TWM584426U - 一種檢測錯誤折疊蛋白質的裝置 - Google Patents

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李興民
徐軍
湯小彬
張以哲
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大陸商浙江數問生物技術有限公司
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Abstract

本新型公開了一種檢測樣本中是否含有錯誤折疊蛋白或錯誤折疊蛋白聚集物的裝置,檢測裝置包括測試部件和點樣部件,測試部件包含微孔膜,點樣部件包含毛細管。使用時,將待測樣本與能夠與錯誤折疊蛋白和微孔膜結合的染料混合,形成混合液,利用點樣部件上毛細管吸取該混合液,後將毛細管出液口與測試部件上的微孔膜充分接觸,混合液從毛細管中緩慢釋放到微孔膜上並將微孔膜染色,通過觀察顏色的擴散情況判斷待測樣本中是否含有錯誤折疊蛋白或錯誤折疊蛋白聚集物。利用本新型進行檢測,結果可通過肉眼或儀器識別,方便完成檢測過程。

Description

一種檢測錯誤折疊蛋白質的裝置
本新型涉及一種檢測裝置,具體地,涉及一種檢測生物樣本中錯誤折疊蛋白的裝置。
蛋白質精確無誤的天然折疊是一個複雜且容易出錯的過程,即容易出現錯誤折疊,錯誤折疊蛋白就是由於錯誤折疊而形成的蛋白質,其與天然折疊形成的蛋白質構形不同。
蛋白錯誤折疊形成大量的排列成反向的β-折疊片層(β-sheet)結構。該結構由於疏水性表面暴露,導致蛋白質分子之間產生高度的粘著性,與其它錯誤折疊蛋白的β-Sheet結構聚集起來,聚集在一起的蛋白質分子,作為結晶核,使其他不相關的蛋白質共聚合形成錯誤折疊蛋白的聚集物,可容納幾乎無限的多肽鏈(Misfolded Protein Aggregates:Mechanisms,Structures and Potential for Disease Transmission,Semin Cell Dev Biol.2011 July;22(5):482-487.),形成寡聚體和纖維狀聚集物。
這些聚集物已經發現與多種老年人相關的神經退行性疾病相關,像阿茲海默症、帕金森氏症等都是錯誤折疊蛋白造成的,雖然這些蛋白都不一樣(阿茲海默症的amyloid β肽、帕金森氏症的α-Synuclein蛋白、亨汀頓舞蹈症的Huntingtin蛋白、狂牛症的Prion蛋白),它們錯誤折疊後形成β片層(β-sheet)結構,都能形成上述聚集物,具有相同的構形。
而最近的研究發現子癇前期患者的尿液和胎盤組織中含有大量錯誤折疊蛋白及其聚集物,而正常孕婦中則沒有這種聚集物,從而發現子癇前 期和子癇的發病和這些錯誤折疊蛋白及其聚集物相關。(Buhimischi et al.,Science Translational Medicine,2014,6(245):245ra92)。然而,目前臨床上還沒有利用這種標誌物檢測子癇前期的快速POC(Point of Care)檢測試劑盒。
為了解決上述技術問題的至少一個,本新型的第一方面提供了一種檢測樣本中是否含有錯誤折疊蛋白質的裝置,包括測試部件和點樣部件,測試部件包含微孔膜,點樣部件包含1、2、3個或更多個毛細管。進一步地,測試部件包括第一蓋板和第一底板,所述第一蓋板包含微孔膜。
進一步地,該裝置還包括載樣部件,其上設有一個或多個樣本槽用於盛裝樣本(檢測樣本、陰性對照樣本、和/或陽性對照樣本)和/或染料。
在本新型的實施方案中,第一蓋板上覆蓋微孔膜。
在本新型的實施方案中,第一蓋板上設置測試槽,測試槽中含有微孔膜。
根據本新型,任選地,點樣部件為一空心盒狀部件,其中含有1、2、3個或更多個毛細管;任選地,點樣部件為一實心盒狀部件,其上設有1、2、3個或更多個凹孔,用於放置相應的1、2、3個或更多個毛細管;任選地,點樣部件為點樣板,包括主體部分和毛細管,主體部分為板狀部件,毛細管設置在側面,毛細管數目為1、2、3個或更多個。毛細管一端為取液端,用於吸取和釋放液體,另一端與點樣板主體相連;任選地,點樣部件為毛細管。
在本新型的實施方案中,所述樣本槽包括能夠結合微孔膜和錯誤折疊蛋白的染料,優選地,染料選自雜環染料、剛果紅、硫磺素、伊文思藍(Evans Blue)中的一種或多種,更優選地,染料為剛果紅。
在本新型的實施方案中,所述對照樣本槽還包括對照樣本槽。
進一步地,對照樣本槽中包括對照樣本,對照樣本包括陰性對照樣本和/或陽性對照樣本。
本新型的使用方法包括以下步驟:(1)將樣本和能夠與微孔膜和錯誤折疊蛋白結合的染料進行混合形成混合液,(2)利用毛細管吸取至少5μL的混合液;(3)將毛細管的出液口與微孔膜緊密接觸,使得毛細管中的混合液被微孔膜吸出而在微孔膜裡緩慢擴散,從而緩慢地完全釋放到微孔膜裡;(4)基於染料的顏色,觀察混合液在所述微孔膜上的擴散情況確定樣本中是否含有錯誤折疊蛋白。
優選地,混合液是通過毛細管的虹吸而無外力作用進入毛細管。優選地5~25μL,更優選地8~15μL混合液吸入毛細管並完全釋放到微孔膜裡。
本新型的第二方面提供一種檢測樣本中是否含有錯誤折疊蛋白質的組合體,包括毛細管和微孔膜,其中,毛細管的出液口與微孔膜的表面接觸並密合。
進一步地,毛細管中包含一定量能夠結合微孔膜和錯誤折疊蛋白的染料和樣本混合而成的混合液,所述毛細管的出液口與微孔膜緊密接觸並密合,優選地,所述染料選自雜環染料、剛果紅、硫磺素、伊文思藍中的一種或多種,更優選為剛果紅,一定量指5μL以上,優選地,為5~25μL,更優選地8-15μL。
進一步地,在所述微孔膜的表面、所述毛細管的出液口的周圍由於毛細管內一定量的剛果紅和樣本的混合液自所述毛細管出液口緩慢釋放而染色。
術語的定義
本新型所述的「錯誤折疊蛋白」或「錯誤折疊蛋白質」是相對於正確折疊的蛋白質而言。蛋白質錯誤折疊形成大量的排列成反向的β-折疊片層(β-sheet)結構,這些β-Sheet結構由於疏水性表面暴露,導致蛋白質分子之間產生高度的粘著性,與其它錯誤折疊蛋白的β-Sheet結構自然就聚集起來,聚集在一起的蛋白質分子,作為結晶核,使其它不相關的錯誤折疊蛋白質共聚合形成錯誤折疊蛋白質的聚集物(寡聚體和纖維狀聚集物)。在本新型中,“錯誤折疊蛋白質”的含義包括錯誤折疊蛋白形成的這些聚集物。
例如,研究發現,子癇前期患者的尿液和胎盤組織中含有大量錯誤折疊蛋白及其聚集物,能夠與剛果紅特異性結合,在電鏡下觀察發現這些嗜剛果紅性的錯誤折疊蛋白聚集物具有非常類似於澱粉樣蛋白(amyloid-like)的纖維狀結構,而正常孕婦中則沒有這種聚集物(Buhimschi et al.,SCIENCE Translational Medicine,2014,6(245):245ra92)。
不同的蛋白質即使在結構上和序列上並無同源性,一旦發生構形變化而錯誤折疊卻不能修復或排除,都可形成β片層(β-sheet)結構,不同蛋白來源的β片層結構能相互作用形成包含不同蛋白的錯誤折疊蛋白聚集物,能構形特異性地結合剛果紅。
