TWI482633B - 用以延長局部麻醉劑止痛的方法與組合物 - Google Patents

Description

用以延長局部麻醉劑止痛的方法與組合物

本揭示內容是有關於用以延長局部麻醉劑(local anesthetics)止痛效果(analgesic effect)和/或提供止痛效果之組合物及方法；特別是以肉桂醛(cinnamaldehyde)化合物作為佐劑(adjuvant)以延長局部麻醉劑止痛效用以及以肉桂醛化合物作為有效成分來提供止痛效果等新穎用途。

局部麻醉劑能夠可逆性地阻斷施用部位之神經脈衝的產生和/或傳導，而不會影響受麻醉個體的意識狀態。阻斷神經脈衝的產生和/或傳導將導致局部性身體感覺喪失，其包含痛覺、溫感、觸覺及本體感覺。麻醉(含止痛)程度往往取決於局部麻醉劑之濃度及其施用部位之完整性。因此，就止痛效果之持續期間和/或強度而言，此領域亟需一種更有效的局部麻醉組合物。

瞬態電壓類香草受器(Transient receptor potential vanilloid,TRPV)為瞬態電壓受器離子通道(TRP ion channels)家族之一。此家族中首先確認出來的成員為TRPV1，其可受各種不同的刺激所活化，例如高溫、酸性條件和內生性大麻素(endocannabinoid anandamide)。辣椒素(Capsaicin)為一種TRPV1促效劑(agonist)，先前研究已證實，在先注射幾近不具膜穿透性之局部麻醉劑(membrane-impermeable local anesthetic)QX-314之後，接著注射辣椒素，可造成一種痛覺選擇性(nociceptive-selective)及長效性(long-lasting)之神經阻斷。然而值得注意的是，注射辣椒素所產生的灼熱感，使其於臨床藥物應用上受到限制。

有鑒於此，此領域亟需一種可用來延長局部麻醉劑效用之有效組合物及其方法。

以下為本發明內容簡要說明，目的是使通常知識者能對本揭示內容有一些基本認識。此發明內容非本揭示內容之概要，且未界定本揭示內容之主要/關鍵元件或勾劃出本發明之範疇。本發明內容之目的為簡要地呈現本揭示內容之概念，更進一步的詳細內容將記載於實施方式。

本揭示內容至少部分係基於發現，相較於單獨使用局部麻醉劑，合併使用肉桂醛與局部麻醉劑，不論是兩者同時施用或兩者先後施用，皆可以延長止痛效果持續的期間和增加其強度。

鑒於上述，本揭示內容之一態樣為提供一種方法，其可於一需受麻醉治療之個體體內延長一膜滲透性局部麻醉劑的止痛效果。

根據本揭示內容一實施方式，上述方法包含施用一麻醉有效量之膜滲透性局部麻醉劑及一有效量之肉桂醛至一個體，以延長該個體體內膜滲透性局部麻醉劑之止痛效果。應注意到，此方法並未使用膜不可滲透性化合物，當將此種膜不可滲透性化合物施用於可一或多種電位閘控型離子通道(voltage-gated ion channel)內表面時，其能夠抑制離子通道，但當將此化合物施用於該些離子通道外表面時，則無法實質抑制離子通道。

根據本揭示內容一實施方式，關於施用方式，可先對該個體施用肉桂醛，再施用膜滲透性局部麻醉劑。於另一實施方式中，則可對該個體同時施用肉桂醛及膜滲透性局部麻醉劑。

根據本揭示內容其他實施方式，該膜滲透性局部麻醉劑是一種醯胺類局部麻醉劑。醯胺類局部麻醉劑的實例包含，但不限於，利多卡因(lidocaine)、甲吡卡因(mepivacaine)、丙胺卡因(prilocaine)、普寧卡因(bupivacaine)、左旋普寧卡因(levobupivacaine)、羅比卡因(ropivacaine)、狄布卡因(dibucaine)與阿替卡因(articaine)。

根據本揭示內容之實施方式，膜滲透性局部麻醉劑與肉桂醛之施用方式，可藉由皮下注射(subcutaneously)、神經軸注射(neuraxially)、口服(orally)、局部(topically)、穿皮膜(transdermally)或經鼻腔(nasally)等方式施用。

