TW448049B - Use of a 7Α-methyl-17Α-ethynyl-estrane derivative for the treatment of atherosclerosis - Google Patents

Description

448 0 Α7 Β7 五、發明説明（1 ) 本發明係關於利#7 α-甲基—1 7 α —乙炔基一雌烷 衍生物來製造一種用來預防和治療動脈硬化的藥品。 動脈硬化的發展是先從脂蛋白中之膽固醇在血管壁堆 積而開始的，接下去的發展則是在動脈血管的血管內膜中 出現脂肪紋（可能是早能由顯微鏡識別出的病害），此爲 充滿脂肪之巨噬細胞泡沬細胞"）的局竈收集。此作 用可發展出進一步的病害形成；而泡沫細胞硬化及內皮損 傷也可能發生而導致平滑肌細胞移行及增生，並導致細胞 外母質的形成。因此，動脈硬化是由於許多種細胞在血管 壁中交互作用所導致的結果，而血漿膽固醇的增加則是引 起此種細胞間交互作用的軀動力（戴維斯，M.J.及伍爾夫， Ν.;"動脈硬化"：它是什麼及它爲什麼發生"：英國心臟 期刊’ 1993，69 (增錄部分），S3〜S11)。 冠狀動脈硬化是動脈管壁中動脈硬化作用的結果。眾 所熟知的是育齢期之婦女的C H D發病率較相近年齡的男 性低很多，但絕經期後其C H D發病危險率則迅速增加。 对步-部中央標涞局員η消赀合作社印製 絕經期向來與許多血管舒縮、生理學的及婦科學的症 狀有關，其中有部分爲絕絕經期前後（更年期）的特徵。 絕經顯示出爲慢性疾病（如骨質疏鬆症、動脈硬化症）的 —個危險因素。停經後婦女體中雌激素類濃度之驟然降低 (尤其是雌一醇、雌—1，3，5 (10)—三稀一 3， 17—二醇）及春情素（3_羥基—雌—1，3，5 —( 10) —三烯一17—酮））被認爲與這些症狀有關。利 用雌激素類替代治療來做爲減緩絕經期前後婦女之更年期 -4- (諳先間讀背而之注意事項再填艿本頁) 本紙張尺度適用中國國家標卑（CNS ) Λ4規格（210Χ 297公釐） Α7 Β7 五、發明説明（2 ) 症狀，並預防動脈硬化的方法已逐漸增加其接度，經由此 法可修正主要雌激素類之生理學上的缺乏。另外，外生雌 激素具有降低血漿膽固醇和LDL (低密度脂蛋白）-膽 固醇的效果及/或增加血漿HDL (高密度脂蛋白）一膽 固醇的效果。這些雌激素類的效果可在動脈硬化病害的形 成上提供一全然的保護效果。 然而，臨床上，在絕經後之婦女的非對抗雌激素類替 代治療會增加子官內膜肥大和子宮內膜癌的危險性。因此 ，目前爲止大部分硏究的治療法部與合倂使用雌激素類成 分和黃體素類成分的治療有關，加入黃體素類可對抗由雌 激素類所促成的危除性（荷爾蒙替代治療）。但黃體素類 在血漿脂蛋白濃度上會有相反效果並且會對抗雌激素類對 動脈血管的有利作用。 經欢部中央標準局貝工消贽合作社印裂 .一種由f尼德蘭，歐根農」製造的合成類固醇，7 α _甲基一乙炔基一17 /3 —經基—雌—5 (10)—嫌一 3_酮（〇rg OD— 14; 7 —甲異炔諾酮），其特 、 徵是具有一微弱的雌激素、黃體素類、雜性素類的性質， 臨床上顯示：此種合成的膽固醇在降低絕經期前後之婦女 的更年期症狀上與戊酸雌二醇或共軛雌馬雌激素類具有相 同的效果。7 〇ί —甲異炔諾酮更進一步顯示：像長期給予 雌激素類般’它可提供對停經後婦女之骨質疏鬆症發展的 實質保護（漢諾瓦，Ν .等人著，臨床內分泌學及代謝作 用的期刊（1996) ，81，2149 〜2422)。 另外’關於7 α -甲異炔諾酮在血漿脂蛋白濃度的作 -5- (对先閱讀背而之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公楚） 448 〇4 ί··.-；] Α7 Β7 五、發明說明（4 ) 甲異炔諾酮做長期治療時，7 ~甲異炔諾酮對HD L —膽 固醇的效果則被認爲是較雌激素替代治療方法不受歡迎（ 里袼斯，B . L ’ J ·克林所著，，內分泌學及代謝" ( 1 9 9 6 )，81，2 4 1 7 〜2 4 1 8 )。 令人驚訝的是1已發現7 α -甲異炔諾酮的先軀藥物 型及其某些代謝物質具有很強的抗動脈硬化性質。這些性 質較那些如：1 7 /3 _雌二醇類的抗動脈硬化性質更爲明 確<= 因此，本發明與利用具有通式I之7 α —甲基_ 1 7 α -乙^夫基-雌烷衍生物來大量製造用來預防或治療動脈 硬化的藥品有關： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 R 1 = H (0R3)或 0 ; R2 = H (Ci-H)醯基；R3 =Η或（C i ！ 8 )醯基；；且虛線代表在4，5 —或5， 1 〇 —位置中的雙鍵。 本發明的化合物，特別是式I所示的化合I物，其中 1^爲11，0H或0，尤其是那些其中之R2 = H且其中的 雙鍵是在5 ，1 0 -位置上的化合物，和其中之R 1爲〇 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 448 0 Α7 Β7 五、發明説明（5 ) ，R 2爲Η且其中之'雙鍵是在5，1 0 —位置中的化合物（ 甲異炔諾酮；〇rg — OD— 14)，具有非常明 確的動脈粥狀保護效果。 因此，可根據本發明來使用之適當的具通式I的7 α 一甲基一 17α —乙炔基-雌烷衍生物爲，例如：7〇:— 甲基-1 7α -乙炔基一1 7召一經.基τ雌一5 ( 1 〇 ) —烯一3 —酮（〇rg 0D— 14 ; 7α —甲異炔諾酮 )，7α —甲基一17α-乙炔基一雌一5 (10)—烯 -3α，17yS —二醇，7α —甲基一17α —乙炔基一 雌 ~5 (10)—烯一3/3 ，17/3 —二醇，7α —甲基 _1 7α—乙炔基一17jS_羥基一雌一4 —烯一3_酮 ，及其酯類。較佳之衍生物爲7 α —甲異炔諾酮及7 α -甲基一17α —乙炔基一雌一5 (10)—烯一3α， 17石一二醇。特別好之7α —甲基一 1 7 α —乙炔基_ 雌烷衍生物爲7α~甲異炔諾酮。 經浪-部中决橾準局Κ工消费合作社印裝 醯基一詞意指一個衍生自含1 _ 1 8個碳原子（也可 以接語（Ci-18)表示）的有機羧酸醯基團。此類羧酸的 賓施例有甲酸、醋酸、丙酸、丁酸、異丁酸、三甲基醋酸 、戊酸己酸、癸酸、土碳烯酸、月桂酸、棕櫚酸、油酸、 苯醋酸、苯丙酸、苯甲酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、及 檸檬酸。較佳之醯基團具有1 - 6個碳原子，而最佳者爲 乙醯基團。 如式I所示之7 α —甲基一 1 7 乙炔基_雌烷衍 生物爲已知化合物。因此，這些化合物可依已有說明的方 -8- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙掁尺度適用中國國家標卑（C'NS ) A4規格（2】0Χ297公釐） ^48 〇 經濟部中决標準局負工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（6 ) : 法加以製備，如：滅國專利3，34〇，279及美國專 利4，70 1，4 5 0中描述的方法可用來製備7α —甲 基一17α —乙炔基一17召一羥基一雌一5 (10) — 烯—3 —酮（7α —甲異炔諾酮）。 使用根據本發明之化合物不僅可去除在荷爾蒙替代治 療中的負面的心血管副作用（這些副作用可能是來自先前 技藝中使用的某些物質），這些化合物並具有非期望中之 顯著而有利的動脈粥狀保護效果。根據本發明之7 α -甲 基- 1 7 α -乙炔基-雌烷衍生物，及以它們爲基礎的醫藥 製品對於血管壁中之膽固醇堆積、脂肪紋的形成，及進一 步的病害形成具有益的效果。 這些對血管壁的直接效果可在一個一般所接受的，在 兔子體內進行的相關而有效的動脈硬化模型中觀察到。與 預期中相反的，就本發明化合物之微弱的雌激素活性的觀 點來看，證實只要很低劑量的本發明.化合物就具有顯著而 預期不到的強烈動脈粥狀保護效果，並且這些化合物的效 果與1 7 — Θ -雌二醇的動脈粥狀保護效果比較時更爲強 烈。 雖然，與雌二醇相反的，本發明化合物可降低人體血 漿內脂蛋白L p ( a )的濃度，但這不是本發明化合物可 具有較強之動脈粥狀保護作用的解釋。與人類相反的，兔 子血漿內並無Lp (a)存在（兔子不合成Lp (a); 見'^科學"，第246冊，1989 ，904〜910頁 )。因此，本發明化合物在（動脈硬化的）兔子體內之強 (讀先閱讀背vg之注意事項再填巧本頁)