本新型所述的「微孔膜」是指一類微孔材料製成或者表面覆蓋微孔材料的薄膜,所述微孔材料因其空間結構和/或組成特殊性,而具有這樣的功能:能夠與錯誤折疊蛋白質競爭結合染料,即如果樣本中不含錯誤折疊蛋白質,染料與微孔材料結合,從而使得染料不能或很難隨溶劑一起在微孔膜上進 行擴散,形成較小的有色斑點;如果染料與錯誤折疊蛋白質結合,則不與微孔材料結合,因此染料與錯誤折疊蛋白質結合產物能夠在微孔膜上進行擴散,從而形成較大的有色斑點。微孔材料可以是任何本領域技術人員所熟知包含大量自由羥基的材料,例如纖維素,則微孔膜是纖維素膜,例如濾紙。染料可以是任何本領域技術人員所熟知的具有以上特性的,能夠與錯誤折疊蛋白質構形特異性地結合,例如剛果紅。
本新型所述的「毛細管」是指出液口內徑不超過3.5mm或出液口橫截面的面積不超過9mm2的中空管,當毛細管插入到液體中時,液體能夠浸潤毛細管內表面,表現為毛細管中液面高度高於外部液面高度,即產生「毛細現象」,當毛細管離開液體時,由於表面張力而留在毛細管內部的液體不少於5μL,優選地,毛細管內表面具有親水性。
毛細管的材料和質地或處理可以是任何相關領域內的技術人員所瞭解的能夠達到上述浸潤液體體積的毛細管。
在上述微孔膜上基於毛細現象的斑點擴散方法檢測錯誤折疊蛋白質的過程中,利用能夠與錯誤折疊蛋白質構形特異性地結合的染料例如剛果紅溶液在微孔膜例如濾紙上擴散面積的大小,來檢測是否存在錯誤折疊蛋白質。
但是,發明人發現,如果用移液器(如吸量管、微量吸管等)進行滴樣,液滴直接滴落在濾紙上,與濾紙形成較大的接觸面並且迅速在濾紙上擴散,這樣即使不含錯誤折疊蛋白質的陰性樣本在濾紙上也顯現出較大的顯色斑點,往往與陽性樣本的顯色斑點區分不大,導致檢測結果不準確,造成很多假陽性和假陰性。即使所用吸管、移液管的出液口很小也無法克服這個缺陷。發明人進一步地發現,如果採用毛細管點樣(而不是滴樣),用毛細管吸取足夠體積的染料和樣本的混合液,使毛細管的出液口與濾紙緊密接觸,使毛 細管中的混合液因濾紙材料的吸水性緩慢地釋放到濾紙上,可以顯著增加陰陽性樣本產生的顯色斑點的差異,大大減少假陽性率,顯著提高檢測準確率。
檢測方法和組合體
本新型提供一種檢測樣本中是否含有錯誤折疊蛋白聚集物的組合體或裝置,可以用於實施上述檢測方法。一般來說,組合體包括毛細管和微孔膜,其中,所述毛細管的出液口與所述微孔膜的表面接觸並密合。
具體地說,本新型的組合體可以用於檢測多種樣本,例如全血、血清、血漿、尿液、唾液、汗液、腦脊液、胸腹水、淚液、陰道分泌物、精液、組織裂解液及其組合,當樣本含有血液而呈顏色,可以在檢測前進行離心去除紅血球細胞或其它干擾因素。特別地,本新型的組合體尤其適用於檢測孕婦尿液中是否含有錯誤折疊蛋白質或錯誤折疊蛋白質聚集物,從而預測、檢測、篩查或診斷孕婦是否患有子癇前期或有子癇前期風險。
優選地,在本新型中的微孔膜可以是由含有自由羥基的材料製成的薄膜並具有吸水性。在優選的實施方案中,微孔膜是由含有自由羥基的纖維素製成的纖維素膜,例如濾紙、書寫紙、打印紙、標籤紙。
染料可以是任何能夠構形特異性地結合錯誤折疊蛋白質的染料,同時這種染料應該還能競爭性地結合微孔膜中的材料(例如含自由羥基的纖維素)。在優選的實施方案中,染料是剛果紅。在其它實施方案中,染料是硫磺素或伊文思藍。染料可以是固體染料直接與樣本例如尿液混合並溶於液體樣本,也可以是以溶液的形態與樣本例如尿液混合,形成的混合液中染料例如剛果紅的濃度可以是0.01~2mg/mL,優選地為0.02~1mg/mL,更優選地為0.05~0.5mg/mL。
在本新型中,毛細管沿著管長方向具有兩端,一端為出液口,另一端可以是開口的也可以是封閉的,毛細管的出液口內徑小於或等於3.5mm 或者出液口的橫截面的面積不超過9mm2。毛細管應該有足夠的管長而能夠吸取和容納至少4μL混合液,優選地至少5μL混合液、至少8μL混合液,更優選地8到15μL左右。在本新型的具體實施方案中,毛細管攝取的一定量混合液為2~30μL,4~30μL,更優選,為5-25μL、5-20μL、4-17μL、或者5-17μL,例如為5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16μL;更優選地8~16μL。優選地,毛細管沿著管長方向粗細大體一致,橫截面包括出液口橫截面可以是圓形或其它任何規則或不規則形狀,例如那些在圖1顯示的。在優選實施方案中,出液口內徑大約為0.5~3mm,0.7到3mm,優選地0.9到2.8mm,或橫截面的面積大約為0.2~7mm2,優選地約為0.64到6.2mm2。在優選實施方案中,毛細管吸取混合液是通過毛細現象,吸取至少5μL液體。在優選實施方案中,毛細管吸取混合液後,將出液口與微孔膜接觸時,液體靠微孔膜的吸水性被動從毛細管釋放到微孔膜裡。優選地,液體釋放到微孔膜中的速度不大於4.5μL/秒,不高於4μL/秒,優選地為0.5~4μL/秒,例如為0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5或4μL/秒,更優選為1~3μL/秒,例如1.2、1.6、1.7、1.8、2.3、2.6或2.8μL/秒。
當樣本中不含有錯誤折疊蛋白質或錯誤折疊蛋白質聚集物,利用本新型的組合體得到的結果為陰性,即利用毛細管將樣本與染料形成的混合液點樣到微孔膜上後,在微孔膜上不形成明顯的擴散,或者在一些實施方案中形成較小的擴散斑點而擴散半徑小於參考值,該參考值可以由一定數量的(例如50-100個)臨床判定為陰性的病人的樣本形成的擴散斑點的半徑的最大值來確定。
當樣本中含有錯誤折疊蛋白質或錯誤折疊蛋白質聚集物,利用本新型的組合體得到的結果為陽性,即利用毛細管將樣本與染料形成的混合液轉移至微孔膜上後,在微孔膜上形成大於陰性樣本的擴散斑點。在本新型的一些實施方案中,陽性樣本產生較大的擴散斑點,擴散半徑大於或等於一個特定 的參考值,而該參考值可以由一定數量的(例如50-100個)陽性樣本形成的擴散斑點的半徑的最小值來確定。值得說明的是,在一些樣本測試中,會產生類似「偽足」狀的擴散,即使擴散斑點的半徑大於陰性樣本的擴散半徑,或大於上述參考值,這種類型的擴散仍然判斷為陰性。
在一個優選實施方案中,判定樣本中是否含有錯誤折疊蛋白質或錯誤折疊蛋白質聚集物包括將混合液在上述微孔膜上的擴散結果與一比對卡比較,比對卡上包括至少陰性和陽性樣本擴散結果的示例;優選地,比對卡包括圖15A中至少1、2或3個的示例,以及圖15B中至少1、2或3個示例;更優選地,比對卡包括圖15中所有6個示例。
