TWI463985B - 單離自金剛纂之化合物於癌症和／或血小板數量低下之治療用途 - Google Patents

Description

單離自金剛纂之化合物於癌症和/或血小板數量低下之治療 用途

本揭示內容是有關於某些小分子的新穎用途，特別是單離自金剛纂(Euphorbia neriifolia )之三萜類及林醇二萜類化合物的新穎用途途，其可用來製造能治療癌症和或血小板數量低下的醫藥品或藥學組合物。

長久以來，許多偏遠村莊和/或部落地區的住民都將大戟屬(Euphorbia genus )植物的葉子和/或膠乳(latex)當作民俗藥物(folk medicines)來使用。舉例來說，已知仙人掌(Euphorbia nivulia )的膠乳可加速傷口癒合的過程；而仙人掌葉的水萃物則具有毒性，且對小菜蛾(cabbage diamondback moth,DMB)具有調控昆蟲生長的效果。近年來，也有許多單離自大戟屬植物的化合物先後被證實具有可殺死癌細胞(如，MT2細胞株)或是白血球細胞株(如，CEM細胞株)之細胞毒性，因此具有可被發展成抗癌藥物的潛在用途。

在本揭示內容中，發明人意外地發現單離自一種大戟屬(Euphorbia genus )植物，金剛纂(Euphorbia neriifolia， 俗名「火巷」)，的兩群化合物，亦即，三萜類(triterpenoids)及林醇二萜類化合物(ingol diterpenes)，分別具有不同的醫療用途。明確的說，單離出來的三萜類化合物可延緩癌細胞的生長，至於單離的林醇二萜類化合物則可誘發骨髓細 胞增生和/或分化。

本揭示內容至少部分係基於發現單離自金剛纂之三萜類及林醇二萜類化合物，分別具有可延緩癌細胞生長和/或誘發骨髓細胞增生與分化的特性而來。上述這些發現，暗示本揭示內容中單離的三萜類化合物可作為能治療癌症之治療性藥劑的先導化合物，至於單離的林醇二萜類化合物則可作為能治療血小板數量低下之治療性藥劑的先導化合物。

因此，本揭示內容第一目的是關於以單離自金剛纂之三萜類化合物，來製造一種可抑制癌細胞生長或可治療癌症之口服醫藥品的新穎用途。此口服醫藥品或藥學組合物包含一治療有效量之式(I)化合物，或其藥學上可接受的鹽類； 其中是一單鍵或雙鍵；R₁ 是-CH₃ ；R₂ 、R₃ 、R₄ 、R₅ 及R₆ 可分別為-H或是-CH₃ ；且R₇ 是-CH₃ 或是不存在(nil)。

細胞生長會受到式(I)化合物抑制的癌細胞種類可為慢 性骨髓白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)細胞、食道癌細胞或是胰臟癌細胞。

在一實例中，式(I)化合物是3β-木栓醇(3β-friedelinol)，其中是一單鍵；R₁ 、R₃ 、R₅ 及R₇ 分別為-CH₃ ；且R₂ 、R₄ 、及R₆ 分別為-H。在另一實例中，式(I)化合物是3β-蒲公英賽醇(3β-taraxerol)，其中是一雙鍵；R₁ 、R₂ 、R₄ 及R₆ 分別為-CH₃ ；R₃ 及R₅ 分別為-H且R₇ 不存在(nil)。在再一實例中，式(I)化合物是3α-木栓醇(3α-friedelinol)，其中是一單鍵；R₁ 、R₃ 、R₅ 及R₇ 分別為-CH₃ ；且R₂ 、R₄ 、及R₆ 分別為-H。

本揭示內容第二目的是關於以單離自金剛纂之林醇二萜類化合物，來製造一種可抑制白血病細胞生長之醫藥品的新穎用途。此醫藥品或藥學組合物包含一治療有效量之式(II)化合物，或其藥學上可接受的鹽類； 其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 為-COCH₃ 、且R₃ 是CH₃ 、

在一實例中，式(II)化合物是3,7,12-氧-三乙醯基-8-氧-替果林醇(3,7,12-O-triacetyl-8-O-tigloylingol(EN 26))，其中 R₁ 、R₂ 、及R₄ 分別為-COCH₃ ；且R₃ 是。在另一實例中，式(II)化合物是3,7,12-氧-三乙醯基-8-氧-苯甲林醇(3,7,12-O-triacetyl-8-O-benzoylingol(EN 27)，其中R₁ 、R₂ 、 及R₄ 分別為-COCH₃ ；且R₃ 是。在再一實例中，式(II)化合物是3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(3,12-O-diacetyl-7-O-angeloyol-8-methoxylingol(EN 28)，其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 是；且R₃ 是-CH₃ 。在另一實例中，式(II)化合物是3,12-氧-二乙醯基-8-甲基-7-苯甲林醇(3,12-O-diacetyl-8-methoxy-7-O-benzoylingol(EN 29))，其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 是；且R₃ 是-CH₃ 。

若以上述藥學組合物總重量為基準，本發明化合物，特別是式(I)或是式(II)化合物，約占該藥學組合物總重量的0.1%至99%(重量%)。在某些實施方式中，本發明化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的1%。在特定實施方式中本發明化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的5%。在其他實施方式中，本發明化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的10%。在另外實施方式中，本發明化合物的量 至少約為該藥學組合物總重量的25%。

在某些實施方式中，上述本發明之醫藥品或是藥學組合物中更包括另一種已知可改善所述可抑制癌細胞生長效果的藥劑。在一較佳實例中，本發明之醫藥品或是藥學組合物更包含一種化療藥劑，例如順鉑(cisplatin)。

本揭示內容第三目的是關於一種治療癌症的方法。所述方法包括對一個體施用一治療有效量之上述式(I)或式(II)化合物，或其藥學上可接受的鹽類。適合以式(I)化合物進行治療之癌症為慢性骨髓白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)、食道癌或是胰臟癌。在一實例中，3β-木栓醇(3β-friedelinol)可抑制CML的生長。在另一實例中，3,7,12-氧-三乙醯基-8-氧-替果林醇(EN26)可抑制CML的生長。在又一實例中，3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(EN28)可抑制CML的生長。在其他實例中，3β-木栓醇可在不影響一個體體內白血球細胞數目或是肝、腎功能的情況下，抑制該個體體內的食道癌細胞生長。該個體可以是一種哺乳動物，較佳是人類。

