TWI233806B - Pharmaceutical composition for treating diabetes by local administration - Google Patents

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1233806 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（1 iL互參考 本申请案係邵分延續標題爲治療胰臟疾病之方法的申請 案’其於2000年1月丨丨日向美國專利暨商標局提出申請，依 序號審理中。 1明背景 本發明係關於治療糖尿病之方法。本發明特別關於投與 神經母素給病患以治療糖尿病之方法。 糖尿病 ^人‘騰臟是包含外分泌和内分泌組織之腺體。外分泌胰 臟之腺泡細胞分泌消化酵素，同時外分泌胰臟之導管細胞 分泌電解質溶液。 内刀/必胰臟包含胰臟藍蓋罕氏（Langerhan)小島，其爲生 f多肽荷爾蒙細胞之聚集體，遍佈在腺泡組織間，並且最 多在胰臟尾端。一般，總小島組織僅佔胰臟體積約丨或2百 分比。 小島組織擁有至少三種不同功能細胞型態。這三種細胞 型悲分別，製造升糖激素之A細胞，產生胰島素之轉）細胞 ，和製造第三種小島荷爾蒙-生長激素釋放抑制因子之;〇細 胞。B細胞是三種小島細胞型態中數量最多者。胰島素促進 細胞！取葡㈣，特別是肌肉細胞，並且預防肝臟和肌肉 中過量肝醣分解。當抗糖尿病荷爾蒙對降低血糖是必要時 ，胰島素爲有效降低血糖劑。在大多數情況中，升糖激素 作用和胰島素作用相反。因Λ，升糖激素是高血糖二 造成血糖增加。 田 -------^---------1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -4- 1233806 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（2 ) 葡萄糖是促進胰島素自小島B細胞釋放的主要因子。葡萄 糖也會減少升糖激素自小島A細胞分泌。像葡萄糖一樣，升 糖激素（從小島A細胞）也會促進胰島素自小島B細胞分泌。 糖尿病是最普遍内分泌疾病而且是一種慢性症狀。在 1 999年估计全球有一億人口患有糖尿病，並且預估未來十 年内，即至2009年糖尿病患者數會高達三億。第2型糖尿病 預報和預防（Type 2 Diabetes Prediction and Prevention)，葛 拉罕A席特曼（Graham A· Hitman)編輯、約翰威利及子出版 社（John Wiley & Sons publisher)，序言（1999)，全文以提及 之方式併入本文中。很不幸地，糖尿病視網膜病變是造成 目眼主因，而且其它糖尿病併發症還包括腎臟疾病、腳部 問題和神經病變。第2型糖尿病爲主要糖尿病型式，在數量 上勝過第1型糖尿病比數約1 〇比1。 第1型或胰島素依賴型糖尿病（IDDM)中有能力製造胰島 素之胰臟B細胞，可能被自體免疫疾病破壞。胰島素取代爲 較佳治療方式。糖尿病病例中最多約20〇/。是第1型或IDDm ，然而一般約80%至90%糖尿病病例是第2型或非胰島素依 賴型糖尿病（NIDDM)。雖然NIDDM比IDDM更普遍，但是其 發病原理並不清楚。即使認定NIDDM是貝它細胞缺陷和騰 島素耐受性二者引起。因此，第2型NIDDM患者具有騰島 素過量分泌（至少在第2型糖尿病初期）和標的組織對騰島 素耐受性之二種生理缺陷。有証據支持高胰島素血症是初 期症狀之信念，而且已知在第2型糖尿病初期，b細胞騰島 素產量會增加。第2型糖尿病預報和預防，上册，第i 99和 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------------------訂---------線 (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) I233806

五、發明說明（3 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 I1 lV4'b ^NIDDM"1 ^(~ ^} ^ - ^ ::小騰島素耐受性和高騰島素濃度。在第二期腺 良：文性惡化以致於發展出餐後高血糖症儘管有高濃度 胰島素。在第2型糖尿病第三期或後期，胰島素耐受性沒有 :，但是胰島素分泌下降，所以造成禁食高血糖症和明顯 .磨尿病。有可能在胰島素過量分泌早期引起胰島素耐受性 呈、匕首要缺py可此由於失調性小島細胞造成月夷島素過 泌而導致胰島素耐受性。在此理論支持點上，値得注 思第2型NIDDM中B細胞量沒.變，而第㈣⑴⑽中大多數貝 匕細胞已被破壞。有趣地，阿爾發（alpha)細胞群在第2型 NIDDM中增加，造成阿爾發對貝它細胞比値升高，且產生 過量升糖激素。哈洛森氏内科理論第14版（Harris〇n,s Principe of Internal Medicine Mth Editi〇n)(i998)，第 2064-65 頁。 很不幸地，鬲胰島素濃度，如可能發生在第2型糖尿病早 期，近來和增加血塊危險串連一起。於是，具有高胰島素 患者也有損害血塊溶解（減少纖維蛋白分解）之能力。明顯 地，血塊形成是心臟病發的主因和大多數一般中風的成因 。美國醫學學會期刊（J AmMed Ass〇c〇, 2〇⑽；283: 221_ 228 〇 所以很明顯地須要治療高胰島素血病，如可能發生在， 至少在第2型糖尿病早期。很不幸地，已知第2型糖尿病治 療方式有許多缺點和不足。於是第2型糖尿病經常性療法可 包括投與口服劑如續醯脲類（Sulf〇nylurea)(例如醋橫環己 --------^--------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -6- I233806 A7

五、發明說明（4 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 脲（acetohexamide)、氣磺丙脲（chl〇rpropamide)、杜拉唑胺 (tolazamide)、葛利門比利定（glimeripiride)、優降糖 (glyburide)或吉力伯紐利德（glibornuride))以刺激B細胞 胰島素分泌，嘗試克服早期第2型糖尿病胰島素耐受性或在 第2型糖尿病後期阻止B細胞胰島素產量下降。很不幸地， 磺醯脲類會增加胰臟外胰島素接受體。因此，嚴重和延長 低血糖症會緊接著續酿脈類投與之後，所以可能須要大量 葡萄糖輸液。此外，口服磺醯脲類會有不預期系統性副作 用。取後，投與續醯H尿類每劑量作用期間一般僅有約12 - 6 0 小時。所以，須要更有效抗糖尿病藥物。 藍盖干士小島之内分泌騰臟性神經刺激活動是經由末端 在或接近小島細胞之交感和副交感神經纖維二者。因此， 交感神經纖維顯示抑制胰島素分泌，可能是經由B小島細胞 上％腎上腺素性接受體。反之，迷走神經的（副交感神經的 )刺激造成胰島素自B細胞釋放。貝格（Berger)等，胰臟，第 1册，第110頁，白萊克維科學（Blackwell Science)出版（1998) ，此書（2册）全文以提及之方式併入本文中。所以，背側迷 走神經或胰臟神經之刺激會增加胰島素和升糖激素的產量 ，並且反應會受阿托品（atropine)撤消，其爲一種毒蕈素性 乙醯膽鹼接受體拮抗劑。因此，副交感神經傳導物質乙醯 膽鹼在生體内和在生體外會刺激胰島素自B細胞中釋放。 所以’胰臟内分泌活動出現受膽驗素性神經纖維刺激， 自從指出小島細胞之副交感神經刺激活動似乎可能增加胰 島素分泌，並且在次要範圍也會增加升糖激素分泌。見於 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1233806 A7 B7 五、發明說明（5 ) 例如美國生理學期刊（Amer J. Physiol) 1999年7月；277(1部 分 1) : E93-102，調節性胜肽（Regul Pept)1999年 6 月 3〇 曰； 82(卜3) · 71·9，生理學期刊（J. Physiol)(Lond)1999年3 月 1 515( 口p 刀 2) · 463-73 ’ 波弗朗久氏案卷（pflUgers ArCh)1996年 8月；432(4) : 589-90，和手術研究期刊（j Surg

