TW202408469A - 醫藥組合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

一種醫藥組合物，包含（a）癌細胞線粒體的靶向劑、（b）離子螯合劑、與（c）藥理活性的多價離子。（a）的重量比以醫藥組合物總重計為64.5%~43.7%，（b）的重量比以醫藥組合物總重計為56.2%~16.1%，（c）的重量比以醫藥組合物總重計為19.4%~0.000116%。

Description

醫藥組合物及其用途
本發明大致上關於一種醫藥組合物、包含此醫藥組合物的套組、以及其用途。特定言之，本發明係針對一種可以治療動物細胞不正常生長之惡性疾病之醫藥組合物、包含此醫藥組合物的套組、以及此醫藥組合物與此醫藥套組之用途。
癌症是一個全球性的重大健康問題，不僅影響人類，也影響其他物種。惡性腫瘤的發展是由基因突變導致的異常細胞。這些細胞不斷分裂和增殖，形成腫瘤，有能力侵入並摧毀附近正常的組織和器官。
此外，它們還可以通過血液循環或淋巴系統傳播到遠處的器官，或是產生抗藥性，這增加了治療的難度。惡性腫瘤細胞活動力旺盛、具有破壞性、復發率高且難以治癒。癌症的成因非常複雜，至今仍缺乏完全治癒的方法。因此，開發能有效抑制癌細胞的藥物對於病患來說至關重要。
常見的抗癌療法包含外科手術、放射治療及化學治療，例如使用癌症治療標靶藥物。不幸地，除了抑制腫瘤生長，這些習知的治療方式往往伴隨著傷害或毒殺正常組織的風險。此外，設計用以毒殺癌細胞而不產生副作用的替代性療法則尚在研究及臨床前試驗階段。
目前常見且價格最低的癌症治療標靶藥物為艾瑞莎（Iressa），其使用於治療上一年需要花費54萬台幣，即便要使用健保也只能有條件給付並依照各醫院訂價為準，因此病人在於治療費用負擔上是十分沉重。因此提供病人更低廉的價格負擔的癌症治療藥物且具備較佳治療效果的藥物是十分重要的。
有鑑於此，本發明提出一種有效對抗惡性腫瘤醫藥組合物、包含此醫藥組合物的套組、以及其治療動物細胞不正常生長之惡性疾病之用途。本藥物組合可以應用於腫瘤學（Oncology）的治療領域中。本發明所提出的醫藥組合物設計多種現有的藥物之間的功能性互動，來協同干擾癌細胞的生長機制。本發明所提出的醫藥組合物其製作簡單、價格便宜、又能在抑制惡性腫瘤生長上表現出統計學上有意義的功效。此外，還可以分開施用本發明所提出的醫藥組合物的成分，並在個體中表現出抑制癌細胞的功效。
在一方面，本發明首先提出一種醫藥組合物，其包含（a）癌細胞線粒體的靶向劑、（b）離子螯合劑、與（c）藥理活性的多價離子。癌細胞線粒體的靶向劑為Niclosamide。離子螯合劑為Disulfiram。藥理上的多價活性離子為選自由鎂離子、鈣離子、錳離子、亞鐵離子、銅離子、鋅離子所組成的群組。（a）的重量比以醫藥組合物總重計為64.5%~43.7%，（b）的重量比以醫藥組合物總重計為56.2%~16.1%，（c）的重量比以醫藥組合物總重計為19.4%~0.000116%。
在本發明的一種實施態樣中，0.091≤（a）/（（b）+（c））≤15.548。
在另一方面，本發明又提出前述醫藥組合物之用途，用於製備用於治療有需要之個體之惡性腫瘤之藥物。
在本發明的一種實施態樣中，惡性腫瘤選自由實質固態瘤（solid tumor）與血液惡性疾病所組成的一群組。
在本發明的一種實施態樣中，惡性腫瘤選自由肺癌與腦癌所組成的一群組。
在本發明的一種實施態樣中，（a）每次的投予量為2000 mg~ 100 mg，（b）每次的投予量為500 mg~ 128.6 mg，（c）每次的投予量為600 mg~ 2.65×10 -4mg。
在本發明的一種實施態樣中，（c）的投予順序不晚於（b）的投予順序。
在本發明的一種實施態樣中，藥物1天投予不超過2次。
在本發明的一種實施態樣中，藥物以口服、注射、經皮、或吸入方式投藥。
除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語具有本領域技術人員通常理解的含義。本文在說明書中所使用的術語只是爲了描述具體的實施方案的目的，不旨在於限制本發明。除非有相反的陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義。
惡性（malignant）腫瘤（tumor, neoplasm）：也被稱為癌症，是一種異常細胞生長和分裂的疾病，其特點是細胞具有無限增殖的潛力，同時還有侵襲周圍組織和器官、轉移到其他部位的傾向。惡性腫瘤是一種複雜的疾病，可能涉及多種基因變異和分子機制。早期檢測、精準診斷和多學科治療策略對於控制惡性腫瘤的發展至關重要。治療方法可以包括手術切除、放療、化療、靶向治療和免疫療法等，取決於患者的具體情況和癌症類型。惡性腫瘤與良性腫瘤不同，後者通常是局限生長，較少侵犯鄰近組織，並且很少轉移到其他部位。
惡性腫瘤的主要特徵包括：
1. 無限增殖：惡性腫瘤的細胞失去了對正常細胞生長的限制，它們可以持續無限地分裂和增殖，形成腫瘤組織。
2. 浸潤和侵襲：惡性腫瘤的細胞能夠侵入周圍正常組織和器官，破壞其結構和功能。這種侵襲性可能使手術切除變得困難，也增加了治療的挑戰。
3. 轉移：惡性腫瘤的細胞有時會通過血液或淋巴系統轉移到身體其他部位，形成轉移瘤（也稱為子宮瘤）。這會導致癌症在身體多個部位同時出現，增加了治療的難度。
4. 異常細胞形態：惡性腫瘤的細胞在形態上常常與正常細胞不同，它們可能不規則、變形、大小不均等。
5. 細胞異質性：在同一個惡性腫瘤中，細胞的性質和特點可能會有所不同，這被稱為細胞異質性。這使得治療更加複雜，因為不同的細胞亞群可能對治療反應不同。
6. 血管生成：惡性腫瘤通常會誘導新的血管生成，為其提供養分和氧氣，從而維持其不斷的生長。
藥物協同效果：也被稱為藥物協同作用，是指兩種或更多種藥物同時使用時，其效果超過了單獨使用每種藥物的效果之和。在藥物治療中，藥物協同效果可以帶來更強大、更持久或更廣泛的治療效果，同時可能降低了使用單一藥物時可能出現的副作用。藥物協同效果可以在不同類型的藥物中觀察到，包括抗生素、抗癌藥物、抗病毒藥物等。然而，藥物協同效果並非對所有藥物和所有疾病都適用，藥物之間的相互作用可能是複雜和多變的。藥物協同效果的含義可以更具體地描述如下：
1. 增強療效：藥物協同作用可能導致治療效果的增強。這意味著在給予多種藥物時，其合併效果可能比單一藥物更強大，從而更有效地控製或治療疾病。
2. 降低耐藥性風險：經常使用單一藥物可能導致細菌、病毒或腫瘤等在疾病治療中產生耐藥性。通過使用多種不同機制的藥物，可以降低疾病對其中任何一種藥物產生耐藥性的風險，從而保持治療的有效性。
3. 減少副作用：在一些情況下，使用低劑量的多種藥物可以取代使用單一藥物的高劑量，從而降低了可能出現的不良副作用。
4. 多靶點干預：不同藥物可能通過影響疾病的不同靶點或途徑發揮作用，通過多重途徑來干預疾病，增加了治療的多樣性和全面性。
5. 應對複雜疾病：一些複雜的疾病可能涉及多個病理學機制，單一藥物難以全面干預。藥物協同作用可以在多個水平上影響疾病的不同方面，從而更有效地應對複雜疾病。
血液惡性疾病係是指來自不正常增生的白血球細胞，可區分成：白血病（leukemia）、或淋巴瘤（lymphoma）。
癌細胞致死率：是指在一定時間內，癌症患者體內的癌細胞被治療方法（如化療、放療、靶向治療等）殺死的百分比。它通常用於評估治療方法的效果，以了解治療對癌症病情的影響。癌細胞致死率的含義可以解釋如下：
治療效果：癌細胞致死率是評估治療方法對癌症的影響的重要指標之一。更高的致死率通常意味著治療方法在殺死癌細胞方面更為有效。
