TWI491407B - 色素上皮衍生因子衍生之多胜肽於治療骨性關節炎之用途 - Google Patents

Description

色素上皮衍生因子衍生之多胜肽於治療骨性關節炎之用途

本發明是關於骨性關節炎之治療，且特別是關於利用來自色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，簡稱PEDF)的合成胜肽來治療骨性關節炎。

骨性關節炎(osteoarthritis)是一種退化性關節疾病，其主要影響的是軟骨(cartilage)組織；這是一種可滑動的組織，覆蓋於骨頭末端和另一骨頭相接形成關節的部位。健康的軟骨使得骨頭可相對於另一骨頭而滑動，並可吸收物理運動時帶來的衝擊能量。在發生骨性關節炎的部位，軟骨的表層破裂並受到耗損，因而位於受損軟骨下方的骨頭會彼此摩擦，導致關節疼痛、腫脹並失去移動能力。骨性關節炎的發生率和年齡有關，最容易受影響的關節是常年承受壓力的部位，譬如膝蓋、臀部、手指與下脊椎等部位。

骨性關節炎是最常見的關節炎類型。據統計，在2008年時，25歲以上的美國人當中約有2千7百萬人患有骨性關節炎。至於在全球60歲以上的人口中，據估計約有9.6%的男性與18.0%的女性具有骨性關節炎相關症狀。世界衛生組織的調查顯示，骨性關節炎的患者中，約有80%的患者行動受到限制，且約有25%的患者無法進行主要的日常活動。

目前並沒有能夠有效治癒骨性關節炎的方法或藥 物。現有的疾病管理主要著重於控制疼痛、改善僵硬與維持患者日常活動能力等方面。通常會建議患者進行物理治療，此種療法有助於強化患者的肌肉與骨骼、增加肌肉撓曲性且可減低疼痛。用於骨性關節炎的藥物主要是止痛藥，譬如口服或局部塗抹的止痛劑，這些藥物雖然能夠舒緩不適，但無法治療發炎。口服或注射用的皮質類固醇(corticosteroids)可控制發炎，但不適合長期服用。非固醇類的抗發炎藥物(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，簡稱NSAIDs)可用以減緩疼痛、腫脹與發炎等情形；然而此類藥物會導致胃部不適與潰瘍，且可能增加某些患者心臟病發作的機率。對於嚴重受損的關節，可考慮外科手術，如關節鏡手術(arthroscopic procedures)乃至於全關節造型術(total joint arthroplasty)。

有鑑於上述問題，相關領域亟需提出一種能夠有效治療骨性關節炎的藥物與方法。

發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件 或界定本發明的範圍。

本發明至少部分是基於發現PEDF衍生合成胜肽(下稱合成胜肽或PEDF胜肽)能夠刺激軟骨細胞(chondrocytes)擴增、引發軟骨再生並促進間葉幹細胞的軟骨細胞生成(chondrogenesis)；因而這些PEDF胜肽能夠有效治療一個體之骨性關節炎。由此可知，此處提出的PEDF衍生合成胜肽能夠作為用以治療骨性關節炎的活性化合物。

有鑑於此，本發明的一態樣是關於一種PEDF衍生合成胜肽的用途，此PEDF衍生合成胜肽可用以製備治療一個體之骨性關節炎的醫藥品。

根據本說明書多個實施例，所述的合成胜肽長度為20-39個胺基酸殘基，且其序列至少80%與序列編號：1相同。此外，上述胺基酸序列包含至少20個連續胺基酸殘基，其序列至少90%與序列編號：1的胺基酸殘基11-30相同，而使得此合成胜肽可用於治療一個體的骨性關節炎。

在可任選的實施例中，上述合成胜肽中有至少四個連續的胺基酸，其序列與序列編號：1的胺基酸殘基11-14相同。此種合成胜肽的非限制性例示包括胺基酸序列如序列編號：1(39-mer)、序列編號：2(34-mer)、序列編號：3(29-mer)、序列編號：5(24-mer)、序列編號：6(20-mer)、序列編號：8(MO 29-mer)與序列編號：9(MO 20-mer)所示者。根據本發明某些實施例，上述合成胜肽的胺基酸序列為序列編號：3(29-mer)、序列編號：5(24-mer)或 序列編號：6(20-mer)任一者所示。

根據本發明多種實施例，所述的個體可以是任何哺乳類動物，包括人類。

在本發明另一態樣中，提出一種用以治療一個體之骨性關節炎的藥學組合物。所述的個體可以是任何哺乳類動物，包括人類。

根據本發明一實施方式，上述組合物包含任一根據本發明上述態樣/實施例的合成胜肽，且此合成胜肽的含量足以治療該個體的骨性關節炎。此組合物亦包含可用以攜帶該合成胜肽的一種藥學上可接受賦型劑。

於可任選的實施例中，所述藥學組合物更包含一糖胺聚多醣(glycosaminoglycan)，譬如玻尿酸(hyaluronic acid)或玻尿酸鈉(sodium hyaluronate)。

根據本發明多種實施例，可將所述藥學組合物製成可注射的劑型。

本發明的又一態樣是一種用以治療一個體之骨性關節炎的方法。所述的個體可以是任何哺乳類動物，包括人類。

於一實施例中，上述方法包含對該個體投予根據本發明上述態樣/實施例的合成胜肽，以使得此合成胜肽到達該個體的滑液囊(synovial cavity)內，進而治療骨性關節炎。

於可任選的本發明實施例中，可將合成胜肽調製為根據上述態樣實施例所述的組合物。

於某些實施例中，可利用關節內注射(intra-articular injection)的方式將所述合成胜肽或藥學組合物注射至該 個體的滑液囊。

在參閱下文實施方式後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易瞭解本發明之基本精神及其他發明目的，以及本發明所採用之技術手段與實施態樣。

為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。

除非本說明書另有定義，此處所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。此外，在不和上下文衝突的情形下，本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型；而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。

雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數界是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準 誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比(例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者)均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。

