TWM453148U - 用於檢測口蹄疫病毒血清中和抗體力價之免疫檢測套組 - Google Patents

Description

用於檢測口蹄疫病毒血清中和抗體力價之免疫檢測套組

本創作係有關於檢測病毒抗體力價之檢測套組，特定而言，本創作係關於檢測動物血清中口蹄疫病毒中和抗體力價之檢測套組。

在先前技術中，口蹄疫病毒血清中和抗體力價之檢測係利用血清中和試驗(SNT)進行。血清中和試驗是利用活細胞、活病毒及連續稀釋的待測血清，藉此了解免疫動物獲得免疫保護力的情形。在進行SNT試驗時，使用活的BHK-21細胞以及活的口蹄疫病毒，培養48小時後觀察細胞是否出現細胞病變(CPE)來判斷此待測血清的中和抗體力價高低，每次的試驗會因為細胞生長的狀況及病毒力價的差異而有所不同，最後判定的結果也可能因為人為標準的差異而有所改變。此外，SNT檢驗過程會用到口蹄疫活病毒，必須在密閉、隔離且負壓的P3實驗室內，由受過專驗訓練之人員操作，十分不便。而目前商品化ELISA以間接型較常見，間接型ELISA是將抗原塗鍍在微量盤上，加入待測抗體為一抗與抗原反應，再加入標示酵素的抗體作為二抗與一抗結合，二抗為專一性對抗一抗來源動物免疫球蛋白之抗體，來判斷動物血清之抗體含量，需依照待測動物的種別來選擇二抗，無法做跨物種的診斷。

因此，仍須要一種可簡易快速進行跨物種口蹄疫病毒血清中和抗體力價檢測之檢測裝置或套組。

鑑於上述，本創作之目的是提供一種可簡易快速進行跨物種之口蹄疫病毒血清中和抗體力價檢測之檢測套組。

為達上述或是其他目的，本創作提供一種用於檢測動物血清中口蹄疫病毒中和抗體力價之免疫檢測套組，包含：一固相 支持物；一或多反應槽，位於該固相支持物上，其具有一口蹄疫病毒標準品層塗佈於該一或多反應槽底部；及一單株抗體，其係由融合瘤Q10E-3(寄存編號BCRC 960454)所產生且與一用於訊號偵測的酵素接合，其用於加入該一或多反應槽中與該口蹄疫病毒標準品層中的病毒標準品結合而進行阻斷型ELISA。

該固相支持物可為一多孔裝置，例如，微孔盤或微孔板。該等病毒標準品可為口蹄疫病毒之結構蛋白，例如，VP1結構蛋白。

根據本創作之一具體實施例，該用於訊號偵測的酵素係為HRP(horseradish peroxidase)。

無須進一步的闡述，咸相信本創作所屬技術領域中具有通常知識者基於前述說明即可利用本創作至最廣的程度。因此，可以理解以下的說明僅僅是作為例示說明之用，而非以任何方式限制其餘的揭露內容。

本創作提供一種用於檢測口蹄疫病毒血清中和抗體力價之免疫檢測套組，包含：一固相支持物；一或多反應槽，位於該固相支持物上，其具有一口蹄疫病毒標準品層塗佈於該一或多反應槽底部；及一單株抗體，其係由融合瘤Q10E-3(寄存編號BCRC 960454)所產生且與一用於訊號偵測的酵素接合，其用於加入該一或多反應槽中與該口蹄疫病毒標準品層中的病毒標準品結合而進行阻斷型ELISA。

該單株抗體係針對口蹄疫病毒VP1蛋白，其係由融合瘤Q10E-3(財團法人食品工業發展研究所寄存編號BCRC 960454)所產生。

根據本創作之較佳具體實施例，該固相支持物係為一多孔裝置。在本創作之部分具體實施例中，該固相支持物係為微孔盤或微孔板。

在本創作之一具體實施例中，該該一或多反應槽係為微孔條。

根據本創作，塗佈於一或多反應槽底部的口蹄疫病毒標準品層係由複數個病毒標準品所組成。該等病毒標準品可為口蹄疫病毒之結構蛋白，較佳為VP1結構蛋白。在本創作之特定具體實施例中，該VP1結構蛋白係為重組VP1結構蛋白。

病毒標準品塗佈於反應槽底部之方法係為習知，在此不多贅述。在本創作之一具體實施例中，藉由將病毒標準品稀釋於塗佈緩充液(coating buffer)中，再加入反應槽中進行一段時間之反應以完成塗佈。

任何合適的可用於訊號偵測的酵素皆可用以與該單株抗體接合而用於本創作，例如，HRP(horseradish peroxidase)。依所使用的酵素可選用對應的呈色物質，當用於訊號偵測的酵素為HRP時，可使用TMB、DAB或ABTS作為呈色物質，其可與HRP結合作用而產生訊號。

請參考第1圖，用於檢測口蹄疫病毒血清中和抗體力價之免疫檢測套組100，包含：一固相支持物110；一或多反應槽120，位於該固相支持物上，其具有一口蹄疫病毒標準品層130塗佈於該一或多反應槽底部；及一單株抗體140，其係由融合瘤Q10E-3(寄存編號BCRC 960454)所產生且與一用於訊號偵測的酵素接合，其用於加入該一或多反應槽中與該口蹄疫病毒標準品層中的病毒標準品結合而進行阻斷型ELISA。可將待檢測的動物血清樣本加入反應槽中反應一適當時間，血清中如有針對口蹄疫病毒之抗體將與病毒標準品結合，清洗反應槽後再加入單株抗體140，結合抗原上未與待測抗體結合的抗原決定位，而進行阻斷型ELISA檢測。