疾病控制：通過監控癌細胞致死率，可以了解治療是否可以有效地控製或減少癌症的擴散和進展。如果致死率較低，可能需要重新評估治療方法以達到更好的控制效果。
預測患者預後：更高的癌細胞致死率可能與患者的預後改善相關。癌細胞被有效地殺死可能降低疾病復發和進展的風險，從而提高患者的生存率。
治療選擇：癌細胞致死率可以幫助醫療專業人員評估不同治療方法的優劣。治療方法的選擇通常會考慮到治療的致死率以及可能的副作用、耐藥性等因素。
治療監測：跟踪癌細胞致死率可以幫助醫療專業人員監測治療的進展。如果致死率在一段時間內沒有明顯改善，可能需要考慮調整治療方案。
「治療」（treat）一詞包含部份或完全預防、改善、減輕及／或處理與癌症相關之病徵（symptom）、次要病徵（secondary disorder）或症狀（condition）。「治療」（treat）一詞於此說明書中亦指應用或施予本發明內容之一或多種藥物至一個體，其係患有與癌症相關之病徵、次要病徵或症狀，以達到部份或完全減輕、減緩、治癒疾病、延遲發病、抑制病程發展、降低疾病嚴重性，及／或降低一或多個與癌症相關之病徵、症狀、或次要病徵的發生。與癌症相關之病徵、次要病徵及／或症狀包含，但不限於，發燒、虛弱、疲倦、體重減輕、疼痛、咳嗽、出血、皮膚改變、腹瀉或便秘、噁心、嘔吐及食慾不振。在此「治療」亦可以是施用至患有早期病徵或症狀之個體，以降低此個體發展成為與癌症相關之病徵、次要病徵及／或症狀的風險。在此「治療」為可以有效地減少一個或多個病徵或臨床標記。換句話說，在此治療亦可以是降低、減緩或終止疾病病程、病徵或症狀的發展。
「有效量」（effective amount）在此處係指一藥物的用量足以產生預定的療效反應。有效量亦指一種化合物或組合物，其治療利益效果超越其毒性或有害影響。具體的有效量取決於多種因素，如欲治療的特定狀況、患者的生理條件（如，患者體重、年齡或性別）、接受治療的哺乳動物或動物的類型、治療持續時間、目前療法（若適用時）的本質以及所用的具體配方和化合物或其衍生物的結構。舉例來說，可將有效量表示成藥物的總重量（譬如以克、毫克或微克為單位）或表示成藥物重量與體重之比例（其單位為毫克/公斤（mg/kg））。或者是，可將有效量表示成活性成分（例如，本發明藥劑）的濃度，例如莫耳濃度、重量濃度、體積濃度、重量莫耳濃度、莫耳分率、重量分率及混合比值。具體來說，「治療有效量」（therapeutically effective amount）一詞，是指藥劑的投予量，其足以減緩或減輕個體與癌症相關之病徵。習知技藝者可依據動物模式的劑量來計算藥物（如本發明內容之藥劑）的人體等效劑量（human equivalent dose, HED）。舉例來說，習知技藝者可依據美國食品藥物管理局（US Food and Drug Administration, FDA）所公告之「估算成人健康志願者在初始臨床治療測式之最大安全起始劑量」（Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers）來估算人體使用之最高安全劑量。
如本文所用，術語體外（in vitro）是指在人工環境中，例如在試管或反應容器中，在細胞培養物中等，而不是在生物體內發生的事件。
如本文所用，術語“體內或者活體內（in vivo）是指在生物體內，例如人體內細胞和非人動物內細胞內發生的事件。在基於細胞的敘述的表述中，可指在活細胞內發生的事件（與例如體外系統相反）。
如本文所用，術語個體可以指例如出於實驗目的、診斷目的、預防目的、美容目的和/或治療目的向其施用所提供的疫苗的任何生物體。典型的個體可以包括動物，例如哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、兔子、非人類靈長類和/或人類。在一些實施方式中，個體可以是人類。
如本文所用，術語藥學上可接受的或是藥理上活性的，可以指與合理的受益/風險比相稱在合理的醫學判斷範圍內，適用於與人和動物的組織接觸，而沒有過度毒性、刺激性、過敏反應或其他問題或併發症的物質。
如本文所用，術語有效的量可以指當施用於個體時，足以預防和/或延遲症狀發作的量。本領域的一般技藝人士可以理解，通常通過包含至少一個單位劑量的給藥方案來投予有效的劑量。
雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。除非另有說明，此處所述的數值範圍皆包含端點。
在本發明內容中，「週期」（cycle）、「治療週期」（cycle of treatment或treatment cycle）為可互換之詞彙，是指對病患投予治療的一段時間。一般來說，治療癌症時，完成一治療週期後會接續一段完全不給予任何治療的休息時間。在此休息時間後，可再次投予一或多次治療週期，每次治療週期後皆會接續另一段休息時間。
藥物再利用是指利用現有的藥物進行新的治療應用，基於這些藥物已經獲得其他治療方面的批准。這種方法可以減少開發所需的成本和時間，以及在上市後產生不良藥物反應的風險。這種方法可以減少開發所需的成本和時間，以及在上市後產生不良藥物反應的風險。
在癌症治療中，舊有藥物再利用結合藥物組合策略方法，相比傳統的新標靶藥物有顯著的優勢，主要原因如下：
1. 舊有藥物利用新的藥物組合策略模式，產生新的惡性腫瘤治療應用，藥物組合有助於不同藥物之間的相互作用。
2. 藥物組合可以發揮藥物之間的協同效應，干擾癌細胞的生長機制。
3. 利用使用已久的舊有臨床藥物加以重新找出新的治療應用，這些藥物有豐富的臨床數據和相對較高的安全性。
4. 通過不同的藥理機制來抑制與癌症有關的多個信號通路分子。
5. 提高治療效果的同時降低個別藥物的遠有的使用劑量，使治療更加安全。
6. 組合藥物治療惡性腫瘤成本遠低於標靶藥物治療惡性腫瘤成本。
本案藥物用於治療癌症上成本可以遠低於目前所有健保給付標靶藥物的自費價格。例如以治療癌症標靶藥物目前最低價格的IRESSA （Gefitinib）來說，IRESSA即使在目前台灣全民健保給付輔助下，單顆藥物病人仍然需要支付573元，並且天天連續使用。而本案藥物用於治療癌症上單顆藥物價格僅需要184元。本案藥品費用雖尚無健保給付補助，若未來可以獲得健保補助，病人在醫藥負擔下可以大量減輕治療費用。
出乎意料地，根據本發明的多種實施態樣，本案的發明人提供一種有效對抗惡性腫瘤醫藥組合物。本發明的醫藥組合物中的各有效成分為現有的已知藥物，這些已知藥物已有豐富的臨床數據和相對較高的安全性。與標靶藥物相比之下，利用舊有藥物再結合藥物組合策略的方法具有顯著的多種優勢。
本發明首先提出一種醫藥組合物，其包含（a）癌細胞線粒體的靶向劑、（b）離子螯合劑、與（c）藥理活性的多價離子等藥物。三種藥物為一種藥物組合，且三種藥物比例設計可以依照不同治療效果進行劑量調整。（a）、（b）（c）等藥物的治療劑量單位為毫克（mg）。
癌細胞線粒體的靶向劑可以為Niclosamide。Niclosamide可以靶向癌細胞中的線粒體，以誘導細胞週期停滯、抑制細胞生長和誘導細胞凋亡。在GlobalData資料中，單一使用治療癌症上，並無任何公司開發完成Niclosamide進入癌症的治療市場。以醫藥組合物總重計的重量比，（a）的量為64.5%~43.7%。Niclosamide的劑量範圍是，在七天中每日使用，每日使用不超過2次。Niclosamide的有效劑量是857.2 mg。Niclosamide的治療劑量範圍由2000 mg~ 100 mg。
