TW202400643A

TW202400643A - 神經退化性疾病之治療劑

Info

Publication number: TW202400643A
Application number: TW112107020A
Authority: TW
Inventors: 江口広志; 富山貴美; 梅田知宙
Original assignee: 日商帝人製藥股份有限公司; 公立大學法人大阪
Priority date: 2022-02-28
Filing date: 2023-02-24
Publication date: 2024-01-01
Also published as: IL314246A; AR128627A1; AU2023226313A1; CO2024010819A2; WO2023163187A1

Abstract

本發明係提供結合至gpNMB並對其進行作用，具有去除機能異常小神經膠質細胞等作用之抗gpNMB抗體及其用途。該種抗gpNMB抗體係特異性結合至gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處。

Description

神經退化性疾病之治療劑

本發明係關於具有使機能異常小神經膠質細胞數減低之活性，及/或去除類澱粉蛋白β寡聚物之活性，及/或使突觸數量恢復之活性，及/或使認知機能恢復之活性之抗gpNMB抗體，以及包含具有該種活性之成分之醫藥。

1.神經退化性疾病所謂神經退化性疾病，係由於具有毒性之蛋白質(發生結構變化所引發之多聚體化或凝集體形成等，變成無法在細胞內分解之蛋白質)蓄積於神經細胞內，神經細胞的神經傳遞機能或細胞內清除的機能便發生障礙，進而發生神經細胞死亡，呈現出認知機能降低/記憶障礙/精神障礙/運動機能降低等之進行性神經疾病。神經退化性疾病沒有根本的治療藥，已使用緩和疾病所伴隨之症狀之藥劑。此種「神經退化性疾病」大多為「中樞神經退化性疾病」。

關於被歸類為神經退化性疾病之疾病，(1)Tau蛋白病變(Tau蛋白蓄積而發生神經退化之疾病)：具體而言，可列舉阿茲海默症(Alzheimer’s disease)、額顳葉退化症(FTLD-Tau)、額顳型失智症(FTD)、與原發性年齡增長相關聯性Tau蛋白病變(PART)、慢性外傷性腦症(CTE)、匹克氏症(Pick’s disease)、大腦皮質基底核退化症(CBD或CBS)、進行性核上性麻痺(PSP)、球狀神經膠質性Tau蛋白病變(GGT)、嗜銀顆粒性失智症(AGD)(嗜銀性顆粒病)、與年齡增長相關聯性Tau星形膠質細胞病變(ARTAG)、家族性英國失智症(FBD)、家族性丹麥失智症(FDD)、FTDP17、伴隨失智症之多系統Tau蛋白病變(MSTD)、神經原纖維變化型失智症、伴隨鈣化之瀰漫性神經原纖維變化症(DNTC)、伴隨球狀神經膠質封入體之白質Tau蛋白病變(WMT-GGI)等。(2)Tau蛋白病變以外之神經退化性疾病：具體而言，可列舉帕金森氏症(Parkinson’s disease)(αSyn的蓄積)、亨丁頓氏症(Huntington’s disease)(變異型亨丁頓蛋白的蓄積)、脊髓小腦退化症(聚麩胺酸蛋白質的蓄積)、遺傳性脊髓小腦失調症(聚麩胺酸蛋白質的蓄積)、球脊髓性肌肉萎縮症(聚麩胺酸蛋白質的蓄積)、路易氏體型失智症(αSyn蓄積)、庫賈氏症(Creutzfeldt-Jakob disease)(異常普立昂蛋白質蓄積)、肌肉萎縮性側索硬化症(ALS)(SOD或TDP43的蓄積)、額顳葉退化症(FTLD-TDP、FTLD-FUS：TDP43或FUS的蓄積)等。

2.阿茲海默症(阿茲海默型失智症) 在世界高齡化的潮流之中，失智症被認為是大問題。依據國際阿茲海默症協會(Alzheimer’s Disease International)所實施之調查，預測全世界的失智症患者的數量在2030年會增加至約7600萬人，隨後在2050年會增加至1億3900萬人。

根據世界衛生組織(WHO)，已報導失智症的約60～70%為阿茲海默症(https://www.who.int/news-room/ fact-sheets/detail/dementia)。在阿茲海默症中，已報導2大病理變化。1種為老人斑(類澱粉蛋白沉積)，另1種為神經原纖維變化(Tau蛋白蓄積)。

由於家族性阿茲海默症患者具有與類澱粉蛋白的產生亢進有關之基因變異，故針對於屬於構成類澱粉蛋白之成分之類澱粉蛋白β(Aβ)之抗體或疫苗的研究正進行中。去除類澱粉蛋白沉積之各式各樣的抗Aβ抗體(非專利文獻1)或被認為毒性較強之以Aβ寡聚物作為標靶之藥劑(非專利文獻2)已進行臨床開發，在2021年，阿杜卡努單抗(Aducanumab)(非專利文獻3)已受到FDA附條件核准。然而，已報導以類澱粉蛋白作為對象之此等醫藥的效果有限，且副作用等的風險亦較高。

另一方面，關於屬於另一個神經原纖維變化的構成成分之Tau蛋白，亦已藉由近年來的腦內影像解析而確認Tau蛋白蓄積與臨床症狀或病態進展之相關性，其係作為創藥標的而受到矚目。目前，針對於各式各樣的抗原決定位之抗Tau蛋白抗體的臨床試驗正進行中(非專利文獻4)。

再者，作為使以治療阿茲海默症為目的之抗體效率佳地移行至腦內之技術，已創製針對於運鐵蛋白受體等在血腦屏障(BBB)中進行表現之膜蛋白質之抗體，或者藉由將具有親和性之胜肽附加至恆定區或導入胺基酸變異來賦予結合性而可效率佳地通過BBB之抗體(非專利文獻5)。

然而，目前尚未存在針對於抑制或改善認知機能的降低之有效藥劑，創製有效的阿茲海默症治療藥是全世界緊迫的課題。

3.小神經膠質細胞小神經膠質細胞是與星狀細胞或寡樹突細胞相同的神經膠質細胞之一，但與星狀細胞或寡樹突細胞等不同，其係以在胎生期卵黃囊中發育之前驅細胞為起源。小神經膠質細胞為腦內之巨噬細胞樣細胞，其係作為中樞神經擔負免疫之細胞而發揮作用，被認為例如扮演去除在腦內之類澱粉蛋白β或凝集Tau蛋白等毒性蛋白質之角色。此外，已報導其在神經障礙時等發揮神經修復或保護作用。再者，已明確得知其在突觸修剪等神經網絡的維持上亦扮演重要的角色。在另一方面，經活化之小神經膠質細胞會釋放炎症性細胞介素等而誘導出腦內炎症。由於近年來之基因解析技術的進步，已報導各式各樣的小神經膠質細胞亞型的存在，各者與疾病之關係已成為今後的研究課題。

在小神經膠質細胞與阿茲海默症理之關係中，已有報導在使用阿茲海默症患者腦之免疫組織染色中，退化小神經膠質細胞係與Tau蛋白蓄積相關(非專利文獻6)。再者，亦有已藉由免疫組織學手法(single cell histology)鑑定出在阿茲海默症中之機能不全小神經膠質細胞的亞型之報導(非專利文獻7)。然而，機能不全小神經膠質細胞如何修飾疾病並不明。此外，機能不全小神經膠質細胞的判別一般係依其形態來進行，研究人員亦將機能不全小神經膠質細胞樣的小神經膠質細胞稱為「退化小神經膠質細胞」或「老化小神經膠質細胞」(非專利文獻8)，其含意未必是固定的。

此外，亦有亦施行使用針對於在小神經膠質細胞被活化時表現會上升之TSPO(translocator protein)之配體之阿茲海默症患者的腦的影像解析，由TSPO-PET (positron emission tomography)所檢測出之訊號在阿茲海默症患者中較高之報導(非專利文獻9)，與Tau蛋白或類澱粉蛋白病理相關之報導(非專利文獻10)。然而，關於此等TSPO-PET配體對活化小神經膠質細胞之特異性等，研究尚在發展途中(非專利文獻11)，並未達成共識。

近年來，在阿茲海默症的GWAS(genome wide association study)解析(非專利文獻12)中，表明許多與疾病相關聯之基因係在小神經膠質細胞中進行表現。因此，以小神經膠質細胞為標的之阿茲海默症治療藥的研究開發正進行中。例如，具有TREM2的機能喪失之LOF(loss of function)基因變異(R47H)之人類，阿茲海默症的發病風險變高(非專利文獻13)。目前，作為小神經膠質細胞標的型抗體醫藥品候補，期待藉由活化小神經膠質細胞而促進Aβ或Tau蛋白等毒性蛋白質的清除，已施行針對於具有活化小神經膠質細胞之作用之抗TREM2促效抗體(非專利文獻14)及抗CD33阻礙抗體(非專利文獻15)之臨床試驗(NCT04592874、NCT03822208)。在另一方面，就抑制神經膠質增生之觀點而言，抑制活化小神經膠質細胞之抗Sema4D抗體(非專利文獻16)亦已實施臨床試驗(NCT04381468)。

近年來，藉由阿茲海默症模型小鼠中之小神經膠質細胞的scRNAseq(single-cell RNA sequencing)解析，已明確得知存在有與阿茲海默症病態相關聯出現之小神經膠質細胞亞型。作為該種小神經膠質細胞亞型，已報導DAM(disease associated microglia，非專利文獻17)、ARM(activated response microglia，非專利文獻18)及MGnD(microglial neurodegenerative phenotype，非專利文獻19)等。然而，由於並不存在特異性調節此等DAM等與疾病相關聯之小神經膠質細胞之方法，故仍無法明確得知此等與疾病相關聯之小神經膠質細胞如何修飾阿茲海默症，亦即如何進行作用。再者，已明確之疾病特異性小神經膠質細胞之中，何種亞型的小神經膠質細胞抑制病態、何種亞型使病態亢進亦不明。此外，就mRNA表現水平而言，無法直接獲得細胞是否蓄積變性蛋白質的信息，因而機能不全小神經膠質細胞被歸類為何種亞型或包含在何種亞型中亦不明。

4.gpNMB gpNMB(Glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B)(別名：osteoactivin、DC-HIL，非專利文獻20)為1次跨膜型醣蛋白質，在人類中具有多達12處醣鏈附加部位。通常係在細胞內小器官(內質網、溶酶體、高基氏體、黑素體)等中進行表現(非專利文獻21)。但是，已報導若過量表現，則亦會在細胞膜上進行表現(非專利文獻22)。已報導gpNMB亦在癌細胞中進行表現(非專利文獻23)，亦有KLD (kringle-like domain)對細胞增殖而言實屬重要、細胞內ITIM基序會誘導訊息等之報導(非專利文獻24)。

再者，gpNMB具有與家族蛋白質的PMEL (premelanosome protein)的CAF(core amyloid fragment)區域(非專利文獻25)具有相似性之區域(以下稱為PMEL-CAF樣(pmel core amyloid fragment-like)結構域)、PKD(polycystic kidney disease homology)結構域。PKD結構域為以由3條鏈所組成之β片層及由4條鏈所組成之β片層進行摺疊之方式形成β三明治結構之結構域。其係屬於多囊性腎病的成因基因之多囊蛋白1(polycystin-1)所具有之特徵性結構，故命名為PKD結構域(非專利文獻26)。

gpNMB對吞噬體或溶酶體的機能而言實屬重要(非專利文獻27)，已報導在gpNMB缺損小鼠中，溶酶體的機能降低(非專利文獻28)。此外，在gpNMB缺損之小鼠中，已報導虹膜的異常或青光眼發病(非專利文獻29)，並已報導gpNMB缺損之人類出現皮膚類澱粉沉積症(非專利文獻30)。

已知gpNMB會被ADAM10等膜型蛋白酶所切割並以可溶型gpNMB之形式游離(非專利文獻31)，已報導可溶型gpNMB參與神經保護(非專利文獻32)或抗炎症(非專利文獻21)及細胞增殖(非專利文獻33)。再者，已報導在使可溶性gpNMB(細胞外區域gpNMB)過量表現之基因轉殖小鼠中，神經機能提升(非專利文獻34)，亦有若藉由使用慢病毒載體使gpNMB進行表現而使自噬亢進，則阿茲海默症模型小鼠(APP/PS1)的認知機能上升之報導(非專利文獻35)。

在另一方面，已報導藉由投予具有小鼠gpNMB的一部分胺基酸序列之小鼠gpNMB特異性疫苗胜肽，已老化之血管內皮細胞或纖維母細胞便減低，高脂肪飲食負荷模型小鼠中之胰島素抵抗性便改善，動脈硬化便改善，老化促進小鼠中之生存期便延長等。此外，已報導此時抗體依存性細胞傷害(ADCC：antibody dependent cellular cytotoxicity)活性實屬重要，已揭示有效於去除老化細胞之gpNMB部分胜肽序列(專利文獻1、非專利文獻36)。此外，同樣地，已有在高脂肪飲食負荷模型小鼠中，藉由投予針對於小鼠gpNMB之多株抗體，便可藉由阻礙產生自肝臟之可溶性gpNMB而改善肥胖或胰島素抵抗性之報導(非專利文獻37)。

作為抗gpNMB抗體，已知屬於抗人類gpNMB特異性人類抗體之格巴妥木單抗(Glembatumumab) (專利文獻2)。屬於格巴妥木單抗與抗癌劑之共軛物之格巴妥木單抗-維多汀(Glembatumumab Vedotin)係作為癌症治療藥候補並進展至第2期試驗，但開發已中止。此外，亦已揭示結合至在癌細胞的表面進行表現之gpNMB，並以免疫毒素治療癌症之另一種抗gpNMB抗體(專利文獻3)。再者，亦有關於取得另一種抗人類gpNMB特異性抗體之報導，述及應用至針對於源自人類之癌細胞之診斷或治療(非專利文獻38)。此外，亦已報導對活化大鼠小神經膠質細胞具特異性之抗大鼠gpNMB特異性抗體(非專利文獻39)。此外，亦有抗小鼠DC-HIL特異性抗體將訊息帶入細胞內之報導(非專利文獻40)。

關於在阿茲海默症(AD)中之gpNMB表現，已有免疫組織染色及RNA表現解析以及腦脊髓液中濃度之報導。關於免疫組織染色，已報導在AD患者腦中，表現gpNMB之小神經膠質細胞堆積於ApoE陽性Aβ斑塊(非專利文獻41)。

關於RNA表現，已有在AppNL-G-F小鼠的scRNAseq解析中，施行小神經膠質細胞的亞型分類，ARM(activated response microglia)產生屬於組織修復基因之gpNMB等之報導，已確認TREM2產生亢進、CD33產生降低(非專利文獻18)。此外，亦有在阿茲海默症模型小鼠5XFAD中，在MGnD中gpNMB的表現上升之報導，並記載其可能有發揮神經保護作用之職責(非專利文獻19)。在另一方面，亦有在阿茲海默症模型小鼠的scRNAseq解析中，gpNMB在機能不全小神經膠質細胞中進行表現之報導(非專利文獻42)。再者，在使用阿茲海默症患者腦的樣品之snRNAseq(single-nucleus RNA sequencing)中，在被認為會發揮毒性蛋白質去除作用之具有吞噬能力之活化小神經膠質細胞中，已報導ApoE4、TREM2、ITGAX、gpNMB、FLT1、SPP1等的表現(非專利文獻43)。亦報導有針對第1型小神經膠質細胞與阿茲海默症之關聯性、gpNMB的第2方面機能的可能性(非專利文獻44)。然而，如非專利文獻18及非專利文獻43所示，已知存在許多小神經膠質細胞亞型。

再者，已報導gpNMB參與自噬機能，減輕AD模型小鼠(APP-PS1)的Aβ沉積，藉由莫里斯水迷宫(morris water maze)試驗改善認知機能(非專利文獻44)。

關於腦脊髓液中之可溶性gpNMB濃度與阿茲海默症之關係，有在AD中濃度上升之報導(非專利文獻19)，但在另一方面，亦有無關聯性之報導(非專利文獻45)。

5.阿茲海默症模型小鼠目前，已開發出各式各樣的阿茲海默症模型小鼠並使用於研究(非專利文獻46)。代表性模型小鼠之一，有5XFAD小鼠(非專利文獻47)。此為會產生被認為是類澱粉蛋白β之中毒性最強之Aβ寡聚物，亦將Aβ寡聚物蓄積於神經細胞內之模型小鼠。此外，APPosk小鼠(非專利文獻48)為與5XFAD模型小鼠同樣地將Aβ寡聚物蓄積於神經細胞內之模型小鼠，迄今為止，已報導利福平(Rifampicin)的經鼻投予所引發之病理的改善、突觸數量的恢復及認知機能的改善(非專利文獻49)。然而，並沒有藉由抗Aβ抗體等抗體將已蓄積於細胞內之Aβ寡聚物或已吞噬或蓄積Aβ之細胞予以清除之報導。再者，亦沒有顯示出成為神經機能或神經傳遞的指標之神經細胞的突觸數量的恢復之抗體之報導。

Tg2576為APP(類澱粉蛋白前驅物蛋白質，異構體695)基因的瑞典變異(KM670/671NL)體基因過量表現之Tg小鼠，其係已報導在9個月齡左右呈現出類澱粉蛋白斑塊(阿茲海默症患者腦中之老人斑)之AD模型小鼠(非專利文獻50)，泛用於類澱粉蛋白病理的研究。

Tau264為表現人類Tau蛋白之Tg小鼠，已報導單獨時並未呈現出Tau病理，但藉由與APPosk小鼠雜交，便會誘導出磷酸化Tau蛋白的蓄積(非專利文獻51)，就呈現出無變異之野生型Tau的磷酸化及蓄積之方面而言，被認為是呈現出近似於人類的阿茲海默症之病理之模型小鼠。

6.神經機能評估作為神經機能恢復的評估，在生體內(in vivo)，一般係施行評估空間參照機能或記憶等之莫里斯水迷宫試驗或Y迷宫、新穎物質探索等行為試驗。

此外，在試管內(in vitro)，作為經由免疫組織染色之評估，一般係施行成為神經細胞的指標之經由NeuN染色之神經細胞數的解析、成為突觸數量的指標之經由突觸素染色之突觸數量的解析。

在許多阿茲海默症模型小鼠中，係在不致神經細胞死亡之狀態下施行評估，故而施行透過經由突觸素染色之突觸數量的解析之神經機能的評估。

在許多論文中已報導在試管內之突觸素量與生體內神經機能有相關性(非專利文獻53、非專利文獻54、非專利文獻55)，藉由經由突觸素染色等之突觸素蛋白質的定量化，便能夠對神經機能恢復進行評估。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]國際公開第2021/020047號 [專利文獻2]日本專利第6334496號公報 [專利文獻3]國際公開第2007/053718號 [非專利文獻]

