206233 A 6 B6 經濟部屮央櫺準局貝工消#合作社印製 五、發明説明（1 ) 本發明有關磷酸/3 —吡喃巖藻糖酯及極純之鳥嘌昤核 苷二磷酸酯一巖藻糖（GDP—巖藻糖），其可製自前者 ,之立體選擇性製法。 L一巖藻糖已知為牛奶寡醏及血類物質之組份（例如 ：Hakomori， Progr. Biochem· Pharmacol· 10 (1975)· 167)。脱氧己糖另牽涉於細菌之脂質多醸及哺乳類糖原 箱脂之合成（例如：Flowers，Adv. Carbohydr. Chem. 39 (1981)，279)。巖藻糖化之糖脂質在細胞生長及細胞 分化之規律中扮演極重要之角色。但，特別引人興致者為 巖藻糖化之糖脂像腫瘤細胞表面結構之組份且具抗原性（ 例如：Hakomor i , Ann. Rev. Biochem. 50 (1981)，733) 。因此其在腫瘤治療及腫瘤診斷上極重要。含巖藻糖之寡 醣及糖脂之生物合成需，尤其，特定酶，巖藻糖基轉移酶 。此種巖藻糖基轉移酶之受質為鳥嘌昤核替二磷酸酯-巖 藻糖（G D P —巖藻糖）。 為研究並産製基於巖藻糖化糖脂之腫瘤伴生抗原，需 有極大量高純之GDP-巖藻糖。儘管長期存有此需要， 但已知僅有一種化學合成法 (Nunez e t a 1 . > Can. J. C~ hem· 59 (1981)，2086)及數種酶合成法（例如：Yamamoto et a 1 . , Agric, Biol. Chem. 48 (1984), 823)用於 GDP —巖藻糖。但是，例如，經由巖藻糖_;l_磷酸酯 或經由GDP—甘露糖而進行之酶合成具有僅産生低量 GDP —巖藻糖之缺點。 G D P -巖藻糖之化學合成中的關鍵化合物無疑的偽 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂· 線< 本紙張尺度逍用中B Η家標準(CNS)甲4規格(210x297公龙） 一 3 - assess： 206233 A6 B6 經濟部中央標準局员工消费合作社印製 五、發明説明（2 ) 巖藻糖一 1 一磷酸酯，其適當供量為總合成之限制量。巖 藻糖一 1 一磷酸酯有兩種不同構型，詳言之磷酸α —吡喃 巖藻糖酯型，其可藉氮磷醛胺化物法輕易製得（例如： Westerduin e t a 1 · · Tetrahedron Lett. 27 (1986), 1211)，及磷酸一吡喃巖藻糖酯型。具/3 —構型之磷酸 酯僅適於GDP —巖藻糖之合成。但是，已知磷酸/3 —吡 喃巖藻酯化學合成 (Nunez e t al·，loc· cit-; Tsai e t al·，Carbohydr· Res· 64 ( 1978)，297)之特性為低立體 選擇性及低産率且某些情況下，亦昂貴且複雜，故其頂多 適於實驗室規模。以往磷酸/3 —吡喃巖藻糖酯製法之困難 無疑地是其明顯不安定性，尤其是對酸。 由磷酸/3 —吡喃巖藻糖酯製得G D P —巖藻耱之已知 法之其他缺點為最終産物純化不僅以離子交換劑進行，故 在許多生化目的上可能需要産生之再純化，至少脱鹽。但 是，此又伴有産量損失。 本標的因此是發展一種新穎之磷酸一吡喃巖藻糖酯 及由彼製得之GDP—巖藻耱之製法，其特色為髙度立體 選擇性，良好産率，最終産物之高純度及實驗方法之簡易 〇 現在發現磷酸>3 —吡喃巖藻糖酯可以高産率製自經保 護L一巖藻糖之α—三氣乙醯亞胺化物，其藉與極純有機 磷酸酯諸如，例如，磷酸二笮酯或二苯酯簡單反應。 亦發現此者所需之α —三氣乙醯亞胺化物可藉在位置 2, 3及4上經保護之L一巖藻糖或其先質與三氣乙睛， 本紙張尺度逍用中Η Β家標準(CNS)甲4規格(210x297公*) — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂· 線· 206233
