TWI515005B - 在接受化療或放療的患者中應用富含半胱胺酸之乳清衍生蛋白以增進患者存活時間 - Google Patents

Description

在接受化療或放療的患者中應用富含半胱胺酸之乳清衍生蛋白以增進患者存活時間

本發明係有關於一種富含半胱胺酸蛋白質的配方及其在癌症患者治療中的應用，以提升患者存活率與生活品質。

此處參照了本說明書末所列的某些文獻，在此將這些文獻的整體內容納入參照。在本說明書中，以括號中的數字來指稱這些公開文獻。

對癌症患者而言，氧化壓力是磨難也是恩賜。氧化壓力在化學治療(化療)與放射線治療(放療)的腫瘤毒性效應中扮演了重要的角色，但也不經意地對患者本身的組織產生了顯著的副作用。證據顯示身體細胞質量的損失(癌症惡病質)在某種程度上是由異常發炎所致(13，15)，且和血漿氧化還原狀態中的氧化轉換(oxidative shift)高度相關，通常可由還原為氧化半胱胺酸的比例降低而推知上述氧化轉換(16)。

體重大量減輕通常會影響癌症患者的生活品質，且會提高罹病率與死亡率(5，10，18，25)。總體來說，藉由營養方面的調適來防止身體細胞質量流失的相關嘗試，都沒有令人滿意的結果(12，13，15，22，25，27)。然而，針對罹患不同種類癌症的初步研究顯示，利用麩胱甘胺酸(glutathione,GSH)前驅物N-乙醯基半胱胺酸可以反轉身體細胞質量的損失以及血漿氧化還原狀態中的氧化轉換(16)。然而，此一研究並未指出在存活率方面的功效。已知有數種氧化還原調控的訊息傳導路徑與異化反應有關(參考文獻11有回顧介紹)。

Gustavo Bounous等人先前曾揭露多種具有生物活性的未變性乳清蛋白質濃縮物與分離物，其可有效地用於促進組織的GSH濃度，且對於免疫反應、宿主對癌症治療的抗性、以及免疫強化都有效果。參見美國專利No. 5,230,902；5,290,571；5,451,412；5,456,924；及5,888,552；以及歐洲專利0374390與0375852，在此將上述專利納入作為參照。

更具體來說，Bounous等人先前揭示了抗癌治療組合物，其包含了乳清蛋白質濃縮物，其中增加細胞的GSH可保護目標細胞對抗致癌物的影響(U.S. 5,888,552)。此外，具體來說，顯示了乳清蛋白質濃縮物可用於治療癌症的方法中。在不限定於任何特定理論的前提下，發明人相信可用於GSH合成的受質的可用率增加(這是因為未變性乳清蛋白質可遞送麩醯基半胱胺酸，這是一種強力的半胱胺酸遞送系統)可能涉及了抑制所形成之癌細胞的複製。

然而，由於癌症化療與放療的腫瘤-細胞毒性效應通常與氧化壓力有關，相關領域提出了抗氧化治療可能干擾上述療法且可能因而加重死亡率的疑慮(參見9，4，24)。由於半胱胺酸是麩胱甘胺酸(GSH)的限制性生物合成前驅物，因此被期待可減緩氧化壓力。

利用放射性和/或化學治療藥劑來治療癌症，會在細胞中產生自由基，且此種療法依賴其氧化性的破壞作用來消除癌症細胞。抗氧化劑能夠保護正常細胞不受急性與長期自由基破壞，且可妨礙癌症治療的整體結果甚至會惡化死亡率(亦即，降低患者存活率)；因此相關領域對於此種抗氧化劑是否能夠對腫瘤細胞提供相同的保護存有疑慮且持保留態度(4)。

經過審慎研究，發明人意外地發現當利用大量的富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白來治療接受化療和/或放療的癌症患者時，能夠提升患者的存活率，並且還能改善其他指標，諸如反轉與癌症相關的體重減輕、反轉身體細胞質量的損失，改善手握力與生活品質、Karnofsky狀態、焦慮感、神經質與憂慮、食慾與憂鬱等問題。

