TWI498564B - 用以評估腫瘤增生、侵犯或轉移風險之生物標記及方法 - Google Patents

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Description

用以評估腫瘤增生、侵犯或轉移風險之生物標記及方法
本發明係關於一種用以評估腫瘤增生、侵犯或轉移風險之生物標記及使用此生物標記評估之方法，尤指一種可早期評估腫瘤增生、侵犯或轉移風險之生物標記及使用此生物標記評估之方法。
近年研究發現，食物或食物添加劑、及環境污染均會直接導致癌症產生。不僅僅在台灣，世界各國之發展中國家之癌症發生率亦逐漸提升。此外，依照美國癌症協會公開資料顯示，癌症可視為對人類健康造成嚴重威脅的因素之一。
若可早期偵測到腫瘤增生、侵犯或轉移，則可大幅提升癌症病患之存活率。因此，各種研究均試圖找出一種可早期分析或預測癌症之方法。近年來，隨著基因檢測及蛋白質體學之發展，目前已發展出多種可用以分析或預測癌症之生物標記，如甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)、T細胞侵犯和轉移蛋白1(T-cell lymphoma invasion and metastasis 1,TIAM1)、及神經型鈣粘素(n-cadherin)。
然而，上述之生物標記仍有其應用上的限制。例如，AFP為一種用於診斷肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)之有效血清標記，但卻有40%之偽陰性。此外，神經型鈣粘素基因表現增加僅與術後癌症發生有關，且僅可於63.8%的肝癌病患中觀察到TIAM1過量表現。另一方面，由於這些蛋白質亦表現在正常肝臟組織中，故不易判定這些蛋白之病理上的過量表現。因此，目前仍需要提供一種生物標記及使用其之評估方法，以提升評估腫瘤增生、侵犯或轉移之風險準確性。
此外，肝癌為全世界前五大常見癌症之一，尤以亞洲及非洲更為盛行。儘管引發肝癌之病因相當廣泛，其中之一明顯的病癥為癌細胞早期血管侵入及轉移。若可早期判斷出肝癌增生及侵入/轉移，則可大幅降低肝癌發生率及死亡率。因此。目前亦須提供一種生物標記及使用其之評估方法，其可準確的評估肝癌腫瘤細胞增生、侵犯或轉移之風險。
本發明之主要目的係在提供一種用以評估腫瘤增生、侵犯、或轉移風險之方法，透過本發明之方法可準確評估腫瘤增生、侵入、或轉移之風險。
本發明之另一目的係在提供一種用以評估腫瘤增生、侵犯、或轉移風險之生物標記，透過此生物標記可判斷待測腫瘤區域是否為腫瘤組織。
為達成上述目的，本發明係提供一種用以評估腫瘤增生、侵犯、或轉移風險之方法，包括下列步驟：(A)提供一用以評估腫瘤增生、侵犯、或轉移風險之組織樣品，其中組織樣品係包括：一非腫瘤區域、及一待測腫瘤區域，且組織樣品係為一選自由肝臟組織、乳房組織、胰臟組織、腦組織、胸腺組織、前列腺組織、大腸組織、或其他固態組織所組成之群組之組織樣品；(B)分別偵測非腫瘤區域、及待測腫瘤區域中一生物標記、及一內標準標記之表現量，其中生物標記係為T細胞侵犯和轉移蛋白2；以及(C)透過下列式(I)，比較生物標記及內標準標記於非腫瘤區域及待測腫瘤區域中之表現量：
[式(I)]
數值=(待測腫瘤區域中之生物標記之表現量/待測腫瘤區域中之內標準標記之表現量)-(非腫瘤區域中之生物標記之表現量/非腫瘤區域中之內標準標記之表現量)
其中，當數值為正值時，表示具有肝癌、乳癌、胸腺癌、前列腺癌、大腸癌、胰臟癌、或其他固態癌之腫瘤增生、侵犯、或轉移風險；且當數值為負值時，表示具有腦癌之腫瘤增生、侵犯、或轉移風險。
此外，本發明亦提供一種用以評估腫瘤增生、侵犯、或轉移風險之生物標記，其係選自由T細胞侵犯和轉移蛋白2(T-cell lymphoma invasion and metastasis 1,TIAM2)之核苷酸鏈、互補核苷酸鏈、核苷酸鏈衍生物、蛋白質、蛋白質衍生物、蛋白質之肽鏈、及突變蛋白質所組成之群組。