在一個優選實施方案中,判定樣本中是否含有錯誤折疊蛋白質或錯誤折疊蛋白質聚集物,包括將混合液在所述微孔膜上的擴散結果通過自動判定系統完成檢測結果判斷並輸出判斷結果。例如,如圖20所示,自動判定系統200包括信號採集模組204和信號處理模組206,優選地,自動判定系統200還可以包括使用者交互模組202,其中,模組之間通過有線或無線相互連接並傳遞資料或信號。信號採集模組204包括光信號採集器,例如數位相機或掃描器。使用時,使用者通過使用者交互模組202向信號採集模組發送信號採集命令,信號採集模組204通過對上述擴散結果進行拍照或掃描,獲得擴散情況的圖片信號,之後,將採集到的圖像信號傳輸到信號處理模組204,信號處理模組將收集到代表圖像的信號與對比資料庫進行比對,基於特定的演算法,得到判定結果並傳輸到使用者交互模組202。優選地,對比資料庫包含大量的臨床樣本檢測資料,信號處理模組通過智慧演算法進行對比。任選地,信號處理模組204將判定結果輸送到協力廠商系統中,例如醫院的HIS(Hospital Information System)或LIMS(Laboratory Information Management System)系統。
在上述本新型的組合體的一個實施方案中,毛細管中出液口及以上部位裝有上述混合液,即樣本例如尿液和能夠與微孔膜和錯誤折疊蛋白競爭結合的染料進行混合形成的混合液體;優選地,所述混合液的體積為1~30μL,更優選,為1~25μL,例如大約1到5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16μL;更優選地8~15μL。
進一步地,在上述實施方案中,由於毛細管與微孔膜緊密接觸並密合,毛細管中所含有一定量的混合液緩慢釋放到微孔膜上,由此在毛細管的出液口周圍的微孔膜表面形成上述擴散斑點。擴散斑點的示例包括圖15中所示;在一個具體實施方案中,混合液從毛細管中釋放出來後染料在出液口聚集、不擴散並形成深色斑點;在另一個具體實施方案中,混合液從毛細管中釋放出來後染料在出液口附近形成深色斑點,還有「偽足」狀擴散;在另一個具體實施方案中,混合液從毛細管中釋放出來後染料在出液口附近形成淺色擴散但包含偽足。在另一個具體實施方案中,混合液從毛細管中釋放出來後,在出液口形成較小的紅色斑點,但周圍形成明顯的圓形擴散斑點,或點樣部位形成向外擴散的不規則擴散斑點,但沒有「偽足」,或形成均勻的、較大的圓形擴散斑點。
類似地,本新型的組合體中也可以包括2、3、4、5、6、7、8、9、10個、12個或更多毛細管,每個毛細管的出液口都分別與微孔膜的表面接觸並密合,這些毛細管可以通過連接橋固定在一起,形成聯排毛細管構成的點樣器。如圖16所示,在圖16A中,組合體160A包括毛細管162、182和192各自分別有一個出液口164、184、和194以及另一開放的管口166、186、196,開放的管口166、186、196穿透連接橋,從而毛細管兩端均與外界連通。連接橋180作為支撐和固定毛細管162、182和192,組合體160A出液口164、184、和194分別與微孔膜168、188、198的表面接觸並密合。如圖16A所示,毛細管162、182 和192各裝有混合液,優選地,毛細管162中的液體是待測孕婦尿液樣本和染料的混合液,毛細管182中的液體是陰性對照樣本或緩衝液和染料的混合液,毛細管192中的液體是陽性對照樣本和染料的混合液。
圖16B顯示上述圖16A的組合體的毛細管中的液體部分被微孔膜吸收;圖16C顯示上述圖16A的組合體的毛細管中的液體全部被微孔膜吸收,在微孔膜中形成不同的斑點擴散結果。
檢測裝置
本新型的另一方面提供一種檢測樣本中是否含有錯誤折疊蛋白質或錯誤折疊蛋白質聚集物的裝置。
綜合並引用上述說明及圖12、13、14,本檢測裝置發明的一個具體實施方案可以包括一個帶有兩排凹槽的面板和一個嵌入面板中並可從面板上拆卸下來的點樣部件,其中面板上的兩排凹槽中,每排有1到多個(3個、10個、12個或更多)凹槽,其中一排為樣本槽,另一排為測試槽。樣本槽的直徑為0.3~1cm,最優選為0.5cm,深度為0.3~1cm,最優選為0.5cm;樣本槽可以裝盛30-500μL或更多液體,優選地,面板上有3個以上樣本槽包括一個待測樣本槽、一個陰性對照樣本槽、一個陽性對照樣本槽。待測樣本槽可以裝有上述染料或染料溶液或染料與待測樣本的混合液;陰性對照樣本槽可以裝有陰性對照樣本;陽性對照樣本槽可以裝有陽性對照樣本。樣本槽可以用密封材料封口。測試槽的直徑為0.5~2cm,最優選為1.8cm,深度為0.2~1cm,最優選為0.3cm。測試槽的底部覆蓋有上述微孔膜如濾紙。一般來說,面板上的測試槽數量與樣本槽一致或更多。嵌入面板中並可從面板上拆卸下來的點樣部件如下所述,具體地,包含一個或多個毛細管,毛細管可固定在一個橫樑或柱狀體上,例如,同樣長度的2個或多個毛細管平行、並排地固定於一個橫樑上,並 且毛細管間的間距與樣本槽間以及測試槽間的間距相對應以至於點樣部件上的多個毛細管可同時插入相應的多個樣本槽或者相應的多個測試槽。
例如,圖2顯示的本新型的檢測裝置包括測試部件和點樣部件,測試部件包含微孔膜,點樣部件包含毛細管,優選地,毛細管的數目為2個以上,例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個或更多個。
在本新型的一些實施方案中,測試部件可以是單獨的微孔膜。
在本新型的另一些實施方案中,測試部件由第一蓋板和第一底板組成,第一蓋板和第一底板或拆卸或不可拆卸地連接。在本新型的一些實施方案中,第一蓋板和第一底板不可拆卸地連接,從而成為一個整體,雖然物理上不再區別第一蓋板和第一底板,但為了描述的方便,仍這樣區分。
在本新型的一些具體實施方案中,第一蓋板上覆蓋有微孔膜,如圖4A、B所示的那樣。任選地,微孔膜為1個或多個,例如2個、3個、4個、5個、10個、20個、50個、100個、200個,微孔膜可為任意形狀,例如圓形、橢圓形、方形或不規則形狀。任選地,1個微孔膜只能供1個樣本擴散,更優選地,微孔膜為圓形,其面積不小於樣本所能擴散的最大面積。任選地,1個微孔膜可供多個樣本擴散,如2個、3個、4個、5個、10個、20個、50個、100個、200個或更多,更優選地,微孔膜可分成多個區間,每個區間裡可供一個樣本擴散,更優選地,區間為正方形,其內切圓面積不小於樣本所能擴散的最大面積。
在本新型的一個具體實施方案中,第一蓋板上設有測試槽,測試槽是圓柱形凹槽,深度為載樣部件厚度的1/3~2/3,凹槽中設有微孔膜,微孔膜為圓形,直徑略小於凹槽橫截面直徑,平鋪在凹槽底部,如圖4C、D所示的那樣。在本新型的具體實施方案中,測試槽的數目為多個,如為2個、3個、 5個、10個、15個、20個、30個、50個、100個、200個,優選地,每個測試槽供一個樣本進行擴散。
在本新型的另一些實施方案中,第一蓋板和第一底板可拆卸地連接,任選地,為通過在邊線和/或四角設置卡扣連接,任選地,通過粘合劑進行粘合連接,任選地,通過焊接連接。在本新型的具體實施方案中,第一蓋板上設有圓孔,第一蓋板和第一底板之間設置微孔膜,當第一蓋板和第一底板扣合或卡合或粘合後,第一蓋板上的圓孔就成為凹槽,凹槽底部即為微孔膜,從而形成測試槽,如圖4E、F所示的那樣。
在本新型的一個實施方案中,檢測裝置還包括載樣部件,由第二蓋板和第二底板組成,其中第二蓋板上設置樣本槽,樣本槽為圓柱形凹槽。
