штучна послідовність
ЕІ КЯ тай Синтетичний пейтид «б» 385 біу Те Тер Ар Хвго чего ій бев Або Маї уні ї ке 18 а 2817 339551 Зециевся БІВ «зіва В «ка «2125 БІЛОК «213» Штучна васвідсвмасть «2ах «иа» Сичтитичкий певТий «Зах ї5В
Те біб Аїз ма) Ве зе біу Ніж Тук 3 з «й ЗУ «В» «8323 БІЛ «2133 Штучна послідовність «Й» «235 Синтетичний пептид «ай» СК? дек отак Абу ї «83» 385 «їх З «жах МЦЮОЖК «ІЇЇМ Втучна послідовність хе» «ВЖИ бкнтетичний вептид. «вах 158 їец вец міх РКе біу Біу ад чаї уві
З 5 «Ваз З «ії а ха БІНОК «ВІЇ уучна аосслідсявість «2ВУ «й бичтитиачний пептид «88ВУ СЮ
Ба дек ї3в го бе» тує 3 У в 217 її Бедцевсв Кіт пв «10: 586 чаї: 5 «ій БІЛОК сЗ135 йнукна послідовність саХех ха Синтетичний паптид ка» Тра дів ївк Зак 1 «38х ої «щік їй «8і2У БКДОК «8ї3х штучна послідовність «7ах «23 ичтетизний пептид «Яйх 955
Віа бій бБег Тук Аки ТвВи біу Ї3е РБа ве 3 5 КЗ са3й» ще «2312 З «8312» БІВЖ тІ4Х» штучна послідовність «га «МІ» Сквтетичний пептид сх тйх
Зак о Зек дкр ВВЕ б1у ТНе Ту» дж Ту 3 т «иИх БЕ «її 3 «8і3» КІДОК «3335 штучна послідовна сть хх «ох Сквтетичниви пептид «Мах сих
АБО Уві 5ет а 5а37 1861 Зеацепсв КАУКІпЕ «21 дай «83 3 «233» БІЛОЄ «иа» Штучна послідовність «иЖИх «Ла3» СинтТетизний пептид «ах жаА его чего тує Пе 5еє біу чеК Те Меч Туг 01У Бі «ТУ ії У 13 «3» ТВ «ха? М хай» БМК кйі3» Втучна послідовність ха» хі» катет ичНний пептид касах ох 5ег о Бве ха їі О3у баб Ази Рг 3 ч «шівз 7в5а «їх 3 «Війх БІЛЖ «Діла Штузма вроспідавність «Ійх «23 сСмитетичний пеутид «Ос ХВ
Те де Ав ї хаАВУ ТВУ «міх 15 «ВИХ БІЛОК «2133х Цтузна посааавністе «Во «Ва Синтетичний пептид «два» й
Віа уві Тв АБО АвроБак фен бее Оіу го ТБромщі
З т 185
А ро ХУ а 3817 31951 бедюепсе Мп
Фі: ОВ «їх «аж БІЛОК «213 йуучма послідовність «лох хийі» Синтетичмиий пептид гойех ОВ а дав 115 АБРБ Ап дев ч т ї к «ах лу к21їз 3 «533 БІД «335 Штучна послудавмістав «Тих й «ЖІ СичтетеЗний пептид савах ОЗ сту Твг Бек 3 ста» 15 «7335 5 «32 БІЛОК «ЗЕМ Штучна песлідовність «Тих «ий» СМТ ТичНиИй пет хащах
Ма ів Ні Аа зеб тує Рго бро ТБе ї Бу «Жах ЛЕ «Е337 5 «й БІК «23» штучна послідовність «хиХВ» «ам Сивтетичний пеатид ч«авах 2 іп жерців Бк обер тут ї 5 а 5817 13053 бедуєпсв ф15КІїпЕ ха ті х»335 5 хийех БАЛОК «2і3з Штучна послідовність «ІДВх
Кай пивтеятечний пептид «аав8х 213 та Вб охек 3 «іа: 313 сх З тій БІЛОК «213: уза послідовність с «ВАХ Сиктетачний пайтяд «дра» 813
Фів бід о бяк Тув Щег о вНя ре Аг ота ї х «21» За «ках т «922» БУЛОК «53» щтучна взсладастм «лай» «АЖ» Свмтетичний пептид «ах 314
Хег бі дів Уві ївго5егб Аа оту Тук
І У саше ДІ «231» З «аз БІЛОК хл3З5 Вітучня послідовних «ІВ «3 пантотичний пеитид «аа: Й
Хеє Аїв бек ї з 283? ЗІР бедцевпсе Бі «ДІЮ» 15 «Зх З «33355 ТЛО «833» йтучна послідовність каех «23» сСевтетичний пептид «аа мно Уві Те Бе б1у вер о біу Мзі і
Кк х хиЩвх 217 келії «125 БІЛОК «73 бтучка послідовність ках «вих бинтетиЗзний пепзТ яд «кава: 5 чів жав тів ек отве Туї «Таз дів «вії: З «21» БІЖЖ аа Штучна послідовність «тий «723» сСУунзтетичний пейтад «вах іх віз Афіш ее ї «їх У
Уа ее «жи БІЛОК хі» штучна посвідовність «и2ах ххаЖУ СяВвтЕТИЧНИЙ ПОЧТИД «Фавх 15 зЗіай зі бе тує АР отТве Рг ТкроТве ї 5 а 2857 31501 бедуевсв ія оВ «зів стй «її З «з1йх БІЛОК «ах Штучна пролідсвність «адах «Іа» Синтетичняй пептид «ах го
Два бек ав маї ЯРУ БІТу Тук Аа Тук 3 З «ях АХ «4: 3 «335 ВІД «ЯКА: штучна послідовність «аоух «5235 Синтатизний певтех «прах БЕЗ
Акроуві тат ї хай» вля «їх За «хід» БІЛОК «2135 Штучна послідеенєюх х2щ8» хлаЗ» ЖжВитетичНий УнНгтид «аайх 235
Зеє беготТук ТВгобеє бюв бетб ТК іжр Уві
З У Ії «3 хІЗ «331» є «аа БЛОК хх» йтумнав послідовність ххх «Ж335 Кинтетичний ЗЕИчТИЙ «ай хи «1 лег оУВі Аза ЩЕ Тут 3 5 а 2919 13053 дедчепев ТІ5іпЕ «заз 27а «ато «335» ВІЯОК 3433 йтучна песлідоаність
Ех кй23» Синтетичний вед снах Ха
Ар АТ ве ху к2івх 3 «ії З «12 БІЙОЮ «ЛІ х Штучна послідовну єть «ах «ай3У пинтетеани печу «вах 775 ята вів дви аіу дов тео оф Тук Твк ї 5 «їй. ди5 «Ши З сажа» ВІДОК «йії3» Штучна послідовність хай таРїх Синтетичний йейтид омах ЗАВ
Бек озек ахр зві біб баб о Тує вза тує ї 5 «3 7 «я53рх 3 «32» БІК «833» Штучна песлідовмісте хх «3 Сентетичний пептид «аа 227 атіа ча тат в ВУ ЗХ Жедмевся іі «І яв «а: 38 кіз БІЛОК «ЗХ» йтучма послідовність «ВХ «ВИМ Синтетичний пейтид «вайх Я
Їївк олег Туб дів сіу йба аз ім АБр Уві ї В Її «вх 255 сті 7 «219 БІЛОК «135 Штучна послідвинасте «ІЗЯх ста Синтетичний пептид «Здаю сІВЗ діб бек Уві Бек бве біу Туг 1 х каз 236 «шій» З «?1хз БІЛОК сві» штучна послідоввасть «32» «ЙЖИ» Свизуетичний пептид «а» 358 у аа дет са: ах «Ії 5 «ай БІЛОК
Ей» Штучна послідовність «738 «ЛИ» Саму тичний певптид «Вр» ахї ів цем Бе Аза Тит беб Беж Ко го а зб ЗІБ бедовнися 353 Е «ах 335.
«таах БІЛ «533» Штучна поепідевиіть «ІХВх «ЙйЗЗ Свюуттичний левтид «ах 552 5іп бек їец їв Абе БІіу Ті дек оТук Ах о тТуб 3 5 Її «их 35 «жі «ази» ВТВЖ «2435 Штучна послідовність «Пой» «223. Сунтатизний тчуТий пад» З ів БІ бог 3 хиааз аа «х33З З хі? БІЛОК 233» Етучиа послідовність «вах «Зах Синтетичний пептид «ах 734 ек сів дів ін) Бій те Бео ТЕ ОТВе ї зу хащах ах ре ее не У кий» БІЛОК «23» тумнв песлідонністів «ВІйх «ЖЇаУ бритетичний певтед «ЗВйх х35 біп лек Уві кви Тує Мі Хеб дев йза бу Аа ТУР 3 5 їй а 2817 З1О63 Бесценсе БіктівВ «иіВх 236 «іїУ З «лій БМЦЮК «135 цітучне роеплідовність чих «03 ЖШинтеувнней вет «ав ХА
ТевВ дів бе» г «аю: ЗИ та4ї5 5 «хай БІЛОК «233 ШЩуучма посліденністк хаАВх х2и3М Синтетичний певтед «аайх 757 біз бій тує тТук зак отвгоБоа Туб Те 3 5
ФШ3Ах ЧА «ЛІіх в «дія» КЕЛІЖ «й532 Штучна посвідовність «ЕоМУ «225» синтетичний поптий кава» 3
ТвВг сту Аіа маї Таб Хе» Б3у НІ тує 3 ї «218 9355 «ії 3 «іх БУЛ «жі3и Штучна посвідовністе сЕ?й хпУй» Синтетичний пебтид каб» СІЯ
Ба таг АВ 3 а раї; зіва зеошелсе ВА«ЕІли «аа» аа «хіх З «232 БІЛОЮ «313» йтучна послідовність киХВУ «225 Синтетваний ст яд «ЗО ай цец ів ні БНе бзіу Зіу «1 Уа Узі
З х сеї А -іїх Є «8ї25 БЕНОК «З355 уучна поклідсвність ха «Зах Синтетичний пептид «вай» І
Біп бек ЩЇї18 ТР лек туб 3 5 «жіайх тай стїх 3 «лях БІДОК «33» Цеучна воспідевмісте «ДаЙх «3 о СинтетизниВ сг, «400; ха дів Те Заг 3 ках 4 «їх 8 «ТУ БЕДОК «дах ручна песлідевнаєть «ВТУЙх «й?» Синтетичний пептид се» ау піп йів Зак оТує деко рне РКО АгРЕ Те 3 ї в ОХ ЗІЗ бедмепсев СІ5ЛЕ «тїа» дай «їз «дз БІЛОК «оз Вітучна послідсвнієтх кохах «аж Синтетичний пептид «ааих ах
Зіа бек бен ів Вій ее дп О3у Тук дай Тук 1 5 но «аЗих 45 «441» 3 «8і2У БІДОК «2135 Жчучна послідевмість сах «023» Синтетичний пептид хващваз 45
Зір» обіу бек 1 «хз та «хх З «хайх БІК «533 бтучнв послідов ість «ВХ «ЖИУХУ Жимтетичний пептид ке ів дів зи вій їВб вка рез ТВе
У 5 сЕ3а» 347 «хх З хіх БІНЖ «Ах Вуучна послідов ть «их «лад Синтетичння ЧчепТВд «вва» 34? евргозвм о дЗа ів іт дів щіу тує й5р
Х 5
Ф ІЙУ 106 зеонепке БЖ5КІЛЕ хІ1ах за «Лі» З «ллйаУ БІЛОК «2335 Штучна послідовність «ІЙ» «ІЗ Жинтетичний пептид «Зах АВ «ФУ АхвВ овЕй ї «аво аа к43» 33 ха32» ВІК хт13» Штучна послідовність «ХиОУ «Я» Кивтетичний пептид «вах а
Зів о Зек тує Ав бек бак зе Беб чіу баб обіу чаї ї к 13 «»3ах У5а «315 З «жи БІД «513 цмиузна воспідовмісте «Аойх «йдли СинтуетТиЗнНий сту «аЗй» За заг обер Ар Маї іу ліз тТук аз тує 1 5 «ів ЗБ «іх З «хіх БІЛОК «ТУ Штучна впослідпиністе «ДО 823» Синтетичний пептид са» й
Аква УВІ Аїа 3 а зві? з31051 Зедцейсе БРВ «ій» 255 «вії ї8 сріїхх БИЖЖ «2343 ВЖузма послідовність 228»
ЯЗ» Синтетичний понтад хара» 252 бік яв Їїуе ївпе беє дер ові 5евБ вк У ї 5 та «лита» 255 «вл» ЗУ «лаз ДНК «813» вірує чікункучей зни» 253 квсвавсяси кхвасавтквь косваасвоя шкевжаекає сетасаарає схе та зевссвЕисї вознссссвк зщуветовие зіршарсїве Єрбсввсас КСВ 338 зсветаїсас сУваттаса кзсрідсвив басзавассв Фсаїсссквес їссвІасніВ їв5 заакрстнсв пізсавсвва втнсзаквас ззавазкскає ства касва сквТЗаВНі дав тігасскрск сстзсссвЕК фасртевве шЕсБестВс вето тноЕВ сЕстивазає зви зесвсзакснеа вскзадсвсе звсивадавв кссвзатсах весзваасава астітвсакся да всаквстрвиж стєвіассво аксовсвтся некаввстсо: дові стїка сстазвразаї ага васвісасій їаскідтствз Ткслазскио квосвіксск їсзсавстаз красиесвий ва йсастнсря ваксзаквис феЕсанссокев зас К везвсзвайї сріжрівкає де исаствсвя висок: КЕсае У а КК зсавсававї свіквовКа тм зазвжжнаси стхасвась: внастасссв сссхкінася сСакоааваєє завасаНЕЕ кеВ шЕпракВісс азвадтсвсвс весінавнрс заздасиїск відставевс зсавтниеа вав крсакввас систе ЕКе ївскріасво кфкосабаєк спозвисжос ВЕСТНВоТУЕ КА, звітних свваараасв пракрснтск стасавсаєвз сзрозсеасВ сдЕсіКосав ЕЕ зеаксвасва зсісвЕтвак врскатиаас Тновссотар ярзасвкнос катка ай квсасвссвв зішеввенЕк сактаквекс кжокасвсве сстотїкаває вияв зва тЕсвакВІає саксстнквс ксвкестся Васко свнре воКсскесса Бабказаєвї За всавжсвеса звавакрса всифЕсеЕвКи свбтсватра ссавевссвВї састассве за в ай? 11063 бедоєвсв КіБїірвЕ вазвстранз тарасеккре авЕиВеКК свребриоваа тожефкжетс двсиестТЕ зВкО шссвЕсвосв аттіссвокі сві ствЕ їсізсасевй сВСВсТНТнс ЗавесЕВЕТДЄ ща сапсетссвз аррассасат врісваство ссввсиесас зіассассск сКЕЕКВОссВЕ тво васвкЕтссв сізскроваї кісафшните сапаарайтов соБеаВВїВХ яластвнії ІБ
ЕКсВсКрів савроасікві сставісвтн всрекатвоа сВісдіссеар свеВсВе 337 «3» 255 «іх тк? каз ДНК «3155 вірує чікунгумьй «ах 25 хвсваясасе сазсавтвах сопгразсасв вІвваавкас сдквфазвеє кетфавтсвах що
НЕЗССЕвКХ зсвнссссаю ДЕсАсквВна зсЕВваєсає івксантсасє пІТВЕВКи св 128 всаєтатїсрєс ХЕраиїїзсак сасвтвевае хвсоваасек фсзтісковжес кесвівеВіЕ ї55 звзансрстрсв птасадсава вівсазрезс певасвессваєс схизсквсвр сту вените зав тісвссвров ТствсссакЕ Баїдгревре роугроствсо ВеСКісСтвсвя свссвавах 353 всесзКЕска рекваксасв бкішквЕаав ссскваксах всванвоввя асКевсВЕса 35 всетасаршн сісвіассях ексотнсоеєса пеосааякіс ВСВіЄсЕКЕЗ ссвзавнаан 528 засаїсасід ізасіксста Бвсзавсвро кассвтнсосв їсвенитква деасвосава зо тісаїстнвре виссевтвкс пане стов все гевсв всвасвазах Ед ас Б зазввикивов їсізівасаї нвасіасссв ссссжвася свЕваакВсс акнисВакХ БВ
ЕнЕсвасаїтсс езавієвсво зсстраюзве аоздаситсх аївставтвє зсавекеека 8 сквсавраває срдебрвовиш гасрртвсає вквссвталі сфсвевєвсє абс. 7 азвврасєткЕс хзазавазсв сексі св ствсдрсаєв свфсвесвтЕ фКЕсквосва ке зІздсвзасав гкссрвави звсрвстнавас срсвссвквв кваасаквес саке 36
Влгакасствв завснвссїк сасіарнвико Бссвасвере сеІККЩЇкхаає Киасвідсея зва «всквЕКсТеис таксотисай севіскскив кзвокЕткиЕК воевіскссаї кВвіхвачках Же,
ВВЕ садсв зкиванвовза вівінквнів себксваїде соквасвосні каста сри 3025
Жазвсквацз созвазнїтна зевКзвактет сакствкаав ТсїсЕсхс дасиясекка зача
Блезнствскв авткксовені зсаввіствЕ сбвасвсанв жвовастккве вести 31548 квсососссва здеазссзат звжсвасіає ссресиісас позккаескех сервие са зба
З ЗВІТУ 1Ле53 бейповяасе ТІКЕЯК вавсабєксосв стасвнсваї вісвзснвнів савнакаїєсв свЕКЗеККАе Вест 1ж5а кісті к ссякзстваї тотавісвів тота дев КВТсвТкКАак сарвоас 157 «83» я «233» МУ «їй» ДВК 1» Вірує чікумгумчевй хавО» еВ
Хаскавсасю квасавткаі сссквасвск вісвиавіас свкасанрає фствикснах Ба акзсстрисї псвассссвВі врми тиран зкрраавскає ХвтсазЕІсас іКтрвавсев їі2а асвсківіскс Херасіасве хасвіневан всвзавскв ке осквіс совка 186 зарінствсв нсесавсвва кінсезивас звазвсскає стеветвсвк склі навіЄ гай
ЖЕсасевесв етнос сВЕК фатрівивис БисшестВсЄ дежтсКвова састиааНах КУ асрсарісиз ксваавсвса «втнванаан посвааїсяї всззазсвиа Ззккінееиса зва длакаканив стсвіассвс атсТвсвЕсв Боїавдстес веБіссскта ссдладназвї Б засатсвстр хаастросста ївсзазсевсе ввсснівссв сспсакстаз веасресваа З
І аствбвЕ вдосваєнїс фесавостви асаєстіктісв всавсазаває БеТКНІВКВе а ззакитився сствіавсах вкастасссв сеспсївисв сакрачвасєє ардасвайтх «86 ввскВвіакес зваснісксак ассіжвеакї овакавевкск втвставтаєс апвасіввіа «850 сівсвЕЗКаС сЕЖКТКЕВЕК Басрясвсвс вЕвсКеКВоК стеввнсаєс асстиееЕк 728 звекзікррео ізавававс скревесркс серсввсвса сере аке Кррєтросва 758 жансавсат всссвніазан зновніваас фвсвсснівн вВивасабиек свісбссвє ща вагажассви азпсвиескх своетзиввЕс вісвасвеке ссжсжттавс возсатяїс Зав зксваквтає саввоствсвс ссакксстса васксккреки вов'свосвЕ сактаавтає зав
БеавссвЕса зкзасевесвеа коштвосвній сакісквікв ствактессве састаиесни ї5гй кааветанна сабзавікиа вввиааток бзвсотвозав Кекс расреєотев їв кксадсвксв зафЕсснсви всаввсТвЕ Кстаєвсваве сасвствївс зЕссваВЕНе ій «асссКссре зржассноак виссавевах совевесве зтассаест сЕВЕКОССВИ зви васвістсек ствоввсвах вссакнвЕки сававвніса сенВаннееЕ кералівні Бо вухасквіти серсасішас хотавтсков віксіаквсв кіс КО сав саввсае 1337 а З817 31853 Бедценпсе БіБКІЛЕ «3 ХЕ «31 3537 «Зх» ДНК «2335 Вірус чікуВвгувья «330; ЩЬ тасрановся саавкзнівак сссовавсвев віндванішк свтасавиас ТствдЕсане ЗІ звассЕНОСт асарссссвї БЕ СІвраб вірдашсттк сиїсвВдшсає ФКтВЕОВССВ 128 зснстчссвс Тснзгтасаї свовіврсвав їаглазвссн тевїсссвіЄс фсосвкасиКе зва азвівстівсн ВЕвсзисаняа ЕІвсваввяс лдарлдсстя: стдаєтаєви стЕтавввкс жу яжеаствасв петасосеєт ситТКТшКрес вЕпЕссХаєе ветккТвквВа сакуваванї З аксвсжниінз япраарсаса Креквакнан фссрантса ковозвасвра ЗВЕКТвеВКеВ За
ЕсвІаєвзЕки сссаквесєвсо аїссвсаїса всоквавстєс всрлетета ссовдивавх зга заквтЕвсте тавїскремса Хвсавасрес дахсакиссв ксвсзвіква везе УА тес твкко киссазтккс ісзвоссівк зво Екко всанкадвех секр квкає Зав зазвясвнсв хстасваєат ввасіасеск сессії тсвиєв савкванасс знрасватеї Ба внквасвксс азаніснсас востванашє шаввасви ії сівссзасеє всазствнха 55и сівдсвданяс сріссвснвЕ аснвінсвс вКвссвтасї стсврвиясє екстнНоіє 72 заатвттвис хзазавзасв авшнвсяїсв строздсвса спавсвссатх фТрострісва 78 зтарслаєсва вессквквав авсватнаас їнсозссвтав явевсаїдес КВфсксоВго за квсетассия всжсряессТк сестарнккєс вЕсВНсВсНо сажсттеаас врасзевев пов
ТрЕнавеєвс саксспвеає ссвобескев квессікнврЕ вектавсоа свікаваєвк ЗБ дканссєврех звазакисаи втвіксрЕке свіїсрасра ставескоснї свехаєтеве 38028 казвстраас їанааріава зврозактсї свзЕхтрсава фсжежККЕ пасив сива ЧУ весвасвсси аесіссвовх Фсвавістя: хствесвсави басвзскине адоснаніве МВ сасссассва зароссвтат завіса кевс серисвесає асвосвеосст севрдусева ї2аВ двсатїїсся бізсвиснеє несакрнисЕ садаенаіса скошавеких века ї2Ба
КесВесТЕМтеЕ свЕсастрвак состава кВ Вінс тнквен ВЕТО ЕКхаВ сайКе ВЕ. 317 чтеїйх У «їх 383У «жи ДИ «8332 Бірує чакунгунья в'я? зу бефютие БІ«КІЛИЕ «айоМ 857 тасианівся бавсовіяах сссязасвов вібняантіас свіакааввє кехвиссяа «В вкзсскЕнеск асвресссво кЕТакідквЕ вівнавствс бржсквїсве сттрравска 1ха пекстаксвс крат Евсяс сзскувекЗЕ Хапзлазссв ТЕВфсссвтс кесижасие їв навтвссдск вхавсовсакиа «свкаввкас задзвскіас скрегсаєсви стяквакнЕе 75а бісвссвеєск фесбасксаке свзікеедкис вЕсвсствок ессіскесви свопранває зе вес ктва вправо) хеідвовави сссрааксак шеваевсава ВСкКрсвеса зба всатасзвяк ска тассвс зїссисайса зекавасїсс вереск сожкаває да заквісвскн іяБскКстква КЕсзевскис Васезінсся бевсаріїза кеасесевай АВ гігсавічнсвк весен КЕсаксстри асассткіск асзатавоавх сек иеККає 38 засваскиск ісбзсевсяї асом св ссссфскиск севвазвасс ввдасаакх «58 кЕсласВісс зваврісвсак яссткзваве взарвскісї аквохвихвс всавсткака о сКдсзнаває снссснсвни касвнівсвс рідконівсЕ схсенревис ВістрВеЕе ТІВ занізсїрЕс іїзавонасск ЗрвЕнсВКсв сснеєзновса свревкоН сресіксва КУ зквесавеза зссеевтани зок ваве срсккскізи вявасвінис сВбсссВіє НІ васзувссви зелене ссї тассаввиїс йісрасвове свісхтіавс двраєсвтяеся За
ТЕСЕСНЕТВХ свесствеве ссакссскоВ дасіжїкневи всржанссяї сагіззаайак зе яспздескажиЗ првапресваи птшЕвспИитЕ састсввіна ссласрссих састатєтова захв кизаствасз їзвазеіско зешкзвасссох савсінсвасв тТоКссІВеК васивсесев їізща кесзковскВ авікесвесве веаззВеКВх фФствсвсавв ЗвосастівЕве засос 388 тахсквосяа пвраксахві звксозваксає ссвровіосас есассаскек свв саВ 128
