TW202342037A - 治療腦腫瘤和神經母細胞瘤之方法 - Google Patents

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Abstract

本揭露關於治療有需要的患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤之方法，該方法包括向該患者投與治療有效量的具有作為聚(ADP-核糖)聚合酶（PARP）抑制劑的活性的經取代的氮雜喹啉酮化合物。

Description

治療腦腫瘤和神經母細胞瘤之方法
本揭露關於治療有需要的患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤之方法，該方法包括向該患者投與治療有效量的聚(ADP-核糖)聚合酶（PARP）抑制劑，該抑制劑係經取代的氮雜喹啉酮化合物。腦腫瘤和神經母細胞瘤可以包含X連鎖的α地中海貧血/精神發育遲滯綜合症（ATRX）缺陷表型。PARP抑制劑可以與烷基化化療藥和/或電離輻射組合投與於患者。
目前用於治療腦腫瘤諸如神經膠質瘤的治療策略包括手術切除、電離輻射和使用烷化劑化療藥諸如替莫唑胺（TMZ）。不幸的是，該等腦腫瘤中的許多，諸如神經膠質母細胞瘤（GBM），與極差的臨床預後相關。隨著時間的推移，外科手術、儀器技術、診斷和放療/化療策略都在慢慢演化，但這沒有轉化成患者存活率的顯著增加。因此，需要針對腦腫瘤諸如GBM的新治療策略。
一些分子標記物已被用於神經膠質瘤的分類。神經膠質瘤可以基於它們在異檸檬酸脫氫酶（IDH）1和/或2基因中是否含有突變（Hartmann等人 2009）和/或它們在X連鎖的α地中海貧血/精神發育遲滯綜合症（ATRX）基因中是否含有突變（Haase等人 2018）進行分類。ATRX基因中的遺傳改變也與神經母細胞瘤患者的不良結局患者亞組相關（George等人 2020）。此外，MGMT啟動子甲基化已被用作標記物，以預測暴露於烷化劑化療的GBM患者的有利結局（Weller等人 2010）。
替莫唑胺（TMZ）係GBM的護理標準（SOC）化療（Stupp等人, 2014；Stuppet等人, 2010）。在機理上，TMZ將特定位置的DNA甲基化，導致DNA加合物，該等DNA加合物除非被修復否則導致單股和雙股DNA斷裂、細胞週期停滯和細胞凋亡（Singh等人, 2021）。重要的是，PARP（尤其是PARP1）係參與DNA損傷和修復（DDR）過程的早期階段的關鍵酶，作為對單股和雙股斷裂的反應。事實上，PARP1的關鍵功能之一係在鹼基切除修復（BER）過程中，該過程係去除由TMZ產生的DNA加合物所需要的並且招募下游因子來修復這種損傷。多種研究已經研究了PARP抑制劑（PARPi）和TMZ的組合益處（Gupta等人, 2018；Higuchi等人, 2020；Murai等人, 2014）。
電離輻射（IR）誘導單股和雙股DNA斷裂，導致細胞週期停滯和細胞死亡（Reisz等人, 2014）。重要的是，PARP1參與修復該等類型的DNA損傷。多種研究已經研究了PARPi和IR的組合益處（Jannetti等人, 2020）。除了使神經膠質瘤對輻射敏感外，還描述了PARPi使室管膜瘤對輻射敏感性（van Vuurden等人, 2011）。
在例如WO 2004/080976中教導了PARP抑制劑之實例及其作用機理。
PARP1和PARP2因其在DNA損傷修復中的作用而是被最廣泛研究的PARP。PARP1由DNA損傷斷裂激活並且起著催化聚(ADP-核糖)（PAR）鏈添加至靶蛋白的作用。這種翻譯後修飾（稱為PAR基化（PARylation））介導另外的DNA修復因子募集到DNA損傷中。
完成此募集作用後，PARP自動PAR基化觸發結合的PARP從DNA釋放，從而允許使用其他DNA修復蛋白以完成修復。因此，PARP與受損位點的結合、其催化活性以及其最終從DNA釋放均為癌細胞應對由化療劑和放療引起的DNA損傷的重要步驟（Bai 2015）。
據信，與其他臨床PARP1/2抑制劑相比，對PARP1選擇性提高的PARP抑制劑可能導致功效提高和毒性降低。還據信對PARP1的選擇性強抑制將導致PARP1捕獲在DNA上，這通過使S期中的複製叉坍塌而導致DNA雙股斷裂（DSB）。
因此，本領域中需要開發PARP抑制劑，該等抑制劑既可以作為單一療法也可以與烷化化療藥和電離輻射組合用於安全且有效地治療腦腫瘤和神經母細胞瘤。該等PARP抑制劑可以展現出對PARP1的選擇性。
申請人發現，本文所述之氮雜喹啉酮令人驚訝地具有PARP抑制活性，並且因此可用於治療其中PARP功能具有藥理學意義的疾病和病症。此外，本文所述之氮雜喹啉酮對PARP1的選擇性比其他PARP家族成員（諸如PARP2、PARP3、PARP5a和PARP6）出人意料地高。
申請人進一步發現，本文所述之氮雜喹啉酮令人驚訝地能夠穿透血腦屏障（BBB），使其可用於治療腦腫瘤，諸如神經膠質瘤。
申請人已經證明，具有該等特性的PARP抑制劑可以用於使用體外和體內模型治療神經膠質瘤。如本文所述，PARP抑制劑被證明在IDH1突變體和IDH1野生型背景兩者中作為單一療法在ATRX突變體細胞系中具有有效活性。
在第一方面，申請人可獲得一種治療有需要的患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤之方法，該方法包括向該患者投與治療有效量的聚(ADP-核糖)聚合酶（PARP）抑制劑， 其中該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含X連鎖的α地中海貧血/精神發育遲滯綜合症（ATRX）缺陷表型， 其中該PARP抑制劑係式 (I) 之化合物： (I) 其中： R 1獨立地選自H、C 1-4烷基、C 3-6環烷基、C 1-4氟烷基、和C 1-4烷氧基； R 2獨立地選自H、鹵代、C 1-4烷基、和C 1-4氟烷基；並且 R 3係H或C 1-4烷基； R 4係鹵代或C 1-4烷基， 或其藥學上可接受的鹽。
在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤進一步包含異檸檬酸脫氫酶1或2（IDH1或IDH2）缺陷表型（例如，其被歸類為IDH1突變體和/或IDH2突變體）。在其他實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤不包含IDH1或IDH2表型（例如，其被歸類為IDH1野生型和/或IDH1野生型）。
在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶（MGMT）啟動子甲基化。
在一些實施方式中，該方法包括在投與該PARP抑制劑之前診斷患者為患有包含ATRX缺陷表型的腦腫瘤或神經母細胞瘤的又一步驟。在其他實施方式中，正在治療的患者先前被診斷為患有包含ATRX缺陷表型的腦腫瘤或神經母細胞瘤的患者。本文描述了用於診斷患者之方法，並且可以例如涉及測定從腦腫瘤或神經母細胞瘤或從患者的腦脊液（CSF）獲得的細胞。
申請人還證明，本文揭露的PARP抑制劑在與烷基化化療劑（包括替莫唑胺（TMZ）和VAL-083）和/或與電離輻射組合使用時展現出協同抗腫瘤活性。
因此，在一些實施方式中，向患者投與PARP抑制劑與以下的組合： i)   烷基化化療劑；和/或 ii)  放療劑。
在第二方面，申請人可獲得一種治療有需要的患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤之方法，該方法包括向該患者投與治療有效量的聚(ADP-核糖)聚合酶（PARP）抑制劑，以及 i)   烷基化化療劑；和/或 ii)  以10 Gy或更高劑量投與的放療劑， 其中該PARP抑制劑係如第一方面中定義的式I之化合物。
在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含： (i) X連鎖的α地中海貧血/精神發育遲滯綜合症（ATRX）缺陷表型； (ii)       異檸檬酸脫氫酶1或2（IDH1或IDH2）缺陷表型；和/或 (iii)      O 6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶（MGMT）啟動子甲基化。
在一些實施方式中，該烷基化化療劑係替莫唑胺（TMZ）或二去水衛矛醇（VAL-083）。
如本文所述，本發明PARP抑制劑和TMZ的組合被證明在不需要高劑量TMZ的情況下提供抗腫瘤益處。這係有益的，因為它表明，涉及PARP抑制劑的組合療法可以用於在烷基化化療劑劑量減少的情況下治療腦腫瘤和神經母細胞瘤，這可能有利於允許有效治療癌症並且減少與化療相關的毒性副作用。類似地，證明了使用本發明PARP抑制劑與減少的臨床相關劑量的電離輻射的組合有效治療神經膠質瘤，表明可以在與放療相關的毒性副作用減少的情況下來實現有效的癌症治療。
因此，在一些實施方式中，按以下投與TMZ： (i) 小於約200 mg/m 2的劑量、小於約150 mg/m 2的劑量、小於約125 mg/m 2、或小於約100 mg/m 2； (ii)       約50與200 mg/m 2之間的劑量、約75與150 mg/m 2之間、或約75 mg/m 2與125 mg/m 2之間的劑量。
在一些實施方式中，按以下投與VAL-083： (i) 小於約50 mg/m 2的劑量、小於約40 mg/m 2的劑量、小於約30 mg/m 2、或小於約20 mg/m 2； (ii)       約10與50 mg/m 2之間的劑量、約10與40 mg/m 2之間、或約10 mg/m 2與30 mg/m 2之間的劑量。
如本文更詳細描述的，所列舉的TMZ和VAL-083劑量典型地是每日劑量。
在一些實施方式中，該放療劑按以下投與： (i) 小於約60 Gy、小於約55 Gy、小於約50 Gy、小於約45 Gy、或小於約40 Gy的劑量；或 (ii)       約20 Gy與約60 Gy之間、約20 Gy與約55 Gy之間、約20 Gy與約50 Gy之間、約20與約45 Gy之間、或約20與約40 Gy之間、約30 Gy與約60 Gy之間、約30 Gy與約55 Gy之間、約30 Gy與約50 Gy之間、約30 Gy與約45 Gy之間、約30 Gy與約40 Gy之間的劑量。
如本文更詳細描述的，電離輻射典型地作為分次放療來投與。
在一些實施方式中，該腦腫瘤係神經膠質瘤或室管膜瘤。在一些實施方式中，該腦腫瘤係神經膠質瘤。神經膠質瘤可為成人神經膠質瘤或兒科神經膠質瘤並且可為高級別神經膠質瘤或低級別神經膠質瘤。在一些實施方式中，該神經膠質瘤係兒科神經膠質瘤。在一些實施方式中，該神經膠質瘤係高級別神經膠質瘤，諸如選自由以下組成之列表的神經膠質瘤：寡樹突神經膠質瘤、間變性星形細胞瘤、神經膠質母細胞瘤、和彌漫性中線神經膠質瘤。在一些實施方式中，該神經膠質瘤係神經膠質母細胞瘤。
如本文中進一步證明的，本發明PARP抑制劑與電離輻射的組合被證明治療H3K27M-突變型彌漫性中線神經膠質瘤的細胞系模型。H3K27M-突變型彌漫性中線神經膠質瘤係與預後不良相關的高級別兒科腦腫瘤並且目前的治療策略具有治療的挑戰。本文證明的數據支持本發明PARP抑制劑用於治療該等挑戰性神經膠質瘤之方法中的潛力。
因此，在一些實施方式中，該神經膠質瘤係H3K27M突變型神經膠質瘤。
還可獲得的係用於治療患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤之方法中的PARP抑制劑，該方法包括向該患者投與治療有效量的PARP抑制劑，其中該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含X連鎖的α地中海貧血/精神發育遲滯綜合症（ATRX）缺陷表型，並且其中該PARP抑制劑係如第一方面中定義的式I之化合物。
還可獲得的係用於治療患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤之方法中的PARP抑制劑，該方法包括向患者（例如，單獨、順序或同時）投與治療有效量的PARP抑制劑，以及 i)   烷基化化療劑；和/或 ii)  以10 Gy或更高劑量投與的電離輻射。 其中該PARP抑制劑係如第一方面中定義的式I之化合物。
還可獲得的係用於治療患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤之方法中的烷基化化療劑，該方法包括向受試者（例如，單獨、順序或同時）投與烷基化化療劑和治療有效量的PARP抑制劑，其中PARP抑制劑係如第一方面中定義的式I之化合物。
在以上實施方式的一個方面，式 (I) 之化合物具有式 (Ia)： (Ia) 其中： R 1獨立地選自H、C 1-4烷基、C 1-4氟烷基、和C 1-4烷氧基； R 2獨立地選自H、鹵代、C 1-4烷基、和C 1-4氟烷基；並且 R 3係H或C 1-4烷基； R 4係鹵代或C 1-4烷基， 或其藥學上可接受的鹽。
在以上實施方式的一個方面，式 (I) 或式 (Ia) 之R 1選自甲基、乙基、異丙基、環丙基、1,1-二氟乙基、1-氟乙基、三氟甲基、二氟甲基和甲氧基中的任一個。在一個特定方面，R 1係甲基或乙基。
在以上實施方式的一個方面，式 (I) 或式 (Ia) 之R 2選自H、氯、氟、甲基和二氟甲基中的任一個。在一方面，R 2係氟或甲基。
在以上實施方式的一個方面，式 (I) 或式 (Ia) 之R 3係甲基或乙基。
在以上實施方式的一個方面，式 (I) 或式 (Ia) 之R 4選自氯、氟和甲基中的任一個。在一個特定方面，R 4係氟。
在以上實施方式的一個方面，提供了式 (I) 或式 (Ia) 之化合物，其中R 1係C 1-4烷基，R 2係鹵代，R 3係C 1-4烷基，R 4係鹵代或C 1-4烷基，或其藥學上可接受的鹽。
在又一方面，式 (I) 或式 (Ia) 之化合物呈游離鹼形式。
在一方面，提供了式 (I) 之化合物，該化合物係5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺或其藥學上可接受的鹽。
在一方面，提供了式 (I) 之化合物，該化合物係6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺或其藥學上可接受的鹽。
在一方面，提供了式 (I) 之化合物，該化合物係6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺結晶形式B或其藥學上可接受的鹽。
在一方面，提供了式 (I) 之化合物，該化合物係6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺結晶形式D或其藥學上可接受的鹽。
在一方面，提供了式 (I) 之化合物，該化合物係6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺甲磺酸鹽，視需要作為結晶形式C。
通過閱讀本說明書，熟悉該項技術者將清楚其他方面。
眾所周知，由人類ether-à-gogo相關基因（hERG）編碼的心臟離子通道的阻斷係藥物發現和開發的風險因素。hERG的阻塞會引起安全性問題，諸如心律不整。有利地，式 (I) 之化合物具有低的hERG活性。在一方面，式 (I) 之化合物具有IC50 ＞10 μM。在一方面，式I之化合物具有IC50 ＞20 μM。
為了使脫靶效應的風險最小化，希望藥物分子具有對特定靶標的選擇性。式I之化合物有利地具有對PARP1的選擇性超過對於PARP家族的其他成員（包括PARP2、PARP3、PARP5a和PARP6）。有利地，式 (I) 之化合物對PARP1具有的選擇性超過PARP2。在一方面，式 (I) 之化合物對PARP1的選擇性係PARP2的10倍。在一方面，式 (I) 之化合物對PARP1的選擇性係PARP2的100倍。
在一方面，患者對於BRCA1和/或BRCA2或其調節劑中的一或多個變異（諸如突變和多態性）係雜合的。對BRCA1和BRCA2中變異的檢測係本領域眾所周知的並且例如描述於例如EP 699 754、EP 705 903、Neuhausen和Ostrander 1997；Chappnis和Foulkes 2002；Janatova等人, 2003；Jancarkova 2003）。BRCA2結合因子EMSY的擴增的確定描述於Hughes-Davies等人（Hughes-Davies等人 2003）中。
與癌症相關的突變和多態性可以藉由檢測變體核酸序列的存在而在核酸水平上檢測，或者藉由檢測變體（即突變體或等位基因變體）多肽的存在而在蛋白質水平上檢測。 定義
烷基基團和部分係直鏈的或支鏈的，例如C 1-8烷基、C 1-6烷基、C 1-4烷基或C 5-6烷基。烷基之實例係甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、三級丁基、正戊基、正己基、正庚基以及正辛基，諸如甲基或正己基。
環烷基係飽和的環狀烷基。C 3-6環烷基係具有3至6個碳原子的飽和環狀烷基。C 3-6環烷基之實例包括環丙基、環丁基、環戊基和環己基。C 3-6環烷基包括C 3-5環烷基和C 3-4環烷基。
氟烷基係其中一或多個H原子被一或多個氟原子替代的烷基，例如C 1-8氟烷基、C 1-6氟烷基、C 1-4氟烷基或C 5-6氟烷基。實例包括氟甲基（CH 2F-）、二氟甲基（CHF 2-）、三氟甲基（CF 3-）、2,2,2-三氟乙基（CF 3CH 2-）、1,1-二氟乙基（CH 3CHF 2-）、2,2-二氟乙基（CHF 2CH 2-）、1-氟乙基（CH 3CHF-）和2-氟乙基（CH 2FCH 2-）。
鹵代意指氟、氯、溴、和碘。在一方面，鹵代係氟或氯。
烷氧基係經由氧原子與分子的其餘部分連接的烷基。合適的C 1- 4烷基氧基之實例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、二級丁氧基和三級丁氧基。
在本說明書中，除非另外說明，否則如本文所用的術語「藥學上可接受的」係指在合理醫學判斷範圍內，適合用於與人類和動物組織接觸使用而沒有過多的毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症（與合理的益處/風險比相稱）的那些化合物、材料、組成物和/或劑型。
在本說明書中，除非另外說明，否則短語「有效量」意指化合物或組成物的足以顯著和積極地改變待治療的症狀和/或病症（例如，提供積極的臨床反應）的量。用於藥物組成物中的活性成分的有效量將隨所治療的特定病症、病症的嚴重程度、治療的持續時間、同步療法的性質、所利用的一或多種特定活性成分、所利用的一或多種特定藥學上可接受的賦形劑/載體、以及處於主治醫生的知識和專業知識範圍內的類似因素而變化。
除非另有指示，否則如本文所用的術語「治療」係指逆轉、緩解或預防此術語所適用的障礙或病症或者此障礙或病症的一或多個症狀，抑制其進展，延遲其進展，延遲其發作。除非另有指示，如本文所用的術語「治療」係指按照如上所定義的「治療」進行治療的行為。術語「治療」還包括受試者的輔助治療和新輔助治療。為免存疑，本文提及的「治療」包括提及治癒性、姑息性和預防性治療以及用於這種治療的藥劑的投與。
式 (I) 或式 (Ia) 之化合物可以形成穩定的藥學上可接受的酸或鹼的鹽，並且在此類情況下投與作為鹽的化合物可能是適當的。酸加成鹽之實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽（camphorate）、樟腦磺酸鹽、膽鹼、檸檬酸鹽、環己基胺基磺酸鹽、二乙基二胺、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、麩胺酸鹽、乙醇酸鹽、半硫酸鹽、2-羥乙基磺酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴化物、氫碘化物、羥基順丁烯二酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲磺酸鹽（methanesulfonate）（甲磺酸鹽（mesylate））、葡甲胺、2-萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽（pamoate）、過硫酸鹽、苯乙酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、奎尼酸鹽、柳酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、胺基磺酸鹽、磺胺酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽（對甲苯磺酸鹽）、三氟乙酸鹽和十一烷酸鹽。儘管其他的鹽可以用於諸如分離或純化產物，但是無毒的生理學上可接受的鹽係較佳的。
該等鹽可以藉由常規手段來形成，諸如藉由在該鹽不可溶的溶劑或介質中或在這樣的溶劑諸如水（在真空中或藉由冷凍乾燥除去）中使產物的游離鹼形式與一或多當量的適當酸反應，或藉由在適合的離子交換樹脂上將現有的鹽的陰離子交換為另一種陰離子。
式 (I) 或式 (Ia) 之化合物可以具有超過一個手性中心，並且應理解本申請涵蓋所有個體立體異構物、鏡像異構物和非鏡像異構物及其混合物。因而，應當理解，在式 I之化合物可憑藉一或多個不對稱碳原子而以光學活性形式或外消旋形式存在的情況下，本申請包括在其定義中任何此類具有上述活性的光學活性形式或外消旋形式。本申請涵蓋具有如本文中定義的活性的所有此類立體異構物。
因此，貫穿本說明書，在提及式 (I) 或式 (Ia) 之化合物時，應理解術語化合物包括作為PARP1抑制劑的非鏡像異構物、非鏡像異構物的混合物以及鏡像異構物。
還應理解，某些式 (I) 或式 (Ia) 之化合物及其藥用鹽可以以溶劑化形式連同非溶劑化形式（例如像水合形式和無水形式）存在。應當理解，本文中的化合物涵蓋所有此類溶劑化形式。為了清楚起見，這包括化合物游離形式的溶劑化（例如，水合）形式以及化合物的鹽的溶劑化（例如，水合）形式兩者。
如本文所述之式 (I) 或式 (Ia) 旨在涵蓋其組成原子的所有同位素。例如，H（或氫）包括氫的任何同位素形式，包括 1H、 2H（D）和 3H（T）；C包括碳的任何同位素形式，包括 12C、 13C和 14C；O包括氧的任何同位素形式，包括 16O、 17O和 18O；N包括氮的任何同位素形式，包括 13N、 14N和 15N；F包括氟的任何同位素形式，包括 19F和 18F；等等。在一方面，式I之化合物包括本文中涵蓋的原子的同位素，該等同位素的量對應於其天然存在的豐度。然而，在某些情況下，可能希望的是使一或多種原子富集於正常將以較低豐度存在的具體同位素。例如， 1H正常地將以大於99.98%的豐度存在；然而，在一方面，本文中呈現的任何式的化合物可以在H的存在下在一或多個位置處富集 2H或 3H。在另一方面中，當本文中呈現的任何式的化合物富集於放射性同位素（例如， 3H和 14C）時，該化合物可以用於藥物和/或底物組織分佈測定。應理解，本申請涵蓋所有此類同位素形式。
