TW202348799A - 用補體旁路途徑抑制劑治療鐮狀細胞病或β地中海貧血之方法 - Google Patents

Abstract

本發明關於用於治療鐮狀細胞病（SCD）、β地中海貧血（BT）、鐮狀細胞BT之方法、用途和組成物。更特別地，本發明關於使用抗體或其片段、核酸分子、肽、小分子或適配體等補體途徑組分（例如，因子P（備解素））抑制劑治療患有SCD、BT或鐮狀細胞BT的患者。

Description

用補體旁路途徑抑制劑治療鐮狀細胞病或β地中海貧血之方法

鐮狀細胞病（SCD）係全球最常見的單基因疾病。在一些形式下，這種疾病係由β球蛋白基因中的突變引起的，例如，β球蛋白基因中的導致位置6處麩胺酸被纈胺酸取代的單核苷酸突變，該基因亦為導致β地中海貧血（BT）和鐮狀細胞BT的原因。儘管廣泛認識到該疾病的根本原因，但控制SCD症狀的可用治療選擇很少。SCD的兩個主要表現，貧血和血管閉塞危象（VOC），影響SCD患者的死亡率、發病率和生活品質。儘管SCD患者有兩種經批准的治療選擇，羥基脲和L-麩醯胺酸，但它們通常被認為是減弱疾病症狀的次優方案。因此，在本領域中對治療此類病症存在需要。

本文描述了特異性或基本上特異性結合補體途徑組分（例如，因子P（備解素））並且選擇性阻斷旁路補體途徑激活的組成物。藉由抑制該旁路補體途徑的功能活性，例如，藉由抑制備解素，本文所述之旁路補體途徑抑制劑（例如，抗因子P單價抗體或其片段）抑制旁路補體途徑誘導的攻膜複合物的組裝。此外，單個備解素分子與備解素抑制劑的選擇性結合可以減少由聚集引起的不期望的免疫複合物。因此，備解素（例如，備解素單體或多聚體）的選擇性靶向可轉而改善鐮狀細胞病（SCD）、β地中海貧血（BT）或鐮狀細胞BT患者的臨床益處。

本揭露部分地基於以下發現，旁路補體途徑的抑制劑，例如像因子P（備解素）抑制劑，可以減弱甚至停止SCD的症狀。藉由使用已建立的SCD實驗室模型（經受缺氧條件的Townes SS小鼠），本揭露首次證明，用抗備解素抑制劑治療動物抑制了SCD的病理生理學，關於：(1) 抑制紅血球（RBC）上的補體沈積；(2) 減弱血管內溶血；和/或降低VOC的嚴重程度。更特別地，使用已建立的細胞模型，本揭露顯示了，通過用抗備解素單株抗體（MAb）預處理逆轉了在缺氧條件下SCD小鼠RBC中C5b9和C3的補體片段沈積增強。此外，藉由用抗備解素MAb預處理有效減弱了在缺氧條件下血管內溶血水平的增加（藉由血漿乳酸脫氫酶（LDH）活性、游離血基質和游離血紅素和/或總膽紅素水平測定）。第三，藉由用抗備解素MAb預處理有效降低了在缺氧條件下SCD小鼠的肺和肝等重要器官的血管中血管閉塞的增加，而在用緩衝液預處理的假（對照）SCD小鼠中未觀察到這種影響。該等數據表明，抗補體抗體（如抗備解素抗體）在細胞和器官水平上均保護SCD動物免受損傷。本揭露提供的科學證據支持補體抑制劑（尤其是備解素拮抗劑，如抗備解素抗體）在治療SCD和相關病症（諸如BT和鐮刀BT）中之用途。

在一個方面，本揭露的特徵係一種治療受試者中SCD之方法，該方法包括向該受試者投與有效量的包括補體旁路途徑抑制劑的組成物。

在另一方面，本揭露的特徵係一種治療受試者中BT之方法，該方法包括向該受試者投與有效量的包括補體旁路途徑抑制劑的組成物。

在另一方面，本揭露的特徵係一種治療受試者中鐮狀細胞BT之方法，該方法包括向該受試者投與有效量的包括補體旁路途徑抑制劑的組成物。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該補體旁路途徑抑制劑選自由抗體或其抗原結合片段、肽、小分子、核酸分子和適配體組成之群組。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該補體旁路途徑抑制劑係備解素抑制劑。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該備解素抑制劑係抗備解素抗體或其抗原結合片段。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該抗備解素抗體或其抗原結合片段包括： CDR-H1（SEQ ID NO: 2）、CDR-H2（SEQ ID NO: 3）和CDR-H3（SEQ ID NO: 4）。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該抗備解素抗體或其抗原結合片段包括：CDR-H1（SEQ ID NO: 7）、CDR-H2（SEQ ID NO: 8）、CDR-H3（SEQ ID NO: 9）、CDR-L1（SEQ ID NO: 10）、CDR-L2（SEQ ID NO: 11）和CDR-L3（SEQ ID NO: 12）；CDR-H1（SEQ ID NO: 13）、CDR-H2（SEQ ID NO: 14）、CDR-H3（SEQ ID NO: 15）、CDR-L1（SEQ ID NO: 16）、CDR-L2（SEQ ID NO: 17）和CDR-L3（SEQ ID NO: 18）；CDR-H1（SEQ ID NO: 19）、CDR-H2（SEQ ID NO: 20）、CDR-H3（SEQ ID NO: 21）、CDR-L1（SEQ ID NO: 22）、CDR-L2（SEQ ID NO: 23）和CDR-L3（SEQ ID NO: 24）；或CDR-H1（SEQ ID NO: 25）、CDR-H2（SEQ ID NO: 26）、CDR-H3（SEQ ID NO: 27）、CDR-L1（SEQ ID NO: 29）、CDR-L2（SEQ ID NO: 29）和CDR-L3（SEQ ID NO: 30）。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該抗備解素抗體包括： SEQ ID NO: 43的重鏈（HC）和SEQ ID NO: 44的輕鏈（LC）；SEQ ID NO: 45的HC和SEQ ID NO: 46的LC；SEQ ID NO: 47的HC和SEQ ID NO: 48的LC；SEQ ID NO: 49的HC和SEQ ID NO: 50的LC；SEQ ID NO: 51的HC和SEQ ID NO: 52的LC；或SEQ ID NO: 53的HC和SEQ ID NO: 44的LC。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該抗備解素抗體或其抗原結合片段包括：SEQ ID NO: 6的抗FP VHH組分；SEQ ID NO:6的序列；SEQ ID NO: 31的V _HH；SEQ ID NO: 32的V _HH；SEQ ID NO: 33的V _HH；或SEQ ID NO: 34的V _HH。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該肽抑制補體因子C3。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該小分子係補體因子D抑制劑。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該組成物包括補體抑制劑和藥學上可接受的載劑。

在任何前述方面的一些實施方式中，該方法降低了該受試者的血管內溶血。

在前述方面的一些實施方式中，SCD包括溶血性貧血或急性VOC事件。在一些實施方式中，VOC事件係肺VOC和/或肝VOC。例如，在一些實施方式中，該肺VOC表現為急性胸腔綜合症（ACS）和/或慢性肺病；和/或該肝VOC表現為嚴重腹痛和/或肝功能障礙。

在任何前述方面的一些實施方式中，該受試者呈現腹部鼓脹、右上腹痛或急性疼痛性肝腫大。

在任何前述方面的一些實施方式中，該受試者係被診斷為患有SCD、BT或鐮狀細胞BT的人患者。

在任何前述方面的一些實施方式中，該人患者未滿18歲。

在前述方面的一些實施方式中，該患有SCD的受試者被診斷為具有β球蛋白基因中的突變。例如，在一些實施方式中，該β球蛋白基因中的突變係β球蛋白基因中的單核苷酸突變。在一些實施方式中，該β球蛋白基因中的單核苷酸突變導致相對於如下的SEQ ID NO: 1在位置6處麩胺酸被纈胺酸取代：VHLTP EEKSAVTALWGKVNVDEVGGEALGRLLVVYPWTQRFFESFGDLS TPDAVMGNPKVKAHGKKVLGAFSDGLAHLDNLKGTFATLSELHCDKLHVDPENFRLLGNVLVCVLAHHFGKEFTPPVQAAYQKVVAGVANALAHKYH。

在前述方面的一些實施方式中，該SCD包括紅血球（RBC）中的補體沈積。例如，在一些實施方式中，該SCD包括RBC中的C5b9沈積。

在前述方面的一些實施方式中，該SCD包括血管內溶血（IVH）。在一些實施方式中，該IVH的特徵在於包括LDH、膽紅素、游離血紅素和游離血基質的至少一種標誌物的增加。

在任何前述方面的一些實施方式中，在向該受試者投與該補體旁路途徑抑制劑後，該受試者表現出SCD、BT或鐮狀細胞BT表型的降低。例如，在一些實施方式中，該SCD表型包括導致血管組織損害的炎症或細胞毒性增加；VOC事件觸發的疼痛加劇；或SCD患者的死亡率或發病率增加。

在任何前述方面的一些實施方式中，該組成物通過靜脈內投與。

在另一方面，本揭露的特徵係一種用於在缺氧條件下提高細胞活力或降低細胞死亡之方法，該方法包括使該細胞與有效量的包含補體旁路途徑抑制劑的組成物接觸。

在前述方面的一些實施方式中，在體內接觸該等細胞。 在前述方面的一些實施方式中，該細胞係鐮狀細胞

在任何前述方面的一些實施方式中，SCD的特徵在於選自以下的特徵：(a) 補體C3和/或C5b9在受影響細胞（例如，RBC）中的沈積增加，尤其是在觸發條件（例如，缺氧）下；(b) 新生血管溶血增加，尤其是在觸發條件（例如，缺氧）下，其中溶血增加的特徵在於血漿LDH活性/水平、游離血基質和/或游離血紅素水平和/或總膽紅素水平的增加；或 (c) VOC的嚴重程度增加，尤其是在觸發條件（例如，缺氧）下。

在任何前述方面的一些實施方式中，用補體抑制劑治療導致選自以下的結果：(a) 抑制或逆轉該SCD受試者的RBC中C3和C5b9的補體片段沈積，例如在缺氧條件下；(b) 減弱或逆轉缺氧條件下血管內溶血（如測量到血漿LDH活性/水平、游離血基質和/或游離血紅素水平和/或總膽紅素水平增加）的水平；或 (c) 降低或逆轉該SCD受試者的肺、腎、肝和脾等重要器官血管中的血管閉塞。例如，在一些實施方式中，與用羥基脲治療該受試者相比，用補體抑制劑治療導致來自 (a)-(c) 的至少一個結果的改善。

在另一方面，本揭露的特徵係一種包括補體旁路途徑抑制劑的組成物，該組成物用於在治療受試者的SCD或與之相關的症狀中使用，特別是用於提高血球的活力，該等血球含有使其易受缺氧或低氧脅迫影響的一或多個突變，例如，正常血紅素A（α2ß2）到血紅素S（α2ß 6 Val2）的突變或RBC的β球蛋白基因中的突變。

在另一方面，本揭露的特徵係一種包括補體旁路途徑抑制劑的組成物，該組成物用於在缺氧條件下提高細胞活力或降低細胞死亡中使用。

在前述方面的一些實施方式中，補體旁路途徑抑制劑係備解素抑制劑。

在前述方面的一些實施方式中，備解素抑制劑選自包括抗備解素抗體或包含與備解素結合的至少一個部分的雙特異性抗體之群組。

在前述方面中任一項的一些實施方式中，該補體旁路途徑抑制劑係選自由小干擾RNA、短髮夾RNA、微小RNA和反義寡核苷酸組成之群組的核酸分子。在一些實施方式中，該核酸分子與編碼補體C3的內源性核酸序列的一部分互補。

本揭露至少部分地基於以下驚人發現，補體抑制劑（例如，備解素抑制劑，例如，抗備解素抗體、核酸分子、肽、小分子或適配體）提供令人驚訝的能力來減弱與SCD、BT或鐮狀細胞BT相關的發病機制。與包含羥基脲（HU）的標準治療方案相比，對抗備解素抗體療法的比較評估表明，在缺氧條件下，該抗備解素抗體在減弱鐮狀細胞小鼠中C3沈積和伴隨的C5b9沈積的方面優於HU。使用本文所述之組成物和方法，補體蛋白（例如，備解素）可以被有效抑制，以治療SCD、BT或鐮狀細胞BT。

本揭露部分基於以下發現，即補體蛋白因子P（備解素）在鐮狀細胞病（SCD）的發展和/或表現中的作用，該病係一種危及生命的疾病，患者的生活品質較差。利用公認的動物模型（例如Towne’s SCD小鼠模型，其中小鼠血紅素α和β基因被含有具有單個胺基酸替換（Glu→Val）的鐮狀細胞突變（β ^S）的相應人基因替換），本申請首次證明了補體旁路途徑（CAP）抑制劑（例如，抗備解素抗體）迄今未被認識到的作用，用於體內SCD或與之相關的症狀的有效改善。 定義

在詳細描述本揭露之前，應當理解，本揭露不限於特定的組成物或生物系統，該等當然可以改變。還應理解的是，本文所用的術語僅出於描述特定實施方式之目的，而並不意圖進行限制。

如在本說明書和所附申請專利範圍中所使用的，除非內容另有明確指示，單數形式「一個/一種（a/an）」和「該（the）」包括複數指示物。因此，例如，提及「分子」視需要包括兩個或多個此類分子的組合，諸如此類。

術語「和/或」包括一或多個相關列出項目的任何和所有可能組合，以及在備選方案（「或」）中解釋時組合的缺少。

應當理解，本文所述之本揭露的方面和實施方式包括「包含」、「由……組成」和「基本上由……組成」方面和實施方式。

術語「約」係指該值的正負10%的範圍，例如，「約5」係指4.5至5.5，除非本揭露的上下文另有指示或與這種解釋不一致。例如，在諸如「約49、約50、約55」之類的數值列表中，「約50」係指延伸到前一個和後一個數值之間的一或多個間隔的一半以下的範圍，例如，超過49.5到低於52.5。

術語「基本上」意味著足以達到預期目的。因此，術語「基本上」允許相對於絕對或完全狀態、尺寸、測量值、結果等諸如此類如本領域普遍技術者所預料的微小、不明顯的變化，但不會明顯影響整體性能（例如，+/-10%）。

在本揭露提供數值範圍的情況下，意圖係該範圍的上限和下限之間的每個中間值以及該所述範圍內的任何其他所述值或中間值均包含在本揭露中。例如，如果規定了1 mM到8 mM的範圍，則意在明確揭露2 mM、3 mM、4 mM、5 mM、6 mM和7 mM。

術語「受試者」可為任何動物，例如，哺乳動物。受試者可為例如人、非人靈長類動物（例如，猴、狒狒或黑猩猩）、馬、母牛、豬、綿羊、山羊、狗、貓、兔、豚鼠、沙鼠、倉鼠、大鼠或小鼠。包括例如，轉基因動物或基因改變（例如，敲除或敲入）的動物。

如本文所用，「需要預防」、「需要治療」或「有需要」的受試者係指根據適當的醫務工作者（例如，就人而言，是醫生、護士或護理工作者；在非人哺乳動物的情況下，則是獸醫）的判斷將從給定的治療（例如用於治療補體介導的疾病或障礙的特定治療劑或預防劑或診斷劑）中合理獲益的人。

如本文所用，術語「治療（「treat」或「treating」）」係指提供干預，例如，為受試者提供任何類型的醫療或外科管理。可以提供治療以逆轉、緩解、抑制障礙或病症的進展，預防或降低障礙或病症的可能性；或逆轉、緩解、抑制或預防障礙或病症的一或多種症狀或表現（例如，病理生理學）的進展，預防或降低該障礙或病症的一或多種症狀或表現的可能性。「預防」係指使得在至少一些個體中至少在一段時間內不發生障礙或病症，或其症狀或表現。治療可以包括在出現指示補體介導的病症的一或多種症狀或表現後，向受試者投與補體抑制劑（例如，備解素抑制劑），例如以逆轉、緩解、降低病症嚴重程度和/或抑制或預防病症進展和/或逆轉、緩解、降低病症的一或多種症狀或表現的嚴重程度和/或抑制病症的一或多種症狀或表現。根據本文所述之方法，可以將補體抑制劑（例如，備解素抑制劑）投與於已患補體介導的疾病的受試者或相對於普通人群成員而言患這種障礙的風險增加的受試者。這種抑制劑（例如，備解素抑制劑）可以預防性投與，即在病症的任何症狀或表現出現之前投與。典型地，在這種情況下，例如，當暴露於補體激活狀況（例如，缺氧）時，該受試者將面臨發展該病症的風險。

術語「症狀」係指疾病、疾患、損傷或某些在體內不正常的指示。症狀由經歷症狀的個體感覺到或注意到，但可能不容易被其他人（例如，非衛生保健專業人員）注意到。術語「體征」也指某些在體內不正常的指示，其可以被醫生、護士或其他衛生保健專業人員看到。

當與藥劑（例如，藥物）聯合使用時，術語「投與（「administration」或「administering」）」係指將該藥劑直接遞送到細胞或靶組織中或其上，或將該藥劑提供給患者，從而影響它靶向的組織。

術語「接觸」係指使藥劑（例如，抗備解素抗體）和靶標（例如，因子P）彼此足夠接近，以便一方對另一方施加生物效應（例如，抑制靶標）。在一些實施方式中，術語接觸意味著藥劑與靶標的結合。

如本文所用，術語「抑制劑」或「拮抗劑」係指抑制另一種物質（例如，補體組分，諸如備解素）的表現、活性和/或水平的物質，諸如抗體、核酸、適配體和小分子。當兩種物質對同一生理功能產生相反的影響時，就會發生功能或生理對抗。化學拮抗或滅活係兩種物質之間中和它們的作用的反應，例如，抗體與抗原的結合，其防止抗原作用於其靶標。處置拮抗係指改變物質的處置（其吸收、生物轉化、分佈或排泄），使得較少藥劑到達靶標或它在那裡的持久性被降低。術語「抑制」或「降低」或其語法變體係指靶標的特定水平或活性的降低或減弱，例如，靶標的水平或活性很少或基本上不可檢測到（最多是微不足道的量）。這種類型的抑制劑之實例係抗體、干擾RNA分子，諸如siRNA、miRNA和shRNA。除了包含抑制補體蛋白（例如，備解素）表現的物質外，備解素抑制劑的額外的實例包括減弱編碼補體蛋白（例如，備解素）的內源性基因的轉錄的物質，諸如小分子。在一些實施方式中，該抑制劑不是補體C5抑制劑。

