TW202405161A

TW202405161A - 益生菌加中草藥的組合物及其用途

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Publication number: TW202405161A
Application number: TW111128485A
Authority: TW
Inventors: 陳博詠; 沈峰毅; 周泰廷
Original assignee: 統欣生物科技股份有限公司
Priority date: 2022-07-29
Filing date: 2022-07-29
Publication date: 2024-02-01
Also published as: TWI817632B

Abstract

本發明提供一種益生菌加中草藥的組合物，其包含益生菌與中草藥，其中該益生菌選自由副乾酪乳桿菌TX-26和加氏乳桿菌MS-72所組成的群組；中草藥包含紅棗、枸杞、黃耆、西洋參、甘草；本發明之益生菌加中草藥的組合物具有腸胃保健之功效，腸胃保健是耐胃酸膽鹽、免疫調節、抗氧化及抑制腸道有害菌，有害菌包含金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、仙人掌桿菌、及產氧莢膜梭菌。

Description

益生菌加中草藥的組合物

本發明是關於一種益生菌加中草藥的組合物，且特別是關於一種益生菌與包含紅棗、枸杞、黃耆、西洋參、甘草之中草藥的組合物。

依據世界衛生組織的定義，益生菌(probiotic)是指在數量足夠時有益於宿主健康的活性微生物。市面上常見的益生菌大多屬於乳酸菌（lactic acid bacteria），乳酸菌是泛指能夠代謝糖類，產生一定程度以上乳酸之數種細菌，例如：乳酸桿菌屬( Lactobacillus)、乳酸球菌屬( Lactococcus)、雙歧桿菌屬( Bifidobacteria)、鍵球菌屬( Streptococcus)、念球菌屬( Leuconostoc)等，其中乳酸桿菌屬包含副乾酪乳桿菌( Lactobacillus paracasei)及加氏乳桿菌( Lactobacillus gasseri)，其若具有改善宿主腸道內生性微生物相平衡的功能，則亦可概稱為益生菌或益多菌。

近年來發現不論是益生菌活菌本身或其死菌體、菌體萃取物或其代謝產物(如維生素B群及維生素K等)皆具有整腸、促進腸道消化吸收、抑制致病菌、降低膽固醇、活化免疫系統、抑制腫瘤、調節血壓、減緩過敏反應、去除自由基抗氧化等促進宿主健康的功效，因此具有應用於預防與輔助治療各種文明病症狀的潛力。此外，乳酸菌在食品領域也扮演重要角色，可應用於醱酵乳品、火腿等肉製品、醃製品、醬油或麵包等，以加強保存性及風味。許多市面上含有益生菌的產品更以「酵素」名稱販售，以強調其整腸、保肝、防癌、強身、增進免疫等保健機能。

紅棗，是在中醫藥和華人的生活裡重要的藥材和食材，根據中醫理論，紅棗性味甘、溫，能健脾益胃；且紅棗富含B維生素，維生素K，鈣，鐵，鎂，鉀，鋅和錳，以及不含脂肪，其營養非常豐富；此外，紅棗富含多種抗氧化劑，可以用來治療和氧化有關的疾病；紅棗裡還含有抗發炎和抗菌化合物，在抵抗傳染病中起作用；紅棗另外還有助消化、保護心臟和調節血糖等功效。

枸杞，又稱「枸檵」、「苟起子」、「枸杞紅實」等，是重要的養生佳品，枸杞包含豐富的礦物質，特別是包含大量的硒元素，硒元素是一種抗氧化成分，能抵抗自由基，提高抗病能力；且枸杞包含豐富的維生素，特別是包含大量的維生素A，所以又說枸杞能清肝明目；此外，枸杞中含有一種獨特的成分叫「枸杞多醣」，枸杞多醣對血脂和血糖具有調節的功效，且能抵抗自由基，預防血管或其他臟器的衰老，有保護血管之抗氧化效果；另外，枸杞多醣能抵抗腫瘤細胞的快速生長，破壞腫瘤細胞DNA，還有助抵抗輻射，保護生殖、神經系統，並提高身體免疫能力，從而增加抗病能力。

黃耆，又稱「黃芪」、「北芪」等，是豆科植物膜莢黃耆或內蒙古黃耆的乾燥根部，黃耆具有免疫、抗癌和抗老作用，具體來說：黃耆可增強腫瘤病人的免疫功能，降低因化療引起的毒副作用；黃耆使細胞生理代謝作用增強，延長人胎腎細胞、肺細胞的壽命。