Евсатїтссв сіасеВснаї вісаїнярік сзиваквісв срвевекквх вакавокввих ї25а
КІсКсТЕЕТЕ садесВстИах сстватсвтв зеветафвсв крісдтКеав сзнвене 13 «Іа ЕВ аа ар; «ад ДНК сій Вірус зікумтуньх «вбах 35
Хвосдавсеср хаваоЗКТваЕ сковавсасв рівреанта: сетанзакас тожжетеває ка
ЗВаЄсРЕКЕЇ асакссссвт веЕпвітенаюк атнренсває авіскрісво «кіквеайсса їі58 а 2217 11851 Хецрейлсе Гі5спа всисінксне Ктреєтасах сзсвірсняК тасзеваски Кевксосстс сссріасвти 185 заніс квчЕ ВіВвсарозна крови нраєс зокавестьас савасівасве «скневаввсо Ай зкеаствези їЄкаслеаи СВІТО ВЕСВСсЕсТ ВТК уВКВа сВосвВааВЕ хе зснсзаїїва всраналснся ївтаренаах їстоаззЕстї всазавасада ВЕТО КСВССЕ ї58 вссізсавав ссесесвоснє вісврсвтсн всвазнсвсс невксктКЕ ссовакнаане йІх ззвсактаети КаЕСтреста свствасвис вассзсвссв псасавівав вевекосане ав тстВісстни БВссаЗТВІс сісскоствВ асвоссвеи всазсааваВ Все ее знавнедаси боїасавсах вдасівсссв СХ ТЕсресв саврваквос авиасважкі. «ве
НІЖ зсаКХс ззавстсвбає вссрдеваКе аевжасекої зішоссавсає ТСВЕКЕдККя ов сіасввакис кавсзаєвЕв сапешквсає ковссвтасу сісзвиевох аксКквсКК 735 зввквІжнис свазишазсв закаЕсВТск севеовнсодей педесассвКх скрткиссВЕ 785 аск свасзи асссретави вествтавах тЕсЕссВкиВ вроазсаєвеє дакфкисаке що квсаївстив зідсвЕеЄсі фастанвех жЕсвасвевс сетствіває вквсатве:й ща хрокавахзе саЕсстксас Тсастсстіск каст ТЕквЕ воКесвосає сехсаваквнї чео зізнсїзвса зреаавксаи внівсввув сабссваквеа ссавонокВ тассаїїсва іч двансскаск іакзавктави вкивеаітсє свасхрсваа жаксектсвК звсвнесе і988 вІаврІвсся аКгтссвсвт всвавстртвсо беосзгасвав свеастнсво зпесвеатиє Іа саспестссвяє авиЕассвВс знссзВіїас ссавсвесас асвсснессї ТлоБасссав їгой вазвтійаксст сазсвнидах фЕсІКнЕЕсЕ савевЕаїТе свиденнавт здав авьь зва віквемнеи сккесккзає Кетаакткев вішак с ТЕЕсВЕВКнр сваккає 1317 сита» 253 «Ах Я «хай ВБІК хиаа» Вірук чіжунгувив «вах Ух
Ту Бі нік уаї Тнг Уві їі бро АЩа Тйбомві щі Уві Бго їук Ку ї 5 ів ї5
ТКгоішжн УВІ) вва ев РгО у туго биБ БР МОЖ маї без и Же 535 х5 25 за а 2417 11564 бепцепсв БіБЇЗВЕ маш бій Бек маф ТМгоїву БІБ РРО ТК оце) бек фе Ахротук Фа ТВ 3 «в 5
Су 3 Тук бух ТР Ма) 1318 Рго его БгРО їує Маї Гу сує Суз БІ
Ім КІ щі
ТНК АїВ БІ: Сує бує дер оіувх Бек оівц Бро аа Тк Хв о сСуз бух Мі 7В 75 на
Тве тре щі маф тує Бго Бра Мех ТР 531уУ БІ Аз о Тук Су ВВЕ о Сує щ5 ско 5 а5о ві пів А«ап Тк БІ Бенц бек Бі) Азз ніх чаї бів вуз ес 1 ща ї85 315
Зег бує фут ІНге Бі» БВе Аза его АЇВ зує див дів Ні ТВ Аза Бек ух 128 Щ5 іа ЗеР дів їм Бей АКЕ ОМаі Сен Тур Біб щі ди ба 38 тт ма 3138 З іде дій АіЗ Тує йіз без Бі; АБ Ні дів Маї ТВе о Уні рУу5 дв Аза ув 155 їх8 зл їб55
Ве меі чаї БУ РКО МЕЖ ее беб віа Те ОТ во РНе Ах Акн гу
ДЕ в 375 їі Уунф Уаї туго вує 53У Ав Уа. ту дз МежоАкр тує тва рга ре і58 ї55 за
БІіу Іа Бі Ак РРО Лу біла Ра щіу Аз о ї15 ів бе дев ТНБ РгОУ 55 7ва 295 віп ее бує ер маі Зуг йїа деп Те щівй фе аі ів вів Аг века 18 235 в аїі8 АіІВ У тТве УВІ Нік маї Без тує бее бів ліз Бго Зек щір вва зх За а ія: іж5 ук тр вен ім З Яга бір Аз Хек і бів Ні Те Аза бріх
АК ЗВ У а ВУ Ла) Бецренся Бі5Ківпе ва іх Суб бій 318 Дів ТиРоА5а Рго УВі Ак дів Уві Азп о сСує АВ ща 255 В
Узі 03у депо їіфе рго ТБ 5ет ів Акроїїв Бр дер Аза Ада Вре Так 75 зва ВЕ дев маіф Увь Абр Аза без его узі Тве Ар о Меє хаб оСу5 іч меіф РРО
ЇВ хО5 зво
Аїз Су» не нія бек 5аг одяр впе бі щіу Ма1 Аза 18 Ті туз Туг за зів 335 га
ТР АЇВ Зак оф уз мух ПТУ їу5 Суз а3а Маї Ні бек Меф Тпб дЖв дід
БУ Зий 5
Маї вк жі АгЕоЗій Дій Ако Уві БР ча) 03 Б3у дай 5еб ів Бе) за За за іп ї3е беб РБе Хее Ївгб діа ев діа 5еє дів біз Бе Абе ож вів
Зк ЗЕ за5
УВІ Сух Бек Тр біб Уа) Ні суз із діа діз Су5 Ні Бго рез 1 у
Ка 875 за
Акр МНіз Кіфе Уа) Ах о тТук Бго Аа бек Ніє ТР ТК гео іу мні Б1и ах ЗОВ 395 «а
Ар Оз) ее ТР Те Аїз Меї бек їгр ук) бів офух КТ Те б1у б1у 485 за 15 ча3і Зіж вес ті уз) 8ія МАаї Ді Аін іа 315 зи їіє Майї Уді бом еВ 425 аза
Сук Уві ек рів бек Ав МІ 455 «ах й «23» 435 «лає БІНОК «233» Вірус чікунгунья «ВЗ» ока а 2817 1563 Хедцевсв рівне
Тут біз Ні Уді тТнгб ом) 39 Рко деп їТИг Уві іу маї Бго тув гук 1 х іа 15
Твгоїва Маї Аза дк овВго Б1Уу Тук Баг о Вбо МеЖж аб ев 3» меж бів 28 а за їви Мед Бей уді Тк обер бі ріж Те Зо баб оіФеБ Ар отТер Х18 ТВе
Ух х ще суз бі Туг бух Те омаїф Кіа Рг бак о Бро Туб ЗАЗ їм Суб» Суб піу
Тв» ові ін бух їуз й5робух деп без ККо Бр тує бе» був кує М ех а 7 88 ве те біу Ма) Ту РКО БВ Мех Тер бі Біу дія Тук Суз Ве сСує
БУ за Зк
Ар вів ін два ТР бом 5ее біз АТ Ні УЗ біз ж бек ІЙ їв тах ца 5ег Суб Буб5 ТИР оБіз Ра лів бек йів Тук Ак лів Ніз Тве Дів хек 115 135 125
Аза его АївВ фуз гео всеж май їжа тує віза зі дов вух їз Те Уві ща хх ща
Таб АЇв тує іа Аа бім Ар о Ніз дів Заі Таб УЗ Буз йзб АЗа фу 345 за УМХ Уе те ї3іе Уві бтТу бро Меї Зебобеє Ві Тер ТвРе о рБго Ре АБО АвЛ ух та 178 ї75 їз МУаі Узі Туг Куб БІу Яхр Маі Туг дев) Меї Абе Ту Рео Вко Бве 158 5 їз чім діа щу Аєр вро у біб бе ЗУ Яво Ге 3 де" АБдОТве ко іїз5 ав зах
То ее вуз вза чад ТУ Ав й ве дій іш аз Бей ій АК орга 215 Т15 ЗЕ
З 837 135855 бепеюпот Ківі ак
Аїв Аіїа «ФіУ ТВг Уві мі уаіф Вбо Тез бек Щів АЗв БРОо бек Щіу Бе 25а ж зо мук Туг ТРр обо вуз йім лен біу жів ес ге бій Не Те лів вго а га Ка вне зі Сух бів 118 ліз Те одеа Рго Уді АкБюодів Меї Аза Суб дід
Уа зх 27 уві Фіу дЕВ Майї Вро ї3)в Хек тів а5а їі бо дер Віа діє вне тВге 75 зве ТЯ
Агк Уні Ві Ар о йіа РКО хаб обєм Твг др МВ сек бух біб Упі вКо
МОВ дв Зо дів сСув УК Ніз Бек о5еб Ахр вне 51Уу біу Ууаіф дів бзе 116 губ ЖК
БУ Уа Зі заз дів узі баг фу ке Чі бу Се іа маї Ніно оЗее МОЮ ОТВЄ Ав Віз 385 БУ 35 мах їве їр5 Аг ЗБ дів 533 3 і чаї 515 БУ вм Бек ів ех
Кен) 345 В бів їе 5ее БВ бек о Тйг Аза Меч Аідв бег Атфа Біш РВЕ АР УВІ й
УВІ бух еп ТВР о йів Упі Ні бух йіз діз 51) бух Ніх БгРо Бго вух 378 375 за
Ав ніж Ті шаф дев тує рго Ата 5ег Ні ТВе Тве фен бзіу Уві та
ЗК: 356 ЗЕ до
Я5р їі Уагодів ТВ діа Ме бегс тТкроуві Біб оіує Ті ТВБоБіу дід ща аа 415
Уу«і Біх пи Мві Маї Аїз Узі Аз» діа зи тів без Щ18 Маф Маї ве) ща 45 ІВ пу та 5ае ке Зег йде НІХ «т: І а заз? І3О5 бедуменю ТЕКА Е «ках ЕІ «клії1х 439 «іа БІЛОК «2і3з вірує чікунгунья «ах ої
Тук він міх уаіф ТНе Хві 118 бко дев ТАВРО Уві піу маії рго Туб Кує і п їв 35 їй оре маї Ачп АРК рго Зіх Ту пев оБго Ме узі їз 53 Ме а -5 ЗВ ійм Сен беє уді ТНК бе БІ БО ТО іеи бек Бен о Ахр о Туб 18 Тве 35 за 48 сут іш тут іу5 ЇБР МУз) зе бе жаб вБго їук Мах їж Се Сук ХХ 5 В
Те одія сіб Су Гуз АБромух деп ів) БК Абр о тує бек осух уч Ма та 75 33)
ВвВе тре Біу Ма) тую овго Бе Мек їв дім зу дія Тук Сух ББе гук 5 За 5 мар о Аїа со Ай Те бів веч бег б) Аза Міє ех бій ую Бе 3 і8а 185 116
Зеє Суб Куб ТНК Об: рве дів жеб А3За Туб лгЕ дів нія ТВе о Аї бег 315 за 25
Аій хаб ліз Бу ри веж омаї іє) Ту бій ЗБу Ажха Ай Її) таб У ща 135 145
Тв» вій Тук Аа Аза бі дер Ні дія мі Таб чаї бух АзвоАїа уз 155 З 155 зас рве Щ1те уві зіу Бго Веб обвге Зеб дід Тр оте Бго Бе Ахо Авпй гук 155 ща ЗУБ
Те ма3і маї їж буз Б3іу йзв Маї туго ви Ме Ахо Тує Рга гру ВВЕ ї85 185 1936
З1іу Аів Б3у ге Рго Біу бій Рпе б31у Ахр Хіє іє бек Аг опе га а ді? іні бециепсе Біле 155 2ва 2а5 біз бегоіїуз два мді тує дів доп оТве чій сез Уві бен ців бгЕ ргео
КК З5 лай дів дів бію ТВе омаї Ні мазі Бго Тує бвб бів Аза го баг піу ре
І 335 248
Муз ТУР Тго сем бук ід Агв б1у Аза Хег їв бБіп Між ТР обід рго ях ав 55
КМе Бі бух біп ї3є АІЗ ТВе дп Ро Уаі АгвоАїа чаї Ахв сСуз Віа за 25 та уаї БїіЖ аза Меж ва Ті» Зек 316 йзр їі бо БТ йтїа Аз кБбе те 375 88 ХВ
Яке Уві Уві пр дій бо бек обем ЗВ АЮ Ме ее Сук 16 Уві мем зов 295 За діа сже Паб нія бес че дев Ве чі пі Мі їз Хі Те бе» Тук
ЗВ зб ЗІ з3а
ЗІЗ іа 5ег іу5 був 01у бух пух дів жі Ні 5еє МЕЖ Те аби Аа 25 їв ЗМ
Уві Тег їі дк оаіз і» віч їі щів Мат бій Біу Ах беєб Бій фен
ЗАВ ха зай щій Тіє чек обпе Бек ТВе олія ей діа бек Аза Чіє рРівб Агро уві 516 255 3658 Зх чаі Су Зб ТВе БІВ Уа) Ні5 Суз іа Аа бів Сув Ні гро бго Був
Уа У а
Ахр НІ Хі Ма3 Ай тує со Віз Зак Нія ТНК ОТБроївм бу Ма Ів
БЗЯ КН ак зво зв тів баг лів Тнг Аза Мої хегоїгр о уаї Бі» кує дів Тк о Біу о1у яв За зі5
У«1 Бі фен узі Маї Аза Маз Аіз Аїв реа їі бем тів Уві Ма ву з ші? ЗОБІ беацелств фАЗТїИВ ага. 325 аза пух Уві зве іш бек дкв НІ щі ху 5 ха1їУ 46 «1ах ВЕЛОК «45 вірус чікунууньВ «вх ех
Тук Жіч Ніб У«1 ТВ» Уві Хіе Вго Аєп ТвгоуВі Ф1іу уві рго Тут зуб 3 5 ї5 15
ТВ о кве маі депоАгЕ ргОо ім тує чЧев Бро МОЖ уді їв) бі меж 41
КЗ. з5 в їн ів Жак уві ТБ огецз ші Бго Твр обєм обеє ів ойзр о тТук Ще ТНе
Бе чи в су пін Тує ре ТвВе МаЗ їіє без бек обро Туб чиї бе Сує Сума 51У «а ч5 Ба
Твг о Аів б) Су СУБ Ар офуб дев сем Бро АБО ТК бек бує вух Уві п та ху ви
Ма тв зу мі тує вВко Бе Мех Трроціу біу АЇа тує Су ря Сух рія за щ5 дав Аїв Бій йза Твб обіз іже Беговії Аза НІ Ма біз іме Зег БІ 158 155 за
Зах Куб бух ТР ОдФію Бе Аза ее Дів Туб Агро Аза НЯ. Тр оаІів Зоє тв 1258 125
Аїа або йі іму іо йгЕ Маі бен Тук Бій бБІіу дп дк Їзє ТвгоУді 358 35 зкв
ТНК АЇВ Тур ліва дп оіу А«р Ні Аза Уві Те У 5 Ахр о Аїя фув 345 15 НУ й
БВе Хі чаі Біу го Мех бе баб дій Тбд Таб бро Бйе дей Аа Бу 185 175 ТУХ а 219 1306 лейуєнсов Цівтіпа тів Ууйф уві Тупг Бут 3У Абр Узі Туг деп мех Ар оТує вго рео Бле 188 185 їва іх Аза піу дкЕ го щ3іу біп РВЕ Біу ар тів бій ЩегоАгРя ТВе го
ВЕ 288 Зщ5
Бі 5ое бух Ар уві Туг Аїа Ахо ТвРобівп їв Мщі івз Б3й агв ро 238 реБя 28
Аіз Уві діу тиг Узі Ві Уві Бко Туг зве бій Аза Бео ет Б1У Вле 22 23а «3 зав
Муз Ту їгробеб іїу5 бій Ре Піу Дів бебоїем іп Ні їн іа бго 45 ї5о за
Бе діу сух ів тів Аза Тс Аха Рез мі АБЕ о йійп Уа дл бух Дів яай бах Ка
Мазі віж Аза Меб Рез 346 Хов їіє дер хів Бо 1 Аза АЇВ Бе Тве
ХУ зва ра дги охмаф Уа1і Аєр Аіз Ре Бас ви ТАБ ОА МК Хег Суб вію Уві вео а з БУ
Кі су» ЗБ нів бав бог Азв вве бфу бу уаі дів 36 ї38 Ку Туг 385 У 35 КУ
Афа дів озее груз бух біу бух Суз Азія маі Мія же Мей ТвВе Ахп АївВ
Ай 33а ЗЖУ й
УВІ ТвБ 1183 дгвопім дів б3іб ї)5 Бію узі Бк Зу би бе бів Щео зай за з5а бів бів зак Бе баб ТБ ОАЇЗ рей Аза баг АЇз бій Рве Ася мМеі БІЙ у ЗО зав
Уеі Сус ек Тв обі» Узі віх Сух дів йїа біб су Ні Бгто Бро Ку
КБ. Ута Ука
Аве НІХ Жіє Уві Азп Ту" Бра дів беконі Те Троє; бБі1у маї 3 їх зза Зч5 За
З 8857 11853 беоцзюпсе Гі5БІВЕ
Азр оїіж боб А)в Те від Мекобаеє Тро Уві Зібй ву 12 ТВе біу 0і1у ах «а 315 чаї шу ер уді УВІ діа Уа Аза Аза меш жін ев Зів уві м) Бей аа дах чх8 бує Маз беє Ре Зек арк Ні 35 «33» 563 «814» 233 «Ваз ВІЖЖ «ї33» Віврує чікунтуння «во» 565 Й тТук біз ніх маії Твеб о маї Тіз Бро йза їде Уві 5іу Ма Ре тук рух х 5 18 ї5
ТНБ ів Уві деб дек рко І Тує 5еб реа Меї УВУ Мей Фів Ме и во, Х5 за вн ія зое ма) їв ож) 53 бро бе «р бер рем др о Туб 138 Те 35 за БІ суз Ба іє бух ТР Уві Ге бгО Бег Бра тТук Чаї бе Суб Суз у
Ба тв одта біб Сук суб йхрогух бев іщо Бр бЗо тТуб Жав Суз тух У 5 в 75 на
Вве Тег обЗіж Жні Ту Рго Вре Ме Тр ому Зіу дів Туб Су Бе Сух 85 За ж деротве Віз Бей Те Бій іо Яке бій діа Міс маї бій бух бжг 031 о Що ща ще бух іух Таб бів РБе Аа Зек дій Туб ди йіа Ніж ТНг йзїа бер
ЩІ 128 На дів Бер АЇв їу5 ни йгв о Маї ів Туб БІВ йпіу Ап й їЇ1з Те мах
М хо 8 а УВУ 1051 5Зафевсе їі діж ід Тут Аза дев пу д5о ні Аза Уві ТвгР ові УЗ Ар ді ух ха КУ 5 158
БНе 116 Маі бі рез Меї все бек АЗв Тв оТВе ВРО Біне Ар дай Гуз 1855 ТІВ 375 їі жі маї Тук вух МІУ АБО мні Тук АБ) ВВЖ дер тує рРгш Бі вне їва ї8х ча щу ліз біу йгЕ Рго піу «іо ВнНе біу А5р їі бів бак дев ТК ОБго 195 285 255 цію жег Сі)» йброшаї Гук дія АКА ТК бі сво УВІ блащ па лем Ко кі АХ ХО хеб діз Б1у тк охві ніх чаї Бго стук баб б3)й дів го 5еб у вве же5 а 235 2
Куб тук о Звр орви бує ЗМР АКи Біу АтТа его ів вій НЕ Вб Зв Рг
У а Зк
Рне ві Суз БІ Ї16 а3За ТЕР оАБи Бро мазі Акр дів Меж дбя Су АД я З за мні БІіЖ аха Меї Бео тів баб оті йо Сів го зв одіх із Рв Ве
АгЕ Уві Маі Ахродів Бго Забоієбц ТйгодЕр Меж бе Суб 10 Уві ее яна ле зай дів Сух ТР о Нія БебобБик Ар о рре бу Біу Уві Аза ї3іє Т1в вух Тує
За зе з: ї2о іа Азз он туз бух біу ух Суб Аїд чаї міх Жеб Маї Тв: Ам Аїд их За ЗИ
Упі ТВг їі Ягве о щіз дів біс ї38 Бій маф Фів біт ав Хеє З31й ев зай зач За зів тів БМае Бі Жеб Тег о Аїз Ком дів бегб їз із бе Агро мВ) За зх В 355
В ІВЕК лІвІ 5ецьансе Біне
Мазі Сує беготнк бів маіф Ні Суз ВІя АВ ПЗ) бу Ні реа бро рух
КК 75 ІВ
Ахв Ніз Хі Маї Аза Ту вго вій Зек з ТМ ЗК бем Бі м) вра
Зав 95 до
Ахрої1о зав аїа Таб Дів Мет бЗеб фр оуаї дів уз 216 Таб ау щу «а за 15 чаї йщіу мео Мазі зах Афон) Аза аїа вен жів іа 316 У маї Кам що 525 жа
Сук Уві Бек РВб о5еє дги НІВ
Зх5
Ох За «231 «Ух «213» БІЛОК «3 Бівзус зікуюрумев «аайх Ба
Туг біз ні Уві ТВг ові Ї1е РГО Аа ТБ ові Біу маї ВРо Тук вух ї т 8 15 їБе їв чаї дей АЮ о ВгРОо Б1іу Тук бас бро Мет Заї баб АЮ Вех ді а рос за ес кем дес уафротне бе) біб Бго Ве фер об фоез джа о тУК Ще Тве а ха 45 сук Фо туго фу Так оМві ЗБ ВБто Жек без Бук о маї Бук бух Суз щу ща 5 «З їТнг Аза Нв Ск бух вази уч баб фер Бго Ар о туб сек осух гух У це ЖЕ й ха вне твгоЗіу МЗі тує бко Бі Меї їКв жу «іу Дів Тум сух вве Сух
Ех що 5
Дер Тк обі Аж ТК ос3іп івц Боб оЗіц діа Ні Уві бій їук бек 51 за 3185 й в 2817 163 Зепиелсов Бі5ЩАр его бу; Бу5 Те б3іє не Аа 5егб Аїа Тук АБв Ажа Ніз Те АТ дег 335 їх8 125 вів аєс Аїд вух кас йсв Мі Бем о їує Зп Бім Аха ба Уві ТвВе Уві 338 135 за
Бек Аза тує віз Абе іх Ахв Ні Аза маї ТР УЗ) Ту АбВ дів ух ї45 ї5е КЗ ї58
Бе їі Уві іу го Меб бек баг? Аза Тгроїле бро Не АЗр ода тує 1655 Її Туя її Маї Маї Тук іїу5 Бі дв Уаії тує дей Мет Аз о Тук рга РРО ре тв 155 1935 ві йіз зіу дея Бго бі бій бле З1у Ар Щі Чі Чег аг ЇВР без нас зва 225 ім баг Фін дер оуаі тує діа дУпоїве Бій оцва чаї іо бів аг вРеа я 535 за хви одів с3іу тк Уві нії Мві верботук бер обі дів Ре вве БІЖ вав
Ка з35 КЕ ай фує Тує Тер їку ух ім Ася бі АЗВ бок їз 016 Ні ТВК Аза бе їх 258 зк5
Раш Бі Суб Зіб їЇ8 діа Те Ап о рго ві АкЕ дів Меї да бух дів 2856 ЗБЕ 27а чаї Б3іу Асп Мої Бго Їфє баб ів ар Їіе Беб Ах» азів діа ве ТВе 2К жа ЗБЕ
АГЕОМВІ жа Аз діа вРо паб фев ТВе о АБО Меє бе Гуз Біц чаї БУ 18 Кух тає Міб Веб осеб бро вае сїу О3у мі ала Ще Їїв фе тут що ща ЗІ 38 дів діа пеб обу» уз Б1У бух Су дів УВІ МНіх беб Мет Ти» йза дів зач 38 35 а 217 ЩО61 Заацилсв РАІ Е
Уві тТВе тів дея 515 Аза бБІіШ Тік 01) УВ) баб щі дей бек ія Се) 533 хАх За ціп її зе Ре Зегб о ТВг АТЗ зу Аза бек Аа ів вва вгв МаХ Фів за 355 уаї сує Жег ТИР біт мві Мі Суб Азіз Аза сів Суб Ніз ро бра ух ута 375 зна йзвонія їів ма) йзл лук бе дів зеео НЯ Пж Те зем іу мах бів
УКВ За 395 208
Аза їіє баб усі Те Ата Мек баб оТгроуві вій бух ТІ тТве сі 519 м ща 15 чаї 03уУ їз Уві узі Аіз Маї Азївз Аза ем їз во) їів як ай Кеш аа ах УЗ
Су чні баг Ре 5ев ака Ні в таз» БУ ха» ВУ ка4ї5з ДЯК хЗІЗ вірує чікумкуюия хана» 25 зіазмааке чкваствкаа Вієта кває вдспакавееаєс ситасетввє сао 2 касінквкав заренсзсіс рідсоаквик сссвтавско Єзвавсясах саквавсвав їаа нодасавасе ндасвстназ закссзнвтх сої Кксавв Ховкавкава ракеветвах АНА звсісвіваїї вдассвавої ровіївнсатн взованісна Хросавоава сВевиввания зав весарескві сіксвакзає штсвдсвссв троазскайта сЇвиласнах вризсвектє зай вісстрЕксс рагвісскова зяеввазаєсє ссврасветве вастсасіва севтаркази ЗА ковЕксйсь сакдтаєвсв ссоакесве свевасвої: сбксдасавю скрарзалва яд їхжсактссс вассксавсВ свебвзданва стассттркз всвсвсвсвх ясзнавсвос ака
Есідсазскк ссракнакаї звеквіасві відсссссав асвссссава ссвсвсВіуВ 5 яКвксвсазс зв(іссвосва срізавваїс зсзрісавка штсзкаскиї всектасвай зва