如本文所用，關於基因的術語「破壞」係指防止功能基因產物的形成。如果基因產物實現了其正常（野生型）功能，那麼它就是有功能的。該基因的破壞防止了由該基因編碼的功能因子的表現，並且可能包含該基因編碼的序列中的一或多個鹼基的插入、缺失或取代，和/或在動物中表現基因所必需的啟動子和/或操作子。被破壞的基因可以藉由例如以下而被破壞：從動物基因組中去除基因的至少一部分、改變該基因以防止該基因編碼的功能因子表現、干擾RNA、或外源性基因表現顯性負因子。內源性備解素的破壞可以例如藉由使用以下來完成：抗備解素抗體、核酸分子、siRNA、shRNA、miRNA、反義寡核苷酸、適配體和基因編輯技術。

如本文所用，術語「內源性」描述了在特定生物體（例如，人）或生物體內特定位置（例如，器官、組織或細胞，諸如人細胞）中天然發現的分子（例如，代謝物、多肽、核酸或輔因子）。

如本文所用，術語「抗體」係指對抗原例如補體蛋白具有高結合親和力的抗體或其功能部分或片段。該術語以最廣泛的意義使用，包括多株和單株抗體，包括完整抗體和功能（抗原結合）抗體片段，包括片段抗原結合（Fab）片段、F(ab’)2片段、Fab'片段、Fv片段、重組IgG（rlgG）片段、單鏈抗體片段，包括單鏈可變片段（scFv）和單結構域抗體（例如，sdAb、sdFv、奈米抗體）片段。該術語涵蓋任何類別或亞類的天然的、基因工程改造的和/或以其他方式修飾的抗體，包括IgG及其亞類、IgM、IgE、IgA和IgD。

如本文所用，術語「單株抗體」係指對特定表位顯示單一結合特異性和親和力的抗體。因此，術語「人單株抗體」或「HuMab」係指顯示單一結合特異性並且具有源自人種系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區的抗體。

術語「單結構域抗體」，也稱為結構域抗體、VHH、VNAR或sdAb，係一種由單個單體可變抗體結構域組成並且在常規Fab區中缺少輕鏈以及重鏈的CH結構域的抗體。sdAb可以從例如駱駝科（例如，單峰駱駝、駱駝、美洲駝和羊駝）重鏈抗體的VHH結構域和軟骨魚（例如，鯊魚）重鏈抗體的VNAR結構域（稱為免疫球蛋白新抗原受體（IgNAR））產生。可替代地，sdAb可以藉由將人或小鼠的正常IgG的二聚體可變結構域藉由駱駝化幾個關鍵殘基而分裂成單體來產生。

術語「抗原」係指可特異性結合抗體或其抗原結合片段的任何分子，例如，蛋白質或其片段。

「抗體片段」包括完整抗體的一部分，例如，完整抗體的抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；雙抗體；線性抗體（Zapata等人 Protein Eng[蛋白質工程]. 8(10):1057-1062 (1995)）；單鏈抗體分子；以及由抗體片段形成的多特異性抗體。

術語「抗原片段」係指可以被抗原特異性抗體識別的抗原部分。

術語「抗原結合片段」係指抗體分子的一部分，其包含負責抗體和抗原之間特異性結合的胺基酸。抗原結合片段通常包含可變重鏈（VH）互補決定區（CDR）1-3（VHCDR1-3），視需要與可變輕鏈（VL）CDR 1-3（VLCDR1-3）一起。對於某些抗原，抗原結合結構域或抗原結合片段可僅結合抗原的一部分。被抗體特異性識別和結合的抗原的部分被稱為「表位」或「抗原決定簇」。抗原結合結構域和抗原結合片段包括Fab（抗原結合的片段）；F(ab')2片段，即具有兩個在鉸鏈區藉由二硫橋連接的Fab片段的二價片段；Fv片段；單鏈Fv片段（scFv）（參見，例如，Bird等人 Science[科學]242:423-426, 1988；和Huston 等人 Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊]85:5879-5883, 1988）；具有兩個VH和CH1結構域的Fd片段；dAb（Ward 等人, Nature[自然]341:544-546, 1989）。該Fab片段具有在恒定區之間藉由二硫鍵共價連接的VH-CH1和VL-CL結構域。該Fv片段較小，並且具有非共價連接的VH和VL結構域。為了克服非共價連接的結構域解離的趨勢，可以構建scFv。該scFv含有柔性多肽，它將 (1) VH的C末端連接到VL的N末端，或 (2) VL的C末端連接到VH的N末端。15-mer(Gly4Ser)3肽可用作連接子，但本領域已知其他連接子。在不含輕鏈的駱駝科抗體的情況下，抗原結合片段包含VHH的CDR。抗原結合片段可以使用常規技術獲得，並且以與完整抗體相同的方式篩選片段以獲得效用。抗原結合片段可以藉由重組DNA技術，或藉由酶或化學切割完整的免疫球蛋白產生。

如本文所用，術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變結構域中序列高變和/或形成結構定義環（「高變環」）的每個區域。通常，天然四鏈抗體包含六個HVR；三個在HCVR中（H1、H2、H3），三個在LCVR中（L1、L2、L3）。HVR通常包含來自高變環和/或來自「互補決定區」（CDR）的胺基酸殘基，後者具有最高的序列變異性和/或參與抗原識別。示例性高變環在胺基酸殘基26-32（L1）、50-52（L2）、91-96（L3）、26-32（H1）、53-55（H2）和96-101（H3）處發生。（Chothia和Lesk, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌]196:901-917 (1987)）。示例性CDR（CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、和CDR-H3）在L1的胺基酸殘基24-34、L2的50-56、L3的89-97、H1的31-35B、H2的50-65、和H3的95-102處發生。（Kabat等人 ,Sequences of Proteins of Immunological Interest [免疫學目的蛋白質序列], 第5版 馬里蘭州貝塞斯達市國立衛生研究院公共衛生服務(1991)）。除HCVR中的CDR1外，CDR通常包含形成高變環的胺基酸殘基。

如本文所用，術語「干擾RNA」係指抑制靶RNA轉錄物表現的RNA，諸如siRNA、miRNA或shRNA，例如，藉由 (i) 退火至靶RNA轉錄物，從而形成核酸雙鏈體；和 (ii) 促進核酸酶介導的RNA轉錄物降解和/或 (iii) 減緩、抑制或防止RNA轉錄物的翻譯，諸如藉由在空間上阻止功能性核糖體RNA轉錄物複合物的形成或以其他方式減弱靶RNA轉錄物中功能性蛋白質產物的形成。本文所述之干擾RNA可以以例如單股或雙股寡核苷酸的形式或以含有編碼該干擾RNA的轉基因的載體（例如，病毒載體）的形式提供給患者，例如患有SCD或本文所述相關障礙的人患者。示例性干擾RNA平臺例如描述於Lam等人, Mol. Ther. Nucleic Acids [ 分子療法核酸 ]4:e252 (2015)；Rao等人, Adv. Drug Deliv. Rev. [ 先進藥物輸送評論 ]61:746-769 (2009)；和Borel等人, Mol. [ 分子 ]22:692-701 (2014)，其中每一個的揭露內容藉由引用以其全文併入本文。

術語「小分子」係指分子量小於約2500 amu、小於約2000 amu、小於約1500 amu、小於約1000 amu或小於約750 amu的有機分子。在一些實施方式中，小分子包含一或多個雜原子。

本文中使用的術語「適配體」係指連接到特定靶標的寡核苷酸（通常是RNA分子）。「適配體」可以指寡核苷酸適配體（例如，RNA適配體）。如本文所用，術語「適配體」係指基於其結合其他分子的能力從隨機池中選擇的DNA或RNA分子。已經選擇了結合核酸、蛋白質、小有機化合物甚至整個生物體的適配體。適配體數據庫保存在aptamer(dot)icmb(dot)utexas(dot)edu/的萬維網上。

如本文所用，術語「人備解素」係指在血漿中發現的一種469個胺基酸的可溶性糖蛋白，其具有七個血小板響應蛋白I型重複序列（TSR），N末端結構域TSR0係截短結構域。人備解素係一種53 kDa的蛋白質，包括一個訊息肽（胺基酸1-28）和六個不相同的TSR重複序列，每個TSR重複序列約60個胺基酸，如下所示：胺基酸80-134（TSR1）、胺基酸139-191（TSR2）、胺基酸196-255（TSR3）、胺基酸260-313（TSR4）、胺基酸318-377（TSR5）和胺基酸382-462（TSR6）。備解素係藉由將棒狀單體寡聚成環狀二聚體、三聚體和四聚體而形成的。在GenBank數據庫中，人備解素的胺基酸序列的登錄號如下：對於人備解素，參見，例如，GenBank登錄號AAA36489、NP _—002612、AAH15756、AAP43692、S29126和CAA40914。備解素係旁路補體激活級聯的正調節因子。備解素的已知結合配體包括C3b、C3bB和C3bBb（Blatt, A.等人, Immunol. Rev.[免疫學評論], 274:172-90, 2016）。

如本文所用，術語「小鼠備解素」係指血漿中發現的457個胺基酸的可溶性糖蛋白，其具有七個TSR，N末端結構域TSR0被截短。小鼠備解素係一種50 kDa的蛋白質，包括一個訊息肽（胺基酸1-24）和六個不相同的TSR，每個TSR約60個胺基酸，如下所示：胺基酸73-130（TSR1）、胺基酸132-187（TSR2）、胺基酸189-251（TSR3）、胺基酸253-309（TSR4）、胺基酸311-372（TSR5）和胺基酸374-457（TSR6）。小鼠備解素係藉由棒狀單體低聚成環狀二聚體、三聚體和四聚體而形成的。例如，在GenBank數據庫（GenBank登錄號P11680和S05478）中發現小鼠備解素的胺基酸序列。

如本文所用，術語「旁路補體途徑」係指補體激活的三種途徑之一（其他途徑係經典途徑和凝集素途徑）。該旁路補體途徑通常被細菌、寄生蟲、病毒或真菌激活，儘管IgA Ab和某些IgL鏈也被報導激活了這一途徑。

如本文所用，術語「旁路補體途徑失調」係指旁路補體途徑提供宿主對病原體的防禦且清除免疫複合物和受損細胞以及進行免疫調節之能力的任何異常。旁路補體途徑失調可發生在液相中以及細胞表面，並且可導致補體過度激活或調節不足，兩者都會導致組織損傷。

如本文所用，術語「由旁路補體途徑失調介導的疾病」係指由旁路補體通路失調引起的身體功能、系統或器官的中斷、停止或障礙。此類疾病將受益於用本文所述之組成物或配製物治療。在一些實施方式中，該疾病係由旁路補體途徑提供宿主對病原體的防禦且清除免疫複合物和受損細胞以及進行免疫調節之能力的任何異常引起的。本文還包括由旁路補體途徑的一或多種組分或由旁路補體通路產生的產物的失調直接或間接介導的疾病。

如本文所用，術語「旁路補體途徑依賴性攻膜複合物組裝」係指作為旁路補體途徑激活的結果而形成的末端複合物，並且包括補體組分C5、C6、C7、C8和C9。攻膜複合物（MAC）的組裝導致細胞裂解。

如本文所用，術語「旁路補體途徑依賴性溶血」係指由增加的旁路補體途徑依賴性MAC組裝和/或紅血球上的沈積介導的紅血球裂解。

術語「樣本」或「生物樣本」係指從受試者獲得的任何實體（例如，含有細胞、血液、血漿、血清或其他血液級分、淋巴、尿液、腦脊液、腹水、唾液、母乳、眼淚、陰道排液、羊水、灌洗液、精液、腺體分泌物、滲出液、囊腫和糞便內容物的組成物）。

諸如補體抑制劑（例如，備解素抑制劑）等活性劑的「有效量」係指足以引發所期望生物反應（或相當於抑制不期望的生物反應）的活性劑的量。有效的特定藥劑的絕對量可以根據諸如期望的生物學終點、要遞送的藥劑、靶組織等因素而變化。「有效量」可以單劑量投與或多劑量投與。例如，治療劑的有效量可為足以緩解障礙的至少一種症狀的量。有效量可為足以減緩慢性和進展性障礙進展的量，例如，增加該障礙的一或多種症狀或體征出現之前的時間，或增加患有該障礙的個體達到一定程度損傷之前的時間。有效量可為足以允許比不存在藥劑時更快或更大程度地從疾病中恢復的量。為了本揭露之目的，有效量的藥物、化合物或藥物組成物係足以直接或間接完成預防性或治療性治療的量。如在臨床上下文中所理解的，有效量的補體抑制劑（例如，備解素抑制劑）或其藥物組成物可以與或可以不與另一種藥物、化合物或藥物組成物聯合使用。因此，在投與一或多種治療劑的上下文中，可以考慮「有效量」，如果與一或多種其他藥劑聯合使用，可以或已經達到期望的結果，則可以考慮以有效量投與單一補體抑制劑（例如，備解素抑制劑）。

如本文所用，「活性」指多肽的保留天然或天然存在的多肽的生物活性的一或多種形式，其中「生物」活性指由天然或天然存在的多肽引起的生物功能（例如，酶功能）。

「藥學上可接受的」載劑係指由非生物學或其他不期望的材料組成的載劑。術語「載劑」在本文中一般用於指除一或多種活性劑以外的藥物配製物中存在的任何組分，因此包括稀釋劑、黏合劑、潤滑劑、崩散劑、填料、著色劑、潤濕劑或乳化劑、pH緩衝劑、防腐劑等。類似地，本文所提供的分子的「藥學上可接受的」鹽或變體（例如，酯）係在生物學上或在其他方面不期望的鹽或變體。

如本文所用，術語「鹽」係指本主題揭露的化合物的相對無毒的無機和有機酸加成鹽。該等鹽可以在化合物的最終分離和純化過程中原位製備，或藉由將游離鹼形式的純化化合物與合適的有機或無機酸單獨反應並且分離由此形成的鹽來製備。藥學上可接受的鹼加成鹽可用金屬或胺（諸如鹼金屬和鹼土金屬氫氧化物）形成或由有機胺形成。用作陽離子的金屬之實例包括但不限於鈉、鉀、鎂、鈣等。合適的胺之實例包括但不限於N,N'-二苄基乙二胺、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普魯卡因。鹽可由無機酸硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物（諸如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、磷等）製備。代表性鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、順丁烯二酸鹽、延胡索酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸萘酯、葡庚酸鹽、乳糖酸鹽、十二烷基磺酸鹽和羥乙基磺酸鹽等。鹽也可以由有機酸製備，諸如脂族單羧酸和二羧酸、苯基取代的烷酸、羥基烷酸、烷二酸、芳香酸、脂族和芳香族磺酸等。代表性鹽包括乙酸鹽、丙酸鹽、辛酸鹽、異丁酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、延胡索酸鹽、順丁烯二酸鹽、苦杏仁酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、苯甲酸甲酯、二硝基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、乙酸苯酯、檸檬酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽等。

如本文所用，術語「藥學上可接受的鹽」或其變體係指在合理的醫學判斷範圍內，適用於與受試者（例如，人受試者）接觸而沒有過度毒性、刺激性、過敏反應等，與合理的益處/風險比相稱，並且對其預期用途有效的那些鹽，以及本揭露的化合物的兩性離子形式（如果可能）。因此，藥學上可接受的鹽可以包括基於鹼金屬和鹼土金屬的陽離子，諸如鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等，以及無毒的銨、四級銨和胺陽離子，包括但不限於銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。還考慮胺基酸的鹽，如精胺酸鹽、葡萄糖酸鹽、半乳糖醛酸鹽等。

如本文所用，術語「診斷」係指可以確定受試者是否可能患有給定疾病或病症（包括但不限於SCD和相關疾病和障礙）之方法。熟練的技術者通常根據一或多個診斷指標進行診斷，例如標誌物，其存在、不存在、量或量的變化指示疾病或病症的存在、嚴重程度或不存在。其他診斷指標可以包括患者病史；身體症狀，例如生命體征或表型、基因型或環境或遺傳因素的無法解釋的變化。熟練的技術者會理解，術語「診斷」係指將發生某些病程或結果的可能性增加；也就是說，與沒有表現出給定特徵（例如，診斷指標的存在或水平）的個體相比，表現出該特徵的患者更可能發生那一病程或結果。本揭露的診斷方法可以獨立使用，或與其他診斷方法組合使用，以確定病程或結果是否更可能發生在表現出給定特徵的患者中。

術語「細胞」係指組織的基本組成部分，諸如人、猴、小鼠、大鼠、兔、倉鼠、山羊、豬、狗、貓、雪貂、母牛、綿羊、馬等的細胞。該等細胞可為二倍體或單倍體（即，性細胞）。該等細胞也可為多倍體、非整倍體或無核細胞。該細胞可以來自特定組織或器官，諸如血液、心臟、肺、腎、肝、骨髓、胰臟、皮膚、骨、靜脈、動脈、角膜、血液、小腸、大腸、腦、脊髓、平滑肌、骨骼肌、卵巢、睪丸、子宮、臍帶等。該細胞還可為血小板、骨髓細胞、紅血球、淋巴球、脂肪細胞、成纖維細胞、上皮細胞、內皮細胞、平滑肌細胞、心肌、骨骼肌細胞、內分泌細胞、神經膠細胞、神經細胞、分泌細胞、屏障功能細胞、收縮細胞、吸收細胞、黏膜細胞、角膜緣細胞、幹細胞（全能、多能（pluripotent或multipotent））、未受精或受精卵母細胞、精子等。包括正常細胞和轉化細胞。

術語「鐮狀細胞病」或「SCD」在本領域中具有其一般含義，並且指的是一種遺傳性血液障礙，其中紅血球呈現異常、僵硬的鐮刀狀。紅血球鐮變降低細胞的靈活性，並且導致各種危及生命的併發症的風險。術語包括鐮狀細胞貧血、血紅素SC病和鐮狀細胞β地中海貧血。

如本文所用的「β地中海貧血（「beta thalassemia」或「β thalassemia」）」係指一種由於血紅素β鏈合成減少或缺失而導致的遺傳性血液障礙。這係β球蛋白基因中或附近的一或多個突變的結果。術語「血管閉塞」或「VOC」在本領域中具有其一般含義，例如，與SCD的常見併發症有關，該SCD導致毛細血管閉塞和流向器官的血流受限，從而導致缺血、血管功能障礙、組織壞死和/或器官損害。VOC通常是血管閉塞性危象的一個組成部分，但也可能更為有限，臨床上無症狀，並且不會導致血管閉塞性危機住院。如本文所用，術語「血管閉塞性危象」係指SCD的疼痛併發症，導致住院，與毛細血管閉塞和器官血流受限相關，導致缺血、嚴重疼痛、壞死和器官損害。