於本發明之方法中，係使用TIAM2蛋白作為生物標記。
當使用本發明之方法評估一受試者是否有腫瘤增生、侵犯、或轉移風險時，可大幅提升預測準確率。此外，本發明亦提供一種新穎的生物標記TIAM2，其特別顯著表現在腫瘤細胞中。因此，當使用本發明之生物標記評估腫瘤增生、侵犯、或轉移風險時，可大幅提升預測準確率。特別是，相較於習知生物標記及方法，本發明之生物標記及方法更可評估固態瘤之侵入或轉移之風險。據此，本發明之生物標記及方法可於早期預測固態瘤之嚴重性，故醫療人員可對患者進行有效的治療，以延緩腫瘤細胞侵入或轉移至血管。
於本發明之方法中，非腫瘤區域係指正常組織區域。較佳為，非腫瘤區域係為待測腫瘤區域周圍的組織。此外，於本發明中，「風險」係指待測腫瘤區域中細胞可能為腫瘤細胞之可能性，或受試者罹患癌症之可能性。此外，當所計算出之數值為正值時，表示待測腫瘤區域為癌細胞區域，即腫瘤組織區域，而受試者會面臨腫瘤增生、侵犯、或轉移之風險。再者，本發明之方法除了可用以預測腫瘤增生外，更可預測腫瘤侵犯或轉移。當所計算出之數值為正值/負值時，表示腫瘤細胞可能容易侵犯或轉移至血管中；而侵犯或轉移的腫瘤細胞可能會導致癌症病症更加嚴重，且發展出轉移性癌症。
此外，於本發明之生物標記及方法中，TIAM2可為T細胞侵犯和轉移蛋白2短型(T-cell lymphoma invasion and metastasis 2 short form,TIAM2S)、或T細胞侵犯和轉移蛋白2長型(T-cell lymphoma invasion and metastasis 2 long form,TIAM2L)。較佳為，TIAM2為TIAM2S。再者，於本發明之生物標記及方法中，TIAM2之核苷酸鏈序列為SEQ ID NO: 1；TIAM2S之表現核苷酸鏈序列為SEQ ID NO: 2；而TIAM2S之蛋白質序列為SEQ ID NO: 3。。
於本發明之生物標記及方法中，腫瘤可為肝癌腫瘤、乳癌腫瘤、胰臟癌腫瘤、腦癌腫瘤、胸腺癌腫瘤、前列腺腫瘤、大腸癌腫瘤、或其他固態癌症腫瘤。較佳為，腫瘤係肝癌腫瘤。
此外，於本發明之生物標記及方法中，組織樣品可為任一待測組織結節。例如，組織樣品可為肝臟、乳房、胰臟、腦、胸腺、前列腺、大腸直腸、或其他組織之組織結節。較佳為，組織結節係為肝結節。
再者，於本發明之生物標記及方法中，表現量為蛋白質表現量。
當表現量為蛋白質表現量時，可透過任一習知蛋白質表現分析法進行偵測。較佳為，本發明之方法係透過西方墨點法、凝膠電泳法、酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)、免疫組織化學法(IHC)、免疫沉澱法(IP)、或質譜分析法(MS)偵測蛋白質表現量。更佳為，本發明之方法係透過西方墨點法偵測蛋白質表現量。此外，於本發明之評估方法中，內標準標記可為α-微管蛋白(α-tubulin)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、或β-肌動蛋白(β-actin)。較佳為，內標準標記為α-微管蛋白、或β-肌動蛋白。更佳為，內標準標記為α-微管蛋白。
當表現量為mRNA表現量時，可透過任一習知RNA表現分析法進行偵測。較佳為，mRNA表現量可透過定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應(quantitative real-time reverse transcription PCR)、或反轉錄聚合酶連鎖反應(reverse transcription PCR)偵測mRNA表現量。更佳為，mRNA表現量係透過定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應進行偵測。此外，分析mRNA表現量時，可使用18S rRNA、α-微管蛋白mRNA、甘油醛-3-磷酸脫氫酶mRNA、或β-肌動蛋白mRNA作為內標準標記。更佳為，係使用18S rRNA作為內標準標記。