離子螯合劑可以為Disulfiram。Disulfiram可以誘發內質網應激和自噬以誘導細胞凋亡，減少血管生成，並可做為放射治療的增敏劑，或離子螯合物。單一使用治療癌症上，並無任何公司開發完成Disulfiram進入癌症治療市場。以醫藥組合物總重計的重量比，（b）的量為56.2%~16.1%。Disulfiram每次投藥的上限劑量是500 mg，下限劑量是128.6 mg。Disulfiram的有效劑量是257.2 mg。Disulfiram的治療劑量範圍由500 mg~ 128.6 mg。
藥理上的多價活性離子為藥學上可接受營養添加劑型態的金屬離子與其鹽類，例如氯離子、氧離子、氫氧離子、葡萄糖酸根、硫酸根、甘胺酸根、琥珀酸根、硬脂酸根、甘油磷酸根、醋酸根、乳酸根、磷酸根、硼酸根、碳酸根、反丁烯二酸根、戊二酸根、甘油磷酸根、果糖硼酸根、膽酸根、蘋果酸根、甘油酸根、乳酸根、草酸根、碳酸根、酒石酸根、檸檬酸根、硬脂酸根、HAP螯合、HVP螯合及酵母…等，但本發明不以此為限。多價活性離子為二價或以上的典型元素離子，或過渡元素離子。藥理上的多價活性離子例如為鎂離子、鈣離子、鉻離子、錳離子、亞鐵離子、銅離子、鋅離子其中之至少一者。以醫藥組合物總重計的重量比，（c）的量為19.4%~0.000116%。藥理上的多價活性離子的劑量範圍是1800 mg~2.65×10 -4mg。藥理上的多價活性離子的有效劑量是0.139 mg~5.3×10 -3mg。例如，作為離子螯合劑時，兩個Disulfiram可以與一個藥理上的多價活性離子形成藥理上的活性螯合物。表一列出不同的藥理上的多價活性離子的劑量範圍。
表一 不同的藥理上的多價活性離子的劑量範圍
藥理上的多價活性離子 上限劑量 有效劑量 下限劑量
二價銅離子 8 mg 0.139 mg 0.0695 mg
二價鋅離子 30 mg 0.139 mg 0.0695 mg
二價亞鐵離子 45 mg 0.113 mg 0.0565mg
二價錳離子 9 mg 0.121 mg 0.0605mg
二價鎂離子 600 mg 0.053 mg 0.0265mg
二價鈣離子 1800 mg 0.088 mg 0.044 mg
本發明的醫藥組合物中的（a）成分、（b）成分和（c）成分，可以視情況需要有不同的調配劑量比例範圍或組合。
在本發明的一種實施態樣中，（a）與（b）項的劑量比例可以是 比例範圍。
在本發明的另一種實施態樣中，（a）與（c）項的劑量比例可以是
在本發明的另一種實施態樣中，（a）與（b）+（c）項的劑量比例可以是 比例範圍。
在本發明的另一種實施態樣中，（a）+（b）與（c）項的劑量比例可以是 比例範圍。
在本發明的另一種實施態樣中，（a）+（c）與（b）項的劑量比例可以是 比例範圍。
在本發明的另一種實施態樣中，（b）與（a）項的劑量比例可以是 比例範圍。
在本發明的另一種實施態樣中，（b）與（c）項的劑量比例可以是 比例範圍。
在本發明的另一種實施態樣中，（b）與（a）+（c）項的劑量比例可以是 比例範圍。
在本發明的另一種實施態樣中，（b）+（c）與（a）項的劑量比例可以是 比例範圍。
在本發明的另一種實施態樣中，（c）與（a）項的劑量比例可以是 比例範圍。
在本發明的另一種實施態樣中，（c）與（b）項的劑量比例可以是 比例範圍。
在本發明的另一種實施態樣中，（c）與（a）+（b）項的劑量比例可以是 比例範圍。
本發明的醫藥組合物，以上述（a）、（b）和（c）的劑量比例範圍可以產生對應的癌細胞致死率的功效。
在本發明的一種實施態樣中，當 3.87，小鼠實驗的癌細胞致死率為46%。
在本發明的一種實施態樣中，當 3.33，小鼠實驗的癌細胞致死率為50%。
在本發明的一種實施態樣中，當 2.2，細胞實驗的癌細胞致死率為44.3%。
在本發明的一種實施態樣中，當 3.3，細胞實驗的癌細胞致死率為58%。
在本發明的一種實施態樣中，當 6.6，細胞實驗的癌細胞致死率為86.5%。
本發明的醫藥組合物中的各藥劑成分可視情況需要安排多種不同的投藥順序。依據本發明內容實施方式，第一藥劑可為（c）藥理活性的多價離子、第二藥劑可為（b）離子螯合劑、而第三藥劑可為（a）癌細胞線粒體的靶向劑。第一藥劑的（c）藥理活性的多價離子的投藥順序不晚於第二藥劑的（b）離子螯合劑的投藥順序，有助於多價藥理活性離子提升動物體內離子濃度。第三藥劑（a）癌細胞線粒體的靶向劑的投藥順序無特別限制。
在本發明的一些實施態樣中，第一藥劑（c）、第二藥劑（b）、第三藥劑（a）的投藥順序可以有下列的可行方式：
1. 先（a）後（c）再（b）。
2. 先（a）+（c）一起，然後（b）。
3. 先（c）後（b）再（a）。
4. 先（c）+（b）一起，然後（a）。
5. （a）、（c）、（b）同時投藥。
視情況需要，本發明的醫藥組合物中可以更進一步包含一或多種的穩定劑、結合劑、填充劑、崩散劑、賦形劑、添加劑。
本發明的醫藥組合物，還可以製成適合不同投藥順序的醫藥套組（pharmaceutical kit）。例如，將本發明的醫藥組合物製成一種用以治療罹患或疑似罹患癌症之個體的醫藥套組。本發明的醫藥套組包含第一容器、視情況需要的第二容器、視情況需要的第三容器、或視情況需要的第四容器。第一容器、視情況需要的第二容器、與視情況需要的第三容器分別包含第一藥劑、第二藥劑、與第三藥劑其中的至少一者。依據本發明內容實施方式，第一藥劑可為（c）藥理活性的多價離子、第二藥劑可為（b）離子螯合劑、而第三藥劑可為（a）癌細胞線粒體的靶向劑。
本發明內容的另一態樣是關於一種使用本發明醫藥套組來治療罹患或疑似罹患癌症之個體的方法。此方法包含對一個體投予第一容器之本發明藥物；對此個體投予視情況需要的第二容器之本發明藥物；以及對此個體投予視情況需要的第三容器之本發明藥物。第一容器包含第一藥劑、第二藥劑、與第三藥劑其中至少一者。視情況需要的第二容器包含第一藥劑、第二藥劑、與第三藥劑其中至少一者。視情況需要的第三容器包含第一藥劑、第二藥劑、與第三藥劑其中至少一者。依據本發明內容實施方式，第一藥劑可為（c）藥理活性的多價離子、第二藥劑可為（b）離子螯合劑、而含第三藥劑可為（a）癌細胞線粒體的靶向劑。
本發明第一藥劑（c）藥理活性的多價離子的第一有效量的範圍可以是1800 mg~2.65×10 -4mg。第二藥劑為（b）離子螯合劑，第二有效量的範圍可以是500 mg~ 128.6 mg。第三有效量的本發明第三藥劑包含（a）癌細胞線粒體的靶向劑，第三有效量的範圍可以是2000 mg~ 100 mg。
可以使用例如玻璃、微脂體或塑膠等不同材料來製備適合用以承載本發明內容之藥劑的第一容器、視情況需要的第二容器及視情況需要的第三容器。第一容器可承載有效量之本發明內容之藥劑或其藥學劑型。第二容器可承載有效量之本發明內容之藥劑或其藥學劑型。第三容器可承載有效量之本發明內容之藥劑或其藥學劑型。本發明醫藥套組可更包含隨附於第一容器及/或第二容器及/或第三容器之使用說明。此外，本發明醫藥套組可視情況需要更包含第四容器，其中有藥學上可接受之緩衝液，例如磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏液或葡萄糖溶液。其可更包含其他商業或使用者所需要的材料，包含其他緩衝液、稀釋液、過濾器、針頭及注射器。
本發明內容的另一態樣是關於一種使用本發明醫藥套組來治療有需要之個體（例如，罹患癌症之個體，或疑似罹患癌症之個體）的投藥方法。此方法包含：對一個體投予第一有效量之本發明第一容器；以及對此個體投予第二有效量之視情況需要的本發明第二容器；或對此個體投予第三有效量之視情況需要的本發明第三容器。對此個體的第一容器的第一投予時間點可以不晚於對此個體的第二容器的第二投予時間點，而對此個體的第三容器的第三投予時間點可以不早於第二容器的第二投予時間點，第三投予時間點可以不早於第二投予時間點10分鐘。本發明醫藥套組中的藥物，一天中投予的次數不超過2次。