[非專利文獻1]Avgerinos et al., Ageing Res. Rev., (2021), 68:101339 [非專利文獻2]Tolar et al., Int. J. Mol. Sci. (2021), 22[12]:6355 [非專利文獻3]Jeremic et al., Ageing Res. Rev., (2021), 72:101496 [非專利文獻4]Ji et al., Drugs, (2021), 81[10]:1135-1152 [非專利文獻5]Pardridge et al., Pharmaceuticals (2022), 15[3], Internet ＜https://doi.org/10.3390/ph15010003＞ [非專利文獻6]Streit et al., Acta Neuropathol., (2009), 118[4]:475-85 [非專利文獻7]Swanson et al., Acta Neuropathol. Commun., (2020), 8:170 [非專利文獻8]Shahidehpour et al., Neurobiol. Aging., (2021), 99:19-27 [非專利文獻9]Malpetti et al., Brain, (2020), 143:1588-1602 [非專利文獻10]Dani et al., Brain, (2018), 141[9]:2740-2754 [非專利文獻11]Gouilly et al., Eur. J. Neurosci., (2022), doi: 10.1111/ejn.15613 [非專利文獻12]Jansen et al., Nat. Genet., (2019), 51[3]:404-413 [非專利文獻13]Wang et al., Cell, (2015), 160[6]:1061-1071 [非專利文獻14]Wang et al., J. Exp. Med., (2020), .217[9]:e20200785 [非專利文獻15]Griciuc et al., Curr. Opin. Neurol., (2021), 34[2]:228-236 [非專利文獻16]Mao et al., Int. J. Mol. Sci., (2021), 22:9465 [非專利文獻17]Keren-Shaul et al., Cell, (2017), 169:1276-1290 [非專利文獻18]Frigerio et al., Cell Rep., (2019), .27[4]:1293-1306 [非專利文獻19]Huettenrauch et al., Acta Neuropathol. Commun., (2018), 6:108 [非專利文獻20]Shikano et al., J. Biol. Chem., (2001), 276[11]:8125-8134 [非專利文獻21]Ripoll et al., J. Immunol., (2007), 178:6557-6566 [非專利文獻22]Tse et al., Clin. Cancer Res., (2006), 12[4]:1373-1382 [非專利文獻23]Maric et al., OncoTargets Ther., (2013), 6:839-852 [非專利文獻24]Xie et al., Cancer Sci., (2019), 110[7]:2237-2246 [非專利文獻25]Hee et al., Scientific Reports, (2017), 7:44064 [非專利文獻26]Bycroft et al., EMBO J., (1999), 18[2]:297-305 [非專利文獻27]Li et al., FASEB J., (2010), 24[12]: 4767-4781 [非專利文獻28]Robinet et al., Scientific Reports, (2021), 11:10249 [非專利文獻29]Anderson et al., Nat. Genet., (2002), 30:81-85 [非專利文獻30]Yang et al., Am. J. Hum. Genet., (2018), 102[2]: 219-232 [非專利文獻31]Rose et al., PLoS One, (2010), 5[8]: e12093 [非專利文獻32]Nakano et al., Neuroscience, (2014), 277: 123-131 [非專利文獻33]Wang et al., Cancer Sci.. (2021), 112:4187-4197 [非專利文獻34]Murata et al., J. Neurochem., (2015), 132: 583-594 [非專利文獻35]Zhu et al., Neurosci. Lett., (2022), 767: 136300 [非專利文獻36]Suda et al., Nat. Aging, (2021), 1:1117-1126 [非專利文獻37]Gong et al., Nat. Metab., (2019), 1[5]: 570-583 [非專利文獻38]FBRI LLC, “ALZFORUM: NETWORKING FOR A CURE”, “RESEARCH MODELS”, [online], (1996), [Seached in 2022], Internet ＜https:// www.alzforum.org/research-models/alzheimers-disease＞ [非專利文獻39]Zhang et al., Monoclon. Antibodies Immunodiagn. Immunother., (2013), .32[4]: 265-269 [非專利文獻40]Kawahara et al., Glia, (2016),64[11]: 1938-1961 [非專利文獻41]Chung et al., J. Immunol., (2019), 183[5]: 5190-5198 [非專利文獻42]Satoh et al., Intractable Rare Dis. Res., (2019), 8[2]: 120-128 [非專利文獻43]Krasemann et al., Immunity, (2017), 47:566-581 [非專利文獻44]Gerrits et al., Acta Neuropathol., (2021), 141:681-696 [非專利文獻45]Zhu et al., Neuroscience Letters, (2022), 767:136300 [非專利文獻46]川原，月刊「細胞」，(2022)，54[2]: 110-114 [非專利文獻47]Aichholzer et al., Alzheimers Res. Ther., (2021), 13:94 [非專利文獻48]Oakley et al., J. Neurosci., (2006), 26[40]:10129-10140 [非專利文獻49]Umeda et al., J. Neurosci. Res., (2011), 89: 1031-1042 [非專利文獻50]Umeda et al., Front. Neurosci., (2021), 15: 763476 [非專利文獻51]Hsiao et al., Science, (1996), 274[5284]: 99-102 [非專利文獻52]Umeda et al., Acta Neuropathol., (2014), 127: 685-698 [非專利文獻53]Shi et al., Front. Pharmacol., (2021), 12: 794458 [非專利文獻54]Umeda et al., Front. Neurosci., (2021), 15: 763476 [非專利文獻55]Hafez et al., Neuroscience, (2012), 223: 465-472 [非專利文獻56]EMBL-EBI, “AlphaFold Protein Structure Database”, “Transmembrane glycoprotein NMB”, [online], (2021), [Seached in 2022], Internet ＜https:// alphafold.ebi.ac.uk/entry/Q99P91＞ [非專利文獻57]Woollacott et al., J. Neuroinflammation, (2020), 17:234 [非專利文獻58]Kushwaha et al., Ann. Neurosci., (2018), 25:223-233 [非專利文獻59]Swanson et al., Acta Neuropathol. Commun., (2020), 8:170 [非專利文獻60]Quek et al., J. Neuroinflammation, (2022), 19:58 [非專利文獻61]Boi et al., Int. J. Mol. Sci., (2020), 21[22]: 8535 [非專利文獻62]Ishijima et al., Science Progress, (2021), 104[4]: 1-21 [非專利文獻63]Cai et al., Bioengineered, (2021), 12[2]: 11390-11398 [非專利文獻64]Paasila et al., Brain Pathology, (2019), 29: 726-740 [非專利文獻65]Hajj et al., J. Neuroinflammation, (2019), 16: 87 [非專利文獻66]Stratoulias et al., EMBO J., (2019), 38: e101997 [非專利文獻67]Anderson et al., Pigment Cell Melanoma Res. (2013), 26[4]: 470–486

[發明所欲解決之課題]

雖然有神經退化性疾病的症狀改善藥，但並無治療藥。在另一方面，藉由scRNAseq等已明確得知在神經退化性疾病中，特異性出現之疾病相關小神經膠質細胞的存在，但何者為使病態進展之小神經膠質細胞並不明。此外，特定出使病態進展之機能異常小神經膠質細胞並加以特異性去除是否會導致神經細胞內之毒性蛋白質的去除或神經機能恢復等治療效果亦不明。

在該種情況下，如作為先前技術所記載，儘管作為在機能異常小神經膠質細胞中進行表現之基因中之參與自噬體或溶酶體的機能之基因之一，可列舉gpNMB，但高度表現gpNMB之小神經膠質細胞是否使病態進展或發揮保護作用、是否參與病態並不明。

此外，如上述，已報導在阿茲海默症模型小鼠中亦存在數種疾病相關小神經膠質細胞，但由於並不存在特異性調節疾病相關小神經膠質細胞之方法，因而疾病相關小神經膠質細胞如何修飾疾病並不明。

再者，如上述，已報導在疾病相關小神經膠質細胞中進行表現之gpNMB係神經保護性地進行作用，並已報導其在機能異常小神經膠質細胞中進行表現等，但迄今為止，並沒有可投予至疾病模型動物並評估藥效且可在生體內之生理條件下以較高的親和性進行結合之抗gpNMB單株抗體之報導例。更不用說，並沒有將可在腦內進行作用之高親和性抗gpNMB單株抗體投予至阿茲海默症模型小鼠並對效果進行解析之報導。

gpNMB為富含醣鏈之醣蛋白質，在人類中存在12處醣鏈附加部位。因此，創造可識別在細胞中進行表現之gpNMB之單株抗體並不容易，如前述，針對屬於格巴妥木單抗與抗癌劑之共軛物之格巴妥木單抗-維多汀，僅實施關於高度表現gpNMB之癌症種類(黑色素瘤或乳癌等)之臨床試驗。由於格巴妥木單抗為人類gpNMB特異性抗體，因而無法評估其對疾病模型小鼠或疾病模型大鼠中之內因性gpNMB之效果。

在另一方面，已報導藉由抗小鼠gpNMB多株抗體而阻礙肝臟表現可溶性gpNMB，藉此改善高脂肪飲食負荷模型小鼠的肥胖或胰島素抵抗性(非專利文獻38)，藉由小鼠gpNMB特異性疫苗胜肽而去除老化細胞，藉此改善高脂肪飲食負荷模型小鼠的動脈硬化/胰島素抵抗性及延長老化促進模型小鼠的生存期(專利文獻35、非專利文獻36)。

在另一方面，以創造阿茲海默症的治療藥為目的之具有小鼠/人類交叉反應性之抗gpNMB抗體的創製係由於gpNMB附加非常多的醣鏈及小鼠/人類相似性為70%左右，相似性亦較低，且具有複雜的立體結構(非專利文獻56)，故識別生體內之立體結構之抗體的取得係難易度非常高，如上述，迄今為止沒有報導。再者，由於醣鏈的修飾係依進行表現之細胞或組織而有所不同，故推定對在小神經膠質細胞中進行表現之gpNMB特異性作用之抗體的取得非常困難，更不用說，結合至在細胞膜上進行表現之gpNMB並具有小鼠/人類交叉反應性之抗gpNMB抗體的創製被認為極為困難。

本發明係有鑑於上述課題而完成，其目的為提供特異性調節機能異常小神經膠質細胞之手段，同時提供基於使用該種手段之新的作用機制之醫藥。 [解決課題之手段]

本發明者等人發現在阿茲海默症模型小鼠或帕金森氏症模型小鼠中，存在將Aβ、Tau蛋白或α突觸核蛋白蓄積於細胞內或者已吞噬此等之小神經膠質細胞。

此外，已報導基於分岐結構而將退化(機能異常)的水平加以評分化之方法(非專利文獻57)，結果此等小神經膠質細胞在形態上分岐結構減低，被評估為退化。除此以外，亦觀察到可在老化細胞中觀察到之脂褐素(lipofuscin)的蓄積。由此等事實，此等小神經膠質細胞被認為是無法分解凝集蛋白質之機能異常小神經膠質細胞或異常吞噬凝集蛋白質之機能亢進小神經膠質細胞。亦提出此等已蓄積或吞噬凝集蛋白質之機能異常小神經膠質細胞會失去神經保護作用，導致神經退化性病態之想法(非專利文獻58、非專利文獻59)。

再者，本發明者等人發現此種機能異常小神經膠質細胞大多為gpNMB陽性，即，在經由抗gpNMB抗體及抗Iba1抗體之免疫組織染色下會被雙重染色之細胞。作為一例，已發現在APPosk小鼠的腦內之免疫組織學解析中，將Aβ蓄積於細胞內之gpNMB陽性細胞為抗gpNMB抗體及抗Iba1抗體陽性的細胞，即，高度表現gpNMB之小神經膠質細胞。另外，在本說明書中，所謂「機能異常小神經膠質細胞」，係意味在經由抗gpNMB抗體及抗Iba1抗體之免疫組織染色下會被雙重染色之細胞。

在此處，針對「機能異常小神經膠質細胞」的含意，如前述，在研究人員間未必一致，本說明書中之所謂「機能異常小神經膠質細胞」，係指具有下列所列舉之特徵中之至少一者之小神經膠質細胞。 1) 其吞噬機能及/或毒性蛋白質分解機能降低或異常亢進。 2) 釋放使(例如腦內炎症等)病態進展之炎症性細胞介素。 3) 相較於正常小神經膠質細胞而言分岐結構減少。

針對其中之1)，已知成為吞噬的對象之例如Aβ、Tau蛋白、α突觸核蛋白、脂褐素、L-鐵蛋白(L-ferritin)、TDP43、SOD、聚麩胺酸蛋白質等因疾病而異之各種各樣的凝集蛋白質，可通過在小神經膠質細胞內觀察其蓄積或吞噬來予以確認(非專利文獻60、非專利文獻61)。具體而言，能夠藉由經由屬於小神經膠質細胞的標記之Iba1之染色，同時藉由針對於凝集蛋白之抗體(例如抗Aβ抗體或抗Tau蛋白抗體等)之檢測或本身螢光(脂褐素)的檢測來予以鑑定。此外，針對2)，可藉由該細胞介素的檢測(非專利文獻62、非專利文獻63)來予以確認，針對3)，可藉由經由免疫組織染色(非專利文獻64)或電子顯微鏡(electron microscopy)(非專利文獻65)之形態觀察來予以確認(非專利文獻66)。

另一方面，本說明書中之所謂「正常小神經膠質細胞」，係指沒有任何前述之機能異常小神經膠質細胞的特徵並發揮維持生體內之恆定性之作用之小神經膠質細胞。

本發明者等人有鑑於上述狀況而反覆致力檢討之結果，成功取得特異性結合至gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處之抗gpNMB抗體，並發現該種抗體通過具有減少機能異常小神經膠質細胞的數量、去除類澱粉蛋白β寡聚物、增加突觸數量及/或恢復認知機能等意想不到的活性，而可利用於阿茲海默症的治療或預防等各種用途。再者，亦發現藉由使用如該抗體般使機能異常小神經膠質細胞的數量減少之任意的手段，便能夠獲得去除類澱粉蛋白β寡聚物、增加突觸數量及/或恢復認知機能等效果，達成各種神經退化性疾病的治療或預防之意想不到的效果之可能性，遂完成本發明。

即，本發明係關於以下者。 [第1項]一種抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其係特異性結合至人類gpNMB(glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B)的橫跨PMEL-CAF樣(PMEL Core Amyloid Fragment-like)結構域至PKD結構域之區域的至少1處。 [第2項]如第1項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其係特異性結合至具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的包含D287及/或H301的胺基酸殘基之區域。 [第3項]如第1或2項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其係特異性結合至具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的包含R214及/或R215的胺基酸殘基之區域。 [第4項]如第2或3項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其亦特異性結合至具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的包含K257及/或D258的胺基酸殘基之區域、包含H268及/或D269的胺基酸殘基之區域、包含K282的胺基酸殘基之區域、包含K316的胺基酸殘基之區域以及包含H216及/或R218的胺基酸殘基之區域中之1個或2個以上區域。 [第5項]如第1～4項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其中，前述抗gpNMB抗體亦特異性結合至小鼠gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處。 [第6項]如第1～5項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其具有選自使機能異常小神經膠質細胞的數量減少之活性、去除類澱粉蛋白β寡聚物之活性、使突觸數量增加之活性及使認知機能恢復之活性中之1種或2種以上活性。 [第7項]如第1～6項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其係單株抗體或其片段或者該等的衍生物。 [第8項]如第1～7項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其至少包含重鏈可變區，前述重鏈可變區具有 (1)作為CDR-H1，SEQ ID NO：1所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：1所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：3所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：3所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：3所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：5所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：5所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：5所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、75.0%以上、83.3%以上或91.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (2)作為CDR-H1，SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者， (3)作為CDR-H1，SEQ ID NO：33所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：33所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：33所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：35所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：35所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：35所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：37所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：37所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：37所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者， (4)作為CDR-H1，SEQ ID NO：49所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：49所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：49所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：51所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：51所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：51所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：53所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：53所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：53所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、68.7%以上、75.0%以上、81.2%以上、87.5%以上或93.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (5)作為CDR-H1，SEQ ID NO：65所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：65所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：65所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：67所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：67所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：67所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：69所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：69所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處或5處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：69所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、78.5%以上、85.7%以上或92.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (6)作為CDR-H1，SEQ ID NO：81所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：81所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：81所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：83所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：83所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：83所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：85所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：85所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：85所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (7)作為CDR-H1，SEQ ID NO：97所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：97所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：97所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：99所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：99所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：99所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：101所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：101所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：101所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (8)作為CDR-H1，SEQ ID NO：113所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：113所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：113所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：115所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：115所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：115所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：117所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：117所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：117所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者， (9)作為CDR-H1，SEQ ID NO：129所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：129所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：129所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：131所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：131所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：131所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：133所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：133所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：133所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者， (10)作為CDR-H1，SEQ ID NO：145所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：145所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：145所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：147所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：147所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：147所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：149所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：149所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：149所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列， (11)作為CDR-H1，SEQ ID NO：161所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：161所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：161所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：163所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：163所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：163所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：165所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：165所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：165所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列， (12)作為CDR-H1，SEQ ID NO：287所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：287所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：287所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：289所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：289所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：289所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：291所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：291所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：291所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (13)作為CDR-H1，SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列中，第32位的天冬醯胺酸及第33位的色胺酸以外之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列中，第55位的天冬胺酸、第57位的苯基丙胺酸及第58位的蘇胺酸以外之任1處、2處、3處、4處或5處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列中，第98位的精胺酸、第100位的甘胺酸及第109位的甘胺酸以外之任1處、2處、3處、4處、5處、6處、7處、8處、9處、10處、11處或12處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列。 [第9項]如第1～7項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其至少包含重鏈可變區，前述重鏈可變區具有 (1)SEQ ID NO：13所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：13所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (2)SEQ ID NO：29所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：29所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (3)SEQ ID NO：45所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：45所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (4)SEQ ID NO：61所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：61所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (5)SEQ ID NO：77所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：77所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (6)SEQ ID NO：93所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：93所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (7)SEQ ID NO：109所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：109所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (8)SEQ ID NO：125所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：125所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (9)SEQ ID NO：141所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：141所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (10)SEQ ID NO：157所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：157所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (11)SEQ ID NO：173所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：173所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (12)SEQ ID NO：299所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：299所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列。 [第10項]如第8或9項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其中，前述重鏈可變區包含人類免疫球蛋白的任何類別的框架序列作為框架序列。 [第11項]如第8～10項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其進一步包含重鏈恆定區，前述重鏈恆定區具有人類免疫球蛋白的任何類別的重鏈恆定區的胺基酸序列。 [第12項]如第1～11項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其至少包含輕鏈可變區，前述輕鏈可變區具有 (1)作為CDR-L1，SEQ ID NO：7所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：7所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：7所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：9所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：9所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：9所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：11所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：11所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：11所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (2)作為CDR-L1，SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (3)作為CDR-L1，SEQ ID NO：39所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：39所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：39所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：41所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：41所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：41所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：43所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：43所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：43所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (4)作為CDR-L1，SEQ ID NO：55所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：55所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：55所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：57所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：57所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：57所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：59所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：59所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：59所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (5)作為CDR-L1，SEQ ID NO：71所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：71所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：71所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：73所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：73所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：73所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：75所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：75所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：75所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (6)作為CDR-L1，SEQ ID NO：87所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：87所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：87所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：89所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：89所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：89所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：91所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：91所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：91所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (7)作為CDR-L1，SEQ ID NO：103所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：103所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：103所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：105所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：105所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：105所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：107所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：107所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：107所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (8)作為CDR-L1，SEQ ID NO：119所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：119所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：119所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：121所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：121所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：121所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：123所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：123所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：123所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (9)作為CDR-L1，SEQ ID NO：135所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：135所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：135所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：137所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：137所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：137所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：139所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：139所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：139所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (10)作為CDR-L1，SEQ ID NO：151所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：151所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：151所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：153所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：153所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：153所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：155所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：155所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：155所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列， (11)作為CDR-L1，SEQ ID NO：167所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：167所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：167所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：169所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：169所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：169所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：171所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：171所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：171所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列， (12)作為CDR-L1，SEQ ID NO：293所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：293所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：293所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：295所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：295所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：295所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：297所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：297所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：297所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (13)作為CDR-L1，SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列中，第29位的異白胺酸及第31位的酪胺酸以外之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列中，第50位的蘇胺酸以外之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列中，第88位的組胺酸、第89位的麩醯胺酸、第90位的色胺酸、第92位的絲胺酸及第93位的酪胺酸以外之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列。 [第13項]如第1～11項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其至少包含輕鏈可變區，前述輕鏈可變區具有 (1)SEQ ID NO：15所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：15所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (2)SEQ ID NO：31所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：31所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (3)SEQ ID NO：47所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：47所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (4)SEQ ID NO：63所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：63所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (5)SEQ ID NO：79所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：79所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (6)SEQ ID NO：95所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：95所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (7)SEQ ID NO：111所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：111所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (8)SEQ ID NO：127所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：127所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (9)SEQ ID NO：143所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：143所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (10)SEQ ID NO：159所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：159所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (11)SEQ ID NO：175所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：175所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (12)SEQ ID NO：301所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：301所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列。 [第14項]如第12或13項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其中，前述輕鏈可變區包含人類免疫球蛋白的任何類別的框架序列作為框架序列。 [第15項]如第12～14項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其進一步包含輕鏈恆定區，前述輕鏈恆定區具有人類免疫球蛋白的任何類別的輕鏈恆定區的胺基酸序列。 [第16項]如第1～15項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其係Fab、scFv、雙價抗體(diabody)、奈米抗體(nanobody)、VHH、雙特異性抗體或多特異性抗體或者該等的衍生物。 [第17項]一種抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其對於向gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處之結合，與如第1～16項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物進行競爭性結合。 [第18項]一種核酸分子，其係由編碼出如第1～17項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物之多核苷酸序列所組成。 [第19項]一種選殖載體或表現載體，其包含至少一種如第18項所記載之核酸分子。 [第20項]一種重組體細胞，其經導入如第19項所記載之載體。 [第21項]一種用於製造如第1～17項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物之方法，其包含將第20項所記載之重組體細胞進行培養。 [第22項]一種用於製造如第1～17項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物之方法，其包含將與具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的包含D287及/或H301的胺基酸殘基之區域及/或包含R214及/或R215的胺基酸殘基之區域具有同一胺基酸序列之多肽投予動物，採取在該動物的體內所產生之抗體或其片段或者該等的衍生物。 [第23項]一種疫苗，其具有促進如第1～17項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物的產生之活性，該疫苗包含與具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的包含D287及/或H301的胺基酸殘基之區域及/或包含R214及/或R215的胺基酸殘基之區域具有同一胺基酸序列之多肽。 [第24項]一種醫藥組成物，其包含選自由如第1～17項中任一項所記載之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物、如第18項所記載之核酸分子、如第19項所記載之載體及如第20項所記載之重組體細胞所組成之群組之1者或2者以上作為有效成分。 [第25項]如第24項所記載之醫藥組成物，其係用於減低對象的機能異常小神經膠質細胞的數量，及/或用於去除對象的類澱粉蛋白β寡聚物，及/或用於使對象的突觸數量增加，及/或用於治療或預防對象的神經退化性疾病。 [第26項]一種醫藥組成物，其係用於去除對象的類澱粉蛋白β寡聚物，及/或用於使對象的突觸數量增加，及/或用於治療或預防對象的神經退化性疾病，該醫藥組成物包含具有使機能異常小神經膠質細胞的數量減少之活性之藥劑作為有效成分。 [第27項]如第25或26項所記載之醫藥組成物，其中，神經退化性疾病為阿茲海默症。 [第28項]如第27項所記載之醫藥組成物，其進一步包含第2活性成分。 [第29項]如第28項所記載之醫藥組成物，其中，第2活性成分為選自抗Tau蛋白抗體、抗類澱粉蛋白β抗體、抗CD33抗體、抗信號素4D抗體、抗TNFα抗體、抗分揀蛋白抗體、抗半乳糖特異性凝集素(半乳糖凝集素)3抗體及抗TREM2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2)抗體中之1種或2種以上。 [第30項]如第28項所記載之醫藥組成物，其中，第2活性成分為包含選自Tau蛋白、類澱粉蛋白β、CD33、信號素4D、TNFα、分揀蛋白、半乳糖特異性凝集素(半乳糖凝集素)3及TREM2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2)中之1種或2種以上蛋白質的全長或部分長的多肽或者編碼出該等之核酸之疫苗。

