TW202402753A - 高純度化合物之製造方法及純化方法 - Google Patents

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日商參天製藥股份有限公司
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Abstract

本發明提供一種不包含雜質、尤其是11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之高產率且高純度之(R)-11-[[-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]-乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之有效之製造方法及/或純化方法。

Description

高純度化合物之製造方法及純化方法
本發明係關於一種高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮(以下，有時亦記為「AFDX0250」)或其鹽之製造方法及純化方法。又，本發明係關於一種高純度之AFDX0250或其鹽、及包含高純度之AFDX0250或其鹽且實質上不包含11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮(以下，有時亦記為「化合物1」)等雜質之醫藥組合物。
已知AFDX0250為(+)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮，具有以下所示之結構，可用於治療青光眼、高眼壓症及近視之眼疾病(專利文獻1及專利文獻2)。 [化1]
AFDX0250之製造方法揭示於非專利文獻1及專利文獻3中。於非專利文獻1中，揭示有如下情況：仿照於乙腈中、碳酸鈉存在下進行反應之一般順序，使11-(氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮與(-)-2-[(二乙胺基)甲基]哌啶反應，而製造AFDX0250。又，於專利文獻3中，亦揭示有如下方法，即，仿照於乙腈中、碳酸鈉存在下進行反應之例，使11-(氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮與(-)-2-[(二乙胺基)甲基]哌啶反應，而製造AFDX0250，但是，顯示其產量較低，為59%。
為了將AFDX0250作為醫藥品來製造販賣，重要的是以高產率製造AFDX0250並有效地進行純化，以及為了不產生不期望之作用而將雜質從粗產物中去除從而以高純度製造。 [先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]國際公開第93/18772號說明書 [專利文獻2]國際公開第2022/030489號說明書 [專利文獻3]日本專利特開昭60-215683號公報 [非專利文獻]
[非專利文獻1]Wolfnard W. Engel et al., J. Med. Chem., 1989, 32 (8), 1718 - 1724
[發明所欲解決之問題]
醫藥為了滿足品質及純度之核准基準，要求其較高之純度。例如，有時會發生醫藥之製造及/或儲藏中產生雜質導致治療效果下降及副作用顯現等不期望之效果等問題。又，若可用作醫藥之有效成分之化合物之產率較低，則難以大量合成或工業生產該化合物，亦存在醫藥開發會耗費較高成本等問題。如上所述，於非專利文獻1及專利文獻3中，揭示有AFDX0250之製造方法，但顯示所製造之AFDX0250之產率較低。因此，為了用作醫藥品，尚有改良AFDX0250之先前之製造方法之餘地。
進而，本發明人等在含有AFDX0250或其鹽之醫藥組合物之開發階段發現，所製造之AFDX0250中所包含之11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮為Ames試驗陽性，認為就副作用顯現之觀點而言，希望去除該化合物。
因此，本發明之課題在於提供一種不包含雜質、尤其是11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之高產率且高純度之AFDX0250或其鹽之有效之製造方法及/或純化方法。又，本發明之課題在於提供一種實質上不包含雜質之高產率且高純度之AFDX0250或其鹽、及包含高純度之AFDX0250之安全性較高之醫藥組合物。 [解決問題之技術手段]
本發明人等為了解決上述問題而進行銳意研究，結果發現了由11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽及(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶或其鹽以高產率且高純度製造AFDX0250或其鹽之方法之特定條件、以及用來以高純度進行純化之結晶化之特定條件。更具體而言，本發明人等發現，藉由在包含相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽每1 g為15～50 mL之量之乙腈的有機溶劑中、鹼金屬之碘化物之存在下，於鹼性條件下使11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽與(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶或其鹽反應，可製造高產率且高純度之AFDX0250或其鹽，進而，可適當調整溶劑及溫度而以高純度使所獲得之AFDX0250之粗產物結晶化，從而完成本發明。
具體而言，本發明提供如下。 [項1]一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之製造方法，其包括如下步驟：於有機溶劑中、鹼金屬之碘化物之存在下，在鹼性條件下使11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽與(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶或其鹽反應；且該有機溶劑包含相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽每1 g為15～50 mL之乙腈。 [項2]如項1中記載之製造方法，其中有機溶劑係相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽每1 g為15～50 mL之乙腈。 [項3]如項1或項2中記載之製造方法，其包括如下步驟：向反應混合物中添加水及酸而調整pH值，繼而，利用有機溶劑進行萃取。 [項4]如項3中記載之製造方法，其中實施2次以上利用有機溶劑所進行之萃取。 [項5]如項3或4中記載之製造方法，其中有機溶劑為乙酸乙酯。 [項6]一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之製造方法，其包括如下步驟：於有機溶劑中、鹼性條件下使11-(2-碘乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽與(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶或其鹽反應。 [項7]一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之純化方法，其包括如下步驟：於1-丙醇及水之混合液中使(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽結晶化。 [項8]一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之純化方法，其包括如下步驟：於醇系溶劑中對(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽進行活性碳處理。 [項9]一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之純化方法，其包括如下步驟：於醇系溶劑及酮系溶劑之混合液中使(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽再結晶化。 [項10]一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽，其純度為95%以上。 [項11]一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽，其中雜質之含量未達5%。 [項12]一種醫藥組合物，其係包含(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽者，且源自(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之雜質之含量相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽未達5%。 [項13]如項12中記載之醫藥組合物，其中雜質之含量未達1%。 [項14]一種醫藥組合物，其係包含(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽者，且實質上不包含11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽。 [項15]如項14中記載之醫藥組合物，其中11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之含量相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽未達1000 ppm。 [項16]如項14或15中記載之醫藥組合物，其進而實質上不包含5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽。 [項17]如項16中記載之醫藥組合物，其中5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之含量未達1000 ppm。