在本新型的優選實施方案中,第二蓋板的下表面可拆卸或不可拆卸地與第二底板的上表面連接;優選為可拆卸連接,更優選為通過在邊線和/或四角設置卡扣連接,或者通過粘合劑進行粘合連接,或者通過焊接連接。
在本新型的一個實施方案中,第一蓋板的側面不可拆卸地與第二蓋板的側面連接,成為一個整體,物理上沒有區別,並且第一底板的側面不可拆卸地與第二底板22的側面連接,成為一個整體,物理上沒有區別。
在本新型的一個實施方案中,第一蓋板與第二蓋板之間設置導流槽,該導流槽為與第一蓋板和第二蓋板中心連接垂直的長凹槽,凹槽橫截面的形狀為倒三角或圓弧狀,設置導流槽的目的是防止樣本槽中的液體流出,進入測試槽中,以產生檢測結果偏差。有了導流槽,樣本如果從樣本槽中溢出或濺出,可以順著第二蓋板表面進入到導流槽中,儲存在導流槽中,或順著導流槽流出,而不再進入第一蓋板。進一步地,在當樣本槽數目多於一個時,在相鄰兩個樣本槽中間同樣可以設置導流槽,防止樣本間交叉污染。
在本新型的另一個實施方案中,第一蓋板的側面可拆卸地與第二蓋板的側面連接,或者第二底板的側面可拆卸地第二底板的側面連接。
在本新型的另一個實施方案中,第一蓋板的側面可拆卸地與第二蓋板的側面連接,並且第一底板的側面可拆卸地第二底板的側面連接。
在本新型一個更優選的實施方案中,連接是指通過活動部件連接,例如通過軟質材料相連,或者通過鉸鏈相連,由此,載樣部件可以與測試部件折疊。
在本新型的一個實施方案中,載樣部件或測試部件的形狀可以為任意形狀,優選為選自三角形、四邊形、多邊形、橢圓形和圓形中的一種,更優選地,載樣部件或測試部件的形狀呈軸對稱。
在本新型的一個具體實施方案中,樣本槽的數目與測試槽的數目相同;在本新型的一個實施方案中,樣本槽和測試槽為單排直線排列、多排直線排列、或呈多邊形排列、圓形排列、任意排列中的一種,優選地,呈直線排列。
在本新型的另一個具體實施方案中,樣本槽和測試槽排列方式相同。
在本新型的一些實施方案中,樣本槽和/或測試槽可以為任意形狀,優選為選自三角形、四邊形、多邊形、橢圓形和圓形中的一種。
在本新型的一個具體實施方案中,樣本槽和測試槽為圓形。
在本新型的一些實施方案中,樣本槽的直徑為0.3~1cm,最優選為0.5cm,深度為0.3~1cm,最優選為0.5cm。
在本新型的一些實施方案中,測試槽的直徑為0.5~2cm,最優選為1.8cm,深度為0.2~1cm,最優選為0.3cm。
在本新型的一個具體實施方案中,樣本槽和測試槽大小相同。
在本新型的一個實施方案中,點樣部件為一空心盒狀部件,其中含有毛細管。
在本新型的一些具體實施方案中,空心盒狀部件與載樣部件和/或測試部件可拆卸或不可拆卸地連接,空心盒裝部件有一個開口,方便取放毛細管,優選地,開口與樣本槽和測試槽開口朝向相同,更優選地,開口設置蓋子。
在本新型的一些實施方案中,點樣部件為一實心盒狀部件,其上設有凹孔,用於放置毛細管。
在本新型的一些具體實施方案中,實心盒狀部件與載樣部件和/或測試部件可拆卸或不可拆卸地連接。優選地,實心盒狀部件與載樣部件和/或測試部件為一個整體。更優選地,直接在載樣部件和/或測試部件上設置凹孔,用於放置毛細管,優選地,凹孔為一個,可容納所有毛細管;優選地,凹孔可放置多個毛細管,更優選地,凹孔數目與毛細管數目相同,凹孔直徑和深度均略大於毛細管,每個凹孔放置一個毛細管。凹孔不與樣本槽或測試槽交叉。
在本新型的一個實施方案中,點樣部件為點樣器,其側面設有毛細管。點樣器主體為一長方體,長方體側面設有凹孔,凹孔貫穿長方體,從而毛細管兩端均與外界相通,毛細管插入到凹孔中,在本新型的一個具體實施方案中,毛細管與長方體為一個整體。對應地,載樣部件和/或測試部件設置凹孔,點樣部件的毛細管突出部分可以插入到對應的凹孔中。
在發明的一個具體實施方案中,毛細管的數目與樣本槽數目或測試槽數目相同,排列方式與樣本槽或測試槽相同。在本新型的一個具體實施方案中,毛細管為2個或2個以上,例如為3個,設置在長方體主體同一側,使得點樣部件呈現聯排毛細管形狀。
在本新型的一個具體實施方案中,點樣器設置毛細管的側面還包括定位針,第一蓋板上設置定位孔,第二蓋板上設置定位孔,當定位針插入到第二蓋板的定位孔時,毛細管插入到樣本槽中吸取液體,當定位針插入到第一蓋板的定位孔時,毛細管接觸測試槽中的微孔膜,毛細管中的液體被微孔膜吸附並在微孔膜上進行擴散。
在本新型的一個實施方案中,定位針的形狀選自子彈頭形狀、圓柱、矩形柱、三角柱、不規則柱、任意柱狀或傾斜的任意柱狀中的一種。在本新型的一個具體實施方案中,定位針的形狀為子彈頭形狀。
在本新型的一個實施方案中,定位針為中空結構。
在本新型的一個實施方案中,定位針的位置在點樣器的兩側或毛細管的中間。
在本新型的一個實施方案中,定位針的數目至少為2個,優選地為2個、3個、4個或更多。
在本新型的一個具體實施方案中,定位針的數目為2個,分別設置在點樣器的兩側。
在本新型的一個具體實施方案中,載樣部件和/或測試部件的不同外表面上還設置凹孔,凹孔排列方式與點樣器上毛細管和定位針排列方式相同,從而可以將點樣器固定在載樣部件或測試部件上。
在本新型的一個具體實施方案中,點樣器上設有凸起或凹槽,目的是增加摩擦力,方便拿捏、插入或拔出點樣器。
在本新型的一些實施方案中,毛細管一端連接可使毛細管內部產生負壓的裝置。在本新型的一個實施方案中,能夠使毛細管內部產生負壓的裝置為橡膠球,類似滴管那樣,在使用時,捏住橡膠球,同時將毛細管的另一端放入液體樣本中,鬆開橡膠球,橡膠球恢復形變,使得毛細管中產生負壓, 從而使得液體樣本更快進入毛細管。在本新型的另一個優選實施例中,能夠使毛細管內部產生負壓的裝置為活塞裝置,如注射器、微量吸管等。在使用時,先將毛細管另一端放入液體中,通過人工拉動活塞或者依靠彈性裝置拉動活塞,使得毛細管內部產生負壓,使得液體樣本更快進入毛細管。在本新型的實施方案中,上述使得毛細管內部產生負壓的裝置同樣能夠使得毛細管內部產生正壓,從而推動毛細管中的液體緩慢流出,轉移至微孔膜上,完成檢測。
在本新型的一些實施方案中,載樣部件、測試部件和點樣部件採用PVC材料、PUC材料、尼龍材料、橡膠材料、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物材料(ABS材料)、玻璃材料或金屬材料製成。優選地,金屬材料為合金材料,更優選地,合金材料為不銹鋼。
本新型的檢測裝置至少有2個核心部件,包括微孔膜的檢測部件和包括毛細管的點樣部件。因此,本領域內的技術人員根據本說明書公開的內容就可明瞭其製備方法:對於檢測部件,可將微孔膜固定在支持表面,可通過圖4所示的3種方法,也可以選擇其它方法。對於點樣部件,如果毛細管多於1個,例如3個,可利用連接橋將毛細管連接,如圖1C所示,毛細管包括出液口和另一開放口,貫穿連接橋,使得另一開放口也與空氣連通。毛細管的排列方式可以是其他任意方式。
為了使本新型所解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白,以下結合實施例,對本新型進行進一步詳細說明。應當理解,此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本新型,並不用於限定本新型。