本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐〉 -9- 經求，部中央標準局貝工消贽合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（7 ) 烈動脈粥狀保護作甫與其對L p ( a )的作用無關。因此 ，當人體內L p ( a )的降低對動脈粥狀保護扮演了一個 附加的角色時，在人體中之非預期性的強烈動脈粥狀保護 作用可能較在兔子體內所觀察到的更爲強烈。 因此，本發明之7 α_甲基_ 1 7 α-乙炔基一雌烷 衍生物具有一強烈的內因性動脈粥狀保護潛力，也因此不 僅可用於絕經期前後婦女的荷爾蒙替代治療，同時也可適 用於哺乳動物（包括所有年齡之雌、雄類）體中之動脈硬 化治療。另外，它們也可預防性地用來預防動脈硬化。 因此，本發明提供一種抑制動脈硬化過程的方法，它 包含給予一哺乳動物（以給予人類較佳）一種動脈粥狀保 護量的通式I所示的7α-甲基_17α-乙炔基一雌烷 衍生物（如前述所定義者）。 本發明之化合物可以單獨使用或彼.此合倂使用或與一 或多種其它動脈粥狀保護藥品合倂使用只要它們不會對彼 此的作用有負面干擾。 根據本發明的7 α —甲基一 1 7 α —乙炔基一雌烷衍 生物可經腸胃道或經腸外給予，且對人類而言，每曰劑量 規定爲0.05〜10毫克，以0.1〜2.5毫克較佳 〇 每曰劑量可經由下列方式以一或多個劑量規定單位給 予，如：口服、經直腸、經舌下途徑、鼻腔途徑或由皮膚 給予（例如：皮膚貼片、或乳膏形成）<以每日經由口服 一個單一劑量規定較佳·>或者，可使用一種經控制的釋出 本紙張尺度適用中國國家標耷（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） -1〇 _ (誚先閱讀背而之注意事項再填巧本頁)