西洋參，又稱「花旗參」、「野山泡參」、「廣東人參」等，是五加科多年生植物西洋參的根，根據中醫理論，西洋參味甘、微苦、性涼、歸心、肺、腎經；西洋參可以增加胰島素的生成和減少β胰島細胞的死亡，且西洋參具有抗氧化能力，有效地防止脂質和水溶介質內的氧化；此外，西洋參根還對於免疫功能具有增強作用，具有抑制癌細胞生長的作用。

甘草，又稱「生草」、「粉草」、「甜草根」等，古來就有「眾藥之王」的美譽；甘草富含甘草甜素、甘草酸等類三萜化合物，以及多種黃酮類化合物、多糖等營養成分，藥用價值極高，不但能抗菌、避免內臟發炎，更能有效消除體內活性氧；此外，甘草能改善細胞受損、加速細胞修復，特別能夠對付紫外線、二手菸等致癌物質所帶來的細胞損害。

有鑑於上述的益生菌、紅棗、枸杞、黃耆、西洋參及甘草各有其獨特的保健功效，因此市面上充斥許多針對此些保健成分分別進行設計的保健產品。然而，若保健產品單獨使用其中一種，或是將任一種與其他成分相搭配，則無法兼顧此些保健成分上述所有保健功效並使其相輔相成。因此，本發明之發明人於是加以研發改良，以期提供一種益生菌加中草藥的組合物，並且提供較佳適當組成比例，以兼顧其成分相容性、保健療效及口感或腸道/皮膚吸收性等，使益生菌加中草藥的組合物具有腸胃保健之功效。

本發明的主要目的在於提供一種益生菌加中草藥的組合物，且特別是益生菌加紅棗、枸杞、黃耆、西洋參、甘草等中草藥之組合物。

為了達成上述目的，本發明提供一種益生菌加中草藥的組合物，其包含益生菌與中草藥，其中該益生菌選自由副乾酪乳桿菌TX-26及加氏乳桿菌MS-72所組成的群組；該副乾酪乳桿菌TX-26的寄存編號為BCRC911137；該加氏乳桿菌MS-72的寄存編號為BCRC910977；該中草藥包含紅棗、枸杞、黃耆、西洋參、以及甘草。

在本發明的一實施例中，相對於該組合物的總重量，該益生菌的含量為1%~20%。

在本發明的一實施例中，該中草藥包含：紅棗20~50份、枸杞20~50份、黃耆30~60份、西洋參1~5份、甘草5~15份。

本發明另提供一種益生菌組合物，其包含副乾酪乳桿菌TX-26，寄存編號為BCRC911137，具有腸胃保健之功效。

在本發明的一實施例中，組合物進一步包含可食性材料，該可食性材料包含水、流體乳品、牛奶、濃縮牛奶、優酪乳、酸乳、冷凍優格、乳桿菌發酵飲料、奶粉、冰淇淋、乳酪、乾酪、豆奶、發酵豆奶、蔬果汁、果汁、運動飲料、甜點、果凍、糖果、嬰兒食品、健康食品、動物飼料、中草藥材或膳食補充品。

在本發明的一實施例中，組合物進一步包含藥學上可接受之載劑。

本發明另提供一種副乾酪乳桿菌，其係副乾酪乳桿菌TX-26，寄存編號為BCRC911137，具有腸胃保健之功效。

本發明另提供一種組合物作為製備醫藥組合物之用途，其中，用途為用於腸胃保健，益生菌為活菌體、死菌體、或其萃取物。

在本發明的一實施例中，組合物為每日劑量1×10 ⁸-1×10 ¹¹CFU/天益生菌。

在本發明的一實施例中，腸胃保健是耐胃酸膽鹽、免疫調節、抗氧化、抑制腸道有害菌。

在本發明的一實施例中，有害菌包含金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、仙人掌桿菌、及產氧莢膜梭菌。

如上所述，本發明之益生菌加中草藥的組合物，其包含益生菌與中草藥，其中該益生菌選自由副乾酪乳桿菌TX-26和加氏乳桿菌MS-72所組成的群組；中草藥包含紅棗、枸杞、黃耆、西洋參、甘草，本發明之益生菌加中草藥的組合物具有腸胃保健之功效。

本說明書使用之「或」、「以及」、「和」，除非另有說明，皆指涉「或/和」。此外，用語「包含」、「包括」皆非有所限制之開放式連接詞。前述段落僅為系統性之指涉而不應解釋為對發明主體之限制。

本說明書使用之「%」若無特定說明皆指「重量百分比（wt%）」；數值範圍（如10%~11%的A）若無特定說明皆包含上、下限值（即10%≦A≦11%）；數值範圍若未界定下限值（如低於0.2%的B，或0.2%以下的B），則皆指其下限值可能為0（即0%≦B≦0.2%）；各成份的「重量百分比」之比例關係亦可置換為「重量份」的比例關係。

