TW505517B - Novel pharmaceutical compositions of uridine triphosphate - Google Patents

Description

505517 五、發明說明（1) 本案為1997年12月23曰提出申請之美國申請案編號 0 8/ 99 6, 740之部分連續申請案，其為1 9 9 6年7月3日提出申 請之美國申請案編號0 8/ 675, 5 5 5之部分連續申請案。 技術範圍 ” 本發明係有關尿曾5’ -三磷酸（UTP)之新穎醫藥組合物。 此組合物有效於促進哺乳類氣道，中/内耳成竇之滯留之 黏膜分泌物之黏液清除。此組合物能應周於治療及診斷。 發明背景 ,、 ” 黏液清除為人類氣道及中/内耳道之重要防禦機制 道及耳中之纖毛之協調搏動將黏膜層推向咽，伴隨捕獲於 黏液中之微生物及其他粒子。此系統之正常機能依纖毛 動之次數及黏液本身之性質而定。 寸 已發現細胞外核苷三磷酸，尤其υτρ調節黏液之清除。 特定S之，UTP刺激纖毛搏動次數（D· Drutz等， Development Research， 377 (3)， 185， （i996))，增加 軋迢之官腔表面上之黏膜層之水化作用（R· B〇ucher等， 苷及腺嘌呤核苷酸：從分子生物學到整合生理學， ρ· 5 25- 32 ”肺中尿苷三磷酸之機制及治療作用”（l. BeUrcHneHi 等編輯，Alumwer Academic pubHshers，

Boston, 1 9 9 5 )，及辦士”私求，, 3加黏蛋白自杯狀細胞及黏膜下腺釋 放(Μ· I· Le them等，人来s友、、，t」丄 A _ 人㉟虱迢上皮外植體中之杯狀細胞 之核有酉义調即：、纖維素泡症中之正常胞泌作肖，Am, J.

ReSPir’ ⑴1/101. βι〇1.，1993 ;9:3 1 5-322 )。此外， UTP及其他核百I已顯示刺激界面活性劑碌脂質自類型（I

第7頁 505517 五、發明說明（2) 肺泡細胞釋放（S· Rooney 等，Progr，Respir. Res·，27, 84-91 (1994) ;L. Gobran 等，Am· J. Physol·， 267， L625-3 3 ( 1 9 94))。已假設UTP有效於治療纖維囊泡症及其 他氣道病包括滯留之黏膜分泌，如美國專利第5，2 9 2，4 9 8 號及美國專利第5, 420, 116號所述。已證明UTP為安全的， 且於原始纖毛運動困難（PCD)患者改善咳漱清除（P. Noone 等 ’Am· J. Resp· Crit· Care Med A530， （1996)。 Inspire Pharmaceuticals 公司（Durham·，NC)研究已證明 UTP有助於誘發痰樣品，藉由水化黏膜分泌及刺激纖毛搏 動次數供診斷分析，如肺癌之細胞病理學或肺結核之酸〜 快速桿菌。可能UTP降低了被固定或接受機械換氣之患者 中滯留之分泌物之危險，因此防止肺炎，包括與換氣筒有 關之肺炎（VAP)。 於調配物中含UTP且於商品名uteple)®下上市，具pH 9 · 〇之專利產品於法國由W y e t h販賣供治療下背痛。法國生 物技術公司Synthe labo已開發腺苷三磷酸（ATP)之調配 物，商品名r h i n Α ΤΡηί供治療鼻黏膜液充血。比利時專利 第597, 360號，i960年12月14日公告，取名為"用為肌肉及 神經刺激劑之新穎治療組合物”，描述用於各種肌/病及神 經刺激治療之utp調配物。 11 隨著增加UTP之臨床用途於水平上之期望，已出現須更 為生物可相容及對溫度較不敏感之調配物。 本發明之调配物I與先前技藝核苜酸醫藥調配物之不同 在於其藉過非滅菌而非由加熱，其具控制之張性於2 5 〇至

505517 五、發明說明（3) --- 100 rnjsM之容積滲莫耳濃度範圍内，最佳地約3〇Q m〇sM， 及調節其pH提供6· 5至8· 5，較好6· 5至8· 〇，更佳地7 〇至 7· 5之範圍之值。 · 本發明之出乎意料之性質為若保持正常地冷藏，則調配 物I能有延長之擱置壽命。此新穎之υτρ調配物！適宜使用 商業可得之促進臨床裝置中投藥之喷霧器（例如噴射噴霧 器、超音波喷霧器等）輸送。本發明之液體υτρ調配物ζ可 經由霧化形式之吸入輸送至患者之氣道，或其可藉由鼻、 眼或耳滴劑輸送至鼻、眼、鼻竇或中/内耳。於任何投藥 形式中’將有效量之UTP直接接觸受影響之部位。 本發明之調配物I I與先前技藝核苷酸調配物之不同在於 其特別適宜經由能有效地產生好呼吸之基於水性之氣、容膠 之緊密的、可攜帶的、手握裝置投予小而預先量好之體夕 積，或特別適宜在投藥前從液體儲存槽計量一小體積。供 投予调配物I I之合宜之裝置包括而不限於那些目前由 、 AracHgni公司（Hayward’CA)開發中，如由Aer〇GeM^示於美 國專利第5, 544, 64 6號，以前由F luid Pr〇pUlsiQn 夭 Technology如揭示於美國專利第5, 164, 740號及由

