TWI483730B - 具生物活性之真菌組合物及其製備方法 - Google Patents
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- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
本發明涉及一種真菌之生物活性組合物及其製備方法，該方法尤指分離純化薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)之代謝產物，用以製備化合物。
真菌薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)，屬於散囊菌目發菌科麴黴屬之一種真菌，可生長於土壤、糞、酒麴、食品、望遠鏡筒內壁及各種材料的基物上；在海洋此真菌為珊瑚致病性之一種病原體。崔傳明於2010年《中國科學院研究生院(海洋研究所)》報導有關五株海洋真菌次生代謝產物及其生物活性研究，發現其代謝產物具備抗氧化以及抑制人類肝癌細胞株之活性。杜豐玉於2011年中國科學院大學報導有關兩株海洋真菌次生代謝產物及其生物活性研究，發現對金黄色葡萄球菌具備抑制活性之次生代謝產物。
全世界約有兩億五千萬糖尿病人口，佔全世界總人口數的3.5%，因此發展有效的糖尿病藥物已變成研發的目標。本研究團隊歷年來從真菌尋找具有此類生理活性化合物，加以積極研發；例如香椿萃取物治療糖尿病之發明，或是經由化學修飾合成chalcone型化合物用於糖尿病之發明。
職是之故，發明人鑒於習知技術之缺失，乃思及改良發明之意念，終能發明出本案之「具生物活性之真菌組合物
及其製備方法」。
本案之主要目的在於提供一種組合物之用途，其係用於製備增加葡萄糖利用率之藥劑，該組合物包含薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)之萃取物。
本案之另一目的在於選自式(II)或式(III)之一化合物，提供為有效量之主成分以及包含藥學上可接受之載體；用於製備增加葡萄糖利用率之藥劑，該式(II)、式(III)、式(IV)係如所示之結構，
其中R7為帶有雙鍵氧基之基團，R11可任選自羥基、C1~3之烷
氧基之一；R8可選自氫基、羥基、C1~3之烷氧基、C1~5之烷基基團。
於具體實施例，增加葡萄糖利用率係涉及與糖尿病及新陳代謝疾病；或與胰島素合併投藥，可增強胰島素之效果；或抑制脂肪在細胞內囤積。
本案尚有另一目的在於提供式(I)化合物，係純化自薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)之萃取物。
其中R1、R2、R3、R4、R5可選自氫基、羥基、C1~3之烷氧基、C1~5之烷基基團、
C1~5含單一雙鍵之烯基基團之一；
若R3、R4合併時可為帶有雙鍵之亞甲基(-CH2)；
或R1、R2、R3、R4、R5之一可為帶有雙鍵氧基之基團，R11
可任選自氫基、羥基、甲氧基之一。
為了讓本發明之上述目的、特徵、和優點能更明顯易懂，下文特舉較佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明。
第一圖：其係真菌萃取物分離流程圖
第二圖：其係化合物之葡萄糖利用率評估
第三圖：其係化合物4之油滴累積試驗
第四圖：其係脂肪細胞油滴定量觀察化合物4之細胞內油滴含量。
從粗萃物製備化合物
薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)購自生物資源保存中心(BCRC)，在25℃、150rpm迴旋震盪速度，培養在馬鈴薯營養液(PDB)，總共收集的發酵液，以濾紙分開菌絲體與培養液，過濾後，如第一圖所示，分離萃取物流程，以乙酸乙酯(EtOAc)萃取培養液，獲得粗萃物。
粗萃物經減壓濃縮，以Sephadex之管柱層析共獲得F1-F4之劃分層。F1劃分層，以矽膠管柱層析分離，獲得F1-1~F1-6之劃分層。F1-2劃分層經過各種管柱層析方法與高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)純化，獲得化合物1(18.9mg)、3(2.1mg)和7(9.4mg)。化合物4(236.2mg)經由劃分層F1-4經由矽膠管柱層析以二氯甲烷：乙酸乙酯(6：1)混合溶劑沖提，並搭配HPLC純化而獲得此化合物。