式 (I) 或式 (Ia) 之化合物或其藥學上可接受的鹽通常會經由口服途徑以藥物製劑形式投與，該等藥物製劑包含活性成分或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物或此類鹽的溶劑化物，呈藥學上可接受的劑型。取決於待治療的障礙和患者，該等組成物可以按不同劑量投與。
以上所述之式 (I) 或式 (Ia) 之化合物的藥物配製物可以被製備用於口服投與，具體地呈片劑或膠囊形式，並且尤其涉及目的在於提供靶向結腸的藥物釋放的技術（Patel, 2011）。
上以上所述之式 (I) 或式 (Ia) 之化合物的藥物配製物可以方便地以單位劑型投與，並且可以藉由製藥領域中眾所周知的任何方法，例如，如Remington's Pharmaceutical Sciences [雷明頓藥物科學], 第17版, Mack Publishing Company, Easton, PA. [馬克出版公司, 伊斯頓, 賓夕法尼亞州], (1985) 中所述的製備。
適於口服投與的藥物配製物可以包含一或多種生理上可相容的載體和/或賦形劑，並且可以呈固體或液體的形式。片劑和膠囊可以用黏合劑、填充劑、潤滑劑和/或界面活性劑（諸如十二烷基硫酸鈉）製備。液體組成物可以含有常規添加劑，諸如助懸劑、乳化劑和/或防腐劑。液體組成物可以封裝在例如明膠中以提供單位劑型。固體口服劑型包括片劑、兩件式硬殼膠囊和軟彈性明膠（SEG）膠囊。此類兩件式硬殼膠囊可以例如藉由將式 (I) 之化合物填充到明膠或羥丙基甲基纖維素（HPMC）殼中來製備。
乾殼配製物典型地包含約40%至60% w/w濃度的明膠、約20%至30%濃度的增塑劑（諸如甘油、山梨糖醇或丙二醇）和約30%至40%濃度的水。也可以存在其他材料，諸如防腐劑、染料、遮光劑和調味劑。液體填充材料包括已經溶解、增溶或分散（用助懸劑，諸如蜂蠟、氫化蓖麻油或聚乙二醇4000）的固體藥物或在媒介物或多種媒介物（諸如礦物油、植物油、甘油三酯、二醇、多元醇和界面活性劑）的組合中的液體藥物。
在治療性地治療人類時，式 (I) 或式 (Ia) 之化合物或其藥學上可接受的鹽的合適的每日劑量係約0.0001-100 mg/kg體重。
口服配製物係較佳的，特別是片劑或膠囊，其可以藉由熟悉該項技術者已知的方法配製，以提供在0.1 mg至1000 mg範圍內的活性化合物的劑量。 分子標記物
腦腫瘤諸如神經膠質瘤和神經母細胞瘤可以基於其基因和分子分類進行表徵。
在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含X連鎖的α地中海貧血/精神發育遲滯綜合症（ATRX）缺陷表型。
人中的ATRX基因跨越X染色體長臂q21.1帶的幾乎300 kbp。含有36個外顯子的基因編碼分子量為282,586 kDa的2492個胺基酸的蛋白質，儘管可替代地已鑒定出剪接轉錄變體。用於人ATRX的NCBI Entrez基因ID係基因ID：546。該蛋白質含有ATP酶/解旋酶結構域和稱為ADD（ATRX-DNMT3-DNMT3L，ADDATRX）的結構域，其與組蛋白H3結合。人ATRX的最長同種型的胺基酸序列作為NCBI參考序列：NP_000480.3提供。
神經膠質瘤中ATRX基因中的失活突變均勻分佈在整個基因中，並且據報導，在7%的成人神經膠質母細胞瘤（GBM）中以及14%-31%的兒科GBM中發生（Jiao等人 2012）。據報導，ATRX喪失促進腫瘤生長並且損害神經膠質瘤中的非同源末端連接DNA修復（Koschmann等人 2017）。
如本文所用，包含ATRX缺陷表型的腦腫瘤或神經母細胞瘤意指在癌症細胞中ATRX活性降低或根除。ATRX活性典型地借助ATRX基因中的突變來去除或根除。因此，在一些實施方式中，包含ATRX缺陷表型的腦腫瘤或神經母細胞瘤包括ATRX基因中具有突變的癌症細胞。癌症細胞中的此類突變典型地是雜合的，並且癌症細胞包含一個ATRX基因突變體拷貝和一個野生型拷貝。
在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含異檸檬酸脫氫酶（IDH）1和/或2缺陷表型。在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含IDH1缺陷表型。在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含IDH2缺陷表型。在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含IDH1和IDH2缺陷表型。在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤不包含IDH1缺陷表型（即，它係IDH1野生型）。在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤不包含IDH2缺陷表型（即，它係IDH2野生型）。在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤不包含IDH1或IDH2缺陷表型（即，它係IDH1和IDH2野生型）。
IDH1和IDH2中的突變在人類惡性腫瘤中普遍存在。在神經膠質瘤中，在世界衛生組織（WHO）II/III級案例的＞ 80%中識別出IDH1和IDH2突變。與癌症相關的IDH1和IDH2突變傾向於定位於精胺酸殘基，該精胺酸對於異檸檬酸鹽的識別和酶的催化活性而言至關重要（對於IDH1為R132，對於IDH2為R140或R172）。減少或根除該等酶的催化活性會影響細胞對抗活性氧（reactive oxygen species）的能力（Cohen等人 2013）。人IDH1的NCBI Entrez基因ID係基因ID：3417，並且人IDH2的NCBI Entrez基因ID係基因ID：3418。人IDH1的胺基酸序列提供為NCBI參考序列：NP_001269315.1，並且人IDH2的胺基酸序列提供為NCBI參考順序：NP_001276839.1。
如本文所用，包含IDH1和/或IDH2缺陷表型的腦腫瘤或神經母細胞瘤意指在癌症細胞中IDH1和/或IDH2活性降低或根除。IDH1或IDH2活性典型地分別借助IDH1或IDH2基因中的突變來去除或根除。因此，在一些實施方式中，包含IDH1和/或IDH2缺陷表型的腦腫瘤或神經母細胞瘤包括該一或多個IDH1和/或IDH2基因中具有突變的癌症細胞。癌症細胞中的此類突變典型地是雜合的，並且癌症細胞包含一個IDH1基因突變體拷貝和一個野生型拷貝。IDH1基因中的突變可為編碼IDH1的胺基酸殘基R132的核苷酸處的非同義突變，而IDH2基因中的突變可為在編碼IDH2的胺基酸殘基R140或R174的核苷酸處非同義突變。
在一些實施方式中，該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含O 6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶（MGMT）啟動子甲基化。
人中的MGMT基因位於染色體10q26.3上並且編碼高度進化保守且普遍表現的參與DNA修復的酶。MGMT基因啟動子的甲基化誘導MGMT蛋白水平的降低，並且已經在大約50%的GBM中觀察到。
在一些實施方式中，該方法包括診斷患者為患有包含以上分子標記物（ATRX突變、IDH突變和MGMT甲基化）中的一或多種的腦腫瘤或神經母細胞瘤的又一步驟。可以使用各種方法來進行該等腫瘤的基因組表徵以及進行診斷。例如，診斷步驟可以涉及從腫瘤中手術分離細胞，並且測定從患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤（即，腫瘤生檢）中獲得的細胞。可替代地，可以使用非侵入性方法。例如，有報導稱，從患有腦腫瘤的患者的腦脊液（CSF）中獲得無細胞循環腫瘤DNA，並且對CSF樣本進行測定（Martínez-Ricarte等人 2018）。
可以使用熟悉該項技術者已知的任何方法評估來自患者的樣本（例如，來自腫瘤的細胞和/或CSF樣本）的ATRX突變、IDH1和/或IDH2突變。作為非限制性實例，此類方法包括：磁共振、化學測定（例如，高效液相層析法（HPLC））、定序和PCR。
已知多種測定，並且可用於評估MGMT基因啟動子甲基化。合適的測定包括Mansouri 等人2019中描述的測定，並且包括例如甲基化特異化PCR、焦磷酸定序、定量即時PCR高解析度解鏈、甲基化特異性多重連接依賴性探針擴增和免疫組織化學。
也可以基於其基因組不穩定性水平來表徵腦腫瘤或神經母細胞瘤。研究證明，DNA損傷檢查點傳訊在神經膠質瘤中異常且組成性地活躍，其可以使用持續進行的DNA複製應激的標記物諸如γgH2AX；Chk2、Chk1和Rad17的磷酸化來測量（Bartkova等人 2010）。在一些實施方式中，腦腫瘤或神經母細胞瘤被表徵為具有高水平的基因組不穩定性，這可以藉由包含高（例如，高於非腫瘤細胞）水平的γgH2AX；Chk2、Chk1和Rad17的磷酸化來證明。 治療性應用
除非另有指示，否則如本文所用的術語「治療」係指逆轉、緩解或預防此術語所適用的障礙或病症或者此障礙或病症的一或多個症狀，抑制其進展，延遲其進展，延遲其發作。除非另有指示，如本文所用的術語「治療」係指按照如上所定義的「治療」進行治療的行為。術語「治療」還包括受試者（患者）的輔助治療和新輔助治療。為免存疑，本文提及的「治療」包括提及治癒性、姑息性和預防性治療以及用於這種治療的藥劑的投與。
在本說明書中，除非另外說明，否則短語「有效量」意指化合物或組成物的足以顯著和積極地改變待治療的症狀和/或病症（例如，提供積極的臨床反應）的量。用於藥物組成物中的活性成分的有效量將隨所治療的特定病症、病症的嚴重程度、治療的持續時間、同步療法的性質、所利用的一或多種特定活性成分、所利用的一或多種特定藥學上可接受的賦形劑/載體、以及處於主治醫生的知識和專業知識範圍內的類似因素而變化。
本發明之PARP抑制劑可以被配製為用於臨床用途的藥物組成物，並且可以包含藥學上可接受的載體、稀釋劑或佐劑。該組成物可以被配製用於局部、腸胃外、靜脈內、肌內、鞘內、眼內、皮下、口服、吸入或透皮投與途徑，其可以包括注射。可注射配製物可以包含在無菌或等滲介質中的所選化合物。
本發明之PARP抑制劑通常會經由口服途徑以藥物製劑形式投與，該等藥物製劑包含活性成分或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物或此類鹽的溶劑化物，呈藥學上可接受的劑型。取決於待治療的障礙和患者，該等組成物可以按不同劑量投與。
本文所述PARP抑制劑的藥物配製物可以被製備用於口服投與，具體地呈片劑或膠囊形式，並且尤其涉及目的在於提供靶向結腸的藥物釋放的技術（Patel, 2011）。
在人類的治療性治療中本文所述PARP抑制劑的合適每日劑量係約0.0001-100 mg/kg體重。
口服配製物係較佳的，特別是片劑或膠囊，其可以藉由熟悉該項技術者已知的方法配製，以提供在0.1 mg至1000 mg範圍內的活性化合物的劑量。在一些實施方式中，投與於患者的PARP抑制劑的量在10 mg/天至500 mg/天之間、在20 mg/天至500 mg/天之間、或在40 mg/天至500 mg/天之間、或在10 mg/天至400 mg/天之間、在20 mg/天至400 mg/天之間、或在40 mg/天至400 mg/天之間。 組合
在一些實施方式中，該等方法包括投與PARP抑制劑與烷基化化療劑和/或電離輻射的組合。此類組合治療可以包括單獨、順序或同時投與PARP抑制劑和烷基化化療劑和/或電離輻射。
還提供了一種藥物產品，該藥物產品包含i) 如本文所定義的PARP抑制劑，和ii) 烷基化化療劑。PARP抑制劑和烷基化化療劑典型地以單獨的劑型存在。
烷基化化療劑可為替莫唑胺（TMZ）。
TMZ係GBM的護理標準（SOC）化療（Stupp等人, 2014；Stupp等人, 2010）。治療可以涉及每28天週期投與150–200 mg/m 2/天的劑量，持續5天。替莫唑胺具有以下結構：
因此，在一些實施方式中，該方法可以包括投與治療有效量的如本文所述PARP抑制劑（例如，在10 mg/天至500 mg/天之間）以及投與150-200 mg/m 2/天的TMZ。這種治療可以在28天週期內進行，其中TMZ在前5天每天投與並且然後在週期的剩餘天數停止。PARP抑制劑可以在28天週期的每一天投與或者可以僅在投與TMZ時投與（例如，僅在28天週期的前5天期間投與）。
本文提供的數據還證明，本文所述PARP抑制劑可以在體外和體內模型中以相對低的TMZ劑量提供抗腫瘤益處。不希望受到理論的束縛，據信，本文所述PARP抑制劑可以能夠在較低的TMZ劑量（例如，低於用於治療所討論疾病的TMZ的SOC劑量）下實現臨床益處（例如，腫瘤減少）。
因此，在一些實施方式中，按以下（例如，每日）劑量投與TMZ：小於約200 mg/m 2、小於約175 mg/m 2、小於約150 mg/m 2、小於約125 mg/m 2、小於約100 mg/m 2、小於約75 mg/m 2、或小於約50 mg/m 2。
在一些實施方式中，按以下（例如，每日）劑量投與TMZ：在約50與200 mg/m 2之間、在約50與175 mg/m 2之間、在約50與150 mg/m 2之間、在約50與125 mg/m 2之間、在約50與100 mg/m 2之間、在約50與75 mg/m 2之間、在約75與200 mg/m 2之間、在約75與175 mg/m 2之間、在約75與150 mg/m 2之間、在約75與125 mg/m 2之間、在約75與100 mg/m 2之間、在約100與200 mg/m 2之間、在約125與175 mg/m 2之間、或在約125與150 mg/m 2之間。
烷基化化療劑可為二去水衛矛醇（VAL-083）。VAL-083係一種血腦屏障滲透烷基化劑，該烷基化劑可以誘導DNA股間交聯並且導致雙股DNA斷裂（Jimenez-Alcazar等人, 2021）。
VAL-083已被授予用於治療GBM的FDA和EMA罕用藥物指定，該藥物在先前的TMZ治療方案上取得了進展。目前，VAL-083處在用於MGMT甲基化和非甲基化GBM患者（NCT03050736、NCT02717962和NCT03138629）的臨床試驗中，並且具有以下結構： 。
與放療組合的30 mg/m 2/天的VAL-083被描述為總體安全且耐受性良好。每21天在第1、2和3天投與VAL-083。
因此，在一些實施方式中，該方法可以包括投與治療有效量的如本文所述PARP抑制劑（例如，在10 mg/天至500 mg/天之間）以及投與10-50 mg/m 2/天（例如，30 mg/m 2/天）的VAL-083。這種治療可以在21天週期內進行，其中VAL-083在前3天每天投與並且然後在週期的剩餘天數停止。PARP抑制劑可以在21天週期的每一天投與或者可以僅在投與VAL-083時投與（例如，僅在21天週期的前3天期間投與）。
在一些實施方式中，按以下（例如，每日）劑量投與VAL-083：小於約50 mg/m 2、小於約40 mg/m 2、小於約30 mg/m 2、或小於約20 mg/m 2。
在一些實施方式中，按以下（例如，每日）劑量投與VAL-083：在約10與50 mg/m 2之間、在約10與40 mg/m 2之間、或在約10 mg/m 2與30 mg/m 2之間。
在一些實施方式中，本文所述PARP抑制劑可以與電離輻射組合投與（例如，用於治療H3K27M神經膠質瘤）。除了烷基化化療劑之外或代替烷基化化療劑，可以投與電離輻射。
在某些實施方式中，電離輻射的劑量係約10 Gy、約15 Gy、約20 Gy、約25 Gy、約30 Gy、約35 Gy、約40 Gy、約45 Gy、約50 Gy、約55 Gy、約60 Gy、約65 Gy、約70 Gy、約75 Gy、約80 Gy、約90 Gy、或約100 Gy。在一些實施方式中，電離輻射的劑量小於約100 Gy、小於約90 Gy、小於約80 Gy、小於約70 Gy、小於約60 Gy、小於約50 Gy、小於約45 Gy、小於約40 Gy、小於約35 Gy、小於約30 Gy、小於約25 Gy、小於約20 Gy。在某些實施方式中，放療的劑量係10 Gy或更高、大於約15 Gy、大於約20 Gy、大於約25 Gy、大於約30 Gy、大於約35 Gy、大於約40 Gy、大於約45 Gy、大於約50 Gy。在一些實施方式中，放療的劑量在約10 Gy與約100 Gy之間。在一些實施方式中，放療的劑量在約20 Gy與約80 Gy之間。在一些實施方式中，放療的劑量在約20 Gy與約60 Gy之間。
電離輻射的劑量可以作為分次放療來投與（即，幾天/幾週內每天投與總劑量的一部分）。例如，上述劑量可以在4-6週內以20-30個部分投與。
電離輻射的投與劑量可以取決於所治療的腫瘤和/或患者的年齡（例如，成人或兒科）。例如，在原發性GBM（IDH野生型和ATRX野生型）的治療中，可以使用60 Gy的劑量，而在復發性GBM（可為IDH突變體/ATRX突變體）的治療中，可以使用35 Gy的劑量。
本文提供的數據還證明，本文所述PARP抑制劑可以在體外模型中以相對低的電離輻射提供抗腫瘤益處。不希望受到理論的束縛，據信，本文所述PARP抑制劑可以能夠在較低的電離輻射劑量（例如，低於用於治療所討論疾病的電離輻射的SOC劑量）下實現臨床益處（例如，腫瘤減少）。
因此，在一些實施方式中，電離輻射按劑量投與：小於約60 Gy、小於約55 Gy、小於約50 Gy、小於約45 Gy、或小於約40 Gy。在一些實施方式中，電離輻射按劑量投與：約20 Gy與約60 Gy之間、約20 Gy與約55 Gy之間、約20 Gy與約50 Gy之間、約20與約45 Gy之間、或約20與約40 Gy之間、約30 Gy與約60 Gy之間、約30 Gy與約55 Gy之間、約30 Gy與約50 Gy之間、約30 Gy與約45 Gy之間、約30 Gy與約40 Gy之間的劑量。 疾病
本文所述方法用於治療腦腫瘤和神經母細胞瘤。
可藉由該等方法治療的腦腫瘤之實例包括神經膠質瘤和室管膜瘤。在一些實施方式中，正在治療的腦腫瘤係神經膠質瘤。
適合治療的神經膠質瘤包括成人和兒科神經膠質瘤以及高級別和低級別神經膠質瘤。高級別神經膠質瘤之實例包括寡樹突神經膠質瘤、間變性星形細胞瘤、神經膠質母細胞瘤、和彌漫性中線神經膠質瘤。低級別神經膠質瘤之實例包括毛狀星細胞瘤、視路神經膠質瘤、頂蓋神經膠質瘤、寡樹突神經膠質瘤、神經節神經膠質瘤、和多形性黃色星形細胞瘤。在一些實施方式中，正在治療的腦腫瘤係高級別神經膠質瘤。
在一些實施方式中，正在治療的腦腫瘤係神經膠質母細胞瘤。在一些實施方式中，正在治療的腦腫瘤係神經膠質母細胞瘤，例如成人神經膠質母細胞瘤。在一些實施方式中，正在治療的腦腫瘤係彌漫性中線神經膠質瘤，例如兒科彌漫性中線神經膠質瘤。在一些實施方式中，正在治療的腦腫瘤係H3K27M突變型神經膠質瘤。
實例
現在將藉由參考以下非限制性實例來進一步解釋本申請的化合物。 通用實驗條件
除非另有說明，否則使用Bruker 300 MHz、400 MHz或500 MHz光譜儀，在27°C下獲得 1H NMR光譜；化學位移以百萬分率（ppm， δ單位）表示，並參考溶劑的殘留單 1H同位素體（CHCl 3：7.24 ppm；CHDCl 2：5.32 ppm；CD 3S(=O)CD 2H：2.49 ppm）。偶合常數係以赫茲（Hz）為單位給出。分裂模式描述了明顯的多重性，並且被指定為s（單峰）、d（雙峰）、t（三重峰）、q（四重奏）、m（多峰）和br s（寬峰）。LC-MS使用裝有Waters SQD質譜儀的Waters UPLC或裝有Shimadzu 2020質譜儀的Shimadzu LC-20AD LC-20XR LC-30AD進行。除非另有說明，否則報告的分子離子對應於[M+H]+；對於具有多個同位素模式的分子（Br、Cl等），除非另有說明，否則報告值係對於最低同位素質量獲得的值。
使用以下進行快速層析法：在來自Biotage TM的SP1 TM純化系統上、來自ISCO的CombiFlash ®Rf或在來自賽默飛世爾公司（Thermo Fisher）的Gilson上，使用正相二氧化矽FLASH+ TM（40 M、25 M或12 M）或SNAP TMKP-Sil筒柱（340、100、50或10）、來自Agela的快速柱矽膠-CS柱，使用C18-快速柱的直相快速層析法，或使用標準快速層析法。通常，所有使用的溶劑均為可商購的並且是分析級的。無水溶劑常規用於反應。在該等實例中使用的相分離器係ISOLUTE®相分離柱。使用來自先進化學發展股份有限公司（Advanced Chemistry Development, Inc.）（ACD/實驗室）的ACD/名稱12.01來命名以下命名的中間體和實例。起始材料係從商業來源獲得的或通過文獻路線製備的。 X- 射線粉末繞射（ XRPD ）分析
XRPD分析使用Bruker D8繞射儀進行，該繞射儀可商購自布魯克AXS公司（Bruker AXS Inc™）（麥迪森，威斯康辛州）。XRPD光譜藉由將用於分析的材料樣本（大約10 mg）安裝在單矽晶體晶片支架上（例如，布魯克矽零背景X-射線繞射樣本架）並且借助於顯微鏡載玻片將該樣本鋪展成薄層獲得。將樣本以30轉/分鐘旋轉（以改善計數統計）並且用由在40 kV和40 mA下操作的銅制長細聚焦管產生的具有1.5406埃（即，約1.54埃）的波長的X-射線來照射。以θ-θ模式中在從5°至40°的2-θ的範圍內，使樣本每0.02°的2-θ增量（連續掃描模式）暴露1秒。D8的運行時間約15 min。
XRPD 2θ值可在合理的範圍內變化，例如在± 0.2°的範圍內變化，並且當由於各種各樣的原因（包括例如較佳的方向）對基本上相同的結晶形式進行測量時XRPD強度可能變化。XRPD的原理被描述於出版物中，例如Giacovazzo, C.等人 (1995), Fundamentals of Crystallography [晶體的基本原理], Oxford University Press [牛津大學出版社]；Jenkins, R.和Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry [對X-射線粉末繞射的介紹], John Wiley & Sons [約翰威利父子出版公司], 紐約；和Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures [X-射線繞射程序], John Wiley and Sons [約翰威利父子出版公司], 紐約。 DSC 分析
對於根據標準方法製備的樣本，使用可獲得自TA INSTRUMENTS®（紐卡斯爾，德拉瓦州）的Q SERIES™ Q1000 DSC熱量計進行DSC分析。將樣本（大約2 mg）稱量到鋁樣本盤中並且轉移到DSC中。將儀器用氮氣以50 mL/min吹掃並且使用10°C/分鐘的動態加熱速率收集在22°C與300°C之間的數據。將熱數據使用標準軟體（例如，來自TA INSTRUMENTS®的通用v.4.5A）進行分析。