Res)1990年 4 月，48(4) : 273-8。 關於胰島素分泌，膽鹼素性系統之可能生理功能是攝食 後初期給予胰島素快速釋放。明顯地，B小島細胞對膽驗素 性刺激比A小島細胞更敏感，自從顯示膽鹼素性控制對胰 島素分泌比對升糖激素分泌來更顯著。手術研究期刊1990 年 4 月 ’ 48(4) : 273-8，在 277 頁。 I毒桿菌Ii 厭氧、革蘭氏陽性菌之肉毒样菌產生強力多肽神經毒素 ，肉毒捍菌毒素，其對人類和動物引起神經麻痺疾病稱為 肉毒桿菌症。肉毒捍菌孢子存在於土壤中並生長在不當滅 囷和封閉之家用罐頭食物容器中，造成許多肉毒桿菌症病 例。肉毒捍菌症症狀一般出現在食用受到肉毒桿菌菌株或 孢子感染食品後18至36小時間。肉毒捍菌毒素可以通過腸 道内膜而不變弱並功擊周邊運動神經元。肉毒捍菌毒素中 毒症狀進程可從走路、呑嚥和說話困難開始至呼吸肌肉麻 痒而死亡。 肉毒捍菌毒素A型對人類是已知最致命之自然生物劑。 市售肉毒捍菌毒素A型（純化神經毒素複合物）約5〇微微克 對小鼠是LD^(致死劑量中間值）（即1單位）。有趣地以莫耳 -8- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公髮)~ -------—- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂-------—線^ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1233806 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（6 ) 里看來，肉毒桿菌毒素A型比白喉毒素致死效力高18億倍 ，比氰化鈉致死效力高6億倍，比眼鏡蛇毒致死效力高3千 萬倍，並且比霍亂毒素致死效力高！千2百萬倍。賽恩（Singh) ’細菌蛋白毒素鑑別觀（Critical Aspects of Bacterial Protein Toxins)，第6弘84頁（第4章）自然毒素11，b r賽恩 等編輯，蒲朗紐出版社（Plenum press)，紐約（1976)(其中定 肉毒捍菌毒素A型之認定LD5。是〇·3毫微克等於丨單位修正 爲波塔S@(BOTOX@W〇〇.05毫微克等於i單位）。一單位肉毒 桿菌毒素定義是以腹膜内注射至每隻重量18至2〇克雌性瑞 士伯斯特（Webster)小鼠達LD5。之劑量。 七種免疫上不同之肉毒桿菌神經毒素已被確認，分別爲 肉毒桿菌神經毒素血清型態A、B、q、D、E、f*g，每 種以種類-專一性抗體中和來鑑別。不同肉毒桿菌毒素血清 型態不同於動物中造成的影響和其引起的麻痺嚴重性和期 間。例如已知肉毒桿菌毒素A型在大鼠中測到產生麻痺速 率比肉毒桿菌毒素B型的效力強500倍。因此，已知肉毒桿 ，，素B型480單位/公斤劑量對靈長類是無毒性，然而此劑 I是肉毒桿菌毒素A型對靈長類LD5。之12倍。肉毒桿菌毒素 似乎具有高度親和力以結合膽鹼素性運動神經元，傳進神 經元會阻斷乙醯膽驗釋放。 肉毒桿菌毒素已在臨床上治療確認爲活動過度骨骼肌之 神經與肌肉上疾病。美國食品與藥物檢驗局已通過肉毒桿 fel母素A型用在治療臉痙攣、斜眼和半面痙攣。非a型肉毒 係取自加川人分’人勒崗公司之商品恥篇⑧】⑼單位小管，]單位之·獅含有約Μ微克之肉毒桿菌毒素A型複合物。 --------------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -9-

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經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 才干菌母素血清型悲、和肉毒捍菌毒素A型相較之下似乎具有 較低效力和/或較短作用期間。周邊肌肉内肉毒桿菌毒素A 型惑臨床藥效通常可見於注射一星期内。單一次肌肉内注 射肉毒桿菌毒素A型典型徵狀減輕期間平均約三個月。 雖然所有肉毒桿菌毒素血清型似乎抑制神經與肌肉連接 點上神經傳導物質乙醯膽鹼之釋放，其影響不同神經分泌 虫白和/或在不同位置切斷這些蛋白質。例如，肉毒捍菌毒 素A和E型二者可切25千道耳呑（kD)突觸體相關蛋白 (SNAP-25)，但其作用在此蛋白中不同氨基酸序列。肉毒样 菌毒素B、D、F和G型作用在囊泡—相關蛋白（VAMp，亦稱 突觸短蛋白（synaptobrevin))也是每種血清型在不同位置上 切斷蛋白。最後，肉毒桿菌毒素^已顯示可切（synaxin)和 SNAP_25。這些作用機制不同點可影響不同肉毒捍菌毒素 血清型態之相關效力和/或作用期間。明顯地，已知胰臟小 島B細胞胞液至少含SNAP-25(生物化學期刊（Bi〇chem 1月1 日；339(部分1): 159-65(1999年4月）），和突觸短蛋白（運動 疾病（Mo v Disord) 1995年5月；1〇(3): 376)。 至於使用肉毒桿菌毒素治療胰臟相關疾病，已知治療胰 臟炎型式以注射肉毒桿菌毒素至十二指腸小乳頭（因為小 乳頭接近胰管），放鬆緊縮胰管（分裂胰）和增加從胰管進入 十二指腸的胰液流量。胃腸内科學（Gastr〇intest Endosc)1999年 10 月；50(4): 545-548。 肉毒桿菌毒素蛋白分子量’所有七種已知肉毒桿菌毒素 血清型約150千道耳呑。有趣地，肉毒样菌毒素由肉毒桿菌 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------tr---------蜂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1233806 五、發明說明（8 =复合物Μ釋出’包含15()千遒耳呑 隨相關非-毒去I Α 、λ V卞闽母I刀子伴 毒桿菌製造爲900二肉毒桿菌毒素A型複合物由肉 式。肉毒桿=主1« 千道耳呑和300千道耳吞型 。肉毒型似乎僅產生綱千道耳呑複合物 產出。=母素D型以則千道耳呑和5⑼千道耳呑複合物 取後，肉毒桿菌毒素£和卩型僅產生近3〇〇千遒耳 “。才目信這些複合物（即分子量大於約150千遒耳吞）包人 :種非他凝素蛋白和一種非_毒素與非血凝素蛋)白“ 毒素蛋白（伴隨肉毒桿菌毒素包含在相關神經毒 中)可提供肉毒桿菌毒素分子抗變性之穩定性和 攝取時抗消化酸之保護。因此，較大(大於約150千 迢耳呑+子量）肉毒桿菌毒素複合物可能使肉 從肌=内注射位置較慢向外擴散。 干囷母素 生外研死已指出肉毒桿菌毒素抑制鉀離子謗導乙醯膽 驗和正腎上腺素自初級腦幹組織細胞培養中釋放出來。因 ，&已報導肉毒桿菌毒素抑制在初級脊髓神經元培養中甘 2和楚氨酸二者之謗發釋放，和腦突觸體製備中:肉毒桿 菌毒素抑制每種神經傳導物質乙酸膽驗、卩巴胺、正腎上 腺素、CGRP和麩氨酸之釋放。 馬獲取肉毒桿菌毒素A型可以在發酵槽内建立和培養肉 毒桿菌菌株，並且之後依照已知程序收集和純化發酵混合 物。所有肉毒桿菌毒素血清型一開始合成爲不活性單一鏈 ，其必須由蛋白酶被切斷或切短以成爲具神經活性。製造 肉毒桿菌毒素A*G血清型態之菌株擁有内生性蛋白酶，所 線 智 慧 財 員 工 消 費 合 作 社 印 製 [____ -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐 1233806 A7 B7 五、發明說明（9 型態八和〇可以自細菌培養中以顯著活性型式回收 人又〈下’肉毒桿菌毒素C,、D和E由非蛋白分解性菌株 所以自培養中回收時—般是不活性。血清型態師F 分解性和非蛋白分解性菌株二者產生，所以可以活 活性二種型式回收。然而，甚至由蛋白分解性菌株 主，例如，肉毒桿菌毒素B血清型式僅切斷產生一部分之 ，素。：短和沒切短分子之確實比例端視培養時間和培養 而疋。因此，任何製備品特定百分比，例如，肉毒桿 囷母素B型傾向爲不活性，可能説明已知肉毒桿菌毒素b型 t t肉毒桿菌毒素A型具有明顯較低效力。不活性肉毒 f菌毒t分子之存在對臨床製劑將有助於整體蛋白製劑劑 1 :可聯結增加抗原性，而沒有臨床上效力。因此，已知 肉毒^毒素B型在肌肉内注射下具有較短活性期間而且 和肉毒桿菌毒素A型相比在相同劑量濃度時擁有較少效能。 已報導肉毒桿菌毒素A型使用在下列臨床狀況： (1) 約75-125單位波塔氏@(Β〇τ〇χ@)每肌肉内注射（多肌 肉）以治療子宮頸緊張不足； (2) 5-10單位波塔氏@每肌肉内注射以治療眉間細紋（眉 額溝）（5單位肌肉内注射至稜錐肌和1〇單位肌肉内注射至 每鈹眉肌眉毛肌肉裏）； (3) 約30-80單位波塔氏⑨以治療便秘經由括約肌内注射 至和骨直腸肌； (4) 約1-5單位每肌肉内注射波塔氏⑧以治療臉痙攣藉由 注射上眼險側面前瞼板輪市肌眼肌肉和下眼瞼側面前險板 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) --------^--------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1233806 A7 B7