本說明書中所揭露的所有數值可具有 ± 10% 的標準技術測量誤差(標準差)。詞彙「約」的目的是表示相對某給定值的 ±10%、±5%、±2.5%、或 ±1%，也就是說，「約20%」代表 20±2%、20±1%、20±0.5%、或 20±0.25%。

本發明所使用之材料，除有特別指明者，皆為市售易於取得之材料。本發明實施例所使用之副乾酪乳桿菌TX-26（ Lactobacillus paracaseiTX-26），其係寄存於台灣食品工業研究所，寄存編號為BCRC911137；加氏乳桿菌（ Lactobacillus gasseriMS-72），其係寄存於台灣食品工業研究所，寄存編號為BCRC910977。

本說明書使用之「提高」、「提升」、「增強」或近似用語，係指涉增加或延長益生菌加中草藥的組合物之意圖之效力或持續期間。因此，提升益生菌加中草藥的組合物之療效，其中「提升」係指涉其餘治療系統中增加或延長之能力，該能力係藥效或持續期間。

本說明書使用之「抗」、「抑制」以及其類用語係指預防、延緩、改善、減少或逆轉症狀之發生。

本說明書使用之「協同作用(synergistic effect)」，意指單獨因子或活性劑的同時作用，其全部效應的總和大於單獨因子的效應。

本發明係以下面的實施例予以示範闡明，但本發明不受下述實施例所限制。

[益生菌加中草藥的組合物及其用途]

本發明提供一種益生菌加中草藥的組合物，其包含益生菌與中草藥，其中益生菌的含量視益生菌的種類來決定；在一實施例中，相對於組合物的總重量，益生菌的含量為約1~20%，較佳為約1~5%；藉由使益生菌的含量在上述範圍內，可以兼顧其成分相容性、保健療效及口感或腸道/皮膚吸收性等，並呈現協同作用以更加提升益生菌加中草藥的組合物對於腸胃保健之功效。

在一實施例中，本發明之中草藥的組合物是由益生菌與中草藥所組成之組合物，其中益生菌的含量視益生菌的種類來決定；在一實施例中，相對於組合物的總重量，益生菌的含量為約1~20%，較佳為約1~5%，換句話說，中草藥的含量為約99~80%，較佳為約99~95%；藉由使各成分的含量在上述範圍內，可以兼顧其成分相容性、保健療效及口感或腸道/皮膚吸收性等，並呈現協同作用以更加提升益生菌加中草藥的組合物能對於腸胃保健之功效。

本發明提供一種益生菌加中草藥的組合物作為製備醫藥組合物之用途，其中，用途為用於腸胃保健；在一實施例中，腸胃保健是耐胃酸膽鹽、免疫調節、抗氧化、以及抑制腸道有害菌；在一實施例中，有害菌包含金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、仙人掌桿菌、及產氧莢膜梭菌。

在一實施例中，益生菌加中草藥的組合物為每日劑量1×10 ⁸-1×10 ¹¹CFU/天益生菌。

在一實施例中，本發明的益生菌與中草藥可呈現協同作用，即相較於單方之益生菌、單方之中草藥，本發明的益生菌加中草藥的組合物具有更好的耐胃酸膽鹽、免疫調節、抑制腸道有害菌之功效、及較少的副作用。

[益生菌組合物及其用途]

本發明提供一種益生菌組合物，其包含副乾酪乳桿菌TX-26，其寄存編號為BCRC911137，具有腸胃保健之功效；在一實施例中，相對於組合物的總重量，副乾酪乳桿菌TX-26的含量為約1~20%，較佳為約1~5%；藉由使副乾酪乳桿菌TX-26的含量在上述範圍內，可以兼顧其成分相容性、保健療效及口感或腸道/皮膚吸收性等，並呈現協同作用以更加提升益生菌組合物對於腸胃保健之功效。

本發明提供一種益生菌組合物作為製備醫藥組合物之用途，其中，用途為用於腸胃保健；在一實施例中，腸胃保健是耐胃酸膽鹽、免疫調節、抗氧化、以及抑制腸道有害菌；在一實施例中，有害菌包含金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、仙人掌桿菌、及產氧莢膜梭菌。

在一實施例中，益生菌組合物為每日劑量1×10 ⁸-1×10 ¹¹CFU/天益生菌。

在一實施例中，該些組合物的投予形式包括溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、口嚼膠、濃漿、膠體或外用劑。