使用以下縮寫：AcOH = 乙酸；aq = 水性；BAST = 雙(2-甲氧基乙基)胺基三氟化硫；Boc 2O = 二碳酸二三級丁酯；Boc = 三級丁氧基羰基；CDCl 3= 氘代氯仿；CD 3OD = 氘代甲醇；CH 3NO 2= 硝基甲烷；DAST = 二乙基胺基三氟化硫；DCE = 1,2-二氯乙烷；DCM = 二氯甲烷；DDQ = 2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌；DEA = 二乙胺；DEAD = 偶氮二甲酸二乙酯；戴斯-馬丁高碘烷 = 1,1,1-三(乙醯基氧基)-1,1-二氫-1,2-苯碘醯-3-(1 H)-酮；DIPEA = N,N-二異丙基乙胺；DMAP = 2,6-二甲基胺基吡啶；DMF = N,N-二甲基甲醯胺；DMSO = 二甲基亞碸；DMSO-d 6= 氘代二甲亞碸；DPPA = 疊氮磷酸二苯酯；dppf = 1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵；DIAD = (E)-二氮烯-1,2-二甲酸二異丙酯；DSC = 微差掃描熱量法 ；DTAD = (E)-二氮烯-1,2-二甲酸二三級丁酯；ee = 鏡像異構物過量；eq. = 當量；ESI或ES = 電灑離子化；Et 2O = 乙醚；EtOAc或EA = 乙酸乙酯；EtOH = 乙醇；FA = 甲酸；格拉布斯（Grubbs）催化劑 (1,3-二莢基咪唑啉-2-亞基)(三環己基膦)二氯化釕；h = 小時；HATU = (二甲基胺基)- N, N-二甲基(3-氧化-1 H-[1,2,3]三唑并[4,5- b]吡啶基)甲亞胺鎓六氟磷酸鹽；HCl = 鹽酸；H 2O 2= 過氧化氫；HP = 高壓；IPA = 異丙醇；KF = 氟化鉀；LC = 液相層析法；LiClO 4= 高氯酸鋰；mmol = 毫莫耳；mCPBA = 間氯過氧苯甲酸；MeOH = 甲醇；min = 分鐘；MeCN或CH3CN或ACN = 乙腈；MeNO 2= 硝基甲烷；MS = 質量 = 譜法；NBS = N-溴琥珀醯亞胺；NH4Cl = 氯化銨；NMP = N-甲基-2-吡咯啶酮；NMR = 核磁共振；Pd/C = 鈀碳；Pd 2dba 3= 三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)；PdCl 2(dppf) = 1,1'-雙(二-三級丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀；PE = 石油醚；PPh 3= 三苯基膦；rt = 室溫；Rt或RT = 滯留時間；Ruphos Pd G3 = (2- 二環己基膦基-2’,6’-二異丙氧基-1,1’-聯苯基)[2-(2’-胺基-1,1’聯苯基)]鈀(II)甲磺酸鹽；Pd-PEPPSI™-IPent = 二氯[1,3-雙(2,6-二-3-戊基苯基)咪唑-2-亞基](3-氯吡啶基)鈀(II)、[1,3-雙(2,6-二-3-戊基苯基)咪唑-2-亞基](3-氯吡啶基)二氯鈀(II)、[1,3-雙(2,6-二-3-戊基苯基)咪唑-2-亞基](3-氯吡啶基)二氯化鈀(II)；Xphos Pd G2 = 氯(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯基)]鈀(II)、X-Phos胺基聯苯基氯化鈀；CataCXium A-Pd-G2 = 氯[(二(1-金剛烷基)- N-丁基膦)-2-(2-胺基聯苯基)]鈀(II)；sat = 飽和的；SFC = 超臨界流體層析法；T3P = 2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物；PPh3O = 三苯基氧化膦；TBTU = 2-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓四氟硼酸鹽；TFA = 三氟乙酸；THF = 四氫呋喃；TLC = 薄層層析法；TMS = 三甲基矽基；Xantphos = 4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基𠮿口星；CBr4 = 四溴化碳；HBr = 氫溴酸；Cs2CO3 = 碳酸銫；MgSO4 = 硫酸鎂；NaHCO3 = 碳酸氫鈉；DDQ = 2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌；SOCl2 = 亞硫醯氯；DIBAL-H = 氫化二異丁基鋁；NH4HCO3 = 碳酸氫銨；BINAP = 2,2’-雙(二苯基膦基)-1,1’-聯萘；SM = 起始材料；CH2Cl2 = 二氯甲烷；Et3N = 三乙胺；HCO2H = 甲酸；LCMS = 液相層析-質譜法；N2 = 二氮；Na2SO4 = 硫酸鈉；NH4CO3 = 碳酸銨；UV = 紫外線；XPhos Pd G2 = 氯(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯基)]鈀(II)；Pd(OAc)2 = 醋酸鈀(II)，ppt = 沈澱。 實例的製備 中間體 2 ： 1- 溴 -4- 氟 -2- 甲基 -3- 硝基 - 苯
在0°C下向1-氟-3-甲基-2-硝基-苯（10.7 g，68.98 mmol）（ 中間體 1 ）在TFA（50 mL）中之溶液中緩慢添加濃H 2SO 4（20 mL），然後分批添加NBS（13.50 g，75.87 mmol）。添加後，將混合物在室溫下攪拌4 h。將所得混合物倒在冰上，並且藉由過濾收集形成的沈澱，用水洗滌並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的1-溴-4-氟-2-甲基-3-硝基苯（ 中間體 2 ）（14.80 g，92%）。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 2.43 (3H, s), 7.03 (1H, t), 7.68 (1H, dd)。 中間體 3 ： 2-(4- 溴 -3- 甲基 -2- 硝基 - 苯胺基 ) 丙酸
將1-溴-4-氟-2-甲基-3-硝基-苯（13.8 g，58.97 mmol）（ 中間體 2 ）、丙胺酸（6.30 g，70.76 mmol）和碳酸鉀（24.45 g，176.90 mmol）在DMF（15 mL）中之混合物在100°C下攪拌5 h，然後將溫度升至110°C並且攪拌5 h。將混合物倒在冰上，在0°C下用1M HCl水溶液（約300 ml）緩慢淬滅，得到黃色懸浮液。藉由過濾收集固體，用水洗滌並且在真空烘箱中在50°C下乾燥2天以得到呈黃色固體的2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丙酸（14.03 g，78%）（ 中間體 3 ）（存在一些雜質）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.39 (3H, d), 2.28 (3H, s), 4.20 (1H, quin), 6.12 (1H, br d), 6.68 (1H, d), 7.58 (1H, d), 12.98 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 303。 中間體 4 ： 2-(4- 溴 -3- 甲基 -2- 硝基 - 苯胺基 ) 丙酸甲酯
在0°C下向2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丙酸（14.9 g，49.16 mmol）（ 中間體 3 ）在MeOH（150 mL）中之溶液中逐滴添加亞硫醯氯（10.76 mL，147.47 mmol），並且將混合物在室溫下攪拌過夜。LCMS指示完全轉化。在0°C下用飽和NaHCO 3水溶液（約300 ml）緩慢淬滅反應混合物以得到橙色懸浮液。藉由過濾收集固體，用水洗滌並且乾燥以產生粗產物（14.6 g）。將固體在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至25%乙酸乙酯洗脫）以得到呈亮橙色固體的2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯（ 中間體 4 ）（12.74 g，82%）。1H NMR (500 MHz, 氯仿-d) 1.52 (3H, d), 2.43 (3H, s), 3.76 (3H, s), 4.14 (1H, quin), 5.83 (1H, br d), 6.45 (1H, d), 7.48 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 317。 中間體 5 ： 7- 溴 -3,8- 二甲基 -3,4- 二氫 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下向2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯（11.6 g，36.58 mmol）（ 中間體 4 ）、鋅（23.91 g，365.77 mmol）、氯化銨（19.56 g，365.77 mmol）在MeOH（100 mL）中之攪拌混合物中添加小冰塊（放熱）。然後將反應混合物在0°C（冰浴）下攪拌15 min。添加水（2 mL）並且將所得混合物在室溫下攪拌15 min。亮橙色消失。將混合物通過濾紙過濾，用甲醇洗滌並且將濾液在真空下濃縮。將殘餘物用乙酸乙酯稀釋並且用水洗滌，然後用鹽水洗滌。將有機層乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮以得到2-(2-胺基-4-溴-3-甲基-苯胺基)丙酸甲酯和7-溴-3,8-二甲基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮的混合物（9.8 g）。
在室溫下向上述固體在MeOH（100 mL）中之溶液中添加2 ml在二㗁𠮿中的4M HCl，並且將混合物在室溫下攪拌10 min。再添加100 ml甲醇（形成游離懸浮液），並且將所得懸浮液在室溫下攪拌1 h。將混合物用醚（約200 ml）稀釋，藉由過濾收集固體並且用醚洗滌。將濾液濃縮直至固體沈澱，藉由過濾收集固體。將此程序重複數次以產生第一份產物7.2 g。將濾液濃縮並且在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至100%乙酸乙酯洗脫），並且將級分濃縮產物，並且將所得材料與上述材料合併以得到呈灰白色固體的7-溴-3,8-二甲基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（9.10 g，98%）（ 中間體 5 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.23 (3H, d), 2.24 (3H, s), 3.68 (1H, q), 3.75 (br, 1H), (6.54 (1H, d), 7.00 (1H, d), 9.77 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 255。 中間體 6 ： 7- 溴 -3,8- 二甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在室溫下將DDQ（8.91 g，39.24 mmol）添加到7-溴-3,8-二甲基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（9.1 g，35.67 mmol）（ 中間體 5 ）在CH 2Cl 2（400 mL）中之懸浮液中並且將混合物攪拌過夜。LCMS指示清楚的轉化。在減壓下除去溶劑，添加飽和NaHCO 3溶液（約300 ml）溶液並且將黃色懸浮液在室溫下攪拌4 h。藉由過濾收集固體並且用水洗滌。將固體在飽和NaHCO 3（100 ml）中漿化並且在室溫下攪拌1 h。將固體過濾，用水洗滌，然後用醚洗滌並且乾燥以產生呈灰白色固體的7-溴-3,8-二甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（7.29 g，81%）（ 中間體 6 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.40 (3H, s), 2.50 (3H, s) (與DMSO- d6峰重疊), 7.32 - 7.65 (2H, m), 11.76 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 253。 中間體 7 ： 7-( 羥甲基 )-3,8- 二甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在80°C下將(三丁基甲錫烷基)甲醇（1142 mg，3.56 mmol）、7-溴-3,8-二甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（600 mg，2.37 mmol）（ 中間體 6 ）和Xphos Pd G2（280 mg，0.36 mmol）在1,4-二㗁𠮿（40 mL）中之混合物攪拌18 h。在減壓下除去溶劑，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在DCM中的0至15%甲醇洗脫）以產生呈灰白色固體的7-(羥甲基)-3,8-二甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（225 mg，46%）（ 中間體 7 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.31 (3H, s), 2.40 (3H, s), 4.58 (2H, d), 5.22 (1H, t), 7.33 (1H, d), 7.52 (1H, d), 11.53 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 205。 中間體 8 ： 7-( 溴甲基 )-3,8- 二甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將在HBr（15 ml，132.59 mmol）（在水中48w%）中的7-(羥甲基)-3,8-二甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（223 mg，1.09 mmol）（ 中間體 7 ）在80°C下攪拌3.5 h。在減壓下除去溶劑，向殘餘物中添加乙醚，將混合物進行音波處理並且收集固體以產生呈黃色固體的7-(溴甲基)-3,8-二甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（408 mg，107%）（ 中間體 8 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.36 - 2.45 (6H, m), 4.83 (2H, s), 7.34 (1H, d), 7.53 (1H, d), 11.63 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 267, 269。 實例 1 ： 5-[4-[(2,5- 二甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 氟 -N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向7-(溴甲基)-3,8-二甲基-1H-喹㗁啉-2-酮，HBr（37 mg，0.10 mmol）（ 中間體 8 ）的懸浮液中添加ACN（5 ml）、6-氟-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺，2HCl（31.5 mg，0.10 mmol）（ 中間體 32 ）和DIPEA（79 µl，0.45 mmol）並且將反應混合物在70°C下攪拌1 h以得到淺黃色懸浮液。將懸浮液冷卻至室溫，添加1滴水，藉由過濾收集固體，用乙腈洗滌三次並且乾燥以產生呈黃色固體的5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.016 g，33%）（ 實例 1 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.07 (3H, br s), 2.42 (3H, br d), 2.56 (4H, br s), 2.76 (3H, br s), 3.14 (4H, br s), 3.61 (2H, br s), 7.23 (1H, br d), 7.42 - 7.67 (2H, m), 7.83 (1H, br d), 8.38 (1H, br s), 11.13 - 11.97 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 425。 實例 2 ： 5-[4-[(2,5- 二甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向7-(溴甲基)-3,8-二甲基喹㗁啉-2(1H)-酮，HBr（240 mg，0.69 mmol）（ 中間體 8 ）、N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，2HCl（202 mg，0.69 mmol）（ 中間體 31 ）在乙腈（13 mL）中之懸浮液中添加DIPEA（0.723 mL，4.14 mmol）並且將所得混合物在70°C下攪拌3 h。將混合物濃縮並且在逆相上純化（C18柱，用0至100% ACN/水（0.2%氫氧化銨）洗脫）以產生呈棕色固體的產物。將固體懸浮在DCM和MeOH（2 : 1）的混合物中，濃縮以除去DCM，將固體過濾並且用甲醇洗滌。將固體懸浮在ACN（3 ml）中，添加0.8 ml 1M HCl的水溶液，用水（約3 ml）稀釋並且凍乾以產生產物5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.033 g，11%）的HCl鹽（ 實例 2 ）。1HNMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.45 (3H, s), 2.54 (3H, s), 2.81 (3H, br d), 3.24 - 3.56 (6H, m), 3.88 - 4.02 (2H, m), 4.54 (2H, br s), 7.48 - 7.71 (3H, m), 7.97 (1H, br d), 8.33 (1H, br d), 8.59 (1H, br s), 11.28 (1H, br s), 11.48 - 11.95 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 407。 實例 3 ： 6- 氯 -5-[4-[(2,5- 二甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將在AcOH中的HBr（2 mL，0.18 mmol）（33 wt%）添加到7-(羥甲基)-3,8-二甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（36 mg，0.18 mmol）（ 中間體 7 ）在NMP（2 mL）中之溶液中。將所得混合物在100°C下攪拌1小時。在減壓下除去溶劑。將DIPEA（0.25 mL，1.43 mmol）添加到6-氯-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺（48 mg，0.19 mmol）（ 中間體 30 ）在NMP（2 mL）中之溶液中。將所得混合物在100°C下攪拌18小時。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：YMC-Actus Triart C18，30*250，5 μm；流動相A：水（0.05% NH 3H 2O），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內41 B至61 B；254；220 nm。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以產生呈白色固體的6-氯-5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（33.0 mg，42%）（ 實例 3 ）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.41 (3H, s), 2.43 (3H, s), 2.54 - 2.62 (4H, m), 2.78 (3H, d), 3.05 - 3.11 (4H, m), 3.62 (2H, s), 7.24 (1H, d), 7.51 (1H, d), 7.65 (1H, d), 7.92 (1H, d), 8.41 - 8.45 (1H, m), 11.56 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 441。 實例 4 ： 5-[4-[(2,5- 二甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將在AcOH中的HBr（2 mL，12.15 mmol）（33 wt%）溶液添加到7-(羥甲基)-3,8-二甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（43 mg，0.21 mmol）（ 中間體 7）在NMP（2 mL）中之溶液中。將所得混合物在80°C下攪拌1小時。在減壓下除去溶劑。向所得固體在NMP（3 mL）中之溶液中添加DIPEA（0.25 mL，1.43 mmol）和N,6-二甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺（42 mg，0.18 mmol）（ 中間體 33 ）。將所得混合物在100°C下攪拌18小時。