TWI568445B - 含有液態醫藥配製物之預填充針筒 - Google Patents

Description

含有液態醫藥配製物之預填充針筒

本發明係關於治療用抗體配製物的領域。更明確而言，本發明係關於包含能特異性地結合人介白素-4受體之人類抗體醫藥配製物的領域。

序列表

本專利說明書同時附有序列表的一ST.25相符文字檔。該文字檔的內藉由引述併入於此。併入與ST.25相符文字檔之內容相同的序列表紙本作為本專利說明書的一部分。

治療性大分子(如抗體)必需以不僅能使該分子適合病人投藥並且亦可於儲存及後續使用時維持安定性之方法被配製。例如，除非適當配製溶液否則液體溶液內治療性抗體易產生降解、聚集或不良化學改性。液態配製物內抗體的安定性不僅依賴用於配製物內的賦形劑種類，亦必需依賴賦形劑之間的相對數量和比例。此外，當製備一液態抗體配製物時除了安定性之外亦必需考慮其他因素。此類附加考慮因素之實例包括溶液的黏度和可適應一已知配製物的抗體濃度，以及該配製物的視覺品質或訴求。因此，當配製一治療性抗體時，必需注意使一配製物維持穩定、含適當抗體，以及具有能方便地投與該配製物至病人的適當黏度和其他性質。

人介白素-4受體α(hIL-4Rα)之抗體為需要適當配製之治療性相關大分子的一實例。抗hIL-4Rα抗體在臨床上被用於治療或預防例如異位性皮膚炎和過敏性氣喘，以及其他狀況的疾病。抗hIL-4Rα抗體的範 例已特別述如美國專利案號7,605,237、7,608,693、7,465,450和7,186,809；以及美國專利申請案號2010-0047254和2010-0021476。

抗hIL-4Rα抗體雖然已為人所習知，但是技術中仍亟需一種含有足夠安定及適合投與病人之抗hIL-4Rα抗體的新穎醫藥配製物。

發明之摘要

本發明藉由提供含有能特異性地結合人介白素-4受體α(hIL-4Rα)之人類抗體的醫藥配製物以滿足上述的需求。

在一態樣中，提供一種液態醫藥配製物，包含：(i)一能特異性地結合人介白素-4受體α(hIL-4Rα)的人類抗體；(ii)一緩衝液；(iii)一有機助溶劑；(iv)一熱安定劑；以及(v)一去黏劑。

在一具體實施例中，該抗體的濃度為約150mg/ml±50mg/ml。在另一具體實施例中，該抗體的濃度為約150mg/ml±15mg/ml。在一特定具體實施例中，該抗體的濃度為約150mg/ml。

在一具體實施例中，該抗體包含序列辨識編號：1~8的任一或多種胺基酸序列。在一具體實施例中，該抗體包含(a)分別含有序列辨識編號：2、序列辨識編號：3和序列辨識編號：4之重鏈互補決定區1、2和3(HCDR1-HCDR2-HCDR3)的一重鏈可變區(HCVR)；以及(b)分別含有序列辨識編號：6、序列辨識編號：7和序列辨識編號：8之輕鏈互補決定區1、2和3(LCDR1-LCDR2-LCDR3)的一輕鏈可變區(LCVR)。在一特定具體實施例中，該抗體包含分別含有序列辨識編號：1和序列辨識編號：5之胺基酸序列的一HCVR和一LCVR。

在一具體實施例中，該抗體包含序列辨識編號：9~16的任一或多種胺基酸序列。在一具體實施例中，該抗體包含(a)分別含有序列辨識編號：10、序列辨識編號：11和序列辨識編號：12之重鏈互補決定區1、2和3(HCDR1-HCDR2-HCDR3)的一重鏈可變區(HCVR)；以及(b)分別含有序列辨識編號：14、序列辨識編號：15和序列辨識編號：16之輕鏈互補決定區1、2和3(LCDR1-LCDR2-LCDR3)的一輕鏈可變區(LCVR)。在一特 定具體實施例中，該抗體包含分別含有序列辨識編號：9和序列辨識編號：13之胺基酸序列的一HCVR和一LCVR。

在一具體實施例中，該抗體包含序列辨識編號：17~24的任 一或多種胺基酸序列。在一具體實施例中，該抗體包含(a)分別含有序列辨識編號：18、序列辨識編號：19和序列辨識編號：20之重鏈互補決定區1、2和3(HCDR1-HCDR2-HCDR3)的一重鏈可變區(HCVR)；以及(b)分別含有序列辨識編號：22、序列辨識編號：23和序列辨識編號：24之輕鏈互補決定區1、2和3(LCDR1-LCDR2-LCDR3)的一輕鏈可變區(LCVR)。在一特定具體實施例中，該抗體包含分別含有序列辨識編號：17和序列辨識編號：21之胺基酸序列的一HCVR和一LCVR。

在一具體實施例中，該液態配製物的pH為約5.9±0.5。在一 特定具體實施例中，該液態配製物的pH為約5.9±0.1。在一具體實施例中，該液態醫藥緩衝液包含可緩衝從約pH 5.6至約pH 6.2的一或多種緩衝劑。

在一具體實施例中，該液體醫藥配製物包含含有至少兩種緩 衝液的一緩衝系統。在一具體實施例中，該緩衝系統包含具3.6~5.6有效pH範圍內的第一緩衝液及具5.5~7.4有效pH範圍內的第二緩衝液。在一具體實施例中，該第一緩衝液具有約4.8±0.3的pKa以及該第二緩衝液具有約6.0±0.3的pKa。在一特定具體實施例中，該第一緩衝液係醋酸鹽緩衝液以及該第二緩衝液係組胺酸緩衝液。在一特定具體實施例中，該醋酸鹽的濃度為12.5±1.9mM以及組胺酸的濃度為20±3mM。

在一具體實施例中，該有機助溶劑係一種含有聚氧乙烯基團 的非離子高分子。在一些具體實施例中，該有機助溶劑係任一或多種的聚山梨糖酸酯20、泊洛沙姆181和聚乙二醇3350。在一特定具體實施例中，該有機助溶劑係聚山梨糖酸酯20。

在一具體實施例中，該有機助溶劑的濃度為從約 0.2%±0.03%至約1%±0.15% "重量體積"或"w/v"，其中例如0.1g/ml=10%以及0.01g/ml=1%)。在一特定具體實施例中，該有機助溶劑的濃度為約0.2%±0.03% w/v的聚山梨糖酸酯20。

在一具體實施例中，該熱安定劑為一糖類。在一具體實施例 中，該糖係選自由蔗糖、甘露糖和海藻糖構成之群組。在一特定具體實施例中，該熱安定劑係蔗糖。

在一具體實施例中，該熱安定劑的濃度為從約0.9%±0.135% W/V至約10%±1.5% w/v。在一特定具體實施例中，該熱安定劑係濃度為約5%±0.75% w/v的蔗糖。

在一具體實施例中，該去黏劑係一種選自由鹽酸精胺酸、硫氰酸鈉、硫氰酸銨、硫酸銨、氯化銨、氯化鈣、氯化鋅和乙酸鈉所構成群組之鹽。在一特定具體實施例中，該去黏劑係L-精胺酸鹽酸鹽。

在一具體實施例中，該去黏劑的濃度係低於約100mM。在一具體實施例中，該去黏劑的濃度為50mM±7.5mM。在另一具體實施例中，該去黏劑的濃度為25mM±3.75mM。在一特定具體實施例中，該去黏劑為濃度25mM±3.75mM的L-精胺酸鹽酸鹽。

在一具體實施例中，該液態醫藥配製物的黏度為低於或等於約35±3.5釐泊(cPoise)。在一具體實施例中，該黏度為約21.5±13.5釐泊，約11±1.1釐泊或約8.5±0.85釐泊。在一特定具體實施例中，該液態醫藥配製物的黏度為約8.5±0.85釐泊。

在一具體實施例中，該液態醫藥配製物的莫耳滲透壓濃度為低於約450mOsm/kg。在一具體實施例中，該液態醫藥配製物的莫耳滲透壓濃度為約290±20mOsm/kg。

在一具體實施例中，當藉由體積排阻層析法測定時該液態醫藥配製物於5℃儲存六個月之後可從該液態醫藥配製物收獲至少90%或至少95%的天然抗hIL-4Rα抗體。在一特定具體實施例中，當藉由體積排阻層析法測定時於5℃儲存六個月之後可從該液態醫藥配製物回收至少98%的天然抗體。