經濟部中央標準局员工消t合作杜印M 五、發明説明（3 ) 較好使用氫化鈉為碱，反應而以高産率立體選擇性地製得 0 最後，發現藉發明所製之磷酸/9 一吡喃巖藻糖酯與活 化之GMP在發明另一程序步驟中之反應所提供之GDP -巖藻糖，若磷酸；Q —吡喃巖藻糖酯轉化成易溶之鹽，尤 其是三_n —辛銨鹽，則特別有利地進行，可藉使用揮發 性洗提劑之HPLC純化而得高純之GDP—巖藻糖，而 且可簡化程序。 因此發明有關一種磷酸；S —吡喃巖藻糖酯之選擇性製 法，其特徵為在2, 3及4位置經保護之L一巖藻糖轉化 成對應之0— （α—L—吡喃巖藻糖）三氣乙醯亞胺化物 ,此與式PO(OH) (OR) 2之絶對無酸之有機酸酯 反應，該式中R為C: _C4烷基，苄基或苯基，將磷酸 酯基上之R基及吡喃巖藻糖環上之保護基移除並單離磷酸 /3 — L —吡喃巖藻糖酯之鹽。 發明另有關一種極純GD P -巖藻糖之立體選擇性製 法，其特徽為磷酸)S-L —吡喃巖藻糖酯轉化成易溶鹽， 此與活化GMP反應且形成之GD P —巖藻糖藉使用揮發 性缓衝条為洗提劑之預備HP LC純化。 發明尤其有開對應法，其持擻為所採用之磷酸/3 —吡 喃巖藻糖酯藉所述法之一製得。 發明另一特色為，尤其，經四-乙醯化之化合物提供 三一0—乙醛一L一巖藻糖可藉一階反應進行，較好使用 乙酸胼，其簡化整體合成。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂- -線· 本紙張尺度逍用中國8家標準(CNS)甲4規格(210X297公龙) 經濟部屮央標準局员工消#、合作社印製 206233^ 200253 A6 ______;_B_6 五、發明説明（4 ) 發明因此亦有關對應法，其特徽為2， 3, 4—三一 0—乙醛一L—巖藻糖以一階反應製自四乙醯化之L一巖 藻糖。 若2, 3,4—經保護之L一巖藻耱與三氣乙腈之反 應中使用其他碱，則形成不同之α —及/3 —吡喃巖藻糖三 氣乙酵亞胺之混合物，其於下一步使用前需先分離。使用 氫化銷及類似碱時，僅形成對應之α—三氯乙醛亞胺。使 用氫化鈉時2—醯亞胺化物之産率，相對於，例如，三一 Ο—乙醯_L一巖藻糖，平均為70至80%。 用於與經保護L 一巖藻糖之a —三氣乙醯亞胺化物之 反應中以産生磷酸吡喃巖藻糖酯的P (OH) (OR), 型磷酸酯之純度，尤其是酸殘量，決定相對於形成之異頭 物的立體選擇性過程。磷酸吡喃巖藻糖酯，其不適於 進一步加工以産生GDP—巖藻糖，若所用之磷酸酯中存 有極少量酸，諸如，例如，三氟化硼，或添加於反應混合 物，則選擇性地形成。依本發明，若僅期望磷酸/5 —吡喃 巖藻糖酯，則反應必需在嚴格無酸之情況下進行。/3 —異 頭物之産率，相對於所用之對應α —三氯乙醛亞胺化物， 依發明，在純化後為85及95%間，85及90%間為 佳。 若發明之磷酸点一吡喃巖藻糖酯之産率，真實情況下 始自三_0—乙醛一L一巌藻糖經醛亞胺化合物，與兩已 知化學合成之産率 tb 較，（1^111162 6131.，1〇0.〇4·;!·-sai et al., loc· Cit.),以所述法得到之期望産物（鹽 本紙張尺度逍用中a B家樣準(CNS)甲4規格(210x297公¢) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂. -6 - Α6 Β6 206233 五、發明説明（5 ) )平均産率約70%,以Nunez等人之已知法者約5 0% 産率，而以Tsai等人方法（始自L-巌藻糖之原乙酸酯） 僅有約2 0%之産率。此外，發明之磷酸/3 —吡喃巖藻糖 酯製法，尤其與Nunez等人之方法比較，具較少且更簡單 之步驟。 發明整體法之特徽為高度立體選擇性，低步驟數，簡 易化一因此，例如，不需c(一及/3 —異頭物之特定分離一 及極佳産率。因新穎純化後，故可得高純GDP —巖藻糖 ，其亦適於最敏感之生化法。