UA103605U - Спосіб визначення загальної антиоксидантної ємності плазми крові - Google Patents

Спосіб визначення загальної антиоксидантної ємності плазми крові Download PDF

Info

Publication number
UA103605U
UA103605U UAU201505606U UAU201505606U UA103605U UA 103605 U UA103605 U UA 103605U UA U201505606 U UAU201505606 U UA U201505606U UA U201505606 U UAU201505606 U UA U201505606U UA 103605 U UA103605 U UA 103605U
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
plasma
antioxidant capacity
luminescence
curves
total antioxidant
Prior art date
Application number
UAU201505606U
Other languages
English (en)
Inventor
Vasil Demidovich Zinchenko
Iryna Petrivna Goryacha
Iryna Viktorivna Govor
Oleksandr Mykolajovych Kiriyenko
Ivan Ivanovych Topchiy
Original Assignee
Inst Of Cryobiology And Cryomedicine Of Nat Academy Of Sciences Of Ukraine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inst Of Cryobiology And Cryomedicine Of Nat Academy Of Sciences Of Ukraine filed Critical Inst Of Cryobiology And Cryomedicine Of Nat Academy Of Sciences Of Ukraine
Priority to UAU201505606U priority Critical patent/UA103605U/uk
Publication of UA103605U publication Critical patent/UA103605U/uk

Links

Landscapes

  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

Спосіб визначення загальної антиоксидантної ємності плазми крові включає приготування двох зразків люмінолу з ініціатором люмінесценції, в один з яких додають плазму крові, і реєстрацію кривих висвічування обох зразків. Як ініціатор люмінесценції використовують озонований фізіологічний розчин, а після одержання кривих висвічування визначають площу під цими кривими і вираховують загальну антиоксидантну ємність за формулою:А=(1-∫I/∫I)С⋅V/Mде А - загальна антиоксидантна ємність, ∫I- площа під кривою висвічування для розчину люмінолу з додаванням плазми, ∫I- площа під кривою висвічування для розчину люмінолу без плазми, С- концентрація озону у озонованому фізіологічному розчині, V- об'єм уведеного озонованого фізіологічного розчину, М- маса уведеної плазми