在第一投予時間點中，是對此個體投予本發明第一容器，以微脂體（Liposome）、膠囊或錠劑型態投藥。在第二投予時間點中，是對此個體投予本發明第二容器，以微脂體、膠囊或錠劑型態投藥。在第三投予時間點中，是對此個體投予本發明第三容器，以微脂體、膠囊或錠劑型態投藥。依據一些實施方式，此個體為人類若為體重60公斤的人類，對此個體投予每日每公斤個體體重10毫克到4.42×10 -6毫克的第一藥劑，對此個體投予每日每公斤個體體重8.33毫克到2.14毫克的第二藥劑，並對此個體投予每日每公斤個體體重33.33毫克到1.67毫克的第三藥劑。依據本發明內容一操作實施例，投予51.67毫克到3.81毫克/公斤/日之本發明內容醫藥組合物，即足以降低此個體的癌細胞數量，藉此表現本發明醫藥組合物的抗癌功效。
在本發明的一些實施態樣中，第一容器包含第三藥劑、第二容器包含第一藥劑、第三容器包含第二藥劑。在第一投予時間點中，對此個體先投予第一容器之本發明藥物；在第二投予時間點中，對此個體投予第二容器之本發明藥物；以及在第三投予時間點中，對此個體投予第三容器之本發明藥物，使得使用本發明醫藥套組來治療罹患或疑似罹患癌症之個體的方法的藥物投予順序為先（a）後（c）再（b）。
在本發明的一些實施態樣中，第一容器包含第一藥劑、第二容器包含第二藥劑、第三容器包含第三藥劑。在第一投予時間點中，對此個體先投予第一容器之本發明藥物；在第二投予時間點中，對此個體投予第二容器之本發明藥物；以及在第三投予時間點中，對此個體投予第三容器之本發明藥物，使得使用本發明醫藥套組來治療罹患或疑似罹患癌症之個體的方法的藥物投予順序為先（c）後（b）再（a）。
在本發明的一些實施態樣中，第一容器包含第一藥劑與第三藥劑、第二容器包含二第藥劑。在第一投予時間點中，對此個體先投予第一容器之本發明藥物；以及在第二投予時間點中，對此個體投予第二容器之本發明藥物，使得使用本發明醫藥套組來治療罹患或疑似罹患癌症之個體的方法的藥物投予順序為（a）與（c）同時投予後才投予（b）。
在本發明的一些實施態樣中，第一容器包含第一藥劑與第二藥劑、第二容器包含第三藥劑。在第一投予時間點中，對此個體先投予第一容器之本發明藥物；以及在第二投予時間點中，對此個體投予第二容器之本發明藥物，使得使用本發明醫藥套組來治療罹患或疑似罹患癌症之個體的方法的藥物投予順序為（c）與（b）同時投予後才投予（a）。
在本發明的一些實施態樣中，第一容器包含第一藥劑、第二藥劑與第三藥劑。在第一投予時間點中，對此個體投予第一容器之本發明藥物，使得使用本發明醫藥套組來治療罹患或疑似罹患癌症之個體的方法的藥物投予順序為（a）與（b）與（c）同時投予。
關於本發明醫藥組合物的釋放形式，可以以雙層或三層錠劑進行打錠，內層錠劑製成以緩釋賦形劑型結合藥物打錠而成，其釋放藥物速度由最外層最快，越內層釋放速度遞減。外層為速崩賦形劑結合優先釋放藥物與內層錠劑打錠製成。利用崩解速度不同，可以使藥理上的多價活性離子進入體內提高體內濃度，進而再與後崩解釋放的離子螯合劑進行螯合產生作用等。
快速崩解釋放劑型的賦形劑
藥物的快速崩解釋放劑型旨在快速釋放藥物，以實現迅速的藥效。在本發明的一些實施態樣中，賦形劑可用於製備快速崩解釋放劑型，例如但不限於：
1. 乳糖（Lactose）：乳糖是一種常見的輔助賦形劑，常用於制備口服片劑。它具有優異的壓片性能和快速崩解特性，可促進藥物的快速釋放。
2. 玉米澱粉（Corn starch）：玉米澱粉是一種常見的天然多醣賦形劑，具有良好的可壓性和崩解性能。它可以用於製備快速崩解片劑和顆粒劑。
3. 微晶纖維素（Microcrystalline cellulose）：微晶纖維素是一種由纖維素處理得到的微細結晶賦形劑，常用於制備口服片劑。它能增加片劑的機械強度並促進藥物的快速釋放。
4. 水溶性聚合物：一些水溶性聚合物，如羥丙基甲基纖維素（Hydroxypropyl methylcellulose, HPMC）、聚乙烯醇（Polyethylene glycol, PEG）等，可以在制備快速崩解劑型時作為崩解劑使用。它們能與水迅速交互作用，從而促使片劑迅速崩解並釋放藥物。
5. 蛋白質賦形劑：某些蛋白質，如明膠（Gelatin）和澱粉鈉辛酸酯（Sodium starch glycolate），能夠在濕潤條件下快速膨脹和崩解，從而實現藥物的快速釋放。這些賦形劑可用於制備各種快速崩解劑型，例如快速崩解片劑、崩解顆粒劑和崩解膠囊等。
緩釋劑型的賦形劑
藥物的緩釋劑型通常使用一些特殊的賦形劑。在本發明的一些實施態樣中，這種賦形劑可以在體內延長藥物的釋放時間，使藥物以穩定的速率進入血液或目標組織，例如但不限於：
1. 聚合物：聚合物是常見的賦形劑，如聚乙烯醇（Polyethylene glycol, PEG）、聚酸酯（Poly（lactic-co-glycolic acid）, PLGA）等。這些聚合物可以形成藥物載體，使藥物以控制的速率釋放。
2. 矽酸鹽：矽酸鹽賦形劑，如二氧化矽（Silica dioxide）和氫氧化鋁（Aluminum hydroxide），可以通過形成藥物包覆層或網絡結構，延緩藥物的釋放速度。
3. 聚乳酸（Polylactic acid, PLA）和聚乳酸-聚己內酯（Polylactic-co-glycolic acid, PLGA）微球：這些微球可以被注射或口服，作為緩釋劑型的載體。它們可以根據不同的需求調整微球的大小和結構，從而控制藥物的釋放速率。
4. 微脂體：微脂體是由脂質雙層組成的微小顆粒，可以包裹藥物並形成穩定的載體。微脂體可以用於口服、注射或局部應用，以實現藥物的緩慢釋放。
5. 聚合微脂體：聚合微脂體是微脂體的改進型，通過添加聚合物或高分子物質，可以進一步調節藥物的釋放速率和穩定性。
本發明醫藥組合物的釋放形式不限於前述可用於製備緩釋劑型的藥物的賦形劑和技術。可以視藥物的特性、治療需求和給藥途徑等因素選擇合適的賦形劑。
在本發明的一些實施方式中，本發明的藥物在電中性、負電性、或正電性的微脂體影響下對於癌症或腫瘤細胞可能有的差異。不同帶電性的微脂體以兩個面向討論作用於細胞的差異：
一、微脂體與細胞相互作用，
二、微脂體對細胞（藥物）傳送（delivery）之影響。
這些差異及影響分為以下幾個方面說明。
相互作用機制：帶正電的微脂體與帶負電的細胞膜之間存在靜電相互吸引力，使得正電性微脂體更容易與細胞膜結合，而負電性微脂體則相對較難。電中性微脂體沒有明顯的靜電相互作用。這種相互作用機制決定了不同帶電性微脂體與細胞之間的親和性和攝取（uptake）效率。
細胞攝取效率：正電性微脂體由於與細胞膜的負電荷相互作用，能夠促進微脂體的細胞內攝取。細胞攝取主要通過內吞作用進行，正電性微脂體與細胞膜結合後能夠被主動或被動地攝入細胞內。相比之下，負電性微脂體由於與細胞膜的靜電排斥作用，攝取效率相對較低。
細胞內遞送效率：正電性微脂體能夠促進藥物或基因等載荷物質的釋放和遞送到細胞內部，因為它們可以與細胞內的負電荷分子相互作用，如核酸、蛋白質等。負電性微脂體也可以在一定程度上遞送藥物或載荷物質，但相對於正電性微脂體來說，負電性微脂體更適合用於穩定和保護藥物，而不太適合直接遞送到細胞內。電中性微脂體與細胞膜之間沒有電荷相互作用，因此在某些參數下可以降低與細胞的非特異性相互作用，減少吸附和被吞噬的可能性。這有助於提高微脂體在體內的穩定性和生物可用性。並通常具有較高的藥物載荷能力，可以更有效地包覆和穩定各種類型的藥物（水溶性和脂溶性）。