劃分層F1-5以矽膠管柱層析方法二氯甲烷與甲醇為溶劑系統，
再以HPLC純化而獲得化合物6(5.2mg)和11(70.0mg)。
劃分層F1-6以二氯甲烷與甲醇(6：1)混合溶劑系統，矽膠管柱層析方法分離獲得化合物2(3.1mg)和5(34.9mg)。化合物8(20.4mg)，從劃分層F2以矽膠管柱層析二氯甲烷與甲醇(14：1)為溶劑系統，並以HPLC進一步純化獲得此化合物。
劃分層F4，經二氯甲烷與甲醇溶劑系統之矽膠管柱層析分離純化，以漸增極性沖提獲得9(8.0mg)和10(4.1mg)。上述之部份化合物，係以十八烷基矽烷(Octadecylsilyl,ODS hypersil)Thermo公司管柱，經乙腈(acetonitrile)與水之不同比例混合溶液之HPLC條件獲得。
所獲得11個化合物，經物理性質數據以及1H-NMR及13C-NMR之核磁共振光譜判定結構式，分別隸屬於没藥烷型倍半萜(bisabolane-type sesquiterpenoids)、山酮(xanthones)以及酚類(phenolic)等共分為式(I)、式(II)、式(III)或式(IV)等四類，
其中R1、R2、R3、R4、R5可選自氫基、羥基、C1~3之烷氧基、C1~5之烷基基團、C1~5含單一雙鍵之烯基基團之一；若R3、R4合併時可為帶有雙鍵之亞甲基(-CH2)；
或R1、R2、R3、R4、R5之一可為帶有雙鍵氧基之基團，R11
可任選自氫基、羥基、甲氧基之一。
而R7為帶有雙鍵氧基之基團，R11可任選自羥基、C1~3之烷氧基
之一；
R8可選自氫基、羥基、C1~3之烷氧基、C1~5之烷基基團。
從薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)分離純化之11個化合物，為如下所示結構式：
上述化合物之化學名稱，分別為化合物1為7-甲基斯杜醇((7S)-(+)-7-O-methylsydonol)；化合物2為7,12-二羥基二甲基已二醇羥苯甲酸((7S,11S)-(+)-12-hydroxysydonic acid)；化合物3為7-脫氧基-7,14-二脫氫基斯杜醇(7-deoxy-7,14-didehydrosydonol)；化合物4為斯杜醇((S)-(+)-sydonol)；化合物5為7-羥基二甲基已烷基羥苯甲酸((S)-(+)-sydonic acid)；化合物6為7-脫羥基華爾特醇B(anhydrowaraterpol B)；化合物7為1-羥基三甲基庚烯基甲基苯酚
((E)-5-(hydroxymethyl)-2-(6'-methylhept-2'-en-2'-yl)phenol)；化合物8為氧雜蒽酮甲氧基酯(AGI-B4)；化合物9為薩多汶B(sydowinin B)；化合物10為薩多汶A(8-hydroxy-6-hydroxymethyl-9-oxo-9H-xanthene-1-carboxylic acid methyl ester,sydowinin A)；化合物11為二羥基甲基苯醚(3,3'-Dihydroxy-5,5'-dimethyldiphenyl ether,diorcinol)。
已知第二型糖尿病與肥胖有密切的關連性，此類糖尿病患者通常需要以口服抗糖尿病藥物改善胰島素抗阻性，或利用藥物促進胰島素的釋放，增加血中胰島素濃度達到穩定血糖之效果。目前市售用於此類型病患的藥物以胰島素增敏劑二巰基噻二唑(Thiazolidinedione,TZD)最有名。最近研究指出，由於噻唑類型藥物具有抗糖尿病效果以及抗發炎之活性，因而評估此類型糖尿病藥物，著眼於相近似之功能。此外噻唑類型藥物存在着造成脂質堆積、肥胖等問題，造成長期服用病患必須在飲食上注意相當多的禁忌，避免造成體重增加、大量的脂肪累積、水腫、貧血及鬱血性心衰竭。
以小鼠前趨脂肪細胞株3T3-L1進行葡萄糖利用率試驗，分析細胞外的葡萄糖濃度，評估從薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)分離純化之11個化合物，觀察添加化合物後的葡萄糖濃度是否有所改變。如第二圖顯示，在未加入待測化合物時，對照組細胞外的葡萄糖濃度427.4±1.1mg/dL，當添加0.32μM胰島素濃度後，葡萄糖濃度則降低為404.9±11.5mg/dL。而當各待測化合物濃度30μg/mL與0.32μM胰島素合併加入後，細胞外的葡萄糖濃度與對照組比較都有顯著性的差異，尤其以化合物4與胰島素合併作用後降低葡萄糖濃度的程度更為顯著，與對照組比較大約降低24%以上，顯示此化合物具有較佳的葡萄糖利用率並且與胰島素合併使用可增強胰島素之效果。化合物8與0.32μM胰島素合併使用後，在顯微鏡下觀察，發現脂肪細胞有凋亡現象，推測此化合物可能具有細胞毒殺或抗癌之效