Description

Корисна модель належить до галузі клінічної біохімії і може бути використана для діагностики загального функціонального стану організму людини.
Пошкодження клітин активними формами кисню (АФК) являють собою істотний фактор виникнення багатьох захворювань, включаючи захворювання серця, рак, ревматоїдні артрити, а також процеси старіння (11.
Існує ряд найбільш шкідливих АФК: пероксильні (КОО") і гідроксильний (НО") радикали, супероксидіон (027), синглетний кисень (7О2), перекис водню (НгОг), пеороксинітрит (ООМО)), озон. При нормальному рівні АФК в клітинах беруть участь у ряді фізіологічних функцій, включаючи проліферацію, диференціацію і апоптоз. Разом з тим, АФК внаслідок їх високої реакційної здатності можуть пошкоджувати клітинні мембрани, білки, ДНК. В живих організмах існують захисні системи, що підтримують безпечний для організму рівень АФК. Відомо, що кров, включаючи клітини крові і плазму, мають системи захисту від АФК. завдяки дії яких підтримується баланс між продукцією АФК і їх нейтралізацією. У стані деяких захворювань цей баланс порушується внаслідок продукції надлишкових АФК або зниження ефективності роботи захисних механізмів. Порушення такого балансу викликає оксидативний стрес організму і порушення його фізіологічних функцій. Показником антиоксидантного стану організму може бути загальна антиоксидантна ємність (ЗАОЄ) або загальна антиоксидантна активність (ЗАОА) його біологічних рідин, зокрема плазми крові. Окрім поняття ЗАОЄ використовують також поняття антиоксидантна ємність (АОЄ), якщо мова йде про нейтралізацію не всіх активних форм кисню, а лише деяких з них, наприклад, гідроксильного радикала. Термін загальна антиоксидантна ємність означає кількість АФК, з якою здатна взаємодіяти жива система. Якщо кількість АФК в живій системі перевищує значення її антиоксидантної ємності, то захисні механізми не здатні повністю нейтралізувати АФК і це призводить до оксидативного стресу.
Термін загальна антиоксидантна активність означає стартову динаміку антиоксидантного процесу. ЗАОА описується відповідною константою швидкості реакції антиоксиданту з активною формою кисню.
В нинішній час широко використовують способи оцінки антиоксидантної ємності з застосуванням різних біомаркерів, які можуть бути індикаторами окисних реакцій, як, наприклад, окиснені біомолекули |21.
Загальним недоліком цих способів є те, що для коректної оцінки антиоксидантної ємності організму необхідно проводити вимірювання панелі біомаркерів, наприклад, п'яти. Застосування великої кількості біомаркерів ускладнює і здорожує проведення аналізу антиоксидантного стану організму.
Відомий спосіб визначення ЗАСОА крові, заснований на реєстрації амплітуди піку хемілюмінесценції люмінолу |З.
Однак даний спосіб вимагає дуже тривалої надзвичайно складної підготовки реактивів і проб, обов'язкового вимірювання шумового сигналу перед дослідженням кожної проби, що призводить до значного збільшення часу аналізу. Оскільки процес багатостадійний, то виникає імовірність внесення похибок на кожній стадії, що, в кінцевому рахунку, призводить до значної сумарної похибки вимірювань. Ці причини знижують надійність кількісної оцінки ЗАОА.
Відомий спосіб визначення АОЄ біологічних рідин шляхом кулонометричного титрування електрогенегованим окисником - бромом 1|4). Електрохімічне окиснення бромід-іонів на платиновому електроді в кислих середовищах призводить до утворення Вг2, Вгз, а також короткоживучих радикалів (Ві"), адсорбованих на поверхні платинового електрода, які легко взаємодіють зі зразками, що досліджуються. Кількісно ЛОЄ виражається як електричний заряд на 1 мл зразка.
Недоліком способу є те, що АОЄ зразка, який досліджується, визначається за його здатністю нейтралізувати окисну дію іонів брому, які не є природними АФК живої системи. Тому цей спосіб не придатний для точного віддзеркалювання реальної здатності зразка, що досліджується, нейтралізувати АФК.
Відомий спосіб визначення ЗАОА плазми крові на підставі вимірювання поглинання плазмою пероксил-радикала |5)Ї. Визначення ЗАОА проводять шляхом вимірювання часу, протягом якого плазма чинить опір окисненню в умовах атаки пероксильним радикалом.
Моніторинг виконують за допомогою кисневого електрода.
Хоча даний електрохімічний спосіб дозволяє отримувати інформацію про роль різних станів плазми, як антиоксиданту, він складний і тривалий, для проведення одного аналізу потрібно близько 90 хв. Реалізація даного способу потребує складного обладнання, яке не завжди доступне, вимірювання досить складне у виконанні.
Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб вимірювання ЗАОЄ зразків плазми бо крові людини, у якому використовуються люмінесцентні реакції з люмінолом |6б|.
Відповідно до способу готують 2 зразки розчину люмінолу, до кожного з яких додають ініціатор люмінесценції (парайодофенол, перекис водню в трис-буфері, рН 8.5 і кон'югат пероксидази хріну) і реєструють залежності інтенсивності люмінесценції від часу (криві висвічування). Після зниження інтенсивності люмінесценції на 10 95 або виходу на плато, до одного зразка додають речовину з відомими антиоксидантними властивостями (ТКОГ ОХ), а до другого - плазму крові і реєструють криві висвічування. На основі порівяння кривих висвічування визначають ЗАОЄ плазмі крові.