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：YMC-Actus Triart C18，30*250，5 μm；使用在乙腈中的水（0.05% NH 4OH。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 4 ）（18.40 mg，24%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.40 (3H, s), 2.43 (3H, s), 2.48 (3H, s), 2.55 - 2.63 (4H, m), 2.79 (3H, d), 2.87 - 2.94 (4H, m), 3.62 (2H, s), 7.24 (1H, d), 7.46 (1H, d), 7.51 (1H, d), 7.78 (1H, d), 8.39 - 8.44 (1H, m), 11.56 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 421。 中間體 10 ： 5- 溴 -6- 氟 - 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將在乙腈（300 ml）中的5-溴吡啶甲酸甲酯（ 中間體 9 ）（24 g，111.09 mmol）裝入乾燥的燒瓶，添加氟化銀(II)（50 g，342.78 mmol），將混合物在室溫下在N 2下攪拌1天。LCMS指示約70%的轉化。添加另一批AgF2（16 g）並且將所得混合物在室溫下繼續攪拌過夜。將混合物通過矽藻土過濾，用乙腈洗滌，然後用DCM洗滌，並且將濾液濃縮以產生淺棕色固體。將殘餘物在DCM和飽和NH 4Cl溶液之間分配，得到白色懸浮液。將固體濾出並且丟棄。將濾液轉移至分液漏斗，分離有機層，並且將水層用乙酸乙酯（150 ml x 3）萃取。將有機物合併，乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮直至固體沈澱出來。藉由過濾收集固體，用醚洗滌，乾燥以產生片狀灰白色固體。將合併的濾液再次濃縮，藉由過濾收集固體以得到合併的19.96 g產物。將剩餘的濾液濃縮並且在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至25%乙酸乙酯洗脫）以產生呈白色片狀固體的所需產物的第二部分3.5 g。合併所有材料以產生5-溴-6-氟-吡啶-2-甲酸甲酯（23.46 g，90%）（ 中間體 10 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 3.89 (3H, s), 7.93 (1H, d), 8.51 (1H, t)；m/z (ES +) [M+H] += 234。 中間體 11 ： 4-(2- 氟 -6- 甲氧基羰基 -3- 吡啶基 ) 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（28.0 g，150.37 mmol）、5-溴-6-氟-吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 10 ）（23.46 g，100.25 mmol）、RuPhos Pd G3（5.45 g，6.52 mmol）和Cs 2CO 3（82 g，250.61 mmol）在1,4-二㗁𠮿（400 mL）中之混合物在80°C下在N 2下攪拌過夜。將反應混合物用水（250 ml）稀釋並且用乙酸乙酯（250 ml）萃取。將有機層用鹽水洗滌，將水層用乙酸乙酯（100 ml x 1）萃取，將有機物乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮，將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至50%乙酸乙酯洗脫）得到呈黃色固體的產物，將固體從乙酸乙酯/己烷中重結晶，過濾，用己烷洗滌，乾燥以產生呈結晶白色固體的產物（24.8 g）；將濾液濃縮並且在矽膠柱上再純化以產生更多的產物1.9 g。總共產生4-(2-氟-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 11 ）（26.7 g，78%）。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 1.51 (9H, s), 3.12 - 3.28 (4H, m), 3.48 - 3.67 (4H, m), 3.98 (3H, s), 7.27 (1H, d), 7.99 (1H, dd)；m/z (ES +) [M+H] += 340。 中間體 12 ： 6- 氟 -5- 哌 𠯤 -1- 基 - 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在室溫下向4-(2-氟-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（1.9 g，5.60 mmol）（ 中間體 11）在MeOH（10 mL）中之混合物中添加在二㗁𠮿中的HCl 4 M（10 ml，40.00 mmol）並且將所得混合物在室溫下攪拌1 h。將混合物用醚稀釋，藉由過濾收集固體，用醚洗滌並且在真空下乾燥以產生呈白色固體的6-氟-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯（1.360 g，78%）（ 中間體 12）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 3.24 (4H, br s), 3.46 (4H, br s), 3.84 (3H, s), 7.65 (1H, br t), 7.94 (1H, br d), 9.43 (2H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 240。 中間體 13 ： 5-[4-[(2,5- 二甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 氟 - 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將7-(羥甲基)-3,8-二甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（223 mg，1.09 mmol）（ 中間體 7）在HBr（15 ml，132.59 mmol）（在水中的48 w%）在80°C下攪拌3.5 h。在減壓下除去溶劑，將DCM添加到殘餘物中並且濃縮以產生呈黃色固體的7-(溴甲基)-3,8-二甲基喹㗁啉-2(1H)-酮。
在室溫下向以上固體（20 ml）在乙腈中之溶液中添加6-氟-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯、2HCl（260 mg，0.83 mmol）（ 中間體 12 ）和DIPEA（1.907 ml，10.92 mmol），並且將反應混合物在70°C下攪拌2 h。將混合物冷卻至室溫，添加0.5 ml水，並且藉由過濾收集固體並且用乙腈洗滌。將固體乾燥以產生灰白色固體，為5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-吡啶-2-甲酸甲酯（0.371 g，80%）（ 中間體 13 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.42 (6H, m), 2.52 - 2.59 (4H, m), 3.20 (4H, br d), 3.61 (2H, s), 3.82 (3H, s), 7.23 (1H, d), 7.41 - 7.59 (2H, m), 7.91 (1H, d), 11.55 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 426。 實例 5 ： 5-[4-[(2,5- 二甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 氟 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在密封的40 ml小瓶中裝入5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-吡啶-2-甲酸甲酯（360 mg，0.85 mmol）（ 中間體 13 ）和胺（15 ml，105.00 mmol，在甲醇中7N）並且將混合物在50°C下攪拌過夜。LCMS指示仍有一些起始材料剩餘。將混合物濃縮，向固體中添加10 ml 7 N胺的甲醇溶液，並且將混合物在50°C下攪拌4 h，得到白色懸浮液。藉由過濾收集固體，用己烷洗滌並且乾燥以產生呈白色固體的5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 5）（340 mg，98%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.40 (3H, s), 2.43 (3H, s), 2.56 (4H, br s), 3.14 (4H, br s), 3.61 (2H, s), 7.23 (1H, d), 7.46 (1H, br s), 7.48 - 7.58 (2H, m), 7.76 (1H, br s), 7.84 (1H, br d), 11.11 - 11.70 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 411。 中間體 15 ： 4-(6- 甲氧基羰基 -2- 甲基 -3- 吡啶基 ) 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
在裝有隔墊蓋的40 mL小瓶中裝入5-溴-6-甲基吡啶甲酸甲酯（ 中間體 14）（2 g，8.69 mmol）、哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（3.24 g，17.39 mmol）、Cs 2CO 3（5.66 g，17.39 mmol）和Ruphos Pd G3（0.727 g，0.87 mmol）。將反應小瓶在真空下抽真空並且填充氮氣。添加1,4-二㗁𠮿（20 mL），並且將反應小瓶置於預熱至80°C的加熱塊中並且攪拌16 h。將反應混合物冷卻，用水稀釋並且用乙酸乙酯萃取，將有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥並且濃縮。將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至50%乙酸乙酯洗脫）以產生呈淺黃色固體的4-(6-甲氧羰基-2-甲基-3-吡啶基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 15 ）（2.090 g，72%）。1H NMR (500 MHz, 二氯甲烷- d2) 1.49 (9H, s), 2.59 (3H, s), 2.88 - 3.00 (4H, m), 3.55 - 3.65 (4H, m), 3.92 (3H, s), 7.32 (1H, d), 7.92 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 336。 中間體 16 ： 6- 甲基 -5- 哌 𠯤 -1- 基 - 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將在1,4-二㗁𠮿中的4 M氯化氫溶液（31.2 ml，124.63 mmol）添加到4-(6-(甲氧基羰基)-2-甲基吡啶-3-基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 15 ）（4.18 g，12.46 mmol）在DCM（30 mL）中之攪拌溶液並且將所得溶液在室溫下攪拌18 h。在真空下除去溶劑，將所得固體在乙醚中漿化，並且藉由過濾收集固體，以得到呈淺黃色固體的6-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 16 ）（3.80 g，99%）；m/z (ES +) [M+H] += 236。 中間體 18 ： 5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 甲基 - 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在室溫下將三苯基膦（1.584 g，6.04 mmol）（添加4.4 g，基於1.6 mmol/g的PPh3負載量計算）添加到8-氟-7-(羥甲基)-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（419 mg，2.01 mmol）（ 中間 體 17 ）和全溴甲烷（1.335 g，4.03 mmol）在DCM（40 mL）中之攪拌漿料中。將所得混合物攪拌1 h。將反應混合物過濾，用DCM和THF洗滌，將濾液在真空下濃縮以產生呈淺黃色固體的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮。
向上述新鮮製備的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮在乙腈（25 mL）中之漿料中添加6-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯，2HCl（590 mg，1.91 mmol）（ 中間體 16）和N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺（1754 µl，10.07 mmol）並且將反應加熱至70°C持續1 h。將反應混合物冷卻至室溫，濃縮，並且用飽和NaHCO 3水溶液淬滅並且攪拌1 h。藉由過濾分離固體並且用水洗滌。將粗固體在二氧化矽膠柱層析上純化（使用在DCM中的0-10% MeOH）以產生5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 18 ）（0.263 g，31%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.40 - 2.49 (6H, m), 2.62 (4H, br s), 2.97 (4H, br s), 3.72 (2H, s), 3.83 (3H, s), 7.30 (1H, t), 7.44 (1H, d), 7.52 (1H, d), 7.85 (1H, d), 12.45 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO- d6) -135.54 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 426。 實例 6 ： 5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將在甲醇中的7 N胺（16.47 ml，115.26 mmol）添加到在40 mL閃爍小瓶中的5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 18）（0.2452 g，0.58 mmol），密封並且在室溫下攪拌18 h。將另外的7 N NH 3溶液（15 mL）添加到反應混合物中並且在50°C下攪拌過夜。將反應在真空下濃縮，在5 mL MeOH中漿化。將固體濾出，用甲醇洗滌並且乾燥以產生呈灰白色固體的5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 6）（0.151 g，64%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.42 (3H, s), 2.45 - 2.49 (3H, m), 2.52 - 2.69 (4H, m), 2.94 (4H, br s), 3.71 (2H, s), 7.29 (1H, t), 7.40 - 7.54 (3H, m), 7.77 - 7.84 (2H, m), 12.43 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO- d6) -135.53 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 411。 中間體 19 ： 5-[4-[(2,5- 二甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 甲基 - 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將在HBr（15 ml，132.59 mmol）（在水中的48 w%）中的7-(羥甲基)-3,8-二甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 7 ）（223 mg，1.09 mmol）在80°C下攪拌4 h。在減壓下除去溶劑，將DCM添加到殘餘物中，將混合物進行音波處理並且濃縮以產生呈黃色固體的7-(溴甲基)-3,8-二甲基喹㗁啉-2(1H)-酮。
向上述在乙腈（20 ml）中之漿料中添加6-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯，2HCl（ 中間體 16 ）（337 mg，1.09 mmol）和DIPEA（1.907 ml，10.92 mmol）。將反應混合物在70°C下攪拌2 h，得到澄清溶液。將所得混合物冷卻至室溫，除去一半溶劑，添加0.5 ml水。藉由過濾收集固體，用乙腈洗滌並且乾燥以產生黃色固體。將此固體在矽膠柱上純化（用0-20%甲醇的DCM溶液洗脫）以產生呈灰白色固體的5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 19 ）（213 mg，46%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.41 (3H, s), 2.43 (3H, s), 2.47 (3H, s), 2.58 (4H, br s), 2.95 (4H, br s), 3.63 (2H, s), 3.82 (3H, s), 7.24 (1H, d), 7.43 (1H, d), 7.51 (1H, d), 7.84 (1H, d), 11.55 (1H, s)。m/z (ES +) [M+H] += 422。 實例 7 ： 5-[4-[(2,5- 二甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在密封的40 ml小瓶中裝入5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 19 ）（210 mg，0.50 mmol）和胺（15 ml，105.00 mmol，在甲醇中7 N）並且將反應在50°C下攪拌過夜。反應不完全。濃縮混合物，向此固體中添加10 ml在甲醇中的7 N胺。將小瓶加蓋並且在50°C下攪拌4 h以得到白色懸浮液。將混合物冷卻至室溫，藉由過濾收集固體，用己烷洗滌並且乾燥以產生呈白色固體的5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 7 ）（191 mg，94%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.41 (3H, s), 2.44 (3H, s), 2.49 (3H, s), 2.58 (4H, br s), 2.92 (4H, br s), 3.63 (2H, br s), 7.24 (1H, br d), 7.42 (1H, br s), 7.46 (1H, br d), 7.51 (1H, br d), 7.79 (2H, br d), 10.53 - 11.23 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 407。 中間體 21 ： 2- 胺基丁酸甲酯
在冰浴中冷卻2-胺基丁酸（ 中間體 20 ）（5 g，48.49 mmol）在甲醇（35 mL）中的漿料。在0°C下將亞硫醯氯（11 mL，150.72 mmol）逐滴添加到上述混合物中。允許使反應升溫至室溫並且攪拌過夜。將澄清溶液濃縮至乾以獲得殘餘物。將所得固體懸浮在醚中，過濾，用醚洗滌並且乾燥以產生呈白色固體呈HCl鹽形式的2-胺基丁酸甲酯.HCl（ 中間體 21 ）（7.35 g，99%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 0.92 (3H, t), 1.76 - 1.93 (2H, m), 3.75 (3H, s), 3.95 - 4.05 (1H, m), 8.53 (3H, br s)。 中間體 23 ： 2-(4- 溴 -3- 氯 -2- 硝基 - 苯胺基 ) 丁酸甲酯
在燒瓶中裝入在1,4-二㗁𠮿（30 mL）中的2-胺基丁酸甲酯，HCl（ 中間體 21 ）（1.811 g，11.79 mmol）、1-溴-2-氯-4-氟-3-硝基苯（ 中間體 22 ）（2.0 g，7.86 mmol），添加DIPEA（8.24 mL，47.16 mmol）並且將混合物在105°C下攪拌24 h。將混合物濃縮，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至50%乙酸乙酯洗脫）以產生呈亮黃色油狀物的2-(4-溴-3-氯-2-硝基-苯胺基)丁酸甲酯（ 中間體 23 ）（2.100 g，76%），靜置後變成黃色固體。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 0.99 (3H, t), 1.78 - 1.89 (1H, m), 1.91 - 2.02 (1H, m), 3.77 (3H, s), 4.04 (1H, q), 5.63 (1H, br d), 6.55 (1H, d), 7.52 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 351。 中間體 24 ： 7- 溴 -8- 氯 -3- 乙基 -3,4- 二氫 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將連二亞硫酸鈉（3.05 g，17.49 mmol）添加到2-(4-溴-3-氯-2-硝基-苯胺基)丁酸甲酯（ 中間體 23 ）（2.05 g，5.83 mmol）在DMSO（50 mL）中之攪拌混合物中，並且將混合物在120°C下攪拌3 h。將混合物用水淬滅並且用乙酸乙酯（50 ml x 2）萃取。將有機層乾燥（無水Na 2SO 4），過濾，濃縮，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（在己烷中的0至55%乙酸乙酯）以產生峰1，即呈淺黃色固體的7-溴-8-氯-3-乙基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 25 ）（0.319 g，19%）。1H NMR (500 MHz, 甲醇- d4) 1.31 (3H, t), 2.89 (2H, q), 7.56 - 7.67 (2H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 287, 289