輪市肌眼肌肉。 (5) 爲治療斜眼，眼球外肌肉以肌肉内注射約丨口。 塔氏®，注射量變化基於所注射肌肉之尺寸和預^早位間级 肉之範圍（例如預期矯正屈出度量）二者。 、〃麻痒朋 (6) 爲治療中風後上肢痙攣性以肌肉内注射欠 個不同上肢屈肌，如下·· 。氏®至五 U)手指深部屈肌·· 7.5單位至30單位 (b) 手指上部屈肌·· 7.5單位至30單位 (c) 腕部尺骨肌屈肌：1〇單位至4〇單位 (d) 腕部橈骨肌屈肌·· 15單位至6〇單位 ⑷肱二頭肌：50單位至200單位。五種指定肌肉於相 同治療期間都要注射，以致於病人在每個治療期間藉由 肌肉内注射上肢屈肌接受到9 〇單位至3 6 〇單位波塔氏⑧。 肉毒桿菌毒素A型治療不同臨床狀況的成功引導對其它 肉毒桿菌毒素血清型的興趣。研究二種市售肉毒桿菌毒 A型製劑(波塔氏⑧和迪斯波特和肉毒桿菌毒素 B和F製劑（二者得自維寇化學（佩〇 Chemicais)，日本）以進 行測定局部肌肉變弱效力、安全性和抗原性潛力。肉毒桿 菌母素製劑注射至右腓腸肌頭部（〇 5至2〇〇 〇單位/公斤）和 肌肉變弱用小鼠腳指外展評分測試（DAS)評估。ed値（半 數有效劑量)從劑量反應曲線計算。另有小鼠給予肌：内注 射以決疋叫❶劑量。治療指數以ld5〇/Ed5〇計算。*同小鼠 群組接受後肢注射波塔氏@(5.0至100單位/公斤）或肉毒桿 囷毒素B型（50.0至400.0單位/公斤），並測試變弱和增

--------tx--------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度_巾關家標準(CNS)A4 ^iT21〇 x 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 I233806 A7 B7

加水消耗量，後者是個推測模型以測乾燥口腔情況。評估 力以每月肌肉内注射兔子(15或6·5亳微克/公斤 處:桿菌毒素Β型或〇·15毫微克/公斤波塔氏@)。肌肉變弱尖 口期間對所有血清型是劑量相關。DAS ED5q値（單位/公 斤)如下：波塔氏'· 6.7,迪斯波特⑧：24 7,肉毒桿菌毒素 '型—· 27.0至244.0，肉毒桿菌毒素F : 4·3。波塔氏⑬比肉毒 桿菌毒素Β型或肉毒桿菌毒素F型有較長作用期間。治療指 ^直如下：波塔氏'·Η)·5,迪斯波特@:63,肉毒桿菌毒 :、Β型·· 3.2。水消耗量在小鼠注射肉毒桿菌毒素㈣時較大 万:’王射波塔氏，雖然肉毒桿菌毒素Β型在肌肉致弱上效力 =弱。注射四個月之後4分之2(以15毫微克/公斤治療）和4 二=4(以6.5¾微克/公斤治療）兔子發展出抗體對抗肉毒桿 菌毒素B型。在分開研究中，9分之〇波塔氏@治療兔子証實 抗體可對抗肉毒桿菌毒素A型。DAS結果指出肉毒桿菌毒素 =型之相關尖峰效力等於肉毒桿菌毒素？型，而且肉毒桿菌 毒素F型大於肉毒桿菌毒素6型。至於作用期間，肉毒桿菌 毒素A型大於肉毒桿菌毒素，並且肉毒桿菌毒素b型作 用期間大於肉毒桿菌毒素1^型。以治療指數値顯示，二種市 售肉毒桿菌毒素A型製劑（波塔氏⑧和迪斯波特@)是不同。增 加水消耗量行爲在後肢注射肉毒桿菌毒素B型後觀察到，指 出此血清型臨床上有顯著劑量進入小鼠系統循環。結果也 指出爲了達到和肉毒桿菌毒素A型相較之藥效，須要增加 測試其它血清型之劑量。增加劑量也要包含安全性。而且 在兔子中B型比波塔氏@更有抗原性，可能是因爲須要較高 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公f