A7 B7 五、發明説明（8 ) 製品來釋出上述所运義之每日所需的全部劑量。經控制釋 出的製品可以口服途徑給予，或者以皮下植入的形式給予 較佳。 根據本發明所用的藥學製品可根據標準技術來製備， 例如：於標準參考書，古納如等人著（E d .)，雷明頓 的藥學科學（第18版，邁克出版公司，1990，如： 第8部分：藥學製品及它們的大量製造#)中所描述的方 法。爲了製備根據本發明的藥學製品，需將如式I所示之 7 α -甲基-1 7 α -乙炔基-雌烷衍生物或其藥學上可 接受的鹽類與藥學上可接受的載媒一起混合，或是溶於藥 學上可接受的載媒中。此類製品的實施例有··錠片、藥九 、栓劑、（微一）膠束、粉末、乳液、乳膏、油膏、懸浮 液、溶液、移植物、或噴霧。 藥學上可接受的載媒的實施例有：澱粉（例如：馬鈴 薯或玉米澱粉）、糖類（例如：乳糖.）、潤滑劑（如：硬 脂酸鎂）、連接劑（如：支鏈澱粉或聚乙烯基吡咯烷酮） 、水、乙醇、甘油及它的衍生物、植物_、動物_、及礦 物油和脂肪、脂肪醇、矽膠聚（烷撐）二醇、纖維素衍生 物、矽、分散劑、乳化劑、界面活性劑、抗-氧化劑、染 色劑及防腐劑。事實上’任何傳統上的藥學載媒，只要它 不會干擾活性成分的表現便可使用在根據本發明的製品中 〇 本發明較佳的7 α —甲基—1 7 α 一乙炔基—雌烷衍 生物（如：7 α —甲基一 1 7 α —乙炔基_ 1 7々一經基 {錆九閲請背而之注意事項再填寫本頁) -'3 經Μ部中夾摞準扃貝工消费合竹社印t 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29T公釐） -11 - 448 A7 B7 五、發明説明（9 ) 一雌-5 (10)」烯-3—酮（〇rg 0D — 14·: 7_甲異炔諾酮））的藥學製品以利用Or g 〇 D -1 4的結晶形純單斜晶（P 2 i )形來製備較佳，這是因爲 此種形態的0 r g 〇D- 1 4具有改良過的穩定性、生 物利用性及貯存期。此種◦ r g 0 D _ 1 4之單斜晶的 衍生物在藥學品中的合成與利用是揭示於歐洲專利號 0，389，035B1。 本發明以下列實施例來加以說明： 一般 如式I所示之7α_甲基一 1 7α_乙炔基_雌烷衍 生物的動脈粥狀保護性質可在以膽固醇飼養兔子的模型中 顯露出來，其中可建立起此種化合物對於切除卵巢的雌兔 子體中的動脈粥狀的效果。此模型被認爲與人類粥狀硬化 過程相關，這是因爲兔子在服用產生.動脈粥狀之飲食期間 ，其動脈硬化病害的發展過程中所發生的細胞變化與人類 冠狀動脈中所觀察到之動脈硬化過程的不同階段中的變化 類似。然而，兔子的血漿中並沒有Lp (a)存在。 經茇部中史標隼局β-11消費合作社印狀 實施例1 取含有乳糖（每令錠片中含1 0 0毫克）及乾燥的馬 鈴薯澱粉（每錠片含1 0毫克）的基礎顆粒來製備錠片。 基礎顆粒是將一部分澱粉與乳糖混合而製備得來的。將剩 餘的澱粉加以混合形成黏泥狀，並將它加入混合物中。將 -12- (誚先閱讀背面之注意事項再填朽本頁) 本紙張尺度適用中國國家標埠（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 4 A7 B7 五、發明説明（1〇 ) 全部混合物加以顆运化並乾燥之。將這些基礎顆粒與棕櫚 酸抗壞血酸酯（每錠片含0 . 2毫克）進行混合，並加入 OD 14 (每錠片含2毫克或6毫克）或1 7 /3 —雌二醇 (每錠片含4毫克）二者中的一種，並篩孔過篩後，很仔 細地與硬脂酸鎂（每錠片0 · 5毫克）混合，然後再製成 錠片。 實施例2 以7組性成熟，處女的雌性紐西蘭白兔子（哈蘭、等 斯特、荷蘭）進行實驗，這些兔子的年齡爲7_9個月且 重約3公斤（每組之動物數：13_14)。在新環境適 應期中，將兔子餵予標準的商業販售的兔子食物L ΚΚ 2 0 (霍普農塲，荷蘭伍爾登市）。在開始實驗的前三星 期先將動物加以麻醉並進行二側卵巢切除術（Ο V X )或 是假裝進行手術。三星期後，在實驗開始時，將兔子隨意 挑選、分配至各處理組間。利用空氣乾燥技術在所有動物 體中將左邊頸動脈的一個片段進行去內皮化處理。空氣乾 燥技術可見於由"^費雪曼，J . A ."所著之^老鼠頸動 脈中內皮再生及內皮剝脫在肌血管內膜增厚之發病厚理中 的意義〃，載於 >實驗室審査期刊，1975，32， 339 — 35 1〃中；及由、拉凡特A等人〃所著之*再 狹窄術及實驗性的血管成形術：與結構重建相關之血管內 膜的中層的及外膜的變化〃，載於a循環硏究，1 9 9 5 ’ 7 6_，996 〜1002'中。 {請^閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經滴部中史標卑局員工消资合作社印絮 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4规格（210x297公1 ) -13- 4 A7 _B7___ 五、發明説明（11 ) 以一個隨意放i的障礙物設計將勲物隨思分配至7個 實驗組。將這些實驗組動物餵予致動動脈粥狀的飲食（商 業販售的兔子食物（LKK20) ’是每1 0 0克的食物 中增加了 0 . 4克的膽固醇’ 3 . 75克的椰子油及 3 . 7克的花生油）。有一組則餵予標準的兔子食物（ LKK20)。食物攝取量則限制爲每日80克。 處理用的藥物（表I )則是每日給予一片口服錠片（ 其製備法是依實施例I的步驟進行）。第1 ’ 2，3組的 處理方式是每日給予安慰劑。第4 ’ 5組是以7 α —甲基 -17α -乙炔基-17/S —羥基—雌一5 (10) —烯 _3 -酮（OD14 ; 7 —甲異炔諾酮；每日2或6毫克 )處理；第6組以1 7 /S —雌二醇（每天4毫克）處理》 第7組以1 7 癸酸雌二醇（1 5 0微克溶於1毫升的 花生油中，以皮下注射方式給予，一週一次）。 (請71閲請背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經淤部中决標準局貝二消费合作社印製 本紙浪尺度適汛中國IS家標準（CNS ) Λ4規格（2ΙΟΧ 297公1 ) -14-