在此處「胜肽」(peptide)一詞係指胺基酸殘基所組成的高分子。「合成胜肽」(synthetic peptide)一詞則代表此胜肽並未包含存在於自然界的完整蛋白質分子。此種胜肽之所以是「合成的」，表示其乃是由人類利用技術手段所得，譬如化學合成、重組遺傳技術或將整個抗原切段。於本說明書中，任何胺基酸殘基於一胜肽中的位置係由該胜肽的N端起算。

在此處「增殖」的各種詞性(如proliferate或proliferation)係指族群中的細胞數目透過細胞分裂而增加之情形。

此處針對合成胜肽序列所述的「胺基酸序列相似度百分比」(Percent% amino acid sequence identity)係指該候選合成胜肽之胺基酸殘基與一參考多胜肽之胺基酸殘基完全相同的百分比。於進行上述比對時，可將該候選合成胜肽與該參考多胜肽並排，並於必要時引入間隙，以使二序 列形成最高的序列相似度，且在計算相似度時，並未將保守性置換之胺基酸殘基納入考量。相關領域已有多種方法可供進行上述並排，譬如可公開取得的軟體如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)等。本發明所屬技術領域中具有通常知識者在進行並排時，可選擇適當的參數與計算方式，以得到最佳的排列方式。在本說明書中，二胺基酸序列間的序列比較是採用美國國家生物科技資訊中心(Nation Center for Biotechnology Information，簡稱NCBI)所提供的蛋白質-蛋白質BLAST分析軟體Blastp來進行。一候選胺基酸序列A相較於一參考胺基酸序列B的胺基酸序列相似度(在本說明書中亦稱之為序列A與序列B具有特定百分比(%)的胺基酸序列相似度)的計算方式如下： 其中X是利用Blastp軟體對序列A、B進行排列後所得到的相同胺基酸殘基數目(identical matches)，而Y是A、B二序列中較短者的胺基酸殘基總數。

於本說明書中，「治療」一詞的各種詞性與時態(如treat、treating或treatment)係指預防性(如，預防用藥)、療癒性或緩和性的處置，藉以達到所欲的藥學和/或生理學效果。在較佳的情形中，上述的效果是指能夠部分或完全地治癒個體的骨性關節炎。此外，「治療」一詞可用以指稱將此處提出的PEDF衍生合成胜肽或藥學組合物投予或施用於一個體，此個體可能有一醫療疾患、症狀、疾病或與 疾患相關的異常或易於罹患一疾患，以期能部分地或完全地緩和、改善、減輕一特定異常和/或病症的一或多種症狀或特徵，或延緩其發生、阻礙其進展、減輕其嚴重性和/或減低發生率。亦可對並未表出現疾病、異常和/或病症之徵兆的個體和/或呈現早期徵兆的個體進行治療，以期降低發展出與該疾病、異常和/或病症相關之病理變化的風險。於此處，上述症狀、疾病、異常或病症係指骨性關節炎。在本說明書中，當一或更多種症狀或臨床指標減少時，通常認為該治療是「有效」的。

在此處，「有效量」(effective amount)一詞係指一成分的用量足以招致所欲的反應或效果。具體的有效量取決於多種因素，諸如欲處理的特定狀況、個體的生理條件(如，個體體重、年齡或性別)、接受處置的哺乳動物或動物的類型、處置持續時間、目前所受其他治療(如果有的話)的本質以及所用的具體配方和化合物或其衍生物的結構。有效量亦指於此用量下，該化合物或組合物的毒性或負面效果不及於其所帶來的正面效果。

「施用」或「投予」(application or administration)等詞在此係指將一或多劑有效量的所述PEDF衍生合成胜肽或組合物提供給個體，以治療骨性關節炎。根據本發明實施方式，較佳的遞送方式為關節內注射(intra-articular injection)。舉例來說，可將所述之PEDF衍生合成胜肽或藥學組合物透過關節內注射到個體關節的滑液囊內，以促進軟骨再生，進而治療骨性關節炎。

此處「賦型劑」(excipient)一詞係指可作為所述PEDF衍生合成胜肽的媒劑/載體之任何惰性物質(包括粉末或溶液)。賦型劑通常是安全無毒性的物質，且廣義上包括製藥產業中可用以製備組合物的任何物質，如填充劑、稀釋劑、凝結劑、黏合劑、潤滑劑、助流劑、安定劑、著色劑、浸潤劑等。

在本說明書中，「藥學上可接受」(pharmaceutically acceptable)的成分係指其適用於人類和/或動物，且在合理的效益/風險比之下不會產生不當的副作用(如毒性、刺激與過敏反應)。此外，每一種賦型劑必須和藥學配方中的其他成分相容，才是「可接受」的成分。

「個體」(subject)一詞在此係指可接受本發明之合成胜肽、組合物和/或方法來進行治療的哺乳類動物(包括人類)。除非另有指明，「個體」一般包含雄性與雌性。

色素上皮衍生因子(Pigment epithelium-derived factor，簡稱PEDF)是一種多功能的分泌性蛋白質，其具有抗血管新生(anti-angiogenic)、抗腫瘤生成(anti-tumorigenic)與神經滋養(neurotrophic)等功能。人類PEDF蛋白質(序列編號：11)是一種大小約50 kDa的分泌性蛋白質，具有418個胺基酸。已知PEDF的34-mer片段(相當於PEDF之第44-77號殘基)與44-mer片段(相當於PEDF之第78-121號殘基；序列編號：10)分別具有抗血管新生與神經滋養性質。

本說明書至少部分是基於發現來自44-mer PEDF的合 成胜肽能夠透過多種機制來促進軟骨再生。本說明書提供的實驗例證實，所述的合成胜肽能夠促進軟骨細胞擴增且可提高間葉幹細胞的軟骨細胞生成。本發明的另一創新特徵在於此處所提出的合成胜肽最長只有20至39個胺基酸殘基，比起先前技術所述的全長PEDF短了許多；因此，本發明克服了傳統蛋白質在臨床使用上經常面臨的困境，諸如製造成本高昂、生體可用率(bioavailability)低落與藥物動力學(pharmacokinetics)表現不佳等。因此，這些合成胜肽可用以治療骨性關節炎。

