TWI314055B - Sensitization of chemotherapeutic agent resistant neoplastic cells with reovirus - Google Patents
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1314055 A7 B7 I、發明説明([) 發明領域 本發明乃關於利用呼腸弧病毒來增加對化學治療試劑具 抗性之新生瘤細胞之敏感性’ 一種利用呼腸弧病毒與化學 治療試劑來治療增殖疾病的方法。 參考文獻 美國專利第6,136,307號。 WO 94/18992,1994 年 9 月 1 日出版。 WO 94/25627,1994 年 11 月 10 日出版。 WO 99/18799,1999 年 4 月 22 日出版。
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裝 玎
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在繼續尋找當中。 化學療法中一項§1 !以Ba 、頌者的問題為腫瘤會對藥物產生抗性。 舉例來說,一種藥物太 _ 、 在第一;人被投入病患體内時可能具有 很南的效率,盆可丨v机 ” 了以殺死腫瘤細胞與降低腫瘤的大小,如 °、吏病〜進入緩解期 '然而在一段時間後,腫瘤可能再 又成長)1匕4相同的藥物可能無法有效殺死再度生長的 腫瘤’’田胞坆種逐漸產生抗藥性的現象可能是來自於腫瘤 中-小群具有抗藥性的細胞,其在首次的藥物治療中得以 殘存下來但主要的腫瘤則被殺死。這些具抗性的細胞最後 月b夠再成長’形成元全只含有抗藥性細胞的腫瘤。 在治療開始時使用組合藥物是一種可能的解決方法,因 為在同乡田胞中要能同時產生兩種或多種不同抗藥性途徑 突變的可能性是很小的(DeVita,jr.,1983 )。然而,研究中亦 發現對一種藥物具抗性的細胞通常亦對多種藥物具有抗 性’包括能夠藉由不同途徑殺死腫瘤細胞之結構上無相關 性的藥物。因此,組合藥物療法並無法解決問題。 雖然我們對整個機制尚未完全瞭解,但腫瘤細胞具多重 藥物抗性最好的證據與臨床相關機制乃與p _醣蛋白(M D R 1 基因的產物)的表現有關。ρ-醣蛋白是一種位於細胞膜上 具有廣泛專一性的外送幫浦,其功能為降低胞内累積的多 種親脂性細胞毒殺性藥物,包括―些廣泛使用的抗癌試劑 如胺茴環黴素(anthracyclines)、長春花屬生物鹼、表鬼臼脂 素卜?丨?0(1(^]^11(^(^113)、放線菌素〇、與紫杉醇,而使細胞 對這些藥物具有抗性(Pastan等人,1 9 9 1)。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐) 1314055 A7 B7 五、發明説明 除了 MDR1外,亦發現了另_種多效性藥物運送器(g_ 等人,1 994)。這種名為多重藥物抗性組合蛋白(MRp)可 提供對某一類型對細胞毒殺性藥物的抗性,特別是化學治 療性藥物,類似於MDR1基因所載有的P_醣蛋白運送^ 接著’陸續發現了許多MRP相關蛋白(B〇rst等°人, 2000)。每一種蛋白皆具有不同的藥物專一性,但其生理 功此尚未完全瞭解。 因此,藥物抗性的成因並未被充分瞭解,我們也仍需要 其他的方法來解決藥物抗性的問題以更有效的治療腫瘤。 發明摘要 本發明提出一種利用呼腸弧病毒來使具抗藥性之細胞對 化學治療試劑敏感化的方法。近來發現到呼腸弧病毒可做 為一種選擇性的抗癌試劑,其可殺死ras—活化之新生瘤細 胞但不會殺死正常的細胞,此乃歸因於呼腸弧病毒可選擇 性地在ras路徑活化的細胞中進行複製(美國專利編號 6,136,307 ; Coffey等人 ’ 1 998 ; Strong等人,1 998)。令人 意外地,在本發明中更進一步發現到呼腸弧病毒亦可以增 加細胞對化學治療試劑的敏感性。因此,若對順鉑 (cisplatin)具抗性的腫瘤共同投與順鉑與呼腸弧病毒,其結 果將顯示出組合使用的效果會比單獨使用呼腸弧病毒的效 果更好。既然順鉑在未投與呼腸弧病毒時對腫瘤不具效 果’組合使用時所產生的效果即無法簡單地以加成或協同 作用來解釋之。取而代之的解釋是呼腸弧病毒可以使原本 具抗性的腫瘤對化學治療試劑敏感化。 木紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1314055 A7 B7 五、發明説明( 據此,本發明的著眼之—在於提供一種敏感化新生瘤細 胞的方法,包含 ' (a)以有效3丨量的啤腸狐病毒投與該細胞,以及 (b )以有效a十量的化學治療試劑投與該細胞。 —»玄’、.田胞最好4r a s 活化新生瘤細胞。該呼腸孤病毒 若邊夠在可X U成新生瘤細胞感染的條件下來投與將更為 里心該.,田胞可以在缺乏呼腸孤病毒的情形下對化學治療 試丄、敏感1±但其最好是對化學治療試劑具有抗性。 在敏感化細胞時,呼腸狐病毒最好㈣在化學治療藥劑 的扠與刖先仃技與。或者,在另_項較理想的具體實範例 中’呼腸孤病毒與化學治療試劑可以共同投與。呼腸狐病 毒與化學治療試劑兩者可各別以單一劑量或多重劑量投 新生瘤細胞以位於哺乳類中較為理想,特別是狗、貓 綿羊、山羊、牛、馬、豬、人或非人靈長類。該細胞以 於人類中者最為理想。 本發明可用來使細胞對任何一種化學治療試劑敏感化 較理想的,學治療試劑包括尿料、絲裂黴素c、葉! :生物、經尿素、環璘酸胺、氮婦味胺(·触眺〇、米4 I醌(mit〇xantrone)、胺g環黴素(如表阿黴素 亞德里亞黴素)、卡錄㈣〇platin)、順銘、紫杉醇、对幻 (tax咖·〇、泰莫西芬(tam〇xifen)、抗雖激素與干擾素。$ 化學治療試劑以鉑酸鹽或紫杉醇更為理想。最為理想的… 學治療試劑為順舶。 1--------- 10 - 本纸張尺度適用t國國家標準(CNS) M規格(210X挪公爱)