再者，上述[項1]至[項17]之各構成可任意選擇2個以上進行組合。
進而，本發明提供如下。 [項18]如項12至17中任一項所記載之醫藥組合物，其為滴眼劑。 [項19]如項12至18中任一項所記載之醫藥組合物，其用以治療青光眼、高眼壓症或近視。 [發明之效果]
根據本發明之製造方法及純化方法，可製造相較於已知之方法高產率且高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽。又，可抑制11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮等雜質之含量。 進而，本發明可提供一種高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽、及包含高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之醫藥組合物。
以下，對本發明詳細地進行說明。
本發明提供一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之製造方法，包括如下步驟：於包含乙腈之有機溶劑、較佳為乙腈中、鹼金屬之碘化物之存在下，在鹼性條件下使11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽與(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶或其鹽反應。於本步驟中，將11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽、(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶或其鹽、包含乙腈之有機溶劑、較佳為乙腈、鹼金屬之碘化物及鹼混合，加熱攪拌，繼而，進行濃縮，能夠獲得反應混合物。
作為本步驟之原料之11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽及(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶或其鹽可使用市售品，亦可使用以公知之方法製造者。
本步驟中之「有機溶劑」係包含乙腈者，較佳為僅為乙腈。乙腈之添加量為15 v/w～50 v/w，較佳為15 v/w～40 v/w，更佳為15 v/w～30 v/w，進而較佳為18 v/w～25 v/w，最佳為20 v/w。 再者，乙腈之添加量之「v/w」意指相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之質量(1 g)的乙腈之體積(mL)。以下，只要無特別說明，則同樣如此。
作為本步驟中之「鹼金屬之碘化物」，例如可例舉碘化鈉、碘化鉀、碘化鈣、碘化鋰等，較佳為碘化鈉。又，鹼金屬之碘化物可單獨使用，亦可以任意之組合及比率使用2種以上。鹼金屬之碘化物之添加量例如為0.01～2當量，較佳為0.05～1.5當量，更佳為0.1～1當量，進而較佳為0.15～0.5當量，特佳為0.2～0.4當量，最佳為0.25當量。 再者，鹼金屬之碘化物之添加量之「當量」意指相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之物質量(1莫耳)的鹼金屬之碘化物之物質量(莫耳)。以下，只要無特別說明，則同樣如此。
作為本步驟中之「鹼性條件」，例如可例舉碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸銫、碳酸鉀、碳酸氫鋰、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫化鋰、氫化鈉、氫化鉀、氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、第三丁醇鋰、第三丁醇鈉、第三丁醇鉀、烷基鋰(例如，正丁基鋰、第二丁基鋰、第三丁基鋰、正己基鋰)、醯胺鋰(例如，二異丙基醯胺鋰、雙(三甲基矽烷)胺基鋰)、甲醇鈉、乙醇鈉、或第三胺(例如，三甲胺、三乙胺、三丙胺、三異丙胺、二異丙基乙胺)等所致之鹼性條件，較佳為碳酸氫鈉、三乙胺或二異丙基乙胺所致之鹼性條件。鹼可單獨使用，亦可以任意之組合及比率使用2種以上。鹼之添加量例如為1～20當量，較佳為1.5～15當量，更佳為2～10當量，進而較佳為2.5～8當量，特佳為3～5當量，最佳為3.15當量。 再者，鹼之添加量之「當量」意指相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之物質量(1莫耳)的鹼之物質量(莫耳)。以下，只要無特別說明，則同樣如此。
本步驟中之反應溫度例如為40～100℃，較佳為50～90℃，更佳為60～80℃，進而較佳為65～78℃，最佳為70～75℃。
本步驟中之反應時間會根據反應溫度等條件而變動，因此並無特別限定，例如於1～48小時之間適當選擇，較佳為3～36小時，更佳為6～30小時，進而較佳為12～27小時，特佳為18～24小時，最佳為20小時。
本發明之製造方法包括如下步驟：將上述步驟所獲得之反應混合物濃縮為例如3～12 v/w，較佳為4～10 v/w，更佳為5～8 v/w，最佳為6～7 v/w，添加水及酸而調整為能使(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽溶解於水中之pH值，繼而，利用有機溶劑進行萃取。於本步驟中，向反應混合物中添加水，繼而，添加酸，將pH值調整為酸性，例如3.0以下，更佳為2.0以下，最佳為1.0以下，利用有機溶劑實施1次以上、較佳為2次以上、更佳為3次以上、最佳為4次以上之萃取。 再者，反應混合物之含量之「v/w」意指相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之質量(1 g)的反應混合物之體積(mL)。
本步驟中之水之添加量例如為3～50 v/w，較佳為5～30 v/w，更佳為7～20 v/w，進而較佳為8～15 v/w，最佳為10 v/w。 再者，水之添加量之「v/w」意指相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之質量(1 g)的水之體積(mL)。以下，只要無特別說明，則同樣如此。
作為本步驟中之酸，只要為能調整為能使(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽溶解於水中之pH值之酸則無特別限定，例如可例舉鹽酸、硫酸、硝酸等，較佳為鹽酸。酸之添加量只要為能調整為能使(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽溶解於水中之pH值之量則無特別限定。
作為本步驟中之有機溶劑，例如可例舉氯仿、二氯甲烷、二乙醚、四氫呋喃(THF)、乙酸乙酯、己烷、甲苯等，較佳為乙酸乙酯。有機溶劑之添加量例如為5 v/w～50 v/w，較佳為10 v/w～40 v/w，最佳為10 v/w。 再者，有機溶劑之添加量之「v/w」意指相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之質量(1 g)的有機溶劑之體積(mL)。
本步驟中之添加水及酸時之溫度例如為-10～30℃，較佳為-5～20℃，更佳為0～15℃，最佳為0～10℃。
本發明之製造方法包括向上述步驟所獲得之有機層中添加溶劑而進行晶析之步驟。於本步驟中，向有機層中添加溶劑，繼而，添加鹼，將pH值調整為鹼性、較佳為8～12、更佳為9～11，進行攪拌，藉此可對(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽進行晶析。藉由過濾而將析出之結晶分離，進行洗淨、乾燥，藉此可獲得高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽。
作為本步驟中之溶劑，例如可例舉水、甲醇及水之混合液、乙醇及水之混合液、丙酮及水之混合液、甲基乙基酮及水之混合液、乙腈及水之混合液、N,N-二甲基甲醯胺及水之混合液等，較佳為乙腈及水之混合液。於使用乙腈及水之混合液作為溶劑之情形時，乙腈與水之體積比例如為1：1～1：10，較佳為1：2～1：6，最佳為1：3～1：5。溶劑之添加量例如為5～20 v/w，較佳為8～16 v/w，更佳為10～14 v/w。 再者，溶劑之添加量之「v/w」意指相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之質量(1 g)的溶劑之體積(mL)。