和峰2，即呈黃色油狀物的7-溴-8-氯-3-乙基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 24 ）（0.895 g，53%），放置後變成黃色固體。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 1.04 (3H, t), 1.75 - 1.84 (1H, m), 1.85 - 1.93 (1H, m), 3.89 (1H, dd), 6.51 (1H, d), 7.12 (1H, d), 7.82 (1H, br s)。m/z (ES +) [M+H] += 289, 291。 中間體 25 ： 7- 溴 -8- 氯 -3- 乙基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在室溫下將DDQ（772 mg，3.40 mmol）添加到7-溴-8-氯-3-乙基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 24 ）（895 mg，3.09 mmol）在1,4-二㗁𠮿（20 mL）中之混合物中，並且將所得懸浮液在室溫下攪拌3 h。LCMS指示完全轉化。在減壓下除去溶劑，並且將殘餘物用飽和NaHCO 3溶液處理，在室溫下攪拌2 h。藉由過濾收集固體，用飽和NaHCO 3溶液、水洗滌並且乾燥以產生呈灰白色固體的7-溴-8-氯-3-乙基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 25 ）（780 mg，88%）。1H NMR (500 MHz, 甲醇- d4) 1.31 (3H, t), 2.89 (2H, q), 7.56 - 7.67 (2H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 287, 289。 中間體 26 ： 8- 氯 -3- 乙基 -7- 乙烯基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將7-溴-8-氯-3-乙基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 25 ）（1.05 g，3.65 mmol）、三丁基(乙烯基)錫烷（1.737 g，5.48 mmol）和Pd(PPh 3) 4（0.422 g，0.37 mmol）在甲苯（50 mL）中之混合物在110°C下在N 2下攪拌2 h。LCMS指示剩餘約44%的起始材料。將混合物在此溫度下繼續攪拌4.5 h並且然後在80°C下攪拌過夜。將混合物濃縮，在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至100%乙酸乙酯洗脫）以產生低溶解性的呈淺黃色固體的所需產物8-氯-3-乙基-7-乙烯基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 26 ）（0.850 g, 99%）。m/z (ES +) [M+H] += 235 （產物被PPh 3O污染）。 中間體 27 ： 5- 氯 -2- 乙基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 甲醛
將在H 2O中的四氧化鋨（0.568 mL，0.07 mmol）添加到8-氯-3-乙基-7-乙烯基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 26 ）（850 mg，3.62 mmol）、2,6-二甲基吡啶（0.844 mL，7.24 mmol）和高碘酸鈉（3099 mg，14.49 mmol）在THF（50 mL）/水（10 mL）/三級丁醇（3.46 mL，36.22 mmol）中之溶液中並且在室溫下攪拌過夜，得到黃色懸浮液。將反應濃縮，在水、飽和NH 4Cl溶液和DCM之間分配，並且分離各層。將水層用DCM萃取，並且將合併的有機層乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮。將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至50%乙酸乙酯洗脫）以產生呈淺黃色固體的5-氯-2-乙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（ 中間體 27 ）（808 mg，94%）。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 1.34 - 1.42 (3H, m), 3.03 (2H, q), 7.88 (2H, d), 8.99 - 9.38 (1H, m), 10.54 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 237。 中間體 28 ： 8- 氯 -3- 乙基 -7-( 羥甲基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將在MeOH（30 mL）中的5-氯-2-乙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（ 中間體 27 ）（808 mg，3.41 mmol）冷卻至0°C，並且一次性添加硼氫化鈉（1292 mg，3.41 mmol）（在鹼性氧化鋁上10 wt%）。將反應混合物在0°C下繼續攪拌40 min。LCMS指示剩餘一些起始材料。將另外213 mg NaBH 4（10 wt%）添加到此混合物中，並且在0°C下繼續攪拌10 min。向混合物中添加1 ml水，濃縮，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用0至25%甲醇的DCM溶液洗脫）以產生8-氯-3-乙基-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 28 ）（625 mg，77%）（被26%的過度還原副產物污染）。1H NMR (500 MHz, 甲醇- d4) 1.27 - 1.34 (3H, m), 2.91 (2H, q), 4.79 - 4.82 (2H, m), 7.54 (1H, d), 7.75 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 239。 中間體 29 ： 7-( 溴甲基 )-8- 氯 -3- 乙基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下將四溴化碳（1612 mg，4.86 mmol）一次性添加到8-氯-3-乙基-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 28 ）（580 mg，2.43 mmol）和三苯基膦（1275 mg，4.86 mmol）在CH 2Cl 2（40 mL）中之溶液中並且將混合物在0°C下攪拌1 h。LCMS指示完全轉化。在減壓下除去溶劑，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至50%乙酸乙酯洗脫）以產生呈白色固體的純的7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 29 ）（200 mg，27%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.22 (3H, t), 2.83 (2H, q), 4.85 (2H, s), 7.51 (1H, d), 7.71 (1H, d), 11.89 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 301, 303。 實例 8 ： 6- 氯 -5-[4-[(5- 氯 -2- 乙基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（0.058 mL，0.33 mmol）添加到7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 29 ）（25 mg，0.08 mmol）和6-氯-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，2HCl（ 中間體 30 ）（27.2 mg，0.08 mmol）在乙腈（4 mL）中之攪拌懸浮液中並且將所得混合物在70°C下攪拌1.5 h，得到懸浮液。LCMS指示完全轉化。在減壓下除去溶劑並且提呈至分析純化組，純化後得到呈黃色固體的6-氯-5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 8 ）（24.00 mg，61%）。純化條件（非手性）：柱（Xbridge C18 19mm x 100mm 5 µm，流動相A：H 2O，含0.2% NH 4OH PH 10，流動相B：乙腈；梯度B%：經8 min 13%-95% B；流速：20 ml/min；濃度：在DMSO中35 mg/ml；負載量（mg/注射）：15；柱溫：室溫。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.23 (3H, t), 2.66 (4H, br s), 2.76 - 2.92 (5H, m), 3.13 (4H, br s), 3.77 (2H, s), 7.44 (1H, d), 7.69 (2H, dd), 7.94 (1H, d), 8.43 (1H, q), 10.75 - 11.45 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 475。 實例 9 ： 5-[4-[(5- 氯 -2- 乙基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 氟 -N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（0.116 mL，0.66 mmol）添加到6-氟-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，2HCl（ 中間體 32 ）（51.6 mg，0.17 mmol）和7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 29 ）（50 mg，0.17 mmol）在乙腈（4 mL）中之攪拌懸浮液中並且將所得混合物在70°C下攪拌1.5 h。LCMS指示完全轉化。在減壓下除去溶劑並且在矽膠柱上純化殘餘物（用在DCM中的0至20%甲醇洗脫）以得到產物和PPh3O的混合物。將材料提呈用於分析組進行純化，純化後得到呈黃色固體的5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 9 ）（47.0 mg，62%）。純化條件（非手性）：柱（Xbridge C18 19mm x 100mm 5 µm，流動相A：H 2O，含0.2% NH 4OH PH 10，流動相B：乙腈；梯度B%：經8 min 13%-95% B；流速：20 ml/min；濃度：在DMSO中35 mg/ml；負載量（mg/注射）：15；柱溫：室溫。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.22 (3H, t), 2.63 (4H, br s), 2.76 (3H, d), 2.82 (2H, q), 3.19 (4H, br s), 3.75 (2H, s), 7.43 (1H, d), 7.52 - 7.64 (1H, m), 7.70 (1H, d), 7.84 (1H, d), 8.39 (1H, q), 11.17 - 11.55 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 459。 實例 10 ： 5-[4-[(5- 氯 -2- 乙基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（0.081 mL，0.46 mmol）添加到N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺，2HCl（ 中間體 31 ）（34.0 mg，0.12 mmol）和7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間 體 29 ）（35 mg，0.12 mmol）在乙腈（4 mL）中之攪拌懸浮液中並且將所得混合物在70°C下攪拌1.5 h。LCMS指示完全轉化。在減壓下除去溶劑，並且將所得殘餘物提呈至分析組進行純化，純化後得到呈白色固體的5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 10 ）（13.00 mg，20%）。純化條件（非手性）柱（Xbridge C18 19mm x 100mm 5 µm，流動相A：H 2O，含0.2% NH 4OH PH 10，流動相B：乙腈；梯度B%經8 min 13%-95% B；流速：20 ml/min；濃度：在DMSO中35 mg/ml；負載量（mg/注射）：15；柱溫：室溫。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.24 (3H, t), 2.79 (3H, d), 2.86 (2H, q), 3.22 - 3.37 (8H, m, 合併入水峰中), 4.39 - 4.65 (2H, m), 7.46 (1H, dd), 7.57 (1H, br d), 7.79 - 7.90 (2H, m), 8.32 (1H, d), 8.43 (1H, br d), 11.87 - 12.21 (1H, m)。m/z (ES +) [M+H] += 441。 實例 11 ： 5-[4-[(5- 氯 -2- 乙基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（0.111 mL，0.64 mmol）添加到N,6-二甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，2HCl（ 中間體 33 ）（48.9 mg，0.16 mmol）和7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 29 ）（48 mg，0.16 mmol）在乙腈（10 mL）中之攪拌懸浮液中並且將所得混合物在70°C下攪拌2 h，得到懸浮液。LCMS指示完全轉化。將混合物冷卻至室溫，藉由過濾收集固體，用水洗滌並且乾燥以產生呈白色固體的5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 11 ）（42.0 mg，58%）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.22 (3H, t), 2.65 (4H, br s), 2.78 - 2.88 (5H, m), 2.95 (4H, br s), 3.38 (3H, s, 與水峰重疊), 3.76 (2H, s), 7.47 (2H, dd), 7.71 (1H, d), 7.79 (1H, d), 8.42 (1H, br d), 11.59 - 11.99 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 455。 中間體 35 ： 1- 溴 -2,4- 二氟 -3- 硝基 - 苯
將1,3-二氟-2-硝基苯（ 中間體 34 ）（19.5 g，122.57 mmol）和NBS（26.2 g，147.08 mmol）在硫酸（150 mL）中之混合物在80°C下攪拌過夜。LCMS指示完全轉化。將混合物冷卻至室溫並且緩慢倒在冰上。將此混合物用乙酸乙酯（200 ml）萃取，將有機層用水（50 ml x 2）、飽和NaHCO 3溶液（50 ml x 2）、鹽水洗滌，乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮。將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至20%乙酸乙酯洗脫）以產生呈淺黃色油狀物的1-溴-2,4-二氟-3-硝基-苯（ 中間體 35 ）（26.8 g，92%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 7.42 - 7.73 (1H, m), 8.06 - 8.26 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 238。 中間體 36 ： 2-(4- 溴 -3- 氟 -2- 硝基 - 苯胺基 )-3- 羥基 - 丁酸甲酯
在室溫下將DIPEA（8.56 mL，48.99 mmol）緩慢添加到1-溴-2,4-二氟-3-硝基-苯（ 中間體 35 ）（5.3 g，22.27 mmol）和2-胺基-3-羥基丁酸甲酯HCl（4.53 g，26.72 mmol）在1,4-二㗁𠮿（50 mL）中之攪拌溶液中，並且將所得混合物在40°C下攪拌3 h。LCMS指示剩餘一些起始材料。向混合物中添加800 mg DL-蘇胺酸甲酯HCl鹽，並且然後將混合物在40°C下繼續攪拌過夜。在減壓下除去溶劑，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至30%乙酸乙酯洗脫）以產生呈亮橙色固體的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-羥基-丁酸甲酯（ 中間體 36 ）（4.69 g，60%）。(HNMR指示它係非鏡像異構物混合物)。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 1.30 - 1.44 (3H, m), 3.81 (3H, s), 4.00 - 4.22 (1H, m), 4.22 - 4.48 (1H, m), 6.32 - 6.68 (1H, m), 7.40 - 7.66 (2H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 351, 353。 中間體 37 ： 2-(4- 溴 -3- 氟 -2- 硝基 - 苯胺基 )-3- 氟 - 丁酸甲酯
在0°C下將DAST（0.919 mL，6.95 mmol）經10 min緩慢添加到2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-羥基-丁酸甲酯（ 中間體 36 ）（2.22 g，6.32 mmol）在CH 2Cl 2（40 mL）中之混合物中，將混合物在0°C下攪拌20 min。LCMS和TLC顯示剩餘起始材料。向混合物中添加0.4 ml DAST，並且將反應攪拌另外10 min。將混合物用飽和NaHCO 3溶液淬滅並且用DCM萃取。將有機層乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮以產生黃色油狀物。將所得殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至30%乙酸乙酯洗脫）以產生峰2，為呈黃色油狀物的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-氟-丁酸甲酯（1.110 g，50%）（ 中間體 37），和峰4，為起始材料2-((4-溴-3-氟-2-硝基苯基)胺基)-3-羥基丁酸甲酯（0.300 g，13%）以及其他副產物。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 1.37 - 1.51 (3H, m), 2.80 - 2.93 (0.5H, m), 3.00 (0.5H, br d), 3.75 (1.5H, s), 3.85 (1.5H, s), 4.40 - 4.56 (0.5H, m), 5.01 - 5.23 (0.5H, m), 6.43 - 6.58 (0.5H, m), 6.71 - 6.74 (0.5H, m), 7.38 - 7.69 (2H, m)。m/z (ES +) [M+H] += 353。 中間體 38 ： 7- 溴 -8- 氟 -3-(1- 氟乙基 )-3,4- 二氫 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
向2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-氟-丁酸甲酯（ 中間體 37）（1.11 g，3.14 mmol）、鋅（2.466 g，37.72 mmol）和氯化銨（3.36 g，62.87 mmol）在MeOH（20 mL）中之混合物中添加水（2 mL）並且將混合物在室溫下攪拌10 min。橙色消失（放熱），並且LCMS顯示完全轉化。將混合物過濾，將固體用甲醇洗滌並且將濾液濃縮。將所得殘餘物溶解在DCM中，並且將有機層用水洗滌，乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮以產生粗產物。將殘餘物在矽膠柱上純化（在己烷中的0至30%乙酸乙酯）以產生呈淺黃色固體的2-((2-胺基-4-溴-3-氟苯基)胺基)-3-氟丁酸甲酯（0.533 g，52%）。