!233806 五、發明說明（12) 蛋白注射量以達到肉毒捍菌毒素B型有效劑量。歐洲神經學 期刊（EurJNeurol)i999 年 11 月；6(補充 4): S3-S10。 __乙醯膽鹼 般在哺乳動物神經系統中每種神經元僅有單一種小分 子神經傳導物質釋放出來。神經傳導物質乙醯膽驗由大腦 許多區域神經元分泌出來，但特別由大型運動皮質錐體細 胞' 由底神經節數種不同神經元、由刺激骨骼肌活運之運 動神經元、由自主神經系統（交感神經和副交感神經）之前 神經卽神經元、由副交感神經系統之後神經節神經元、和 由一些交感神經系統之後神經節神經元。基本上，僅有後 神經節交感神經纖維至汗腺、豎毛肌和一些血管是膽鹼素 性’且如同大多數交感神經系統後神經節神經元會分泌神 傳導物貝正腎上腺素。在大多例子乙酸膽驗具有興奮活 性。然而，已知乙醯膽鹼在一些周邊副交感神經末端有抑 制效應，如由迷走神經抑制心臟速率。 自主神經系統輸出性訊號傳達至身體經由交感神經系統 或副交感神經系統。交感神經系統前神經節神經元從位在 在脊髓中間與外侧角之前神經節交感神經元細胞體延伸出 來。前神經節交感神經纖維從細胞體延伸出來，突觸和後 神經節神經元位在脊柱旁交感神經節或在椎前神經節。因 為，交感神經和副交感神經前神經節神經元二者是膽鹼素 性，乙醯膽驗應用至神經節將興奮交感神經和副交感神經 後神經節神經元。 乙醯膽鹼活化二種型態接受體，毒菌素性和菸鹼性接受 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公蓳） --------^---------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1233806 A7 —------B7_____ 五、發明說明（13) 體。母菌素性接受體存在所有由副交感神經系統後神經節 神經元所刺激之活化細胞上。於驗性接受體存在交感神經 和田文感神經一者前神經節和後神經節神經元間突觸中。 菸鹼性接受體也存在神經肌肉連接點許多骨骼肌纖維膜中。 當小型、澄清的細胞内液泡和前突觸神經細胞細胞膜融 合時，乙醯膽鹼會自膽鹼性神經元釋放出來。非_神經元分 泌細胞具廣泛多樣性，如腎上腺髓質（以及pci2細胞株）和 胰臟小島細胞分別自大型密度-核心液泡分泌兒茶酚胺 (catecholamines)和胰島素。pcl2細胞株是老鼠親鉻細胞瘤 細胞株廣泛使用在組織培養模型以研究腎上腺交感神經發 育。肉毒桿菌毒素抑制二種細胞型式生體外釋放二種化合 物，藉由滲透（如以電子穿孔法（electr〇p〇rati〇n))或直接注 射毒素至已去除神經之細胞。已知肉毒桿菌毒素也會阻斷 神經傳導物質麩氨酸自皮質突觸體細胞培養中釋放。 因此須要有效、長持續性、非-外科切除術、非_放射性 治療、非-系統性藥物投與之治療方法以治療第2型糖尿 (NIDDM) 〇 發明摘要 本發明符合須要與提供一種有效性，非-外科手術、相♦ 長期、非_放射性療法、非-系統藥物投與之治療方法以= 療第2型糖尿病。 執行根據本發明治療糖尿病之方法可以局部&與神經毒 素至胰臟。神經毒素可投與劑量界於約1〇·3單位/公斤 35單位/公斤之間。較佳是，神經毒素投與劑量界於 --------訂---------線 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) -16- A233806

發明說明（Μ) 單位/ Α斤和約25單位/公 於約10·1單位/公斤^母素更佳投與劑量界 平U /公斤和約i 5單位/公斤 與劑量界於約丨單彳^/八+ 1 A斤心間。神經毒素最佳投 〕i早位/公斤和約1〇單位/公 ..^ . j 子中，投盥從约！笛\ γ <間。在$午夕例 4 ^主/ 公斤至約5〇0單位/公斤神麵毒辛，例 如肉毒桿菌毒素八型，提 叮钟一素例 用從約5單位至⑽广文和長持•療效。可更佳使 早位土 4 200早位神經毒素，如肉毒桿 素a型 ’和取佳從約1 〇單位i %】 ’、 早相毒素，如肉毒桿菌毒 效。 又與至標的組織如胰臟或交感神經節以達療 製造神經毒素可藉由梭狀芽胞桿菌屬細菌w — acterium)’如由肉毒桿菌（cl〇stridiumb咖如咖）、酪酸桿 «(Clostridium butyricum) ^ Clostridium beratti® 〇 ’神經毒素可爲修飾之神經毒素，即相較於自$的或野生 I神Ί母素’孩神經毒素有至少—個氨基酸被去除、修飾 或置換而且，神經毒素可爲重組產生之神經毒素或衍生 物或其片斷。 μ 根據本發明之方法可用來治療第2型糖尿病，如（早口期 中功或後期第2型糖尿病。明顯地，神經毒素注射至胰臟 時’可降低胰臟胰島素分泌和升糖激素分泌。 神經毒素可爲肉毒桿菌毒素，例如肉毒桿菌毒素血清型 A B、C、D、E、F或G型之一。較佳地，神經毒素是肉毒 桿菌毒素A型和神經毒素可局部投與以直接神經毒素注射 至胰臟（當治療高胰島素血症糖尿病時）。 本發明範圍内進一步方法也可包含在局部投與神經毒素 -17 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) -----------------線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1233806 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（15) 至：臟之前或同時投與—藥劑以降低胰島素耐受性。 可詳細實施例爲治療第2型糖尿病 步二：： 治療有效劑量至人類病患胰臟之 U氐小島B細胞胰島素分泌以治療第2型糖尿病 二：ΠΓ第2型糖尿病伴隨高胰島素血症且胰島素分 /必疋膽鹼素性影響之胰島素分泌。 型:::万去中、’另-詳細實施例爲治療人類第2 «水、丙° W對人類病患胰臟組織中膽驗素性影塑之小 ^細胞局部投與肉毒桿菌毒素A型之治療有效劑量：因此 ::來自小島B細胞膽驗素性影響之過量胰島素分泌以治 療弟2型糖尿病。 本發明靶圍内另一方法是治療過量升糖激素分泌之方法 三k幻王射肉毒桿菌毒素治療有效劑量至人類病患的騰臟， 、此降低自小島A細胞分泌升糖激素。 根據本發明之方法以治療第2期NIDDM，可以注射肉毒 桿菌毒素治療有效劑量至人類病患之⑽。❹^ 本發明範圍内另一方法是治療第2型糖尿病之方法，以投 與神經毒素至病患交感神㈣統。在此方法中神經毒素是 局卩技與至刺激B細胞活動之交感神經結上，並且第2型糖 尿病將伴隨胰島素過少症。 本I月範圍内方法中，一詳細實施例爲治療人類第2型糖 =病患可包含在生體内局部投與肉毒桿菌毒素治療有效 / I、、、cr病刺;放騰臟小島B細胞之交感神經節，因此增加胰 臟、、且織缺陷性胰島素分泌以治療第2型糖尿病。 --------訂---------線 (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) -18 - 1233806 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（16) 本發明因此包括範圍内方法以治療最普遍的糖尿病型式 (第2型或NIDDM) ’經局邵投與神經毒素至胰臟或交感神經 節以治療糖尿病。 一本發明詳述實施例爲治療糖尿病以注射肉毒桿菌毒素 治療有效劑量至人類病患胰臟，因此降低胰臟細胞分泌而 治療糖尿病。所治療之分泌可以是胰島素分泌而胰臟疾病 可以是NIDDM。較佳地，所治療之分泌是膽鹼素性影響之 分泌且肉毒桿菌毒素是肉毒桿菌毒素八型，雖然肉毒桿菌 毒素可選自下列群組之肉毒桿菌毒素A、B、c(即CJ、D、 £、卩和0型。 此處所指"局部施予"意指直接注射神經毒素至胰臟或交 感神經節系統性之施予路徑，如口服或靜脈注射均排除於 本發明範圍之外。 發明 本發明是基於發現糖尿病，例如早期第2型糖尿病，可被 治療生體内投與神經毒素給病患騰臟。投與神經毒素之初 期效果是胰臟降低鬲胰島素血症之過量胰 :、 神經毒素續發效果是降低胰島素耐受性。.、乃’、又… 本發明也基於發現糖尿病，例如中期或後期第2型糖尿病 ，可被治療以生體内投與神經毒素至交感神姐『，並: 病患胰臟小島B細胞活動。投與神經毒素：六：、：：::刺激 果是去除對胰島素分泌抑制性影 历人4、^經即灸效 泌減輕低胰島素血症。 〜曰’因此以促進胰島素分 於是，第2魏咖可根據 月木^口潦，以（a)局部投 _一19 一 本紙張尺度適用中fern豕鮮（CNS)A4規格_(加χ挪^丁 --------------------訂---------線-^1^" (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1233806 A7 B7 五、發明說明（17) 與神經毒素至胰臟之替代性治療，或以（b)局部投與神經毒 素至病患交感神經節，因此分別造成胰臟内分泌細胞分泌 下降，或胰臟内分泌細胞分泌增加。 已發現特別的神經毒素，肉毒桿菌毒素可用來治療第2 型糖尿病具有戲劇性改善效果，因此明顯地取代經常性治 療攝生法，如口服胰島素或磺醯脲類。明顯地，根據本發 明單一次局部胰臟投與神經毒素，如肉毒桿菌毒素，可實 免上降低或反轉第2型糖尿病早期症狀至少約2至約6個月 。已明白報導腺體組織以肉毒桿菌毒素治療，在注射毒素 後顯示降低分泌活性長達27個月。喉鏡檢查（Laryng〇sc邛匀 1999 ; 109 : 1344-1346，喉鏡檢查 1998 ; 108 : 381.384。 類似地，根據本發明單一次局部交感神經節投與神經毒素 ，例如肉毒桿菌毒素，可實質上降低或反轉第2型糖尿病中 期或後期症狀至少约2_6個月。-般在第2型糖尿病早期存 在高胰島素血症，當在第2型糖尿病中期和晚期時 素血症會出現。 -旬 本發明較佳實施例是注射病患胰臟從1 :=200單位，和最佳從2❹至叫位之神二 杯固母素八型），因此造成小島姨島素分泌 =母 泌降低接著是胰島素耐受性下降夷島素为 高胰島素血症的反轉反m旅馬姨島素耐党性是對

