TWI434698B - 人類酸性纖維母細胞生長因子之醫藥用途 - Google Patents

Description

人類酸性纖維母細胞生長因子之醫藥用途

本發明係關於一種治療神經退化的方法。

神經壓迫症，又稱壓迫性神經病變，係為一種因直接壓迫、神經或周圍組織的結構改變，或在單一神經上的機械性傷害所造成之病症，其症狀包括疼痛、刺痛、發麻與肌肉無力。該症狀視其被影響之神經，僅影響身體之特定部位。知名的例子為手腕正中神經受到壓迫(腕隧道症)，其他神經如手腕或肘之尺神經與脊椎孔的脊髓神經根也容易受到傷害。神經壓迫之長期影響可能導致神經元退化與神經功能的喪失。

減壓手術係一種常規的治療方法用於移除壓迫源，如硬骨或軟骨，以舒緩壓迫並且減輕神經病性疼痛。症狀在手術後可完全移除，但倘若壓迫過於嚴重或過久，神經可能無法完全地恢復且可能會殘存某些症狀。此外，病患的功能性恢復在手術後將需要更長的時間來達成。在多數案例中，退化的神經纖維無法以減壓手術修復。

因此，在壓迫性神經病變之早期階段或減壓手術後，仍需一種改善或恢復退化神經之功能之方法。

本發明非預期地發現酸性纖維母細胞生長因子(acid fibroblast growth factor，aFGF)在神經再生中扮演關鍵的角色。當投予aFGF至患有神經壓迫症之個體後，觀察到退化或受傷的神經之功能性的恢復。與傳統減壓手術相比，注射aFGF係為更有效且更安全的療法。

因此，本發明提供一種治療因神經壓迫症或壓迫性神經病變所造成之神經退化之方法，包括投予有需要之個體人類酸性纖維母細胞生長因子(acidic fibroblast growth factor，aFGF)。

需瞭解是上述之一般說明與之後的詳細說明皆僅用於例示或解釋而非對本發明之限制。

在本文中冠詞「一」或「該」意指該冠詞之文法上受詞為一個或一個以上(即至少為一個)，除非另外闡明該冠詞特別用於單數文義。

本發明提供一種治療因神經壓迫症或壓迫性神經病變所造成之神經退化之方法，包括投予有需要之個體人類酸性纖維母細胞生長因子(acidic fibroblast growth factor，aFGF)、纖維蛋白原、抑肽酶(aprotinin)與二價鈣離子。

本文所稱之「神經壓迫症」或「壓迫性神經病變」乙詞意指因微血管功能之局部性阻礙以及神經或周圍組織之結構改變所導致之週邊神經失調。神經壓迫症可能是長期或重複的外部力量所產生的壓迫，如坐時以一手臂環繞於椅背上(橈神經)、經常地以一肘於桌上休息(尺神經)或不合腿的輔具或支架(腓神經)。壓迫會隨著時間變得更為嚴重，病灶處會發生去髓鞘化，然後神經軸損傷，最後產生瘢疤。此外，某些情況會使神經特別容易受到壓迫，其中包括糖尿病，其血液供給至神經已經不足，使得神經對於輕微的壓迫變得更敏感。

常見的神經壓迫症包括椎間盤脫出、頸椎神經壓迫症、胸廓出口症與腕隧道症。其他神經壓迫症可能包括，但不限於，前骨間神經症、旋前圓肌症、Struther氏韌帶症、肘隧道症、蓋氏通道症、橈神經壓迫、後骨間神經壓迫、Wartenberg氏症、肩胛上神經壓迫、腓神經壓迫、跗管症、麻痛性股痛、髂腹下神經壓迫、閉孔神經壓迫、會陰神經壓迫以及腹部皮神經壓迫症。