443 L A7 B7 五、發明説明（12 ) 表I :實驗目十 組別 數目 處理# 劑量 飮食 0VX 一 請 1 14 安 慰劑 膽 固 醇 是 先 閲 讀 2 13 安 慰劑 膽 固 醇 否 背 安 之 3 13 慰劑 正常 是 注 意 4 14 Org 0D14 6毫克 膽 固 醇 是 事 項 再 5 13 〇rg 0D14 2毫克 膽 固 醇 是 填 本 6E2 14 雌 二醇 4毫克 膽 固 醇 是 頁 ^ 7E2D 14 癸酸 雌二醇 150微克 膽 固 醇 是 *除第7組的劑量是以皮下注射方式一週給予一次藥物 外，其餘各組的劑量以口服方式給予。 經潢部中次枒準局負工消费合作社印製 在實驗期間的第4，8，12，16及20週，於每 曰給予處理用的藥物前’先以"希普諾"（Hypnorm ’ 0.1毫升1.111.)(傑森製藥，比利時比爾斯）將兔 子鎭定後，於其耳朵中間動脈處採取血液樣品來監測血漿 膽固醇濃度並在第1 7週時，測量血漿中雌二醇和血漿中 7 -甲異炔諾酮的濃度。 在實驗開始後的第2 0週，經肌肉內注射"希普諾" (0 . 5毫升/公斤）的方式將兔子施以麻醉。採取血液 樣品後，以放血方式將兔子殺死，再取出動脈弓、子宮及 頸動脈來做進一步分析。 -15- 本紙張尺度適州中國园家標卑（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 1 A7 ___ B7_____ 五、發明説明（13 ) 實施例3 ' (請先閱讀背而之注意事項再填巧本頁) 除了實施例2外，還有一個附加實驗是以二個較低的 〇 r g OD 1 4劑量及一個較高的癸酸雌二醇劑量來進 行。這幾組加上一個安慰組及一個控制組產生了一個共計 五組的實驗 此實驗步驟與實施例2中的步驟相同。 在實驗開始前三星期先將動物進行卵巢切除術。在實 驗開始時以空氣乾燥將頸動脈去內皮化，然後以產生動脈 .粥狀的飮食來取代兔子的正常飮食，但控制組在實驗期間 仍給予正常的兔子飮食。 表I I :實驗設計 組別數目 處理1 劑量 飲食 卵巢切除術 1 22 安慰劑 膽固醇 是 2 13 安慰劑 正常 是 3 13 〇rg.0D14 0.6毫克 膽固醇 是 4 11 Org 0D14 0.15毫克 膽固醇 是 5E2D 14 癸酸雌二醇 300微克 瞻固醇 是 經濟部中央標隼局負工消费合作社印？ 衣 -16- 1 除了第5組外，其餘四組是以口服方式給予劑量第五 組的劑量是以一星期給予一次皮下注射的方式來給予的。 第1，2，3，4組的處理方式（表I I)是以每曰 本紙張尺度適用中國囤家標绛（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經淌部中决標準局員工消费合作社印製 ^4s〇49 A7 B7 五、發明説明（14 ) 口服一片錠片的方¥來給予的，錠片，是依實施例1的方法 來製備的。然而，每片錠片中之Or g 0D 1 4的劑量 .各爲0.6毫克及0.15毫克。第五組是以17石_癸 酸雌二醇來處理（1毫升之花生油中含3 0 0微克，以每 星期經皮下注射一次的方式給予）。 在實驗開始後的第2 0週後以相同於實施例2中的方 式來結束實驗。 動脈硬化的評估 A .脂肪紋. 將動脈弓切割出來，縱向切開後固定於2%的伸甲醛 中。以0.3%(w/v)蘇丹法來染組織中的脂肪。將 所有的斷片以彩色照相攝影。以影像分析（康德士視覺系 統AB，瑞典，林高平市）來評估動.脈弓（表I I )被脂 肪紋覆蓋的百分比。 B.血管壁膽固醇的測量 在測量脂肪紋後，將動脈弓在一個肢體切斷機（米克 羅一肢體切斷機，德國梅爾山根市，B .布朗公司）中切 碎，再根據布里和戴爾（Bligh及Dyer，加拿大生化及生理 學期刊，1 9 5 9，37，911〜917頁）的方法萃 取脂肪。將萃取溶液在氮氣下蒸發後，將氯仿/甲醇萃取 溶液中含有的全部膽固醇在甲醇中加以分解，再利用酵素 (請先閱讀背而之注意事項再填寫本頁〕 訂 本紙诔尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） -17- 經濟部中央標準局男工消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明（15 ) 的CHOD — PAP'法（德國，色林保慕林，批號：‘ 1 4 4 2 3 4 1 )來決定全部膽固醇含量並且在—個分光 光度計（波長5 0 nm)中進行評估。組織中之蛋白質量 以"羅利（Liwry ) 〃的方法來測定。 ψ C .去內皮化後的血管內膜增厚作用 將左邊的（在空氣中乾燥過的）頸動脈切割並置於含 6 · 8%之葡萄糖的2%仲甲醛中加以固定。