術語「急性胸腔綜合症」係一種通常以發熱、胸痛和胸片上出現新浸潤為特徵的病症。在SCD上下文中，術語「慢性肺病」通常表現為影像學間質異常、肺功能受損，最嚴重的表現為肺動脈高壓。

如本文所用，術語「溶血性貧血」係指紅血球數（RBC）/mm或100 mL血液中血紅素的量低於正常值的任何情況，例如，由於紅血球的破壞。如本文所用，術語「血小板減少症」係指血液中循環的血小板數量低於血小板正常範圍的病症。

術語「補體沈積」係指導致補體（例如，C5b9或C3b）沈積在靶細胞（例如，RBC）上的活性或事件，以此方式觸發血液中含有補體相關蛋白組的一系列級聯（補體激活途徑）。此外，補體激活產生的蛋白質片段可以誘導免疫細胞的遷移、吞噬和激活。相關的下游事件包括，例如，(a) 靶細胞溶血，導致血球中血基質釋放和/或貧血；或 (b) C3調理作用，其可能導致吞噬作用和血管外溶血（EVH）；調理細胞與激活的內皮細胞的黏附；和/或嗜中性球和血小板的激活。

在SCD上下文中，術語「觸發」包括引發、傳播或加劇疾病症狀或病理（諸如血管閉塞性危象）的任何事件或現象。代表性的實例包括例如酸中毒、缺氧和脫水，所有該等都增強了SS血紅素的細胞內聚合（J. H. Jandl, Blood: Textbook of Hematology [血液：血液學教科書], 第2版, 利特爾&布朗出版社（Little, Brown and Company）, 波士頓, 1996, 第544-545頁）。

「確定核酸水平」係指藉由本領域已知的方法直接或間接檢測核酸（例如，mRNA）。測量mRNA水平之方法通常包括但不限於北方印漬術、核酸酶保護測定（NPA）、原位雜交（ISH）、RT-PCR和RNA定序（RNA-Seq）。

「確定蛋白質水平」係指藉由本領域已知的方法直接或間接檢測蛋白質。測量蛋白質水平之方法通常包括但不限於西方墨點法、免疫墨點法、酶聯免疫吸附測定（ELISA）、放射免疫測定（RIA）、免疫沈澱、免疫螢光、表面電漿共振、化學發光、螢光偏振、磷光、免疫組化分析、基質輔助雷射脫附/游離飛行時間（MALDI-TOF）質譜、液相層析（LC）-質譜、微細胞測定、顯微鏡檢術、螢光激活細胞分選（FACS）和流式細胞術，以及基於蛋白質性質的測定，包括但不限於酶活性或與其他蛋白配偶體的相互作用。

術語「溶血性疾病」係指細胞裂解、細胞損害和炎症在疾病病理中起作用的任何障礙或疾病。溶血性疾病亦為一種炎症性障礙或疾病，其中旁路途徑（AP）激活導致細胞裂解、細胞損害和炎症。溶血性疾病包括以紅血球和/或血小板的病理性裂解為特徵的疾病。無核細胞諸如紅血球和血小板受到充分裂解。紅血球的裂解會釋放許多標誌物，例如，血基質、血紅素、LDH、膽紅素，其中一些標誌物可能會產生血液和器官的病理結果。有核細胞諸如嗜中性球、單核細胞、T淋巴球可以被MAC攻擊，但不會完全裂解。術語「血管內溶血」係指無核細胞和有核細胞的裂解，這係由AP激活以及細胞表面上相關的C5b-9的產生和沈積引起的。術語「血管外溶血」係指C3b沈積導致的細胞裂解和通過補體受體清除。C3b通過激活經典途徑和旁路途徑產生。本揭露關於經由旁路補體途徑產生的C3b。

術語「靜脈內」通常意味著「在靜脈內」，指的是通過脈管系統進入受試者的靶細胞或組織。在靜脈內（IV）療法中，將液體物質直接投與至靜脈中。與其他投與途徑相比，靜脈內途徑可能是全身遞送藥劑的最快途徑。一些藥物、輸血和非腸道（例如，非消化性）營養物使用標準遞送系統靜脈內投與。

術語「缺氧」係指氧氣水平低於正常水平的情況，諸如低於正常氧氣水平的21%、15%、12%、9%、6%、3%或2%。相比之下，「常氧」係指氧氣水平基本接近正常水平的情況，例如，在正常水平的+/-10%範圍內。

如本文所用，術語「檢測」係指藉由樣本中的一或多個參數的測量值來確定與樣本相關的一個值或一組值的過程，並且可以進一步包括將測試樣本與參考樣本進行比較。根據本揭露，補體標誌物的檢測包括鑒定、測定、測量和/或定量一或多種標誌物。

如本文所用，術語「可能性」通常係指概率、相對概率、存在或不存在或程度。

如本文所用，術語「標誌物」係指可以作為正常生物過程、致病過程或對治療干預（例如，用補體抑制劑治療）的藥理學反應的指標而被客觀測量的特徵。標誌物的代表性類型包括，例如標誌物的結構（例如，序列或長度）或數量的分子變化，包含，例如標誌物的水平、濃度、活性或特性的變化。

如本文所用，術語「對照」係指測試樣本的參考，如對照健康受試者或未經治療的受試者，諸如此類。如本文所用，「參考樣本」係指用於比較的可能患有或可能不患有疾病的組織或細胞的樣本。因此，「參考」樣本因此提供了一個基礎，另一個樣本（例如，來自SCD患者的血液）可以與之進行比較。相反，「測試樣本」係指與參考樣本相比較的樣本。參考樣本不必是無病的，諸如當參考樣本和測試樣本取自按時間分開的同一患者時。

術語「水平」可以指二元（例如，不存在/存在）、定性（例如，不存在/低/中/高）或表明特定分子種類的存在的定量資訊（例如，與數量、頻率或濃度成比例的值）。蛋白質或核酸（例如，mRNA）的「水平降低」或「水平增加」係指與參考相比蛋白質或核酸（例如，mRNA）水平的降低或增加（例如，與參考相比，降低或增加了約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約100%、約150%、約200%、約300%、約400%、約500%或更多；降低或增加了超過約10%、約15%、約20%、約50%、約75%、約100%或約200%；降低或增加了低於約0.01倍、約0.02倍、約0.1倍、約0.3倍、約0.5倍、約0.8倍或更低；或增加了超過約1.2倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.8倍、約2.0倍、約3.0倍、約3.5倍、約4.5倍、約5.0倍、約10倍、約15倍、約20倍、約30倍、約40倍、約50倍、約100倍、約1000倍或更多）。可以將樣本中的蛋白質水平以相對於總蛋白質或核酸（例如，mRNA）的質量/體積（例如，g/dL、mg/mL、μg/mL、ng/mL）或百分比表示。

如本文所用，疾病或障礙的術語「處於風險中」係指傾向於經歷特定疾病的受試者（例如，人）。這種傾向可能是遺傳的（例如，或由於其他因素（例如，環境條件、高血壓、活動水平、代謝症候群等）。因此，不意欲將本揭露限於任何特定風險，也不意欲將本揭露限於與補體相關的任何特定類型的病症或功能障礙（例如，鐮狀細胞病）。

如本文所用，「聯合」係指除另一種治療模式外，還投與一種治療模式。因此，「聯合」係指在向個體投與另一種治療模式之前、期間或之後投與一種治療模式。

術語「藥物組成物」係指呈使得其中含有的活性成分的生物活性有效的形式，並且不含對投與該配製物的受試者具有不可接受的毒性的其他組分的製劑。

如本文所用，術語「特異性結合」、「選擇性結合」、「選擇性地結合」和「特異性地結合」係指抗體結合預定抗原上的表位。通常，當藉由BIACORE 3000儀器中的表面電漿共振（SPR）技術確定時，抗體結合的親和力（KD）約小於10 ^{− 7}M，諸如約小於10 ^-8M、10 ^{− 9}M或10 ^{− 10}M，甚至更低，這可以例如使用重組CDH11作為分析物和抗體作為配體來進行。在一些實施方式中，抗體與預定抗原的結合具有比其與除預定抗原或密切相關抗原之外的非特異性抗原（例如，BSA、酪蛋白）的結合親和力大至少兩倍的親和力。術語「識別抗原的抗體」和「抗原特異性抗體」在本文中與術語「特異性結合抗原的抗體」可互換使用。

如本文所用，「延遲疾病進展」係指推遲、阻礙、減緩、延緩、穩定和/或順延疾病（諸如癌症）的發展。這種延遲會有不同的時間長度，這取決於病史和/或正在接受治療的個體。正如熟悉該項技術者顯而易見的那樣，充分或顯著的延遲實際上可以包括預防，在這種情況下該個體不會發生疾病。例如，晚期癌症（諸如轉移的發展）可能會延遲。

如本文所用，術語「轉導（「transduction」和「transduce」）」係指將病毒載體構建體或其一部分引入細胞並且隨後在該細胞中表現由該載體構建體編碼的轉基因之方法。

如本文所用，術語「轉染」係指通常用於將外源性DNA引入原核或真核宿主細胞的各種技術中任一種，例如，電穿孔、脂質轉染、磷酸鈣沈澱、二乙胺基乙基（DEAE）葡聚糖轉染、NUCLEOFECTION™、擠壓蒸發、超音波蒸發、光學轉染、MAGNETOFECTION™、穿刺感染等。

如本文所用，術語「載體」意指包括但不限於表現目的基因或編碼序列的核酸分子，例如，編碼抗體的編碼序列。因此，一種類型的載體係病毒載體，其中可以將額外的DNA區段（例如，轉基因，例如，編碼本揭露的備解素抑制劑的轉基因）連接到病毒基因組中，然後可以向受試者投與病毒載體（例如，藉由電穿孔，例如，電穿孔到肌肉組織中），以允許以類似於基因療法的方式表現轉基因。

另一種類型的載體係「質體」，其係指圓形雙股DNA環，可以將額外的DNA區段連接到該環中。某些載體能夠在引入它們的宿主細胞中自主複製（例如，具有細菌複製起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體）。其他載體（例如，非附加型哺乳動物載體）可在引入該宿主細胞後整合到宿主細胞的基因組中，從而與宿主基因組一起複製。此外，某些載體能夠指導與它們可操作連接的基因的表現。此類載體在本文中稱為「重組表現載體」（或簡稱為「表現載體」）。一般來說，在重組DNA技術中應用的表現載體通常是質體的形式。 病理學中的補體系統

補體系統與機體的其他免疫系統聯合作用以抵禦細胞病原體和病毒病原體的入侵。儘管功能正常的補體系統提供強大防禦力來抵禦微生物感染，但補體途徑的不當調控或激活已牽涉到多種障礙的發病機制。

例如，1967年發表了第一份補體激活可能與SCD有關的報告（Francis和Womack. Am. J. Med. Technol. [美國醫學技術雜誌] 1967;33(2):77-86）。從那時起，研究報告了SCD患者血液中補體衍生片段水平的增加，表明SCD中補體被激活，並且表明補體可能在該疾病的病理生理學中發揮重要作用。

已知SCD病理係由β球蛋白基因的誤義突變引起的，導致球蛋白分子外表面的麩胺酸被纈胺酸取代。這種胺基酸取代使得鐮狀 細胞血紅素（HbS）不易溶解，並且在去氧時易於聚合。因此，攜帶聚合HbS的紅血球（例如，紅血球；RBC）不易變形，並且可能阻塞微血管。這種血管閉塞導致組織缺血和梗死，代表SCD患者發病和死亡的主要原因。SCD的臨床表現遠遠超出純合子球蛋白突變。研討會發現，鐮狀（SS）RBC與正常RBC不同，可以在體外黏附於受刺激的內皮細胞，並且SS-RBC的黏附與SCD的臨床嚴重程度相關。隨後的研究已經認識到血漿因子（諸如補體蛋白）在SS-RBC黏附到內皮中的重要性。在SCD的模型系統中，已經表明補體蛋白之一C5a在缺氧/再氧合誘導後被激活（例如，參見Vercellotti等人, Am. J. Hematol [ 美國血液學雜誌 ], 94:3 (2019), 327-338），進一步表明補體蛋白可能直接參與該障礙的發病機制。然而，重要的是，補體系統在SCD發病機制或其模型中的直接因果作用尚未得到證實。

β球蛋白基因的突變也會導致其他疾病，包括，例如，β地中海貧血（BT）。然而重型BT係由含有導致β球蛋白產生完全缺失的突變的β球蛋白基因的兩個等位基因引起的，中間型BT係歸因於β球蛋白鏈產生的減少和/或突變β球蛋白鏈的產生。BT係一種導致慢性貧血（例如，RBC缺乏）的疾病，這可能表明補體蛋白在遺傳相關障礙BT的發病機制中發揮了額外的作用。

本揭露至少部分地基於以下驚人發現，補體抑制劑（例如，備解素抑制劑，例如，抗備解素抗體、核酸分子、肽、小分子或適配體）提供令人驚訝的能力來減弱與SCD、BT或鐮狀細胞BT相關的發病機制。如本文所述，本揭露至少部分地基於以下發現，即用補體抑制劑（例如，備解素抑制劑）預處理有效地減弱SCD相關的發病機制，包括缺氧誘導的C5b9沈積、血管內溶血（IVH）以及重要器官諸如肺和肝中血管堵塞的程度。鑒於SCD的病理生理學普遍存在，該等特性特別有益，SCD的病理生理學包括貧血、氧化應激、溶血、炎症和血管閉塞。使用本文所述之組成物和方法，可以有效地抑制補體蛋白（例如，備解素）以治療SCD。 補體蛋白

有至少25種補體蛋白，它們係血漿蛋白和膜輔因子的複雜集合。血漿蛋白占脊椎動物血清中球蛋白的約10%。補體組分藉由在一系列複雜但精確的酶切割和膜結合事件中相互作用來實現其免疫防禦功能。由此引起的補體級聯使得具有調理、免疫調節和溶解功能的產物產生。

補體級聯可以通過經典途徑（CP）、凝集素途徑或旁路途徑（AP）進行。CP通常藉由抗體識別和結合靶細胞上的抗原位點來引發。凝集素途徑通常由甘露糖結合凝集素（MBL）與高甘露糖底物的結合引發。AP可以不依賴於抗體，並且由病原體表面上的某些分子引發。該等途徑在C3轉化酶處彙聚，在此處補體組分C3被活性蛋白酶切割以產生C3a和C3b。

補體組分C3的自發水解也可導致AP C3轉化酶引發，補體組分C3在血液的血漿級分中含量豐富。這個過程稱為「怠速運轉（tickover）」，通過C3中硫酯鍵的自發切割形成C3i或C3(H ₂0)。支持激活的C3結合和/或具有中性或正電荷特徵的表面（例如，細菌細胞表面）的存在促進了怠速運轉。C3(H ₂0)的形成允許血漿蛋白因子B的結合，這反過來又允許因子D將因子B切割成Ba和Bb。Bb片段仍然與C3結合，形成含有C3(H ₂0)Bb的複合物—「液相」或「引發」C3轉化酶。雖然只產生少量，但液相C3轉化酶可以將多種C3蛋白切割成C3a和C3b，並導致C3b的產生及其隨後與表面（例如，細菌表面）的共價結合。與表面結合的C3b結合的因子B被因子D切割，從而形成含有C3b,Bb的與表面結合的AP C3轉化酶複合物。

AP C5轉化酶（(C3b) ₂,Bb）在向AP C3轉化酶添加第二C3b單體後形成。第二C3b分子的作用係結合C5並將其呈遞以供Bb切割。AP C3和C5轉化酶藉由添加三聚體蛋白備解素而穩定化。備解素促進C3b與因子B的締合，並且為C3bBb在細胞表面上的組裝提供了集中點。備解素還抑制因子I造成的因子H介導的C3b切割。它與預先形成的旁路途徑C3轉化酶結合；然而，備解素結合並不是形成功能性旁路途徑C3或C5轉化酶所必需的。

CP C3轉化酶係在補體組分C1（C1q、C1r和C1s的複合物）與結合靶抗原（例如，微生物抗原）的抗體相互作用後形成的。C1的C1q部分與抗體-抗原複合物的結合導致C1的構形變化，從而激活C1r。活性C1r然後切割C1相關的C1，產生活性絲胺酸蛋白酶。活性C1s將補體組分C4切割成C4b和C4a。與C3b一樣，新生成的C4b片段包含高反應性硫醇，它很容易與目標表面（例如，微生物細胞表面）上的合適分子形成醯胺或酯鍵。C1s還將補體組分C2切割成C2b和C2a。由C4b和C2a形成的複合物係CP C3轉化酶，它能夠將C3加工成C3a和C3b。CP C5轉化酶（C4b、C2a、C3b）係在將C3b單體添加到CP C3轉化酶後形成的。

除了在C3和C5轉化酶中的作用外，C3b還通過與存在於抗原呈遞細胞（如巨噬細胞和樹突細胞）表面的補體受體相互作用，發揮調理素的作用。C3b的調理功能通常被認為是補體系統最重要的抗感染功能之一。具有阻斷C3b功能的遺傳病變的患者容易受到多種病原生物體的感染，而在補體級聯序列中的較後具有病變的患者，例如，具有阻斷C5功能的病變的患者被發現僅更容易感染奈瑟菌，然後只是稍微更容易。

AP和CP C5轉化酶將C5切割成C5a和C5b。C5的切割釋放C5b，這允許形成切割末端補體複合物C5b-9。C5b與C6、C7和C8結合以在靶細胞表面形成C5b-8複合物。在結合幾個C9分子後，形成攻膜複合物（MAC，C5b-9，末端補體複合物（「TCC」））。當足夠數量的MAC插入靶細胞膜時，它們產生的開口（MAC孔）介導靶細胞的快速滲透裂解。

C5的切割也會釋放C5a，這已被證明是一種有效的過敏毒素和趨化因子。 補體途徑抑制劑

本文所述之組成物結合並且抑制補體途徑的組分，並且可用於治療SCD、BT或鐮狀細胞BT。例如，備解素係旁路補體途徑的正調節因子。本文描述了結合並抑制補體蛋白（例如，備解素）並且可用於治療SCD、BT或鐮狀細胞BT的組成物。

