TW202413403A - 包含IgA蛋白酶截短體的融合蛋白及其用途 - Google Patents

包含IgA蛋白酶截短體的融合蛋白及其用途 Download PDF

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呂繼成
張宏
舒楚天
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北京大學第一醫院
大陸商上海君祉醫藥科技有限公司
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本申請案關於一種IgA蛋白酶截短體、包含IgA蛋白酶截短體的融合蛋白（例如，包含IgA蛋白酶截短體和Fc的融合蛋白）及其在治療IgA沉積疾病（例如，IgA腎病）中的用途。

Description

包含IgA蛋白酶截短體的融合蛋白及其用途
本申請案係關於生物醫藥領域，具體地，本申請案案係關於一種IgA蛋白酶截短體、包含IgA蛋白酶截短體的融合蛋白、包含所述IgA蛋白酶截短體或所述融合蛋白的藥物組合物、編碼所述IgA蛋白酶截短體或所述融合蛋白的核酸、所述IgA蛋白酶截短體或所述融合蛋白的製備方法、以及IgA蛋白酶截短體或所述融合蛋白在製備用於治療IgA沉積相關疾病的藥物中的用途。
IgA腎病是目前世界上最常見的原發性腎小球疾病之一，給患者和社會帶來沉重的負擔。目前針對IgA腎病尚缺乏特異性的治療。臨床上多用RAS阻斷劑為基礎的支持治療，以減緩腎功能惡化。對於支持治療無效的患者予以聯合激素免疫抑制劑治療。但激素免疫抑制劑的使用長期療效不佳且給患者帶來嚴重的副作用。
亟需開發有效並且具有低副作用的治療藥物。
在一個方面，本申請案提供了一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽是IgA蛋白酶截短體，所述第二多肽不能被IgA蛋白酶或IgA蛋白酶截短體切割。
在某些實施方式中，所述的IgA蛋白酶截短體包含獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的非天然截短片段，或者與所述非天然截短片段具有至少70%的序列同一性。在某些實施方式中，所述非天然截短片段在所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的基礎上有胺基酸突變、缺失、插入或修飾，使得所述IgA蛋白酶截短體喪失或降低自酶切功能。在某些實施方式中，所述胺基酸突變、缺失、插入或修飾發生在所述肺炎鏈球菌TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點、所述天然自酶切位點的上游5個胺基酸殘基以內和/或下游5個胺基酸殘基以內。在某些實施方式中，所述天然自酶切位點在如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第43位至第745位之間。在某些實施方式中，所述天然自酶切位點在如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第71位和第72位之間、第210位和第211位之間、第228位和第229位之間、第239位和第240位之間、第245位和第246位之間、第382位和第383位之間、第418位和第419位之間、第439位和第440位之間、第490位和第491位之間、第506位和第507位之間、第509位和第510位之間、第514位和第515位之間、第533位和第534位之間、第536位和第537位之間、第563位和第564位之間、第594位和第595位之間、第613位和第614位之間、第616位和第617位之間、第639位和第640位之間、第645位和第646位之間、或者第678位和第679位之間。
在某些實施方式中，所述非天然截短片段為獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的N末端截短片段或C末端截短片段。在某些實施方式中，所述C末端截短片段包含獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的第43位起的至少703個連續胺基酸的多肽片段，或者與所述多肽片段具有至少70%的序列同一性。
在某些實施方式中，所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的寄存編號為ATCC BAA-334。在某些實施方式中，所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。
在某些實施方式中，所述第一多肽包含如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第665位起的至少1300個（例如，至少1310個、至少1320個、至少1330個、或者至少1340個）連續胺基酸的多肽片段。在某些實施方式中，所述第一多肽包含如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第665位至第2004位胺基酸的多肽片段或者與其具有至少70%的序列同一性的多肽片段。在某些實施方式中，所述融合蛋白在所述多肽片段的胺基酸序列基礎上，在一個或多個位點具有胺基酸的保守替換。在某些實施方式中，所述第一多肽包含如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，所述第二多肽位於所述第一多肽的N末端或者C末端。
在某些實施方式中，所述融合蛋白具有特異性切割人IgA的酶活性。在某些實施方式中，所述融合蛋白具有特異性切割人IgA重鏈的酶活性。在某些實施方式中，所述融合蛋白具有特異性切割人IgA重鏈鉸鏈區的酶活性。在某些實施方式中，所述融合蛋白具有特異性切割人IgA1的酶活性。在某些實施方式中，所述融合蛋白具有特異性切割人IgA1重鏈的酶活性。在某些實施方式中，所述融合蛋白具有特異性切割人IgA1重鏈鉸鏈區的酶活性。
在某些實施方式中，所述第一多肽和所述第二多肽之間透透過連接子連接。在某些實施方式中，所述連接子選自下組：可切割連接子、不可切割連接子、肽連接子、柔性連接子、剛性連接子、螺旋連接子和非螺旋連接子。在某些實施方式中，所述連接子包括肽連接子。在某些實施方式中，所述肽連接子包括含有甘胺酸和絲胺酸的連接子。在某些實施方式中，所述含有甘胺酸和絲胺酸的連接子包括如SEQ ID NO: 15 (GGGS)、SEQ ID NO: 16 (GGGGS)、SEQ ID NO: 17 (GGGGGGS) 或SEQ ID NO: 19 (GSS)所示的胺基酸序列的一個、兩個、三個、四個或更多個重複。在某些實施方式中，所述連接子包括如SEQ ID NO: 18 (GGGGSGGGGSGGGGS)所示、如SEQ ID NO: 20 (GSSGSSG) 所示或者如SEQ ID NO: 21 (RSGSSGSSG) 所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，所述第一多肽和所述第二多肽之間為直接連接。
在某些實施方式中，所述第二多肽包含用於延長所述第一多肽在受試者體內半衰期的胺基酸序列。在某些實施方式中，所述第二多肽選自：Fc結構域和白蛋白。在某些實施方式中，所述Fc結構域包含鉸鏈區。在某些實施方式中，所述Fc結構域來源於人IgG Fc結構域。在某些實施方式中，所述Fc結構域來源於人IgG4 Fc結構域。在某些實施方式中，所述Fc結構域包含與SEQ ID NO: 14具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%的序列同一性的胺基酸序列。在某些實施方式中，所述Fc結構域包含如SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，所述Fc結構域包含一個或多個延長所述融合蛋白的半衰期的突變。在某些實施方式中，所述Fc結構域與所述第一多肽的C末端或者N末端連接。在某些實施方式中，所述融合蛋白包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽的胺基酸序列如SEQ ID NO: 2所示，並且所述第二多肽的胺基酸序列如SEQ ID NO: 14所示。在某些實施方式中，所述融合蛋白包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽和所述第二多肽直接透過如SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21所示的連接子連接。在某些實施方式中，所述融合蛋白的胺基酸序列如SEQ ID NO: 8所示。在某些實施方式中，所述融合蛋白的胺基酸序列如SEQ ID NO: 24所示。在某些實施方式中，所述融合蛋白包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽和所述第二多肽透過如SEQ ID NO: 20所示的連接子連接，所述第一多肽的胺基酸序列如SEQ ID NO: 2所示，並且所述第二多肽的胺基酸序列如SEQ ID NO: 14所示。在某些實施方式中，所述融合蛋白包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽和所述第二多肽透過如SEQ ID NO: 21所示的連接子連接，所述第一多肽的胺基酸序列如SEQ ID NO: 2所示，並且所述第二多肽的胺基酸序列如SEQ ID NO: 14所示。在某些實施方式中，所述白蛋白包含人血清白蛋白的一個或多個結構域。在某些實施方式中，所述白蛋白包含人血清白蛋白的D3結構域。
在某些實施方式中，所述融合蛋白進一步包含標記。在某些實施方式中，所述標記選自下組：螢光標記、發光標記、純化標記和呈色標記。在某些實施方式中，所述標記選自下組：c-Myc標記、HA標記、VSV-G標記、FLAG標記、V5標記和HIS標記。在某些實施方式中，所述標記是包含6個、7個、8個、9個、10個或更多個組胺酸的HIS標記。在某些實施方式中，所述第二多肽位於所述第一多肽的C末端，所述標記位於所述第二多肽的C末端。
在某些實施方式中，所述融合蛋白在受試者體內的血循環中的半衰期為至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天。
在另一個方面，本申請案提供了一種分離的核酸，其包含編碼本申請案所述之融合蛋白的核苷酸序列。在某些實施方式中，本申請案所述的核酸包含如SEQ ID NO: 12所示的核苷酸序列或者與其具有至少70%序列同一性的核苷酸序列。在某些實施方式中，本申請案所述的核酸包含如SEQ ID NO: 25所示的核苷酸序列或者與其具有至少70%序列同一性的核苷酸序列。
在另一個方面，本申請案提供了一種分離的IgA蛋白酶截短體，其包含獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的非天然截短片段，或者與所述非天然截短片段具有至少70%的序列同一性。在某些實施方式中，所述非天然截短片段在所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的基礎上有胺基酸突變、缺失、插入或修飾，使得所述IgA蛋白酶截短體喪失或降低自酶切功能。在某些實施方式中，所述胺基酸突變、缺失、插入或修飾發生在所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點、所述天然自酶切位點的上游5個胺基酸殘基以內和/或下游5個胺基酸殘基以內。
在某些實施方式中，所述非天然截短片段為獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的N末端截短片段或C末端截短片段。在某些實施方式中，所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的寄存編號為ATCC BAA-334。在某些實施方式中，所述C末端截短片段包含獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的第43位起的至少703個連續胺基酸的多肽片段，或者與所述多肽片段具有至少70%的序列同一性。在某些實施方式中，所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。
在某些實施方式中，所述天然自酶切位點在如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第43位至第745位之間。在某些實施方式中，所述天然自酶切位點在如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第71位和第72位之間、第210位和第211位之間、第228位和第229位之間、第239位和第240位之間、第245位和第246位之間、第382位和第383位之間、第418位和第419位之間、第439位和第440位之間、第490位和第491位之間、第506位和第507位之間、第509位和第510位之間、第514位和第515位之間、第533位和第534位之間、第536位和第537位之間、第563位和第564位之間、第594位和第595位之間、第613位和第614位之間、第616位和第617位之間、第639位和第640位之間、第645位和第646位之間、或者第678位和第679位之間。
在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體包含如SEQ ID NO: 1所示之胺基酸序列的第665位起至少1300個（例如，至少1310個、至少1320個、至少1330個、或者至少1340個）連續胺基酸的多肽片段。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體包含如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第665位至第2004位胺基酸的多肽片段，或者與其具有至少70%的序列同一性的多肽片段。在某些實施方式中，在所述多肽片段的胺基酸序列基礎上，在一個或多個位點具有胺基酸的保守替換。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體包含如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體由如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列組成。
在某些實施方式中，本申請案提供的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA的酶活性。在某些實施方式中，本申請案提供的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA重鏈的酶活性。在某些實施方式中，本申請案提供的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA重鏈CH1與鉸鏈區交會處的酶活性。在某些實施方式中，本申請案提供的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA1的酶活性。在某些實施方式中，本申請案提供的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA1重鏈的酶活性。在某些實施方式中，本申請案提供的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA1重鏈CH1與鉸鏈區交會處的酶活性。
在另一個方面，本申請案提供了一種分離的核酸，其包含編碼本申請案所述的IgA蛋白酶截短體的核苷酸序列。
在另一個方面，本申請案提供了一種載體，其包含本申請案所述的核酸。
在另一個方面，本申請案提供了一種細胞，其包含本申請案所述的核酸或載體。在某些實施方式中，所述細胞是原核生物細胞或真核生物細胞。在某些實施方式中，所述原核生物細胞是大腸桿菌細胞。在某些實施方式中，所述真核生物細胞是哺乳動物細胞。在某些實施方式中，所述哺乳動物細胞是人細胞或中國倉鼠卵巢（CHO）細胞。在某些實施方式中，所述哺乳動物細胞是人胚胎腎細胞293（HEK293細胞）。
在另一個方面，本申請案提供了一種藥物組合物，其包含本申請案所述的融合蛋白、包含本申請案所述的核酸、包含本申請案所述的載體或者包含本申請案所述的細胞，以及藥學上可接受的載體。
在另一個方面，本申請案提供了一種產生融合蛋白的方法，其包括培養本申請案所述的細胞的步驟。
在另一個方面，本申請案提供了一種治療或預防IgA沉積相關疾病的方法，其包括向需要治療或預防的受試者施用如本申請案所述的IgA蛋白酶截短體、如本申請案所述的融合蛋白或者如本申請案所述的藥物組合物。
在另一個方面，本申請案提供了如本申請案所述的IgA蛋白酶截短體、如本申請案所述的融合蛋白或者如本申請案所述的藥物組合物在製備用於治療或預防IgA沉積相關疾病的藥物中的用途。
在另一方面，本申請案提供了用於治療或預防IgA沉積相關疾病的如本申請案所述的IgA蛋白酶截短體、如本申請案所述的融合蛋白或者如本申請案所述的藥物組合物。
在另一方面，本申請案提供了一種治療或預防IgA沉積相關疾病的方法，其包括向需要治療或預防的受試者施用IgA蛋白酶或其截短體、包含所述IgA蛋白酶或其截短體的融合蛋白或者包含所述IgA蛋白酶或其截短體或者所述融合蛋白的藥物組合物，其中，所述IgA蛋白酶的胺基酸序列選自下組：SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或其組合。
在另一方面，本申請案提供了IgA蛋白酶或其截短體、包含所述IgA蛋白酶或其截短體的融合蛋白或者包含所述IgA蛋白酶或其截短體或者所述融合蛋白的藥物組合物在製備用於預防IgA沉積相關疾病的藥物中的用途，其中，所述IgA蛋白酶的胺基酸序列選自下組：SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或其組合。
在另一方面，本申請案提供了用於治療或預防IgA沉積相關疾病的IgA蛋白酶或其截短體、包含所述IgA蛋白酶或其截短體的融合蛋白或者包含所述IgA蛋白酶或其截短體或者所述融合蛋白的藥物組合物，其中，所述IgA蛋白酶的胺基酸序列選自下組：SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或其組合。
在某些實施方式中，所述IgA沉積相關疾病包括IgA腎病、皰疹樣皮炎、類過敏性紫斑（又稱IgA血管炎）、川崎病、紫斑性腎炎、IgA血管炎腎損害、IgA類風濕因子陽性的類風濕性關節炎、IgA型抗GBM病或IgA型ANCA相關血管炎。在某些實施方式中，所述IgA沉積相關疾病為IgA腎病、IgA血管炎或川崎病。
儘管本申請案將在以下揭露多個方面和實施方式，但是在不違背本申請案主題精神和範圍的前提下，本申請案所屬技術領域中具有通常知識者顯然可以對其進行各種等同改變和修改。本申請案揭露的多個方面和實施方式僅用於舉例說明，其並非旨在限制本申請案，本申請案的實際保護範圍以申請專利範圍為準。除非另外指出，本文中使用的所有技術和科學術語均具有與本申請案所屬領域中的通常知識者通常所理解的相同的含義。本申請案中引用的所有參考文獻、專利、專利申請均通過透過整體引用併入本文。
定義
本申請案中使用的術語「肺炎鏈球菌」均指的是 Streptococcus pneumoniae菌，它是一種伺機性病原體，屬於革蘭氏陽性球菌，可以產生IgA蛋白酶。
本申請案中使用的術語「蛋白酶」指的是具有分解蛋白質和肽能力的酶。蛋白酶可以透過在形成蛋白質的肽或多肽鏈中將胺基酸連接在一起的肽鍵進行水解，從而分解蛋白質。現有技術中已知多種方法測試某種蛋白酶的蛋白水解活性。例如，可以透過分析各種蛋白酶水解合適基質的能力的比較測定來確定蛋白酶的蛋白水解活性。用於蛋白水解活性分析的示例性基質包括，例如，二甲基酪蛋白、牛膠原、牛彈性蛋白等等。使用這些基質的比色測定也是現有技術中已知的（參見，例如WO99/34011和US 6,376,450）。
本申請案中使用的術語「IgA蛋白酶」是指能夠特異性切割或分解受試者（例如，人）的IgA免疫球蛋白分子（例如，IgA1或IgA2）的酶。例如，獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的IgA蛋白酶能夠特異性切割IgA1的第227位脯胺酸（Pro）和第228位蘇胺酸（Thr）之間的肽鍵，從而分解IgA1。
當提及的是多肽或蛋白質時，本申請案中使用的術語「野生型」指的是在一個或多個胺基酸位置處不包括人為的突變、插入、缺失或修飾的天然存在的多肽或蛋白質；當提及的是核酸、核苷酸或多核苷酸時，本申請案中使用的術語「野生型」指的是在一個或多個核苷酸位置處不包括人為的突變、插入、缺失或修飾的天然存在的核酸、核苷酸或多核苷酸。但是編碼野生型多肽的多核苷酸不僅限於天然存在的多核苷酸，也包括編碼野生型多肽的任何多核苷酸（例如，人工合成的多核苷酸）。
本申請案中使用的術語「TIGR4」是指肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）的TIGR4株。在某些實施方式中，肺炎鏈球菌TIGR4株產生的野生型IgA蛋白酶的胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，其中，第1至42位胺基酸（已用粗體標出）為訊息肽。 MEKYFGEKQERFSFRKLSVGLVSATISSLFFMSVLASSSVDAQETAGVHYKYVADSELSSEEKKQLVYDIPTYVENDDETYYLVYKLNSQNQLAELPNTGSKNERQALVAGASLAAMGILIFAVSKKKVKNKTVLHLVLVAGIGNGVLVSVHALENHLLLNYNTDYELTSGEKLPLPKEISGYTYIGYIKEGKTTSESEVSNQKSSVATPTKQQKVDYNVTPNFVDHPSTVQAIQEQTPVSSTKPTEVQVVEKPFSTELINPRKEEKQSSDSQEQLAEHKNLETKKEEKISPKEKTGVNTLNPQDEVLSGQLNKPELLYREETMETKIDFQEEIQENPDLAEGTVRVKQEGKLGKKVEIVRIFSVNKEEVSREIVSTSTTAPSPRIVEKGTKKTQVIKEQPETGVEHKDVQSGAIVEPAIQPELPEAVVSDKGEPEVQPTLPEAVVTDKGETEVQPESPDTVVSDKGEPEQVAPLPEYKGNIEQVKPETPVEKTKEQGPEKTEEVPVKPTEETPVNPNEGTTEGTSIQEAENPVQPAEESTTNSEKVSPDTSSKNTGEVSSNPSDSTTSVGESNKPEHNDSKNENSEKTVEEVPVNPNEGTVEGTSNQETEKPVQPAEETQTNSGKIANENTGEVSNKPSDSKPPVEESNQPEKNGTATKPENSGNTTSENGQTEPEPSNGNSTEDVSTESNTSNSNGNEEIKQENELDPDKKVEEPEKTLELRNVSDLELYSLSNGTYKQHISLEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGMVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDRDAQIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVRHAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINPLILPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAYYQAKRNLTYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLAGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKK （SEQ ID NO: 1）