本揭示內容另一態樣為提供一種組合物，其可用以於一需受麻醉治療之個體體內延長一膜滲透性局部麻醉劑的止痛效果。

根據本揭示內容一實施方式，上述組合物包含一麻醉有效量之膜滲透性局部麻醉劑，以及一有效量之肉桂醛，其中該肉桂醛之用量足以延長個體上膜滲透性局部麻醉劑之止痛效果，且此組合物未包含膜不可滲透性化合物。當將此種膜不可滲透性化合物施用於可一或多種電位閘控型離子通道內表面時，其能夠抑制離子通道，但當將此化合物施用於該些離子通道外表面時，則無法實質抑制離子通道。

根據本揭示內容其他實施方式，該膜滲透性局部麻醉劑是一種醯胺類局部麻醉劑。醯胺類局部麻醉劑的實例包含，但不限於，利多卡因、甲吡卡因、丙胺卡因、普寧卡因、左旋普寧卡因、羅比卡因、狄布卡因與阿替卡因。

根據本揭示內容之實施方式，此組合物適用於皮下、神經軸、口服、局部、穿皮膜或經鼻腔等施用方式。

本揭示內容亦提供一種方法，其可於一需受麻醉治療之個體體內延長一膜滲透性局部麻醉劑的止痛效果。根據本揭示內容一實施例，本方法包含施用一有效劑量之本發明上述態樣/實施方式所述的組合物至一個體，以延長膜滲透性局部麻醉劑的止痛效果。根據本揭示內容的可任選實施方式，此膜滲透性局部麻醉劑可以是利多卡因或普寧卡因。

本揭示內容亦有關於一種用以於一有需要的個體體內提供止痛效果的方法。根據本揭示內容一實施例，所述方法包含施用一止痛有效劑量之肉桂醛至一個體，以達到止痛效果。

透過以下的詳細說明與附隨之申請專利範圍將可更了解本揭示內容的這些及其他特徵。需知以上的概述及以下的詳細說明僅為例示，用來闡述本揭示內容，而非用以限制本揭示內容之範疇。

所述實施方式與專有名詞是為了闡述發明內容之用，並非用以限制本揭示內容範疇。本揭示內容範疇也涵蓋並未特意揭示於此，但習知技藝人士在閱讀過本揭示內容後可輕易推知的其他實施方式。

除非另有說明，本揭示內容中所用的科學與技術名詞的意義與相關領域中具有通常知識者所理解的通常意義相同。應當理解，除非與文義明顯衝突，此處所用的單數名詞亦涵蓋其複數型，而所用的複數名詞亦涵蓋其單數型。具體來說，於本揭示內容以及申請專利範圍中所使用之單數形式的「一」和「該」包含複數參照物，除非文義另有規定。此外，於本揭示內容以及申請專利範圍中所使用的「至少一」和「一個或多個」，包含一、二、三或以上之複數參照物。

儘管此處使用了近似值來記載用以限定本揭示內容較廣範圍的數值範圍和參數，但於記載特定實施例時，則盡可能精確地報導相關數值。然而，任何數值無可避免地會包含誤差(error)，此一誤差可能是由個別測量方法所致之標準偏差(standard deviation)所造成。本揭示內容中所記載之名詞「約」，一般介於特定數值或範圍的正負10%、5%，、1%、或0.5%之間。或者是，「約」一詞可表示所述的數值或範圍介於習知技藝人士所認可的平均值加減一可接受的標準誤差之間。除了於實施例中或另有規定者外，當可理解本文中所記載的所有數值範圍、數量、數值及百分比(例如材料含量、持續期間、溫度、操作條件、數量比和其他類似者)於所有情況下皆以「約」作為修飾。因此，除非另為相反表示，本揭示內容及申請專利範圍所記載之數值參數為近似值，其可以依照需要而改變。然而，於解釋每一數值參數時，至少應按照所記載之數字之最小位數並應用一般四捨五入法來解讀。

在本揭示內容中「局部麻醉(local anesthesia)」一詞意指此種麻醉的特徵在於喪失感覺能力之區域僅位於身體施用一麻醉藥劑或麻醉藥劑組合物之部位。「麻醉有效量(anesthetically effective amount)」一詞意指一麻醉藥劑或麻醉藥劑組合物之用量，能夠產生一麻醉效果，即部分或完全喪失感覺能力、抑制感官能力或抑制運動功能。麻醉有效量以產生最小毒性副作用較佳。