本領域已知許多方法來確定化合物是否調節補體途徑組分的表現或活性，例如，以確定化合物是否是補體抑制劑（例如，備解素抑制劑）。該補體組分活性測定可為基於細胞的、基於細胞提取物的（例如，微粒體測定）、無細胞測定（例如，轉錄測定）或使用基本上純化的蛋白質。例如，化合物作為補體蛋白抑制劑的鑒定可以使用補體蛋白（例如，備解素）肝微粒體測定進行，例如，如以下所述：Shanklin等人 Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊] 88:2510-2514, 1991或Miyazaki等人 J. Biol. Chem.[生物化學雜誌] 275:30132-30138, 2000。在一些情況下，基於液相層析/質譜（LC/MS）的方法可用於測量補體蛋白的活性（例如，備解素活性），例如，如以下所述：Dillon等人 Anal. Chim. Acta. [ 分析化學學報 ]627(1):99-104, 2008。可以使用高通量測定，例如，如以下所述：Soulard等人 Anal. Chim. Acta. [ 分析化學學報 ]627(1):105-111, 2008。美國專利案號7,790,408中描述了測量補體蛋白的活性的仍進一步方法。

可以使用任何合適的方法來確定化合物是否與補體途徑組分（例如，備解素）結合，例如，質譜、表面電漿共振或免疫測定（例如，免疫沈澱或酶聯免疫吸附測定）。

可以使用任何合適的方法來確定化合物是否調節補體途徑組分（例如，備解素）的表現，例如，北方印漬術、西方墨點法、反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）、質譜或RNA定序。 補體抑制劑模式

旁路補體途徑抑制劑可以選自多種不同模式。補體抑制劑可為抗體、核酸分子（例如，DNA分子或RNA分子，例如，mRNA或抑制性RNA分子（例如，短干擾RNA（siRNA）、微小RNA（miRNA）或短髮夾RNA（shRNA））或雜交DNA-RNA分子）、肽、小分子（例如，備解素小分子抑制劑）、傳訊級聯抑制劑、傳訊級聯激活劑或表觀遺傳修飾劑）或適配體。該等模式中的任何一種都可為針對以下的補體抑制劑：補體蛋白的靶向（例如，抑制）功能；補體表現；補體結合；或補體傳訊。核酸分子或小分子可以包括修飾。例如，該修飾可為化學修飾，例如，與標誌物（例如，螢光標誌物或放射性標誌物）軛合。該修飾還可以包括與抗體軛合以將該藥劑靶向特定細胞或組織。此外，該修飾可為化學修飾、包裝修飾（例如，包裝在奈米顆粒或微粒內）或靶向修飾。 I. 抗補體旁路途徑抗體

本文描述了在補體旁路途徑中抑制蛋白質的抗補體旁路途徑抗體、抗體衍生物（例如，工程化抗體、人化抗體、嵌合抗體、取代抗體、人源化抗體等）及其抗體片段。本文所述之抑制性抗體（例如，中和、阻斷或耗竭）可以抑制例如補體旁路途徑中的蛋白質。

例如，本文所述的是單價抗備解素抗體、抗體衍生物（例如，工程化抗體、人化抗體、嵌合抗體、經取代抗體、人源化抗體等）及其抗體片段，其抑制備解素（補體旁路途徑的正調節因子），並且隨後破壞C3和C5轉化酶酶複合物的穩定性。本文所述之抑制性抗體（例如，中和、阻斷或耗竭）可以抑制例如備解素與C3b、C3Bb和C3bBb的結合。例如，本文所述之抗備解素抗體或其抗原結合片段係通過與備解素結合而降低或阻斷備解素的活性和/或功能的抗體。此類多肽可以具有本文所述之抑制性備解素抗體的互補決定區（CDR）中的一或多個或全部（參見，例如，下 表 1），或具有本文所述之重鏈（HC）、輕鏈（LC）、重鏈可變區（HCVR）或輕鏈可變區（LCVR）中的一種或多個（參見，例如，下 表 2）。抑制備解素導致旁路途徑補體激活降低，這表明對患有旁路途徑失調疾病（其中該旁路途徑被過度激活）的患者具有治療益處。例如，該抗備解素抗體或其抗原結合片段可藉由調節鐮狀細胞活性而有益於SCD、BT或鐮狀細胞BT的治療。 [ 表 1] ：抗備解素抗體的示例性 CDR 序列

SEQ ID NO:	CDR	序列
2	CDR-H1	GRISSIIHMA
3	CDR-H2	RVGTTVYADSVKG
4	CDR-H3	LQYEKHGGADY
7	CDR-H1	GFSLTTYGVH
8	CDR-H2	VIWSGGDTDYNASFIS
9	CDR-H3	NKDYYTNYDFTMDY
10	CDR-L1	KSSQSVLYSSNQKNFLA
11	CDR-L2	WASTRES
12	CDR-L3	HQYLSSYT
13	CDR-H1	GYTFIDYWIE
14	CDR-H2	EIFPGSGTINHNEKFK
15	CDR-H3	EGLDY
16	CDR-L1	SASSSVSYIY
17	CDR-L2	DTSTLAS
18	CDR-L3	QQWSRNPFT
19	CDR-H1	GFSLTSYGVH
20	CDR-H2	VIWSGGSTDYNAAFIS
21	CDR-H3	NKDFYSNYDYTMDY
22	CDR-L1	KSSQSVLYSSNQKNFLA
23	CDR-L2	WASTRES
24	CDR-L3	HQYLSSYT
25	CDR-H1	GYT*TAYGIN
26	CDR-H2	YIYIGNGYTDYNEKFKG
27	CDR-H3	SGWDEDYAMDF
28	CDR-L1	RASENIYSYLA
29	CDR-L2	HAKTLAE
30	CDR-L3	QHHYGPPPT

* 可為任何天然存在的胺基酸

在一些實施方式中，該抗體或其抗原結合片段包含含有VHCDR1-3和VLCDR1-3的全套CDR。例如，在第一方面，抗備解素抗體或其抗原結合片段可以包含：分別含有SEQ ID No: 7、8和9的VHCDR1-3序列，和分別含有SEQ ID No: 10、11和12的VLCDR1-3序列（FP1）。在第二方面，抗備解素抗體或其抗原結合片段可以包含：分別含有SEQ ID No: 13、14和15的VHCDR1-3序列，和分別含有SEQ ID No: 16、17和18的VLCDR1-3序列（FP2）。在第三方面，抗備解素抗體或其抗原結合片段可以包含：分別含有SEQ ID No: 19、20和21的VHCDR1-3序列，和分別含有SEQ ID No: 22、23和24的VLCDR1-3序列（FP3）。在第四方面，抗備解素抗體或其抗原結合片段可以包含：分別含有SEQ ID No: 25、26和27的VHCDR1-3序列，和分別含有SEQ ID No: 28、29和30的VLCDR1-3序列（FP4）。

在一些實施方式中，本揭露關於單價抗備解素抗體及其抗原結合片段之用途。代表性實例提供在WO 2018140956和美國公開案號 2019/0352381中，其揭露內容藉由引用併入本文。在第一方面，單價抗體或其抗原結合片段可以包含：分別含有SEQ ID NO: 2、3和4的VHCDR1-3序列。在一個實施方式中，本揭露關於分離的單價抗體或其抗體片段，其中該抗體或其抗體片段結合人備解素。在特定實施方式中，該抗體或片段係駱駝科抗體。在特定實施方式中，該抗體或片段係單結構域抗體。在特定實施方式中，該抗體或片段抑制人備解素的活性。

在一些實施方式中，該抗備解素抗體包括雙特異性抗體，特別是迷你抗體。在WO 2018140956中提供了雙特異性抗備解素迷你抗體的代表性類型，其藉由引用以其全文併入本文。在一些實施方式中，該雙特異性迷你抗體包含特異性結合第一抗原（例如，備解素或其抗原片段）的序列（例如，CDR）和特異性結合第二抗原（例如，白蛋白或其抗原片段）的序列（例如，CDR）。該備解素結合序列和該白蛋白結合序列的方向可以顛倒，即，相對於迷你抗體的胺基到羧基末端，該一或多個備解素結合序列可以在該一或多個白蛋白結合序列之前或之後（較佳的是在之後）。在一些實施方式中，備解素結合序列僅包含抗備解素抗體的抗體重鏈CDR（CDRH1-3），例如，分別是SEQ ID NO: 2-4的序列。較佳的是，該等備解素結合CDR位於迷你抗體的C末端。在一些實施方式中，經由連接子（例如，具有SEQ ID NO: 5的胺基酸序列的連接子），將一或多個備解素結合序列與白蛋白結合序列連接（例如，軛合）。在特定的實施方式中，該抗備解素抗體包含SEQ ID NO: 6的迷你抗體序列。 [ 表 2] ：抗備解素抗體的示例性可變區序列

SEQ ID NO:	可變區	序列
43	HC	MAVLGLLFCLVTFPSCVLSQVQLKQSGPGLVQPSQSLSISCTVSGFSLTTYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGDTDYNASFISRLRINKDTSKSQVFFKMNSLQADDTAYYCARNKDYYTNYDFTMDYWGQGTSVTVSS
44	LC	MESQTQVFLSLLLWVSGTCGNIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNFLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFILTINSVQVEDQAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK
45	HC	MDWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQLLQSGAEVMKPGASVTLSCKAIGYTFIDYWIEWIKQRPGHGLEWIGEIFPGSGTINHNEKFKDKASFSAHSSSNTAYMQLSRLTSEDSAIYYCAREGLDYWGQGTTLTVSS
46	LC	MDFQVQIFSFLLISASVIISRGQIVLTQSPAIMSASPGERVTMTCSASSSVSYIYWYQQKSGTSPKRWIFDTSTLASGVPTRFSGSGSGTSYSLTISSMETEDAATYYCQQWSRNPFTFGSGTKLEIK
47	HC	MAVLGLLFCLVTFPSCVLSQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGSTDYNAAFISRLSISKDTSKSQVFFKMNSLQPDDTAIYYCARNKDFYSNYDYTMDYWGQGTSVTVSS
48	LC	MESQTQVFLSLLLWVSGTCGNIMMTQSPSFLAVSAGEKVTLSCKSSQSVLYSSNQKNFLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK
49	HC	MAVLGLLFCLVTFPSCVLSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWVSVIWSGGDTDYNASFISRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNKDYYTNYDFTMDYWGQGTTVTVSS
50	LC	MESQTQVFLSLLLWVSGTCGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNQKNFLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK
51	HC	MDWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFIDYWIEWVRQAPGQGLEWMGEIFPGSGTINHNEKFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGLDYWGQGTLVTVSS
52	LC	MEAPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYIYWYQQKPGQAPRLLIYDTSTLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSRNPFTFGPGTKVDIK
53	HC	TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

本文所述之抗備解素抗體可以藉由使用全長備解素、備解素多肽和/或使用攜帶抗原性備解素表位的肽（例如，備解素多肽的片段）來製備。備解素肽和多肽可作為天然多肽、重組或合成重組多肽分離並且用於產生抗體。所有可用於產生抗備解素抗體的抗原都可用於產生單價抗體。合適的單價抗體形式和製備它們的方法係本領域已知的（例如，WO 2007/048037和WO 2007/059782，其全部內容藉由引用併入本文）。

該抗備解素抗體可為單株抗體或源自單株抗體。可藉由已知技術製備針對選定抗原的合適的單株抗體（「Monoclonal Antibodies: A manual of techniques,」 [「單株抗體：技術手冊」], Zola (CRC出版社, 1988)；「Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications,」 [「單株融合瘤抗體：技術和應用」], Hurrell (CRC出版社, 1982)，其全部內容藉由引用併入本文）。

在其他實施方式中，該抗體可為單結構域抗體，諸如V _HH。此類抗體天然存在於例如駱駝科和鯊魚中（Saerens, D.等人, Curr. Opin. Pharmacol.[當代藥理學觀點], 8:600-8, 2008）。駱駝科抗體描述在例如美國專利案號5,759,808；5,800,988；5,840,526；5,874,541；6,005,079；和6,015,695中，其中每一個的全部內容藉由引用併入本文。選殖和分離的V _HH結構域係一種穩定的多肽，特徵係具有原始重鏈抗體的完全抗原結合能力。V _HH結構域以其獨特的結構和功能特性將常規抗體的優勢（高靶向特異性、高靶向親和力和低固有毒性）與小分子藥物的重要特徵（抑制酶和接近受體裂縫的能力）組合起來。此外，它們係穩定的，有可能藉由注射以外的方式進行投與，更容易製造，並且可以人源化（美國專利案號5,840,526；美國專利案號5,874,541；美國專利案號6,005,079、美國專利案號6,765,087；EP 1589107；WO 97/34103；WO 97/49805；美國專利案號5,800,988；美國專利案號5,874,541和美國專利案號6,015,695，其中每一個的全部內容藉由引用併入本文）。這種V _HH可以具有下 表 3中所述之多肽。 [ 表 3] ：示例性抗備解素 V _HH

SEQ ID NO:	序列
31	QVQVVESGGGLRQTGGSLRLSCTASGRIFEVNMMAWYRQAPGKQRELVAEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDSAKNTVTLQMNSLKSEDTAVYYCNALQYDRYGGAEYWGQGTQVTVSS
32	QVQLAESGGGLVQAGDSLKLSCTASGRIFEVNMMAWYRQAPGKDRELVAEISRVGTTTYADSVKGRFTISRDSAKNTVTLQMNSLKSEDTAVYYCNALQYSRYGGAEYWGQGTQVTVSG
33	QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRISSIIHMAWYRQAPGKQRELVAEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDDAKNTVTLQMNSLKPEDTAVYYCNALQYEKHGGADYWGQGTQVTVSG
34	QVQLVESGGGLRQTGESLRLSCTASGRIFEVNMMAWYRQAPGKQRELVAEISRVGTTTYADSVKGRFTISRDSAKNTVTLQMNSLKSEDTAVYYCNALQYDRYGGAEYWGQGTQVTVSG

在一些實施方式中，當抗備解素結合結構域具有暴露的N末端時，N末端麩醯胺酸可以轉化為環化焦麩胺酸酯。此類修飾係本領域已知的（參見，例如，Liu等人, The Journal of Biological Chemistry [生物化學雜誌] 286(13:11211-11217, 2011)）。

V _HH可以包括一或多個胺基酸修飾。本文所述之胺基酸修飾包括本領域已知的所有胺基酸修飾（參見，例如，Liu等人, The Journal of Biological Chemistry [生物化學雜誌] 286(13:11211-11217, 2011)和Manning 等人, Pharmaceutical Research [藥學研究] 27(4):544-575, 2010）。在所有上下文中，將包括特定胺基酸的已知轉化，例如，在融合多肽的加工或純化過程中，例如，暴露的N末端麩醯胺酸轉化為焦麩胺酸酯。 Ia. 抗備解素抗體片段和衍生物

一些天然存在的抗體包括兩個抗原結合結構域，因此係二價的。在蛋白酶消化後已鑒定出天然存在的抗體的許多較小的抗原結合片段。例如，該等包括「Fab片段」（V _L-C _L-C _H1-V _H）、「Fab'片段」（具有重鏈鉸鏈區的Fab）和「F(ab') ₂片段」（由重鏈鉸鏈區域接合的Fab'片段的二聚體）。已使用重組方法來產生此類片段，並且產生甚至更小的抗體片段，例如，被稱為「單鏈Fv」（可變片段）或「scFv」的那些，由藉由合成肽連接子（V _L-連接子-V _H）接合的V _L和V _H組成。Fab片段、Fab'片段和scFv片段對於抗原結合係單價的，因為它們各自只包含含有一個V _H/V _L二聚體的一個抗原結合結構域。甚至更小的單價抗體片段係dAb，僅包括單個免疫球蛋白可變結構域，例如，V _H或V _L，其單獨特異性結合抗原，即，不需要分別互補的V _L或V _H結構域。dAb獨立於其他V結構域結合抗原；然而，dAb可以以與其他V _H或V _L結構域同源或異源的多聚體存在，其中其他結構域對於該dAb的抗原結合不是必需的，即該dAb獨立於額外的V _H或V _L結構域結合抗原。 Ib. 連接子

在本揭露中，連接子用於接合多肽或蛋白質結構域和/或相關的非蛋白質部分。在一些實施方式中，連接子係至少兩個多肽構建體之間的鍵合或連結，例如，使得兩個多肽構建體以串聯系列彼此接合（例如，與第二多肽或單價抗體連接的單價抗體）。連接子可以將一個抗體構建體的N末端或C末端連接到第二個多肽構建體的N末端或C末端。

連接子可為簡單的共價鍵（例如，肽鍵）、合成聚合物（例如，聚乙二醇（PEG）聚合物）或由化學反應（例如，化學軛合）產生的任何類型的鍵。在連接子係肽鍵的情況下，一個蛋白質結構域的C末端的羧酸基團可以在縮合反應中與另一蛋白質結構域N末端的胺基反應以形成肽鍵。特別地，該肽鍵可以通過本領域公知的常規有機化學反應由合成手段形成，或藉由宿主細胞天然產生形成，其中編碼兩個蛋白質的DNA序列的多核苷酸序列（例如，串聯系列中的兩個抗體構建體）可以藉由宿主細胞中必要的分子機制（例如，DNA聚合酶和核糖體）直接轉錄和翻譯成編碼兩種蛋白質的連續多肽。

在連接子係合成聚合物（例如，PEG聚合物）的情況下，該聚合物可以在每一端用反應性化學官能基官能化，以與兩個蛋白質連結端的末端胺基酸反應。

在連接子（除了上述肽鍵）由化學反應製成的情況下，化學官能基，例如，胺、羧酸、酯、疊氮化物或本領域中常用的其他官能基，可以分別合成地連接到一種蛋白質的C末端和另一種蛋白的N末端。然後，這兩個官能基可以通過合成化學手段反應形成化學鍵，從而將兩個蛋白質連結在一起。此類化學軛合程序對於熟悉該項技術者來說是常規的。

兩個肽構建體之間的連接子可為例如包含1-200（例如，1-4、1-10、1-20、1-30、1-40、2-10、2-12、2-16、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200）個胺基酸的胺基酸連接子。合適的肽連接子係本領域已知的，並且包括例如含有柔性胺基酸殘基諸如甘胺酸和絲胺酸的肽連接子。在某些實施方式中，連接子可以包含單個模體或多個不同或重複的模體。

在一些實施方式中，該連接子係聚甘胺酸連接子。在一些實施方式中，聚甘胺酸連接子包括序列GGGGE（SEQ ID NO: 5）。 Ic. 雙特異性構建體

本揭露特徵還在於其中兩種抗原結合多肽被連接的雙特異性構建體。此類雙特異性構建體可以包括藉由連接子連結到第二多肽（例如，第二單價抗體）的抗備解素結合多肽（例如，單價抗體）。該第二多肽可以增強雙特異性構建體的體內穩定性。在一些實施方式中，該第二多肽係白蛋白結合分子、白蛋白結合肽、抗白蛋白抗體（例如，單價抗體）、抗人血清白蛋白或其修飾形式。白蛋白結合肽係本領域已知的，例如描述於WO 2007/106120（參見表1至9）和Dennis等人, 2002, J Biol. Chem. [生物化學雜誌] 277: 35035-35043中，其揭露內容藉由引用併入本文。