另外，本發明中之用語「醫藥」，在前後文沒有矛盾之前提下，係解釋為含括「治療劑」及「預防劑」兩種概念。 [發明效果]

本發明之抗gpNMB抗體係藉由特異性結合至gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處，而發揮減少對象的機能異常小神經膠質細胞的數量、去除類澱粉蛋白β寡聚物、增加突觸數量及/或改善認知機能之極為意想不到的活性。再者，係提供用於治療或預防各種神經退化性疾病之基於新的作用機制之醫藥。

以下，基於具體的實施形態說明本發明，但本發明不受此等實施形態任何限定。另外，在本說明書中所引用之包含日本專利公報、日本專利申請公開公報及非日本專利公報之所有的文獻在所有目的下，其整體係藉由援用而併入本說明書中。

[抗gpNMB抗體] 本發明之一態樣係關於特異性結合至gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣(PMEL Core Amyloid Fragment-like)結構域至PKD結構域之區域的至少1處之抗gpNMB抗體(以下有時適宜簡稱為「本發明之抗gpNMB抗體」或「本發明之抗體」)。所謂gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處，係意味例如具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的橫跨第172至319個胺基酸殘基之區域的至少1處。

・抗體：在本發明中，所謂「抗體」，係包含藉由二硫鍵相互結合而得之至少2個重(H)鏈及2個輕(L)鏈之醣蛋白質。重鏈包含重鏈可變區(略記為VH)及重鏈恆定區，重鏈恆定區包含3個結構域，CH1、CH2及CH3。輕鏈包含輕鏈可變區(略記為VL)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含1個結構域，CL。在輕鏈的恆定區中，存在被稱為λ鏈及κ鏈之2種。在重鏈的恆定區中，存在γ鏈、μ鏈、α鏈、δ鏈及ε鏈，取決於該重鏈的差異，分別存在IgG、IgM、IgA、IgD及IgE之抗體的同型。VH及VL區域係進一步細分成被稱為框架區(FR)之較保守的4個區域(FR-1、FR-2、FR-3、FR-4)，及被稱為互補性決定區(CDR)之可變性的3個區域(CDR-1、CDR-2、CDR-3)。VH包含從胺基末端至羧基末端以FR-1、CDR-1(CDR-H1)、FR-2、CDR-2(CDR-H2)、FR-3、CDR-3(CDR-H3)、FR-4的順序進行排序之3個CDR及4個FR。VL包含胺基末端至羧基末端以FR-1、CDR-1(CDR-L1)、FR-2、CDR-2(CDR-L2)、FR-3、CDR-3(CDR-L3)、FR-4的順序進行序列之3個CDR及4個FR。重鏈及輕鏈的可變區包含與抗原進行相互作用之結合結構域。

本發明之抗體在具有特異性結合至gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處之活性之前提下，亦可為抗體的片段(例如抗原結合片段)及/或衍生物。作為抗體的片段，可列舉F(ab’) ₂、Fab、Fv等。作為抗體的衍生物，可列舉將胺基酸變異人工導入至恆定區部分而得之抗體、改變恆定區的結構域的構成而得之抗體、每1分子持有2個以上Fc之形式的抗體、僅由重鏈或僅由輕鏈所構成之抗體、改變醣鏈之抗體、雙特異性抗體、與抗體或抗體的片段化合物或抗體以外之蛋白質進行結合而得之抗體共軛物、抗體酵素、奈米抗體、串聯scFv、雙特異性串聯scFv、雙價抗體(diabody)、VHH等。另外，在本發明中，在僅提及「抗體」之情況，在沒有另行載明之前提下，係視為亦包含抗體的片段及/或衍生物。

本發明之抗體可為單株抗體，亦可為多株抗體，較佳為單株抗體。所謂單株抗體，古典上係指從源自於單一的抗體產生細胞之殖株所獲得之抗體分子，其係指包含由特定的胺基酸序列所組成之VH及VL的組合之單一種類的抗體分子。單株抗體亦能夠獲得具有編碼出該抗體的蛋白質的胺基酸之基因序列之核酸分子，亦能夠使用該種核酸分子以基因工程製作抗體。此外，使用H鏈、L鏈、該等的可變區或CDR序列等基因信息施行用於提升抗體的結合性或特異性之改變等，或藉由從小鼠等動物的抗體改變成人類型抗體而製作適合用於治療劑之結構的抗體，皆為本領域中之熟習該項技術者所熟知之技術。此外，亦能夠藉由使用經導入人類抗體基因之基因轉殖動物作為抗原致敏動物，而取得人類的單株抗體。除此以外，作為不需要對動物進行致敏之方法，只要是熟習該項技術者，亦可適宜施行使用表現人類抗體的抗原結合區域或其一部分之噬菌體庫(人類抗體噬菌體展示技術)，取得與所對應之抗原進行特異性結合之抗體或由特定的胺基酸序列所組成之噬菌體殖株，由其信息製作人類抗體之技術(參照例如Keio J. Med., (2011), 60:37-46的綜論等)。此外，在設計投予至人類以外之動物之抗體之情況，只要是熟習該項技術者，便能夠與人類化技術同樣地，適宜使用CDR或可變區的胺基酸序列信息來進行設計。

所謂抗體的特異性，係指抗體對某種抗原顯示出較高的抗原抗體反應。關於抗原抗體反應的測定，只要是熟習該項技術者，便能夠適宜選擇固相或液相系統中之結合測定來施行。作為該種方法，可列舉酵素結合免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay：ELISA)、酵素免疫測定法(enzyme immunoassay：EIA)、表面電漿共振法(surface plasmon resonance：SPR)、螢光共振能量移動法(fluorescence resonance energy transfer：FRET)、發光共振能量移動法(luminescence resonance energy transfer：LRET)等，但並不限定於該等。此外，在測定該種抗原抗體結合時，亦能夠將抗體及/或抗原以酵素、螢光物質、發光物質、放射性同位素等施行標識，並使用適合該經標識之物質的物理及/或化學特性之測定方法來檢測抗原抗體反應。

・向gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處之特異性結合：本發明之抗體係特異性結合至gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處。在本發明中，「gpNMB」(glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B)(別名：osteoactivin、DC-HIL)為前述之1次跨膜型醣蛋白質。針對細節，參照前述各文獻(特定而言，非專利文獻20等)。

分別將人類gpNMB(同型a)的全長蛋白質的胺基酸序列示於SEQ ID NO：209，將編碼出該蛋白質之基因的核酸序列示於SEQ ID NO：210。分別將小鼠gpNMB的全長蛋白質的胺基酸序列示於SEQ ID NO：211，將編碼出該蛋白質之基因的核酸序列示於SEQ ID NO：212。分別將大鼠gpNMB的全長蛋白質的胺基酸序列示於SEQ ID NO：213，將編碼出該蛋白質之基因的核酸序列示於SEQ ID NO：214。此外，將人類gpNMB(同型a)及小鼠gpNMB的胺基酸序列的比對示於圖1。

gpNMB的PKD(Polycystic Kidney Disease homology)結構域為以由3條鏈所組成之β片層及由4條鏈所組成之β片層進行摺疊之方式形成β三明治結構之結構域。其係屬於多囊性腎病的成因基因之多囊蛋白1(polycystin-1)所具有之特徵性結構，故命名為PKD結構域(非專利文獻26)。根據一態樣，在SEQ ID NO：209所示之人類gpNMB及SEQ ID NO：211所示之小鼠gpNMB之情況，各胺基酸殘基第256～319位的區域係相當於PKD結構域。根據一態樣，作為PKD結構域，較佳為胺基酸殘基第256～316位的區域，其中，較佳為第257～316位的區域，尤佳為第268～316位的區域，更佳為第270～316位的區域，更佳為第282～316位的區域，特佳為第287～316位的區域。根據一態樣，作為PKD結構域，較佳為胺基酸殘基第257～319位的區域，尤佳為第257～316位的區域，更佳為第257～301位的區域。根據一態樣，作為PKD結構域，特佳為胺基酸殘基第287～301位的區域。另外，圖1中，作為人類gpNMB及小鼠gpNMB的各PKD結構域之例，將胺基酸殘基第256～319位的區域以虛線圍住來表示。

gpNMB的PMEL-CAF樣(PMEL Core Amyloid Fragment-like)結構域係如前述，為與相同家族蛋白質的PMEL中之CAF區域具相似性之區域，在PMEL蛋白質中，其係誘導類澱粉蛋白樣的凝集體的形成之區域。由於在鄰接之PKD區域存在許多N型醣鏈結合部位，gpNMB的PMEL-CAF樣結構域被認為會防止凝集形成(非專利文獻67)。根據一態樣，在SEQ ID NO：209所示之人類gpNMB及SEQ ID NO：211所示之小鼠gpNMB之情況，各胺基酸殘基第172～246位的區域係相當於PMEL-CAF樣結構域。在該等之中，作為PMEL-CAF樣結構域，較佳為胺基酸殘基第178～228位的區域，更佳為胺基酸殘基第186～218位的區域。另外，圖1中，作為人類gpNMB及小鼠gpNMB的各PMEL-CAF樣結構域之例，將胺基酸殘基第172～246位的區域以實線圍住來表示。

在本發明中，所謂「gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域」，係意味除了以上所定義之PMEL-CAF樣結構域及PKD結構域以外，亦包含介於PMEL-CAF樣結構域與PKD結構域之間之區域之區域。根據一態樣，在SEQ ID NO：209所示之人類gpNMB及SEQ ID NO：211所示之小鼠gpNMB之情況，各胺基酸殘基第172～319位的區域係相當於橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域。

本發明之抗體只要特異性結合至任意脊椎動物的gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處即可，若考慮到人類醫藥用途，則較佳係至少特異性結合至SEQ ID NO：209所示之人類gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處。此外，從評估對疾病模型小鼠或疾病模型大鼠中之內因性gpNMB之效果之觀點而言，本發明之抗體更佳係除了人類gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處以外，亦特異性結合至SEQ ID NO：211所示之小鼠gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處。另外，在本發明中，所謂抗體「特異性」結合至gpNMB，係意味相對於對gpNMB以外之蛋白質(例如白蛋白)之結合而言，gpNMB結合強度為10倍以上，較佳為100倍以上，更佳為1000倍以上。此外，前述所謂「橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域」，係PMEL-CAF樣結構域、PKD結構域及PMEL-CAF樣結構域與PKD結構域之間之區域。

在本發明之抗體特異性結合至人類gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處之情況，其抗原決定位並無特別限制。惟，本發明之抗體較佳係結合至PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域的至少1處以上，更佳係特異性結合至SEQ ID NO：209所示之人類gpNMB的包含PKD結構域的K257及/或D258的胺基酸殘基之區域、包含PKD結構域的H268及/或D269的胺基酸殘基之區域、包含PKD結構域的K282的胺基酸殘基之區域、包含PKD結構域的D287及/或H301的胺基酸殘基之區域、包含PKD結構域的K316的胺基酸殘基之區域、包含PMEL-CAF樣結構域的K186的胺基酸殘基之區域、包含PMEL-CAF樣結構域的R214及/或R215的胺基酸殘基之區域以及包含PMEL-CAF樣結構域的H216及/或R218的胺基酸殘基之區域中之1個或2個以上區域。在該等之中，本發明之抗體較佳係至少特異性結合至SEQ ID NO：209所示之人類gpNMB的包含D287及/或H301的胺基酸殘基之區域以及包含R214及/或R215的胺基酸殘基之區域中之一者或兩者，除了此等區域以外，更佳係亦進一步特異性結合至包含K257及/或D258的胺基酸殘基之區域、包含H268及/或D269的胺基酸殘基之區域、包含K282的胺基酸殘基之區域、包含K316的胺基酸殘基之區域、包含K186的胺基酸殘基之區域以及包含H216及/或R218的胺基酸殘基之區域中之1個或2個以上區域。

本發明之抗體對gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域之結合強度並無特別限定，在使用重組gpNMB之抗原ELISA及/或使用表現gpNMB之細胞之細胞ELISA中所測定出之對gpNMB的PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之50%效果濃度(EC ₅₀)通常較佳為1× 10 ^-7M以下，或1×10 ^-8M以下，或1×10 ^-9M以下。另外，在本說明書中，所謂抗體的「50%效果濃度」(EC ₅₀)，係意味顯示出該抗體結合至抗原之最大結合親和性的50%的結合親和性之抗體濃度。作為經由使用重組gpNMB之抗原ELISA及/或使用表現gpNMB之細胞之細胞ELISA之EC ₅₀的具體測定條件，可列舉後述實施例中所採用之條件。

本發明之抗體係除了gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域以外，亦可進一步結合至其他區域內之1處或2處以上。作為除了gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域以外，本發明之抗體亦可結合之胺基酸部位，並無限制，可列舉例如SEQ ID NO：209所示之人類gpNMB的E385。

・抗體的活性：根據一態樣，本發明之抗體較佳係具有以下所說明之多種活性。

本發明之抗體較佳係具有結合至小神經膠質細胞之活性。在該等之中，已有gpNMB會在就承受壓力而將有毒性之蛋白質或不需要的蛋白質進行分解之機能而言變得機能異常之機能異常小神經膠質細胞中進行表現之報導(非專利文獻43)，而本發明之抗體較佳係具有結合至在該種機能異常小神經膠質細胞的細胞膜上進行表現之gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處之活性。

此外，本發明之抗體較佳係具有對小神經膠質細胞之多種活性。具體而言，本發明之抗體較佳係具有以下所列舉之活性中之至少1者或2者以上。 (a)減低或去除機能異常小神經膠質細胞之活性。 (b)促進正常小神經膠質細胞所引發之機能異常小神經膠質細胞的吞噬作用之活性，或將機能異常小神經膠質細胞的機能異常予以正常化之活性。 (c)使機能異常小神經膠質細胞周邊的正常小神經膠質細胞的作用增大之活性。

本發明之抗體所引發之前述(a)機能異常小神經膠質細胞的減低/去除活性，(b)促進正常小神經膠質細胞所引發之機能異常小神經膠質細胞的吞噬作用之活性，或將機能異常小神經膠質細胞的機能異常予以正常化之活性，及(c)機能異常小神經膠質細胞周邊的正常小神經膠質細胞的作用的增強活性之關係並不明。但是，雖然未必受理論所束縛，但可推測如下。即，經推測抗gpNMB抗體結合至機能異常小神經膠質細胞，識別該等並具有吞噬活性之正常機能的小神經膠質細胞吞噬去除機能異常小神經膠質細胞，正常的小神經膠質細胞在經去除之空間增生，藉此促進腦內環境的正常化，誘導神經細胞的毒性蛋白去除或突觸數量恢復，或者，抗gpNMB抗體促進小神經膠質細胞的吞噬活化或增殖，機能異常小神經膠質細胞的吞噬發生亢進，改善腦內環境，誘導神經細胞的毒性蛋白去除或突觸數量恢復。