本申請案中使用的術語「訊息肽」是指可以參與蛋白質的成熟或前體形式的分泌或定向轉運的胺基酸殘基序列。訊息肽通常位於前體或成熟蛋白序列的N末端。訊息肽可以是內源的或外源的。成熟蛋白中一般不存在訊息肽。通常情況下，在蛋白轉運後，訊息肽透過訊息肽酶從所述蛋白中被切割掉。例如，SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列去除掉N末端的訊息肽之後形成的胺基酸序列如SEQ ID NO: 22所示。 QETAGVHYKYVADSELSSEEKKQLVYDIPTYVENDDETYYLVYKLNSQNQLAELPNTGSKNERQALVAGASLAAMGILIFAVSKKKVKNKTVLHLVLVAGIGNGVLVSVHALENHLLLNYNTDYELTSGEKLPLPKEISGYTYIGYIKEGKTTSESEVSNQKSSVATPTKQQKVDYNVTPNFVDHPSTVQAIQEQTPVSSTKPTEVQVVEKPFSTELINPRKEEKQSSDSQEQLAEHKNLETKKEEKISPKEKTGVNTLNPQDEVLSGQLNKPELLYREETMETKIDFQEEIQENPDLAEGTVRVKQEGKLGKKVEIVRIFSVNKEEVSREIVSTSTTAPSPRIVEKGTKKTQVIKEQPETGVEHKDVQSGAIVEPAIQPELPEAVVSDKGEPEVQPTLPEAVVTDKGETEVQPESPDTVVSDKGEPEQVAPLPEYKGNIEQVKPETPVEKTKEQGPEKTEEVPVKPTEETPVNPNEGTTEGTSIQEAENPVQPAEESTTNSEKVSPDTSSKNTGEVSSNPSDSTTSVGESNKPEHNDSKNENSEKTVEEVPVNPNEGTVEGTSNQETEKPVQPAEETQTNSGKIANENTGEVSNKPSDSKPPVEESNQPEKNGTATKPENSGNTTSENGQTEPEPSNGNSTEDVSTESNTSNSNGNEEIKQENELDPDKKVEEPEKTLELRNVSDLELYSLSNGTYKQHISLEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGMVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDRDAQIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVRHAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINPLILPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAYYQAKRNLTYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLAGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKK （SEQ ID NO: 22）
本申請案中使用的術語「受試者」包括人類和非人類的動物。非人類的動物包括所有的脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物。「受試者」也可以是家畜動物，例如牛、豬、羊、家禽和馬；或齧齒類動物，例如大鼠、小鼠；或靈長類動物，例如猿（ape）、猴子、黑猩猩（chimpanzee）、大猩猩（gorilla）、猩猩（orangutan）、狒狒（baboon）；或家養動物，例如狗和貓。「受試者」可以是雄性或者雌性，可以是老年、成年、青少年、兒童或者嬰兒。人類「受試者」可以是高加索人、非洲人、亞洲人、閃族人，或其他種族或所述種族背景的混合。
本申請案中使用的術語「蛋白」、「多肽」以及「肽」可以互換使用，是指胺基酸的聚合物。本申請案所述的蛋白、多肽或肽可以含有天然的胺基酸，也可以含有非天然的胺基酸，或胺基酸的類似物、模擬物。本申請案所述的蛋白、多肽或肽可以透過本領域習知的任何方法獲得，例如但不限於，透過天然分離、重組表現、化學合成等。
本申請案所用的術語「胺基酸」是指含有胺基（-NH 2）和羧基（-COOH）官能團以及每個胺基酸特有的側鏈的有機化合物。胺基酸名稱在本申請案中也以標準的單字母或三字母代碼表示，總結如下：
名稱 三字母代碼 單字母代碼
丙胺酸 Ala A
精胺酸 Arg R
天門冬醯胺 Asn N
天門冬胺酸 Asp D
半胱胺酸 Cys C
麩胺酸 Glu E
麩醯胺酸 Gln Q
甘胺酸 Gly G
組胺酸 His H
異白胺酸 Ile I
白胺酸 Leu L
離胺酸 Lys K
甲硫胺酸 Met M
苯丙胺酸 Phe F
脯胺酸 Pro P
絲胺酸 Ser S
蘇胺酸 Thr T
色胺酸 Trp W
酪胺酸 Tyr Y
纈胺酸 Val V
在本申請案中當「保守替換」用於胺基酸序列時，是指將一個胺基酸殘基用另一個具有相似理化性質的側鏈的胺基酸殘基替代。例如，可以在具有疏水側鏈的胺基酸殘基之間（例如Met、Ala、Val、Leu和Ile）、具有中性親水側鏈的胺基酸殘基之間（例如Cys、Ser、Thr、Asn和Gln）、具有酸性側鏈的胺基酸殘基之間（例如Asp、Glu）、具有鹼性側鏈的胺基酸殘基之間（例如His、Lys和Arg）或具有芳香側鏈的胺基酸殘基之間（例如Trp、Tyr和Phe）進行保守替換。本領域已知，保守替換通常不會引起蛋白構象結構的顯著變化，因此能夠保留蛋白質的生物活性。
本申請案所述的術語「同源的」指當最佳比對時核酸序列（或其互補鏈）或胺基酸序列與另一條序列具有至少60%（例如，至少65%、70%、75%、80%、85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%）的序列同一性。
當「百分比（%）序列同一性」用於胺基酸序列（或核酸序列）時，是指在進行序列比對，並且必要時引入間隔使相同胺基酸（或核酸）數目達到最多後，在候選序列中，與參比序列相同的胺基酸（或核酸）殘基占所述候選序列的胺基酸（或核酸）殘基的百分比。換言之，可以透過用與其比較的參比序列相同的胺基酸殘基（或鹼基）數除以候選序列或參比序列（以較短者為準）中的胺基酸殘基（或鹼基）總數來計算胺基酸序列（或核酸序列）的百分比（%）序列同一性。所述胺基酸殘基的保守替換可以認為或可以不認為是相同殘基。可以透過本領域公開的工具，例如BLASTN、BLASTp（美國國家生物技術資訊中心網站（NCBI），也可參見Altschul S.F. et al.，J. Mol. Biol.，215：403–410（1990）；Stephen F. et al.，Nucleic Acids Res.，25：3389–3402（1997））、ClustalW2（歐洲生物資訊研究所網站，可參見Higgins D.G. et al., Methods in Enzymology，266：383-402（1996）；Larkin M.A. et al.，Bioinformatics（Oxford, England），23（21）：2947-8（2007））和ALIGN或Megalign（DNASTAR）軟體，對序列進行比對以確定胺基酸（或核酸）序列的百分比序列同一性。本領域中具有通常知識者可以使用所述工具的預設參數或根據比對的需要適當調整參數，例如透過挑選合適的演算法。
「分離的」物質已經經人工由自然狀態改變。如果自然界中出現某種「分離的」組合物或物質，那麼其已經被改變或脫離其原始狀態，或二者均有發生。例如，某一活體動物體內天然存在的多核苷酸或多肽不是「分離的」，但如果這些多核苷酸或多肽與之在天然狀態下共存的物質足夠分離並以基本上純的狀態存在，則可以認為是「分離的」。「分離的核酸序列」是指分離的核酸分子的序列。在一些實施方式中，「分離的IgA蛋白酶截短體」是指純度為至少60%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的IgA蛋白酶截短體，其中純度由電泳方法（例如，SDS-PAGE、等電聚焦、毛細管電泳），或色譜法（例如，離子交換色譜或反相HPLC）確定。
本申請案中的術語「載體」是指可將遺傳因子操作性地插入其中並使該遺傳因子獲得表現的一種運載工具，例如生產由該遺傳因子編碼的蛋白質、RNA或DNA，或者複製所述遺傳因子。載體可用於轉化、轉導或轉染宿主細胞，使其攜帶的遺傳因子在宿主細胞內得以表現。舉例來說，載體包括：質體、噬菌體、黏質體（cosmid）、人工染色體如酵母人工染色體（YAC）、細菌人工染色體（BAC）或P1衍生的人工染色體（PAC）、噬菌體如λ噬菌體或M13噬菌體，以及動物病毒等。載體可含有多種控制表現的元件，包括啟動子序列、轉錄起始序列、增強子序列、選擇元件及報導基因。另外，載體還可含有複製起始位點。載體還可包括協助其進入細胞的成分，包括但不限於，病毒顆粒、脂質體或蛋白外殼。載體可以是表現載體或選殖載體。本申請案提供的載體（例如表現載體）含有本申請案所述的編碼IgA蛋白酶截短體或融合蛋白的核酸序列、至少一個可操作地連接至所述核酸序列的啟動子（例如，SV40、CMV、EF-1α），以及至少一個選擇標記。
本申請案中使用的對某種疾病、病症或狀況的「治療」或「療法」包括預防或減輕某種疾病、病症或狀況，降低某種疾病、病症或狀況發生或發展的速度，降低發展出某種疾病、病症或狀況的風險，預防或延遲與某種疾病、病症或狀況相關的症狀發展，減少或終止與某種疾病、病症或狀況相關的症狀，產生某種疾病、病症或狀況的完全或部分的逆轉，治癒某種疾病、病症或狀況，或以上的組合。
術語「藥學上可接受的」表示指定的載體、媒介、稀釋劑、賦形劑和/或鹽通常在化學和/或物理上與組成該製劑的其他成分相容，並且在生理上與其受體相容。
術語「IgA沉積相關疾病」是指與IgA免疫球蛋白以聚集或非聚集形式在受試者的組織或器官中積累相關的疾病。例如，包括但不限於，IgA腎病、皰疹樣皮炎、類過敏性紫斑（又稱IgA血管炎）、川崎病、紫斑性腎炎、IgA血管炎腎損害、IgA類風濕因子陽性的類風濕性關節炎、IgA型抗GBM病或IgA型ANCA相關血管炎。
術語「IgA腎病」是指腎臟內以IgA沉積為特徵的腎臟疾病。
IgA 蛋白酶截短體
在一個方面，本申請案提供了一種分離的IgA蛋白酶截短體，其包含獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的非天然截短片段，或者與所述非天然截短片段具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性）。在某些實施方式中，與所述非天然截短片段具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性）的IgA蛋白酶截短體仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。
本申請案中使用的術語「截短體」或「截短片段」是指從野生型多肽的一端或兩端去除一個或多個胺基酸之後形成的肽。因此，本申請案中的「截短體」或「截短片段」並不包括其對應的野生型多肽的全長，但是可以與野生型多肽的截短形式相比有一個或多個胺基酸突變、缺失、插入或修飾等。例如，「IgA蛋白酶截短體」或「IgA蛋白酶截短片段」可以包括從野生型的IgA蛋白酶的一端或者兩端去除一個或多個胺基酸之後形成的肽，也可以包括與野生型的IgA蛋白酶的截短形式相比有一個或多個胺基酸突變、缺失、插入或修飾的肽。
在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體與其對應的野生型IgA蛋白酶相比有一個或多個胺基酸突變、缺失、插入或修飾。例如，在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體包含獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的非天然截短片段，其中所述非天然截短片段在所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的基礎上有胺基酸突變、缺失、插入或修飾，使得所述IgA蛋白酶截短體喪失或降低自酶切功能。
本申請案中使用的術語「獲得自」和「衍生自」不僅包括由所提及的生物體生產或可由其生產的蛋白質，而且還包括由從此類生物體分離的DNA序列編碼並且在含有此類DNA序列的宿主生物體中生產的蛋白質，也包括由合成的和/或cDNA來源的DNA序列編碼並且具有所提及的蛋白質的鑑定特徵的蛋白質。例如，獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶既包括由肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株天然生產的IgA蛋白酶，也包括透過使用基因工程技術由用編碼IgA蛋白酶的核酸轉化的其他宿主細胞（例如，大腸桿菌）生產的IgA蛋白酶。
本申請案中使用的術語「非天然截短片段」是指與肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶在自然環境下自酶切之後形成的截短片段具有不同的胺基酸序列（例如，不同的胺基酸長度、不同的胺基酸類型等等）的片段。
在某些實施方式中，所述胺基酸突變、缺失、插入或修飾發生在所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點。
術語「天然自酶切位點」是指IgA蛋白酶能夠識別其自身的某些特定的肽鍵，從而進行自催化切割，釋放C端成熟的IgA蛋白酶。
在某些實施方式中，所述胺基酸突變、缺失、插入或修飾發生在所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點的上游5個胺基酸殘基以內（例如，在所述天然自酶切位點的上游1個胺基酸殘基處、2個胺基酸殘基處、3個胺基酸殘基處、4個胺基酸殘基處或5個胺基酸殘基處）。在某些實施方式中，所述胺基酸突變、缺失、插入或修飾發生在所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點的下游5個胺基酸殘基以內（例如，在所述天然自酶切位點的下游1個胺基酸殘基處、2個胺基酸殘基處、3個胺基酸殘基處、4個胺基酸殘基處或5個胺基酸殘基處）。在某些實施方式中，所述胺基酸突變或缺失發生在所述肺炎鏈球菌TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點的上游5個胺基酸殘基以內（例如，在所述天然自酶切位點的上游1個胺基酸殘基處、2個胺基酸殘基處、3個胺基酸殘基處、4個胺基酸殘基處或5個胺基酸殘基處）和下游5個胺基酸殘基以內（例如，在所述天然自酶切位點的下游1個胺基酸殘基處、2個胺基酸殘基處、3個胺基酸殘基處、4個胺基酸殘基處或5個胺基酸殘基處）。
在某些實施方式中，所述胺基酸突變、缺失、插入或修飾發生在所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶選自下組的一個或多個胺基酸位置（對應於SEQ ID NO: 1）：第71位、第97位、第175位、第177位、第210位、第222位、第228位、第239位、第245位、第254位、第262位、第292位、第303位、第315位、第338位、第382位、第384位、第401位、第418位、第425位、第435位、第439位、第442位、第456位、第459位、第469位、第474位、第476位、第487位、第490位、第499位、第506位、第509位、第514位、第517位、第533位、第536位、第549位、第563位、第576位、第594位、第597位、第613位、第616位、第639位、第644位、第645位、第652位和第661位。
在某些實施方式中，所述非天然截短片段為獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的N末端截短片段或C末端截短片段。
本申請案中使用的術語「N末端截短片段」是指包括肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的胺基端的胺基酸序列的截短片段。「胺基端」的起始位置可以是靠近肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的胺基酸序列的胺基端的任何位置，例如，可以是從胺基端數起的第1位，也可以是從胺基端數起的其他位置。再例如，如果野生型IgA蛋白酶全長的胺基酸序列由1000個胺基酸組成，那麼它的N末端截短片段的胺基端起始位置可以是它的胺基酸序列從胺基端起第1位至第500位之間的任何位置。
在某些實施方式中，本申請案中所述的IgA蛋白酶的非天然截短片段的N末端起始位點為肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點的上游5個胺基酸殘基以內（例如，在所述天然自酶切位點的上游1個胺基酸殘基處、2個胺基酸殘基處、3個胺基酸殘基處、4個胺基酸殘基處或5個胺基酸殘基處）。在某些實施方式中，本申請案中所述的IgA蛋白酶的非天然截短片段的N末端起始位點為肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點的下游5個胺基酸殘基以內（例如，在所述天然自酶切位點的下游1個胺基酸殘基處、2個胺基酸殘基處、3個胺基酸殘基處、4個胺基酸殘基處或5個胺基酸殘基處）。
在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶的非天然截短片段的N末端起始位點為肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點（例如，對應於SEQ ID NO: 1的第71位、第97位、第175位、第177位、第210位、第222位、第228位、第239位、第245位、第254位、第262位、第292位、第303位、第315位、第338位、第382位、第384位、第401位、第418位、第425位、第435位、第439位、第442位、第456位、第459位、第469位、第474位、第476位、第487位、第490位、第499位、第506位、第509位、第514位、第517位、第533位、第536位、第549位、第563位、第576位、第594位、第597位、第613位、第616位、第639位、第644位、第645位、第652位或第661位）。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶的非天然截短片段的N末端起始位點為肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點的下游1個胺基酸殘基處（例如，對應於SEQ ID NO: 1的第72位、第98位、第176位、第178位、第211位、第223位、第229位、第240位、第246位、第255位、第263位、第293位、第304位、第316位、第339位、第383位、第385位、第402位、第419位、第426位、第436位、第440位、第443位、第457位、第460位、第470位、第475位、第477位、第488位、第491位、第500位、第507位、第510位、第515位、第518位、第534位、第537位、第550位、第564位、第577位、第595位、第598位、第614位、第617位、第640位、第645位、第646位、第653位或第662位）。
本申請案中使用的術語「C末端截短片段」是指包括肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的羧基端的胺基酸序列的截短片段。「羧基端」的終止位置可以是靠近肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的胺基酸序列的羧基端的任何位置，例如，可以是從羧基端數起的第1位，也可以是從羧基端數起的其他位置。再例如，如果野生型IgA蛋白酶全長的胺基酸序列由1000個胺基酸組成，那麼它的C末端截短片段的羧基端終止位置可以是它的胺基酸序列從胺基端起第501位至第1000位之間的任何位置。
在某些實施方式中，所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的寄存編號為ATCC BAA-334。
在某些實施方式中，所述C末端截短片段包含獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的第43位起的至少703個（例如，至少710個、至少750個、至少800個、至少850個、至少900個、至少950個、至少1000個、至少1050個、至少1100個、至少1150個、至少1200個、至少1250個、至少1300個、至少1350個、至少1400個、至少1450個、至少1500個、至少1550個、至少1600個、至少1650個、至少1700個、至少1750個、至少1800個、至少1850個、至少1900個、至少1910個、至少1920個、至少1930個、至少1940個、至少1950個、至少1960個、至少1961個、至少1962個）連續胺基酸的多肽片段，或者與所述多肽片段具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性）。在某些實施方式中，與所述多肽片段具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性）的N末端截短片段仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。在某些實施方式中，所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。
除特殊說明外，本申請案所提到的TIGR4 IgA蛋白酶的胺基酸位點即為對應於野生型TIGR4 IgA蛋白酶（其胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示）的胺基酸位點。例如，本申請案所提到的TIGR4 IgA蛋白酶的第665位對應於SEQ ID NO: 1的第665個位點。除特殊說明外，本申請案所提到的TIGR4 IgA蛋白酶截短體的命名規則為TIGR4 (對應於SEQ ID NO: 1的起始位點-對應於SEQ ID NO: 1的終止位點)。例如，TIGR4 (665-2004)指的是SEQ ID NO: 1的第665位至第2004位胺基酸形成的TIGR4 IgA蛋白酶截短體。
在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶的天然自酶切位點在如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第43位至第745位之間。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶的天然自酶切位點在如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第43位至第665位之間。在某些實施方式中，所述天然自酶切位點在如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第71位和第72位之間、第210位和第211位之間、第228位和第229位之間、第239位和第240位之間、第245位和第246位之間、第382位和第383位之間、第418位和第419位之間、第439位和第440位之間、第490位和第491位之間、第506位和第507位之間、第509位和第510位之間、第514位和第515位之間、第533位和第534位之間、第536位和第537位之間、第563位和第564位之間、第594位和第595位之間、第613位和第614位之間、第616位和第617位之間、第639位和第640位之間、第645位和第646位之間、或者第678位和第679位之間。
在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體包含如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第665位起的至少1300個連續胺基酸的多肽片段。例如，在某些實施方式中，本申請案提供的IgA蛋白酶截短體包含如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第665位起的至少1310個、至少1320個、至少1321個、至少1322個、至少1323個、至少1324個、至少1325個、至少1326個、至少1327個、至少1328個、至少1329個、至少1330個、至少1331個、至少1332個、至少1333個、至少1334個、至少1335個、至少1336個、至少1337個、至少1338個、至少1339個、至少1340個連續胺基酸的多肽片段。在某些實施方式中，本申請案提供的IgA蛋白酶截短體包含如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第665位起的1340個連續胺基酸的多肽片段。
在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體包含如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第665位至第2004位胺基酸的多肽片段或者與其具有至少70%（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%）的序列同一性的多肽片段。在某些實施方式中，與所述多肽片段具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性）的IgA蛋白酶截短體仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。