在一具體實施例中，當藉由體積排阻層析法測定時於45℃儲存八週之後可從該液態醫藥配製物回收至少90%的天然抗體。

在一具體實施例中，當藉由陽離子交換層析法測定時於45℃儲存八週之後可從該液態醫藥配製物回收低於45%的酸形式抗體。

在一具體實施例中，當藉由體積排阻交換層析法測定時於 25℃儲存六個月之後可從該液態醫藥配製物回之抗體低於約4%聚集。

在一態樣中，提供一液態醫藥配製物，包含：(i)約150mg/ml ±50mg/ml可特異性地結合hIL-4Rα的人類抗體，其中該抗體包含分別含有序列辨識編號：1和序列辨識編號：5之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和輕鏈可變區(LCVR)；(ii)約12.5mg/ml±2mM的醋酸鹽；(iii)約20mM±3mM的組胺酸；(iv)約5%±0.75%(w/v)的蔗糖；(v)約0.2%±0.03%(w/v)的聚山梨糖酸酯20；以及(vi)於約5.9±0.5pH的約25mM±3.75mM精胺酸。

在一具體實施例中，該液態醫藥配製物具有從約8.5±0.85 釐泊至約11±1.1釐泊的黏度。在一特定具體實施例中，該液態醫藥配製物的黏度為約8.5±0.85釐泊。

在一具體實施例中，該液態醫藥配製物係生理上等張。在一 具體實施例中，該液態醫藥配製物的莫耳滲透壓濃度為約290±20mOsm/kg。

在一具體實施例中，當藉由體積排阻層析法測定時於5℃儲 存六個月之後可從該液態醫藥配製物回收至少98%的天然抗hIL-4Rα抗體。

在一具體實施例中，當藉由體積排阻層析法測定時於45℃ 儲存八週之後可從該液態醫藥配製物回收至少90%的天然抗hIL-4Rα抗體。

在一具體實施例中，當藉由陽離子交換層析法測定時於45℃儲存八週之後可從該液態醫藥配製物回收低於45%的酸形式之抗體。

在一具體實施例中，當藉由體積排阻交換層析法測定時於25℃儲存六個月之後可從該液態醫藥配製物回收之抗體低於約4%聚集。

在一態樣中，提供一種含至少100mg/ml安定抗hIL-4Rα抗體的安定低黏度等張液態醫藥配製物。在一具體實施例中，該抗體的濃度為約150mg/ml±50mg/ml。在一特定具體實施例中，該抗體的濃度為約150mg/ml±15mg/ml。

在一具體實施例中，該抗體包含序列辨識編號：1~8的任一 或多種胺基酸序列。在一具體實施例中，該抗體包含一重鏈可變區(HCVR)和一輕鏈可變區(LCVR)，其中該HCVR/LCVR組合包含分別含有序列辨識編號：2-3-4和序列辨識編號：6-7-8之胺基酸序列的重鏈和輕鏈互補決定區(HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3)。在一特定具體實施例中，抗hIL-4Rα抗體的一HCVR和一LCVR。

在一些具體實施例中，該配製物的黏度低於35±3.5釐泊，低於20±2釐洚，低於15±1.5釐泊，或低於10±1釐泊。在一特定具體實施例中，該液態配製物具有約8.5±2.5釐泊的黏度。

在一具體實施例中，該配製物具有生理上可相容的莫耳滲透壓濃度。在一特定具體實施例中，該配製物包含290±20mOsm/kg的莫耳滲透壓濃度。

在一具體實施例中，該抗體於約5℃具有至少約六個月的安定性。在一特定具體實施例中，當藉由體積排阻層析法測定時於5℃約儲存六個月至少約98%的抗體保留其自然構形。

在一具體實施例中，該抗體於約45℃具有至少約八週的儲存安定性。在一特定具體實施例中，當藉由體積排阻層析法測定時於45℃約儲存約八週至少約90%的抗體保留其自然構形。在一特定具體實施例中，當藉由陽離子交換層析法測定時於45℃約儲存八週低於約45%為酸形式之抗體。

在一具體實施例中，該抗體於約25℃具有至少約六個月的儲存安定性。在一特定具體實施例中，當藉由體積排阻層析法測定時於25℃約儲存六個月抗體低於約4%聚集。

在一具體實施例中，該配製物包含具有pH約5.9±0.5的一緩衝液。在一具體實施例中，該緩衝液包含一醋酸鹽緩衝液以及一組胺酸緩衝液。在一特定具體實施例中，該醋酸鹽的濃度為12.5mM±1.9mM以及該組胺酸的濃度為20mM±3mM。

在一具體實施例中，該配製物包含濃度從約0.2%±0.03%至約1%±0.15% w/v的有機助溶劑。在一具體實施例中，該有機助溶劑係一種含聚氧乙烯基團的非離子高分子。在一些具體實施例中，該有機助溶劑係 任一或多種的聚山梨糖酸酯20、泊洛沙姆181和聚乙二醇3350。在一特定具體實施例中，該有機助溶劑係濃度約0.2%±0.03% w/v的聚山梨糖酸酯20。

在一具體實施例中，該配製物包含濃度從約0.9%±0.135% w/v至約10%±1.5% w/v的熱安定劑。在一具體實施例中，該熱安定劑係蔗糖。在一具體實施例中，該糖係選自由蔗糖、甘露糖和海藻糖構成的群組。在一特定具體實施例中，該熱安定劑係濃度約5%±0.75% w/v的蔗糖。

在一具體實施例中，該配製物包含濃度不超過約100mM的去黏劑。在一具體實施例中，該去黏劑係精胺酸。在一特定具體實施例中，該去黏劑係濃度25mM±3.75mM的L-精胺酸鹽酸鹽。

在一特定具體實施例中，該安定低黏度等張液態醫藥配製物具有約8.5±2.5釐泊的黏度和約290±20mOsm/kg的莫耳滲透壓濃度，以及包含：(i)150mg/ml±15mg/ml的抗hIL-4Rα抗體，其中該抗體包含分別含有序列辨識編號：1和序列辨識編號：5之胺基酸序列的一HCVR和一LCVR；(ii)12.5mM±1.9mM的醋酸鹽；(iii)20mg/ml±3mM的組胺酸；(iv)0.2%±0.03% w/v的聚山梨糖酸酯20；(v)5%±0.75% w/v的蔗糖；以及(vi)25mM±3.75mM的L-精胺酸鹽酸鹽。根據此具體實施例，(i)當藉由體積排阻層析法測定時於5℃儲存至少約六個月至少約98%的抗體保留其自然構形；(ii)當藉由體積排阻層析法測定時於45℃儲存至少約八週至少約90%的抗體保留其自然構形；(iii)當藉由陽離子交換層析法測定時於45℃儲存八週低於約45%為酸形式抗體；以及(iv)當藉由體積排阻層析法測定時於25℃儲存約六個月抗體低於約4%聚集。

在一態樣中，提供容器內任何上述態樣的一液態醫藥配製物。在一具體實施例中，該容器係一玻璃瓶。在另一具體實施例中，該容器係一微量注射器。在另一具體實施例中，該容器係一針筒。在一特定具體實施例中，該針筒包含一氟碳塗層活塞。在一特定具體實施例中，該針筒係一種低鎢針筒。

從隨後詳細說明的綜述可更瞭解本發明的其他具體實施例。

發明之詳細說明

在說明本發明之前，應瞭解本發明並非僅侷限於所述特定具體實施例和實驗條件，因此可有不同的方法和條件。

除非另有說明，否則此處使用之全部技術和科學名詞與熟習本領域之技術者通常所瞭解的意義相同。此處"大約"一詞當用於一有關特定陳述數值或值範圍時意指該值不超過所陳述值的1%。例如，此處所述"約100"的表達式包括99和101以及全部其間的值(如99.1、99.2、99.3、99.4等)。

雖然此處所述之任何類似或相同的方法和材料亦可被應用於本發明之實務或試驗中，但仍於下文中詳述其較佳的方法和材料。於此藉由引述併入本文內所提及的全部公開案以完整描述本發明。

醫藥配製物

此處"醫藥配製物"的陳述意指至少一種活性成分(例如可於人類或非人動物體內展現生物學效應的小分子、大分子、化合物等)以及至少一種非活性成分的組合，其當混合該活性成分與一或多種附加非活性成分時可治療性投藥至人類或非人動物。除非另有明述，否則此處"配製物"一詞意指"醫藥配製物"。本發明提供包含至少一種治療用多肽的醫藥配製物。根據本發明某些具體實施例，該治療用多肽係可特異性地結合人介白素-4抗體α(hIL-4Rα)的一抗體或其抗原結合片段。更明確而言，本發明包括含有(i)可特異性地結合hIL-4Rα的人類抗體；(ii)一醋酸鹽/組胺酸緩衝液系統；(iii)一非離子表面活性劑的有機助溶劑；(iv)一碳水化合物的熱安定劑；以及(v)一去黏劑的醫藥配製物。本發明所含的特定範例成分和配製物被詳細描述如下文。