在某些實施方式中，所述方法更包含在對該個體施用式(I)或式(II)化合物之前、同時和/或之後，也對該個體施用另一種已知可改善癌症治療效果的藥劑。在一較佳實例中，同時對該個體施用3β-木栓醇與順鉑，且3β-木栓醇可防止或減輕一般經常伴隨著因使用化療藥劑所產生的體重減輕問題。

本揭示內容第四目的是關於一種以單離自金剛纂之林 醇二萜類化合物，來製造一種可誘發骨髓細胞增生和/或分化、或治療血小板數量低下之醫藥品或藥學組合物的新穎用途。此醫藥品或藥學組合物包含一治療有效量之式(II)化合物，或其藥學上可接受的鹽類； 其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 為-COCH₃ 、且R₃ 是CH₃ 、

若以上述藥學組合物總重量為基準，本發明式(II)化合物約占該藥學組合物總重量的0.1%至99%(重量%)。在某些實施方式中，本發明式(II)化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的1%。在特定實施方式中，本發明式(II)化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的5%。在其他實施方式中，本發明式(II)化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的10%。在另外實施方式中，本發明式(II)化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的25%。

在一實例中，式(II)化合物是3,7,12-氧-三乙醯基-8-氧- 替果林醇(3,7,12-O-triacetyl-8-O-tigloylingol(EN 26))，其中 R₁ 、R₂ 、及R₄ 分別為-COCH₃ ；且R₃ 是。在另一實例中，式(II)化合物是，其中R₁ 、R₂ 、及R₄ 分別為-COCH₃ ；且 R₃ 是。在再一實例中，式(II)化合物是3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(3,12-O-diacetyl-7-O-angeloyol-8-methoxylingol(EN 28))，其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 是；且R₃ 是-CH₃ 。在另一實例中，式(II)化合物是3,12-氧-二乙醯基-8-甲基-7-苯甲林醇(3,12-O-diacetyl-8-methoxy-7-O-benzoylingol(EN 29))，其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 是；且R₃ 是-CH₃ 。

因此，本揭示內容第五目的是提供一種治療血小板數量低下之方法。此方法包括對一個體施用一治療有效量之式(II)化合物，或其藥學上可接受的鹽類，以便誘使白血病細胞或骨髓細胞分化成為巨核細胞(megakaryocytic cells)。所述白血病細胞為慢性骨髓白血病(CMIL)細胞或是紅白血病(erytholeukemia)細胞；且該骨髓細胞為正常的骨髓細胞。該個體可以是一種哺乳動物，較佳是人類。在一較佳實例中，式(II)化合物是3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(3,12-O-diacetyl-7-O-angeloyol-8-methoxylingol (EN 28)，其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 是；且R₃ 是-CH₃ 。

透過以下的詳細說明與附隨之申請專利範圍將可更了解本揭示內容的這些及其他特徵。

需知以上的概述及以下的詳細說明僅為例示，用來闡述本揭示內容，而非用以限制本揭示內容之範疇。

所述實施方式與專有名詞是為了闡述發明內容之用，並非用以限制本揭示內容範疇。本揭示內容範疇也涵蓋並未特意揭示於此，但習知技藝人士在閱讀過本揭示內容後可輕易推知的其他實施方式。

以下為本說明書中所用特定名詞的說明：在本文中，「治療(treating or treatment)」一詞意指對癌細胞或一個體施用所述化合物，以使至少45%、50%、55%、60%或65%的癌細胞生長停滯，防止癌細胞複製，因而可使腫瘤體積縮小。因此，「治療」一詞在此亦表示殺死癌細胞或誘發癌細胞進入細胞凋亡程序。

「一有效量(an effective amount)」一詞意此一用量在經過適當的給藥期間後，能夠達到治療癌症或血小板數量低下之所祈求的治療效果。

「化合物(compounds)」、「組合物(compositions)」、「藥劑(agent)」或「醫藥品(medicament)」等詞在此可互相替換，且都是指當施用於一個體(人類或動物)時，能夠透 過局部和/或全身性作用而誘發所欲藥學和/或生理反應的一種化合物或組合物。

「施用(administered、administering或、administration)」一詞在此係指直接施用所述的化合物或組合物，或施用活性化合物的前驅藥(prodrug)、衍生物(derivative)、或類似物(analog)等，而可於施用個體體內形成該活性化合物之一相當用量者。

本文中交替使用「個體(subject)」或「患者(patient)」等詞，其係指可接受所述化合物和/或方法治療的動物，包括人類。「個體」或「患者」在此涵蓋了雄性與雌性兩種性別，除非另有具體說明。因此「個體」或「患者」包含任何哺乳類動物，較佳為人類，其可因利用所述化合物進行治療而獲益。

本揭示內容至少有一部分是肇因於單離自金剛纂之三萜類化合物以及林醇二萜類化合物，分別具有可延緩癌細胞生長和/或誘發骨髓細胞增生與分化的特性而來。因此，本揭示內容這些單離的活性化合物是潛在可作為能治療癌症或血小板數量低下之治療性藥劑的先導化合物。

單離自金剛纂之活性化合物分別具有以下式(I)或(II)之結構，在某些實例中，該化合物具有以下式(I)之結構： 其中是一單鍵或雙鍵；R₁ 是-CH₃ ；R₂ 、R₃ 、R₄ 、R₅ 及R₆ 可分別為-H或是-CH₃ ；且R₇ 是-CH₃ 或是不存在(nil)。

明確的說，式(I)化合物可選自以下群組：

在其他實例中，該化合物具有以下式(II)之結構： 其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 為-COCH₃ 、且R₃ 是-CH₃ 、