有鑑於此，本發明的一態樣是關於一種PEDF衍生合成胜肽用於治療一個體之骨性關節炎的用途。本發明的另一態樣是關於上述PEDF衍生合成胜肽的另一種用途，其可用於製備用以治療一個體之骨性關節炎的藥學組合物。除了上述用途之外，本發明的一態樣亦提出了一種治療一對象之骨性關節炎的方法。下文記載了適用於以上各態樣的多種實施例。

根據本說明書多個實施例，此合成胜肽有20-39個胺基酸殘基，且其胺基酸序列與序列編號：1(LSVATALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGT)有至少80%的胺基酸序列相似度。舉例來說，此合成胜肽與序列編號：1的胺基酸序列相似度可為約80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%。另外，此合成胜肽包含至少20個連續的胺基酸殘基，其與序列編號：1第11-30個殘基 有至少90%的胺基酸序列相似度。具體來說，這20個連續胺基酸殘基與序列編號：1第11-30個殘基的胺基酸序列相似度可為約90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%。

在本發明一實施例中，所述的合成胜肽有39個胺基酸殘基，其序列即如序列編號：1所示。在下文實驗例中，亦將此合成胜肽稱為39-mer。此種39-mer胜肽是來自人類PEDF的已知44-mer片段(PEDF第78-121號殘基)的一種較短的變形。

本案發明人先前所做的實驗(如，審查中的美國專利申請案第13/428996號，在此將該先申請案的內容一併納入為本說明書的一部分)與本說明書所提供的實驗例顯示還有其他數種來自此39-mer的短PEDF合成胜肽能夠用以治療骨性關節炎。

譬如，由下文與先申請案的實驗例可知，如序列編號：2(ALSALSLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGT)所示的34-mer合成胜肽能夠有效地治療骨性關節炎。此34-mer合成胜肽相當於人類PEDF的第88-121號胺基酸殘基；根據上文所述的胺基酸序列相似度的計算方法，此34-mer與39-mer的胺基酸序列相似度為100%，且34-mer的第6-25號胺基酸殘基與39-mer的第11-30號胺基酸殘基的胺基酸序列相似度也是100%。

此外，下文多個實驗例證明如序列編號：3(SLGAEQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGT)所示的29-mer 合成胜肽能夠有效治療個體的骨性關節炎。此29-mer合成胜肽相當於人類PEDF的第93-121號胺基酸殘基；其與39-mer的胺基酸序列相似度為100%，且29-mer的第1-20號胺基酸殘基與39-mer的第11-30號胺基酸殘基的胺基酸序列相似度亦為100%。

下文某些實驗例證實，一種24-mer合成胜肽亦可有效治療個體的骨性關節炎。此24-mer的序列如序列編號：5(SLGAEQRTESIIHRALYYDLISSP)所示，且相當於人類PEDF第93-116號胺基酸殘基。此外，24-mer序列與39-mer的第11-30號胺基酸殘基完全相同(胺基酸序列相似度：100%)且其相較於39-mer的胺基酸序列相似度同樣也是100%。

本說明書某些實驗例顯示，如序列編號：6(SLGAEQRTESIIHRALYYDL)所示的20-mer亦可有效治療個體的骨性關節炎。此20-mer的序列相當於人類PEDF第93-112號胺基酸殘基，其與39-mer的第11-30號胺基酸殘基完全相同(胺基酸序列相似度：100%)且其相較於39-mer的胺基酸序列相似度同樣也是100%。

本案與先申請案所揭載的實驗例亦顯示，另外有兩種衍生自小鼠PEDF的短、合成胜肽同樣也能夠有效地治療骨性關節炎。第一種衍生自小鼠的合成胜肽在本說明書中稱為Mo 29-mer，其序列如序列編號：8(SLGAEHRTESVIHRALYYDLITNPDIHST)所示，此序列與39-mer的胺基酸序列相似度為83%，且其前20個胺基 酸殘基與39-mer第11-30個殘基的胺基酸序列相似度為90%。另一種衍生自小鼠PEDF的合成胜肽稱為Mo 20-mer，其序列如序列編號：9(SLGAEHRTESVIHRALYYDL)所示。Mo 20-mer與39-mer或39-mer的第11-30號胺基酸殘基的胺基酸序列相似度皆為90%。

在可任選的實施例中，所述的PEDF衍生合成胜肽中有至少四個連續的胺基酸，其序列與序列編號：1的胺基酸殘基11-14相同。本案發明人所進行的實驗結果顯示，序列編號：1所示序列的第11-14號胺基酸殘基(即，SLGA)對於維持短PEDF合成胜肽之生理功能扮演的重要的角色。舉例來說，下文提出的多個實驗例顯示，不具有此SLGA片段的18-mer合成胜肽(EQRTESIIHRALYYDLIS；序列編號：7)無法保護個體對抗骨性關節炎。此外，由本案與先申請案所載的實驗例可以推知，不含SLGA序列的25-mer合成胜肽(EQRTESIIHRALYYDLISSPDIHGT；序列編號：4)也無法有效治療骨性關節炎。

可利用任何習用的技術來合成此處所述的合成胜肽，譬如t-BOC或FMOC來保護α-氨基(alpha-amino groups)。這兩種方法都採用了逐步合成法，其係由該胜肽的C端開始，每次加上一個胺基酸。亦可利用其他已知的固態胜肽合成(solid phase peptide synthesis，簡稱SPPS)法來合成此處所述的合成胜肽。

本發明之範圍亦涵蓋了其他相較於39-mer具有保守性 置換(conservative variation)的合成胜肽。在此處，「保守性置換」一詞係指利用另一種在生物學上相似的殘基來取代某一殘基。保守性置換的例示包括親水性殘基(如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸與甲硫胺酸)彼此間的置換，或相近極性殘基(如精胺酸與離胺酸；或麩胺酸與天冬胺酸)彼此間的置換，以及其他類似的置換模式。「保守性置換」在此亦指利用一具有取代基的胺基酸來取代一不具有取代基的原始胺基酸，只要可和此具有取代基之胺基酸反應的抗體亦可和原始胺基酸進行免疫反應即可。