特異性地結合hIL-4R的抗體

本發明的醫藥配製物包含一特異性地結合hIL-4Rα的人類抗體或其抗原結合片段。此處所述"hIL-4Rα"一詞意指特異性結合介白素-4(IL-4)的人細胞活素受體。在某些具體實施例中，該含於本發明醫藥配製 物內的抗體特異性地結合hIL-4Rα的胞外區。一範例人類IL-4受體α(hIL-4Rα)胺基酸序列述於序列辨識編號：25。hIL-4Rα的抗體述於美國專利案號7,605,237和7,608,693。hIL-4Rα的胞外區表示於序列辨識編號：26的胺基酸序列。

此處所述"抗體"一詞通常意指包含四個多肽鏈、兩個重鏈(H)和兩個輕鏈(L)藉由雙硫鏈相互連接的免疫球蛋白分子以及其多聚體(如IgM)；然而，僅由重鏈(即無輕鏈)構成的免疫球蛋白分子亦屬於"抗體"的定義範圍內。各重鏈包含一重鏈可變區(此處簡稱為HCVR或V_H)和一重鏈恒定區。該重鏈恒定區包含三個結構域，CH1、CH2和CH3。各輕鏈包含一個輕鏈可變區(此處簡稱為LCVR或V_L)和一輕鏈恒定區。該輕鏈恒定區包含一個結構域(CL1)。該V_H和V_L可進一步再被細分成散佈更保守區稱為骨架區(FR)之超變區稱為互補決定區(CDRs)。各V_H和V_L由三個CDRs和四個FRs從胺基端至羧基端以下列順序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的配置所組成。

除非另有明述，否則此處所述"抗體"一詞應被視為包含完全抗體分子以及其抗原結合片段。此處所述抗體的"抗原結合區"或"抗原結合片段"(或簡稱為"抗體區"或"抗體片段")意指保留特異性結合hIL-4Rα或其抗原表位(epitope)能力之抗體的一或多個片段。

此處所述的"分離抗體"意指實質上無具有不同抗原特異性之其他抗體的抗體(例如能夠特異性地結合hIL-4Rα的分離抗體，其實質上無特異性結合除了hIL-4Rα外之抗原的抗體)。

"特異性地結合"等一詞意指一抗體或其抗原結合片段與一抗原形成一在生理狀態下相對安定的複合物。特異性結合的特徵為具有至少約1x10^-6M或更高的解離常數。兩個分子是否特異性地結合的測定方法已為本技術所習知以及包括，例如透析平衡法、表面電漿共振法等。然而，一特異性結合hIL-4Rα的分離抗體與其他抗原具有交叉反應性，例如來自其他品系的IL-4R(同源基因)。在本發明的上下文中，結合hIL-4Rα的多特異性(雙特異性)抗體以及一或多個附加抗原被視為"特異性地結合"hIL-4Rα。此外，一分離抗體可實質上無其他細胞物質或化學品。

併入本發明醫藥配製物內的範例抗hIL-4Rα抗體說明於US 7,605,237和US 7,608,693，藉由引述將其併入於此。

根據本發明的某些具體實施例，該抗hIL-4Rα抗體係包含IGHV 3-9亞型之一重鏈可變區以及IGKV 2-28亞型之一輕鏈可變區的一種人類IgG1(請看Barbie和Lefranc，人免疫球蛋白κ可變區(IGKV)基因和連接(IGKJ)片段，Exp.Clin.Immunogenet.1998，15：171~183；以及Scaviner,D.等人，人免疫球蛋白重鏈、κ和λ可變區及連接區的蛋白展現，Exp.Clin.Immunogenet.1999，16：234~240)。

在一些具體實施例中，該抗hIL-4Rα包含至少一種胺基酸取代作用，其導致抗體相對胚系IGHV 3~9序列或胚系IGKV 2~28序列之暴露表面的電荷變化。示於此處的該胚系IGHV 3~9和胚系IGKV 2~28序列，以及胺基酸位置指定號碼與國際免疫遺傳學(IMGT)信息系統已述於Lefranc,M.-P.等人，IMGT^®，國際免疫基因學資訊系統^®，Nucl.Acids Res.，37，D1006~D1012(2009)。在一些具體實施例中，該暴露表面包含一互補決定區(CDR)。在一些具體實施例中，該胺基酸的一或多種取代作用係選自由(a)一鹼性胺基酸取代IGHV 3~9之CDR2(如於位置58)內一天然胺基酸；(b)一天然胺基酸取代IGHV 3~9之CDR3(如於位置107)內一胺基酸；以及(c)一天然胺基酸取代IGKV 2~28之CDR1(如於位置33)內一鹼性胺基酸所構成的組合。一抗體特別是於環境介面(舉例如於CDR)之電荷分佈內的特殊排列將使溶液內抗體之安定性產生無法預期的狀況。

在一些具體實施例中，該抗hIL-4Rα抗體包含至少一種胺基酸取代作用，其於相對胚系IGHV 3~9序列或胚系IGKV 2~28序列之抗體可變區的骨架區內產生扭轉應變的改變。在一些具體實施例中，該胺基酸的一或多種取代作用係選自由(a)一脯胺酸取代於IGHV 3~9之骨架區3(FR3)(如於位置96)內一非脯胺酸；以及(b)一非脯胺酸胺基酸取代IGKV 2~28之骨架區2(FR2)(如於位置46)內一脯胺酸所構成的組合。改變胜肽鏈特別指一骨架區內之影響CDR與溶劑介面的扭轉能力將使溶液內抗體之安定性產生無法預期的狀況。

根據本發明某些具體實施例，該抗hIL-4Rα抗體或其抗原結 合片段包含序列辨識編號：2的一重鏈互補決定區(HCDR)1、序列辨識編號：3的一HCDR2，以及序列辨識編號：4的一HCDR3。在某些具體實施例中，該抗hIL-4Rα抗體或其抗原結合片段包含序列辨識編號：1的一HCVD。

根據本發明某些具體實施例，該抗hIL-4Rα抗體或其抗原結 合片段包含序列辨識編號：6的一輕鏈(kappa)互補決定區(LCDR)1、序列辨識編號：7的一LCDR2，以及序列辨識編號：8的一LCDR3。在某些具體實施例中，該抗hIL-4Rα抗體或其抗原結合片段包含序列辨識編號：5的一LCVD。

根據本發明某些其他具體實施例，該抗hIL-4Rα抗體或其抗 原結合片段包含序列辨識編號：10的一HCDR1、序列辨識編號：11的一HCDR2、序列辨識編號：12的一HCDR3、序列辨識編號：14的一LCDR1、序列辨識編號：15的一LCDR2，以及序列辨識編號：16的一LCDR3。在某些具體實施例中，該抗hIL-4Rα抗體或其抗原結合片段包含序列辨識編號：9的一HCVD以及序列辨識編號：13的一LCVD。

根據本發明某些其他具體實施例，該抗hIL-4Rα抗體或其抗 原結合片段包含序列辨識編號：18的一HCDR1、序列辨識編號：19的一HCDR2、序列辨識編號：20的一HCDR3、序列辨識編號：22的一LCDR1、序列辨識編號：23的一LCDR2，以及序列辨識編號：24的一LCDR3。在某些具體實施例中，該抗hIL-4Rα抗體或其抗原結合片段包含序列辨識編號：17的一HCVD以及序列辨識編號：21的一LCVD。

此處實例中非限制性之範例抗體被稱為"mAb1"。此抗體於 US 7,608,693中亦被稱為H4H098P。mAb1(H4H098 P)包含具有序列辨識編號：1/5的一HCVR/LCVR胺基酸序列對，以及代表序列辨識編號：2-3-4/序列辨識編號：6-7-8的HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3結構域。

用於本發明實務的另一非限制性範例抗體被稱為"mAb2"。 此抗體於US 7,608,693中亦被稱為H4H083P。mAb2(H4H083P)包含具有序列辨識編號：9/13的一HCVR/LCVR胺基酸序列對，以及代表序列辨識編號：10-11-12/序列辨識編號：14-15-16的HCDR1-HCDR2-HCDR3/ LCDR1-LCDR2-LCDR3結構域。

用於本發明實務的又另一非限制性範例抗體被稱為"mAb3"。 此抗體於US 7,608,693中亦被稱為H4H095P。mAb3(H4H095P)包含具有序列辨識編號：17/21的一HCVR/LCVR胺基酸序列對，以及代表序列辨識編號：18-19-20/序列辨識編號：22-23-24的HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3結構域。