明確的說，式(II)化合物可選自以下群組：

本揭示內容之式(I)或(II)化合物是單離自金剛纂(Euphorbia neriifolia )。收集金剛纂植物的地上部分(aerial parts)，並依據此領域中習知的方法，以有機溶劑進行萃取。適合的有機溶劑包括，但不限於，醇類(如，甲醇、乙醇、丙醇或異丙醇)，酯類(如，乙酸乙酯)，烷類(如，己烷和環己烷)，和鹵烷類(如，一氯或二氯甲烷、一氯或二氯乙烷)。在一較佳實例中，此有機溶劑為醇類，例如乙醇。依據本發明揭示方式，將乾燥的有機溶劑萃出物懸浮於水中，再次以乙酸乙酯進行萃取；接著再利用矽膠管柱層析法自乙酸乙酯萃出物中分離出純物質。依據本發明揭示內容，是以一系列的溶劑混合物對矽膠管柱進行沖提，並收集每一沖提部分，接著以另一矽膠管柱和/或製備級HPLC對每一沖提部分進行純化，直到得到純物質為止。在一較佳實施方式中，是使用由乙酸乙酯和正-己烷(0-100%)組成的混合溶劑梯度對矽膠管柱進行沖提，總計收集23個沖提部分。在一實例中，依序以己烷、95%己烷/5%乙酸乙酯組成的混 合溶劑，對矽膠管柱進行沖提。在另一實例中，則依序以己烷、80%己烷/20%乙酸乙酯組成的混合溶劑，對矽膠管柱進行沖提。在又一實例中，依序以5%乙酸乙酯和苯，對矽膠管柱進行沖提。非必要地，也可利用溶劑再結晶方法來加速分離出純物質。

因此，本揭示內容的第一目的是有關以本發明化合物(即，式(I)或(II)化合物)來製造可抑制癌細胞生長或是可治療癌症之藥品。所述藥品或藥學組合物包含一治療有效量之上述本發明化合物或其藥學上可接受的鹽類。

在一實例中，該具有式(I)結構的化合物為3β-木栓醇(3β-friedelinol)，其中是一單鍵；R₁ 、R₃ 、R₅ 及R₇ 分別為-CH₃ ；且R₂ 、R₄ 、及R₆ 分別為-H。在另一實例中，式(I)化合物是3β-蒲公英賽醇(3β-taraxerol)，其中是一雙鍵；R₁ 、R₂ 、R₄ 及R₆ 分別為-CH₃ ；且R₃ 及R₅ 分別為-H且R₇ 不存在(nil)。在再一實例中，式(I)化合物是3α-木栓醇(3α-friedelinol)，其中是一單鍵；R₁ 、R₃ 、R₅ 及R₇ 分別為-CH₃ ；且R₂ 、R₄ 、及R₆ 分別為-H。

在另一實例中，該具有式(II)結構的化合物是3,7,12-氧-三乙醯基-8-氧-替果林醇(3,7,12-O-triacetyl-8-O-tigloylingol(EN 26))，其中R₁ 、R₂ 、及R₄ 分別為-COCH₃ ；且R₃ 是。在另一實例中，式(II)化合物是3,7,12-氧-三乙醯基-8-氧-苯甲林醇 (3,7,12-O-triacetyl-8-O-benzoylingol(EN 27)，其中R₁ 、R₂ 、及R₄ 分別為-COCH₃ ；且R₃ 是。在再一實例中，式(II)化合物是3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(3,12-O-diacetyl-7-O-angeloyol-8-methoxylingol(EN 28)，其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 是；且R₃ 是-CH₃ 。在另一實例中，式(II)化合物是3,12-氧-二乙醯基-8-甲基-7-苯甲林醇(3,12-O-diacetyl-8-methoxy-7-O-benzoylingol(EN 29))，其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 是；且R₃ 是-CH₃ 。

癌細胞的生長，例如慢性骨髓白血病(CML)細胞、人類紅白血病(HML)細胞、食道癌細胞或是胰臟癌細胞的生長，均可被濃度約在1μM至10μM間(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10μM)的式(I)或(II)化合物抑制。在一實例中，體外食道癌細胞的生長可分別被1μM及10μM的3β-木栓醇(EN22)抑制約50%及60%。在另一實例中，體外食道癌細胞的生長可分別被1μM及10μM的3α-蒲公英賽醇(EN25)抑制約50%及60%。在再一實例中，體外CML細胞的生長可被10μM的3β-木栓醇(EN22)抑制約45%。在又一實例中，體外CML細胞的生長可被10μM的3,7,12-氧-三乙醯基-8-氧-替果林醇(EN26)抑制約40%。在其他實例中，體外CML細胞的生長可被10μM的3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(EN28)抑制約50%。在進一步的實例中，體 外人類紅白血病(HML)細胞的生長可分別被約2.5μM、5μM和10μM的3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(EN28)抑制約40%、55%及60%。

因此，本揭示內容提供一種可治療一患者之癌症的方法。所述方法包含對該患者施用一有效量之式(I)或(II)化合物，或其藥學上可接受的鹽類。

在某些實施方式中，可經由口服、靜脈注射或肌肉注射方式施用本發明式(I)或(II)化合物至該患者身上，所施用的有效用量約為1-100毫克/公斤個體體重間。每天可施用至該患者身上之本發明式(I)或(II)化合物的有效用量約為10、20、30、40、50、60、70、80、90或100毫克/公斤體重；較佳是約30-70毫克/公斤體重，例如約30、40、50、60、70毫克/公斤體重；更佳是約50毫克/公斤體重。這些劑量可以單次施用或是分成多次在一天內施用。

在某些實施方式中，所述方法更包括在施用本發明式(I)或(II)化合物的同時、之前或之後，對該患者施用另一種已知可改善癌症治療效果的藥物。在一特定實例中，在利用腹膜內注射方式施用2mg/Kg之順鉑的同時，以口服方式施用50mg/Kg之3β-木栓醇(EN22)至患有食道癌的實驗動物體內，並連續施用至少25天。意外發現此種組合治療可防止或減輕一般伴隨使用化療藥劑所引起的體重減輕問題。在另一實施方式中，對患有食道癌的實驗動物施用2mg/Kg之順鉑的同時，以口服方式施用50mg/Kg之3β-木栓醇(EN22)，並連續施用至少24天，發現此種組合治療對實驗 動物的白血球數目和/或肝、腎功能並無明顯的影響。