100‧‧‧毛細管
102‧‧‧出液口
106‧‧‧開放口
108‧‧‧連接橋
160A‧‧‧組合體
162‧‧‧毛細管
164‧‧‧出液口
166‧‧‧管口
168‧‧‧微孔膜
180‧‧‧連接橋
182‧‧‧毛細管
184‧‧‧出液口
186‧‧‧管口
188‧‧‧微孔膜
192‧‧‧毛細管
194‧‧‧出液口
196‧‧‧管口
198‧‧‧微孔膜
201‧‧‧測試部件
211‧‧‧蓋板
212‧‧‧底板
231‧‧‧凹槽
251‧‧‧濾紙
271‧‧‧圓孔
291‧‧‧測試槽
301‧‧‧測試部件
311‧‧‧測試槽
312‧‧‧測試槽
501‧‧‧測試部件
502‧‧‧載樣部件
511‧‧‧第一蓋板
512‧‧‧第一底板
514‧‧‧測試槽
516‧‧‧測試槽
518‧‧‧測試槽
521‧‧‧第二蓋板
522‧‧‧第二底板
525‧‧‧樣本槽
527‧‧‧樣本槽
529‧‧‧樣本槽
534‧‧‧濾紙
536‧‧‧濾紙
538‧‧‧濾紙
601‧‧‧測試部件
602‧‧‧載樣部件
611‧‧‧第一蓋板
612‧‧‧第一底板
621‧‧‧第二蓋板
622‧‧‧第二底板
631‧‧‧測試槽
633‧‧‧測試槽
635‧‧‧測試槽
637‧‧‧測試槽
639‧‧‧測試槽
641‧‧‧樣本槽
643‧‧‧樣本槽
645‧‧‧樣本槽
647‧‧‧樣本槽
649‧‧‧樣本槽
651‧‧‧濾紙
653‧‧‧濾紙
655‧‧‧濾紙
657‧‧‧濾紙
659‧‧‧濾紙
675‧‧‧軟質材料
701‧‧‧測試部件
702‧‧‧載樣部件
705‧‧‧活動鉸鏈
731‧‧‧測試槽
733‧‧‧測試槽
735‧‧‧測試槽
741‧‧‧樣本槽
743‧‧‧樣本槽
745‧‧‧樣本槽
751‧‧‧濾紙
753‧‧‧濾紙
755‧‧‧濾紙
901‧‧‧測試部件
902‧‧‧載樣部件
903‧‧‧點樣部件
905‧‧‧卡扣
911‧‧‧第一蓋板
921‧‧‧第二蓋板
931‧‧‧測試槽
933‧‧‧毛細管
941‧‧‧樣本槽
951‧‧‧濾紙
1001‧‧‧測試部件
1002‧‧‧載樣部件
1003‧‧‧點樣部件
1011‧‧‧第一蓋板
1012‧‧‧第一底板
1021‧‧‧第二蓋板
1022‧‧‧第二底板
1031‧‧‧測試槽
1032‧‧‧凹孔
1041‧‧‧樣本槽
1051‧‧‧濾紙
1101‧‧‧測試部件
1102‧‧‧載樣部件
1103‧‧‧點樣部件
1111‧‧‧第一蓋板
1112‧‧‧第一底板
1121‧‧‧第二蓋板
1122‧‧‧第二底板
1131‧‧‧測試槽
1141‧‧‧樣本槽
1151‧‧‧凹孔
1153‧‧‧毛細管
1201‧‧‧測試部件
1202‧‧‧載樣部件
1203‧‧‧點樣部件
1204‧‧‧定位孔
1206‧‧‧導流槽
1208‧‧‧定位孔
1211‧‧‧第一蓋板
1221‧‧‧第二蓋板
1231‧‧‧測試槽
1233‧‧‧毛細管
1235‧‧‧定位針
1237‧‧‧凸起
1241‧‧‧樣本槽
1251‧‧‧濾紙
圖1A顯示了本新型中使用的部分毛細管類型(A:毛細管外形,從左到右依次為:上下等粗毛細管,上粗下細毛細管,分段等粗毛細管,分段上粗下細毛細管,波浪形毛細管,五角柱型毛細管,五角星型毛細管),圖1B顯示了毛細管與微孔膜接觸一端橫截面可選擇的其他形狀,圖1C顯示了3個毛細管製成聯排毛細管的示意圖,上圖左是主視圖,上圖右是俯視圖,下圖是左視圖。
圖2顯示了本新型的測試部件一個具體結構的示意圖。
圖3顯示了本新型的測試部件又一個具體結構的示意圖。
圖4顯示了微孔膜4的設置方式,A、C、E分別是設置示意圖,B、D、F分別是相應的剖面圖。
圖5顯示了本新型的檢測裝置一個具體結構的示意圖(A:俯視圖,B:正視圖,C:左視圖)。
圖6顯示了本新型的檢測裝置另一個具體結構的示意圖(A:俯視圖,B:正視圖,C:展開時的左視圖,D:折疊時的左視圖)。
圖7顯示了本新型的檢測裝置另一個具體結構的示意圖(A:俯視圖,B:仰視圖)。
圖8顯示了本新型的檢測裝置另一個具體結構的示意圖。
圖9顯示了本新型的檢測裝置另一個具體結構的示意圖。
圖10顯示了本新型的檢測裝置另一個具體結構的示意圖(A:俯視圖,B:正視圖,C:左視圖)。
圖11顯示了本新型的檢測裝置另一個具體結構的示意圖(A:俯視圖,B:正視圖,C:左視圖)。
圖12顯示了本新型的檢測裝置另一個具體結構的示意圖。
圖13顯示了本新型的檢測裝置另一個具體結構的示意圖。
圖14顯示了本新型的檢測裝置一個具體結構的使用方法示意圖。
圖15顯示了本新型的檢測裝置或試劑盒檢測結果。
圖16顯示了本新型利用聯排毛細管進行檢測的示意圖。
圖17顯示了利用毛細管、微量吸管和滴管點樣對斑點擴散的影響。
圖18顯示了不同毛細管內徑對斑點擴散的影響。
圖19顯示了不同點樣量對斑點擴散的影響。
圖20顯示了本新型自動判定系統示意圖。
實施例1
本實施例提供本新型所使用的毛細管類型。如圖1A所示,本新型所使用的毛細管外觀可以是多種形狀(圖1A)。其與微孔膜接觸一端(即出液口一端)的橫截面也可以是多種形狀,包括但不限於圓形、橢圓形、正多邊形、不規則多邊形、帶有圓角的多邊形(圖1B)。這些毛細管均可以吸取5-20μL液體,當毛細管中含有液體,出液口一端與濾紙接觸後,液體釋放到濾紙上的速度不大於4μL/秒。
如果同時需要使用多個毛細管,例如3個,可製作聯排毛細管。如圖1C所示,利用連接橋108將毛細管連接,毛細管100的出液口102用於吸取液體和接觸濾紙,另一開放口106貫穿連接橋108後與空氣連通。
實施例2
本實施例提供包括一種類型的裝置,包括圖2、圖3、圖4所示的裝置,還包括1個或2個內徑為1.25mm的不銹鋼毛細管。
圖2所示的裝置包括測試部件201,測試部件201包括濾紙251。濾紙在測試部件上有3種設置方式:
第一種:測試部件201為一長方體,長方體上表面覆蓋一個圓形濾紙251(設置方式如圖4A、B)。
第二種:測試部件201為一長方體,長方體上表面設有一個圓柱形凹槽231,凹槽底部設有濾紙251(如圖4C、D)。
第三種:測試部件201包括蓋板211和底板212,蓋板上設有圓孔271。當蓋板211與底板212粘合時,中間設置一層濾紙251(如圖4E、F),這樣,蓋板211和底板212通過粘合後,圓孔形成測試槽291,測試槽底部即為濾紙251。
圖3所示的裝置包括測試部件301,測試部件301為一長方體,其中一個側面上設有2個測試槽311和312,測試槽311和312各為一個圓柱形凹槽,凹槽深度約為長方體厚度的2/3,凹槽中設有濾紙,濾紙為圓形,略小於凹槽橫截面,平鋪在凹槽底部(設置方式如圖4C、D所示,圖3中未顯示濾紙)。
用於檢測孕婦尿液中是否含有錯誤折疊蛋白質的具體檢測步驟為,將取自孕婦尿液的樣本與剛果紅混合得到混合液,將毛細管豎直放置在混合液中10秒左右(可吸取10μL左右混合液),轉移至測試槽,將毛細管的出液口與濾紙緊密接觸,保持豎直,停留15秒左右,毛細管中的液體緩慢釋放至濾紙上,移去毛細管,觀察結果。