Technology Partnership (Hertfordshire, UK)如揭示於 美國專利第5, 518, 179號。此外，基於小體積局部輪送=十； 量泵之系統，如為Bespak pic專利（(JK揭示於US專利第 5, 547，131號）者’可用來經由鼻或耳輸送本發明之調配物 II。 ° 發明概要

505517 五、發明說明（4) 揭示UTP之新穎醫藥物。組合物包含UTP粗物質例如二水 合尿苷5’-三磷酸三鈉鹽，於滅菌水溶液或是浮液。調配 物I加以滅菌，具控制之張性，調節之pH，且當適當地保 持冷藏時能具延長之擱置壽命。其適合用於各種商業上可 得之喷霧器如噴射或超音波噴霧器。 調配物I I為高度濃縮且適宜經由能有效地自預先測量之 小體積產生組的可呼吸之基於水性之氣溶膠，或能自隨後 氣溶膠化之液體儲存槽計量-小體積之小的、攜帶用手握 式裝置投藥。此外，調配物I I亦很適宜經由可經由鼻或耳 輸送治療上有效量之基於計量泵之系統，局部輸送小體 積。 此等UTP之新穎調配物很適宜治療性投予，以促進遭受 肺、鼻竇或中/内耳中滯留之黏膜分泌之患者之黏液清 除；增加咳痰及痰產生，誘發痰供診斷分析之目的，清除 肺之各種空氣傳播之毒素，在放射學顯像前清肺及在接種 疫曲或基因治療以前清肺。 本發明之調配物亦包括UT P之醫藥上可接受之鹽，例如 鹼金屬鹽如鈉或鉀；鹼土鹽；或銨或四烷銨鹽，亦即N H， ’其中X為(^_4。 由於U T P為對熱不穩定，本發明之調配物I與I I，藉由過 濾滅菌而非用加熱。 本發明之第二方面為可控制調配物I之張性，例如供等 張之調配物；因此將UTPNa3溶於適當量之鹽水或其他水溶 液，控制張性於2 5 0至1 0 0 0 m 0 s m之容積滲透莫耳濃度之範

^5517 五、發明說明（5) 圍；教隹之定接、、△ 佔夕—技-、妻、&透莫耳濃度於2 50至45 0 mOsM之間’最 佳之容積；夢透莫互、曲 .^ αα # 、今♦度約為30 0 mOsm，亦即等張溶液。 本發明之弟三方；从 R > ττ 乃面為將調配物I調pH於6· 0至8· 5之範 圍，較佳之pH水平於7 n t 丄々〇 # 十於7· 〇與7. 5之間。 本發明之第四方而& 夕門々文絲、，曲由為調配物1可以於0· 1與100毫克/毫升 古二 展X调配·’較佳之UTP治療濃度於5與45毫克/ 笔升之間。 本發明之第五方面i 乃由為具7.0至7.5之pH值之調配物I，為 貯於0。至1 0 t：間之、、w奋n士 他处《 — 皿度k，維持穩定形式歷高至30個月。 較佳之貯存溫度約5。〇。 於本發明之第六方面中，調配物丨丨為高度濃縮，於—2〇。 至+ 40 °C之溫度範圍内，達υτρ之溶解度極限，或於高於溶 解度極限之濃度，或於非溶媒媒劑中為極細之微粒懸浮 液。 於本發明之第七方面中，可投予很小體積之調配物丨1， 同时維持療效。此南度7辰縮之U Τ Ρ調配物之體積範圍由1 Q 至1000微升，較好25至500微升，最佳為5〇至丨㈣微升。 於本發明之第八方面’因將調配物I I輸送至標的部位， 且藉由氣道表面液體快速稀釋，無須維持此調配物之容積 滲透莫耳濃度於生理上等張值或維持生理之ρΗ。 於本發明之第九方面，一旦將調配物Π配予患者，則無 須冷藏。 於本發明之第十方面’調配物I I無須包含防腐劑供單位 劑量體積包裝。