在一些實施方式中，該第二多肽係增強構建體的體內穩定性的Fc結構域。

在一些實施方式中，單價抗備解素抗體與單價抗白蛋白抗體連接。該單價抗備解素抗體可藉由其N末端或C末端與該單價抗白蛋白抗體的N末端或C末端連接。 Id. 示例性抗備解素抗體

在一些實施方式中，抗備解素/抗人血清白蛋白雙特異性構建體包含SEQ ID NO: 6的六個CDR序列（SEQ ID NO:2、3和4以及55、56和57）。

在一些實施方式中，雙特異性構建體的抗人血清白蛋白組分包含CDR序列GRPVSNYA（SEQ ID NO: 55）、INWQKTAT（SEQ ID NO: 56）和AAVFRVVAPKTQYDYDY（SEQ ID NO: 57）。

在一些實施方式中，抗備解素雙特異性構建體包含以下的序列： QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGEGGGGEGGGGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRISSIIHMAWFRQAPGKERELVSEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCNALQYEKHGGADYWGQGTLVTVSS（SEQ ID NO: 6）。

在一些實施方式中，抗備解素雙特異性構建體包含以下的序列： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSLEVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRISSIIHMAWYRQAPGKQRELVAEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDDAKNTVTLQMNSLKPEDTAVYYCNALQYEKHGGADYWGQGTQVTVSS（SEQ ID NO: 35）。

在一些實施方式中，抗備解素雙特異性構建體包含以下的序列： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRISSIIHMAWFRQAPGKERELVSEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCNALQYEKHGGADYWGQGTLVTVSS（SEQ ID NO: 36）。

在一些實施方式中，抗備解素雙特異性構建體包含以下的序列： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGDGGGGDGGGGEVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRISSIIHMAWYRQAPGKQRELVAEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDDAKNTVTLQMNSLKPEDTAVYYCNALQYEKHGGADYWGQGTQVTVSS（SEQ ID NO: 37）。

在一些實施方式中，抗備解素雙特異性構建體包含以下的序列： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGEGGGGEGGGGEVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRISSIIHMAWYRQAPGKQRELVAEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDDAKNTVTLQMNSLKPEDTAVYYCNALQYEKHGGADYWGQGTQVTVSS（SEQ ID NO: 38）。

在一些實施方式中，抗備解素雙特異性構建體包含以下的序列： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRISSIIHMAWVRQAPGKQRELVSEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNALQYEKHGGADYWGQGTLVTVSS（SEQ ID NO: 39）。

在一些實施方式中，抗備解素雙特異性構建體包含以下的序列： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGDGGGGDGGGGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRISSIIHMAWFRQAPGKERELVSEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCNALQYEKHGGADYWGQGTLVTVSS（SEQ ID NO: 40）。

在一些實施方式中，抗備解素雙特異性構建體包含以下的序列： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGEGGGGEGGGGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRISSIIHMAWFRQAPGKERELVSEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCNALQYEKHGGADYWGQGTLVTVSS（SEQ ID NO: 41）。

在一些實施方式中，抗備解素雙特異性構建體包含以下的序列： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGDGGGGDGGGGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRISSIIHMAWVRQAPGKQRELVSEISRVGTTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNALQYEKHGGADYWGQGTLVTVSS（SEQ ID NO: 42）。

在一些實施方式中，當抗備解素結合結構域或抗人血清白蛋白結合結構域具有暴露的N末端時，N末端麩醯胺酸可以轉化為環化焦麩胺酸酯。此類修飾係本領域已知的（參見，例如，Liu等人, The Journal of Biological Chemistry [生物化學雜誌] 286(13:11211-11217, 2011)）。

融合蛋白可以包括一或多個胺基酸修飾。本文所述之胺基酸修飾包括本領域已知的所有胺基酸修飾（參見，例如，Liu等人, The Journal of Biological Chemistry [生物化學雜誌] 286(13:11211-11217, 2011)和Manning 等人, Pharmaceutical Research [藥學研究] 27(4):544-575, 2010）。在所有上下文中，將包括特定胺基酸的已知轉化，例如，在融合多肽的加工或純化過程中，例如，暴露的N末端麩醯胺酸轉化為焦麩胺酸酯。

在一些實施方式中，特定構建體的抗備解素由以下序列編碼： CAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCAGACCCGTGTCCAATTACGCCGCTGCCTGGTTCCGGCAGGCCCCTGGCAAAGAGAGAGAGTTCGTCAGCGCCATCAACTGGCAGAAAACCGCCACCTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCGCTGTGTTCCGGGTGGTGGCCCCCAAGACCCAGTACGACTACGATTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTGTCATCTGGCGGAGGGGGAGAAGGCGGGGGAGGGGAAGGGGGAGGCGGCGAAGTCCAGCTGCTGGAATCTGGGGGCGGACTGGTGCAGCCAGGCGGCTCCCTCAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCCGGATCAGCAGCATCATCCACATGGCCTGGTTTAGACAGGCTCCCGGAAAAGAACGCGAGCTGGTGTCCGAGATCTCCAGAGTGGGCACCACCGTGTATGCCGACTCCGTGAAAGGCAGATTCACAATCTCCCGCGACAACAGCAAGAATACTCTGTATCTCCAGATGAATAGCCTGAAGCCCGAAGATACAGCCGTCTACTATTGCAACGCCCTGCAGTACGAGAAGCACGGCGGAGCCGACTATTGGGGACAGGGAACACTCGTGACAGTGTCTAGCTGATGA（SEQ ID NO: 54）。 II. 核酸 IIa. 抑制性 RNA

在一些實施方式中，補體抑制劑係抑制性RNA分子，例如，其藉由RNA干擾（RNAi）途徑起作用。抑制性RNA分子可以降低補體蛋白（例如，補體C3、因子B或備解素）的表現水平（例如，蛋白質水平或mRNA水平）。例如，抑制性RNA分子包括siRNA、shRNA和/或miRNA，其靶向全長補體C3、因子B或備解素。siRNA係通常具有約19-25個鹼基對長度的雙股RNA分子。shRNA係一種含有通過RNAi降低靶基因表現的髮夾彎的RNA分子。shRNA可以藉由轉染、電穿孔或轉導以質體（例如，病毒或細菌載體）的形式遞送至細胞。微小RNA係通常具有約22個核苷酸長度的非編碼RNA分子。miRNA與mRNA分子上的靶位點結合並且緘默該mRNA，例如，藉由引起mRNA的切割、mRNA的失穩或抑制mRNA翻譯。在一些實施方式中，該抑制性RNA分子降低補體蛋白功能的水平和/或活性。在其他實施方式中，該抑制性RNA分子降低功能正調節因子的抑制劑的水平和/或活性。

抑制性RNA分子可以被修飾，例如，以含有修飾的核苷酸，例如，2'-氟、2'-鄰甲基、2'-去氧、未鎖定核酸、2'-羥基、硫代磷酸、2'-硫尿苷、4'-硫尿嘧啶核苷或2'-去氧尿嘧啶核苷。在不受特定理論約束的情況下，相信某些修飾可以增加核酸酶抗性和/或血清穩定性或降低免疫原性。

在一些實施方式中，該抑制性RNA分子降低補體蛋白（例如，補體C3、因子B或備解素）的水平和/或活性或功能。在一些實施方式中，該抑制性RNA分子抑制補體蛋白（例如，補體C3、因子B或備解素）的表現。在其他實施方式中，該抑制性RNA分子增加補體蛋白（例如，補體C3、因子B或備解素）的降解。該抑制性RNA分子可以在體外化學合成或轉錄。基於非編碼RNA諸如核酶、RNA酶P、siRNA和miRNA等的抑制性治療劑的製備和使用在本領域亦為已知的，例如，如以下中所述：Sioud, RNA Therapeutics: Function, Design, and Delivery (Methods in Molecular Biology) [RNA治療：功能、設計和遞送（分子生物學方法）]. 哈門那出版社（Humana Press）2010。 IIb. 反義

在一種方法中，本發明提供了一種單股寡核苷酸，其具有與補體蛋白（例如，補體C3、因子B或備解素）靶核酸內的等長部分互補的至少6個連續核酸鹼基的核酸鹼基序列。這種方法通常被稱為反義方法。不希望受理論約束，該方法涉及寡核苷酸與靶核酸（例如，分別為備解素前mRNA轉錄物1或轉錄物2）的雜交，然後是核糖核酸酶h（RNase h）介導的靶核酸的切割。可替代地，在不希望受理論約束的情況下，這種方法涉及寡核苷酸與靶核酸（例如，分別地，補體C3、因子B或備解素前mRNA轉錄物1或轉錄物2）的雜交，從而在空間上阻斷靶核酸結合細胞轉錄後修飾或翻譯機制，從而防止靶核酸的翻譯。在一些實施方式中，該單股寡核苷酸可以作為雙鏈寡核苷酸遞送給患者，其中該寡核苷酸與另一個雜交。 III. 適配體

在一些實施方式中，該補體途徑組分抑制劑可為適配體。可以使用任何合適的適配體。Bock L C等人, Nature [自然] 355 (6360): 564-6 (1992)；Hoppe-Seyler F, Butz K 「Peptide aptamers: powerful new tools for molecular medicine [肽適配體：分子醫學的強大新工具]」. J Mol Med. [分子醫學雜誌] 78 (8): 426-30 (2000)；Cohen B A, Colas P, Brent R. 「An artificial cell-cycle inhibitor isolated from a combinatorial library [從組合文庫中分離出的人工細胞週期抑制劑]」. Proc Natl Acad Sci USA [美國國家科學院院刊]. 95 (24): 14272-7 (1998)中描述了適配體的一般描述。

適配體係分離的核酸分子，其藉由沃森-克裡克鹼基配對以外的相互作用以高特異性和親和力結合一些靶標，諸如蛋白質（例如，激活CAP的因子）。適配體係基於核酸的分子，但適配體與其他核酸分子（諸如基因和mRNA）之間存在根本性差異。在後一種情況下，核酸結構藉由其線性鹼基序列編碼資訊，因此該序列對於資訊存儲功能很重要。相比之下，基於結合特定靶分子，適配體功能取決於特定的二級/三級結構，而不是保守線性鹼基序列。也就是說，該適配體係非編碼序列。適配體可能具有的任何可編碼性均為非常偶然的，並且在適配體與其同源靶標的結合中沒有作用。因此，與同一靶標甚至與靶標上的同一位點結合的適配體可以共用類似的線性鹼基序列，但大多數不共用。

在一些實施方式中，該適配體包括一系列長度約15至約60個核苷酸的核酸適配體，其特異性結合CAP因子並且調節該CAP因子的活性。

該等適配體可包括如本文所述之修飾，包括例如與親脂性或高分子量化合物（例如，PEG）軛合、摻入帽部分、摻入修飾的核苷酸、和修飾磷酸鹽骨架。

在一些實施方式中，該適配體係抗C5適配體，例如，Avacincaptad Pegol（ARC-1905；CAS #1491144-00-3和FDA藥品#K86ENL12I5）。在一些實施方式中，該適配體係還抑制C3轉化酶的因子B結合適配體。代表性實例（例如，SL1102和SL1103）提供在Xu等人（J Immunol.[免疫學雜誌], 206(4): 861–873, 2021；PMID: 33419768）中。 IV. 小分子

在一些實施方式中，該補體途徑組分抑制劑可為小分子。小分子係通常具有小於約1000道爾頓的分子量的分子，或在一些實施方式中，小於約500道爾頓，其中該分子能夠將靶分子的活性調節至一些可測量的程度。示例性小分子，例如肽和小分子抑制劑。可以基於功效和特異性選擇小分子，例如小分子抑制劑。

在一些實施方式中，補體途徑抑制劑包括因子D抑制劑。代表性的口服因子D抑制劑揭露於WO 2015130838和美國專利案號9,732,103中，其揭露內容藉由引用以其全文併入。其他代表性的因子D抑制劑揭露於WO 2017035353和美國專利案號10,011,612中，其揭露內容藉由引用以其全文併入。仍其他代表性因子D抑制劑揭露在WO 2018160889和US公開案號 2020/0071301中，其揭露內容藉由引用以其全文併入本文。

在一些實施方式中，可用於本申請的治療方法的因子D抑制劑包括達尼科潘（danicopan）（化合物1或其鹽）： 化合物1

在一些實施方式中，可用於本申請的治療方法的因子D抑制劑包括維爾米科潘（vermicopan）（化合物2或其鹽）： 化合物2

在一些實施方式中，可用於本申請的治療方法的因子D抑制劑包括化合物3的因子D抑制劑或其鹽： 化合物3

在一些實施方式中，可用於本申請的治療方法的因子D抑制劑包括化合物4的因子D抑制劑或其鹽： 化合物4

在一些實施方式中,該鹽係鹽酸鹽。在一些實施方式中，該鹽係任何藥學上可接受的鹽，例如甲苯磺酸鹽、硫酸鹽等。 V. 肽

在一些實施方式中，該CAP的抑制劑係肽，例如，環肽、AP通路組分（例如，補體因子C3）的抑制劑。補體因子C3的已知肽抑制劑包括坎普他汀及其衍生物。

肽 抑制劑可為與補體旁路途徑中的蛋白（例如補體因子C3）特異性結合的任何肽，或者是抑制或中和其蛋白的功能的蛋白質。肽抑制劑可以使用已知的肽合成方法化學合成，或可以使用重組技術製備和純化。肽抑制劑可以使用眾所周知的技術在沒有過度實驗的情況下鑒定。在這方面，應當注意，用於篩選肽庫中能夠特異性結合CAP多肽靶標的肽的技術係本領域眾所周知的。 示例性治療方法

表 4和以下段落中提供了治療SCD、BT或鐮狀細胞BT的示例性治療方法：

以下包括治療SCD、BT或鐮狀細胞BT患者的示例性方法。 [ 表 4] . 藉由調節補體系統治療 SCD 、 BT 或鐮狀細胞 BT 的治療方法

靶標	治療	研發者 / 經銷者	模式
C1q	抗C1q mAb	Annexon	抗體
C1	C1-INH（BERINERT、RUCONEST、CYNRIZE）	分別為傑特貝林公司（CSL Behring）、塞利克斯製藥公司（Salix Pharma）、夏爾公司（Shire）	多肽/蛋白質
C1s	抗C1s mAbBIVV020或激活的抗C1s Ab	真北療法公司（True North Therapeutics） 賽諾菲公司（Sanofi）	抗體
蘇替莫單抗（BIVV009或TNT009）	Bioverativ，賽諾菲公司	抗體
C1s肽	拉埃製藥公司（Ra Pharma）	肽
C2	PRO-02 mAb	Prothix BV	抗體
MASP-2	納索利單抗（α-MASP-2 mAb）	奧梅羅斯公司（Omeros）	抗體
MASP-3	OMS906（α-MASP-3 mAb）	奧梅羅斯公司（Omeros）	抗體
因子 D	抗FD mAb（蘭帕利珠單抗）	基因泰克公司（Genentech）	抗體
ALXN 2040（ACH-4471）；ALXN 2050（ACH-5228）；或第三代FD抑制劑	阿克琉斯公司（Achillion）	小分子
BCX9930	生物晶體公司（Biocryst）	小分子
各種（參見，Maibaum等人（ Nat Chem Biol. [自然化學生物學] 2016 12(12):1105-10））	諾華股份有限公司（Novartis）	小分子
因子 B	因子B siRNA IONIS-FB-L RX	怡諾思公司（Ionis）	siRNA/核酸
抗因子B mAb	新醫公司（Novelmed）/亞力兄公司（Alexion），阿斯利康罕見病公司	抗體
伊匹塔科潘（Iptacopan）（LNP023；CAS：1644670-37-0；FDA藥品號8E05T07Z6W）	諾華股份有限公司	小分子
備解素	抗備解素mAb	新醫公司	抗體
CLG561 Mab	諾華股份有限公司	抗體
備解素	ALXN1820	亞力兄公司，阿斯利康罕見病公司	雙特異性迷你抗體
因子 H	AMY-201，‘微型因子H’	阿明達斯公司（Amyndas）	多肽
C3/C5 轉化酶	坎普他汀/衍生物-APL2、APL9	阿佩利斯公司（Apellis）	肽
坎普他汀/衍生物-AMY-101	阿明達斯公司（Amyndas）	肽
sCR1/TP10	希爾德克施公司（Celldex）	多肽
微型-FH	阿明達斯公司（Amyndas）	多肽
米羅考普（APT070）	AdProTech	多肽軛合物
CR2-因子H/TT30	亞力兄公司，阿斯利康罕見病公司	融合蛋白
C3a/C3aR	各種	實驗性和治療性的	主要為小分子，例如，SB290157（Calbiochem）
C6	抗C6 mAb C6反義RNA	Regenesance	抗體 反義核苷酸
CP010	補體製藥公司/亞力兄公司，阿斯利康罕見病公司	抗體
CD59	腺相關載體（AAV）CAGsCD59（HMR59）	赫默拉公司（Hemera）	基因療法

舉例來說，本揭露關於以下用於監測SCD（例如，鐮狀細胞貧血、BT或鐮狀BT）的療法的功效之方法：

(A) 一種用抗C1q單株抗體治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(B) 一種用C1-INH（例如，BERINERT、RUCONEST、CYNRIZE）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(C) (1) 一種用抗C1s單株抗體（例如，BIVV020或激活的抗C1s抗體）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(C) (2) 一種用C1s肽治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(D) 一種用抗C2單株抗體（例如，PRO-02）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(E) 一種用抗MASP-2單株抗體（例如，納索利單抗）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(F) 一種用抗MASP-3單株抗體（例如，OMS906）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(G) 一種用抗因子D（FD）單株抗體（例如，蘭帕利珠單抗）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(H) 一種用口服小分子因子D（FD）抑制劑（例如，達尼科潘（ALXN2040或ACH-4471）或維爾米科潘（ALXN2050或ACH-5228）或第三代FD抑制劑（化合物3））治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(I) 一種用小分子因子D（FD）抑制劑（例如，美國專利案號9388199中的BCX9930或FD抑制劑，其藉由引用併入本文）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(J) 一種用因子B（FB）抑制劑（例如，因子B siRNA IONIS-FB-L _RX或α-FB單株抗體）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(K) 一種用因子B（FB）抑制劑（LNP023）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(L) 一種用抗備解素（因子P）單株抗體（例如，CLG561）或雙特異性抗體（例如，ALXN1820）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(M) 一種用因子H（FH）調節劑（例如，小因子H、AMY-201或CR2因子H/TT30）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(N) 一種用選自坎普他汀或其衍生物（例如，APL2、APL9或AMY-101）、sCR1/TP10或米羅考普的C3抑制劑治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(O) (1) 一種用諾馬科潘（nomacopan）（覆蓋素；rVA576）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(O) (2) 一種用齊蘆克布侖（Zilucoplan）（RA101495）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(P) (1) 一種用阿瓦科潘（Avacopan）（CCX-168）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(P) (2) 一種用抗C5a單株抗體（例如，奧侖達利珠（olendalizumab）單抗（ALXN1007）或BDB-001或IFX2）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(Q) (1) 一種用選自抗C6單株抗體和C6反義RNA的補體C6抑制劑治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(Q) (2) 一種用補體C6抑制劑CP010治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。