此外，本發明之抗體較佳係具有改善或恢復腦內環境或神經細胞機能之活性。具體而言，本發明之抗體較佳係具有以下所列舉之活性中之至少一者或兩者。 (x)去除類澱粉蛋白β寡聚物之活性。 (y)使突觸數量增加之活性。

此外，本發明之抗體較佳係具有(z)治療或預防神經退化性疾病之活性。在該等之中，本發明之抗體較佳係具有治療或預防中樞神經退化性疾病之活性。具體而言，本發明之抗體較佳係具有治療或預防以下所列舉之神經退化性疾病之活性。

被歸類為神經退化性疾病之疾病可分成Tau蛋白病變及其以外之神經退化性疾病。若各自列舉具體例，則如下。

作為Tau蛋白病變(Tau蛋白蓄積而發生神經退化之疾病)的具體例，可列舉阿茲海默症、額顳葉退化症(FTLD-Tau)、額顳型失智症(FTD)、原發性年齡增長相關聯性Tau蛋白病變(PART)、慢性外傷性腦症(CTE)、匹克氏症、大腦皮質基底核退化症(CBD或CBS)、進行性核上性麻痺(PSP)、球狀神經膠質性Tau蛋白病變(GGT)、嗜銀顆粒性失智症(AGD)(嗜銀性顆粒病)、年齡增長相關聯性Tau星形膠質細胞病變(ARTAG)、家族性英國失智症(FBD)、家族性丹麥失智症(FDD)、FTDP17、伴隨失智症之多系統Tau蛋白病變(MSTD)、神經原纖維變化型失智症、伴隨鈣化之瀰漫性神經原纖維變化症(DNTC)、伴隨球狀神經膠質封入體之白質Tau蛋白病變(WMT-GGI)等。

作為Tau蛋白病變以外之神經退化性疾病的具體例，可列舉帕金森氏症(αSyn的蓄積)、亨丁頓氏症(變異型亨丁頓蛋白的蓄積)、脊髓小腦退化症(聚麩胺酸蛋白質的蓄積)、遺傳性脊髓小腦失調症(聚麩胺酸蛋白質的蓄積)、球脊髓性肌肉萎縮症(聚麩胺酸蛋白質的蓄積)、路易氏體型失智症(αSyn蓄積)、庫賈氏症(異常普立昂蛋白質蓄積)、肌肉萎縮性側索硬化症(ALS)(SOD或TDP43的蓄積)、額顳葉退化症(FTLD-TDP、FTLD-FUS：TDP43或FUS的蓄積)等。

根據後述實施例，將本發明之一態樣所涉及之抗體投予至高齡阿茲海默症(AD)模型小鼠，並將其腦切片藉由免疫組織染色進行評估，藉此對該抗體的效果進行解析。其結果，已明確得知藉由投予本抗體，AD模型小鼠的腦內之gpNMB陽性小神經膠質細胞減低。更令人驚訝的是，已明確得知被認為是在AD模型小鼠腦內之類澱粉蛋白β之中毒性最強之Aβ寡聚物從神經細胞中被去除。更令人驚訝的是，已確認藉由投予本發明之抗體，AD模型小鼠的腦內之神經細胞的突觸數量恢復至正常的水平。更令人驚訝的是，在使用本發明者等人新穎地構築之APP/ Tau-Tg(AD模型小鼠)之莫里斯水迷宫試驗中，顯示出使認知機能恢復。

另外，本發明之抗體所具有之前述各種活性可在生體內(in vivo)加以發揮，亦可在生體外(ex vivo)加以發揮，亦可在生體內(in vivo)及生體外(ex vivo)加以發揮。此外，針對生體內(in vivo)及生體外(ex vivo)中之任何者，只要在任意的對象中加以發揮即可，較佳係至少在脊椎動物中加以發揮，更佳係在至少哺乳動物中加以發揮，特佳係在人類或非人類動物中加以發揮。

・抗體各鏈各區域的胺基酸序列及核酸序列：本發明之抗體在具備前述之向gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處之特異性結合活性之前提下，其胺基酸序列並無特別限定。惟，本發明之抗體較佳係具有特定的胺基酸序列作為各CDR序列。具體而言係如下。另外，在本說明書中，胺基酸序列的所謂「同一性」(identity)，係意味一致的胺基酸殘基的比例，所謂「相似性」(similarity)，係意味一致或類似的胺基酸殘基的比例。胺基酸序列的相似性及同一性可藉由例如BLAST法(NCBI的PBLAST的預設條件)予以決定。此外，例如在表述「80%以上的相似性」時，顯然包含「80%以上的同一性」之情況。

在此處，所謂「類似的胺基酸殘基」，係意味具有持有同樣的化學特質(例如電荷或疏水性)之側鏈之胺基酸殘基。作為類似的胺基酸殘基，可列舉例如以下組合。 (1)具有脂肪族側鏈之胺基酸殘基：甘胺酸(Gly或G)、丙胺酸(Ala或A)、纈胺酸(Val或V)、白胺酸(Leu或L)及異白胺酸(Ile或I)殘基。 (2)具有脂肪族羥基側鏈之胺基酸殘基：絲胺酸(Ser或S)及蘇胺酸(Thr或T)殘基。 (3)具有含醯胺之側鏈之胺基酸殘基：天冬醯胺酸(Asn或N)及麩醯胺酸(Gln或Q)殘基。 (4)具有芳香族側鏈之胺基酸殘基：苯基丙胺酸(Phe或F)、酪胺酸(Tyr或Y)及色胺酸(Trp或W)殘基。 (5)具有鹼性側鏈之胺基酸殘基：離胺酸(Lys或K)、精胺酸(Arg或R)及組胺酸(His或H)殘基。 (6)具有酸性側鏈之胺基酸殘基：天冬胺酸(Asp或D)及麩胺酸(Glu或E)殘基。 (7)具有含硫側鏈之胺基酸基：半胱胺酸(Cys或C)及甲硫胺酸(Met或M)殘基。再者，(1)與甲硫胺酸(Met或M)的組合及(4)與組胺酸(His或H)殘基的組合亦被視為類似的胺基酸殘基。

此外，在參考生殖系(germline)的序列而存在相應的變異體之情況，有時能夠不拘於類似性而進行取代。在參考生殖系而得之變異體中，包含取代、缺失或附加。關於取代，包含亦能夠取代成脯胺酸(Pro或P)或甘胺酸(Gly或G)之類的經推定會對經側鏈的方向帶來影響之胺基酸之情況。

作為本發明之抗體之一態樣，可列舉包含具有以下(1)～(12)的CDR-H1～H3序列之重鏈可變區之抗體。

(1)作為CDR-H1，SEQ ID NO：1所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：1所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：3所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：3所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：3所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：5所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：5所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：5所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、75.0%以上、83.3%以上或91.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(2)作為CDR-H1，SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(3)作為CDR-H1，SEQ ID NO：33所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：33所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：33所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：35所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：35所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：35所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：37所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：37所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：37所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(4)作為CDR-H1，SEQ ID NO：49所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：49所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：49所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：51所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：51所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：51所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：53所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：53所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：53所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、68.7%以上、75.0%以上、81.2%以上、87.5%以上或93.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(5)作為CDR-H1，SEQ ID NO：65所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：65所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：65所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：67所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：67所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：67所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：69所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：69所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處或5處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：69所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、78.5%以上、85.7%以上或92.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(6)作為CDR-H1，SEQ ID NO：81所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：81所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：81所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：83所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：83所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：83所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：85所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：85所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：85所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(7)作為CDR-H1，SEQ ID NO：97所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：97所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：97所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：99所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：99所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：99所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：101所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：101所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：101所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(8)作為CDR-H1，SEQ ID NO：113所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：113所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：113所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：115所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：115所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：115所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：117所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：117所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：117所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(9)作為CDR-H1，SEQ ID NO：129所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：129所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：129所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：131所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：131所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：131所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：133所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：133所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：133所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(10)作為CDR-H1，SEQ ID NO：145所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：145所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：145所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：147所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：147所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：147所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：149所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：149所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：149所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(11)作為CDR-H1，SEQ ID NO：161所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：161所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：161所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：163所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：163所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：163所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：165所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：165所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：165所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(12)作為CDR-H1，SEQ ID NO：287所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：287所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：287所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：289所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：289所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：289所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：291所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：291所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：291所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

另外，如後述實施例17所示，本發明者等人係針對人類化抗gpNMB抗體H1L1(殖株GPN06-1)，藉由丙胺酸掃描檢討各CDR的各胺基酸殘基在其結合維持中之重要性。其結果，鑑定出人類化抗gpNMB抗體H1L1的重鏈可變區(SEQ ID NO：29)的CDR-H1(SEQ ID NO：17)中之第32位的天冬醯胺酸及第33位的色胺酸；CDR-H2(SEQ ID NO：19)中之第55位的天冬胺酸、第57位的苯基丙胺酸及第58位的蘇胺酸；CDR-H3(SEQ ID NO：21)中之第98位的精胺酸、第100位的甘胺酸及第109位的甘胺酸對結合維持而言實屬重要。另一方面，針對上述以外之各CDR的胺基酸殘基，經鑑定對其結合維持而言幾乎沒有影響。由此等見解，作為本發明之抗體之一態樣，亦可列舉包含具有以下(13)的CDR-H1～H3序列之重鏈可變區之抗體(另外，以下胺基酸位置係以人類化抗gpNMB抗體H1L1的重鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：29)為基準來表示)。 (13)作為CDR-H1，SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列中，第32位的天冬醯胺酸及第33位的色胺酸以外之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列中，第55位的天冬胺酸、第57位的苯基丙胺酸及第58位的蘇胺酸以外之任1處、2處、3處、4處或5處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列中，第98位的精胺酸、第100位的甘胺酸及第109位的甘胺酸以外之任1處、2處、3處、4處、5處、6處、7處、8處、9處、10處、11處或12處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列。

作為本發明之抗體之一態樣，可列舉包含具有以下(1)～(12)的CDR-L1～L3序列之輕鏈可變區之抗體。

(1)作為CDR-L1，SEQ ID NO：7所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：7所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：7所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：9所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：9所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：9所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：11所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：11所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：11所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(2)作為CDR-L1，SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(3)作為CDR-L1，SEQ ID NO：39所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：39所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：39所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：41所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：41所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：41所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：43所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：43所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：43所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(4)作為CDR-L1，SEQ ID NO：55所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：55所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：55所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：57所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：57所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：57所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：59所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：59所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：59所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(5)作為CDR-L1，SEQ ID NO：71所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：71所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：71所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：73所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：73所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：73所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：75所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：75所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：75所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(6)作為CDR-L1，SEQ ID NO：87所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：87所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：87所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：89所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：89所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：89所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：91所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：91所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：91所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(7)作為CDR-L1，SEQ ID NO：103所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：103所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：103所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：105所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：105所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：105所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：107所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：107所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：107所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(8)作為CDR-L1，SEQ ID NO：119所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：119所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：119所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：121所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：121所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：121所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：123所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：123所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：123所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(9)作為CDR-L1，SEQ ID NO：135所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：135所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：135所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：137所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：137所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：137所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：139所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：139所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：139所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(10)作為CDR-L1，SEQ ID NO：151所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：151所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：151所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：153所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：153所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：153所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：155所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：155所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：155所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(11)作為CDR-L1，SEQ ID NO：167所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：167所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：167所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：169所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：169所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：169所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：171所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：171所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：171所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(12)作為CDR-L1，SEQ ID NO：293所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：293所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：293所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：295所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：295所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：295所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：297所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：297所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：297所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

另外，如後述實施例17所示，本發明者等人係針對人類化抗gpNMB抗體H1L1(殖株GPN06-1)，藉由丙胺酸掃描檢討各CDR的各胺基酸殘基在其結合維持中之重要性。其結果，鑑定出人類化抗gpNMB抗體H1L1的輕鏈可變區(SEQ ID NO：31)的CDR-L1(SEQ ID NO：23)中之第29位的異白胺酸及第31位的酪胺酸；CDR-L2(SEQ ID NO：25)中之第50位的蘇胺酸；CDR-L3(SEQ ID NO：27)中之第88位的組胺酸、第89位的麩醯胺酸、第90位的色胺酸、第92位的絲胺酸及第93位的酪胺酸對結合維持而言實屬重要。另一方面，針對上述以外之各CDR的胺基酸殘基，經鑑定對其結合維持而言幾乎沒有影響。由此等見解，作為本發明之抗體之一態樣，亦可列舉包含具有以下(13)的CDR-L1～L3序列之輕鏈可變區之抗體(另外，以下胺基酸位置係以人類化抗gpNMB抗體H1L1的輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：31)為基準來表示)。 (13)作為CDR-L1，SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列中，第29位的異白胺酸及第31位的酪胺酸以外之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列中，第50位的蘇胺酸以外之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列中，第88位的組胺酸、第89位的麩醯胺酸、第90位的色胺酸、第92位的絲胺酸及第93位的酪胺酸以外之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列。

作為本發明之抗體之一態樣，可列舉將具有前述任一種CDR-H1～H3序列之重鏈可變區及具有前述任一種CDR-L1～L3序列之輕鏈可變區各自進行組合而得之抗體。

作為本發明之抗體之一態樣，可列舉具有以下(a)～(c)中之任一種胺基酸序列作為重鏈可變區的序列之抗體。

(a)選自SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：173及SEQ ID NO：299中之任1種胺基酸序列。

(b)與前述(a)的胺基酸序列具有至少60%以上，或65%以上，或70%以上，或75%以上，或80%以上，或85%以上，或90%以上，或95%以上，或96%以上，或97%以上，或98%以上，或99%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列。

(c)在前述(a)的胺基酸序列中，1～12(較佳為1～11，更佳為1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、1～2或1)個胺基酸殘基發生取代、缺失或附加而得之胺基酸序列。

作為本發明之抗體之一態樣，可列舉具有以下(a)～(c)中之任一者作為輕鏈可變區的序列之抗體。

(a)選自SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：175及SEQ ID NO：301中之任1種胺基酸序列。

(c)在前述(a)的胺基酸序列中，1～10(較佳為1～9，更佳為1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、1～2或1)個胺基酸殘基發生取代、缺失或附加而得之胺基酸序列。

作為本發明之抗體之一態樣，可列舉將前述任一種重鏈可變區及前述任一種輕鏈可變區各自進行組合而得之抗體。

另外，作為鑑定抗體中之CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3的各序列之方法，可列舉例如Kabat法(NIH Publication, (1991),No. 91-3242)或Chothia法(J. Mol. Biol., (1997), 273[4]:927-48)。此等方法對本領域的熟習該項技術者而言屬技術常識，亦能夠由例如Dr. Andrew C.R. Martin’s Group的網際網路首頁(http://www.bioinf.org.uk/abs/)得知概要。另外，本發明中之CDR係以Kabat的CDR之形式來加以記載。

屬於本發明之抗體之免疫球蛋白的重鏈可變區及輕鏈可變區的各框架序列較佳為脊椎動物的免疫球蛋白的各類別中之框架序列。特定而言，較佳為人類或者包含小鼠或大鼠之非人類動物的免疫球蛋白的各類別中之框架序列。

藉由在以上重鏈及輕鏈的各CDR及/或各鏈可變區的胺基酸序列中適宜組合人類或者包含小鼠或大鼠之非人類動物的抗體的重鏈及輕鏈的各框架區及/或各恆定區的胺基酸序列，只要是熟習該項技術者，便能夠設計本發明之抗gpNMB特異性抗體。特定而言，藉由使用人類抗體的重鏈及輕鏈的各框架區及/或各恆定區的胺基酸序列，便可製成人類化抗gpNMB特異性抗體。人類化抗體的重鏈及輕鏈的各框架區及/或各恆定區的胺基酸序列能夠選自例如人類的IgG、IgA、IgM、IgE、IgD的各類別或其變異體。

本發明之抗體較佳為IgG類別或其變異體，更佳為人類IgG類別或其變異體、人類IgG4次類別或其變異體或者人類IgG1次類別或該等的變異體。在一例中，依據Kabat的系統，安定化IgG4恆定區在鉸鏈區的位置241包含脯胺酸。依據EU編號方式(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, (1969), 63[1]:78-85)、免疫學上關注的蛋白質的序列(Washington DC United States Department of Health and Human Services, 2001及NIH Publication, (1991), No. 91-3242)，此位置係對應於鉸鏈區的位置228。在人類IgG4中，此殘基一般為絲胺酸，可藉由將絲胺酸取代成脯胺酸而誘導安定化。在一例中，可在IgG1的恆定區中組入N297A變異而盡可能地抑止向Fc受體之結合及/或固定補體之能力。

・競爭性結合：作為本發明之一態樣，亦可列舉對於向gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處之結合本身，與本發明之抗體進行競爭性結合之抗體。該種進行競爭性結合之抗體亦包含在本發明的範圍中。在本發明中，所謂「競爭性結合」，係意味複數種單株抗體與抗原共存時，一種抗體向抗原之結合受到另一種抗體向抗原之結合所阻礙之現象。一般而言，在相對於一定量(濃度)的單株抗體而言變更另一種單株抗體的量(濃度)並予以加入之情況，能夠藉由測定前者的一定量的單株抗體向抗原之結合量降低之添加量(濃度)而予以測定。其阻礙的程度可以IC ₅₀或Ki之值來表示。所謂與本發明之抗體進行競爭性結合之單株抗體，係指例如以10nM使用本發明之抗體檢測向gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處之競爭性抗原抗體結合時，IC ₅₀通常為1000nM以下，其中尤其是100nM以下，進而10nM以下之抗體。在施行競爭性結合的測定之情況，亦能夠藉由將所使用之抗體以酵素、螢光物質、發光物質、放射性同位素等施行標識並使用適合該經標識之物質的物理及/或化學特性之測定方法進行檢測而施行該測定，亦可使用以表面電漿共振法(surface plasmon resonance：SPR)或生物層干涉法(bio-layer interferometry：BLI)為首之生物感測器。

[抗gpNMB抗體的製造方法] 本發明中之抗體可使用熟習該項技術者所周知的技法獲得。本發明中之抗體為多株抗體或單株抗體(Nature, (1983), 305(5934): 537-40)。例如，關於多株抗體，可將具有SEQ ID NO：209所示之胺基酸序列之人類gpNMB蛋白質或具有其一部分胺基酸序列之gpNMB部分胜肽(例如包含由胺基酸殘基256～319所組成之PKD結構域之胜肽等)作為抗原，或者，使用編碼出該種人類gpNMB蛋白質或gpNMB部分胜肽的胺基酸序列之表現抗原之多核苷酸等，投予至哺乳動物的肌肉內或皮下，在動物體內使抗原進行表現而對動物進行致敏，藉此從該動物的血清等中加以回收。此外，在使用胜肽作為抗原之情況，可使用在結合至BSA或KLH等攜載蛋白質或聚離胺酸等之形態下之抗原。