使用本創作之檢測口蹄疫病毒血清中和抗體力價之免疫檢測套組檢測一批動物血清樣本，以重組VP1結構蛋白(rVP1)作為病毒標準品，進行阻斷型ELISA(bELISA)檢測。該批動物血清樣本在口蹄疫病毒力價100 TCID₅₀ 下先經血清中和 試驗(SNT)測出其血清中和抗體力價(SN)。這些樣本經過口蹄疫非結構蛋白檢測皆為陰性。依血清中和抗體力價進行分組(SN3、8、32、181及512)，每組20個樣本，共100個血清樣本。接著，以本創作之免疫檢測套組進行bELISA檢測，並將血清樣本的A450讀值依下列公式轉換成PI值：100-(血清樣本A450/陰性對照血清A450)×100%。再計算出不同SN組別的平均PI值，依據每組的平均PI值與血清中和抗體力價繪製標準曲線圖，藉此觀察rVP1-bELISA與SNT的相關性。結果如第2圖所示，根據平均PI值及中和抗體力價的標準曲線圖，rVP1-bELISA與SNT有明顯的正向關係(相關係數：0.9646)，故可取代SNT而用於檢測血清樣本的口蹄疫病毒中和抗體力價。

由上述結構及實施例可知，本創作具有如下優點：

1.相對於SNT的變化性，本創作所使用的病毒標準品及單株抗體都是能夠經由定量而控制所需的濃度，並可透過機器來判讀檢測結果，其穩定程度相對提高。

2.本創作之免疫檢測套組在一般實驗室即可操作，且相較於SNT實驗流程至少要三天才能完成，本創作之免疫檢測套組利用阻斷型ELISA進行，僅需約其一半的時間就可得知實驗結果，在防疫時效上較佔優勢。

3.口蹄疫會感染所有偶蹄類動物，本創作之檢測套組係基於阻斷型ELISA，是以經標示酵素的單株抗體作為示蹤抗體(tracer antibody)與抗原作用，結合抗原上未與待測抗體結合的抗原決定位，利用標示酵素的單株抗體作為訊號產生之工具，可同時檢測不同動物種別的樣本。

以上所述為本創作之較佳實施例以具體說明本創作之技術特徵，並非為限制之目的，且應理解的是，所屬技術領域之技藝人士在未脫離本創作之精神與範疇下進行之等效修改與變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。

100‧‧‧用於檢測口蹄疫病毒血清中和抗體力價之免疫檢測套組

110‧‧‧固相支持物

120‧‧‧反應槽

130‧‧‧口蹄疫病毒標準品層

140‧‧‧單株抗體

第1圖 係為本創作之一具體實施例之用於檢測口蹄疫病毒血清中和抗體力價之免疫檢測套組。

第2圖 係為使用本創作之用於檢測口蹄疫病毒血清中和抗體力價之免疫檢測套組進行血清樣本檢測而與SNT比較之標準曲線圖。

100‧‧‧用於檢測口蹄疫病毒血清中和抗體力價之免疫檢測套組

110‧‧‧固相支持物

120‧‧‧反應槽

130‧‧‧口蹄疫病毒標準品層

140‧‧‧單株抗體

Claims (10)

1. 一種用於檢測口蹄疫病毒血清中和抗體力價之免疫檢測套組，包含：一固相支持物；一或多反應槽，位於該固相支持物上，其具有一口蹄疫病毒標準品層塗佈於該一或多反應槽底部；及一單株抗體，其係由融合瘤Q10E-3(寄存編號BCRC 960454)所產生且與一用於訊號偵測的酵素接合，其用於加入該一或多反應槽中與該口蹄疫病毒標準品層中的病毒標準品結合而進行阻斷型ELISA。
2. 如申請專利範圍第1項的免疫檢測套組，其中該固相支持物係為一多孔裝置。
3. 如申請專利範圍第2項的免疫檢測套組，其中該多孔裝置可為微孔盤或微孔板。
4. 如申請專利範圍第1項的免疫檢測套組，其中該一或多反應槽可為微孔條。
5. 如申請專利範圍第1項的免疫檢測套組，其中該口蹄疫病毒標準品層係由複數個病毒標準品所組成。
6. 如申請專利範圍第5項的免疫檢測套組，其中該等病毒標準品係為口蹄疫病毒之結構蛋白。
7. 如申請專利範圍第6項的免疫檢測套組，其中該結構蛋白係為VP1結構蛋白。
8. 如申請專利範圍第7項的免疫檢測套組，其中該VP1結構蛋白係為重組VP1結構蛋白。
9. 如申請專利範圍第1項的免疫檢測套組，其中該用於訊號偵測的酵素係為HRP(horseradish peroxidase)。
10. 如申請專利範圍第9項的免疫檢測套組，其更包含一選自TMB、DAB或ABTS之呈色物質，用以與該HRP結合作用而產生訊號。