在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體為TIGR4 (665-2004)截短體，其胺基酸序列如SEQ ID NO: 2所示。 GNTTSENGQTEPEPSNGNSTEDVSTESNTSNSNGNEEIKQENELDPDKKVEEPEKTLELRNVSDLELYSLSNGTYKQHISLEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGMVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDRDAQIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVRHAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINPLILPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAYYQAKRNLTYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLAGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKK（SEQ ID NO: 2）
在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體為TIGR4 (745-2004)截短體，其胺基酸序列如SEQ ID NO: 3所示。 LEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGMVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDRDAQIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVRHAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINPLILPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAYYQAKRNLTYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLAGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKK（SEQ ID NO: 3）
在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體為TIGR4 (845-2004)截短體，其胺基酸序列如SEQ ID NO: 4所示。 LNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGMVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDRDAQIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVRHAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINPLILPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAYYQAKRNLTYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLAGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKK（SEQ ID NO: 4）
在某些實施方式中，所述的IgA蛋白酶截短體在上述多肽片段的胺基酸序列基礎上，在一個或多個胺基酸殘基處（例如，在1個、2個、3個、4個、5個或更多個胺基酸殘基處）具有胺基酸的保守替換。胺基酸殘基的保守替換是指性質相似的胺基酸之間的替換，例如極性胺基酸之間的替換（如麩醯胺酸和天門冬醯胺之間的替換），疏水性胺基酸之間的替換（如白胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸和纈胺酸之間的替換），以及帶相同電荷的胺基酸之間的替換（如精胺酸、離胺酸和組胺酸之間的替換，或者麩胺酸和天門冬胺酸之間的替換）等。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體與SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 4所示的胺基酸序列相比，在1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、15個、20個或更多個胺基酸殘基處具有胺基酸的保守替換。
在不影響活性的前提下，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體還可以含有非天然的胺基酸。非天然的胺基酸包括例如，β-氟代丙胺酸、1-甲基組胺酸、γ-亞甲基麩胺酸、α-甲基白胺酸、4,5-脫氫賴胺酸、羥基脯胺酸、3-氟代苯丙胺酸、3-胺基酪胺酸、4-甲基色胺酸等。
本申請案所述的IgA蛋白酶截短體也可以使用本領域習知的方法進行修飾。例如，但不限於，PEG化、醣基化、胺基端修飾、脂肪醯化、羧基端修飾、磷酸化、甲基化等。本領域中具有通常知識者可以理解，本申請案提供的IgA蛋白酶截短體使用本領域習知的方法進行修飾之後，仍然保留了與IgA蛋白酶或IgA蛋白酶截短體基本上相似的功能。
在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA的酶活性。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA重鏈的酶活性。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA重鏈鉸鏈區的酶活性。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA1的酶活性。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA1重鏈的酶活性。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體具有特異性切割人IgA1重鏈鉸鏈區的酶活性。
在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體在上述多肽片段的胺基酸序列基礎上，在一個或多個胺基酸殘基處具有胺基酸的保守替換，但仍然具有切割人IgA（例如，IgA1）的酶活性。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA蛋白酶截短體與上述多肽片段具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性），並且仍然具有切割人IgA（例如，IgA1）的酶活性。
融合蛋白
在另一個方面，本申請案提供了一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽包含獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的全長、獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶去掉訊息肽之後形成的多肽或者本申請案所述的IgA蛋白酶截短體，所述第二多肽不能被IgA蛋白酶或IgA蛋白酶截短體切割。不受任何理論的限制，但是認為第二多肽不能被IgA蛋白酶或IgA蛋白酶截短體切割是有益的，因為這樣既可以使得融合蛋白保持其完整性和穩定性，又可以保持所述第一多肽切割IgA的活性。
在某些實施方式中，本申請案所述的融合蛋白的第一多肽和第二多肽之間透過連接子連接。在某些實施方式中，所述第一多肽和所述第二多肽之間為直接連接（即，不透過連接子連接）。本申請案中使用的術語「連接子」或「接頭」是指具有1、2、3、4或5個胺基酸殘基，或長度介於5和15、20、30、50或更多個胺基酸殘基之間的人工胺基酸序列，透過肽鍵連接，並用於連接一個或多個多肽。連接子可能有也可能沒有二級結構。連接子序列在本領域是已知的，例如，參見Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993); Poljak et al., Structure 2:1121-1123 (1994)。
在某些實施方式中，所述連接子選自下組：可切割連接子、不可切割連接子、肽連接子、柔性連接子、剛性連接子、螺旋連接子和非螺旋連接子。可以使用本領域已知的任何合適的連接子。在某些實施方式中，所述連接子包含肽連接子。例如，本申請案中的有用連接子可能富含甘胺酸和絲胺酸殘基。示例包括具有包含蘇胺酸/絲胺酸和甘胺酸的單個或重複序列的連接子，例如GGGS（SEQ ID NO: 15）、GGGGS（SEQ ID NO: 16）、GGGGGGS（SEQ ID NO: 17）或GSS（SEQ ID NO: 19），或其串聯重複（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多重複）。在某些實施方式中，本申請案使用的連接子包括GGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO: 18）。在某些實施方式中，本申請案使用的連接子包括GSSGSSG（SEQ ID NO: 20）。在某些實施方式中，本申請案使用的連接子包括RSGSSGSSG（SEQ ID NO: 21）。在某些實施方式中，本申請案使用的連接子包括RSGGGGS（SEQ ID NO: 31）。在某些實施方式中，本申請案使用的連接子包括選自下組的胺基酸序列或由選自下組的胺基酸序列組成：與SEQ ID NO: 18、20、21、31中的任何一個具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性的胺基酸序列。
在某些實施方式中，所述第二多肽包含用於延長所述第一多肽在受試者體內半衰期的胺基酸序列。在某些實施方式中，所述第二多肽選自Fc結構域和白蛋白。在某些實施方式中，所述Fc結構域包含鉸鏈區。在某些實施方式中，所述Fc結構域包含下游鉸鏈區（lower hinge）。在某些實施方式中，所述Fc結構域包含核心鉸鏈區（core hinge region）和下游鉸鏈區（lower hinge）。在某些實施方式中，所述Fc結構域包含上游鉸鏈區（upper hinge region）、核心鉸鏈區（core hinge region）和下游鉸鏈區（lower hinge）。在某些實施方式中，所述Fc結構域不包含鉸鏈區。在某些實施方式中，所述Fc結構域來源於人IgG Fc結構域。在某些實施方式中，所述Fc結構域來源於人IgG1 Fc結構域、人IgG2 Fc結構域、人IgG3 Fc結構域或人IgG4 Fc結構域。
在某些實施方式中，所述Fc結構域來源於人IgG1 Fc結構域。在某些實施方式中，所述Fc結構域包括如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，所述Fc結構域由如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列組成。在某些實施方式中，所述Fc結構域的胺基酸序列與如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。 TCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK（SEQ ID NO: 13）
在某些實施方式中，所述Fc結構域來源於人IgG4 Fc結構域。在某些實施方式中，所述Fc結構域包括如SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，所述Fc結構域由如SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列組成。在某些實施方式中，所述Fc結構域的胺基酸序列與如SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。 ESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK（SEQ ID NO: 14）
本申請案的發明人意想不到地發現，雖然TIGR4 IgA蛋白酶截短體與IgG4 Fc結構域或IgG1 Fc結構域形成的融合蛋白均具有切割IgA的酶活性，但是TIGR4 IgA蛋白酶截短體與IgG4 Fc結構域形成的融合蛋白的穩定性優於TIGR4 IgA蛋白酶截短體與IgG1 Fc結構域形成的融合蛋白的穩定性。在某些實施方式中，TIGR4 IgA蛋白酶截短體與IgG4 Fc結構域形成的融合蛋白的半衰期比TIGR4 IgA蛋白酶截短體與IgG1 Fc結構域形成的融合蛋白的半衰期長至少10小時、至少12小時、至少24小時、至少36小時、至少48小時、至少60小時、至少72小時、至少84小時或者至少96小時。
在某些實施方式中，所述Fc結構域包含一個或多個延長所述融合蛋白的半衰期的突變。在某些實施方式中，所述Fc結構域與所述第一多肽的C末端連接。在某些實施方式中，所述Fc結構域與所述第一多肽的N末端連接。
在某些實施方式中，所述第二多肽為白蛋白。在某些實施方式中，所述白蛋白的胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示。在某些實施方式中，所述白蛋白包含人血清白蛋白的一個或多個結構域。在某些實施方式中，所述白蛋白包含人血清白蛋白的D3結構域。 DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGL（SEQ ID NO: 23）
在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白進一步包含標記。在某些實施方式中，所述標記選自下組：螢光標記、發光標記、純化標記和呈色標記。在某些實施方式中，所述標記選自下組：c-Myc標記、HA標記、VSV-G標記、FLAG標記、V5標記和HIS標記。在某些實施方式中，所述標記為HIS標記。在某些實施方式中，所述標記是包含6個、7個、8個、9個、10個或更多個組胺酸的HIS標記。在某些實施方式中，所述第二多肽位於所述第一多肽的C末端，所述標記位於所述第二多肽的C末端。
在某些實施方式中，本申請案提供一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽包含如SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 4所示的胺基酸序列，所述第二多肽包含如SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，本申請案提供一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽包含如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列，所述第二多肽包含如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽由如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列組成，所述第二多肽由如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列組成。在某些實施方式中，本申請案提供一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽由如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列組成，所述第二多肽由如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列組成，並且所述第一多肽位於所述第二多肽的N末端。在某些實施方式中，本申請案提供一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽由如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列組成，所述第二多肽由如SEQ ID NO: 13所示的胺基酸序列組成，並且所述第一多肽位於所述第二多肽的C末端。
在某些實施方式中，本申請案提供一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽包含如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列，所述第二多肽包含如SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽由如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列組成，所述第二多肽由如SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列組成。在某些實施方式中，本申請案提供一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽由如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列組成，所述第二多肽由如SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列組成，並且所述第一多肽位於所述第二多肽的N末端。在某些實施方式中，本申請案提供一種融合蛋白，其包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽由如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列組成，所述第二多肽由如SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列組成，並且所述第一多肽位於所述第二多肽的C末端。
在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白包括如SEQ ID NO: 5所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白由如SEQ ID NO: 5所示的胺基酸序列組成，或者與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。在某些實施方式中，與如SEQ ID NO: 5所示的胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性的融合蛋白仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。 TCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGGSRQETAGVHYKYVADSELSSEEKKQLVYDIPTYVENDDETYYLVYKLNSQNQLAELPNTGSKNERQALVAGASLAAMGILIFAVSKKKVKNKTVLHLVLVAGIGNGVLVSVHALENHLLLNYNTDYELTSGEKLPLPKEISGYTYIGYIKEGKTTSESEVSNQKSSVATPTKQQKVDYNVTPNFVDHPSTVQAIQEQTPVSSTKPTEVQVVEKPFSTELINPRKEEKQSSDSQEQLAEHKNLETKKEEKISPKEKTGVNTLNPQDEVLSGQLNKPELLYREETMETKIDFQEEIQENPDLAEGTVRVKQEGKLGKKVEIVRIFSVNKEEVSREIVSTSTTAPSPRIVEKGTKKTQVIKEQPETGVEHKDVQSGAIVEPAIQPELPEAVVSDKGEPEVQPTLPEAVVTDKGETEVQPESPDTVVSDKGEPEQVAPLPEYKGNIEQVKPETPVEKTKEQGPEKTEEVPVKPTEETPVNPNEGTTEGTSIQEAENPVQPAEESTTNSEKVSPDTSSKNTGEVSSNPSDSTTSVGESNKPEHNDSKNENSEKTVEEVPVNPNEGTVEGTSNQETEKPVQPAEETQTNSGKIANENTGEVSNKPSDSKPPVEESNQPEKNGTATKPENSGNTTSENGQTEPEPSNGNSTEDVSTESNTSNSNGNEEIKQENELDPDKKVEEPEKTLELRNVSDLELYSLSNGTYKQHISLEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGMVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDRDAQIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVRHAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINPLILPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAYYQAKRNLTYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLAGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKK（SEQ ID NO: 5）
在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白包括如SEQ ID NO: 6所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白由如SEQ ID NO: 6所示的胺基酸序列組成，或者與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。在某些實施方式中，與如SEQ ID NO: 6所示的胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性的融合蛋白仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。 TCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGGSRGNTTSENGQTEPEPSNGNSTEDVSTESNTSNSNGNEEIKQENELDPDKKVEEPEKTLELRNVSDLELYSLSNGTYKQHISLEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGMVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDRDAQIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVRHAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINPLILPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAYYQAKRNLTYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLAGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKK（SEQ ID NO: 6）