確切地說，基於上述互相衝突的態樣，發明人確認了富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白配方不會干擾化療與放療的腫瘤-細胞毒性效應，且不會如某些人士所擔憂地對臨床結果產生負面效果，亦即，不會負面地影響存活率與增加死亡率。事實上，發明人發現在治療癌症患者時使用高-半胱胺酸未變性乳清衍生蛋白會導致患者存活率的增加。

因此，本發明的一態樣係有關於一種富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白及其配方，其可用於治療癌症患者，以提高患者存活率。

本發明的另一態樣係有關於一種富含半胱胺酸之乳清衍生蛋白的劑量，上述劑量範圍為每日約5至30克的蛋白質，較佳的範圍為約5-25克/日，更佳的範圍為約13-20克/日，且最佳為約13克/日。

本發明的另一態樣係有關於利用一種富含半胱胺酸之乳清衍生蛋白來治療癌症患者以及利用該蛋白質的治療方法，以提高患者存活率，並同時改善其他生活品質的指標，特別是用於治療接受化療、放療或上述兩種治療的患者中；以及利用該富含半胱胺酸的蛋白質來製備用於此種用途的配方或藥劑。

發明人確認了富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白及其配方能夠改善經歷化療與放療之患者的患者存活率。在安慰劑控制的雙盲臨床試驗中，以高半胱胺酸之乳清衍生蛋白質配方來取代酪蛋白。明確地說，發明人探討了是否能夠藉由高半胱胺酸乳清衍生蛋白配方(相較於酪蛋白)來改善癌症患者的患者存活率同時提升其他生活品質指標，諸如體重減輕與身體細胞質量的減少。酪蛋白是臨床上使用之腸內營養補充品中最主要的蛋白質基底，在相關試驗中使用酪蛋白是因為其中僅含有少量的半胱胺酸。由於半胱胺酸是GSH的限制性生物合成前驅物，據信能夠減緩氧化壓力。比起一般的乳清蛋白質，高半胱胺酸的乳清衍生蛋白經設計具有更高的半胱胺酸含量(參見表1)。

這兩種蛋白質的熱量與含氮量大至相等。必須在一般蛋白質攝取的架構下來比較這兩種蛋白質補充品。有部分結果指向罹患末期癌症的患者的蛋白質攝取較低，即便在使用商業可取得的營養補充品的患者中也有同樣的情形(14，17)。根據近來針對蛋白質需求的回顧文獻(20)，即便是在相同年齡的健康個體體內，這樣的蛋白質攝取量可能都不足以支持氮平衡。一些近來針對胰臟癌患者所進行的研究顯示，含有複雜蛋白質的補充品能夠提供適度的改善，但這些蛋白質各別的貢獻未明(1，2，14)。有鑑於癌症患者的在蛋白質攝取方面的營養不足，目前認為蛋白質的品質特別重要，這是因為無法藉由增加蛋白質攝取量來克服在組成物中一特定蛋白質的缺乏。

表1：富含半胱胺酸蛋白質(CysP)與對照組蛋白質(酪蛋白)的胺基酸組成。

患者招募、試驗概況、基線特徵與順從度

患者招募期間為2003年10月至2006年2月(附錄1-5)。一共募集了66名罹患肺癌的患者與22名罹患直腸癌的患者，並將這些患者隨機分派至兩個獨立試驗層中的群組。只有7名患者符合試驗計畫書所定「依計畫書」(per protocol,PP)規定，服用了最低75%的試驗用藥(參見附錄2)。因此，在本分析中涵蓋了所有交回藥罐並至少完成第二次看診的所有患者(稱為「可評估患者」)。