接下來將伴隨圖式，詳細描述本發明之其他目的、優點及特徵。
以下係藉由特定的具體實施例說明本發明之實施方式，熟習此技藝之人士可由本說明書所揭示之內容輕易地了解本發明之其他優點與功效。本發明亦可藉由其他不同的具體實施例加以施行或應用，本說明書中的各項細節亦可針對不同觀點與應用，在不悖離本創作之精神下進行各種修飾與變更。
以半定量RT-PCR及西方墨點法鑑定正常組織與腫瘤組織中內生性TIAM2S表現量
在此，係使用由Clontech(Palo Alto,CA)及Biochain(Hayward,CA)購得之不同人類組織之cDNA樣本盤，樣本盤內包括正常大腦組織、大腦腫瘤組織、正常肝組織、肝腫瘤組織、正常胸腺組織、胸腺腫瘤組織、正常乳房組織、乳癌腫瘤組織、正常前列腺組織、前列腺腫瘤組織、正常胰臟組織、胰臟癌腫瘤組織、正常大腸組織、及大腸癌腫瘤組織。使用TIAM2S專一性PCR引子放大TIAM2S。PCR反應參數如下：先於95℃加熱5分鐘，再進行放大反應共30週期(於95℃下進行30秒、64℃下進行20秒、及72℃下進行20秒)，最後再於72℃延長反應10分鐘。以8%丙醯胺(acrylamide)膠體分離PCR產物。使用Alphaimage 1200(Alpha Innotech Corporation,San Leandro,CA)，利用點密度函數(spot density function)，由每一PCR產物測量TIAM2S於不同組織之相對表現量，並以1 Kb之DNA標記(Invitrogen)中200 bp帶之密度作為標準。每一組織中mRNA表現結果係如圖1所示。此外，亦由Biochain(Hayward,CA)購得正常人類組織總體蛋白，包括正常大腦組織、正常肝組織、正常胸腺組織、正常乳房組織、正常前列腺組織、正常胰臟組織、及正常大腸組織。此外，於用以進行西方墨點測試之抗體中，兔子抗-α-微管蛋白抗體係購自Cell Signaling Technology(MA,USA)，而山羊抗-TIAM2S抗體則購自Santa Cruz Biotech(CA,USA)。
西方墨點測試係以下述方式進行。首先，將30 μg蛋白質注入置於Tris-甘胺酸緩衝溶液(10 mM Tris,50 mM glycine,0.1% SDS,pH 8.0)中之6% SDS-PAGE，並以電泳進行分離。而後，將SDS-PAGE上之蛋白質轉漬至PVDF膜上，並以含有5%無脂牛奶之TBST(10 mM Tris-HCl,pH7.5,150 mM NaCl,and 0.05% Tween 20)封填膜至少1小時，再以一級TIAM2S抗體反應隔夜。以TBST清洗膜4次，再以辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)-共軛鍵結之二級抗體反應2小時。於清洗後，以增強化學發光系統(ECL system)(PerkinElmer Life Science,Waltham,MA)偵測膜上訊號。於西方墨點測試中，α-微管蛋白係作為一控制組，以分析TIAM2S蛋白總量。
如圖1所示，於肝腫瘤組織、乳癌腫瘤組織、及胰臟癌腫瘤組織中可觀察到TIAM2S之mRNA表現。然而，並未於正常肝組織、正常乳房組織、及正常胰臟組織中觀察到TIAM2S之mRNA表現。反之，於正常大腦組織、正常胸腺組織、正常前列腺組織、及正常大腸組織中可觀察到TIAM2S之mRNA表現，但於大腦腫瘤組織、胸腺腫瘤組織、前列腺腫瘤組織、及大腸癌腫瘤組織則未觀察到TIAM2S之mRNA表現。再者，僅正常大腦組織觀察到大量TIAM2S蛋白質表現，此結果表示TIAM2S蛋白質表現可能受到特殊轉譯調節所控制。上述結果顯示，TIAM2S於許多固態腫瘤中均可觀察到異常mRNA表現，表示TIAM2S係為一種潛在與腫瘤相關之基因；而相較於TIAM2S之mRNA，此基因產物，即TIAM2S蛋白質更可適用於做為一生物標記。