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五、發明説明 該增生性:在& t 、丙亦可以為一種造血性腫瘤,特別是淋巴瘤 與白血病。 為增生性疾病可以是—種原發性腫瘤或轉移性腫瘤。 t發H提供_種避免受測者中之新生㈣化學治療試 劑發展出抗藥性的的方法,該方法包含了: 月b夠以呼腸弧病毒感染新生瘤的狀況下以有效計 量的呼腸弧病毒進行投與,以及 (^)以有效計量的化學治療試劑投與該受測者。 主可,任何與化學治療試劑相關的時間中投與呼腸弧病 ^此夠在技與化學治療試劑之前或同時投斑呼腸弧 病毒。呼職病毒最好能以多重劑量來投與。㈣學治療 多重劑量來投與。呼《病毒可考慮在任何 予〜療試劑投與前以多重劑量來投與。 ,,該受測者以喃乳類較為理想,特別是狗、猶、绵羊、山 轉。牛.焉豬、人或非人靈長類’其中以人類最為理 :腸_毒的投與可避免新生瘤對多種化學治療試劑發 抗藥性’包括結構上不相關的藥劑。據此’本發明較 具體實範㈣提供—種避免受測料之新生瘤對化 t療試劑發展出抗藥性的的方法,丨中亦包含了避免其 種化學治療試劑產生抗藥性,該方法包含了: (a) 在能夠以呼腸弧病毒感染新生瘤的狀況下以有效 的呼腸弧病毒進行投與,以及 °丨里 (b) 以有效計量的化學治療試劑投與該受測者。
“張尺度 家料(CNS) AlEi^X297]^T 1314055 A7 ______ B7 五、發明説明() 本發明其他的著眼在於提供一種可以敏感化新生瘤細 胞、治療增生性疾病、或利用其他種類的病毒,在盘呼勝 狐病毒相同的方式下避免抗藥性發展的方法。使用於本發 明:的病毒以能夠選擇性感染新生瘤細胞者較為理想。該 病毋以選自含有修飾腺病毒、修飾H s ν、修飾瘦病毒、修 飾副癌病毒、delNsl病毒、p53表現病毒、〇Νγχ_〇ΐ5、^ 24水疱性口炎病毒、缺乏hrR3之唇疱疹病毒第一突變 3L 7城疫疾病病毒、腦森病毒、帶狀癌療病毒、肝炎病 毒、感冒病毒、水痘病毒與麻疹病毒的群組者較為理想。 該病毒以選自含有修飾腺病毒、修飾HSV、修飾癌病毒、 修飾《丨痘病毒、d e 1N S 1病毒、p 5 3表現病毒、ONYX-015、 <5 24、水疱性口炎病毒的群組者更為理想。 附圖簡介 圖1為呼腸弧病毒與順鉑對腫瘤生長的影響。帶有先天性 腫瘤的動物乃分別進行假處理(序列丨)、順鉑單獨處理(序 列2 )'呼腸弧病毒單獨(序列3 )或順鉑與呼腸弧病毒組合處 理(序列4 )。結果顯示出該腫瘤對順鉑具抗性。然而,呼腸 弧病毒的存在可使腫瘤對順鉑敏感化。 發明詳述 本發明提出一種利用呼腸弧病毒來使具抗藥性之細胞對 化學治療試劑敏感化的方法。近來發現到呼腸弧病毒可做 為種選擇性的抗癌試劑’其可殺死r a s -活化之新生瘤細 胞但不會殺死正常的細胞,此乃歸因於呼腸弧病毒可選擇 性地在ras路徑活化的細胞中進行複製(美國專利編號 ______-13 -_ 本畝張尺度適用中國國家標準(CMS) A4規格(210X 297公釐) 1314055 A7 _ B7 五、發明説明(M ) 6,136,307,Coffey等人,1 9 9 8 ; Strong等人 ’ 1 9 9 8)。令人 意外地,在本發明中更進一步發現到呼腸弧病毒亦可以增 加細胞對化學治療試劑的敏感性。本發明因此提供了一種 增加癌症化學療法之效率與選擇性的方法。其亦可避免抗 藥性逐步的發展。 在進一步說明本發明的細節前,下文中將對使用於本發 明之詞彙稍作定義,除非有進一步的說明。 此處所使用使新生瘤細胞對化學治療試劑"敏感化"一辭 是指增強新生瘤細胞對化學治療試劑之敏感性的動作。 新生瘤細胞對化學治療試劑的”敏感性"是指新生瘤細胞 對化學治療試劑之抑制效果的敏感程度。舉例來說,新生 瘤細胞對化學治療試劑的敏感性是藉由細胞生長速率的降 低程度相對化學治療試劑使用的反應來表示的。敏感性亦 可以藉由因新生瘤細胞所造成之症狀的降低程度來說明 之。 新生瘤細胞對化學治療試劑的”抵抗性,,是指經由化學試 劑的使用而無法殺死或抑制其生長的新生瘤細胞。可藉由 本技藝中所建立的方法來測定化學治療試劑存在或不存在 時細胞的生長速率,以測定新生瘤細胞的生長是否受到抑 制。若化學治療試劑存在或不存在時細胞的生長速率沒有 明顯的不同’那麼該新生瘤細胞的生長即未受到化學治療 試劑的抑制。 對化學治療試劑具"抵抗性"的腫瘤是指在化學治療試劑 -______-14 -_ 本紙張尺度適财0國家標準(CNS) A4規格(21QX297公爱) ~ ' 1314055
存在下,該腫瘤的大小增加率或重量增加率並無改變。或 者不論在該受測者有無接受化學治療試劑的情形下,帶有 腫瘤的受測者仍表現出類似的腫瘤症狀或指標,亦即該腫 ,對化學治療試劑具抵抗性。舉例來說,白A球細胞計數 是白血病常用的一種指標。如果白血病病患的白血球細胞 冲數在接文化學治療試劑後沒有明顯的改變,那該白血病 病患即對化學治療試劑具抵抗性。 ”新生瘤細胞”或者”具增生性疾病的細胞"意指具高度不 正常增生迷率的細胞。新生瘤包含了新生長之新生瘤細 胞’亦稱之為腫瘤。新生瘤指不正常的組織生長,通常會 开/成月顯的區塊,該區塊是經由較正常組織生長更為快 速的細胞增生所形成。新生瘤可能缺乏部份或完全的結構 體制以及與正常組之間的功能協調。此處所用的新生瘤意 指造血性釋瘤以及固型腫瘤。 新生瘤可能是良性(良性腫瘤)或惡性(惡性腫瘤或癌) 的。惡性腫瘤可以大致歸納成三種主要的類型。源自於表 皮結構的惡性新生瘤稱為癌瘤、源自於結締組織如肌肉、 軟骨、脂肪或骨骼的惡性新生瘤稱為肉瘤、影響造血結構 (與形成血球有關的結構)包括免疫系統的組成者的惡性腫 瘤稱為淋巴瘤與白企病。其他的新生瘤包括但不限制為纖 維神經瘤病。 "增生性疾病"指由生長較正常細胞更快速的細胞所造成 的疾病或狀況,即新生瘤細胞。增生性疾病包括良性腫瘤 或惡性腫瘤。