在一實施例中，該些組合物進一步包含可食性材料，該可食性材料包含水、流體乳品、牛奶、濃縮牛奶、優酪乳、酸乳、冷凍優格、乳桿菌發酵飲料、奶粉、冰淇淋、乳酪、乾酪、豆奶、發酵豆奶、蔬果汁、果汁、運動飲料、甜點、果凍、糖果、嬰兒食品、健康食品、動物飼料、中草藥材、膳食補充品或其組合，但本發明不限於此。

在一實施例中，該些組合物的投予形式可以例如是塗覆於皮膚表面來施用，但本發明不限於此；在一實施例中，該些組合物的投予形式可以例如是以口服形式服用至生物體內以產生作用，但本發明不限於此。

在一實施例中，該些組合物係可利用本發明所屬技術領域具有通常知識者所詳知的技術，將本案所提供之組合物，與至少一藥學上可接受之載劑（vehicle），製備一適用本發明醫藥組合物之劑型。其中該劑型包含但不限於溶液、乳劑、懸浮液、粉末、錠劑、口含錠、藥片、口嚼膠、膠囊以及其他類似或適用本發明之劑型。

本說明書使用之「藥學上可接受」係指稱物質或組合物必須與其藥學上調配物之其他成分相容，且不加劇患者之症狀。

本說明書使用之「藥學上可接受之載劑」包含一種或多種選自於下列的成分類型：溶劑、乳化劑、懸浮劑、分解劑、黏結劑、賦形劑、安定劑、螯合劑、稀釋劑、膠凝劑、防腐劑、潤滑劑、表面活性劑、及其他類似或適用於本發明之載劑。

該些組合物中，亦可依需適宜地添加一種或多種以上製劑領域內通常使用之溶解輔助劑、緩衝劑、著色劑、調味劑等。

本說明書使用之「藥學上可接受之賦形劑」包括但不限於，聚合物、樹脂、增塑劑、填料、潤滑劑、稀釋劑、黏合劑、崩解劑、溶劑、共一溶劑、界面活性劑、防腐劑、甜味劑、調味劑、藥學級的染料或顏料、及黏度劑至少一者。

本說明書使用之「醫藥組合物」係指稱一固體或液體組成物，其形式、濃度和純度程度適合投予給患者，在投予之後，其可誘發所欲生理變化；醫藥組成物為無菌及/或非發熱性者（non-pyrogenic）。

本說明書使用之「免疫調節」係指可專致的或非專致的增加或減少免疫反應，亦指可抑制過敏反應或自我免疫反應，但同時保留甚至增強對外來入侵物或癌細胞的抵抗作用。

[益生菌]

在能夠達到本發明上述之技術效果的情況下，任何益生菌都適用於本發明，其中較佳為乳酸桿菌屬( Lactobacillus)之益生菌；在一實施例中，益生菌可以為副乾酪乳桿菌( Lactobacillus paracasei)，更佳為副乾酪乳桿菌TX-26，其寄存編號為BCRC911137，具有腸胃保健之功效；在另一實施例中，益生菌可以為加氏乳桿菌( Lactobacillus gasseri)，更佳為加氏乳桿菌MS-72，其寄存編號為BCRC910977，具有腸胃保健之功效；即本案之益生菌較佳為選自由副乾酪乳桿菌TX-26及加氏乳桿菌MS-72所組成的群組；藉由使益生菌為上述菌種，可以更加提升組合物之腸胃保健之功效。

在一實施例中，本發明之益生菌可以包含兩種以上的菌種，在能夠達到本發明上述之技術效果的情況下，各益生菌的菌種可以任意比例進行混合，例如可以使用副乾酪乳桿菌TX-26及加氏乳桿菌MS-72之任意比例進行混合作為本發明之益生菌，但本發明不限於此。

在一實施例中，益生菌可以是以任何形式存在於本發明之益生菌加中草藥的組合物中，例如可以為活菌體、死菌體、或其萃取物等，可以根據投予形式或所欲達到的功效選擇，但本發明不限於此。

[中草藥]

本發明之中草藥至少包含紅棗、枸杞、黃耆、西洋參、以及甘草，其各成分含量可以視益生菌的種類來調整；在一實施例中，中草藥包含：紅棗約20~50份，或者約30~40份；枸杞約20~50份，或者約30~40份；黃耆約30~60份，或者約40~50份；西洋參約1~5份，或者約2~4份；甘草約5~15份，或者約7~12份；藉由使中草藥的各成分含量比例為上述範圍，可以兼顧其成分相容性、保健療效及口感或腸道/皮膚吸收性等，並呈現協同作用以更加提升益生菌加中草藥的組合物之耐胃酸膽鹽、免疫調節、抗氧化及抑制腸道有害菌等之功效。