本發明醫藥配製物內抗體或其抗原結合片段之含量視該配 製物所欲特殊性質以及該配製物擬被使用的特定情況和用途而定。在某些具體實施例中，該醫藥配製物係含有約100±10至約200±20mg/ml、約110±11至約190±19mg/ml、約120±12至約180±18mg/ml、約130±13至約170±17mg/ml、約140±14至約160±16mg/ml，或約150±15mg/ml之抗體的液態配製物。例如本發明的配製物含有約90mg/ml、約95mg/ml、約100mg/ml、約105mg/ml、約110mg/ml、約115mg/ml、約120mg/ml、約125mg/ml、約130mg/ml、約131mg/ml、約132mg/ml、約133mg/ml、約134mg/ml、約135mg/ml、約140mg/ml、約145mg/ml、約150mg/ml、約155mg/ml、約160mg/ml、約165mg/ml、約170mg/ml、約175mg/ml、約180mg/ml、約185mg/ml、約190mg/ml、約195mg/ml，或約200mg/ml之特異性地結合hIL-4Rα的抗體或其抗原結合片段。

賦形劑和pH

本發明之醫藥配製物包含一或多種賦形劑。此處所述"賦形劑"一詞意指加入配製物內以提供所欲稠度、黏度或穩定效應的任何非治療性物質。

在某些具體實施例中，本發明之醫藥配製物包含在激烈操作舉例如振盪狀態下能穩定該hIL-4Rα抗體之類型和數量的至少一種有機助溶劑。在一些具體實施例中，其所述"穩定"一詞意指在激烈操作過程中可預防抗體總量(莫耳基礎上)之聚集抗體形成超過2%。在一些具體實施例中，激烈操作係將含該抗體和有機助溶劑的溶液振盪約120分鐘。

在某些具體實施例中，該有機助溶劑係一種非離子表面活性 劑，例如烷基聚(氧乙烯)。可被併入本發明配製物內的特定非離子表面活性劑包括，例如聚山梨糖醇酯如polysorbate 20、polysorbate 28、polysorbate 40、polysorbate 60、polysorbate 65、polysorbate 80、polysorbate 81，和poly-sorbate 85；泊洛沙姆如poloxamer 181、poloxamer 188、polo-xamer 407；或聚乙二醇(PEG)。polysorbate 20亦被稱為吐溫20(TWEEN 20)、山梨糖醇單月桂酸酯和聚氧乙烯山梨糖醇單月桂酸酯。poloxamer 181亦被稱為PLURONIC F68。

本發明之醫藥配製物內的有機助溶劑含量視該配製物所欲 特殊性質以及該配製物擬被使用的特定情況和用途而定。在某些具體實施例中，該配製物內的表面活性劑含量為約0.1±0.01%至約2±0.2%。例如，本發明之配製物可含有約0.09%、約0.10%、約0.11%、約0.12%、約0.13%、約0.14%、約0.15%、約0.16%、約0.17%、約0.18%、約0.19%、約0.20%、約0.21%、約0.22%、約0.23%、約0.24%、約0.25%、約0.26%、約0.27%、約0.28%、約0.29%，或約0.30%的polysorbate 20或poloxamer 181。例如，本發明之配製物可含有約0.5%、約0.6%、約0.7%、約0.8%、約0.9%、約1%、約1.1%、約1.2%、約1.3%、約1.4%、約1.5%、約1.6%、約1.7%、約1.8%、約1.9%，或約2.0%的PEG 3350。

可穩定該hIL-4Rα抗體的範例有機助溶劑含有0.2%±0.02%的polysorbate 20、0.2%±0.02%的polyxamer 181，或1%±0.1%的PEG 3350。

本發明之醫藥配製物亦包含在熱緊迫狀態下能穩定該hIL-4Rα抗體之類型和數量的一或多種熱安定劑。在一些具體實施例中，其所述"穩定"一詞意指當含該抗體和熱安定劑之溶液保存於約45℃高至約28天時可維持大於約92%的自然構形抗體。在一些具體實施例中，其所述"穩定"一詞意指當含該抗體和熱安定劑之溶液保存於約45℃高至約28天時可維持低於約5%的聚集抗體。

在某些具體實施例中，該熱安定劑係選自蔗糖、海藻糖和甘露糖或其任何組合的一種糖或糖醇，其於配製物內的含量視特定情況和該配製物擬被使用的目的而定。在某些具體實施例中，該配製物含有約2.5%至約10%、約3%至約9.5%、約3.5%至約9%、約4%至約8.5%、約4.5% 至約8%、約5%至約7.5%、約5.5%至約7%，或約6.0%至約6.5%的糖或糖醇。例如，本發明的醫藥配製物可含有約2.5%±0.375%、約3%±0.45%、約3.5%±0.825%、約4.0%±0.6%、約4.5%±0.675%、約5.0%±0.75%、約5.5%±0.825%、約6.0%±0.9%、約6.5%±0.975%、約7.0%±1.05%、約7.5%±1.125%、約8.0%±1.2%、約8.5%±1.275%、約9.0%±1.35%，或約10.0%±1.5%的糖或糖醇(如蔗糖、海藻糖或甘露糖)。

本發明之醫藥配製物亦可含有作為維持安定pH和幫助穩定 該hIL-4Rα抗體的一緩衝劑或緩衝系統。在一些具體實施例中，其所述"穩定"一詞意指當含該抗體和緩衝劑之溶液保存於約45℃高至約14天時可維持低於3.0%±0.5%的聚集抗體。在一些具體實施例中，其所述"穩定"一詞意指當含該抗體和緩衝劑之溶液保存於約25℃高至約6個月時可維持低於3.7%±0.5%的聚集抗體。在一些具體實施例中，其所述"穩定"一詞意指當含該抗體和緩衝劑之溶液保存於約45℃高至約14天時以體積排阻層析法測定可維持至少95%±0.5%的自然構形抗體。在一些具體實施例中，其所述"穩定"一詞意指當含該抗體和緩衝劑之溶液保存於約25℃高至約6個月時以體積排阻層析法測定可維持至少96%±0.5%的自然構形抗體。在一些具體實施例中，其所述"穩定"一詞意指當含該抗體和緩衝劑之溶液保存於約45℃高至約14天時以陽離子交換層析法測定可維持至少62%±0.5%的中性構形抗體。在一些具體實施例中，其所述"穩定"一詞意指當含該抗體和緩衝劑之溶液保存於約25℃高至約6個月時以陽離子交換層析法測定可維持至少54%±0.5%的中性構形抗體。"中性構形"意指離子交換樹脂中從主峰透析的抗體部分，其通常於兩側中一側較趨"鹼性"尖峰以及另一側更趨"酸性"尖峰。

本發明之醫藥配製物具有從約5.2至約6.4的pH。例如，本 發明之醫藥配製物可具有從約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3，或約6.4的pH。在一些具體實施例中，該pH係約5.3±0.2、約5.9±0.2，或約6.0±0.2。

在一些具體實施例中，該緩衝劑或緩衝系統包含完全重疊或 於pH 5.2~6.4部分範圍內的至少一緩衝劑。在一具體實施例中，該緩衝劑 或緩衝系統包含兩種緩衝劑，其第一種在3.6~5.6的有效pH範圍以及第二種在5.5~7.4的有效pH範圍。在一具體實施例中，該第一緩衝劑具有約4.8±0.3的pKa以及第二緩衝劑具有約6.0±0.3的pKa。在某些具體實施例中，該緩衝系統包含醋酸鹽緩衝劑和組胺酸緩衝劑。在某些具體實施例中，每1份莫耳比醋酸鹽含有約1.3~1.9份的組胺酸。在某些具體實施例中，每1份莫耳比醋酸鹽含有約1.6±0.25份的組胺酸。在某些具體實施例中，該醋酸鹽的濃度為約2.5mM至約22.5mM、約3.0mM至約22mM、約3.5mM至約21.5mM、約4.0mM至約21.0mM、約4.5mM至約20.5mM、約5.0mM至約20mM、約5.5mM至約19.5mM、約6.0mM至約19.0mM、約6.5mM至約18.5mM、約7.0mM至約18.0mM、約7.5mM至約17.5mM、約8.0mM至約17.0mM、約8.5mM至約16.5mM、約9.0mM至約16.0mM、約9.5mM至約15.5mM、約10.0mM至約15.0mM、約10.5mM至約14.5mM、約12.5mM至約1.875mM、約11.0mM至約14.0mM、約11.5mM至約13.5Mm，或約12.0mM至約13.0mM。在某些具體實施例中，該組胺酸的濃度為約10mM至約30mM、約11mM至約29mM、約12mM至約28mM、約13mM至約27mM、約14mM至約26mM、約15mM至約25mM、約16mM至約24mM、約17mM至約23mM、約18mM至約22mM，或約19mM至約21mM。在某些具體實施例中，該緩緩系統包含於約pH5.9之約12.5mM的醋酸鹽以及約20mM的組胺酸。