Квізасінсв якЕасісавза свазрваст ассасквсви зсзазоінат саакватуне «ва а 2817 13581 Звооелпсе ГБН заретсвакс звтросакАдс свсрросвсоє зиссасвазна звінасадтяа тавжтесссї ТІЙ сЕдвксссВс ВсЗатретвв асісрвнКаЄ «вавевавиа завккенаак сов Ба «Крвсвзаїн тнасвівсве ввтнссіази вславиаасс севассвтнас атясвнавиа 845 зассоазвдтсв теафествех дтіассстдас сасесвасве тескджсета ссввааТаКе БІ внаровиазс сааасізеса враввастев свасисаса зразижадає сарексвасе З
ВсЕссвастя зздфасіпяа ватсясВіви ввсазсаасе Зрссвтвове та квАКси 1025 «звттвісса свавсдЕсас ввсссасдвс сасссновтя зкатааєхее реве тавв
ЕаДстЕКасс стаскатнах стра вЕВісзатвв ссфсвЕкснт аск Есе ЗА аснЕтнЕнін пНЕОВЕіНВЕ Ва НІВсаТи ТЕІВсВсяВо всарятксах гесасоріве ЗхВ5 квасктрасвс своеавескви сЕжссскео стдектаксо свактятвеки с«старасної 12655 кита. за клі» соб ххх З хх» днк «йЗ» Вірус чікунгумев «ча ЕЕ звиїзстазив асзастєтаз вуста аза всїасванас свкаїсквве їсвфщесї Бе кастнсвнав аванс сіс зінссасави сетакквсаї сведрсвсак сарзавеєав ї35 всазсдвазса вазсстеве зайпссчентя Тесїбреоениа ссшнкекава вВахакаукає ія зпросвоскВ М весессазнсї опетвівси Васзиссвка свссввсвва свореавска дав кссквактдс ск твардає стсадевсся Кдсогсраїса ссвнрассаї ВнЕзсаНя Зра зікстсексес ракрескває акракараєси ствесавтвв кагстасвкз сзвсвразай ЗБ зісавссаси сакрсасвса сеовкЕссий свідванхво ствЕіваїани саврЕнаеве зга тус дессасваєв Тнетїаважне кізссткса вововкВскЕ ясаевсвся 55
БСсЕсСВСКЕ ССЗ завеївсаї зівскоскак втаскесіна севсвснсіК За зкиасвсенх зністресев себизаватс всеріївати висакзсвиї весевисасвая аз тисайстяск вевВсісзиа слані звсазссвсай асвасефиаї свабсзаєтвс Ба завзаєстваєс прідссаквс свсвитсвеЄ звісасваиа зитедіІавка свати ТІЙ «(арт ссерде візасвстри зскорнввас скіайзвиза звактсвасак сссайтесса тва тідЕсазвсе іївзсіївнсак звсрсосазай дозанвайсс ссоаєвикває вквевкаава АЮ а а) зла) зецднепсв РВУЗКІИЕ зассвавтса ссаївстдек шквіссткас свіскдасає СКК КевЕВасВЕ ОВ впасявваас сазвіївссв сввквадтни КіІвасасвсе акваввади? квостТкВК зла яІвскісів авбністИв ВІК асітри крсазсивесв аассаквсзв ктастаКесЕ тяга савинїштста свавсвБеТас СВоОТСВТКОХ бвсгсеасвев явЗтавтске каста зо навсівЕВсс ссвостасває твіайткаєї врЕВссВВІВВ сосні сНі КОКС з148 зЗіжнівниса саксаксевк касЕТВІККИ ХвсоноасрЕс шсзвакесаї квсессатає їх5а рзакіаатас садвансоає сксКссстЕс ствКтсевеє івсІатвЕКв срфсзваВся зхБ5а весвааЕхв За «аа вв? «ії два «АЖАх ДНК «33 Бібує чікунгуввя «аа» 257 звсассазее зсазстісва кіст наз вссакведає снкаскіне Кос еє 58 дасівтврен заноревсто всрссвіант сеснтансас ізраасвсяє свваваєраа 138 певасадаси вевсвстваа засссавн Ксссквсага севвавенав паспвасиВе ї88 авссаснаїх вЕасспавсї вовк атаїв весвассвся ТвссзвсЗиа сровоаиаКе КО, дсниЕноТає їХвтаздавс зісеновосв готова їка страва врЕВвоЗТіє зев аккстквсс: деїдкссаза зрЕнраавсї стеВоБВТЕН КЗітсВстрва савсавиаа 388
ЗзКсаКЕсЕ сасштвсвєв ссоєдтїтсве сасрасссто сертеахаро ссввдазаав ха зхасассско вассксаксв срЕіваовак ствссхівов котвситаквт везевавовеє чив шссвееасКя ссвчнанЗУ зракекасеє вкрессосев агаскоскра совок 5 яКЕКоВсанс знісєдвсВа сказані є всавксваєр ссарвскох вскотасває вай тетастїксв кІВЕсісвзаа сової З авсазссасви зсзавОКАаК беавтааити: ОВ звеВЖстщасс звікссаєве сепваксвкс азтсовсзаза зитедевиоє бавоиосх Ей сів севс дізатшствЗ зсствнршас срааавекаа зазсісвсаї скоїв У50 сікасавзаки фавсакрогв вЕТЩсстава нсазкочасс «свсснтвн: ВеВсереава вне зассаздісв їсвівскаск вевієствВс сакссансйс фссткЕсств севиватаєе зав книзвазвеасс сиааоскаїса зизанвеоюе віжеївсвіа визашизанії свткогавіє сво з гаї? їі3реії1 зЗвдцепсе сіб іпе вкЕсскЗски заренсісре неесвсвеве Внсаасвисе зоссліатва ВКВТКИЕссВ і82й савіжніскв севасввівс врсссабреє семнсксаєв зресваєссю ват Каєьах 1988 вавстініаєс ксвотвікас Кртартїаві: віюїсвевтне ссзсвікевк востссєвКсю з1яе зкертквЕха ТЕрсароквВ варів фнкрсвскас вкенвЕнкаЕ сесавссвках зо
Казстизсас сараевокас сресоєствкк свое звле сазквіневи сайолрасв Іа севавися : 3253 ких ж «віх 19355 «23и5 ДМЕ «я» Вірує чікжнгумья «вах сБХ звсзссазнк всазсітсах фрЕствіаав кссвсваняс саїасвтавс тсВЕКАКссЕ БО
КаІЖвІВшВЕ задивсаохє дтрссаТавХ сесвЕалЕсаАс Їаквасвсак сзразавева 17 ксвасодасв вЕасвскивае забссвивт беслквсова сокнаасада яаскуаснве 150 зассзсвегї неассаввсї деріїбнтате квсазссзса сдссввсавз сесаввоане 40
МеЕККЕсВЕ сТКсварзає атсажевесе кевтасваєта сткрассвак криасвекі зви зіссівякес викніссває зкиваавакт ствасЕжснЕ ваксісастка свекавее зва вВЕукКарісвУк секиіасвса сепекітсяс свожвосстс ститвасани Мова авва го
ТЕссвтчнє рзссвсврса сврізавнар севскікоа вевсвасКЕ всвКаревоє ше всснсааіз «севавшарах зкевЕевсах аброссєсве звсасесківа БЕрсасаеа Бо зжхвкІасавс авкссвисва сесванрахс асвиксваїв весввасве вевнЕвсаве, вах ідтзасквск дінрстсваз снаввнаста всзасіевв зовазнЕвиї Казкаветве Ме ваквітиві": засетсвтвс срсднісасс взатсвсозвав зводевсявка Евастісссй й сккитсксвк Віва ТестКЗ зів Кас свавалвеав зезфжксасаї песвткесЕ тка «квисваакїя базове врувостива всзаркавсх севесрікає кізсвекаай 548 звссезвісв тсатЕстаст віатсстває сасссоваснс фосєтвісста севеазЕВТя зва «равазвавс свеєсіасса звазрванвтиЕк шкватвсаєса здазроаввх свЕриказих За
ВІЖСсВесІВ завивсткоаа ввіхасніви вровасаако врсквтаїзаа ВЕЗТКрЕсКВ 395 казка та сзавсявіас аксссзівВие своссвсВіК вваїзаєтсх вОВісаїкаї за5а варсевтвсс стасізкрак ікЕантанеї кідтсакЕвК созодктсах асфсствЕсВ з14а в ВІ? лів) 5ециенсе БічЕав асвиТВНАТа (Бе ЗАтВНИ БесБТВсаїЕ Есе зсває нсеювівсАє сасасовквї 3389 взастЕвсвс саввзнстає сВжсесВІКс сжовоткавссє кзасатисти сахсараака зсБя вохвавнс 12658 «20» 53 «в» ЗДУ ятІах ДНК «213» Вірує чідунг учня «ащаз» ЗОЗ знсассадия асаасттсва ївтстаєвав десасванвє секассевк КевВсіртесе кВ вастисЕнзЗе свевесабтс втнесасинЕ сесвувБове Єакавсреак сарана ї2а всвасзвасв квасистюва аакссннеко бооккисава Субраесзви васвкаТКА їва авсслтракі краессваКех векетасвки васзассаев їзссвисвва снсвщеВе гав кесЕкрокаї Мергтаакавс вісвровесса тнсасракев сівквасвах вераєвок зай
Фест рЕссо кВінкссива вежавеВасЕ страсрисвв пахіснсїва севувеваве зва астадісвсї сатвжаєвовВ сссВжктсВс сасвассетс ствТвЗїавИи северачавйс 28
Кіссаїксос дассисввовз «свисаззеВи стассствса дсВсВКасвї всавЗаВсВаЄ зва несрсвесів сснваЕнкеї авайдкіасвс зівсссссав асвсшсетря ЄсвсвсоаттеЕ 54 сівжЕсасває ввтссвнсаз сисаоварасс зксартісзата пксавасвех Ксвеіакває Бра їджзасквсв трас жсааз тклавнаста зіазстзсак аквапеівЗї кзасвастде вка закнттивтє зоабнтсвікс срожЕтсаксе зазгасававз актвксанта квастепеся ща конріссквх всавсисїнв зеіскракаВо сваззакрав аенікевеве ссснеКК тв ктнисаазів теасасвсає вЕТщсстева вснавинаєсє спвссдінВє тав аев кВ запсанвісв тсвевсВесеї віжеетвас сасскавсве тесфвїскіа ссввартатв аа щизвазравс сзластакса зразвантек дпіввкисаєв зваввшавех сесискаасс ка кивсскиств азвшретква вЕМІВсвІВК вЕсаасваєк зесосетасаа ватки с 828 савЕхатсїв сзеасиккас звсксвевЕе сасссреакв зВеївесїх вкзсхакат ї98а кавстдувсс стастатрає ТЕЇХЯКТаВЕЇ віІштсавЕнЕ СсбоВЕТсаАх ложесТВКсК то зінЕівнетТа іївЕсанівКи вас твсаКЕ Хвтнсасває шсвваєвсвї «вовесатає іхща давстЕвсоє «зввавсївс ситет «тТвсткавсс гватаїтвств сейсакавсв Зеба з зя19 111 кесиваце ГР5ЯОК шетваввсхе 3205 каївУ да ках За «вій дик «ВА» вірує зікункуния тащах а за квани зксасктсав срскасаае восвсазває сріакставео зеасфикесх а васіківшаи зависає пікові сссркавснс хадавокках сзказасваа ї2й
ЕсрасевВаси ввасвиттвав автссвноїк ТсСсТКрозав хореваввав васвватває їі8а зяссніванї кизссваняї корка ресвасаса фосвосаве «Верона ай шссВККсТаї фвіазравс кісввсассв ідсвосквіка сфрезаєсвак врекасасек: лав аЕтстнессс ваЗївсксвавз звраранаєт сктизсврове веумкасева свнтанезай КІ зксгавтсасїі свтвізснсв сс саєс сВівазсесК: сфвхИаКаЕЕ ссвдЕнваВа БІ
Укссаїтесс дассвсвнса сВБХаВЕваЗ Стас сТВКсА ВсасртасвЄ шоВдевевсх. 488 кежксваскв севарканях здавштзсас акрсссскви зсасяссвКа бсреасатка «45 асвЕтлвсавс вріссвнсва ївівазиаієс зсавтсвзаїа нісзвасвве денрїасааи вай
Треапсткев БІдасісзва сдазиваїта зссвстасве зіазвитндай базтавктно аа «ввяксвесс авідссекво сЕсветсвесс азтгосаєза ватврсврта казок 725 ствдксскис віза свссра віконна серааздива заисісвсайх бесакккссх 755 стввсвазсв їрасвідсве вретоссєзав всвакваис сеассвжтрає возескняаня ша зассазвхсв окр Екиек віассстрає саосєсваєсвс кестртоста сарвавтее ЗЕ вЕЗЕВЗЕНАЄ свавстнісе ВБаВЕаКІВи шЕВасрсака вразевавай сарековасс зва вІдксдеасти зВКкирсхекн вес асртнЕ врізасзнів авссвтасай ВІЗІ КрвСКВ захо сакстаксса саввснкнтас акссоєвсввс свсссвовїв лезівактсх вата аї зва ренстЕкхасс саєстасрає сксектзКет тсвісавкев сстевктсаї асфсствосВ з атреЕТИнЕКН ТрЕсанТвне вафЕсвВсаКе Хекксовсвах всвраквсяї свсессвеає 1758 вБавсктезвсах сврЕБаретве ЄвТсссКЕТЕ сте тврсє бзаївївсств савіавааса зе детаваася Т2КО «я3а» хл «аж ЯІЗ а 28і7 190) бЗезцевся 45гіпЕ «5385 БІЛОК «2335 Вірус чікунгувья «ийх ХХ бег ївбофухк дер оани Бве аби чУаі Тук вуз аа Те АБе бро Туб кв
З ї: за 35 дів нія Сух рео двробує сіу бів бІу Мі Зег сих Ніх 5ес Вго 18 аа 25 Зв віз ер біз Аге Щі РЕ дея 030» Азв о ТвВе Або бі ТВе о Кбеу фуз 312 48 5
Фіп ожеії бегоіви біб Хів б1у Ї32 уз ТР обо АБр бе Мі Авр Тер в ще «8
ТЕ фу» ям о вгЕ Тує МежЖ Анрочаб Ні їв Без яів вз Аїє і) агЕ вк та ТВ що дів щі ви ївзи МаЗ дов Те очне Ала всо Суб ТВе е ТвВе бі ТВе ца щу
Ме «іу НЯ ВВЕ (іє без Аза Агвосує бе бу» БІУ Ябя Те без ТВе
КІЗ. Її ще
Узі біт РВе Те Ар бег Абе був Ті бек Ні» ТВк Суб Пт нів вго ї35 ЗВ зд па іх Ні сб о Бео ВБгро Уві Ті Біу дек пів АБ ВВЕ нія баг о йгв ї38 135 345
Бго вБіа Мі О3у їу5 іш три бра Су Мекотве Тук таї бів бя» ТВе
ТЕ їх 355 ївБа
Хіа Аів Тег дів бій біч 116 Фіз уві Ні МОЖ Вео Бей АкроТвВе Вро ї855 КК т
Акр о йгЕ їв Кеч Меї ТвВг Осій бів бБее біу деп Уаї вуз бі ТВе ха з15а ік ї-а
Аза іу жів ве Маї дбав ТУ уз Сук дк Суз 51Ж Я1у аг дБА 530
Ж 5 255 в Ява ШІаБь зедуелся БІУКІпа ві фено так тк ТВг оАхр фу УЛ 12 йза йбе Су» Бу Ті дев ВІЙ 23 215 рез бує нія Афів дів мві те Абяа НІХ Бу ух ТР ОО3В Тук аа 5еє рр) 2245 їв ДУУ 24 і2гц хаі Рез Агр оби Аа біц із Бі зр оден ув Бім му Хе Ні з45 т5а МУ їв Бео РН ре бви Айв оби Уві ТВге бує дено Мвії РгО бух Аїв Аге се РЕ 78
Ав Бго Таг Уві Тйе Туб Фі бух ази іп уі Таб оМет во фе; Тук
ТУ 28 2КЕ
Без Ахроніз га Тйб бе іш баб оТук АКБ Ап Ме бу іп ід рго що 5 що дав тТук о ніз бій зії їгбро Уа Тне ніх бух фу5 БІ) Уві тб фе) ТвЕ
БІС 338 Ка 320
Узі го Тве вій біб ее біз Уві Тв о їбр бі Ахи бза біб Веб Тур 325 БЖ 335 іч Ту ТБровбро бій Мей бек ТВе зо Зі Те АЇЗ Ні Зі Ні Вго зав 345 за
Ніз брз 116 Їз16 вв отТуб Тук Тує ЩІіЗ фе; оТує РКО тТве Мей тв» Уві бів Ті Уаіф бек уаі Азїв зе РАВ ах іжи ви 5егоМеє маї БІ1у Тве
ЗВ 375 Б
Аа уаї Фу Мах Сух Майї пух дія Аги Аг АкЕ бує Зі Тк орго Тує их 35 ЗЕ «ва пів бе» ТВе оБро БУ Аз Твб УдДІ РК Бе Бей без бер Бен ває Суб 3 щі ре
Сух маф дев Те Твбоіув Дія з3В а хі 1953 Зедмейсе Б3553пЕ «ЕВ Ж «31» Я «233 БІД «53» БірУЄ чікувгунья «1885 572
Хег Тіє Сук Дер НІВ вве Аза Ми Тур о фух Аіз Тігб йгБ о Вго Туг бе і 5 а т
АЇїа Ніб Суб рго дер бує бі ів Бі Ві Хеєб Сув Ні Баг вто Уа їв 25 3 діз без ій аби Ї18 АБЕ АБа біз авіа пк Ав оЗІу Так обов бу Щ16 ке 4 45 іп Уаїф зЗеб зби ЗіБ ЇТіє бі ї31о вуз Гб о АЖр о АБробеє Ніж Акр Тер а 5 28
Тнгофуз їв) де Тує МЕЖ АхроАбп НІВ Ме Рео АХЇв в5р ді 31 Аг ха 75 за
АЇа Лу кни БВе Мазі дев о тТвК о Зег Аза ее Су» ЗВе фе їй в3у ТВ
Ммеї біт Ні Рае 1і« бен Аза Аг о Кує го бух БХуУ щі Тег оБез ТВе 188 355 ме
АЇїз біж рве Тве АхвоЗіх агроїух Ті Зейе Ні бек бух Тг о Ніх Рг 315 158 5
Рпе Ну Нік дев Рез кго Ма) Бі діт Аєр біш бух бе Ніб Зре дев за 135 1858
Ба ій Мі Б1У АРе ОБІіц їз бео Сук бек о Тве Туб йїа бів Хве Тег 345 158 ВЕ 58 віз від тТиб Азв ім «у ї31е 523 Ві Мф мес обгба бБго д5р Так вро зе 78 175
Ар Аг о Тве Тем Мет беб Бір бій 5еб Б1у дкй Узі бух Іі тТйк Ма 388 3х5 ї15а а ЛЯ 561 Євдюеров Бізе деп бек бів Тео уі Аге Ту фух Суб Ак бух Б1у Ах ер оЗве оЛн їз за 7595
Зіу вям о ївВе Твк Те дхробуз Маф ів Акб Аза бух бух Мі йзр бів 3 215 ха
Ку5 Мі Аза вія Ма ЗвВе йо Мі ЄМ бу» Ткробія Ту дело бог го
З25 23 235 зай івь уві Бро Ак одез Дів Бім Бе іх АброайКе гук п3у Був Уві іє 285 ро КВ ї18 Рго Бе ке фер азів Аа мі їне Суз ке Уві Рго іу5 аіа дек зби ДВ зв дАяй бго твг уві ТнгобТує ЗІТу ух Аа бів МВ Хі Меб вва фев о тТуг
В Ва га АБ Мі БРО Таб ген сем 5ае їуєб Ага би меф бі 033 віш Бро 2за з 383 ази Тже біб 91 51; їгро МА) ТРОНІ уз вух ів тів аб Кен ТР х85 3318 ЗІ БАЗІ
Маї вра їВтб біо іх вои біб ух Те тро оїу дев Ах бра бто тує 325 338 БЖ
Муз Тує Тгробга Вів обом 5еє ТР Ахп Бу Те дів Ні» б3у Ніж ко зай ах з58
Мі біз Хі» Щ1е реф тує Тук Туб 20 ем ТуР Бео Те Меж ТвгоАїа
З З зви
Уві Уї це хек Ма3 дів бег БВ Фів ге із пек о Меї Ма фу Уві
КК ЗУ 55 дів уві ЗУ мех сук Меї Суз діа Агро АсЕ аби оСух ТР ОТВК Бра тув
З зва 395 408
Фій о фен тве бро 63у Ала тТае маі рео рез ів оцев бек оівб 18 Сує
За 1 тро в 2812 13061 хедцелесе 151
Су: тів АБ отве дЗа вух АЇВ ща «Оз Ж «аж 83 хі БІЛОК. «8а3) Мівує чікункумев хаОб» 93
Бек 315 КУ» др ден Бе А5и Маї Ту" УЗ Аз Ії АбдоБра тує ве 5 19 ї5
Аза віх Ку бро Ахробуз б1у пів Чім Ні бек Кук Ні зве орга Уві за 5 ЗВ діа оз ші дено жіфе ага Аза ів дів Таб ойзв іч ТР оБей бу іє
Зк ча аВ б5іап Мазі баг із бів їі Оу Ї3е Буз їпб 0ЗК Ахо хаб ніх аа ТеВ їКт рух КВН АГ ЗУ МОЖ д5р дав Ні МОЖ Ба дів дер Віа 51 дер 75 75 а лів агК ен о Рне Уві Абе їВг Зеб Ада Вко бух Твг ЇХе ТВ віх Таг
ЗУ за з5
Мебс б1іу Ні Рпе їі ізз Аза ср осу5 го бує Ф3уУ БІ Ве ву Те їіва їх 18 у«і Щ3Іу БВе тр одби ФТУ Абе Муз ї18 беб Віз бвеосСух Таб ОНів Вго
І ї95 25 тп Ні вні АБО Бге та Уді і Бі дек 1 уз Бе ва ве ге ке ї3х ї45
Бо зіпй мії сі5 АК БІВ мем опго бу» бер отве тує Аза афй Зв таб
Кене 55 її зей дій діа Тнголівз бій бін Ті дів мі Ні меж Вго Бго дзвотве Вго
БЕ 178 їх5 вАБроагЕ тк бер Меї За бін бів Зеє Щ1уУ де УМЕЗ бух Хе Так Уві а зак, ші дфкдцепсв сіл
Ка 185 125 два бек обів Те уві дей ту КУх Суб ЯвИЙ бух Я1у Джо би аха ід
Зак зва а кави їв їве ТР о АБр вух Маї їїфс Ар ойБа бух їу5 МВА йзр щі а 215 та
Суз Нік Аз дів базі ве ода Міс Бу фу рр оЗіА Ту во УМ реа яи5 КЕ 35 лай їви чі ве АбК Ас вів Віз Бен сів АБроАкК бує піу ух ма іє а5и ях 118 Бе Ве Бго ін) віз Ап оМаф тТвк Су агф очаї Бей ву ха дек щей 55 2Ув
Вп оБко Те ота) їБе тую б5іу ук дев бій мві їі Меб ро о беи Тут жу 85 285
РРО АВ Мі Бео ТвР оре вец Бек тТуК АБ Аа Мет О3у Бо БІіч вго за а 383 депо тує бів о щІв Б) те очаї ТРОНІ рух куб із 539 АББ Его Те зав Ма З КУ
Маї рге їн бі» біу меч сів У Те їге З3іу Ав а5а бім бгоа Туб
КУ з3а Зх зуб Ту" їгбоРРО пів ува 5еб ТИР Ази БУ Таб Азів он Ту щік рез
За зе За із 2Хе ів 11 вен отук тує тує бі ке) тує Бга Тае Ме Тиб Уді з зве ЗЕ
Мах Мак уаї хХег уві діа Бек Ба Ух) рез без зе Мех Уа і У ута З за
Хіз маї 0іу Меж су Меї Суб Аіа АгроАКв о дгЕ бут Ї3е ЗВе рра Туб
ЗМ З 55 за
О1Ш сво ТВК РКО фу діа Те уз) Бро Бе бен фей бегорен Їівз Су а бої? 1953 Хедиевсе БІТ ще КУ Б суч Її» Ако ТВе діа фуб Аза ях ка» 374 «231 823 «їх» БІДОК «її Віру чікунгуньй «вва» 76 би ТАК фу Ай Ана вне Ба чаї Туб гу» іа ЇВ о АЮ ВКО тує фен ї ху за її ліз ніх Сук го дв буз іу біб б3у Ні его Суб Ніж бер вро ма а ше за
Аїш іву с16 дек їі Аг одха бін Аїа ТВ о Авр о сі Трої: бує іа 48 45 щіп маіф дег оїи бій її Щ1у жів бі Те оАзр Ар бак Ні АхВ їгр ча КЗ «8
ТВбогух ідо дгЕ оту МОЖ Ар оАкп НІХ ДІВ РКО дів АЗр вла ЩУ Аг
БУ 7 її о дів оіу Без Бе ма) дб ТВг чер іа Бре Сук ТВе 16 Те діу Тве за о
Ме біу Ні Ре Хі ів Ада АБВ обух Вео бус ЗДУ Бім оте фер ТВе
ВЕ ке 118
УВІ біу Бра ТигоАБО дек Ак оїує Ті Жек нів бек Сук ТМРОНІХ реа 115 178 ха
Ре Ні Мі5 АвроБго РРО Уві Щі 53у АЮ ОбЇ: вує РВЕ Ні Бек ог ллй 5 ВУ.