利用圖2的裝置只能檢測1個待測樣本。利用圖3的裝置可以檢測2個待測樣本,或者檢測1個待測樣本,1個對照樣本,對照樣本可以是陰性對照樣本,也可以是陽性對照樣本。陰性對照樣本是PBS緩衝液,陽性對照樣本為含有經過特殊變性處理形成錯誤折疊BSA的PBS緩衝液。
實施例3
本實施例提供另一種類型的檢測裝置,如圖5、圖6、圖7或圖8所示。
圖5所示檢測裝置包括測試部件501和載樣部件502,測試部件501由第一蓋板511和第一底板512組成,第一蓋板511上設有3個圓柱形凹槽,即為測試槽514、516、518,測試槽底部按圖4C、D設置濾紙534、536、538。第一蓋板511的下表面不可拆卸地與第一底板512的上表面連接,成為一個整體。載樣部件由第二蓋板521和第二底板522組成,第二蓋板521上設有3個樣本槽525、527、529。第二蓋板521的下表面不可拆卸地與第二底板522的上表面連接,成為一個整體;第一蓋板511的側面與第二蓋板521的側面直接連接,成為一個整體;第一底板512的側面與第二底板522的側面直接連接,成為一個整體。由此,測試部件和載樣部件成為一個整體,物理上沒有任何分別。
圖6所示的檢測裝置包括測試部件601和載樣部件602,測試部件601由第一蓋板611和第一底板612組成,第一蓋板611上表面設有5個測試槽631、633、635、637、639,測試槽底部分別設有濾紙651、653、655、657、659(設置方式如圖4C、D所示)。載樣部件由第二蓋板621和第二底板622組成,第二蓋板621上表面設有5個樣本槽641、643、645、647、649。第一蓋板611的側面通過軟質材料675與第二蓋板621的側面連接,第一底板612的側面與第二底板622的側面沒有連接。由此,測試部件601和載樣部件602在運輸、儲藏過程中可以折疊在一起,從而節省空間。
圖7所示的檢測裝置包括測試部件701和載樣部件702,測試部件701上表面上設有3個測試槽731、733、735,測試槽底部分別設有濾紙751、753、755(設置方式如圖4C、D所示)。載樣部件702的上表面 設有3個樣本槽741、743、745。測試部件701和載樣部件702通過活動鉸鏈705連接。
圖8所示的檢測裝置與圖7基本相同,不同的是測試槽和樣本槽的數目比圖7所示的要多(14個),這樣可以用來檢測更多的樣本。
任一試劑盒還包括與樣本槽數目相同的,內徑為1.25mm的不銹鋼毛細管。
用於檢測孕婦尿液中是否含有錯誤折疊蛋白質的具體檢測步驟為,將取自孕婦尿液的樣本與剛果紅(濃度5mg/mL)以20:1的比例在樣本槽中混合得到混合液,豎直放置在混合液中10秒左右(可吸取10μL左右混合液),將毛細管轉移至測試槽,使其出液口與濾紙接觸,停留15秒左右,毛細管中的液體緩慢釋放至濾紙上,移去毛細管,觀察結果。
利用圖5和圖7所示的裝置最多可以檢測3個待測樣本,當然,也可以檢測1個待測樣本,另外兩個測試槽用於檢測陰性對照樣本和陽性對照樣本。檢測方法與此相同。利用圖6的裝置最多可以檢測5個待測樣本,或者檢測3個待測樣本、2個對照樣本即陰性對照樣本和陽性對照樣本。利用圖8所示的裝置最多可以檢測14個待測樣本,或者檢測12個待測樣本,1個陰性對照樣本,1個陽性對照樣本。
實施例4
本實施例提供又一種類型的檢測裝置,如圖9、圖10或圖11所示。
圖9所示的檢測裝置包括測試部件901、載樣部件902和點樣部件903。測試部件901由第一蓋板911和第一底板(圖中未示出)組成,第一蓋板911上設有14個測試槽931。載樣部件902由第二蓋板921和第二 底板(圖中未示出)組成,第二蓋板921上設有14個樣本槽941。第一蓋板911和第一底板為一個整體,物理上不可區分,測試槽931中設有濾紙951,按圖4C、D所示方式設置。第二蓋板921與第二底板為一個整體,物理上不可區分。測試部件901和載樣部件902通過卡扣905連接在一起,運輸儲藏時可分開疊放在一起,使用時連接在一起。點樣部件903為一空心盒狀部件,其中包含毛細管933,該毛細管933為內徑為1.2mm的玻璃管,空心盒狀部件與載樣部件902和測試部件901通過卡扣連接。
圖10所示的檢測裝置包括測試部件1001、載樣部件1002和點樣部件1003。測試部件1001由第一蓋板1011和第一底板1012組成,第一蓋板1011上設有5個測試槽1031。載樣部件1002由第二蓋板1021和第二底板1022組成,第二蓋板1021上設有5個樣本槽1041。第一蓋板1011與第一底板1012為一個整體,物理上不可區分,測試槽1031中按圖4C、D方式設置濾紙1051。第二蓋板1021與第二底板1022為一個整體,物理上不可區分。同樣,第一蓋板1011與第二蓋板1021為一個整體,並且第一底板1012與第二底板1022為一個整體。也就是說,測試部件1001和載樣部件1002為一個整體,只是在劃分上進行區別。點樣部件1003為一實心盒狀部件,其上設置與樣本槽數目同樣多的凹孔1032,所述凹孔1032的直徑略大於毛細管(圖中未示出)直徑,深度略大於毛細管長度,每個凹孔可放置一個毛細管。該實心盒狀部件上表面與第一底板1012下表面和第二底板1022下表面不可拆卸地連接,並成為一個整體。
圖11所示的檢測裝置,包括括測試部件1101、載樣部件1102和點樣部件1103。測試部件1101由第一蓋板1111和第一底板1112組成, 第一蓋板1111上設有5個測試槽1131;載樣部件由第二蓋板1121和第二底板1122組成,第二蓋板1121上設有5個樣本槽1141。同圖10所示的檢測裝置一樣,該檢測裝置為一個整體,只是劃分上進行區別,並且第一蓋板1111上設有測試槽1131,同樣按照圖4C、D的方法放置濾紙。不同的是,點樣部件1103位於測試部件1101和載樣部件1102側面。點樣部件1103上設置凹孔1151,可容納不少於樣本槽數目的毛細管1153(內徑為1.25mm的不銹鋼毛細管),深度略大於毛細管1153長度(3cm)。
使用步驟同實施例2、3。
實施例5
本實施例提供又一種類型的檢測裝置,如圖12、圖13或圖14所示的裝置。
圖12所示的檢測裝置,包括測試部件1201、載樣部件1202和點樣部件1203,所有部件由PVC材料製成。測試部件1201由第一蓋板1211和第一底板(圖中未示出)組成。載樣部件1202由第二蓋板1221和第二底板(圖中未示出)組成,第二蓋板1221上設有3個樣本槽1241。第一蓋板1211的側面不可拆卸地和第二蓋板1221的側面連接,成為一個整體,並且第一蓋板1211和第二蓋板1221之間設置導流槽1206,導流槽1206與測試部件1201和載體部件1202中心連線垂直,橫截面呈倒三角形狀,貫穿整個上表面。第一底板的側面不可拆卸地和第二底板的側面連接,成為一個整體。第一蓋板1211上設有3個圓孔,在與第一底板連接時,中間放置一層濾紙(如圖4E、F),這樣,第一蓋板1211和第一底板通過四角卡扣蓋合後,圓孔形成測試槽1231,測試槽1231底部即為濾紙1251。