邱;4 ^ 表明特別佳實施例中，A w又與神經毒素並伴隨（同時或不 ，中，局 速期望之胰島去嶄為从 』W又人一樂劑，以加 王 < 胰島素耐受性下降。降低 牛低胰島素耐受性之適合藥 L---- -20- 本紙張尺度適用

-10^--------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1233806 A7

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1233806 A7 B7 五、發明說明（19 寸和市售毒素制劑。因此，計算在人體適當劑量可推論自 其它組織有效去除神經刺激活性所須之肉毒桿菌毒素^量 決定値。如此，肉毒桿菌毒素A型注射量和被治療之 組織大小和活動程度成比例。一般來説，病患體重每公斤 可投與約G.G1和35單位間之肉毒桿菌毒素，如肉毒桿菌主 素A型，在投與神經毒素進入胰臟後以有效達成毒素赞= 胰臟内分泌組織分泌向下調節。少於約〇〇1單位/公斤肉V主 桿菌毒素劑量對胰臟細胞分泌活動無法有明顯療效，當： ，約35單位/公斤肉毒桿菌毒素時會接近神經毒素中:劑 重二=心放置注射針頭和使用低體積神經毒素以預防=; 肉母柃菌毒素出現在系統組織。更佳劑量範圍從約〇·〇 1 訂 位/ a斤至約25單位/公斤之肉毒桿菌毒素，如配方如波塔 技與肉母桿菌毒素單位/公斤之實際用量端視因子如、么 =臟組織範圍（尺寸）和活動程度與所選之投與路捏。肉口 母干菌母素A型疋較佳肉毒桿菌毒素血清型以 明方法中。 +七 員 工 消 費 已報導肉毒桿菌神經毒素之神經元選擇性是非常選擇性 二和進人細胞機制的結果。雖然肉毒桿菌毒素作用位置 肌肉連接點，#中毒素快速結合以預防乙醯膽驗 素性神經轉放，然而如果高濃度神經毒素和細胞 2 養時，已知肉4桿菌神經毒素可經低親和性接受 Γ闽μ足神經分泌細胞（例如PC12細胞）。這個過程顯示 種路徑所經接受體不同於在神經肌肉連接點高度專 和回度親和性接受體。此外，也報導特定肉毒桿菌毒 印 L---- -22- 本紙張尺度適用Tiiiiy(CNS)A4規格·(2ι〇 χ撕公羞·^ 1233806 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（20) 素有效於呑嗤細胞，如巨嗤細胞，其中推測進入細胞是經 由這些細胞特殊呑噬活動。而且，已報導特定脂細胞（即脂 肪細胞）和肉毒桿菌毒素A型培養也可抑制脂細胞對葡萄糖 攝取。抑制葡萄糖攝取機制似乎是由於毒素抑制質膜融合 或裁剪胞液中可再利用的膜囊泡（RMVs)，該膜囊泡含有葡 萄糖輸送蛋白。PCT公佈全球專利案94/2 1300。 於是，當已知肉毒桿菌毒素對膽鹼素性、前-突觸之、周 邊運動神經元具有已知結合親和力時，報導指出肉毒桿菌 毒素也可以結合和轉運進入多樣非-神經元分泌細胞，當中 母素以已知方式作用如同内生蛋白酶在個別分泌導管-膜 中裁男蛋白。因爲比較於肉毒桿菌毒素對刺激胰臟細胞膽 驗素性神經元之親和力，肉毒桿菌毒素對分泌細胞，如胰 臟細胞具有相當低親和力，所以肉毒桿菌毒素可注射至分 泌性或腺體組織以提供局部毒素高濃度，因此在膽驗素性 神經元和直接在胰臟分泌細胞加速毒素藥效。於是，本發 明可應用在治療胰臟疾病，其中標的内分泌胰細胞具有二 點或無膽驗素性刺激活性。 應用在本發明範圍内方法所使用神經毒素較佳是肉毒桿