因此，本揭示內容提供一種可用來抑制癌細胞生長或可治療癌症的藥品或藥學組合物。此藥品或藥學組合物包括一治療有效量之上述本發明式(I)或(II)化合物；以及一藥學上可接受的輔劑。一般來說，本發明式(I)或(II)化合物的含量佔整體藥學組合物重量約0.1%至99%(重量%)。在某些實施方式中，本發明式(I)或(II)化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少1%(重量%)。在特定實施方式中，本發明式(I)或(II)化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少5%(重量%)。在另一些實施方式中，本發明式(I)或(II)化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少10%(重量%)。在又另一些實施方式中，本發明式(I)或(II)化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少25%(重量%)。

本發明的第二目的是有關以式(II)化合物來製造一種可誘發骨髓細胞增生和/或分化或可治療血小板數量低下之醫藥品或藥學組合物的新穎用途。此醫藥品或藥學組合物包含一治療有效量之式(II)化合物，或其藥學上可接受的鹽類； 其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 為-COCH₃ 、且R₃ 是-CH₃ 、

若以上述藥學組合物總重量為基準，本發明式(II)化合物約占該藥學組合物總重量的0.1%至99%(重量%)。在某些實施方式中，本發明式(II)化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的1%。在特定實施方式中，本發明式(II)化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的5%。在其他實施方式中，本發明式(II)化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的10%。在另外實施方式中，本發明式(II)化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的25%。

在一實例中，式(II)化合物是3,7,12-氧-三乙醯基-8-氧-替果林醇(3,7,12-O-triacetyl-8-O-tigloylingol(EN 26))，其中R₁ 、R₂ 、及R₄ 分別為-COCH₃ ；且R₃ 是。在另一實例中，式(II)化合物是，其中R₁ 、R₂ 、及R₄ 分別為-COCH₃ ；且R₃ 是。在再一實例中，式(II)化合物是3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(3,12-O-diacetyl-7-O-angeloyol-8-methoxylingol(EN 28)，其中 R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 是；且R₃ 是-CH₃ 。在另一實例中，式(II)化合物是3,12-氧-二乙醯基-8-甲基-7-苯甲林醇(3,12-O-diacetyl-8-methoxy-7-O-benzoylingol(EN 29))，其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 是；且R₃ 是-CH₃ 。

依據某些實施方式，白血病細胞(如，CML細胞或是HEL細胞)或正常骨髓細胞可被本揭示內容之式(II)化合物誘發增生並分化成為巨核細胞(megakaryocytes)。巨核細胞是生體內負責製造正常凝血過程中不可或缺之血小板的細胞。因此，本揭示內容之式(II)化合物是潛在可用來治療治療血小板數量低下之先導藥物。在一實例中，10μM的3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(EN 28)可誘使HEL細胞分化成為巨核細胞。在另一實例中，1.25μM至約5μM的3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(EN 28)可誘使正常骨髓細胞分化成為巨核細胞。

據此，本揭示內容提供一種治療血小板數量低下之方法。此方法包括對一亟需治療之患者施用一有效量之上述式(II)化合物，或其藥學上可接受的鹽類，以便誘使白血病細胞或骨髓細胞分化成為巨核細胞(megakaryocytic cells)。

在某些實施方式中，可經由口服、靜脈注射或肌肉注射方式施用本發明(II)化合物至該患者身上，所施用的有效用量約為1-100毫克/公斤體重間。每天可施用至該個體身 上之本發明(II)化合物的有效用量約為10、20、30、40、50、60、70、80、90或100毫克/公斤體重；較佳是約30-70毫克/公斤體重，例如約30、40、50、60、70毫克/公斤體重；更佳是約50毫克/公斤體重。這些劑量可以單次施用或是分成多次在一天內施用。

一般來說，本發明化合物(即，式(I)或(II)化合物)可經由口服(如，口服用膠囊、藥包(sachets)、懸浮液或藥錠)、或腸胃外(parenterally)等適當方法施用。腸胃外(parenterally)施用方式包括例如肌肉內注射、靜脈注射、皮下注射或腹膜內注射等系統性方式施用。或是，也可透過穿皮膜方式施用，如局部皮膚塗抹或是吸入性(如支氣管內、鼻腔內、口腔內或鼻滴劑等)；或是直腸內方式施用。施用時可單獨給藥或併同習知藥學可接受輔劑一起給藥。在較佳實施方式中，可經由口服方式(如，透過食物)將本發明化合物投予個體。

若以口服方式施用，可將本發明化合物配方成為內含各種輔劑(如，微晶纖維素、碳酸鈣、磷酸二鈣及甘胺酸)；各種崩解劑(如澱粉、藻酸及特定矽酸鹽)；以及顆粒黏合劑(如，聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明膠及相思樹膠(acacia))的藥錠。除此外，還可包含諸如硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉及滑石等的潤滑劑。與此相關的較佳材料包括乳糖或牛奶中的糖以及高分子量聚乙二醇。上述的固態劑型也可非必要地包括塗層或殼，例如腸衣塗層，以及用來改善任一藥物活性成分釋放速率的塗層。這類塗層的實例已為此領域 中人士所熟知。在一實例中，所述藥學組合物是被配方成為藥錠。在另一實例中，所述藥學組合物是被配方成為充填在軟或硬明膠膠囊內或是封裝在生物可分解之藥包內的顆粒。當使用方式是口服用懸浮液和/或特效藥液(elixirs)時，可組合活性成分與各種甜味劑或風味劑、著色劑或染料一起配方，需要時還可加入乳化劑和/或懸浮劑，以及諸如水、酒精、丙二醇、甘油等稀釋劑。

在某些實施方式中，本發明藥學組合物是被配方成為適合口服的液體劑型。此類液體配方可更包括用來維持pH值的緩衝液。也可將此液體配方充填在軟膠囊內。此液體劑型可為一種溶液，懸浮液，乳化液，微乳化液，沉澱或是可攜帶式(I)或(II)化合物、其之藥學上可接受的衍生物異構物、代謝物、鹽類或溶合物之任何液體介質。此液體可被設計成能改善式(I)或(II)化合物其之藥學上可接受鹽類之溶解度，以便形成一種含有藥物的乳化液或分散液。當使用這種劑型時，是將活性化合物與至少一種藥學上可接受的輔藥(包括，但不限於，上述輔藥)一起混合後形成。