將右邊的頸 動脈做爲比較組。在固定後，將組織分成長度爲2毫米的 塊狀，並包埋於石蠟中（A派洛帕拉斯特·帕洛斯@( Paraplast Plus®)"美國聖路易斯市西華醫學公司），此 步驟是利用一種自動組織處理器（"亥普山德XP，雪頓 (Hypercenter XP，Sharndon) 〃來進行的。 一種特殊染色方法及一種屬於影像分析的應用法已經 發展出來可測量血管內膜增厚的情形·（利用影像分析）。 將2微米大的橫切片先以彈性蛋白酶（^西瓦范拜爾開米 公司Serva Feinbiochemica Gmbh 〃，德國海德堡）處理後 再以 ' 羅森溶液〃 （Lawson Solution,荷蘭馬坡市，布馬公 司Boom)及亮綠（史格馬，Sigma )進行彈性硬蛋白染色， 然後在此血管內膜橫切片上進行測量。接著，讓切片在空 氣中乾燥並封固於"拍泰克斯〃 （Pertex)中（德國努斯洛 克市，萊卡公司L e i c a G m b h )。 使用以亞甲藍/天藍I I染色和以血毒林 (hemotoxylim ) /伊紅染色的二種橫切片來進行生物形態 {請先閱讀背而之注意事項再填ΪΪ。本頁) ，农_ 訂 本纸張尺度適用中國國冢標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -18 - ^ 4 Q 〇 ^ 〇 ° A7 B7 五、發明説明（16 ) 學上的硏究。平滑sji細胞和巨噬細胞各自以甲型-肌纖蛋 白抗體（史格馬）和抗巨噬細胞抗體（RAM1 1， DAKO，丹麥葛羅斯普市）來進行偵測。使用山羚抗~ (誚先閱讀背而之注意事項再读寫本頁) 老鼠超小金黃共軛的二級抗體（荷蘭維根寧根，歐里翁公 司）及免疫金一銀加強技術（日美，％史英滿斯-LM試 劑組〃 （Silv Enhance-LM Kit))來偵測已連結的抗體。 切片的影像是利用一種黑白攝錄影機（MX — 5，阿 狄梅克影像系統BV，英荷文），而此攝錄影機則是架在 一台光學顯微鏡上（阿斯歐普蘭，蔡斯公司，德國杰那市 )。將攝錄下的影像數位化後，可利用一種半自動影像分 析應用法（康德士視覺系統A B，瑞典林高平市）來測量 血管內膜增厚的情形。 統計：除非另外指出，數據以平均値土 S . E . Μ來 表示。使用Variance的分析來測試統上的意義。所得數據經 對數轉換成正常化的差異。當P小於0 . 0 5時，則認爲 差異有意義。 經淖部中央標準局消贽合作社印製 結果（實施例2，表I I I ) 在經過2 0週的飮食和每日給藥處理後，進行兔子屍 體的檢驗以決定在動脈弓中膽固醇堆積及脂肪紋形成的情 形，並檢驗在頸動脈中之進一步病害，另外，並測量子宫 的重量。這些結果顯示於表III。 以口服方式紿予動物1 7Θ —雌二醇時（每日4毫克 ;第6組：E 2 )血漿中的雌二醇程度會在給予後1小時 -19- 本紙張尺度適用中國國家標津（CMS ) Α4規格（210X297公嫠） 經濟部中央標萆局兵工消费合作社印製 A7 ____B7 五、發明説明（17 ) 達到2 3 8 p g/m 1的尖峰，而在給予2 4小時後降在 1 8 D g/m 1。當以皮下注射方式給予動物癸酸雌二醇 (每週15〇vg ;第七組；E2D)時，血漿中雌二醇 的程度會在一整天中均維持穩定（約在6 0〜7 0 P g/ m 1 )。血漿中之雌二醇程度表示二種給予雌二醇的方式 均可達到有效的血漿程度。 預期中，在兔子體內利用人類雌二醇及0 r g 0 D 1 4的劑量來做HRT治療及熱量攝取修正時，口服4毫 克之雌二醇約與6毫克之Or g 0D14具有.第I效果 。當測量兔子體內之血漿程度時顯示出，兔子每日服6毫 克0^£ 0D14的劑量所產生之Org 0D14的 血漿濃度相當於在女性體內服用2·5毫克之臨床劑量後 所產生的血漿濃度。 用Org 0D14(每曰2及6毫克）處理後所增 加的子宫（雌激素活性）重量與經二種雌二醇（E 2或 E 2 D )處理後所增加的重量類似，這可確定所使用之劑 量的等勢效果。 雖然在子宮方面，以雌激素和Or g 0D1 4的處 理中可確定此二種物質的等勢活性，但在動脈中的膽固醇 堆積及病害形成方面此二種物質@不相同：以1 7点一雌 二醇（E 2 )處理時不會使膽固醇的堆積減少’以1 7泠 —癸酸雌二醇（ED2)處理時，可使動脈弓中的膽固醇 堆積降低4 6%，而所硏究之二種濃度的0 r S OD 1 4則可完全預防動脈弓中膽固醇的堆積。 本紙张尺度適用中國國家榇準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） -20 - (請先閲讀背面之注意事項再填朽本頁)