在本發明的一些實施方式中，正電性微脂體，例如但不限於DOTAP（二十二碳四烯酸三甲基溴化銨）、DDAB（二十二碳四烯酸二十二碳四烯酸胺鹽）、DPTAP（二十二碳四烯酸三苯基膦酸鹽）、DMTAP（二十二碳酸二甲基膦酸鹽）、DMTMA（二十二碳酸二甲基三甲基溴化銨）、DC-Chol（二十二碳酸膽鹼）、DOTMA（二十二碳四烯酸三甲基胺鹽）、DPTMA（二十二碳四烯酸三苯基胺鹽）、DPTTA（二十二碳四烯酸三苯基三乙胺鹽）、DMRIE（二十二碳酸二甲基去氧膽鹼）。
在本發明的一些實施方式中，負電性微脂體，例如但不限於DOPC（二十二碳六烯酸磷脂醯膽鹼）、DOPS（磷脂醯絲胺酸）、DOPG（二十二碳六烯酸磷脂醯甘油）、DOPA（二十二碳六烯酸磷脂醯絲胺酸）、DOPS-Na（磷脂醯絲胺酸鈉鹽）、POPG（二十二碳六烯酸磷脂醯絲胺酸）SOPC（磷脂醯絲胺酸醇胺）、SOPG（磷脂醯絲胺酸醇甘油）、POPE（磷脂醯絲胺酸醇磷脂醯膽鹼）、POPA（磷脂醯絲胺酸醇磷脂醯絲胺酸）。
在本發明的一些實施方式中，電中性微脂體，例如但不限於DSPC（二十二碳酸磷脂醯膽鹼）、DMPC（二十二碳酸磷脂醯甘油）、DPPC（二十二碳酸磷脂醯膽鹼）、DOPC（二十二碳六烯酸磷脂醯膽鹼）、DPPG（二十二碳酸磷脂醯甘油）、DOPG（二十二碳六烯酸磷脂醯甘油）、DPPA（二十二碳酸磷脂醯絲胺酸）、DOPA（二十二碳六烯酸磷脂醯絲胺酸）、DMPE（二十二碳酸磷脂醯甘油醇胺）、DMPS（二十二碳酸磷脂醯甘油硫醇）。
在本發明的一些實施方式中，其他用於製備微脂體的成分，例如但不限於膽固醇、聚乙二醇（PEG）、表面活性劑（如Tween, Span）、輔助劑（如卵磷脂醯絲胺酸、卵磷脂酸）、微脂體包覆劑（如卵磷脂酸膽鹼）、靶向配體（如抗體、配體）、染料（如螢光染料、核酸染料）、微脂體穩定劑（如微脂體結構調節劑、防腐劑）。
在本發明的一些實施方式中，可以以大小球進行藥劑的包覆。例如，先以小球微脂體包覆兩藥物，離子螯合劑+癌細胞線粒體的靶向劑，再以小球微脂體與藥理活性的多價離子以大球微脂體包覆，形成兩層式微脂體。大球可以先崩解後使藥理上的多價活性離子先釋出提升濃度、小球之後才崩解釋出離子螯合劑+癌細胞線粒體的靶向劑產生作用，其離子螯合劑可以與早先釋出的藥理活性的多價離子產生螯和進而產生治療作用。例如大球先崩解10分鐘內，小球才崩解。
在本發明的一些實施方式中，雙層或三層微脂體指利用雙層或三層微脂體來同時包覆和傳遞三種不同藥物的製程，具有多個脂質層的結構。例如，可增強個別藥物穩定性：每種藥物都被封裝在自己的微脂體層內，保護其免受降解、化學相互作用和酶降解的影響；或是控制藥物釋放：雙層微脂體結構允許對每種藥物個別釋放進行控制。通過調整微脂體的成分和結構，可以實現各藥物的獨立釋放，從而精確控制藥物的釋放速率和時間。這將有助於在儲存和運輸過程中維持藥物的穩定性和完整性。適用於藥物遞送策略考量，以增加藥物的穩定性，減少藥物分解或失活的可能性，並提高藥物生物作用效率。因此，通過調整內外層的脂質成分製程之雙層或三層微脂體，可有利於藥物遞送過程的控制和調節，例如針對藥物的先崩解後使藥理上的多價活性離子預先進入體內提高體內濃度，再與後釋放的離子螯合劑進行螯合產生作用等。故使用不同大小的微脂體進行包覆是一種策略，可以實現藥物的逐步釋放。通過先用小的微脂體包覆其中一種藥物，再用大粒徑的微脂體包覆藥理上的多價活性離子和小粒徑的微脂體。於釋放的過程，大的微脂體可以先崩解，使其中的藥理上的多價活性離子發揮提升體內濃度作用，而與小的微脂體則稍後崩解釋放離子螯合劑發生螯合反應產生作用，延遲藥物的釋放作用，以優化治療效果和減輕藥物副作用。
本發明之醫藥套組及/或醫藥組合物例示性之適應癌症包含惡性腫瘤，惡性腫瘤例如實質固態瘤或血液惡性疾病。適應癌症例如但不限於，胃癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、胰臟、腎臟癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、卵巢癌、腦癌、前列腺癌、肝癌、黑色素瘤、食道癌、多發性骨髓瘤，以及頭頸部鱗狀細胞癌。依據本發明內容的某些實施方式，此癌症的癌細胞對於化學治療、放射治療或免疫治療的其中至少一者具有抗性。例如，三陰性乳癌是指癌細胞對雌激素（ER）、黃體素（PR）和第二型人類上皮生長受體（HER2）等三種荷爾蒙受體呈現陰性，而難以採用荷爾蒙療法以及標靶治療，治療方式相當有限。人類乳腺癌細胞株（MCF7）-耐藥型也有類似的抗藥性問題。或是，已知人類膠質母細胞瘤細胞株（U-87）對於細胞凋亡的抗性較高，對於標靶藥物IRESSA（Gefitinib）及ABT-737（Bcl-2抑制劑）等的抗性較高（Chang et al., 2011; Cristofanon and Fulda, 2012; Jane et al., 2013）。還有，人類肺鱗狀上皮細胞癌（H520）的腫瘤組織對於標靶藥物IRESSA會產生抗性，所以標靶治療的效果較差。
本發明之醫藥套組及/或醫藥組合物之例示性之投藥方式包含，但不限於，腸內、口服、鼻腔、非口服、局部或經黏膜投予，其中非口服可以是腫瘤內、肌肉內、靜脈內、動脈內、皮下、腹腔內、顱內、腦室內或鞘內注射。
實驗步驟
動物試驗材料與方法
實驗動物
5週齡的雌性、Balb/c CAnN.Cg-Foxnlnu/CrlNarl裸鼠，購自國家動物實驗中心，每日給予水及飼料（LabDiet 5058, PMI Nutrition International Inc, MO, USA; 21.56%能量由脂肪提供，代謝能為3.46 kcal/gm）任食，溫度控制於 22±2℃，濕度 55±15％，光照/黑暗比例為 12/12 小時（上午 1 時開燈，下午 1 時關燈）。飼養至6周齡後，開始進行實驗。
誘導癌症腫瘤動物模式
6週齡的裸鼠，開始建立兩種肺上皮細胞癌腫瘤及動物模型。本實驗使用食品工業發展研究所提供人類非小細胞肺癌細胞株（A549）、人類肺鱗狀上皮細胞癌細胞株（H520），誘導方式為將含有1×10 7A-549細胞懸浮液跟H520細胞懸浮液進行皮下注射100 μL至右後肢近背側部分，給予A549細胞與給予H520細胞後2週，觀察腫瘤直徑5 mm至6 mm時，進行分組並開始給藥，即成功建立誘導肺上皮細胞癌腫瘤小鼠模型。
試驗產品給予投藥
建立兩類肺癌腫瘤：人類非小細胞肺癌細胞株（A549）、人類肺鱗狀上皮細胞癌細胞株（H520）小鼠模型後，各自癌腫瘤組中將小鼠再分成6組。S1：為對照組（Control set）無使用藥物治療、S2：單獨（Niclosamide）組、S3：單獨（Disulfiram+藥理活性的多價離子）組、S4：標靶藥物組（IRESSA, Gefitinib）、S5：本發明組合用藥有效劑量組（Niclosamide+Disulfiram+藥理活性的多價離子）、S6：本發明組合用藥低劑量組（Niclosamide+Disulfiram+藥理活性的多價離子）。A549組：每組6隻，口服，一天一次，連續25天。H520組：每組7隻，口服，一天一次，連續13天。在本實驗中藥理活性的多價離子為銅離子，使用的型態為葡萄糖酸銅。
體重及攝食量觀察
實驗期間裸鼠飼料和飲水自由攝取，利用電子天秤記錄每週體重、食物攝取量。
腫瘤體積、重量及抑制率測量評估