若以腸胃外(parenterally)方式施用，可將本發明化合物配方成為液態的藥學組合物，其可為能以靜脈內注射、肌肉內注射、皮下注射或腹膜內注射等方式施用的無菌溶液或懸浮液。可用來製造上述無菌注射溶液或懸浮液的稀釋劑包括，但不限於，1,3-丁二醇、甘露醇、水、林格氏溶液、等張性氯化鈉溶液。也可使用脂肪酸(如，油酸)及其之甘油酯衍生物，或是天然藥學可接受的油(如，橄欖油或菜 籽油)來製造可供注射用的溶液或懸浮液。這類油性溶液或懸浮液中也可包含用來稀釋的醇類或羧甲基纖維素或類似的分散劑。也可使用其他常用的界面活性劑(如，Tweens或Spans系列)或乳化劑，或藥學領域製造配方時常用來增強生物可利用性的藥劑。

亦可將本發明之上述醫藥品或藥學組合物製成多種適用於黏膜給藥(mucosal application)的劑型，如經頰(buccal)和/或舌下(sublingual)藥物劑型單元，以遞送藥物穿過口腔黏膜。可使用多種生物可降解且藥學可接受的高分子輔劑，此種輔劑可使得藥學組合物具有可接受的吸附效果以及所欲的藥物釋放模式，且可和經頰和/或舌下藥物劑型單元中所含的欲施用活性成分或其他成分相容。一般來說，上述的高分子輔劑包含親水性聚合物，其可黏附至口腔黏膜的濕潤表面。高分子輔劑的實施例包括但不限於丙烯酸聚合物與共聚物(acrylic acid polymers and copolymers)；水解聚乙烯醇(hydrolyzed polyvinylalcohol)；聚乙烯氧化物(polyethylene oxides)；聚丙烯酸酯(polyacrylates)；乙烯聚合物與共聚物(vinyl polymers and copolymers)；聚乙烯吡咯啶；葡萄糖(dextran)；瓜膠(guar gum)；果膠(pectins)；澱粉；及纖維素聚合物(cellulosic polymers)。

當可理解，本發明之化合物的劑量會因個體而異，這不僅是因為所用的特定化合物或組合物、給藥途徑、化合物(單獨或連同一或多種藥物)於患者體內所引發之所欲反應等因素之不同，還可能受到其他因素影響，例如：欲 治療症狀的疾病狀態或嚴重程度；患者的年齡、性別或體重、患者的健康狀況；以及欲治療的病理狀態的嚴重程度、患者於同時進行的其他醫療或特殊飲食內容；以及本領域通常知識者可想到的其他因素；而負責照料的醫療人員最終可基於這些因素而判斷出適當的劑量。可調整給藥劑量與形式以提供較佳的治療反應。治療有效量同時也是指化合物或組合物所致的毒性或有害的效果不及於其所帶來的治療利益。在較佳的情形中，本發明之化合物或組合物於投藥時，應採用適當的劑量並持續一段時間，以使得症狀的數目和/或嚴重性得以降低。

以下實施例是用來闡明本揭示內容特定態樣並幫助習知技藝者了解並實施本揭示內容。但本揭示內容範疇並不限於這些實施例中。

實施例 材料與方法 實驗動物及細胞

在本研究中係使用人類慢性骨髓性白血病(chronic myelogenous leukemia，簡稱CML)細胞株K562R、紅白血病HEL細胞、人類胰臟癌似上皮細胞(epithelial-like)細胞株PANC-1以及人類食道鱗狀上皮細胞癌株81T/VGH(human esophageal squamous cell carcinoma line 81T/VGH)。將每一細胞株的細胞分別培育在經Dulbecco氏改良過之Eagle氏培養基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium,DMEM)中，並添加10%胎牛血清(fetal calf serum,FCS)、100單位 /ml之盤尼西林、100 μg/ml之鏈黴素(Invitrogen,Carlsbad,CA)和2miM L-穀氨酸，並維持在37℃的潮溼環境下(5% CO₂ 及95%空氣)。

無胸線BALB/c-nu裸鼠(4週齡)係購自國家動物中心(台北，台灣)，並飼養在無病源且飲水與食物可隨時取用的環境下。將81T/VGH細胞注入到裸鼠皮下組織內以建立移植腫瘤。所有動物實驗的執行均遵守馬偕紀念醫院實驗動物委員會所制定的相關規定。

MTT分析

MITT分析是一種比色分析，其可量測酵素(即，還原酶)在活細胞內將黃色的四唑化合物-溴化3-(4,5-二甲噻唑)-2,5-二苯四銼(3-[4,5-dimethylthiazol]-2,5-diphenyltetrazolium bromide，簡稱MTT)還原成甲(formazane)的活性。只有在細胞存活時，才能進行這種還原作用；因此通常會利用MTT分析來評估細胞存活與增殖的能力。簡言之，使細胞和10或20 μM的試驗化合物(如，式(I)或(II)化合物)接觸48或72小時；之後加入MTT染料(500 μg/ml)，並讓還原反應進行4小時；而後加入500 μl的異丙醇以終止還原反應。利用分光光度計測量樣本在570 nm之波長下的吸光度。

細胞週期分析

自培養基中取得經培育之細胞(不論是否經過本發明之化合物(即，式(I)或(II)化合物)預先處理)，接著，在4℃下以75%冰冷的酒精處理該些細胞至少經過一夜，使細 胞固定。之後，在室溫下以A型RNA酶(RNAase A)處理細胞約30分鐘，離心後將細胞沉澱物重新懸浮在適量的碘化丙啶(propidium iodide,PI)(20 μg/ml)中，然後以流式細胞儀測定出不同週期的細胞並計數其數目。

免疫墨點分析

利用已知的溶解緩衝液使培育後的細胞溶解，並利用布拉德福(Bradford)法來測量蛋白質總量。將萃取出的粗單白(about 50-100 μg)加入至0.15%的十二基硫酸鈉聚丙醯胺凝膠(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel)中，再利用電泳法分離其中的蛋白質。其後將分離後的蛋白質轉印至硝化纖維膜上，並利用含有4%脫脂牛奶的TBST緩衝液(0.8%氯化鈉、0.02%氯化鉀、25 mM Tris-HCl/pH 8.0以及0.1%的Tween-20)來移除非專一結合。將各種抗體(包括p-Jak-2、Jak-2、p-stat3-2、stat3、p-stat5、stat5、GAPDH(購自Transduction Laboratories,Lexington,KY,USA))分別溶解於含有2%脫脂牛奶的TRST緩衝液中，並分別和分離後的蛋白帶(protein band)於4℃下培育至少一夜。清洗後，以和辣根過氧化酶形成共軛的二次抗體(horseradish conjugated secondary antibodies)在室溫下培育約30分鐘，而後利用ECL化學冷光試劑(Amersham Pharmacia Biotech,US)偵測蛋白帶並利用X-光將底片曝光，便於以肉眼觀察表現的蛋白帶。