收集肝癌組織樣品
以手術方式，由肝癌病人身上(病人年齡介於13至85歲，且平均年齡為57.9±15.6)收集共88組(腫瘤區域與非腫瘤區域)、及3組轉移肝癌樣品。其中，27組及59組樣品係分別由國立成功大學附設醫院之外科部及台灣肝癌網(TLCN)取得。使用組織學檢查診斷肝癌。樣品收集係經由IRB委員會認可，且經病患同意進行試驗。分別並切下組織中之腫瘤區域及鄰近正常組織區域，於手術後隨即進行冷凍，以進行後續核酸及蛋白萃取試驗。另由國立成功大學附設醫院病理科之癌症組織資料庫中，取得從四位病患取得的另外七組肝癌轉移組織，且從TLCN取得30組良性血管瘤(8位男性及22位女性)作為控制組。於91組肝癌樣品中，32組樣品為病理分期第I期(35%)，26組樣品為病理分期第II期(29%)，而25組樣品為病理分期第III期(27%)。
以定量即時RT-PCR測量HCC細胞中TIAM2S之mRNA表現量
依據Rezol C&T(Protech Technology,Taipei,Taiwan)使用手冊，由肝癌冷凍樣品中萃取總RNA。依照TaqMan試驗(Applied Biosystems,Foster City,CA)使用手冊，以qRT-PCR分析TIAM2S及18S核糖體RNA(18S rRNA)表現量。以2-ΔΔCt 法計量每一HCC腫瘤樣品中之TIAM2S之mRNA的相對表現量，在此同時以每一樣品之18S rRNA表現量作為內標準。所有測量均重複進行三次，而所有試驗均獨立進行至少兩次。20組HCC樣品係用以測量HCC細胞中TIAM2S之mRNA異位表現，並以相對應正常組織中相對TIAM2S mRNA表現量作為內標準，以標準化(normalize)每一腫瘤細胞中TIAM2S mRNA之異位表現量。HCC細胞中TIAM2S之mRNA表現結果係如圖2所示。
如圖2所示，HCC細胞中TIAM2S之mRNA表現量相對於正常組織中TIAM2S之mRNA表現量，且由成對t值檢定(paired-t test)結果顯示，TIAM2S之mRNA顯著表現於腫瘤細胞中(**：P=0.0043)。此外，於20組HCC細胞之TIAM2S之mRNA檢測結果顯示，65%(13/20)之HCC病人之腫瘤區域中，其TIAMnS之mRNA表現量相對高於正常組織(從2倍至9倍)。
以西方墨點測試測量HCC細胞中TIAM2S蛋白質表現
取大約150 mg之上述HCC樣品，並於液態氮中急速冷凍。將冷凍的樣品添加至1 mL之RIPA緩衝液中(50 mM Tris,pH 8.0、150 mM NaCl、1% Triton X-100、0.5%脫氧膽酸鈉(sodium deoxycholate)、0.1% SDS、1 mM PMSF、及蛋白酶抑制劑混合物)，並於冰上隨即以組織均質機將組織均質化。以1 mL之RIPA緩衝液洗下細胞裂解物兩次，並持續於4℃下攪拌混合20分鐘以維持細胞裂解液之均質性，再於4℃以19,600×g離心20分鐘。收集上清液，並以西方墨點測試進行分析。
西方墨點測試結果顯示，TIAM2S蛋白僅表現在腫瘤細胞中，但不表現在正常細胞中。此外，於血管瘤中並未偵測到或少量偵測到TIAM2S蛋白表現。此結果顯示，TIAM2S蛋白僅專一表現在HCC細胞中。
另一方面，分別以HCC細胞及正常肝臟細胞中α-微管蛋白作為內標準，分析每一病人之HCC細胞及正常肝臟細胞之TIAM2S蛋白質表現量，而表現量分析主要根據西方墨點密度進行標準化計算。於HCC細胞及正常細胞中之TIAM2S及α-微管蛋白之西方墨點密度需由同一病患取得。在此，係使用下式(II)進行標準化計算，而密度及數值係整理於下表1中。