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圖1為於非抽煙者中ϋΤ p調配物j相對於安慰劑對 噬細胞（AMs)為陽性之痰樣百分比之影響之時間過 般圖示。 ^ 一 圖2為於抽煙者由（n = 1 5)中υτρ調配物I相對於安慰劑對 兩段期間交叉研究之三天連續處理之痰重量（克）之影"響之 一般圖示。 曰 圖3為由接受U ΤΡ調配物I之抽煙者咳出之痰相對於安慰 劑者之細胞學結果之一般圖示（由肺泡巨嗔細胞，Α Μ之存 在定義為陽性樣品）（η=15) 圖4為UTP調配物I相對於安慰劑對慢性支氣管炎患者之 痰重（克）之影響之一般圖示（基線相對於投藥後立刻至5分 鐘）。 圖5為UTP調配物I相對於安慰劑對具慢性支氣管炎患者 之瘦重（克）之影響之 ^般圖不（基線相對於投藥後6 - 3 〇 分）。 圖6為U Τ Ρ調配物I相對於安慰劑對具慢性支氣管炎串、者 之痰重（克）之影響之一般圖示（基線相對於投藥後分至 排出）。 圖7為自慢性支氣管炎患者收集之痰樣之細胞學結果之 一般圖示（由肺泡巨嗟細胞，A Μ之存在定義陽性樣品）（基 線相對於投藥後6分至30分）。 圖8為自慢性支氣管炎患者收集之痰樣之細胞學結果之 一般圖示（由有纖毛之呼吸上皮細胞，CRE細胞之存在定義 II ! S 1 1 I 1 I I - 第12頁 505517 五、發明說明（7) 陽性細胞）（基線相對於投藥後6分至3 0分）。 圖9為於2. 5小時之一段時間内對於基線（無吸入UTP或安 慰劑）、兩劑量之U T P調配物I ( 5毫克/毫升標記為處理組 3 ; 25毫克/毫升標記為處理組2)及安慰劑（標記為處理組 1 )之全肺滯留放射標記曲線之一般圖示。滯留之減退證明 帶有放射標記粒子之肺中分泌物之清除。 特別實施例之說明 本發明之醫藥組合物為U T P之新穎調配物及很適合臨床 治療性投藥之滅菌水溶液。 調配物I加以滅菌，具控制之張性，為經調節pH，適合 供各種商業可得之喷霧器如喷射或超音波喷霧器投藥。出 乎意料之調配物I之性質為當貯於冷藏狀態時能延長擱置 壽命。 調配物I為高度濃縮之溶液，能容許很少體積輸送至標 的且仍為治療上有效的。調配物I I之出乎意料之性質為無 須包含防腐劑。 本發明之醫藥組合物調配物I及調配物I I之治療目的係 增加遭受纖維囊泡症、支氣管炎、鼻竇炎、中耳炎、泵發 性纖毛運動困難、有換氣機有關之肺炎及其他涉及滯留之 黏膜分泌或損傷之纖毛運動之其他疾病之患者，及無任何 疾病但具蓄積黏膜分泌物之高危險例如四肢麻痺之臥床之 人之氣道、肺、鼻竇及中/内耳及眼增加滯留之黏膜分泌 物之黏液清除。調配物I與調配物I I高增進供診斷分析例 如分析肺癌、肺結核或其他肺病用之咳出及誘發痰樣。

第13頁 505517 發明說明（8) 另外，由於已證明UTP之能力，本醫藥組合物之 合物，增進正常患者之肺黏液之清除，可用本明 物促進自氣道清除任何類型之吸入之外來物質之、、主t调配 於許多情況，例如生物戰、吸煙、工業及採二==。此 之毒素（造成矽土沉著病、炭未沉著病及所謂肺-塵埃、沉吸入 病之所有表現）；吸入之放射標記或其他診斷之顯像二 對吸入之粒子如花粉之過敏反應證明為有利的。 d及 本發明之醫藥組合物主要欲供投予人類患者但彼 投予其他哺乳類患者如狗、貓及馬供獸醫目的。

調配I可投予肺或鼻，以患者吸入之氣溶膠形成， 以液體形式例如鼻、眼或耳滴劑投予。以氣中溶膠形 液體形成，有效量之UTP直接沉積於作用部位。 少一

調配物II可經由可自小的預先測量之體積有效地產生鲕 的可呼吸之水性氣溶膠或自液體貯存槽計量小體積、 溶膠化之小、可攜帶之手握式裝置投予肺、鼻或耳。適= 之手握式裝置包括而不限於目前由司，Aer〇Gen 公司開發中，以前之Fluid propulsion Techn〇1〇gy及由 Technology Partnership開發者。此外，基於計量泵之小 體積局部輸送系統（如由Bespak plc取得專利者）可用來輪 送調配物I I。不論投藥係經由可攜帶之手握式裝置或局^ 輸运之計量泵系統，有效量之UTP沉積於作用部位。對於 於1、至1 〇微米之範圍，較好為2至7微米之範圍且最佳為3 —6 微来之範圍之氣溶膠小滴以質量中等氣體動力學直徑 (MMAD)每秒於3與5〇毫升之間之速率’適合供肺藥輸送。

505517 五、發明說明（9) 本發明之調配物亦包含UTP之醫藥上可接受之鹽，例如 鹼金屬鹽如鈉或鉀，鹼土鹽，或銨或四烷銨鹽，亦即NX/ 其中X為Gy。醫藥上可接受之鹽為保留所要之化合物之生 理活性而無賦予不要之毒物學作用之鹽。 供本發明組合物之原料，例如二水合2υτρΝ&，可依已 知之方法或其變化法製造，其顯然於精於此道者，例如核 苷之磷酰基化可藉標準方法如述於D. Hoard&D. 〇tt，j.