在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白包括如SEQ ID NO: 7所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白由如SEQ ID NO: 7所示的胺基酸序列組成，或者與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。在某些實施方式中，與如SEQ ID NO: 7所示的胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性的融合蛋白仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。 GNTTSENGQTEPEPSNGNSTEDVSTESNTSNSNGNEEIKQENELDPDKKVEEPEKTLELRNVSDLELYSLSNGTYKQHISLEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGMVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDRDAQIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVRHAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINPLILPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAYYQAKRNLTYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLAGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKKRSGGGGSHHHHHHHHHHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK（SEQ ID NO: 7）
在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白包括如SEQ ID NO: 8所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白由如SEQ ID NO: 8所示的胺基酸序列組成，或者與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。在某些實施方式中，與如SEQ ID NO: 8所示的胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性的融合蛋白仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。 GNTTSENGQTEPEPSNGNSTEDVSTESNTSNSNGNEEIKQENELDPDKKVEEPEKTLELRNVSDLELYSLSNGTYKQHISLEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGMVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDRDAQIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVRHAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINPLILPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAYYQAKRNLTYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLAGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKKRSGGGGSESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK （SEQ ID NO: 8）
在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白包括如SEQ ID NO: 24所示的胺基酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白由如SEQ ID NO: 24所示的胺基酸序列組成，或者與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。在某些實施方式中，與如SEQ ID NO: 24所示的胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性的融合蛋白仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。 GNTTSENGQTEPEPSNGNSTEDVSTESNTSNSNGNEEIKQENELDPDKKVEEPEKTLELRNVSDLELYSLSNGTYKQHISLEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNPSGTYHLAASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGMVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDRDAQIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVRHAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINPLILPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAYYQAKRNLTYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLAGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKKRSGSSGSSGESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK （SEQ ID NO: 24）
在某些實施方式中，本申請案提供的融合蛋白在受試者體內的血循環中的半衰期為至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天。
核酸
在另一方面，本申請案提供了一種分離的核酸，其包含編碼本申請案所述的IgA蛋白酶截短體的核苷酸序列或包含編碼本申請案所述的融合蛋白的核苷酸序列。
本申請案所用的術語「核酸」或「核苷酸」是指單鏈或雙鏈形式的去氧核糖核酸（DNA）或核糖核酸（RNA）及其聚合物。除非另有說明，否則特定的核苷酸序列還隱含地涵蓋其保守修飾的變體（例如簡併的密碼子取代）、等位基因、直向同源物、SNP和互補序列以及明確指出的序列。具體而言，簡併的密碼子取代可透過產生這樣的序列來實現：其中一個或多個選定的（或全部）密碼子的第三位置被混合鹼基和/或去氧肌苷殘基取代（參見Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985)以及Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)）。
使用傳統的步驟，可以容易地對編碼本申請案所述的IgA蛋白酶截短體或者融合蛋白的DNA進行分離和定序（例如透過使用能夠與編碼所述融合蛋白的基因特異性結合的寡核苷酸探針）。編碼DNA也可以透過合成方法獲得。
在某些實施方式中，本申請案提供的核酸包括如SEQ ID NO: 9所示的核酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供的核酸由如SEQ ID NO: 9所示的核苷酸序列組成，或者與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。 ACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAAGGTGGCGGTGGCGGCGGTTCTAGACAAGAAACGGCAGGTGTGCATTACAAATACGTGGCAGATAGCGAACTGAGCAGCGAAGAAAAAAAACAACTGGTCTACGACATCCCGACCTACGTCGAAAATGATGACGAAACGTATTACCTGGTGTATAAACTGAATTCACAGAACCAACTGGCAGAACTGCCGAATACCGGCTCGAAAAACGAACGTCAGGCTCTGGTGGCAGGTGCTAGCCTGGCAGCAATGGGTATTCTGATCTTTGCCGTGAGCAAGAAAAAAGTTAAAAACAAAACCGTCCTGCATCTGGTCCTGGTGGCAGGCATTGGTAATGGCGTTCTGGTCAGCGTGCATGCTCTGGAAAACCACCTGCTGCTGAACTACAATACCGATTATGAACTGACGAGCGGTGAAAAACTGCCGCTGCCGAAAGAAATCTCTGGCTATACCTACATTGGTTACATCAAAGAAGGCAAAACCACGTCGGAAAGCGAAGTCTCCAACCAGAAAAGCTCTGTGGCAACCCCGACGAAACAGCAAAAAGTTGACTATAATGTCACCCCGAACTTCGTTGATCATCCGTCTACCGTCCAAGCGATTCAGGAACAAACGCCGGTCAGCTCCACCAAACCGACGGAAGTGCAGGTGGTTGAAAAACCGTTTTCAACCGAACTGATCAATCCGCGTAAAGAAGAAAAACAGTCATCGGATTCGCAGGAACAACTGGCGGAACACAAAAACCTGGAAACCAAAAAAGAAGAAAAAATCAGCCCGAAAGAAAAAACCGGCGTGAATACGCTGAACCCGCAGGATGAAGTTCTGTCTGGTCAACTGAATAAACCGGAACTGCTGTATCGTGAAGAAACCATGGAAACGAAAATTGACTTCCAGGAAGAAATCCAAGAAAACCCGGATCTGGCGGAAGGCACCGTTCGCGTCAAACAGGAAGGTAAACTGGGCAAAAAAGTTGAAATTGTCCGTATCTTTTCCGTGAATAAAGAAGAAGTTTCACGCGAAATTGTCTCTACCAGTACCACGGCACCGAGCCCGCGTATTGTCGAAAAAGGTACCAAGAAAACCCAGGTGATCAAAGAACAACCTGAAACCGGCGTGGAACATAAAGATGTTCAGAGTGGTGCTATTGTGGAACCGGCGATCCAACCGGAACTGCCGGAAGCGGTCGTGTCCGATAAAGGCGAACCGGAAGTTCAGCCGACCCTGCCGGAAGCCGTTGTCACCGACAAAGGTGAAACGGAAGTGCAGCCGGAATCCCCGGACACCGTGGTTTCAGATAAAGGTGAACCGGAACAGGTTGCACCGCTGCCGGAATACAAGGGTAACATCGAACAAGTGAAACCGGAAACCCCGGTGGAAAAAACGAAAGAACAGGGCCCGGAAAAAACCGAAGAAGTGCCGGTTAAACCGACCGAAGAAACGCCGGTGAACCCGAATGAAGGTACCACGGAAGGCACCAGCATCCAGGAAGCCGAAAATCCGGTTCAACCGGCAGAAGAATCAACCACGAACTCGGAAAAAGTCAGCCCGGACACCAGCTCTAAAAATACGGGCGAAGTTAGTTCCAACCCGTCCGATTCAACCACGTCTGTCGGTGAAAGTAATAAACCGGAACACAACGACTCCAAAAACGAAAATTCAGAAAAAACCGTCGAAGAAGTCCCGGTTAATCCGAATGAAGGTACCGTGGAAGGCACGAGCAATCAGGAAACCGAAAAACCGGTTCAGCCGGCAGAAGAAACCCAAACGAATAGTGGCAAAATTGCTAACGAAAATACCGGTGAAGTGTCCAACAAACCGTCGGATAGCAAACCGCCGGTTGAAGAAAGCAATCAGCCGGAGAAAAACGGCACCGCGACGAAACCGGAAAATTCGGGCAACACCACGAGCGAAAACGGTCAGACCGAACCGGAACCGTCCAACGGCAATTCAACGGAAGATGTTAGTACCGAATCCAATACGTCTAACAGTAACGGTAACGAAGAAATCAAACAGGAAAACGAACTGGATCCGGACAAAAAAGTCGAAGAACCGGAAAAAACCCTGGAACTGCGCAATGTGAGCGATCTGGAACTGTATTCCCTGTCAAACGGCACGTACAAACAGCATATCTCTCTGGAACAAGTTCCGTCGAATCCGAACAGCTACTTTGTTAAAGTCAAATCATCGAGCTTCAAAGATGTGTATCTGCCGGTTGCATCGATCAGCGAAGAACGTAAAAATGACAAAATCCTGTACAAAATCACCGCTAAAGTGGAAAAACTGCAGCAAGAAATCGAAAGCCGCTATAAAGATAACTTTACGTTCTACCTGGCGAAAAAAGGTACCGAAGAAACCACGAATTTTACGTCTTTCAGTAACCTGGTTAAAGCGATTAATCAGAACCCGTCAGGCACCTACCACCTGGCAGCTTCGCTGAATGCCAACGAAGTGGAACTGGGTCCGGACGAACGTAGCTATATTAAAGATACCTTCACGGGTCGCCTGATCGGCGAAAAAGATGGTAAAAACTACGCCATCTACAACCTGAAAAAACCGCTGTTTGAAAATCTGTCTGGCGCGACCGTTGAAAAACTGTCGCTGAAAAACGTCGCCATTAGCGGTAAAGATGACATCGGCTCTCTGGCGAATGAAGCCCAGAACAATACCAAAATCAAACAAGTGCATGTTGATGGCGTGCTGGCAGGTGAACGTGGCATTGGCGGTCTGCTGGCGAAAGCCGAACAGTCTAGTATCACCGAATCCTCATTTAAAGGTCGCATTATCAATACGTATGAAACCACGGCGGCCTACAACATTGGCGGTATGGTTGGCCACCTGACCGGTGATAAAGCCCTGCTGACCAAAAGCAAAGCAACGGTGGCTATCTCGAGCAATACCAACACGTCTGATCAGACCGTTGGCGGTCTGGCTGGTCTGGTCGATCGTGACGCGCAGATTCAAGACTCTTATGCCGAAGGCGATATCAACAATGTTAAACATTTTGGTCGCGTGGCGGGTGTTGCCGGCAATCTGTGGGACCGTACCAGTGGCGATGTTCGCCACGCAGGTTCGCTGACGAATGTCCTGAGCGATGTCAACGTGACCAATGGTAACGCTATTACGGGCTACCATTACAACGAAATGAAAGTGAAAGATACCTTCTCTAGTAAAGCGAATCGTGTCTATAACGTGACGCTGGTTAAAGATGAAGTCGTGTCAAAAGAATCGTTTGAAGAACGCGGCACCATGCTGGACGCATCTCAGATCGCTAGTAAAAAAGCGGAAATTAACCCGCTGATCCTGCCGACCGTTGAACCGCTGTCCACGTCAGGTAAAAAAGATAGCGACTTCTCTAAAGTGGCCTATTACCAGGCAAAACGTAACCTGACCTACAAAAACATCGAAAAACTGCTGCCGTTCTACAACAAAGCCACGATCGTCAAATACGGCAACCTGGTGAATGAAAACAGCCTGCTGTATCAGAAAGAACTGCTGTCTGCGGTGATGATGAAAGACAATCAGGTCATTACCGATATCGTGAGTAATAAACAAACGGCCAACAAACTGCTGCTGCATTATAAAGATGACCTGTCCGAAAAACTGGACCTGAAATATCAGAACGATTTCGCAAAACTGGCTGAATACTCACTGGGTAATACCGGCCTGCTGTATACGCCGAACCAGTTTCTGTACGATCAAACCTCGATTATCAAACAGGTGCTGCCGGACCTGCAAAAAGTTGATTACCACTCAGAAGCAATTCGCAAAACCCTGGGTATCTCGCCGAATGTGAAACAGACGGAACTGTATCTGGAAGATCAATTTGCTAAAACCAAACAGCAACTGGAAGACTCTCTGAAAAAACTGCTGAGTGCAGATGCTGGCCTGGCGTCTGCCAATCCGGTTACCGAAGGTTACCTGGTCGATAAAATTAAACGTAACAAAGAAGCCCTGCTGCTGGGCCTGACCTATCTGGAACGCTGGTACAATTTCAGCTATGGTCAGGTTAACGTCAAAGACCTGGTGCTGTATCATCTGGATTTCTTTGGTAAAGGCAACGCAAGTCCGCTGGATACCCTGATTGAACTGGGTAAATCCGGCTTTAACAATCTGCTGGCGAAAAACAATGTTGACACCTACGGCATCAGTCTGGCCTCCCAGCATGGTACCACGGACCTGTTTAGCACGCTGGAACACTATCGTAAAGTGTTCCTGCCGAATACCAGTAACAATGATTGGTTTAAATCCGAAACGAAAGCGTATATTGTGGAAGAAAAAAGCACCATCGAAGAAGTTAAAACGAAACAGGGTCTGGCGGGCACCAAATACAGTAT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ID NO: 9）
在某些實施方式中，本申請案提供的核酸包括如SEQ ID NO: 10所示的核酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供的核酸由如SEQ ID NO: 10所示的核苷酸序列組成，或者與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。 ACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAAGGTGGCGGTGGCGGCGGTTCTAGAGGCAACACCACGAGCGAAAACGGTCAGACCGAACCGGAACCGTCCAACGGCAATTCAACGGAAGATGTTAGTACCGAATCCAATACGTCTAACAGTAACGGTAACGAAGAAATCAAACAGGAAAACGAACTGGATCCGGACAAAAAAGTCGAAGAACCGGAAAAAACCCTGGAACTGCGCAATGTGAGCGATCTGGAACTGTATTCCCTGTCAAACGGCACGTACAAACAGCATATCTCTCTGGAACAAGTTCCGTCGAATCCGAACAGCTACTTTGTTAAAGTCAAATCATCGAGCTTCAAAGATGTGTATCTGCCGGTTGCATCGATCAGCGAAGAACGTAAAAATGACAAAATCCTGTACAAAATCACCGCTAAAGTGGAAAAACTGCAGCAAGAAATCGAAAGCCGCTATAAAGATAACTTTACGTTCTACCTGGCGAAAAAAGGTACCGAAGAAACCACGAATTTTACGTCTTTCAGTAACCTGGTTAAAGCGATTAATCAGAACCCGTCAGGCACCTACCACCTGGCAGCTTCGCTGAATGCCAACGAAGTGGAACTGGGTCCGGACGAACGTAGCTATATTAAAGATACCTTCACGGGTCGCCTGATCGGCGAAAAAGATGGTAAAAACTACGCCATCTACAACCTGAAAAAACCGCTGTTTGAAAATCTGTCTGGCGCGACCGTTGAAAAACTGTCGCTGAAAAACGTCGCCATTAGCGGTAAAGATGACATCGGCTCTCTGGCGAATGAAGCCCAGAACAATACCAAAATCAAACAAGTGCATGTTGATGGCGTGCTGGCAGGTGAACGTGGCATTGGCGGTCTGCTGGCGAAAGCCGAACAGTCTAGTATCACCGAATCCTCATTTAAAGGTCGCATTATCAATACGTATGAAACCACGGCGGCCTACAACATTGGCGGTATGGTTGGCCACCTGACCGGTGATAAAGCCCTGCTGACCAAAAGCAAAGCAACGGTGGCTATCTCGAGCAATACCAACACGTCTGATCAGACCGTTGGCGGTCTGGCTGGTCTGGTCGATCGTGACGCGCAGATTCAAGACTCTTATGCCGAAGGCGATATCAACAATGTTAAACATTTTGGTCGCGTGGCGGGTGTTGCCGGCAATCTGTGGGACCGTACCAGTGGCGATGTTCGCCACGCAGGTTCGCTGACGAATGTCCTGAGCGATGTCAACGTGACCAATGGTAACGCTATTACGGGCTACCATTACAACGAAATGAAAGTGAAAGATACCTTCTCTAGTAAAGCGAATCGTGTCTATAACGTGACGCTGGTTAAAGATGAAGTCGTGTCAAAAGAATCGTTTGAAGAACGCGGCACCATGCTGGACGCATCTCAGATCGCTAGTAAAAAAGCGGAAATTAACCCGCTGATCCTGCCGACCGTTGAACCGCTGTCCACGTCAGGTAAAAAAGATAGCGACTTCTCTAAAGTGGCCTATTACCAGGCAAAACGTAACCTGACCTACAAAAACATCGAAAAACTGCTGCCGTTCTACAACAAAGCCACGATCGTCAAATACGGCAACCTGGTGAATGAAAACAGCCTGCTGTATCAGAAAGAACTGCTGTCTGCGGTGATGATGAAAGACAATCAGGTCATTACCGATATCGTGAGTAATAAACAAACGGCCAACAAACTGCTGCTGCATTATAAAGATGACCTGTCCGAAAAACTGGACCTGAAATATCAGAACGATTTCGCAAAACTGGCTGAATACTCACTGGGTAATACCGGCCTGCTGTATACGCCGAACCAGTTTCTGTACGATCAAACCTCGATTATCAAACAGGTGCTGCCGGACCTGCAAAAAGTTGATTACCACTCAGAAGCAATTCGCAAAACCCTGGGTATCTCGCCGAATGTGAAACAGACGGAACTGTATCTGGAAGATCAATTTGCTAAAACCAAACAGCAACTGGAAGACTCTCTGAAAAAACTGCTGAGTGCAGATGCTGGCCTGGCGTCTGCCAATCCGGTTACCGAAGGTTACCTGGTCGATAAAATTAAACGTAACAAAGAAGCCCTGCTGCTGGGCCTGACCTATCTGGAACGCTGGTACAATTTCAGCTATGGTCAGGTTAACGTCAAAGACCTGGTGCTGTATCATCTGGATTTCTTTGGTAAAGGCAACGCAAGTCCGCTGGATACCCTGATTGAACTGGGTAAATCCGGCTTTAACAATCTGCTGGCGAAAAACAATGTTGACACCTACGGCATCAGTCTGGCCTCCCAGCATGGTACCACGGACCTGTTTAGCACGCTGGAACACTATCGTAAAGTGTTCCTGCCGAATACCAGTAACAATGATTGGTTTAAATCCGAAACGAAAGCGTATATTGTGGAAGAAAAAAGCACCATCGAAGAAGTTAAAACGAAACAGGGTCTGGCGGGCACCAAATACAGTATTGGCGTTTATGATCGCATCACCAGCGCCACGTGGAAATATCGCAACATGGTGCTGCCGCTGCTGACCCTGCCGGAACGCTCTGTGTTCGTTATTAGTACGATGTCCTCACTGGGTTTTGGCGCCTACGACCGTTATCGCTCGAGCGATCATAAAGCGGGTAAAGCCCTGAATGATTTTGTGGAAGAAAACGCTCGTGAAACCGCGAAACGTCAGCGCGACCACTATGATTACTGGTATCGCATTCTGGATGACAATGCGCGTGAAAAACTGTATCGCAACATCCTGCTGTACGATGCCTATAAATTCGGCGATGACAATACCGTGGGTAAAGCCACGGAAGTTGCAGATTTTGACAATCCGAACCCGGCGATGCAACATTTCTTTGGTCCGGTCGGCAATAAAGTGGGTCATAACCAGCACGGCGCGTATGCGACCGGTGATGCAGTGTATTACATGGGCTACCGTATGCTGGATAAAGACGGTGCTATTACCTATACGCATGAAATGACCCACGATAGTGACCAGGATATCTACCTGGGCGGTTATGGTCGTCGCTCCGGTCTGGGCCCGGAATTTTTCGCTAAAGGTCTGCTGCAGGCGCCGGATCATCCGGATGACGCAACCATTACGATCAATTCAATTCTGAAACACTCGAAAAGCGACTCTACCGAATCGCGTCGCCTGCAAGTTCTGGATCCGACCACGCGCTTCAACAATGCGGATGACCTGAAACAGTATGTGCATAACATGTTTGATGTTGTCTACATGCTGGAATATCTGGAAGGCAATAGCATTCTGAAACTGGACACCAACCAGAAACAGCAACTGCTGCGTAAAGTTACGAATGAATATCACCCGGACCCGGATGGTAACAAAGTGTACGCGACCAATGTGGTTCGCAACCTGACGGTCGAAGAAGTGGAACGTCTGCGCTCATTCAACGACCTGATTGATAACAATATCCTGTCTAGTCGTGAATACGCATCGGGCAAATATGAACGCAATGGTTACTTTACCATTAAACTGTTCGCTCCGATCTACGCAGCTCTGAGTAACGACATTGGTACGCCGGGTGATCTGATGGGTCGTCGCATCGCCTATGAACTGCTGGCGGCCAAAGGCTTTAAAGATGGTATGGTTCCGTATATTAGCAATCAGTACGAAGAAGAAGCGAAACAAAAAGGTAAAACCATCAACCTGTATGGCAAAACCCGTGGTCTGGTGACGGATGACCTGGTTCTGGAAAAAGTCTTCAACAATCAATACCATACCTGGAGCGAATTTAAAAAAGCGATGTATCAGGAACGTCAGGACCAATTTGATCGCCTGAATAAAGTTACCTTCAACGATACCACGCAGCCGTGGCAAACGTTTGCGAAGAAAACCACGTCCTCAGTGGATGAACTGCAGAAACTGATGGACGTCGCCGTGCGTAAAGATGCAGAACATAACTACTACCACTGGAACAACTACAACCCGGACATTGATAGCGAAGTGCACAAACTGAAACGCGCGATCTTCAAAGCGTACCTGGACCAAACCAATGACTTCCGTTCTAGTATCTTCGAAAACAAAAAA （SEQ ID NO: 10）