利用腫瘤測量儀（TM900, Peira, Turnhout, Belgium）每周測量腫瘤體積，待給藥五週後裸鼠犧牲，取下右後肢處腫瘤，腫瘤體積大小以測量外觀最長徑及最短徑，所採用之腫瘤體積計算公式：體積=0.5×最長徑×最短徑 2計算腫瘤實際體積，再將腫瘤團塊秤重且紀錄，以對照組為基準，計算各組腫瘤抑制率。
腫瘤體積抑制率%=1-（藥物組腫瘤體積）/（控制組腫瘤體積）×100%
腫瘤團塊重量抑制率%=1-（藥物組腫瘤重量）/（控制組腫瘤重量）×100%
癌細胞試驗材料與方法
細胞培養（Cell culture）
將人類非小細胞肺癌細胞株（A549）、人類膠質母細胞瘤細胞株（U87）、人類膠質母細胞瘤細胞株（T98G）、人類永生化骨髓性白血病細胞株（K-562）、人類單核白血球細胞株（THP-1）、人類肝癌細胞株（HepG2）、人類大腸直腸癌細胞株（HCT116）、人類卵巢癌細胞株（TOV-21G）、人類三陰性乳癌細胞株MDA-MB-231或人類乳腺癌細胞株（MCF7）-耐藥型，培養在含10%（v/v） 胎牛血清（Fetal Bovine Serum, Penicillin-Streptomycin Solution）（100X）（ACE Biolabs, CC1009）及含有Glutamine的Nutrient Mixture F-12 Ham Kaighn’s Modification （F-12/K）（SIGMA-ALDRICH, USA）以及RPMI-1640（HiMedia Laboratories LLC, USA）培養基中，之後將個別細胞株放入5%CO 2、37℃的培養箱（Astec-SCA-165DS）。
細胞活力測驗（Cell Viability）
將不同癌細胞株接種到96-井（well）中，使細胞貼附於底盤24小時後，經由三種藥物聯合處理，無藥物處理的組別為對照組，加入20μL MTS試劑（Progema, USA）,在37℃下放置1小時，使用ELISA 偵測機（BioTeck EPOCH2），在490nm的波長下偵測吸光值，評估細胞活性及增殖能力。細胞活力計算公式如下：
細胞活力率%=（加入藥物後的細胞吸光值）/（沒有加藥物的細胞吸光值）×100%
本發明藥物投予癌細胞株實驗劑量 （Drug Dosage）
在本發明的一些實施例中，藥物投予癌細胞實驗劑量濃度為nM，其中該有效劑量範圍為0.8~83nM。
實施例1 本發明之醫藥組合物中不同藥理活性的離子的功效，以人類非小細胞肺癌細胞株（A549）進行測試
為評估本發明之醫藥組合物內以不同藥理活性的離子是否能夠有效產生藥物協同作用，以人類非小細胞肺癌細胞株（A549）進行測試，觀察是否有抑制癌細胞存活率的功效分析，結果列於表二中，表二中的劑量單位是nM。本實驗所使用的藥理活性的離子型態為葡萄糖酸根離子。
表二、含有不同的藥理活性的多價離子之本發明醫藥組合物組合對人類非小細胞肺癌細胞株（A549）細胞存活率
Niclosamide Disulfiram 藥物活性離子 存活率 （%）
6 - - - 98.00
- 1 - - 99.58
- - 1 鋅 104.71
- - 1 錳 104.35
- - 1 鎂 100.52
- - 1 亞鐵 106.27
- - 1 銅 103.70
- - 1 鈣 103.98
6 1 1 鋅 51.97
6 1 1 錳 52.75
6 1 1 鎂 43.84
6 1 1 亞鐵 41.73
6 1 1 銅 21.32
6 1 1 鈣 49.60
各表中的-記號表示無添加該成分。
表二中的實驗結果顯示，當Niclosamide、Disulfiram和藥理活性的多價離子各自對於癌細胞株實驗時，其並無展現有效的抑制效果。在本發明之藥組合物更換不同離子的組合下，可以對癌細胞產生明顯具有抑制效果，依據實驗結果組合藥理活性的多價離子為Cu時，可以產生最佳抑制功效。
表二中的實驗結果顯示，本發明之醫藥組合物的單一成分各自對於人類非小細胞肺癌細胞（A549）存活率上並無明顯抑制效果。但本發明之醫藥組合物使用不同的離子都可以產生癌細胞抑制效果，使得癌細胞存活率明顯下降。
實施例2 本發明之醫藥組合物對人類非小細胞肺癌細胞株（A549）的功效
為評估本發明之醫藥組合物不同的投藥劑量是否會對人類非小細胞肺癌細胞株（A549）有抑制癌細胞存活率的功效，先以肺癌細胞株（A549）細胞存活率進行分析，結果列於表三中。如表三所示，本發明之醫藥組合物對人類非小細胞肺癌細胞株（A549）存活率與投藥劑量相關。本實驗所使用的藥理活性的銅離子型態為葡萄糖酸銅。
表三、本發明之醫藥組合物對人類非小細胞肺癌細胞株（A549）細胞存活率
Niclosamide Disulfiram 銅離子 存活率 （%）
2 - - 112.66
- 80 - 93.85
- - 80 109.28
- 25 12.5 64.42
- 25 25 47.63
1 25 25 21.80
2 12.5 12.5 70.76
4 12.5 12.5 41.96
4 25 25 13.46
6 0.8 0.8 43.89
6 1 1 37.05
13 0.8 0.8 39.88
13 1 1 33.70
表三中的實驗結果顯示，當Niclosamide、Disulfiram和藥理活性的多價離子Cu各自對於癌細胞株實驗時，其並無展現有效的抑制效果。在本發明之醫藥組合物的不同劑量組合下，都具有抑制效果，且當Niclosamide濃度大於Disulfiram和藥理活性的多價離子Cu濃度，或Disulfiram和藥理活性的多價離子Cu濃度大於Niclosamide濃度時，會產生更高程度癌細胞抑制效果，由此可知藥物彼此間可產生更高之協同功效。
實驗結果顯示，在Niclosamide、Disulfiram、銅離子各自投予A549癌細胞株濃度2~80nM，癌細胞並無產生抑制存活率效果。當僅同時投予Disulfiramc和銅離子濃度各為25nM時，其癌細胞株產生存活率效果，癌細胞存活率下降至47.63%。當本發明醫藥組合物同時投予癌細胞株，具有顯著較高之抑制癌細胞存活效果，其A549癌細胞存活率至低可以下降至13.46%。依本實驗得知本發明醫藥組合，三個藥物可以產生更高程度之協同功效。
本實驗結果顯示，本發明之醫藥組合物對肺上皮細胞癌的癌細胞有抑制癌細胞存活率的功效，其抑制癌細胞存活率係可以由本發明醫藥組合中各自劑量的調整比例呈正相關。
實施例3 本發明之醫藥組合物對人類非小細胞肺癌細胞株（A549）於動物體內的癌細胞腫瘤抑制功效
為評估本發明之醫藥組合物是否會對人類非小細胞肺癌有抑制效果的功效、藥物經由腸胃道吸收後是否能夠有效抑制肺癌腫瘤生長、藥物是否會造成不適性而進行試驗。先以裸鼠皮下注射建立腫瘤模型，待觀察14天內並測量腫瘤大小，進行分成6組並開始給藥，藥物使用組接續以口服管餵試驗藥品，評估腫瘤模型裸鼠在25天給藥後腫瘤生長的變化，並觀察試驗藥品對腫瘤的抑制效果，結果列於表四與表五中。第1圖繪示本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類非小細胞肺癌細胞株（A549）於動物體內的癌細胞腫瘤體積的抑制功效與投藥時間的相關性。第2圖繪示本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類非小細胞肺癌細胞株（A549）於動物體內的癌細胞腫瘤重量的抑制功效與投藥時間的相關性。
表四、本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類非小細胞肺癌（A549）的癌細胞腫瘤體積與投藥日期相關性，表中所列的癌細胞腫瘤體積單位為mm 3。