Am， Chem， Soc· 87， 1785-88 (1965) ;Μ· Yoshrkawa 等，Tetrahedron Let· 5 0 6 5-68 ( 1 96 7 )及Bull· Chem

Soc. 8 3,649 -59 ( 1 96 1 ) ； ΛΒ. Fischer# ^ J. Med.

Chem· 36, 3937-46 (1993)及其中之參考文獻者完成。UTp 亦為商業可得（Sigma, St· Louis， M0， USA)。 為增加固體藥物之穩定性，以粉末形式之UTp可保持於 -2 0 C與-8 Q C之間冷；東’且於此種情形應在調配製程前， 令其溫至室溫。另外，UTP原料在打開以前應使至處理溫 度以減少存在於周圍空氣中之水分吸收及/或濕氣之凝 結。 本發明之調配物I之張性可藉加乾粉UTPNa3於前面製備 之水性鹽溶液，如鹽水溶液，藉已知於精於此道者之技銜 使張性至任何所須之容積滲透莫耳濃度之程度控制於2 5 〇 至1 0 0 0 mOsM之範圍内；較好溶液之容積滲透莫耳濃度於 2 5 0至4 5 0 m 0 s Μ之範圍内，最佳地溶液與生物流體為等 張，亦即溶積滲透莫耳濃度約3 0 0 m〇sM。替代地，可將 UTP粉及NaCl於過濾前溶於適宜媒劑。藉精於此道者已知

第15頁 505517 五、發明說明（10) 之技術，可調溶液之pH，致使該溶液之讪於6, 間’較佳地’ pH於7. 0與7. 5之間。溶液再藉清、·朴 用適當之微米濾膜。 '一烕囷使 本發明之出乎意料之結果為等張，調節pH及 調配物I ’當貯於0。至1(TC之間之溫度下，維 尚達3 0個月。本發明之調配物I賦予實用之声芯疋/， 價值之無須冷藏空間。 处在於有 調配物I可以多種於〇· i與100毫克/毫升之 2備；較佳之UTP治療濃度於5與45毫克/毫升之 ，辰又 β周配物I之臨床投藥被促進，因 業可得之Α.Tp馬其適且使用大部分商 貝務器，例如Pan LC P1US喷射式噴。 於配物η，醫藥組合物之濃度之控制藉由：於精 濃声=者之技術，加乾粉耵㈣〜至水性或乙醇性溶液，使 、又至約1克/耄升，為其於周圍條件六 — 液再藉過濾滅菌，替化地， 配、曲 ^又極限。溶 液，輸送治療劑量之UTP。於此清/的叮極將細 已滅菌之水性媒劑。 …形，可將樂物加至先前 之範鬥物1/，由於其尚濃度之UTP，以只有10至1 0 0 0微升 圍之，接幸乂好25至5〇0微升之範圍，更好50至100微升之範 国之體積，輸送治療劑量之υτρ。 由A體積之調配物Π之溶液輪送至標…，其立刻 理等5夕面液體稀釋，〉肖除了維持體積滲透莫耳濃度於生 液張之值之須要。類似地，可由患者耐受更驗性之ΡΗ溶

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凋配物Π之pH範圍，可於 之間，更佳於7 ΰ，、12之間，較佳於7· 5與12 地於8鱼10之門 之間；再更佳地於7與10之間；最佳 、/、1 〇之間，且於7與9之間最適宜。 之出乎意料之好處為其較高之ΡΗ及1^?於溶液中之 =又依賴性降解，造成醫藥組合物一旦配予患者則不必 冷藏。 UTP之劑量自密封、預先測量之單位體積之溶液輸送為 佳’由於無須包含防腐劑於調配物中。然而，自其計量一 J、，積及氣溶膠化之貯存槽系統亦可接受供藥之輸送。對 於財存槽系統’須單一防腐劑或防腐劑之混合物，依溶液 之體積^透莫耳濃度及/或pH而定，可接受之防腐劑包括 而不限於氯丁醇或氯f烷銨。 本毛明之醫藥組合物更詳細解釋於下面實例。此等實例 欲說明本發明而不應視為其限制。 實驗實合j 置勿 1(6 升 Pilot GMP 批次）

調配以前，將二水合UTPNa3保存於—2〇它下冷凍，打開 之前’令UTP粉溫至處理溫度歷至少1小時。此係減少水之 吸收 將U 丁 p原料溶於滅菌水溶液（食鹽溶液）。用適當濃 度之鹽水溶液使體積滲透莫耳濃度至約3〇〇 mOsM，亦即等 張溶液。替代地，可將UTP粉溶於滅菌水並加適當量 NaCl ’使體積滲透莫耳濃度至約3 0 0 m0sM。於兩情形，以 充分體積來添加水溶液以達5至45毫克/毫升之最適治療之 UTP濃度。將液體溶液調pH使pH於7· 0至7· 5之間。所得UTP