果。
觀察葡萄糖利用率增高之同時，評估能否將葡萄糖轉換為脂肪儲存在細胞內，如第三圖顯示，化合物4比對照組與胰島素組之油滴累積程度明顯地變少，與胰島素組比較可發現油滴含量大約降低48%。如第四圖顯示化合物4不僅可有效地增加葡萄糖利用效果且能抑制脂肪在細胞內囤積。
從薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)所獲得11個化合物，經測定超氧自由基陰離子之釋放評估抗發炎活性的表現。如表一數據得知，除化合物3及10外，都具有抑制一半以上超氧自由基陰離子釋放之活性，其中化合物4、7、8與陽性對照組索拉非尼(sorafenib)比較，具有較佳的抑制超氧自由基陰離子釋放活性，其中又以化合物4具有較佳的抑制效果其IC50數值為5.23±0.55μM。而在彈性蛋白酶釋出的表現上，如表二數據得知，化合物8的表現較佳其IC50數值為6.60±0.16μM，此結果顯示化合物4不僅在抗糖尿病藥物具有發展潛力，其在抗發炎的效果上呈現頗佳之的候選先導藥物。
[d]N.D.表示無測定。
評估葡萄糖利用率
將購自生物資源保存中心(BCRC)之小鼠前趨脂肪細胞株3T3-L1，以450mg/dL葡萄糖(D-glucose)、0.32μM胰島素(insulin)、0.5mM3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)及1μM氟化甲基氫皮質醇(dexamethasone)誘導分化為成熟脂肪細胞48小時後更換細胞培養液。該培養液含葡萄糖100mg/dL、DMEM培養基、10%胎牛血清(Fetal Bovin Serum,FBS)、100U/mL青黴素(penicillin)，以及100μg/mL鏈黴素(streptomycin)。
將細胞區分為以下組別：(i)培養液中加入450mg/dL葡萄糖為對照組；(ii)培養液中加入450mg/dL葡萄糖及0.32μM胰島素為胰島素組；(iii)培養液中加入450mg/dL葡萄糖、0.32μM胰島素及30μg/mL之待測化合物。24小時後，以化學分析儀(Roche Cobas Integra 400 Chemistry Analyzer,Roche Diagnostics,Taipei,Taiwan)血糖機測定細胞培養液內之葡萄糖濃度，以測定待測化合物是否能促進增加葡萄糖利用率
脂肪細胞油滴染色試驗
將上述試驗之小鼠前趨脂肪細胞株3T3-L1，利用油紅染色法(oil Red O dye)進行油滴染色。脂肪細胞以10%甲醛(formaldehyde)固定後再以油紅染色法染色，將細胞中之油滴染成紅色。利用100%異丙醇(isopropanol)溶解細胞後，以超微量分光光度計(Thermo Multiskan Ascent microplate reader)，490nm測定其吸光值。吸光值越高則表示脂肪細胞油滴形成越多。
超氧自由基釋放測定方法
將含有0.5mg/ml高鐵細胞色素c(ferricytochrome c)，1mM氯
化鈣(CaCl2)與氯化鈣鎂(MgCl2)的嗜中性白血球懸浮液(1×106cells/ml)，在37℃攪拌狀態下預熱2分鐘。加入待測化合物作用5分鐘後，再以0.1μM N-甲醯-甲硫氨醯-亮氨醯-苯丙氨酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLP)/1μg/ml細胞松弛素(cytochalasin B,CB)或50nM佛波醇-12-豆蔻酸-13-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)反應10分鐘，經以紫外光/可見光分光光度計(Hitachi,U3010)於波長550nm下，持續監測吸光值變化。評估嗜中性白血球所釋出超氧陰離子自由基(O2 ‧-)含量，而消光係數(extinction coefficient)21.1/mM/cm，可經由100U/ml超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)抑制ferricytochrome c還原，計算得知。計算公式如下：