Недоліком даного способу є його довготривалість. Це пов'язано з тривалістю реєстрації кривих висвічування. Внаслідок цього процес вимірювання ЗАОЄ одного зразка триває близько 1 години.
В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалити відомий спосіб вимірювання
ЗАОЄ шляхом заміни ініціатора люмінесценції, що забезпечить можливість скорочення часу його здійснення.
Поставлена задача вирішується тим, що в способі оцінки вимірювання ЗАОЄ плазми крові, який включає приготування двох зразків люмінолу з ініціатором люмінесценції, в один з яких додають плазму крові, і реєстрацію кривих висвічування обох зразків, згідно з корисною моделлю, як ініціатор люмінесценції використовують озонований фізіологічний розчин (ОФР), а після одержання кривих висвічування визначають площу під цими кривими і вираховують ЗАОЄ за формулою;,
АЗ( -Дл п/Йл)Соз-Моз р/ Мал, де А - ЗАОЄ, /л п - площа під кривою висвічування для розчину люмінолу з додаванням плазми, /л - площа під кривою висвічування для розчину люмінолу без плазми, Соз - концентрація озону у ОФР, Моз р - об'єм уведеного ОФР, Мал - маса уведеної плазми.
При використанні ОФР як ініціатора люмінесценції, скорочується тривалість реєстрації кривих висвічування. Час на проведення одного вимірювання складає близько 5 хв. Таким чином, час вимірювання скорочується порівняно з найближчим аналогом, приблизно, в 12 разів.
Спосіб здійснюють таким чином. Готують зразок розчину люмінолу (105 М, рН8В.5) і ОФР, для чого фізіологічний розчин (150 мМ МасіЇ) барботують озоно-кисневою сумішшю до досягнення концентрації розчиненого озону 5 мг/л. Розчин люмінолу об'ємом 1 мл поміщують у кювету
Зо люмінометра, вводять 0.1 мл ОФР і реєструють криву висвічування, починаючи з моменту уведення ОФР до моменту припинення люмінесценції. Вираховують площу під кривою висвічування. Готують другий зразок розчину люмінолу і додають 0.1 мл плазми крові та 0.1 мл
ОФР. Реєструють криву висвічування і вираховують площу під нею. Використовуючи отримані площі під кривими висвічування, вираховують ЗАОЄ плазми крові за формулою:
АЗ( -л п/Йл)Соз-Моз р/ Мал, де А - ЗАОЄ, /л п - площа під кривою висвічування люмінолу з додаванням плазми, Лл - площа під кривою висвічування для розчину люмінолу без плазми, Соз - концентрація озону у
ОФР, Моз - об'єм уведеного ОФР, Мплл - маса уведеної плазми.
Дослідження ефективності заявленого способу були проведені на здорових і хворих на гломерулонефрит пацієнтах. Результати наведені на графіку та у таблиці. З графіка видно, що площа під кривою висвічування у зразку з плазмою здорового донора (крива 1), менша, ніж відповідна площа у зразку без плазми (крива 2).
Різниця між цими двома площами зумовлена тим, що частина активного кисню (озону) була нейтралізована антиоксидантними системами плазми і не брала участі у окисненні люмінолу і у генерації квантів світла. У присутності плазми пацієнта, хворого на гломерулонефрит на початку лікування (крива 3), ця різниця менша. Це означає, що антиоксиданті системи плазми хворого пацієнта нейтралізують менше активного кисню, тобто ЗАОЄ плазми менша, ніж у здорового донора. Після лікування протягом 10 днів різниця між площами збільшується, а через 21 день ця різниця стає ще більшою (відповідно, криві 4 і 5), однак вона не досягає значення, характерного для здорового донора.
Одержані дані свідчать про те, що заявлений спосіб визначення ЗАОЄ плазми крові може ефективно використовуватись для контролю стану організму.
Таблиця
Показники ЗАОЄ плазми крові
Площа під кривою спаду
ШИ флуоресценції (умови, ІЗАОЄ, мг Оз/г плазми ЗАОЄ, мкмоль Оз/г плазми один.)
Контрольний зразок (розчин люмінолу без 21255 плазми)
Здоровий донор (2,840,06)-103 561,5
Гломерулонефрит на 8 початку лікування 14555 (1,7-0,06)-10 341,5
Гломерулонефрит на 8 10 день лікування 12155 (2,2-0,06)-10 4351,5
Гломерулонефрит на 8 21 день лікування 10955 (2,4-0,06)-10 4851,5
Джерела інформації: 1. бівв Н. Зігагедієз ої апіїохідапі детепсе// Ешиг. У. Віоспет.-1993. - Мої. 215.-Р. 213-219. 2. Ріпагао .., І емів 9У.А. Метоа ог спагасієгігіпуд пе охідаїме 5іге55 ргоїесіїме сарасіу ої ап апіохідайме зиБ5іапсе. Заявка МО 2006/083293, МПК Аб2К 49/00, публ. 10.08.2006.
З. Икконникова Е.И., Бурова М.Б. Способ определения суммарной антиоксидантной активности крови. Патент РФ Мо 2157531, МПК С01М33/52, публ. 10.10.2000. 4. Погорельцев В.И., Зиятдинова Г.К., Будников Г.К. Способ определения интегральной антиоксидантной емкости биологических жидкостей. заявка РФ Мо 2002134634/15, МПК С 01 М 33/48, публ. 27.05.2005. 5. Маїпег О0.0.М., Випоп Са.МУ., Іпдоїа К.О., Вагсіау І.А.С., ГосКе 5.9. Те геіайме сопіпршіоп ої міатіп Е, шигаїє, азсоїбаїе апа ргоївїп5 то Ше юїа! регохуї гадіса!І--їгарріпу апіхідапі асіїмпу ої
Ппитап Біоса ріазта. //Віоспіт Віорпуз Асіа.-1987. - Мої. 924, Мо 3. - Р. 408-419. б. Тнгоре О.Н., М/ппенеайд Т.Р. Патент Великобританії Мо 2245062, МПК СО1ТМ 21/76, 120 1/28; 201 33/52/, публ. 18. 12. 1991.