關於本發明中之單株抗體，如前述，可將人類gpNMB蛋白質或gpNMB部分胜肽或者編碼出該種人類gpNMB蛋白質或gpNMB部分胜肽之表現抗原之多核苷酸等投予至哺乳動物而進行致敏，從該哺乳動物中取出免疫細胞並與骨髓瘤細胞等進行細胞融合，將藉此所獲得之融合瘤進行選殖，從該培養物中加以回收。該種單株抗體的取得方法(Nature, (1992), 356[6365]:152-4)或細胞融合的手法(Nature, (1975), 256[5517]:495-7)已被報導並普及，可藉由投予免疫賦活物質而進一步提高取得效率(Cancer Gene Ther., (2007), 14[11]:904-17)。作為藉由該種方法所獲得之單株抗體，並無限定，可列舉以下者。

・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：13的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：15的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN05-1)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：29的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：31的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN06-1)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN07-1)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：61的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：63的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN11-10)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：77的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：79的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN15-2)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：93的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN15-3)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：109的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：111的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN18-4)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：125的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：127的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN18-1)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：141的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：143的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN18-2)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：157的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：159的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN18-6)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：173的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：175的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN18-7)。・具有下列者之抗體：具有SEQ ID NO：299的胺基酸序列之重鏈可變區，及具有SEQ ID NO：301的胺基酸序列之輕鏈可變區(GPN09-1)。

此外，作為另一種製造方法，係由產生所欲取得之抗體之融合瘤或藉由人類抗體噬菌體展示技術所獲得之噬菌體殖株等，製作編碼出抗體的重鏈及/或輕鏈之基因，更詳細而言，編碼出免疫球蛋白的重鏈及/或輕鏈之核酸分子。在此處，亦可藉由將該種核酸分子導入各種載體或質體中，而製作包含該核酸分子之載體或質體。接著，以前述核酸分子、載體或質體將宿主細胞進行轉形。作為宿主細胞，可列舉例如哺乳動物細胞、昆蟲細胞、酵母細胞或植物細胞等真核細胞，或者細菌細胞。其次，將此經轉形之宿主細胞在用於產生本發明之抗gpNMB特異性抗體之適切的條件下進行培養。在此處，亦可視需要將所獲得之本發明之抗gpNMB特異性抗體從宿主細胞中進行單離。用於此等程序之各種手法皆為熟習該項技術者所周知者。

在此處，只要是熟習該項技術者，便能夠使用公知的技術實施針對編碼出免疫球蛋白的重鏈及/或輕鏈之基因，施行用於導入所期望的性狀之基因改變，或者使用免疫球蛋白的重鏈及/或輕鏈的可變區或CDR區域的結構信息，藉此製作抗體嵌合蛋白質、低分子抗體、支架抗體等。此外，以提升抗體的性能或迴避副作用為目的，亦可藉由熟習該項技術者所熟知之技術適宜施行對抗體的恆定區的結構引入改變，或施行在醣鏈的部分之改變。

[醫藥組成物] 本發明之抗gpNMB特異性抗體較佳係使用作為醫藥組成物的活性成分。即，本發明之一態樣係關於包含本發明之抗gpNMB特異性抗體作為活性成分之醫藥組成物(以下適宜總稱為「本發明之第1醫藥組成物」)。

如前述，在將本發明之抗gpNMB特異性抗體投予至人類等對象之情況，可期待以下活性(a)～(c)及(w)～(z)中之1種或2種以上活性。從而，本發明之第1醫藥組成物較佳為以下列活性(a)～(c)及(w)～(z)中之1種或2種以上活性為目的之醫藥組成物。 (a)減低或去除機能異常小神經膠質細胞之活性。 (b)促進正常小神經膠質細胞所引發之機能異常小神經膠質細胞的吞噬作用之活性，或將機能異常小神經膠質細胞予以正常化之活性。 (c)使機能異常小神經膠質細胞周邊的正常小神經膠質細胞的作用增大之活性。 (w)使認知機能恢復之活性 (x)去除類澱粉蛋白β寡聚物之活性。 (y)使突觸數量增加之活性。 (z)治療或預防神經退化性疾病之活性。

在該等之中，如前述，作為一態樣所涉及之本發明之抗gpNMB特異性抗體具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之結果，經推測會發揮前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性。從而，在本發明之抗gpNMB特異性抗體為具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之抗體之情況，本發明之第1醫藥組成物較佳為以前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性為目的之醫藥組成物。特定而言，在前述活性(a)～(c)中，較佳係具有(a)。

此外，基於本文的實施例的結果，作為前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性的結果，發揮前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性之或然性極高，該種見解為本發明者等人所發現之新見解。基於本見解，即便不是本發明之抗gpNMB特異性抗體，只要使用具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之任意的藥劑(例如，可為低分子化合物，亦可為抗體等高分子醫藥)，即能夠調製發揮前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性之醫藥組成物。從而，本發明之一態樣係關於包含具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之任意的藥劑(例如，可為低分子化合物，亦可為抗體等高分子醫藥)作為活性成分，且以前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性為目的之醫藥組成物(以下適宜總稱為「本發明之第2醫藥組成物」)。特定而言，在前述活性(a)～(c)中，較佳係具有(a)。

以下，本發明之第1醫藥組成物及本發明之第2醫藥組成物(將此等適宜總稱為「本發明之醫藥組成物」)的細節並無限定，例如，係如下。

本發明之醫藥組成物亦可製成除了活性成分(在本發明之第1醫藥組成物之情況，為本發明之抗gpNMB特異性抗體，在本發明之第2醫藥組成物之情況，為具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之任意的藥劑)以外，尚含有醫藥上可容許的擔體及/或其他添加劑之醫藥組成物的形態而加以製劑化。使用醫藥上可容許的擔體及/或其他添加劑之製劑能夠藉由例如University of the Sciences in Philadelphia, “Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th EDITION”, Lippincott Williams & Wilkins, (2000)所記載之方法予以實施。

作為此種治療劑或預防劑之一形態，係以藉由溶解、懸浮或乳化於無菌的水性液或油性液中所調製而得之液劑或凍結乾燥劑之形式提供。作為此種溶劑或溶解液，就水性液而言，可列舉注射用蒸餾水、生理食鹽水等，除此以外，在添加滲透壓調節劑(例如D-葡萄糖、D-山梨糖醇、D-甘露糖醇、氯化鈉等)之情況，有時亦併用適當的溶解輔助劑，例如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子性界面活性劑(例如聚山梨糖醇酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油50)等。此外，作為溶劑或溶解液，有時亦使用油性液，作為該油性液之例，可列舉芝麻油、大豆油等，有時亦併用安息香酸苄酯、苄醇等作為溶解輔助劑。在此種製劑中，有時係適宜使用緩衝劑(例如磷酸鹽類緩衝劑、醋酸鹽類緩衝劑)、無痛化劑(例如氯化苄烷銨(benzalkonium chloride)、鹽酸普魯卡因(procaine hydrochloride)等)、安定劑(例如人類血清白蛋白、聚乙二醇等)、保存劑(例如抗壞血酸、異抗壞血酸及該等的鹽等)、著色劑(例如銅葉綠素、β-胡蘿蔔素、紅色2號、藍色1號等)、防腐劑(例如對羥基安息香酸酯、苯酚、氯化苄乙氧銨(benzethonium chloride)、氯化苄烷銨等)、增黏劑(例如羥丙基纖維素、羧甲基纖維素及該等的鹽等)、安定化劑(例如人血清白蛋白、甘露糖醇、山梨糖醇等)、矯臭劑(例如薄荷醇、柑橘香料等)等添加劑。

此外，作為另一種治療劑或預防劑的形態，可列舉散劑、錠劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、口含錠劑等固形劑。在以經口用製劑之形式進行投予之固形劑之情況，作為添加劑，係使用賦形劑(例如結晶性纖維素、乳糖、澱粉等)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石等)、黏合劑(例如羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇(macrogol)等)、崩解劑(例如澱粉、羧甲基纖維素鈣等)等。此外，可視需要使用防腐劑(例如苄醇、氯丁醇、對羥基安息香酸甲酯、對羥基安息香酸丙酯等)、抗氧化劑、著色劑、甜味劑等添加劑。作為又另一形態，亦可列舉用於黏膜應用之治療劑或預防劑，在此製劑中，以賦予對黏膜之吸附性、滯留性等為主要目的，有時亦含有黏著劑、黏著增強劑、黏稠劑、黏稠化劑等(例如黏蛋白、瓊脂、明膠、果膠、鹿角菜膠、海藻酸鈉、刺槐豆膠、黃原膠、黃蓍膠、阿拉伯膠、幾丁聚糖、普魯蘭多醣(pullulan)、蠟質澱粉、斯克拉非(Sucralfate)、纖維素及該等的衍生物)作為添加劑。然而，供予生體之治療劑或預防劑的形態及溶劑或添加劑並不限定於此等，只要是熟習該項技術者，即可適宜選擇。

本發明之醫藥組成物係除了活性成分(在本發明之第1醫藥組成物之情況，為本發明之抗gpNMB特異性抗體，在本發明之第2醫藥組成物之情況，為具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之任意的藥劑)以外，亦可包含既存的其他藥物(活性成分)。作為該種既存的其他藥物(活性成分)，並無限制，可列舉各種中樞神經疾病治療藥、神經退化性疾病治療藥、神經機能恢復藥、阿茲海默症治療藥等。作為其具體例，可列舉抗Tau蛋白抗體、抗類澱粉蛋白β抗體、抗CD33抗體、抗信號素4D抗體、抗TNFα抗體、抗分揀蛋白抗體、抗半乳糖特異性凝集素(半乳糖凝集素)3抗體、抗TREM2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2)抗體等。此等可單獨使用一種，亦可併用二種以上。

此外，亦可將本發明之醫藥組成物與既存的其他藥物進行組合，製成套組的形態。作為與本發明之抗gpNMB特異性抗體進行組合之活性成分，亦可列舉針對摻合劑而前述之藥物(活性成分)。作為此等摻合劑或套組的形態中所使用之抗gpNMB特異性抗體以外之藥物的用量，可在用於通常的治療之用量下施行，亦能夠因應狀況而增減。

本發明之醫藥組成物可以改善症狀為目的而非經口地投予。在非經口投予之情況，可製成例如經鼻劑，可選擇液劑、懸浮劑、固形製劑等。此外，作為另一種非經口投予的形態，可製成注射劑，作為注射劑，可選擇皮下注射劑、靜脈注射劑、點滴注射劑、肌肉注射劑、腦室內注射劑或腹腔內注射劑等。此外，作為其他用於非經口投予之製劑，亦可列舉栓劑、舌下劑、經皮劑、經鼻劑以外之經黏膜投予劑等。再者，亦可以含在或塗佈於支架或血管內栓塞劑之態樣進行血管內局部投予。亦能夠視情況以編碼出本抗體之DNA或RNA，甚至產生本抗體之細胞或常駐菌的形態進行投予。

本發明之醫藥組成物的投予量係依患者的年齡、性別、體重、症狀、治療效果、投予方法、處理時間或該醫藥組成物中所含有之活性成分的種類等而有所不同，通常每1位成人每1次可在0.1mg至1g的範圍中，較佳為0.5mg至300mg的範圍中，1週至4週1次，或1個月至6個月1次投予主劑。但是，投予量及投予次數係依多種條件而變動，因而有時在比前述投予量及次數更少的量及次數下亦充分，此外，有時亦需要超過前述範圍之投予量及投予次數。此外，本發明中之治療劑或預防劑係藉由減輕副作用而能夠在較短的投予期中獲得效果或進行長期投予。

[其他] 如前述，在將本發明之抗gpNMB特異性抗體投予至人類等對象之情況，可期待以下活性(a)～(c)及(w)～(z)中之1種或2種以上活性。 (a)減低或去除機能異常小神經膠質細胞之活性。 (b)促進正常小神經膠質細胞所引發之機能異常小神經膠質細胞的吞噬作用之活性，或將機能異常小神經膠質細胞予以正常化之活性。 (c)使機能異常小神經膠質細胞周邊的正常小神經膠質細胞的作用增大之活性。 (w)使認知機能恢復之活性 (x)去除類澱粉蛋白β寡聚物之活性。 (y)使突觸數量增加之活性。 (z)治療或預防神經退化性疾病之活性。

因此，作為本發明之對象，除了前述本發明之醫藥組成物以外，亦可列舉例如以下數種態樣。

即，本發明之一態樣係關於以在對象中發揮前述活性(a)～(c)及(w)～(z)中之1種或2種以上活性為目的之方法，其係將本發明之抗gpNMB特異性抗體的有效量投予至需要該等之對象。在該等之中，在本發明之抗gpNMB特異性抗體為具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之抗體之情況，前述方法較佳為以在對象中發揮前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性為目的之方法。其他細節係如前述。特定而言，在前述活性(a)～(c)中，較佳係至少具有(a)。

此外，本發明之一態樣係關於以在對象中發揮前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性為目的，而將具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之任意的藥劑(例如，可為低分子化合物，亦可為抗體等高分子醫藥)的有效量投予至需要該等之對象之方法。其細節係如前述。特定而言，在前述活性(a)～(c)中，較佳係至少具有(a)。

此外，本發明之一態樣係關於本發明之抗gpNMB特異性抗體，其係使用於在對象中發揮前述活性(a)～(c)及(w)～(z)中之1種或2種以上活性之目的下。在該等之中，在本發明之抗gpNMB特異性抗體為具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之抗體之情況，前述抗體較佳為使用於在對象中發揮前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性之抗體。其他細節係如前述。特定而言，在前述活性(a)～(c)中，較佳係至少具有(a)。

此外，本發明之一態樣係關於具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之任意的藥劑(例如，可為低分子化合物，亦可為抗體等高分子醫藥)，其係使用於在對象中發揮前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性之目的下。其細節係如前述。特定而言，在前述活性(a)～(c)中，較佳係至少具有(a)。

即，本發明之一態樣係關於本發明之抗gpNMB特異性抗體的使用，其係使用在製造以在對象中發揮前述活性(a)～(c)及(w)～(z)中之1種或2種以上活性為目的之醫藥。在該等之中，在本發明之抗gpNMB特異性抗體為具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之抗體之情況，前述醫藥較佳為以在對象中發揮前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性為目的之醫藥。其他細節係如前述。特定而言，在前述活性(a)～(c)中，較佳係至少具有(a)。

此外，本發明之一態樣係關於具有前述活性(a)～(c)中之1種或2種以上活性之任意的藥劑(例如，可為低分子化合物，亦可為抗體等高分子醫藥)的使用，其係使用在製造以在對象中發揮前述活性(w)～(z)中之1種或2種以上活性為目的之醫藥。其細節係如前述。特定而言，在前述活性(a)～(c)中，較佳係至少具有(a)。 [實施例]

以下，按照實施例更詳細地說明本發明。惟，此等實施例終究只是為了說明而方便地示出之例，本發明並不以任何意圖限定於此等實施例。

[標準的操作] ・抗原ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)：將重組可溶性人類或小鼠gpNMB藉由PBS進行稀釋而調整2μg/mL，以50μL/孔添加至96孔盤(Nunc，MaxiSorp)中，於4℃靜置一晩。將此96孔盤以3%BSA/PBS進行阻斷，將所得之物以固定重組可溶性gpNMB之96孔盤之形式使用於ELISA。

將含抗gpNMB抗體之融合瘤培養上清液或3%BSA/PBS溶液以30μL/孔添加至上述固定重組可溶性gpNMB之96孔盤中，於室溫使其進行反應1小時。以洗淨液(TBS-T：Tris buffered saline，0.025%Tween20)洗淨後，以30μL/孔添加將對小鼠IgG的所有同型進行反應之抗體、抗小鼠IgG抗體-ALP共軛物(SBA，1050-04)以3%BSA/PBS稀釋1000倍而得之溶液，於室溫使其進行反應1小時。以100μL/孔添加基質(PNPP(磷酸對硝基苯酯(p-nitrophenyl phosphate))，1mg/mL)溶液，於室溫使其進行反應1小時，算出405～550nm的吸光度。將所獲得之吸光度的值作為結合活性而進行評估。

・細胞ELISA(cell-based ELISA)：將表現gpNMB之細胞接種於經聚離胺酸塗覆之96孔盤，使其黏附後，去除培養上清液，以10%福馬林含有液於室溫固定化10分鐘。然後，去除上清液並以3%BSA/PBS溶液施行阻斷，加以冷藏保存。

去除所獲得之上述細胞固定盤的阻斷液，以30μL/孔添加含抗體之培養基或溶液，於室溫保溫培養1小時～1小時30分鐘左右。然後，以洗淨液(TBS-T)施行2～4次洗淨，添加抗小鼠IgG-HRP標定二級抗體的10000倍稀釋溶液，於室溫保溫培養1小時。然後，以洗淨液(TBS-T)施行2～4次洗淨，添加50μL/孔的基質TMB溶液，於室溫保溫培養30分鐘。然後，以50μL/孔添加1N硫酸而使反應停止，算出450～650nm的吸光度。將所獲得之吸光度的值作為結合活性而進行評估。

[實施例1]小鼠或大鼠單株抗體的製作及篩選(抗原ELISA及細胞ELISA)：小鼠或大鼠單株抗體可藉由Koehler et al., Nature, (1975), 256:495-497等所記載之融合瘤法予以製作。關於抗gpNMB抗體，係使用包含人類gpNMB(同型a)的胺基酸序列(SEQ ID NO：209)或核酸序列(SEQ ID NO：210)或者小鼠gpNMB的胺基酸(SEQ ID NO：211)或核酸序列(SEQ ID NO：212)的全長或一部分之核酸、蛋白質或胜肽，對小鼠或大鼠誘導免疫，從抗體價上升之小鼠或大鼠中採取淋巴球細胞。所有的動物實驗均依照設施的規則來實施。經由採取自小鼠或大鼠之淋巴球細胞與小鼠骨髓瘤細胞株(P3U1(P3X63Ag8U.1)或SP2/0(SP2/0-Ag14))之融合之融合瘤製作係使用標準的融合瘤技術來實施。使用含有次黃嘌呤、胺基喋呤及胸苷之所謂的HAT培養基來選擇融合瘤。另外，將人類gpNMB(同型a)(SEQ ID NO：209)及小鼠gpNMB(SEQ ID NO：211)的胺基酸序列的比對示於圖1。圖中，作為PKD結構域之例，將胺基酸殘基第256～319位的區域以虛線圍住來表示。作為PMEL-CAF樣結構域之例，將胺基酸殘基第172～246位的區域以實線圍住來表示。

使用所獲得之融合瘤的培養液，實施經由已固定重組人類可溶性gpNMB(SEQ ID NO：221)或小鼠可溶性gpNMB(SEQ ID NO：223)之抗原ELISA及使用使包含人類gpNMB(SEQ ID NO：209)之蛋白質進行表現之細胞之細胞ELISA之結合性評估，選擇含陽性融合瘤之孔。將此孔中所包含之融合瘤藉由有限稀釋法予以單一殖株化。將此經單一殖株化之陽性融合瘤進行培養，使用蛋白A管柱(Ab-Capcher，ProteNova)從培養液中將單株抗體進行精製，取得複數種抗gpNMB抗體。