△A550=extinction coefficient×1×△C
△C=△A550(21.1/mM/cm×1cm)
△C=△A550×47.4nmol/ml
其中△A550為測得的吸光值減去SOD抑制組之吸光值，△C為O2 ‧-的生成量。結果以A550或1×106細胞每10分鐘產生超氧化物衍生量(superoxide generation)，nmol表示。以索拉非尼(Sorafenib)作為陽性對照組。
彈性蛋白酶酵素測定方法
人白細胞彈性蛋白酶(PMN elastase,HLE.EC3.4.21.37)為酶靶，MeO-Suc-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide為該彈性蛋白酶(elastase)所需的基質(substrate)，根據酶反應原理，通過酶標儀高效率測定特定吸收值，評估抗炎作用。
將含有MeO-Suc-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide的嗜中性白血球懸浮液(1×106cells/ml)，在37℃攪拌狀態下預熱2分鐘，加入代測化合物作用5分鐘後，再以fMLP(0.1μM)/cytochalasin B(CB,0.5μg/mL)反
應10分鐘，以紫外光/可見光分光光度計(Hitachi,U3010)於波長405nm之下測量其吸光值變化。以索拉非尼(Sorafenib)作為陽性對照組。
上述賦形劑或稱為『藥學上可接受之載體或賦形劑』、『生物可利用之載體或賦形劑』，係包括溶媒、分散劑、包衣、抗菌或抗真菌劑，保存或延緩吸收劑等任何習知用於製備成劑型之適當化合物。通常此類載體或賦形劑，本身不具備治療疾病之活性，且將本技術所揭示之衍生物，搭配藥學上可接受之載體或賦形劑，製備之各劑型，投與動物或人類不致於造成不良反應、過敏或其它不適當反應。因而本技術所揭示之衍生物，搭配藥學上可接受之載體或賦形劑，係適用於臨床及人類。”有效地劑量”係代表足以改善或防止醫學症狀或生物體狀態之劑量。有效地劑量亦說明投與化合物之劑量足供用於診斷之劑量。除非說明書另有敘述，否則『活性化合物』以及『醫藥活性化合物』於此均可替換使用，係指稱一具有製藥學、藥理學或治療效果之物質。
運用本化合物之劑型經由靜脈、口服、吸入或經由鼻、直腸、陰道等局部或舌下等方式投藥，可達到治療效果。對於不同病症之患者，約每日投與0.1mg至100mg之活性成份。
該載體隨各劑型而不同，無菌注射之組成物可將溶液或懸浮於無毒之靜脈注射稀釋液或溶劑中，此類溶劑如1,3-丁二醇。其間可接受之載體可為甘露醇(Mannitol)或水。此外固定油或以合成之單或雙甘油酯懸浮介質，係一般習用之溶劑。脂肪酸，如油酸(Oleic acid)、橄欖油或蓖麻油等與其甘油酯衍生物，尤其經多氧乙基化之型態皆可作為製備注射劑並為天然醫藥可接受之油類。此等油類溶液或懸浮液可包含長鏈酒精稀釋液或分散劑、羧甲基纖維素或類似之分散劑。其他一般使用之介面活性劑如Tween、Spans或其他
相似之乳化劑或是一般醫藥製造業所使用於醫藥可接受之固態、液態或其他可用於劑型開發之生物可利用增強劑。
用於口服投藥之組合物則係採用任何一種口服可接受之劑型，其型式包括膠囊、錠劑、片劑、乳化劑、液狀懸浮液、分散劑、溶劑。口服劑型一般所使用之載體，以錠劑為例可為乳糖、玉米澱粉、潤滑劑，如硬脂酸鎂為基本添加物。而膠囊使用之稀釋液包括乳糖與乾燥玉米澱粉。製成液狀懸浮液或乳化劑劑型，係將活性物質懸浮或溶解於結合乳化劑或懸浮劑之油狀介面，視需要添加適度之甜味劑，風味劑或是色素。
鼻用氣化噴霧劑或吸入劑組成物，可根據已知之製劑技術進行製備。例如，將組成物溶於生理食鹽水中，添加苯甲醇或其他適合之防腐劑，或促吸收劑以增強生物可利用性。本技術所揭示化合物之組合物亦可製成栓劑，進行經直腸或陰道之投藥方式。
本技術所揭示化合物亦可運用『靜脈投藥』，其係包括經由皮下、腹腔、靜脈、肌肉，或關節腔內、顱內、關節液內、脊髓內注射，主動脈注射，胸腔注射，疾病部位內注射，或其他適合之投藥技術。
實施例：
實施例一 製備粗萃物