此法最適於極大工業規模者 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 經濟部屮央橾準局ΚΧ工消#合作社印製 附圖說明如下： ‘ 圖1 :三經取之L 一巖藻糖經各三氣乙醛亞胺化物以 産生對應經保護之磷酸α —及/3 —吡喃巖藻糖酯之 反應的合成圔。 1 :三取代之L 一巖藻糖；2 :經保護之L 一巖藻 糖之/3 —三氣乙醯亞胺化物；3 : L —巖藻糖之α _三氛乙醛亞胺化物；4:2, 3,4—經保護之 a — L —吡喃巖藻糖磷酸酯；5 : 2, 3, 4 —經 保護之；3 — L-吡喃巖藻糖磷酸酯；各情況中之符 號：R 一 =R2CO —，R' , R2 =烷基（c: — C4),苄基，苯基，R=R7。 圖2 :磷酸/S - L 一吡喃巖藻糖酯反應産生GDP —巖溪 糖之合成圖。5 : 2，3，4~經保護— l 一批 本紙張尺度边用中國Η家標準(CNS)甲4規格(210x297公煃) 206233 合66 經濟部屮央標準局员工消费合作社印製 五、發明説明（6 ) 喃巖藻糖磷酸酯；6 : 2, 3, 4 —經保護/3 — L 一吡喃巖藻糖磷酸酯之鹽；7 :未保護/3 — L 一吡 喃巖藻糖磷酸酯之鹽；8:(經活化）GMP嗎啉 化物之鹽；9 : GDP—巖藻糖（鹽）；各情況中 符號意為：— , R2 =烷基（C! 一C4),苄基，苯基，R=Ri ， K=較佳有機 陽離子。 以下各化合物後括弧中之符號為圖中编號。 上文及下文中，若無另述，則R，基員有 詳述於下之意義。 R及R2為（：2 _C4 —烷基，苄基或苯基。若R/ R2為烷基，則尤其為甲基，乙基，η —丙基，異丙基， η—丁基，異丁基或另一及待-丁基；烷基尤其為甲基。 但是，R或R7較好為苄基，R/為R2C0 一及R2 。就始自磷酸/5 — L —吡喃巖藻糖酯之GDP —巖藻糖之 合成言之，R/較好為I^CO —。R2CO —基中，R2 較好為C Η 3 —或C 6 Η 4 _。R 2因此較好為乙醯基或笮 基，但尤其是乙醛基。若R2為苯基或笮基，則芳族璟可 單一或多取代。適當取代基為F, Cl, Br, 0Η或甲 基。但是，芳族琛較好未取代。Κ#為無機或有機陽離子 ，較好為式NH (R3) #之有機陽離子，其中R3為直鐽 或支鐽，但較好為具1至10(：原子之直鏈院基。陽離子 基N H ( C 2 Η 3^尤其是N H ( C s Η , 7)〆為佳。 分子中特定基之定義可相同或相異；但是，較好相同 本紙張尺度逍用中Β Β家標準(CNS)甲4規格(210X297公龙） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂- -線- 20623,3 A6 ___B6_ 五、發明説明（7 ) Ο 有關巖藻糖羥基改質之各步驟，諸如，例如，酯化， 醚化，鹵化，酯基轉移，醚基轉移，水解，醚切除，保護 基導入及移除與糖基醯亞胺化物形成，若不另陳述，則同 於一般醏化學之方法。此標準技術之整體表示於，例如： Carbohydrate Chemistry (Editor John F· Kennedy) * Oxford Science Publication， Clarendon Press， 1988
O 發明方法較好如下進行。 為對糖苷C原子或對異頭磺，如已知者，進行特定變 化，需導入保護基。依所需之反應性而定，酯或醚基有利 於此。發明方法在此較好用乙醛基或苄基為保護基。但是 ，亦可成功地採用詳述於上之代用物。； 三取代L 一巌藻糖（1)之合成： 經濟部屮央標準局貝工消费合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 2，3，4 一三一0 —爷基一L 一 Dth喃巖藻糖醋（1 )可製自L —巖藻糖，例如，藉Wegmann et al. (Carbo-hy d r · Res. 184 (1988)，254)方法或 De j ter-Juszynsk i et al. (Carbohydr· Res. 18 (1971)，219 )方法。但是 ,依發明，有利地合成三乙醯化之L_巖藻糖，因此者較 適於下一合成步驟。 就2, 3, 4 —三一0 —乙醯—L 一吡喃巖藻糖（1 )之合成言之，依發明，1，2，3, 4 —四一 0 —乙醯 — L 一吡喃巖藻糖在一階反應中與，較好，乙酸胼在 本紙張尺度边用中β Η家樣準(CNS)甲4規格(210x297公龙) -9 - 206253