作為本步驟中之鹼，只要為可將pH值調整為鹼性、較佳為8～12、更佳為9～11之鹼則無特別限定，例如可例舉碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰等，較佳為氫氧化鉀。鹼之添加量只要為可將pH值調整為鹼性、較佳為8～12、更佳為9～11之量則無特別限定。
本步驟中之攪拌時之溫度例如為-10～20℃，較佳為-5～15℃，最佳為0～10℃。
本步驟中之攪拌時間會根據溫度等反應條件而變動，因此並無特別限定，例如於1～24小時之間適當選擇，較佳為1～12小時，更佳為2～8小時，最佳為3～5小時。
本步驟中之乾燥溫度只要為可去除附著水分或溶液之範圍則無特別限定，例如為30～100℃，較佳為50℃左右。
於本發明之製造方法中，可去除11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽。
又，本發明提供一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之製造方法，其包括如下步驟：於有機溶劑中、鹼性條件下，使11-(2-碘乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽與(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶或其鹽反應。
作為本製造方法中之「有機溶劑」，例如可例舉：乙腈、二甲基甲醯胺(DMF)、二甲基乙醯胺(DMA)、二甲基亞碸(DMSO)、乙酸乙酯等。有機溶劑之添加量例如為3 v/w～50 v/w，較佳為5 v/w～30 v/w，更佳為7 v/w～20 v/w，進而較佳為8 v/w～15 v/w，最佳為10 v/w。 再者，有機溶劑之添加量之「v/w」意指相對於11-(2-碘乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之質量(1 g)的有機溶劑之體積(mL)。
作為本製造方法中之「鹼性條件」，例如可例舉碳酸鈉、碳酸銫、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫化鈉、氫化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、第三丁醇鈉、第三丁醇鉀、烷基鋰(例如，正丁基鋰、第二丁基鋰、第三丁基鋰、正己基鋰)、醯胺鋰(例如，二異丙基醯胺鋰、雙(三甲基矽基)胺基鋰)、甲醇鈉、或第三胺(例如，三甲胺、三乙胺、三異丙胺、二異丙基乙胺)等所致之鹼性條件，較佳為碳酸氫鈉、三乙胺或二異丙基乙胺所致之鹼性條件。鹼可單獨使用，亦可以任意之組合及比率使用2種以上。鹼之添加量為1～20當量，較佳為1.5～15當量，更佳為2～10當量，進而較佳為2.5～8當量，特佳為3～5當量，最佳為3.15當量。 再者，鹼之添加量之「當量」意指相對於11-(2-碘乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之物質量(1莫耳)的鹼之物質量(莫耳)。
本製造方法中之反應溫度例如為40～100℃，較佳為50～90℃，更佳為60～80℃，進而較佳為65～78℃，最佳為70～75℃。
本製造方法中之反應時間會根據反應溫度等條件而變動，因此並無特別限定，例如於1～48小時之間適當選擇，較佳為3～36小時，更佳為6～30小時，進而較佳為12～27小時，特佳為18～24小時，最佳為20小時。
本發明提供一種高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之純化方法，其包括如下步驟：於1-丙醇及水之混合液中使本發明之製造方法所獲得之粗產物之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽結晶化。於本純化方法中，將粗產物之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽與1-丙醇混合，加熱攪拌，於冷卻後添加水而攪拌，其後進而冷卻，藉此可對(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽進行晶析。對析出之結晶進行熟化，藉由過濾而進行分離，進行洗淨、乾燥，藉此可獲得高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽。
本純化方法中之1-丙醇之添加量例如為1～10 v/w，較佳為2～8 v/w，更佳為3～15 v/w，最佳為4 v/w。 本純化方法中之水之添加量例如為1～15 v/w，較佳為2～10 v/w，更佳為4～8 v/w，最佳為6 v/w。 再者，1-丙醇及水之添加量之「v/w」意指分別相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之質量(1 g)的1-丙醇及水之體積(mL)。
本純化方法中之各步驟之溫度可適當調整。例如，於1-丙醇中進行攪拌時，例如加熱至80～100℃、較佳為85～95℃。其後冷卻至40～60℃、較佳為45～55℃，進行水之添加及攪拌。其後亦可進而冷卻至-5～10℃、較佳為0～5℃而進行熟化。乾燥溫度若為可去除附著水分或溶液之範圍則皆可，例如為80℃以下，較佳為50℃左右。
本純化方法中之於1-丙醇中進行攪拌之時間並無特別限定，例如於1～5小時之間適當選擇，較佳為2～4小時，最佳為3小時。於添加水之後進行攪拌之時間例如於10分鐘～5小時之間適當選擇，較佳為20分鐘～4小時，最佳為30分鐘～3小時。
於本純化方法中，可去除源自(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之特定雜質。
又，本發明提供一種高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之純化方法，其包括如下步驟：於溶劑中使本發明之製造方法所獲得之粗產物之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽再結晶化。於本純化方法中，包括如下步驟：於醇系溶劑中對(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽進行活性碳處理；及/或於醇系溶劑與酮系溶劑之混合液中進行再結晶化。具體而言，於活性碳處理步驟中，包括如下步驟：將AFDX0250及活性碳與成為良溶劑之醇系溶劑混合，加熱攪拌，進行碳過濾而進行濃縮。於再結晶化步驟中，包括如下步驟：向濃縮之混合物中添加成為不良溶劑之酮系溶劑，加熱攪拌，進行冷卻，藉此對AFDX0250進行晶析，使析出之結晶熟化，藉由過濾而進行分離，進行洗淨、乾燥；藉此可獲得高純度之AFDX0250。又，為了獲得更高純度之AFDX0250，可重複複數次除活性碳之添加及碳過濾以外之相同操作。又，亦可不進行活性碳處理步驟而僅進行再結晶化步驟。
作為本純化方法中之「醇系溶劑」，例如可例舉甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇等，較佳為乙醇及1-丙醇。醇系溶劑之添加量例如為5～50 v/w，較佳為10～40 v/w，更佳為15～30 v/w，最佳為20 v/w。 再者，醇系溶劑之添加量之「v/w」意指相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之質量(1 g)的醇系溶劑之體積(mL)。
作為本純化方法中之「活性碳」，例如可例舉白鷺(shirasagi)A、白鷺(shirasagi)P等，較佳為白鷺(shirasagi)A。活性碳之添加量例如為0.01～0.3 w/w，較佳為0.03～0.2 w/w，最佳為0.05～0.15 w/w。 再者，活性碳之添加量之「w/w」意指相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之質量(1 g)的活性碳之質量(g)。
於本純化方法中，在活性碳過濾之後對混合液進行濃縮，直至醇系溶劑成為例如0.5～3 v/w、較佳為1～3 v/w、更佳為2～2.5 v/w。於濃縮中途或濃縮後，以例如3～15 v/w、較佳為5～10 v/w、更佳為7～8 v/w之量添加酮系溶劑，藉此成為醇系溶劑及酮系溶劑之混合液。於不進行活性碳處理步驟而僅進行再結晶化步驟之情形時，再結晶化之溶劑同樣使用醇系溶劑及酮系溶劑之混合液，醇系溶劑之添加量例如為0.5～3 v/w，較佳為1～3 v/w，更佳為2～2.5 v/w，酮系溶劑之添加量例如為3～15 v/w，較佳為5～10 v/w，更佳為7～8 v/w。 再者，混合液中之醇系溶劑之含量、醇系溶劑及酮系溶劑之添加量之「v/w」意指相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之質量(1 g)的混合液、醇系溶劑及酮系溶劑之體積(mL)。
作為本純化方法中之「酮系溶劑」，例如可例舉丙酮、甲基乙基酮(MEK)、甲基異丁基酮(MIBK)、二乙基酮等，較佳為丙酮、MEK及MIBK。