劉氏染色

將細胞轉移到載玻片上並以溶液A(0.5 g的甲基藍 (methylene blue)以及1.7 g的伊紅黃(Eosin yellow)，皆溶於1,000 ml的甲醇中)覆蓋。45秒後，加入溶液B(1.3 g的天藍染料(azure)、1.4 g的甲基藍、23.38 g的磷酸氫二鈉(Na₂ HPO₄ )與6.5 g的磷酸二氫鉀(KH₂ PO₄ )，皆溶於1,000 ml的蒸餾水中)，其中溶液B與溶液A的添加量為2：1。輕吹溶液表面，以使得兩種溶液混合均勻。將玻片靜置約90秒，而後以流動的水迅速地洗去染料。之後利用顯微鏡來觀察染色細胞的外觀。

生成食道鱗狀上皮細胞癌及活體內治療方法

於實驗開始的第1天，透過皮下注射方式，將1x 10⁵ 個81T/VGH細胞注射到實驗動物體內(每次注射1x 10⁵ 個細胞)，使之產生食道鱗狀上皮細胞癌。在抽出針頭後，立即以電子式凝血器(Aaron,Petersburg,Florida,USA)將注射針孔密封，以避免注入的物質洩漏出來，接著將切口縫合。

以皮尺測量腫瘤，並依據以下公式來計算體積大小：體積=(寬度)² x(長度)x 0.52每天量測動物體重，並依其體重調整添加在其飲水內的測試化合物(即，EN22、順鉑或是兩者的組合)濃度，使成為所示劑量。

STAT3 RNAi試驗

挑選小鼠stat3標的基因從位置134至158之序列(5’-TGG CCC AAT GGA ATC AGC TAC AGC A-3’(序列編號：1))來合成stat3干擾性RNA(stat3 siRNA)(5’-UGG CCC AAU GGA AUC AGC UAC AGC A-3’，序列編號：2)。同時以 scramble RNA做為負控制組並依據製造商提供的說明指引以PCR衍生的siRNA表現匣來合成干擾RNA，並將其植入pSEC^TM hydro質體內(Ambion)。

透過轉染試劑lipofectamine(Invitrogen,Carisbad,CA,USA)以上述質體(即，內含stat3干擾性RNA或是scramble RNA的質體)來轉染小鼠HEL細胞或是K562細胞。詳言之，在室溫下，於不含抗生素的DMEM培養基內，在25分鐘內，將5μg內含小鼠stat3 siRNA pSEC^TM hydro質體與9 μl lipofectamin2000一起混合以形成一複合物。將著將所形成的複合物加到培養在6個培養孔之HEL細胞或是K562細胞的培養基內，並繼續培育24小時。

為了挑選具有siRNA高表現率的穩定細胞株，以內含500μg/ml之潮黴素的培養基篩選出可穩定表現stat3 siRNA的細胞株以及負控制組siRNA(即，scramble RNA)，並將選植出來的選植株維持在內含250μg/ml之潮黴素的培養基內。利用免疫分析來確認轉染有小鼠stat3 siRNA之HEL細胞或是K562細胞中小鼠stat3基因的表現情況。

實施例1 從金剛纂植物中單離及鑑別出式(I)或(II)化合物

將18.2公斤之金剛纂的地上部切碎後再以每次40公升乙醇迴流萃取，共進行3次。將368克乾燥的乙醇抽出物重新懸浮在1公升的水中，並依序以乙酸乙酯及正-丁醇(每次1公升，萃取3次)進行萃取，並分別獲得乙酸乙酯(82克)、正-丁醇(37克)及水(304克)之抽出物部分。將80克的 乙酸乙酯抽出物載入矽膠管柱(10 x 120公分)中，並以溶劑乙酸乙酯及正-己烷進行梯度混合(乙酸乙酯由0%至100%)，來充提該矽膠管柱，並依TLC結果進行收集，總計可獲得約23個沖提部分(第1-23部分)。

將第5及第6部分混合(共3.5克)，繼續利用矽膠管柱進行層析，並以5%乙酸乙酯/正-己烷溶液進行沖提，以獲得EN22和EN23。將第8部分(10.4克)載入矽膠管柱，並以5%乙酸乙酯/正-己烷溶液進行沖提，可獲得後續第8-1至8-8共8個部分。收集第8-4與8-6兩部分的沉澱，並利用正-己烷/乙酸乙酯進行再結晶，可分別獲得EN24和EN25。將第8-4與8-6兩部分的濾液合併，繼續利用矽膠管柱進行層析，並以5%乙酸乙酯/正-己烷溶液進行沖提，亦可獲得EN24和EN25。

將第14部分(3.9克)載入矽膠管柱，並以20%乙酸乙酯/正-己烷溶液進行沖提，可獲得後續第14-1至14-10共10個部分。以矽膠管柱(以5%乙酸乙酯/苯溶液沖提)和製備級HPLC(碳18管柱)來純化第14-5部分(1.1克)，可獲得EN28和EN29。以矽膠管柱(以5%乙酸乙酯/苯溶液沖提)和製備級HPLC(碳18管柱)來純化第14-6部分(0.6克)，可獲得EN26和EN27。

分離出來的化合物利用質譜儀、¹ H-NMR、¹³ C-NMR和2D-NMR等光譜分析，進行結構解析與鑑定，所獲得數據分別列在下面及表1與表2中。

3β-木栓醇(EN 22) ：白色粉末；¹ H NMR(pyridine-d₅ ) δ 0.91(3H,s,H-25),0.97(3H,s,H-26),0.98(3H,s,H-29),1.02(3H,s,H-27),1.05(3H,s,H-30),1.16(3H,d,J=7.2 Hz,H-23),1.17(3H,s,H-28),1.27(3H,s,H-24),1.00(1H,m,H-6a),1.65(1H,m,H-2a),1.80(1H,dt,J=13.2,3.0 Hz,H-6b),2.14(1H,dd,J=13.2,3.0 Hz,H-2b),3.96(1H,s,H-3)；¹³ C NMR(pyridine-d₅ ,CDCl₃ )參見表1；EIMSm/z 428[M]⁺ .