五、發明説明（8 ) 經濟部屮央標準局β工消費合作社印製 =甲基甲醯胺中反應。就異頭乙醯基之恃定水解言之，除 乙酸讲外笮胺，氫氣化鉀，氡化鉀或雙（三丁錫）化氧亦 適合。 形成之三乙醯化産物以α : /3異頭物比平均3 : 1存 在。但是，就進一步反應及整體程序之立體選擇性言之， 此狀浣不明顯。經，例如，矽膠層析純化後，得到産率 7 5至8 5%之三乙醛化L 一吡喃巖藻糖之異頭混合物。 對應産物以先目U技舊法（Nunez et al., loc· cit.)製得 ，另一方面以複雜之多階反應製得且亦不再純化。原料， 1，2, 3，4 一四一 0_乙醛一 α — L —吡喃巖藻糖， 若非市售者，輕易藉 Nunez e t a 1. or Prihar e t a 1 . ( Biochemistry 12 ( 1973), 997)已知方法製得。 三經取L—吡喃巖藻糖之cc 一及/3 —三氯乙醯亞胺化物（ 2, 3)之合成： 2, 3, 4 —三一 0 —乙醯一L 一吡喃巖藻糖（1) 或對應之三笮基化衍生物（1)現依已知糖基醯亞胺化法 (例如Schmidt et al.. Angew. Chem· 92 (1980)，763) 。與三氯乙睛反應。異頭比可依所用碱種類控制。意外地 ，當使用氫化納時，單獨得到進一步合成所需之〇— （2 ,3, 4 —三一 0 —乙醯/爷基一 a — L —吡喃巖藻糖） 三氛乙醯亞胺（3),即，僅有α —異頭物。在使用氫化 鉀或氫氣化鈉時得到相同結果。另一方面，若採用其他碱 諸如DBU (1, 2 —二氮雜二環〔5· 4. ◦〕十一磺 本紙張尺度逍用中Β困家標準(CNS)甲4規格（210X297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂- 線- -10 - A 6 B6 206233 五、發明説明（9 ) 一 7 —烯，則得到比例約7 : 1至1 : 1之α _及/3 —三 氱乙醯亞胺異頭混合物。因此發明方法利於以如氫化銷般 反應之碱操作。α-三氯乙醯亞胺較好藉層析純化，然後 以平均7 0至8 0%之産率得到純型。 三取代磷酸L—吡喃巖藻糖酯（4, 5)之合成 藉L一巖藻糖之三取代α_三氣乙醯亞胺，如上製者 ，與式PO(OH) (OR) 2有機磷酸酯，式中R為 R2且1^2具上述定義，反應，得到良好産率之對應三取 代磷酸L一吡喃巖藻糖酯，較好為磷酸二苄酯2, 3, 4 一三一 0 —乙醯>苄基一 a — L 一妣喃巖藻糖酯（4 )及 磷酸二苄酯2, 3, 4 —三一 0 —乙醯/苄基_/? — L — 吡喃巖藻糖酯（5)。因此適當之有機磷酸酯較好磷酸二 苄酯，一方面因其易於取得且另一方面因苄基特別容易選 擇性移除。 當然，其他上述磷酸酯，諸如，例如，磷酸二苯酯， 亦適合。但是，在反應期間存在或缺少酸對具α -或冷-構型之磷酸酯的選擇性製備之適用性言之，僳決定者。純 c(一異頭物（4)在添加催化量之酸，諸如，例如，三氟 化硼，於混合物時達到。若使用之磷酸酯不太純，則不需 添加酸。另一方面，若反應在絶對無酸之情況下進行，則 選擇性地得到純/3 —異頭物（5)。是故，通常需將所用 之磷酸酯至少再結晶一次或採取其他不使任何酸催化之適 當方法。 