本純化方法中之各步驟之溫度可適當調整。例如，活性碳處理步驟可藉由在例如50～90℃、較佳為60～80℃、更佳為65～75℃之溫度下進行加熱攪拌而實施。再結晶化步驟可藉由在例如50～80℃、較佳為60～70℃、更佳為63～67℃之溫度下進行晶析後，視需要進行攪拌，冷卻至例如-10～15℃、較佳為-5℃至10℃、更佳為0～5℃而實施。又，再結晶化步驟中之熟化可於例如-10～15℃、較佳為-5℃至10℃、更佳為0～5℃下實施。
本純化方法中之活性碳處理步驟中進行加熱攪拌之時間會根據條件而變動，因此並無特別限定，例如於30分鐘～24小時之間適當選擇，較佳為40分鐘～12小時，更佳為50分鐘～6小時，進而較佳為1小時～3小時，最佳為1小時。再結晶化步驟中之熟化例如為6～48小時，較佳為12～36小時，最佳為24小時。
於本發明中，起始物質、中間物、及/或製造化合物(AFDX0250)亦可為鹽之形態。本發明之製造方法亦包括包含該等鹽之形態之製造方法。作為其等化合物之鹽，只要為容許作為醫藥之鹽則無特別限制。作為其等鹽，例如可例舉：與鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸等無機酸之鹽；與乙酸、草酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、己二酸、葡萄糖酸、葡庚糖酸、葡萄糖醛酸、對苯二甲酸、甲磺酸、丙胺酸、乳酸、馬尿酸、1,2-乙二磺酸、羥乙磺酸、乳糖酸、油酸、沒食子酸、雙羥萘酸、聚半乳糖醛酸、硬脂酸、鞣酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、月桂基硫酸、硫酸甲酯、萘磺酸、磺基水楊酸等有機酸之鹽；與鈉、鉀、鈣、鎂等金屬之鹽；與氨等無機化合物之鹽；及與三乙胺、胍等有機胺之鹽等。
於本發明中，起始物質、中間物、及/或製造化合物(AFDX0250)或其鹽亦可取水合物或溶劑合物之形態。
藉由本發明之製造方法及純化方法，可獲得高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽。(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之純度通常為95%以上，較佳為97%以上，更佳為99%以上，最佳為99.5%以上。
藉由本發明之製造方法及純化方法，可將(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽中之雜質之含量去除至例如未達5%、較佳為未達3%、更佳為1%、最佳為0.5%。此處，於本發明中，所謂「雜質」係源自(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之雜質，意指(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之製造或純化之過程中混入之11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮、5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮、11-(2-碘乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮、其他物質。
於本發明中，(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之純度及雜質之含量可藉由利用面積百分率法對作為分析化學之領域中周知之方法之液相層析法(HPLC)中之峰面積比率進行定量及利用液相層析質譜法(LC/MS)進行定量而測定。
(1) (R)-11- [2-[2-[( 二乙胺基 ) 甲基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-5,11- 二氫 -6H- 吡啶并 [2,3-b][1,4] 苯二氮呯 -6- 酮 (AFDX0250) 或其鹽之含量之測定法AFDX0250或其鹽之含量例如可藉由以下方法進行測定。 ＜流動相及溶解液＞ 使用以下流動相及溶解液。 ·流動相A：0.1 mol/L過氯酸鈉溶液(pH值3.0) 將過氯酸鈉一水合物14.0 g溶解於水1000 mL中，添加1 mol/L鹽酸試液，調整為pH值3.0。 ·流動相B：乙腈 ·溶解液A：流動相A：流動相B(1：1)(v/v) ＜AFDX0250標準溶液之製備＞ 精密地稱量AFDX0250約10 mg，添加溶解液A，準確地製成100 mL。 ＜試樣溶液之製備＞ 藉由以下方法製備試樣溶液。 ·試樣溶液A：取包含AFDX0250之反應懸濁液(於下述實施例1之步驟1中獲得之反應液)100～200 mg，溶解於溶解液A 10 mL中。 ·試樣溶液B：取包含AFDX0250之反應懸濁液(於下述實施例1之步驟1中獲得之反應液)約200 μL，使用桐山漏斗(S-40)、桐山濾紙(No.3)及吸引瓶進行減壓過濾，將濾渣約10 mg溶解於溶解液A 10 mL中。 ·試樣溶液C：精密地稱量獲取固體(於下述實施例1之步驟3中獲得之AFDX0250)約10 mg，添加溶解液A進行溶解，準確地製成100 mL。 ·試樣溶液D：精密地稱量水層(於下述實施例1之步驟2中獲得之水層)約100 μL，添加溶解液A，準確地製成10 mL。 ＜測定方法＞ 藉由以下方法、條件之液相層析法測定各試樣溶液。進而，藉由以下之計算式算出AFDX0250之含量(%)。 (液相層析法(UHPLC)之試驗條件) ·檢測器：紫外線分光光度計(測定波長210 nm) ·管柱：AQUITY UPLC HSS T3(內徑2.1 mm，長度100 mm，粒徑1.8 μm；Waters公司) ·鬼峰捕集小柱：鬼峰捕集小柱DS-HP(P/N：228-59931-91)(島津製作所)或具有同等性能品質者(為了去除流動相之雜質，將鬼峰捕集小柱連接於流動相攪拌器之後) ·管柱溫度：40℃附近 ·樣品冷卻器溫度：10℃附近 ·流動相A：0.1 mol/L過氯酸鈉溶液(pH值3.0) ·流動相B：乙腈 ·流動相之輸液：將流動相A及流動相B之混合比如表1般進行濃度梯度控制。 [表1]
距試樣注入後之時間(分鐘) 流動相A(%) 流動相B(%)
0.00-16.00 95→40 5→60
16.00-20.00 40 60
20.00-20.10 40→95 60→5
20.10-24.00 95 5
·流量：0.5 mL/min ·注入量：2 μL ·面積測定範圍：溶劑之峰後至注入後20分鐘 (計算式) 試樣溶液 A ～ C ：AFDX0250含量(%)＝100×AAp/ATp AAp：由試樣溶液獲得之AFDX0250峰面積 ATp：由試樣溶液獲得之全部峰面積 試樣溶液 D ：AFDX0250含量(%)＝100×MS×AT×10/(MT×AS×100) MS：AFDX0250之採取量(mg) MT：試樣溶液之採取量(mg) AS：由標準溶液獲得之AFDX0250峰面積 AT：由試樣溶液獲得之AFDX0250峰面積
(2)11-(2- 氯乙醯基 )-5,11- 二氫 -6H- 吡啶并 [2,3-b][1,4] 苯二氮呯 -6- 酮 ( 化合物 1) 含量之測定法(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽所包含之化合物1含量例如可藉由以下方法進行測定。 ＜流動相及溶解液＞ 使用以下流動相及溶解液。 ·流動相C：10 mM乙酸銨溶液 將乙酸銨0.77 g溶解於水1000 mL中。 ·流動相B：乙腈 ·溶解液B：流動相C：流動相B(7：3)(v/v) ＜化合物1標準溶液之製備＞ ·化合物1標準原液：精密地稱量化合物1約20 mg，添加溶解液B而溶解，準確地製成100 mL。於難以溶解之情形時，使用超音波約1分鐘進行溶解。準確地稱量該液2 mL，添加溶解液B，準確地製成20 mL。準確地稱量該液1 mL，添加溶解液B，準確地製成20 mL。 ·化合物1標準溶液1：準確地稱量標準原液4 mL，添加溶解液B，準確地製成20 mL。 ·化合物1標準溶液2：準確地稱量標準溶液1 2 mL，添加溶解液B，準確地製成10 mL。 ·化合物1標準溶液3：準確地稱量標準溶液2 2 mL，添加溶解液B，準確地製成20 mL。 ＜試樣溶液之製備＞ 藉由以下方法製備試樣溶液。 ·試樣溶液E(測定對象為水層之情形)：根據按照上述(1)之測定法獲得之水層之AFDX0250含量(%)進行計算，以含有之AFDX0250成為約100 mg之方式精密地稱量水層，添加溶解液B，準確地製成25 mL。 ·試樣溶液F(測定對象為結晶之情形)：精密地稱量AFDX0250約100 mg，添加溶解液B 5 mL及稀鹽酸0.2 mL而溶解，添加溶解液B，準確地製成25 mL(AFDX0250濃度：約4 mg/mL)。於難以溶解之情形時使用超音波進行溶解。 ＜測定方法＞ 藉由以下條件之液相層析質譜法，以下表3所示之順序及次數測定各試樣溶液。進而，根據標準溶液之濃度(μg/mL)及峰面積繪製校準曲線(使用標準溶液1～3之合計6個結果)，藉由以下之計算式算出試樣溶液中之化合物1濃度(μg/mL)及AFDX0250中之化合物1含量(ppm)。 (液相層析質譜法(LC/MS)之試驗條件) ·檢測器：質譜儀 ·檢測離子：m/z 288(ESI，Positive) ·管柱：X Bridge C18(內徑2.1 mm，長度150 mm，粒徑3.5 μm；Waters公司) ·管柱溫度：40℃附近 ·樣品冷卻器溫度：實時溫度 ·流動相C：10 mM乙酸銨溶液 ·流動相B：乙腈 ·流動相之輸液：將流動相C及流動相B之混合比如表2般進行濃度梯度控制。 [表2]