此處所述的PEDF多胜肽片段可用於治療哺乳類動物的骨性關節炎。所述的哺乳類動物包括但不限於人類、人類以外的靈長類、鼠科動物等。在較佳的實施例中，所述的對象為人類。

亦可將上述實施方式所述的各種合成胜肽調製成一藥學組合物，以治療個體的骨性關節炎；此種藥學組合物即屬於本發明另一態樣之範圍。

根據本發明一實施方式，上述藥學組合物包含任一根據本發明上述態樣/實施例的合成胜肽，且此合成胜肽的含量足以治療該個體的骨性關節炎。此藥學組合物亦包含可用以攜帶該合成胜肽的一藥學上可接受賦型劑。

根據本發明的可任選實施例，此藥學組合物中所述合成胜肽的含量為約1-1,000 μM；較佳為約10-500 μM；更佳為25-250 μM。舉例來說，上述合成胜肽的含量可為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、 40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1,000 μM。具體而言，下文實驗例中針對約310克重的大鼠所用的劑量濃度為約25 μM。本發明所屬技術領域具有通常知識者可基於本說明書提出的小鼠給藥劑量，計算出人體等效劑量(human equivalent dose，簡稱HEQ)；譬如可依據美國食品暨衛生管理局提出的準則(標題為”Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers”)來計算。

可根據既有的藥學程序來製備上述藥學組合物，譬如Remington’s Pharmaceutical Sciences(17th edition,ed.Alfonoso R.Gennaro,Mack Publishing Company,Easton,Pa(1985).)一書中有詳細的記載。

在選擇適用於投遞合成胜肽之藥學上可接受賦型劑時，主要需考量此藥學組合物的給藥方式。

根據本發明的可任選實施例，可利用關節內注射的方式局部給藥。在此種情形中，可利用無菌水溶液作為藥學上可接受載體，此水溶液較佳為與接受者體液等張的溶液。舉例來說，可將活性成分溶解或懸浮於含有生理可相容物質的水中，所述的生理可相容物質如氯化鈉、甘胺酸及與其相似者，且其pH值經緩衝可與生理條件相容，以得到一水溶液，而後再進行滅菌。可用來製造上述無菌注射溶液或懸浮液的其他稀釋劑或溶劑包括，但不限於，1,3- 丁二醇(1,3-butanediol)、甘露醇(mannitol)、水與林格氏溶液(Ringer’s solution)。也可使用脂肪酸(如，油酸)及其之甘油酯衍生物，或是天然藥學可接受的油(如，橄欖油或菜籽油)來製造可供注射用的溶液或懸浮液。這類油性溶液或懸浮液中也可包含用來稀釋的醇類或羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose)或類似的分散劑。於調製藥學組合物時，亦可使用其他常用的界面活性劑(如，Tweens或Spans系列)、乳化劑，或於製備藥學上可接受劑型時常用的生物可利用性促進劑(bioavailability enhancer)。

於可任選的實施例中，所述的藥學組合物可更包含一糖胺聚多醣。糖胺聚多醣是一種線性多醣類，由重複的雙醣(disaccharide)單元所構成，並有一羧基與至少一硫酸。糖胺聚多醣可連接至核心蛋白(core protein)以形成蛋白多醣(proteoglycan)，此乃骨細胞外間質(bone extracellular matrix)的主要成分。在患有骨性關節炎的軟骨處，基質中糖胺聚多醣的含量降低，而使得糖胺聚多醣和第二型膠原蛋白的之間的連結減弱，而使病況加重。因此，提供外來的糖胺聚多醣至病灶部位，有助於治療骨性關節炎。糖胺聚多醣的實施例包括但不限於：玻尿酸與玻尿酸鈉。作為例示而非限制，根據本發明實施例的藥學組合物可包含約1-15%(重量百分比)的玻尿酸。

同樣可任選地，本發明的組合物亦可包含所屬技術領域中具有通常知識者所熟知的藥學上可接受之一或多種添 加劑，以提升合成胜肽的投遞效率、改善使用者的使用經驗。上述可任選的成分包括但不限於一或多種以下成分：乾燥劑(drying Agent)、抗癢劑(anti-itch agents)、抗發泡劑(anti-foaming agents)、緩衝劑(buffers)、中和劑(neutralizing agents)、pH調節劑(pH adjusting agents)、著色劑(coloring agents)、脫色劑(discoloring agents)、軟化劑(emollients)、乳化劑(emulsifying agents)、乳化安定劑(emulsion stabilizers)、增黏劑(viscosity builders)、保濕劑(humectants)、芳香劑(odorants)、防腐劑(preservatives)、抗氧化劑(antioxidants)、化學安定劑(chemical stabilizers)、增稠劑(thickening agents)、硬化劑(stiffening agents)、懸浮劑(suspending agents)等。

在又一態樣中，本發明提出了一種用以治療一個體之骨性關節炎方法。所述個體可以是任何哺乳類動物，包括人類。根據本發明的原理與精神，所述方法能夠促進軟骨再生，進而能夠緩和或治癒該個體的骨性關節炎。

於一實施例中，上述方法包含對該個體投予一有效量的根據本發明上述態樣/實施例之合成胜肽，藉使所述胜肽到達該個體體內鄰近病灶的滑液囊。

於可任選的實施例中，可將所述合成胜肽調製為上述本發明態樣/實施例所述的藥學組合物。

於一實施例中，可將所述合成胜肽或藥學組合物以關節內注射的方式局部遞送至該個體的滑液囊內。

下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣，以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明。不應將這些實施例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後，可在不需過度解讀的情形下，完整利用並實踐本發明。此處所引用的所有公開文獻，其全文皆視為本說明書的一部分。