可評估直腸癌患者的試驗概況(第1圖)與基線資料顯示其並不相配，且樣本數過少因此不具統計意義。具體而言，平均年齡(63.6:±:10.1 VS. 41.7:±7.0歲)、基線TNF-α濃度(1.8±0.7 VS. 3.1±1.9pg/ml)、血漿麩醯胺酸濃度(592±129 VS. 461±100μM)以及ESAS 8(1.25±2.82 VS. 7.00±1.73)都與基線參數顯不相配。因而，此處僅討論來自肺癌患者試驗層的結果(表2)。服用酪蛋白或富含半胱胺酸蛋白質的35名可評估肺癌患者的平均順從度分別為44±34%以及42±29%，這意味著患者平均服用了約13克/日的任一種蛋白質。此處所稱的蛋白質係指純蛋白質，並未添加任何添加劑。

*資料±標準差(S.D.)係以至少完成第二次看診的患者計。括號中的資料係指全部隨機分組患者的資料。所有群組主要係由高加索人種(>85%)所組成。(C-反應性protein，C-反應性蛋白質)資料僅來自15名以酪蛋白治療以及16名以IMN1207(CysP)治療之患者。資料係來自15名以酪蛋白治療以及17名以IMN1207(CysP)治療之患者。^§資料係來自16名以酪蛋白治療之患者。

習知技藝人士皆可理解乳清蛋白質的意義以及此類蛋白質的取得來源，相關內容可參照上述Bounous等人的專利，且該專利亦提出了生產未變性乳清蛋白質、分離物與濃縮物的標準技術。

舉例來說，根據目前廣泛使用的標準程序，通常可利用超過濾技術或離子交換層析法來分離與純化乳清蛋白質、蛋白質片段及胜肽。可利用所屬技術領域中具有通常知識者所知的標準技術來取得本申請案所述的富含半胱胺酸蛋白質，上述標準技術可以用來製備未變性的乳清蛋白質(如Glanbia、Davisco)。可將具有不同半胱胺酸內容物的乳清蛋白質、分離物以及胜肽與蛋白質片段混合，以得到本申請案所述的半胱胺酸內容物。一旦得到此種內容物之後，可利用習知技藝人士所知的方式將這些乳清蛋白質濃縮物、分離物、胜肽、蛋白質片段與其混合物的配方製成適當的配方，同樣地可參照上述Bounous等人的專利。

通常會利用放療與化療來治療患者癌症。習知技藝人士都可理解這些治療方法，(參見如，參考文獻(4))。在本研究中，單獨或配合使用的化療藥物有：CARBOPLATIN、CISPLATIN、OXALIPLATIN、GEMCITABINE、CAPECITABINE、TAXOTERE、ETOPOSIDE、LEUCOVORINE、IRINOTECAN、5-FLUOROURACIL以及環磷酸醯胺。

富含半胱胺酸蛋白質對於接受化療和/或放療之患者存活率的正面影響

在隨機分組的66名肺癌患者與22名直腸癌患者中，有25名與36名肺癌患者以及8名與15名直腸癌患者在試驗過程中因為疾病相關的原因而分別在6個月與12個月內死亡(參見第1圖)。就所有癌症群組之兩個治療分支來看，兩者的Kaplan-Meier存活率曲線(參見附錄8)並沒有差別(第2A圖)，然而針對35名可評估患者的兩個治療分支來看(第2B圖)，兩者間就有區別(p=0.024；95%危險比，0.067至0.916)。約80%之經富含半胱胺酸蛋白質治療的患者以及小於50%之對照組患者存活超過12個月。接受化療和/或放療之之肺癌患者(n=28)的存活率(第2C圖)亦顯示出在富含半胱胺酸蛋白質的群組中有正向的趨勢(p=0.058)。

相較於接受酪蛋白治療的患者，可以發現到完成了6個月看診週期且接受富含半胱胺酸蛋白質的患者其身體細胞質量與手握力明顯較高(參見附錄7)且其身體功能狀態(Karnofsky status)相較於基線值(表3)亦呈現正向的趨勢(p=0.09)。然而，二治療分支的身體功能狀態卻未呈現出明顯的區別，這可能是因為存活患者的樣本數較少的關係。