距試樣注入後之時間(分鐘) 流動相A(%) 流動相B(%)
0-40.0 95→40 5→60
40.0-40.5 40→5 60→95
40.5-45.0 5 95
45.0-45.5 5→95 95→5
45.5-55.5 95 5
·流量：0.3 mL/min ·注入量：5 μL ·試樣溶液之測定順序及次數： [表3]
測定順序 試樣溶液 測定次數等
1 空白溶液(溶解液B) 1次
2 標準溶液3 2次：繪製校準曲線
3 標準溶液2 2次：繪製校準曲線
4 標準溶液1 2次：繪製校準曲線
5 空白溶液(溶解液B) 1次
6 試樣溶液E或試樣溶液F 1次
(計算式) 試樣溶液 E( 測定對象為水層之情形 ) ：試樣溶液E中之化合物1濃度(μg/mL)＝(AT－b)/a AFDX0250中之化合物1含量(ppm)＝試樣溶液E中之化合物1濃度(μg/mL)/MT×P/100×25000 AT：由試樣溶液E獲得之化合物1之峰面積 b：校準曲線之截距 a：校準曲線之斜率 MT：試樣稱取量(mg) P：按照上述(1)之測定法而獲得之水層之AFDX0250含量(%) 試樣溶液 F( 測定對象為結晶之情形 ) ：試樣溶液F中之化合物1濃度(μg/mL)＝(AT－b)/a AFDX0250中之化合物1含量(ppm)＝試樣溶液F中之化合物1濃度(μg/mL)/MT×25000 AT：由試樣溶液F獲得之化合物1之峰面積 b：校準曲線之截距 a：校準曲線之斜率 MT：試樣稱取量(mg)
本發明之高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之純度較高，為95%以上，雜質之含量少於藉由先前公知之方法製造之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮，因此可期待成為更安全之醫藥品。
又，本發明提供一種醫藥組合物，其包含(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽，且實質上不包含雜質。
本發明之醫藥組合物包含純度95%以上、較佳為純度97%以上、更佳為純度99%以上、最佳為純度99.5以上之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽。
本發明之醫藥組合物較佳為實質上不包含11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽，進而較佳為進而實質上不包含5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽，特佳為實質上亦不包含11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮、及5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮以外之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之製造或純化之過程中混入之物質。再者，5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮為以下之結構式所表示之化合物。 [化2]
於本發明中，所謂「實質上不包含」，意指完全不包含11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮等雜質、藉由使用手性管柱之液相管柱層析法(檢測器：紫外線分光光度計)等醫藥分析中通常使用之方法無法檢測出雜質之存在、或以不顯現其效果及副作用之程度之量包含。例如，醫藥組合物中之雜質之含量相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽未達5%，較佳為未達3%，更佳為未達1%，最佳為未達0.5%。
於本發明中，醫藥組合物中之11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之含量相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽，例如未達1000 ppm，較佳為未達700 ppm，更佳為未達500 ppm，進而較佳為未達300 ppm，進而更佳為未達100 ppm，特佳為未達10 ppm，最佳為未達2 ppm。
於本發明中，醫藥組合物中之5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之含量相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽，例如未達1000 ppm，較佳為未達800 ppm，更佳為未達600 ppm，最佳為未達500 ppm。
於本發明中，醫藥組合物中之11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮及5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之合計量相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽，例如未達2000 ppm，較佳為未達1000 ppm，更佳為未達700 ppm，最佳為未達500 ppm。
只要不特別說明，本發明之醫藥組合物亦可包含(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽以外之醫藥上容許之有效成分，但於一態樣中，不包含(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽以外之醫藥上容許之有效成分。
本發明之醫藥組合物視需要可使用添加劑，作為添加劑，可添加界面活性劑、等張劑、穩定劑、防腐劑、抗氧化劑、高分子量聚合物、pH值調整劑、基劑等。
本發明之醫藥組合物希望為水性醫藥組合物，但亦可為非水性醫藥組合物。
本發明之醫藥組合物可經口或非經口投予。作為投予路徑，可例舉：經口投予、靜脈內投予、經皮投予、眼局部投予(例如，滴眼投予、眼藥膏投予、結膜囊內投予、玻璃體內投予、結膜下投予、Tenon囊下投予、結膜囊內插入、眼瞼塗佈)等。
本發明之醫藥組合物之劑型只要為可用作醫藥品者則無特別限制，例如可例舉：滴眼劑、眼凝膠劑、注射劑等。本發明之醫藥組合物特佳為滴眼劑。又，於將本發明之醫藥組合物用作非水性醫藥組合物之情形時，亦可配方為非水性製劑。 其等可按照該技術領域中之通常之方法進行製造。
於將本發明之醫藥組合物製備為滴眼劑之情形時，向純化水、緩衝液等介質中添加有效成分並攪拌後，藉由利用pH值調整劑調整pH值，可製備所需之滴眼劑。 又，視需要亦可使用滴眼劑所泛用之添加劑。作為添加劑之例，可例舉：等張劑、緩衝劑、界面活性劑、穩定劑、防腐劑、助溶劑等。
於製成錠劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑等經口劑之情形時，視需要可添加增量劑、潤滑劑、結合劑、崩解劑、包衣劑、皮膜劑等而製備。作為增量劑，可例舉乳糖、結晶纖維素、澱粉、植物油等，作為潤滑劑，可例舉硬脂酸鎂、滑石等，作為結合劑，可例舉羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯啶酮等，作為崩解劑，可例舉羧甲基纖維素鈣、低取代羥丙基甲基纖維素等，作為包衣劑，可例舉羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇(Macrogol)、矽樹脂等，作為皮膜劑，可例舉明膠皮膜等。
本發明之醫藥組合物之用法用量可根據劑型、患者之症狀、年齡、體重、疾病發病之年齡、醫生之判斷等適當變更。例如，於將本發明之醫藥組合物作為滴眼劑進行眼局部投予之情形時，只要足夠起到所需之藥效則用法用量無特別限制，可1天1次～幾次(例如，1次～4次、1次～6次、1次～8次)滴眼1次量1滴～幾滴。又，於佩戴隱形眼鏡時亦可使用。
本發明之醫藥組合物可用於治療青光眼、高眼壓症、近視等眼疾病。 [實施例]
以下，舉出實施例，對本發明進而詳細地進行說明，但本發明並不受該等實施例限制。
於以下之實施例中，只要不特別明確提及，HPLC(UHPLC)分析及LC/MS分析係根據以下條件實施。
(HPLC(UHPLC)分析條件) ·檢測器：紫外線分光光度計(測定波長210 nm) ·管柱：AQUITY UPLC HSS T3(內徑2.1 mm，長度100 mm，粒徑1.8 μm；Waters公司) ·鬼峰捕集小柱：鬼峰捕集小柱DS-HP(P/N：228-59931-91)(島津製作所)或具有同等性能品質者(為了去除流動相之雜質，將鬼峰捕集小柱連接於流動相攪拌器之後) ·管柱溫度：40℃附近 ·樣品冷卻器溫度：10℃附近 ·流動相A：0.1 mol/L過氯酸鈉溶液(pH值3.0) ·流動相B：乙腈 ·流動相之輸液：將流動相A及流動相B之混合比如表4般進行濃度梯度控制。 [表4]
距試樣注入後之時間(分鐘) 流動相A(%) 流動相B(%)
0.00-16.00 95→40 5→60
16.00-20.00 40 60
20.00-20.10 40→95 60→5
20.10-24.00 95 5