3α-蒲公英賽醇(EN 23)： 白色粉末；¹ H NMR(pyridine-d₅ )δ 0.88(6H,s,H-27,-28),0.91(3H,s,H-24),0.96(3H,s,H-30),0.97(3H,s,H-25),0.98(3H,s,H-29),1.13(3H,s,H-26),1.19(3H,s,H-23),3.61(1H,s,H-3),5.57(1H,dd,H=7.8,3.0 Hz,H-15)；¹³ C NMR(pyridine-d₅ ,CDCl₃ )參見表1；EIMSm/z 426[M]⁺ .

3β-蒲公英賽醇(EN 24)： 白色粉末；¹ H NMR(pyridine-d₅ )δ 0.80(1H,d,J=10.0 Hz,H-5),0.89(3H,s,H-28),0.95(3H,s,H-25),0.97(3H,s,H-30),0.98(3H,s,H-27),0.99(3H,s,H-29),1.06(3H,s,H-24),1.11(3H,s,H-26),1.23(3H,s,H-23),3.43(1H,dd,J=10.5,5.0 Hz,H-3),5.61(1H,dd,H=8.0,3.5 Hz,H-15)；¹³ C NMR(pyridine-d₅ ,CDCl₃ )參見表1；EIMSm/z 426[M]⁺ .

3α-木栓醇(EN 25)： 白色粉末；¹ H NMR(pyridine-d₅ )δ 0.81(3H,s,H-25),0.95(3H,s,H-26),0.97(6H,s,H-27,-29),1.03(3H,s,H-30),1.18(3H,d,J=6.6 Hz,H-23),1.16(3H,s,H-28),0.81(3H,s,H-24),1.04(1H,m,H-6a),1.59(1H,m,H-2a),1.77(1H,td,J=13.2,3.0 Hz, H-6b),2.32(1H,m,H-2b),3.58(1H,m,H-3)；¹³ C NMR(pyridine-d₅ ,CDCl₃ )參見表1；EIMSm/z 428[M]⁺ .

3,7,12-氧-三乙醯基-8-氧-替果林醇(EN 26) 白色粉末；¹ H和¹³ C NMR(CD₃ OD)參見表2；ESIMSm/z 597[M+Na]⁺ .

3,7,12-氧-三乙醯基-8-氧-苯甲林醇(EN 27)： 白色粉末；¹ H和¹³ C NMR(CD₃ OD)參見表2；ESIMSm/z 619[M+Na]⁺ .

3,12-氧-二乙醯基-7-氧-當歸醯基呋-8-甲氧林醇(EN 28)： 白色粉末；¹ H和¹³ C NMR(CD₃ OD)參見表2；ESIMSm/z 569[M+Na]⁺ .

3,12-氧-二乙醯基-8-甲基-7-苯甲林醇(EN 29)： 白色粉末；¹ H和¹³ C NMR(CD₃ OD)參見表2；ESIMSm/z 591[M+Na]⁺ .

實施例2 本發明化合物之抗增生活性 2.1 EN22、EN24或EN25抑制人類食道鱗狀上皮細胞癌

利用上文「材料與方法」部分所述試驗來評估本發明式(I)化合物(即，EN22、EN24或EN25)抑制人類食道鱗狀上皮細胞生長的能力，結果示於表3中。

試驗結果顯示經過1μM之任何一種式(I)化合物處理24小時後，人類食道鱗狀上皮細胞(81T/VGH細胞)的數目減少約50%；且當式(I)化合物濃度被提高至10 μM後，可進一步減少81T/VGH細胞的數目約60%。

2.2 EN22可使移植有人類食道鱗狀上皮細胞(81T/VGH)癌之實驗動物身上的腫瘤體積縮小

依據上文「材料與方法」段落所述試驗步驟在小鼠身上接種人類食道鱗狀上皮細胞，並使之發展成為腫瘤。在活體治療方面，在有或無經口服用20 mg/Kg之EN22的情況下，同時透過腹膜注射對小鼠施加2 mg/Kg的順鉑，並持續施用4週。接著，在指定期間分別測量小鼠身上的腫 瘤體積大小、小鼠體重、白血球數目及肝臟功能。結果分別顯示在第1-3圖。

第1圖繪示出EN22對經過順鉑治療之動物身上腫瘤體積變化的影響。如第1圖所示，小鼠身上的腫瘤體積會隨著時間的增加而增加，而習用的化療藥劑-順鉑(劑量2 mg/Kg)，於整個治療期間可有效地抑制腫瘤體積，使不致增加。EN22也具有類似的效果，雖然其效果不若順鉑來得好，但仍展現出與劑量之間的相依性，其中50 mg/Kg EN22的效果較20 mg/Kg EN22的效果來得佳。此外，組合使用EN22(20 mg/Kg)與順鉑(2 mg/Kg)，其縮減腫瘤體積大小的效果與單獨使用順鉑(2 mg/Kg)的效果相去不遠。

習用化療藥劑的一大缺點是會造成使用者體重大幅滑落，進而因使用者無法維持健康體重而折損藥劑本身的治療效果。參照第1及2圖，雖然順鉑可以有效地抑制腫瘤生長(第1圖)，但是實驗動物體重卻大幅滑落約40%(第2圖)。相反的，雖然EN22本身抑制腫瘤生長的效果不及順鉑，但是EN22本身卻不會造成實驗動物體重大幅下降；當同時給予50 mg/Kg的EN22及2 mg/Kg之順鉑時，此種組合治療可大幅減少過去因使用化療藥劑所造成的「體重滑落」的問題。

第3圖為EN22對經過順鉑治療之動物體內白血球細胞數目(WBC)變化的影響。所測試的EN22劑量，包括25或50 mg/Kg，均能抑制腫瘤生長，且不會影響白血球細胞的數目。類似的結果也可在經過順鉑(2 mg/Kg)治療的動物 身上觀察到。