有鑑於患者的狀況不佳，且因為死亡或其他原因不能持續而使得受試患者人數不斷減少，因此分析所有「可評估患者」(共計35名)似乎是合適的作法。此一分析顯示，在開始治療後第六週，接受酪蛋白治療以及接受富含半胱胺酸蛋白質治療的兩個群組間，平均體重的改變就出現顯著的不同(分別為-1.21±3.90%(n=17)以及+1.36±2.94%(n=18)；p=0.038)。為了闡明在試驗期間中，表3的中間與右方欄位中分別呈現了基線與根據最後觀察值推估(Last-observation-carried forward,LOCF)法(參見附錄8)所得的最後觀察數值間的改變以及在第6週、第3個月與第6個月(或最後觀察)觀察到的改變的平均值。在整個觀察期間中，都可以發現到不同治療群組間體重的改變明顯不同(表3)。在接受富含半胱胺酸之蛋白質治療的群組中，患者身體細胞質量的改變亦與對照組不同(p=0.01)，且亦與基線值不同(p=0.02)。然而，身體細胞質量的資料較不精確，這是因為其標準差較大，且因而只能將其視為支撐性的證據。

*資料顯示在第6個月看診測得之數值的平均值±S.D.，信賴區間(Confidence intervals,C.I.)為95%。

少完成兩次看診的患者在觀察其結束後的測量值。

一病患三個數值的平均值，上述三個數值即在第6週、第3個月與第6個月測得之數值。

粗體資料表示具有統計學上的顯著性。

^§不同群組間的差異P=0.049。

^∥不同群組間的差異P=0.036。

^**與基線的差異P=0.015。

用Kruskal-Wallis檢驗，不同群組間的差異P=0.010。

基線的差異P=0.022。

^§§利用Kruskal-Wallis檢驗，不同群組間的差異P=0.005。

^∥∥與基線的差異P=0.0019。

^***與基線的差異P=0.089。

兩個治療分支的結果顯示，在實驗室終點(laboratory end point)時兩分支的改變沒有顯著的差異，包括C反應性蛋白質、TNF-α、IL-6、及白蛋白濃度(資料未顯示)。在以富含半胱胺酸蛋白質治療的患者中，麩胱甘胺酸(-58.9±242.7 vs.±110.7±300.7μM)(參見附錄7)與血漿半胱胺酸(+9.8±23.5 vs.±34.8:':150A}-LM)的改變呈現了較高的數值，但此種差異並非統計上的顯著差異。較高的標準差顯示出這些資料並非非常精確。

對生活品質改變之影響(參見附錄6)

在死亡之前，某些生活品質參數會在短時間內顯著惡化，這些參數包括手握力、身體功能狀態、緊張與焦慮的感覺(McGill QOLC2)以及食慾與憂鬱(ESAS)(參見附錄6)，而由6名患者組成的次群組的觀察資料顯示，在死亡前17天之內會呈現出這些測量結果。不論治療群組為何，與另外29名患者相較之下，上述6名患者的身體功能指數以及另外三種生活品質參數(感到緊張與焦慮、感覺不舒服與憂鬱)大幅降低且具有統計上的顯著性(p<0.05)。在其餘29名患者(這些人構成了族群中的大多數，且其中有2名患者的最後資料分別是在死亡前41天與56天收集到的資料)中，以富含半胱胺酸蛋白質治療的群組的所有上述參數都呈現出了顯著的改善(與基線值相較之下)；另一方面，以酪蛋白治療的群組則未顯示明顯的改善(表4)。此外，在其他McGill或ESAS參數中則未呈現顯著的改變(資料未顯示)。在瀕臨死亡的患者的綜合治療分支以及其餘患者的綜合治療分支之間，可以發現其身體功能狀態、緊張與焦慮感、不舒服與憂鬱程度(未顯示)都有顯著的差異。第17天與第41天之間的截點是任意選擇的時間點。