在某些實施方式中，本申請案提供的核酸包括如SEQ ID NO: 11所示的核酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供的核酸由如SEQ ID NO: 11所示的核苷酸序列組成，或者與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。 GGCAACACCACGAGCGAAAACGGTCAGACCGAACCGGAACCGTCCAACGGCAATTCAACGGAAGATGTTAGTACCGAATCCAATACGTCTAACAGTAACGGTAACGAAGAAATCAAACAGGAAAACGAACTGGATCCGGACAAAAAAGTCGAAGAACCGGAAAAAACCCTGGAACTGCGCAATGTGAGCGATCTGGAACTGTATTCCCTGTCAAACGGCACGTACAAACAGCATATCTCTCTGGAACAAGTTCCGTCGAATCCGAACAGCTACTTTGTTAAAGTCAAATCATCGAGCTTCAAAGATGTGTATCTGCCGGTTGCATCGATCAGCGAAGAACGTAAAAATGACAAAATCCTGTACAAAATCACCGCTAAAGTGGAAAAACTGCAGCAAGAAATCGAAAGCCGCTATAAAGATAACTTTACGTTCTACCTGGCGAAAAAAGGTACCGAAGAAACCACGAATTTTACGTCTTTCAGTAACCTGGTTAAAGCGATTAATCAGAACCCGTCAGGCACCTACCACCTGGCAGCTTCGCTGAATGCCAACGAAGTGGAACTGGGTCCGGACGAACGTAGCTATATTAAAGATACCTTCACGGGTCGCCTGATCGGCGAAAAAGATGGTAAAAACTACGCCATCTACAACCTGAAAAAACCGCTGTTTGAAAATCTGTCTGGCGCGACCGTTGAAAAACTGTCGCTGAAAAACGTCGCCATTAGCGGTAAAGATGACATCGGCTCTCTGGCGAATGAAGCCCAGAACAATACCAAAATCAAACAAGTGCATGTTGATGGCGTGCTGGCAGGTGAACGTGGCATTGGCGGTCTGCTGGCGAAAGCCGAACAGTCTAGTATCACCGAATCCTCATTTAAAGGTCGCATTATCAATACGTATGAAACCACGGCGGCCTACAACATTGGCGGTATGGTTGGCCACCTGACCGGTGATAAAGCCCTGCTGACCAAAAGCAAAGCAACGGTGGCTATCTCGAGCAATACCAACACGTCTGATCAGACCGTTGGCGGTCTGGCTGGTCTGGTCGATCGTGACGCGCAGATTCAAGACTCTTATGCCGAAGGCGATATCAACAATGTTAAACATTTTGGTCGCGTGGCGGGTGTTGCCGGCAATCTGTGGGACCGTACCAGTGGCGATGTTCGCCACGCAGGTTCGCTGACGAATGTCCTGAGCGATGTCAACGTGACCAATGGTAACGCTATTACGGGCTACCATTACAACGAAATGAAAGTGAAAGATACCTTCTCTAGTAAAGCGAATCGTGTCTATAACGTGACGCTGGTTAAAGATGAAGTCGTGTCAAAAGAATCGTTTGAAGAACGCGGCACCATGCTGGACGCATCTCAGATCGCTAGTAAAAAAGCGGAAATTAACCCGCTGATCCTGCCGACCGTTGAACCGCTGTCCACGTCAGGTAAAAAAGATAGCGACTTCTCTAAAGTGGCCTATTACCAGGCAAAACGTAACCTGACCTACAAAAACATCGAAAAACTGCTGCCGTTCTACAACAAAGCCACGATCGTCAAATACGGCAACCTGGTGAATGAAAACAGCCTGCTGTATCAGAAAGAACTGCTGTCTGCGGTGATGATGAAAGACAATCAGGTCATTACCGATATCGTGAGTAATAAACAAACGGCCAACAAACTGCTGCTGCATTATAAAGATGACCTGTCCGAAAAACTGGACCTGAAATATCAGAACGATTTCGCAAAACTGGCTGAATACTCACTGGGTAATACCGGCCTGCTGTATACGCCGAACCAGTTTCTGTACGATCAAACCTCGATTATCAAACAGGTGCTGCCGGACCTGCAAAAAGTTGATTACCACTCAGAAGCAATTCGCAAAACCCTGGGTATCTCGCCGAATGTGAAACAGACGGAACTGTATCTGGAAGATCAATTTGCTAAAACCAAACAGCAACTGGAAGACTCTCTGAAAAAACTGCTGAGTGCAGATGCTGGCCTGGCGTCTGCCAATCCGGTTACCGAAGGTTACCTGGTCGATAAAATTAAACGTAACAAAGAAGCCCTGCTGCTGGGCCTGACCTATCTGGAACGCTGGTACAATTTCAGCTATGGTCAGGTTAACGTCAAAGACCTGGTGCTGTATCATCTGGATTTCTTTGGTAAAGGCAACGCAAGTCCGCTGGATACCCTGATTGAACTGGGTAAATCCGGCTTTAACAATCTGCTGGCGAAAAACAATGTTGACACCTACGGCATCAGTCTGGCCTCCCAGCATGGTACCACGGACCTGTTTAGCACGCTGGAACACTATCGTAAAGTGTTCCTGCCGAATACCAGTAACAATGATTGGTTTAAATCCGAAACGAAAGCGTATATTGTGGAAGAAAAAAGCACCATCGAAGAAGTTAAAACGAAACAGGGTCTGGCGGGCACCAAATACAGTATTGGCGTTTATGATCGCATCACCAGCGCCACGTGGAAATATCGCAACATGGTGCTGCCGCTGCTGACCCTGCCGGAACGCTCTGTGTTCGTTATTAGTACGATGTCCTCACTGGGTTTTGGCGCCTACGACCGTTATCGCTCGAGCGATCATAAAGCGGGTAAAGCCCTGAATGATTTTGTGGAAGAAAACGCTCGTGAAACCGCGAAACGTCAGCGCGACCACTATGATTACTGGTATCGCATTCTGGATGACAATGCGCGTGAAAAACTGTATCGCAACATCCTGCTGTACGATGCCTATAAATTCGGCGATGACAATACCGTGGGTAAAGCCACGGAAGTTGCAGATTTTGACAATCCGAACCCGGCGATGCAACATTTCTTTGGTCCGGTCGGCAATAAAGTGGGTCATAACCAGCACGGCGCGTATGCGACCGGTGATGCAGTGTATTACATGGGCTACCGTATGCTGGATAAAGACGGTGCTATTACCTATACGCATGAAATGACCCACGATAGTGACCAGGATATCTACCTGGGCGGTTATGGTCGTCGCTCCGGTCTGGGCCCGGAATTTTTCGCTAAAGGTCTGCTGCAGGCGCCGGATCATCCGGATGACGCAACCATTACGATCAATTCAATTCTGAAACACTCGAAAAGCGACTCTACCGAATCGCGTCGCCTGCAAGTTCTGGATCCGACCACGCGCTTCAACAATGCGGATGACCTGAAACAGTATGTGCATAACATGTTTGATGTTGTCTACATGCTGGAATATCTGGAAGGCAATAGCATTCTGAAACTGGACACCAACCAGAAACAGCAACTGCTGCGTAAAGTTACGAATGAATATCACCCGGACCCGGATGGTAACAAAGTGTACGCGACCAATGTGGTTCGCAACCTGACGGTCGAAGAAGTGGAACGTCTGCGCTCATTCAACGACCTGATTGATAACAATATCCTGTCTAGTCGTGAATACGCATCGGGCAAATATGAACGCAATGGTTACTTTACCATTAAACTGTTCGCTCCGATCTACGCAGCTCTGAGTAACGACATTGGTACGCCGGGTGATCTGATGGGTCGTCGCATCGCCTATGAACTGCTGGCGGCCAAAGGCTTTAAAGATGGTATGGTTCCGTATATTAGCAATCAGTACGAAGAAGAAGCGAAACAAAAAGGTAAAACCATCAACCTGTATGGCAAAACCCGTGGTCTGGTGACGGATGACCTGGTTCTGGAAAAAGTCTTCAACAATCAATACCATACCTGGAGCGAATTTAAAAAAGCGATGTATCAGGAACGTCAGGACCAATTTGATCGCCTGAATAAAGTTACCTTCAACGATACCACGCAGCCGTGGCAAACGTTTGCGAAGAAAACCACGTCCTCAGTGGATGAACTGCAGAAACTGATGGACGTCGCCGTGCGTAAAGATGCAGAACATAACTACTACCACTGGAACAACTACAACCCGGACATTGATAGCGAAGTGCACAAACTGAAACGCGCGATCTTCAAAGCGTACCTGGACCAAACCAATGACTTCCGTTCTAGTATCTTCGAAAACAAAAAAAGATCTGGTGGCGGTGGCTCTcaccatcatcaccaccatcatcatcaccacACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA （SEQ ID NO: 11）
在某些實施方式中，本申請案提供的核酸包括如SEQ ID NO: 12所示的核酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供的核酸由如SEQ ID NO: 12所示的核苷酸序列組成，或者與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。 GGCAACACCACGAGCGAAAACGGTCAGACCGAACCGGAACCGTCCAACGGCAATTCAACGGAAGATGTTAGTACCGAATCCAATACGTCTAACAGTAACGGTAACGAAGAAATCAAACAGGAAAACGAACTGGATCCGGACAAAAAAGTCGAAGAACCGGAAAAAACCCTGGAACTGCGCAATGTGAGCGATCTGGAACTGTATTCCCTGTCAAACGGCACGTACAAACAGCATATCTCTCTGGAACAAGTTCCGTCGAATCCGAACAGCTACTTTGTTAAAGTCAAATCATCGAGCTTCAAAGATGTGTATCTGCCGGTTGCATCGATCAGCGAAGAACGTAAAAATGACAAAATCCTGTACAAAATCACCGCTAAAGTGGAAAAACTGCAGCAAGAAATCGAAAGCCGCTATAAAGATAACTTTACGTTCTACCTGGCGAAAAAAGGTACCGAAGAAACCACGAATTTTACGTCTTTCAGTAACCTGGTTAAAGCGATTAATCAGAACCCGTCAGGCACCTACCACCTGGCAGCTTCGCTGAATGCCAACGAAGTGGAACTGGGTCCGGACGAACGTAGCTATATTAAAGATACCTTCACGGGTCGCCTGATCGGCGAAAAAGATGGTAAAAACTACGCCATCTACAACCTGAAAAAACCGCTGTTTGAAAATCTGTCTGGCGCGACCGTTGAAAAACTGTCGCTGAAAAACGTCGCCATTAGCGGTAAAGATGACATCGGCTCTCTGGCGAATGAAGCCCAGAACAATACCAAAATCAAACAAGTGCATGTTGATGGCGTGCTGGCAGGTGAACGTGGCATTGGCGGTCTGCTGGCGAAAGCCGAACAGTCTAGTATCACCGAATCCTCATTTAAAGGTCGCATTATCAATACGTATGAAACCACGGCGGCCTACAACATTGGCGGTATGGTTGGCCACCTGACCGGTGATAAAGCCCTGCTGACCAAAAGCAAAGCAACGGTGGCTATCTCGAGCAATACCAACACGTCTGATCAGACCGTTGGCGGTCTGGCTGGTCTGGTCGATCGTGACGCGCAGATTCAAGACTCTTATGCCGAAGGCGATATCAACAATGTTAAACATTTTGGTCGCGTGGCGGGTGTTGCCGGCAATCTGTGGGACCGTACCAGTGGCGATGTTCGCCACGCAGGTTCGCTGACGAATGTCCTGAGCGATGTCAACGTGACCAATGGTAACGCTATTACGGGCTACCATTACAACGAAATGAAAGTGAAAGATACCTTCTCTAGTAAAGCGAATCGTGTCTATAACGTGACGCTGGTTAAAGATGAAGTCGTGTCAAAAGAATCGTTTGAAGAACGCGGCACCATGCTGGACGCATCTCAGATCGCTAGTAAAAAAGCGGAAATTAACCCGCTGATCCTGCCGACCGTTGAACCGCTGTCCACGTCAGGTAAAAAAGATAGCGACTTCTCTAAAGTGGCCTATTACCAGGCAAAACGTAACCTGACCTACAAAAACATCGAAAAACTGCTGCCGTTCTACAACAAAGCCACGATCGTCAAATACGGCAACCTGGTGAATGAAAACAGCCTGCTGTATCAGAAAGAACTGCTGTCTGCGGTGATGATGAAAGACAATCAGGTCATTACCGATATCGTGAGTAATAAACAAACGGCCAACAAACTGCTGCTGCATTATAAAGATGACCTGTCCGAAAAACTGGACCTGAAATATCAGAACGATTTCGCAAAACTGGCTGAATACTCACTGGGTAATACCGGCCTGCTGTATACGCCGAACCAGTTTCTGTACGATCAAACCTCGATTATCAAACAGGTGCTGCCGGACCTGCAAAAAGTTGATTACCACTCAGAAGCAATTCGCAAAACCCTGGGTATCTCGCCGAATGTGAAACAGACGGAACTGTATCTGGAAGATCAATTTGCTAAAACCAAACAGCAACTGGAAGACTCTCTGAAAAAACTGCTGAGTGCAGATGCTGGCCTGGCGTCTGCCAATCCGGTTACCGAAGGTTACCTGGTCGATAAAATTAAACGTAACAAAGAAGCCCTGCTGCTGGGCCTGACCTATCTGGAACGCTGGTACAATTTCAGCTATGGTCAGGTTAACGTCAAAGACCTGGTGCTGTATCATCTGGATTTCTTTGGTAAAGGCAACGCAAGTCCGCTGGATACCCTGATTGAACTGGGTAAATCCGGCTTTAACAATCTGCTGGCGAAAAACAATGTTGACACCTACGGCATCAGTCTGGCCTCCCAGCATGGTACCACGGACCTGTTTAGCACGCTGGAACACTATCGTAAAGTGTTCCTGCCGAATACCAGTAACAATGATTGGTTTAAATCCGAAACGAAAGCGTATATTGTGGAAGAAAAAAGCACCATCGAAGAAGTTAAAACGAAACAGGGTCTGGCGGGCACCAAATACAGTATTGGCGTTTATGATCGCATCACCAGCGCCACGTGGAAATATCGCAACATGGTGCTGCCGCTGCTGACCCTGCCGGAACGCTCTGTGTTCGTTATTAGTACGATGTCCTCACTGGGTTTTGGCGCCTACGACCGTTATCGCTCGAGCGATCATAAAGCGGGTAAAGCCCTGAATGATTTTGTGGAAGAAAACGCTCGTGAAACCGCGAAACGTCAGCGCGACCACTATGATTACTGGTATCGCATTCTGGATGACAATGCGCGTGAAAAACTGTATCGCAACATCCTGCTGTACGATGCCTATAAATTCGGCGATGACAATACCGTGGGTAAAGCCACGGAAGTTGCAGATTTTGACAATCCGAACCCGGCGATGCAACATTTCTTTGGTCCGGTCGGCAATAAAGTGGGTCATAACCAGCACGGCGCGTATGCGACCGGTGATGCAGTGTATTACATGGGCTACCGTATGCTGGATAAAGACGGTGCTATTACCTATACGCATGAAATGACCCACGATAGTGACCAGGATATCTACCTGGGCGGTTATGGTCGTCGCTCCGGTCTGGGCCCGGAATTTTTCGCTAAAGGTCTGCTGCAGGCGCCGGATCATCCGGATGACGCAACCATTACGATCAATTCAATTCTGAAACACTCGAAAAGCGACTCTACCGAATCGCGTCGCCTGCAAGTTCTGGATCCGACCACGCGCTTCAACAATGCGGATGACCTGAAACAGTATGTGCATAACATGTTTGATGTTGTCTACATGCTGGAATATCTGGAAGGCAATAGCATTCTGAAACTGGACACCAACCAGAAACAGCAACTGCTGCGTAAAGTTACGAATGAATATCACCCGGACCCGGATGGTAACAAAGTGTACGCGACCAATGTGGTTCGCAACCTGACGGTCGAAGAAGTGGAACGTCTGCGCTCATTCAACGACCTGATTGATAACAATATCCTGTCTAGTCGTGAATACGCATCGGGCAAATATGAACGCAATGGTTACTTTACCATTAAACTGTTCGCTCCGATCTACGCAGCTCTGAGTAACGACATTGGTACGCCGGGTGATCTGATGGGTCGTCGCATCGCCTATGAACTGCTGGCGGCCAAAGGCTTTAAAGATGGTATGGTTCCGTATATTAGCAATCAGTACGAAGAAGAAGCGAAACAAAAAGGTAAAACCATCAACCTGTATGGCAAAACCCGTGGTCTGGTGACGGATGACCTGGTTCTGGAAAAAGTCTTCAACAATCAATACCATACCTGGAGCGAATTTAAAAAAGCGATGTATCAGGAACGTCAGGACCAATTTGATCGCCTGAATAAAGTTACCTTCAACGATACCACGCAGCCGTGGCAAACGTTTGCGAAGAAAACCACGTCCTCAGTGGATGAACTGCAGAAACTGATGGACGTCGCCGTGCGTAAAGATGCAGAACATAACTACTACCACTGGAACAACTACAACCCGGACATTGATAGCGAAGTGCACAAACTGAAACGCGCGATCTTCAAAGCGTACCTGGACCAAACCAATGACTTCCGTTCTAGTATCTTCGAAAACAAAAAAAGATCTGGCGGTGGTGGTAGCGAATCGAAGTACGGTCCGCCGTGTCCGAGTTGCCCGGCTCCGGAGTTTCTGGGTGGCCCTAGCGTGTTCTTATTTCCGCCAAAGCCGAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCGGAGGTAACTTGCGTCGTCGTGGATGTTTCCCAAGAAGATCCGGAGGTGCAGTTTAACTGGTATGTGGACGGCGTTGAAGTTCATAATGCGAAAACCAAGCCGCGTGAAGAGCAGTTCAACAGCACCTATCGTGTGGTCTCCGTGTTGACGGTTCTTCACCAGGATTGGTTGAATGGTAAAGAATATAAGTGCAAAGTTTCCAATAAAGGCCTGCCGTCGAGCATTGAAAAAACGATTAGCAAGGCAAAGGGCCAACCTCGCGAGCCGCAAGTGTACACTCTGCCGCCGAGCCAAGAGGAAATGACCAAAAACCAGGTTTCATTGACCTGCCTGGTTAAGGGTTTTTACCCGAGCGACATCGCCGTTGAGTGGGAATCTAACGGCCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACCCCACCGGTTCTGGACAGCGATGGTTCCTTCTTCCTGTACTCCCGTCTCACCGTGGACAAAAGCCGTTGGCAAGAGGGAAACGTGTTCTCTTGTAGCGTGATGCATGAAGCGCTGCACAATCATTATACGCAGAAATCTCTGAGCCTTTCTCTGGGCAAA （SEQ ID NO: 12）