「局部麻醉劑(local anesthetic)」一詞意指此麻醉劑能夠可逆地抑制周邊神經脈衝和/或傳導而誘導局部麻醉效果產生。「膜滲透性局部麻醉劑(membrane permeable local anesthetic)」一詞意指局部此麻醉劑能夠藉由穿過細胞膜的脂質雙層結構或藉由活化離子通道穿越電位活化離子通道而穿透細胞膜。「膜不可滲透性化合物(membrane impermeable compound」一詞意指，當此化合物作用於細胞膜外時，無法通過一完整細胞之脂質雙層結構，亦無法活化細胞膜上之電位閘控型離子通道；此處所述的無法通過或無法活化並非完全未發生通過或活化之情形，而是指縱有通過或活化之情形亦未達可被偵測之程度。然而，一但電位閘控型離子通道被活化時，上述膜不可通透性化合物即可以穿越此通道。更具體而言，在此處「膜不可滲透性化合物」一詞是指一化合物當施用至電位閘控型離子通道內表面時，能夠抑制此離子通道；但將其施用至離子通道外表面時，則無法實質抑制離子通道。

「痛覺缺失(analgesia)或止痛效果(analgesic effect)」一詞意指痛覺感知減低之狀態，包含失去痛覺以及對於傷害性刺激(noxious stimuli)的敏感性降低或喪失。止痛一詞包含「抗痛覺作用(antinociception)」一詞，抗痛覺作用可作為一種定量方法，相關技術領域中可據此以動物模型來探究痛覺喪失或降低疼痛敏感性。此外，於本文中係藉由施用一局部麻醉劑，來誘導此種痛覺感知的降低或喪失。「延長止痛效果(prolonging the analgesic effect)」一詞意指，相較於一適當的對照組，可觀察到止痛效果發生的期間相對較長。「促進止痛效果(promoting the analgesic effect)」一詞意指相較於一適當的對照組，其止痛效果發生的期間和程度獲得改善。

「施用(administered、administering或administration)」等詞在此係指直接施用所述的化合物或組合物；或施用活性化合物的前驅藥(prodrug)、衍生物(derivative)或類似物(analog)等，此類化合物可於對象體內形成該活性化合物之一相當用量。

在此處「個體(subject)」一詞意指可接受所述化合物和/或方法治療的動物，包括人類。「個體」在此涵蓋了雄性與雌性兩種性別，除非另有規定。

瞬態電壓錨蛋白受器亞家族1(Transient receptor potential ankyrin subfamily member 1,TRPA1)為瞬態電壓受器(TRP)通道家族之一。此受器為一種非選擇性鈣離子通道，可藉由有害的低溫、機械性刺激和發炎反應所活化。肉桂醛為萃取自肉桂(cinnamon)樹皮的有機化合物，也是肉桂風味和香氣的來源。肉桂醛是一種TRPA1促效劑，會對神經系統內突觸傳導產生抑制與興奮的作用。然而，目前仍對於肉桂醛在皮膚止痛效果機制中所扮演之角色尚未十分明瞭。

本揭示內容為首次證實合併施用肉桂醛及至少一膜滲透性局部麻醉劑，相較於單獨施用局部麻醉劑，可以促進局部麻醉劑止痛效果。有鑒於此，本揭示內容提供一種延長局部麻醉劑止痛效果之組合物及其方法。

根據本揭示內容一實施方式，本發明之方法包含施用一麻醉有效量之膜滲透性局部麻醉劑及一有效量之肉桂醛至一個體，肉桂醛的用量足以延長個體體內該膜滲透性局部麻醉劑之止痛效果。值得注意的是，根據本發明之原則和精神，於施用膜滲透性局部麻醉劑及肉桂醛時，並未使用膜不可滲透性化合物，當將此種膜不可滲透性化合物施用於可一或多種電位閘控型離子通道內表面時，其能夠抑制離子通道，但當將此化合物施用於該些離子通道外表面時，則無法實質抑制離子通道。

根據本揭示內容，於施用肉桂醛與膜滲透性局部麻醉劑時，兩者可以依序或同時施用。根據本揭示內容一實施方式，首先施以肉桂醛，之後(例如，經過至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或30分鐘)再施以膜滲透性局部麻醉劑。舉例而言，先施以肉桂醛，待10分鐘後，再施以膜滲透性局部麻醉劑。此外，本揭示內容之膜滲透性局麻醉劑與肉桂醛亦可以同時施用。