將上述黃色固體溶解在15 ml甲醇中，添加在甲醇中的0.5 1M HCl並且將反應在室溫下攪拌4 h。LCMS指示完全轉化。除去溶劑，並且將殘餘物用DCM/甲醇（5 : 1）稀釋。將有機層用50% NaHCO 3溶液洗滌一次，乾燥（無水Na 2SO 4）並且濃縮。將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至31%乙酸乙酯洗脫）以產生呈白色固體的7-溴-8-氟-3-(1-氟乙基)-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 38 ）（0.337 g，37%）。1H NMR (500 MHz, 甲醇- d4) 1.27 - 1.46 (3H, m), 4.26 (1H, dd), 4.90 - 5.12 (1H, m), 6.50 (1H, dd), 6.97 (1H, dd)。m/z (ES +) [M+H] += 291, 293。 中間體 39 ： 7- 溴 -8- 氟 -3-(1- 氟乙基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將DDQ（289 mg，1.27 mmol）添加7-溴-8-氟-3-(1-氟乙基)-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 38 ）（337 mg，1.16 mmol）在CH 2Cl 2（10 mL）中之漿料中並且將混合物在室溫下攪拌2 h。在減壓下除去溶劑，將殘餘物用飽和NaHCO 3溶液（約20 ml）稀釋並且將懸浮液在室溫下攪拌3 h。藉由過濾收集固體，用水洗滌並且乾燥以產生呈白色固體的7-溴-8-氟-3-(1-氟乙基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 39 ）（333 mg，100%）。1H NMR (500 MHz, 甲醇- d4) 1.65 - 1.84 (3H, m), 5.87 - 6.18 (1H, m), 7.50 - 7.60 (1H, m), 7.61 - 7.78 (1H, m)。m/z (ES +) [M+H] += 289, 291。 中間體 40 ： 8- 氟 -3-(1- 氟乙基 )-7-( 羥甲基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將Pd-PEPPSI™-IPent催化劑（26 mg，0.03 mmol）、(三丁基甲錫烷基)甲醇（1638 mg，5.10 mmol）和7-溴-8-氟-3-(1-氟乙基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 39 ）（590 mg，2.04 mmol）在1,4-二㗁𠮿（25 mL）中之混合物脫氣，用N 2回填，並且將混合物在80°C下攪拌17 h。將混合物濃縮，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至50%乙酸乙酯（以回收剩餘的SM），然後用在DCM中的0至20%甲醇洗脫）以產生8-氟-3-(1-氟乙基)-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 40 ）（282 mg，57%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.58 - 1.81 (3H, m), 4.67 (2H, br d), 5.46 (1H, br t), 5.87 - 6.24 (1H, m), 7.33 - 7.48 (1H, m), 7.65 (1H, br d), 12.65 - 12.83 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 241。 中間體 41 ： 7-( 溴甲基 )-8- 氟 -3-(1- 氟乙基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將三苯基膦（1223 mg，4.66 mmol）和8-氟-3-(1-氟乙基)-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（280 mg，1.17 mmol）（ 中間體 40 ）在CH 2Cl 2（15 mL）中之懸浮液冷卻至0°C，添加四溴化碳（1546 mg，4.66 mmol），混合物立即變為透明和紫色，將混合物在此溫度下繼續攪拌10 min，混合物變成黃色溶液，藉由LCMS檢查，指示完全轉化（不是很乾淨），將混合物濃縮，在矽膠柱上純化（用0-20%甲醇的DCM溶液洗脫）以產生主峰，為7-(溴甲基)-8-氟-3-(1-氟乙基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 41 ），其被一些雜質污染。濃縮得到2.5 g固體（理論質量為353 mg，假設100%產率可用於下一步驟）。m/z (ES +) [M+H] += 303, 305。 實例 12 和實例 13 ： 6- 氟 -5-[4-[[5- 氟 -2-[(1S 和 1R)-1- 氟乙基 ]-3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ] 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（0.265 mL，1.52 mmol）添加到7-(溴甲基)-8-氟-3-(1-氟乙基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 41 ）（115 mg，0.38 mmol）和6-氟-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺, 2HCl（94 mg，0.30 mmol）（ 中間體 32 ）在乙腈（20 mL）中之混合物中並且將所得混合物在70°C下攪拌1 h。LCMS指示完全轉化。濃縮混合物，將殘餘物溶解在DMSO（約4 ml）中並且在C18逆相柱上純化（用0至100% ACN/水/0.1% TFA洗脫）。將含有產物的級分合併，並且凍乾至乾燥。在吉爾森（Gilson）上對材料進行再純化（用0至80% ACN/水/0.1% TFA洗脫）得到產物6-氟-5-[4-[[5-氟-2-[(1S和1R)-1-氟乙基]-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺。藉由手性柱分離鏡像異構物。手性純化條件：柱資訊：chiralpak OD 4.6mm x 100 mm 5 µm，流動相A：CO 2（100%），流動相B：含0.2% NH 4OH的甲醇，在6 min內等度25% B，流速：4.0 ml/min，稀釋劑：甲醇，柱溫：室溫，出口壓力（SFC）：N/A。
峰 1：將白色固體用水和ACN稀釋。添加0.1 mL 0.5M HCl水溶液並且將混合物凍乾至乾燥以產生呈HCl鹽的異構物1，6-氟-5-[4-[[5-氟-2-[(1S或1R)-1-氟乙基]-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 12 ， 未確定絕對立體化學）（5.42 mg，10.90 µmol，3%），呈HCl鹽呈黃色固體。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.54 - 1.73 (3H, m), 2.70 - 2.87 (3H, m), 3.53 - 3.90 (8H, m), 4.57 (2H, br s), 5.79 - 6.21 (1H, m), 7.59 - 7.81 (3H, m), 7.87 (1H, d), 8.43 (1H, br d), 11.40 - 11.85 (1H, m), 12.78 - 13.14 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 461, ＞ 95%ee。
峰 2：將白色固體用水和ACN稀釋。添加0.1 mL 0.5M HCl水溶液並且將混合物凍乾至乾燥以產生呈HCl鹽的異構物2，6-氟-5-[4-[[5-氟-2-[(1S或1R)-1-氟乙基]-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 13 ， 未確定絕對立體化學）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.49 - 1.83 (3H, m), 2.77 (3H, br d), 3.46 - 3.91 (8H, m), 4.56 (2H, br s), 5.80 - 6.26 (1H, m), 7.52 - 7.80 (3H, m), 7.87 (1H, br d), 8.43 (1H, br d), 11.44 - 11.82 (1H, m), 12.77 - 13.24 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 461, ＞ 95% ee。 實例 14 和實例 15 ： 5-[4-[[5- 氟 -2-[(1S 和 1R)-1- 氟乙基 ]-3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ] 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向7-(溴甲基)-8-氟-3-(1-氟乙基)喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 41 ）（138 mg，0.41 mmol）和N,6-二甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺，2HCl（126 mg，0.41 mmol）（ 中間體 33 ）在乙腈（13 mL）中之懸浮液中添加DIPEA（429 µl，2.46 mmol）並且將所得混合物在70°C下攪拌3 h。LCMS指示完全轉化。將反應濃縮並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在DCM中的0至20%甲醇洗脫）以產生呈淺黃色固體的外消旋產物5-[4-[[5-氟-2-[(1S/1R)-1-氟乙基]-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（169 mg）。藉由手性分離來分離鏡像異構物。手性純化條件：柱資訊：chiralpak OD 21.2mm x 250mm 5 µm，流動相A：CO 2（100%），流動相B：含0.2% NH 4OH的甲醇，等度：經12 min 25% B，流速：70.0 ml/min，濃度：8.45 mg/ml甲醇溶液，負載量：4.23 mg/注射，柱溫：室溫，出口壓力（SFC）：N/A。
手性分離後，將每種異構物在逆相柱上再純化（用0-60% ACN/水/0.2%氫氧化銨洗脫）以產生；
峰 1：呈白色固體的5-[4-[[5-氟-2-[(1S或1R)-1-氟乙基]-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺，異構物1（ 實例 14 ，未確定絕對立體化學）（30.7 mg，0.067 mmol，16%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.40 - 1.70 (3H, m), 2.48 (3H, s), 2.54 - 2.69 (4H, m), 2.79 (3H, d), 2.94 (4H, br s), 3.74 (2H, s), 5.83 - 6.22 (1H, m), 7.17 - 7.41 (1H, m), 7.47 (1H, d), 7.65 (1H, d), 7.78 (1H, d), 8.40 (1H, br d), 11.65 - 12.88 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 457；＞98% ee。
峰 2：呈白色固體的5-[4-[[5-氟-2-[(1S或1R)-1-氟乙基]-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺，異構物2（ 實例 15 ，未確定絕對立體化學）（37 mg，0.081 mmol，20%）。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 1.68 - 1.88 (3H, m), 2.51 (3H, s), 2.71 (4H, br s), 2.86 - 3.12 (7H, m), 3.81 (2H, s), 5.92 - 6.29 (1H, m), 7.34 (1H, d), 7.44 (1H, t), 7.76 (1H, d), 7.95 (1H, br d), 7.99 (1H, d), 10.24 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 457；94.5% ee。 中間體 43 ： 2-(4- 溴 -3- 氯 -2- 硝基 - 苯胺基 ) 丙酸甲酯
在燒瓶中裝入在1,4-二㗁𠮿（70 mL）中的丙胺酸甲酯，HCl（ 中間體 42 ）（1.851 g，13.26 mmol）和1-溴-2-氯-4-氟-3-硝基苯（ 中間體 22 ）（2.25 g，8.84 mmol）。添加DIPEA（9.27 mL，53.06 mmol），並且將混合物在105°C下攪拌24 h，得到棕色溶液。LCMS顯示反應完成。將混合物濃縮，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至30%乙酸乙酯洗脫）以產生呈亮黃色油狀物的2-(4-溴-3-氯-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯（ 中間體 43 ）（2.120 g，71%），靜置後變成黃色固體。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 1.52 (3H, d), 3.77 (3H, s), 6.53 (1H, d), 7.15 (1H, t), 7.53 (1H, d), 7.78 (1H, dd)；m/z (ES +) [M+H] += 337。 中間體 44 ： 7- 溴 -8- 氯 -3- 甲基 -3,4- 二氫 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將連二亞硫酸鈉（3.28 g，18.84 mmol）添加到2-(4-溴-3-氯-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯（ 中間體 43 ）（2.12 g，6.28 mmol）在DMSO（50 mL）中之攪拌溶液中，並且將混合物在120°C下攪拌5 h。LCMS和TLC指示完全轉化。將混合物用水淬滅並且用乙酸乙酯（50 ml x 2）萃取。將有機層乾燥（無水Na 2SO 4），過濾，濃縮，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（在己烷中的0至55%乙酸乙酯）以產生7-溴-8-氯-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 45 ）（0.055 g，3%）。m/z (ES+) [M+H]+ 273，275和 7-溴-8-氯-3-甲基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 44 ）（0.190 g，11%）。m/z (ES +) [M+H] += 275，277。 中間體 45 ： 7- 溴 -8- 氯 -3- 甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將DDQ（157 mg，0.69 mmol）添加到7-溴-8-氯-3-甲基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 44 ）（190 mg，0.69 mmol）在1,4-二㗁𠮿（10 mL）中之混合物中，並且將所得混合物在室溫下攪拌過夜，LCMS指示完全轉化。將混合物濃縮並且將殘餘物用飽和NaHCO 3溶液處理。在室溫下攪拌混合物4，藉由過濾分離固體，用飽和NaHCO 3溶液和水洗滌。然後將固體在矽膠柱上純化（用在DCM中的0至20%甲醇洗脫）以產生呈黃色固體的7-溴-8-氯-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 45 ）（122 mg，65%）。m/z (ES +) [M+H] += 273，275。 中間體 46 ： 8- 氯 -3- 甲基 -7- 乙烯基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將7-溴-8-氯-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 45 ）（122 mg，0.45 mmol）、四(三苯基膦)鈀(0)（51.5 mg，0.04 mmol）和三丁基(乙烯基)錫烷（212 mg，0.67 mmol）在甲苯（15 ml）中之混合物中在110°C下在N 2下攪拌16 h。LCMS指示反應完成。將混合物濃縮，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在DCM中的0至16%甲醇洗脫）以產生呈棕色固體的8-氯-3-甲基-7-乙烯基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 46 ）（98 mg，100%）。（被PPh 3O污染）。m/z (ES +) [M+H] += 221。 中間體 47 ： 5- 氯 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 甲醛
將在H 2O中的四氧化鋨（0.1 mL，0.01 mmol）添加到8-氯-3-甲基-7-乙烯基-1H-喹㗁啉-2-酮（140 mg，0.63 mmol）（ 中間體 46 ）、2,6-二甲基吡啶（0.148 ml，1.27 mmol）和高碘酸鈉（543 mg，2.54 mmol）在THF（10 mL）/水（2 mL）/三級丁醇中（0.607 mL，6.34 mmol）中之溶液中並且在室溫下攪拌過夜，得到黃色懸浮液。LCMS和TLC指示仍有剩餘起始材料。向混合物中添加THF（10 ml）/水（2.000 ml）、200 mg高碘酸鈉、0.3 ml四氧化鋨並且將混合物在室溫下繼續攪拌5 h。LCMS指示完全轉化。將反應用水稀釋，添加飽和NH 4Cl溶液並且用DCM萃取。將合併的有機層乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮。將殘餘物在矽膠柱上純化（用在DCM中的0至20%甲醇洗脫）以產生呈黃色固體的5-氯-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（ 中間體 47 ）（141 mg，100%）。（不是很純，轉入下一步驟）。m/z (ES +) [M+H] += 223。 中間體 48 ： 8- 氯 -7-( 羥甲基 )-3- 甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將硼氫化鈉（23.96 mg，0.63 mmol）添加到5-氯-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（ 中間體 47 ）（141 mg，0.63 mmol）在MeOH（16 mL）和DCM（8.00 mL）的混合物中的冷卻至0°C的冷卻溶液中，並且將混合物在0°C下繼續攪拌1 h。LCMS指示完全轉化。向混合物中添加1 ml水，濃縮，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的40至100%乙酸乙酯洗脫；然後用在DCM中的0至20%甲醇洗脫）以產生呈黃色固體的8-氯-7-(羥甲基)-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 48 ）（142 mg，100%）；1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.42 (3H, s), 4.65 (2H, br d), 5.53 (1H, br t), 7.46 (1H, br d), 7.69 (1H, br d), 11.77 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 225。 中間體 49 ： 7-( 溴甲基 )-8- 氯 -3- 甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將在CH 2Cl 2（20 ml）中的8-氯-7-(羥甲基)-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 48 ）（142 mg，0.63 mmol）和三苯基膦（332 mg，1.26 mmol）冷卻至0°C。一次性添加過溴甲烷（419 mg，1.26 mmol），並且將混合物在0°C下攪拌1 h並且在室溫下攪拌2 h。LCMS指示無進展。在室溫下向混合物中添加第二部分的三苯基膦（332 mg，1.26 mmol）和全溴甲烷（419 mg，1.26 mmol）並且將混合物攪拌1 h。LCMS指示完全轉化。在減壓下除去溶劑，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至100%乙酸乙酯洗脫）以產生呈黃色固體的產物7-(溴甲基)-8-氯-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 49 ）（32 mg，18%）。進一步用在DCM中的20%甲醇洗脫得到第二部分100 mg（55%）呈棕色固體的產物（47%純度）。m/z (ES +) [M+H] += 287，289。 