(R) 一種用編碼可溶性CD59（HMR59）的腺相關載體（AAV）治療受試者中SCD、BT或鐮狀細胞BT之方法。 遞送I. 表現治療性補體蛋白抑制劑的病毒載體

病毒基因組提供了豐富的載體來源，可用於將外源性基因有效遞送至哺乳動物細胞（例如，鐮狀細胞）中。病毒基因組係用於基因遞送的特別有用的載體，因為通常藉由通用或專用轉導將包含在該等基因組中的多核苷酸摻入到哺乳動物細胞的核基因組中。該等過程係自然病毒複製週期的一部分，並且不需要添加蛋白質或試劑來誘導基因整合。病毒載體之實例係反轉錄病毒（例如，反轉錄病毒科病毒載體）、腺病毒（例如，Ad5、Ad26、Ad34、Ad35和Ad48）、細小病毒（例如，腺相關病毒）、冠狀病毒、負鏈RNA病毒諸如正黏液病毒（例如，流感病毒）、桿狀病毒（例如，狂犬病和水泡性口炎病毒）、副黏液病毒（例如，麻疹和仙台）、正股RNA病毒諸如小核糖核酸病毒和α病毒、以及雙股DNA病毒（包括腺病毒、皰疹病毒（例如，1型和2型單純皰疹病毒、EB病毒、巨細胞病毒）和痘病毒（例如，牛痘、改良安卡拉牛痘（MVA）、禽痘和金絲雀痘））。例如，其他病毒包括諾沃克病毒、披衣病毒、黃病毒、呼腸孤病毒、乳多泡病毒、嗜肝DNA病毒、人乳頭狀瘤病毒、人泡沫病毒和肝炎病毒。反轉錄病毒之實例有：鳥類白血病性肉瘤、禽C型病毒、哺乳動物C型、B型病毒、D型病毒、腫瘤反轉錄病毒、HTLV-BLV組、慢病毒、α反轉錄病毒、γ反轉錄病毒、馬鈴薯病毒（Coffin, J. M., Retroviridae: The viruses and their replication [反轉錄病毒科：病毒及其複製], Virology [病毒學], 第三版（Lippincott Raven, 費城, (1996)））。其他實例係鼠科動物白血病病毒、鼠科動物肉瘤病毒、小鼠乳腺腫瘤病毒、牛科動物白血病病毒、貓科動物白血病病毒、貓科動物肉瘤病毒、禽類白血病病毒、人T細胞白血病病毒、狒狒內源性病毒、長臂猿白血病病毒、梅森菲舍猴病毒（Mason Pfizer monkey virus）、猿猴免疫缺陷病毒、猿猴肉瘤病毒、勞斯肉瘤病毒和慢病毒。例如，在McVey等人（US 5,801,030）中描述了載體的其他實例，其教導內容藉由引用併入本文。 Ia. 反轉錄病毒載體

本文所述之方法和組成物中使用的遞送載體可為反轉錄病毒載體。可用於本文所述之方法和組成物的一種類型的反轉錄病毒載體係慢病毒載體。慢病毒載體（LV）係反轉錄病毒的一個子集，高效轉導多種分裂和非分裂細胞類型，賦予轉基因穩定、長期的表現。包裝和轉導LV的優化策略概述見Delenda, The Journal of Gene Medicine[基因醫學雜誌] 6: S125 (2004)，其揭露內容藉由引用併入本文。

基於慢病毒的基因轉移技術的使用依賴於攜帶高度缺失的病毒基因組的重組慢病毒顆粒（其中容納了目的轉基因）的體外生產。特別地，該重組慢病毒通過以下在允許的細胞系中的反式共表現來回收：(1) 包裝構建體，即表現Gag-Pol先質連同Rev的載體（可替代地反式表現）；(2) 表現通常具有異源性質的包膜受體的載體；和 (3) 轉移載體，其由病毒互補DNA（cDNA）組成，該病毒互補DNA失去了所有開讀框，但保持複製、封裝和表現所需的序列，其中插入待表現的序列。 Ib. 腺相關病毒載體

本文所述之組成物的核酸和方法可摻入重組腺相關病毒（rAAV）載體和/或病毒體中，以促進將其摻入細胞（例如，鐮狀細胞）中。用於本文所述之組成物和方法的rAAV載體係重組核酸構建體（例如，能夠在鐮狀細胞中表現的核酸），其包括 (1) 待表現的異源序列和 (2) 促進異源基因整合和表現的病毒序列。該等病毒序列可包括將DNA複製和包裝到病毒體中所需的順式的AAV序列（例如，功能性反向末端重複序列（ITR））。此類rAAV載體還可以包含標誌物或報告基因。有用的rAAV載體具有全部或部分缺失但保留功能性側翼ITR序列的一或多個AAV WT基因。該AAV ITR可為適合於特定應用的任何血清型。例如，使用rAAV載體的方法描述於Tai等人, J. Biomed. Sci. [生物醫學科學雜誌] 7:279 (2000)，以及Monahan和Samulski, Gene Delivery[基因遞送] 7:24 (2000)中，其中每一個的揭露內容藉由引用併入本文，因為它們涉及用於基因遞送的AAV載體。

rAAV病毒體的構建已在以下中描述，例如US 5,173,414；US 5,139,941；US 5,863,541；US 5,869,305；US 6,057,152；和US 6,376,237；以及Rabinowitz等人, J. Virol. [病毒學雜誌] 76:791 (2002)和Bowles等人, J. Virol. [病毒學雜誌] 77:423 (2003)，其中每一個的揭露內容藉由引用併入本文，因為它們涉及用於基因遞送的AAV載體。 藥物組成物

本文所述之CAP抑配製物（例如，抗體、小分子、核酸分子、肽和適配體）可以配製成例如藥物組成物，以適合體內投與的生物相容形式投與給患者，諸如表現出或有發展SCD、BT或鐮狀細胞BT的風險的人患者。含有例如本文所述之補體蛋白抑制劑（諸如干擾RNA分子）的藥物組成物通常包含藥學上可接受的稀釋劑或載劑。藥物組成物可以包含（例如，由其組成）例如無菌鹽水溶液和核酸。該無菌鹽水通常是藥物級鹽水。藥物組成物可以包含（例如，由其組成）例如無菌水和核酸。該無菌水通常是藥物級水。藥物組成物可以包含（例如，由其組成）例如磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）和核酸。該無菌PBS通常是藥物級PBS。

在某些實施方式中，藥物組成物包含一或多種CAP抑制劑和一或多種賦形劑。在某些實施方式中，賦形劑選自水、鹽溶液、醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、澱粉酶、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、羥甲基纖維素和聚乙烯吡咯啶酮。

在某些實施方式中，補體蛋白抑配製物可與藥學上可接受的活性和/或惰性物質混合以製備藥物組成物或配製物。用於配製藥物組成物的組成物和方法取決於許多標準，包括但不限於投與途徑、疾病程度或投與劑量。

在某些實施方式中，包含CAP抑制劑的藥物組成物包含該抑制劑的任何藥學上可接受的鹽、抑制劑的酯或此類酯的鹽。在某些實施方式中，包含補體蛋白抑制劑的藥物組成物在投與給受試者（例如，人）時能夠（直接或間接）提供生物活性代謝物或其殘餘物。因此，例如，本揭露還涉及抑制劑的藥學上可接受的鹽、前驅藥、此類前驅藥的藥學上可接受的鹽和其他生物等效物。合適的藥學上可接受的鹽包括但不限於鈉鹽和鉀鹽。在某些實施方式中，前驅藥包括一或多個連接到補體蛋白抑制劑的軛合物基團，其中該軛合物基團被體內的內源性核酸酶切割。

脂質部分已在多種方法中用於核酸療法。在某些此類方法中，將該核酸引入由陽離子脂質和中性脂質的混合物製成的預成型脂質體或脂質複合物中。在某些方法中，與單陽離子或聚陽離子脂質的DNA複合物在不存在中性脂質的情況下形成。在某些實施方式中，選擇脂質部分以增加藥劑向特定細胞或組織的分佈。在某些實施方式中，選擇脂質部分以增加藥劑向脂肪組織的分佈。在某些實施方式中，選擇脂質部分以增加藥劑向肌肉組織的分佈。

在某些實施方式中，藥物組成物包含遞送系統。遞送系統之實例包括但不限於脂質體和乳劑。某些遞送系統可用於製備某些藥物組成物，包括那些包含疏水性化合物的藥物組成物。在某些實施方式中，使用某些有機溶劑，諸如二甲基亞碸。

在某些實施方式中，藥物組成物包含一或多種組織特異性遞送分子，其被設計為將本揭露的一或多種藥劑遞送至特定組織或細胞類型。例如，在某些實施方式中，藥物組成物包括塗覆有組織特異性抗體的脂質體。

在某些實施方式中，藥物組成物包含共溶劑系統。此類共溶劑系統中的某些包括例如苄醇、非極性界面活性劑、水混溶性有機聚合物和水相。在某些實施方式中，此類共溶劑系統用於疏水性化合物。這種共溶劑系統之非限制性實例係VPD共溶劑系統，它係包含3% w/v苯甲醇、8% w/v非極性界面活性劑聚山梨醇酯80™和65% w/v聚乙二醇300的純乙醇溶液。此類共溶劑系統的比例可以改變甚大，而不會顯著改變其溶解度和毒性特徵。此外，共溶劑組分的特性可以改變：例如，可以使用其他界面活性劑代替聚山梨醇酯80™；聚乙二醇的餾分大小可以改變；其他生物相容性聚合物可替代聚乙二醇，例如，聚乙烯吡咯啶酮；並且其他糖或多糖可以取代葡萄糖。

在某些實施方式中，製備藥物組成物用於藉由注射（例如，靜脈內）投與。在某些此類實施方式中，藥物組成物包含載劑並且配製在水溶液中，諸如水或生理相容的緩衝液，諸如Hanks溶液、林格氏液或生理鹽水緩衝液。在某些實施方式中，包括其他成分（例如，有助於溶解或用作防腐劑的成分）。在某些實施方式中，使用合適的液體載劑、懸浮劑等製備可注射懸浮液。某些注射用藥物組成物以單位劑量形式存在，例如，在安瓿或多劑量容器中。某些用於注射的藥物組成物係油狀或水性媒介物中的懸浮液、溶液或乳液，並且可能含有配製劑，諸如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑。適用於注射用藥物組成物的某些溶劑包括但不限於親脂性溶劑和脂肪油（諸如芝麻油）、合成脂肪酸酯（諸如油酸乙酯或甘油三酯）以及脂質體。 套組

本文所述之組成物可在用於治療SCD、BT或鐮狀細胞BT的套組（kit）中提供。如本文所述，該套組可包括一或多種AP抑制劑，特別地為備解素抑制劑。該套組可包括指示套組的用戶（諸如醫師）執行本文所述之任何一種方法的包裝說明書。該套組可視需要包括注射器或用於投與組成物的其他裝置。在一些實施方式中，該套組可以包含一或多種額外的治療劑。 實例

以下係本揭露的方法之實例。應當理解，根據以上提供的一般描述，可以實施各種其他實施方式。 實例 1. 抑制補體激活在缺氧誘導的血管閉塞危象中的功效

為了證明抑制補體激活在VOC中的功效（ 圖 1），Townes SS小鼠被分成四組，並且在缺氧處理前十天用PBS（媒介物）或14E1（小鼠抗備解素）進行四次預防性處理。 圖 2中提供了代表性實驗設置。在缺氧處理後處死動物，然後在常氧條件下靜止一小時。在其中一個媒介物處理組中，動物未暴露於缺氧條件，並且在整個實驗過程中持續保持在常氧條件，並且作為基線。安樂死後，從動物中收穫血液樣本和關鍵器官，以測量RBC上補體沈積水平、血管內溶血和血管閉塞的嚴重程度。

基於流式細胞術的RBC分析揭示了暴露於缺氧條件的SS RBC中補體片段沈積增加，C5b9和C3都增加（ 圖 3）。然而，用抗備解素單株抗體（14E1）預處理防止了C5b9沈積的增加。抗備解素MAb防止了缺氧條件下SS RBC中C3b沈積的增加。這一觀察結果與備解素係CAP C3和C5轉化酶的關鍵組分以及藉由抗備解素mAb處理防止PNH RBC的C3調理作用的概念一致。

接下來，藉由各種測定確定血管內溶血水平的變化，包括血漿乳酸脫氫酶（LDH）活性、游離血基質和游離血紅素以及總膽紅素水平。SCD動物暴露於缺氧條件下觸發血管內溶血（IVH），這藉由用抗備解素MAb預處理而有效地防止（ 圖 4）。使用公認的標誌物諸如LDH、膽紅素、游離血紅素和游離血基質等來測定IVH。該等藉由抗補體療法抑制SCD小鼠中血管內溶血的數據在SCD患者中具有明確的意義，因為該等溶血生物標誌物在SCD患者中得到了充分驗證。LDH活性升高與穩定狀態下（Kato等人 2006）或疼痛VOC事件期間（Ballas和Marcolina 2006）SCD患者的死亡率和發病率相關。此外，據報導，VOC期間兒童LDH活性與疼痛嚴重程度呈正相關（Najim和Hassan 2011）。類似地，血管內溶血期間釋放的未結合血紅素和血基質具有高度的炎症性、細胞毒性，並且促進SCD中的血管和組織損害（Merle等人 2019；Thomas等人 2019）。

接下來，藉由RBC的免疫螢光（IF）染色（Ter-119）觀察和量化原位血管閉塞的水平。進行測定以測量諸如肺（ 圖 5）、腎（ 圖 6）、肝（ 圖 7）和脾（ 圖 8）等重要器官中血管堵塞的程度。SCD小鼠暴露在缺氧條件下顯著增加了肺和肝中血管閉塞的強度。與對照（用磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）處理）相比，用抗備解素MAb（14E1）預處理有效地降低了血管閉塞水平。代表性實驗的結果顯示在顯微照片中，並且進一步總結在 圖 5-8的長條圖中。

肺中血管閉塞的改善特別相關，因為肺中血管閉塞係急性胸腔綜合症（ACS）的潛在原因（Jain, Bakshi, 和Krishnamurti 2017）。ACS與兒童鐮狀細胞相關死亡率和發病率的高風險相關，包括長期住院。所有具有純合子SCD（HbSS）的兒童中超過一半在生命的第一個十年中至少經歷過一次ACS發作（Gill等人 1995）。反復發作可能預示著衰弱性慢性肺病的發作（Powars等人 1988）。因此，抗備解素對肺中血管閉塞的顯著改善為抗補體療法治療SCD提供了明確的理論基礎。

抗備解素預處理在改善肝中血管閉塞方面也具有深遠的影響（ 圖 7）。數據顯示，當用抗備解素抗體處理小鼠時，體內小鼠模型中缺氧誘導的肝VOC顯著降低。

該等數據表明，抗補體抗體，諸如抗備解素抗體，可以保護患有鐮狀細胞病的動物免受肝VOC的侵害。肝急性VOC係嚴重腹痛和肝功能障礙的潛在原因（Ebert, Nagar, 和Hagspiel 2010）。在因急性血管閉塞危象（胸部、腹部和關節劇烈疼痛）入院的患者中，約39%的病例累及肝臟（Koskinas等人 2007）。該等患者呈現腹部鼓脹、右上腹痛或急性疼痛性肝腫大（Koskinas等人 2007）。因此，本文所提供的數據進一步支持了用備解素拮抗劑（諸如抗備解素抗體）治療SCD、BT和鐮刀型BT患者。

總之，數據表明鐮狀RBC通過補體激活發生SCD病理，包括溶血和血管閉塞。此外，使用抗補體療法，特別是通過使用備解素拮抗劑的療法，在組織（例如，肺、腎、肝或脾）以及細胞水平上顯著改善SCD疾病表型。 實例 2. 抑制補體激活在血基質誘導的血管閉塞危象中的功效

這項研究使用了129/B6混合遺傳背景的雄性Townes S/S小鼠（Wu等人 2006）。在Townes S/S小鼠中，小鼠α和β球蛋白基因座缺失，並且被人α和 ^Aγβ ^S球蛋白替代。當攜帶兩個拷貝的β ^S等位基因（hα /hα::β ^S/ β ^S）時，小鼠會發展為人鐮狀病表型，血液塗片中可見鐮狀紅血球（RBC）。繁殖對係從傑克遜實驗室獲得的。該等動物被安置在想象研究所（Imagine Institute）的動物護理設施的常規條件下。

為了證明抑制補體激活在VOC中的功效，Townes SS小鼠被分成五組，並且在血基質處理前十天用PBS（媒介物）或者抗備解素mAb（14E1）進行四次預防性處理（ 圖 9）。將該等動物暴露於50 µmol/Kg的血基質中三小時，然後處死動物（ 圖 9）。在其中一個媒介物處理組中，動物未暴露於血基質並且用作基線（ 圖 9）。安樂死後，從動物中收穫血液樣本和關鍵器官，以測量RBC上補體沈積水平、血管內溶血和血管閉塞的嚴重程度（ 圖 10）。使用內部塗有肝素/EDTA抗凝劑的毛細管藉由眼球後出血對小鼠進行靜脈切開術。藉由頸椎脫位將小鼠安樂死，並且通過左心室灌注1 mL鹽水溶液。收集肺、肝、腎和脾並且稱重。