日 7 11 14 17 20 23 犧牲當時
S1 113.4 153.4 189.1 231.2 293.1 354.8 454.1
S2 73.4 89.7 136.3 179.6 219.0 319.8 396.1
S3 44.9 59.1 83.3 98.6 151.4 210.6 316.1
S4 54.2 69.5 82.0 102.8 141.3 202.6 239.6
S5 44.2 55.5 70.6 73.6 98.4 150.9 229.3
S6 69.9 97.9 106.7 123.8 162.4 189.8 254.1
在表四中，日所代表的為投藥日期。
在表四中顯示患有人類非小細胞肺癌細胞的小鼠，在腫瘤體積抑制率：在犧牲當時的各組腫瘤體積對比S1組的實驗結果顯示，S2組的腫瘤抑制率為12.78%，S3組的腫瘤抑制率為30.39%，S4組的腫瘤抑制率為47.23%，本發明之醫藥組合有效劑量組S5組的腫瘤抑制率為49.51%，本發明之醫藥組合低劑量組S6組的腫瘤抑制率為44.03%。因此在實驗結果可以得知S5對於癌症細胞可以產生比S4更加有效的癌症抑制效果，且S6效果也比S2或S3更加，證明以本發明之醫藥組合物具備有較佳的癌細胞腫瘤體積抑制功效。
表五、本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類非小細胞肺癌（A549）的癌細胞腫瘤團塊秤重與投藥劑量相關性。癌細胞腫瘤團塊重量單位為克（g）。
S1 S2 S3 S4 S5 S6
0.381 0.330 0.239 0.197 0.184 0.20
在表五中顯示患有人類非小細胞肺癌細胞的小鼠，在小鼠犧牲後平均腫瘤團塊重量抑制率：對比S1組的實驗結果顯示，S2組的腫瘤抑制率為13.5%，S3組的腫瘤抑制率為37.3%，S4組的腫瘤抑制率為48.3%，本發明之醫藥組合有效劑量組S5組的腫瘤抑制率為51.8%，本發明之醫藥組合低劑量組S6組的腫瘤抑制率為47.4%。因此在實驗結果可以得知S5對於癌症細胞可以產生比S4更加有效的癌症抑制效果，且S6效果也比S2或S3更加，證明以本發明之醫藥組合物具備有較佳的癌細胞腫瘤團塊重量抑制功效。
與目前現在肺癌標靶藥物比較，根據本實驗結果，可以清楚了解本發明之醫藥組合物在動物體內皆可以有效抑制腫瘤團塊重量與腫瘤體積，本發明之醫藥組合物能夠有效通過腸胃道吸收後，藥物明確靶向癌細胞腫瘤組織，且動物在服用藥過程中並無任何不適性。
實施例4 本發明之醫藥組合物對人類肺鱗狀上皮細胞癌細胞株（H520）於動物體內的癌細胞腫瘤抑制功效
為評估本發明之醫藥組合物是否會對人類肺鱗狀上皮細胞癌有抑制效果的功效、藥物經由腸胃道吸收後是否能夠有效抑制肺癌腫瘤生長、藥物是否會造成不適性而進行試驗。先以裸鼠皮下注射建立腫瘤模型，待觀察14天內並測量腫瘤大小，進行分成6組並開始給藥，藥物使用組接續以口服管餵試驗藥品，由於H520腫瘤在小鼠體內成長速度較快，因此在腫瘤成長至一定程度時進行動物犧牲，腫瘤模型裸鼠在13天給藥後犧牲，評估腫瘤生長的變化，並觀察試驗藥品對腫瘤的抑制效果，結果列於表六與表七中。第3圖繪示本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類肺鱗狀上皮細胞癌細胞株（H520）於動物體內的癌細胞腫瘤體積的抑制功效與投藥時間的相關性。第4圖繪示本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類肺鱗狀上皮細胞癌細胞株（H520）於動物體內的癌細胞腫瘤重量的抑制功效與投藥時間的相關性。
表六、本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類肺鱗狀上皮細胞癌（H520）的癌細胞腫瘤體積與投藥日期相關性，癌細胞腫瘤體積單位為mm 3。
日 4 7 9 11 犧牲當時
S1 366.4 721.4 1315.6 1759.9 2308.1
S2 269.6 538.8 802.4 1204.1 1604.3
S3 266.4 492.2 790.3 1216.3 1567.5
S4 259.6 506.4 898.6 1290.0 1653.1
S5 168.0 363.1 584.5 854.1 1216.3
S6 171.7 338.4 613.3 828.7 1116.6
在表六中日所代表的為投藥日期。
在表六中顯示患有人類肺鱗狀上皮細胞癌的小鼠，在腫瘤體積抑制率：在犧牲當時的各組腫瘤體積對比S1組的實驗結果顯示，S2組的腫瘤抑制率為30.49%，S3組的腫瘤抑制率為32.09%，S4組的腫瘤抑制率為28.38%，本發明之醫藥組合有效劑量組S5組的腫瘤抑制率為47.30%，本發明之醫藥組合低劑量組S6組的腫瘤抑制率為51.62%。根據實驗分析結果得知，人類肺鱗狀上皮細胞癌對於標靶藥物S4組有較高抗性，因此S4的治療上腫瘤抑制率為最小。S2跟S3組的腫瘤抑制率較本發明之醫藥組合物低，證明以本發明之醫藥組合物具備有較佳的癌細胞腫瘤體積抑制功效。另外，在本實驗中意外發現低劑量S6組對於此肺癌腫瘤型態反而有最佳的抑制效果。
表七、本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類肺鱗狀上皮細胞癌（H520）的癌細胞腫瘤團塊秤重與投藥劑量相關性。癌細胞腫瘤團塊重量單位為克。
S1 S2 S3 S4 S5 S6
1.374 0.955 0.933 0.981 0.787 0.659
在表七中顯示患有人類肺鱗狀上皮細胞癌的小鼠，腫瘤團塊重量抑制率：對比S1組的實驗結果顯示，S2組的腫瘤抑制率為30.5%，S3組的腫瘤抑制率為32.1%，S4組的腫瘤抑制率為28.6%，本發明之醫藥組合有效劑量組S5組的腫瘤抑制率為42.7%，本發明之醫藥組合低劑量組S6組的腫瘤抑制率為52.0%。根據實驗分析結果可以得知，不論在腫瘤體積或重量分析上，此腫瘤型態對於標靶藥物S4組有較高抗性，在腫瘤團塊重量抑制率同樣為低劑量S6組。
根據實驗結果顯示，標靶藥物對於人類肺鱗狀上皮細胞癌的治療效果較差，腫瘤組織對於標靶藥物會產生抗性。但本發明之醫藥組合對於此癌症治療能夠產生有效的腫瘤抑制效果，腫瘤組織沒有對於本發明之醫藥組合產生抗性，且在本實驗中意外發現低劑量S6組對於此肺癌腫瘤型態反而有最佳的抑制效果。
根據實施例3跟實施例4的分析結果，可以清楚知道不同型態肺癌腫瘤會對於標靶藥物產生抗性，使得腫瘤抑制治療效果下降。本發明之醫藥組合物在不同種型態的肺癌腫瘤治療上肺癌腫瘤無抗性問題，表現具備明顯的抑制功效。
實施例5 本發明之醫藥組合物對腦癌人類膠質母細胞瘤細胞株（T98G）的功效
為評估本發明之醫藥組合物是否會對腦癌人類膠質母細胞瘤細胞株（T98G）有抑制癌細胞存活率的功效，先以人類膠質母細胞瘤細胞株（T98G）細胞存活率進行分析，結果列於表八中。
表八、本發明之醫藥組合物對人類膠質母細胞瘤細胞株（T98G）細胞存活率，此癌細胞株應用於腦癌研究
Niclosamide Disulfiram Cu 存活率 （%）
8 - - 92.50
16 - - 87.87
- 16 - 96.37
- 41 - 97.27
- 83 - 96.15
- - 16 102.03
- - 41 102.19
- - 83 98.35
4 8 8 59.99
4 21 21 63.68
4 41 41 33.98
4 83 83 25.49
8 8 8 55.14
8 21 21 55.95