[式(II)]
數值=(HCC細胞中之TIAM2S密度/HCC細胞中之α-微管蛋白密度)-(正常肝臟細胞中之TIAM2S密度/正常肝臟細胞中之α-微管蛋白密度)
數值：TIAM2S蛋白相對異位表現量
如表1所示，每對樣品之數值均為正值，表示TIAM2S蛋白質表現與肝癌形成有正相關。
再者，圖3係為69對肝癌之西方墨點測試結果，其係使用alpha-imager系統(alpha-imager system)進行墨點密度函數定量分析。於69對HCC樣品之西方墨點測試結果顯示，於60(87%)對肝癌樣品中，肝腫瘤區域顯示異常TIAM2S蛋白質表現量，而成對t值檢定顯示TIAM2S顯著異位表現於HCC細胞中(***:P<0.0001)。
此外，更進一步分析TIAM2S表現量與各種臨床症狀之關係。若HCC樣品病理分期係在第II及/或III期，表示腫瘤侵犯至血管之可能性較高。因此，腫瘤細胞侵犯/轉移風險增加。如圖4所示，於具有侵犯能力之HCC樣品(即第II及III期病患)中，TIAM2S蛋白質表現量有明顯增加，但此結果未見於不具有侵犯能力之HCC樣品中(即第I期病患，*:P<0.05)。如圖4結果顯示，TIAM2S確實可作為一用以評估腫瘤侵犯或轉移風險之生物標記，特別是用於肝癌腫瘤評估上。
由上述結果顯示，本發明之使用TIAM2S作為生物標記以評估肝癌增生風險之方法，具有極高準確率(87%)。然而，使用AFP作為生物標記之方法僅具有約50%之準確率。因此，相較於以AFP作為生物標記之方法，本發明之方法準確率較高。此外，本發明之TIAM2S生物標記亦可用以評估肝腫瘤侵犯/轉移之風險，但習知之AFP生物標記卻無法用以評估腫瘤侵犯/轉移之風險。
細胞增生試驗
在此，係使用人類肝癌細胞株HepG2，以建構可大量表現重組TIAM2S之細胞株。使用G418並經過30天挑選，則可得到一控制組HepG2/pcDNA3.1A+(V1A3)及兩實驗組HepG2/pcDNA3.1A+_TIAM2S(T1A1及T2C1)細胞株。將細胞於潮濕且含5% CO2 之環境下，於37℃下，以含有100 U/mL盤尼西林(penicillin)、100μg/mL鏈黴素(streptomycin)、700μg/mL G418、及10% FBS之α-MEM培養基進行培養。
依據比色法分析試驗(colorimetric assay)之使用手冊(CellTiter 96 Aqueous One Solution cell proliferation assay；Promega,Madison,WI)測量細胞增生。步驟大致如下。將細胞以每孔5×103 個細胞種殖於96孔培養盤中(每一組種殖四個孔)。於不同時間點測量TIAM2S過量表現對細胞生長的影響效果。使用96孔微孔盤讀取儀(Labsystems,Multiskan EX,Helsinki,Finland)量測490nm下顏色密度。正確吸收值(讀取值減去背景值)係用以判定細胞增生反應。所有實驗均重複進行三次。控制組質體(V1A3)及重組TIAM2S質體(T1A1及T2C1)之相對細胞增生倍數係如圖5所示。
如圖5結果顯示，HepG2-TIAM2S細胞(T1A1及T2C1)於第4天後仍持續生長，但HepG2控制組細胞(V1A3)則於第4天後停止生長(*：P<0.05,**：P<0.01,***：P<0.001)。此結果顯示，持續表現重組蛋白的HepG2-TIAM2S細胞，會增加HepG2細胞(低分化肝癌細胞株)的增生能力。
細胞侵犯試驗