從生物資源保存中心(Breast Cancer Resource Center,BCRC)所購買之薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)，在25℃、150rpm的迴旋震盪速度，培養在馬鈴薯營養液(potato dextrose agar,PDB)，經10天後，總共收集12公升的發酵液。利用濾紙將菌絲體與培養液分開，過濾後之培養液，再以乙酸乙酯(EtOAc)萃取三次，共獲獲得粗萃物0.8克。
馬鈴薯營養液(PDB)之詳細組成，24克馬鈴薯營養液溶於1
公升水。DifcoTM Potato Dextrose Broth(PDB)，購自BD公司(Becton,Dickinson and Company)。
實施例二 管柱層析之分離
將粗萃物0.8克裝載於Sephadex為層析材料，甲醇為沖提液之管柱，經管柱層析分離，共獲得F1-F4之4個劃分層。
將F1劃分層裝載於矽膠管柱，以二氯甲烷和甲醇(29：1)為沖提液，經矽膠管柱層析分離，共獲得F1-1~F1-6之6個劃分層。
將F1-2劃分層，經過各種管柱層析方法，獲得6個劃分層。
經由HPLC純化獲得化合物1(18.9mg)、3(2.1mg)和7(9.4mg)。
化合物4(236.2mg)經由劃分層F1-4經由矽膠管柱層析以二氯甲烷：乙酸乙酯(6：1)混合溶劑沖提，並搭配HPLC純化而獲得此化合物。
劃分層F1-5以矽膠管柱層析方法二氯甲烷與甲醇為溶劑系統，再以HPLC純化而獲得化合物6(5.2mg)和11(70.0mg)。
劃分層F1-6以二氯甲烷與甲醇(6：1)混合溶劑系統，矽膠管柱層析方法分離，經薄層層析(TLC)方法確認，獲得化合物2(3.1mg)和5(34.9mg)。化合物8(20.4mg)從劃分層F2以矽膠管柱層析二氯甲烷與甲醇(14：1)為溶劑系統並以HPLC進一步純化獲得此化合物。
劃分層F4經矽膠管柱層析分離純化，以二氯甲烷與甲醇溶劑系統，從漸增極性沖提，經薄層層析(TLC)方法確認，獲得9(8.0mg)和10(4.1mg)。
實施例三 HPLC之分離
依照HPLC之條件獲得化合物1、3、4、6、7、8、11，藉由HPLC方法，建立指紋圖譜之參考依據。將樣品濃度配製為50毫克/毫升，
取樣100μL，其中使用內徑(I.D.)為10毫米、長度(L)為250毫米且顆粒大小為5微米之ODS管柱，偵測波長為215nm。
分離化合物1、3、7的HPLC條件係以十八烷基矽烷(Octadecylsilyl,ODS Hypersil)Thermo公司管柱(250×10mm,5μm,2.5mL/min)，流動相組成為乙腈(acetonitrile)與水之80：20(v/v)溶液。分離化合物4的HPLC條件，十八烷基矽烷(ODS Hypersil)Thermo公司管柱(250×10mm,5μm,2.5mL/min)，流動相組成為乙腈與水之60：40(v/v)。分離化合物6、11的HPLC條件，十八烷基矽烷(ODS Hypersil)Thermo公司管柱(250×10mm,5μm,2.5mL/min)，流動相組成為乙氰與水之35：65(v/v)。分離化合物8的HPLC條件，十八烷基矽烷(ODS Hypersil)Thermo管柱(250×10mm,5μm,2.5mL/min)，流動相組成為乙腈與水之50：50(v/v)。
實施例四 純化化合物之數據
氫核磁共振光譜(1H-NMR)係利用氘代氯仿(CDCl3)400MHz、600MHz測定，碳核磁共振光譜(13C-NMR)氘代氯仿100MHz、150MHz測定，異核單量子關係(heteronuclear singular quantum correlation，HSQC)，多鍵碳氫關係(Heternuclear Multiple Bonding Correlation，HMBC)。
化合物1 7-甲基斯杜醇((7S)-(+)-7-O-Methylsydonol)：colorless gum；+1.87(c 1.69,CH2Cl2)；紅外光譜(IR,Neat)νmax 3308,2952,2869,1627,1575,1459,1265,1160,1042cm-1；紫外光譜(UV,CH3OH)λ max(log ε)207(4.30),223(3.99),279(3.64)nm；1H-NMR(CDCl3,600MHz)與13C-NMR(CDCl3,150MHz)