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五、發明說明（12) 溶液以0 · 2微米濾膜 菌/制黴菌；内毒素 耳濃度測定；pH -水 物質。破壞被捨棄^ 過濾滅菌。包裝以 測定；高壓液相層 平測定；濃度測定 ，小瓶。 前做品質管制：制細 析法，體積滲透莫 ;及目視審查微粒 至4.2毫升之水平，每6 籤宣稱為4·〇毫升）。於 再於約1 2 5 0個小瓶容器中各充填 升一批，以充填標的為4 · 4毫升（標 製造2週内將小瓶託運。 ΰ 毫升UTP 溶 液〉 '~'

自冰箱移出UTP並令乾燥器恢復近室溫。藉正確稱取等 於1 2· 5克及1 5克UTP(令供層析法純度及藥物之水分含量 用）製備各濃度之四批UT Ρ溶液，以分別得溶液具2 5 〇與3 〇 宅克/¾升之濃度。將各正確稱重量之UTP移至乾淨之 升容量瓶，並溶於最後為50毫升體積之一部分蒸餾水。j 溶液以NaOH溶液調至標的PH為7.0， 8·0, 9·〇或ι〇·〇，再 調至最後體積。 各溶液之部分移至玻璃小瓶（1 1毫升第1類型，Β分類之 硼石夕酸鹽’具聚乙稀基面之纸漿襯裏之黑色齡系螺絲頂 蓋）或低密度聚乙烯（LDPE)瓶（8毫升窄口 Nalgene編號

2 0 0 3-9 0 2 5 )。將如此包裝之樣品上立貯於5。(：， 25。〇/60% 相對溫度及40 °C/7 5%相對濕度，以定溶液穩定性。3 0 0毫 克/毫升溶液貯於25 °C下12週後，顯示最小降解（貯存玻璃 為原來效力之92· 8及9 8. 0%之間及貯於LDPE為原來效力之 9 2 · 5與9 4 %之間）。當貯於5 °C於6個月内，於同樣之溶液範

苐18頁 5〇55l7 五'發明說明（13^ ' ----- ^内無見到降解。上述穩定性研究係於Me tries公司， reenvilie，NC 2 783 6之實驗計晝書IP/ 0 33下進行。 、、於開發研究學中，對於以3 〇 〇毫克/毫升調配之UT P溶 液’ $準電子機械輪送裝置顯示高達3· 9微升之流速。類 2之標準電子機械輪送裝置產生具質量中等氣體動力學直 ^(MMADs)於3至6微米之範圍之氣溶膠。 (無抽煙者）

此單中心第1期單元研究為於4 8個健康男志願者中，隨 ，、雙盲評估加強、單一劑量之氣溶膠化之υτρ。以各劑 =登記連續4組1 2個志願者，並以之1方式隨機接受UTP或 安慰劑。安慰劑為正常鹽水，所評估之四種劑量之UTP為： 〇· 5毫克/毫升，5毫克/毫升，25毫克/毫升及45毫克/毫 升。於投藥時’將4毫升安慰劑或4毫升適當之UTP溶液置 於噴霧器供氣溶膠化。此研究之目的為以各種劑量決定 utp之安全性及耐受性，並測定是否υτρ與安慰劑比較時， 可增進正常、健康受試者咳出含肺泡巨噬細胞（指示深肺 樣品之細胞）之痰之能力。

處i里組指复及研究藥物之投藥:隨機指定各受試者接受單 劑1之UTP或安慰劑。各劑量包括4毫升安慰劑或適當之 UTP溶液（〇· 5， 5， 25或4 5毫克/毫升），並使用藉由設定於 14升/分之流速之可攜帶之加壓器 (〇6\^11)丨^?111111〇41(1_)為動力之噴射式霧化器（1^1^

第19頁 五、發明說明（14) = Γ^ΤΜ)投藥。安慰劑或ϋΤΡ之吸入約須8至15分。 —.品:試驗產品為供吸入之、、麓庚炎、 毫克/毫升之UTP、容洛度為0·5， 5， 25或45 式銘封之單 、〗又早便用之玻璃小瓶中，將產品貯於2。 ，注入後各小瓶輸送4毫升溶液。各、、六 、 ^ 溶液之張力约3 0 0 M〇Sm/升。各小瓶各P為7.2及各 度及貯存說明。 各】瓶各別標以内容物，強 安慰劑以滅菌之氯化鈉吸入溶液υτρ ’〇 9% (d

Lab0ratories，NapaCA，USA)。安慰劑包裝於含 = 并根據，規格，溶液之Μ於“ΙΟ: 二圍，請笔升之安慰劑供投藥。將產品貯於2。—8 C。各小瓶各標以内容物、強度及貯存說明。 收集痰供細胞學檢查之目的以決定是否 肺泡巨嗟細胞。肺泡巨喵么旳 ^ 自肺1之特痰樣本（非單純之唾液分泌物）。為此研究， 以，列時間收集痰供細胞學檢查：基線（投藥前） 二小時、投藥後4小時至δ小時，投藥後二後時 至1 2小化及隔天起床後。 為了皇之目的，合併接受安慰劑之所有患者 (二=16)及合曰併接受υτρ之所有患者（γ32，所有四種劑 15 1并得自所有4 8個X試者之數據供基線痰樣時間點 用圖1 σ兒月女慰劑與U T P對經測定為肺泡巨嗤細胞（a μ )陽 性之痰樣百分比之影響之時間過程。雖然大多數受試者 (投藥前之期間）可產生於基線之痰樣（44/48受試者自發性