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公逆) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· -訂- 經濟部屮央標準局貝工消費合作社印製 -11 - A6 B6 206253 五、發明説明（10) 純化後之産率較好在85及90%間，相對於所用之 保護L 一巖藻糖之c(一三氣乙醯亞胺化物。不持加純化即 可預期90及98%間之産率。産於對巖藻糖環上所選定 之酯保護基性質無決定依存性。純化可，例如，藉矽腰層 析成功地進行。 /3 — L 一妣喃巖藻糖基鳥嗦昤核苷5 / -焦磷酸酯（ G D P —巖藻糖）（9 )之合成 巖藻糖環上以酯基保護之磷酸吡喃巖藻糖酯，尤 其是對應乙醯或苯醯衍生物，恃別適於進一步合成。後缅 磷酸酯保護基之去除中，保留此保護基。進一步合成之較 佳受質因此為磷酸二苄或二苯酯2, 3,4—三一Ο—乙 醯一々一 L 一吡喃巖藻糖酯（5)。去除，較好為二笮基 或二酯基，可藉標準法，例如以把及氫進行。但是，其他 解媒亦適於此，巖藻糖保護基不水解，例如鉑及鎳觸媒。 水解亦可以甲酸銨進行。 形成之磷酸2, 3, 4 —三一0 —乙醯一 yS — L—吡 喃巖藻耱酯（6)較好以鹽單離，雙一三乙銨鹽為佳，並 隨意以本身已知之方式層析純化。但是，單離亦可以另一 種鹽進行，例如鋇或雙-三- η -丁銨鹽。反應期可藉薄 層層析簡便地偵测。吡喃巖藻糖環之三保護基，較好為乙 醯基，接著在次步驟中藉已知之標準法移除並得到自由磷 酸>9 - L -吡喃巖藻糖酯之對應鹽。此最後步驟定量地進 行。發明法較佳實例中，所得之磷酸/3 —吡喃巖藻糖酯接 本紙張尺度逍用中國8家樣毕(CNS)甲4規格(210X297公放) ' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 經濟部屮央標準局員工消t合作社印製 -12 - A 6 B6 2062 將 五、發明説明（11) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) *1T- 經濟部屮央標準局员工消费合作社印製 著轉化成對應之三一 η —辛銨鹽。此者意外地證明特別有 利於後缠之最終合成步驟，可能因其有利之溶解性質。其 他相當之NH (R3) *Χ_鉸鹽，式中R3具（原文照抄 )以上定義，尤其是R3為高鐽烷基，亦特別適用於此。 發明合成中利於使用之磷酸/3 — L 一吡喃巖藻糖酯雙一三 _η—辛銨之反應，其産生最終産物，GDP—巖藻酸， 是使用單磷酸鳥嗦昤核苷進行。在此，如文獻所述，必然 要採用活化形成之GMP以達良好反應速率。與GMP— 5 / —磷嗎啉化物已證明特別適合。但是，以其他已知方 式活化之G Μ Ρ,如述於Nunez等人中者，亦可採用。較 佳程序中採用4一嗎啉一N,N'_二環己基碩醛亞胺鳥 嘌昤核苷5>—單磷嗎啉化物（8)。L-GDP —巖藻 糖（9)之雙—三一 η -辛銨鹽以平均約70%之産率形 成。就進一步純化言之，化合物再轉化成雙-三乙銨鹽， 其於此狀況下更安定。依發明，接著進行HPLC純化， 較好為逆相材料上。對高純GDP_巖藻糖良好最終産率 極決定性且符合簡單程序技術者為最终産物以揮發性缓衝 糸，較好為預備酸洗提之合成。可用之此種適當洗提劑為 〔引用原文〕尤拜是碩酸氫三乙銨。亦適者為代用之碩酸 氫銨或甲酸较。 所述之純化方式具有可極簡便地得到極純之G D P — 巖葎糖之優點。依經驗，脱鹽始終有産率之損失，因此可 省略。 以下實例更詳細描述本發明。 冬紙張尺度逍用中SH家樣準(CNS)甲4規格(210父297公货) _ 13 一 A6 B6