在以腫瘤的結構來分類時,增生性疾病包括 I______- 15 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1314055 A7 ________B7 五、發明説明() 了固型腫瘤與造血性腫瘤。 "Ras-活化新生瘤細胞|,或"ras•媒介新生瘤細胞"指因為 或至)部分因為r a s路徑之活化所造成不正常快速增生的細 胞。ras路牷可藉由下列方式來活化並增加路徑的活 性,如ras基因結構突變、增加ras基因表現的程度、增加 ras基因訊息的安定性、或任何可以導致ras或某因子或 上游或下游之因子活化之突變或機制。舉例來說,E G F受 體PDGF文體或s〇s的活化會造成ras路徑的活化。 活化新生瘤細胞包括但不限制為ras_媒介癌細胞,其為因 fas路徑的活化在惡性狀態下進行增生的細胞。 ’’以呼腸弧病毒進行感染"指呼腸弧病毒進入細胞中並進 行複製。類似地,"以呼腸弧病毒感染新生瘤”指呼腸弧病 毒進入新生瘤細胞中並進行複製。 ”化學治療試劑”或"化學治療藥劑"指任何使用於增生性 疾病治療的化學成分。化學治療試劑的實例包括但不限制 為下列試劑: -氮芥子氣,如環磷酸胺、曲磷胺(tr〇f〇sfamide) '異環 磷胺(ifosfamide)與苯丁 酸氮芥(chlorambucil); -亞硝尿素,卡莫司汀(tarmustineXBCNU)、洛莫司;丁 (l〇mUStine)(CCNU)、司莫司汀(semustine)(曱基 CCNU)與尼 莫司汀(nimustine)(ACNU); '乙烯亞胺(ethylene imines)與曱基-三聚氰胺; -葉酸類似物’曱胺蝶呤(methotrexat e); 嘧啶類似物,如5-氟尿嘧啶與阿糖胞嘗(cytarabine); _____ . —_____ - 16 - 本紙張尺度適用中S S家標準(CNS) A4:%格(21G X 297公复) 一 — 1314055 A7 B7 五、發明説明(14 ) -嘌呤類似物,如硫醇嗓吟與氮硫嘌吟; -長春花屬驗,如長春驗(vinblastine)、長春新驗 (vincristine)與長春地辛(vindesine); -表鬼臼脂素(epipodophyllotoxins),如依託泊苷(61:〇卩〇5丨(16) 與替尼泊嘗(teniposid e); -抗生素,如更生黴素(dactinomycin)、紅變黴素 (daunorubicin)、艾黴.素(doxorubicin)、表阿黴素 (epirubicin)、博萊黴素(bleomycin)a2 、絲列黴素 (mitomycin) c、二經蒽二酮(mitoxantrone); -雌激素,如己婦雌盼(diethyl stilbestrol); -性腺激素釋放賀爾蒙類似物,如利普安(leuprolide)、 布舍瑞林(buserelin)與戈舍瑞林(goserelin ); -抗雌激素,如泰莫西盼(tamoxifen)與胺魯米特 (aminoglutethimide); -雄激素,如睪固酮與經曱雄g旨酮丙酸醋 (drostanolonproprionate); -鉑酸鹽,如表阿黴素與卡鉑;以及 -干擾素,包括干擾素-α、/3與7*。 本發明中之化學治療試劑以小化學成分較為理想。因 此,化學治療試劑的分子量以低於約5,000較為理想,低於 約3,000更為理想,低於約2,000更加理想,並低於約1,000 - 最為理想。 "鉑酸鹽”是一種含有以鉑元素為中心原子的化學治療試 劑。鉑酸鹽的實例包括順鉑、卡鉑、奥沙利鉑 _____- 17 - _ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1314055 A7 B7 15 五、發明説明( (oxaliplatin)、奥馬鉑(ormapiatin)、異丙鉑(ipr〇piatin)、恩 洛鉑(enloplatin)、奈達鉑(nedaplatin)、ZD0473(順-胺基二 氣(2 -甲基吡啶)-鉑(π))、BBR3464與類似成分。 呼腸狐病毒’’指任何一種歸類於呼腸孤病毒屬的病毒, 不論是自然發生的、修飾的或重組的。呼腸弧病毒是一種 具有雙股' 片段之RN A基因組的病毒。其病毒粒子的直徑 約為60-80奈米,並具有兩同心外殼,每一個皆為二十面 體。其總基因組大小約為16_27 kbp,並含有i 〇_丨2個不連 續片段的雙股RNA。每一獨立的RNA片段大小皆不同。在 淬多種間發現了三種不同但相關的呼腸弧病毒種類。這三 種病毒享有共同的補體固著抗原。 人類啤腸派病毒具有三種:第—型(Lang株或til)、第 二型(Ws株,T2J)與第三型⑽—或^胃株, :叫。可簡單藉由中和反應與血球凝集抑制分析(舉例來 5兄見FleldS,B.N·等人,1 996)來鑑定這三種血清型。 弧病毒可以是自然發生的或修娜的。當呼腸弧病毒 自然來源中分離出來,且未在實驗室中經人類修飾者 即屬於"自然發生的"。舉例來說, ,腸弧病毒可以來自"野 外,亦即來自已經呼腸弧病毒感染的人類。 呼腸弧病毒可以經過修飾,伸 咸汰呈、“ A 仁仍月匕夠以溶菌感染的方式 α木具活化ras路徑的哺乳類細 m έ ^ 卞腸弧病毒可以在投與 增生細胞則經過化學或生化方式 ^ 飞進仃預處理(如蛋白酵素的 處理,如胰凝乳蛋白酵素或姨蛋 可以丰…广主“ 酵素)。蛋白酵素的處理 了以去除病毒的外膜或外殼, l j以增加該病毒的感染 18 - 16 1314055 A7 B7 五、發明説明 二h呼腸Q弧病毋忐夠包復在脂質體或微膠粒内(—。11與 、二:":8!·。舉例來說,可在微膠粒(由濃烷基硫酸鹽清 二以姨凝乳蛋白酵素處理病毒粒子,形成 新的感染次病毒粒子顆粒。 呼腸弧病毒可以是由兩種或多料腸弧病毒所構成的重 組病毒(即重新組合),這些病毒具有不同的病原表現型如 二含有不同的抗原決定位’如此可降低或避免哺乳類因先 刖暴露於某㈣腸紙病毒亞型時所誘發的免疫反應。