第20頁 505517 五、發明說明（15) 地及47/48受試者按照簡單之包括3次深呼吸之 嗽產生痰樣），此等樣品中只約30%被認為為特質=著咳 藉由細胞學檢查證明（AMs之存在）時於16個試貝痍樣。，當 量安慰劑（正常鹽水）之褒、、六腴外 木命|仏 '有之早劑 投藥後之時間點，不能改進經測定含肺泡巨嗟細胞之 之百分比。然而，於UTp合併組（n = 32)，超過8〇%之痰樣^ 認為為肺泡^嗟細胞陽性，代表超過基線與安慰劑之2. 5 倍改進。於第二時點（投藥結束至投藥後4小時），υτρ改進 肺泡巨嗟細胞為陽性之樣品百分比之作用亦為明顯的；投 予安慰劑後之陽性為樣品之37%，相對於投予UTP後之 5 7%。由4小時與8小時之時點，於安慰劑與υτρ組之間所著 到之差異不再明顯’於其時點，安慰劑可υτρ組與投藥前 之值實質上為相同。此與相當點之υτρ非用期間以及於以 前之研究所發現者一致，指示單一、吸入劑量之UTP增進 全胖黏液之清除約1 · 5小時。 Β.抽煙者研究 研究設計，此於抽煙者之第二研究為於以前研究中評估 之最高劑量之氣溶膠化U Τ ρ之多次每曰劑量之單中心、隨 機化、雙盲、交叉評估。於此研究登記1 5個抽煙者。受試 者必須為目前抽煙，且於研究項目中具相當正常之肺功能 (於1秒之強迫呼吸體積高於預期之8〇%)。受試者一天接受 UTP( 45毫克/毫升）及安慰劑（正常鹽水）3次連續3日，兩段 期間之間有1週洗出。此研究之目的為決定是否隶南劑里 之UTP可一致地有效於數個連續之日内增進咳出之痰量。

505517 五、發明說明（16) 此模擬收集痰供診斷某些肺功能及其他 通常要求患者每天早晨收集其痰歷數個連續之2的佼者 藥物之投藥：隨機指定各总_去拉心 個每日劑量（一天3次連續3天）之安慰劑及υτ^ °1，於2叉多 期之間至少隔1週。各劑量包括4毫升之45毫克/毫升容又樂 $安慰劑（正常鹽水），使用設定於14升/分之可攜帶之加 壓器（Devilbiss Pulmo-Aid eg》為動力之噴射式霧化界 (Pari LC PLUSTM)投藥。安慰劑或UTP約須8至15分。的 良立結果、、-於各研究期間跨3天之投藥之各時點，收集投藥 予UTP及安慰劑之前與之後咳出之痰量（以克表之重）。亦 由細胞學檢查評估痰以決定是否痰樣含肺泡巨噬細胞；指 示深肺樣品’圖2說明於3天之處理投予安慰劑與υ τ p之前 及之後之痰重（克）。如圖2所示，於3天之投藥之任一天當 中安慰劑之吸入，並無增加投藥後立刻咳出之痰量（投藥 前之痰重與緊接投藥後者相比）。對照地，於所有3天之投 藥，UTP之吸入一致地增加緊接投藥後咳出之痰量（投藥前 之痰重與緊接投藥之後者相比）；於3天投予UTP之期間之 每一天，咳出之痰量增加之大小（投予UTP之前與之後相 比）；圖3說明由接受U T P之抽煙者咳出痰相對於安慰劑 者。如圖3所示，於3天之任一天，接受UTP之抽煙者比接 受安慰劑者更易於產生會肺泡巨噬細胞（AM )之痰樣（安慰 劑與UTP間之差異於第2天最顯著）。安慰劑顯示有降低產 生含肺泡巨嗟細胞之樣本之可能性之趨勢（於安慰劑組中 投予前與投予後比較）。此研究證明UTP —致地增加咳出之

第22頁 505517 五、發明說明（17) 痰量（含肺泡巨噬細胞）超 用於3天之連續處理中證明°。安慰劑產生者。此UTp之作 品:试驗產品為供％ 、曲 UTP溶液。UTP溶液包裝於I 之J辰度為45毫克/毫升之 用玻璃小瓶。產品貯於2。〜8皮塞及扯除式鋁封之單一使 4宅升溶液。各溶液之p jj 下、藏注入後各小瓿輪送 3〇〇M〇sm/毫升各小觀各押、、· ^各溶液之張性為約 二，丨以滅菌氯化 〜t〇ries’ Napa CA，USA)供應。安慰劑包裝於含5毫 升=液之單厂使用小瓶中。根據usp規格，溶液之pH於 7 · 〇之範圍内。用4毫升安慰劑投藥。產品貯於2。一 8 各小瓶分別標以内容物、強度及貯存說明 者中之增強、單一吸入劑量之υτρ。於此研究中登記〜〜 者必須符合美國胸部協會之慢性支氣管炎之定義（於一年 中超過3個月之過度黏液產生歷至少連續2年）。患者包括 /、L微至中度氣道閉基（1秒内強迫之呼氣體積大於研究項 目所預期之65%)。登記於此研究中總共26位（14位女性及 1 2位男性）患者，且大多數目前抽煙。五個連續之5位受試 者之組（於一組中由於放棄加入另一位患者）以隨機之順序 接=單劑量之安慰劑及適當劑量之ϋτρ(2· 5， 5， 15，25及 45宅克/毫升）。以至少24小時分開υτρ與安慰劑之劑量。 此研九之目的係更小心地定義時間過程，藉其Μ?增進已