Бго 536 НІ БІ Ку Біб фен без Суб Бог Таб Ту» Маі біВа бе Ак» 145 У 55 з
Аїв Аів тв" Аза іє ФІ 12 бій узі Ніє Меї рео рр АЗВ Те Рг ї55 та МУ ж Оу ЗУМ берзценсе ік
Ер дев Тс фев жов Чек бій біб бек Б1у А5а Маї бух 312 те Маї
Іа ЗАЗ тз5 ден оба Бій Гб оУді Аге озуБ бух Су» Ай буз бБіу 0Іу бив вза он ї55 зва 285 іх зїяц їїє Тваг оїнК аБротух мах тів Ар за бух був Уві ав бів 38 ії ха су Ні діз АЇз Уві Ве б5а Мія ух уз Ткробів Туб Ажи бае го
ЗІ 238 за: тав
Ми уві вга йги деп ді Бі фев у АБродкЕ бує О1у бух Ті нія ах 6 5
Те БрРб ве свго із Аза АЗИ МаЇ ТАБ оСуз МК Я РгО фу ліз ге зва Зх ув дав обта ТБгомві Тит тує (іу їуз йезп бра маї Ті Мвж фецш бен Туг 75 ФВ ЗБЕ
Респ Аа Ні о Бго ТВ офец із Хек оТує дра бог? Мет 5Б1у бі 53) вБго за ЗВ зав
Яфа тує пів 531» 6Ї5 їбромазї ТНК ні бує бук Бів уві аз вен тн 385 338 ЗК За чаї вка ТВБоБЦЕ НЕТУ сев осів Уві ТВ о Тко с1у дев дай бід вра тує
Муз тує трРроБгеа Бій ів Чек аїа дай діу Тве Аза Ні йіу Ніз Рг 388 За За
НІЖ Б ТТ Ті фен ої Тук тує біб ев тує Бко Тве Має УвВе чаї
БЕК Зв 355
У Уві Уві беє Маї Аїа ек Бае їіє бом оїсц баг оМеЕй Уві яжу Має 78 Му зва
Аіз Укі Зіу Мет Су меж Сує дів Аги дб АБИ Суз 18 Тр бко Тує д 231 33861 Зециенсв фікі іп
ОН аз ве Рг шіу дій Тв? Маї го ТБ це вер хег м зе бух жа чів Би
Суз Х3)е дев ТАБ одів фу Аза ав «тах 75 «23Ех 8575 «232» БІЛОК «тах Вірус чікунгуньй чшах 375
Зб ТВе о іфукх Аз оАчп КБе Аза ад Туб Бу АТа Те Аг обо Ту рев ї 5 їв їх
Лі Ні Сук Бе дн су» Біу їй бі Ві бет Суб Ні бек бо Мах а 5 зи із фев дій дев Х1о АР» Аза сій дів ї1Вр ар оБім То їяв куб Ще зв за 45 ій маї его іев 5313 213 Бім сін ха Твройзр Ар сег а Ар Тор 58 5 ва
Пе ам баб Агро оТує Мей Дер Аа Вів Маб Ре ліз бер йіа ій Ас
ЩЕ 75 75 ха дів зі ви РНе Маі Абж їйб баб дів Вео бух ТВб тів тТВе яіу їт як ва ЗЕ
Ме Фі ІЗ Рпе 316 8 АЇв Агк о сСузх Рко фу Фу пр ТВ еп Твк їі5а Так 318
Уві аіу Бе тик ази 5егк Ав обу їЇ12 Бог Ні чЧаб бух ТАЄ ОНів рго
З78 їз вне ні між Ар оре обго МЗії 116 ОМ АРк обі жу Ве Ні5 бек АгЕ 158 ї3ч зав
Рг піп Ніз сіу бух біз ва про Суб бек о Твг тує Уві вір зве ТК 345 за 5 ще т ЩІ? 115) Зедрепсе її КіпЕ діа дів Таб Тнбовіь бів 116 3 Мі Мах Меж Бго Ро Ах о Тве Бра ве їув 175
А5р аг ТР фев Мої Хек бі бів Зек ПЕу Ахв о мві вух Тіж так Уві їі15а ЗК тА да оіу біб Твг УЗ. Ав Туб уз бух Абап Суз б1у біу хек АБИ бу ї9З5 Зо 205
Чіу ів о Тае Тр отТве Ахр був Мві 315 Аза Ав Суз ух Уаі АБр о БІВ
ВЗ кіБ 28
Сух НІ 8зїз Віа чаї ТЕ Ахв о НіЗ ух бує ї6Б БІЙ Туб А5В би? РКО т АВ 235 зі
Бер омві бро ге дек Азів ОЗ1О фоеа З3Ж дев Агро губ 53 Ку Її НІХ 245 Ба ЗЕ 11 рго РВе Бгто ен Аів ахи Уві Те См: Агв о уві во ух АТ Аг а дБ дю дзвп ого тТВе Уаі Твгб о Тук 02У ух Ажа бів Мі 33 Мет фа бек тує ак 2х8 5
Бго дв оМмі5 бро Твг бе) реч бек Туг Аси Аа Мет Фіу 58) ОЦ бго за за зав дей Тут Біб Б) 10 ткроМаф Мет НІ» уз ух ів Маї УВУ Кеш ТЕ 3 318 3 зав чаї Бра Тег обіш 1» Кен бі маї Те отРр ЗЕМ дей да БО Бво Ту був ТуК їгр ОБР віп зеб бек тне ап Зіу ТР о АіЗ Ні Біу Ні Бго 3435 З55 УА із Бім їі ї3Зе івб тек о їут Тут Щі іец Тук БРе Те оМеї Твр очах
ЗБ зва 5
Маії маії маіф бек Уві Аза ТВе Бе Ї3Зе ем фізи беб Веж уві ББУ Мех
Ба ЗВ 35 а 2817 165) Бефуевпся Бі5ЖІЛЕ
Аа За) б3іу Меє Су Мет сує А3За б АБЕ Аев о Сух Фів ТВРОБго Тук 385 Бе У зай
Яім без Тк орго п3у іа Те заз Бго рве бе ве) бек це бів Сух за5 в Зі5
Сух їі аг олпге дів куб дів зга 83 Ж75 та 83 хай ВЕНЮЖ «33 Міврує чікумеунна хаб Те
Бек Те фу др оди рвав Ак Уві Тук іу« АЇз ТВе АкЕ орга тТук Соц 1 5 їо і
Аїа Ні буз ро Аз Сук 03уУ ім Я1У НІХ бек сСух Нія бек Рг уві я. ку зо
Аза їз Бін лк їі дРИ дей ЩІ Аза ТБ АБО Біу ТБ обер вух 31 3 че 45 біп маі его і2и Фів їі б3іу Хі іу5 таб аза до деє нії аза тер 56 55 ке
ТвБосук рес АБрОотук меж взр о йзп НІ Меї ро АЇв Ащ» Аз» бім Асе -к а 75 я лів Фіу фез Ре Маі Акв Те Чер вів Рго бух ТМ їі ТВе ім Тв 55 За зе
Меє шіУ Ні Бне її бе: Ада Ага бух бго гу ФІУ 5іш ТВ ов ТВе зав мк і18 уві Біу вка ТРг Ав хег Агро фу Ті Бег НіЗ бек бух Цю Ні Вко 158 ке
Ре ніх Ні5 АзроРго Ргз Уві Хі 03у де Б3м кує Ре нів зов ее їх її з4 а газу зЗ10Б Хеднютч БР ге піз Мі» Зіу ку ін без йго бує 5еб ТНК оїук маз бів ек Те 145 1хй 155 159 дів дів ве тВе біз щі тів 1) о Мві нія Ме бко) бро да їКроргО їв т7уа МВ
АкхроАЄЮ ТР офод Ме бе ців Бій зеє 83у дез Уві уз Гі Твг уві ї8о 1855 19 деп зу вій тївг омзі ден Тук ух Суб да Сук Б3у Бі3іу Бек А 3 35 за ККО
Фу рев оте отТве ВР одбр бут УІЇ 315 д5а бе Сух Муз МаЗ Ар БІК за ЗІ га
Су Ні Ата йіа маі Таб одевВ НВ уж іує Теробів ТуР дув ек рр иЗЕ Зх га ім уві рго Абй Аза Аів 01ц івз 51У Ах йгд гу Ру був Т3е ніх ре ав 255
Зіе рко БЕ орга св А1З Аби МаЗ Таб Суб аку уві ро ув йіїа дгЕ зов ах ка
Акп ого Тео уаф тиб тує БІУ ух деп Вів Уві Тіз Меб ев Мем тТук 875 зо р
РгО АББ НІВ Кго Так офев о Кео Звгб Тук Ас дви Ме 5іУ Віз и Бгео за 235 За мап отут шіп 5із 51» Тгоа ма) Меж із Без фу мів у маї фей ТВе 385 З УїВ З
Уа овгРо Таб бій 51у меч зів Уаї ТБеоткрробіху йеа Ачи Б1м Бре Тут
Зак 338 355
МУЗ Тук ткрорго бій ігн обеск Те вза іу ТМг о йаза Ні фу Нія Брго 359 355 за
НЕ Бі жа тів ів тує Ту Тує біз о фжи Тег о Вко Те Меб Те Маї 355 зей зе5 а аку їОБі Зедченпсе БУР НК
Уві мві аз бек уаії АІ1з Те рає Ті ем орсм 5еє Меб ма) біу Мет за 375 зай
Аіз діа (Фу Мей Сух Меї Суб Віа де Агв АР бух Зв ТБроБко тує
ЗяЕ заз За5 зав
ЗВЕР іец пуб БРо б3іу дів ТВеоМаф бе; Ре ре зец беє фу 318 бук 485 55 8135 бує ТЗ Аве ТИ" Азія туз ДІВ

Claims (22)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Виділене і/або рекомбінантне моноклональне антитіло, яке є антитілом або фрагментом антитіла, де антитіло або фрагмент антитіла містить: - СОРНІ, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 103; - СОКН2, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 104; - СОКНЗ, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 105; - СОКІ 1, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 187; - СОКІ 2, що складається з БЕО ІЮО МО: 188; і - СОКІ 3, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 189.
2. Монокональне антитіло за п. 1, де зазначене антитіло або фрагмент антитіла кодується варіабельною послідовністю легкого ланцюга ЗЕО ІЮ МО: З і варіабельною послідовністю важкого ланцюга 5ЕО ІЮО МО: 2.
3. Моноклональне антитіло за п. 1, де зазначене антитіло або фрагмент антитіла кодується варіабельною послідовністю легкого ланцюга, що має щонайменше 70, 80 або 90 95 ідентичності з послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 3, і варіабельною послідовністю важкого ланцюга, що має щонайменше 70, 80 або 90 95 ідентичності з послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 2.
4. Моноклональне антитіло за п. 1, де зазначене антитіло або фрагмент антитіла кодується варіабельною послідовністю легкого ланцюга, що має щонайменше 95 95 ідентичності з послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 3, і варіабельною послідовністю важкого ланцюга, що щонайменше 95 95 ідентичності з послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 2.
5. Моноклональне антитіло за п. 1, де зазначене антитіло або фрагмент антитіла містять варіабельну ділянку легкого ланцюга ЗЕО ІЮ МО: 54 і варіабельну ділянку важкого ланцюга ЗЕО ІО МО: 53.
6. Моноклональне антитіло за п. 1, де фрагмент антитіла являє собою рекомбінантне антитіло ЗСЕм (одноланцюжковий варіабельний фрагмент), Баб-фрагмент, Е(аб)»-фрагмент або Ем- фрагмент.
7. Моноклональне антитіло за п. 1, де зазначене антитіло являє собою химерне антитіло або біспецифічне антитіло, яке націлено на антиген вірусу чікунгунья, відмінний від глікопротеїну.
8. Моноклональне антитіло за п. 1, де зазначене антитіло являє собою до.
9. Моноклональне антитіло за п. 1, де зазначене антитіло або фрагмент антитіла додатково містить пептид, що проникає в клітину, і/або являє собою інтраантитіло.
10. Гібридома, що кодує антитіло або фрагмент антитіла за будь-яким із пп. 1-9.
11. Спосіб виявлення інфекції вірусом чікунгунья у суб'єкта, що включає: (а) приведення у контакт зразка від зазначеного суб'єкта з антитілом або фрагментом антитіла за будь-яким із пп. 1-9; і (р) виявлення глікопротеїну Е2 вірусу чікунгунья у зазначеному зразку за допомогою зв'язування зазначеного антитіла або фрагмента антитіла з Е2 у зазначеному зразку.
12. Спосіб за п. 11, де зазначеним зразком є рідина організму.
13. Спосіб за п. 11, що додатково включає проведення стадій (а) і (б) другий раз і визначення зміни рівнів Е2 порівняно з першим аналізом.
14. Спосіб лікування суб'єкта, інфікованого вірусом чікунгунья або зменшення імовірності інфікування суб'єкта, що має ризик контакту з вірусом чікунгунья, що включає доставку зазначеному суб'єкту антитіла або фрагмента антитіла за будь-яким із пп. 1-9.
15. Спосіб за п. 14, де зазначене антитіло або фрагмент антитіла вводять до інфікування.
16. Спосіб за п. 14, де зазначене антитіло або фрагмент антитіла вводять після інфікування.
17. Спосіб за п. 14, де доставка включає введення антитіла або фрагмента антитіла, або генетичну доставку послідовності РНК або ДНК, або вектора, що кодують антитіло або фрагмент антитіла.
18. Фармацевтична композиція, що містить виділене і/або рекомбінантне моноклональне антитіло або фрагмент антитіла за будь-яким із пп. 1-9.
19. Клітинна лінія, що продукує виділене і/або рекомбінантне моноклональне антитіло або фрагмент антитіла за будь-яким із пп. 1-9.
20. Спосіб одержання виділеного і/або рекомбінантного моноклонального антитіла або фрагмента антитіла за будь-яким з пп. 1-9, де зазначений спосіб включає стадії: (а) культивування клітинної лінії що продукує зазначене виділене і/або рекомбінантне моноклональне антитіло або фрагмент антитіла; (Б) очищення продукованого виділеного і/або рекомбінантного моноклонального антитіла або фрагмента антитіла; і необов'язково (с) складання зазначеного виділеного і/або рекомбінантного моноклонального антитіла або фрагмента антитіла у фармацевтичну композицію.
21. Виділене і/або рекомбінантне моноклональне антитіло, де антитіло або фрагмент антитіла можуть бути одержані способом за п. 20.