此種 重組病毒粒子可藉由不同亞型之呼腸弧病毒共感染哺乳類 細胞來產生重組的效果,並將不同亞型的被膜蛋白合併至 得到的病毒粒子外殼中。 可藉將突變的被膜蛋白(如σ1)纟併至病毒粒子的外殼中 來修料Μ病毒。可藉由取代、插人或去除等方式來使 蛋白質產生突變。取代包括了插入不同的氨基酸置換原有 的氨基酸。插入包括了在一個或多個位置上將額外的氨基 酸殘基插入蛋白質内。去除包括了去除蛋白質中一個或多 個氨基酸殘基。這些突變處理可使用本技藝中所知的方法 來70成。舉例來說,寡核苷酸引導之載有被膜蛋白基因的 突變可以形成理想的突變被膜蛋白。突變蛋白於活體外在 呼腸孤病毒感染之哺乳類細胞(如C 〇 S 1細胞)的表現可以 使犬變蛋白合併至呼腸孤病毒粒子顆粒中(Turner與Duncan, 1992 ; Duncan 等人,1991 ; Mah 等人,1990)。 呼腸弧病毒最好是經過修飾以降低或移除對呼腸弧病毒 產生的免疫反應。該修飾呼腸弧病毒乃稱之為"免疫保護性 ___- 19 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) !314055
吁腸弧病毒 > 匕括將呼腸弧病毒裝載至脂質體 微膠粒或其他載體内以僻& α 两毋忒戰主舳買肚 . 避免呼腸弧病毒與哺乳類免疫系統 的接觸。或者,可移除哞 腸弧病母粒子顆粒的外殼,既然 存在於外设外側的蛋白皙3 — + a 疋佰主體液性與細胞性免疫反應 的主要決定者。 ’调理腸病毒”或”修飾腹| 哪脲病毒一辭指該腸病毒中可抑制 PKR活化的產物或基因身物θ认4 產物疋缺乏、經抑制或突變的,此 使PKR的活化未受到抑制。VAT RMa, ^ ^ VAI RNAs以未進行轉譯較為理 想。該調理或修飾腺病毒盔法左 货•”、/¾•在不具活化r a s路技之正常細 胞中進行複製,然而,直可以汚逃a、工儿 A ''' ,、」以感染具活化ras路徑之細胞並 在該細胞中進行複製。 ”調理HSV”或”修飾HSV"-辭指該唇疱療病毒中可抑制 PKR活化的產物或基因產物是缺乏、經抑制或突變的,此 使PKR的活化未受到抑制。Hsv基因γΐ34·5以未進行轉譯 較為理想。該調理或修飾HSV病毒無法在不具活化ras路徑 之正常細胞中進行複製,然而,其可以感染具活化ras路徑 之細胞並在該細胞中進行複製。 "副痘病毒”是一種痘病毒。它是一種可以在不同哺乳類 物種(包括人類)中誘發急性皮膚損害的病毒。副痘病毒可 經由破裂或受損的皮膚自然感染綿羊、山羊與人類,於再 生的表皮細胞中複製’並使膿包傷處形成痂(H a i g等人, 1 99 8)。”調理副痘病毒”或”修飾副痘病毒"一辭指該副疫 病毒中可抑制PKR活化的產物或基因產物是缺乏、經抑制 或突變的’此使PKR的活化未受到抑制。其基因〇V2〇此 20 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1314055
以未進仃轉譯較為理想。該調理或修飾副痘病毒無法在不 具活化ras路徑之正常細胞中進行複製,然而,其可以感染 具活化ras路徑之細胞並在該細胞中進行複製。 "調理痘病毒”或”修飾痘病毒”一辭指該痘病#中可抑制 PKR活化的產物或基因產物是缺乏、經抑制或突變的,此 使PKR的活化未受到抑制。其饥基因和/或訊基因以未 進行轉譯較為理想。㈣理或修㈣騎無法在不具活化 ⑴路徑之正常細胞中進行複製,然而,其可以感染具活化 ras路徑之細胞並在該細胞中進行複製。 腸孤病毒的投與"至受測者是指將呼祕病毒投與受 測者的動作使該病毒可以與新生瘤細胞接觸。呼腸弧病毒 的投與路徑以及配方、載體或載具可視標的細胞的種類與 位置而定。可使用多種投與路徑,並於下文中詳細討論。 ”治療增生性疾病"意指減少或移除增生性疾病的症狀, 或減緩增生性疾病的發展。 "轉移性腫瘤”指腫瘤已自同一動物的一個部位轉移至另 一個部位。 "有效含量"是指化學治療試劑或呼腸弧病毒的含量足以 造成預期的效果。在以化學治療試劑治療疾病時,有效含 量是指足以減少或移除增生性疾病的症狀,或減緩增生性 疾病的發展的含量。以呼腸弧病毒使腫瘤對化學治療試劑 敏感化時,有效含量是指足以增加腫瘤對化學治療試劑敏 感性的含量。 累積性抗藥性"意指一種現象,其中起先新生瘤對化學
_____- 21 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公梦) 1314055 A7 B7 五、發明説明( >台療試劑具敏感性’但該試劑抑制新生瘤生長或降低疾病 症狀的能力卻隨著時間増加而降低。 方法 啤腸孤病毒是一種有效對抗ras活化新生瘤的治療試劑, 因為它可以選擇性在活化ras路徑的細胞中進行複製(美國 專利6,136,307號)。在正常的細胞中ras路徑並未活化,因 此呼腸紙病毒可藉由高度選擇性殺死新生瘤細胞。在不限 定為理論的狀況下,一般認為病毒基因在正常細胞中的轉 錄與約65 kDa細胞蛋白(指雙股RNA活化蛋白激酶(pKR)) 的秘酸化有關,其在r a s活化細胞中是觀察不到的。p K R的 鱗酸化將導致轉譯的抑制,因此病毒的複製無法完成。然 而在raS/舌化細胞中,ras或其下游因子可阻斷pKR的磷 酸化,因此允許病毒的轉意與複製繼續進行。 、在本發明中,我們以呼腸弧病毒與化學治療試劑的組合 治療腫瘤。意外的是,我們發現呼㈣病毒可以使新生瘤 細,對化學治療試劑敏感化,化學治療試劑單獨對細胞使 用時亚無效果。如圖i戶斤示,來自C3H1〇Tl/2之腫瘤對順始 具有抗性。這些腫瘤在順鉑存在下能夠旺盛的生長,其生 長速率與未處理的腫瘤幾乎相等。相較之下,同時使用呼 腸孤病毒與化學治療試劑治療腫瘤時幾乎完全使通瘤停止 生長。組合使用(呼腸弧病毒加上順鉑)的抑制效果遠高於 呼腸弧病毒單獨使用者,此顯示順麵可負責殺死腫瘤細 胞。因此’當細胞對順始具抗性時’啤腸狐病毒的處理可 增加腫瘤對藥物的敏感性。 