根據本發明其他實施方式，膜滲透性局部麻醉劑為一醯胺類局部麻醉劑。醯胺類局部麻醉劑的實例包括，但不限於，利多卡因(2-(二乙胺)-N-(2,6-二甲苯)乙醯胺；2-(diethylamino)-N-(2,6-dimethylphenyl)acetamide)、甲吡卡因(N-(2,6-二甲苯)-1-甲哌啶-2-甲醯胺；N-(2,6-dimethylphenyl)-1-methylpiperidine-2-carboxamide)、丙胺卡因(N-(2-甲苯)-2-(丙胺)丙醯胺；N-(2-methylphenyl)-2-(propylamino)propanamide)、普寧卡因(1-丁基-N-(2,6-二甲苯)哌啶-2-甲醯胺；1-butyl-N-(2,6-dimethylphenyl)piperidine-2-carboxamide)、左旋普寧卡因((2S)-1-丁基-N-(2,6-二甲苯)哌啶-2-甲醯胺；(2S)-1-butyl-N-(2,6-dimethylphenyl)piperidine-2-carboxamide)、羅比卡因((2S)-N-(2,6-二甲苯)-1-丙基哌啶-2-甲醯胺；(2S)-N-(2,6-dimethylphenyl)-1-propylpiperidine-2-carboxamide)、狄布卡因(2-丁氧基-N-[2-(二乙胺基)乙基]苯并吡啶-4-甲醯胺；2-butoxy-N-[2-(diethylamino)ethyl]quinoline-4-carboxamide)及阿替卡因((RS)-甲基4-甲基-3-(2-丙胺丙醯胺)噻吩-2-羧酸酯；(RS)-methyl 4-methyl-3-(2-propylamino propanoylamino)thiophene-2-carboxylate)。

為了能有效地延長局部麻醉劑之止痛效果，本發明之肉桂醛的實際用量，可依據局部麻醉劑選擇之不同而改變。根據本揭示內容多種實施方式，施用利多卡因和肉桂醛之莫耳比約1:2至1:10；相當於約1:1至1:4的重量比。較佳的莫耳比約為1:4至1:10。具體而言，施用利多卡因和肉桂醛之莫耳比約1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10。根據本揭示內容其他實施例，施用普寧卡因和肉桂醛之莫耳比約1:20至1:85；相當於約1:8至1:32的重量比。較佳的莫耳比約為1:40至1:85。具體而言，施用普寧卡因與肉桂醛之莫耳比約1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45、1:50、1:55、1:60、1:65、1:70、1:75、1:80或1:85。

另外，本發明之肉桂醛濃度可隨著合併施用之膜滲透性局部麻醉劑類型和劑量之不同而予以改變。一般而言，若和速發型(short-onset)局部麻醉劑合併施用時，可使用較高濃度之肉桂醛。本發明之肉桂醛重量濃度範圍介於約0.05%至5%之間。在某些實施例中，肉桂醛之重量濃度介於約0.5%至2%之間；且以介於約1%至2%之間較佳。具體而言，在下文提供的實施例中，所用之肉桂醛濃度為約0.5%、1%和2%。

本發明之方法可使用任何合適的投藥方式來施用。膜滲透性局部麻醉劑與肉桂醛可以下列之方式，例如，皮下、神經軸、口服、局部、穿皮膜(包括穿黏膜(transmucosal))或經鼻腔(nasal)等方式施用。

如本文中所述，本發明之肉桂醛的施用量足以於一個體體內達到預期的效果(例如，延長止痛)。一般而言，可以藉由活體內(in vivo )或活體外(in vitro )的方法來決定所述的有效量。根據本揭示內容之實施例，適用此方法的個體為人類。可根據Meeh-Rubner公式來計算動物劑量和人類劑量間之相互關係。然而，劑量值會隨著多種因子而改變，這些因子如個體的病程、年齡、性別和重量。

以人類而言，本發明之肉桂醛的有效量約2-10毫克/公斤；較佳約4-10毫克/公斤。根據本揭示內容之實施方式，肉桂醛之有效量約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10毫克/公斤。

根據本揭示內容之實施方式，提出了一種於一需受麻醉治療之個體體內用以延長一膜滲透性局部麻醉劑止痛效果之組合物，此組合物包含一麻醉有效量之膜滲透性局部麻醉劑或其藥學上可接受鹽類，和一有效量之肉桂醛或其藥學可接受鹽類以延長該個體體內該膜滲透性局部麻醉劑之止痛效果，並且此組合物未包含任何膜不可滲透性化合物。當將此種膜不可滲透性化合物施用於可一或多種電位閘控型離子通道內表面時，其能夠抑制離子通道，但當將此化合物施用於該些離子通道外表面時，則無法實質抑制離子通道。