[實施例2]抗體的序列的決定：為了決定實施例1中所取得之各抗gpNMB抗體殖株的輕鏈及重鏈的基因序列，實施SMARTer ⁽ ^登錄商標 ⁾RACE法。藉由SMARTer ⁽ ^登錄商標 ⁾RACE法從源自產生抗體之融合瘤之RNA中取得包含起始及終止密碼子之抗體的重鏈及輕鏈的基因片段，決定其鹼基序列。以源自融合瘤之total RNA作為模板，使用SMARTer ⁽ ^登錄商標 ⁾RACE 5’/3’ Kit(634859，Clontech)，合成第一鏈cDNA後，藉由PCR反應使cDNA進行增幅。以該cDNA作為模板，使用針對於套組所附之通用序列之引子及對抗體的重鏈及輕鏈各自具特異性之引子施行PCR反應。所獲得之PCR產物係以5’RACE PCR產物之形式用於TA選殖。

另外，關於大鼠單株抗體基因的序列決定，係施行針對於大鼠抗體的重鏈及輕鏈的可變區之PCR反應，使所獲得之PCR片段與小鼠恆定區進行結合，以小鼠嵌合抗體之行施行序列決定。

在TA選殖中，係將5’RACE PCR產物進行電泳並將包含目標分子量之cDNA片段使用QIAEX II Gel Extraction Kit(20021，Qiagen)進行精製。精製後之cDNA係藉由使用TaKaRa-Taq(R001A，Takara)於72℃進行反應5分鐘而使腺嘌呤附加於3’末端。使用Mighty TA-cloning Kit(6028，Takara)，依照所附之實驗指南，將該cDNA片段選殖至pMD20-T載體(以下，MD20載體)中。使已選殖目標cDNA之MD20載體轉形至大腸菌TOP10中，以含胺苄青黴素100μg/mL之瓊脂培養基進行培養。目標cDNA片段向MD20載體之插入係藉由菌落PCR予以確認。對所選殖而得之cDNA片段的鹼基序列進行鑑定。同樣地，對3’RACE PCR產物的鹼基序列進行鑑定，決定各抗體的基因的全長序列。

針對實施例1中所取得之抗gpNMB抗體殖株中之GPN05-1、GPN06-1、GPN07-1、GPN09-1、GPN11-10、GPN15-2、GPN15-3、GPN18-1、GPN18-2、GPN18-4、GPN18-5、GPN18-6、GPN18-7及1-5E，將藉由以上程序所決定之重鏈及輕鏈各可變區(分別為VH及VL)以及該等中所包含之互補性決定區(分別為CDR-H1～H3及CDR-L1～L3)的各胺基酸序列及鹼基序列的SEQ ID NO示於表1-1～1-5。

[實施例3]對小神經膠質細胞之結合活性的解析(細胞ELISA)：為了評估實施例1中所取得之各抗gpNMB抗體對小神經膠質細胞之結合性，從1日至2日齡的小鼠或大鼠腦中採取腦細胞後，培養1週左右，藉由將黏附細胞搖晃1小時左右而收集已剝離之細胞，採取小鼠或大鼠小神經膠質細胞。將所採取而得之小鼠或大鼠小神經膠質細胞以20%FBS/DMEM-GlutaMax進行懸浮，以2×10 ⁴個細胞/孔接種於96孔盤，在37℃的CO ₂保溫培養箱中培養1日至2日左右而使其進行黏附之後，以Mildform進行固定化，然後，以3%BSA/PBS施行阻斷，製作細胞ELISA盤。

去除小鼠或大鼠小神經膠質細胞固定ELISA盤的阻斷液，以30μL/孔添加抗gpNMB抗體稀釋液(3%BSA/PBS溶液)，於室溫使其進行反應1小時。然後，以洗淨液加以洗淨後，以50μL/孔添加對小鼠IgG特異性地反應之抗體、抗小鼠IgG抗體-HRP共軛物(MBL，Code No.330)，或以30μL/孔添加抗小鼠IgG抗體-ALP共軛物(SBA，1050-04)，於室溫使其進行反應1小時。以100μL/孔添加HRP用基質(ELISA-StarTM過氧化酶化學發光基質，富士Film和光純藥(股))，立即測定1～10秒的發光量，將所獲得之發光強度的值作為結合活性而進行評估。或者，以100μL/孔添加ALP用基質(PNPP)，於室溫使其進行反應1小時，測定405～550nm的吸光度，將所獲得之吸光度的值作為結合活性而進行評估。其結果，確認到抗gpNMB抗體對小鼠小神經膠質細胞及大鼠小神經膠質細胞之結合性。

[實施例4]抗gpNMB抗體的結合部位的解析(抗原ELISA)：為了解析實施例1中所取得之各抗gpNMB抗體對人類gpNMB蛋白質之結合部位，實施以下實驗。

首先，以人類gpNMB細胞外結構域的胺基酸序列(SEQ ID NO：215；另外，該胺基酸序列中，第1～21位的胺基酸殘基構成訊息胜肽，第22位以後之胺基酸殘基構成人類gpNMB細胞外結構域的單離胜肽)為基準，製作下述表2所示之人類gpNMB細胞外結構域的N末端缺失變異體(hgpNMB_d07_76-498)及C末端缺失變異體(hgpNMB_d03_1-251、hgpNMB_d04_1-321、hgpNMB_d05_1-375、hgpNMB_d06_1-418、hgpNMB_d13_1-412、hgpNMB_d14_1-406、hgpNMB_d15_1-400、hgpNMB_d16_1-394、hgpNMB_d17_1-388、hgpNMB_d18_1-382及hgpNMB_d19_1-234)。製作已插入gpNMB基因之瞬時動物細胞表現載體，以Expi293 Expression System(A14635，Thermo Fisher Scientific)在培養基中表現精製gpNMB蛋白質。然後，使用附加至C末端之組胺酸標籤，以Ni-NTA瓊脂糖(143-09763，FUJIFILM Wako)進行親和精製，獲得精製蛋白質。

其次，在ELISA用96孔盤中各自以100μL/孔添加17nmol/L的精製重組人類可溶性gpNMB(SEQ ID NO：221)、上述表2所示之人類gpNMB細胞外結構域的N末端缺失變異體(hgpNMB_d07_76-498)及C末端缺失變異體(hgpNMB_d03_1-251、hgpNMB_d04_1-321、hgpNMB_d05_1-375、hgpNMB_d06_1-418、hgpNMB_d13_1-412、hgpNMB_d14_1-406、hgpNMB_d15_1-400、hgpNMB_d16_1-394、hgpNMB_d17_1-388、hgpNMB_d18_1-382及hgpNMB_d19_1-234)以及精製重組小鼠可溶性gpNMB(SEQ ID NO：223)，於室溫靜置90分鐘。然後，以3%BSA/PBS施行阻斷，製作抗原ELISA盤。

去除抗原ELISA盤的阻斷液，以50μL/孔添加抗gpNMB抗體稀釋液(3%BSA/PBS溶液)，於室溫使其進行反應1小時。然後，以洗淨液加以洗淨後，以50μL/孔添加對小鼠IgG特異性地反應之抗體、抗小鼠IgG抗體-ALP共軛物(SBA，1050-04)，於室溫使其進行反應1小時。以100μL/孔添加基質(PNPP)，於室溫使其進行反應1小時，算出405～550nm的吸光度。將所獲得之吸光度的值作為結合活性而進行評估。

[實施例5]抗gpNMB抗體的抗原決定位的決定(抗原ELISA)：為了決定實施例1中所取得之各抗gpNMB抗體對gpNMB之抗原決定位，實施以下實驗。

首先，製作下述表3所示之人類gpNMB細胞外結構域的C末端缺失變異體(hgpNMB_d19_1-234)及點突變體(hgpNMB_d22_K245A、hgpNMB_d23_D252A、hgpNMB_d24_E253A、hgpNMB_d25_D264A、hgpNMB_d26_H272A、hgpNMB_d28_H297A、hgpNMB_d30_H376A、hgpNMBd31_D247A_R248A、hgpNMB_d34_D287A、hgpNMB_d35_H301A、hgpNMB_d36_R331A_K334A、hgpNMB_d37_K344A_D347A、hgpNMB_d38_D356A、hgpNMB_d39_E360A、hgpNMB_d40_E367A及hgpNMB_d41_R373A)。製作已插入gpNMB基因之瞬時動物細胞表現載體，以Expi293 Expression System(A14635，Thermo Fisher Scientific)在培養基中表現精製gpNMB蛋白質。然後，使用附加至C末端之組胺酸標籤，以Ni-NTA瓊脂糖(143-09763，FUJIFILM Wako)進行親和精製，獲得精製蛋白質。另外，將此等人類gpNMB細胞外結構域的C末端缺失變異體及點突變體的概要示於表3。

使用此等人類gpNMB細胞外結構域丙胺酸點變異體，以與實施例4所示之程序同樣的程序施行抗原ELISA解析，評估各抗gpNMB抗體的結合性。具體而言，在ELISA用96孔盤中以17nmol/L的濃度以100μL/孔添加上述表2所示之人類gpNMB細胞外結構域的C末端缺失變異體及丙胺酸點變異體各者，於室溫靜置90分鐘。然後，以3%BSA/PBS施行阻斷，製作抗原ELISA盤。

去除抗原ELISA盤的阻斷液，以50μL/孔添加抗gpNMB抗體稀釋液(3%BSA/PBS溶液)，於室溫使其進行反應1小時。然後，以洗淨液加以洗淨後，以50μL/孔添加對小鼠IgG特異性地反應之抗體、抗小鼠IgG抗體-ALP共軛物(SBA，1050-04)，於室溫使其進行反應1小時。以100μL/孔添加基質(PNPP)，於室溫使其進行反應1小時，算出405～550nm的吸光度。將所獲得之吸光度的值作為結合活性而進行評估。在2nM濃度中之吸光度中，將相較於顯示出最大吸光度之變異體而言降低50%以上吸光度之變異體記載為+，將顯示出50%以上的吸光度之變異體記載為-。將結果示於表4。

再者，使用結合至人類gpNMB細胞外結構域的C末端缺失變異體(hgpNMB_d19_1-234)之抗gpNMB抗體，以抗原ELISA同樣地解析N末端側對人類gpNMB細胞外結構域丙胺酸點變異體之結合性。

首先，製作下述表5所示之人類gpNMB細胞外結構域的C末端缺失變異體(hgpNMB_d19_1-234)及點突變體(hgpNMB_d19_1-234、hgpNMB_d43_1-234_R77A、hgpNMB_d44_1-234_D85A、hgpNMB_d45_1-234_R104A、hgpNMB_d47_1-234_E117A、K118A、hgpNMB_d48_1-234_R121A、E123A、hgpNMB_d49_1-234_D129A、hgpNMB_d50_1-234_E140A、D141A、hgpNMB_d51_1-234_D143A、E145A、hgpNMB_d52_1-234_H152A、H153A、hgpNMB_d53_1-234_D158A、K160A、hgpNMB_d54_1-234_H164A、H165A、hgpNMB_d55_1-234_R169A、hgpNMB_d58_1-234_R189A、hgpNMB_d59_1-234_R193A、hgpNMB_d61_1-234_R214A、R215A及hgpNMB_d64_1-234_D109A)。製作已插入gpNMB基因之瞬時動物細胞表現載體，以Expi293 Expression System(A14635，Thermo Fisher Scientific)在培養基中表現精製gpNMB蛋白質。然後，使用附加至C末端之組胺酸標籤，以Ni-NTA瓊脂糖(143-09763，FUJIFILM Wako)進行親和精製，獲得精製蛋白質。另外，將此等人類gpNMB細胞外結構域的C末端缺失變異體及點突變體的概要示於表5。

使用此等人類gpNMB細胞外結構域丙胺酸點變異體，以與實施例4所示之程序同樣的程序施行抗原ELISA解析，評估各抗gpNMB抗體的結合性。具體而言，在ELISA用96孔盤中以17nmol/L的濃度以100μL/孔添加表5所示之C末端缺失變異體及各gpNMB丙胺酸點變異體，於室溫靜置90分鐘。然後，以3%BSA/PBS施行阻斷，製作抗原ELISA盤。

去除抗原ELISA盤的阻斷液，以50μL/孔添加抗gpNMB抗體稀釋液(3%BSA/PBS溶液)，於室溫使其進行反應1小時。然後，以洗淨液加以洗淨後，以50μL/孔添加對小鼠IgG特異性地反應之抗體、抗小鼠IgG抗體-ALP共軛物(SBA，1050-04)，於室溫使其進行反應1小時。以100μL/孔添加基質(PNPP)，於室溫使其進行反應1小時，算出405～550nm的吸光度。將所獲得之吸光度的值作為結合活性而進行評估。將結果示於下述表6(另外，如前述，SEQ ID NO：215所示之胺基酸序列中，第1～21位的胺基酸殘基構成訊息胜肽，第22位以後之胺基酸殘基構成人類gpNMB細胞外結構域的單離胜肽。隨此，表6所示之各變異體蛋白質亦從第22位的胺基酸殘基開始)。將對上述C末端缺失變異體(hgpNMB_d19_22-234)之結合性定為100%，在結合活性成為50%以下之情況，標示+。在維持50%以上的結合活性之情況，標示-。

考慮精製gpNMB變異體的安定性及對結合性造成影響之變異部位，而決定各抗gpNMB抗體的抗原決定位。其結果，已明確得知抗體殖株GPN18-1、GPN18-2、GPN18-6及GPN18-7係與存在於PMEL-CAF樣區域之胺基酸(R214及/或R215)進行相互作用。另一方面，已判明抗體殖株GPN18-5係進一步識別N末端部分。抗體殖株1-5E為以論文報導(非專利文獻36)所載明之疫苗胜肽進行免疫所獲得之抗gpNMB抗體，識別抗原決定位為N末端的胺基酸殘基第63-71位的「RRGDGRWKD」。

[實施例6]重組抗gpNMB抗體的製造：製作將在編碼出實施例2中所獲得之抗gpNMB抗體的H鏈之基因序列及編碼出L鏈之基因序列各者中於5’末端附加編碼出訊息序列之基因序列而得之基因序列插入動物細胞表現載體pcDNA3.4中而得之質體，使用ExpiCHO Expression System(A29133，Thermo Fisher Scientific)使其瞬時表現，使抗體分泌至培養基中。然後，將培養上清液進行回收，使用蛋白A管柱(Ab-Capcher，ProteNova)、凝膠過濾管柱(Superdex 200 Increase，Cytiva)進行精製。

[實施例7(1)]經由表面電漿共振法之抗gpNMB抗體的相互作用解析1：為了比較檢討實施例1中所取得之各抗gpNMB抗體殖株對gpNMB之結合特性(結合速度及解離速度)，藉由表面電漿共振(SPR)法進行測定。具體而言，藉由以下所記載之條件來實施。

作為測定系統，係使用BIACORE T200系統。以Amine Coupling Kit(BR-1000-50，GE)及His Capture Kit(28-9950-56，Cytiva)將約5000RU前後的抗His單株抗體固定於感測器晶片CM5(BR-1005-30，Cytiva)的所有流動槽並加以使用。電泳緩衝液係使用HBS-EP+(BR-1006-69，Cytiva)。

作為配體，係將重組人類gpNMB-FLAG-His (SEQ ID NO：221)或重組小鼠gpNMB-FLAG-His(SEQ ID NO：223)捕捉至測定系統中並加以使用。作為分析物，係使用100nmol/L濃度的抗gpNMB抗體殖株。作為分析物陰性對照，係使用志賀毒素2(Shiga toxin 2)抗體(11E10)或對照小鼠IgG1(leinco：Pro＃M1411)。

測定系統的溫度係設定於25℃。作為配體，使重組人類gpNMB-FLAG-His以成為100RU以下為目標而對流動槽(2)的抗His單株抗體進行反應。使重組小鼠gpNMB-FLAG-His以成為100RU以下為目標而對流動槽(4)的抗His單株抗體進行反應。設為流速20μL/分鐘，使10nmol/L的精製小鼠IgG2a，κ，同型Ctrl，殖株：MG2a-53(401502，BioLegend，以下ctrl IgG2a)進行反應1分鐘，使HBS-EP+流動10分鐘以上。將分析物以HBS-EP+稀釋，使其成為(100nmol/L)，使其對所有流動槽各進行反應600秒，獲得結合曲線後，使HBS-EP+進行反應600秒，獲得解離曲線。

反應結束後，使再生用緩衝液1(0.2%SDS)、再生用緩衝液2(100mmol/L Tris-HCl(pH8.5)、1mol/L NaCl、15mmol/L MgCl ₂)及再生用緩衝液3(10mmol/L甘胺酸-HCl(pH1.5))各進行反應1分鐘，去除測定系統的gpNMB-FLAG-His，加以洗淨。使用Biacore T200 Evaluation softWare(ver2.0)，以1：1結合的模式進行解析，作為序數，將結合速度值(Ass：1/Ms)、結合安定值(Diss：1/s)及平衡解離值(Diss/Ass：M)予以數值化。將結果示於表7。

[實施例7(2)]經由表面電漿共振法之抗gpNMB抗體的相互作用解析2：針對實施例1中所取得之抗gpNMB抗體殖株中之GPN05-1及GPN06-1，為了檢討對gpNMB之濃度依存性結合特性(結合速度及解離速度)，藉由表面電漿共振(SPR)法進行測定。具體而言，除了以下所記載之條件以外，藉由與實施例7(1)同樣的條件來實施。

使用感測器晶片CM3(BR-1005-36，Cytiva)，作為分析物，係以各種濃度使用抗gpNMB抗體殖株GPN05-1及GPN06-1。測定條件係使用單週期動力學法。使各濃度的分析物各進行反應450秒，獲得結合曲線後，使HBS-EP+進行反應600秒，獲得解離曲線。反應結束後，使再生用緩衝液1(0.2%SDS)、再生用緩衝液2(100 mmol/L Tris-HCl(pH8.5)、1mol/L NaCl、15mmol/L MgCl ₂)及再生用緩衝液3(10mmol/L甘胺酸-HCl(pH1.5))各進行反應1分鐘，去除測定系統的gpNMB-FLAG-His，加以洗淨。使用Biacore T200 Evaluation softWare(ver2.0)，以1：1結合的模式進行解析，算出解離速度常數(ka，1/Ms)、結合速度常數(kd，1/s)及解離常數(KD，M)。將結果示於表8。

[實施例8]阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(市售多株抗體)的結合解析：將21～25個月齡的APPosk小鼠進行回流固定，取出腦，製作5μm厚的石蠟切片。脫石蠟後，將腦切片在檸檬酸緩衝液(pH6)中煮沸30分鐘而將抗原賦活化之後，以市售的抗gpNMB多株抗體AF2330(2μg/mL)+FITC-驢抗山羊IgG抗體(Jackson Lab)及Iba1抗體(WAKO，5μg/mL)+羅丹明(Rhodamine)-驢抗兔IgG抗體(Jackson Lab)進行雙重染色。以脂褐素淬滅劑TrueBlackplus(Biotium)於室溫處理10分鐘後，以含DAPI之封入劑(Vector)進行封入。