實驗例 材料與方法 <材料>

DMEM培養基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)、胎牛血清(fetal bovine serum，簡稱FBS)、0.25%胰蛋白酶(trypsin)、抗生素、TRIzol與Dynabeads皆購自Invitrogen(Carlsbad,CA)。玻尿酸(hyaluronic acid，簡稱HA)、單碘乙酸(mono-iodoacetate，簡稱MIA)、二甲亞碸(dimethyl sulfoxide，簡稱DMSO)、纖維連接蛋白(fibronectin)、Percoll、胰島素(insulin)、氫皮質酮(hydrocortisone)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin，簡稱BSA)、5-溴-2'-去氧尿苷(5-bromo-2'-deoxyuridine，簡稱BrdU)、Hoechst 33258染料皆購自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。抗-BrdU抗體、抗-軟骨蛋白聚醣(anti-aggrecan)抗體與抗-第二型膠原蛋白抗體皆購自GeneTex(台北，台灣)。各種螢光染料-結合二級抗體皆購自BioLegend(San Diego,CA)。鏈蛋白酶(Pronase)與膠 原蛋白酶係購自Roche(Indianapolis,IN)。蘇木色素與伊紅(Hematoxylin and eosin，簡稱H&E)染料購自Merck(Rayway,NJ,USA)。

短合成胜肽(包括29-mer(序列編號：3)、24-mer(序列編號：5)、20-mer(序列編號：6)與18-mer(序列編號：7))係購自GenScript(Piscataway,NJ)，於合成後，將其N端醯化(acetylated)並將C端醯胺化(amidated)以提升安定性，並以質譜儀定性(純度>95%)。以DMSO為溶劑，分別將PEDF衍生合成胜肽(29-mer、24-mer、20-mer或18-mer)製成濃度為5 mM的儲備溶液(stock solution)，並儲存於-20℃中以供後續使用。

<動物>

本說明書所載實施例所用的所有動物皆飼育於有溫度與濕度控制的飼養籠中，飼養溫度約24℃至25℃，光暗循環為12：12小時。試驗過程中提供飲水與標準齧齒類飼料供任食。實驗計畫皆通過馬偕紀念醫院(新北市，台灣)倫理委員會核准，並遵循國家動物保護相關規範。

對大鼠進行MIA關節內注射，以建立骨性關節炎的動物模型。具體來說，10週大的成年雄性Sprague-Dawley大白鼠(平均體重312±11 g)經腹腔內注射若朋(xylazine，用量為每公斤體重10毫克)以進行麻醉；接著在右膝以單一劑關節內注射的方式注入MIA(1毫克MIA溶於25 μl的無菌生理食鹽水中)，注射時，將膝蓋處彎曲成90度， 利用27G的針頭，經由膝韌帶(patellar ligament)注入上述MIA溶液。

欲偵測活體內細胞擴增時，以DMSO為溶劑，製得含80 mM BrdU的儲備溶液。將150 μl的BrdU儲備溶液和350 μl的磷酸緩衝液(phosphate-buffered saline，簡稱PBS)混合後，經腹膜內注射至大白鼠體內，並於16小時後將大白鼠安樂死。其後根據下文所述方法利用抗-BrdU抗體來標記BrdU，以評估DNA合成之情形。

<關節軟骨細胞的分離與培養>

自8週大雄性Sprague-Dawley大白鼠的股骨髁(包括前方、後方與側邊等區域)得關節軟骨，取樣時需小心以免滑液膜引起污染並避免破壞骨質結構。取下的樣本切成約0.5 mm3的小片後，依序以鏈蛋白酶(70 U/ml，37℃下1小時)與膠原蛋白酶(300 U/ml，37℃下3小時)處理。之後，以無菌PBS沖洗一次，之後再以添加了2%FBS的DMEM培養基沖洗兩次，以移除膠原蛋白酶。進行初代培養時，在六孔盤上放入經10 μg/ml纖維連接蛋白(fibronectin)塗覆的蓋玻片，並將對錐藍(trypan blue)呈陰性反應的細胞以每孔6000個的密度培養於六孔盤中，所用的培養基為DMEM並添加10%FBS與1%青黴素/鏈黴素抗生素混合物。隔天，將培養基換成標準增殖培養基(standard expansion medium，含有10% FBS-DMEM、0.1 mM維生素C、0.5 mg/ml L-葡萄糖、100 mM HEPES、 1 mM丙酮酸鈉(sodium pyruvate)、2 mM L-麩胺酸與抗生素)，培養基中可添加或不添加50 nM PEDF胜肽。每3天更換新鮮培養基，共培養12天。

<間葉幹細胞的分離與培養>

8週大雄性Sprague-Dawley大鼠經腹腔內注射若朋(xylazine，用量為每公斤體重10毫克)以進行麻醉。在無菌環境下移出股骨，以PBS和抗生素的混合物沖洗約5分鐘後，切除所有軟組織、將其股端(epiphysis)截斷，之後以肝素和DMEM混合物反覆沖洗骨髓腔。將收集到的骨髓細胞以1000×g離心10分鐘，而後將細胞沈澱物重新溶於DMEM培養基中，並將此細胞懸浮液轉移到含有5毫升Percoll(1.073 g/ml)的15-ml離心管中，以1500×g離心30分鐘。之後取出位於中間層的單核細胞(mononuclear cells)，以PBS沖洗三次後，重新懸浮於低葡萄糖含量的DMEM，(添加10%經熱不活化的FBS與1%青黴素/鏈黴素混合物)。在95%空氣和5%二氧化碳以及37℃的環境下培養2週，並每4天更換新鮮培養基。棄置未貼附的細胞，並保存貼附細胞。在培養約一週後，初代間葉幹細胞(mesenchymal stem cells，簡稱MSCs)會長至約80-90%滿的狀態。

欲引發間葉幹細胞分化為軟骨細胞時，將5 X 10⁵ 的細胞培養於促進軟骨細胞生成的培養基(chondrogenic medium)中，此培養基為高葡萄糖含量的DMEM培養基， 含有100 nM甲基脫氫皮質固醇(dexamethasone)、0.17 mM維生素C-2磷酸鹽(ascorbic acid-2 phosphate)、10 μg/ml胰島素、5 μg/ml運鐵蛋白(transferrin)、5 ng/ml硒、1 mM丙酮酸鈉、2 mM L-麩胺酸與2% FBS)，並添加10 ng/mlTGF-β2(R&D Systems；Minneapolis,MN)。在接受PEDF處理的組別中，將細胞培養於上述促進軟骨細胞生成的培養基中，並添加50 nM的PEDF胜肽。每兩天更換一次培養基，培養一週。