22. Набір для застосування для виявлення і діагностики інфекції вірусом чікунгунья у суб'єкта, що містить одне виділене і/або рекомбінантне моноклональне антитіло або фрагмент антитіла за будь-яким із пп. 1-9 і необов'язково пакувальний матеріал. ж 5 я їх Х Же Ку 5 Ех и М М ве ІНН о мок ОК ОК оо ЗА АВ АК о Он КО т пядешем лм я ня ся жк кА Кк юя Я КН ЖЖ Юля КАК Ж НЯ КК ил Ку ЖК Я ТИЖ ЯК кит киян для ки пня Му или ж я мя я ня нія тж ння тні ще Ї А п о дружив наю кн хиуануки нки Шлоюхиатохмухо ння - й колу тю кутя куля жи не й ж й й щ п шо на я З бен но нн вон АТ ВВ В В ВАВ ВКА М ОВ ПО ПАНИ вв КОЗУ 7 пам ІК КА АЖ АКА АТМ КК ЖК КПА ЖА КК КАТА МКК МА КО АЛААТ А КЕ АТАКУ АЮ тА ЖАХ пи сх мм и МА А ск МАМАЯ, шки ект З їх 5 шо КУ й є тал в х г ї їз НЯ легтгу КУН што М Б ПВ М З В В В В В ВОМ К БЕ нн нн кс ІБК ДЕК океан хедожюлтюю меж ють ую кю хек мм АКА ЄВИ ЖАКА КАК МАМА КАМ УМ МАМАЯ МАМА ЖИ М зем ДА ДІ ой дит ото пл ут жи КАХ А УТА А ЖК т ккд Джек ком ть Женя АК Ж ЮЮ дя КК ож АМІАК Квт М А ЖАКА КМ АЛЛА БМ нн нн нн Манна пн нн нн нн нн ння ВЕ но в в пад тт о в м КІ Й «КЛ Ко МВ ще М КМ лк ЛЕ БО о ВІ ОО нн ВН ві НМ Не ен ВОНО В в А я Кози и А А о зак ря яю юки кю юю и я Др ня ух Прежнжння пики Б кни пом он й ру нина у с а пошти сторо ленетни, ФУКВ ВИМИ КЕ КАК у ВкЦЄ ЖЕ кВКННя кутю т З ЗК Шо кю и ж ви кю и жи ж ким : : ВЕ зижитиютю життю Ку коти уалллалАХАААЛАЛАХАААААЛАДАААКАААААААЛІ ЗАЛАХ АХЛАААЛАХ АЧХ АААААДІ І І ААААААІААААХАХАААААААЛААААААААААААААКАХАХАХАМАХААААХААААТАКЙ
ЕК. їй уиркодокхонхої о ВО їх МК я з І й Ко с: ня ж Іо в ЖЕ ВО. сх "Ж В ОК хх ЖК. свй КК о З Кх й ПК с В жо ОКХ БУ «ще т ах ХМК тних 5 Жийтяю пу В и кс А ВООк З Ал ЗИ ШИ и з: В о НК Пром Бай в ккхфокнккнллляя ШТ нн В БО З КК зн пт дою Ж ШО МОЮ ду МН ск СЕП, ях шиті ї ЗИ сддЕшем щемМе Ж ВК ВХ пл й М З и З ше А з о оДДЖЕ ЖЕ дк Я ММ МТУ ож век БИ
ЖЕК. МВ ЖК. : г х 3 000 ржЕттютоя 000 Сер Ж гав ь їх з сон Ж Е Ж мо ї мю Ж хе ОО в, 5 у ОК х пЖ як Ор ЕОР Ж -щЕ З да. Зж по МО. з Шо КЗ Бо ки Ох х чо ее 5 з 5 да я. Тіна МОЙ ай я ки а кіна МОУ й З Ке ни кю дя г ЗУ ун иднлннт днк В ддюклуяятчнняю ж и и пн п п В інве код нагя Ж к Е х У Е я ря . ге І в. БІ о ТВЕ Би 5 Ж жо Ух Е щі Ох 5 оте ко ВО я ЕОМ
5 я. ся й й. й о з ж ЗУ вч 5 2 Же ія хх й и В ВИМ КЕ КН нн С НИ х ши й щ НИ Я ї й 5 ли Я і 5 ни не ШИ Н ру ; В : ; В Івенти Ф дн вне е х Ж зап. беж Р НУ ЖАН. 3-5 МУ ем КОМ я НОМ В. 5 Бра «ми ов тю г й їх ЗК дО же я Б
Об. и, хо х 8 Ме М го. у Її и пе Я х Й ун маму Кларк Е Я І їх ей й і З й І Х ; й 5 ів й Корені го Кк ЖжІК. їв
Е . З врннннннннии З кети ориг Гу а ДІ - інже о сови Ї КУ ; 8 з Же Ж фан й я я Оу є ю ун: ХО ох СІЕКСик Ваше Іри ЦИ; ЕІ х бує Сон нн з ха й За я ХУ М ОЗ к З зп Сея З же х, ШУ х щи ж ЄВ х хо зі. шк г 2 й Ду лнжнжуюкляжихжктк ння В нин Зо ЧАК ої з Що . В Я З ще х й ї п Ух СЯ у У їх ще тк; т М Н СІ й 5 п х ів « ру вл Я х х З Е З і 5 і ЖІ БО ЕЛОК ГЕ як Есе ВееШ 5 Во й ЕІ з З ІВ і В Ж. В І р БИ» х КН ОО Кк Я х Ж ла в Я оди ІЗ ЖЕ ; ча ОО м З пр на и МУ ДЕбекунннку ню м наоірфсоф ж: ни ИН ! Е З Ме НИ Її ш 5 ; З Мун в діа 2 Н з де л г М код АЇ ГУ ЕЕОХ ШИ ЖІ Ста за 5 ноу БІ ек З ОВ ех З ові Во із Син
: т. кох, 5 ко с "КВ 5 ОК М ЕОЯВ Му Ж р Ки їх Б во зго во то пк ва х и КЕ ї : я хх ів й й м 5 а Кі й 7 ї ов -Ї ЩО ! Х зо завд тля сетве рЗ ж ВИМ г Ноя ся еіг. да 5 іт. Же Імегдовютимої іприксвимикекі ДЕКаВаННя ВАХ Дохбааннне ак Кк Два анн МА У Досзаання МЯВ У ЯЗКИ КВ даму ЗНАННЯ ЖІ доме ВАННИ ОХ вах ванн РЕК гони у зх Ж дин «С Ж я з х ДЕН Щ Б и Ж ОО. - ХК тя пит 3 рсєесєєєєкюня » ик В т Є - ЖЕК реє Ж щх Пет ше Еш МЕ и х ко аа Ж сх її Дод Ку шоб В ЩЕ і Ї ЗІ ЗК КЗ її я Ше х БА : зо В» КО дк ВК жі офеттттт СН ШЕ що щі я мВ То був Сх і: х Щ УМ ї - м ї Ко ця Хсссстгогтот отой, в Б : Я : х «- Ж. В 5 КО ЕК зни Я х Н У й я ї і з НН Ж о В. кож шо РО фону во ЯМ І ОА ; що ОЖМ Н Х ЖАХ : : Ж Отже ут ртесуекетвев, х Центр МУ. 0 ЩО бечеефееерстссстююсюрсту 0 бесереф усе стюотюростусскх ЗДАНО якихе ЗКУ ЗНЯВ «пси ВНОККЛЕЯ Да пе ІНК У ЕНЕК Нм Доу ек й Ех 5 ІЗ хх вАУх я сих -к жи й ка с Ме сяк МЕЖА сх ЗЕМ ух ШУ - НК сх ДЕННЕ «же ДАЛЕКО заз ДОМА К ТЕ тає МІЙ и КИ вжи М че БАКІВ
ЗЕ. ЗБ ЕФ ВЕ кг. 3 ЗЕ. ЗВ с С: ОН ОХ Ох С: ОВ КОН ПОВ ВО ОК КОХ ОХ БЕ ОКХ ох ХО
Х п. КК ЗХ х ОХ ХХ ОО ММК КК ОМ ОХ о ЗХ ОО ех В В с о. о ОО я ОО о
С. с с зі, «
Кон. доме очкуруюче внпішкниє о проник сденк неон аа іже пр певні лив і пек пектин ока НИЖ СОЯ БЕНУКТ ЯХ ів шт се жк ші ск ЕКО КО КОКС З Нема нн нн нн ня оленя роко рох веМрЖК МЕ ЩКОЕ мунпуялении Б в х ви па а ВО ЗО В р вн РУШ ОЗНА ЗЕ Інші гу мя ВШ ин нин ак зм Пн ОДНА КК ЖІ БО Ох шівЕж щі ї пи рн ком нисвн ен щ Діл КК а і х Н ІІ: МА Но винне Не МНН ОХ ї о па о а МО ІИМЖ ЕЙ жо є Я ЖОВ КИ, Ки же і ке Кат м ІЗ у с овен НИЄ МЕ Мо В МО МОЯ АКТ щЖІБВіЖ їі - іхдеід фі Й КО а ее осв: мамо мс Мешко рамі ХХ Еф Би ВВ ПИ їх жи п а па а М шві Я я еВ ЕЕ і ові ми знання зом ВМ р пп шк Ж я Во о НУ ОКО І їх Фе де ї Но МАЕ оон, ПІД ОВКЯ р Ж Ох БшМіІ ШОК ши Ж Во вок пдтттетфрнтт тво 171 х БМ ик ом ци У а а НЕ Ми ИН і: с - Н 1 Канни ни и т ин МИ Бик У щ Н Н ЛИ Пл ви пу ни ти з І ВИ ЗНО М ще Гдщшо ОД в Кт Н ЗВ НН Ж км ЗЕ ек а З Нв су ЖИТ ще. Н ОВ а ЗК нн у п м р м м А МИ ФО рнелннтінінітвк ев В а НЕ ЗБ ТЯ Р шт - ГУ 1 і рвовннкх ОН В ЗА ООН р Мор д Тож і до вита ОК онов нос ко вед зсоа А ПА ДЗ и Н їх Не; МЕНЕ ОС КО КЕ ПВ З ни а НЕ і лики ви ВИН Ж фон кл КМ Базі івВІшІВКІ х: Ж Баш ві а о в о пон ЕЕ СВ НЄ Е ВІС НН ШИ Ж: В Козик Не З зе зве кни ие ВЕСНА - РЕХІ Ж ОБ І М а ОКМЕ КН КН Зі ж Н й Н Ж Овен В РОК КК МИ М КТ, шіщішіі Що БО в нини: ни Вміння кан НИ НСНУ щі щХ ЗІБ МІВ Еш со ке кре а СК ду ве нон зни зн сни й щі БОМ МК шлю роя Вч НИ НИ СЕНЕСН 1 Ка НИКА НИ НД с с КІ ше щ Ж гуни мевкщи ки вив и В Я о най мо РК рих г. а АЖ ПЕ ТУ КУТЕ сао: МНН г Тл Ки МК МА МУ ви ВЕ Щ Кк ох ВК ОВНА ІНШ Н ї т т еко ее юоеи ни о МН ІТУХМОАТЕ БІВ НІШІ НИК о Зоо: З ре МИШЕ МНН Бомейнняия пис ІН С НЯ :Е - В пив й Р з. т ема ее її : Н МЛН З ни шо ЯН че НН ЧНІ ких на Ох ВК о Й КН ШЕІВІ МО ЖІ ІВІВІВЕ В о ее Н Н Н ПРІ тіІЖКІ РУ Ми З Ве КН ще! нн нн НИ МЕ щи НК ВОКАНИ ЯН І нен В о о НН НО А СО кі Х НЕ БО Ж І: БВ: Ж те о о лляні приміт ШК ях ПЕК Я дк : Н ї пен нн нн яння НИ НЯ С ПК УЖ ММ Фі Бе ЕІ що ПМ Н ин сн, ни в БА В мк РІВ БІВ ІІ ВІ і їж ГО пи сорок ШИН Мінннненннннннння о о о ЕН ПЕ Ви НО ная МЕН па попе о МИ А НИ НЕ З МНК Хе ШЕУ М шо пеллля ВКА нолжадент кю КАКККАКК АКА пн ЗО й ЩЕ ЗЛЕ о ВО НЕК: ТЕ ДЯК Я тка ся ГЕРОЯ ФІ Я БОРрОВБжвве зни ТОП од : пінні ОО ДререККь ке во. ; ! т ЖІ КІГ іншим шана БІ х хОомиЕричаси СІ ВЕН ВЗЖЯНЗ а М -Е-КЕ - 4 н НУО ОВЕН или класс квну нив ник: я Ки : Е ; НІЙ ЗЕ ШЕ МЕН ЯКІЙ ДИ ЗЄНОВе ние г КО ОО ОБІГ АНІ їйл ІШИИННИННИЙ ж ОО БІЕ-Я КЕНЕ шен я ге ВОРОН сере ев Е БО кНйя ОО БЕК еМе вия З 8 ше ОБ у шЕ пасе е о В КУ и ОДШХ і БЕН ЕЕ к ее НИ и БК жа пммінсніє НЕ ЗНКО! шо сенс : ФІ вх ПДАА яд 7 пня нини и п й Б же «Ух их Жиртре У що нж Б дя й шо фуаюживністть поз зи Вятизь Моє рльниРо под ак ; ЕЕ вед ззт. ва в г
2. зад « Но ЕВ - п 14 000 беденинніить ща хо ІЙ ВН щи ТЗ щих їй Еш ри м ше ШК зн ШЕ ш мі г: ей ЕК Те ой МО ЕЕ а й ік ННІ Е ше ЕНН кра БЕ БЕЗ Із во Е АЛІНИ ТЕО БК ЕЕ я НЕТ НН нич НН ЕНН те ЕКЗ нок СЗШ БЕ БІТ БЕК ВВЕ ірх ща шк ВКЕЖа Ба Аа Бук: З: ШИ Я з БІ шо ЩІК ББЖ МЕ а БЕБЕКРОКка іт їдкі ям КІВ | То ТБ і БОЛИЖОЯ 8 КЕ ее ШІ МТ Зара КО» Та и КК ШЕ - КЕ КЗ ; Бо ї ге Х 13 ЗИ у р Те ОК їх жо Не ех Н -Х о бтря ЕЙ ЕВ ЯН ІБ скпнкнтнжнний ск к ще Н й 7 - ка Ко щ- « СЕ - м ке - -е ще і иж хе Зкарвшеек елквани ЗХ ік.
УК хо КО се
У а. ЗКУ УЖЕ ій о, с ях хх Мох зн Я с о У У Се ЗУ Ж ж КО ке ко со: М Ко МОЖ СЕ Й Ж С С ва Ох а ооо СК БО а, щи ях п г Я й п М і. се ее. ше ко Е ПА МК С Ся се. ВВ щі ДКЗ У З З о в а. Є ВК зх Ку ж ЯК се н КОЖ а ща М х ке І Ех Ей 5 5 се со, ох яаках ве вх т МО а ЕК їду МОУКЯ що ОВК хх Трммер кн МИ ЕВ я св КЕ вя збову КО сх Засоа . ту ще : хо ее ко ОБО УКВ я В о Ващеа п В жк: ри кни а с СЯ и ВОВК з Б ОК ОА ОВ ща ек поту У ОО М ОЗ ПД У се ж Х УК ї ОВК я З шк Та І ях КУ ЖК ех Кощая п.
0. о В шо ПК СКК со пох ще сх УОБОУВУ КАК За З КО г п - по о (Я Х ж Ко З КК що ОХ КОКН і. о чщщ СХ м КО х сн п М НЯ з МО ОВ сей х МО о Ко ОО ХХ ОМ ЕВ о Кк ЗТНЯ -ЖХ ак хе Я Я а МО ВК З Ой Зжшие УКВ ни дО КМ ну ЕК. К Фр. б дна дур с ня к «х ща Ще г. г ми я й Ох дені з о. ОК вве 115 ще і а гемо - ЗХ х ОО СО ще М ХЕ ж З 5 Тшкма ВОДУ З бо КЗ пило тв ія ки вав: и «КО ОК ОХ НН ВХ зсееком: НВ Ех КОКО се з. ї З с ВО у о о МАЯ 3. З рони ОЗ й І Ка ДО » чо ЩЕ і М Е Б ЖК ВОК, Ех 5 що щ - . - Р СУ о. а о. ши Й ОК ЗХ. Щ Ж м яке 7 3 «а дк яна ОВ фреску ЗО ОБУ ЩЕ 5 ЗОВ поря ще ! Ко й а їх ой ЗЕ ВХ щу ди З СС ХО Я С СЕУ х 7 с З 0 й ша Зк З УКВ 5 рей ння Після) зай І Ме НК щі ЗИ я пе В КЗ зн ТОК о, кох, г пе ЖОВ вок Кз я ЕІ Мих ЩО вся ж З З Тло ку ОО КЗ г, Я хи ня А Ге ку щ З фон, ГКУ й й дк Кв В хххоююся, х й Мини нн сна ик 8 ма Що У Іа Ж яко Жодне я КК Со, гу З ра у шо ско С Х В. ех
- в. в: що а "ее ше х То | шко я - оч я еф Баш ше М ЩІ Н Ще ї В с я. Код ааня г. ї дедевавими МАВ ЧИ КМТ ЕЙ мкм : г Я д- а оІнів В ЩА жжоожх вом КЕ Що й З 2 держ - й зх в ЩІ а ши З М м їж "йох хо КИ че Б як ш Я г: В- 5 є . жжа жя о жж ц шо й й и Ко Я стстє СЯ жкжжо з з'яеЯ НЕ г Фа па щи Фон мя ЗЕ кое 2 Не їй Бела СН ЕК уч ; - г 2 ПЕКИ ННтх ей. я а в я : , ой ї й т МПНМЦМИиМи? 5 они кч. -: с Ж. с си Ж з Маки ме ванни нини ен ск ме сне не НИ Її ї і іа х У х ї ї. ІЗ ї ї х БЕЗ тет сових ЕК Му путем у СН МІнИМЕЕНІ КПК КОН Ся ях пами но у промені я 3
ВВЕ НО млі ва іван І ре Я з ж й. БУ т Б й й пААААААААЛААААААХ и шк сЗ 8 з є ня са 8 ж Б Ж Я я Ї нн о о Ки нині ПЕН аИТИхО тКУжх МЕВОХОЗИУК ще сюдкучу Би правки ве З кохилирухтоме дике зв ВЖИДеЦЕнОМюМ; МКК ХК ПЕК КОЮ дике СК зів. їй ОК х. Кк МК на
ВО. : Х ж : В 3 х. ІН ня ван и о М щ а ЖОМУ св їж Од жк ши Ах Я З ї ті ж пи як Я зво Бо В 9 КЛ «її зв чх ще Кк м В Н шої ХЕ : р хЕ божу жо їмо є Ж о єм осв їх і хе. щу дО 35 25 МО МО ш Ю Щ хо ж ОБ 5 по м їх В Ек еко КИМ ОК МК ОКЕАН ВНИМ мил м КУ КК Межнккнних ЖКК МУЗ Мекки ДИВО вдо К г МОМ МИ З АЮММяНи М
ІТ. да ЗО вай, миля ПИ ОСТ УК Щеня д «жд ї рр ОМ ми ОО ! ТЕ АН пет Ком ким ж г: У КЖКІХ зх В ка- Б че ЕЕ ії ш У її -кке МА ех З М Ср Акт су г В аа сащр- ВИК зуди й? ж ї се люком Нр; чо ко НН а ее В пе с МЕ ен сві важка я Е мк. У ей АТ ні Ж ні Гор ої: й Й що Ж ба: що КЕ -о Бай нематяви кет пил КЕ -к КК КИ охихлолнллолхлольіу -йе КК мн Я : Б Мена Ка ТВ ДСТО ЕХ Мехонилине номонввне веозневиє зок и у и й Ка й Д-бесоссоєсоссоффсоі ДК феоодеюсососссоссодосооососососостосх п- - її Бе й й їй То Й Ніні ЩО пі іно
ШУ З ж ЩО що М. І Ом - ж У їх ї і з МО г ;
ще. Воно КУ тк. ї х гЗ шо Ще ЕМ г в ї я ; БУ КЯ ї Б ІА їх 3 р и Ї ПА. і с х з 1 ОО Ж Е: й Ба в г драже п. сіння лнй пенні : ЩЕ МЕ ЕЕ: с НА ДО ДОДОННЬ іде ПАН зані ії Ні цо Ащ яже ід НВ ни жк НІЙ иек ж 2 ТочЕ я НІ тою з СН кокоє зем До хо НИ т Ж виду х НУ Ж по . ЕЗ фі» ЕЗ УЖЕ З Ат 3 т: шо вк З Х зов. ХУ Ба 5 я х - СЯ щш ЖЕ. в Ж К 5 Е ; шк ; воояе НЕ 5 йо х ЖЕ БЕ я ж; 5 ІЗ В Еш й х БО боннерВнввнюя ЕЕ ман вн и ни: НИ ПИ ЗУ с ЗМ Я Ти вНякітоя, где ММК осхув ів, ПОД нію гу жа ж Я ких кН ек М у Я гм УК си їх. Ха ШИ ЗСУ Би зу ЖО ТУХ 7 ТК ШІ Об те В Я ся МЕНІ в. ОО Зі ЯКО й Ж й М Ж ет ї 15 - да щ о МА х В | ї м | х БУ І їх гі Щ СН Ж ж, У ще ц в КК ї К 7 ї М її 24 й ше й ГО сонне ов каб І Пише . г и дж АНІ жа що. Дек не іш, ОН СУК; У Ж ЕВ осо я сонне м ДЕВУ г ник з ЗК. сце зав в з мі, кот З у Її ї ва ї 5 зві Ж 5 морок Ж зві УЖ що ніж ОО ї ; ж Ши НЕ З ВИ Ж й 5 Н Ж У І й вд Е х І хо М З 5 ож Бо шої ї й а НУ пи З - їй ОК х. р ре ВІ тують МО туба ї ЕЕ риби ї ЩЕ ім, ДИМ кає івр, В жо я ВТК я щи Я зкхвх ЗЕ скоре КМ сокох
ФК. АЗ слрохоюхомем)