本紙張尺度適/fi t g ®家標準(CNS) Α4_2ισχ 装 玎
線 1314055 A7 B7 20 五、發明説明 在不限定為理論的狀況下,我們相信呼腸弧病毒使腫瘤 細胞對化學治療試劑敏感化的原因是來自於増加試劑在腫 瘤”·田胞内的累# ’或誘發細胞計畫性死亡。呼腸弧病毒可 抑制宿主細胞的蛋白質合成,並使其本身的蛋白質進行轉 譯。因此,呼腸弧病毒的感染可能抑制藥物運輸蛋白的合 成’如MDR1或MRPS,並使藥物累積於細胞内。既然藥物 ?輸蛋白負責將不同的藥物運至細胞外,包括結構不相關 藥物’該運輸蛋白的抑制將導致細胞對不同藥物的敏感 化。或者,呼腸弧病毒可誘發感染細胞的細胞計畫性死 亡,其可使細胞對進一步的緊迫更為敏感化。 本發明因此提供了一《有價值的方法來增加化學療法的 效率與選擇性。選擇性是化學療法的主要問題之一,因為 化學治療試劑通常會抑制正常細胞與新生瘤細胞的生長。 化學治療試劑確實表現出有限的選擇性,因為新生瘤細胞 比大部分的正常細胞長的還快,試劑的使用確實能夠大量 抑制腫瘤的生長。不過,快速生長的的正常細胞(如骨髓細 胞)郃谷易文到化學治療試劑的的傷害,產生嚴重的副作 用相較之下,呼腸弧病毒對新生瘤細胞具有高度選擇 性’並只對新生瘤細胞具敏感心因此,呼腸弧病毒只會 增加化學治療試劑在新生瘤細胞内的聚集,因而增加了化 學治療試劑的效果與選擇性。 一在本發明中,相較於呼腸弧病毒不存在時藥物的效果而 。,呼腸弧病毒可至少增加細胞或動物對藥物的敏感性達 20%。增加的敏感性以至少約4〇%更為理想以至少約 本紙張尺度心巾㈣家標準(CNS) A4^^(21Q_X297公货 1314055 A7 B7 五 '發明説明 21 70%更加理想,以至少約100%更為理想。在最理想的具體 時範例中(如實例丨),呼腸弧病毒可有效用來敏感化在呼腸 弧病毒不存在時對藥物具抗性的細胞,且該效果無法量化 表示之。 細胞對藥物的敏感性可根據本技藝令已建立的方法來觀 察或測量’其隨著疾病的本質而有不同。舉例來說,新生 瘤細胞對藥物的敏感性可藉由腫瘤的大小或新生瘤細胞的 生長速率來測量(如實例丨)。敏感性亦可以以同源症狀或疾 病指標的降低程度來表示,b白血病患者的血球細胞計數 或肝細胞瘤病患的肝功能。 裝 線 本發明可以用來增加新生瘤細胞對任何化學治療試劑的 的敏感性。較理想的化學治療試劑包括了 5_氟尿㈣、絲 裂磁素C、葉酸衍生物、㈣素、環嶙酸胺、氮烯咪胺、米 托乾醌、胺®環黴素(表阿黴素與德里亞黴素)、卡姑、順 = '紫杉醇、划癌易、泰莫西芬、抗雌激素與干擾素。儘 :::化學治療試劑持續發展出纟,我們預期對新藥物的 :師可對已知樂物相同的方式產生。一位技術專精的 ,I根據此處所提出的方法來對新試劑進行测量。 乎腸狐病毒是以和新生瘤細胞接觸的方式來投與的。呼 與:路徑以及配方、載體或載具將視標的細胞 來說 “。可使用多種不同的投與路徑。舉例 果固型新生瘤是可以接觸的,可藉由 方式投與呼勝弧病毒。對造血性新生癌而:,啤腸 b丙骨可以靜脈或灰管方式投與。對於體内無法容易達到 -24 X297V^) 本紙張 五、發明説明( ==(如轉移性)而言’可藉由能 :體:的方式來投與啤腸弧病毒,使其能夠到達新生瘤:: 固:=Γ)。或者,呼腸弧病毒可直接投與至單獨的 中,然後再全身性運送至身體各部的轉移性腫 ^。呼腸弧病毒亦可以以皮下、 瘤)、局部的(如黑色素瘤) ^内(如服 直腸(如結腸直腸新生瘤 瘤)、鼻部或吸入喷霧(如肺部新生瘤)。 m 呼腸弧病毒或化學治療試财以單—劑量或多重劑 夕於—個劑量)來投與。多重劑量可以同時在不同部位或 rit路徑或連續(如在數天或數週内)投與。料弧病毒 取好此夠同時或在化學治療試劑投與前投與。 哞腸孤病毒以調配成單—劑量形式較為理想,每_巧量 含有約1〇2pfUS至約1〇13pfus的呼腸孤病毒。”單一二量 形式辭指適合使用於人類受測者或其他哺乳類之實際上 不連續單元’每一單元含有預先測定好的呼腸狐病毒含量 與合適的醫藥賦形物,可產生理想的治療效果。 本發明可考慮與其他腫瘤療法如放射線療法或外科手術 組合使用。 此外,本發明提供一種避免新生瘤發展出抗藥性的方 法。累積杬藥性是由以藥物(該藥物可殺死新生瘤内對藥物 敏感的細胞)治療新生瘤時發展出來的,如此可篩選出抗 藥性細胞。在抗藥性細胞擴張中,新生瘤將表現出抗藥性 的表現型。據此,可在化學療法進行之初即使用呼腸弧病 ---- - 25 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1314055 A7
母來敏感化新生瘤’如此可殺死或抑制所有的細胞,包括 抗藥性細胞。因此,經此方法治療的新生瘤將沒有梭會發 展出抗藥性。 一個對一種藥物具抗性的細胞通常對其他的藥物也具抗 性,此乃所謂的多重抗藥性現象。因此,呼腸弧病毒最好 投與至沒有投與過任何化學治療試劑的新生瘤以避免發展 出抗藥性。然而一旦抗藥性發展出來,呼腸弧病毒仍可以 用來敏感化具抗藥性的細胞,並增加化學療法的效力與選 擇性,並藉由瘤崩解的方式殺死新生瘤細胞。 如上所述,我們相信呼腸弧病毒是藉由抑制宿主細胞蛋 白質合成或誘發細胞計晝性死亡的方式使新生瘤細胞對化 學治療試劑具敏感性。因此,可考慮以與呼腸弧病毒相同 的方式使用其他的病毒。特別是可選擇性感染新生瘤細胞 的病毒是較為理想的。這些病毒包括但不限制為修飾腺病 毒、修飾HSV、修飾痘病毒、修飾副痘病毒、deiNSi病 毒' P53表現病毒、ONYX-015、524、水疱性口炎病毒、 缺乏hrR3之唇疱疹病毒第一突變型、新城疫疾病病毒、腦 炎病毒、帶狀疱疹病毒、肝炎病毒、感冒病毒、水痘病毒 與麻疹病毒。這些"溶瘤性"病毒將討論如下。 腸病毒、HSV、痘病毒與副痘病毒是可以發展出壓倒雙 >lscRNA激酶(PKR)機制的病毒。一般而言,當病毒進入細 胞時,PKR會活化並阻斷蛋白質合成,且該病毒無法在細 胞内進行複製。然而,腸病毒可製造出大量的小RN A .、 VA1 RNA。VA1 RNA具有大量的二級結構,並可與能夠