44β 〇4

經"部中央標卑局員工消费合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（) 1 7/5 -雌二# (E2)及1 7点一癸酸雌二醇（ E2D)並不會影響血漿中的膽固醇程度，但Or g 0 D 1 4則可強力降低血漿中的膽固醇程度。 在動脈弓中所形成的脂肪紋以雌激素處理時只有些微 減少，但以◦ r g OD 1 4處理時（近於）完全預防脂 肪紋的形成。 在機械性的去內皮化作用後，1 7 /5 —雌二醇對進一 步病害的形成沒有效果，而1 7癸酸雌二醇（E 2D )可降低進一步的病害形成。組織學的結果顯示：在給予 膽固醇飮食的安慰劑組動物中，所產生的病害是由平滑肌 細胞和泡沬細胞所組成，而在給予正常飮食的動物中，於 病害處僅能觀察到平滑肌細胞。以E 2 D處理的動物組中 ，病害處仍是由平滑肌細胞及泡沬細胞所組成L瓦〇 r g 0 D 1 4可強烈抑制進一步病害的形成，其體中所形成 的病害甚至少於給正常飮食的動物組（控制組）°組織學 顯示其病害處僅由平滑肌細胞所組成。 結果（實施例3，表IV) 在實施例2中，我們發現2毫克及6毫克的0 r g OD 1 4可強烈抑制動脈硬化病害形成的發展。這些效果 意料外地較雌二醇或癸酸雌二醇更爲明確，而0 r g OD 1 4與此二種物質在子宮方面的作用上具有等勢的雌 激素活性。