МЕМХ. пк Клін пікмхлккужене «ТМ, ЖД РТ УКЛ ВАНКМУ пи лЕКОЛувУЄНИХ ВКМ й я Н о сила Колесо о Я іскор МН ДИНА СИМ іхмиамихі п пкухччнжжаххкчюювихччиююкихичжюю ни иєєювт я кв жують иєюьвнюч живи нжжєюююькикюютьнииь х з І жк х КІ МН Ж х грат КЗ хо х ЕН КІ ВУ ХХ пу за зх СУК ї )» Як ЕКО Ж ЕАеУ я СКУ тої я х ЛУ «Ії Ж х КВ й Ох ! Я не 5; х пеуя я ке З АЖ 3 4 я Ме 174 С ТЯ БУ Кк ЗЕ й й дадвих. Кк ти ЗАВ З Та ду СН СЯ ЯВНЯ З ж ек. ІВ дов у КІ ЛеЄІХ дим куму ЗКНЕЕ НМ КВ ВІНИК МУ Нау ТЕчОнЕРНК ВО ВА МЕ пе ве У УК АРКУ КК ЯНИ НЕ ХК ЩО нку хменк пмукихх ВХ ЕКУДКвнКи ПКТ ВЕНУ КОНИК ХО КОРКОХ МММЯКУ М К еИ ЕК Ту ШМКДК лк 15 СХНЕХАВ МіО Ж ку жоюююних серікнемсмх мови кдкмеююих шо ди МИЗаТйнХ УМІИ МАКОМ КАВИ МИ КИ ЗА КТК ПІК КАХ ТАН КІМ АКТ ТІМ МОВУ Мо БНАЛВТ КР ЖТИЗУ.Х ОН ОВ СО Ки КВ ХВ ВН АК В З ВН т В о ВК ОСИ МУ МЛК ЕТЯАМ УВОПААСАИИ ТАМИ ТВА МОКАСИНИ МУ ТВА ГА КОВА МІ ОІ1БМЯЙ ДЕМО ПДВ АКИМУ МІНОАЛУ МХАИМВМ ККАЛ ХВАТ УК ВІКА жали ат ої уки р НИ люд МОХ Мем ІМК МУ ТИВ АКТ ЕК МУ АСК ОКА УТ ВАХ МІ ТЕМУ ЗИЖУКУ АК У Пи в В в НИ що т о в в ем я а А Кв ОК Я М Ж З ня МОЙ МошТА ВОЛІ Х ВИДОМ ТАМ ВТ ВИ М КЕКВ КВ Мілль уми Ох ДИ Кошти КПК ТЕ ВИТ ИИ МТ куми ДИЛИ Ди ии ДІДИ пі ІМТ М ПИЛИ Ах вес вн СОТ о Ко а В КК с о ан АН КИ о МК КАК оо дит уми енд ТхО по о о и А о в па по а о и ие де НИМ МИ СИ ЖКЕИЛТяЇ ВОМС ІТ АСВ МУКИ МУ ТО МЕКА ТИ ММУМО У МУ ТТ АХ СТА КЕОІМКІ ла БТ ий ПИКА МАЛА КИМ К ТВ ММК КВТ ТК М КМЗ ВУ мемспруви лю бфозмут ол ди я ефек ик ВАВ ВВ ММ УВК ММК ВК Ки М и дом ПОКИ АВМ ТАКЕ КЛІТКИ ТЕ ММ АЛІ ММК МУКА КВН дю ами М р а и оч Со а м АСВ о ие ДИН МОДУ БМВ БЛАКИТНИМИ ТТН ВІ ТЕН В Й Що о ж зи НА ки на и ки о НА жк нка В НН ни ВН и с М НН я Я ЩА ОБЕУ МОЯ Х МК ТАЦІ МІ МАВ А ЛВ МТК ЕТ КВТ зум Жахи Уж млрд М СУК КУ ММ МУ МУ Ми и МЕ КМ М МІУ ик МІУ ші ОЛОВА В ІІ. У ВЕБ ТАЛІММІ КИМ ТАМИ ММК АДМ ТАМ ІІІ кІСрВлцеє ЖЕЯФУКОТ;З ВОК АТО ДС ЕТ ДАВНО КО СОС ОЕМ У РЕ дО ВЕ БОТИ ОС ЕК В НК НО В ВО КЕ НН ЕК М о СН жі лппЕоЗ лам МИМІТТАХМУТ УТ УВО ВОМУ МАКИ МУ ХТПП Е У МИУ ТИ млості що й Для ДИ У тами Ки и МКК дик МИ и и им уми у а ииу РОЛІВ ВМО МАТОМ АШ ТММ ІМУНІТЕТ КВ ТЕТ ве в р и р НЕ п о нн но и як ве ШК воно о а о Нв ноя ложок мкл ою ее килими и Кам В ми ли МКМ ев Кв и ик вих ЩА ТММ ММ АТМ Є ААВЛІМІ ТИВ АЮ КММ АВ АЛАМУ ТАТИ ВОМ КІЗ КТАНН шу ши Ми ДІМ и вжи дом Ки хи Ми видих КОМИ, МІ ОБІДЛЕВІК МЛ НМЛО ХУ АЕН ХАЖМ МАКИ А ВВС МТВ ВАТ УТА ПАОБАЖИНМ МЯКИЙ ВАМИ ХУ АЮ ВКА АААМИ ТАКИ МАУ МИСТ: МІД лу юии т СУ Х Ку Как щих ов мем МК Ми Кв ТАК У СЕ АДМІНІ АВМ АВТ АТАКА - чаЖОВ кланів иа. ЗАЦІКАВИТИ КОДИ ТМ ХВ КВК Шло ХОЛ ВИБУВ Х, ВХ ПВЕК ВАТ НМТ АЖИНН МИЛЕ ВТ ТАК ВХ ВТ АВТ КІ ВОВК, ще т се А ок о ов НЕ я Ж МИ В о В МО Ноя
ЕК. ї5 сСпродокханккї шо мех щумтудть меми ие и ких ви МКУ М Кмин му пе ВІ мк де Фе ВА МИЛИ МК ІТИ СУ, ІА ПАЙ У ПИКА М Юм КЛІ ЛІВО ПМ КВ ПАЖВИХ. мосту єна му ши рн о НИ подо ЛОДЕю Й ЛЬ Ж ЕЕ КИ Ах ТЕ ЕМу ж ни КМТ МЕ МАМУ УМ АЙ МАК АН Мк В КВУ дО НИМ АСК МОЖ т. ФЛ КМ КМ Кун ММА ЧИ ТЛУРМЕМИМЮ ИМК Є ЖК КАЛІ А ФА ТИВ К тю ВИ ХА шиття в я хх ооо вон о ЗВ о о и и он КО о УК в о і СА в о В Я ря ІЕМ Ой УК. ОКА НтИТх ХК я С еаіи и и ан кв о КЗ ТИЖ МАУ КЛИМКО ПАХУ м спіл иш Мотдліій пити меди ми ди доми ик и Мед им див В по яких ЛАМКІ МИХ Ї соя ви ВН ХЕ в ЗДО В В КО В ОД В МОЛІ ВМО ТАКО ЛОККА ТЕ ви КК ММ КВІТКА ще то. чи нн ан а ж а и нн о и а М ОК м а М М ЧК и « шо Мо мохи дл ле а НН в ЖЕ ОЛЯ ОМА їВИ. ВПИОМИЄТТСВ МИ АВ КМ МАН ТІ ПАПА ВЕК протя Ж в м діт МЕДИ В т МИ Кт І пит В Ди дих ВВ Кк и ди, шо А ИТИЬОСХ ЛІКА КУМ я 1 ВИК У МДЕ ЕМ КАТ АМКУ МУ АВТ КК ЕДЕМ му да цдевмк еи деОх пожива о ОО у и о и В и 2 ЩИУГМ ММ УЗА А МЛ ж. ВХІД АК ТАКІ ЕЛЕ ХИЖАКА КОМУ АЛ УТА ШО АЛ тю ЩІ ІЙ МОСТІ МИМОНЕ ВКМ КУМ УВА МИ ГТК ЕК зп стих дала лися КИМ вим ем Ки ви КИ Ми ОКУ К А В МИХ Ки Анд по Ж ХІТ ИСКМІШАлХї ПИЙТЕ ДМК ТИМ МІ ЖАТКИ МУК КАМ АТ ОК КЛЕЮ ММК Х ДОК УМ ВІ ПДАА ЗНУ. КО я ВН КИ В я Й ня А вони Не ЗА о Но В а ов кс ьяя « х х є н - . пло дл тку МОХ еле Ж Од КИМ ДМ пит В КИ ДУ я м Ки хижих ки вд КУ ЩО ши ОМА їОИ ПАВЛА ОВНА АЛЛА ЕВ АМОКІАААХ тест. лю М ут и и и М У й ДСС МА КИМ я ПЕВНА У КИ АМКУ и и АК КМУ КІМ в мкм Мити во и Ти и Ме ВИМИ МЕ випив ми и и КК пщо тя ММм ПАН ВМА М ПОВАЛІЙ ЖЕ ОАВІЖНИВ ЖЖ, Я ПТАХАМИ КИМ МАЛО КОЛА КМТ КМ ТМ ТТ УХАКАХ чех спи модний ее ди в Ку ДОА и Ми Ми ви и ду ЩОКУ МКМ Киї ВЛА у ЕК АС ЕЕ АТМ АВМ НЕТ КВК НЕ «клю о диди и ММК кон а а о о п о у пк о о оо у М ЕЛЕН ЖІ ДЖ ЗМ М АЖ ОТАК ВИЛА ПЕК ВМТ І ТІ ВТ АПА що Що ХМ ж МК ж змію ж х мМ жо сю ж жжит ки ххх км Ух м х , Я Фев щрж туту дуоденіт ве и ВАМИ КІМ КЕ Ми коди худий ЩІ ил ОЗІАТ ОМА АЛЛА ТАМ ТИТА ВКМ АКТІ КЕ ТАМ КЕ ВА МТ А ВЕ ре ЖМота маки
ФТТ. ІМ пурощикженихі ще шо щдлоу сум ша шт дит вий дит ди им КЕ КК КИТИ вия ДИКЕ Я ЖУК КК или коди я ЩО ШОМУ Т ПА МАМИ Ли АВІА ТАКВИХ МІК ВХ ММ ВХ МОВАМ ВО ОВ, ше Сущвуций ЩА Дт шум ки МК ие мити в и ух и кити и Мк и КТ ММ дити КК ЖІ ОМАН КТК, МАТИ МИТА КУТА МАК МИ КУКА КСВ І АЗИМУТ МВА шт ект и ФОМІХ Те МУ у ДЦ МОМ В М вик кю ми умим ем пою Ж ММ що М ЯлЛо ПЕТЯ МКІ ААТІКЕ АХ ЛЛІТІЛИМІКУ ВМІВ ТИМ ТММ ВИМ МИ ПТ ААТЬ ЖОДНУ ОТЕЦЬ, МЕТА УТ АТО АВК АКОТ КК АК ПАВЛІВНА ов по НН дили ки Кит ВД и ви и пи Ди М жо ДИМЛТ Є ШИМУ ЖУК ВО и В В А НИ В КО З СО М ОК о кН нь нн не М А З се зв ж М В в а в р п в в в в й Я В мтоирт МуУуллАтах я пек же В мими и В Ди А В КИ о АДМ ДИМ т НК КООИ К ВИ СОВ КК К и ВО а ЖІ ОПІШМІКАЙ СОТ ЕІНТК. У ШИК ЕММА ТІНИ АВМ КІ КОСТА ВВА УТИТ М ше тю клеми ПЕК ЛК пику дини кити Куди и уд КК ниж тю си ж дупи Ум чити М шЖшІНУ ЕТ ЗАХІ І ХМК ХМК ККД АН МАК ХІН А АЮ о и о В ВК ке на жо и м по а а п о пр в в а а пд лах БА ХЖІ Й ПОКИ ММ МК ТВ ТАК А І ВЕК КН І пло ХМІКЖВ пИчМІДИТ я 1 МЕМ АК АТ ТУКА М МТА КМ МОДНИХ ШМК МИТО ЕМ Е ММА ІА ТЕ ПА ХТ КАЛІ ВАТА ВМТ І МКК Ух ск в а СК В КК Я З ЗК а МК о м м М А ВК А М У МАСОВО ТМЕХМИ ЖУК АКЕВІМУКАТИУТТІ ВВА ММК КИМ МАВ ПОАСУМК ЛАТИ Х холу шт УЄШ ТО М даМи У ди МАК Ли А и и им КК МИ, ШО ШИХ СУМІ ШНМ МОХ ТІМ ІТАЛ КПА МІ АКТ ПТК МАШІ МАКИ ВАТИ ин на АНЯ х ОВ мини М и ММ М и у у Мам и КЕ ВК Ки У шим ХТЗ ОС и в А и НН А НИ А Я ІТ ДМК пра а нка і п о п о т і в о МОДЕМ УМХ МОЙ МЛМ ох АТМ МУК МІМІКУ ША ТМ ІІТ ММА штати шим И ходу или М пи и Ки Ми ти и я и ди МИТИ ше СТИ ТИЧ ММ я вес СН с Зо с Зо р Со АК В КК КО КК ОВ КО В ко Флоту В дими ЩО ов а и ДК о й в а во ни МО ДАМУ МИТИ ТМ я АКУЛИ УВА МАСИВИ ТММ МВА КЕ Б ак а ово ж ень Я с моде в ак жк ль ШВИ ЗП пк Си ло В Тв и В м чи ши щи меми тат я пд у их див ми ув вим ж ВВЕ ТИ Ми Кт д иа ви міки Мои МОДУ ЛО ПЕ ТА ДІМ УТ В АК ТВ ВИК ІМ АТ ВИ ТА ТЕКИ для ЖД жо жуки рома а аа а а о о а а а ца а а п п ОО в о ШОКУ И ММЗ Е,Х КИМ КТК ВЕНУ ОКО В КЕ АФК ТАКИМ КІ АКА КАК г АК же ИПІДДИ ГТК ВВЕ пути, ПА ХАН ЖТХшММИХХ ЗАТ АМ ТОМАТ КВК КВК АТАК КВУ КИ ВТ ІСТ ЩО Тлещ' бю утит о лу МУХИ Ж Мити М ММ КИ и ВИ М Мои Ки ну мим М КМ у им ВІ ОВАЛ ЦК МВВ ВЕ ВК КАШ МІЖ АТАКА АСВ УАД мими уки ЖК ВО КМУ ви о МИ Ми ВТМ дО КК вих Ж УМХ
ШО. СЮЦІМ ММА АХ ох На МВВ КН и АН плслудіріт спи пути Жировик ТИ вки КОТИК ТИМ Ки Ко и им ЛО КМ СКУ ЗІ, ПИТ АСКТТША КМУ МВА ЦІ АКДІМНШК ТА АТАК КА 7 ж а я Нв ЕЕ НИ В З НН В ЕЕ ЕЕ НЕ В З НИМ У
ЖК. її Брошки: доїти «чию с вигуками М УК Кун р тою МУ Дт ж У А Км дит ери мин джу тп хни ЖІ МУ МІНІ МОХ о в В В В ИН ВИ МСЕК Ки і ших ОН нн А мя СМІТЛУМІ В ЖАХ АХ СУДЕН МАМУ МАЕ В ДЕ КРАКІВ УКВ МАМІ ВУ ТЕНТИ з та дизитьи Люди ВпИ в вад МД вт м и пд и ті Допит йюб МУ, МУ ЕВИДа А вежа ко ва а а в ЕК в а о п п в о а КОН ші муки ПІКИ КК я и ИН МАМИ М КМ Кі КА КИ кати Мити и их а АшЕа МІХ. МТА МКК А В ЕТ лоз оду дви сешиии тид х В и Ки дн ил и или диву Ек ВЕ НМ ока їх ЖАТКИ М В ВАД о ВО Нова СОН ВС В Я ДА и р В хо КВ Во ов мое МІ м а пОЮОЖІНМИЕ ПМС у ШВА МИМО АКТ МОВИТИ ТТ ОВК а не а и Шк р Не но НН и Не Я в я деко брлєтю дози УдрХМ доки М й т КИ КИ идд Вих КВК й Кв Мод лив ие ох дещо Жлю ОХ МЛИТЕ М. КК ху и Уа С С В КВ В ОО роса КВ томі дя пл вал дм Мт Кл МИ им дики КІМ ди а МИ Мих ЩО МЕТУ шах СЕТАМ МАТ ПОКИ КВ КПА АНІ У шен пт Я З ка АНЯ зи и ати щи ВМ Ж ШО ККИшИЕ глФВИМИ У ХАТАХ АВК КМТ ШИ І КА ТЕКТИ шт шо хто ДА ВК В ве и КАК их Ми ДИН А Ж щхОИшІТЕЛ ОБУ МАТ ВІ АКАДЕМ МІТКИ місц Хл Малі поро во о в ровом о ад о во окоці МОЖЕ Х МУ Щит ем иа АН и НК В С КВН я шле миле п и о Ох що сю Оо ВИЗ еІвВуЕ ВЕХТАТТМИКМІТ ЕМ МКМ КМУ ВІЛ УКУПІ МКХ и кн в о о в с а о не а Я шо СЛУ пмлрмуд і дл пед дод ви и КК о В о ки дров шим ТМ хм иАи КОКО МАХОВІ ВАВ АК ИМАК ЕМ ВТКА МКК ККУ Е М КК ЖКЕКЖИЕК шу І ВИХ поле у дом и у о Ми ДОА и и до Ди Ки вих мі діло ниКх УТ МІХ, Її. КВ и о о кА ЕВ ОО С ВН па о В З ро ам ооо ав но о о і а р опи ВСЕМ пл ВМ о а НН НН Ви А ИН НЯ ши шо тя МК мими кити ик ли ий и и ЛИЖ КАТІ МИТА им ША АЖ ДНІ ТАМИ ММА ІМК ММК КІ КМТ АС ИН АТМ ТІТКА ШО МВ ЖИТІ БИ ЛОЖА ЛІ ША АТ ІМ ТЦ ІММЖМ МТЕІ ТТО ит я ХЛ жи ІМ У ем еем сим М ІМ Іще Мо ФОМИ и и ми МИ М що МИ ЗНАК ІМК. Х МІЛАН АЛТАЮ ТМ ЕВ АК Е ВИТАК ТМ УМ и А А КЕ Ки шо кс жк ж ку ккАх ша КК шк хх я мк х і ШІ АХ поп ВО МАКОМ Ж АВ МУ ТАКИ ПН АТ ПИ МКУ ТВ пт Ж шт В и я Мо МІБАОУЧЮХИ ЗМЛІ МІНІ Х МЕМ МКМ ВКА ТАТИ АМКУ ам, НИ ОВ МТА КУ МИХ пхати м ле руч ца о о о ц а о о н і о ЩЕ А Ци МЛ ВИх,.ї ПАСА КАК ВІКА КИ ВІВ акта що КУ Му ушу Осо о о у СО В ооо ро ССО и С СЕ сне ло ІДД ТИЖ УКХ АПА МИМА НМА ТАТА ЕК ТКА АКОТ КНТАТ КУТУ пасе: Мішані пк и Ко КЕ ик мВ ин им ви ВИК М о я ке са ов а в ДВ В ОК ВЕ о КВ Со В А ВЕ СА М ОО пила ци их пови дмозиив ша ик Ж и Ки ДИ АК МВ и КН и. МлоОшнмІ ММИизоо мих ЗАТВ МУ ЖИМ АКВА ХХ КЕ ЕХ ВКА МК УМ Щ Щ хжихУкУххижуУ хЖВ ЖИВУ ЖЕ Ух ях АК МЖ хх жВАМЕЖИМАКЕЖХ що я куму вм ов
ЗЕК. Ай фапревужевихиї
ТД ТИ ди а В о А НН а КН дим т жлтя м т Ох пн ні о м М в и Х жі мука ЧМТ УТА ММ КАК ВІ АВ ПЕК КТК СМАК ВИ АКТ ТЕМИ штук ін жд т педоктииин п Ки к ккои Еинининиоих и к иМ пне МА ОД и ЛИ МИ у пи НН ОН а КН ННЯ Ман ВН НИК плиту ВУ В и уд дл У и ди ди пло й шу пд шт я ХИКОАТИМТККТ ВУХАМИ КК КВ КИМ КОМА М МУ КОСТА МИ ТКУ ТИЖ КІ МВ, Щи ллудто ШОК и І ФУДІШИТУ! Муки Мити дом у и М КИМ кити ув у Ви дити ВИМИ ри ЙОНИ СМЖЕ ШИЇ СВІ ВУК АВ АХА МКК МОСКВА АЛІ АК КАК КН КВУ ВЕ, Мих 1АХМТІ СМ ОМ І у ПЦМ ЕК ААК ЕНМЕ ТАКАМ ЕВ ТОВЛПААСМВКА КІМІКТЕМНКХ т жо юн В ж жов жов х ов ж жшВая жк хау СКК УК ВИВТІТКММУ ММК ШУМ ТИН ШМК ПК ТТ шум тт щит я ом кн о о ск о о Со Ме Со ШлО ДЕЛІ ЛИЮМ СМ КІМ В о и м а о в а в а В В ЕЕ о Ом ит пюуУМи ДЕЯКІ прмзчечне нн а ар ана а а і а а в ар о КА ЧІМ УКВ ПММ ТК АЕН КЕ МІ ОХ ВМТ КМ ККАЛ шу ШАХ ВИК я ПВ ВІТ ТМ МЕБУ ВИСКА Ш ВУ Ми ВК МУМи ЕММА ВИ ВОК мотд МИ м до З Ома А я КН Ан А В НН Ин шо. БИ ІТ МИ Я, о у и ов о а В В а В ВК о ЕВ КО Ве ТОЇ ЛЬ ЛЕМ МУ ТО ПАЛЕТ НТ ЕМ ВАМ АКТАКК І ВІМАДІМ ІК ИТ А ИЕ що жо жк. УЖЕ ку вки. тки ккх Мк хх шоу зМихите т муки су М Ки уми им МИС ву ум М ру Кан М Ми Мк ШО ЖІ И МІ МХВХ ЛИЙ Ю ЗМІ В КОВКИ МКК АТТІЛА ТЕМІ ММ ГТМ ВО піІсшрх ШЕ ит шт УК КАК М ди ик д Тому К и т вид о КК ШІ ОЖШКХЛФМ Я ЛІШОМИЮІ. У ТІТКА ТАКТУ МІМУ М ТТ КЕ ПА АК шоу пз ше пен и і КН "ово ме МОУ соч я, ОА по ОВ В СО КЕ ВН ЗО КВН КО шо ш ті Те ПМ Му ди и дому КМ и мс ММ дих що АР МАУ ШМК МАЛИХ КМТ КВІНКЕ МІАКХКИМІ ЛО ЗІМУХВ фоМЕОТЕЖХЧ Ох ІТК ЕКО ВИТ ЕВ ЕТ ВЕК КАВИ дику и ЩІ кн а о в ки и п п р о і о о о В п пом ДОТИ ТЕМИ ЛК Ко оо КН ПК ВК оо и и оо ОН Ка а м я В ЗК М А о В НЕ ДК и МК ОВ В ВК ем. хо вени с ХК КЕ фхрадеекюнихі пееійщожт Фуко лю х сх пт юю ук може і ОІД УТАЮ ЗІВ.Х. КІ сможиюнме двхраюмаажамих пеамідвиви ОУЕН щу ЖЕК ЕМ КК ВЕ ЕІ Нд ИН В КО І шк КУ ЩИХ аа и и у ОН А УА я А вн о ІА ПОМ МОЙ ЕМ а Зк и ОК КОНЯ МІЗХИОСШОЮВ ІІТ 01, ТОМІ КИ ЧІМУ т МОрІУМ ТІТУШОК У МО КОМ М ВК Х фаст авищи й Ще ММ УВУ Тем Мт ДІ леї ТИХА ДИ АХ ОТ ли ВИМ ЕД УМХ еВ ХТЛМ МО БАЛКИ АЮ ТП ТЖМИУКУ ІТИ УТІК ШО КОТУ БО во саиру шо Ах он В В и КлЛООХУУ шмаВІВиЕЗ ке ан и и о в я Ки и ВНЗ тя ви М и. деки МИМи Ми ПМК в МКК МК ДМ ДИ УМХ «ОМ и Мун и и ШМК МЕ, м АМОША ЕН В на КВ М Ко Ва АК КИ НН НЕ и и о и а а мк и м в п о а В ЧЕ пед ЛУ. МВ М ВІ Но М КК В ЕВ ЕС ВВ ДО о ква о а ІСТЬ сМмуттуНИ МОх УТ ДІХУЄЦИЄЄТИ КИ ПИЛИ Ми МИ УЮ КИ ІМ АК ТММ В УК КМУ М ші ОД МеХМЗІ ХХ ВИМЕНІ ААУ МИВКЕМИИАХ хІсЕрІЖЕащ пили доОї ших шу Іо У МДЕ ИН Х хо ЖЕО шаХ ЕК ВО и ни М и и КН ОН й МЛС МІЖАНЕСІ ВИП МЕТКуІ МЖК ВЕК ВКМ МЕТИ АХ туї люшигут. Шотя мог ших шток В М М о Мицик Нх пх ТО ММА И СКУ ЮТхя. МІД ЕК ЕК В ВУ У КТК КА М ОМА КВ ВК шу ки у мити дк МУ п юним іди екв и му УК МК пов УМА М МІД Х ЖЕХЛЕТАЖКИ МВТ КАТКИ ЕМО ЕК ЗИ КТК не ник на а в М не ов вв Ки ОВ ки в ие ЖІ лЛІШИай ДИКИМ. БУБЛИТВОДаККЕВИ ОСИКИ УАНМ ЛИВИМ ЕТІМУХ ор Дол лм І УЄт т МУЧИТИ Мо У Комод МИИТИД й и УМ КИ М УВУ ВИДИ М НИКИ ЖИЖх. жи МИЮИ МТ ОВК яю ЖУЛЬЕН ММ ЕМ ТЕТ АЛІ ПЕТ УКАЗ ЕМВ ТЕТ шля п шо «пл І МКК МІ АЖТ ик У УМ ЦИ ММ мое им Мет ІК КО Ук МІ МИ МО шІ ІМЕН М ПІШЛО І ІБК УМІТИ КУА холу КМ У ОБ и а З о о ви и и КАЧА Ан ФАТИ ВТІМ ШОМО ЗИЖИИЦ ЗУБ ЮК ОХ БУМ МТВММуЦЕКІ МУ МИ КУКА кож о ком тмщ ук я дик ми ЕМ підт Кт виде кмит ЗАТЕ У ЛИВИХ ВЕ ТАЛА ММ ЦКМ ХКАК УК АМТ КиМУ шІСТа і ИЛ хом апа саше иа У М у тм УТ ІМ МУК М ІКТХ тло ЗлюБІ Й МУ СМх ях З В о КВ КВ З ХВ ЕН УКОБИКІУПРИЛЛАКІТКАШКІКХХ ее Ва я ж кн ква ян В Ко В В я В в ЕВ що КТ ПІВ БУ, Її КІПУЄУ ОМВО ТКУ АМСУ ОМВК УНК МКК штяюдом мк ДО ан НН и НК ЛО СМИ ши АКХ ІМХ юх У ОН Со В ЕЕ ВИ І НЕ В шлам ІННИ 1 кІПІСЖММИ МК ик ВК пи ВУХ А ЦІ ши ша М МІ ЗИВИ У а ООН и Я Ка ЗОМ В УЖ КВК ук У; штук ОС ХЕ ШК и ЕМ УЖ т и Шум ЛУ Мини КАМИ ДК пи ПО ОДЯТМАИЮИ М ТОЮ М ИТУМИ их ІМТ ЦТК АВК МКК АМКУ КМ КАХ ШТ Суши МЕ ІІ ММ и МК им ее МА КЕ и МИ и ДЕ МОВНЕ КАВИ о НН У В ОНИ ІІІ УМ вищ Іі ІМК Аа му КК МУ дп Кук ев Мі оуБЕииИ БІТ. ММ ЕТ ТЕКИ КІМ МАМ А КАК ВЕ КЕ СКОЖОКЮ В М КО ОК М ЖИВ Ж ЖК Ж хОжиЖ ВОМ ою ВИ МК ВО Ж МОВ. 0 МОЖУТ ИКИМ М МОЖ ЖИВ М КОЖ. оо Ж СУ З