2.3 EN26或EN28可抑制體外人類慢性骨髓白血病(CML)細胞和/或人類紅白血球(HEL)細胞的生長

可透過本文「材料與方法」段落所述細胞存活試驗，來評估本揭示內容式(I)或(II)化合物，特別是EN22、EN26或EN28，對K562細胞生長的影響。結果總結於表4中。

如表4所示，對抑制人類慢性骨髓白血病細胞(K562細胞)來說，式(II)化合物(如，EN 28)的效果似乎比式(I)化合物來得好。在經過10 μM之EN28治療24小時後，K562細胞數目減少約20%；至於EN22，則可造成細胞數目減少約17%。隨著EN28的處理時間被延長到72小時，可使細胞數目減少達約50%。第4圖則繪示出K562細胞的體外生長抑制與本發明化合物濃度間的依存關係。在紅白血球(HEL)細胞的體外生長上也可獲得類似的結果。

實施例3 式(II)化合物對血小板數量低下的影響 3.1 EN28促進巨核細胞成熟

巨核細胞生成乃是骨髓前驅細胞發展變成巨核細胞的過程，這些巨核細胞又是產生正常凝血時不可或缺之血小板所需的細胞。在本申請案中，發明人意外發現當連續以10 μM之EN28處理K562細胞9天，細胞外形會產生顯著變化，可觀察到細胞間開始融合並形成巨核細胞(參見第6圖)。類似的結果也可在HEL細胞上觀察到(參見第7圖)。此外，細胞週期分析進一步證實EN28可以誘使產生新的細胞群(參見第8圖)。

發明人進一步藉由測量諸如stat3及磷酸化之stat3等調控蛋白的表現量，來確認EN28誘使K562細胞或HEL細胞形成巨核細胞的能力。實驗發現，相較於控制組，經過EN28處理的K562細胞或HEL細胞中，stat3及磷酸化之stat3的表現量會增加(參見第9圖)。此外，EN28誘使巨核細胞分化的現象，會因為細胞內stat3之干擾性RNA的表現，使得stat3蛋白質的表現被抑制，而逆轉；此一觀察也確認stat3蛋白質會參與巨核細胞的分化過程(參見第10圖)。

此一誘發巨核細胞分化的現象，也可透過測量紅血球細胞膜上的分化標誌蛋白CD61及CD235a的表現量來確認。如第11圖所示，細胞經過5 μM EN28處理後，可使CD61的表現量增加，同時減少CD235a的表現量；且stat3基因 並不參與往上調控此CD6及往下調控CD235a的現象。

即使是正常的骨髓細胞，在經過低濃度(1.25 μM)的EN28處理後，也可先誘使其增生，接著再使增生的細胞成熟為巨核細胞(參見第12圖)。

當可理解上述實施方式與實施例僅為例示，且熟習此技藝者可對齊進行各種修飾。上文提出之說明書、實施例與資料的目的在於使本說明書的結構完備，並作為實作本發明之例示。雖然本揭示內容已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本揭示內容，任何熟習此技藝者，在不脫離本揭示內容之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本揭示內容之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

為讓本揭示內容之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：第1圖繪示出依據本發明一實施方式，EN22對以順鉑治療之動物體腫瘤大小之影響；第2圖繪示出依據本發明一實施方式，EN22對以順鉑治療之動物體體重減輕之影響；第3圖繪示出依據本發明一實施方式，EN22對以順鉑治療之動物體內白血球細胞數目之影響；第4圖繪示出依據本發明一實施方式，EN28對K562細胞之體外生長抑制的影響； 第5圖繪示出依據本發明一實施方式，EN28對HEL細胞之體外生長抑制的影響；第6圖為依據本發明一實施方式，經劉氏染色法標定出之K562細胞的照片，其中(A)為控制組細胞的照片，且(B)為經過10μM EN28處理9天後之細胞的照片；第7圖為依據本發明一實施方式，經劉氏染色法標定出之HEL細胞的照片，其中(A)為控制組細胞的照片，且(B)為經過10μM EN28處理5天後之細胞的照片；；第8圖為依據本發明一實施方式，有或無經EN28處理之HEL細胞的細胞週期分析；第9圖為依據本發明一實施方式，有或無經EN28處理之HEL細胞的磷酸化蛋白表現量；第10圖為依據本發明一實施方式，利用干擾性RNA去除HEL細胞中Stat3基因表現的結果，其中控制組實驗係以scramble RNA進行；第11圖為依據本發明一實施方式，以流式細胞儀分析有或無經EN28處理之HEL細胞內CD61和CD235a的表現量結果；以及第12圖為依據本發明一實施方式，EN28誘使正常骨髓細胞增生及分化成為巨核細胞的效果。

<110> 馬偕紀念醫院 陳裕仁 林麗純

<120> 單離自金剛纂之化合物於癌症和/或血小板數量低下之治療用途

<130> P2716US

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 25

<212> DNA

<213> 小鼠

<400> 1

<210> 2

<211> 25

<212> RNA

<213> 合成

<400> 2

Claims (6)

1. 一種活體外用來延緩白血病細胞之生長或誘使該白血病細胞或一骨髓細胞分化成為巨核細胞的方法，包含使該白血病細胞或該骨髓細胞接觸一足夠量之式(II)化合物或其藥學上可接受的鹽類 其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ； R₂ 為-COCH₃ 或；且 R₃ 是CH₃ 或； 其中當R₂ 為則R₃ 是CH₃ ，或當R₂ 為-COCH₃ 則R₃ 是。
2. 如請求項1所述之方法，其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 為且R₃ 是-CH₃ 。
3. 如請求項2所述之方法，其中該足夠量之式(II)化合物是約1.25μM至約10μM間。
4. 如請求項2所述之方法，其中該白血病細胞為慢性骨髓白血病細胞或紅白血病細胞；且該骨髓細胞為正常骨髓細胞。
5. 一種式(II)化合物的用途，其可用來製造一種可治療血小板數量低下的藥物， 其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ； R₂ 為-COCH₃ 或；且 R₃ 是CH₃ 或； 其中當R₂ 為則R₃ 是CH₃ ，或當R₂ 為-COCH₃ 則R₃ 是。
6. 如請求項5所述之用途，其中R₁ 及R₄ 分別為-COCH₃ ；R₂ 為且R₃ 是-CH₃ 。