<組織學分析>

切下膝關節後，移除周圍軟組織，將樣本以4%甲醛固定後，利用Shandon TBD-2脫鈣劑(decalcifier，購自Thermo Scientific；Logan,UT)處理。之後沿著關節中央徑向(mid-sagittally)切開，再以固態石蠟(paraffin blocks)包埋。沿縱向將組織切成厚度約5-μm的薄片。

於使用前，於二甲苯(xylene)中移除石蠟，並以一系列濃度梯度的乙醇回復樣本。之後，可利用H&E染色進行一般組織學觀察，或進行螢光染色。每個膝蓋樣本中取出20個切片，以盡可能涵蓋退化最嚴重的部分。

<免疫螢光染色與BrdU染色>

經石蠟包埋的關節樣本於二甲苯(xylene)中移除石蠟，並以一系列濃度梯度的乙醇回復樣本。脫蠟的樣本在室溫下以1 N HCl處理1小時，而後再進行免疫螢光染色。

進行免疫染色分析前，將脫臘的組織切片以10%山羊血清和5%的BSA處理約1小時以進行阻斷。之後以抗-軟骨蛋白聚醣(稀釋比1：100)、抗-第二型膠原蛋白(稀釋比1：100)與抗-BrdU(稀釋比1：100)的一級抗體在37℃下培育2小時，再和與適當螢光染劑結合之驢IgG抗體於室溫下培育1小時。之後將樣本和Hoechst 33258染劑接觸約7分鐘，以進行細胞核的對比染色(counter staining)，經染色的細胞核呈現藍色。

使用Zeiss螢光顯微鏡(Zeiss epifluorescence microscope)來擷取樣本影像。計算細胞數目時，從每一個樣本中隨機選取20個視野，由不知道實驗分組的人員人力計算，並重複三次。

<RNA萃取與反轉錄聚合酶連鎖反應>

反轉錄聚合酶連鎖反應(reverse-transcription polymerase chain reaction，簡稱RT-PCR)分析方法如下。利用TRIzol自細胞內萃取出全RNA，並以不含核糖核酸水解酶(RNase-free)的第一型去氧核糖核酸水解酶(DNase I)(Qiagen,Santa Clarita,CA)處理以移除基因組DNA，之後以RNA純化套組Dynabeads進行純化。在20 μl的反應緩衝液(含0.25 μg的隨機引子與0.8 mM去氧核糖核苷三磷酸鹽(dNTPs))中加入1 μg取自BM-MSC的全RNA與200單位的反轉錄酶(Roche,Mannheim,Germany)，於42℃下反應1小時，以將RNA反轉錄為cDNA。

在後續的PCR反應中，取2 μl的cDNA作為反應模板。PCR反應的反應體積為30 μl，其中含有15 μl的EconoTaq® PLUS GREEN 2× Master Mix(Lucigen® Corp.)、1 μM的各種引子以及2 μl的模板DNA。合成cDNA的增殖反應約18-22個循環(變性：20秒、94℃；黏合：30秒、57℃；以及聚合：40秒、72℃)。每種引子組所用的循環數落在擴充的線性範圍內。用以增殖大白鼠軟骨蛋白聚醣(aggregan)基因(註冊號：J03485)的引子組包含正向引子(TTGGAAATCCAGAACCTTCG；序列編號：12)與反向引子(GTCCAGTGTGTAGCGTGTGG；序列編號：13)，其PCR產物大小約149 bp。另外以大白鼠甘油醛3-磷酸去氫酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，簡稱GAPDH)基因(註冊號：X02231.1)作為管家基因(housekeeping gene)，以將基因表現量標準化。用以增殖GAPDH基因的引子組包括正向引子(AGACAGCCGCATCTTCTTGT；序列編號：14)與反向引子(CTTGCCGTGGGTAGAGTCAT；序列編號：15)，而PCR產物的大小約207 bp。利用含有溴化乙錠(ethidium bromide)的2%洋菜膠對PCR產物進行電泳分析，並以UV光照使其顯影。利用FUJI LAS-3000系統與Multi Gauge Ver.1.01軟體(Fujifilm,Tokyo,Japan)對PCR產物進行光密度法定量分析。

<統計分析>

將結果表示為平均值±平均值的標準差(standard error of the mean，SEM)。利用單向(one-way)ANOVA分析來進行統計比較。除非另有說明，P <0.05時具有統計上的顯著差異。

實驗例1 PEDF胜肽可於活體內促進軟骨細胞擴增與軟骨再生

膝蓋的骨性關節炎是一種常見的慢性退化性疾病，其特徵在於關節軟骨的減損。單碘乙酸是一種糖解(glycolysis)抑制劑，已知將MIA注射至鼠類的股脛關節空間(femorotibial joint space)會引發關節軟骨的流失，此過程與人類骨性關節炎的症狀相近。研究顯示，在注射MIA後7天，通常會出現嚴重的軟骨細胞退化與壞死等情形。因而，本實驗例中，在MIA注射後第8天開始進行PEDF治療，以探究此處提出的PEDF胜肽是否可促進軟骨再生。

將MIA注射後的大白鼠隨機分派至六個實驗群組，每組6隻，並分別接受以下處理。HA組的大白鼠接受25 μl濃度為5%的玻尿酸注射。在載體/HA組中，將DMSO載體溶於25 μl的5%玻尿酸中，而後注射至大白鼠體內。在29-mer/HA、24-mer/HA、20-mer/HA與18-mer/HA等組別中，將0.2 mM PEDF胜肽(29-mer、24-mer、20-mer或18-mer)溶於25 μl的5%玻尿酸中，而後注射至大白鼠體內。以上處理皆透過單一劑關節內注射，分別在MIA注射後第8、12、16與20天注射一次。