本文所稱之「人類aFGF」乙詞意指天然人類aFGF或任何來自於天然人類aFGF之修飾胜肽。可藉由對天然人類aFGF進行一次或多次的刪除、插入或置換或前述組合而得到該修飾胜肽。在本發明之一具體實施例中，該修飾人類aFGF係包括自天然人類aFGF之N端刪除20個胺基酸所縮短的天然人類aFGF，並且在該縮短的天然aFGF前端增加一個丙胺酸。例如，該人類aFGF可為一具有序列編號：1之胺基酸序列之胜肽，其係揭露於美國專利申請案第12/482041號中，此專利全文內容併入本案作為參考。

根據本發明，人類aFGF可製備為任何適合所選擇之投予方式之態樣。較佳的是，人類aFGF係以局部地、神經內或肌肉內給予。根據本發明，本發明領域熟習該項技藝之人能輕易地依其經驗或根據神經壓迫症之患者之生理狀況決定投予之途徑與劑量，如年齡、體重、嚴重程度或劑量。在本發明之一具體實施例中，0.1 mg/ml人類aFGF係被注射入左側內收拇指肌。

已知多肽或蛋白質會輕易地於活體內降解。為了延長人類aFGF在個體內之功效，人類aFGF可以任何載體或組合物包覆以持續釋放。例如，纖維蛋白膠已成功地於手術界廣泛使用，如皮膚移植的固定、神經修復、軟骨的重新附著以及微血管的黏合。許多研究也證實纖維蛋白膠可長期的持續釋放活性成份。

因此，在本發明之一實例中，人類aFGF係包含在一纖維蛋白膠混合物中，並且投予至患有神經壓迫症或壓迫性神經病變的個體中。在纖維蛋白膠混合物中，aFGF之較佳濃度約為0.01 mg/ml至100 mg/ml。在本發明之一具體實施例中，當透過左側內收拇指肌注射方式給予時，該纖維蛋白膠混合物含有0.1 mg/ml aFGF。在本發明之另一具體實施例中，當透過枕骨大孔注射方式給予時，該纖維蛋白膠混合物含有0.04 mg/ml aFGF。本發明領域熟習該技藝者當可基於本說明書所揭露之內容，依據其知識與常規實驗的標準方法輕易地決定治療有效量，以及劑量或投予頻率。

本發明所稱之纖維蛋白膠混合物係指一藥物組合物，其包含人類aFGF、纖維蛋白原、抑肽酶與二價鈣離子，其可提供生物相容性與持續釋放之功效。在本發明之一實例中，該二價鈣離子可來自於任何鈣離子源，如藉由添加氯化鈣或碳酸鈣所提供。

根據本發明，該纖維蛋白膠混合物係包括0.01-100 mg/ml人類aFGF以及纖維蛋白膠，其包括10-1000 mg/ml纖維蛋白原、10-500 KIU/ml抑肽酶與0.1-10 mM二價鈣離子。在本發明之一實例中，為提供更佳的凝結作用，其纖維蛋白膠混合物可另包括10-100 IU/ml凝血酶。

本發明之纖維蛋白膠混合物可製備為任何適合所選擇之投予方式之態樣。較佳的是，纖維蛋白膠混合物係以局部地、神經內或肌肉內給予。依據本發明，本發明領域熟習該項技藝者能輕易地依其經驗或正遭受到神經壓迫症之患者之生理狀況決定投予途徑，如年齡、體重、嚴重程度或劑量。

依據本發明，一神經退化動物模式係被設計以驗證促進神經纖維生長與功能性恢復的功效。在本發明之一具體實施例中，頸背根神經節以8-O尼龍縫線捆綁。捆綁受傷1週後，將含0.6 μg aFGF之總量為6 μl生理食鹽水注入左側內收拇指肌中。

在本發明另一具體實施例中，捆綁受傷1週後，將5 μl纖維蛋白膠混合物，其包括0.04 mg/ml(0.2 μg aFGF於5 μl生理食鹽水中)、10 mg/ml纖維蛋白原與200 KIU/ml抑肽酶，直接注入手術大鼠之枕骨大孔中。首次注射5分鐘後，以同一注射器注入10 μl補充組合物至枕骨大孔中，其包含0.45 mM氯化鈣與10 IU/ml凝血酶。