CysP=富含半胱胺酸蛋白質

^*主觀上對於身體、情緒、社交、精神與經濟上是否滿意的感覺

來自15名患者的McGill QOL及ESAS資料關於McGill QOL與ESAS參數的詳細資訊請參見參考文獻23-25。

粗體資料表示具有統計學上的顯著性。

^§不同群組間的差異P=0.064

^∥與基線的差異P=0.044

^**與基線的差異P=0.056

基線的差異P=0.033

基線的差異P=0.105

^§§與基線的差異P=0.008

^∥∥與基線的差異P=0.042

疾病活動度的臨床評估

在兩個治療群組間，所紀錄到的疾病活動度(疾病的進展、穩定或退化)改變並未呈顯顯著差異。

副作用

在分配至富含半胱胺酸蛋白質治療組別的33名肺癌患者中，有4名患者抱怨可能與蛋白質有關的情形(即，一名患者感到中等程度的噁心；一名患者感到中度噁心加上腹部不適；一名患者出現輕微的嘔吐；以及一名患者感到口腔黏膜感乾燥。一名患者抱怨噁心的程度輕微賞升，這可能和蛋白質有關)。在分配至富含半胱胺酸蛋白質治療組別的直腸癌患者中，一名患者出現嚴重的嘔度、中度腹瀉以及中度噁心，這些症狀可能都和蛋白質有關。在分配至酪蛋白治療組別的33名肺癌患者中，有一名患者出現輕微的噁心，這可能與蛋白質有關；且有三名患者出現了可能與蛋白質有關的情形(即，一名患者出現輕微的暫時嘔吐；以及各有一名患者出現了輕微與中度的便秘)。在分配至酪蛋白治療組別的直腸癌患者中，一名患者出現輕微的噁心，此一症狀絕對與蛋白質有關；以及一名患者出現輕微的便秘，這可能與蛋白質有關。

相關結果顯示，再接受化療、放療或上述兩種治療的非小細胞肺癌患者中，其存活率並未因為補充了富含半胱胺酸的蛋白質而降低。事實上，結果顯示，藉由補充由未變性乳清蛋白衍生之富含半胱胺酸蛋白質可以提高患者的存活率。因此，相關結果不但降低了對於利用某些抗氧化物進行治療時可能干擾化療與放療之腫瘤-細胞毒性效應且因此可能提高死亡率的疑慮(參見參考文獻4，9，24)；同時亦降低了某些營養配方可能促進腫瘤生長的疑慮。

相關資料(包括患者順從度與統計分析的相關考量)顯示以約5至30克/日的富含半胱胺酸蛋白質進行治療，就足以增加患者存活率，且尚可反轉非小細胞肺癌患者中與癌症相關的體重減輕與身體細胞質量降低。雖然根據患者所服用的量計算出來的平均患者服用量為約13克/日，實際上施用的劑量範圍應為約5至30克/日，較佳為約5至25克/日，更佳為約13-20克/日，且最佳為13克/日，以達改善接受化療或放療之癌症患者的存活率之效。上述效果又意外地與肌肉力量與某些生活品質參數的改善相關，此係在排除了死亡前短時間內所收集的數據後所做出的結論。由於麩胱甘胺酸及半胱胺酸的數據並未產生統計上的顯著差異，相關試驗所產生的數據無法證實「體重減輕可能主要與半胱胺酸與麩胱甘胺酸有關」此一試驗假設。所得到的可用資料並未排除半胱胺酸以外的其他胺基酸或富含半胱胺酸蛋白質的其他性質(例如可消化性)等(亦)可能對於所觀察到的效果有所貢獻。然而，在先前的研究中觀察到其他半胱胺酸衍生物可以增加身體細胞質量(16，20)，且本研究中所用的兩種蛋白質最主要的差異為半胱胺酸內容物，上述事實可以支持半胱胺酸在其中扮演了重要的角色。乳清衍生蛋白經特殊設計而具有較高的半胱胺酸內容物(相較於正常乳清蛋白質)，且半胱胺酸不僅是蛋白質的生物合成前驅物，也是細胞抗氧化物-麩胱甘胺酸的生物合成前驅物。已知在老年人與癌症患者中身體細胞質量降低與血漿氧化還原狀態中的氧化轉換有關(16)，且在異化反應中涉及了某些氧化還原敏感的訊息傳導路徑(參考文獻11有回顧介紹)；上述事實亦可支持麩胱甘胺酸在這些消耗性反應中的角色。這些事實可連結本試驗中兩種蛋白質的不同效應，以建立分子機制。試驗結果確認了假設的重要預測。已知氧化壓力亦涉及了化療與放療的副作用(4，9，19，23)。放療後的血漿麩胱甘胺酸與患者頭部與頸部的鱗狀細胞癌有關(3)。然而，試驗資料清楚地顯示讓患者補充富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白不會干擾化療與放療的腫瘤-細胞毒性效應而增加死亡率；且事實上會導致患者存活率增加。