在某些實施方式中，本申請案提供的核酸包括如SEQ ID NO: 25所示的核酸序列。在某些實施方式中，本申請案提供的核酸由如SEQ ID NO: 25所示的核苷酸序列組成，或者與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性。 GGCAACACCACGAGCGAAAACGGTCAGACCGAACCGGAACCGTCCAACGGCAATTCAACGGAAGATGTTAGTACCGAATCCAATACGTCTAACAGTAACGGTAACGAAGAAATCAAACAGGAAAACGAACTGGATCCGGACAAAAAAGTCGAAGAACCGGAAAAAACCCTGGAACTGCGCAATGTGAGCGATCTGGAACTGTATTCCCTGTCAAACGGCACGTACAAACAGCATATCTCTCTGGAACAAGTTCCGTCGAATCCGAACAGCTACTTTGTTAAAGTCAAATCATCGAGCTTCAAAGATGTGTATCTGCCGGTTGCATCGATCAGCGAAGAACGTAAAAATGACAAAATCCTGTACAAAATCACCGCTAAAGTGGAAAAACTGCAGCAAGAAATCGAAAGCCGCTATAAAGATAACTTTACGTTCTACCTGGCGAAAAAAGGTACCGAAGAAACCACGAATTTTACGTCTTTCAGTAACCTGGTTAAAGCGATTAATCAGAACCCGTCAGGCACCTACCACCTGGCAGCTTCGCTGAATGCCAACGAAGTGGAACTGGGTCCGGACGAACGTAGCTATATTAAAGATACCTTCACGGGTCGCCTGATCGGCGAAAAAGATGGTAAAAACTACGCCATCTACAACCTGAAAAAACCGCTGTTTGAAAATCTGTCTGGCGCGACCGTTGAAAAACTGTCGCTGAAAAACGTCGCCATTAGCGGTAAAGATGACATCGGCTCTCTGGCGAATGAAGCCCAGAACAATACCAAAATCAAACAAGTGCATGTTGATGGCGTGCTGGCAGGTGAACGTGGCATTGGCGGTCTGCTGGCGAAAGCCGAACAGTCTAGTATCACCGAATCCTCATTTAAAGGTCGCATTATCAATACGTATGAAACCACGGCGGCCTACAACATTGGCGGTATGGTTGGCCACCTGACCGGTGATAAAGCCCTGCTGACCAAAAGCAAAGCAACGGTGGCTATCTCGAGCAATACCAACACGTCTGATCAGACCGTTGGCGGTCTGGCTGGTCTGGTCGATCGTGACGCGCAGATTCAAGACTCTTATGCCGAAGGCGATATCAACAATGTTAAACATTTTGGTCGCGTGGCGGGTGTTGCCGGCAATCTGTGGGACCGTACCAGTGGCGATGTTCGCCACGCAGGTTCGCTGACGAATGTCCTGAGCGATGTCAACGTGACCAATGGTAACGCTATTACGGGCTACCATTACAACGAAATGAAAGTGAAAGATACCTTCTCTAGTAAAGCGAATCGTGTCTATAACGTGACGCTGGTTAAAGATGAAGTCGTGTCAAAAGAATCGTTTGAAGAACGCGGCACCATGCTGGACGCATCTCAGATCGCTAGTAAAAAAGCGGAAATTAACCCGCTGATCCTGCCGACCGTTGAACCGCTGTCCACGTCAGGTAAAAAAGATAGCGACTTCTCTAAAGTGGCCTATTACCAGGCAAAACGTAACCTGACCTACAAAAACATCGAAAAACTGCTGCCGTTCTACAACAAAGCCACGATCGTCAAATACGGCAACCTGGTGAATGAAAACAGCCTGCTGTATCAGAAAGAACTGCTGTCTGCGGTGATGATGAAAGACAATCAGGTCATTACCGATATCGTGAGTAATAAACAAACGGCCAACAAACTGCTGCTGCATTATAAAGATGACCTGTCCGAAAAACTGGACCTGAAATATCAGAACGATTTCGCAAAACTGGCTGAATACTCACTGGGTAATACCGGCCTGCTGTATACGCCGAACCAGTTTCTGTACGATCAAACCTCGATTATCAAACAGGTGCTGCCGGACCTGCAAAAAGTTGATTACCACTCAGAAGCAATTCGCAAAACCCTGGGTATCTCGCCGAATGTGAAACAGACGGAACTGTATCTGGAAGATCAATTTGCTAAAACCAAACAGCAACTGGAAGACTCTCTGAAAAAACTGCTGAGTGCAGATGCTGGCCTGGCGTCTGCCAATCCGGTTACCGAAGGTTACCTGGTCGATAAAATTAAACGTAACAAAGAAGCCCTGCTGCTGGGCCTGACCTATCTGGAACGCTGGTACAATTTCAGCTATGGTCAGGTTAACGTCAAAGACCTGGTGCTGTATCATCTGGATTTCTTTGGTAAAGGCAACGCAAGTCCGCTGGATACCCTGATTGAACTGGGTAAATCCGGCTTTAACAATCTGCTGGCGAAAAACAATGTTGACACCTACGGCATCAGTCTGGCCTCCCAGCATGGTACCACGGACCTGTTTAGCACGCTGGAACACTATCGTAAAGTGTTCCTGCCGAATACCAGTAACAATGATTGGTTTAAATCCGAAACGAAAGCGTATATTGTGGAAGAAAAAAGCACCATCGAAGAAGTTAAAACGAAACAGGGTCTGGCGGGCACCAAATACAGTATTGGCGTTTATGATCGCATCACCAGCGCCACGTGGAAATATCGCAACATGGTGCTGCCGCTGCTGACCCTGCCGGAACGCTCTGTGTTCGTTATTAGTACGATGTCCTCACTGGGTTTTGGCGCCTACGACCGTTATCGCTCGAGCGATCATAAAGCGGGTAAAGCCCTGAATGATTTTGTGGAAGAAAACGCTCGTGAAACCGCGAAACGTCAGCGCGACCACTATGATTACTGGTATCGCATTCTGGATGACAATGCGCGTGAAAAACTGTATCGCAACATCCTGCTGTACGATGCCTATAAATTCGGCGATGACAATACCGTGGGTAAAGCCACGGAAGTTGCAGATTTTGACAATCCGAACCCGGCGATGCAACATTTCTTTGGTCCGGTCGGCAATAAAGTGGGTCATAACCAGCACGGCGCGTATGCGACCGGTGATGCAGTGTATTACATGGGCTACCGTATGCTGGATAAAGACGGTGCTATTACCTATACGCATGAAATGACCCACGATAGTGACCAGGATATCTACCTGGGCGGTTATGGTCGTCGCTCCGGTCTGGGCCCGGAATTTTTCGCTAAAGGTCTGCTGCAGGCGCCGGATCATCCGGATGACGCAACCATTACGATCAATTCAATTCTGAAACACTCGAAAAGCGACTCTACCGAATCGCGTCGCCTGCAAGTTCTGGATCCGACCACGCGCTTCAACAATGCGGATGACCTGAAACAGTATGTGCATAACATGTTTGATGTTGTCTACATGCTGGAATATCTGGAAGGCAATAGCATTCTGAAACTGGACACCAACCAGAAACAGCAACTGCTGCGTAAAGTTACGAATGAATATCACCCGGACCCGGATGGTAACAAAGTGTACGCGACCAATGTGGTTCGCAACCTGACGGTCGAAGAAGTGGAACGTCTGCGCTCATTCAACGACCTGATTGATAACAATATCCTGTCTAGTCGTGAATACGCATCGGGCAAATATGAACGCAATGGTTACTTTACCATTAAACTGTTCGCTCCGATCTACGCAGCTCTGAGTAACGACATTGGTACGCCGGGTGATCTGATGGGTCGTCGCATCGCCTATGAACTGCTGGCGGCCAAAGGCTTTAAAGATGGTATGGTTCCGTATATTAGCAATCAGTACGAAGAAGAAGCGAAACAAAAAGGTAAAACCATCAACCTGTATGGCAAAACCCGTGGTCTGGTGACGGATGACCTGGTTCTGGAAAAAGTCTTCAACAATCAATACCATACCTGGAGCGAATTTAAAAAAGCGATGTATCAGGAACGTCAGGACCAATTTGATCGCCTGAATAAAGTTACCTTCAACGATACCACGCAGCCGTGGCAAACGTTTGCGAAGAAAACCACGTCCTCAGTGGATGAACTGCAGAAACTGATGGACGTCGCCGTGCGTAAAGATGCAGAACATAACTACTACCACTGGAACAACTACAACCCGGACATTGATAGCGAAGTGCACAAACTGAAACGCGCGATCTTCAAAGCGTACCTGGACCAAACCAATGACTTCCGTTCTAGTATCTTCGAAAACAAAAAAAGATCTAGATCTGGATCAAGCGGGTCATCTGGAGAATCGAAGTACGGTCCGCCGTGTCCGAGTTGCCCGGCTCCGGAGTTTCTGGGTGGCCCTAGCGTGTTCTTATTTCCGCCAAAGCCGAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCGGAGGTAACTTGCGTCGTCGTGGATGTTTCCCAAGAAGATCCGGAGGTGCAGTTTAACTGGTATGTGGACGGCGTTGAAGTTCATAATGCGAAAACCAAGCCGCGTGAAGAGCAGTTCAACAGCACCTATCGTGTGGTCTCCGTGTTGACGGTTCTTCACCAGGATTGGTTGAATGGTAAAGAATATAAGTGCAAAGTTTCCAATAAAGGCCTGCCGTCGAGCATTGAAAAAACGATTAGCAAGGCAAAGGGCCAACCTCGCGAGCCGCAAGTGTACACTCTGCCGCCGAGCCAAGAGGAAATGACCAAAAACCAGGTTTCATTGACCTGCCTGGTTAAGGGTTTTTACCCGAGCGACATCGCCGTTGAGTGGGAATCTAACGGCCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACCCCACCGGTTCTGGACAGCGATGGTTCCTTCTTCCTGTACTCCCGTCTCACCGTGGACAAAAGCCGTTGGCAAGAGGGAAACGTGTTCTCTTGTAGCGTGATGCATGAAGCGCTGCACAATCATTATACGCAGAAATCTCTGAGCCTTTCTCTGGGCAAA （SEQ ID NO: 25）
載體和細胞
在另一方面，本申請案提供了一種載體，其包含編碼本申請案所述的IgA蛋白酶截短體或包含編碼本申請案所述的融合蛋白的核酸。
使用本領域習知的重組技術，可以將編碼所述的IgA蛋白酶截短體或融合蛋白的分離的多核苷酸插入載體，用於進一步的選殖（DNA的擴增）或用於表現。有多種載體可供選擇。載體組分通常包括但不限於下列的一種或多種：訊號序列、複製起始點、一種或多種標記基因、增強子元件、啟動子（例如SV40、CMV、EF-1α）和轉錄終止序列。
在某些實施方式中，本申請案提供的核酸編碼IgA蛋白酶截短體或融合蛋白、與核酸序列可操作連接的至少一種啟動子（例如SV40、CMV、EF-1α）和至少一種選擇標記。載體的實例包括但不限於：逆轉錄病毒（包括慢病毒）、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒（例如單純皰疹病毒）、痘病毒、桿狀病毒、乳頭瘤病毒、乳多空病毒（例如SV40）、λ噬菌體和M13噬菌體、質體pcDNA3.3、pMD18-T、pOptivec、pCMV、pEGFP、pIRES、pQD-Hyg-GSeu、pALTER、pBAD、pcDNA、pCal、pL、pET、pGEMEX、pGEX、pCI、pEGFT、pSV2、pFUSE、pVITRO、pVIVO、pMAL、pMONO、pSELECT、pUNO、pDUO、Psg5L、pBABE、pWPXL、pBI、p15TV-L、pPro18、pTD、pRS10、pLexA、pACT2.2、pCMV-SCRIPT.RTM.、pCDM8、pCDNA1.1/amp、pcDNA3.1、pRc/RSV、PCR 2.1、pEF-1、pFB、pSG5、pXT1、pCDEF3、pSVSPORT、pEF-Bos等。
可以將包含編碼所述IgA蛋白酶截短體或融合蛋白的核酸序列的載體引入宿主細胞，用於選殖或基因表現。適用於選殖或表現本申請案中所述的載體中的DNA的宿主細胞為上述的原核、酵母或高等真核細胞。適用於本申請案用途的原核細胞包括真細菌，如革蘭氏陰性菌或革蘭氏陽性菌，例如，腸桿菌科（ Enterobacteriaceae），例如，埃希氏菌屬（ Escherichia）（例如，大腸桿菌（ E. coli））、腸桿菌屬（ Enterobacter）、歐文氏菌屬（ Erwinia）、克雷白氏桿菌屬（ Klebsiella）、變形桿菌屬（ Proteus）、沙門氏菌屬（ Salmonella）（例如，鼠傷寒沙門（氏）桿菌（ Salmonella typhimurium））、沙雷氏菌屬（ Serratia）（例如，黏質沙雷氏菌（ Serratia marcescans））、志賀氏菌屬（ Shigella）、桿菌屬（ Bacilli）（例如，枯草芽孢桿菌（ B. subtilis）和地衣芽孢桿菌（ B. licheniformis））、假單胞菌屬（ Pseudomonas）（例如，綠膿桿菌（ P. aeruginosa）、以及鏈黴菌屬（ Streptomyces）。在某些實施方式中，所述細胞是大腸桿菌細胞。
除了原核細胞以外，真核生物細胞，例如真核微生物如絲狀真菌或酵母也可用作編碼融合蛋白的載體的合適的選殖或表現宿主。釀酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae），或麵包酵母是最常用的低等真核宿主微生物。但是，許多其他屬、種和株都比較常用且在本申請案中適用，例如，粟酒裂殖酵母（ Schizosaccharomyces pombe）；克魯維酵母屬（ Kluyveromyces）宿主，例如，乳酸克魯維酵母（ K. lactis）、脆壁克魯維酵母（ K. fragilis）（ATCC 12,424）、保加利亞克魯維酵母（ K. bulgaricus）（ATCC 16,045）、魏氏克魯維酵母（ K. wickeramii）（ATCC 24,178）、克魯雄酵母（ K. waltii）（ATCC 56,500）、果蠅克魯維酵母（ K. drosophilarum）（ATCC 36,906）、耐熱克魯維酵母（ K. thermotolerans）和馬克斯克魯維酵母（ K. marxianus）；解脂耶氏酵母（ yarrowia）（EP 402,226）；巴斯德畢赤酵母（ Pichia pastoris）（EP 183,070）；假絲酵母（Candida）；裡氏木黴（ Trichoderma reesia）（EP 244,234）；鏈孢黴（ Neurospora crassa）；西方許旺酵母（ Schwanniomyces），例如，西方許旺酵母（ Schwanniomyces occidentalis）；和絲狀真菌（Filamentous fungi），例如，脈孢菌（ Neurospora）、青黴菌（ Penicillium）、彎頸黴（ Tolypocladium）和曲黴菌（ Aspergillus）（例如，鉤巢麯黴（ A. nidulans）和黑麯黴（ A. niger））。在某些實施方式中，所述真核生物細胞是哺乳動物細胞。在某些實施方式中，所述哺乳動物細胞是人細胞或中國倉鼠卵巢（CHO）細胞。在某些實施方式中，所述哺乳動物細胞是人胚胎腎細胞293（HEK293細胞）。
藥物組合物
在另一方面，本申請案提供了一種藥物組合物，其包含本申請案所述的IgA蛋白酶截短體、包含本申請案所述的融合蛋白、包含本申請案所述的核酸、包含本申請案所述的載體或者包含本申請案所述的細胞，以及藥學上可接受的載體。
用於本申請案中公開的藥物組合物的藥學上可接受的載體可包括，例如，藥學上可接受的液體、凝膠或固體載劑、水相溶媒、非水相溶媒、抗微生物物質、等滲物質、緩衝液、抗氧化劑、麻醉劑、懸浮劑/分散劑、螯合劑、稀釋劑、佐劑、輔料或無毒輔助物質，其他本領域習知的組分或以上的多種組合。
適用的組分可包括，例如，抗氧劑、填充劑、粘合劑、崩解劑、緩衝液、防腐劑、潤滑劑、矯味劑、增稠劑、著色劑、乳化劑或穩定劑例如糖和環糊精。適用的抗氧劑可包括，例如，甲硫胺酸、抗壞血酸、EDTA、硫代硫酸鈉、鉑、過氧化氫酶、檸檬酸、半胱胺酸、巰基甘油、巰基乙酸、巰基山梨醇、丁基甲基茴香醚、丁基化羥基甲苯和/或沒食子酸丙酯。如本申請案所揭露，在包含本申請案揭露的IgA蛋白酶截短體或融合蛋白的組合物中包括一種或多種抗氧劑如甲硫胺酸，可降低所述IgA蛋白酶截短體或融合蛋白的氧化。本申請案進一步提供多種防止所述融合蛋白氧化、延長其保質期和/或提高其活性的方法，例如，透過將本申請案中提供的IgA蛋白酶截短體或融合蛋白與一種或多種抗氧劑（例如，甲硫胺酸）混合來實現。
進一步地說，藥學上可接受的載體可包括，例如，水相介質如氯化鈉注射液、林格氏液注射液、等滲葡萄糖注射液、無菌水注射液、或葡萄糖和乳酸林格注射液、非水介質例如：植物來源的不揮發性油、棉花籽油、玉米油、芝麻油、或者花生油、細菌抑制或真菌抑制濃度下的抗菌物質、等滲劑如：氯化鈉或葡萄糖、緩衝液如：磷酸鹽或枸櫞酸酸鹽緩衝液，抗氧化劑如：硫酸氫鈉，局部麻醉劑如：鹽酸普魯卡因，助懸劑和分散劑如：羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮，乳化劑如：聚山梨醇酯80（吐溫-80）、螯合試劑如EDTA（乙二胺四乙酸）或EGTA（乙二醇雙（2-胺基乙基醚）四乙酸）、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸或乳酸。作為運載體的抗菌劑可加入多劑量容器中的藥物組合物中，其包括酚類或甲酚、汞製劑、苯甲醇、氯代丁醇、甲基和丙基對羥基苯甲酸酯、噻汞撒、氯苯甲烷銨和氯苯乙銨。適用的輔料可包括，例如，水、鹽、葡萄糖、甘油或乙醇。適用的無毒輔助物質可包括，例如，潤濕劑、乳化劑、pH緩衝劑、穩定劑、增溶劑，或者醋酸鈉、去水山梨糖醇月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯或者環糊精之類的物質。
所述藥物組合物可以是液體溶液、懸浮液、乳劑、丸劑、膠囊、片劑、持續釋放製劑或粉末。口服製劑可以包括標準運載體如藥物級的甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。
在某些實施方式中，所述藥物組合物被製成可注射的組合物。可注射的藥物組合物可以任何常規的形式製備，例如，液體溶劑、懸浮劑、乳化劑或適用於產生液體溶劑、懸浮劑或乳化劑的固體形式。注射製劑可包括現用的無菌和/或無熱原溶液、使用前現與溶劑結合的無菌乾燥的可溶物，如凍乾粉，包括皮下片、注射即用的無菌懸浮劑、使用前現與介質結合的無菌乾燥不溶產品，和無菌和/或無熱原的乳劑。溶劑可以為水相或非水相。
在某些實施方式中，單位劑量的注射製劑包裝在一個安瓿、一支管或一支帶有針的針筒中。本領域習知，所有注射給藥的製劑應為無菌無熱原。
在某些實施方式中，透過將本申請案中公開的IgA蛋白酶截短體或者融合蛋白溶解於某適當的溶劑中可製備無菌凍乾的粉末。所述溶劑可含有一種可提高粉末或由粉末製得的重組溶液的穩定性，或改善粉末或重組溶液的其他藥理組分。適用的輔料包括，但不限於，水、葡萄糖、三梨糖醇、果糖、玉米糖漿、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他適用的物質。溶劑可含有緩衝液，如枸櫞酸緩衝液、磷酸鈉或磷酸鉀緩衝液或其他本領域中具有通常知識者習知的緩衝液，在一種實施方式中，緩衝液的pH為中性。在本領域習知的標準條件下進行對所述溶解進行隨後的過濾除菌，然後凍乾製得理想的製劑。在一種實施方式中，將所得的溶劑分裝至小管中凍乾。每支小管可容納單次劑量或多次劑量的所述IgA蛋白酶截短體或融合蛋白或其組合物。每支小管中的裝入量可略微高於每次劑量所需或多次劑量所需（例如10%過量），從而保證取樣精確和給藥精確。凍乾粉可在適當的條件下儲存，如在約4°C到室溫範圍。
用注射用水將凍乾粉重溶得到用於注射給藥的製劑。在一種實施方式中，可將凍乾粉加至無菌無熱原水或其他適用的液體載劑中重溶。精確的量由選擇的療法決定，可根據經驗值決定。
治療或預防疾病的方法
在另一方面，本申請案提供了一種治療或預防IgA沉積相關疾病的方法，其包括向需要治療或預防的受試者施用本申請案所述的IgA蛋白酶截短體、本申請案所述的融合蛋白或者本申請案所述的藥物組合物。
在另一方面，本申請案提供了一種治療或預防IgA沉積相關疾病的方法，其包括向需要治療或預防的受試者施用IgA蛋白酶或其截短體、包含所述IgA蛋白酶或其截短體的融合蛋白或者包含所述IgA蛋白酶或其截短體或者所述融合蛋白的藥物組合物，其中，所述IgA蛋白酶的胺基酸序列選自下組：SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或其組合。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體與如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29或SEQ ID NO: 30所示的多肽具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性）。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體與如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29或SEQ ID NO: 30所示的多肽具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性），並且仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。
SEQ ID NO: 26~30的胺基酸序列如下表所示。
SEQ ID NO 胺基酸序列
26 QETAGVHYKYVADSELSSEEKKQLVYDIPTYVENDDETYYLVYKLNSQNQLAELPNTGSKNERQALVAGASLAALGILIFAVSKKKVKNKTVLHLVLVAGIGNGVLVSVHALENHLLLNYNTDYELTSGEKLPLPKEISGYTYIGYIKEGKTTSDFEVSNQEKSAATPTKQQKVDYNVTPNFVDHPSTVQAIQEQTPVSSTKPTEVQVVEKPFSTELINPRKEEKQSSDSQEQLAEHKNLETKKEEKISPKEKTGVNTLNPQDEVLSGQLNKPELLYREETIETKIDFQEEIQENPDLAEGTVRVKQEGKLGKKVEIIRIFSVNKEEVSREIISTSTTAPIPRIVEKGTKKTQIIKEQPETGVEHKDVQSGAIVEPAIQPELSEAVVSDKGVPEVQPALPEAVVSDKGEPEQVATLPEYKGNIEQVKPETPVEKTKEEVPVKPTEETPVNPNEGTTEGTSIQEAENPVQPAEESTTNSEKVSPDTSSENTGEVSSNPSDSTTSVGESNKPEHNDSKNENSEKTVEEVPVNPNEGTVEGTSNQETEKPVQPAEETQTNSGKIANENTGEVSNKPSDSKPPVEESNQPEKNGTATKPENSGNTTSENGQPEPEPSNGNSTEDVSTESNTSNSNGNEEIKQENELDPDKKVEDPEKKLELRNVSDLELYSLSNGTYKQHISLEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNLSGTYRLGASLNANEVELGPDERSYIKDTFTGRLIGEKDGKNYAIYNLKKPLFENLSGATVEKLSLKNVAISGKDDIGSLANEAQNNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKADQSSITESSFKGRIVNTYETKSAYNIGGLVGHLTGDRASINSSKSTVVISSNTNSSDQTVGGISGLVDKDAHIQNSYSEGDINNSQRFGKVAGIAGNLWDRESNSENHAGRLTNVLSDVNVTNGNAISGYHYNGMKITDAFSNKANKVFNVTLEKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINLLTPPIVEPLSTSGKKDSDFSKIAHYQANRALVYKNIEKLLPFYNKTTIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKQTANKLLLHYKDDLSEKLDLKYQNDFAKLAEYSLGNTGLLYTPNQFLYDQTSIIKQVLPDLQKVDYHSEDIRKTLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKQQLEDSLKKLLSADAGLASANPVTEGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPNTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKTKQGLASTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRSSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDDNAREKLYRNILLYDAYKFGDDNTVGKATEVADFDNPNPAMQHFFGPVGNKVGHNQHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPDDATITINSILKHSKSDSTESRRLQVLDPTTRFNNADDLKQYVHNMFDVVYMLEYLEGNSILKLDTNQKQQLLRKVTNEYHPDPDGNKVYATNVVRNLTVEEVERLRSFNDLIDNNILSSREYASGKYERNGYFTIKLFAPIYAALSNDIGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEEAKQKGKTINLYGKTRGLVTDDLVLEKVFNNQYHTWSEFKKAMYQERQDQFDRLNKVTFNDTTQPWQTFAKKTTSSVDELQKLMDVAVRKDAEHNYYHWNNYNPDIDSEVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKK
27 QETAGVHYKYVADSELSSEEKKQLVYDIPTYVENDDETYYLVYKLNSQNQLAELPNTGSKNEMQALVAGASLATLGILIFAVSKKKVKNKTVLHLVLVAGIGNGVLVSVHALENHLLLNYNTDYELTSGEKLPLPKEISGYTYIGYIKEGKTTSDFEVSNQEKSAATPTKQQKVDYNVTPNFVDHPSTVQAIQEQTPVSSTKPTEVQVVEKPFSTELINPRKEEKQSSDSQEQLAEHKNLETKKEEKISPKEKTGVNTLNPQDEVLSGQLNKPELLYREETIETKIDFQEEIQENPDLAEGTVRVKQEGKLGKKVEIVRIFSVNKEEVSREIVSTSTTAPSPRIVEKGTKKTQVIKEQPETGVEHKDVQSGAIVEPAIQPELPEAVVSDKGEPEVQPTLPEAVVTDKGETEVQPESPDTVVSDKGEPEQVATLPEYKGNIEQVKPETPVEKTKEEVPVKPTEEVPVKPTEETPVNPNEGTTEGTSIQEAENPVQPAEESTTNSEKVSPDTSSENTGEVSSNPSDSTTSVGESNKPEHNDSKNENSEKTVEEVPVNPNEGTVEGTSNQETEKPVQPAEETQTNSGKIANENTGEVSNKPSDSKPPVEESNQPEKNGTATKPENSGNTTSENGHPEPEPSNGNSTEDVSTESNTSNSNGNEEIKQENELDPDKKVEDPEKKLELRNVSDLELYSLSNGTYKQHISLEQVPSNPNSYFVKVKSSSFKDVYLPVASISEERKNDKILYKITAKVEKLQQEIESRYKDNFTFYLAKKGTEETTNFTSFSNLVKAINQNLAGTYHLAASLNANEVELANTDNAYIKGTFTGKLIGKNNGKHYAIYNLKKSLFDSLSNATVENLSLKSVNISGKNDIGSLANEAKNGTTINEVHVDGLLGGERGIGGLVAKVDQSNITNSSFTGRIVNTYETKSAYNIGGLVGHLTGDRASINSSKSTVVISSNTNSSDQTVGGIAGLVDKDAHIQNSYSEGDINNSQRFGKVAGIAGNLWDRESNSENHAGRLTNVLSDVNVTNGNAISGYHYNGMKITDAFSNKANKVFNVTLEKDEVVSKESFEERGTMLDASQIASKKAEINLLTPPIVEPLSTSGKKDSDFSKIAHYQANRALVYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVKENSILYQKELLSAVMMKDDQVITDIISNKQTANKLLLHYKDHSSEKLELKYKDDFANLAEYSIGDSGLLYTPNQFLYDQTSIINQVLPELNRVNYQSDAVRNTLGISPEVKLTELYLEEQFTKTKQDLANSLKKLLSADAGLAGDNPVTRGYLVDKIKNNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVMYHPDFFGKGNTSPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYAISLASHHGTTDLFSTLENYRKVFLPDKTNNDWFKSQTKAYIVEEKSNIEEVKTKQELVGTKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPEKSVFVISTISSLGFGAYDRYRNSEHKAGKDLNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDNNAREKLYRNILLYDAYKLGDDNTVGKATKVASFDDPNPAMKYFFGPVGNKVGHNGHGAYATGDAVYYMGYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDQPSDATITINSILKHKTSDSTEGQRLQVLDPTTRFNDAADLQNYVHNMFDLIYMLEYLEGQSIVNKLSVYQKMAALRKIENKYVKDPADGNEVYATNVVKELTEAEARNLNSFESLIDHNILSAREYQSGDYERNGYYTIKLFAPIYSALSSEKGTPGDLMGRRMAYELLAAKGFKDGMVPYISNQFEADARANNKTITSYGKTKGLVTDTLVLQKLFNGQYNTWSDFKKAMYKERQDKFNKLNKISFKDPSQPWTRNIIKTIHSVNELQNLMNEAVRKDTETPHWYNYNPEIDSAVHKLKRAIFKAYLDQTNDFRSSIFENKK
28 QENVAVHYKYVTDTELSGQEKDLIVKDIPKIAEDSESTYYLVYRMDEKAQLGQLPNTGGQNSLTSVLTGGALASIGLLIFVVSKKKGKKKALLNVILVTGMGSGLASSVQAIENQLLLQYNQEYQLSQGDSLPLPRALSGYTYLGYIKQDKEINQQETAARDQKLDYTVQPHFQANEGGQKAGDEQKAPSSTSPADKTIPSQDLSNKKPSGIASVDPQDEVLAGRVNKPELLYKDQEIVTKLDVSEVVQENPDLAEGTIHVKQEGRAGKKIELVRIFTVENQEISREVLSTKVEEALPRIVEKGTKKAVAASEAPQSARKGEPETQAPLPEYTGEQAGAVVAPETAEKPEYTGTQAGAVVEPEQVAPLPEYQGTQAGAIVEPEQVEPEVGGVQSGALVEPETTDKPAYTGEQSGAIVEPEQVPPTPEYTGTQAGAIVDPEIAEKPEYTDTQSGAIVEPETQSSLPEYKGEQAGAIVEPEQVAPLPEYTGNTEQVKPETPTEKPKEKDPEKTLELRNVSDLELYSQTNGTYKQHVSLDGVPSNPDTYFVKVKSSSFKDVYLPVASITAEIKNGQPVYKITAKAEKLQQELENKYVDNFTFYLAKKAREETTTFTSFSNLVKAINQNLSGTYHLAASLNANEVELEPEAKSYIKGTFTGQLIGEKDGKQYAIYNLKKPLFETLSSATVEKLSLKNVSISGKDDIGALSYEAQNGTKIQQVHVDGVLAGERGIGGLLAKAEQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGLVGHLTGDKALLTKSKATVAISSNTNSSDQTVAGLAGLVDQDAQIQDSYAEGDINNAKHFGRVAGVAGYLWDRKTNEEQHAGRLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNGMKVKDTFSSKANRVYNVTLVKDEVVSKESFEERGTMLDASQIESKKAAINPLTLPTVEPLSTSGKKDSDFSKVAHYQAKRALAYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKETANKLLLHYKDHSSEKLNLKYQDDFAKLAEYSLGDTGLLYTPNQFLYDQSSIIKQVLPDLQKIDYHSEAIRKTLGISPKVEQTELYLEDQFAKTKQHLEDSLKKLLSADAGLAGANPVTKGYLVDKIKRNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLANQHGTTDLFSTLENYRKVFLPTTSNNDWFKSETKAYIVEEKSTIEEVKAKQGLAGTKYSVGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPEKSVFVISTMSSLGFGAYDRYRNSDHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDNEGREKLYRTILLYDAYKFGDDTTSGKATLEAKFDSSNPAMKNFFGPVGNKVVHNQHGAYATGDGVYYMSYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDQPSDATITINSILRHSKSDSAEGSRLQVLDPTERFQNASDLQSYVHNMFDLIYMLEYLEGQSIVNKLNVYQKMAALRKIENKYVKDPADGNEVYATNVVKELTEAEAQNLNSFESLIDHNILSAREYQSGEYERNGYYTIKLFAPIFSALSSEKGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEVAKQKGKTINLYGKERGLVTDKLVLDKVFEGKYSSWANFKKAMYKERVDQFENLKQVTFKDPTKPWPSYATKTINSVTELQELMDQAVLQDAVAPRWSNYNPEYDSAVHKLKRAIFKAYLDQTKDFRTSIFKK
29 QENVAVHYKYVTDTELSRQEKDLIVKDIPKIAEDSESTYYLVYRMDEKAQLGQLPNTGGQHSLTSVLSGGVMASIGLLIFVVSKKKGKKKALLNVILITGMGSGLVSSVQAIENQLLLQYNQEYQLSQGDSLPLPRTLSGYTYLGYIKQDKDASLQETAARGQKPDYTVQPRFQTNEGGQKAGDEQKATSPTTPAEKPIPSQDSSNQNPSGLASVDPQDEVLAGRVNKPELLYKDQEIVTKLDFSEVVQENSELAEGTIRVKQEGHAGKKVEVVRIFTVENQEISREVLSTNVEEALPRIVEKGTKKAVVPSEASQSARKGEPETQASLPEYKGEQAGAIVAPETAEKPEYTGTQAGAVVEPEQVAPQPEYQGTQAGAIVEPEQVEPEVGGVQSGALVEPEMAEKPSYTGEQSGAIVEPEQVPPTQEYTETQAGAVVAPETTETPEYTDNQSGAIVEPEIQSSLPEYKGEQAGAIVEPEQVAPLPEYTGNTEQVKPEAPTEKPKEKDPEKTLELRNVSDLELYSQTNGTYKQHVSLDSVPKNTETYFVKVKSSAVKDVYLPVSSITAETKNGQSVYKITAKAEKLQQELENKYVDNFTFYLAKKATEETTTFTSFSNLVKAIKQNLSGTYYLAASLNANEVELDPDEKSYIKGTFTGQLIGEKDGKQYAIYNLKKPLFETLSGARVEKLSLKNVSISGKDDIGSLAYEAQNGTKIKQVHIDGVLAGERGIGGLLAKADQSSITESSFKGRIINTYETTAAYNIGGLVGHLTGDKALLSKSKATVAISSNTNTSDQTVGGLAGLVDQDAQIQNSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGNLWDRTSGDVKYAGSLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNGMKVKDTFSSKANRVYNVTLFKDEVVSRESFEERGTMLDASQIESKKAAINPLTLPTVEPLSTSGKKDSDFSKVTHYQAKRALAYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDNQVITDIVSNKETANKLLLHYKDHSSEKLNLKYQDDFAKLAEYSLGDTGLLYTPNQFLYDQSSIIKQVLPDLQKVDYHSEAIKETLGISPNVKQTELYLEDQFAKTKEQLEDSLKKLLSADAGLAGDNPVTKGYLVDKIKHNKEALLLGLTYLERWYNFSYGQVNVKDLVLYHLDFFGKGNASPLDALIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASQHGTTDLFSTLEHYRKVFLPEKSNNDWFKSQTKAYIVEEKSTIEEVKTKQGQTGSKYSIGVYDRITSATWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTMSSLGFGAYDRYRNSEHKAGKALNDFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDNEGREKLYRTILLYDAYKFGDDTTSGKATVEAKFDSSNPAMKNFFGPVGNKVVHNQHGAYATGDGVYYMSYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDQPSDATITINSILKHSTSDSTEGSRLQVLDPTERFQKAADLQNYVHNMFDLIYMLEYLEGQSIVNKLSVYQKMAALRKIENKYVKDPSDGNEVYATNVVKELTAEEAQKLTSFESLIDHNILSAREYQSGEYERNGYYTIKLFAPIFSALSSEKGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEVAKQKGKTINLYGKERGLVTDKLVLDKVFEGKYSSWANFKKAMYKERVDQFENLKQVTFKDPTKPWPSYATKTINSVTELQELMDQAVLQDAVAPRWSDYKPEIDSAVHKLKRAIFKAYLDQTKDFRTSIFKK
30 QENVSVHYKYVTDTELSSHEKDLIVKDFPNIAEDSESTYYLVYRMDEKAQLGQLPHTGEHNNLVTALTGGALASIGLLIFAVSRKKGNKKALLKVVLITGVGSGLVSSVQAIENQLLLQYNQEYQLSQGDSLPLPRVLSGYTYLGYIKQDKKINQLETVARDQKLDDTVHPHFQSNEGGQNVRDERKNPSPTSPADKSIPSQDSPNQKPSGIASVDPHDEVLAGRLNKPELLYKDQEIVTKLDVLEVVQENPELAEGTIRVKQEGHVGKKVEVVRIFTVENQEITREILSTKVEKSLPRIVEKGTKKAVAPSEAPQSARKGEPETHASLPEYKGEQSGAIVAPEKTDKPSYTGTQSGAIVEPEQVAPQPEYKGIQSGAIVEPEKQEPEVGGAQSGALVEPETADKPSYTGPQSGAVVEPEQVAPQPEYKGTQAGAIVEPETQPSLPEYKGEQSGAIVAPEKTAKPSYTGTQSGAIVEPEKVAPQPEYKGTQAGAIVEPETHASLPEYKGEQSGAIVAPETTEKTEYTGIQSGVIVEPETADKPSYTGTQSGAVVEPEQVAPQPEYTGTQAGTIVEPETLASLPEYKGEQSGAVVAPETADKPEYTGIQSGAIVEPEQAPSKPSYTGTQSGAIVEPEQIAPLPEYTGNIEQAKPENPAEKPKEKDPEKTLELRNVSDLELYSQTNGTYKQHVSLDSVPSNPDTYFVKVKSSSFKDVYLPVASITAEIKNGQSVYKIIAKAEKLQQELENKYVDNFTFYLAKKATEETTTFTSFSNLVKAINKNLSGTYHLAASLNANEVELGPDDRSYIKGTFTGQLMGEKDGKQYAIYNLKKPLFATLRGATVEKLSLKNVSISGKDDIGSLANEATDNTKIKQVHVDGVLAGERGIGGLLAKADQSSITESSFKGRIVNTYETTAAYNIGGLVGHLTGGRASLTKSKATVAISSNTNSSDQTVGGLAGLVDQDAHIQDSYAEGDINNVKHFGRVAGVAGYLWDRKTNEEQHAGRLTNVLSDVNVTNGNAITGYHYNEMKVANTFSNKANRVYNVTLVREEVVSKESFVERGTILDASEVTNKKAEITPLTPPIVEPLSTSGSKESDFSKVKHYQVKRALAYKNIEKLLPFYNKATIVKYGNLVNENSLLYQKELLSAVMMKDDQVITDIVSNKQTANKLLLHYQDHSSETFQIKYQTDFAKLAEYSLGDTGLLYTPNQFLYNQETIIQQVLPELKKVNYHSDAIRNTLGISPKVKQTELYLEEQFAKTKEHLEDSLRKLLSADAGLVENNQVMTGYIVDKIKRNKEALLLGMSYLERWYNFSYGQVNIKDLVLYHLDFFGKGNASPLDTLIELGKSGFNNLLAKNNVDTYGISLASHHGTTDLFSTLENYRKVFLPNTSNNDWFKKQTKAFIVEEKSTIAEVKAKQEQAGTKYSIGVYDRITSSTWKYRNMVLPLLTLPERSVFVISTLSSLGFGAYDRYRNSDYRAGDKLNKFVEENARETAKRQRDHYDYWYRILDNQGREKLYRTILLYDAYKFGDDHTEGKASTIADFENSNPAMQHFFGPVGNKVVHNHHGAYATGDGVYYMSYRMLDKDGAITYTHEMTHDSDQDIYLGGYGRRSGLGPEFFAKGLLQAPDHPNDATITINSILKHSKSDSLEGSRLQVLDPTERFKDASDLQKYVHNMFDLIYLLEYLEGQSIVKKLNVSQKMEALRKIENKYVKDPADGNDVYATNVVKDLTEEEAKKLTSFDSLIDNNILSAREYQVGTYERNGYFTIKLFAPIFSALSSEKGTPGDLMGRRIAYELLAAKGFKDGMVPYISNQYEEIAKQNGQTINLYGKKQGLVTDKLVLEKLFGGQYSSWAAFKKAMYQERVAQFDHLNKVTFKDPTQSWMSNATKTIQRVNELQELMDQAVLKDAEGTRWSDYNPETDSAVHKLKRAVFKAYLDQTNDFRTSIFANKK
在另一方面，本申請案提供了本申請案所述的IgA蛋白酶截短體、本申請案所述的融合蛋白或者本申請案所述的藥物組合物在製備用於治療或預防IgA沉積相關疾病的藥物中的用途。
在另一方面，本申請案提供了IgA蛋白酶或其截短體、包含所述IgA蛋白酶或其截短體的融合蛋白或者包含所述IgA蛋白酶或其截短體或者所述融合蛋白的藥物組合物在製備用於治療或預防IgA沉積相關疾病的藥物中的用途，其中，所述IgA蛋白酶的胺基酸序列選自下組：SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或其組合。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶的胺基酸序列是如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29或SEQ ID NO: 30所示的胺基酸序列去掉訊息肽序列之後形成的胺基酸序列。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體與如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29或SEQ ID NO: 30所示的多肽具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性）。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體與如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29或SEQ ID NO: 30所示的多肽具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性），並且仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。
在另一方面，本申請案提供了用於治療或預防IgA沉積相關疾病的如本申請案所述的IgA蛋白酶截短體、如本申請案所述的融合蛋白或者如本申請案所述的藥物組合物。
在另一方面，本申請案提供了用於治療或預防IgA沉積相關疾病的IgA蛋白酶或其截短體、包含所述IgA蛋白酶或其截短體的融合蛋白或者包含所述IgA蛋白酶或其截短體或者所述融合蛋白的藥物組合物，其中，所述IgA蛋白酶的胺基酸序列選自下組：SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或其組合。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶的胺基酸序列是如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29或SEQ ID NO: 30所示的胺基酸序列去掉訊息肽序列之後形成的胺基酸序列。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體與如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29或SEQ ID NO: 30所示的多肽具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性）。在某些實施方式中，所述IgA蛋白酶截短體與如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29或SEQ ID NO: 30所示的多肽具有至少70%的序列同一性（例如，具有至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的序列同一性），並且仍然保持IgA蛋白酶的功能或活性（例如，蛋白水解活性、特異性切割IgA的酶活性等）。
在某些實施方式中，本申請案所述的IgA沉積相關疾病包括IgA腎病、皰疹樣皮炎、類過敏性紫斑（又稱IgA血管炎）、川崎病、紫斑性腎炎、IgA血管炎腎損害、IgA類風濕因子陽性的類風濕性關節炎、IgA型抗GBM病或IgA型ANCA相關血管炎。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA沉積相關疾病為IgA腎病。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA沉積相關疾病為IgA1腎病。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA沉積相關疾病為IgA血管炎。在某些實施方式中，本申請案所述的IgA沉積相關疾病為川崎病。