透過抓握力試驗檢測功能性的進步。從處理後2和3週之實驗結果得知，給予aFGF之組對於恢復神經功能有較好的功效，其抓握力比(受傷左側/正常右側)顯著地高於安慰劑控制組(僅給予生理食鹽水)。如結果所示，本發明提供非預期地神經功能恢復之治療。

因為神經再生是費時的，持續的給予對於修復神經退化是必需的。在本發明之一實例中，建議給予個體包含人類aFGF之組織蛋白膠混合物一個月一次。任何熟習本發明領域該項技藝者能依標準方法與通常知識以及個體給予後的表現來決定劑量。

本發明現由下列實例進行進一步之說明。然而，需注意的是該等實例係為說明而非限制之目的而提供。

實例：在壓迫神經病變之大鼠模式中以aFGF恢復神經功能 動物

總數20隻Sprague-Dawley成年母鼠，年齡在8到10週間，使用時體重為250至300克。動物以一般溴氯三氟乙烷麻醉(1.0升/分鐘以保持呼吸頻率約60/分鐘)於加熱墊上操作。於手術期間監控並且維持直腸溫度。使用雙極電燒讓出血降至最小。術前與術後1週每天於皮下注射抗生素。術後，動物置於通風、濕度與溫度皆受到控制之12/12小時日/夜循環的房間中。

大鼠的壓迫手術

大鼠以趴臥姿勢放置並且露出C4至C8脊椎骨。於左側C4至C7施行半側脊椎板切除術。於顯微鏡下辨識出左側C5至C7頸神經根，接著於該區域整個切面上輕微地鑽孔移除更多側邊。接著，小心地將硬腦膜打開並且緊拉C5至C7神經根，將露出的左側頸背根神經節之C5、C6與C7截斷後以8-O尼龍縫線捆綁末端。術後，將大鼠分成兩個實驗組。

在A組中，大鼠分成安慰劑控制組(以生理食鹽水治療，n=6)，與aFGF組(以6μl含有0.6 μg之aFGF治療，n=5)。壓迫手術1週後，大鼠以異氟烷麻醉並於保溫墊上維持其體溫，在aFGF治療組中於肌肉內緩慢地注入含有總量0.6 μg aFGF之6 μl生理食鹽水至內收拇指肌中(從第1掌墊到第4掌墊，1.5 μl/掌墊)，同時控制組以生理食鹽水注射。以抓握力試驗評估神經的功能性恢復(表1)。

另外在B組中，大鼠一樣被分成兩組：安慰劑控制組以生理食鹽水治療(n=4)，與aFGF治療組(0.2 μg aFGF/5 μl生理食鹽水，n=4)。在壓迫手術1週後，在aFGF治療組中將aFGF與5 μl雞尾酒溶液混和後緩慢地注入枕骨大孔中，其中該雞尾酒溶液包括1.5 mg纖維蛋白原(Beriplast P,Germany)、抑肽酶溶液(200 KIU/ml，20 μl)以及漢克氏平衡溶液(80 μl，Hank’s balanced solution，HBSS)，同時控制組注入生理食鹽水混和5μl雞尾酒溶液。在注射含有aFGF或生理食鹽水之雞尾酒溶液5分鐘後，於枕骨大孔中注入10 μl第二溶液，其包括0.45 mM氯化鈣與10 IU/ml凝血酶，接著於數秒後移除注射器。神經的功能性恢復亦以抓握力試驗評估(圖1)。