·流量：0.5 mL/min ·注入量：2 μL ·面積測定範圍：溶劑之峰後至注入後20分鐘
(LC/MS分析條件) ·檢測器：質譜儀 ·檢測離子：m/z 288(ESI，Positive) ·管柱：X Bridge C18(內徑2.1 mm，長度150 mm，粒徑3.5 μm；Waters公司) ·管柱溫度：40℃附近 ·樣品冷卻器溫度：實時溫度 ·流動相C：10 mM乙酸銨溶液 ·流動相B：乙腈 ·流動相之輸液：將流動相C及流動相B之混合比如表5般進行濃度梯度控制。 [表5]
距試樣注入後之時間(分鐘) 流動相A(%) 流動相B(%)
0-40.0 95→40 5→60
40.0-40.5 40→5 60→95
40.5-45.0 5 95
45.0-45.5 5→95 95→5
45.5-55.5 95 5
·流量：0.3 mL/min ·注入量：5 μL ·試樣溶液之測定順序及次數： [表6]
測定順序 試樣溶液 測定次數等
1 空白溶液 (上述溶解液B) 1次
2 標準溶液3 (上述化合物1標準溶液3) 2次：繪製校準曲線
3 標準溶液2 (上述化合物1標準溶液2) 2次：繪製校準曲線
4 標準溶液1 (上述化合物1標準溶液1) 2次：繪製校準曲線
5 空白溶液 (上述溶解液B) 1次
6 試樣溶液 1次
實施例 1 ： AFDX0250 之製造 (1)[化3] 按照以下步驟，製造(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮(AFDX0250)。
步驟 1氮氣氛圍下，於室溫下向11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮(化合物1)(200 g，0.695 mol)之乙腈溶液(3200 g)中添加(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶二鹽酸鹽(以下，有時亦記為「化合物2」；178 g，0.732 mol)、碘化鈉(26.0 g，0.174 mol)及碳酸氫鈉(184 g，2.19 mol)，以內溫73.0～74.5℃進行加熱。將各時間點(反應2小時後、3小時後、4小時後及5小時後)之反應液交由液相層析法(UHPLC)，利用面積百分率法對AFDX0250、化合物1及5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮(以下，有時亦記為「化合物3」)進行定量。
步驟 2於步驟1中進行5小時反應後，使反應液冷卻並加以濃縮而獲得粗產物AFDX0250(1231.56 g)。添加水(1800 g)，於內溫4.0～5.5℃下滴加濃鹽酸(155 mL)直至pH值成為1以下之後(pH值0.8)，利用乙酸乙酯(1800 g)進行3次分液。利用液相層析法(UHPLC)對各次之分液之水層進行測定，利用面積百分率法對AFDX0250及化合物3進行定量。又，藉由液相層析質譜法(LC/MS)對化合物1含量進行測定。
步驟 3向步驟2所獲得之水層中添加水(1400 g)及乙腈(780 g)，於內溫2.0～5.0℃下進行攪拌，繼而，滴加3.25 N氫氧化鉀水溶液直至pH值成為11以下，攪拌5小時。對析出之固體進行減壓過濾，用水(2000 g)洗淨濾渣後，於50℃下進行減壓乾燥，獲得淡褐色固體之粗AFDX0250(274.35 g，產率93.3%)。利用液相層析法(UHPLC)對所獲得之淡褐色固體進行測定，利用面積百分率法對AFDX0250及化合物3進行定量。又，藉由液相層析質譜法(LC/MS)對化合物1含量進行測定。
再者，步驟1中獲得之反應液、步驟2中獲得之水層及步驟3中獲得之固體中之AFDX0250及化合物3之含量、以及步驟1中獲得之反應液中之化合物1之含量係依據本說明書中之(1)AFDX0250或其鹽之含量之測定法進行測定。 又，步驟2中獲得之水層及步驟3中獲得之固體中之AFDX0250所包含之化合物1之含量係依據本說明書中之(2)化合物1含量之測定法進行測定。
將各步驟中之反應液及試樣溶液之UHPLC分析及LC/MS分析之結果示於表7。於表7中，示出AFDX0250、化合物1及化合物3之含量。再者，表中之a)表示利用液相層析質譜法測得之化合物1之含量。 [表7]
操作 測定對象 AFDX0250 化合物1 化合物3
反應2 hr後 漿料 90.41% 5.58% 0.77%
結晶 89.84% 5.29% 0.73%
反應3 hr後 漿料 95.26% 0.878% 0.90%
結晶 98.24% 0.504% 0.10%
反應4 hr後 漿料 96.23% 0.0986% 0.96%
結晶 98.76% 0.188% 0.09%
反應5 hr後 漿料 96.66% 0.0659% 0.95%
結晶 98.78% 0.129% 0.09%
分液第1次 水層 96.63% 58.7 ppm a) 0.77%
分液第2次 水層 96.95% 14.1 ppm a) 0.63%
分液第3次 水層 97.21% 4.6 ppm a) 0.54%
乾燥後 獲取固體粗AFDX0250 98.43% 3.1 ppm a) 0.44%
由本試驗所示，根據本發明之製造方法，可將Ames試驗陽性之化合物1去除至不被檢測出之水準，又，可以高產率且高純度獲得AFDX0250。因此，本發明之製造方法可製造高產率且高純度之AFDX0250。 進而，可知即便為使用三乙胺來代替上述步驟1之碳酸氫鈉之情形，亦可製造AFDX0250。
實施例 2 ：利用本發明之製造方法及已知之製造方法製造之 AFDX0250 之定量分析針對利用本發明之製造方法(每1 g化合物1使用乙腈20 mL作為反應溶劑)及已知之製造方法(每1 g化合物1使用乙腈10 mL作為反應溶劑)製造之AFDX0250進行定量分析，對AFDX0250及雜質之面積%進行比較。 具體而言，將化合物1之批次量從200 g變更為95 g，化合物2及試劑之下料量(化合物1每1物質量之當量)按照與實施例1相同之方法，而製造AFDX0250(實施例2)。又，除了使用乙腈10 mL來代替每1 g化合物1使用乙腈20 mL以外按照與實施例2相同之方法，而製造AFDX0250(比較例1)。對所獲得之反應液以與實施例1相同之方法製備試驗溶液。針對各試驗溶液進行UHPLC分析。
將利用本發明之製造方法(實施例2)及已知之製造方法(比較例1)獲得之AFDX0250之UHPLC分析之結果示於表8。 [表8]
操作 測定對象 比較例1 實施例2
AFDX0250 化合物1 化合物3 AFDX0250 化合物1 化合物3
反應2 hr後 漿料 - - - 92.70% 3.14% 0.83%
結晶 - - - 90.90% 4.84% 0.77%
反應4 hr後 漿料 - - - 96.05% 0.12% 0.97%
結晶 - - - 98.80% 0.19% 0.07%
反應20 hr後 漿料 95.51% 0.36% 1.19% 96.16% 0.01% 1.08%
結晶 98.17% 0.79% 0.11% 99.40% 0.03% 0.07%
反應24 hr後 漿料 95.31% 0.32% 1.29% -    -
結晶 98.33% 0.71% 0.10% -    -
反應40 hr後 漿料 95.18% 0.27% 1.43% -    -
結晶 98.64% 0.47% 0.11% -    -
由本試驗所示，根據本發明之製造方法，可大幅去除包含化合物1之雜質。因此，可知本發明之製造方法會提高AFDX0250之純度。
實施例 3 ： AFDX0250 之製造 (2)[化4] 氮氣氛圍下，於室溫下向11-(2-碘乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮(以下，有時亦記為「化合物4」)(2.00 g，5.27 mol)之乙腈溶液(40.0 mL)中添加化合物2(135 g，5.53 mol)及碳酸氫鈉(140 g，16.6 mol)，於內溫73.0℃下加熱23小時。對反應液進行減壓過濾，利用乙腈(2.0 mL)清洗濾渣5次。將濾液濃縮乾燥，向殘渣中添加乙腈(7.60 mL)及水(9.20 mL)，進行攪拌溶解，冷卻至0℃。向該溶液中添加3.25 N氫氧化鉀直至pH值成為11.2～11.4，於0℃下攪拌3小時。將析出之固體減壓過濾，用水(13.2 mL)清洗而獲得濕固體。將其於50℃下減壓乾燥，以淡褐色固體之形式獲得AFDX0250(1.04 g，產率46.9%)。
AFDX0250之 1H-NMR資料如下所述。 1H-NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 0.83 - 0.97 (m, 6H), 1.07 - 1.80 (m, 6H), 1.95 - 2.63 (m, 7.5H), 2.72 - 2.82 (m, 0.5H), 3.07 - 3.27 (m, 0.5H), 3.68 (s, 1H), 4.10 - 4.28 (m, 0.5H), 7.27 - 7.33 (m, 1H), 7.36 - 7.48 (m, 1H), 7.55 - 7.70 (m, 3H), 7.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H) ,8.30 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 9.90 - 10.30 (br, 1H).