以下列舉數個實施例與比較例，來說明本發明的組合物，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明精神與範圍內，當可做各種更動與潤飾。

實驗1：最適濃度制定-增長試驗能力評估

對本發明之益生菌加中草藥的組合物進行最適濃度制定；藉由將不同濃度的中草藥加入益生菌培養基中，觀察益生菌的生長趨勢，並依據生長情形，找出最適之中草藥濃度。

選擇不同濃度的中草藥加入MRS培養基中，經過高溫高壓滅菌後，放入預先活化好的益生菌進行培養，16-18小時後，進行序列稀釋，塗盤觀察益生菌生長情形，其實驗組別如下述表1所示：

[表1] 實驗組別之代號及說明：

組別	說明	代號
1	單方之1%中草藥	1R
2	單方之5%中草藥	5R
3	單方之10%中草藥	10R
4	單方之副乾酪乳桿菌TX-26	TX-26
5	副乾酪乳桿菌TX-26+1%中草藥複方	TX-26+1R
6	副乾酪乳桿菌TX-26+5%中草藥複方	TX-26+5R
7	副乾酪乳桿菌TX-26+10%中草藥複方	TX-26+10R
8	單方之加氏乳桿菌MS-72	MS-72
9	加氏乳桿菌MS-72+1%中草藥複方	MS-72+1R
10	加氏乳桿菌MS-72+5%中草藥複方	MS-72+5R
11	加氏乳桿菌MS-72+10%中草藥複方	MS-72+10R

實驗結果請參考下述表2、表3以及圖1，副乾酪乳桿菌TX-26添加三種不同濃度（1%、5%、10%）的中草藥進行培養，其中[TX-26+1R]的組別生長趨勢最佳，其菌數生長菌數為單方的1.7倍（高於單方70%）；加氏乳桿菌MS-72添加三種不同濃度（1%、5%、10%）的中草藥進行培養，其中[MS-72+10R]的組別生長趨勢最佳，其菌數生長菌數為單方的7.13倍（高於單方613%）。

[表2] 添加不同濃度之中草藥對益生菌生長之影響（其生菌數之表示方式為CFU/g）：

組別	純菌	1R	5R	10R
TX-26	1.66×10 ⁹	2.82×10 ⁹	2.22×10 ⁹	2.12×10 ⁹
MS-72	5.05×10 ⁸	9.85×10 ⁸	1.36×10 ⁹	3.60×10 ⁹

[表3] 益生菌加中草藥的組合物之生長試驗結果(rate)：

組別	純菌	1R	5R	10R
TX-26	1.00	1.70	1.34	1.28
MS-72	1.00	1.95	2.68	7.13

以純菌TX-26及MS-72各自為1作為比值。

從上述內容可知，不論添加1%、5%或是10%的中草藥，相較於不添加中草藥（純菌），都能促使益生菌的生長；換句話說，不論是1%、5%或是10%的中草藥，由於不會使益生菌死亡，可推知中草藥不會影響益生菌的藥效，即本發明之益生菌加中草藥的組合物藉由使中草藥在上述的濃度範圍內，不會產生藥物(益生菌)-藥物(中草藥)間的排斥等副作用，其成分具有相容性。

實驗2：通過腸胃道能力評估─耐胃酸膽鹽試驗

對本發明之益生菌加中草藥的組合物進行功效性評估；將中草藥加入益生菌培養基活化後，模擬益生菌經人類消化道之消化過程，經胃酸及膽鹽之逆境，而能存活的菌數。

將益生菌分別經pH2.5（胃酸）、0.3%膽鹽及pH2.5（胃酸）+0.3%膽鹽各處理三小時，再計數存活率，探討該菌株對酸環境及膽鹽環境之耐受性。

本實驗之耐胃酸膽鹽能力的計算公式如下式(1)：

式(1)：耐胃酸膽鹽能力(%) =

請參考圖2、圖3，本實驗為模擬人類消化道的嚴苛考驗，探討該菌株對酸環境及膽鹽環境之耐受性。益生菌加中草藥的組合物經過pH2.5（胃酸）+0.3%膽鹽的連續處理後，其菌數存活率皆優於單方益生菌；具體來說，益生菌加中草藥的組合物[TX-26+1R]及[MS-72+5R]的菌數存活率皆優於單方益生菌TX-26及MS-72，且經過pH2.5（胃酸）+0.3%膽鹽的連續處理後，菌數存活能力皆高於單方約17.16%。

從上述結果可知，本發明之益生菌加中草藥的組合物可以通過人類消化道，並呈現協同作用，對於酸環境及膽鹽環境更具有耐受性；換句話說，本發明之益生菌加中草藥的組合物具有耐胃酸膽鹽的功效。