使用氯化血紅素測定套組（西格瑪奧德里奇公司（Sigma-Aldrich）參考MAK036）測定血漿血基質，藉由偶合酶反應確定，得到與血漿中存在的氯化血紅素成比例的比色（570 nm）產物。將血漿用氯化血紅素測定緩衝液1 : 4稀釋至最終體積為50 µL。按以下順序製備反應混合物一式兩份：3 µL酶混合物、2 µL氯化血紅素底物、43 µL氯化血紅素測定緩衝液和2 µL氯化血紅素探針。血漿中存在的血紅素蛋白可以產生背景信號，因此為了控制該變量，藉由從反應混合物中省略酶來為每個樣本製備空白。將反應混合物添加到96孔板中的樣本中，使用水平振動器均勻化，並且在室溫下避光孵育30分鐘。藉由稀釋該套組中提供的氯化血紅素標準溶液，在96孔板中製備氯化血紅素標準溶液。使用Infinite F200 Pro多模式讀板儀（帝肯公司（Tecan））在570 nm處以動力學模式測量吸光度。藉由從每個樣本讀數中減去空白樣本值來去除背景信號，以獲得校正的測量值。藉由將校正後的測量值繪製成標準曲線來確定該氯化血紅素濃度。

藉由包括總膽紅素、血漿乳酸脫氫酶（LDH）活性和游離血紅素在內的多種測量來確定血管內溶血水平。SCD動物暴露於血基質觸發血管內溶血，這藉由用抗備解素抗體預處理而有效防止（ 圖 10）。

基於Jendrassik-Grof方法，使用膽紅素測定套組（西格瑪奧德里奇公司參考MAK126）測量血漿膽紅素。該方法基於膽紅素與重氮化胺基磺酸的反應，得到在530 nm下測得的比色產物，與樣本中存在的膽紅素成比例。藉由添加含有苯甲酸咖啡因的試劑C來測定總膽紅素，苯甲酸咖啡因將膽紅素從未軛合的膽紅素蛋白複合物中分離出來。用PBS以1 : 2稀釋血漿至最終體積為50 µL。工作試劑按以下順序製備：50 µL試劑A、20 µL試劑B和130 µL試劑C。藉由從反應混合物中省略試劑B和C（用鹽水溶液代替），為每個樣本製備空白。將反應混合物添加到96孔板中的樣本中，使用水平振動器均勻化，並且在室溫下避光孵育10分鐘。使用Infinite F200 Pro多模式讀板儀（帝肯公司）在530 nm處測量吸光度。藉由從每個樣本讀數中減去空白樣本值來去除背景，以獲得校正的測量值。藉由以下方程序確定膽紅素濃度：[(樣本-空白)/(校準品-水)] x 5 mg/dL。

在K2 EDTA管（Melet Schloesing實驗室）上採集全血。使用冷凍離心機以2,000 x g離心15分鐘，從血漿中去除細胞。該步驟也會耗盡血漿樣本中的血小板。將血漿分成50 µL等分試樣，並且在-80°C下儲存。

使用Pierce LDH細胞毒性測定套組（賽默飛世爾科技公司（Thermofisher Scientific）參考88953）測量血漿LDH。藉由在15 mL錐形管中將0.6 mL測定緩衝液與11.4 mL基質混合物混合來製備反應混合物。用PBS以1 : 2稀釋血漿至最終體積為50 µL。將反應混合物添加到96孔板中的樣本中，使用水平振動器均勻化，並且在室溫下避光孵育30分鐘。藉由向每個樣本中加入50 μL終止溶液來終止反應。使用Infinite F200 Pro多模式讀板儀（帝肯公司）在490 nm和680 nm處測量吸光度。LDH活性確定為[(LDH 490 nm)-(LDH 680 nm)]。

使用Drabkin試劑（西格瑪奧德里奇公司參考D5941）測量血漿血紅素。該程序基於在鹼性鐵氰化鉀存在下將血紅素及其衍生物（硫血紅素除外）氧化為高鐵血紅素。高鐵血紅素與氰化鉀反應生成氰高鐵血紅素，其最大吸收波長為540 nm。在540 nm處測量的顏色強度與總血紅素濃度成比例。將血漿轉移至96孔板（每個樣本20 µL）。藉由用1,000 mL水和0.5 mL 30% Brij L23溶液（西格瑪目錄號B4184）複溶一小瓶Drabkin試劑來製備Drabkin’s溶液。將Drabkin’s溶液（180 µL）添加到96孔板中的樣本中，使用水平振動器均勻化，並且在室溫下避光孵育15分鐘。製備在Drabkin’s溶液中的血紅素校準曲線。使用Infinite F200 Pro多模式讀板儀（帝肯公司）在540 nm處測量吸光度。藉由從每個樣本讀數中減去空白樣本值來去除背景，以獲得校正的測量值。藉由將校正後的測量值繪製成校準曲線來確定血紅素濃度。

將血液（45 µL）與5 µL小鼠FcR阻斷試劑（美天旎生物技術公司（Miltenyi Biotec）參考130-092-575）孵育一起10分鐘，並且用50 µL細胞染色緩衝液（百進生物科技公司（Biolegend）參考420201）1 : 2稀釋。然後用針對Ter-119 Pacific Blue（百進生物科技公司參考116232；1/100稀釋）、小鼠TfR1/CD71 PerCP/Cy5.5（百進生物科技公司參考113816；1/100稀釋）、C5b9-FITC（聖克魯斯生物技術公司（Santa Cruz Biotechnologies）參考sc-66190 FITC；1/20稀釋）或C3-FITC（塞德林公司（Cedarlane）參考CL7631F；1/50稀釋）的抗體對樣本進行染色。藉由Live-Dead（電子生物科學公司（eBioscience））排除死亡細胞。

使用FlowJo軟體（Tree Star）藉由流式細胞術（Gallios Beckman Coulter）進一步分析細胞。基於流式細胞術的SS RBC分析揭示了暴露於血基質後SS RBC上C5b9和C3沈積的顯著增加（ 圖 11）。用抗備解素預處理幾乎完全防止了C5b9在SS RBC上沈積的增加（ 圖 11）。由於C5b9染色代表潛在的攻膜複合物（MAC）形成，預計防止C5b9沈積可降低補體介導的血管內溶血（ 圖 11）。接下來，在SS RBC上測量C3沈積。暴露於血基質後C3沈積的增加被抗備解素抗體顯著降低（ 圖 11）。

將石蠟包埋的肺、脾、肝或腎切片（5 μm）在95°C下使用檸檬酸鹽緩衝液處理20分鐘，以進行脫親和、再水合和抗原回收（百進生物科技公司參考928502）。用PAP筆界定樣本，用高蛋白IHC/ICC阻斷緩衝液（電子生物科學公司參考00-4952-54）阻斷15分鐘，然後與Ter-119（血管捕獲RBC的標誌物）的一級抗體一起孵育1小時，與alexa fluor-488（百進生物科技公司參考116215；1/100稀釋）偶合。將載玻片用TBS吐溫-20 0.05%徹底洗滌3 X 10分鐘，並且用DAPI（賽默飛世爾科技公司參考P36962）的prolong diamond防褪色封固劑封固。在EVOS M5000成像系統（賽默飛世爾科技公司）上以× 200的放大率採集圖像，並且使用ImageJ軟體分析每個區域的正像素。藉由阻塞包括肺和肝在內的重要器官中的血管的RBC（Ter-119）的免疫螢光（IF）染色來視覺化和量化血管閉塞的強度（分別為 圖 12和 圖 13）。SCD小鼠暴露於血基質顯著增加了肺和肝中血管閉塞的強度。與PBS處理相比，用抗備解素單株抗體預處理以統計學顯著的方式有效地降低了血管閉塞水平。

統計分析研究採用單因素方差分析（ANOVA）檢驗，然後進行圖基檢驗（多重比較檢驗）或克魯斯卡爾-沃利斯檢驗（非參數），以分析與對照相比的處理效果。所有統計分析均使用GraphPad軟體（v6.00，聖地牙哥，加利福尼亞州，美國）得出。鑒定了p ＜ 0.05水平的拒絕無效假設的統計顯著性。為了說明之目的，還注釋了顯著性水平P ＜ 0.01和P ＜ 0.005。 實例 3 ：補體誘導的 C3 和 C5b-9 沈積測定 血基質對 SS RBC 上補體沈積的誘導及對抗備解素阻斷的評估

來自血紅素基因（SS）突變純合子SCD患者的RBC和血清從BioIVT（分別為目錄HUMANRBCALSUZN和HMRBC-SCA）和樂天生物科學（Sanguine Biosciences）（研究#24348）獲得。明膠弗羅拿緩衝液（GVB）從Boston Bioproducts（目錄IBB-300X）獲得。Mg-EGTA（目錄B106）、C8耗竭的正常人血清（目錄A325）和正常人血清（目錄NHS）從補體技術公司（Complement Technology）獲得。PBS從康寧公司（Corning）（目錄21-031-CV）獲得。以不同濃度（50 uM-800 uM）使用豬血基質（西格瑪目錄51280）來擴大補體激活並且誘導人細胞上的沈積。

所有離心均在4°C下以440 xg離心5分鐘，並且用多通道移液管抽吸上清液，以避免擾亂鬆散的RBC團塊。 用於在補體抑制測定中使用的血基質的適當濃度的鑒定

將患者SS RBC在PBS中洗滌三次，重新懸浮在GVB、5 mM Mg EGTA中，並且以2 x 10 ⁶個細胞/孔的濃度重新分配至無菌V底96孔板。添加自體血清至20%終濃度。以0 µM、100 µM、200 µM、400 µM和800 µM使用血基質。在37°C 5% CO ₂下孵育20-30分鐘後，加入含有10% EDTA的PBS（康寧公司，目錄46-030-CI）以終止補體激活。洗滌RBC並且用iC3b抗體染色，如下所述。 對血基質誘導的 SS-RBC 上的補體沈積的 AP 阻斷

將患者SS RBC在PBS中洗滌兩次或三次。為了誘導補體沈積，將RBC以5 x 10 ⁷個細胞/mL重新懸浮在GVB、5 mM Mg EGTA（測定緩衝液）中，並將30 µL添加到無菌V-96孔中。添加正常人血清至20%終濃度。將補體抑制劑以3.125 µM的5X工作儲備液在測定緩衝液中稀釋，並將10 µL添加到含有細胞的孔中。添加豬血基質至400 µM，並且將細胞在37°C、5% CO ₂下孵育20-30分鐘。藉由添加150 µL/孔的含有10 mM EDTA的PBS來終止補體激活。將細胞離心並且用200 µL PBS洗滌一次，並且針對以下iC3b和C5b-9沈積進行染色。 對 SS-RBC 表面上的 iC3b 和 C5b-9 沈積的流式細胞術分析

將細胞重新懸浮在50 µL/孔iC3b（Quidel，目錄A209）或C5b-9抗體（Quidel，目錄A239）中，在PBS中稀釋至4 µg/mL，並且在4°C下孵育20-30分鐘，在鞘液中進行流式細胞術染色。用150 µL-200 µL PBS洗滌細胞兩次，重新懸浮在50 µL山羊抗小鼠IgG（H+L）-AF488（英傑公司（Invitrogen）目錄A11029）中，在PBS中稀釋至4 µg/mL，並且在4°C下孵育20-30分鐘。在一些實驗中，以4 µg/mL的濃度使用山羊抗小鼠IgG2b AF488（英傑公司，目錄A21141）。用150 µL-200 µL PBS洗滌細胞兩次，並且在LSR Fortessa上採集用於流式細胞術分析。 結果

圖 14顯示了基於流式細胞術的關於鐮狀RBC上血基質誘導的補體沈積的數據以及抗備解素抗體處理的效果。在20%正常人血清（NHS）存在下，將SCD紅血球暴露於400 µM血基質。左邊係散點圖，顯示了iC3b在各種條件下的沈積，包括正常、血基質和血基質+抗備解素抗體預處理。右側係量化iC3b水平之長條圖。對於圖14所示的數據，注釋了****P ＜ 0.0001和**P ＜ 0.01的顯著性水平。 圖 14顯示了在存在抗備解素抗體的情況下，iC3b的SCD RBC上的血基質觸發補體沈積被阻斷了＞ 95%，而C5b-9的被阻斷了＞ 85%。

圖 15顯示了基於流式細胞術的關於鐮狀RBC上血基質誘導的補體沈積的數據以及抗備解素抗體處理的效果。在20%正常人血清（NHS）存在下，將SCD紅血球暴露於400 µM血基質。左邊係散點圖，顯示了C5b9在各種條件下的沈積，包括正常、血基質和血基質+抗備解素。右側係量化C5b9水平之長條圖。對於圖15所示的數據，注釋了**P ＜ 0.01的顯著性水平。 圖 15顯示，在存在抗備解素抗體的情況下，iC3b的SCD RBC上的血基質觸發的補體沈積被阻斷了＞ 95%，而C5b-9的被阻斷了＞ 85%。

如 圖 14和 圖 15所示，鐮狀細胞患者的紅血球上血基質觸發顯著水平的iC3b和C5b-9沈積。如藉由學生t檢驗確定，針對iC3b和C5b-9的顯著水平分別為P ＜ 0.0001和＜ 0.01。在存在抗備解素單株抗體的情況下，iC3b的SCD RBC上的血基質觸發補體沈積被阻斷了＞ 95%，而C5b-9的被阻斷了＞ 85%（分別地，P ＜ 0.0001和＜ 0.01）。 實例 4 ： AP 抑制劑阻斷 HMEC-1 細胞上的血基質誘導的補體沈積

內皮細胞系HMEC-1購自ATCC（CRL 3243），並且在AcCellerate（目錄CBA02，批號92-190318FG01）擴增和儲備。這係真皮微血管內皮細胞系。細胞在傳代＜ 5時用於實驗。

所有離心步驟在室溫（RT）下在300 g下進行5-7分鐘。將HMEC-1細胞以1.5 x 10 ⁵個細胞/孔接種到6孔板中的培養基（內皮細胞生長培養基MV2，Promocell公司，目錄22022）中，並且使其達到匯合（72小時）。將正常人血清（補體技術公司，目錄NHS）摻入1 uM抑制劑，使用含有5 mM-10 mM MgEGTA的活細胞成像溶液（LCIS）（英傑公司，目錄A1429DJ）稀釋至20%，並且添加到HMEC-1培養基（以代替培養基）中。可替代地，使用不含MgEGTA的LCIS作為測試緩衝液。添加血基質至400 µM，混合並且在37°C下孵育20-30分鐘。用2 mL PBS（康寧公司，目錄21-031-CV）沖洗細胞兩次，並且用含有10 mM EDTA的PBS（康寧公司，目錄46-034-CI）分離細胞。將細胞離心，將團塊重新懸浮在400 µL鞘液（BD生物科學，目錄342003）中，並且轉移至V底96孔板，一式兩份。離心後，將團塊重新懸浮在50 µL/孔鞘液中，該鞘液中含有稀釋至4 µg/mL的iC3b或C5b-9抗體。幾次洗滌後，將細胞與50 µL山羊抗小鼠IgG（H+L）AF 488（在鞘液中稀釋至4 µg/mL）一起在4°C下孵育30分鐘。幾次洗滌後，在LSR Fortessa上採集細胞用於流式細胞術分析。 結果

圖 16顯示了長條圖，該等長條圖顯示暴露於血基質的內皮細胞上血基質誘導的補體片段沈積的基於流式細胞術的分析以及抗備解素抗體對補體沈積的影響。圖中顯示了正常、血基質以及血基質+抗備解素預處理的補體片段水平（從左到右）的變化。左側分圖顯示了C3/C3b/iC3b沈積，而右側分圖顯示了C5b9沈積。對於 圖 16所示的數據，注釋了P ＜ 0.0001的顯著性水平。

如 圖 16所示，血基質有效地觸發了iC3b和C5b-9在HMEC-1細胞上的沈積（兩者的 P＜ 0.0001）。在存在抗備解素抗體的情況下，iC3b的HMEC-1上的沈積被阻斷了＞ 70%，而C5b-9的被阻斷了＞ 85%（兩者的 P＜ 0.0001）。 參考文獻

以下參考文獻藉由引用以其全文併入本文： Ballas et al. Hyperhemolysis during the Evolution of Uncomplicated Acute Painful Episodes in Patients with Sickle Cell Anemia. Transfusion46(1): 105–110, 2006. Blatt et al. Properdin: A Tightly Regulated Critical Inflammatory Modulator. Immunological Reviews 274(1): 172–190, 2016. Ebert et al. Gastrointestinal and Hepatic Complications of Sickle Cell Disease. Clinical Gastroenterology and Hepatology 8(6): 483–489, 2010. Frimat et al. Complement Activation by Heme as a Secondary Hit for Atypical Hemolytic Uremic Syndrome. Blood 122(2): 282–292, 2013. Gill et al. Clinical Events in the First Decade in a Cohort of Infants with Sickle Cell Disease. Cooperative Study of Sickle Cell Disease. Blood 86(2): 776–783, 1995. Gullipalli et al. Antibody Inhibition of Properdin Prevents Complement-Mediated Intravascular and Extravascular Hemolysis. Journal of Immunology (Baltimore, Md.: 1950) 201(3): 1021–1029, 2018. Jain et al. Acute Chest Syndrome in Children with Sickle Cell Disease. Pediatric Allergy, Immunology, and Pulmonology 30(4): 191–201, 2017. Kato et al. Lactate Dehydrogenase as a Biomarker of Hemolysis-Associated Nitric Oxide Resistance, Priapism, Leg Ulceration, Pulmonary Hypertension, and Death in Patients with Sickle Cell Disease. Blood 107(6): 2279–2285, 2006. Koskinas et al. Liver Involvement in Acute Vaso-Occlusive Crisis of Sickle Cell Disease: Prevalence and Predisposing Factors. Scandinavian Journal of Gastroenterology 42(4): 499–507, 2007. Lombardi et al. Factor H Interferes with the Adhesion of Sickle Red Cells to Vascular Endothelium: A Novel Disease-Modulating Molecule. Haematologica 104(5): 919–928, 2019. Merle et al. Complement Activation during Intravascular Hemolysis: Implication for Sickle Cell Disease and Hemolytic Transfusion Reactions. Transfusion Clinique Et Biologique: Journal De La Societe Francaise De Transfusion Sanguine 26(2): 116–124, 2019. Merle et al. Intravascular Hemolysis Activates Complement via Cell-Free Heme and Heme-Loaded Microvesicles. JCI Insight 3(12), 2018. Miwa et al. Blocking Properdin, the Alternative Pathway, and Anaphylatoxin Receptors Ameliorates Renal Ischemia-Reperfusion Injury in Decay-Accelerating Factor and CD59 Double-Knockout Mice. Journal of Immunology (Baltimore, Md.: 1950) 190(7): 3552–3559, 2013. Najim et al. Lactate Dehydrogenase and Severity of Pain in Children with Sickle Cell Disease. Acta Haematologica 126(3): 157–162, 2011. Powars et al. Sickle Cell Chronic Lung Disease: Prior Morbidity and the Risk of Pulmonary Failure. Medicine 67(1): 66–76, 1988. Stankovic et al. Lactate Dehydrogenase in Sickle Cell Disease. Clinica Chimica Acta; International Journal of Clinical Chemistry 458: 99–102, 2016. Test et al. Defective Regulation of Complement by the Sickle Erythrocyte: Evidence for a Defect in Control of Membrane Attack Complex Formation. Blood 83(3): 842–852, 1994. Thomas et al. Complement Component C5 and TLR Molecule CD14 Mediate Heme-Induced Thromboinflammation in Human Blood. Journal of Immunology (Baltimore, Md.: 1950) 203(6): 1571–1578, 2019. Ueda et al. Blocking Properdin Prevents Complement-Mediated Hemolytic Uremic Syndrome and Systemic Thrombophilia. Journal of the American Society of Nephrology: JASN 29(7): 1928–1937, 2018. Vercellotti et al. Critical Role of C5a in Sickle Cell Disease. American Journal of Hematology 94(3): 327–337, 2019. Wang et al. Activation of the Alternative Complement Pathway by Exposure of Phosphatidylethanolamine and Phosphatidylserine on Erythrocytes from Sickle Cell Disease Patients. The Journal of Clinical Investigation 92(3): 1326–1335, 1993. Wu et al. Correction of Sickle Cell Disease by Homologous Recombination in Embryonic Stem Cells. Blood 108(4): 1183–1188, 2006. Zhou et al. Antibody Directs Properdin-Dependent Activation of the Complement Alternative Pathway in a Mouse Model of Abdominal Aortic Aneurysm. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 109(7): E415-422, 2012. . 其他實施方式