20623S 五、發明説明（12) 以下層析糸統為此類例中所通用者： 薄層層析：TLC塑膜矽膠60 F 2 5 4 ( E. Merck, Da-rmstadt, FRG),在254nm之UV光中偵測，或藉噴 以 10% H2S〇4 並熱至 liot：。 管柱層析：矽膠60,粒徑0. 063—◦. 200nm (E. Merck . Darmstadt > FRG)〇 分析 Η P L C : LiChrospher RP-18, 1 2 5 X 4咖，5 um (E. Merck，Darmstadt，FRG)，缓衝劑：0. 0 5 M碩酸氫三乙銨（pH7. 1) 3. 5%乙睛，0. 5 mJ?/min〇 R / = 3. 24min (GMP)， 3. 85min (GDP-巖藻糖，12. 7min ( G Μ P -嗎啉化物）。 預備 Η P L C : LiChrosorb RP-18, 2 5 ◦ x 1 Omm, 7 wm (E. Merck，Darmstadt，FRG),缓衝劑如上。 所合成之中間物/最終産物藉2H — NMR及i3C — NMR確認並決定其純度。 實施例1 : 2，3，4 一三一 0 —爷基一 L —社喃巖藻糖（例如 ，依 Wegmannet al·， loc· cit·) (◦· 5〇g, 0. 86 mmol)在無水二氣甲烷中之溶液與不再 純化之市售碟酸一'卞醋（〇.24g, 〇. 8 6mmol)在 室溫氮氣氛下搜拌約2 h。若為高純磷酸二笮酯，則添加 催化量之三氣化硼於混合物。然後濃縮溶液並以層析純化 本紙張尺度遑用中國B家標準(CNS)甲4規格(210x297公龙） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. -線· 經濟部屮央標準局兵工消费合作社印製 -14 經濟部屮央標準局3工消t合作社印製 2063-¾¾^ 20骑33 A6 ________B6___ 五、發明説明（13) (甲苯/甲酮9 : 1)。磷酸二笮酯2，3, 4 —三一 〇 一笮基一 α-L —吡喃巖藻糖酯（4)産率為90%,無 色油（0. 54g) 。TLC (甲苯/丙酮7: 1)産生 R / 0 . 6 0, 〔α〕578 = - 68. 2 (c = l,氣仿 )0 實施例2 : 2, 3, 4 —三一 0 —笮基一 L 一吡喃巖藻糖（ 〇. 50g, 〇. 86mmol)在20mi?無水二氛甲烷中 之溶液與新再結晶之磷酸二笮酯（◦. 24g, 〇. 86 mmol)在室溫氮氣氛下攪拌約1 h。然後濃縮溶液並以層 析純化（甲苯/丙酮7 : 1)。得到磷酸二笮酯2, 3, 4 一三一 〇 —笮基一 /3 — L—吡喃巖藻糖酯（5),産率 95%,無色油（〇. 57g)。TLC (甲苯/丙酮7 :1)産生 R / 〇.45， 〔α〕578 = — 9. 7 (c== 1 ,氣仿）。 實施例3 : 1，2, 3, 4 —四一 ◦一 乙醯—a — L—Utt 喃巖溪 糖（6. 00g, 18mmol)，.依 Nunezetal.; (loc. cit.)製得，及乙酸胼（1. 99g, 21. 6mmol)在 2 0m 無水二甲基甲醯胺中之溶液在5 Ot：攪拌約 4. 5h。添加乙酸乙酯後，混合物以氣化鈉水溶液萃取 約兩次並層析濃有機萃取物（石油醚（4〇 : 60° ) / (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· ，町. 線. 本紙張尺度逍用中國Η家標準(CNS)甲4規格(210X297公:¢) -15 - A 6 B6 經濟部屮央榣準局β工消费合作社印製 206233 五、發明説明（14) 乙酸乙酯1 : 1)。得到2, 3，4 一三一Ο —乙醛_L 一吡喃巖藻糖（1) , α : /5之異頭比3 : 1,産率80 %。TLC分析（石油醚（40 — 60° ) /乙酸乙酯1 :1)産生 R/ =0. 47〇 實施例4 : a) 在氮下及室溫下將氫化鈉（〇· 25g, 10. 9 mmol)添加於2，3，4 —三一 Ο —乙酿一L— Hit喃 巖藻糖（異頭混合物）（2 . 0 0 g , 6 . 