點樣部件1203為點樣板,該點樣板的側面設有毛細管1233,毛細管的數目與樣本槽1241數目或測試槽1231數目相同,即都為3個,排列方式與樣本槽1241或測試槽1231相同;點樣板設置毛細管1233的同一側面,毛細管1233的兩側還包括定位針1235,第一蓋板1211和第二蓋板1221上設置定位孔1204和1208,當定位針1235插入到定位孔1204或1208中時,毛細管1233可插入樣本槽1241或測試槽1231中。載樣部件1202相對於測試部件1201的側面還設置凹孔(圖中未示出),凹孔排列方式與點樣板上毛細管1233和定位針1235排列方式相同,從而可以將點樣部件1203固定在載樣部件1202上。點樣板上還設置凸起1237,方便將點樣板插入拔出。
在樣本槽1241中,預先加入剛果紅,其中一個樣本槽還加入陽性對照樣本(含有BSA的PBS緩衝液),另一個樣本槽中加入陰性對照樣本(不含有BSA的PBS緩衝液),並利用錫箔密封。
圖13所示的檢測裝置與圖12所示的檢測裝置基本相同,不同的是測試槽和樣本槽的數目比圖12所示的要多(5個),這樣可以用來檢測更多的樣本。
本裝置的使用方法如下:
1、將點樣部件拔出,並將檢測裝置主體(包裝測試部件和載樣部件)水準放置於檯面上;
2、利用定位針依次將樣本槽上的錫箔刺破(圖14A);
3、在待測樣本槽中加入孕婦尿液;
4、將點樣部件上的定位針插入到第二蓋板的定位孔中(圖14B),由此點樣部件上的毛細管插入到樣本槽中的液體中,從而液體會自動毛細管中上升;
5、將點樣部件的定位針插入到第一蓋板的定位孔中(圖14C),由此點樣部件上的毛細管直接接觸位於測試槽中的微孔膜上(圖14D剖面圖所示),靜置5-10秒;
6、移去點樣部件,觀察檢測結果。
7、若結果如圖15A所示,即點樣部位顯示較為聚集、不擴散的紅色斑點(圖15A,a),或者除了點樣部件顯示較為聚集、不擴散的紅色斑點,還有「偽足」(圖15A,b),或者還伴隨輕微的擴散(圖15A,c),則孕婦尿液樣本判定為陰性,即不含有錯誤折疊蛋白質或含有的錯誤折疊蛋白質低於參考值。
若結果如圖15B所示,即點樣部位顯示較小紅色斑點,但周圍有較為明顯的擴散(圖15B,d),或點樣部位顯示紅色斑點,具有不規則擴散的淺絕色圓形(圖15B,e),或形成均勻的、較大的擴散斑點(圖15B,f),則孕婦尿液樣本判定為陽性,即含有錯誤折疊蛋白質或含有的錯誤折疊蛋白質高於參考值。
本實施例提供的檢測裝置將器材和試劑集成在一起,大大壓縮了包裝空間,方便運輸、存儲,且便於實驗室操作。
實施例6
本實施例提供一種簡便組合體,該組合體包括濾紙和毛細管(內徑為1.25mm的不銹鋼毛細管)。使用方法如下:1、將濾紙水準放置於檯面上;2、將取自孕婦的尿液樣本與剛果紅染料混合成混合液;3、取毛細管吸取混合液,轉移至濾紙上緊密接觸並密合,停留5秒以上使得毛細管中液體被緩慢、充分釋放在濾紙上;4、靜置10秒左右,即可觀察檢測結果。
圖16示出了組合體檢測裝置檢測過程示意圖,毛細管接觸濾紙後,樣本緩慢釋放在濾紙上,並在接觸位置向外擴散,形成不同大小的染色斑點。
實施例7
為了比較毛細管和微量吸管或滴管點樣對檢測結果的影響,發明人設計以下實驗:
1.毛細管、微量吸管和滴管
採用的毛細管是圓形出液口內徑為1.25mm、長度為10cm的玻璃毛細管,毛細管上標有10μL刻度線。
採用的微量吸管為10μL的微量吸管。
採用的滴管為100μL,每次測試吸取10μL液體。
2.陰性樣本和陽性樣本
陰性樣本為醫生根據臨床結果判斷為非子癇前期的孕婦尿液樣本,陽性樣本為醫生根據臨床結果判斷為子癇前期的孕婦尿液樣本。
3.檢測
分別在陰性樣本和陽性樣本中按50:1的比例加入剛果紅。將毛細管分別插入陰性樣本或陽性樣本中,待液體上升到10μL刻度線時,取出毛細管,將吸取液體的一頭接觸濾紙,待樣本全部被濾紙吸收,移除毛細管,擴散15秒左右後,觀察檢測結果。
同樣,利用微量吸管和滴管分別吸取10μL陰性樣本或陽性樣本,之後將微量吸管尖端或滴管滴頭與濾紙接觸,釋放出吸取的液體至濾紙上,擴散一段時間後,觀察檢測結果。
為了比較接觸點樣和懸空點樣對檢測效果的區別,同樣分別利用毛細管、微量吸管和滴管吸取10μL陰性樣本或陽性樣本,將毛細管 出液口、微量吸管尖端或滴管滴頭懸空在濾紙上方0.5~2cm處,釋放出吸取的混合液至濾紙上,擴散一段時間後,觀察檢測結果。分別測量陰性樣本和陽性樣本擴散斑點半徑,擴散斑點半徑為點樣中心點到斑點擴散至最遠位置的長度。並計算陽性樣本擴散斑點半徑與陰性樣本擴散半徑的半徑比。每個實驗重複5次。
4.結果
利用毛細管、微量吸管和滴管點樣的斑點擴散情況如圖17或表1所示。對於陽性樣本:不管哪種點樣器,也不管哪種點樣方式,陽性樣本均會形成均勻的、較大的擴散斑點,幾乎沒有區別。
對於陰性樣本:三種點樣器(毛細管、微量吸管和滴管)懸空點樣時,陰性樣本均形成相對較大的斑點,與陽性樣本同樣的點樣方式形成的斑點的半徑比在1.2左右,區別相對較小,容易形成誤判。
而當接觸點樣時,毛細管檢測形成的斑點較為聚集、不向外擴散或極少擴散,與陽性樣本形成的斑點半徑比在2.5以上。微量吸管和滴管接觸點樣,陰性樣本形成的擴散斑點相對較大,且有不規則向外擴散,半徑比在1.6左右。
綜上所述,利用毛細管接觸點樣檢測效果最好,區分更明顯,不易形成誤判,結果直觀可靠。
實施例8
為了比較毛細管不同內徑對檢測結果的影響,發明人設計以下實驗:
1. 毛細管
採用的毛細管為內徑分別為0.4、0.5、0.6、0.7、0.9、1.12、1.25、1.45、1.69、1.99、2.4、2.64和2.8mm,長度為3cm的不銹鋼毛細管,毛細管上標有10μL刻度線。
2. 陰性樣本和陽性樣本
陰性樣本為醫生根據臨床結果判斷為非子癇前期的孕婦尿液樣本,陽性樣本為醫生根據臨床結果判斷為子癇前期的孕婦尿液樣本。
3. 檢測
分別在陰性樣本和陽性樣本中加入剛果紅。將不同內徑的毛細管分別插入陰性樣本或陽性樣本中,停留30秒以上,待液體不再上升時,取出毛細管,將吸取液體的一頭接觸濾紙,待樣本全部被濾紙吸收(約3-10秒),移除毛細管,擴散一段時間後,觀察檢測結果。
分別測量陰性樣本和陽性樣本擴散斑點半徑,擴散斑點半徑為點樣中心點到斑點擴散至最遠位置的長度。並計算陽性樣本擴散斑點半徑與陰性樣本擴散半徑的半徑比。每個實驗重複5次。
4. 結果
利用不同內徑毛細管點樣的斑點擴散情況如圖18或表2所示,可見當毛細管內徑太小(例如小於0.7mm時),液體從毛細管擴散到濾紙上的速度過慢,陽性樣本的斑點擴散半徑太小,與陰性樣本的斑點擴散半徑區別不大。隨著毛細管內徑的增加,陰性樣本的斑點擴散增加不明顯,但陽性樣本的斑點擴散迅速增加。當毛細管內徑增加到一定程度(例如大於3mm),由於液體與濾紙的接觸面積太大,陰性樣本的斑點擴散半徑也開始變大,但陽性樣本的斑點擴散半徑變化不明顯,從而導致半徑比不再增加甚至出現下降的趨勢。當毛細管進一步增大時,液體不再能夠自主進入毛細管中,導致無法進行檢測。在本試驗中,當毛細管內徑0.7-2.8mm時檢測效果較好,1.12-2.64mm時,檢測效果更好。