本發明之醫藥配製物亦包含用於維持低黏度或降低含高濃 度蛋白(例如通常>100mg/ml蛋白)之配製物黏度的一或多種賦形劑。在一些具體實施例中，該配製物的精胺酸含量足以使液態配製物之黏度維持在低於約35cPoise、低於約30cPoise、低於約25cPoise、低於約20cPoise、低於約15cPoise、低於約14cPoise、低於約13cPoise、低於約12cPoise、低於約10cPoise，或低於約9cPoise。

在某些具體實施例中，本發明之醫藥配製物所含較佳為L- 精胺酸鹽酸鹽之精胺酸濃度為約25mM±3.75mM、約50mM±7.5mM，或約100mM±15mM。在某些具體實施例中，該精胺酸的濃度為約20mM至約30mM、約21mM至約29mM、約21.25mM至約28.75mM、約22mM 至約28mM、約23mM至約27mM，或約24mM至約26mM。

代表性配製物

根據本發明之一態樣，該醫藥配製物係一種低黏度、通常生 理上等張的液態配製物，其包含：(i)特異性地結合hIL-4Rα(例如mAb1、mAb2或mAb3[如上述])之濃度約100mg/ml或更高的人類抗體；(ii)足以緩衝於約pH 5.9±0.6的緩衝系統；(iii)特別用於作為熱安定劑的糖；(iv)保護抗體內結構完整性的有機助溶劑；以及(v)維持易用於皮下注射之黏度的一胺基酸。

根據一具體實施例，該醫藥配製物包含：(i)特異性地結合 hIL-4Rα以及包含一經取代IGHV 3~9型重鏈可變區和一經取代IGLV 2~28型輕鏈可變區(如mAb1)之濃度約100mg/ml至約200mg/ml的人類IgG1抗體；(ii)足以緩衝於約pH 5.9±0.6之包含醋酸鹽和組胺酸的緩衝系統；(iii)作為熱安定劑的蔗糖；(iv)作為有機助溶劑的聚山梨糖醇酯；以及(v)作為去黏劑的精胺酸。

根據一具體實施例，該醫藥配製物包含：(i)特異性地結合 hIL-4Rα以及包含序列辨識編號：2的一HCDR1、序列辨識編號：3的一HCDR2、序列辨識編號：4的一HCDR3、序列辨識編號：6的一LCDR1、序列辨識編號：7的一LCDR2，以及序列辨識編號：8的一LCDR3之濃度約150mg/ml±25mg/ml的人類IgG1抗體；(ii)足以緩衝於約pH 5.9±0.3之約12.5mM±1.9mM的醋酸鹽和約20mM±3mM的組胺酸；(iii)於約5%±0.75% w/v的蔗糖；(iv)於約0.2%±0.03% w/v的polysorbate 20；以及(v)於約25mM±3.75mM之作為L-精胺酸鹽酸鹽的精胺酸。

本發明之醫藥配製物的其他非限制性實例已說明於本文中他處，包括下列所述的實施例。

醫藥配製物的安定性和黏度

本發明之醫藥配製物一般展現高度的安定性。此處關於該醫藥配製物的"安性性"一詞意指醫藥配製物內的抗體於界定的儲存條件下保持可接受程度的化學結構或生物學功能。一配製物內所含抗體於儲存一段 時間之後縱使其化學結構或生物學功能無法維持100%，但仍屬安定狀態。 在某些情況下，於儲存一段時間之後該抗體結構或功能維持於約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%時可被視為"穩定"。

可於界定溫度儲存一段時間之後藉由特別是測量配製物內 保留天然抗體之百分比的方法測定其穩定性。可特別是藉由體積排阻層析法(例如體積排阻高效液相層析法[SE-HPLC])測定天然抗體的百分比。如此處所述"一可接受程度穩定性"的片語意指於一給定溫度儲存一段時間之後配製物內可偵測到至少90%的天然抗體。在某些具體實施例中，於一界定溫度儲存一段時間之後配製物內可偵測到至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%，或100%的天然抗體。測出為穩定的該界定一段時間為至少2週、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月，或更長。測出為穩定之可儲存醫藥配製物的該界定溫度可為任何溫度從約-80℃至約45℃，例如儲存於約-30℃、約-20℃、約0℃、約4℃~8℃、約5℃、約25℃，或約45℃。例如，若一醫藥配製物於5℃儲存3個月之後藉由SE-HPLC可測得大於約90%、95%、96%、97%或98%的天然抗體，則可被視為安定。若一醫藥配製物於5℃儲存6個月之後藉由SE-HPLC可測得大於約90%、95%、96%、97%或98%的天然抗體，則亦可被視為安定。若一醫藥配製物於5℃儲存9個月之後藉由SE-HPLC可測得大於約90%、95%、96%、97%或98%的天然抗體，則亦可被視為安定。 若一醫藥配製物於25℃儲存3個月之後藉由SE-HPLC可測得大於約90%、95%、96%或97%的天然抗體，亦可被視為安定。若一醫藥配製物於25℃儲存6個月之後藉由SE-HPLC可測得大於約90%、95%、96%或97%的天然抗體，亦可被視為安定。若一醫藥配製物於25℃儲存9個月之後藉由SE-HPLC可測得大於約90%、95%、96%或97%的天然抗體，亦可被視為安定。

可於界定溫度儲存一段時間之後藉由特別是測量配製物內 聚集抗體之百分比的方法測定其穩定性，其中穩定性與形成之聚集抗體百 分率成反比。可特別是藉由體積排阻層析法(例如體積排阻高效液相層析法[SE-HPLC])測定聚集抗體的百分比。如此處所述"一可接受程度穩定性"的片語意指於一給定溫度儲存一段時間之後配製物內可偵測到至多5%的聚集抗體。在某些具體實施例中，一可接受程度穩定性意指於一給定溫度儲存一段時間之後配製物內可偵測到至多約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集抗體。測出為穩定的該界定一段時間為至少2週、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月，或更長。測出為穩定之可儲存醫藥配製物的該界定溫度可為任何溫度從約-80℃至約45℃，例如儲存於約-30℃、約-20℃、約0℃、約4℃~8℃、約5℃、約25℃，或約45℃。例如，一醫藥配製物於5℃儲存3個月之後若測得低於約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集抗體，則可被視為安定。一醫藥配製物於5℃儲存6個月之後若測得低於約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集抗體，則亦可被視為安定。一醫藥配製物於5℃儲存9個月之後若測得低於約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集抗體，亦可被視為安定。一醫藥配製物於25℃儲存3個月之後若測得低於約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集抗體，亦可被視為安定。一醫藥配製物於25℃儲存6個月之後若測得低於約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集抗體，亦可被視為安定。一醫藥配製物於25℃儲存9個月之後若測得低於約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集抗體，亦可被視為安定。

可特別是藉由測量於離子交換期間抗體遷移至更酸性部分 ("酸形式")與抗體主要部分("中性構形")的比例測定其穩定性，其中穩定性與酸形式部分的抗體成反比。在不侷泥於理論之下，抗體的去醯胺化可導致抗體帶有更多的負電荷而因此相對非脫醯胺抗體更酸性(請看例如Robinson,N.，蛋白質去醯胺作用，PNAS，2002年4月16日，99(8)：5283~5288)。 可特別是藉由離子交換層析法(例如陽離子交換高效液相層析法[CEX-HPLC])測定"酸化"或"去醯胺化"抗體。如此處所述"一可接受程度穩定性"的片語意指於一界定溫度儲存一段時間之後配製物內可偵測到至多 45%的酸形式抗體。在某些具體實施例中，一可接受程度穩定性意指於一給定溫度儲存一段時間之後配製物內可偵測到至多約45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸形式抗體。測出為穩定的該界定一段時間為至少2週、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月，或更長。測出為穩定之可儲存醫藥配製物的該界定溫度可為任何溫度從約-80℃至約45℃，例如儲存於約-30℃、約-20℃、約0℃、約4℃~8℃、約5℃、約25℃，或約45℃。例如，一醫藥配製物於5℃儲存3個月之後若測得低於約15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸形式抗體，則可被視為安定。一醫藥配製物於25℃儲存3個月之後若測得低於約18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸形式抗體，則亦可被視為安定。一醫藥配製物於45℃儲存8週之後若測得低於約45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸形式抗體，亦可被視為安定。一醫藥配製物於40℃儲存2週之後若測得低於約20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸形式抗體，亦可被視為安定。