其結果，在21～25個月齡的APPosk小鼠的腦切片中，在Iba1陽性的小神經膠質細胞之中存在經抗gpNMB抗體(AF2330，R&D公司)染色之細胞，幾乎所有gpNMB陽性細胞皆為Iba1陽性的小神經膠質細胞。此外，發生形態變化之小神經膠質細胞為gpNMB陽性小神經膠質細胞。由以上，已確認在阿茲海默症模型小鼠(APPosk小鼠)中，出現gpNMB陽性小神經膠質細胞。

[實施例9]阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN05-1、GPN06-1)的投予所引發之gpNMB陽性小神經膠質細胞的減低：將19～20個月齡的APPosk小鼠分成2組(各組2隻雄性，3隻雌性)，對各組腹腔內投予實施例1中所取得之不同的抗gpNMB抗體殖株(GPN05-1、GPN06-1)，每週1次，共計5次(各次1mg/400μL，PBS中)。在最終投予的4日後，將小鼠進行回流固定，取出腦，製作5μm厚的石蠟切片。脫石蠟後，將腦切片在檸檬酸緩衝液(pH6)中煮沸30分鐘而將抗原賦活化之後，以抗小鼠gpNMB山羊多株抗體(R&D systems，#AF2330，2μg/mL)+FITC-驢抗山羊IgG抗體(Jackson Lab)及Iba1抗體(WAKO，5μg/mL)+羅丹明-驢抗兔IgG抗體(Jackson Lab)進行雙重染色。以脂褐素淬滅劑TrueBlackplus(Biotium)於室溫處理10分鐘後，以含DAPI之封入劑(Vector)進行封入。另外，GPN06-1投予組的1隻雄性在第4次投予後一週死亡。此外，作為對照，將21～25個月齡的APPosk小鼠的腦切片(3隻)同樣地進行染色。將所獲得之染色照片示於圖2。分別地，圖2(A)表示對照，圖2(B)表示GPN05-1投予組，圖2(C)表示GPN06-1投予組。

其結果，在對照的APPosk小鼠中，在海馬迴(CA2-CA3)、內嗅皮質(Ent)、齒狀迴(DG)中可見到數量很多的被抗小鼠gpNMB山羊多株抗體所檢測出之gpNMB陽性的小神經膠質細胞(Iba1陽性)。在另一方面，在GPN05-1投予組中，gpNMB陽性的小神經膠質細胞減少，在GPN06-1投予組中，則變得幾乎見不到。由以上結果，已確認藉由投予抗gpNMB單株抗體GPN05-1、GPN06-1，腦內之gpNMB陽性小神經膠質細胞減低。

再者，關於上述免疫染色結果，實施統計學上之解析。具體而言，各自提取Iba1的染色訊息及gpNMB與Iba1的共染色訊息，使用影像處理軟體ImageJ，對各染色區域的面積進行定量。基於所獲得之數值而施行圖表化。將所獲得之圖表示於圖3。另外，顯著差異檢定係使用StatView，以3組ANOVA進行解析。僅將經由Fisher’s PLSD所得之p值小於0.05者視為「有顯著差異」，在圖表中記載該p值。

由以上解析結果，已確認藉由投予抗gpNMB單株抗體GPN05-1、GPN06-1，在有統計學上之顯著差異之情形下，腦內之gpNMB陽性小神經膠質細胞減低。此意味構成gpNMB陽性小神經膠質細胞的至少一部分之機能異常小神經膠質細胞減低。此外，此種機能異常小神經膠質細胞的減低效果亦可由下列結果所支持：如實施例10所示，Aβ寡聚物被去除，如實施例11所示，突觸數量恢復。

[實施例10]阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN05-1、GPN06-1)的投予所引發之Aβ寡聚物的去除：將19～20個月齡的APPosk小鼠分成2組(各組2隻雄性，3隻雌性)，對各組腹腔內投予實施例1中所取得之不同的抗gpNMB抗體(GPN05-1、GPN06-1)，每週1次，共計5次(各次1mg/400μL，PBS中)。在最終投予的4日後，將小鼠進行回流固定，取出腦，製作5μm厚的石蠟切片。脫石蠟後，將腦切片在鹽酸(pH2)中煮沸10分鐘後，以Aβ寡聚物抗體11A1(IBL，1μg/mL)+生物素(biotin)-馬抗小鼠IgG抗體(Vector)+ABC elite(Vector)+DAB進行染色。此外，作為對照，將21～25個月齡的APPosk小鼠的腦切片(3隻)同樣地進行染色。將結果示於圖4。分別地，圖4(A)表示對照，圖4(B)表示GPN05-1投予組，圖4(C)表示GPN06-1投予組。

其結果，在對照的APPosk小鼠中，在海馬迴、齒狀迴中可見到Aβ寡聚物陽性細胞。在GPN05-1投予組中，11A1陽性的細胞減少，在GPN06-1投予組中，則幾乎見不到。由以上結果，已確認藉由投予抗gpNMB抗體，腦內之Aβ寡聚物被去除。

[實施例11]阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN05-1、GPN06-1)的投予所引發之突觸的恢復：將19～20個月齡的APPosk小鼠分成2組(各組2隻雄性，3隻雌性)，對各組腹腔內投予實施例1中所取得之不同的抗gpNMB抗體(GPN05-1、GPN06-1)，每週1次，共計5次(各次1mg/400μL，PBS中)。在最終投予的4日後，將小鼠進行回流固定，取出腦，製作5μm厚的石蠟切片。脫石蠟後，將腦切片在檸檬酸緩衝液(pH6)中煮沸30分鐘後，以突觸素抗體SVP-38(Sigma，200倍稀釋)+FITC-山羊抗小鼠IgG抗體(Jackson Lab)進行染色。此外，作為對照1，將20個月齡的非基因重組(Non-Tg)小鼠的腦切片(2隻)，以及作為對照2，將21～25個月齡的APPosk小鼠的腦切片(3隻)同樣地進行染色。將所獲得之染色照片示於圖5。分別地，圖5(A)表示對照1(Non-Tg小鼠)，圖5(B)表示對照2 (APPosk小鼠)，圖5(C)表示GPN05-1投予組，圖5(D)表示GPN06-1投予組。

其結果，相較於對照1的非基因重組(Non-Tg)小鼠而言，在對照2的APPosk小鼠中，可見到海馬迴苔狀纖維的突觸素的減少。在GPN05-1投予組中，突觸素略微恢復，在GPN06-1投予組中，則顯著地恢復。突觸素的恢復看起來似乎與Aβ寡聚物的去除相關。由以上結果，暗示藉由投予抗gpNMB抗體，阿茲海默症模型小鼠的腦內之神經細胞的突觸數量增加，神經機能恢復。

[實施例12-1]阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN09-1、GPN11-10、GPN15-2、GPN15-3、GPN18-2、11E10)的投予所引發之藥效評估(Aβ寡聚物的去除)：將19～20個月齡的APPosk小鼠分成6組(各組4隻匹)，對各組腹腔內投予實施例1中所取得之不同的抗gpNMB抗體(GPN09-1、GPN11-10、GPN15-2、GPN15-3、GPN18-2)及對照抗體11E10(抗志賀毒素小鼠單株抗體)，每週1次，共計5次(各次1mg/400μL，PBS中)。在最終投予的4日後，將小鼠進行回流固定，取出腦，製作5μm厚的石蠟切片。脫石蠟後，將腦切片在鹽酸(pH2)中煮沸10分鐘後，以Aβ寡聚物抗體11A1(IBL，1μg/mL)+生物素-馬抗小鼠IgG抗體(Vector)+ABC elite(Vector)+DAB進行染色。

將所獲得之染色照片示於圖6。分別地，圖6(A)表示對照抗體11E10，圖6(B)表示GPN09-1投予組，圖6(C)表示GPN11-10投予組，圖6(D)表示GPN15-2投予組，圖6(E)表示GPN15-3投予組，圖6(F)表示GPN18-2投予組。

再者，針對圖6的免疫染色照片，施行細胞內Aβ寡聚物染色的定量化，顯著差異檢定係使用StatView，以3組ANOVA進行解析。將結果示於圖7的圖表。僅將經由Fisher’s PLSD所得之p值小於0.05者視為「有顯著差異」，在圖表中記載該p值。其結果，在對照抗體投予組的APPosk小鼠中，在大腦皮質中可見到11A1染色陽性細胞。另一方面，在GPN09-1、GPN11-10、GPN15-2、GPN15-3投予組中，11A1染色陽性的細胞減少，在GPN18-2投予組中，則幾乎見不到。由以上結果，已確認藉由投予抗gpNMB抗體，腦內之Aβ寡聚物被去除。

再者，使用投予GPN18-2之APPosk小鼠及同月齡附近的Non-Tg小鼠的海馬迴切片，依照實施例11的方法，施行突觸素染色。將所獲得之染色照片示於圖8。分別地，圖8(A)表示對照(Non-Tg小鼠)，圖8(B)表示GPN18-2投予組。其結果，觀察到在投予GPN18-2之APPosk小鼠的海馬迴中，突觸數量恢復至Non-Tg水平。

[實施例12-2]阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN18-2、GPN06-1、GPN18-5、1-5E、抗BTV小鼠單株抗體)的投予所引發之藥效評估(Aβ寡聚物的去除)：將18～20個月齡的APPosk小鼠分成5組(各組5隻)，對各組腹腔內投予實施例1中所取得之不同的抗gpNMB抗體(GPN18-2、GPN06-1、GPN18-5、1-5E)及對照抗體(抗BTV小鼠單株抗體(Leinco Technologies, Inc.))，每週1次，共計5次(各次1mg/400μL，PBS中)。在最終投予的4日後，將小鼠進行回流固定，取出腦，製作5μm厚的石蠟切片。脫石蠟後，將腦切片在鹽酸(pH2)中煮沸10分鐘後，以Aβ寡聚物抗體11A1(IBL，1μg/mL)+生物素-馬抗小鼠IgG抗體(Vector)+ABC elite(Vector)+DAB進行染色。

將所獲得之染色照片示於圖9。分別地，圖9(A)表示對照抗體，圖9(B)表示GPN18-2投予組，圖9(C)表示GPN06-1投予組，圖9(D)表示GPN18-5投予組，圖9(E)表示1-5E投予組。

再者，針對圖9的免疫染色照片，施行細胞內Aβ寡聚物染色的定量化，顯著差異檢定係使用StatView，以3組ANOVA進行解析。將結果示於圖10的圖表。僅將經由Fisher’s PLSD所得之p值小於0.05者視為「有顯著差異」，在圖表中記載該p值。

其結果，在對照抗體投予組的APPosk小鼠中，在大腦皮質中觀察到許多11A1染色陽性細胞。另一方面，在GPN18-2及GPN06-1投予組中，11A1染色陽性的細胞在統計學上顯著地減少。該減少相較於GPN18-5及1-5E投予組而言，係在統計學上顯著地減少。由以上結果，顯示出識別PMEL-CAF區域之GPN18-2抗體及識別PKD區域之GPN06-1抗體相較於識別N末端區域之GPN18-5及識別N末端區域的疫苗胜肽之1-5E抗體而言，去除腦內之Aβ寡聚物之藥效較強。由以上比較實驗，顯示出關於腦內之Aβ寡聚物去除，相比於識別N末端區域之抗體而言，識別PMEL-CAF區域及PKD區域之抗體實屬有效。

[參考例]新穎阿茲海默症模型小鼠的製作：將呈現出類澱粉蛋白斑塊之Tg2576小鼠(導入瑞典變異APP之小鼠)及表現人類Tau蛋白(野生型)之Tau264進行雜交而製作新穎的阿茲海默症模型小鼠(Tg2576/Tau264小鼠(APP/Tau-Tg))。

施行在9個月齡的APP/Tau-Tg中之病理解析，結果觀察到抗Aβ抗體所引發之類澱粉蛋白斑塊形成及AT8抗體所引發之磷酸化Tau蛋白的蓄積。再者，藉由抗gpNMB抗體(R&D公司，山羊多株抗體)及檢測小神經膠質細胞之Iba1抗體，亦確認出現gpNMB陽性小神經膠質細胞。

[實施例13]抗gpNMB抗體的阿茲海默症模型小鼠的認知機能改善評估：使用14個月齡的參考例所記載之阿茲海默症模型小鼠APP/Tau-Tg，藉由莫里斯水迷宫試驗解析本發明之抗gpNMB抗體的認知機能改善作用。使用同腹所生之14個月齡的Non-Tg(野生型小鼠)作為比較對象。

＜組構成＞・評估抗體組1：抗gpNMB小鼠單株抗體GPN06-1，在包含0.2M組胺酸之150mM NaCl緩衝液(pH6.5)中2.5mg/mL(n=8) ・評估抗體組2：抗gpNMB小鼠單株抗體GPN18-2，在包含0.2M組胺酸之150mM NaCl緩衝液(pH6.5)中2.5mg/ mL(n=8)※以n=8開始試驗，但在莫里斯水迷宫試驗前1隻脫離，因而數據構成要素為n=7。・對照抗體組：抗BTV小鼠單株抗體(Leinco Technologies, Inc.)，在包含0.2M組胺酸之150mM NaCl緩衝液(pH6.5)中2.5mg/mL(n=9)※以n=9開始試驗，但在莫里斯水迷宫試驗前1隻脫離，因而數據構成要素為n=8。・Non-Tg組：包含0.2M組胺酸之150mM NaCl緩衝液(pH6.5)(n=12)

＜水迷宫試驗＞・準備：在內徑100cm，高度45cm的黑色池內注滿16cm深的水。水溫係調整21～23℃，保持無色透明。在每個試行日(trial day)後，各施行約10L糞便的排除及水的替換。

・獲得(acquisition)試驗：將15cm高的透明平台淹沒在離牆壁20cm(離中心30cm)的位置。區分成包含淹沒平台之場所在內之4個象限，僅從沒有平台之3個象限中之任一者隨機投入小鼠。以1次試行60秒為限度，以5次試行/日施行。1次試行的間隔為約5分鐘。將直至到達平台之逃出時間(escape time)記錄為數據。針對未在60秒以內逃脫之小鼠，由操作者的手誘導至平台，逃出時間係視為60秒。平台上之小鼠係在10秒後從池中移除，使其自由行動並使身體乾燥，直至下一次試行。就每日之小鼠的成績而言，係使用5次試行的逃出時間的平均秒數。試驗係實施4日。

在對照組(Non-Tg)的成績安定之時點結束獲得試驗，翌日施行探索(probe)試驗。・探索(probe)試驗：獲得(acquisition)試驗的最終日的翌日，將平台從池中移除，以錄像機拍攝60秒的自由游泳。觀察所拍攝之錄像，測定自由游泳中之小鼠在4個象限中之平台所存在之象限(目標象限(target quadrant))內游泳之時間，以在60秒中之百分比表示。此時，針對投入池後30秒為止之游泳，亦同樣地進行解析。

各試驗的顯著差異檢定係藉由重複測定(repeated measure)、Fisher的附約束之最小顯著差異檢定(Fisher’s PLSD)施行，探索(probe)試驗的顯著差異檢定係藉由Fisher的附約束之最小顯著差異檢定(Fisher’s PLSD)施行。

將獲得(acquisition)試驗的結果示於圖11的圖表。解析的結果，針對於APP/Tau-Tg之對照抗體組相較於Non-Tg(野生型)而言，在莫里斯水迷宫試驗中，到達隱藏踏台之時間(逃避潛伏期(escape latency))係顯著地較長。另一方面，在投予針對於APP/Tau-Tg之本發明之抗gpNMB抗體：GPN06-1或GPN18-2之組中，顯示出到達隱藏踏台之時間在統計學上顯著地縮短。另一方面，在投予針對於APP/Tau-Tg之同型對照抗體(Leinco Technologies, Inc)之組中，到達隱藏踏台之時間係與媒體投予組相同。

將探索(probe)試驗的結果示於圖12的圖表。在探索(probe)試驗中，亦呈與獲得(acquisition)試驗同樣的結果。具體而言，針對於APP/Tau-Tg之對照抗體投予組相較於Non-Tg(野生型)而言，在隱藏踏台所存在之象限周圍游動之時間在統計學上顯著地較少，投予GPN06-1或GPN18-2之組與對照抗體投予組相比，在隱藏踏台所存在之象限周圍游動之時間在統計學上顯著地較長。

由此等結果，顯示出抗gpNMB抗體：GPN06-1、GPN18-2係在有統計學上之顯著差異之情形下，使APP/Tau-Tg小鼠的認知機能恢復。

[實施例14]小鼠抗gpNMB抗體的人類化設計：以抗gpNMB抗體：GPN06-1的胺基酸序列為基礎，參考IMGT(Lefranc, M.-P., Pommié, C., Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V. and Lefranc, G. “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains”. Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003) PMID: 12477501 LIGM:268.)及Kabat的編號方式而鑑定出CDR區域。藉由將IMGT/Kabat進行組合而得之方法將CDR環結構保持最佳。

＜重鏈人類化設計＞與小鼠重鏈可變區的胺基酸序列(VH0)(SEQ ID NO：283)最近似的人類生殖系(germline)基因為IGHV1-46*01。在另一方面，使用BLAST搜索，選出與VH0相似性較高的200種人類IgG序列作為候補。然後，從框架的同源性或在框架中關鍵胺基酸的保留或環結構等之觀點而言，最終選擇4種框架序列。對該等施行CDR移植，作為人類化變異序列VH1、VH2、VH3、VH4。此外，將以IGHV1-46*01的序列作為框架進行CDR移植者作為人類化變異序列VH5。將此等人類化變異序列VH1～VH5對小鼠VH0之比對示於圖13。劃下線部分為已鑑定之CDR區域。此外，將此等人類化變異序列VH1～VH5對小鼠序列VH0之同一性及相似性示於表9。若將人類化變異序列VH1～VH5按對小鼠VH0之同一性及相似性較高的順序排列，則為VH3=VH5＞VH2＞VH1＞VH4。

＜輕鏈人類化設計＞與小鼠輕鏈可變區的胺基酸序列(VL0)(SEQ ID NO：285)最近似的人類生殖系(germline)基因為IGKV1-9*01。在另一方面，使用BLAST搜索，選出與VL0相似性較高的200種人類IgK序列作為候補。然後，從框架的同源性或在框架中關鍵胺基酸的保留或環結構等之觀點而言，最終選擇4種框架序列。對該等施行CDR移植，作為人類化變異序列VL1、VL2、VL3、VL4序列。此外，將以IGKV1-9*01的序列作為框架進行CDR移植者作為人類化變異序列VL5。將此等人類化變異序列VL1～VL5對小鼠VL0之比對示於圖14。劃下線部分為已鑑定之CDR區域。此外，將此等人類化變異序列VL1～VL5對小鼠序列VL0之同一性及相似性示於表10。若將人類化變異序列VL1～VL5按對小鼠VL0之同一性及相似性較高的順序排列，則為VL5＞VL4＞VL1＞VL3＞VL2。

[實施例15]人類化抗體的選擇將實施例14中所設計之抗gpNMB抗體：GPN06-1的5種人類化重鏈序列、5種人類化輕鏈序列進行組合而製作25種人類化抗體。將此等人類化抗體以抗原ELISA評估結合性，挑選出結合活性接近人類嵌合抗體之人類化抗體。