由本試驗所示，即便為使11-(2-碘乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮與(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶二鹽酸鹽反應之情形，亦可製造(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮。
實施例 4 ： AFDX0250 之純化 (1)[化5] 氮氣氛圍下，於室溫下將實施例1所獲得之粗AFDX0250(250 g，0.593 mol)在1-丙醇(800 g)中所得之溶液於內溫89.7～90.1℃下加熱攪拌3小時後，以0.5℃/min之冷卻速度將內溫冷卻至50.1℃，於內溫48.1～50.9℃下耗時30分鐘添加水(1500 g)，繼而，於50.3～50.9℃下攪拌30分鐘。其後，以0.5℃/min之冷卻速度將內溫冷卻至6.3℃，於內溫0.8～6.3℃下攪拌17小時。將析出之固體減壓過濾，用水(2500 g)洗淨濾渣，於50℃下進行減壓乾燥，以淡褐色固體之形式獲得經純化之粗AFDX0250(217.09 g，產率86.8%)。所獲得之淡褐色固體交由液相層析法(UHPLC)，利用面積百分率法對AFDX0250、化合物1、化合物3及相對滯留時間為1.06之化合物((以下，有時亦記為「化合物5」))進行定量。又，藉由液相層析質譜法(LC/MS)測定化合物1含量。
將UHPLC分析及LC/MS分析之結果示於表9。再者，表中之a)表示利用液相層析質譜法測得之化合物1含量。 [表9]
測定對象 AFDX0250 化合物1 化合物3 化合物5
粗AFDX0250 98.43% 3.1 ppm a) 0.44% 0.44%
經純化之粗AFDX0250 99.47% 1.1 ppm a) 0.03% 0.22%
由本試驗所示，根據本發明之純化方法，可以高產率獲得AFDX0250，並且，除了可減少化合物1及化合物3以外，還可進而減少作為雜質之化合物5。因此，藉由使用本發明之純化方法，可製造進而高產率且高純度之AFDX0250。
實施例 5 ： AFDX0250 之純化 (2)[化6] 出於實現醫藥品適當正確之性狀及品質之確保之目的，需要於原料藥之製造步驟中針對作為展現原料藥之性狀之項目之一的顏色進行控制。因此，使粗AFDX0250加熱溶解於有機溶劑中，添加活性碳而進行攪拌，藉由過濾而去除活性碳，進行脫色，去除著色成分，使AFDX0250純化。 於本試驗中，製備各試樣，其等使用白鷺A(0.05 w/w、0.10 w/w及0.15 w/w)及白鷺P(0.10 w/w及0.15 w/w)作為活性碳，又，使用乙醇(EtOH)、1-丙醇(1-PrOH)及N-甲基吡咯啶酮(NMP)作為有機溶劑。再者，關於包含NMP作為溶劑之試樣，未製備使用白鷺A(0.15 w/w)及白鷺P(0.10 w/w及0.15 w/w)者。 乙醇及1-丙醇之添加量分別為每1 g粗AFDX0250為20 mL，攪拌溫度設為70℃。NMP之添加量為每1 g粗AFDX0250為2.5 mL，攪拌溫度設為70℃。 為了確認是否去除了著色成分，而針對包含乙醇、1-丙醇及NMP之試樣確認活性碳處理前後之性狀。進而，針對各試樣，於各時間點(活性碳添加前、活性碳添加1小時後、活性碳添加3小時後)進行HPLC分析。
將活性碳處理前後之各試樣(粉末及DMSO溶液)之性狀示於圖1。對於粉末，係將包含各有機溶劑之各試樣進行減壓過濾，將濾液減壓濃縮，將所獲取之濕固體於50℃下進行減壓乾燥，確認其性狀，並且，對於DMSO溶液，係將所獲取之固體溶解於10%二甲基亞碸(DMSO)中，製成溶液，確認其性狀。 進而，將包含乙醇(EtOH)之試樣、包含1-丙醇(1-PrOH)之試樣及包含NMP之試樣之HPLC分析之結果示於表10～12。 [表10]
包含乙醇之試樣
活性碳 測定樣品 HPLC(Area%)
AFDX0250 化合物3
白鷺A(0.05 w/w) 活性碳添加前 97.28% 1.96%
活性碳添加後1 hr 97.75% 1.38%
活性碳添加後3 hr 97.64% 1.42%
白鷺A(0.10 w/w) 活性碳添加前 97.25% 1.97%
活性碳添加後1 hr 98.20% 0.93%
活性碳添加後3 hr 98.04% 1.01%
白鷺A(0.15 w/w) 活性碳添加前 97.19% 1.97%
活性碳添加後1 hr 98.60% 0.60%
活性碳添加後3 hr 98.50% 0.63%
白鷺P(0.10 w/w) 活性碳添加前 96.93% 1.97%
活性碳添加後1 hr 97.85% 0.87%
活性碳添加後3 hr 97.65% 0.92%
白鷺P(0.15 w/w) 活性碳添加前 97.22% 1.96%
活性碳添加後1 hr 97.76% 0.56%
活性碳添加後3 hr 97.62% 0.61%
[表11]
包含1-丙醇之試樣
活性碳 測定樣品 HPLC(Area%)
AFDX0250 化合物3
白鷺A(0.05 w/w) 活性碳添加前 97.30% 1.95%
活性碳添加後1 hr 97.72% 1.43%
活性碳添加後3 hr 97.79% 1.44%
白鷺A(0.10 w/w) 活性碳添加前 97.04% 1.98%
活性碳添加後1 hr 98.14% 0.96%
活性碳添加後3 hr 98.17% 1.03%
白鷺A(0.15 w/w) 活性碳添加前 97.23% 1.95%
活性碳添加後1 hr 98.49% 0.68%
活性碳添加後3 hr 98.46% 0.72%
白鷺P(0.10 w/w) 活性碳添加前 96.96% 1.94%
活性碳添加後1 hr 97.36% 0.91%
活性碳添加後3 hr 97.77% 0.91%
白鷺P(0.15 w/w) 活性碳添加前 96.86% 1.92%
活性碳添加後1 hr 97.94% 0.58%
活性碳添加後3 hr 97.86% 0.64%
[表12]
包含NMP之試樣
活性碳 測定樣品 HPLC(Area%)
AFDX0250 化合物3
白鷺A(0.05 w/w) 活性碳添加前 96.98% 1.99%
活性碳添加後1 hr 96.83% 2.12%
活性碳添加後3 hr 96.11% 2.59%
白鷺A(0.10 w/w) 活性碳添加前 97.05% 2.02%
活性碳添加後1 hr 96.81% 2.17%
活性碳添加後3 hr 96.08% 2.63%
由本試驗所示，藉由使用醇系溶劑進行活性碳處理，可充分去除作為著色成分及雜質之化合物3。
實施例 6 ： AFDX0250 之 純化 (3)氮氣氛圍下，於室溫下向實施例4所純化之粗AFDX0250(200 g，0.474 mol)在乙醇(3200 g)中所得之溶液中添加作為活性碳之白鷺A(30.0 g)，於內溫69.0～72.4℃下加熱攪拌1小時後，利用填充有過濾助劑之過濾裝置進行減壓過濾，利用預先加熱至70℃之乙醇(320 g)洗淨。將濾液減壓濃縮，獲得濃縮殘渣(989.04 g)。
於本試驗中，就純化步驟之作業效率之觀點而言，為了連續於活性碳處理步驟而實施再結晶化步驟，而將活性碳處理所使用之醇與不良溶劑組合來實施再結晶化步驟。 使用乙醇或1-丙醇作為醇系溶劑，使用作為酮系溶劑之丙酮、甲基乙基酮(MEK)、甲基異丁基酮(MIBK)或正庚烷作為不良溶劑，針對其等之組合，以各自之全部溶劑量為10 v/w(比率1：3)及20 v/w(比率1：1)如下所述地實施再結晶化步驟。 於AFDX0250之醇系溶液中在50℃下加熱攪拌0.5小時至1小時，向該溶液中添加各不良溶劑後，進而加熱攪拌1小時。其後，冷卻至5℃，熟化24小時。過濾懸濁溶液，於90℃下對濾渣進行減壓乾燥。針對所獲得之乾燥品，進行性狀之確認及HPLC分析。又，將乾燥品製成10%二甲基亞碸(DMSO)溶液，確認其性狀。
將使用乙醇及1-丙醇作為醇系溶劑之再結晶化步驟所獲得之各乾燥品及DMSO溶液之性狀、以及純化前之乾燥品及DMSO溶液之性狀分別示於圖2及圖3。又，將使用乙醇及1-丙醇作為醇系溶劑之再結晶化步驟所獲得之各乾燥品、以及純化前之乾燥品之HPLC分析之結果及產率分別示於表13及14。 [表13]
醇系溶劑：乙醇
不良溶劑 不良溶劑/醇系溶劑 全部溶劑量 HPLC(Area%) 產率
AFDX0250 化合物1
丙酮 3 10 v/w 98.98% 0.77% 70.8%
1 20 v/w 98.59% 1.07% 54.6%
MEK 3 10 v/w 99.17% 0.68% 72.9%
1 20 v/w 98.51% 1.23% 57.6%
MIBK 3 10 v/w 99.46% 0.49% 77.0%
1 20 v/w 98.49% 1.24% 67.8%
正庚烷 3 10 v/w 97.62% 1.92% 88.3%
1 20 v/w 98.40% 1.47% 78.1%
純化前 94.80% 3.71% -
[表14]
醇系溶劑：1-丙醇
不良溶劑 不良溶劑/醇系溶劑 全部溶劑量 HPLC(Area%) 產率
AFDX0250 化合物1
丙酮 3 10 v/w 99.12% 0.67% 74.1%
1 20 v/w 98.78% 0.95% 59.0%
MEK 3 10 v/w 99.50% 0.42% 75.7%
1 20 v/w 98.99% 0.88% 54.3%
MIBK 3 10 v/w 99.00% 0.78% 84.3%
1 20 v/w 98.82% 0.96% 66.9%
正庚烷 3 10 v/w 96.93% 2.55% 93.9%
1 20 v/w 98.09% 1.57% 80.9%
純化前 95.27% 3.33% -