可使用其他方法測定本發明配製物的穩定性，舉例如以微差 掃瞄熱量法(DSC)測定熱安定性、以控制攪動法測定機械安定性，以及於約350或約405nm的吸光度測定溶液濁度。例如，本發明的一醫藥配製物於約5℃至約25℃儲存6或更多個月之後若該配製物從零時間點OD₄₀₅變化低於OD₄₀₅約0.05(如0.04、0.03、0.02、0.01，或更低)時則被視為安定。

亦可藉由測定抗體的生物活性或結合至其標的的親和力評 估其穩定性。例如，本發明一配製物於例如5℃、25℃、45℃等儲存一段時間(例如1至12個月)之後該配製物內所含抗IL-4Rα抗體以儲存前之抗體結合親和力至少90%、95%或更高結合至IL-4Rα時，則可被視為安定。藉由 例如ELISA或電漿共振法測定結合親和力。藉由IL-4Rα活性檢測法測定生物活性，舉例如使一表現IL-4Rα細胞接觸含該抗IL-4Rα抗體的配製物。 可直接測定此類細胞與該抗體的結合作用，舉例如經由FACS分析法。或者，於存在該抗體和一IL-4Rα激動劑之下測定該IL-4Rα系統的下游活性，然比較無抗體之該IL-4Rα系統的活性。在一些具體實施例中，該IL-4Rα可內生於該細胞內。在其他具體實施例中，該IL-4Rα可被異位地表現於該細胞內。

測定配製物內抗體安定性的其他方法說明於下文的實例中。

在某些具體實施例中，本發明之醫藥配製物展現低至中度的黏性。此處所述"黏性"可為"動力黏度"或"絕對黏度"。"動力黏度"係一液體在重力影響下所測得的流阻。當兩種等量液體被置入相同毛細管黏度計內並在重力下流動時，一黏性液體需較低黏性液體更長的時間流經該毛細管。例如，若一液體需200秒而另一液體則需400秒完成其流動時，在一動力黏度尺標上該第二液體為第一種的兩倍黏度。"絕對黏度"係指動力黏度和液體密度的產品(絕對黏度=動力黏度x密度)，其有時被稱為動力或簡單黏度。動力黏度的尺寸為L²/T，該L係長度及T係時間。通常，動力黏度被表示為厘拖(cSt)。動力黏度的SI單位為mm²/s，其指1cSt。絕對黏度的單位為釐泊(cP)。絕對黏度的SI單位為釐帕-秒(mPa-s)，其1cP=1mPa-s。

如此處所述，本發明一低黏度的液態配製物將展現低於約15釐泊(cP)的絕對黏度。例如，本發明一液態配製物若以標準黏度測量法測定後被視為具有"低黏度"時，該配製物將展現約15cP、約14cP、約13cP、約12cP、約11cP、約10cP、約9cP、約8cP，或更低的絕對黏度。如此處所述，本發明一中等黏度的液態配製物將展現介於約35cP至約15cP的絕對黏度。例如，本發明一液態配製物若被視為具有"中等黏度"時，該配製物將展現約34cP、約33cP、約32cP、約31cP、約30cP、約29cP、約28cP、約27cP、約26cP、約25cP、約24cP、約23cP、約22cP、約21cP、約20cP、約19cP、約18cP、約17cP、約16cP，或約15.1cP的絕對黏度。

如下文實例中所述，本發明人意外地發現藉由從約25mM 至約100mM的精胺酸配製該抗體可獲得含有高濃度抗hIL-4Rα抗體(例如從約100mg/ml高達至少200mg/ml)之低至中等黏度的液態配製物。此外，已進一步發現藉由調整蔗糖含量至低於約10%甚至可更大程度地降低配製物的黏度。

用於該醫藥配製物之容器以及投藥方法

本發明之醫藥配製物可被置入適合儲存藥物和他治療組成物的任何容器內。例如，該醫藥配製物可被置入具有限定容量例如小玻璃瓶、安瓿、針筒、藥匣或藥瓶的一密封和滅菌塑膠或玻璃容器內。本發明之配製物可被置入不同類型的小玻璃瓶例如透明和不透明(如琥珀)玻璃或塑膠瓶。同樣，可使用任何類型的針筒容納或投與本發明的醫藥配製物。

本發明之醫藥配製物可被置入"普通鎢(normal tungsten)"針筒或"低鎢"針筒內。如熟悉本領域之一般技術者所瞭解，製造玻璃針筒的過程通常涉及使用作為穿透玻璃的熱鎢條而產生可從針筒抽吸液體的小孔。此過程導致微量鎢沈積於該針筒的內表面。接著可使用洗滌和其他製程步驟以減少針筒內的鎢量。如此處所述的"普通鎢"一詞意指該針筒含有大於500十億分率(ppb)的鎢。"低鎢"一詞意指該針筒含有低於500ppb的鎢。例如，根據本發明的一低鎢針筒可含有小於約490、480、470、460、450、440、430、420、410、390、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10或更少ppb的鎢。

可塗佈用於針筒的橡膠柱塞及用於關閉玻璃瓶開口的橡皮塞以避免針筒或瓶內藥物的污染，或保存其穩定性。因此，根據某些具體實施例的本發明醫藥配製物可被置於包含一塗佈柱塞的針筒內，或以塗佈橡皮塞密封的玻璃瓶內。例如，該柱塞或橡皮塞可被塗佈氟碳薄膜。適用於含本發明醫藥配製物之玻璃瓶和針筒的塗佈柱塞或橡皮塞實例已述於美國專利案號4,997,423、5,908,686、6,286,699、6,645,635和7,226,554，藉由引述將其內容完整併入於此。用於本發明文中的特殊塗佈橡膠柱塞和橡皮塞可購自West Pharmaceutical Services公司(賓州Lionville市)的市面商品 "FluroTec^®"。

根據本發明的某些具體實施例，該醫藥配製物可被置入包含 氟碳塗層活塞的低鎢針筒內。

該醫藥配製物可經由例如注射(如皮下、靜脈、肌肉、腹腔內等)或經皮、黏膜、經鼻、肺部或口服投藥的腸道外途徑被投與至病人。許多隨身注射筆或自動注射輸液裝置可被用於皮下輸注本發明的醫藥配製物。實例包括，但不侷限於AUTOPEN^TM(英國Woodstock市Owen Mumford公司)、DISETRONIC^TM筆(瑞士Bergdorf市Disetronic醫療公司)、HUMALOG MIX 75/25^TM筆、HUMALOG^TM筆、HUMALIN 70/30^TM筆(印第安那州Indianapolis市Eli Lilly公司)、NOVOPEN^TM I、II和III(丹麥Copenhagen市Novo Nordisk公司)、NOVOPEN JUNIOR^TM(丹麥Copenhagen市Novo Nordisk公司)、BD^TM筆(紐澤西州Franklin市Becton Dickinson公司)、OPTIPEN^TM、OPTIPEN PRO^TM、OPTIPEN STARLET^TM，以及OPTICLIK^TM(德國Frankfurt市Sanofi-Aventis公司)。已用於皮下輸注本發明醫藥組成物的隨身注射筆或自動注射輸液裝置之實例包括，但不侷限於SOLOSTAR^TM筆(Sanofi-Aventis)、FLEXPEN^TM(Novo Nordisk)，和KWIKPEN^TM(Eli Lilly)；SURECLICK^TM自動注射器(加州Thousand Oaks市Amgen公司)、PENLET^TM(德國Stuttgart市Haselmeier公司)、EPIPEN^TM(Dey,L.P.)，以及HUMIRA^TM筆(伊利諾州Abbott Park市Abbott實驗室)。

此處亦使用微量注射器輸注本發明之醫藥配製物。如此處所述，"微量注射器"意指於長時間(如約10、15、20、25、30分鐘或更長)緩慢投與大量(如高至約2.5ml或更多)治療性配製物的皮下輸注器。請看如US 6,629,949、US 6,659,982；以及Meehan等人，J.Controlled Release 46：107~116(1996)。微量輸注器最適用於輸注含有高濃度(如約100、125、150、175、200mg/ml，或更高)的大劑量治療性蛋白，或黏稠溶液。