實施例9
為了比較不同點樣量對檢測結果的影響,發明人設計以下實驗:
1. 毛細管
採用的毛細管為內徑1.25mm,長度為5cm的玻璃毛細管,該毛細管最大取液量為20μL,毛細管上標有範圍為1-20μL,精度為1μL的刻度線。
2. 陰性樣本和陽性樣本
陰性樣本為醫生根據臨床結果判斷為非子癇前期的孕婦尿液樣本,陽性樣本為醫生根據臨床結果判斷為子癇前期的孕婦尿液樣本。
3. 檢測
分別在陰性樣本和陽性樣本中加入剛果紅。將毛細管分別插入陰性樣本或陽性樣本中,分別吸取2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17μL液體後,取出毛細管,將吸取液體的一頭接觸濾紙,待樣本全部被濾紙吸收,移除毛細管,擴散一段時間後,觀察檢測結果。
分別測量陰性樣本和陽性樣本擴散斑點半徑,擴散斑點半徑為點樣中心點到斑點擴散至最遠位置的長度。並計算陽性樣本擴散斑點半徑與陰性樣本擴散半徑的半徑比。每個實驗重複5次。
4. 結果
不同點樣量的斑點擴散情況如圖19或表3所示,可見隨著點樣量的增加,陰性樣本的斑點擴散半徑增加不明顯,但陽性樣本的斑點擴散半徑迅速增加,陰性樣本和陽性樣本的區分越來越明顯,表現為半徑比逐漸增大。但當點樣量達到16μL時,陽性樣本的斑點擴散半徑增 加變緩,甚至不再增加,這是受到擴散力學的影響,使得斑點擴散集中在一定的區域內。另一方面,隨著點樣量的增加,毛細管吸附時間越來越長,並且由於陰性樣本由於不擴散或擴散程度很小,毛細管中的液體難以被徹底吸附至濾紙上或者需要更長時間才能完全被吸附,從而造成檢測時間過長。綜合考慮,點樣量至少4μL,在5-15μL時效果較好。
以上例子在此用於示範本新型的優選實施方案。本領域內的技術人員會明白,上述例子中披露的技術代表發明人發現的可以用於實施本新型的技術,因此可以視為實施本新型的優選方案。但是本領域 內的技術人員根據本說明書應該明白,這裡所公開的特定實施例可以做很多修改,仍然能得到相同的或者類似的結果,而非背離本新型的精神或範圍。
除非另有定義,所有在此使用的技術和科學的術語,和本新型所屬領域內的技術人員所通常理解的意思相同,在此公開引用及他們引用的材料都將以引用的方式被併入。
那些本領域內的技術人員將意識到或者通過常規試驗就能瞭解許多這裡所描述的發明的特定實施方案的許多等同技術。這些等同將被包含在權利要求書中。
在本新型提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考,就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解,在閱讀了本新型的上述講授內容之後,本領域技術人員可以對本新型作各種改動或修改,這些等價形式同樣落於本申請的申請專利範圍所限定的範圍。

Claims (16)

  1. 一種檢測樣本中是否含有錯誤折疊蛋白質的裝置,包括:具有面積不超過9mm2的橫截面的出液口、並且能夠吸取和容納至少5μL液體的毛細管;和能夠與錯誤折疊蛋白質競爭結合染料的微孔膜,其中,所述毛細管的出液口與所述微孔膜的表面接觸並密合。
  2. 如請求項1所述的裝置,其中所述毛細管中包含所述染料和生物樣本混合而成的至少5μL的混合液,其中所述染料選自雜環染料、剛果紅、硫磺素、伊文思藍中。
  3. 如請求項2所述的裝置,其中所述毛細管出液口的周圍的所述微孔膜的表面由於所述毛細管內所述混合液自所述毛細管出液口緩慢釋放而染色。
  4. 一種檢測樣本中是否含有錯誤折疊蛋白質的裝置,包括:帶有至少第一排凹槽和第二排凹槽的面板,以及一個點樣部件,其中所述第一排凹槽包括一個待測樣本槽、一個陰性對照樣本槽、一個陽性對照樣本槽分別供以裝盛30-500μL或更多液體;所述第二排凹槽包括至少三個底部覆蓋有能夠與錯誤折疊蛋白質競爭結合染料的微孔膜的測試槽;所述點樣部件包含同樣長度至少三個相互平行的出液口橫截面面積不超過9mm2並且能夠吸取和容納至少5μL液體的毛細管並排地固定於一個橫樑上,並且所述毛細管間的間距與所述樣本槽間以及測試槽間的間距相對應以至於所述至少三個毛細管同時分別插入相應的所述樣本槽或者相應的所述測試槽。
  5. 如請求項4所述的裝置,其中,所述待測樣本槽裝有能與錯誤折疊蛋白質特異性結合的染料或染料溶液;所述陰性對照樣本槽裝有所述陰性對 照樣本;所述陽性對照樣本槽裝有所述陽性對照樣本;所述樣本槽用密封材料封口。
  6. 一種檢測樣本中是否含有錯誤折疊蛋白質的裝置,其特徵在於,包括相互連接的測試部件和點樣部件,所述測試部件包含微孔膜,所述點樣部件包含毛細管。
  7. 如請求項6所述的裝置,其特徵在於,還包括載樣部件,載樣部件和點樣部件連接,所述載樣部件包括相互連接的第二蓋板和第二底板。
  8. 如請求項6或7所述的裝置,其特徵在於,所述點樣部件為一空心盒狀部件,其中含有毛細管。
  9. 如請求項6或7所述的裝置,其特徵在於,所述點樣部件為一實心盒狀部件,其上設有凹孔,用於放置毛細管。
  10. 如請求項6或7所述的裝置,其特徵在於,所述點樣部件為點樣板,其側面設有毛細管。
  11. 如請求項6或7所述的裝置,其特徵在於,所述點樣部件為毛細管。
  12. 如請求項7所述的裝置,其特徵在於,所述點樣部件為一空心盒狀部件,其中含有毛細管,且所述第二蓋板上設有樣本槽,所述樣本槽包括待測樣本槽、一個陰性對照樣本槽和一個陽性對照樣本槽。
  13. 如請求項7所述的裝置,其特徵在於,所述點樣部件為一實心盒狀部件,其上設有凹孔,用於放置毛細管,且所述第二蓋板上設有樣本槽,所述樣本槽包括待測樣本槽、一個陰性對照樣本槽和一個陽性對照樣本槽。
  14. 如請求項7所述的裝置,其特徵在於,所述點樣部件為點樣板,其側面設有毛細管,且所述第二蓋板上設有樣本槽,所述樣本槽包括待測樣本槽、一個陰性對照樣本槽和一個陽性對照樣本槽。
  15. 如請求項7所述的裝置,其特徵在於,所述點樣部件為毛細管,且所述第二蓋板上設有樣本槽,所述樣本槽包括待測樣本槽、一個陰性對照樣本槽和一個陽性對照樣本槽。
  16. 如請求項12至15任一項所述的裝置,其特徵在於,所述待測樣本槽裝有能與錯誤折疊蛋白質特異性結合的染料或染料溶液;所述陰性對照樣本槽裝有所述陰性對照樣本;所述陽性對照樣本槽裝有所述陽性對照樣本;所述樣本槽用密封材料封口。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI698641B (zh) * 2017-12-28 2020-07-11 大陸商浙江數問生物技術有限公司 一種檢測錯誤折疊蛋白質的裝置、試劑盒和方法

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