相較於酪蛋白，富含半胱胺酸蛋白質的較佳效果對於這些患者非常重要，這是因為患者通常很快感到飽足因而使得他們無法實用更多的蛋白質。在兩個治療群組中，平均順從度小於50%，這可對應至約13克蛋白質/日。這也呼應了癌症患者的飲食蛋白質攝取量通常較低(14，21)。

本研究亦顯示在罹患晚期非小細胞肺癌的患者中，富含半胱胺酸蛋白質能夠有效地支持體種的增加以及身體細胞質量的增加。除了瀕臨死亡的患者之外，其他患者的肌肉功能與數種生活品質參數亦見提升。由這些資料可以看出，如果將瀕臨死亡的患者的資料與在整個或大多數試驗期間中存活的患者的資料混合在一起，就會忽略了治療方式可能產生的功效。

縮寫

CRP：C-反應性蛋白質(C-reactive protein)；EPO：紅血球生成素(erythropoietin)；ESAS：艾氏症狀評估量表(Edmonton symptom Assessment Scale)；HR：風險比(hazard ratios)；LOCF：最後觀察值推估(last observation carried forward)；PP：依計畫書(per protocol)；QOL：生活品質(quality of life)；TNF-α：腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α)。

附錄：患者與方法

1.試驗設計

此一多中心、隨機的雙盲第二期試驗(加拿大健康部Health Canada編號085608)經設計以評估富含半胱胺酸蛋白質分離物IMN 1207(Immunotec Research Ltd.,Vaudreuil,QC,Canada)在防止兩種患者(即，分別罹患轉移性直腸癌或第3B(IIIB)期至第4(IV)期非小細胞肺癌六個月以上的患者)的消耗性反應的有效性與安全性。試驗治療係透過經口施用富含半胱胺酸蛋白質或另一種蛋白質(酪蛋白)來取代安慰劑。參加者在試驗一開始與第三個月回診時分別拿到7個容量為400克罐子，內裝有粉末狀的藥物。受試者亦會收到一個10克的藥匙、振動器、混合器與用藥指引，以便每日服用三匙(3 X 10g)的藥物。

試驗用藥與用以治療其所罹患的癌症類型與期別的標準治療方法一同施用。

2.試驗用藥

利用胺基酸分析儀來決定富含半胱胺酸之蛋白質與控制組蛋白質的胺基酸組成(表1)。

由Immunotec Research,Ltd.與Well Spring Pharmaceutical Corporation(Canada)合作來製備富含半胱胺酸蛋白質及酪蛋白，並進行產品的標示、包裝、安定性測試與輸送。產品符合加拿大健康部的所有安定性測試規範。

3.採計與排除的類別

採計的資料來自轉移性直腸癌或非小細胞肺癌患者，並將其分為兩個試驗層。本說明書中僅呈現了肺癌患者的試驗結果。採計的資料來自年齡21歲以上的患者，且在參與試驗之前的三個月中，體重非自願性地減輕了大於3%的比例；身體功能狀態為；0:70%；期待壽命大於3個月；血清肌酸酐小於3.0mg/dl或265/LM；膽紅素屬於正常範圍；以及SGPT/ALT小於正常值上限的6倍，且對於有可能懷孕的婦女需採用可靠的避孕法。排除的患者具有血管性水腫(angioedema)的病史、對於試驗中所用的任何物質有過敏反應、不受控制的轉移性腦瘤、乳蛋白不耐症、腹水、水腫、明顯貧血、或正在服用N-乙醯基半胱胺酸、類脂酸(-lipoic acid)、或乾燥乳清蛋白補充品者。