有關於適用於此組合物之膜滲透性局部麻醉劑的實例、，肉桂醛之有效量與濃度以及肉桂醛和局部麻醉劑之莫耳濃度，與上文所述相同，在此不另贅述。

於非必要的實施例中，在調製此組合物時，可將膜滲透性局部麻醉劑或其藥學上可接受鹽類調製於第一載體中，並將肉桂醛或其藥學上可接受鹽類調製於第二載體中。可視需求來選擇第一載體與第二載體的形式，譬如根據一非必要實施例，第二載體的釋放速率比第一載體的釋放速率來得快，因而使得該個體可先接觸到肉桂醛成分，而後才接觸到膜滲透性局部麻醉劑。

本發明之組合物可配製成適用於皮下、神經軸、口服、局部、穿皮膜(包括穿黏膜)或經鼻腔給藥等各種劑型。

若以皮下方式施用，本發明之膜滲透性局部麻醉劑和肉桂醛可以各別或同時與一藥學上可接受載體結合，例如無菌水溶液，其與接受者之血液等滲透壓較佳。可將上述配方製成一無菌水溶液；簡單來說，將固態的活性成分溶解於含有生理相容物質(如氯化鈉、甘胺酸及其類似物)的水中，並利用緩衝溶液將其pH值調配成與生理條件相容範圍，而後再消毒此水溶液。所述的組合物中亦可包含其他其他藥學可接受載體(carrier)、佐劑(adjuvant)及賦形劑(vehicle)，其實施例包含但不限於：離子交換劑(ion exchangers)、氧化鋁(alumina)、硬脂酸鋁(aluminum stearate)、卵磷脂(lecithin)、血清蛋白(serum proteins)(如人類血清蛋白(human serum albumin))、緩衝物質(如磷酸鹽(phosphates)、檸檬酸鹽(citrate)、甘胺酸(glycine)、己二烯酸(sorbic acid)、已二烯酸鉀(potassium sorbate)及其類似物)、由飽和植物脂肪酸(saturated vegetable fatty acids)、水、鹽類或電解質(如，硫酸魚精蛋白(protamine sulfate)、磷酸氫二鈉(disodium hydrogen phosphate)、磷酸氫鉀(potassium hydrogen phosphate)、氯化鈉(sodium chloride)、鋅鹽(zinc salts)及其類似物)所組成的部分甘油酯混合物(partial glyceride mixtures)、膠質氧化矽(colloidal silica)、三矽酸鎂(magnesium trisilicate)、聚乙烯氫吡咯酮(polyvinyl pyrrolidone)、纖維物質(cellulose-based substances)、聚乙二醇(polyethylene glycol)、羧甲基纖維素鈉(sodium carboxymethylcellulose)、聚丙烯酸酯(polyacrylates)、蠟(waxes)、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物(polyethylene-polyoxypropylene-block polymers)、聚乙二醇(polyethylene glycol)和羊毛脂(wool fat)。可將上述配方填充於單一或多劑量之容器內，例如預充注射器(prefilled syringes)、密封安瓿(sealed ampoules)或藥瓶(vials)。

若針對皮膚表層局部施用，可將此膜滲透性局部麻醉劑和肉桂醛各別或共同配製為乳霜(creams)、凝膠(gels)、軟膏(ointments)或乳液(lotions)或製成皮膚貼片。於配製此種組合物時，可利用液體或油性為基底，並添加適當的增稠劑(thickening)、膠凝劑(gelling)、穩定劑(stabilizing)，乳化劑(emulsifying)、分散劑(dispersing)、懸浮劑(suspending)和/或著色劑(coloring agents)。若用於穿皮膜之施用方式，可各別或共同地將膜滲透性局部麻醉劑和肉桂醛與經皮促進劑(skin penetration enhancers)結合使用，例如丙二醇(propylene glycol)、聚乙二醇(polyethylene glycol)、異丙醇(isopropanol)、乙醇(ethanol)、(油酸oleic acid)、N-甲基吡咯啶酮(N-methylpyrrolidone)，其可增加上述化合物對於皮膚之穿透性，而使得活性化合物可藉此穿越皮膚。

若以經由口服或鼻腔吸入之方式施用，活性化合物可製備成一適當的藥物形式，並且藉由機械形式來遞送此組合物上述機械形式之例示包含但不限於：吸入器(inhaler)、霧化器設備(nebulizer device)或噴鼻劑(nasal spray)。再者，若以口服或鼻腔吸入路徑等方式施用，則亦可以使用小分子氣霧製造器(small particulate aerosol generator,SPAG)。