在此，亦使用上述控制組HepG2/pcDNA3.1A+(V1A3)及實驗組HepG2/pcDNA3.1A+_TIAM2S(T1A1及T2C1)細胞株進行試驗。將一具有8-μm孔洞尺寸聚碳酸酯過濾膜(Millipore,Temecula,CA)之孔室(transwell)中，形成一層均勻的15.15μg/cm2 基底膜基質(Matrigel basement membrane matrix)。而後，完全乾燥孔室。於進行實驗之前，添加含有40 μL之0.1% FBS之α-MEM以回復基底膜基質，並置於37℃下培養1小時。將經胰蛋白酶處理之細胞(1.5×105 )懸浮於100 μL之0.1% FBS之α-MEM培養基中，並添加至孔室上層腔室中；而含有10% FBS之α-MEM培養基(700 μL)則添加至孔室下層腔室中。於培養24小時後，使用棉花棒移除非侵犯細胞及過濾膜上層細胞。於過濾膜下表面之細胞則以甲醇固定15分鐘，再以0.2%結晶紫染色30分鐘。將過濾膜區域分成五個區塊，並以200x放大倍率觀察每個區域，以計算侵犯細胞數。
由孔室之五個隨機挑選區域中所觀察的結晶紫染色細胞數目係列於圖6中(*: P<0.05,**: P<0.01,***: P<0.001)。如圖6所示，相較於控制組V1A3細胞侵犯細胞數目，實驗組T1A1(P<0.001)及T2C1(P<0.05)細胞侵犯細胞數目較多。此實驗結果顯示，TIAM2S會增加HepG2細胞侵犯能力，故TIAM2S過表現可促進細胞之生長及侵犯能力。
活體內癌化程度分析
將控制組(V1A3)及TIAM2S實驗組(T1A1及T2C1)細胞株皮下注射至8週大ICR nu/nu小鼠，以測量癌化程度。將每一細胞株取出5×106 細胞(於0.2 μL PBS中)，使用27注射針頭(27-gauge needle)皮下注射至小鼠背部區域。每一株細胞株係注射九隻小鼠，且於注射後以觸診方式每週量測腫瘤生成。於三週後，使用雙角規形夾(以長×寬×高×0.52進行計算)測量腫瘤體積，直到腫瘤體積到達1,000 mm3 或注射八週後，而後犧牲小鼠，並將腫瘤切除且包埋至OCT中。各切除腫瘤係以HE染色，並以HE染色區域評估侵犯能力。異體移植腫瘤生長曲線結果係列於圖7A至7C中。
圖7A係顯示注射控制組(V1A3)之小鼠中異體腫瘤(Xenograft tumor)體積，圖7B係顯示注射具TIAM2S建構質體之實驗組(T1A1)之小鼠中異體腫瘤體積；而圖7C係顯示注射具TIAM2S建構質體之實驗組(T2C1)之小鼠中異體腫瘤體積。
如圖7A至7C結果顯示，相較於控制組(3/9;33%)，於注射具TIAM2S建構質體之實驗組小鼠(9/18;50%)中，可觀察到較多隻小鼠體內有腫瘤生長。相較於注射具TIAM2S建構質體之實驗組小鼠，控制組小鼠體內的腫瘤較圓且有明顯生長邊限。反之，於注射具TIAM2S建構質體之實驗組小鼠中，體內有多處具有模糊邊界之腫瘤硬塊，且腫瘤難以與鄰近正常組織分離。顯示侵犯能力之腫瘤比例於控制組及TIAM2S實驗組中，分別為0%(0/3)及55.6%(5/9)。此外，僅在TIAM2S表現細胞(實驗組)中觀察到重組TIAM2S表現，但未於控制組中觀察到。
此外，組織分析結果顯示，TIAM2S表現腫瘤會緊密甚至是侵犯至鄰近骨骼肌肉層，且無法明確定義腫瘤邊界。反之，於控制組中，腫瘤區域及基質細胞間具有明顯邊界，且腫瘤區域不會侵犯至鄰近骨骼肌。組織結果分析係與細胞癌化試驗結果一致，表示TIAM2S表現確實會幫助細胞成長及侵犯。
由上述細胞增生試驗、細胞侵犯試驗、及活體內癌化程度分析結果顯示，TIAM2S表現會增加腫瘤細胞侵犯能力，且與癌症轉移相關。因此，本發明之生物標記TIAM2S不僅僅可作為用以評估腫瘤增生風險之生物標記外，更可用以預測腫瘤之侵犯及轉移能力。
上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。
圖1係大腦、肝臟、胸腺、乳房、前列腺、胰臟、及大腸之正常及腫瘤組織之中TIAM2S之mRNA表現結果。