實驗3：抑菌能力試驗

對本發明之益生菌加中草藥的組合物進行功效性評估；針對四種微生物(壞菌)進行試驗，包括金黃色葡萄球菌( Staphylococcus aureusBCRC10451)、仙人掌桿菌( Bacillus cereusBCRC10603)、腸道沙門氏菌( Salmonella entericaBCRC10742)及產氣莢膜桿菌( Clostridium perfringensBCRC10913)進行抗菌試驗，包含抑菌圈試驗、最低抑菌濃度、最低殺菌濃度及微生物消長試驗，以測試單方之益生菌、單方之中草藥、及本發明之益生菌加中草藥的組合物之抗菌能力。

將益生菌TX-26及MS-72以MRS於37℃培養16-18 hr後，接種至含有中草藥之MRS培養基，於37℃培養16-18 hr，針對目標微生物進行下述之抗菌能力試驗。

一、抑菌圈試驗

選用四種壞菌（金黃色葡萄球菌、仙人掌桿菌、腸道沙門氏菌及產氣莢膜桿菌）進行測試，將配置好的培養基挖洞後放入測試樣品，培養24小時觀察，以尺量測抑菌圈的直徑(mm)。

請參考表4、圖4至圖7，實驗結果顯示，益生菌加中草藥的組合物[TX-26+1R]及[MS-72+5R]對金黃色葡萄球菌、仙人掌桿菌、腸道沙門氏菌及產氣莢膜桿菌皆可形成抑菌圈，且抑菌圈大小更優於單方之益生菌TX-26及MS-72。益生菌加中草藥的組合物[MS-72+5R]對金黃色葡萄球菌及產氣莢膜桿菌優於益生菌加中草藥的組合物[TX-26+1R]，而益生菌加中草藥的組合物[TX-26+1R]對仙人掌桿菌及腸道沙門氏菌優於益生菌加中草藥的組合物[MS-72+5R]。

[表4] 益生菌加中草藥的組合物之抑菌圈結果

	1	2	3	4	5	6
抑菌圈直徑平均(mm)/組別	1R	5R	TX-26	TX-26+1R	MS-72	MS-72+5R
金黃色葡萄球菌	8.0	8.0	10.0	12.7	12.7	15.0
仙人掌桿菌	8.0	8.0	20.7	25.7	15.0	16.0
腸道沙門氏菌	8.0	8.0	23.3	24.3	15.0	19.3
產氣莢膜桿菌	8.0	8.0	13.7	15.0	13.0	24.7

二、最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration, MIC)

將試驗菌株活化後，將菌數調整成1×10 ⁶~1×10 ⁸CFU/mL。試驗樣品經離心去除菌體後之上清液，分別做2倍系列稀釋，共得10個測試濃度，樣品濃度分別為66.67、33.33、16.67、8.33、4.17、2.08、1.04、0.52、0.26、0.13%。以1：1比例加入96 well microplates，置於37℃培養箱培養72小時，肉眼觀察混濁度並拍照。若微生物澄清無生長，則此為最小抑菌濃度。

三、最低殺菌濃度(minimum bactericidal concentration, MBC)

將澄清well中的液體取出100 µL均勻塗抹在培養基平板上，再置於37℃培養72小時，算其菌數。若無菌落生長，則此為最低殺菌濃度。

四、抑菌曲線分析

以最小抑菌濃度MIC結果，將澄清為抑菌能力100%，混濁為抑菌能力0，繪製出抑菌曲線。

將益生菌加中草藥的組合物之上清液，針對四種微生物包括金黃色葡萄球菌、仙人掌桿菌、腸道沙門氏菌及產氣莢膜桿菌進行上述MIC、MBC試驗，具體實驗結果請參考下述表5。

[表5] 益生菌加中草藥的組合物之MIC及MBC抗菌試驗

[表5]

樣品濃度(%)		1	2	3	4	5	6
組別	試驗	1R	5R	TX-26	TX-26 +1R	MS-72	MS-72 +5R
金黃色葡萄球菌	MIC	NA	NA	66.7	33.3	66.7	33.3
MBC	NA	NA	NA	NA	NA	NA
仙人掌桿菌	MIC	NA	NA	66.7	33.3	66.7	33.3
MBC	NA	NA	NA	NA	NA	NA
腸道沙門氏菌	MIC	NA	NA	33.3	33.3	33.3	33.3
MBC	NA	NA	NA	NA	NA	NA
產氣莢膜桿菌	MIC	NA	NA	66.7	66.7	66.7	66.7
MBC	NA	NA	NA	NA	NA	NA