本發明亦提供另一種方法，可用以於一需受麻醉治療之個體體內延長一膜滲透性局部麻醉劑的止痛效果。根據本揭示內容一實施例，本方法包含對一個體施用一有效劑量之根據本發明上述態樣/實施方式的組合物，以延長膜滲透性局部麻醉劑的止痛效用。根據本揭示內容任一實施方式，此膜滲透性局部麻醉劑可以是利多卡因或普寧卡因。

本揭示內容亦首度發現當將肉桂醛單獨施用予一個體時，能夠提供止痛效果。基於此一發現，本揭示內容亦提出了於一有需要的個體體內提供止痛效果的方法與組合物。

根據本揭示內容一實施例，上述方法包含對一個體施用一止痛有效劑量之肉桂醛，以於個體體內提供止痛效果。

可利用任何適當的投藥方式(如上文所述者)來實踐本方法；因此，可將肉桂醛調製成適用於所欲投藥方式的配方，譬如可將肉桂醛調製成上文所例示的各種配方。

在一實施方式中，以人類為投藥對象時，所述的止痛有效量為約2-10毫克/公斤；較佳為約5-10毫克/公斤。根據本發明多個實施方式，肉桂醛的止痛有效量可為約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10毫克/公斤。

以下實施例是用來闡明本揭示內容特定態樣，並幫助習知技藝者了解並實施本揭示內容。但本揭示內容範疇並不限於這些實施例中。

實施例 材料與方法 材料

肉桂醛係購自Sigma-Aldrich(St Louis,Mo)；利多卡因(lidocaine)及普寧卡因(bupivacaine hydrochloride)係購自AstraZeneca USA(Westborough,MA)。以5%葡萄糖溶液稀釋二甲亞碸(Dimethyl sulfoxide,DMSO；Merck,Darmstadt,Germany)，以作為肉桂醛之賦形劑(pH值為4.8至5.0)。DMSO和葡萄糖溶液之最終濃度分別為40%與3%。利多卡因和普寧卡因分別溶解於生理食鹽水(pH值為5.8-6.5)中。於局部注射時，組織液(pH 7.4)能夠迅速緩衝這些溶液中相對較低的pH值。於每一次注射前，配製各種新鮮的藥物溶液。

皮下注射

本動物實驗計畫經由台灣台北馬偕醫院動物委員會所核准。Sprague-Dawley品系雄性大白鼠係購自於BioLasco(Taipei,Taiwan)，並將其飼養於一空調動物室中，飼養條件為：室溫22℃至24℃、濕度40%至50%且明-暗週期各為12小時。

注射時，每一隻大白鼠重量介於250克至300克之間，並且無神經行為障礙之徵狀。將大白鼠隨機分配至不同的處理組別，每組八隻大白鼠。使所有大白鼠吸入2%異氟烷(isoflurane，購自Abbott Laboratories,North Chicago,IL)進行簡單麻醉。接著以剃刀謹慎的除去大白鼠背毛，且過程中不造成任何傷害。然後，於吸入麻醉誘導之後，於大白鼠胸腰處以皮下注射之方式注射藥物，此注射將造成大白鼠皮膚上具有一圓形凸起，產生直徑約2公分之隆起，於注射後一分鐘內標示該隆起處。係利用一極細針頭(30號，30-gauge)，將0.6毫升之肉桂醛溶液(0.5%，39.7 mM；1%，79.4 mM；或2%，158.9 mM)、利多卡因(0.5%，18.5 mM)和普寧卡因(0.0625%，1.9 mM)分別以皮下注射之方式注射至大白鼠已除毛之背側皮膚(每組n=8)。於合併藥物處理時，先注射0.6毫升肉桂醛(0.5%、1%、或2%)，待10分鐘後，再分別注射0.6毫升利多卡因(0.5%)或普寧卡因(0.0625%)。

神經行為檢查

於實驗進行之前，持續14天每日照料動物，以使其熟悉進行行為檢查的操作人員、實驗環境和特定實驗流程，持續至14天。以有害針刺試驗(noxious pinprick test)來偵測藥物對皮膚軀幹肌反射(cutaneous trunci muscle reflex,CTMR)之止痛效用，此種反射的特徵為當動物背部皮膚受到局部刺激時，其胸椎側肌會抽動，而使得背部皮膚產生反射運動動作。為了標準化刺激強度以及測試神經行為檢查，將馮佛瑞氏纖維絲(von Frey filament)(26.0 g)固定於18號(18-gauge)針上。