ФЕЇ. Ж5 симовомюанх шжло хи мимо кт канти думи думі ВІШАТИ І лем мМ ших ве о и а Вл о в в о с В з а В Ос в а о в пл УТ т сли ж і Ме у мех км і І М т М Кук ШО ЖК ТАМИ ЕВ ДИКІ я, ЕММА КАТКИ ВМО МЕ ПІНЦЕТ УМАНІ тою диму п и ее и о о в о о о и а о м о а р а КА ЖІ ШИК МЕЖ МИМО А МКК АШКИИУ МК ТАКИМ УК КМЕ п РЛЗИМИйЙ. ШНМ 0 дУЙСЕВАИВЛІХНТВЕ МАТЕМАТИК ТУ АВЕМУНМХ ще ЖИМ Меч. НН око А ОК ОО ОК о КН шо маихХ БТІ КЕжШОЕВИХВИТОКОЖ НАУК МААМИ КУМ І ШО ХІТХ ША ТАМ ІНАУ КХ Що о и ан а Ле З З А чи КА ДА а и В ни м ж ж В Ж м о В ЧК ин м с В ШК Іо ДВИЗ нора вНе,ї в у НК В А и КЕ м и А НЯ пе А В НО з Я СКИБА УТІМ УЮ ІКТ ВУ АКОКОУВИВ МАУ МАКИ ТА мостюх мо Мт ші т мини ее но Ким дні ми МІК Мам кі п мим ОО УМА ММА ее и В ката лим шиє од следка и УлІ ВКМ ЖК тм ІМи с уд М ТІВ МУ М МЕ ОМЕХлММ ХМ ЕМХАЛІКНОЛІ МУХИ ЛА МІ МАМ ТАНКИ ММ МИ шви ки Мила А а і В НИ Ж ЖУК 0 МОМИДІ НИХ. ТПУБАСТИМЕЛАЗМУКАТІКТВАЛККОСКОМЕНИМТМАУТІ ВМІТИ ТАТА мети лю падали тм им ми ДАМИ МШшЖМ ТШ МК И дУЦимх ин а а МЖК ТММ МАНКИ ВАВ ОО ВМ НЕ ТІМ ІК ІІ ЕХ вв в в ен а ж В ьо с а в в я хол уми сце що Зп ми М Ки Ком их КІЗМУМ т КІМ и УУМ В юю КК о мих у пло ЗНУ ОК КАХ в АЕН ЕВ НК а НН в КН ох еКЯ шу ухил х я М и дви г кеВ М КН ин В МА Ви и сини вух, Моди що и и в НВ Ки и М и А ННЯ МИ ЦИМ ЛИ я и и З ОН и І НО и А ВАНН Мох и пліт ци шани тут Ви Ме пКІМКІЧЛИМУИ моих и Між АСУ МИЛИ тими КУ ОМ АЗК ХА АЖАШКВУ ЦИ ЛУТ ВАК ЕК К АТМ КК шеСстюд тних ВИР дам мм шим м в и М Му М м и вд м ми ми лож Же М ФОМИ А я т. дише КИТА МАМ и КОЮ шЕ ВЗ ЕОЯВКХИЯ.Х ВАШЕКУЦ ПЕС ОУВИААКИМЕВИ ВІКАМИ ММА ММ ЦИ ЖИ шле УМ ВЛ 2 МКУ мок мисі уи мир у рани спот у и КИ КТ ДО ОМЖ АЙ Я УЖ ТЯ еТЮтюх т оУ ОО о ЗВЯЗОК МА БО КОВО УкхтУхкжхвихх их Ух Ухиха Ух УХМиВКИХ хХеВУУКХЕО ХХХ. шоростлютук пу тло У ку МУ ПАОЛО. ХМ М УМ МУК МК лм АД УКИТИХ мробтьлі отут о кт вудобек м жде ие МКК кХ жк МАЙ І МИ и КА МАМО ОІВ. ЕУДЕМІКЕ ВЕК Ус УултУуєичк мо Ма АНІ 5 А ке а о АСВ МІ ВЕЛИ МИ КТЕаАМНІ.ї ВАВ МИМ шати ЦшА щи зи т В У Мі Ек МІОМИ лу АЮ М ХУ АВ Ж МАМУ шли М сої ХІМ т У сет УК ХО ЗУМаю; МО ММ Ми УААН КМУ МЕМ Ж ЖЖ Ж Ко юю ЖК
ВУК. Зх хородоюхихикї пІНЖАл. Тл по уевкихх дж мух йде У СЛ АЕ Щі1.Х Ов) єоєюкихх омуххковжаєях мослідовютинх сек лш дх я жит ек ККД и Имя вивід, у Ки Кн До КИ меж Мити я они жи кикух МИ ЖІ Сптовх.й АЛТАТТММУК ВАТИ ТТ АВ КОМІ ТАК КОТИ КМ шт у Ше пити вики житі А Ки или жи мм, ж и и и и КИЙ
Тім. СВД МИЖУ МІК М Мих ЕТАПАМ ІА АТ ТТ АВТО МТАААЦКТТ АКА В УТА КУ ТКА ЩІ шим ТДМУ М мед Кит МД И Мии М ЖИ мкл М дити КК и КК ПИ им мим Ми КУМ. ше МІ уд ФФУ ИЙОл їх КОСА ВЖУХАСВКНТІ КУВАТИ ТАКТ ВИКОН Т АКТИ ТУ ТЕ КИМ тик ди сим поєхии Же ию дані ж и ок паужемие тк в ВК км КМ шиии джем ум М оди в ун п Дал ІМЗО АЕТАССВАЛОВИВАСИТОАА ТАМ ВТЕКТИ ЗМІ озиме Мир М, оно ре «Мк и Ким и п АТ МИ шу ВИТ АВАКОВ КАКАО поета дн я Ду Ки они ее он ни Ки опа и п нн и пе ЖОМУ ЗЖТАТУКВМАЦИВУ ТКА КЕМА МАХ ВИТК УК ТАТА ХМ ІКТ Й Сх не Не ек а ДЕ НН А В В М НЕ и М шо пет ек сок додто сх под ий и КИ МИ и Ки ди В МКК у в оди ВВ хо мкл ДИ ТММ ОА У в МИ В о ни В У о В В КАС можут ех Мило тої ко о а о о а о но о т р а чия й. ЗЖМБю Мало жи ово оо о НИ ОН: САН В В СЕ КО КІ СТ Мо мем пи Шу имени ся Ж АК Ко нити ни ня що т тил Коли, Тек ЛИ МИМЮ ПУХТУТМММИ хо ПЕТТІ В МУКА М УМ МІ КАНТ МИХ ЖОВ УА МИ ХАВЕХІ КУМ мет ки ит т Додоиити ни кит дити Ма и и и А и или Мои и м КИ моти йхОжОМХ ПАВЛУ а оо вк ВН ОД КИ Ох ВВ Во ВО ДН и ВВ ДО В МИТІ ШИ и хи до а а в ден УМ ЧА Ж МТВ АМКУ ІМ МКК МО ТКС ВАТИ МОЗ ВЕ КЛ НІЮДХИХ Не а В КК В А Я Що Й вамжжх жу южЕКякжИ Уж жуки ВА Ж кож и А є х нах мо сршло ли токах ен нн я МО АЛІ СОКОЛ в ав а о М М В В р у М ЕК плюлжвтх ШИ Те Ед вад вим вд В и Ки вк ВВА КИЙ. п ММЗ ХО ЖИМ МЕ ях, МКК УЦИ КМ МКК ЕМ КЕ ВЕ ВИ АЛЕН МУ ТУ Же Ми ди ит ву ді В Ку КК МЕ В М КК Ки у, ил УСО пт ИсТ МЕС АЛІК МИМО АКВА ТЕТ ТС ВАЛ АТАВН МАК КАК поши ті Аді дике и и нини допов ин и ти ит в Ки и у ди они дн МО Ле ММ Х ХК ММХЮХ, ПДМ ВА ВК ВМ ТИ КОМА АК ІМК ККУ а п ня о у п А п о о А и ВИ шк МУКА шк пн вв в в КО в о о в в ОВ З ВН С ВК, шию мок дл пити у УК МУ итити у а Я шхочшав КІЗ ИЯ, МКАС КАС МІД ВВА МК ТИ МТК ТО ВВАЖАТИ МАЮ ПЕЖО СМАК ЖМО Пх сАСК ЖК ОК К МЖИК Ж КИМ, Се нн хх шою зд токє КчзЕшт.х и р а М ще МКК ШУМ А МОИОТТОАТ МИНУС ХТ У ЕОАТОХАА ХВ КАТОК МАКС КК КАК шезссужлудт ЗЕМ ЗА ші о о в А А х ЛОБА. ХМ ЧЛІШ ЗМІШАНІ ТИМИ МАТКИ КУА ХХІХ ЖИМ МИХ ХИЕМЕОК ПММ дОУ т. МІВ Оті ми оди уи див Вид и и а, ЛУ ПТАХОМ КБУБЛКІМУМ Т.Є ХМ АБИ МУК ТММ ВАК ВЕК АВІА А УК В ОКІВМККМК п Ху и огино ВКЗУ К КАМИ М ие Ве до вив КИ НИ КУ Ки ВК и К лти, ДОМІВ ММА ВЕМіи А ЗВМАЦИ ЕК ЯКИХ МТК АКА КАК МТ АТМ ВЦВК ВІКО КИ А ни А ооо и и и и о і А шо КНТ, а о и о НВ и СУ ВА Ви о я ХУ ск Ор а о а о о В МХОСМММУВ КОЗА МТА УХ ДИМ АЖВХ МИ ВИК КЕ ТАТ ККУ ТОВ КЛІК МКК МИ ТАКІ ен не в о м м о п В Ко о и В я З НЕ КЕ В МО С и, люжхнИХ
ФК. ДИ поважних полю остадир титу сдиш шу З на Кв МОВИ ДК КІ 5 АННИ УТА ММ МТМ МК ПЛ МАЛА ЕК МК ЖЕО ІЛАДЦ НМА ТИВИ КІВІ АСТМУ ВХ КНТ МАВ МТК ши в я ситету пи Ки ци ди ОК до пи КИ М ШИ В ДИ ЩОДО ПАМ ло МУ КК В в С М В В КК В ОК В НК ЗНО я дек ни зи их мети щи В КИ У ШИ ВИ МИ ПИ М МИТ МІ ДИМ Ще ша МЕ ТИМИ МЕ ТІК ММ ВА ТИ КВ І ТУТ ВАК ТИ МАКИ пе в С у жита меми мини вис и в ли Ан ки и ДИМ ди кити кити МдДОМИит. ММК ех Ко я В ВЕК С НН и ВОК КВН о У и ен КН В а а дод Жила Духи ЮИм А ЖИМУ ХК І ММ ВІКА КО ВИ ПУ ТУКА АМК А с и и І М В КК В ж м у М я п ших бл ше що Же дити Кит тих ДОК КОТОВ В ДОТИ КИ ит КК ЕК ЕЕ КВК КВ, ж ЖИВ ВР МШкиХ НК У о в ТО В НО ТВ КВ С В КИ С КЕ КУ шу жу дютм сім що Шити Ж я Вих В ВИМ ди Мити и Ід и в и ще АМММУЯ ЛУ М ох ро В В КВ о СО ВВ ОК КВК ЗВ ооо КО Ве ш фо кшЕсФа НОВІ АТТІЛА ММА У УА МЕМ ТОМІ МАСИ КОМІ ВМ п МІ ЕТ ОТИХ. Х ТИМ ТК АВК ММ ІМ ЕМАЛІ МИ ШИК У ЗІКА ШИМИ Ми ом ДМЕ ки ами Муки Ж ЩО НИ ММ В КИ МУ МУКИ УМ У Муки М жи, й ОНИ ТИМ КД и нн а ОН и НН А чеки де ау Мт ин кла р м а м і в п о че по МАМО МОХ шЕУЮИх. ХХ ОВ ВО В ВО В КН В ОД С Я Й вн В ов З В в т і Ов Не З а во с В З С М а В М о і З М ЗО В пд ХЛ УЮ БУК У ВСАА УМ ТЕ ВЕК ТЕ НК ВУ КУМ ОМ ТМ КАТ АД КМИН ММА пХО БЕН ЕІ КЖК Ії АТОМИ ВОАС КИ ПДМ М ВИНИ ТІТКА ТАНК ВИК а ННЯ нн а а на а во сл в п о и ин дж о МКлшМО КУЛЯ. ДИЛИ МА ТУ ІК КЕ МЕ ЕМ Ин М МА ЕМ пйтиж т вті жд ДЮ ро а м нн а на нн ща м а в о о о о о и в я ПЕЖО ПМС МЛМ Я МИХ ОМ ЖЕ АХ КАКУКМАК ХК МИАШЛЮ МОК ММ ККК АІ ВИК ТКНІММУКА М ШТ СМЖТМ сю ю т МИТІ дет длу меми пу п КА Ду и пи ТАКИ и МКК Тх сЖИ ТЖУМАМК АЮ АЖ УСАДКИ У ДИТ УК НКИ КАК путакшЕмц мли ати ої Мити Ми Ким у ке у их ух вия в ик и КМ у іх Якшо МЦІФСУУ АТТІЛА ТЬх МЕТА МО КУ АК КМ КЕ КАХ МКК ТИВ, ЖЖ пох ух ж жа юм о ж юка кож ех кто ою ХК, мч паж гох хчики ох СКК КИМ ди В В ЖК ДЮ ДИ Ки Дт ДИ ви тя Щи ОАЖІСИХ БОМ ОТИТ МК ДИ ВИ ДАВ К ТОК ВЕНУ ВОК ЕМВ В, а Фоми ник ки и дв тини р иа ма и Фо ЖАХИ ЛЕМ МИ Ух ни сек оо о ов о в о а Кв о Ва ВК о В о СД Ва СК ОЕМ Чи улдува лм палої уж их Ту и и Как ву УМА Ж й ПЕ КИ І ди Му І ви до ВХ ТУДИ МИ ях ПАК КИ ММК АД МК МІМІЦІ КУКИ ТАКИМ КТ АКВКТІАКХ мете кни ему во А а од С о иа о А м си я ши СЖИТІМИ ШИХ ВИ КИ І ФЕИПАТ ММА ІА ВО ЕЕВААОМИМУТАК ТТ ТИМИ МК КМ ВМ шпик и сети и вд МН І ДИ дим и Ів о м Ж НИХ ММА КІНМ а Я УЖКГ АВІМААОК ВИК ТАКІ ТАК АКА АК ШТ мем она а а о ні о ач оре о Я ЗОВСІМ КМ ТК ВИ У ВИК ВИМ що ще ее З Ве ж м я п В Я о М КЕ М а п кв о СХ
ФС. Ай зпрадсежения Шок ІМЯ ХЛЮ АКТІВ. В В В и КК фо тир мм а а а а а у и т у о о у а Ми МОМ ВМО гу Х ПУЕ АВ МК ТАТА КАВА УК АКИ ДЮКА МИМО праці о ан аа а о р оц о о о НК ВЕ или КХІАБНИХ.Ї МОТО АКЦХУ ВКМ ДІМ МЕ АЛ МНУ К М А ИІКНЕЕНУ К ІК ТА ше Мо В ож пи оо а ау ан а НН Де ДМАЛДИЙУІ ЗМК ех ПІКУ ЕАУУ ВИ ПИ МКМ КВ УМА МКМ МИ КІ ККАЛ КИТА ЛЮ ТлЮ Мети До ше и м и МИОЛеМ МИМО ши жк КЛ МТАВИ МАМО КАСЕТ АХМОМЕЕТАТА ТК СКС МАМ ІТК КІ ВАЛКИХ Ул тм Кв и зум ВИМ ит щи АЛ АХДИ И ДК К ВК и І и м Ми ли КО МОЖ МО ОМІНУЧЕ КИШКУ ПТ ШИМИ ВІ ЕТО Д КІ ДВ Т ВТДО ІА 7 ки ше ик шк и и КН А НН НЯ БУ шок що г У тк кВ Код КИ им ЮК УК ДА М Ми ув М ЖОВ еВ МТВ А ЗІВА АХА ІВАН МИ ВИТ І ММ МТ ШТАТІ пику що жк пліт м дими вет уки В и и ик КІ ТИХ ОСІАНМУ САМИМИ ОХ АТМ МЕЦ ВМО КВ АК АВС КАК АЛІ АК ВІВАТ УМА момею а мих и у в НН рн а м и А ан я М ог ММ МТМ Ку и ЕК Ми А НВО Фе михк Ми мив юю цит м ми ши и дм КИМ КО Мини Ж Ж пи Ки и МЕ т неси нені ин КИ шо МАМЮ В МЮУ ЗІКА ВУХ ДИМУ А МОДА ХВАТ МАВКИ КН КЕКВ пе ОНИ фе Ве ді КК ди ДО КД М ВИД АН и КК ЕЕ В я КИЛИМИ МУКУ Кл МУКУ МИХ МАМИ У ХМК МКМ У МТИМУМХ МУ АЛ УМ ЕММА ИКМІ мя плдлпю оп дти Н нн А АН НН ОНИ УМ ми КІ ЮК я Ух МжОЛИКУХВ БІБІК, ЖММКІОВІААСВ УТІМ АТ АМІАК КАМИ МЕТАН жене ЕК р тон нн в ОН НН Ки НКУ хе пт кт У пули отим Му ти М Ми МІ де КИ У МІД ОК Ж ик УМ ШО ДОМА УТА АКА АЩ МИТО ВАВ АВАКОВА АК ІМ млості пилу шо х о ово с о а о я пре оо с о и В а я ши одАлЛИ пИМЗИІшЕАХ КУНА ЕМВ ПВА КК АСТАХОВА КТ ПОКТ ЕІ мкА Мт ким плед дл Мети ВАМ и в в и в ДК й А Мо ДИТЯ МІОМА ЗАМ ПЛИТА а МАК ІДЕ СКАЖЕ УМ ЕМ У КА ТЕМ КМ КТК ШІСтеюю У А Му кит пора и в а а р а А і А і М і і п І
Ми. Ж ОНЯТ МОХИ И А ПУТІ ОТАК ТАКА АТАКА БОЖЕ ВюЮФИЗАКИ СЕБЕ МІК ТОК НА ТІМ МТ АВТ КИМ ТЕСТАХ ТАТІ МК пал Мщ Аа дО тут кими Ка и и ММА Мд МИ КІМ М АУДИ В МИ ДМК Ме п ОІВ УМ СУДАМИ ТУТ СЕ КОХАН АД МАДАМ АЮ М АКВА КАВИ ТАМ ТАКИ 7 Пюкх ос м кю в кжх о те ся жо южеюю СК А ВХ Ж Мом екс дит ол лолику хх пуття Ки дики и Де МА КОМ КОКС Мити у ДИТ Вучиим ШЖ ОА ж МТМ А Я ММХИ МАМАМИ МИ ІК МА ТО ВИМ АДМ ТИ КТГ ВК шт пе их шипи ту МА Кмин у моди и тив ин я Ем МЕ ОАЕ А МОУ ТИХ КЕТІ МИТ СВ ТАКТИ МАВКИ МІ ХА АЛ ВИМААКХДІНТІ МАТ ун ма влтмУмт. пд м щи Ме Ми Кв и ДМ КО В ІМ В ММ КИ Ки МИ ОБМАН. БІЖИ ІМА КОМЕТИ АЛЕ ММ НАМ АТТА ВААС КАВИ шт щи пмую ах ХОжиІАмени дл КМУ влити ММ думи МИ му тва и и КА ЩА ОЛИВ ШОМУ А МК ХХ МУК МКМ КИ МК ІВ ААУ Б ММК ВЕК КУ Пе ми дл дих порно і а а ла о а в і м і МО МУКУ КІ их ДЕУКТИ ІОВА УМА У ВМ АД ВЕ МІМАКВКЕ АЙАЛК ИМЯ ДАЛЕЕ А М во а оц в он а а о в п оо ЖИ азаБеЗ класи иаї ТММ ММА ТОМУ АКТ МАКИ КАК КМ СЛИМАКІВ У ПЕ ОКУ ТТ - - пе З Я Зк ик о я п о о о ур о с Є Ді о и о ЗК я жу фар -
ФАК. и ЗБродвовевимх
ШЕ а КО я РУ и Ми КК НАМ ФК илии М оЕиІ М МОВ ми Км ми Уж ук мк мочучих ЖИ ХІЛЛ БУГ ЕМКОН ВІН ВАК МКК ЖИТ шт пе ТЕН Мел Ки ВИЩ ух ик В ММК ХМ Мих В Ки юки Пе, ИН в ТТ І КТ ВТ КЕ АКАД ТАКЕ ПКТ ІСТИНИ вд дит пекти че уд у І Кинь у М ДІ Ки их ше зу СИкВ ЕТ. ПЗМІТКИ ЛИТВИ КАЛОВІ ААТТИВНАТ ТЕТ стук А имя о: теми почти, ДМЕ в Мов вок вв ди м вв ви ЩО ЖИМУ ПО ЛІМІІ ТЕТ НІВ ВАТ ВО ТИ за ми дк пн НН ТО ла ї ТИМ МАУ КОХ о ТК т мА ММК ТКА М 1 АФ УМИ У КОМУ КА ІА МТМ МИМО КЛИМЕ шИІС лиИВш Мо сих От ти Е мити у мучити Ви Мед ДУ и ду Кк В КАТ дух ДИ УХ ДИМУ щеж Ж шу ЛІ ММ ПЕТ МЕТ ААУ ВКА КИМ АИ ТТ ож жховююхю ххх фо жд юю Ж шк 0 жюшюхюх сю юю с юх фо пшл сто У тд петЕИи у ДОТИК ди п еВ У ЛИ ДО и ОК КИ вид МК ДЖ У в о а В Ов о і о в М с Я Кен масці пилвихити ад й им и и мех ие в в дк ДИ коди ди ми ем мук М Мло ОБЛ МОВІ Е Я УТА СКАСКІВ АВ МАЕ ЕК ВУХАХ жваву мли ее В КА ДІКА ии ВК ПНИ Ма ДИ Ж ух А СТИД и ТИ М Й Мт ЕОМ МІОМИ Х По сововароВ ан у ЗОВ КН Ко ня зх с орав Кв о о о УМОВ В о ДН Ко Я УУЛИУК М М ДОДАМ Кам и В или ик ММ ВК мити КК и ак ВХ умо МІВ МАЙ ММ г ПЕС ВААТХТ ВАСКО МКК АКОТ МАМА КОТ КМ КПК КІЛ м НЕ и ТІЄЮ Муки Ми ко КИ ВХ УМ у Вих дк М МЕЖОИ МИША Єш. Ен А А А Же Ж АСШІ ПУИЛКУУ Ох кВ зар в по ЕС ОК КС КК ОВ З жа уж жу жУх МУ ххх ут жа хек жимо хх ших хх « ї - ї « х . н . жо Лія ОБЛ УО, БАХ МУРИАТИА ТИ ПИТАЛИ АКТИВ ТТ КТ КД ТИ шила ше х мн м нн о п ца о а м а о о п і о В М, ОМ ЕИ ТЕМИ У ох АКВА УЦВАМКУМКККИУТ КК ПКМ КТЮ МК ТАТИ Ж лу У У МД ДМА АК ЕЕОКМТ ТЕ М ВІААИВМТ І КК КЕ ТКМПМУАДКХ Ло: САЖІ ЗАЛУ УМ ЛИМОМИ До М ТОМ ЕМЕ КОХА ТЕН ГАТТ АЛЛО ТІКАТИ КІ ТВІТИ ШУМИ ЗУЄ ТУД л КМУ К и ВИНИ Ки КК Ка КИ у в Ки тих, Мп дя ММА ОО В ВЕ а ООН СИ ЕЕ КУН штук маш Ман о о Я лиж ТИЖ Мол овлат ВАСІ ТАТО М МИ ОМ ТК КО КИТА КТ Щі ов в в М КК В М а ЗВО З З Ох З ДО У В В М КСВ м ох хх Фо св фл що я ВО мех еи м о иа що и Ме МІ МУК Мих ех А нн ни МЕЛЕ ЩОДО ОО НО МІН мих ах пом тт дуд и КК ди и кни ВА КИ ие Кл МО БИБО МУКУ ОНИ АВК ТАМИ ИМЕНИ КО ВЛА ТАК УК ТОВ ше трм ЦЕ сади пило он и дю МОЮ ММ. ТА КІМ хх ПАЛИВА МУК КОАТУУ АК ЕІ МО пкт м вм А иа р а і о ОО А В о МОЗ МИЛИХ ОА ДОВЖ АВІ АВ АТОУММІА МТУ АТО АТАВІКИАИАК ММС ТАТИ МЙОЩИТ Малих ІММУНОВІТ МК ЕІ ММК В МАЛИНА МЕТ ВТК тек схасма Ми щу и лот кидки и нд КА МИ М Вк ХО МІВ ЗИ. ХК АСТАХОВА К МКУ АСОМ ГАЗОВУ УМА ВЕК КАК т пт ххмо жуки ох а мих муку юухх жк хе уххм х хо