從上表可知，MIC結果顯示益生菌加中草藥的組合物[TX-26+1R]及[MS-72+5R]上清液對金黃色葡萄球菌及仙人掌桿菌的抑菌效果優於單方之益生菌TX-26及MS-72。益生菌加中草藥的組合物[TX-26+1R]及[MS-72+5R]上清液對腸道沙門氏菌及產氣莢膜桿菌與單方之益生菌TX-26及MS-72有相同之最低抑菌濃度。此外，MBC結果皆長菌，顯示益生菌加中草藥的組合物之上清液僅具有抑菌效果，並未有殺菌效果。益生菌加中草藥的組合物對四種微生物之最小抑菌濃度之抑菌曲線請參考圖8至圖11。

五、好壞菌消長試驗

益生菌樣品(好菌)與四株微生物(壞菌)定量至10 ⁹CFU/mL，以1:1比例放入混合培養液，於37℃培養24小時，將樣品稀釋計算菌數，以分析益生菌及四種微生物菌數之消長，其具體實驗結果請參考圖12至圖15、及下述表6~表9。

[表6] 益生菌加中草藥的組合物與金黃色葡萄球菌共培養24小時之log菌數

菌數log	樣品	TX-26	TX-26+1R	MS-72	MS-72+5R
益生菌	原始接種	7.92	7.78
個別培養	9.25	9.71	9.34	9.68
共同培養	9.15	9.70	9.20	9.68
金黃色葡萄球菌	原始接種	7.65
個別培養	8.40
共同培養	4.83	2.65	4.69	＜1

[表7] 益生菌加中草藥的組合物與仙人掌桿菌共培養24小時之log菌數

菌數log	樣品	TX-26	TX-26+1R	MS-72	MS-72+5R
益生菌	原始接種	7.92	7.78
個別培養	9.25	9.71	9.34	9.68
共同培養	9.37	9.59	9.41	9.68
仙人掌桿菌	原始接種	7.26
個別培養	8.66
共同培養	3.84	＜1	3.62	＜1

[表8] 益生菌加中草藥的組合物與腸道沙門氏菌共培養24小時之log菌數

菌數log	樣品	TX-26	TX-26+1R	MS-72	MS-72+5R
益生菌	原始接種	7.92	7.78
個別培養	9.25	9.71	9.34	9.68
共同培養	9.19	9.71	9.38	9.75
腸道沙門氏菌	原始接種	8.04
個別培養	6.65
共同培養	＜1	＜1	＜1	＜1

[表9] 益生菌加中草藥的組合物與產氣莢膜桿菌共培養24小時之log菌數

菌數log	樣品	TX-26	TX-26+1R	MS-72	MS-72+5R
益生菌	原始接種	7.92	7.78
個別培養	9.25	9.71	9.34	9.68
共同培養	8.94	9.12	9.58	9.54
產氣莢膜桿菌	原始接種	7.72
個別培養	8.65
共同培養	5.17	3.93	4.98	＜1

從上述結果可知，益生菌加中草藥的組合物[TX-26+1R]及[MS-72+5R]與金黃色葡萄球菌、仙人掌桿菌及產氣莢膜桿菌共培養24小時，皆可抑制微生物生長，且使好菌增長，壞菌下降。單方之益生菌TX-26、MS-72及益生菌加中草藥的組合物[TX-26+1R]及[MS-72+5R]與腸道沙門氏菌共培養24小時，皆可完全抑制微生物生長。益生菌加中草藥的組合物[MS-72+5R]對金黃色葡萄球菌、仙人掌桿菌及產氣莢膜桿菌抑制效果更優於益生菌加中草藥的組合物[TX-26+1R]。

綜上所述，益生菌加中草藥的組合物針對四種微生物進行試驗，包括金黃色葡萄球菌、仙人掌桿菌、腸道沙門氏菌及產氣莢膜桿菌。抑菌圈試驗結果顯示，益生菌加中草藥的組合物對四種微生物皆有很好之抑菌效果。MIC結果顯示，益生菌加中草藥的組合物之上清液對金黃色葡萄球菌及仙人掌桿菌的抑菌效果優於對腸道沙門氏菌及產氣莢膜桿菌。

益生菌加中草藥的組合物分別與四種微生物共培養24小時，分析益生菌(益生菌)及微生物菌數之消長。結果顯示，益生菌加中草藥的組合物對四種微生物皆有很好之抑菌效果，其中益生菌加中草藥的組合物[MS-72+5R]可完全抑制四種微生物生長。

總體而言，益生菌加中草藥的組合物對金黃色葡萄球菌、仙人掌桿菌、腸道沙門氏菌及產氣莢膜桿菌等四種微生物皆有很好之抑菌能力。

雖然本發明已以較佳實施例揭露，然其並非用以限制本發明，任何熟習此項技藝之人士，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