在MIA注射後第18天與第25天取得關節樣本，經H&E染色後的代表性照片如第1圖所示。將載體/HA組和18-mer/HA組和未接受MIA注射的正常關節(正常組)相比較，可以發現到MIA注射會導致和骨性關節炎類似的關節形態改變，包括軟骨組織變小、軟骨表面纖維化以及軟骨下骨(subchondral bone)崩壞等，這些變化在承受體重的部位尤其明顯。相較於載體/HA組和18-mer/HA組，在接受20-mer/HA處理的組別中，軟骨表面較為平滑，且軟骨和軟骨下骨相對較為完整。其他PEDF胜肽諸如29-mer與24-mer處理(資料未示出)亦可產生和20-mer類似的效果。這些結果顯示此處提出的PEDF胜肽可以改善與骨性關節炎相關的病理學特徵。

正常軟骨是層狀結構的組織，根據功能和結構可將其分成表層區(superficial zone)、中層區(middle zone；又稱過渡區(transitional zone))以及深層區(deep zone；又稱徑向區(radial))等三層。當膝關節活動時表層區的平滑表層提供足夠的潤滑度用於緩衝應力；本區約佔整個關節軟骨厚度的10%至20%。中層區約佔關節軟骨的40%至60%，其細胞分泌蛋白多醣和膠原纖維，以提供足夠的支撐力。深層區約佔軟骨的30%，主要是由直徑較大的膠原蛋白纖維所組成，其排列方向與關節表面垂直對抗剪應力。表層區中的軟骨細胞多成狹長紡錘狀，膠原蛋白纖維的排列非常規則，且與關節面平行。中層區中膠原蛋白的白列較不規則，且軟骨細胞外型較圓(相較於表層中的軟 骨細胞)。深層區中的軟骨細胞通常成條狀(columnar)，且和膠原蛋白纖維的方向平行並垂直於關節線。在第2圖的代表性照片中，可以觀察到此種層狀構造，所示照片係取自MIA注射後25天的膝關節樣本。

由第2圖的照片可以看出，正常軟骨中的細胞數目較低(hypoccllular)；而經過載體/HA處理的膝蓋中，可以觀察到表層區中的軟骨細胞大量流失，且在中層區與深層區中，可以看到有退化細胞聚集成群(如箭頭所指處)。相較之下，在29-mer/HA與20-mer/HA組中，可以看到整個軟骨內皆有大量新生成的軟骨細胞。此外，在經過此處提出之PEDF胜肽處理的膝蓋中，每一層中的軟骨細胞呈現較規則的排列。一般來說，軟骨再生的過程包含軟骨細胞增殖以及結構重組兩個部分；由此可知，此處提出的PEDF胜肽可促進軟骨再生過程。

骨性關節炎會導致軟骨退化引起軟骨內細胞間質(如軟骨蛋白聚醣與第二型膠原蛋白)的流失。如第3圖左方照片所示，在經過20-mer處理的軟骨細胞中，其表層區、中層區與深層區內皆可看到大量對軟骨蛋白聚醣呈陽性反應的信號(綠色)；相較之下，在經過載體處理的軟骨中，僅可觀察到微弱的螢光信號。利用抗-第二型膠原蛋白抗體來染色膝關節切片，亦可觀察到相似的結果(資料未示出)。即此處提出的PEDF胜肽有助於保持細胞外間質的含量，此一結果與此處提出之PEDF胜肽可促進軟骨修復的論點相呼應。此外，利用軟骨蛋白聚醣染色亦可觀察軟骨 細胞的族群大小，結果顯示經20-mer處理之軟骨內，軟骨細胞的數目高於經載體處理的軟骨。

對軟骨蛋白聚醣與細胞核(以Hoechst 33258染料染成藍色)進行雙重免疫螢光染色，代表性照片如第3圖中間所示；結果顯示，在20-mer/HA組中，有超過95%的細胞對軟骨蛋白聚醣呈陽性反應；意味著此處提出的PEDF胜肽能夠藉由引發軟骨細胞擴增而促進軟骨癒合。

此外，利用抗-BrdU抗體進行免疫組織分析，結果顯示相較於載體/HA組，在20-mer/HA組中，BrdU-陽性細胞的數目較多(第3圖右方照片)。根據上文所述的方法，於每一個膝關節樣本中取三個切片(每組6隻大白鼠)，以進行定量分析。以BrdU/軟骨蛋白聚醣標記指數(%)來表示對BrdU和軟骨蛋白聚醣皆呈陽性之細胞，其計算方式係將BrdU-與軟骨蛋白聚醣-雙陽性細胞的數目除以軟骨蛋白聚醣-陽性細胞數，並以百分比表示之。定量分析結果摘要整理於表1；*P <0.0001相較於載體/HA組。

表1的數據指出以此處提出的PEDF胜肽(如，29-mer、24-mer與20-mer)進行處理，可促進軟骨細胞擴增(相較於HA組或載體/HA組)。亦可注意到，不含「SLGA殘基」的18-mer則不具有所述的促進效果。

軟骨細胞擴增為軟骨再生的重要機制。總結來說，實驗例1的結果顯示此處提出的PEDF胜肽能夠有效促進受損軟骨中的軟骨細胞擴增。因而，此處提出的PEDF胜肽可促進軟骨再生。

實驗例2 PEDF胜肽可於活體外促進關節軟骨細胞擴增

由大白鼠關節軟骨分離出細胞，並培養於添加或不添加PEDF胜肽的培養基中，以探究此處提出的PEDF胜肽是否可刺激軟骨細胞擴增。

第4A圖的照片顯示出當培養基中含有此處提出的PEDF胜肽時，軟骨細胞的生長速度較快，且會聚集成較大的聚落。相較之下，在不含PEDF胜肽的載體組中，軟骨細胞聚落較小。另外，免疫染色分析顯示聚落為軟骨蛋白聚醣陽性，確認聚落中細胞主要是軟骨細胞，結果如第4A圖插入的照片所示。關節軟骨分離出的細胞在單層培養系統中隨機選取20個視野來定量對軟骨蛋白聚醣呈陽性的細胞數目(第4B圖)，並以軟骨蛋白聚醣標記指數(%)來表示，此數值是將經軟骨蛋白聚醣標記的細胞數目除以細胞總數(以Hoechst 33258染料標記細胞核)並以百分比 表示。定量分析結果摘要整理於表2；*P <0.01相較於未處理組。