於施用藥物之後，每15分鐘於標示區域進行六次針刺，直至大白鼠從阻斷狀況中完全恢復為止。每試驗進行六次針刺，足以從不同的大白鼠試驗群組中得到可再現的(reproducible)結果，且可避免在反覆的試驗過程中對皮膚造成傷害。以針刺無法引起反應的次數，來定量地表示藥物之效果。在一次試驗中，若大白鼠完全沒有CTMR反應時，視為完全阻斷，即最大可能止痛效應(maximum possible effect，MPE)為100%；於一次試驗中，出現三次CTMR刺針反應則為50%MPE；於一次試驗中，發生六次CTMR刺針反應則為0%MPE。而完全回復時間(The complete recovery time,CRT)，係指六次針刺皆出現反應(即，回復至0%MPE)所需之時間。上述之CTMR反應皆於大白鼠生命徵象穩定情況下觀察。

進一步觀察大白鼠皮膚顏色和質地的巨觀變化，以評估是否出現皮膚刺激(如壞死、腫脹和發炎)之情形。此外，亦一併評估全身性副作用(例如鎮靜、情緒激動和呼吸窘迫)。於此試驗進行時，未事先告知觀察人員有關藥物之使用狀況。

組織學

為了測定本發明之組合物於皮下組織中產生之毒性，大白鼠經麻醉注射後兩天，切除注射部位之皮膚。將皮膚橫截面檢體以4%三聚甲醛(paraformaldehyde)固定處理，置放至隔夜，再以蘇木素(hematoxylin)和伊紅(eosin)進行染色。

統計分析

利用Mann-Whitney Rank Sum Test來檢驗各處理組別間之統計差異性，以評估MPE的止痛程度。使用Microcal Origin version 7(Microcal Software,Northampton,MA)以及SigmaStat(Systat Software,Inc.,Chicago,IL)兩套軟體來計算MPE數值，並且產生圖表及分析統計數據。若p值小於0.05，即代表數值具有顯著性。所有數據以平均值±標準差(mean±SE)表示。

實施例1單獨注射肉桂醛之劑量-反應分析

當肉桂醛(CA)的重量濃度分別為0.5%、1%及2%時，可在大白鼠體內觀察到與劑量相關的止痛效果(第1圖和第2圖；表1)。特別是，單獨注射以下濃度分別為0.5%、1%及2%之肉桂醛時，其所需之完全恢復時間各別為43.13±5.97、63.75±4.70及95.63±3.95分鐘。

此外，於皮膚刺激方面，未觀察到皮膚顏色明顯的改變以及傷害。作為肉桂醛賦形劑的DMSO則未產生任何止痛效果。

實施例2合併施用肉桂醛及利多卡因

首先施用肉桂醛，待10分鐘後，再施以利多卡因(0.5%)以探討肉桂醛是否可以延長利多卡因之止痛效果。針刺試驗的結果顯示，以2%肉桂醛及0.5%利多卡因處理之大白鼠出現痛覺完全阻斷之情形，並持續了約15分鐘。此外，以不同濃度肉桂醛搭配0.5%利多卡因時，亦可觀察到與劑量成正相關的止痛效果。具體來說，在分別以5%、1%及2%肉桂醛與5%利多卡因處理的組別中，大白鼠完全恢復時間分別為65.63±2.74、106.88±3.40及157.50±5.67分鐘。相較之下，單純以0.5%利多卡因處理之大白鼠，其完全恢復時間為63.75±3.75分鐘。

在不同的給藥劑量組中，可觀察到不同組別中存有顯著差異。具體來說，經1%或2%肉桂醛併同0.5%利多卡因處理之大白鼠，相較於僅單獨施用肉桂醛或利多卡因之大白鼠，其完全恢復時間明顯較長。然而，雖然以0.5%肉桂醛併同0.5%利多卡因處理之大白鼠，相較於單獨以0.5%肉桂醛處理之大白鼠，其完全恢復時間明顯較長；但相較於單獨施用0.5%利多卡因，則並未觀察到類似的結果(第1圖；表1)。此外，觀察合併施用肉桂醛和利多卡因之注射區域，其未產生明顯的外傷。