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正常活化PKR的雙股RNA(dsRNA)進行競爭性與ρκρ 合的動作。既然活化PKR時需要一最小長度的心驗, VA1 RNA無法活化PKR。取而代之的是,它可以藉由其 大量的存在阻絕PKRe接著,由於蛋白質的合成未被阻 斷,腸病毒可以在細胞内進行複製'然而需要注意的是, 即使蛋白質合成機件未被阻斷,宿主細胞蛋白質的合成將 因趨向於病毒蛋白質的合成而受到抑制。 痘病毒載有兩段產物,K3L與E3L,其可以不同的機制 逆調節PKR。K3L基因產物與eIF_2a(天然的pKR受質) 的N端具有有限的相似性’可做為PKR的假受質。E3 L基 因產物為一種dsRNA結合蛋白,可用來隔離活化子 dsRNAs。 類似地’唇疱疹病毒(HSV)基因^ 3 4 5載有基因產物感 染細胞蛋白34.5(ICP34.5),其可避免PKR所產生的抗病 毒效果。副痘病毒載有基因OV20.0L,其可以阻斷PKR的 活性。因此’這些病毒可以成功的感染細胞而不會被PICr 所抑制。 在修飾腺病毒、修飾H S V、修飾痘病毒或修飾副痘病毒 中’其病毒的抗P K R機制已經過突變或去活化。因此,這 些修飾病毒並無法在具有正常PKR功能之正常細胞内進行 複製。然而,Ras活化之新生瘤細胞並不會因PKR而抑制 蛋白質的合成,因為ras會去活化PKR。因此這些細胞易受 到修飾腺病毒、修飾H S V、修飾痘病毒或修飾副痘病毒的 感染。 ___ - 27 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 裝 η
線 1314055 A7 _B7 五、發明説明(25~) ~ ' 可根據已知的病毒PKR抑制物之結構-功能關係對病毒進 行修飾或突變。舉例來說’既然痘病毒之E 3蛋白的氨基端 與PKR之梭基端具交互作用,此區間的去除或點突變處理 可抑制抗PKR的功能(Chang等人,1 992,1 99 3,1995 ; Sharp等人,1 99 8 ; Romano等人,1 99 8 )。痘病毒的K3L基 因載有pK3 ’ 一種PKR的假受質。在K3L内具有喪失功能 性的突變。Κ 3 L蛋白的C端進行切割或點突變(e丨F _ 2 α殘 基79至83的類似物)可破壞PKR的抑制活性(Kawagishi_ Kobayashi 等人,1 9 9 7)。 修飾HSV包括但不限制為R3616(rl34.5基因的兩個重複 區已經去除)、R4009(兩個停止密碼子已插入”34 5基因中) 與G207(核糖核与:酸還原酶與τ134·5基因已經突變) (Andreansky等人,1 996)。這些修飾病毒已使用於腦瘤療 法中’而在最近R3616已顯示可優先感染ras活化細胞 (Farassati 等人,2 0 〇 1)。 類似地’ delNSl病毒(Bergmann等人,200 1 )是一種經 過基因工程改造過的A型感冒病毒,可選擇性在ras活化新 生瘤細胞内進行複製。感冒病毒的N S 1蛋白是一種致病因 子’其可壓倒宿主PKR媒介的抗病毒反應。delNSl病毒中 的NS 1已經過抑制’其可能因為Pkr媒介的抑制作用而無 法感染正常的細胞,但能成功地在r a s活化新生瘤細胞中進 行複製。因此’經修飾的感冒病毒(N S 1已經修飾或突變) 如delNSl病毒’亦可有效使用於本發明中。 其他的溶瘤性病毒包括了可藉由帶有一腫瘤抑制基因來 --------28 -___ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(2ι〇χ 297公釐) 1314055 A7 B7 五、發明説明 殺死新生瘤細胞的病毒。舉例來說,p 5 3是一種細胞腫瘤抑 制因子,其可抑制正常細胞失控的增生。然而,大約半數 的腫瘤具有功能受損的p53並在失控的狀況下進行增生。因 此,表現野生型p53基因的病毒可選擇性殺死因p53基因產 物被去活化而瘤化的新生瘤細胞。該病毒已經過建構,並 可以誘發表現有p 5 3突變體之癌細胞的細胞計畫性死亡 (Blagosklonny 等人,1 996) ° 另一種類似的方法需要腫瘤抑制子之病毒抑制子的參 與。舉例來說,特定的腸病毒、SV4〇與人類乳頭狀瘤病 毋含有可去活化p53的蛋白,並能允許其本身的複製 (Nemunaitis 1999)。對血清型第$型腸病毒來說,該種蛋白 為載於E1B區域的一種55 Kd蛋白。載於E1B區域的55 Kd蛋白被去除後(如ΟΝΥΧ·015病毒(Bisch〇ff等人,1 996 ; Heise等人,2000 ; W〇 94/18992)),該55以之⑹抑制子 將不在存在。結果,當ONYX_〇15進入正常細胞時,p53 可抑制細胞增生以及病毒複製,其與細胞增生組具有關。 因此,ONYX-015不會在正常細胞内進行複製。換句話 。尤在&有P 5 3功能遭破壞的新生瘤細胞中,〇 n γ X _ 〇 1 5 可以複製並最後會造成細胞死亡。據此,該病毒可以用來 選擇性感染並殺死P53-缺乏的新生瘤細胞。熟習本技藝者 亦可根據已建立的技術來突變或破壞腸病毒5或其他病毒中 的p 5 3抑制子基因。 另一個實例為524病毒,其為E1A區域中帶有一 24鹼基 對去除片段的腸病毒突變體(Fuey〇等人,2〇〇〇) ^該區域