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб визначення загальної антиоксидантної ємності плазми крові, який включає приготування двох зразків люмінолу з ініціатором люмінесценції, в один з яких додають плазму крові, і реєстрацію кривих висвічування обох зразків, який відрізняється тим, що як ініціатор люмінесценції використовують озонований фізіологічний розчин, а після одержання кривих висвічування визначають площу під цими кривими і вираховують загальну антиоксидантну ємність за формулою: АЗ( -Йл п/Йл)Соз-Моз р/Мапл, де А - загальна антиоксидантна ємність, /Лл п - площа під кривою висвічування для розчину люмінолу з додаванням плазми, /Іл - площа під кривою висвічування для розчину люмінолу без плазми, Соз - Концентрація озону у озонованому фізіологічному розчині, Моз р - Об'єм уведеного Зо озонованого фізіологічного розчину, Мпл - маса уведеної плазми.
UAU201505606U 2015-06-08 2015-06-08 Спосіб визначення загальної антиоксидантної ємності плазми крові UA103605U (uk)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU201505606U UA103605U (uk) 2015-06-08 2015-06-08 Спосіб визначення загальної антиоксидантної ємності плазми крові

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU201505606U UA103605U (uk) 2015-06-08 2015-06-08 Спосіб визначення загальної антиоксидантної ємності плазми крові

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA103605U true UA103605U (uk) 2015-12-25

Family

ID=55172127

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAU201505606U UA103605U (uk) 2015-06-08 2015-06-08 Спосіб визначення загальної антиоксидантної ємності плазми крові

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA103605U (uk)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Oowada et al. Multiple free-radical scavenging capacity in serum
IE66038B1 (en) Antioxidant assay
JP2014134545A (ja) 酸化状態の測定及び使用方法
Grigorieva et al. Measurement of plasma hemoglobin peroxidase activity
US20230357820A1 (en) Test method for mild cognitive impairment, test reagent for mild cognitive impairment, and method for screening therapeutic candidate substances for mild cognitive impairment
US9811635B2 (en) Immune and oxygen system measuring and drug screening method and apparatus
UA103605U (uk) Спосіб визначення загальної антиоксидантної ємності плазми крові
CN107132217A (zh) 一种宫颈细胞瓦博格效应简易检测试剂及其制备方法和应用
RU2728601C1 (ru) Способ тестирования веществ, влияющих на процессы старения, по анализу крови
RU2337359C1 (ru) Средство оценки антиокислительной активности химических соединений и биологических жидкостей
RU2430363C1 (ru) Способ диагностики сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии akr/jy
RU2168165C2 (ru) Экспресс-метод оценки степени тяжести состояния больных
JP7376203B2 (ja) 身体的フレイルの試験方法、身体的フレイルの試験試薬、身体的フレイルの治療薬候補物質のスクリーニング方法、精神的フレイルの試験方法、精神的フレイルの試験試薬、および精神的フレイルの治療薬候補物質のスクリーニング方法
Oxana et al. Changes of oxidation during use the food diet with deuterium depleted water in laboratory animals with purulent inflammation
RU2798670C1 (ru) Способ определения супероксиддисмутазы
WO1996013193A2 (en) Non-invasive device and method for quantitative determination of oxidants and/or antioxidants in the skin
Trofimova et al. Effect of Gas-Discharge Plasma Radiation on the Biochemical Parameters of Blood and Urine of Intact Animals and Those with Acute Alcohol Intoxication
RU2178563C1 (ru) Способ прогнозирования преморбидного состояния при воздействии химических загрязнителей производственной среды
BĂLĂEȚ et al. Determining the electric potential of blood–a possible screening method at the population level
RU2538081C1 (ru) Способ оценки антиоксидантной защиты организма человека
RU2084894C1 (ru) Способ диагностики сифилиса
SU1013852A1 (ru) Способ идентификации @ -уробилина
Bratchikov et al. Zinc metabolism in healthy men and in patients with chronic bacterial prostatitis
RU2523403C1 (ru) Способ количественной оценки баланса про- и антиоксидантов в отделах головного мозга животного
Cheng et al. Screening and Identification of Potentials Molecules Involved in the Radiation Induced Osteoblast Damage