在實施例3中’我們測試了二種較低劑量的0 r S 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210x29"?公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填穷本頁} -21 - A7 B7 °4 s 五、發明説明（彳9 ) (請先閲請背面之注意事項再填巧本頁) 0D14(每日口滴一次〇·6及0.15毫克）及較高 劑量的癸酸雌二醇（每週一次300#g s · c)。此 目的是爲了得到與癸酸雌二醇具有等勢抗動脈硬化效果的 〇rg 0D14的劑量。 結果顯示0.60毫克的Org 0D14仍幾乎能 完全預防動脈硬化病害的形成。而高二倍的癸酸雌二醇劑 量（與表I I Ϊ比較）則只能部分抑制動脈硬化病害的形 成。 介於0·60毫克〜0.15毫克的Org 〇D 1 4可顯示出如3 0 0微克劑量之癸酸雌二醇的等勢 抗動脈硬化效果。而使用〇 r g 0D1 4時每1 00克 體重會增加0 · 054至0 . 132克（增加144%) 的子宮重量，使用癸酸雌二醇時會增加0 . 5 0 5克（增 加835%)的子宮重量。 結論 經淨'部中央標準局負工消费合作社印¾ 實施例2的結果證實：當17雌二醇，17召一 癸酸雌二醇及Org OD14三者的劑量爲臨床上的等 勢劑量時，它們對兔子體中子宮生長的作用約具有相同的 潛力，而〇D 1 4對於血漿中的膽固醇，在動脈弓之膽固 醇堆積及頸動脈中進一步病害的形成等三方面的有利作用 則較1 7 /3 —雌二醇更爲明確。 ;ι 還有，如實施例3中所證實的，低宇1 0至4 0倍（ 0-60 〜0.1_5mg)的 Org 0D14 劑量與高 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐〉 A7 3 Θ 4 3 Β7 五、發明説明（2〇 ) 了二倍（3 Ο 0微古）的癸酸雌二醇劑量具有脅勢铀抗動 脈粥狀效果。然而，癸酸雌二醇的雌激素作用（增加子宮 -重量）較Or g OD 14的更爲明確。這些結果表示 0 r g OD 1 4具有內在潛力於臨床上可有效預防及治 療動脈硬化。 (詞先閱請背面之注意事項再填本頁) 訂 經消部中央標準局長工消费合作社印梨 本紙張尺度適用中國囤家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） -23- 9 4 ο84 4

A 五、發明説明（21 ) 表 I I I ' · 於屍體檢驗時（在開始實驗後的第2 0週）所測量到 之不同處理對由動脈粥狀飲食所誘發之下列各項變化的效 果與影響：①在動脈弓和頸動脈中之形態變化及0體重、 血漿中膽固醇^ <口子宮重量。 控制組 第3組 安慰劑組 第1組 Org 0D14 第4組 Org 0D14 第5組 雌二醇 第6組 癸酸雌二醇 第7組 兔子的數目 13 9 13 12 13 11 體重(以克計） 2831 ±50 2683 ±95 2758±41 2815±50 2831 ±58 2973 ±52 每100克體重的子宮重 里 0Ό8±0.01 0.09±0.01 0.24±0.06* 0.29±0.03* 0.31 ±0.02* 0,37+0.04* 血漿膽固醇的平均値C 以毫莫耳/升/天表示） 1.0±0.Ρ 26.9 土 13 11，2土1.5* 9.0±1.3* 27.7±2.8 3α〇 士 3.7 動脈弓處的膽固醇程度 (以毫微莫耳/¾克蛋白 質表示） 45±5* 590±126 52 土 9* 61±1P 52】±卯 318±58* 在勖脈弓中的脂肪紋（ 以被覆蓋之弓處的百分 比表示） 0.3 ±0.2* 34.5±6.8 1.3±0.8* 1.4 ±0.7* 25.5±5.2 28.1±4.1 在頸動脈中之進一步病 害:血管內膜面積(以平 方毫米表示） 0.22 ±0.03* 0.44 ±0.10 0·13 土 0.03* 0.14±0,02 0.30+0.6 α23±0.06* 經濟部中决標準局负工消费合作杜印製 *與安慰劑比較時P < 0 . 0 5 (第1組） -24- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 3 4 Ο CD 4 4 五、發明説明（22 )

表I V 將以Org 0D14(每雙兔子每天口服0.6及 0 . 15毫克）處理兔子與以較表I I I之劑量高二倍的 癸酸雌二醇（每隻兔子每週皮下注射3 0 0微克）處理兔 子的結果進行比較。下表是在屍體檢驗時（開始實驗後的 第2 0週）時所測量到的上述二種藥物對由粥狀動脈飮食 所誘發之下列各項變化的效果和影響：①在動脈弓和頸動 脈之形態變化及②體重、血 .槳膽固醇和子宮重量。 控制組 安慰劑組 Org 0D14 0.6毫克 Org 0D14 0.15毫克 癸酸雌二醇 兔子的數目 13 22 13 11 14 體重(以克表示） 2869±38 2882±73 3008±58 2850±42 3093 ±60 每100克體重的子宮重量 0.051 ±0.009 0.0540.007 0.224±0.016* αΐ32±0.013* 0.505±0.075* 血漿膽固醇的平均値(以毫莫 耳/升/日表示） 1.3 ±0.4* 38.9±2.5 12.8±1.2* 20.7±1.5* 2.30±2.0* 在動脈多處之膽固醇程度(以 毫莫耳/毫克蛋白質表示） 51±9* 636 ±53 97 ±23* 297 ±67* 225 ±69* 在動脈多處的脂肪紋(以被覆 蓋之多處的百分比表示） 1.0±0.7* 41.9±2.8 5.9 ±2.4* 23·5±5.3* U‘2±3.2* 在頸動脈中之進一步病害:血 管內膜面積(以平方毫米表示） 0.13 ±0.02* 0.31 ±0.07 o.i4±oir^ 0.24±0.05 0,18±α〇2* *與安慰劑組比較（第一組）時，P < 0 · 0 5 經淖部中央標单局兵工消費合作社印¾ -25- (請先閱請背面之注意事項再填苟本頁) 本紙張尺度適州中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2丨0'乂 297公釐）

Claims (1)