抓握力試驗

抓握力試驗係修改自Bertelli與Mira之方法(J.A. Bertelliet al .,and J.C. Mira,Neurosci Methods 58:151-5,1995)。為評估抓握強度，一金屬橫棒連接至一普通電子秤。兩前肢均予以測試，一次測試一前肢。未測試之前肢以膠帶捆綁暫時阻止抓握，而欲測試之前肢則保持自由。讓大鼠抓握住橫棒，同時從尾巴逐漸穩定地舉起大鼠直到鬆手，然後評分抓握力。抓握力指數為受傷側/正常側(受傷側-左/正常側-右)之比例。分數越高，則表示神經恢復狀況越好。

表1顯示A組肌肉內注射至內收拇指肌之抓握力結果。其可觀察到aFGF治療組之大鼠抓握力表現優於其他控制組。

B組之抓握力試驗結果呈現於圖1。雙尾學生試驗(Student’s test)用來檢測aFGF治療組和控制組間或aFGF治療前和治療後之間在抓握力方面的統計上差異。在圖1中，治療後2週和3週時，投予aFGF之大鼠之分數顯著地高於投予生理食鹽水之大鼠(*，p <0.05)。另一方面，投予aFGF之大鼠，在治療2週和3週後之分數皆顯著地高於aFGF治療前(#,p <0.05)。這些研究結果顯示對於患有慢性/急性壓迫性或機械性的神經傷害之個體，經由枕骨大孔投予aFGF能挽救神經功能。此結果在目前因神經壓迫症所造成之神經性退化之治療領域中是一種突破。

熟習技藝者將可明瞭，可對上述之具體實例進行變化而不偏離其廣泛之發明概念。因此，咸可明瞭，本發明並不限於所揭示之特定具體實例，其係欲涵括由附呈之申請專利範圍所定義之本發明精神及範圍中之修飾。

<110>　雅祥生技醫藥股份有限公司

<120>　治療神經退化之方法

<130>　HC0020PRO

<150>　US 61/233,987

<151>　2009-08-14

<160>　1

<170>　PatentIn 3.5版

<210>　1

<211>　135

<212>　PRT

<213>　人類

<400>　1

前文整理及以下有關本發明之詳細敘述，結合附加之圖式將可幫助理解本發明。

圖1係為顯示壓迫手術後大鼠經枕骨大孔投予生理食鹽水或人類aFGF後之抓握力試驗表現之圖表。*表示aFGF治療組與控制組間有顯著差異(p <0.05)。#表示治療前組與治療後組間有顯著差異(p <0.05)。

Claims (10)

1. 人類酸性纖維母細胞生長因子(acidic fibroblast growth factor，aFGF)在製備用於經由神經內、肌肉內或脊髓腔內(intrathecal)投予而治療因神經壓迫症或壓迫性神經病變所造成之神經退化之藥物的用途。
2. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該神經壓迫症或壓迫性神經病變係由慢性或急性壓迫，或機械性傷害所造成。
3. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該神經壓迫症或壓迫性神經病變包括椎間盤脫出、頸椎神經壓迫症、胸廓出口症及腕隧道症。
4. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該人類aFGF係自天然人類aFGF之N端刪除20個胺基酸，並於縮短之天然aFGF前端加上丙氨酸。
5. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該人類aFGF具有序列編號：1之胺基酸序列。
6. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該人類aFGF可另與纖維蛋白原、抑肽酶及二價鈣離子混和以形成纖維蛋白膠混合物。
7. 如申請專利範圍第6項之用途，其中該二價鈣離子係藉由氯化鈣或碳酸鈣之添加所提供。
8. 如申請專利範圍第6項之用途，其中該纖維蛋白膠混合物包括0.01-100mg/ml人類aFGF，以及纖維蛋白膠包含10-1000mg/ml纖維蛋白原、10-500KIU/ml抑肽酶及0.1-10mM氯化鈣。
9. 如申請專利範圍第6項之用途，其中該纖維蛋白膠混合物包括0.04-100mg/ml人類aFGF、10mg/ml纖維蛋白原、200KIU/ml抑肽酶及0.45mM氯化鈣。
10. 如申請專利範圍第6項之用途，其中該纖維蛋白膠混 合物可另包括10-100IU/ml凝血酶。