實施例3合併施用肉桂醛和普寧卡因

單獨注射普寧卡因(0.0625%)可產生完全痛覺阻斷並持續約45分鐘，其完全恢復時間為91.88±4.43分鐘。為了研究合併施用肉桂醛和普寧卡因，所產生之延長止痛效用，先分別施用濃度為0.5%、1%或2%之肉桂醛，待10分鐘後，再施用普寧卡因(0.0625%)。在所有合併施用肉桂醛與普寧卡因的組別中，針刺試驗所產生之完全痛覺阻斷。以1%及2%肉桂醛添加0.0625%普寧卡因處理之大白鼠而言，其完全恢復時間分別為116.25±4.70及159.38±6.30分鐘。因此，相較於分別單獨施用1%肉桂醛(63.75±4.70 minutes)、2%肉桂醛(95.63±3.95 minutes)或普寧卡因(91.88±4.43 minutes)，其痛覺阻斷結果具有顯著的延長(第2圖；表1)。

觀察合併施用0.5%或1%肉桂醛添加0.0625%普寧卡因之結果，其未產生皮膚明顯刺激。然而，以2%肉桂醛添加0.0625%普寧卡因處理八隻大白鼠，約24小時後，其中兩隻大白鼠出現輕微的皮膚刺激，於注射部位邊緣產生紅腫。

實施例4淋巴球浸潤

觀察大白鼠皮膚橫截面，肉桂醛皮下注射區域之淋巴浸潤程度，以評估組織發炎反應。於肉桂醛於注射約2天後，注射區域出現部分淋巴浸潤之現象，意味著可能注射部位可能發炎。然而於40% DMSO(肉桂醛之賦形劑)和生理食鹽水(利多卡因和普寧卡因之賦形劑)注射之區域中，並無觀察到浸潤現象(第3圖)。

上述結果證實肉桂醛可導致劑量依賴性的皮膚痛覺阻斷。並且相較於單獨施用局部麻醉劑或肉桂醛，合併施用肉桂醛與至少一膜滲透性局部麻醉劑(例如，利多卡因及普寧卡因)，可以增加皮下止痛的效果和持續時間。上述結果皆顯示肉桂醛可以作為一具有潛力之麻醉佐劑，用以改善局部麻醉效用於浸潤麻醉/止痛和局部應用，例如EMLA乳霜(2.5%利多卡因/2.5%丙胺卡因)、LIDODERM(利多卡因皮膚貼片)以及ELADUR(普寧卡因皮膚貼片)。

當可理解上述實施方式與實施例僅為例示，且熟習此技藝者可對其進行各種修飾。上文提出之說明書、實施例與資料的目的在於使本說明書的結構完備，並作為實作本發明之例示。雖然本揭示內容已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本揭示內容，任何熟習此技藝者，在不脫離本揭示內容之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本揭示內容之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

為讓本揭示內容之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：

第1圖繪示出依據本發明一實施方式，以各種不同治療方式對於止痛效果的影響；

第2圖繪示出依據本發明另一實施方式，以各種不同治療方式對於止痛效果的影響；以及

第3圖為依據本發明一實施方式，經處理大白鼠之皮膚橫截面的照片。

Claims (5)

1. 一種於一需麻醉治療之個體體內用以延長一膜滲透性局部麻醉劑止痛效果的組合物，包含：一麻醉有效量之該膜滲透性局部麻醉劑或其藥學上可接受鹽類，其中該膜滲透性局部麻醉劑為醯胺類膜滲透性局部麻醉劑；一有效量之肉桂醛或其藥學上可接受鹽類，以延長該個體體內該膜滲透性局部麻醉劑之止痛效果，其中該個體為人類，且該肉桂醛之有效量為3-10毫克/公斤體重；以及一藥學上可接受賦形劑，其中該組合物之特徵在於未包含一膜不可滲透性化合物或其藥學上可接受鹽類，其中該膜不可滲透性化合物當施用於一或多電位閘控型離子通道之內表面時，可抑制該離子通道，且當施用於該離子通道之外表面時，則無法實質抑制該離子通道。
2. 如請求項1所述之組合物，其中該醯胺類膜滲透性局部麻醉劑是利多卡因、甲吡卡因、丙胺卡因、普寧卡因、左旋普寧卡因、羅比卡因、狄布卡因或阿替卡因。
3. 如請求項1所述之組合物，其中該醯胺類膜滲透性局部麻醉劑是利多卡因；且該利多卡因和該肉桂醛之莫耳比約1：2至1：10。
4. 如請求項1所述之組合物，其中該醯胺類膜滲透性局部麻醉劑是普寧卡因；且該普寧卡因與該肉桂醛之莫耳比約1：20至1：85。
5. 如請求項1所述之組合物，其中該組合物經配製適用於以下施用方式：皮下給藥、神經軸給藥、口服、局部給藥、穿皮膜給藥或經鼻腔給藥。