具體而言，製作將在實施例14中所設計之編碼出人類化抗gpNMB抗體的H鏈之基因序列及編碼出L鏈之基因序列各者中於5’末端附加編碼出訊息序列之基因序列而得之基因序列插入動物細胞表現載體pcDNA3.4中而得之質體，使用ExpiCHO Expression System(A29133，Thermo Fisher Scientific)使其瞬時表現，使抗體分泌至培養基中。然後，將培養上清液進行回收，使用蛋白A管柱(Ab-Capcher，ProteNova)、凝膠過濾管柱(Superdex 200 Increase，Cytiva)進行精製。

在已固定重組人類可溶性gpNMB(SEQ ID NO：221)之盤中添加經階段稀釋之精製人類化抗體溶液，實施抗原ELISA。將結果示於表11。其結果，得知H1L1、H1L2、H2L1、H2L2、H3L1、H3L2、H4L1、H5L2、H5L4及H5L5具有與嵌合抗體(H0L0)同等水平的結合性(EC ₅₀值相較於嵌合抗體H0L0而言為3倍以內)。

[實施例16]經由表面電漿共振法之人類化抗gpNMB抗體的相互作用解析3：針對實施例15中所取得之人類化GPN06抗體變體中之H1L1、H1L2、H1L4、H2L1、H2L2、H3L1、H3L2、H4L1、H5L2，為了比較檢討對人類gpNMB之結合特性(結合速度及解離速度)，藉由表面電漿共振(SPR)法進行測定。具體而言，除了以下所記載之條件以外，藉由與實施例7同樣的測定解析條件來實施。

作為分析物，係使用人類化GPN06抗體變體中之H0L0、H1L1、H1L2、H1L4、H2L1、H2L2、H3L1、H3L2、H4L1、H5L2。使各濃度的分析物各進行反應600秒，獲得結合曲線後，使HBS-EP+進行反應1200秒，獲得解離曲線。反應結束後，使再生用緩衝液1(0.2%SDS)、再生用緩衝液2(100mmol/L Tris-HCl(pH8.5)、1mol/L NaCl、15mmol/L MgCl ₂)及再生用緩衝液3(10mmol/L甘胺酸-HCl (pH1.5))各進行反應1分鐘，去除測定系統的gpNMB-FLAG-His，加以洗淨。使用BIACORE T200 Evaluation softWare(ver2.0)，以1：1結合的模式進行解析，算出解離速度常數(ka，1/Ms)、結合速度常數(kd，1/s)及解離常數(KD，M)。將結果示於表12。

[實施例17]經由人類化抗體的丙胺酸取代之對結合而言實屬重要的CDR區域胺基酸鑑定製作48種將實施例15中所製作而得之人類化抗gpNMB抗體H1L1的CDR區域的胺基酸取代成丙胺酸而得之人類化抗gpNMB抗體H1L1的CDR取代體。以抗原ELISA評估此等丙胺酸取代體抗體對重組人類可溶性gpNMB(SEQ ID NO：221)之結合性，決定對結合而言實屬重要的CDR區域內之胺基酸。將所製作而得之人類化抗gpNMB抗體H1L1的CDR取代體及結合活性的測定結果示於以下表13及表14。

由所獲得之結果，鑑定出在各CDR區域中，結合活性因丙胺酸取代而降低之胺基酸，即，人類化抗gpNMB抗體H1L1的輕鏈可變區(SEQ ID NO：31)的CDR-L1 (SEQ ID NO：23)中之第29位的異白胺酸及第31位的酪胺酸；CDR-L2(SEQ ID NO：25)中之第50位的蘇胺酸；CDR-L3(SEQ ID NO：27)中之第88位的組胺酸、第89位的麩醯胺酸、第90位的色胺酸、第92位的絲胺酸及第93位的酪胺酸；以及人類化抗gpNMB抗體H1L1的重鏈可變區(SEQ ID NO：29)的CDR-H1(SEQ ID NO：17)中之第32位的天冬醯胺酸及第33位的色胺酸；CDR-H2(SEQ ID NO：19)中之第55位的天冬胺酸、第57位的苯基丙胺酸及第58位的蘇胺酸；CDR-H3(SEQ ID NO：21)中之第98位的精胺酸、第100位的甘胺酸及第109位的甘胺酸對結合維持而言極為重要。

[產業上之可利用性]

本發明可提供藉由特異性結合至表現脊椎動物的gpNMB之小神經膠質細胞而去除機能異常小神經膠質細胞、促進屬於毒性蛋白質之Aβ寡聚物的去除、使突觸數量恢復及/或使認知機能恢復之抗體，因而能夠利用於以阿茲海默症為首之小神經膠質細胞參與之神經退化性疾病的治療、預防或診斷等。

[圖1]圖1為示出人類gpNMB(同型a)及小鼠gpNMB的胺基酸序列的比對之圖。圖中，作為PKD結構域之例，將胺基酸殘基第256～319位的區域以虛線圍住來表示。作為PMEL-CAF樣結構域之例，將胺基酸第172～246位的區域以實線圍住來表示。 [圖2]圖2為示出阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN05-1及GPN06-1)的投予所引發之gpNMB陽性小神經膠質細胞的減低效果之免疫染色照片。(A)對照，(B)GPN05-1投予組，(C)GPN06-1投予組。L：左腦，R：右腦，DG：dentate gyrus(齒狀迴)，CA：cornu ammonis sectors，CA3：海馬迴CA3區域，CA23：海馬迴CA2-CA3區域，Ent：entorhinal cortex(內嗅皮質)，PPtA：大腦皮質體性體感皮層。 [圖3]圖3為示出圖2的免疫染色照片的統計學解析結果之圖表。 [圖4]圖4為示出阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN05-1、GPN06-1)的投予所引發之Aβ寡聚物的去除效果之免疫染色照片。(A)對照，(B)GPN05-1投予組，(C)GPN06-1投予組。 [圖5]圖5為示出阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN05-1、GPN06-1)的投予所引發之突觸的恢復效果之染色照片。(A)對照1(Non-Tg小鼠)，(B)對照2(APPosk小鼠)，(C)GPN05-1投予組，(D)GPN06-1投予組。 [圖6]圖6為對阿茲海默症模型小鼠投予抗體後之腦切片的免疫染色照片。(A)對照抗體11E10，(B)GPN09-1投予組，(C)GPN11-10投予組，(D)GPN15-2投予組，(E)GPN15-3投予組，(F)GPN18-2投予組。 [圖7]圖7為示出圖6的免疫染色照片的統計學解析結果之圖表。 [圖8]圖8為示出阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN18-2)的投予所引發之突觸的恢復效果之染色照片。(A)對照(Non-Tg小鼠)，(B)GPN18-2投予組。 [圖9]圖9為對阿茲海默症模型小鼠投予抗體後之腦切片的免疫染色照片。(A)對照抗體，(B)GPN18-2投予組，(C)GPN06-1投予組，(D)GPN18-5投予組，(E)1-5E投予組。 [圖10]圖10為示出圖9的免疫染色照片的統計學解析結果之圖表。 [圖11]圖11為示出阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN06-1、GPN18-2)的投予所引發之莫里斯水迷宫試驗(獲得(acquisition)試驗)的結果之圖表。 [圖12]圖12為示出阿茲海默症模型小鼠中之抗gpNMB抗體(GPN06-1、GPN18-2)的投予所引發之莫里斯水迷宫試驗(探索(probe)試驗)的結果之圖表。 [圖13]圖13為示出人類化變異序列VH1～VH5對小鼠VH0之比對之圖。 [圖14]圖14為示出人類化變異序列VL1～VL5對小鼠VL0之比對之圖。

TW202400643A_112107020_SEQL.xml

Claims

一種抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其係特異性結合至人類gpNMB(glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B)的橫跨PMEL-CAF樣(PMEL Core Amyloid Fragment-like)結構域至PKD結構域之區域的至少1處。
如請求項1之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其係特異性結合至具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的包含D287及/或H301的胺基酸殘基之區域。
如請求項1或2之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其係特異性結合至具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的包含R214及/或R215的胺基酸殘基之區域。
如請求項2或3之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其亦特異性結合至具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的包含K257及/或D258的胺基酸殘基之區域、包含H268及/或D269的胺基酸殘基之區域、包含K282的胺基酸殘基之區域、包含K316的胺基酸殘基之區域以及包含H216及/或R218的胺基酸殘基之區域中之1個或2個以上區域。
如請求項1至4中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其中，前述抗gpNMB抗體亦特異性結合至小鼠gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處。
如請求項1至5中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其具有選自使機能異常小神經膠質細胞的數量減少之活性、去除類澱粉蛋白β寡聚物之活性、使突觸數量增加之活性及使認知機能恢復之活性中之1種或2種以上活性。
如請求項1至6中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其係單株抗體或其片段或者該等的衍生物。
如請求項1至7中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其至少包含重鏈可變區，前述重鏈可變區具有 (1)作為CDR-H1，SEQ ID NO：1所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：1所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：3所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：3所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：3所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：5所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：5所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：5所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、75.0%以上、83.3%以上或91.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (2)作為CDR-H1，SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者， (3)作為CDR-H1，SEQ ID NO：33所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：33所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：33所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：35所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：35所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：35所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：37所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：37所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：37所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者， (4)作為CDR-H1，SEQ ID NO：49所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：49所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：49所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：51所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：51所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：51所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：53所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：53所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：53所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、68.7%以上、75.0%以上、81.2%以上、87.5%以上或93.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (5)作為CDR-H1，SEQ ID NO：65所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：65所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：65所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：67所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：67所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：67所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：69所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：69所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處或5處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：69所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、78.5%以上、85.7%以上或92.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (6)作為CDR-H1，SEQ ID NO：81所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：81所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：81所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：83所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：83所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：83所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：85所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：85所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：85所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (7)作為CDR-H1，SEQ ID NO：97所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：97所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：97所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：99所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：99所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：99所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：101所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：101所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：101所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (8)作為CDR-H1，SEQ ID NO：113所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：113所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：113所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：115所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：115所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：115所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：117所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：117所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：117所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者， (9)作為CDR-H1，SEQ ID NO：129所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：129所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：129所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：131所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：131所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：131所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：133所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：133所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：133所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者， (10)作為CDR-H1，SEQ ID NO：145所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：145所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：145所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：147所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：147所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：147所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：149所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：149所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：149所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列， (11)作為CDR-H1，SEQ ID NO：161所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：161所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：161所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：163所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：163所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：163所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：165所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：165所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：165所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、66.6%以上、73.3%以上、80.0%以上、86.6%以上或93.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列， (12)作為CDR-H1，SEQ ID NO：287所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：287所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：287所記載之胺基酸序列具有62.5%以上、75.0%以上或87.5%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：289所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：289所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：289所記載之胺基酸序列具有71.4%以上或85.7%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：291所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：291所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：291所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (13)作為CDR-H1，SEQ ID NO：17所記載之胺基酸序列中，第32位的天冬醯胺酸及第33位的色胺酸以外之任1處、2處、3處、4處、5處或6處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，作為CDR-H2，SEQ ID NO：19所記載之胺基酸序列中，第55位的天冬胺酸、第57位的苯基丙胺酸及第58位的蘇胺酸以外之任1處、2處、3處、4處或5處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，及作為CDR-H3，SEQ ID NO：21所記載之胺基酸序列中，第98位的精胺酸、第100位的甘胺酸及第109位的甘胺酸以外之任1處、2處、3處、4處、5處、6處、7處、8處、9處、10處、11處或12處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列。
如請求項1至7中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其至少包含重鏈可變區，前述重鏈可變區具有 (1)SEQ ID NO：13所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：13所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (2)SEQ ID NO：29所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：29所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (3)SEQ ID NO：45所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：45所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (4)SEQ ID NO：61所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：61所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (5)SEQ ID NO：77所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：77所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (6)SEQ ID NO：93所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：93所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (7)SEQ ID NO：109所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：109所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (8)SEQ ID NO：125所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：125所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (9)SEQ ID NO：141所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：141所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (10)SEQ ID NO：157所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：157所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (11)SEQ ID NO：173所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：173所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (12)SEQ ID NO：299所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：299所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列。
如請求項8或9之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其中，前述重鏈可變區包含人類免疫球蛋白的任何類別的框架序列作為框架序列。
如請求項8至10中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其進一步包含重鏈恆定區，前述重鏈恆定區具有人類免疫球蛋白的任何類別的重鏈恆定區的胺基酸序列。
如請求項1至11中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其至少包含輕鏈可變區，前述輕鏈可變區具有 (1)作為CDR-L1，SEQ ID NO：7所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：7所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：7所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：9所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：9所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：9所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：11所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：11所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：11所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (2)作為CDR-L1，SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (3)作為CDR-L1，SEQ ID NO：39所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：39所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：39所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：41所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：41所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：41所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：43所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：43所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：43所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (4)作為CDR-L1，SEQ ID NO：55所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：55所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：55所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：57所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：57所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：57所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：59所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：59所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：59所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (5)作為CDR-L1，SEQ ID NO：71所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：71所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：71所記載之胺基酸序列具有60.0%以上或80.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：73所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：73所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：73所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：75所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：75所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：75所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (6)作為CDR-L1，SEQ ID NO：87所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：87所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：87所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：89所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：89所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：89所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：91所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：91所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：91所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (7)作為CDR-L1，SEQ ID NO：103所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：103所記載之胺基酸序列中之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：103所記載之胺基酸序列具有66.6%以上或83.3%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：105所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：105所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：105所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：107所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：107所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：107所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (8)作為CDR-L1，SEQ ID NO：119所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：119所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：119所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：121所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：121所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：121所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：123所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：123所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：123所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (9)作為CDR-L1，SEQ ID NO：135所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：135所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：135所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：137所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：137所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：137所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：139所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：139所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：139所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (10)作為CDR-L1，SEQ ID NO：151所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：151所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：151所記載之胺基酸序列具有60.0%以上、70.0%以上、80.0%以上或90.0%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：153所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：153所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：153所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：155所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：155所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：155所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列， (11)作為CDR-L1，SEQ ID NO：167所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：167所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：167所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：169所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：169所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：169所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：171所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：171所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：171所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列， (12)作為CDR-L1，SEQ ID NO：293所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：293所記載之胺基酸序列中之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：293所記載之胺基酸序列具有64.2%以上、71.4%以上、81.8%以上或90.9%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：295所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：295所記載之胺基酸序列中之任1處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：295所記載之胺基酸序列具有66.6%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：297所記載之胺基酸序列，或SEQ ID NO：297所記載之胺基酸序列中之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：297所記載之胺基酸序列具有66.6%以上、77.7%以上或88.8%以上的相似性(較佳為同一性)之胺基酸序列，或者 (13)作為CDR-L1，SEQ ID NO：23所記載之胺基酸序列中，第29位的異白胺酸及第31位的酪胺酸以外之任1處、2處或3處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，作為CDR-L2，SEQ ID NO：25所記載之胺基酸序列中，第50位的蘇胺酸以外之任1處或2處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列，及作為CDR-L3，SEQ ID NO：27所記載之胺基酸序列中，第88位的組胺酸、第89位的麩醯胺酸、第90位的色胺酸、第92位的絲胺酸及第93位的酪胺酸以外之任1處、2處、3處或4處的胺基酸殘基發生取代、缺失或插入而得之胺基酸序列。
如請求項1至11中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其至少包含輕鏈可變區，前述輕鏈可變區具有 (1)SEQ ID NO：15所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：15所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (2)SEQ ID NO：31所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：31所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (3)SEQ ID NO：47所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：47所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (4)SEQ ID NO：63所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：63所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (5)SEQ ID NO：79所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：79所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (6)SEQ ID NO：95所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：95所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (7)SEQ ID NO：111所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：111所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (8)SEQ ID NO：127所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：127所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (9)SEQ ID NO：143所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：143所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (10)SEQ ID NO：159所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：159所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (11)SEQ ID NO：175所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：175所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列，或者 (12)SEQ ID NO：301所記載之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：301所記載之胺基酸序列具有60%以上的相似性之胺基酸序列。
如請求項12或13之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其中，前述輕鏈可變區包含人類免疫球蛋白的任何類別的框架序列作為框架序列。
如請求項12至14中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其進一步包含輕鏈恆定區，前述輕鏈恆定區具有人類免疫球蛋白的任何類別的輕鏈恆定區的胺基酸序列。
如請求項1至15中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其係Fab、scFv、雙價抗體(diabody)、奈米抗體(nanobody)、VHH、雙特異性抗體或多特異性抗體或者該等的衍生物。
一種抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物，其對於向gpNMB的橫跨PMEL-CAF樣結構域至PKD結構域之區域的至少1處之結合，與如請求項1至16中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物進行競爭性結合。
一種核酸分子，其係由編碼出如請求項1至17中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物之多核苷酸序列所組成。
一種選殖載體或表現載體，其包含至少一種如請求項18之核酸分子。
一種重組體細胞，其經導入如請求項19之載體。
一種用於製造如請求項1至17中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物之方法，其包含將如請求項20之重組體細胞進行培養。
一種用於製造如請求項1至17中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物之方法，其包含將與具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的包含D287及/或H301的胺基酸殘基之區域及/或包含R214及/或R215的胺基酸殘基之區域具有同一胺基酸序列之多肽投予動物，採取在該動物的體內所產生之抗體或其片段或者該等的衍生物。
一種疫苗，其具有促進如請求項1至17中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物的產生之活性，該疫苗包含與具有SEQ ID NO：209的胺基酸序列之人類gpNMB的包含D287及/或H301的胺基酸殘基之區域及/或包含R214及/或R215的胺基酸殘基之區域具有同一胺基酸序列之多肽。
一種醫藥組成物，其包含選自由如請求項1至17中任一項之抗gpNMB抗體或其片段或者該等的衍生物、如請求項18之核酸分子、如請求項19之載體及如請求項20之重組體細胞所組成之群組之1者或2者以上作為有效成分。
如請求項24之醫藥組成物，其係用於減低對象的機能異常小神經膠質細胞的數量，及/或用於去除對象的類澱粉蛋白β寡聚物，及/或用於使對象的突觸數量增加，及/或用於治療或預防對象的神經退化性疾病。
一種醫藥組成物，其係用於去除對象的類澱粉蛋白β寡聚物，及/或用於使對象的突觸數量增加，及/或用於治療或預防對象的神經退化性疾病，該醫藥組成物包含具有使機能異常小神經膠質細胞的數量減少之活性之藥劑作為有效成分。
如請求項25或26之醫藥組成物，其中，神經退化性疾病為阿茲海默症。
如請求項27之醫藥組成物，其進一步包含第2活性成分。
如請求項28之醫藥組成物，其中，第2活性成分為選自抗Tau蛋白抗體、抗類澱粉蛋白β抗體、抗CD33抗體、抗信號素4D抗體、抗TNFα抗體、抗分揀蛋白抗體、抗半乳糖特異性凝集素(半乳糖凝集素)3抗體及抗TREM2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2)抗體中之1種或2種以上。
如請求項28之醫藥組成物，其中，第2活性成分為包含選自Tau蛋白、類澱粉蛋白β、CD33、信號素4D、TNFα、分揀蛋白、半乳糖特異性凝集素(半乳糖凝集素)3及TREM2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2)中之1種或2種以上蛋白質的全長或部分長的多肽或者編碼出該等之核酸之疫苗。