ЕС. Ж спусдююткчх яиий ж ШИ щО ЖЖ ДІЛ УНК т Ми МЛК руди ЕМО ДИ В ММК І УМ М МКМ юки шо АК ДОМІ АХ ТА ОВ НЕ В НВ У ЗО С с і о мо о КО ОВО з Ор о Я юр то зу у Мт в в нн йлОЇсНа неп, Ко ин а НК НН А КН СН Я дит удо межи веде о о о о а кв п З р о по ШОЕ ЖДМЛО В МТА МАК ОХ ТТН ММ Ку ЕВ МИ ЕТ В МАК ТАКТИ ШО УМ МлМИ МАМА ЕКО АНМАЛІВ КУТИ А КОСИ КИ АДАМА ТИ АХІМКМ КВ ИІМИНИИХ хоп хе: путидти дики в пити в и ВІК МУ А КІНА ДИТ ДИ КАВИ МОДИ МИ жом МОМИЯЧІшгІМ ПЕЖО МО ТИ ТАНКИ МО ВМТ МИ УТІК АВ ТС МЕ ВК доти мА их мому ду ди дити ди пев Ку В г дк КК их ШО ТМЕТЛМО ОМИХУК Ти В он о и в А о 7 щ ин в ВН НК и НК НН жи ШВА мк ПАХ АКИ ВАМИ АВМ КАЛІ АК УХККЕТІКТККХ шо ЇЖІ МшМООВ.л ПАТО ТАШИАКІКУ ТАЦІ КАТА УТА ТО ТАТО КТКАУХ СТВ ЛЮ МИ МУ и в ки и До и МТ Кл в и в, Ди и по ЗБИВ МИ ВИМ й ПМК ХІМ ВА АН ВА М ЕК МАЛЕ АКТІ АХ шля тх ди и и пекла ие дих КИ дн у в и и А Кит А МИ НК ВК и шо іл аяВ дише вти Я МИ ТАКА МАМІ КА М МА ВАШИМ ТІМ А АЛ ТІЕКОАКЕ ШО МИЛОМ КИ ПАЖІХВТУ ПИВА МИУ ММК ПАСКА КМУ УТ ТАТ шМО ОТИХ КЛЯБТУЮИОХ ПАЛАТИ КТАКВИМ ААУ МИ МТА ТАКТ КЕ АЛЕ що т- мишах Ко а ла а кн А А і А ра НЯ В МІЙ БТІ Х ПММ ТМХ В Т ВЗАКУТХ ВМ ЕМ ГТ ВІКОВУ МК ЖЕ КОХ АКОНІТ Х МО ТНЕУ Нема. ПИЛАМИ МСЕК КВАШЕНІ ТИПИ шк аулв шЕ ее о о НЯ шо ДМ У УЮ МТК вок в кр м о и в в п о АК В В шт до сег ПуКлАр Ми ди М ДЕ А КИ МА Ки и чи уд и ит ЖЖ ОІВ МИХ хи ШМУІТИХ ВИМ ВХ АЮТІУТ АУТИЗМ ШОУ МОБ ши СМАКІВ АТ ТАК МЕТ ВИТКИ ЕКОН СМТ АЕН ИТКК КИ шах Бо КоЕ,ї ОМХУМУУАМК ВУХ МК У КУ КК КТК й ще вв р ШК ня КУ ен и в а в ОН МАЯ ит АТХ ДОДОЛУ Ю.Я ДИМУ ТОВКИ МЕТУ КК ХТО ТММ МАЛО ВМО МКМ ТКС МКМ зекмтУКрІю ТИВИ щ а а А о А в о а ШИ От БО НХ: 1 ВТІМ НАМЕТ МКМ ВЕК МТМО АЛОК АТАК ВЕУХ ШК ЕІ и тиви си КУ мив Ки ВИ Ки ЦИ ит и ти и Му их п МІМЕ Ж ЛЮ ОД ххх вуса о а о Ж А І ПН В НО клошкіащяй смт нен р я ОО А А мо АНЯ Ми ОЖБІ й СПКРрЖМІті іх ІМУННІ ВМТ Кок сиве ИН Я ясен пит Мой дини ит и о щит в ни рити т. МшМО ую ОМ юю ТИМ МКК МУК КК КІМ В Т САВШ АВІА дит шию луги ДОН и А и о НИ шХОси й ВУЖ, Х ДУТИ КМ АТМ ПИКА ТУТ МИ УМ ще тп с Я шоком Уа вом ж а с В о В Я
МХ. лов ДЕНО ДЖ. ХА хг. 8 змродовхавнах на НК Я ки ВТ КИ М Дт, ТК ТО КИ КК ЖК УКВ пи ДМК Км де ВВ, пот МАУ МЛМ Х МИ ММА СА МИ ВА УАОКУМТ КЕКВ Й МАЛА Х ДОМА МА о КАЛУШ ЖИ МУ ТВА УЛАМКИ ХХ ши ши пмуаБ Її ПАТОКА УЄЄВ ВИ ЦТК ПЕН КУ КИ В ЦІ КМУ КИ МАЛИ СІЛ едикт МІМІКУ и у утиліт КИМ УТ Ми МІК йо нлХММК пАЗОТИЮХї АНТАНТИ МТМ АНІ ВАТА ТИ МОХИ ОІД ЯМ СИЛІ. СПАЛЮВАТИ ТКА КЕ МАТ АЕН АТ КІВИАИМКХ тихтемек МизТдуй ду ко а и и о мо о о ни п ач нео МОДА ОМ ПАМ КМ АЖ З ЕМ МАМ 1 ЕЕ І ММ О ТМВ ЗІМКЕАІКА А МАСАХ КМТ ше Мід и ин А ДМК КИ нд Кути КИ М НКИ тя Ки ву А, пло але ВЕЛИЧ, НЕ ОВО а и ОК А СЕН А В СКС ВА Й Й ки Не в в в п в а о В Я М м м а в м в М М М Я ххх, чт чі Щщ ХВ тдмОх лиха Мах доп А ІЙ КО КІТ. ПЕЛІАМЦИКУХ МЕ СхП ШЕПЄКІДИО АЕН ДЛОВ Али нива У А НК У САУ ня пут МІЛА ММО УА ЗО ШХКИ Хохх Мах. КЕЖМРАМИИТИ У шекплу ци шпал пу ТАМИ Ж СУБІВЗВЯ ДИТИ. КТ АДКМОМ ПУТ ми ти жд Вих и ож МКМ А є МА. АБИ пекти М: Моди межа жи хо ллзшшм КІВІ БИЯ.Ї ТРАВМ й т хо вик ЗХК 15 сне Я
ВХК. 15 фгнрздоююкикхз сік. пк Ох ди сита век міо Кір вкквртм ШЕОВУЖ. ПІ. В.І мохи виру ваююх ки вОннОКиеИ Поу чом іме чим пен ви КН КН НО Ж Зк НМиЗЕл,.ї Но о ан по ТО о МОВ о се в я ЗД СКК о В в В В З КІ кл дане клав ІКП ЕМУЖКЛ АКАУНТ МКУ ІМ кОм БИЧКИ аа а НИМ пожещі Ак т пед рев е іне шип і ш еш МК М у І и п и ци ши СЗЖІ У пи ПЕКПЗКЕШУТКВІМЕ ОК МОХІВ Ми КТК КМУ дОошИл зони ви. Х ПКМУ ІК ІК МК КМ ТТ ПЕ й КЕКС денно и кн БО й ПМ у УКХ А ТНК МПК ав ЗІ ВЧИВ МАКУХИ ди ми вд Порт вами и КІМ м ЕК КА фе и и ши тус БЕЛА ТММ МууиЕвЕ М УМА ТКУ КІМ т Що ки ки Км нн о п пн о й уйзак семи свимо с зиугашецтлку ка иа Кеті ритмин и Ап трДІ МО сти Ей Оо От, ПМЖ ТКУ ВМ АКНВММ КУТА ВАК КМААКЕКОМТ УМ ТУ а а БО ЧОЧЯ ссср КАТКИ КВК ик ПКД ВЕ МО МИ БОМ ВЕ ОК В и Ки МН пика што СА доска пожувати дод и дя и МУ ІЕМ уки. Ях ВЗ В ВН ОБ о ке НИ ОМ о В В За З Кі ДСН шо на са ен а ан о ов р Я пити да кю діди тнІ им Мр ВЕ ит КУ у пи ОВБИЛ ОЗИМІ КОХ ПАВУК ВУКИММ ВЕШАЦЕ КВ МАБТТІ ТС МНК ПАКСВЕИТЕУВІ МКК ПК шумі му шт Мт підтипів до кре ж и дии ет к К КуМю кею
Ж. ТІМ ФИКУу ИЙ и У І КК КВ ИН ИН ж ка а п у од р і я кл ОвЖУЄсюЮ КЕ МЕПЬ.Ї ПИТ КІЛІВПИ ВМП АЩИМ М ЕЗЕТІАРТТТІ ТХХММЕТ ХМАРІ БУМ МТМ ко Ме Кн ен ак Не не ІН НИ А ак о НК ж жхжж хх їх тРдрюи смаващд ої гу т мір цип Е цит у маш м Мр БИТИ Ки ДВ КЕ топ К ти ДИи пи. ЕТИЗІВ ЖИМ МИ, Ї у и в вк ке ка нс р о о в З ОВО Пн т ния піді и: КЕ ек ТТ, ши щи МАМ МИТНЕ ве шу ВО АКТАМИ ВОЛІВ КИТ нн и А Й он лопне БУ. ТЕТ ТІК У ПА КК КТ КК ОКА АЖ КИ МИ КК ЛК пита кА еп ариниевим мем мим В иа й цях МОМ ЯЗКИ ТЕО У ВК З СВ З В В СВ а С С ВК ОККО З он а НК А НИ улица НКИ Кука І ДМЕ, МИ Од ИеЯ ПМИХЖТИИ У МП е КИМ ИМУМ М У ЖИЛИ МЕМ МИНЕ ВХ ЖУК ТИМИ ІМЛІ ПМЖ МАМИ зт нити ЕВ лм чисел жеи нки и МК КЕ КК і вин МО КАМ КМ. ПИ КЕН я ЗВО В ро о НВ пн ОВ МОНЕ З КОМУН 7 що и и ни и нн п м м ня ку п НЕ КО цех Уцтю сок МО кпк КК и Кит и т Кт ку КК Кут пло ЖТУВА ЛА ЛЛІМУ.Ї МОМ ИУУ ХХ М МКК НАХ МИ А ХА МЕМКЖ ТИТА УТ о ни МІЖ УЮТМИМ І КиМУ К і Ку ит Мити Ку ДМ КТ КД КЕ МК Ж МИ ОЕМ КАВИ МІК КУБКА МЕМ КИМ ИКУ ПІДСМААНІМИКНВО КИ нед ти кр Моне вищ окр уч ен щЕЩУ К др хе КК. ОК ТЕО у и НИК КН М В Я НКУ пен нн Не А оо КО ЖЕ п аа ПЛИНІ УТ ГТК ААУ ХМК КЕ а а З В А я пе о а в в п п о в п КК о ОК и а Ко МОЛІ ПЕ Вл що СОМ, ПТеВОТ МЖК КІ МКУ ТММ МОБ ЗУБАХ Луг их МИМО ТМ МЕТ МОМ ТЯ МК ТТ ІМК ТММ ТИ УК ЕК ВИК МИХ па на а ж в а а в м ВК М М а в в о В о
ІК. МБ зіпредскоюеююх! пуху ни год полю івжшивих КД І Крим Кум Кит жим Ж ІБН ПУШаНіІВ.: ДЖЕМИ ЖЕК ККУ КИ КАК УМХ МОЯ Жляпівил ПБП МДЖІ МКМ Усе ОК М ІМЗО ВО ИА МУ шт дл т фони М ТІМ Кз Дом ше Ім Куди КО дних т ви МО ДІМ ИшлЛІ БОМ ї М ЛИЖЖ МЛМ МЛМ МЛ КУ Мои ММК ЕЕ ХІМ НХ МИНУТИ МД МОХ пед. па У кі о Кт М ІК р Ка Мод кити пе ЩОЯ ОХ ХПЛ яІ ВА ЕК ОА В На и ОК ОХ ри а а : : м й В а а о по м а пи жи имя и нн і МХОШЦІМОУ М ДІ МИХ ІЗ УуККИКІ НІК КАМКТИБУ КАНТОМ ВИНЕН ШУ Ум ско мук пот уки в ем і ШІ АДМ Ек кими ми ши Мити ЕРА. У ЕЕ В В Що що туххствахистуУхуТ МКАС кю ХХЮТ ЖЖ х юю шток мам дор ум ккд у о КМ Мп ке рих вир п МК т ух ВА НУ НИ Вони М и НЯ НУ ТИМИ У щх шал А ВІЯЛО Х кре НН Ка І НЯ пт Ко тоні Муровані кн тк моло шк щої ОК в А ВН Не ВТ КО ОК ОУН що АНЯ ї на А она о а а о и МЕТ МИЛІ ИЙ ОН и и В В В ро Ве о ХО ші ПИШУ. Я и НЕ в и А НКУ пр ач начАнии ою ПОМ кни и ІА ект ви КК в ванжданя я хижі шишок. АК дим пери ом вкл е и еко мні цих ШО СИ МЛИНИ и КН ЗК о о В НК СТО ВЗ З В КН п тт тшжжжеи юки ххх Вже юю Кі юю шко стулатіко пе й ділом тиру тм их т КОМ В КЕ Кт ем Ук шу Ви МИ ІВ НМА, кітч ІК КІЛ ЕКО М ККА БІО ОСЛЖЛМИТЬОК МЛ СУІ ШИ и ЖЛПЕКІМТВЕиТЦИУИЕВКІЛУ МАКИ ЖИВИ МАТИМЕ ММ ВХ шити КУ шу хорами дви: ПИ ди Ум ме У І ЩО ЖНЯ Я БК я КОТРІУМТУЧУХТУАКИ Є НМ ХУ КАВИ ТЕМ ТЕМІ шт дмми кт М а он Ма ше МИС. ВПО КТЕЕУУ МУ М УМА Ви ЕК ОК И Є ІТ МІ АТ ши жд що тек рожа пн о Я кл ОошЦЕВааВ пон О Вії ХІІ ТЕКИ УАНМ АКА ЖУКА КЕ КЕ Мер к Же АТ и о ОА ОО В в що ДвУОсКа КТЗ пВІ ВОЗ ЕУуВТУ УЧЕТУ МУ МО ТК ТЕХ ЕЕ МІХ тт тт ххх зт;рхххуМіІЮВХХХ с, хоІАКОВ УКУСИ Мх Сх ххх Ж ОХЕФЮКО ТЕМ КЯ МВ, З їкд У За ЖІ ВИ Бий МЕ шили ших са ХО МИ 13 КЕН БУ де лу фраки в Я ех щи ди шлю х ВЕ ОЖІІВАЙ ПЛІТ ВКА. шмтілиУМаи ід пи я МО МиЕдшУлЕ КІЛО. як не - Му : хо жо вирок -
ЗХ. ЩЕ дпродсчаювинх ' М
UAA201711061A 2015-04-14 2016-04-14 Опосередковувана антитілом нейтралізація вірусу чікунгунья UA125206C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562147354P 2015-04-14 2015-04-14
PCT/US2016/027466 WO2016168417A2 (en) 2015-04-14 2016-04-14 Antibody-mediated neutralization of chikungunya virus

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125206C2 true UA125206C2 (uk) 2022-02-02

Family

ID=57126199

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201711061A UA125206C2 (uk) 2015-04-14 2016-04-14 Опосередковувана антитілом нейтралізація вірусу чікунгунья

Country Status (28)

Country Link
US (2) US10787503B2 (uk)
EP (1) EP3283101A4 (uk)
JP (3) JP6979875B2 (uk)
KR (2) KR102541905B1 (uk)
CN (2) CN114478756A (uk)
AR (1) AR104264A1 (uk)
AU (2) AU2016250188C1 (uk)
BR (1) BR112017021952A2 (uk)
CA (2) CA2982491C (uk)
CL (1) CL2017002596A1 (uk)
CO (1) CO2017010316A2 (uk)
CR (2) CR20170518A (uk)
DO (1) DOP2017000236A (uk)
EA (1) EA037060B1 (uk)
EC (1) ECSP17075750A (uk)
HK (1) HK1246671A1 (uk)
IL (2) IL290449B2 (uk)
MA (1) MA41517A (uk)
MX (2) MX2017013286A (uk)
MY (1) MY191666A (uk)
NZ (1) NZ736445A (uk)
PE (2) PE20220297A1 (uk)
PH (1) PH12017501865A1 (uk)
SG (2) SG11201708152SA (uk)
TN (1) TN2017000438A1 (uk)
TW (2) TWI772257B (uk)
UA (1) UA125206C2 (uk)
WO (1) WO2016168417A2 (uk)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW202300515A (zh) 2016-10-20 2023-01-01 法商賽諾菲公司 抗ｃｈｉｋｖ抗體及其用途
KR102029394B1 (ko) * 2017-11-14 2019-10-07 재단법인 바이오나노헬스가드연구단 치쿤구니아 바이러스 감염 진단용 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 및 이를 이용한 치쿤구니아 바이러스 감염 진단 방법
EP3735270A1 (en) 2018-01-05 2020-11-11 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding anti-chikungunya virus antibodies
US11851478B2 (en) 2018-01-05 2023-12-26 Vanderbilt University Antibody-mediated neutralization of chikungunya virus
US11560421B2 (en) 2018-02-09 2023-01-24 Osaka University Broad-spectrum monoclonal antibodies against chikungunya virus E1 structural protein
JP6906207B2 (ja) * 2018-02-09 2021-07-21 国立大学法人大阪大学 チクングニアウイルス検出用免疫クロマト分析装置
US20220265806A1 (en) * 2018-06-06 2022-08-25 Albert Einstein College Of Medicine, Inc Antibodies or antibody-fragments thereof targeting alphaviruses, and compositions and methods comprising same
WO2021042021A1 (en) * 2019-08-31 2021-03-04 Vanderbilt University Human antibodies to alphaviruses
KR102202082B1 (ko) * 2019-09-25 2021-01-11 충북대학교 산학협력단 치쿤군야 바이러스의 외피단백질 도메인 ⅱ에 대해 특이적으로 결합하는 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이의 용도
CN110922478B (zh) * 2019-12-07 2021-07-30 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 针对特异表位的抗基孔肯雅热的全人源单克隆抗体及应用
WO2022101805A1 (en) * 2020-11-13 2022-05-19 Emergent Biosolutions Canada Inc. Hyperimmune globulins for treatment of chikungunya virus infections

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2598966A1 (en) 2007-09-07 2009-03-07 Institut Pasteur Anti-chikungunya monoclonal antibodies and uses thereof
US9000131B2 (en) * 2008-07-31 2015-04-07 The Regents Of The University Of California Antibodies that neutralize botulinum neurotoxins
WO2011124635A1 (en) 2010-04-07 2011-10-13 Humalys Binding molecules against chikungunya virus and uses thereof
US9902765B2 (en) * 2013-07-19 2018-02-27 Integral Molecular, Inc. Antibodies against chikungunya virus and uses thereof
TW202300515A (zh) * 2016-10-20 2023-01-01 法商賽諾菲公司 抗ｃｈｉｋｖ抗體及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
US10787503B2 (en) 2020-09-29
CA2982491C (en) 2023-08-29
PE20220297A1 (es) 2022-03-07
WO2016168417A2 (en) 2016-10-20
MY191666A (en) 2022-07-06
AU2022202819A1 (en) 2022-05-19
PE20180171A1 (es) 2018-01-22
CR20210438A (es) 2021-10-04
BR112017021952A2 (pt) 2018-07-10
TW202248210A (zh) 2022-12-16
WO2016168417A3 (en) 2017-01-05
CO2017010316A2 (es) 2017-12-15
MX2017013286A (es) 2018-06-19
AU2016250188A1 (en) 2017-11-02
IL290449B1 (en) 2023-12-01
CA3176525A1 (en) 2016-10-20
ECSP17075750A (es) 2018-02-28
CL2017002596A1 (es) 2018-05-18
KR20180004403A (ko) 2018-01-11
DOP2017000236A (es) 2017-12-15
EA201792220A1 (ru) 2018-03-30
SG10202107295XA (en) 2021-08-30
EP3283101A2 (en) 2018-02-21
IL254891B (en) 2022-03-01
CA2982491A1 (en) 2016-10-20
TN2017000438A1 (en) 2019-04-12
TWI772257B (zh) 2022-08-01
PH12017501865A1 (en) 2018-03-05
EA037060B1 (ru) 2021-02-01
CN107708726B (zh) 2022-01-14
IL290449A (en) 2022-04-01
TW201643189A (zh) 2016-12-16
US20200277359A1 (en) 2020-09-03
AU2016250188B2 (en) 2022-02-03
JP2022174144A (ja) 2022-11-22
MX2021013207A (es) 2021-12-10
SG11201708152SA (en) 2017-11-29
US20180079802A1 (en) 2018-03-22
AU2016250188C1 (en) 2022-08-11
CN107708726A (zh) 2018-02-16
JP2021144047A (ja) 2021-09-24
JP2018520334A (ja) 2018-07-26
KR20230087616A (ko) 2023-06-16
AR104264A1 (es) 2017-07-05
JP6979875B2 (ja) 2021-12-15
KR102541905B1 (ko) 2023-06-12
IL254891A0 (en) 2017-12-31
HK1246671A1 (zh) 2018-09-14
NZ736445A (en) 2023-06-30
CN114478756A (zh) 2022-05-13
US11345743B2 (en) 2022-05-31
MA41517A (fr) 2017-12-19
IL290449B2 (en) 2024-04-01
CR20170518A (es) 2018-01-25
EP3283101A4 (en) 2019-01-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA125206C2 (uk) Опосередковувана антитілом нейтралізація вірусу чікунгунья
JP5698137B2 (ja) Ｃ型肝炎ウイルス感染の阻害のためのモノクローナル抗クローディン１抗体
US7507408B2 (en) Anti hepatitis C virus antibody and uses thereof
US11084869B2 (en) Antibody-mediated neutralization of Marburg virus
US11054423B2 (en) Antibody-mediated neutralization of ebolaviruses
US11851478B2 (en) Antibody-mediated neutralization of chikungunya virus
US10888615B2 (en) Neutralizing human monoclonal antibody 8D6 against HCV infection