圖2係成對HCC細胞中TIAM2S之mRNA表現結果。
圖3係西方墨點測試定量分析結果。
圖4係不同病理時期之HCC樣品之TIAM2S蛋白質表現關係圖。
圖5係細胞增生試驗結果圖。
圖6係細胞侵犯試驗結果圖。
圖7A至圖7C係活體內癌化程度分析結果圖。
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<211> 626
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<400> 3

Claims (12)

  1. 一種用以評估腫瘤增生、侵犯、或轉移風險之方法，包括下列步驟：(A)提供一用以評估腫瘤增生、侵犯、或轉移風險之組織樣品，其中該組織樣品係包括：一非腫瘤區域、及一待測腫瘤區域，且該組織樣品係為一選自由肝臟組織、乳房組織、胰臟組織、腦組織、胸腺組織、前列腺組織、大腸組織、或其他固態組織所組成之群組之組織樣品；(B)分別偵測該非腫瘤區域、及該待測腫瘤區域中一生物標記、及一內標準標記之表現量，其中該生物標記係為T細胞侵犯和轉移蛋白2短型；以及(C)透過下列式(I)，比較該生物標記及該內標準標記於該非腫瘤區域及該待測腫瘤區域中之表現量：[式(I)]數值=(該待測腫瘤區域中之該生物標記之表現量/該待測腫瘤區域中之該內標準標記之表現量)-(該非腫瘤區域中之該生物標記之表現量/該非腫瘤區域中之該內標準標記之表現量)其中，當數值為正值時，表示具有肝癌、乳癌、胸腺癌、前列腺癌、大腸癌、胰臟癌、或其他固態癌之腫瘤增生、侵犯、或轉移風險；且當數值為負值時，表示具有腦癌之腫瘤增生、侵犯、或轉移風險。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該生物標記係選自由T細胞侵犯和轉移蛋白2短型之核苷酸鏈、互補核苷酸鏈、及蛋白質所組成之群組。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該腫瘤係為肝腫瘤。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該組織樣品係為一組織結節。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之方法，其中該組織樣品係為一肝結節。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該表現量係為蛋白質表現量。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之方法，其中該蛋白質表現量係透過西方墨點法、凝膠電泳法、酵素結合免疫吸附分析法、免疫組織化學法、免疫沉澱法、或質譜分析法進行偵測。
  8. 如申請專利範圍第7項所述之方法，其中該內標準標記係為α-微管蛋白(α-tubulin)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、或β-肌動蛋白(β-actin)。
  9. 一種以T細胞侵犯和轉移蛋白2短型之核苷酸鏈、互補核苷酸鏈、或蛋白質做為生物標記之用途，係用以評估腫瘤增生、侵犯、或轉移風險，其中該腫瘤為肝癌腫瘤、乳癌腫瘤、胸腺癌腫瘤、前列腺癌腫瘤、大腸癌腫瘤、胰臟癌腫瘤、或其他固態癌症腫瘤。
  10. 如申請專利範圍第9項所述之用途，其中該T細胞侵犯和轉移蛋白2短型之表現核苷酸鏈序列為SEQ ID NO：2。
  11. 如申請專利範圍第10項所述之用途，其中該T細胞侵犯和轉移蛋白2短型之蛋白質序列為SEQ ID NO：3。
  12. 如申請專利範圍第9項所述之用途，其中該腫瘤係為肝腫瘤。
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