1314055 A7 B7 五、發明説明( 乃負責與細胞腫瘤抑制子Rb結合並抑制Rb的功能,因而允 s争細胞增生組具與病毒的複製在失控的狀態下進行。d 2 4 在Rb結合區域中具有刪除片段且不會結合至。因此,突 變病毒的複製將在正常細胞中被Bb所抑制。然而,若111)被 去活化且細胞變為瘤化’ δ 2 4將不再受到抑制。取而代之的 是該突變病毒將有效地進行複製並瓦解缺乏Rb的細胞。 其他溶瘤性病毒包括干擾素敏感病毒。水疱性口炎病毒 (VSV)可在干擾素的存在下選擇性殺死新生瘤細胞。干擾 素為一種循環因子’可結合於細胞表面的受體,最後導致 抗病毒反應與在標的細胞中誘發生長抑制和/或細胞計畫性 死亡訊號。雖然干擾素在理論上可用來抑制腫瘤細胞的生 長’但此嘗試卻因為干擾素路徑成員之腫瘤專一性突變的 存在而未非常成功。 然而,藉由破壞干擾素路徑來避免干擾素所行使的生長 抑制作用時’腫瘤細胞可能同時喪失它們的抗病毒反應。 確實,研究顯示VSV( —種具被膜,負股R_NA病毒)可迅速 地於干擾素存在下’在不同的人類腫瘤細胞株中進行複製 並殺死它們,而正常人類的一級細胞培養物可完全受到干 擾素的保護。腫瘤内注射VSV的處理亦可降低帶有皮下人 類黑色素瘤異種皮移植裸鼠的腫瘤質量(S t 〇 j d丨等人, 2000) 〇 其他對干擾素敏感的病毒(WO 99/18799)(亦即在干擾素· 存在下不會在正常細胞内複製的病毒)可藉由下列方法來 鑑定’先培養正常的細胞,然後在含有不同濃度的干擾素 _- 30 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐) 1314055
下將有興趣的病毒與細胞培養在一起,測 州置-段時間的培 蚕後細胞被殺死的百分比。被殺死的正常 φ,.,田皰以低於2 0 % 較為理想,被殺死的細胞以低於丨〇 %更為理相。 有一項可利用的事實為某些新生瘤細胞可表現出高含量 的特定酵素’我們可因此建構一需要該酵素的病毒::: 來說,核糖核苷酸還原酶的含量在肺轉移的過程中是相去 豐富的’但在正常細胞中則相當稀少。因此,唇疱:病: UHSV-】)突變體可在結腸癌細胞中進行複製卻無法在正 常的肝細胞中進行複製(γοοη等人,2〇〇〇)。 除了上述討論的病毒外,其他許多的病毒都具有殺死腫 瘤的能力’雖然其作用機制尚未知曉《新城疫疾病病毒 (NDV)可優先於惡性腫瘤中進行複製,最常用的病毒株為 73-T(Reichard 等人,1992; Zorn 等人,1 994; Bar-Eli 等人 1 9 9 6)。其臨床抗腫瘤活性.亦在不同的腫瘤中發現(在經過 腫瘤内接種後’ NDV可降低腫瘤的質量),包括子宮頸、結 腸直腸、胰臟、胃、黑色素瘤與腎臟癌(W〇 94/25627 ; Nemunaitis,1999)。 再者’腦炎病毒對老鼠肉瘤腫瘤具有溶瘤效果,但仍需 對其加以調理以降低其對正常細胞的感染性。腫瘤病患感 染帶狀癌療、肝炎病毒、感冒病毒、水痘病毒或麻療病毒 後皆出現腫瘤逆行的現象(文獻回顧,見Nemunaitis, 1999 )。根據本發明在此提出的方法,熟習於本技藝者可以 測試這些或其他病毒使新生瘤細胞對化學治療試劑敏感 化、或避免新生瘤發展出抗藥性的能力》 ____- 31 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐)
裝 訂
k. 1314055 A7 B7 五、發明説明(29 ) 下列實例乃用來說明本發明,但不藉此對本發明的著眼 做出任何的限制。 實例 在下列實例中, 下述的縮寫具有其後述的意義。未定義 的縮寫則具有其一 般可接受的意義。 °c = 攝氏度數 hr = 小時 min = 分鐘 βΜ = 微莫耳濃度 mM = 毫莫耳濃度 Μ = 莫耳濃度 ml = 毫升 μ\ = 微升 mg = 毫克 HZ = 微克 PAGE = 聚丙烯醯胺凝膠電泳 r p m = 每分鐘轉數 FB S = 胎牛血清 DTT = 二硫蘇糖醇 SDS = 十二基硫酸鈉 PBS = 磷酸缓衝生理食鹽水 _ DMEM = DulbecccTs 修飾 Eagle's 培養基 a -MEM = α -修飾Eagle、培養基 β -ME - /3 ·硫醇乙醇 -32 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1314055 A7
裝
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---—一 序號 —_ —— 呼腸弧病毒 藥物 1 控制組 控制組 2 控制組 順鉑 3 呼腸弧病毒 控制組 4 ------- 呼腸弧病毒 ______ 在接党呼腸弧病毒的動物(序號3_4)的組別中,在第。 1 2與1 8天時以靜脈於沾士 5Χ108 PFTT / ,的方式自動物的尾部靜脈注> PFUs的呼腸弧病毒(於2〇 w生理食鹽水中卜未接a 呼腸狐病毒的動物(序號")的組別,則 以相同的方式注射生理食鹽水。職是在第101 =天時自尾部靜脈注入動物體内,劑量為每公斤體重2. 據。。自第0天開始每天測量腫瘤以得到腫瘤生長速率的类 广該腫瘤對職具抗性。如圖i所示,以_單獨治療的遇 瘤(序列2) ’其增生狀況幾乎與控制組沒有差別(序列1), 此結果顯示順挺對腫瘤的生長迷率完全沒有抑制效果。相 辦呼腸弧病毒共同投與者(序列4)則明顯抑 :腫瘤的生長。共同投與時的抑制效果遠比呼腸弧病毒單 獨使用%的效果要好(序列3)。因此,·在與呼腸弧病主 共同使用時可以提供腫瘤抑制作用。 -34 - 本紙張尺度適用t國國家標準(CNS) A4規格(2I〇X297公釐)
裝 町
Claims (1)