具體實施方式
所有實施例中的關於的生物學材料如大腸桿菌菌株、各種選殖與表現質體、培養基、工具酶、緩衝液，和各種培養方法、蛋白提取和純化方法、其它的分子生物學操作方法，均為該領域中具有通常知識者所熟悉，可以參考Sambrook等人編著的「分子選殖」（實驗室手冊，冷泉港，1989）及「精編分子生物學實驗指南」（美/F.奧斯伯等著，顏子穎等譯，北京，科學出版社，1998）。
實施例 1 ： TIGR4 IgA 蛋白酶的活性位點研究
發明人將來自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶（其胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示）N末端的訊息肽（即，SEQ ID NO: 1的第1至42位胺基酸）去掉，建構了PET30a-TIGR4質體。然後，發明人以PET30a-TIGR4質體為範本，建構了一系列TIGR4 IgA蛋白酶截短體，並於原核細胞（大腸桿菌）中進行表現以研究TIGR4 IgA蛋白酶的活性位點。如圖1所示，從SEQ ID NO: 1的N末端開始起算，當截短至第745位胺基酸時形成的C末端截短體TIGR4 (745-2004)（其胺基酸序列如SEQ ID NO: 3所示）的IgA酶切活性開始減弱；當截短至第845位胺基酸時形成的C末端截短體TIGR4 (845-2004)（其胺基酸序列如SEQ ID NO: 4所示）、當截短至第945位胺基酸時形成的C末端截短體TIGR4 (945-2004)均無體外酶切活性。因此，可以得出結論：TIGR4 IgA蛋白酶的活性位點位於第43位至第745位胺基酸之間。
實施例 2 ：製備包含 TIGR4 IgA 蛋白酶截短體的融合蛋白
2.1 質體建構
發明人將來自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶（其胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示）N末端的訊息肽（即，SEQ ID NO: 1的第1至42位胺基酸）去掉，然後將人IgG1的Fc序列（HR-CH2-CH3，其胺基酸序列如SEQ ID NO: 13所示）加在去掉了訊息肽的IgA蛋白酶的胺基酸序列（即，由SEQ ID NO: 1的第43位至第2004位胺基酸組成的IgA蛋白酶截短體）的N末端，建構了PET30a-IgG1 Fc-TIGR4 (43-2004)質體。按照類似的策略，發明人還建構了PET30a-IgG1 Fc-TIGR4 (665-2004)質體。
發明人將來自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶（其胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示）N末端的第1-664位胺基酸（即，SEQ ID NO: 1的第1至664位胺基酸）去掉，然後將人IgG1的Fc序列（其胺基酸序列如SEQ ID NO: 13所示）加在TIGR4 (665-2004) IgA蛋白酶截短體的C末端，建構了pET30a-TIGR4 (665-2004)-IgG1 Fc質體。按照類似的策略，發明人還建構了兩種pET30a-TIGR4 (665-2004)-IgG4 Fc質體（區別在於使用的連接子不同）。
2.2 融合蛋白製備方法
將實施例2.1中建構的五種質體表現載體分別轉染入大腸桿菌（BL21-DE3）勝任細胞，經含50μg/ml的卡那黴素的LB瓊脂培養皿抗性選擇，然後挑取單株菌落至含相應抗生素的LB培養液中震盪培養至指數生長期（OD600：0.6-0.8），至指數生長期後，加入0.1-0.5 mM的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導，16℃低溫誘導表現24h（或37℃誘導3h）。還將pET30a-TIGR4 (665-2004)-IgG1 Fc質體轉染入真核表現系統HEK293細胞。完成表現後按照常規方法處理大腸桿菌胞體超音波碎裂後高速離心並保留上清液，然後採用親和層析及分子篩純化得到所述重組融合蛋白。
PET30a-IgG1 Fc-TIGR4 (43-2004)質體表現的融合蛋白（下稱「融合蛋白1」）的胺基酸序列如SEQ ID NO: 5所示，其編碼核酸序列如SEQ ID NO: 9所示；其中，融合蛋白1包含如SEQ ID NO: 13所示的IgG1 Fc結構域和TIGR4 (43-2004)截短體；
PET30a-IgG1 Fc-TIGR4 (665-2004)質體表現的融合蛋白（下稱「融合蛋白2」）的胺基酸序列如SEQ ID NO: 6所示，其編碼核酸序列如SEQ ID NO: 10所示；其中，融合蛋白2包含如SEQ ID NO: 13所示的IgG1 Fc結構域和如SEQ ID NO: 2所示的TIGR4 (665-2004)截短體；
pET30a-TIGR4 (665-2004)-IgG1 Fc質體表現的融合蛋白（下稱「融合蛋白3」）的胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示，其編碼核酸序列如SEQ ID NO: 11所示；其中，融合蛋白3包含如SEQ ID NO: 2所示的TIGR4 (665-2004)截短體和如SEQ ID NO: 13所示的IgG1 Fc結構域；
一種pET30a-TIGR4 (665-2004)-IgG4 Fc質體表現的融合蛋白（下稱「融合蛋白4」）的胺基酸序列如SEQ ID NO: 8所示，其編碼核酸序列如SEQ ID NO: 12所示；其中，融合蛋白4包含如SEQ ID NO: 2所示的TIGR4 (665-2004)截短體和如SEQ ID NO: 14所示的IgG4 Fc結構域；
另外一種pET30a-TIGR4 (665-2004)-IgG4 Fc質體表現的融合蛋白（下稱「融合蛋白5」）的胺基酸序列如SEQ ID NO: 24所示，其編碼核酸序列如SEQ ID NO: 25所示；其中，融合蛋白5包含如SEQ ID NO: 2所示的TIGR4 (665-2004)截短體和如SEQ ID NO: 14所示的IgG4 Fc結構域。
2.3 體外活性測試方法
將獲得的包含TIGR4 IgA蛋白酶截短體的融合蛋白1、融合蛋白2、融合蛋白3、融合蛋白4和融合蛋白5分別與從健康人血漿中提純的基質IgA在體外混合，37℃下過夜反應，然後進行Western blot，驗證其對基質IgA的酶切活性。
2.4 體內活性測試方法
將獲得的包含TIGR4 IgA蛋白酶截短體的融合蛋白4和融合蛋白5分別透過尾靜脈注射到人源化IgA1 alpha鏈敲入（α1KI-Tg）C57BL/6小鼠體內，分別在收集注射前，注射後2小時、1天、2天、3天、5天、7天的血樣，然後進行Western blot驗證。
2.5 結果
體外活性實驗表明，融合蛋白1和融合蛋白2在體外有針對IgA的酶切活性（分別如圖2a和圖3a所示），但融合蛋白1和融合蛋白2有很多非全長蛋白酶表現（分別如圖2b和圖3b所示）。
體外活性實驗表明，pET30a-TIGR4 (665-2004)-IgG1 Fc質體在原核細胞中成功表現融合蛋白3（如圖4b所示），同時也具有體外針對IgA的酶切活性（如圖4a所示）。pET30a-TIGR4 (665-2004)-IgG1 Fc質體在HEK293真核細胞中有表現，但是沒有檢測到體外針對IgA的酶切活性（資料未示出）。此外，使用鎳柱及S200純化後活性驗證顯示，使用鎳純化得到的融合蛋白3在4℃放置過夜或者24小時後均仍具有體外針對IgA的酶切活性；使用S200純化得到的F1、F2和F3峰值也均在體外具有針對IgA的酶切活性（如圖5所示）。其中，F1和F2中融合蛋白3形成二聚體的比例最高（如圖6所示）。將所得峰值於37℃下放置，結果顯示F1在6小時後仍有明顯的融合蛋白3的條帶，但是在放置21小時以上時，融合蛋白3被切割，僅剩下被切掉Fc的IgA蛋白酶截短體TIGR4 (665-2004)以及IgG1 Fc上的一些殘留的胺基酸（如圖7a、7b所示）。
體外活性實驗表明，pET30a-TIGR4 (665-2004)-IgG4 Fc質體同樣成功表現融合蛋白4，且F1、F2和F3均有一部分形成了二聚體形式（如圖8a所示）。此外，穩定性試驗顯示：鎳純化的樣品在37℃放置40h後，甚至80h後，仍然具有清晰的目的條帶，顯示融合蛋白4具有良好的穩定性（如圖8b所示）。
體外活性實驗還表明，另一種pET30a-TIGR4 (665-2004)-IgG4 Fc質體也成功表現融合蛋白5，同時也具有體外針對IgA的酶切活性（如圖10a所示）。此外，穩定性試驗顯示：鎳純化的樣品在37℃放置9天后，仍然具有清晰的目的條帶，顯示融合蛋白5具有良好的穩定性（如圖10b所示）。
體內活性實驗還表明，人源化IgA1（α1KI-Tg）C57BL/6小鼠在接受融合蛋白4的單針尾靜脈注射後，血液中的IgA被融合蛋白4酶切為Fc段和Fab段，並且持續至少5天（如圖9所示）。體內活性實驗也表明，人源化IgA1（α1KI-Tg）C57BL/6小鼠在接受融合蛋白5的單針尾靜脈注射後，血液中的IgA被融合蛋白5酶切為Fc段和Fab段，並且持續至少5天（如圖11所示）。
實施例 3 ：探索其他 IgA 蛋白酶
發明人從基因組資料庫裡篩選了若干種與肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶具有一定同源性的胺基酸序列，並合成了5種TIGR4同源酶。它們的胺基酸序列分別如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30所示。發明人按照實施例2、3所述的體外活性測試方法，分別測試了這些TIGR4同源酶對IgA1的酶切活性。結果如圖12所示。圖12中的「肺炎鏈球菌-1」表示如SEQ ID NO: 26所示的多肽與基質IgA1在體外混合；「肺炎鏈球菌-2」表示如SEQ ID NO: 27所示的多肽與基質IgA1在體外混合；「口腔鏈球菌-1」表示如SEQ ID NO: 28所示的多肽與基質IgA1在體外混合；「口腔鏈球菌-2」表示如SEQ ID NO: 29所示的多肽與基質IgA1在體外混合；「緩症鏈球菌-2」表示如SEQ ID NO: 30所示的多肽與基質IgA1在體外混合。
由圖12可知，如SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30所示的多肽均對IgA1具有酶切活性。
雖然本申請案透過引用特定實施例的方式對發明進行特定的展現和描述，但是本領域中具有通常知識者都應該理解，在不脫離本申請案揭露的主旨和保護範圍的情況下，上述內容還可以進行各種形式和細節上的變化。
無
圖1顯示不同TIGR4 IgA截短體TIGR4 (745-2004)、TIGR4 (845-2004)和TIGR4 (945-2004)對IgA1的體外酶切活性實驗結果。
圖2 a部份顯示融合蛋白1對IgA1的體外酶切活性實驗結果，圖2 b部份顯示融合蛋白1在原核細胞BL21（DE3）中的表現情況。
圖3a顯示融合蛋白2對IgA1的體外酶切活性實驗結果，圖3b顯示融合蛋白2在原核細胞BL21（DE3）中的表現情況。
圖4 a部份顯示融合蛋白3對IgA1的體外酶切活性實驗結果，圖4 b部份顯示融合蛋白3在原核細胞BL21（DE3）中的表現情況。
圖5顯示分別使用鎳和S200純化得到的融合蛋白3對IgA1的體外酶切活性實驗結果。
圖6顯示使用鎳純化得到的融合蛋白3在4℃放置下不同時間點的聚集狀態，使用S200純化得到的融合蛋白3的不同峰值的聚集狀態；以及純化產品的液相色譜圖。
圖7 a部份顯示使用S200純化得到的融合蛋白3的第一個峰值F1在37℃放置不同時間的穩定性；圖7 b部份顯示使用S200純化得到的融合蛋白3在37℃放置不同時間的穩定性。
圖8 a部份顯示分別使用鎳和S200純化得到的融合蛋白4的聚集情況；圖8 b部份顯示鎳純化得到的融合蛋白4在37℃放置不同時間的穩定性。
圖9顯示融合蛋白4在人源化IgA1（α1KI-Tg）C57BL/6小鼠中的體內活性。
圖10 a部份顯示融合蛋白5對IgA1的體外酶切活性實驗結果；圖10 b部份顯示鎳純化得到的融合蛋白5在37℃放置不同時間的穩定性。
圖11顯示融合蛋白5在人源化IgA1（α1KI-Tg）C57BL/6小鼠中的體內活性。
圖12顯示5種TIGR4同源酶對IgA1的酶切活性實驗結果。
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Claims (63)

  1. 一種融合蛋白，其包含第一多肽及第二多肽，其中所述第一多肽是IgA蛋白酶截短體，所述第二多肽不能被IgA蛋白酶或IgA蛋白酶截短體切割。
  2. 如請求項1所述的融合蛋白，其中所述的IgA蛋白酶截短體包含獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的非天然截短片段，或者與所述非天然截短片段具有至少70%的序列同一性。
  3. 如請求項2所述的融合蛋白，其中所述非天然截短片段在所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的基礎上有胺基酸突變、缺失、插入或修飾，使得所述IgA蛋白酶截短體喪失或降低自酶切功能。
  4. 如請求項3所述的融合蛋白，其中所述胺基酸突變、缺失、插入或修飾發生在所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的天然自酶切位點、所述天然自酶切位點的上游5個胺基酸殘基以內和/或下游5個胺基酸殘基以內。
  5. 如請求項2～4中任一項所述的融合蛋白，其中所述非天然截短片段為獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的N末端截短片段或C末端截短片段。
  6. 如請求項2～5中任一項所述的融合蛋白，其中所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的寄存編號為ATCC BAA-334。
  7. 如請求項5或6所述的融合蛋白，其中所述C末端截短片段包含獲得自或衍生自肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的第43位起的至少703個連續胺基酸的多肽片段，或者與所述多肽片段具有至少70%的序列同一性。
  8. 如請求項7所述的融合蛋白，其中所述肺炎鏈球菌（ Streptococcus pneumoniae）TIGR4株的野生型IgA蛋白酶的胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。
  9. 如請求項8所述的融合蛋白，其中所述天然自酶切位點在如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第43位至第745位之間。
  10. 如請求項8所述的融合蛋白，其中所述天然自酶切位點在如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第71位和第72位之間、第210位和第211位之間、第228位和第229位之間、第239位和第240位之間、第245位和第246位之間、第382位和第383位之間、第418位和第419位之間、第439位和第440位之間、第490位和第491位之間、第506位和第507位之間、第509位和第510位之間、第514位和第515位之間、第533位和第534位之間、第536位和第537位之間、第563位和第564位之間、第594位和第595位之間、第613位和第614位之間、第616位和第617位之間、第639位和第640位之間、第645位和第646位之間、或者第678位和第679位之間。
  11. 如前述請求項中任一項所述的融合蛋白，其中所述第一多肽包含如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第665位起的至少1300個（例如，至少1310個、至少1320個、至少1330個、或者至少1340個）連續胺基酸的多肽片段。
  12. 如前述請求項中任一項所述的融合蛋白，其中所述第一多肽包含如SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列的第665位至第2004位胺基酸的多肽片段或者與其具有至少70%的序列同一性的多肽片段。
  13. 如請求項12所述的融合蛋白，其在所述多肽片段的胺基酸序列基礎上，在一個或多個位點具有胺基酸的保守替換。
  14. 如前述請求項中任一項所述的融合蛋白，其具有特異性切割人IgA的酶活性。
  15. 如請求項14所述的融合蛋白，其具有特異性切割人IgA重鏈的酶活性。
  16. 如請求項15所述的融合蛋白，其具有特異性切割人IgA重鏈鉸鏈區的酶活性。
  17. 如請求項14～16中任一項所述的融合蛋白，其具有特異性切割人IgA1的酶活性。
  18. 如前述請求項中任一項所述的融合蛋白，其中所述第一多肽包含如SEQ ID NO: 2所示的胺基酸序列。
  19. 如前述請求項中任一項所述的融合蛋白，其中所述第二多肽位於所述第一多肽的N末端或者C末端。
  20. 如前述請求項中任一項所述的融合蛋白，其中所述第一多肽和所述第二多肽之間透過連接子連接。
  21. 如請求項1～19中任一項所述的融合蛋白，其中所述第一多肽和所述第二多肽之間直接連接。
  22. 如請求項20所述的融合蛋白，其中所述連接子選自下組：可切割連接子、不可切割連接子、肽連接子、柔性連接子、剛性連接子、螺旋連接子和非螺旋連接子。
  23. 如請求項22所述的融合蛋白，其中所述連接子包括肽連接子。
  24. 如請求項23所述的融合蛋白，所述肽連接子包括含有甘胺酸和絲胺酸的連接子。
  25. 如請求項24所述的融合蛋白，其中所述含有甘胺酸和絲胺酸的連接子包括如SEQ ID NO: 15 (GGGS)、SEQ ID NO: 16 (GGGGS)、SEQ ID NO: 17 (GGGGGGS)或SEQ ID NO: 19 (GSS)所示的胺基酸序列的一個、兩個、三個、四個或更多個重複。
  26. 如請求項25所述的融合蛋白，其中所述連接子包括如SEQ ID NO: 18 (GGGGSGGGGSGGGGS)所示、如SEQ ID NO: 20 (GSSGSSG) 所示或者如SEQ ID NO: 21 (RSGSSGSSG) 所示的胺基酸序列。
  27. 如前述請求項中任一項所述的融合蛋白，其中所述第二多肽包含用於延長所述第一多肽在受試者體內半衰期的胺基酸序列。
  28. 如請求項27所述的融合蛋白，其中所述第二多肽選自：Fc結構域和白蛋白。
  29. 如請求項28所述的融合蛋白，其中所述Fc結構域包含鉸鏈區。
  30. 如請求項29所述的融合蛋白，其中所述Fc結構域來源於人IgG Fc結構域。
  31. 如請求項30所述的融合蛋白，其中所述Fc結構域來源於人IgG4 Fc結構域。
  32. 如請求項28～31中任一項所述的融合蛋白，其中所述Fc結構域包含與SEQ ID NO: 14具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%的序列同一性的胺基酸序列。
  33. 如請求項32所述的融合蛋白，其中所述Fc結構域包含如SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列。
  34. 如請求項28～33中任一項所述的融合蛋白，其中所述Fc結構域包含一個或多個延長所述融合蛋白的半衰期的突變。
  35. 如請求項28～34中任一項所述的融合蛋白，其中所述Fc結構域與所述第一多肽的C末端或者N末端連接。
  36. 如前述請求項中任一項所述的融合蛋白，其中所述第一多肽的胺基酸序列如SEQ ID NO: 2所示，並且所述第二多肽的胺基酸序列如SEQ ID NO: 14所示。
  37. 如請求項36所述的融合蛋白，其中所述第一多肽和所述第二多肽直接透過如SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21所示的連接子連接。
  38. 如請求項36所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白的胺基酸序列如SEQ ID NO: 8所示或者如SEQ ID NO: 24所示。
  39. 如請求項28所述的融合蛋白，其中所述白蛋白包含人血清白蛋白的一個或多個結構域。
  40. 如請求項39所述的融合蛋白，其中所述白蛋白包含人血清白蛋白的D3結構域。
  41. 如前述請求項中任一項所述的融合蛋白，其進一步包含標記。
  42. 如請求項41所述的融合蛋白，其中所述標記選自下組：螢光標記、發光標記、純化標記和呈色標記。
  43. 如請求項41或42所述的融合蛋白，其中所述標記選自下組：c-Myc標記、HA標記、VSV-G標記、FLAG標記、V5標記和HIS標記。
  44. 如請求項43所述的融合蛋白，其中所述標記是包含6個、7個、8個、9個、10個或更多個組胺酸的HIS標記。
  45. 如請求項41～44中任一項所述的融合蛋白，其中所述第二多肽位於所述第一多肽的C末端，所述標記位於所述第二多肽的C末端。
  46. 如請求項41～45中任一項所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白在受試者體內的血循環中的半衰期為至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天。
  47. 一種分離的核酸，其包含編碼如請求項1～46中任一項所述的融合蛋白的核苷酸序列。
  48. 如請求項47所述的核酸，其包含如SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 25所示的核苷酸序列或者與其具有至少70%的序列同一性的核苷酸序列。
  49. 一種載體，其包含如請求項47或48所述的核酸。
  50. 一種細胞，其包含如請求項47或48所述的核酸或如請求項49所述的載體。
  51. 如請求項50所述的細胞，其中所述細胞是原核生物細胞或真核生物細胞。
  52. 如請求項51所述的細胞，其中所述原核生物細胞是大腸桿菌細胞。
  53. 如請求項51所述的細胞，其中所述真核生物細胞是哺乳動物細胞。
  54. 如請求項53所述的細胞，其中所述哺乳動物細胞是人細胞或中國倉鼠卵巢（CHO）細胞。
  55. 如請求項54所述的細胞，其中所述哺乳動物細胞是人胚胎腎細胞293（HEK293細胞）。
  56. 一種藥物組合物，其包含如請求項1～46中任一項所述的融合蛋白、包含如請求項47或48所述的核酸、包含如請求項49所述的載體或者包含如請求項50～55中任一項所述的細胞，以及藥學上可接受的載體。
  57. 一種產生融合蛋白的方法，其包括培養如請求項50～55中任一項所述的細胞的步驟。
  58. 一種治療或預防IgA沉積相關疾病的方法，其包括向需要治療或預防的受試者施用如請求項1～46中任一項所述的融合蛋白或者如請求項56所述的藥物組合物。
  59. 一種治療或預防IgA沉積相關疾病的方法，其包括向需要治療或預防的受試者施用IgA蛋白酶或其截短體、包含所述IgA蛋白酶或其截短體的融合蛋白或者包含所述IgA蛋白酶或其截短體或者所述融合蛋白的藥物組合物，其中，所述IgA蛋白酶的胺基酸序列選自下組：SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或其組合。
  60. 如請求項1～46中任一項所述的融合蛋白或者如請求項56所述的藥物組合物在製備用於治療或預防IgA沉積相關疾病的藥物中的用途。
  61. IgA蛋白酶或其截短體、包含所述IgA蛋白酶或其截短體的融合蛋白、或者包含所述IgA蛋白酶或其截短體、或者所述融合蛋白的藥物組合物在製備用於治療或預防IgA沉積相關疾病的藥物中的用途，其中，所述IgA蛋白酶的胺基酸序列選自下組：SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或其組合。
  62. 如請求項58或59所述的方法或者如請求項60或61所述的用途，其中所述IgA沉積相關疾病包括IgA腎病、皰疹樣皮炎、類過敏性紫斑（又稱IgA血管炎）、川崎病、紫斑性腎炎、IgA血管炎腎損害、IgA類風濕因子陽性的類風濕性關節炎、IgA型抗GBM病或IgA型ANCA相關血管炎。
  63. 如請求項58或59所述的方法或者如請求項60或61所述的用途，其中所述IgA沉積相關疾病為IgA腎病、IgA血管炎或川崎病。
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