第23頁 刈5517 、發明說明（18) 知有高危險發生肺癌之患者 ， %學之檢查包括於痰樣中之肺泡巨嗟 :胞及，吸纖毛上皮細胞之鑑別及定量。t㈣巨巫 家及研究藥—隨機指定各 nm—」供投藥，各劑量包括4毫升之2.5,5, 升)八β 克升溶液或安慰劑，使用藉由設定於14 刀之可攜贡之加壓器為動力之喷射式霧化器ri lc PLUS)。安慰劑或UTP之吸入須約8至15分。 曼子^^^試驗產品為供吸入之附溶液，濃度為25， ，5， 25或45毫克/毫升。UTP溶液包裝於具橡皮塞及扯 除式鋁封之單一使用玻璃小瓶。產品貯於2。〜8它下冷藏。 注入後各小瓶輸送4毫升溶液。各溶液之_為7.2，各溶液 之張力約30 0 MOsm/升。各小瓶分別標以内容物、強度及 貯存說明。 安慰劑以滅菌氣化鈉吸入溶液1^1)，〇. 9%(Dey

Laboratories, Napa CA，USA)供應。安慰劑包裝於含5毫 升溶液之單一使用小瓶。根據USP規格，溶液之pH於 4· 5-7· 0之範圍。用4毫升之安慰劑投予。產品貯於2。_8 °C。各小瓶分別標以内容物、強度及貯存說明。 效力結果： 於基線及仅予UTP及安慰後之各時點，收集咳出之痰量 (以克表重量）°時點為：投藥後立刻至5分，投藥後6分至 3 0分，及投藥後3 1分至排出（投藥後數小時内）。供分析之

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505517 五、發明說明（19) 目的，合併跨所有劑重組之接受安慰劑之患者（n = 2 5);合 併接受UTP (所有劑量）之患者；及合併接受3種最高劑量 (15， 25及45毫克/毫升）之患者（n=15)。 圖4說明安慰劑相對於UTP於2個時點：基線（自發性咳出） 相對於投藥後立刻至5分鐘。對咳出之痰量（以克表重量） 之影響。UTP (合併所有劑量）與基線及安慰劑（合併所有劑 量）比較顯著增進咳出之痰。當將3種最高劑量之UTP (n=15)與安慰劑組比較時，UTP之影響更加顯著。UTP增進 咳出之痰量超過安慰劑與基線之能力，於投藥後6分至3 0 分之後面時點亦明顯的，如圖5所示。圖6顯示於3 1分至排 出之時點，UTP與安慰劑對咳出痰量之影響，兩者之間實 質上無差異，指示於短時間架構内顯示UTP之影響，與前 面之研究一致。 於投藥後6至3 0分之時點收集之痰樣之細胞學結果，示 於圖7 (含肺泡巨嗟細胞）及圖8 (含呼吸纖毛上皮細胞之 痰）。UTP(合併所有劑量）及UTP(合併三種最高劑量）與安 慰劑比較時，顯著增進產生含肺泡巨嗟細胞（A Μ )之痰樣之 患者之百分比。UTP(所有含併之劑量）及UTP(合併三種最 高劑量）當與安慰劑比較時，亦顯著增進產生會呼吸纖毛 上皮細胞之痰樣之患者百分比（圖8 )。值得注意的，於圖8 中只有8%所之患者，於基線或安慰劑氣溶膠化後能產生含 纖毛上皮細胞之樣品；而7 3 %之患者於U Τ Ρ ( 3種最高劑量） 組中，可產生此種樣品。UTΡ之此等作用亦於投藥後立刻 至5分之時點，觀察到肺泡纖毛上皮細胞（基線/安慰劑