實例 16 ： 5-[4-[(5- 氯 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（0.053 mL，0.31 mmol）添加到N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺，2HCl（22.43 mg，0.08 mmol）（ 中間體 31 ）和7-(溴甲基)-8-氯-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 49 ）（22 mg，0.08 mmol）在乙腈（4 mL）中之混合物中並且將所得懸浮液在70°C下攪拌1 h。LCMS指示完全轉化。將混合物濃縮，將殘餘物溶解在DMSO中並且在逆相C18柱上純化（用0至100% ACN/水/0.1% TFA洗脫）。將含有純產物的級分凍乾至乾燥以產生5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（20 mg，56%）。添加1 mL在醚中的2M HCl，並且在真空下除去溶劑以得到呈黃色固體的相應HCl鹽（ 實例 16 ）。1H NMR (500 MHz, 甲醇- d4) 2.96 - 3.03 (3H, m), 3.48 - 3.86 (6H, m), 4.04 - 4.41 (2H, m), 4.78 (2H, s), 4.86 (3H, d, 合併入水峰中), 7.74 (1H, d), 7.84 (1H, d), 8.14 (1H, dd), 8.31 (1H, d), 8.47 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 427。 實例 17 ： 5-[4-[(5- 氯 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 氟 -N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（0.061 mL，0.35 mmol）添加到6-氟-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺，2HCl（ 中間體 32 ）（27.1 mg，0.09 mmol）和7-(溴甲基)-8-氯-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 49 ）（50 mg，0.09 mmol）（純度約50%）在乙腈（5 mL）中之混合物中並且將所得溶液在70°C下攪拌1 h。LCMS指示完全轉化。將混合物濃縮，並且將殘餘物溶解在DMSO中並且在逆相C18柱上純化（用0至100% ACN/水/0.1% TFA洗脫），然後在逆相C18柱上第二次純化（用0到100% ACN/水/0.1% TFA洗脫）。最後將材料在逆相柱上第三次純化（用0至100% ACN/水/氫氧化銨洗脫，PH約10）以產生呈白色固體的5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 17）（16.50 mg，43%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.37 - 2.47 (3H, m), 2.63 (4H, br s), 2.76 (3H, d), 3.13 - 3.23 (4H, m), 3.74 (2H, s), 7.45 (1H, d), 7.57 (1H, dd), 7.68 (1H, d), 7.84 (1H, d), 8.39 (1H, br d), 10.71 - 12.11 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 445。 實例 18 ： 5-[4-[(5- 氯 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（0.061 mL，0.35 mmol）添加到N,6-二甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺，2HCl（ 中間體 33）（26.7 mg，0.09 mmol）和7-(溴甲基)-8-氯-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（50 mg，0.09 mmol）（ 中間體 49 ，約50%純度）在乙腈（5 mL）中之混合物中並且將所得溶液在70°C下攪拌1 h。LCMS指示完全轉化。將混合物濃縮，將殘餘物溶解在DMSO中並且將殘餘物在逆相C18柱上純化（用0至100% ACN/水/0.1% TFA洗脫）。濃縮級分後，將殘餘物在逆相C18柱上再純化（用0至100% ACN/水/氫氧化銨洗脫，PH約10）。將純級分凍乾至乾燥以產生呈游離鹼的5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 18 ）（18.4 mg，48%）。1H NMR (500 MHz, 甲醇- d4) 2.53 (6H, d), 2.76 (4H, br s), 2.94 (3H, s), 3.04 (4H, br t), 3.86 (2H, s), 7.48 (1H, d), 7.51 - 7.60 (1H, m), 7.69 (1H, d), 7.86 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 441。 中間體 50 ： 7- 溴 -8- 氟 -3-(1- 羥乙基 )-3,4- 二氫 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下，將氯化銨（6.70 g，125.31 mmol）添加到2-((4-溴-3-氟-2-硝基苯基)胺基)-3-羥基丁酸甲酯（ 中間體 36 ）（4.4 g，12.53 mmol）和鋅（8.19 g，125.31 mmol）在MeOH（65 mL）中之懸浮液中。向其中添加水（2 mL）並且將混合物在0°C下攪拌60 min。橙色消失，這指示完全轉化，LCMS指示反應完成。將混合物過濾，用甲醇洗滌並且將濾液濃縮。將殘餘物用乙酸乙酯/甲醇（10/1）稀釋，將有機層用水（約20 ml）、鹽水洗滌，乾燥（無水Na 2SO 4），濃縮至乾燥以產生中間體2-((2-胺基-4-溴-3-氟苯基)胺基)-3-羥基丁酸甲酯。
將上述固體在甲醇（約30 ml）中漿化，添加在二㗁𠮿中的4 M HCl（約1 ml）並且將混合物在室溫下攪拌2 h。LCMS指示完全轉化。將混合物濃縮，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至100%乙酸乙酯洗脫）以產生呈黃色固體的7-溴-8-氟-3-(1-羥乙基)-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 50 ）（3.20 g，88%）。（非鏡像異構物混合物）。m/z (ES +) [M+H] += 289，291。 中間體 51 ： 7- 溴 -8- 氟 -3-(1- 羥乙基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將DDQ（432 mg，1.90 mmol）添加到7-溴-8-氟-3-(1-羥乙基)-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 50 ）（500 mg，1.73 mmol）在CH 2Cl 2（30 mL）中之懸浮液中並且將混合物在室溫下攪拌過夜。LCMS指示清楚的轉化。在減壓下除去溶劑，添加飽和NaHCO 3（約100 ml）溶液並且將混合物在室溫下攪拌3 h。藉由過濾收集固體，用水洗滌並且乾燥以產生7-溴-8-氟-3-(1-羥乙基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 51 ）（439 mg，88%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.39 (3H, d), 4.78 - 5.31 (2H, m), 7.39 - 7.71 (2H, m), 12.72 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 287, 289。 中間體 52 ： 3- 乙醯基 -7- 溴 -8- 氟 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在-78°C下將DMSO（0.651 mL，9.17 mmol）在DCM中之溶液逐滴添加到草醯氯（3.06 mL，6.12 mmol）（在DCM中2 M）在二氯甲烷（20 ml）中之攪拌溶液中。將7-溴-8-氟-3-(1-羥乙基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 51 ）溶液（439 mg，1.53 mmol）緩慢添加到上述反應混合物中，並且將所得漿料在-78°C下攪拌15 min。逐滴添加三乙胺（1.279 mL，9.17 mmol），並且將所得漿料在0°C下攪拌另外30 min。LCMS指示所需產物的形成。添加水（30 ml），並且將混合物用二氯甲烷/MeOH（5:1）（2 x 50 ml）萃取。將有機相合併，並且經硫酸鎂乾燥。在真空下除去溶劑，並且將殘餘物藉由逆相C18柱純化（用0至100% ACN/水/0.1% TFA洗脫）以產生呈黃色固體的3-乙醯基-7-溴-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 52 ）（85 mg，19%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.52 - 2.66 (3H, m), 7.42 - 7.76 (2H, m), 13.03 (1H, br s)。m/z (ES +) [M+H] += 285, 287。 中間體 53 ： 7- 溴 -3-(1,1- 二氟乙基 )-8- 氟 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在室溫下將DAST（0.148 mL，1.12 mmol）添加到3-乙醯基-7-溴-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 52）（80 mg，0.28 mmol）在CH 2Cl 2（20 mL）中之懸浮液中，並且將所得懸浮液在室溫下攪拌24 h。LCMS指示42%的產物形成。繼續攪拌混合物過週末。向混合物中添加水並且用DCM萃取。將有機層乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮。將殘餘物在矽膠柱上純化（用在DCM中的0至20%甲醇洗脫）以產生呈淺黃色固體的7-溴-3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 53 ）（65.0 mg,75%）。m/z (ES +) [M+H] += 307，309。（材料不是很純，進行下一步驟）。 中間體 54 ： 3-(1,1- 二氟乙基 )-8- 氟 -7-( 羥甲基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將(三丁基甲錫烷基)甲醇（102 mg，0.32 mmol）、Xphos Pd G2（24.98 mg，0.03 mmol）和7-溴-3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 53 ）（65 mg，0.21 mmol）在1,4-二㗁𠮿（10 mL）中之混合物在N 2氣氛下在80°C下攪拌6 h。LCMS指示完全轉化。在真空下除去溶劑，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在DCM中的0至20%甲醇洗脫）以產生呈棕色固體的3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 54 ）（55.0 mg，100%）。m/z (ES +) [M+H] += 259。 中間體 55 ： 7-( 溴甲基 )-3-(1,1- 二氟乙基 )-8- 氟 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下將CBr 4（129 mg，0.39 mmol）添加到3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 54 ）（67 mg，0.26 mmol）和三苯基膦（102 mg，0.39 mmol）在CH 2Cl 2（6 mL）中之混合物中並且將所得混合物在室溫下攪拌過夜。LCMS指示完全轉化。在真空下除去溶劑，並且將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至100%乙酸乙酯洗脫）以產生呈白色固體的7-(溴甲基)-3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 55 ）（56.0 mg，67%）。m/z (ES +) [M+H] += 321，323。 實例 19 ： 5-[4-[[2-(1,1- 二氟乙基 )-5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ] 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向7-(溴甲基)-3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 55 ）（56 mg，0.16 mmol）和N,6-二甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺，2HCl（ 中間體 33 ）（48.2 mg，0.16 mmol）在乙腈（4 mL）中之懸浮液中添加DIPEA（0.164 mL，0.94 mmol）並且將所得混合物在70°C下攪拌1.5 h。LCMS指示完全轉化。將混合物濃縮，並且將殘餘物在逆相吉爾森柱上純化（用0至70% ACN/水/0.1% TFA洗脫）。將純級分合併，將0.5 ml 1M HCl水溶液添加到合併的級分中並且凍乾至乾燥以產生呈黃色固體的5-[4-[[2-(1,1-二氟乙基)-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺，呈HCl鹽（ 實例 19 ）（35.0 mg，44%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.08 (3H, br t), 2.52 (3H, s), 2.80 (3H, br d), 3.02 - 3.54 (8H, m), 4.61 (2H, br s), 7.57 (1H, br d), 7.67 - 8.04 (3H, m), 8.52 (1H, br d), 11.74 (1H, br s), 12.77 - 13.55 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 475。 中間體 56 ： 2-(4- 溴 -3- 氟 -2- 硝基 - 苯胺基 ) 丙酸甲酯
將DIPEA（151 ml，867.27 mmol）緩慢添加到1-溴-2,4-二氟-3-硝基苯（ 中間體 35 ）（68.8 g，289.09 mmol）和丙胺酸甲酯，HCl（40.4 g，289.09 mmol）在DMF（300 mL）中之攪拌溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌18小時（根據LCMS完全轉化為所需產物）。使用火箭蒸發系統將反應混合物濃縮，用水稀釋並且用乙酸乙酯萃取。將有機層用水徹底洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾並且在真空下濃縮。向上述橙色固體中添加100 mL DCM，將懸浮液在室溫下攪拌30 min，將固體過濾以產生呈亮橙色固體的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯（24.00 g，26%）（ 中間體 56 ）。1H NMR (500 MHz, 二氯甲烷- d2) 1.52 - 1.62 (3H, m), 3.80 (3H, s), 4.28 (1H, quin), 6.49 (1H, dd), 7.19 - 7.39 (1H, m), 7.54 (1H, dd)；19F NMR (471 MHz, 二氯甲烷- d2) -109.49 (1F, s) ；m/z (ES +) [M+H] += 321，323。 中間體 57 ： 7- 溴 -8- 氟 -3- 甲基 -3,4- 二氫 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下將鋅（78 g，1195.88 mmol）分批添加到2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯（ 中間體 56 ）（48 g，149.49 mmol）和氯化銨（64.0 g，1195.88 mmol）在MeOH（720 ml）和水（16 ml）中之混合物中（放熱反應）並且將混合物在室溫下攪拌2 h（橙色完全消失表明反應完成）。將固體濾出並且將固體濾餅用在DCM中的20% MeOH洗滌。將濾液濃縮，向粗產物中添加水，並且將產物用乙酸乙酯萃取。將有機層乾燥並且在真空下濃縮以提供油狀物。m/z (ES +) [M+H] += 291，293。
將此材料在乙酸乙酯（50 mL）和甲醇（50 mL）中漿化，添加2 mL在二㗁𠮿中的4N HCl，並且將混合物攪拌1 h。將反應混合物濃縮以產生呈灰色固體的粗產物7-溴-8-氟-3-甲基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 57 ）（38.7 g）。假設此反應的產率為100%，粗產物（38.7 g）無需任何進一步純化即可用於下一步驟。m/z (ES +) [M+H] += 259。 中間體 58 ： 7- 溴 -8- 氟 -3- 甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將DDQ（21.55 g，94.95 mmol）一次性添加到7-溴-8-氟-3-甲基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 57）（20.5 g，79.13 mmol）在DCM（200 mL）中之攪拌溶液中，產生很黏稠的灰白色漿料，添加另外的二氯甲烷（800 mL）。將所得漿料在室溫下攪拌2小時（根據LCMS完全轉化為所需產物）。將反應混合物在真空下濃縮並且用飽和碳酸氫鈉水溶液（約500 mL，淬滅導致劇烈起泡）淬滅。將上述漿料在室溫下攪拌過夜並且濾出固體，用水徹底洗滌並且將固體在過濾器上乾燥過夜。將此固體用乙醚洗滌並且乾燥30 min以得到呈灰白色固體的7-溴-8-氟-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 58）（16.28 g，80%）。19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -124.18 (1F, s)；1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.41 (3H, s), 7.45 - 7.54 (2H, m), 12.60 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 257。 中間體 17 ： 8- 氟 -7-( 羥甲基 )-3- 甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將(三丁基甲錫烷基)甲醇（15.39 g，47.93 mmol）、7-溴-8-氟-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 58）（11.2 g，43.57 mmol）和Xphos Pd G2（1.714 g，2.18 mmol）在1,4-二㗁𠮿（200 mL）中之混合物在80°C下攪拌7 h。LCMS指示完全轉化。在減壓下除去溶劑，將殘餘物在矽膠柱上純化（用在DCM中的0至15%甲醇洗脫）。將級分濃縮成漿料，用醚稀釋，藉由過濾收集固體並且乾燥以產生呈白色固體的8-氟-7-(羥甲基)-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 17）（8.10 g，89%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.41 (3H, s), 4.63 (2H, br d), 5.39 (1H, t), 7.31 (1H, br t), 7.51 (1H, d), 12.41 (1H, br s)。m/z (ES +) [M+H] += 209。 實例 20 ： 6- 氟 -5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在0°C下在氮氣下用加料漏斗將三乙基膦（20.90 ml，145.06 mmol）逐滴添加到8-氟-7-(羥甲基)-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 17）（15.1 g，72.53 mmol）和1,2-二溴-1,1,2,2-四氯乙烷（52.0 g，159.56 mmol）在DCM（400 mL）中之攪拌懸浮液中。將混合物在室溫下攪拌3 h，得到淺黃色懸浮液。粗LCMS指示完全轉化。在真空下除去DCM；將殘餘物在室溫下在300 mL乙醚中漿化，並且將淺黃色ppt過濾並且用200 ml醚洗滌。將固體吸收在300 ml水中，在室溫下攪拌10 min，藉由過濾收集固體，用水徹底洗滌（200 ml）以除去鹽。將固體在真空下乾燥過夜（不加熱）。將固體用己烷洗滌並且在蒲式耳漏斗中在真空中乾燥以得到呈灰白色固體的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 59）（22.76 g，116%，可能含有一些無機鹽）。按原樣用於下一步反應。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.42 (3H, s), 4.65 - 4.93 (2H, m), 7.28 - 7.42 (1H, m), 7.51 (1H, d), 12.53 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 271, 273。