無。

圖1是本發明之益生菌加中草藥的組合物之益生菌生長試驗結果。

圖2是本發明之益生菌加中草藥的組合物之耐胃酸膽鹽試驗結果，其中益生菌為副乾酪乳桿菌TX-26。

圖3是本發明之益生菌加中草藥的組合物之耐胃酸膽鹽試驗結果，其中益生菌為加氏乳桿菌MS-72。

圖4是本發明之益生菌加中草藥的組合物之抑菌圈試驗結果，其中細菌為金黃色葡萄球菌。

圖5是本發明之益生菌加中草藥的組合物之抑菌圈試驗結果，其中細菌為仙人掌桿菌。

圖6是本發明之益生菌加中草藥的組合物之抑菌圈試驗結果，其中細菌為腸道沙門氏菌。

圖7是本發明之益生菌加中草藥的組合物之抑菌圈試驗結果，其中細菌為產氣莢膜桿菌。

圖8是本發明之益生菌加中草藥的組合物的上清液之抑菌曲線圖，其中細菌為金黃色葡萄球菌。

圖9是本發明之益生菌加中草藥的組合物的上清液之抑菌曲線圖，其中細菌為仙人掌桿菌。

圖10是本發明之益生菌加中草藥的組合物的上清液之抑菌曲線圖，其中細菌為腸道沙門氏菌。

圖11是本發明之益生菌加中草藥的組合物的上清液之抑菌曲線圖，其中細菌為產氣莢膜桿菌。

圖12是本發明之益生菌加中草藥的組合物與微生物共培養之消長分析，其中微生物為金黃色葡萄球菌。

圖13是本發明之益生菌加中草藥的組合物與微生物共培養之消長分析，其中微生物為仙人掌桿菌。

圖14是本發明之益生菌加中草藥的組合物與微生物共培養之消長分析，其中微生物為腸道沙門氏菌。

圖15是本發明之益生菌加中草藥的組合物與微生物共培養之消長分析，其中微生物為產氣莢膜桿菌。

國內寄存資訊

1. 寄存機構：台灣食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心；寄存日期：2020年3月13日；寄存編號：BCRC910977

2. 寄存機構：台灣食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心；寄存日期：2022年7月1日；寄存編號：BCRC911137

Claims

一種益生菌加中草藥的組合物，其包含益生菌與中草藥，其中該益生菌選自由副乾酪乳桿菌TX-26和加氏乳桿菌MS-72所組成的群組；該副乾酪乳桿菌TX-262的寄存編號為BCRC911137；該加氏乳桿菌MS-72的寄存編號為BCRC910977；該中草藥包含紅棗、枸杞、黃耆、西洋參、以及甘草。
如請求項1所述之組合物，其中相對於該組合物的總重量，該益生菌的含量為1%~20%。
如請求項1所述之組合物，其中該中草藥包含：紅棗20~50份、枸杞20~50份、黃耆30~60份、西洋參1~5份、甘草5~15份。
一種益生菌組合物，其包含副乾酪乳桿菌TX-26，其寄存編號為BCRC911137，具有腸胃保健之功效。
如請求項1至請求項4中任一項所述之組合物，其進一步包含可食性材料，該可食性材料包含水、流體乳品、牛奶、濃縮牛奶、優酪乳、酸乳、冷凍優格、乳桿菌發酵飲料、奶粉、冰淇淋、乳酪、乾酪、豆奶、發酵豆奶、蔬果汁、果汁、運動飲料、甜點、果凍、糖果、嬰兒食品、健康食品、動物飼料、中草藥材或膳食補充品。
如請求項1至請求項4中任一項所述之組合物，其進一步包含藥學上可接受之載劑。
一種副乾酪乳桿菌，其係副乾酪乳桿菌TX-26，其寄存於食品工業發展研究所，具有腸胃保健之功效。
一種如請求項1至請求項4中任一項所述之組合物作為製備醫藥組合物之用途，其中，該用途係為用於腸胃保健；該益生菌為活菌體、死菌體、或其萃取物。
如請求項8所述之用途，其中該組合物為每日劑量1×10 ⁸-1×10 ¹¹CFU/天益生菌。
如請求項8所述之用途，其中相對於該組合物的總重量，該益生菌的含量為1%~20%。
如請求項8所述之用途，其中該腸胃保健是耐胃酸膽鹽、免疫調節、抗氧化、以及抑制腸道有害菌。
如請求項11所述之用途，其中該有害菌包含金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、仙人掌桿菌、及產氧莢膜梭菌。