菌毒素’如血清型A、B、C、D、E、F或G肉毒桿菌毒素Z 一。所使用肉毒桿菌毒素較佳是肉毒桿菌毒素八型，當肌 肉内注射以局部投與時因爲在人體中高效能、容易獲^、 和已知士全性及有效治療骨骼肌和平滑肌疾病。 本發明包括在範圍使用任何神經毒素 成、 母I §局邵應用以治 療病^胰臟小島細胞疾病具有長期療效。例如，神經毒 ---------------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •23- 1233806 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（21 ) 由任何產生毒素心肉毒桿菌菌株製造，如肉毒桿菌、酪酸 桿菌、和（Clostridium beratti)可使用或適合在本發明方法 中使用。此外，所有肉毒桿菌毒素血清型A、B、c、D、e 、？和0宜使用在本發明應用上，雖然a型是最佳血清型， 如上解説。本發明應用可提供人類有效減輕糖尿病達從孓 27個月或更久。 已知被滲透（如以電子穿孔法）胰島素分泌細胞之胰島素 釋放可受肉毒桿菌毒素抑制。當生體外，這些非-神經細胞 細胞膜被滲透以支持肉毒桿菌毒素導入細胞胞液，由於缺 之針對肉毒桿菌毒素之細胞表面接受體。於是，肉毒桿菌 毒素B型可抑制胰島素分泌經切斷存在於胰島素分泌細胞 株ΗΙΊΜ5之突觸短蛋白。波依德Rs(B〇yd RS)等肉毒桿 菌神經毒素_B對貝它細胞胰島素釋放上之藥效，運動疾病 10(3): 376(1995)。因此只要肉毒桿菌毒素的輕鏈轉送至細 胞内基質，肉毒桿菌毒素可阻斷從任何分泌（即神經元的、 腺體的、分泌的、嗜鉻的）細胞型態任何經由胞釋作用而釋 放之液泡。例如，細胞内蛋白SNAp_25廣泛分佈在神經元 和非-神經元分泌細胞二者，而且肉毒桿菌毒素A型是内生 胜肽酶，其專一性受質是SNAp_25。因此，膽鹼素性神經 元對肉毒桿菌毒素和破傷風毒素具有高度親和性接受體（ 所以比其它神經元和其它細胞更敏感以抑制胞釋作用分泌 化合物之囊泡），當毒素濃度升高時，非-膽鹼素性交感神 經凡、嗜鉻細胞和其它細胞型態可攝取肉毒桿菌毒辛 現降低胞釋作用。 1 -24 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐 --------------------訂---------線 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 12338〇6

發明說明（22) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 7後應用本發明可治療非-膽驗、 缺乏神經刺激胰臟内分泌細胞，經使：：纖維以及非或 菌毒素以達到治療減輕糖尿病高胰島素？…農度肉毒桿 胰島素耐受性。 ’、’以及續發性疾病 交感神經^ 顯然地’本發明範圍内方法以增加缺 包含局部投與神經毒素至交感神經系咬之牛：島素分泌， 神經刺激胰臟内分泌活動。於是，交已知交感 騰島素分泌其作用經由B小島細胞“、以抑制 此可奸本發明範園内方法以局部投 = 膽驗素性、前神經節交感神經元、母素至 $、丄， ^ I素性、則神經筋# 有腎上腺素刺激性、後神經節、交感二 =^^些後者交感神經元對胰臟小島㈣㈣島素分泌 上具有抑制效力。 腹腔神經節是椎前交感神經節中最大和冑高群組，位在 腹腔王動脈上方，在腹腔動脈起點的二側。腹腔神經節位 於腹腔神經叢中並且包含膽鹼素性、交感神經前神經節纖 維，其突觸具有腎上腺素刺激性、交感神經性、後神經節 神經。腹腔神經節刺激背側胰臟，而上方腸繫膜神經節刺 激腹面胰臟。根據本發明阻斷腹腔神經節以腹腔神經叢阻 斷之相同方式進行。 於是，神經組織崩解性阻斷腹腔神經叢是一種已知療程 以治療起因於上腹内臟癌症之頑固性疼痛。局部麻醉與疼 痛醫學（Reg Anest Pain Med) 1998 ; 23(1) : 37_48。腹腔神 -25 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -----I--訂----I----線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 1233806 A7 B7 五、發明說明（23) 傳人和傳出臟腑神經纖維二種，具有小部分迷走神 佈。麻醉（Anest)1997; 87(6): 13〇1_13〇8。因此，已 瘃=乙醇或酉”至腹腔神經叢爲起因於騰臟癌或騰臟炎之 ;痛袄供減輕治療。美國胃腸學期刊（ajg)i999 ; 94⑷： :874。可執行抗感受傷害性注射以經皮方式或以開放性 術期間内）注射。經皮性（閉口）方式執行可依照早期研究 ，用非常細注射針頭（22測針（Gauge))。進行腹腔神經叢阻 、斤較佳是以電腦局部X射線檢查法（CT)(和勞光屏法相反） 汪射針頭指引（局部麻醉與疼痛醫學1999 ; 24(5) : 483_484 。）和也可將針頭定位在主動脈前方來進行。該程序依照早 期研究使病患仰臥姿態以採用微細針頭。 本I月範圍内較佳方法以增加胰島素分泌經移除交感神 經在B細胞的抑制，可在局部投與神經毒素至腹腔神經^和 /或腸繫膜神經節其中之一或二者上方。 而且，本發明範園内方法可提供改善病患功能。”改善病 患功能”可定義爲改善狀況針對測量因子如降低疼痛、降低 在床上消耗時間、增加移動力、較健康姿態、更具變化生 活型態和/或以正常肌肉緊張度認定復原情形。改善病患功 悲是改吾生活品質（QOL)的同義詞。可評估QOL，以例如， 已知SF-12或SF-36健康觀測計分法。SF-36在八個生理功熊 範轉評估一位病人生理與心智健康，角色限定起因於生理 問題、社會功能、身體疼痛、一般心智健康，角色限定起 因於感情問題、活力、和一般性健康箴言。所得計分可和 得自一般和生病多樣性族群之公佈數値相比較。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂---------線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -26- 1233806 A7 B7

I 員 工 消 費 五、發明說明（24) 、同t込、，二由局邵投與神經毒素至胰臟或至刺激人類 病〜、胰臟活動之交感神經節已發現達到驚人效力和長期療 t十本ί明取佳實施例以直接注射肉毒捍菌毒素A型至胰 、、至人感神經即。已報導在神經與腺體連接點，肉毒桿 菌毒素，如肉毒桿菌毒素八型之化學去除神經效力具有長 久作用期間，即27個月和3個月。 古? V不』主與任何理論結合，中請者仍假設第2型糖尿病 门★素血症先行發生，接著騰島素耐受性如同隨著發生 之保護性反應。當高胰島素血症存在時，爲此適當治療標 的是以降低B細胞過量胰島素分泌(和同時存在A細胞過量 升糖激素分泌）以容許胰島素耐受性復原。因此，針對第2 型NIDDM至少第竭，適當療法可直接降低或抑制過量騰 島素分泌。在投與治療時不會引起高騰島素血症顯然是因 A局邵:夷臟性神經毒素投藥，如本文所揭露，降低騰島素 分泌接著伴隨騰島素耐受性下降並改善葡萄糖利用率。 於是，可以合理預測胰島素過度分泌是第2型糖尿病病理 發生（初始病筆，所以首要病肇是對B細胞過量膽鹼素性刺 激引起的（見於例如波弗朗久氏案卷，歐洲生理學期刊 (1996)432 ·· 589-596,在595頁)。胰島素耐受性因此成爲绩 發性效果且爲初始病肇高騰島素血症之保護性成果。在第； 型糖尿病胰島素耐受性直接起因相信不是由於胰島素接受 體結合問題而是來自結合後不正常性。所以，高胰血 症發生於胰島素接受體數目向下調節而導致後-胰島素结 合至接受體之缺陷。第2型糖尿病之醫藥管理 印 _ -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱 1233806 A7 五、發明說明（25 )