在一具體實施例中，該含有約150±15mg/ml抗IL-4Rα抗體的液態醫藥配製物從自動注射器內一預填充針筒以體積約1±0.15ml被皮下投藥。在另一具體實施例中，該配製物以介於約1ml和2.5ml之間的體積從一微量注射器被投藥。該配製物可被預填充入微量注射器的一儲袋或藥 匣內。

醫藥配製物的治療用途

本發明之醫藥配製物特別被用於治療、預防或緩解與IL-4活性有關的任何疾病或障礙，包括經IL-4Rα活化介導的疾病或障礙。可藉由投與本發明醫藥配製物被治療或預防的非侷限性範例疾病和障礙包括各種過敏性疾病舉例如異位性皮膚炎、過敏性結膜炎、過敏性鼻炎、氣喘以及其他IgE/Th2介導性疾病。

因此，本發明包括治療、預防或緩解與IL-4活性或IL-4Rα活化(包括任何上述範例疾病、障礙和病症)有關之任何疾病或障礙的方法。本發明的治療方法包含將上述含抗hIL-4Rα抗體之配製物投與至一生物體。被投與該醫藥配製物的生物體可為例如需此類治療、預防或緩解，或可從抑制或緩解IL-4或IL-4Rα介導活性而獲益的任何人類或非人類動物。例如，該生物體可為被診斷或認為可能有罹患上述疾病或障礙之危險的個體。本發明進一步包括此處揭示之任何該醫藥配製物於製造用於該治療、預防或緩解與IL-4活性或IL-4Rα活化有關之任何疾病或障礙(包括上述任何範例疾病、障礙和病症)的用途。

下列實例係提供熟悉此項技術者如何製造和使用本發明之方法和組成物的一完整揭示和說明，並且非擬限制被發明者視為其發明的範圍。雖然已努力確保所使用數字(例如，數量、溫度等)的準確度，但一些實驗仍可能發生某些錯誤和偏差。除非另有說明，否類其份數為莫耳份數、分子量為平均分子量、溫度為攝氏度，以及壓力為在或接近大氣壓。

形成初步配製物的活動涉及篩選mAb1(本發明的抗IL-4Rα抗體)液態配製物內之有機助溶劑、熱安定劑和緩衝劑以確認賦形劑與蛋白質具有相容性及有助於其穩定性，同時可維持莫耳滲透壓濃度及用於皮下注射的黏度。亦檢查緩衝液條件以測定最高蛋白穩定性的最適pH。

實例1. 有機助溶劑

已發現mAb1於振盪性緊迫時不穩定。藉由反相高效液相層 析法(RP-HPLC)和體積排阻高效液相層析法(SE-HPLC)分析證明當mAb1於室溫下振盪下的蛋白損失及凝集性蛋白的增加(表1，請看"無助溶劑"數據)。添加有機助溶劑至mAb1溶液可預防藉由SE-HPLC和RP-HPLC測量的蛋白質降解(表1)。然而，已發現一些有機助溶劑的添加將降低mAb1的熱安定性(表2)。已發現含PEG 3350(3%)和PEG 300(10%和20%)的配製物於熱緊迫之後將喪失藉由RP-HPLC測量的回收蛋白質(表2)。此外，含PLURONIC F68(poloxamer 181)(0.2%)、PEG 300(10%和20%)和丙二醇(20%)的配製物較無助溶劑的配製物形成更多藉由SE-HPLC測量的聚集物。 Polysorbate 20(0.2%)和polysorbate 80(0.2%)對振盪和熱緊迫具有相當的穩定性。

根據表1，將2ml玻璃瓶內0.3ml於10mM磷酸鹽pH 6.0 內15mg/ml的mAb1以及各種有機助溶劑振盪約120分鐘。於405nm的光學密度(OD)測定濁度以及比較起始原料於405nm之OD的相對變化。藉由體積排阻HPLC(SE-HPLC)法測定天然和聚集mAb1的百分比。示於"起始原料"表內的SE-HPLC結果為未經振盪之各配製物的平均值。

根據表2，將2ml玻璃瓶內0.3ml於10mM磷酸鹽pH 6.0 內15mg/ml的mAb1以及各種有機助溶劑於約45℃保存約28天。於405nm的光學密度(OD)測定濁度以及比較起始原料於405nm之OD的相對變化。 藉由反相HPLC(RP-HPLC)法測定總回收mAb1的百分比。藉由體積排阻HPLC(SE-HPLC)法測定天然和聚集mAb1的百分比。示於"起始原料"表內的SE-HPLC結果為未受熱緊迫之各配製物的平均值。

實例2. 熱安定劑

檢查各種熱安定劑，例如糖、胺基酸和無機鹽對保存於約45℃之抑制mAb1降解的能力。熱安定劑的一研究摘要示於表3。含蔗糖或海藻糖的配製物當培養於高溫溶液內時具有較高的mAb1穩定效應(藉由SE-HPLC測定)。因為蔗糖已有長久用於單株抗體配製物內的安全史因此被選擇作為安定劑。

根據表3，將2ml玻璃瓶內0.3ml於10mM醋酸鹽pH 5.3內25mg/ml的mAb1以及各種熱安定劑於約45℃保存約28天。於405nm的光學密度(OD)測定濁度以及比較起始原料於405nm之OD的相對變化。全部樣本可忽略其濁度差異。藉由反相HPLC(RP-HPLC)法測定總回收mAb1的百分比。藉由體積排阻HPLC(SE-HPLC)法測定天然和聚集mAb1的百分比。酸性或鹼性物質被定義為從陽離子交換(CEX-HPLC)管柱分別比 主峰較早或較晚停留時間被透析的mAb1峰總量。示於"起始原料"表內的SE-HPLC結果為未受熱緊迫之各配製物的平均值。

實例3. 緩衝劑和pH

亦檢查pH和緩衝種類對mAb1穩定性的效應。以不同緩衝劑於範圍從pH 4.5至7.0不同pH值培養15mg/ml的mAb1。藉由SE-HPLC和陽離子交換HPLC(CEX-HPLC)監測蛋白質穩定性。當mAb1配製於pH 6.0組胺酸緩衝液或pH 5.3醋酸鹽緩衝液時具有以SE-HPLC和CEX-HPLC測定的最大蛋白質穩定性(表4和表5)。該醋酸鹽緩衝系統相對含組胺酸緩衝劑之配製物具有較廣的pH穩定性範圍以及較低的變異電荷形成速率(表5)。因此，pH 5.3的醋酸鹽緩衝劑被選擇用於mAb1藥物的配製物。

根據表4，將10mM之各種緩衝劑混合0.3ml之15mg/ml mAb1、0.2%之polysorbate 20的2ml玻璃瓶於約45℃保存約14天。於405nm的光學密度(OD)測定濁度以及比較起始原料於405nm之OD的相對變化。全部樣本可忽略其濁度差異。藉由反相HPLC(RP-HPLC)法測定總回收mAb1的百分比。藉由體積排阻HPLC(SE-HPLC)法測定天然和聚集mAb1的百分比。酸性或鹼性物質被定義為從陽離子交換(CEX-HPLC)管柱分別比主峰較早或較晚停留時間被透析的mAb1峰總量。示於"起始原料"表內的SE-HPLC結果為未受熱緊迫之各配製物的平均值。

根據表5，將10mM之各種緩衝劑混合0.3ml之15mg/ml mAb1、0.2%之polysorbate 20的2ml玻璃瓶於約45℃保存約14天。於405nm的光學密度(OD)測定濁度以及比較起始原料於405nm之OD的相對變化。全部樣本可忽略其濁度差異。藉由反相HPLC(RP-HPLC)法測定總回收mAb1的百分比。藉由體積排阻HPLC(SE-HPLC)法測定天然和聚集mAb1的百分比。酸性或鹼性物質被定義為從陽離子交換(CEX-HPLC)管柱分別比主峰較早或較晚停留時間被透析的mAb1峰總量。示於"起始原料"表內的SE-HPLC結果為未受熱緊迫之各配製物的平均值。

配製物形成試驗顯示於鹼性條件(pH6.5)下溶液內mAb1可 被去醯胺。反之，低於pH 5.0時已發現可增加形成變異分子量之mAb1的速率。根據這些數據，該mAb1配製物的pH被維持在約pH 5.6和pH 6.2之間。已發現mAb1可穩定存在於此pH範圍。

進一步評估配製物內含20mM組胺酸pH 6、12.5mM醋酸鹽pH 5.3或混合20mM組胺酸和12.5醋酸鹽pH 5.9之pH和緩衝種類對mAb1穩定性的效應(表6)。比較個別的緩衝系統，配製物內含組胺酸及約pH 5.9醋酸鹽的mAb1最為安定。當mAb1配製於此混合緩衝系統內(SE-HPLC)時具有最緩慢的聚集速率(表6)。