數據，分別列於表三；正離子模式質譜(MS-ESI+)m/z 289[M+Na]+；HRMS(ESI+)m/z calcd for C16H26O3Na[M+Na]+ 289.1779,found 289.1780
化合物2 7,12-二羥基二甲基已二醇羥苯甲酸((7S,11S)-(+)-12-Hydroxysydonic acid)：colorless oil；+3.9(c 0.39,CH3OH)；IR(Neat)νmax 3385,2928,1704,1575,1392,1228,1030cm-1；UV(CH3OH)λ max(log ε)210(4.59),241(4.15),294(3.70)nm；1H-NMR(CD3OD,400MHz)與13C-NMR(CD3OD,100MHz)數據，分別列於表三。
(MS-ESI+)m/z 305[M+Na]+；HRMS(ESI+)m/z calcd for C15H22O5Na[M+Na]+ 305.1362,found 305.1365
化合物3 7-脫氧基-7,14-二脫氫基斯杜醇(7-Deoxy-7,14-didehydrosydonol)：colorless oil；IR(Neat)νmax 3335,2953,2927,1608,1423,1289,1027cm-1；UV(CH3OH)λ max(log ε)209(4.75),238(4.22),283(3.95),333(3.58)nm；1H-NMR(CDCl3,600MHz)與13C-NMR(CDCl3,150MHz)數據，分別列於表三；MS(ESI+)m/z 257[M+Na]+；HRMS(ESI+)m/z calcd for C15H22O2Na[M+Na]+ 257.1516,found 257.1517
依照相關文獻資訊，而判定結構式；化合物4之參考文獻為Kudo,S.et al.,Biosci.Biotech.Bioch.2009,73,203；化合物5之參考文獻為Hamasaki,T.Et al.,Agr.Biol.Chem.1978,42,37以及Li,D.Et al.,Mar.Drugs 2012,10,234；化合物6之參考文獻為Henne,
P.Et al.,Liebigs Ann.Chem.1993,1993,565；化合物7之參考文獻為Sumarah,M.W.Et al.,Phytochemistry 2011,72,1833；化合物8之參考文獻為Kim,H.S.Et al.,J. Antibiot.2002,55,669；化合物9之參考文獻為Nakanishi,S.Et al.,J.Antibiot.1993,46,1775；化合物10之參考文獻為Hamasaki,T.Et al.,Agr.Biol.Chem.1975,39，2341；化合物11之參考文獻為Itabashi,T.Et al.,Chem.Pharm.Bull.1993,41,2040。
實施例五 製備錠劑之組合物
分別依量秤取下列各成分，混合後充填於打錠機，製備成錠劑薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)萃取物 200mg
乳糖 qs
玉米粉 qs
綜上所述，本發明運用小鼠前趨脂肪細胞株3T3-L1細胞評估從薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)分離純化之11個化合物，能否促進增加葡萄糖利用率作為開發藥物之模式，確定經分離之粗萃物或純化之化合物，能呈現有效地增加葡萄糖利用效果以及抑制脂肪在細胞內囤積。而彈性蛋白酶酵素測定以及超氧自由基釋放測定，發現從真菌萃取物分離純化之化合物，亦可抑制發炎。顯示本發明之粗萃物或化合物可用於產業產品，確實具有進步性與新穎性。
是以，縱使本案已由上述之實施例所詳細敘述而可由熟悉本技藝之人士任施匠思而為諸般修飾，然皆不脫如附申請專利範圍所欲保護者。
其他實施例
1.一種組合物之用途，其係用於製備增加葡萄糖利用率之藥劑，該組合物包含薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)萃取物。
2.一種組合物之用途，其係用於製備增加葡萄糖利用率之藥劑，該組合物包含選自式(II)或式(III)之一化合物；
其中R7為帶有雙鍵氧基之基團，R11可任選自羥基、C1~3之烷