Management of Type 2 Diabetes)，大衛凱利（David KeUey) 編輯，美國糖尿病協會出版，第四版，第以頁（丨Μ”，全 文以ί疋及之方式併入文中。 當胰島素耐受性存在時，已報導3小島細胞顯示增加對膽 鹼素性刺激之敏感性。美國生理學期刊，1999年7月；277〇 邛刀./93_102。此外，相信Β細胞之膽鹼素性刺激對Β 細胞葡萄糖敏感性具有深遠的影響，而且迷走神經釋放乙 醯膽鹼的刺激效果在高胰島素血症和胰島素耐受性發展過 程中是首要起因。1弗朗久氏案卷，歐洲生理學期刊 (1996)432: 589-596。所以很重要地發現本文揭露之發明將 B細胞㈣向下調節，不僅很重要地降低胰島素高度分泌和 引起之高胰島素血症，也允許胰島素耐受性消退並伴隨降 低B細胞對膽驗素性刺激之敏感性。 線 而且相信對高胰島素血症的反應是胰島素標的組織上胰 :素數目下降(第2型糖尿病預報和預防，席特曼編 輯’弟⑼頁’上冊），於是可合理歸結降低心胞胰島素分 泌量將使得騰島素接受體數目相對增加，因而提高葡萄 利用率。 濟 部 智 慧 局 員 工 消 費 於是，一項發明者前題-刺激B細胞，以嘗試克服姨 耐受性，對治療早期第2型糖尿病來說是不當治療方法理論 ’因為胰島切受性僅是高胰島素分泌首要和先後。 適當治療方法理論’如同上述本文，是治療起因（B細胞失 調）而不是後果症狀（胰島素耐受性）。碳酿膽驗（如⑹ 引起胰島素釋放之急性刺激’但是長期暴露在碳醯膀驗實 28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐

I 1233806 A7 B7 五、發明說明（26) 際上會抑制胰島素釋放。波弗朗久氏案卷，歐洲 刊（1996)432 : 589-596，在 594 頁。 ‘理學期 因此，投與碳醯膽鹼或類似膽鹼素性拮抗劑之、，二 治療第2型糖尿病慢性高胰島素血症，會出現以 胞過量胰島素分泌濃度。申請者假設之機制，局i牛:^細 肉毒桿菌毒素之療效’以治療第2型糖 冋騰島素血症（即長期降低B細胞膽鹼素性刺激）出 =由至少以膽驗素性拮抗劑碳酿膽驗減緩胰：素3 十-精由降低長期胰島素分泌因此促使 性消退。 t〈騰島素耐受 本發明範圍包括：⑷神經毒素複合物以 毒素，毒素萃取，濃縮，保存A I和/或再組合和；（b)修料或重組神經毒素，爲神經 具有-或多個氨基酸序列被愼重地剔除、修飾或置換，以 =化子/生化風基酸修飾方法或使用已知宿主/重組载^ 技術，以及製造神經毒素衍生物或片斷，和包括神： :::有：或多個接觸標的部分以接合存在内分泌騰臟細 月已表面接受體。 桿菌毒素用於根據本發明可保存在冷康乾燥中或在 音可22下在谷态中具S乾燥。冷凍乾燥前，肉毒桿菌毒 二1醫藥f可接受之賦形劑、穩定劑和/或載體，如白 7東乾燥或興2乾燥物質可用生理食鹽水或水重建。 消 艮t發明以治療糖尿病之投與路徑和神經毒素（如肉 母^母素血清型八、^^、£、卜或_量具有廣 -29 χ 297^17 本紙張尺錢财_ ^@7eNS)A4 — (2f ^ ^' ----—21 ^ ^' ----—21 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 l2338〇6 A7 五、發明說明（27) ，變化’可依照不同病人不同於大小、體重、年齡、疾病 嚴，性、對治療反應，和所選擇之神經毒素溶解度與擴散 =欲相仏不僅胰臟範圍或受影響神經節組織和注射神經 毒素體積成比例，而且當去除神經作用爲定量時，在大部 分劑量範圍，相信與注射神經毒素濃度成比例。 判定適當投與路徑和劑量《方法一般是依照案例而由主 治醫師決定。此判定是熟諳此藝者例行事項(見於例如，哈 洛森内科原理（1998)。安東尼弗西（Anth〇ny Fauc〇等編輯， =14版，麥克葛雷山丘（McGraw Hiu)出版）。例如，爲治療 第土糖尿病早自，肉母桿菌毒素A複合物溶液可用内視鏡 或腹膜内直接注射至胰臟組織，因此可實質上避免毒素進 入系統性循環。 “ 實例 /以下實例提供熟諳此藝者本發明範圍内特別㈣法以貫 徹本發明，但是不纟任何發明者視爲其發明^目$限 發明。 實例1 屋-^技與神經毒素至内分泌性腩稱 、直接局部投與神經至胰臟内分泌細胞或其周圍可由數個 万法％成。例如’所熟知診斷和治療用之胰臟内視鏡。治 療用胰臟内視鏡技術包括胰臟括約肌切除術、狹窄擴張& 移植膜術、假囊腫排液法和内視鏡逆行膽管胰臟攝影術 (ERCP)，可允許看見和治療騰臟-膽管系统。用於騰臟治 之内視鏡經修飾可應用在注射神經毒素，如肉毒桿菌毒素