由本試驗所示，藉由使用醇系溶劑與酮系溶劑之混合溶劑進行再結晶化步驟，可充分去除作為著色成分及雜質之化合物1，並且，AFDX0250之純度提高。
實施例 7 ： AFDX0250 之純化 (4)[化7] 向實施例6中經活性碳處理之AFDX0250在乙醇中所得之溶液中添加甲基異丁基酮(MIBK)(640 g)，進行濃縮。藉由 1H-NMR測定，計算出乙醇及MIBK相對於AFDX0250之質量容積百分比，以乙醇成為合計2.5 v/w之方式調整乙醇之量。繼而，將反應混合物加熱至63～67℃，攪拌30分鐘。以成為合計7.5 v/w之方式耗時48分鐘滴加MIBK，於63～67℃下攪拌1小時。繼而，將反應混合物冷卻至0～5℃，熟化24小時，進行過濾，而獲得結晶(第1次再結晶化)。 所獲得之AFDX0250依據本說明書中之(1)AFDX0250或其鹽之含量之測定法，製備試驗溶液，針對試驗溶液進行HPLC分析。
又，將所獲得之AFDX0250溶解於乙醇中，以與第1次再結晶化相同之方法，對該溶液進行第2次再結晶化。於90℃下對所獲得之濕固體AFDX0250進行14小時35分鐘減壓乾燥，而獲得AFDX0250(152.27 g，產率76.1%)。 與第1次再結晶化所獲得之AFDX0250同樣，所獲得之AFDX0250依據本說明書中之(1)AFDX0250或其鹽之含量之測定法，製備試驗溶液，針對試驗溶液進行HPLC分析。
AFDX0250之 1H-NMR資料如下所述。 1H-NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 0.85 - 0.97 (m, 6H), 1.08 - 1.75 (m, 6H), 1.96 - 2.60 (m, 7.5H), 2.72 - 2.82 (m, 0.5H), 3.10 - 3.24 (m, 0.5H), 3.68 (s, 1H), 4.12 - 4.26 (m, 0.5H), 7.27 - 7.33 (m, 1H), 7.36 - 7.43 (m, 1H), 7.59 - 7.67 (m, 3H), 7.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 10.00 - 11.00 (br, 1H)
將藉由第1次及第2次再結晶化獲得之AFDX0250之HPLC分析之結果示於表15。再者，表中之「N.D.」意指「未檢測」，a)表示利用液相層析質譜法測得之化合物1含量。 [表15]
測定對象 AFDX0250 化合物1 化合物3 化合物5
經純化之粗AFDX0250 99.47% 1.1 ppm 0.03% 0.22%
第1次再結晶後AFDX0250 99.67% N.D. 0.01% 0.08%
第2次再結晶後AFDX0250 99.80% N.D. (1.19 ppm) a) 0.01% 0.03%
由本試驗所示，藉由在活性碳處理後進行再結晶化，可與化合物1同樣地充分去除化合物5。因此，可知藉由將活性碳處理與再結晶化步驟組合，可進而提高AFDX0250之純度。 [產業上之可利用性]
根據本發明，可製造相較於已知之方法高產率且高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽。又，可抑制11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮等雜質之含量。 進而，根據本發明，可提供一種高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽、及包含高純度之(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之醫藥組合物。
圖1示出利用白鷺A(0.05 w/w、0.10 w/w及0.15 w/w)及白鷺P(0.10 w/w及0.15 w/w)進行之活性碳處理前後之包含各溶劑(乙醇(EtOH)、1-丙醇(1-PrOH)及N-甲基吡咯啶酮(NMP))之AFDX0250試樣(粉末及DMSO溶液)之性狀。再者，關於包含NMP作為溶劑之試樣，未製備使用白鷺A(0.15 w/w)及白鷺P(0.10 w/w及0.15 w/w)者。 圖2示出使用乙醇作為醇系溶劑，使用丙酮、甲基乙基酮(MEK)、甲基異丁基酮(MIBK)或正庚烷作為不良溶劑，針對其等之組合，以各自之全部溶劑量為10 v/w(比率1：3)及20 v/w(比率1：1)實施再結晶化步驟所得之各乾燥品及DMSO溶液以及純化前之乾燥品及DMSO溶液之性狀。 圖3示出使用1-丙醇作為醇系溶劑，使用丙酮、甲基乙基酮(MEK)、甲基異丁基酮(MIBK)或正庚烷作為不良溶劑，針對其等之組合，以各自之全部溶劑量為10 v/w(比率1：3)及20 v/w(比率1：1)實施再結晶化步驟所得之各乾燥品及DMSO溶液以及純化前之乾燥品及DMSO溶液之性狀。

Claims (17)

  1. 一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之製造方法，其包括如下步驟：於有機溶劑中、鹼金屬之碘化物之存在下，在鹼性條件下使11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽與(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶或其鹽反應；且該有機溶劑包含相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽每1 g為15～50 mL之乙腈。
  2. 如請求項1之製造方法，其中有機溶劑係相對於11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽每1 g為15～50 mL之乙腈。
  3. 如請求項1或2之製造方法，其進而包括如下步驟：向反應混合物中添加水及酸而調整pH值，繼而，利用有機溶劑進行萃取。
  4. 如請求項3之製造方法，其中實施2次以上利用有機溶劑所進行之萃取。
  5. 如請求項3或4之製造方法，其中有機溶劑為乙酸乙酯。
  6. 一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之製造方法，其包括如下步驟：於有機溶劑中、鹼性條件下使11-(2-碘乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽與(R)-2-(二乙胺基)甲基哌啶或其鹽反應。
  7. 一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之純化方法，其包括如下步驟：於1-丙醇及水之混合液中使(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽結晶化。
  8. 一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之純化方法，其包括如下步驟：於醇系溶劑中對(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽進行活性碳處理。
  9. 一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之純化方法，其包括如下步驟：於醇系溶劑及酮系溶劑之混合液中使(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽再結晶化。
  10. 一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽，其純度為95%以上。
  11. 一種(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽，其中雜質之含量未達5%。
  12. 一種醫藥組合物，其係包含(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽者，且源自(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之雜質之含量相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽未達5%。
  13. 如請求項12之醫藥組合物，其中雜質之含量未達1%。
  14. 一種醫藥組合物，其係包含(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽者，且實質上不包含11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮。
  15. 如請求項14之醫藥組合物，其中11-(2-氯乙醯基)-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮之含量相對於(R)-11-[2-[2-[(二乙胺基)甲基]-1-哌啶基]乙醯基]-5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽未達1000 ppm。
  16. 如請求項14或15之醫藥組合物，其進而實質上不包含5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽。
  17. 如請求項16之醫藥組合物，其中5,11-二氫-6H-吡啶并[2,3-b][1,4]苯二氮呯-6-酮或其鹽之含量未達1000 ppm。
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