氧基之一；R8可選自氫基、羥基、C1~3之烷氧基、C1~5之烷基基團。
3.如本實施例第1、2項所述組合物之用途，係涉及與糖尿病及新陳代謝疾病；或與胰島素合併投藥，可增強胰島素之效果；或抑制脂肪在細胞內囤積；或抗發炎。
4.一種增加葡萄糖利用率之組合物，其係選自式(I)化合物；
其中R1、R2、R3、R4、R5可選自氫基、羥基、C1~3之烷氧基、C1~5之烷基基團、C1~5含單一雙鍵之烯基基團之一；若R3、R4合併時可為帶有雙鍵之亞甲基(-CH2)；
或R1、R2、R3、R4、R5之一可為帶有雙鍵氧基之基團，
R11可任選自氫基、羥基、甲氧基之一。
5.如本實施例第4項所述之組合物，係用於治療糖尿病及新陳代謝疾病；或與胰島素合併投藥，可增強胰島素之效果；或抑制脂肪在細胞內囤積；或抗發炎。
6.一種化合物，如式(I)所示，係純化自薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)萃取物；
其中R1、R2、R3、R4、R5可選自氫基、羥基、C1~3之烷氧基、C1~5之烷基基團、C1~5含單一雙鍵之烯基基團之一；若R3、R4合併時可為帶有雙鍵之亞甲基(-CH2)；
或R1、R2、R3、R4、R5之一可為帶有雙鍵氧基之基團，
R11可任選自氫基、羥基、甲氧基之一。
7.一種組合物之用途，其係用於製備增加葡萄糖利用率之藥劑，該組合物包含薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)之乙酸乙酯萃取物HPLC圖譜。
8.一種組合物之用途，其係用於製備增加葡萄糖利用率之藥劑，該組合物包含選自斯杜醇((S)-(+)-sydonol)、7-羥基二甲基已烷基羥苯甲酸((S)-(+)-sydonic acid)、7-脫羥基華爾特醇B(anhydrowaraterpol B)、1-羥基三甲基庚烯基甲基苯酚((E)-5-(hydroxymethyl)-2-(6'-methylhept-2'-en-2'-yl)phenol)、氧雜蒽酮甲氧基酯(AGI-B4)；化合物9為薩多汶B(sydowinin B)、薩多汶A(sydowinin A)、二羥基甲基苯醚(diorcinol)之一化合物或其混合。
9.一種增加葡萄糖利用率之組合物，其係選自7-甲基斯杜醇((7S)-(+)-7-O-methylsydonol)、7,12-二羥基二甲基已二醇羥苯甲酸
((7S,11S)-(+)-12-hydroxysydonic acid)7-甲基斯杜醇((7S)-(+)-7-O-methylsydonol)；化合物2為7,12-二羥基二甲基已二醇羥苯甲酸((7S,11S)-(+)-12-hydroxysydonic acid)；化合物3為7-脫氧基-7,14-二脫氫基斯杜醇(7-deoxy-7,14-didehydrosydonol)、7-脫氧基-7,14-二脫氫基斯杜醇(7-deoxy-7,14-didehydrosydonol)之一化合物或其混合。
10.一種化合物，7-甲基斯杜醇((7S)-(+)-7-O-methylsydonol)，係純化自薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)萃取物。
11.一種化合物，7,12-二羥基二甲基已二醇羥苯甲酸((7S,11S)-(+)-12-hydroxysydonic acid)，係純化自薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)萃取物。
12.一種化合物，7-脫氧基-7,14-二脫氫基斯杜醇(7-deoxy-7,14-didehydrosydonol)，係純化自薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)萃取物。
參考文獻
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Hamasaki, T. et al., Agr. Biol. Chem. 1978, 42, 37
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Itabashi, T. et al., Chem. Pharm. Bull. 1993, 41, 2040。
Claims (5)