8 9 uunol )及三氣乙腈（7. Omi?, 70mm〇l)在 20mi 無水二氣甲烷中之混合物。混合物攪拌約12h,然 後濾經矽藻土並濃縮。層析純化後（石油醚/乙酸乙 酯3 : 1),得到0 — （2, 3, 4 —三一 0 —乙醯 _ct_L 一吡喃巖藻糖）三氯乙醯亞胺（3),産率 7 1 % ( 2 . 1 3 g ) 〇 b) 2, 3, 4—三一 0-乙醯一 L—吡喃巖藻糖（異頭 混合物）（◦ . 5 0 g , 1 . 7 2 nm〇 1),氯化鋰（ 73mg, 1. 72 mmol) , 1, 8 — 二氮雜二環〔5 .4. 0〕一十一碩一 烯（〇. 2〇m5, 1 . 3 4 mm〇 1 )及三氯乙睛（2 · ◦ rn 芡，2 ◦ mm〇 1 )在2 0m β無水乙腈中之混合物在氮及室溫下攪拌 約1 2h。層析純化（石油醚/二乙醚2 : 5)後， 得到0— （2， 3,4—三一◦一乙醯一α-L—吡 喃巖藻糖）三氯乙醯亞胺（3)及0_ (2, 3, 4 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂- -線· 本紙張尺度逍用中國國家樣準(CNS)甲4規格(210x297公货) -16 - 經濟部屮央#準局员工消费合作社印製 1^^ 20623^ A 6 「 ___B_6五、發明説明（15) —三一 Ο —乙醯一 /3 — L —吡喃巖藻糖）三氣乙醯亞 胺（2)之混合物，産率92% (a:/S = 6. 5: 1)〇 c)*2, 3, 4 —三一0 —乙醯一 L 一吡喃巖藻糖（異頭 混合物）（0.85g,2.93mm〇l),三氣乙腈 (3 m 5 , 30 mmol)及碩酸鉀（2. 73g, 19. 7 mmol)在無水二氯甲烷（12mJM中之混 合物在氮及室溫下攪拌約4h。濾經矽藻土後，去除 溶劑。層析純化後（石油醚/二乙醚2 : 5 ),得到 0 - （2, 3, 4 — 三.一Ο — 乙酸一ot — L — 耻喃巖 藻耱）三氣乙醯亞胺（3 )及0 — （ 2 , 3 , 4 —三 —0 —乙醯一 /9 一 L 一吡喃巖藻糖）三氣乙醯亞胺（ 2)之混合物，産率76% (a :/3=1 : 1. 3) 0 α - 異頭物：〔α〕β=-116. ◦ (c = l,氯仿） ，R/ =◦. 54 (石油醚/乙酸乙酯2 : 1), m. p. 107-10910。 /9-異頭物：〔α〕〇 = — 24. 5 (c = l,氣仿）， R/ =0· 34 (石油醚/乙酸乙酯2 : 1) , m. P. 6 0 - 6 3 t： 〇 實施例5 : 0— （2, 3, 4 —三一 0 —乙醯一 L —吡喃巖藻糖 )三氣乙醛亞胺（◦ · 2 0 8： , ◦ . 4 6 mmol)在無水二 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂- 線. 本紙張尺度通用中國B家樣準(CNS)甲4規格(210X297公釐) -17 - 2062法3 A 6 B6 五、發明説明（16) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 氣甲烷（7mJ2)中之溶液及市售磷酸二笮酯，其不加純 化，（0. 13g, 0. 47 mmol)在氮及室溫下攪拌約 2. 5h。若為極純之磷酸二苄酯，則添加催化量之三氯 化硼於混合物。然後濃縮溶液並以層析純化（甲苯/丙_ 7 : 1)並再層析（氯仿/二乙醚20 : 1)。得到磷酸 二苄酯2, 3, 4 — Ο —乙醯一ct-L 一吡喃巖藻糖酯（ 4),産率91%,無色油（0. 23g) 。TLC (甲 苯/丙酮/三乙胺84:15:1)産生R/◦. 38, C a 3 d =-83. 7 (c = l，氯仿）。 實施例6 : 0 — （2, 3, 4 —三一 ◦—乙醛一 L—吡喃巖藻糖 )三氣乙醯亞胺（◦. 