4.樣本大小的決定

根據歷史資料，預期對照組的患者在3個月的時期中平均體重會減輕4%，標準差為4%。當a=0.05，樣本大小為2 X 30名患者時，可望有80%的機會能夠在兩個治療群組間偵測到假設性的3%的差異。

5.招募、隨機分組與評估

由GEREQ(Montreal,Quebec)來進行患者的隨機分組與資料管理。由Canreg,Inc.(Dundas,Ontario)來進行資料監控與訪視(site visit)。在臨床試驗中心(即Department of Oncology at McGill University,Montreal；Cross Cancer Institute,Edmonton;Juravinski Cancer Center,Hamilton;and Allan Blair Cancer Center,Regina)進行患者的招募並篩選其是否合格。在不隸屬於中心的獨立生物統計公司(GEREQ)，將患者分別分群為罹患肺癌與直腸癌的兩個試驗層，並將其隨機分組到兩個治療分支。將盲法編碼(blinding code)保存在統計者的辦公室。在試驗處所，經過隨機分組的患者會在治療開始前(第0週)、第6週、第3個月與第6個月進行臨床檢查。在上述時間點，會採集額外的血液與尿液樣本以進行實驗室檢驗，並會決定患者的身體功能狀態、生活品質(QOL)、症狀與食慾(8)還有ESAS(6，7)，以及手握力強度，並會進行CT掃瞄或MRI以作為患者之癌症療程的一部份。所進行的實驗室檢驗包括了血液概況、臨床生物化學、生物標記、尿液分析以及懷孕測試(僅針對女性)。將這些資料記錄於試驗處所。順從度係取決於對於試驗用藥的攝取，可藉由量稱患者交回的藥罐重量來決定。透過不舒服的副作用(包括死亡)之資料的中心收集來持續監控安全性。

6.初級與次級終點

初級終點(primary end point)為在經過六個月的期間後，體重的相對改變(%)與身體細胞質量的絕對改變。

次級終點(secondary end point)包括利用手握動力學所進行的力量評估。身體功能狀態。以McGill QOL為基礎進行的生活品質評估(8)，以及以艾氏症狀評估量表(ESAS)為基礎進行的症狀負荷(symptom burden)(6，7)、死亡率、紅血球細胞中麩胱甘胺酸的改變、半胱胺酸、紅血球生成素(EPO)、介白素6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)與C-反應性蛋白質(CRP)的血漿濃度、以及疾病活動度(疾病的進展、穩定或退化)。

7.身體細胞質量與血液參數的決定

利用生物電阻分析(Biodynamics，型號Model 450，Seattle,WA)來決定身體細胞質量(16)。在分析前8小時內，要求患者僅能飲用400毫升的水且不能進食。在試驗處所直接進行臨床評估與某些實驗室檢驗(包括C-反應性蛋白質，CRP)。在Clinical Research and Clinical Trials Laboratory(Hamilton,Ontario,Canada)集中進行血漿胺基酸、EPO、IL-6與TNF-α的分析。利用胺基酸分析儀來決定游離血漿胺基酸包括半胱胺酸。由Immunosciences Lab.,Inc.(Beverly Hills,CA,U.S.A.)利用商業畫的試驗套組BIOXYTECH R GSH-420 TM(型錄編號21023)來評估麩胱甘胺酸。

將0.5毫升的血液樣本在4℃下以2,500g的速率離心5分鐘以得到紅血球細胞。在移除了血漿之後，利用冷的生理食鹽水沖洗細胞3次，重新懸浮於4被容積的冷水中，並徹底進行渦漩處理(vortexed)。之後在微離心管中將容積0.1毫升的溶解物(lysate)與0.3毫升的「沈澱劑」(aqueous solution of trichloroacetic acid)混合，進行至少15秒的渦漩處理，之後在室溫下以10,000g的速率離心5分鐘。