1314055 A8 B8 -__ C8 六 - 種用來使經r as活化之新生瘤細胞對化學治療試劑敏感 化的醫藥組合,包含: (a)種有效計量的呼腸弧病毒,其乃投與至該新生瘤細 胞;以及 ⑼種有效計量的化學治療試劑,其乃投與至該細胞。 2·根據巾請專利範圍第1項之Μ組合,其中該呼腸狐病毒 係在化學治療試劑投與之前先投與。 3’根據中請專利範圍第1項之f藥組合,其t該呼腸孤病毒 係與化學治療試劑共同投與。 4.根據申請專利範圍第丨項之醫藥組合,其中該經ras活化 之新生瘤細胞係位於哺乳類中。 5·根據申請專利範圍第4項之醫藥組合,其中該哺乳類是選 自狗、貓、棉羊、山羊、牛、馬、豬、人類與非人類之 靈長類所組成的群組。 6·根據申請專利範圍第1項之醫藥組合,其中該化學治療試 劑是選自5 -氟尿嘧啶、絲裂黴素c、葉酸衍生物、羥尿 素、環磷酸胺、氮烯咪胺(dacarbazine)、米托莲酿 (mitoxantrone)、胺菌環黴素(anthracyicins)、卡翻 (carboplatin)、順鉑(Cispiatin)、紫杉醇、剋癌易 (taxotere )、泰莫西芬(tamoxifen)、抗雌激素與干擾素所 組成的群組。 7. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合,其中該化學治療試 劑是順鉑。 8. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合,其中該呼腸弧病毒 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) A4規格(210 X 297公爱) 1314055 ABCD ~--- κ、申請專利範圍 疋哺乳類呼腸弧病毒。 康申《專利範圍第8項之醫藥組合,其中該哺乳類呼腸 弧病毒是人類令腸弧病毒。 m:申%專利範圍第9項之醫藥組合,其中該人類呼腸弧 病毒是第3血清型之呼腸弧病毒。 11·根據申β月專利範圍第1〇項之醫藥組合,其中該第3血清型 之呼腸弧病毒是—種Deadng株 之呼腸孤病毒。 12. t用來冶療具有經ras調節之增生性疾病之哺乳動物的 t € ϋ ’其+該哺乳動物含有對化學治療試劑具抵抗 能力之經ras活化之新生瘤細胞,包含: ()種有效„tl:的呼腸狐病毒,其乃在藉由呼腸孤病毒 感木、士 ras活化之新生瘤細胞的狀況下投與哺乳動 物;以及 ⑼物種有效计量的化學治療試劑,其乃投與該哺乳動 其中該呼腸弧病 其中該呼腸狐病 其中該呼腸弧病 其中該呼腸弧病 13 根據申請專利範圍第1 2項之醫藥組合 毒係在化學治療試劑投與之前先投與。 14. 根據申請專利範圍第12項之醫藥組合 毒係與化學治療試劑共同投與。 15. 根據申請專利範圍第丨2項之醫藥级合 毒係以多重劑量來投與的。 16_根據申請專利範圍第丨2項之醫荦細 阳浓姐〇 ,六τ战吁腸 毒係在化學治療試劑投與之前以多重劑量先行投與。 Π.根據申請專利範圍第i 2項之醫藥組合,纟中該· ^ -2 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格^21〇 X 297公釐) 1314055 A8 B8 C8
豬、人類與非人類 ’其中該經r a s調節 選自狗、猶、棉羊'山羊、牛、馬、 之靈長類所組成的群組。 18.根據中請4利範圍第1 2項之醫藥組合 之增生性疾病為一種固型腫瘤。 19·,據申吻專利範圍第! 9項之醫藥組合,纟中該固型腫瘤 是選自肺癌、前列腺癌、結腸癌、甲狀腺癌、腎臟、腎 上腺肝癌、胰臟癌、乳癌與中樞和周圍神經系統癌症 所組成的群組。 20·根據申ό青專利範圍签1 q j 殺姑 粑固弟19項之醫樂組合,其中該呼腸弧病 毋疋4又與至或接近固型腫瘤的位置。 21. 根據中請專利範圍第12項之醫1组合,#中該呼腸弧病 毒是以全身性的方式投與的。 22. 根據申請專利範圍第丨2項之醫藥組合,其中該增生性疾 病為造血腫瘤。 23. 根據申請專利範圍第23項之醫藥組合,其中該造血腫瘤 是選自淋巴瘤與白血病所組成的群組。 24. 根據申請專利範圍第12項之醫藥組合,其中該經ras調節 之增生性疾病為轉移性腫瘤。 25. —種避免哺乳動物之經ras活化之新生瘤對化學治療試劑 發展出抗藥性的醫藥組合,係包含: ⑻一種有效計量的呼腸弧病毒,其乃在藉由呼腸弧病毒 感染經ras活化之新生瘤的狀況下投與哺乳動物;以 及 (b) —種有效計量的化學治療試劑,其乃投與該哺乳動 '本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) - A B c D 1314055 六、申請專利範圍 物。 其中該呼腸弧病 其中該呼腸弧病 其中該化學治.療 26. 根據申請專利範圍第2 5項之醫藥組合 毒係在化學治療試劑投與之前先投與t 27. 根據申s青專利範圍第2 5項之醫藥組八 毋·係與化學治療試劑是共同投與。 28. 根據申凊專利範圍第2 5項之醫藥組合 試劑是順叙。 =據f請專利範圍第25項之醫藥組合,纟中該呼腸弧病 毒的投與可以避免經r a s活化之新生瘤對第二種化學治療 试劑產生抗藥性β ' ' 30. —種用來使經ras活化之新生瘤細胞對化學治療試劑敏感 化的醫藥組合,包含: ⑻一種投與該經ras活化之新生瘤細胞之有效計量的病 毒’該病毒能夠選擇性感染經r a s活化之新生瘤細 胞;以及 ⑼一種有效計量的化學治療試劑,其乃投與至該細胞。 31. 根據申請專利範圍第30項之醫藥組合,其中該病毒是選 自修飾腺病毒、修飾HSV、修飾痘病毒、及修飾副痘病 毒所組成的群組。 32. —種用於以化學治療試劑治療哺乳動物的醫藥組合,其 中该哺乳動物具有經r a s調節之增生性疾病與對化學治療 试劑具抵抗能力之經r a s活化之新生瘤細胞,該醫藥組合 包含: (a) —種有效計量的病毒’其乃在藉由病毒感染經r a s活 -4 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X 297公釐) 1314055 as B8 C8 D8 六、申請專利範圍 化之新生瘤細胞的狀況下投與哺乳動物;以及 (b) —種有效計量的化學治療試劑,其乃投與至該受測 者。 33.根據申請專利範圍第3 2項之醫藥組合,其中該病毒是選 自修飾腺病毒、修飾HSV、修飾痘病毒、及修飾副痘病 毒所組成的群組。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
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