第25頁 505517 五、發明說明（20) 二8%/4%:UTP(所有劑量）= 32% ; UTP(3種最高劑量>50%。 UTP之影響於31分至排出之時點，已回至按近基線/安慰劑 值，與於痰重上之發現一致。 此研究明白地證明氣溶膠化之UTP劑量（尤其是1 5，2 5及 45毫克/毫升之3種最高劑量）於誘發產生含町評估前癌性 損傷或變化之細胞之深痰樣，比安慰劑（正常鹽水）更有 效。另外，ϋ T P可於短時間架構内（投藥後3 〇分内）誘發特 質痰樣（含肺泡巨噬細胞及纖毛上皮細胞）之產生。 D ·輕度慢性支氣管炎泉者之治；率 已證明f輕度慢性支氣管炎患者中，藉由吸入（4毫升之 含5宅克/¾升或25¾克/毫升υτρ之液體溶液）投予之 同劑量，增進黏液之清除超過基線（無吸入之治療）且 過安慰劑。於此研究中，声、者八 亦超 之UTP及安慰劑測量黏液^ ;刀幵一 口入不同劑量 面順序吸入而完成：以鑄::率，方法猎由使患者以下 UTP或安慰劑中之—。3 =?之二化鐵粒子再以兩劑量之 及入UTP或安慰劑德，葬由会 分鐘r閃爍圖法影像仆、日丨—‘ 4佼精由糸列之2 小時。 “象化測定放射標記粒子之清除率歷25 射標記，再令進行2 r立士基線黏液清除率’患者只吸入放 投藥期間吸入之前，.3互、時之T閃爍圖法影像化。對所有 速、ECG、血壓、氧八為中與之後，藉衝動氧合法監測心 研究之所有階段中，紅+素飽和，收集安全性數據。於 - 现測患者於各投藥期間之任何不利之 505517 五、發明說明（21) 圖9顯示於2· 5小時之期p气肉 甘，w ^丄 4間内’基線（無吸入UTP或安慰 劑）兩劑量之UTP(5毫克/臺斗炉々去，丨士 w n 几’笔升松纪為”處理組3丨丨；25毫克/ 毫升標記為”處理組2")及容尉制r诚“ ,丨上 毛凡/ y久文慰劑（標記為”處理組丨”）。滯 留之減退證明帶有放射樟々初；+吐山 ^ 於此情形兩劑量之υτρ日月顯地增進分泌物之清除率（ϋ之 清除率）超過安慰劑及基線。 π〜除羊（黏液之 Τ~ Γ~ 、及入之UTP溶液，以5與25毫夯/ 宅升之濃度。UTP溶液包裝於具橡皮蓋及扯除式銘封 一使用玻璃小瓶。產品貯於2〇 —g。厂下、人一 ” 輸送4毫升之溶液。各溶液之pH 冷1。注入後各小瓶 30"-，升。…分別標：Γ容物各強容 明。 円谷物強度及貯存說 安慰劑以滅菌氯化鈉吸入溶液“？，〇

Lab〇rat〇ries，Napa CA，USA)供應。安^ = 升溶液之小瓶。根據USP規格，溶液$nH认」[ ' ^ 允 , ♦及之PH於4· 5-7· 0之範圍 内。使用4笔升之安慰劑投予。產品貯於& 分別標以内容物、強度及貯存說明。、 汧 於纖維囊泡症之患者（年齡6〜4(υ中 於細毫克/毫升之劑量=嚴重= 本發明現已完全說明，其將顯然於精於 :變化及修飾而無偏離附加之申請專利範圍之主旨或範，、

5055士·7γ· i7 :‘號87121536 只1年Ί月 曰 修正

O:\56\56629-910717.ptc 第28頁

Claims (1)

1. 505¾¾修丑 修正 六、申請專利範圍 1. 一種滅菌醫藥組合物，其包含尿苷5’ -三磷酸（UTP)及 滅菌水溶液，具UTP濃度於1毫克/毫升與10 0毫克/毫升之 間；於250與450 mOsM之間之體積滲透莫耳濃度；及於6.0 與8. 5之間之pH，其中UTP之濃度足以提供每劑量之UTP於 2 1毫克與1 9 8毫克之間 2 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中UTP之濃 度於5與45毫克/毫升之間。 3 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其與約3 0 0 mOsM之體積滲透莫耳濃度等張。 4 ·根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該p Η於 7 . 0與7. 5之間。 5. 申請專利範圍第1至4項中任一項之醫藥組合物，其係 投予有效於增加咳痰之量。 6. —種滅菌醫藥組合物，其包含尿苷5’ -三磷酸（UTP)於 滅菌懸浮液中，具UTP濃度於45與1 0 0 0毫克/毫升之間；pH 於6 · 5與1 2之間；以致該組合物能以體積範圍1 0至1 0 0微 升，輸送治療量之UTP。 7. 根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中UTP之濃 度於100與500毫克/毫升之間。 根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中該pH於7 與9之間。 9 .根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中每治療 量之該體積於50至100微升之間。 1 0 ·根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中無防腐

   O:\56\56629-91Q717.ptc 第29頁 505517 修正 案號87121536 0(年7月 六、申請專利範圍 劑存在。 1 1 .申請專利範圍第6至1 0項中任一項之醫藥組合物，其 係投予有效於增加咳痰之量。 1 2. —種滅菌醫藥組合物，其包含尿苷5’ -三磷酸（UTP) 及滅菌水溶液，具UTP濃度足以提供每劑量之UTP於2 1毫克 與1 98毫克之間；於2 5 0與4 5 0 mOsM之間之體積滲透莫耳濃 度；及於6. 0與8. 5之間之pH ;及可接受之滅菌程度。

   O:\56\56629-9i0717.ptc 第30頁