總結來看，此處提出之PEDF胜肽(如29-mer、24-mer與20-mer)可促進培養系統內的軟骨細胞擴增；此一結果可支持上文實驗例1的結論，即，此處提出的PEDF胜肽可於活體內刺激軟骨細胞擴增。此外，經培養之軟骨細胞中軟骨蛋白聚醣含量較高，亦可與上文所述的活體內軟骨基質再生之結果相呼應。

實驗例3 PEDF胜肽可促進間葉幹細胞分化為軟骨細胞

在軟骨修復過程中，間葉幹細胞被認為是產生軟骨細胞的來源。本實驗例的目的再探究此處提出的PEDF胜肽是否可促進培養中的間葉幹細胞分化為軟骨細胞。

根據上文「材料與方法」一節所述的步驟來分離並培養間葉幹細胞，並利用RT-PCR分析來定量軟骨蛋白聚醣mRNA的表現量，所得結果以GAPDH基因的表現量進行標 準化。將載體組的表現率設定為1，以計算其他組別中mRNA表現量相對於載體組的誘導率(fold of induction)，結果摘要整理於表3；*P <0.0002相較於載體組。

由表3可以看出，培養於標準增殖培養基中的間葉幹細胞內幾乎無法偵測到軟骨蛋白聚醣mRNA的表現。相反地，當培養於促進軟骨細胞生成之培養基內時，有大量的間葉幹細胞分化為軟骨細胞，而能夠觀察到大量的軟骨蛋白聚醣mRNA表現(載體組)。若將細胞培養於含有此處所述之PEDF胜肽(如29-mer、24-mer與20-mer)的培養基中，則會使得軟骨蛋白聚醣mRNA的表現量至少提高為載體組的3.5倍。此外，以18-mer(即，不含所述SLGA殘基的PEDF胜肽)處理時，則無法促進間葉幹細胞朝向軟骨細胞分化。

亦對細胞進行軟骨蛋白聚醣與第二型膠原蛋白的染色，以探討此處提出之PEDF胜肽於促進分化的活性。隨機選取20個視野後，定量軟骨蛋白聚醣-陽性細胞，並以軟骨蛋白聚醣標記指數(%)來表示，其計算方式是將經 軟骨蛋白聚醣標記的細胞除以細胞總數(以Hoechst 33258染料標記細胞核)，再以百分比表示。結果摘要整理於表4；*P <0.0001相較於載體組。

表4的結果顯示，當培養基中加入此處提出的PEDF胜肽(如，29-mer、24-mer與20-mer)時，會有更多細胞分化為軟骨細胞(相較於載體組)。相較之下，18-mer則無法提供這種促進間葉幹細胞分化為軟骨細胞的效果。總結來看，這些結果顯示此處提出的PEDF胜肽可促進間葉幹細胞朝向軟骨細胞分化。

本揭示內容首度證實短的PEDF合成胜肽對於骨性關節炎所導致的軟骨損傷有保護效果。相較於先前技術通常對個體投予可表現全長PEDF胜肽的載體，此處提出的短、合成PEDF胜肽在使用上不但較為安全，且成本也相對低廉。

雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不悖離本發明之原理與精神的情形下，當可對其進行各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍 當以附隨申請專利範圍所界定者為準。

為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：第1圖包含於本發明一實驗例中，經H&E染色之膝關節樣本的代表性照片(F：股骨髁(femoral condyle)；T脛骨髁：(tibial condyle)；M：半月軟骨(meniscus))；第2圖為第1圖所示之膝關節組織切片的代表性顯微照片(原始倍率：400倍)；第3圖包含於本發明另一實驗例中，經免疫染色之膝關節樣本的代表性照片(原始倍率：1000倍)；以及第4圖包含於本發明又一實驗例中，經免疫染色之大鼠關節軟骨細胞的代表性照片(右圖原始倍率：1000倍)。

<110> 財團法人台灣基督長老教會馬偕紀念社會事業基金會馬偕紀念醫院

<120> 色素上皮衍生因子衍生之多胜肽於治療骨性關節炎之用途

<130> P2733-TW

<160> 15

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胜肽

<400> 1

<210> 2

<211> 34

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胜肽

<400> 2

<210> 3

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胜肽

<400> 3

<210> 4

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胜肽

<400> 4

<210> 5

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胜肽

<400> 5

<210> 6

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胜肽

<400> 6

<210> 7

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胜肽

<400> 7

<210> 8

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胜肽

<400> 8

<210> 9

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胜肽

<400> 9

<210> 10

<211> 44

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胜肽

<400> 1

<210> 11

<211> 418

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 11

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 12

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 13

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 14

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 15

Claims (7)

1. 一種合成胜肽之用途，其係用於製備治療一個體的骨性關節炎之藥學組合物，該合成胜肽係由一長度為20-39個胺基酸殘基的胺基酸序列所組成，其中該胺基酸序列包含至少20個連續胺基酸殘基，其與序列編號：1的第11-30個胺基酸殘基具有100%的胺基酸序列相似度。
2. 如請求項1所述的用途，其中該個體為一人類。
3. 如請求項1所述的用途，其中該藥學組合物更包含：一藥學上可接受的賦型劑。
4. 如請求項1所述的用途，其中該藥學組合物更包含一糖胺聚多醣。
5. 如請求項4所述的用途，其中該糖胺聚多醣為玻尿酸或玻尿酸鈉。
6. 如請求項1所述的用途，其中該藥學組合物之劑型為溶液、噴劑、氣霧劑、泡沫、乳霜、乳液、乳膏、凝膠或敷料。
7. 如請求項1所述的用途，其中該藥學組合物更包含一穿透促進劑。