8 41 41 45.55
8 83 83 24.00
16 8 8 46.20
16 21 21 46.15
16 41 41 31.63
16 83 83 23.17
T98G是應用於腦癌研究和藥物開發的人類膠質母細胞瘤細胞株。本實驗結果顯示，在表八中，當Niclosamide、Disulfiram和藥理活性的多價離子Cu各自對於癌細胞株實驗時，其並無展現有效的抑制效果。在本發明之藥組合物的不同濃度組合下，都具有抑制效果，且當Niclosamide濃度大於Disulfiram和藥理活性的多價離子Cu濃度，或Disulfiram和藥理活性的多價離子Cu濃度大於Niclosamide濃度時，會產生更高程度癌細胞抑制效果，由此可知藥物彼此間可產生更高之協同功效。
如表八所示，本發明之醫藥組合物對人類膠質母細胞瘤細胞株（T98G）存活率與投藥劑量相關。本實驗所使用的藥理活性的銅離子型態為葡萄糖酸銅，實驗結果顯示，在Niclosamide、Disulfiram、銅離子各自投予T98G癌細胞株濃8~83nM，癌細胞存活率維持於相對高檔87.87%~102.19%，無法產生明顯效果。當本發明醫藥組合物同時投予癌細胞株，Niclosamide 4 nM、Disulfiram 8 nM、銅離子8 nM時，癌細胞存活率可以降至59.99%，具有顯著下降。當三個藥物彼此濃度互相調整時，可以使T98G癌細胞存活率至低可以下降至23.17%。在本實驗得知本發明醫藥組合，三個藥物可以產生更高程度之協同功效。
本實驗結果顯示，本發明之醫藥組合物對人類膠質母細胞瘤抑制癌細胞存活率的功效，其抑制癌細胞存活率係可以由本發明醫藥組合中各自劑量的調整比例呈正相關，使得該癌細胞存活率下降。
實施例6 本發明之醫藥組合物對腦癌人類膠質母細胞瘤細胞株（U-87）的功效
為評估本發明之醫藥組合物是否會對腦癌人類膠質母細胞瘤細胞株（U-87）有抑制癌細胞存活率的功效，先以人類膠質母細胞瘤細胞株（U-87）細胞存活率進行分析，結果列於表九中。
表九、本發明之醫藥組合物對人類膠質母細胞瘤細胞株（U-87）細胞存活率，此癌細胞株應用於腦癌研究亦用於乳腺癌研究
Niclosamide Disulfiram Cu 存活率 （%）
8 - - 89.33
16 - - 88.60
- 16 - 102.66
- 41 - 101.02
- 83 - 63.98
- - 16 103.71
- - 41 103.97
- - 83 101.73
4 8 8 73.69
4 21 21 70.48
4 41 41 30.45
4 83 83 35.46
8 8 8 64.63
8 21 21 62.78
8 41 41 36.10
8 83 83 38.99
16 8 8 58.18
16 21 21 52.57
16 41 41 32.93
16 83 83 35.74
已知人類膠質母細胞瘤細胞株（U-87）對於細胞凋亡的抗性較高，對於標靶藥物IRESSA（Gefitinib）及ABT-737（Bcl-2抑制劑）等的抗性較高（Chang et al., 2011; Cristofanon and Fulda, 2012; Jane et al., 2013）。
實驗結果顯示，表九中，當Niclosamide、Disulfiram和藥理活性的多價離子Cu各自對於癌細胞株實驗時，其並無展現有效的抑制效果。在本發明之藥組合物的不同濃度組合下，都具有抑制效果，且當Niclosamide濃度大於Disulfiram和藥理活性的多價離子Cu濃度，或Disulfiram和藥理活性的多價離子Cu濃度大於Niclosamide濃度時，會產生更高程度癌細胞抑制效果，由此可知藥物彼此間可產生更高之協同功效。
如表九所示，本發明之醫藥組合物對人類膠質母細胞瘤細胞株（U-87）存活率與投藥劑量相關。本實驗所使用的藥理活性的銅離子型態為葡萄糖酸銅，實驗結果顯示，在Niclosamide、Disulfiram、銅離子各自投予U-87癌細胞株濃8~83nM，癌細胞存活率維持於63.98%~103.97%。當單獨投予Disulfiram 83 nM時，癌細胞存活率為63.98%。運用本發明醫藥組合物，可以有效降低藥物濃度並且提高癌細胞抑制率。當本發明醫藥組合物同時投予癌細胞株，Niclosamide 4 nM、Disulfiram 41 nM、銅離子 41 nM時，癌細胞存活率可以降至30.45%，對比於單獨使用Disulfiram具，其癌細胞存活率有顯著下降。當三個藥物彼此濃度互相調整時，可以使U-87癌細胞存活率至低可以下降至30.45%。在本實驗得知本發明醫藥組合，本發明醫藥組合物的三個藥物在特定濃度下可以產生較低且明顯的癌細胞存活率，組合物之間可產生更高程度之協同功效。 以上所述僅為本發明之較佳實施例，凡依本發明申請專利範圍所做之均等變化與修飾，皆應屬本發明之涵蓋範圍。
無
第1圖繪示本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類非小細胞肺癌細胞株（A549）於動物體內的癌細胞腫瘤體積的抑制功效與投藥時間的相關性。 第2圖繪示本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類非小細胞肺癌細胞株（A549）於動物體內的癌細胞腫瘤重量的抑制功效與投藥時間的相關性。 第3圖繪示本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類肺鱗狀上皮細胞癌細胞株（H520）於動物體內的癌細胞腫瘤體積的抑制功效與投藥時間的相關性。 第4圖繪示本發明之醫藥組合物與習知之標靶藥物組對人類肺鱗狀上皮細胞癌細胞株（H520）於動物體內的癌細胞腫瘤重量的抑制功效與投藥時間的相關性。

Claims (10)

  1. 一種醫藥組合物，包含： （a）癌細胞線粒體的靶向劑； （b）離子螯合劑；以及 （c）藥理活性的多價離子； 其中，該癌細胞線粒體的靶向劑為Niclosamide、該離子螯合劑為Disulfiram、該藥理活性的多價離子為選自由鎂離子、鈣離子、錳離子、亞鐵離子、銅離子、鋅離子所組成的一群組，（a）的重量比以該醫藥組合物總重計為64.5%~43.7%，（b）的重量比以該醫藥組合物總重計為56.2%~16.1%，（c）的重量比以該醫藥組合物總重計為19.4%~0.000116%。
  2. 如請求項1的醫藥組合物，其中0.091≤（a）/（（b）+（c））≤15.548。
  3. 如請求項1的醫藥組合物，其中0.214≤（b）/（c）≤1.8867 10 4。
  4. 一種如請求項1或請求項2或請求項3之醫藥組合物之用途，用於製備用於治療有需要之個體之惡性腫瘤之藥物。
  5. 如請求項4之用途，其中該惡性腫瘤選自由實質固態瘤與血液惡性疾病所組成的一群組。
  6. 如請求項5之用途，其中該惡性腫瘤選自由肺癌與腦癌所組成的一群組。
  7. 如請求項4之用途，其中（a）每次的投予量為2000 mg~ 100 mg，（b）每次的投予量為500 mg~ 128.6 mg，（c）每次的投予量為600 mg~ 2.65×10 -4mg。
  8. 如請求項7之用途，其中（c）的投予順序不晚於（b）的投予順序。
  9. 如請求項4之用途，其中該藥物1天投予不超過2次。
  10. 如請求項4之用途，其中該藥物以口服、注射、經皮、或吸入方式投藥。
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