- 一種組合物之用途，其係用於製備改善糖尿病之藥劑，該組合物包含薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)萃取物；其係包含7-甲基斯杜醇((7S)-(+)-7-O-methylsydonol)；7,12-二羥基二甲基已二醇羥苯甲酸((7S,11S)-(+)-12-hydroxysydonic acid)；7-脫氧基-7,14-二脫氫基斯杜醇(7-deoxy-7,14-didehydrosydonol)；斯杜醇((S)-(+)-sydonol)；7-羥基二甲基已烷基羥苯甲酸((S)-(+)-sydonic acid)；7-脫羥基華爾特醇B(anhydrowaraterpol B)；1-羥基三甲基庚烯基甲基苯酚((E)-5-(hydroxymethyl)-2-(6'-methylhept-2'-en-2'-yl)phenol)；氧雜蒽酮甲氧基酯(AGI-B4)；薩多汶B(sydowinin B)；薩多汶A(sydowinin A)；二羥基甲基苯醚(3,3'-Dihydroxy-5,5'-dimethyldiphenyl ether,diorcinol)。
- 如申請專利範圍第1項所述組合物之用途，係涉及增加葡萄糖利用率；或與胰島素合併投藥，可增強胰島素之效果；或抑制脂肪在細胞內囤積。
- 一種化合物之用途，其係用於製備改善糖尿病之藥劑，該化合物包含薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)萃取物；其係包含7-甲基斯杜醇((7S)-(+)-7-O-methylsydonol)；7,12-二羥基二甲基已二醇羥苯甲酸((7S,11S)-(+)-12-hydroxysydonic acid)；7-脫氧基-7,14-二脫氫基斯杜醇(7-deoxy-7,14-didehydrosydonol)；斯杜醇((S)-(+)-sydonol)；7-羥基二甲基已烷基羥苯甲酸((S)-(+)-sydonic acid)；7-脫羥基華爾特醇B(anhydrowaraterpol B)；1-羥基三甲基庚烯基甲基苯酚((E)-5-(hydroxymethyl)-2-(6'-methylhept-2'-en-2'-yl)phenol)；氧雜蒽酮甲氧基酯(AGI-B4)；薩多汶B (sydowinin B)；薩多汶A(sydowinin)；二羥基甲基苯醚(3,3'-Dihydroxy-5,5'-dimethyldiphenyl ether,diorcinol)。
- 如申請專利範圍第3項所述化合物之用途，係涉及增加葡萄糖利用率；或與胰島素合併投藥，可增強胰島素之效果；或抑制脂肪在細胞內囤積。
- 一種製備薩氏麯黴萃取物方法，係將薩氏麯黴(Aspergillus sydowii)培養在馬鈴薯營養液，收集發酵液，以乙酸乙酯(EtOAc)萃取，以Sephadex之管柱層析，以乙腈(acetonitrile)與水之不同比例混合溶液之HPLC條件獲得。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020002014A (ja) * | 2018-06-25 | 2020-01-09 | 日本システム企画株式会社 | 阻害活性物及びその精製方法 |
-
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Li Dan et al.;"Antibacterial Bisabolane-Type Sesquiterpenoids from the Sponge-Derived Fungus Aspergillus sp.";Marine Drugs,2012,vol.10,pages 234-241. * |
| Trisuwan Kongkiat et al.;"Sesquiterpene and Xanthone Derivatives from the Sea Fan-Derived Fungus Aspergillus sydowii PSU-F154";Journal of Natural Products,2011,vol.74,no.7,pages 1663-1667. * |
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