50g, 1. 15mmol)在無水二 氯甲烷（25mi)中之溶液及市售磷酸二苄酯，其不加 純化，（0 . 2 9 g , 1 . 1 6 mmol)在氪及室溫下攪拌 約6. 5h。若為極純之磷酸二苄酯，則添加催化量之三 經濟部屮央櫺準局员工消费合作社印製 氯化硼於混合物。然後濃縮溶液並以層析純化（石油醚/ 二乙醚1 : 5)。得到磷酸二笮酯2, 3, 4 — Ο —乙醯 一 c(一 L 一吡喃巖藻糖酯（4),産率63%,無色油（ ◦ . 38g) 。TLC (石油醚/二乙醚1 : 5)産生 R / 0 . 4 1 〇 實施例7 : 0 — （2，3，4 一三一 ◦—乙醯一 α — L 一吡喃巖 本紙張尺度逍用中a困家標準(CNS)甲4規格（210x297公埂） -18 - 206233
經濟部屮央楳準局员工消費合作社印製 五、發明説明（17) 藻糖）三氣乙醛亞胺（0. 3〇g，◦. 69mmol)在無 水二氣甲烷（12mi2)中之溶液與市售，但新再結晶， 磷酸二苯酯（〇. 19g, ◦. 68 mmol)在氮及室溫下 攪拌lh。然後濃縮溶液並層析（甲苯/丙酮7 : 1)及 再層析（石油醚/二乙醚1 : 5)。得到磷酸二笮酯2, 3, 4 —三一0 —乙醯一 /3 — L —吡喃巌藻糖酯（5), 産率86%,無色油（0. 36g)。TLC (甲苯/丙 酮 7:1)産生 R / 0.30, C α 3 〇 = + 0 . 5 ( c =1 ,氣仿）。 實施例8 : 磷酸二苄酯2, 3, 4 —三—0 —乙醛一 L 一吡喃巖 藻糖酯（5) ( 7 2 mg，0 . 1 3 mmol)及耙（4 mg)在 10mi無水四氫呋喃/乙酸乙酯（1 : 1)中之混合物 在（依原文）H2氫氣氛下搖動。反應終點以TLC決定 (R/ =0. 19,氣仿/甲醇60 :40)。過濾混合 物，濃縮並層析（氣仿/甲醇/三乙胺60 : 39 : 1) 。在二噁烷中冷凍乾燥後，得到磷酸雙一三乙鞍2, 3, 4 一三一Ο —乙醛一 L—吡喃巖藻糖酯（6),産率 90% (68呢），非晶粉末。 實施例9 : ◦. 三乙胺添加於磷酸雙一三乙銨2, 3,4 一三一 ◦一乙醯_/S — L—妣喃巖藻耱醋（8 0. Omg, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國B家標準(CNS)甲4規格(210X297公龙) -19 - A 6 B6 經濟部屮央標準局员工消"合作社印製 五、發明説明（18) 〇.1 3 5 mmo 1)在3mj?甲醇/水混合物中之溶液中。 1 8. h後，濃縮混合物並由水冷凍乾燥。得到磷酸雙一三 乙銨々一 L 一吡喃巖藻糖酯（7),産率100% ( 73. 8呢），收溼性白色粉末，其不再純化。 實施例1〇： 添加三一 η — 辛胺（0. 117mJ2, 0. 135 mmol)於磷酸雙一三乙銨/3- L—吡喃巖藻糖酯（ 73. 8mg, 0. 135mm〇l)在無水吡啶（5mi2)中 之溶液。濃縮混合物並藉在1 0_2 torr下以吡啶重覆蒸 發而將形成之三一η—辛銨鹽乾燥。添加4一嗎啉一N, Ν / -二環己基碩醯亞胺鳥嘌昤核苷5 < —單磷皭啉（8 )(1 0 9 mg , 0 . 15mmol),其於無水吡啶/二甲基 甲醯胺中，後，以分析HPLC偵測反應。約5日後，混 合物濃縮至乾。殘留物攝於碩酸氫三乙銨缓衝劑（PH 7.4, 0. 05M)中，以醚萃除三一η—辛胺，混合 物最後以預備HPLC純化（t* = 9. 4m in)且將 用為洗提剤之缓衝劑蒸發。得到極純雙一三乙銨（β-L 一吡喃巖藻糖）鳥核苷5- —焦磷酸酯（9),産率25 % (23. 3呢），非晶粉末。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210父297公货) -20 -