1. A8 B8 C8 D8 ^8 〇4 9 <、申請專利範圍 第871 02648號專利申請案

   中文申請專利範圍修正本 民國8 9年3月修正 1·一種用於預防或治療動脈硬化之醫藥組成物’其 包含動脈粥狀保護量之具下列通式1之7 α 一甲基一 1 7 α -乙炔基-雌烷衍生物 〇R2

   (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 式 其中 R.cHCORs)或 0; R2 = H 或（Ci-ie)醯基： R3 = H 或（Chis)醯基； 且該虛線代表在4，5-或5 — 10位置中的一個雙鍵。 2 .如申請專利範圍第1項的醫藥組成物，其中R i = 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Η ，Ο Η 或 0 。 3 .如申請專利範圍第1項或第2項的醫藥組成物， 其中R2 = H且該虛線代表在5，10 —位置中的一個雙鍵 〇 4 .如申請專利範圍第1項的醫藥組成物，其中該種 7 α _甲基_ 1 7 α—乙炔基一雌烷衍生物是7 甲基 -17α —乙炔基-17/3 -羥基一雌一 5 (10)-烯

   本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ί48〇43 六、申請專利範圍 —3 -嗣。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣 1 ----I I 訂 1 ί 1 1 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格<210 X 297公釐） -2- 448 〇4 ί··.-；] Α7 Β7 五、發明說明（4 ) 甲異炔諾酮做長期治療時，7 ~甲異炔諾酮對HD L —膽 固醇的效果則被認爲是較雌激素替代治療方法不受歡迎（ 里袼斯，B . L ’ J ·克林所著，，內分泌學及代謝" ( 1 9 9 6 )，81，2 4 1 7 〜2 4 1 8 )。 令人驚訝的是1已發現7 α -甲異炔諾酮的先軀藥物 型及其某些代謝物質具有很強的抗動脈硬化性質。這些性 質較那些如：1 7 /3 _雌二醇類的抗動脈硬化性質更爲明 確<= 因此，本發明與利用具有通式I之7 α —甲基_ 1 7 α -乙^夫基-雌烷衍生物來大量製造用來預防或治療動脈 硬化的藥品有關： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

   經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 R 1 = H (0R3)或 0 ; R2 = H (Ci-H)醯基；R3 =Η或（C i ！ 8 )醯基；；且虛線代表在4，5 —或5， 1 〇 —位置中的雙鍵。 本發明的化合物，特別是式I所示的化合I物，其中 1^爲11，0H或0，尤其是那些其中之R2 = H且其中的 雙鍵是在5 ，1 0 -位置上的化合物，和其中之R 1爲〇 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 48 04 9 附件二(A): ___- 正 r o / i υ z o 4- o 中文說明書修正頁 民國89年3月呈 承、中文發明之名稱：7 α —甲基一 1 7 « —乙炔基一雌院）--------------------------------------J 衍生物在動脈硬化治療上之用途本發明關於一種具有通式I之7α —甲基_1 7α — 乙炔基-雌烷衍生物在大量製造用來預防或治療動脈硬化 之醫藥品中的用途： or2 CHjf 兰CM

   式 S .} 1的 3 R1-中 0 C置ί ί位Η 或_ II Η ο 1 - 1 3 ϊ 中R 5其；或 1 4 -在 C1表C代 或線 Η虛I-該 2且。 ·， UJSI鍵基雙◦醯個 或> 一 基醯 (請先鬩讀背面之注意事項再填寫衣頁各欄) 英文發明摘要（發明之名稱： ) USE OF A 7a-METHYL-17a-ETHYNYL-ESTF^ANE DERIVATIVE FOR THE TREATMEN丁 OF ATHEROSCLEROSIS The invention relates to the use of a 7a-methyi-17a-ethyny1-estrane derivative having the general fcrmutS I

   經濟部中央標準局員工消費合作社午製 wherein - H(0R3) or 0; R2 = H or (Ci.ie)Acyl; R3 = H or (CMg)Acyl; and the dotted line represents a double bond in the 4’5- or the 5.10-position for the manufacture of a medicament for the prophylaxis or the treatment of atherosclerosis. 本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) A4说格（210X297公釐）-2 - A8 B8 C8 D8 ^8 〇4 9 <、申請專利範圍 第871 02648號專利申請案

   中文申請專利範圍修正本 民國8 9年3月修正 1·一種用於預防或治療動脈硬化之醫藥組成物’其 包含動脈粥狀保護量之具下列通式1之7 α 一甲基一 1 7 α -乙炔基-雌烷衍生物 〇R2

   (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 式 其中 R.cHCORs)或 0; R2 = H 或（Ci-ie)醯基： R3 = H 或（Chis)醯基； 且該虛線代表在4，5-或5 — 10位置中的一個雙鍵。 2 .如申請專利範圍第1項的醫藥組成物，其中R i = 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Η ，Ο Η 或 0 。 3 .如申請專利範圍第1項或第2項的醫藥組成物， 其中R2 = H且該虛線代表在5，10 —位置中的一個雙鍵 〇 4 .如申請專利範圍第1項的醫藥組成物，其中該種 7 α _甲基_ 1 7 α—乙炔基一雌烷衍生物是7 甲基 -17α —乙炔基-17/3 -羥基一雌一 5 (10)-烯

   本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）