根據表6，將2ml玻璃瓶內混合各種緩衝劑的0.4ml之150mg/ml mAb1、10%蔗糖、0.2% polysorbate 20於約45℃保存約14天。於405nm的光學密度(OD)測定濁度以及比較起始原料於405nm之OD的相對變化。全部樣本可忽略其濁度差異。藉由反相HPLC(RP-HPLC)法測定總回收mAb1的百分比。藉由體積排阻HPLC(SE-HPLC)法測定天然和聚集mAb1的百分比。酸性或鹼性物質被定義為從陽離子交換(CEX-HPLC)管柱分別比主峰較早或較晚停留時間被透析的mAb1峰總量。示於"起始原料"表內的SE-HPLC結果為未受熱緊迫之各配製物的平均值。

實例4. 黏度和張力的控管

評估混合各種賦形劑與高濃度mAb1(即150mg/ml、175 mg/ml和200mg/ml)的黏度和張力(表示為莫耳滲透壓濃度)。調整蔗糖、氯化鈉和鹽酸L-精胺酸的含量以形成易於舒適和快速地高量皮下輸注mAb1之含高濃度mAb1的低黏度和生理等張配製物(表7)。含25mM精胺酸、20mM組胺酸、12.5mM醋酸鹽、5%(w/v)蔗糖、0.2%(w/v)polysorbate 20和150mg/ml mAb1之pH 5.9的液態配製物(配製物A)為具有低黏度(約8.5cPoise)和生理等張(約293mOsm/kg)同時仍維持mAb1穩定性的最佳配製物。

實例5. 配製物A的特性描述

形成mab1液態配製物過程中的主要降解徑路為產生聚集體、斷裂產物及電荷變異體。藉由配製mAb1於含有20mM組胺酸、12.5mM醋酸鹽、0.2% polysorbate 20、5%蔗糖和25mM鹽酸L-精胺酸之pH 5.9的配製物內可減少這些降解產物的形成。已發現這些經配製150mg/ml mAb1呈基本上無肉眼可見之顆粒的透明至微乳白色液態溶液。

該經配製mAb1於各種緊迫(25℃和45℃培養)及即時儲存條件(5℃)之下具有物理和化學安定性(表8)。該mAb1於25℃(3個月)或5℃被儲存6個月時不影響其外觀。此外，已發現不影響溶液pH、濁度或mAb1的回收量。經配製mAb1於25℃儲存3個月之後，以SE-HPLC測定的抗體無明顯地被降解及以CEX-HPLC測定的降解僅高出3.3%。已發現於 45℃儲存8週之後增加以SE-HPLC和CEX-HPLC測定的降解量而顯示形成聚集和電荷變異為該mAb1抗體分子的主要降解途徑。經配製mAb1抗體於5℃儲存6個月時未發現被降解。

根據表8，OD=光學密度；RP-HPLC=反相高效液相層析法； SE-HPLC=體積排阻高效液相層析法；以及CEX-HPLC=陽離子交換高效液相層析法。酸性或鹼性物質被定義為從陽離子交換(CEX-HPLC)管柱分別比主峰較早或較晚停留時間被透析的mAb1峰總量。

實例6. 容器

經過濾滅菌之含mAb1配製物已被測定證明具有穩定性。臨床供應上的製造係使用微孔MILLIPAK過濾裝置，同時研究室中係使用相同成分的過濾器(微孔Millex DURAPORE)。

以於pH 5.9之最少2.5ml的150mg/ml mAb1、5%(w/v)蔗 糖、25mM鹽酸L-精胺酸、0.2%(w/v)polysorbate 20、12.5mM醋酸鹽、20mM組胺酸充填入5ml玻璃瓶內。將0.5ml的超量配製物用於5ml瓶內以確保可抽出2.0ml的配製物。此過量並非用於補償mAb1或含mAb1配製物製造期間的損失、製造期間的降解、儲存期間(保存期限)的降解，或延長有效期。

與儲存於玻璃瓶內比較，當儲存於聚丙二醇管、聚苯乙烯管、 聚碳酸酯管，或於含不銹鋼塊的玻璃瓶內時該經配製mAb1(配製物A)的穩定性不受影響(表9)。

根據表9，將pH 5.9之150mg/ml mAb1、5%蔗糖、25mM 精胺酸鹽酸鹽、0.2% PS-20、20mM組胺酸、12.5mM醋酸鹽於40℃的各種材料內儲存14天。OD=光學密度；RP-HPLC=反相高效液相層析法；SE-HPLC=體積排阻高效液相層析法；以及CEX-HPLC=陽離子交換高效液相層析法。濁度記錄為於405nm之OD與起始原料比較的濁度差異。酸性或鹼性物質被定義為從CEX-HPLC管柱分別比主峰較早或較晚停留時間被透析的mAb1峰總量。

<110> Regeneron Pharmaceuticals,Inc.

<120> 含有抗-介白素-4受體(IL-4R)抗體之安定化配製物

<130> 6032

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<170> PatentIn version 3.5

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Claims (22)

1. 一種預填充針筒，其含有液態醫藥配製物，其中液態醫藥配製物包含：(a)100毫克/毫升至200毫克/毫升之特異性地結合人介白素-4受體α(hIL-4Rα)的抗體或其抗原結合片段，其中抗體包含重鏈可變區(HCVR)，其包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列；及輕鏈可變區(LCVR)，其包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)10mM至15mM之醋酸鹽；(c)15mM至25mM之組胺酸；(d)2.5%重量/體積至10%重量/體積之蔗糖；(e)0.1%重量/體積至0.3%重量/體積之聚山梨糖酸酯；以及(f)20mM至100mM之精胺酸；其中該液態醫藥配製物具5.6至6.2之pH。
2. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中針筒為正常鎢針筒。
3. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中針筒為低鎢針筒。
4. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中針筒包含經塗布之柱塞。
5. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中經塗布之活塞係以氟碳薄膜塗布。
6. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中針筒為低鎢針筒且其中針筒包含經塗布之柱塞。
7. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中在45℃下儲存8週後至少90%之抗體具天然構型。
8. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中在45℃下儲存8週後低於45%之抗體為酸性形式之抗體。
9. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中在5℃下儲存6個月後至少98%之抗體具天然構型。
10. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中在25℃下儲存6個月後少於4%之回收抗體為聚集的。
11. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中配製物包含175毫克/毫升之抗體。
12. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中配製物包含150毫克/毫升之抗體。
13. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中配製物包含100毫克/毫升之抗體。
14. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中聚山梨糖酸酯為聚山梨糖酸酯20。
15. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中聚山梨糖酸酯為聚山梨糖酸酯80。
16. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中聚山梨糖酸酯係以0.2%±0.03%重量/體積之濃度存在。
17. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中精胺酸係以25mM±3.75mM之濃度存在。
18. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中精胺酸係以50mM±7.5mM之濃度存在。
19. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中配製物包含：(a)150±50.0毫克/毫升之抗體；(b)12.5mM±2mM之醋酸鹽；(c)20mM±3mM之組胺酸；(d)5%±0.75%重量/體積之蔗糖；(e)0.2%重量/體積±0.03%重量/體積之聚山梨糖酸酯20；以及(f)25mM±3.75mM之精胺酸；其中該液態醫藥配製物具5.9±0.2之pH。
20. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中配製物包含：(a)150±50.0毫克/毫升之抗體；(b)12.5mM±2mM之醋酸鹽；(c)20mM±3mM之組胺酸；(d)5%±0.75%重量/體積之蔗糖；(e)0.2%重量/體積±0.03%重量/體積之聚山梨糖酸酯80；以及(f)25mM±3.75mM之精胺酸； 其中該液態醫藥配製物具5.9±0.2之pH。
21. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中配製物包含：(a)175毫克/毫升之抗體；(b)12.5mM±2mM之醋酸鹽；(c)20mM±3mM之組胺酸；(d)5%±0.75%重量/體積之蔗糖；(e)0.2%重量/體積±0.03%重量/體積之聚山梨糖酸酯20；以及(f)50mM±7.5mM之精胺酸；其中該液態醫藥配製物具5.9±0.2之pH。
22. 如申請專利範圍第1項之預填充針筒，其中配製物包含：(a)175毫克/毫升之抗體；(b)12.5mM±2mM之醋酸鹽；(c)20mM±3mM之組胺酸；(d)5%±0.75%重量/體積之蔗糖；(e)0.2%重量/體積±0.03%重量/體積之聚山梨糖酸酯80；以及(f)50mM±7.5mM之精胺酸；其中該液態醫藥配製物具5.9±0.2之pH。