將所得到的上清液(容積約0.2毫升)與0.2毫升的緩衝液(pH 7.8，包含potassium phosphate/diethylene triaminepentaacetic acid/lubrol，即磷酸鉀/二乙三胺五乙酸/乙二醇月桂酸酯)以及0.2毫升的還原劑([tris(2-carboxyethyl)phosphine in HCl]，即三(2-羰基乙基)膦的鹽酸溶液)均勻混合。於加入0.2毫升的色素原(1-methyl-4-chloro-7trifluoromethylquinolinium methylsulfate in HCl，即硫酸甲酯1-甲基-4-氯-7三氟甲基喹啉的鹽酸溶液)之後，再度將溶液混合均勻，接著和0.2毫升的顯色劑(氫氧化鈉水溶液)混合。在暗室中於室溫下培育30分鐘之後，測量其在420nm下的吸收光譜。

8.統計分析

由獨立的統計公司(Boreal Primum,Montreal,Quebec)來進行統計分析。兩個試驗層(疾病部位)的資料分別分析，並表示成平均值±標準差(SD)。藉由與對照組(對自變數進行雙邊r檢定，除非另有其他說明)以及相對應基線值(對於應變數進行t檢定)的比較，利用統計學的方法來評估治療效果。對於治療群組間的比較係以完成至少兩次到診的患者之第6個月或最後觀察值推估法所得的資料為基礎。存活率曲線係利用治療用的Kaplan-Meier估計值所繪製，並與時序檢驗(log-rank test)的結果進行比較。利用Cox比例-風險模型來估算風險比(HR)。由p值來評斷結果。p值小於<0.05者具有統計上的顯著性。

雖然上文參照附隨圖式揭露了本發明的特定較佳具體實施例，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易想見，本發明不限於這些精確的具體實施例，且本發明所屬技術領域中具有通常知識者可在不悖離附隨申請專利範圍中界定的本發明之精神與範圍的情形下，對其進行多種修飾與修改。

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第1圖呈現了酪蛋白治療群組與富含半胱胺酸蛋白質治療群組的試驗概況。

第2圖呈現了肺癌患者的Kaplan-Meier存活率曲線。於第2圖中，實線：酪蛋白群組；虛線：富含半胱胺酸之蛋白質群組。群組(a)為試驗所招募的全部66名肺 癌患者；群組(b)為35名可評估的肺癌患者(p=0.024)；群組(c)為28名可評估且接受了化療或放療或上述兩種治療的患者(p=0.058)。

Claims (8)

1. 一種半胱胺酸含量較天然的乳清蛋白的半胱胺酸含量高之富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白(whey derived protein)，其可和化療、放療或上述兩種治療合用以提高非小細胞肺癌患者存活率。
2. 如申請專利範圍第1項所述的半胱胺酸含量較天然的乳清蛋白的半胱胺酸含量高之富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白，至少包含每公斤0.5莫耳的半胱胺酸。
3. 如申請專利範圍第1項所述的半胱胺酸含量較天然的乳清蛋白的半胱胺酸含量高之富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白，其係以約5至30克的劑量每日施用。
4. 如申請專利範圍第3項所述的半胱胺酸含量較天然的乳清蛋白的半胱胺酸含量高之富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白，其係以約5至25克的劑量每日施用。
5. 如申請專利範圍第4項所述的半胱胺酸含量較天然的乳清蛋白的半胱胺酸含量高之富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白，其係以約13至20克的劑量每日施用。
6. 如申請專利範圍第5項所述的半胱胺酸含量較天然的乳清蛋白的半胱胺酸含量高之富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白，其係以約13克的劑量每日施用。
7. 一種半胱胺酸含量較天然的乳清蛋白的半胱胺酸含量高之富含半胱胺酸之未變性乳清衍生蛋白之用於製造一藥劑的應用，該藥劑可用於治療一非小細胞肺癌患者以提高接受化療、放療或上述兩種治療之一非小細胞肺癌患者的存活率。
8. 如申請專利範圍第7項所述的應用，其中該蛋白質係以約5至30克/日的劑量施用。