應當理解，貫穿本說明書給出的每個最大數值限制都包括每個較低數值限制，就好像這種較低數值限制在本文中被明確地寫出一樣。貫穿本說明書給出的每個最小數值限制都將包括每個較高數值限制，就好像該等較高數值限制在本文中被明確寫出一樣。貫穿本說明書給出的每個數值範圍都將包括落入這種更寬的數值範圍內的每個較窄數值範圍，就好像該等較窄數值範圍在本文中被明確寫出一樣。

除非另外定義，否則本文所用的所有技術和科學術語均具有與本揭露所屬領域的普通技術者通常所理解的相同的含義。本文描述了用於本揭露的方法和材料；也可以使用本領域已知的其他合適的方法和材料。材料、方法和實例僅是說明性的並不旨在是限制性的。本文提及的所有出版物、專利申請、專利、序列、數據庫條目（例如，PUBMED、NCBI、FDA藥物或UNIPROT登錄號）和其他參考文獻藉由引用以其整體併入。在有矛盾的情況下，將以本說明書（包括定義）為準。

儘管已經說明和描述了本揭露的特定實施方式，但是對於熟悉該項技術者來說顯而易見的是，在不背離本揭露的精神和範圍的情況下可以進行各種其他變化和修改。因此，旨在在所附申請專利範圍中涵蓋在本揭露範圍內的所有該等變化和修改。

無

本專利或申請檔包含至少一個彩色附圖。本專利或專利申請公開的帶有一或多個彩色附圖的副本將根據要求並且並支付必要的費用後由官方提供。

為了更完整地理解本文揭露的原理及其優點，現在聯合附圖參考以下描述。

[ 圖 1]顯示了鐮狀紅血球（RBC）上的補體旁路途徑（CAP）造成鐮狀細胞病理。RBC係CAP激活的位點，該激活觸發表面的C3調理作用以及補體介導的RBC溶血。血管內溶血不僅導致貧血，而且藉由從RBC釋放游離血基質造成CAP激活的進一步擴大。鐮狀RBC的C3調理作用也通過血管外溶血促進貧血。此外，C3調理作用係VOC的關鍵機制基礎，這被以下事實所證明，C3調理作用可藉由磷脂醯絲胺酸（PS）在鐮狀RBC上的暴露來促成，並且藉由增強其與激活的內皮細胞上的黏附分子諸如P選擇素和補體受體3（CR3或Mac-1）的相互作用來促進VOC。

[ 圖 2]顯示了在SCD的體內小鼠模型中研究VOC中補體激活的抑制作用的實驗概要。Townes SS小鼠在缺氧處理前十天用PBS（媒介物）或「14E1」（抗備解素）進行四次預防性處理，並且在缺氧處理後處死，然後在常氧條件下靜止一小時。在媒介物處理亞組中，動物未暴露於缺氧條件，並且持續保持在常氧條件（基線）。安樂死後，從動物中收穫血液樣本和關鍵器官，以測量RBC上補體沈積水平、血管內溶血和VOC的嚴重程度。

[ 圖 3]顯示了長條圖，該等長條圖顯示暴露於缺氧條件的鐮狀細胞RBC上缺氧誘導的補體片段沈積的基於流式細胞術的分析以及抗備解素單株抗體對補體沈積的影響。圖中顯示了正常、缺氧（對照）、缺氧+羥基脲和缺氧+抗備解素（14E1）預處理下補體片段水平（從左到右）的變化。右側分圖顯示C3/C3b/iC3b水平，而左側分圖顯示C5b9水平。

[ 圖 4]顯示了長條圖，該等長條圖顯示14E1單株抗體對SCD動物中缺氧誘導的血管內溶血的影響。圖中顯示了正常、缺氧（對照）、缺氧+羥基脲和缺氧+抗備解素（14E1）預處理下溶血標誌物水平（從左到右）的變化。測量了以下溶血標誌物：乳酸脫氫酶（LDH）（左上分圖）；膽紅素（右下分圖）；游離血紅素（左下分圖）；和游離血基質（右上分圖）。

[ 圖 5]顯示了缺氧誘導的肺血管閉塞和14E1單株抗體處理的效果的數據。左邊係各種條件下（從上到下）小鼠肺中鐮狀細胞（SS）RBC的代表性顯微照片：常氧、缺氧（對照）、缺氧+羥基脲和缺氧+14E1預處理。PE抗小鼠TER-119和DAPI用作螢光探針。右側分圖顯示了使用標準軟體量化圖像螢光密度之長條圖。

[ 圖 6]顯示了缺氧誘導的腎血管閉塞和14E1單株抗體處理的效果之數據。左邊係各種條件下（從左到右）小鼠腎中SS RBC的代表性顯微照片：常氧、缺氧（對照）、缺氧+羥基脲和缺氧+14E1預處理。PE抗小鼠TER-119和DAPI用作螢光探針。右側分圖顯示了使用標準軟體量化圖像螢光密度之長條圖。

[ 圖 7]顯示了缺氧誘導的肝血管閉塞和14E1單株抗體處理的效果之數據。左邊係各種條件下（從左到右）小鼠肝中SS RBC的代表性顯微照片：常氧、缺氧（對照）、缺氧+羥基脲和缺氧+14E1預處理。PE抗小鼠TER-119和DAPI用作螢光探針。右側分圖顯示了使用標準軟體量化圖像螢光密度之長條圖。

[ 圖 8]顯示了缺氧誘導的脾血管閉塞和14E1單株抗體處理的效果之數據。左邊係各種條件下（從左到右）小鼠脾中SS RBC的代表性顯微照片：常氧、缺氧（對照）、缺氧+羥基脲和缺氧+14E1預處理。PE抗小鼠TER-119和DAPI用作螢光探針。右側分圖顯示了使用標準軟體量化圖像螢光密度之長條圖。

[ 圖 9]顯示了在SCD的體內小鼠模型中研究VOC中補體激活的抑制作用的實驗概要。Townes SS小鼠被分成五組，並且在血基質處理前十天用PBS（媒介物）或14E1單株抗體進行四次預防性處理。將動物暴露於50 µmol/Kg的血基質中三小時，然後處死動物。在其中一個媒介物處理組中，動物未暴露於血基質，並且作為基線。安樂死後，從動物中收穫血液樣本和關鍵器官，以測量RBC上補體沈積水平、血管內溶血和血管閉塞的嚴重程度。

[ 圖 10]顯示了長條圖，該等長條圖顯示抗備解素抗體對SCD動物中血基質誘導的血管內溶血的影響。圖中顯示了正常（對照）、血基質、血基質+抗備解素抗體預處理下溶血標誌物水平（從左到右）的變化。測量了以下溶血標誌物：膽紅素（最左側）；乳酸脫氫酶（LDH）（中心）；和游離血紅素（最右側）。 ****P ＜ 0.0001；*** P＜ 0.001；** P＜ 0.01；* P＜ 0.05。

[ 圖 11]顯示了長條圖，該等長條圖顯示抗備解素抗體對SCD動物中血基質誘導的血管內溶血的影響。圖中顯示了正常、血基質以及血基質+抗備解素抗體預處理的補體片段水平（從左到右）的變化。左側分圖顯示了C3/C3b/iC3b沈積，而右側分圖顯示了C5b9沈積。*** P＜ 0.001；** P＜ 0.01；* P＜ 0.05。

[ 圖 12]顯示了關於肺中血基質誘導的血管閉塞和抗備解素抗體處理的效果的數據。左邊係各種條件下（從左到右）小鼠肺中鐮狀細胞（SS）RBC的代表性顯微照片：正常（對照）、血基質和血基質+抗備解素抗體預處理。右側分圖顯示了使用標準軟體量化圖像螢光密度之長條圖。**** P＜ 0.0001；*** P＜ 0.001。

[ 圖 13]顯示了關於肝中血基質誘導的血管閉塞和抗備解素抗體處理的效果之數據。左邊係各種條件下（從左到右）小鼠肺中鐮狀細胞（SS）RBC的代表性顯微照片：正常（對照）、血基質和血基質+抗備解素抗體預處理。右側分圖顯示了使用標準軟體量化圖像螢光密度的長條圖。**** P＜ 0.0001；*** P＜ 0.001；* P＜ 0.05。

[ 圖 14]顯示了基於流式細胞術的關於鐮狀RBC上血基質誘導的補體沈積的數據以及抗備解素抗體處理的效果。左邊係散點圖，顯示了iC3b在各種條件下的沈積，包括正常、血基質和血基質+抗備解素抗體。右側係量化iC3b沈積之長條圖。**** P＜ 0.0001。

[ 圖 15]顯示了基於流式細胞術的關於鐮狀RBC上血基質誘導的補體沈積之數據以及抗備解素抗體處理的效果。左邊係散點圖，顯示了C5b9在各種條件下的沈積，包括正常、血基質和血基質+抗備解素抗體預處理。右側係量化C5b9沈積之長條圖。** P＜ 0.01。

[ 圖 16]顯示了長條圖，該等長條圖顯示暴露於血基質的內皮細胞上血基質誘導的補體片段沈積的基於流式細胞術的分析以及抗備解素抗體對補體沈積的影響。圖中顯示了正常、血基質以及血基質+抗備解素抗體預處理的補體片段水平（從左到右）的變化。左側分圖顯示了C3/C3b/iC3b沈積，而右側分圖顯示了C5b9沈積。ns = 不顯著。**** P＜ 0.0001。 序列表

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無

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Claims (46)

1. 一種治療受試者中鐮狀細胞病（SCD）之方法，該方法包括向該受試者投與有效量的包含補體旁路途徑抑制劑的組成物。
2. 一種治療受試者中β地中海貧血（BT）之方法，該方法包括向該受試者投與有效量的包含補體旁路途徑抑制劑的組成物。
3. 一種治療受試者中鐮狀細胞BT之方法，該方法包括向該受試者投與有效量的包含補體旁路途徑抑制劑的組成物。
4. 如請求項1-3中任一項所述之方法，其中該補體旁路途徑抑制劑選自由抗體或其抗原結合片段、肽、小分子、核酸分子和適配體組成之群組。
5. 如請求項1-3中任一項所述之方法，其中該補體旁路途徑抑制劑係備解素抑制劑。
6. 如請求項5所述之方法，其中該備解素抑制劑係抗備解素抗體或其抗原結合片段。
7. 如請求項6所述之方法，其中該抗備解素抗體或其抗原結合片段包含： (a)    CDR-H1（SEQ ID NO: 2）、CDR-H2（SEQ ID NO: 3）和CDR-H3（SEQ ID NO: 4）。
8. 如請求項6所述之方法，其中該抗備解素抗體或其抗原結合片段包含： (a)    SEQ ID NO: 6的抗FP VHH組分； (b)   SEQ ID NO: 6的序列； (c)    SEQ ID NO: 31的V _HH； (d)   SEQ ID NO: 32的V _HH； (e)    SEQ ID NO: 33的V _HH；或 (f)    SEQ ID NO: 34的V _HH。
9. 如請求項4所述之方法，其中該肽抑制補體因子C3。
10. 如請求項4所述之方法，其中該小分子係補體因子D抑制劑。
11. 如請求項4所述之方法，其中該核酸分子選自由小干擾RNA、短髮夾RNA、微小RNA和反義寡核苷酸組成之群組。
12. 如請求項11所述之方法，其中該核酸分子與編碼補體C3的內源性核酸序列的一部分互補。
13. 如請求項1-12中任一項所述之方法，其中該組成物包含補體抑制劑和藥學上可接受的載劑。
14. 如請求項1-13中任一項所述之方法，其中該方法降低了該受試者的血管內溶血。
15. 如請求項1和4-14中任一項所述之方法，其中該SCD包括溶血性貧血或急性血管閉塞（VOC）事件。
16. 如請求項15所述之方法，其中該受試者呈現腹部鼓脹、右上腹痛或急性疼痛性肝腫大。
17. 如請求項15所述之方法，其中該VOC事件係肺VOC和/或肝VOC。
18. 如請求項17所述之方法，其中： (a) 該肺VOC表現為急性胸腔綜合症（ACS）和/或慢性肺病；和/或 (b) 該肝VOC表現為嚴重腹痛和/或肝功能障礙。
19. 如請求項1-18中任一項所述之方法，其中該受試者係被診斷為患有SCD、BT或鐮狀細胞BT的人患者。
20. 如請求項19所述之方法，其中該人患者未滿18歲。
21. 如請求項1所述之方法，其中該患有SCD的受試者被診斷為具有β球蛋白基因中的突變。
22. 如請求項21所述之方法，其中該β球蛋白基因中的突變係β球蛋白基因中的單核苷酸突變。
23. 如請求項22所述之方法，其中該β球蛋白基因中的單核苷酸突變導致相對於SEQ ID NO: 1在位置6處麩胺酸被纈胺酸取代。
24. 如請求項1所述之方法，其中該SCD包括紅血球（RBC）中的補體沈積。
25. 如請求項24所述之方法，其中該SCD包括RBC中的C5b9沈積。
26. 如請求項1所述之方法，其中該SCD包括血管內溶血（IVH）。
27. 如請求項26所述之方法，其中IVH的特徵在於包括乳酸脫氫酶（LDH）、膽紅素、游離血紅素和游離血基質在內的至少一種標誌物的增加。
28. 如請求項1-3中任一項所述之方法，其中當向該受試者投與該補體旁路途徑抑制劑時，該受試者表現出SCD表型、BT表型或鐮狀細胞BT表型的降低。
29. 如請求項28所述之方法，其中該SCD表型包括導致血管組織損害的炎症或細胞毒性增加；VOC事件觸發的疼痛加劇；或SCD患者的死亡率或發病率增加。
30. 如請求項1-29中任一項所述之方法，其中該組成物通過靜脈內投與。
31. 一種在缺氧條件下提高細胞活力或降低細胞死亡之方法，該方法包括使該等細胞與有效量的包含補體旁路途徑抑制劑的組成物接觸。
32. 如請求項31所述之方法，其中在體內接觸該等細胞。
33. 如請求項31或32所述之方法，其中該等細胞係鐮狀細胞。
34. 如請求項31-33中任一項所述之方法，其中該補體旁路途徑抑制劑係備解素抑制劑。
35. 如請求項34所述之方法，其中該備解素抑制劑選自由抗備解素抗體或含有至少一個與備解素結合的部分的雙特異性抗體組成之群組。
36. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中SCD的特徵在於選自以下的特徵： (a)    補體C3和/或C5b9在受影響細胞（例如，RBC）中的沈積增加，尤其是在觸發條件（例如，缺氧）下； (b)   新生血管溶血增加，尤其是在觸發條件（例如，缺氧）下，其中溶血增加的特徵在於血漿LDH活性/水平、游離血基質和/或游離血紅素水平和/或總膽紅素水平的增加；或 (c)    VOC的嚴重程度增加，尤其是在觸發條件（例如，缺氧）下。
37. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中用補體抑制劑治療得到選自以下的結果： (a)    抑制或逆轉該SCD受試者的RBC中C3和C5b9的補體片段沈積，例如在缺氧條件下； (b)   減弱或逆轉缺氧條件下血管內溶血（如測量到血漿LDH活性/水平、游離血基質和/或游離血紅素水平和/或總膽紅素水平增加）的水平；或 (c)    降低或逆轉該SCD受試者的肺、腎、肝和脾等重要器官血管中的血管閉塞。
38. 如請求項37所述之方法，其中與用羥基脲治療該受試者相比，用補體抑制劑治療導致來自 (a)-(c) 的至少一個結果的改善。
39. 一種包含補體旁路途徑抑制劑的組成物，該組成物用於在治療受試者的SCD或與之相關的症狀中使用，特別地用於提高血球的活力，該等血球含有使其易受缺氧或低氧脅迫影響的一或多個突變，例如，正常血紅素A（α2ß2）到血紅素S（α2ß 6 Val2）的突變或RBC的β球蛋白基因中的突變。
40. 如請求項39所述之用於使用的組成物，其中該補體旁路途徑抑制劑係備解素抑制劑。
41. 如請求項40所述之用於使用的組成物，其中該備解素抑制劑選自由抗備解素抗體或含有至少一個與備解素結合的部分的雙特異性抗體組成之群組。
42. 如請求項41所述之用於使用的組成物，其中該核酸分子選自由小干擾RNA、短髮夾RNA、微小RNA和反義寡核苷酸組成之群組。
43. 一種包含補體旁路途徑抑制劑的組成物，該組成物用於在缺氧條件下提高細胞活力或降低細胞死亡中使用。
44. 如請求項43所述之組成物，其中該補體旁路途徑抑制劑係備解素抑制劑。
45. 如請求項44所述之組成物，其中該備解素抑制劑選自由包含抗備解素抗體或含有至少一個與備解素結合的部分的雙特異性抗體組成之群組。
46. 如請求項45所述之組成物，其中該補體旁路途徑抑制劑係選自由小干擾RNA、短髮夾RNA、微小RNA和反義寡核苷酸組成之群組的核酸分子。