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經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 1233806 A7 ----B7 五、發明說明（29) 症。糖尿病減輕持續至少約2個月至約6個月。 實例3 ϋ毒桿菌第2型糖尿病 一位48歲肥胖男性被診斷出具有早期第2型糖尿病 (NIDDM)。將界於約1 〇·3單位/公斤和约3 5單位/公斤之肉毒 桿菌毒素Β製劑（例如界於約10〇〇單位和約2〇,〇〇〇單位間2 肉毒桿菌毒素Β製劑）直接注射至胰臟，使用上述實例丨所述 技術之一二在1-7天之内糖尿病症狀減輕，胰島素濃度回復 至正常無鬲血糖症。糖尿病減輕持續至少約2_6個月。 實例4 丛..肉毒桿菌毒素C型治療第2型糖尿气 一位48歲肥胖男性被診斷出具有早期第2型糖尿病 (NIDDM)。將界於約10單位/公斤和約1〇,〇〇〇單位/公斤之肉 毒桿菌毒素q製劑直接注射至胰臟，使用上述實例丨所述技 術〈一。在1-7天之内糖尿病症狀減輕，胰島素濃度回復至 正常無高血糖症。糖尿病減輕持續至少約2_6個月。 實例5 U毒桿菌毒素D型治療第2型糖 一位48歲肥胖男性被診斷出具有早期第2型糖尿病 (NIDDM)。將界於約10單位/公斤和約1〇,〇〇〇單位/公^之: 毒桿菌毒素D製劑直接注射至胰臟，使用上述實例丨所述技 術（一。在U天之内糖尿病症狀減輕，胰島素濃度回復至 正常無高血糖症。糖尿病減輕持續至少約2_6個月。 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21G x 297公髮 --------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1233806 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（30) 實例6 色直療第2¾糖届症 -位48歲肥胖男性被診斷出具有早期第2型 (nIDDM)。將界於約10單位/公斤和約1〇，_單位/公斤之 毒桿菌毒素E製劑直接注射至胰臟，使用上述實例 =-。在卜7天之内糖尿病症狀減輕，騰島素濃度回復至 正常無向血糖症。糖尿病減輕持續至少约2_6個月。 實例7 療第2型糖 一位48歲肥胖男性被診斷出具有早期第2型糖 (腦_。將界於約10單位/公斤和約1〇,〇〇〇單位/公斤 毒桿菌毒素？製職接注射至胰臟，使用上述實⑷所述技 術之一 i在卜7天之内糖尿病症狀減輕，騰島素濃度回復至 正常無高血糖症。糖尿病減輕持續至少約個月。 實例8 療第2型糖g 一位4 8歲肥胖男性被診斷出具有早期第2型 (NIDDM)。將界於約10單位/公斤和約10，_單位/公;= 毒桿菌毒素G製劑直接注射至胰臟，使用上述實例}所述技 術之二在1:7天之内糖尿病症狀減輕，胰島素濃度回復至 正常無高血糖症。糖尿病減輕持續至少約2_6個月。 實例9 一位34歲肥胖女性被診斷出具有早期第2型糖尿病 -33 - 表紙張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（21G X 297公髮 --------------------訂---------線-4^— (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 1233806 A7 B7 1 員 工 消 五、發明說明（31) (動岡。將界於約1〇單位/公斤和約5 桿菌毒素A製劑（即波早位/a斤义肉毒 例！所述技術之-。先;_’使用上述實 與四氫㈣二㈣降低胰島素耐受性。在"天^寺才又 症狀減輕，胰島素濃度回復至正以高 =尿病 輕持續至少約2-6個月。 。症。糖尿病減 實例1 0 一位34歲肥胖病 ΓΛ?10""7" ^^" 母才干园母素血wB、c、D、E、F、5t(^n 騰f使用上述實例1所述技術之-。先於或同時於肉毒桿 菌母素注射時’投與四氫嘍唑二酮以降低胰島素耐受性。 在1-7天之内糖尿病症狀減輕，胰島素濃度回復至正常血内 血糖症。糖尿病減輕持續至少約2_6個月。 …回 實例1 1 、一位53歲肥胖男性被診斷出具有中期或晚期第2型糖尿 病（NIDDM)。將界在約10_3單位/公斤和約35單位/公斤之肉 毒桿⑧菌毒素A製劑（例如界於約1〇單位和約5〇〇單位間之波 塔氏直接注射至腹腔神經節如下。以經皮注射方式進行 ，應用先期研究使病患採用仰臥並將非常細針頭（22測針T) 在電腦局部X射線檢查法指引下達到腹腔神經節。在u天 之内糖尿病症狀減輕，胰島素濃度回復至正常（爲提高）無

S -34 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1233806 A7 B7 五、發明說明（32 ) ⑴本發明不須料多手有許多優點，包括如下： 病。 ^切程序而有效治療第2型糖尿 ⑺根據本發^接^ 藥物副作用。 外、，工母常可避免系統性 (3)本發明之改善效果， 、 可持續平均2-6個月。 心早一 /人局邵投與神經毒 雖然本發明已敘述詳盡，但是關於特讀佳 :施Γ樣：動：和修飾在本發明範圍内都有可能：例二 廣《夕樣神經毒素可有效用在本發明之 發明包括局部姨臟投藥法，其中二或多種：外，本 或多種肉毒桿菌毒素，可同時或接續投與 ’，、= 線 肉毒桿菌毒素A型直到失去臨床效應或發展出中和ϋ 馬止’接者投與肉毒桿菌毒素㈣。或者，結合任二種或多 種肉毒桿菌毒素血清型A_G局部投與以控制期望之療效開 端和期間。因此’非·神經毒素化合物可先投與，同時或接 續投與神經毒素以提供輔佐性效果如增加或更快速開始去 除神經刺激作用在神經毒素，如肉毒桿菌毒素開始作用前 產生療效。 本發明包括神經毒素，如肉毒桿菌毒素使用範圍、藥物 製備以局部投與神經毒素治療糖尿病。 因此，下列申請範圍之精神和範疇將不受限於上述較佳 實施例之钦述。 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims (1)

1. 年月 修正 補充 號專利申請案 換本(92 年 μ ) 申請專利範圍 1·::::投與至胰臟以治療糖尿病之醫 ，療有效量之肉毒桿菌毒素及藥學上可接…;, 、中該肉毒㈣毒素劑# Q.3 單位/公斤之間。 早仫/公斤與約35 2，據申請專利範圍第Μ之醫藥組合物，其 母素劑量介於約1〇、位/公斤與約25 ::::私囷 3.根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，— 毒素劑量介於約1〇-2單位/公斤與約叫位、^肉^干困 4·根據申請專利範圍第3項之 5根攄斤與約1〇單位/公斤之間。 !據申知專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該肉… 母素係由肉毒桿菌所產生。 、母私囷 6:據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中咳肉… 母素是經修飾之肉毒桿菌毒素。 ν母柃囷 7·，據中請專利範圍第1If之醫藥組合物，其中該 母素和自然肉毒桿菌毒素相比 干菌 飾或置換。 ^有氣基酸被剔除、修 & =請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該肉毒桿菌 9.才1據產生疋肉毒桿菌毒素或其衍生物或片斷。 •第2::二利範圍第1項之醫藥組合物，其中該糖尿病是 1Q=::r項之醫藥組合物’其中該糖… 11.根據申請專利範固第9項之醫藥組合物，其中該肉毒桿菌 O:\68\68796-920804.DOC\ 本紙張尺度適用巾g g家標準(CNS) Μ規格挪公董） 裝 玎 1233806 A8 B8 〇8 D8 申請專利範圍 毒素作用以降低胰臟胰島素分泌。 申請專利範圍第9項之醫：組合物，其中該肉毒桿菌 母素作用以降低胰臟升糖激素分泌。 B.，據中請專利範圍第i項之醫藥組合物，其中該肉毒桿菌 Γ素係選自由肉毒桿菌A、B、Cl、D、E、#(^^ 成之群組。 14申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該肉毒桿菌 母素是肉毒桿菌毒素A型。 請專利範圍第!項之醫藥組合物，其中該肉毒桿菌 161 =經直接讀該肉毒桿菌毒素至胰臟以局部投與。 6根據中請專利範圍第α之醫藥組合物，進―步包括藥劑 以降低胰島素耐受性，可弁於 局部投與至胰臟。了先於或同時與該肉毒桿菌毒素 17·=Γ專利範圍第1項之醫藥組合物，其係、經注射至病 夷臟以降低小島Β細胞胰島素分泌以治療第2型糖尿病 迟根據申請專利範圍第17項之 尿病伴隨高騰島素血症。 '且合物’其中該第2型糖 範圍第17項之醫藥組合物，其中該騰島素 刀，必疋膽鹼素性影響之胰島素分泌。 2〇.根據中請專利範圍第17項之醫藥組合物，其中咳 囷毒素是肉毒桿菌毒素A型。 、 干 乳_中請專利範圍第17項之醫藥組合物，其+該 菌毒素係選自由肉毒桿菌a、b、 ^ j干 S、D、E、F和G型之所 0: \68\68796-920804. D〇C\ -2- 1233806 Λ8 B8 C8