在室溫下向裝有在乙腈（350 ml）中的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 59）（22.76 g）和6-氟-N-甲基-5-的燒瓶中(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺，2HCl（ 中間體 32 ）（24.24 g，77.9 mmol）的燒瓶中添加DIPEA（38.0 ml，217.59 mmol）並且將所得混合物在70°C下攪拌4 h。反應未完成。向混合物中添加5 g KI和2 g NaI並且將混合物在50°C下攪拌20 h。向混合物中添加更多540 mg（約0.03當量）6-氟-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲醯胺，2HCl（ 中間體 32）並且在50°C下繼續攪拌2 h。藉由過濾收集來自反應懸浮液的固體，用乙腈洗滌並且乾燥。然後將所得材料懸浮在水（約400 ml）中，在室溫下漿化20 min，過濾並且乾燥（LCMS純度為97%）。然後將固體在回流下溶解到DCM/MeOH混合物（3/1）（約1.5 L）中，通過矽膠墊過濾，除去大部分DCM，直到固體沈澱出來，並且將混合物在室溫下保持20 min。藉由過濾收集固體並且針對濾液重複程序，並且將固體合併以產生呈淺黃色固體的產物6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺 （實例 20）（26 g，84%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.41 (3H, s), 2.57 - 2.69 (4H, m), 2.76 (3H, d), 3.16 (4H, br s), 3.70 (2H, s), 7.29 (1H, br t), 7.40 - 7.60 (2H, m), 7.83 (1H, d), 8.38 (1H, br d), 12.44 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 429。 實例 21 ： 6-( 二氟甲基 )-5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（0.052 mL，0.30 mmol）添加到7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 59）（40 mg，0.15 mmol）和6-(二氟甲基)-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺，2HCl（ 中間體 60）（50.6 mg，0.15 mmol）在乙腈（mL）中之攪拌混合物中並且將所得混合物在70°C下攪拌2 h。將反應濃縮並且提呈至分析組進行純化（純化條件：將殘餘物藉由逆相C18柱純化（用0至100% ACN/水/0.1% NH4OH洗脫），其產生呈白色固體的6-(二氟甲基)-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 21）（15 mg，22%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.37 (3H, s), 2.64 (4H, br s), 2.84 (3H, d), 3.01 (4H, br d), 3.70 (2H, s), 7.00 - 7.28 (2H, m), 7.42 (1H, br d), 7.86 (1H, d), 8.09 (1H, d), 8.39 (1H, q), 12.24 - 12.63 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 461。 中間體 61 ： 6- 氟 -5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在室溫下將聚合物負載的三苯基膦（1.512 g，5.76 mmol）（添加3.4 g，基於1.6 mmol/g的PPh 3負載量計算）添加到8-氟-7-(羥甲基)-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 17）（400 mg，1.92 mmol）和全溴甲烷（1.274 g，3.84 mmol）在DCM（40 mL）中之攪拌漿料中。將所得混合物在23°C下攪拌1 h。反應未完成。添加另外的聚合物結合的-PPh 3（1 g）以使反應完成。將反應混合物過濾，用DCM、THF洗滌，將濾液在真空下濃縮以產生呈淺黃色固體的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮。
向上述新鮮製備的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮中添加6-氟-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲酸甲酯，2HCl（ 中間體 12）（600 mg，1.92 mmol）、乙腈（25 mL）和N-乙基-N-異丙基丙-2-胺（1674 µl，9.61 mmol）並且將反應混合物加熱至70°C 1 h。將反應混合物冷卻至室溫，濃縮，並且將粗固體經由正相層析法使用在DCM中的0-10% MeOH純化以產生呈灰白色固體的6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 61）（0.484 g，59%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.34 - 2.49 (3H, m), 2.52 - 2.62 (4H, m), 3.08 - 3.28 (4H, m), 3.70 (2H, s), 3.83 (3H, s), 7.29 (1H, t), 7.44 - 7.54 (2H, m), 7.91 (1H, dd), 12.45 (1H, s)；19F NMR (471 MHz, DMSO- d6) -135.50 (1F, s), -70.49 (1F, s)。m/z (ES +) [M+H] += 430。 實例 22 ： 6- 氟 -5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 吡啶 -2- 甲醯胺
將胺（MeOH中的7 N胺）（31.3 ml，218.90 mmol）添加到在40 mL閃爍瓶中的6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 61 ）（0.470 g，1.09 mmol），密封並且在室溫下攪拌18 h。藉由LCMS，完全轉化為所需產物。將白色固體過濾得到103 mg純產物。將濾液在真空下濃縮，將所得灰白色固體在約5 mL甲醇中漿化並且過濾以獲得另外的純產物298 mg。將兩批合併以獲得6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]吡啶-2-甲醯胺（ 實例 22）（0.401 g，88%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.42 (3H, s), 2.59 (4H, br s), 3.09 - 3.27 (4H, m), 3.70 (2H, s), 7.29 (1H, br t), 7.46 (1H, br s), 7.49 - 7.58 (2H, m), 7.76 (1H, br s), 7.85 (1H, br d), 12.35 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO- d6) -135.49 (1F, s), -72.40 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 415。 中間體 62 ： 2-(4- 溴 -3- 氟 -2- 硝基 - 苯胺基 ) 丁酸甲酯
將DIPEA（165 ml，942.91 mmol）緩慢添加到1-溴-2,4-二氟-3-硝基苯（ 中間體 35）（74.8 g，314.30 mmol）和2-胺基丁酸甲酯，HCl（48.3 g，314.30 mmol）在DMF（733 mL）中之攪拌溶液中並且將所得溶液在室溫下攪拌18小時。在火箭式蒸發器上除去DMF，用水稀釋並且用乙酸乙酯萃取。濃縮後，將粗材料藉由快速二氧化矽層析法純化，洗脫梯度為0至70% EtOAc/己烷。將產物級分在減壓下濃縮以提供呈紅色固體的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)丁酸甲酯（ 中間體 62）（49.4 g，47%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 0.82 - 0.98 (3H, m), 1.77 - 1.93 (2H, m), 3.70 (3H, d), 4.38 - 4.54 (1H, m), 6.77 (1H, br d), 7.28 (1H, br d), 7.64 - 7.80 (1H, t)；m/z (ES +) [M+H] += 335。 中間體 63 ： 7- 溴 -3- 乙基 -8- 氟 -3,4- 二氫 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將鋅（44.1 g，674.07 mmol）分批添加（放熱反應）至2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)丁酸甲酯（ 中間體 62）（50.2 g，149.79 mmol）和氯化銨（64.1 g，1198.34 mmol）在MeOH（468 mL）中之混合物中。將混合物在室溫下攪拌1 h。濾出固體並且用在DCM中的20% MeOH洗滌。將此材料溶解在甲醇（120 mL）中，並且添加在二㗁𠮿中的4N HCl（10 mL）並且將反應攪拌30 min。在真空下除去溶劑，用乙酸乙酯稀釋並且用飽和NaHCO 3溶液鹼化。將有機層分離，用水洗滌，經硫酸鈉乾燥並且濃縮以得到粗產物。將固體與100 mL甲醇研磨，攪拌10 min，並且濾出淺棕色固體以得到7-溴-3-乙基-8-氟-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 63）（39.8 g，97%）產物。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 0.92 (3H, t), 1.49 - 1.77 (2H, m), 3.57 - 3.87 (1H, m), 6.24 - 6.62 (2H, m), 6.99 (1H, dd), 10.44 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 273。 中間體 64 ： 7- 溴 -3- 乙基 -8- 氟 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將DDQ（29.7 g，130.94 mmol）一次性添加到7-溴-3-乙基-8-氟-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 63）（29.8 g，109.12 mmol）在DCM（546 mL）中之攪拌溶液中，並且將所得溶液在室溫下攪拌2 h。在真空下除去溶劑，並且將固體用150 mL甲醇漿化並且攪拌30 min。濾出固體並且用30 mL甲醇洗滌。將固體轉移到2 L圓底燒瓶中；添加200 mL水，然後緩慢添加300 mL碳酸氫鈉。添加完成後，將混合物在室溫下攪拌過夜以得到淺黃色漿料。停止攪拌並且傾析水層。藉由過濾收集固體並且用水徹底洗滌以得到呈黃色固體的7-溴-3-乙基-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 64）（24.45 g，83%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.22 (3H, t), 2.81 (2H, q), 7.27 - 7.69 (2H, m), 12.59 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 271。 中間體 65 ： 3- 乙基 -8- 氟 -7-( 羥甲基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將Xphos Pd G2（1.121 g，1.43 mmol）添加到7-溴-3-乙基-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 64）（7.727 g，28.50 mmol）和(三丁基甲錫烷基)甲醇（10.98 g，34.20 mmol）在1,4-二㗁𠮿（143 mL）中之攪拌脫氣溶液中。將所得溶液在80°C下攪拌6小時。在真空下除去溶劑，添加100 mL乙醚，並且將漿料攪拌30 min。濾出固體並且用50 mL乙醚洗滌以得到呈灰白色固體的3-乙基-8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（5.88 g，93%）（ 中間體 65）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.22 (3H, t), 2.82 (2H, q), 4.64 (2H, br d), 5.40 (1H, t), 7.32 (1H, br t), 7.55 (1H, d), 12.40 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 223。 中間體 66 ： 7-( 溴甲基 )-3- 乙基 -8- 氟 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下在氮氣下經5分鐘的時間將三乙基膦（19.94 ml，135.00 mmol）逐滴添加到3-乙基-8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 65）（10 g，45.00 mmol）和CBr 4（49.2 g，148.50 mmol）在DCM（355 mL）中之攪拌溶液中。將反應在室溫下攪拌1 h。在真空下除去DCM並且將殘餘物在150 mL乙醚中漿化。濾出白色ppt並且用50 mL乙醚洗滌。將此固體用水（200 mL）漿化並且攪拌30 min。濾出固體並且用水徹底洗滌。將固體在真空下乾燥過夜以得到呈淺棕色固體的7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 66）（11.38 g，89%）。1H NMR (500 MH z, DMSO- d6) 1.22 (3H, t), 2.83 (2H, q), 4.81 (2H, s), 7.37 (1H, br t), 7.55 (1H, d), 12.53 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 285。 實例 23 ： 5-[4-[(2- 乙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（20.90 ml，119.64 mmol）添加到7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 66）（11.37 g，39.88 mmol）和N,6-二甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，2HCl（ 中間體 33）（14.09 g，45.86 mmol）在乙腈（178 mL）中之攪拌漿料中。將所得溶液在50°C下攪拌2 h。反應完成。藉由蒸發除去一半溶劑，添加10 mL飽和碳酸氫鈉並且將混合物攪拌15 min。濾出固體，用水洗滌，然後用50 mL乙腈洗滌。將固體溶解在DCM/甲醇（約9/1）中並且通過二氧化矽床過濾。將濾液濃縮以得到淺黃色固體。將此材料與約120 mL甲醇一起研磨，濾出固體並且乾燥。LCMS仍顯示出約2.1%的雜質（可能來自試劑）。再次用乙腈並且然後用在乙腈中的3%甲醇研磨材料以得到約14 g白色固體。添加甲醇（40 mL）並且攪拌3 h。濾出固體以得到純產物5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 23）（12.26 g，70%）。1HNMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.23 (3H, t), 2.48 (3H, s), 2.62 (4H, br s), 2.76 - 2.88 (5H, m), 2.95 (4H, br s), 3.73 (2H, s), 7.31 (1H, t), 7.47 (1H, d), 7.56 (1H, d), 7.79 (1H, d), 8.41 (1H, q), 12.44 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 439。 實例 24 ： 6-( 二氟甲基 )-5-[4-[(2- 乙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將DIPEA（0.049 mL，0.28 mmol）添加到7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 66）（40 mg，0.14 mmol）和6-(二氟甲基)-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺，2HCl（ 中間體 60）（48.1 mg，0.14 mmol）在乙腈（2 mL）中之攪拌混合物中並且將所得混合物在70°C下攪拌2小時。將反應濃縮並且提呈至分析組進行純化（純化條件：將殘餘物藉由逆相C18柱純化（用0至100% ACN/水/0.1% NH4OH洗脫），其產生6-(二氟甲基)-5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 24）（56.0 mg，84%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.23 (3H, t), 2.65 (4H, br d), 2.77 - 2.86 (5H, m), 2.97 - 3.06 (4H, m), 3.73 (2H, s), 7.00 - 7.26 (1H, t), 7.30 (1H, br d), 7.55 (1H, br d), 7.86 (1H, d), 8.09 (1H, d), 8.39 (1H, q), 12.45 (1H, br d)；m/z (ES +) [M+H] += 475。 中間體 67 ： 5-[4-[(2- 乙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將DIPEA（246 µl，1.41 mmol）添加到7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 66）（134 mg，0.47 mmol）和5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲酸甲酯，2HCl（ 中間體 119）（138 mg，0.47 mmol）在乙腈（2 mL）中之攪拌漿料中。將所得溶液在50°C下攪拌2 h。在真空下除去溶劑並將所得殘餘物藉由快速二氧化矽層析法（洗脫梯度為在DCM中的0至20% MeOH）進行純化。將產物級分在減壓下濃縮以提供呈白色固體的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 67）（0.142 g，71.0%）；m/z (ES +) [M+H] += 426。 實例 25 ： 5-[4-[(2- 乙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 吡啶 -2- 甲醯胺
將胺（7 N）的甲醇溶液（3 mL，6.00 mmol）添加到5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]吡啶-2-甲酸甲酯甲酯（ 中間體 67）（130 mg，0.31 mmol）。將所得懸浮液在50°C下攪拌24小時（密封管）。除去溶劑，並且將所得殘餘物藉由快速二氧化矽層析法純化，洗脫梯度為在DCM中的0至35% MeOH。將產物級分在減壓下濃縮以提供呈淡黃色固體的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]吡啶-2-甲醯胺（ 實例 25）（0.079 g，63%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.23 (3H, t), 2.54 - 2.61 (4H, m), 2.83 (2H, q), 3.32 - 3.40 (4H, m), 3.70 (2H, s), 7.24 - 7.34 (2H, m), 7.38 (1H, dd), 7.56 (1H, d), 7.76 (1H, br d), 7.84 (1H, d), 8.27 (1H, d), 12.44 (1H, br s)；m/z (ES +) [M+H] += 411。 中間體 68 ： 5-[4-[(2- 乙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 甲基 - 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在0°C下在氮氣下經5分鐘的時間將三乙基膦（0.399 ml，2.70 mmol）逐滴添加到3-乙基-8-氟-7-(羥甲基)喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 65）（0.2 g，0.90 mmol）和CBr 4（0.985 g，2.97 mmol）在DCM（7.10 mL）中之攪拌溶液中。將反應在室溫下攪拌1 h。在真空下除去DCM並且將所得固體在乙醚中漿化。在真空下過濾白色ppt，用水並且然後用醚洗滌。將固體在真空下乾燥過夜（不加熱）以得到呈淺棕色固體的7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟喹㗁啉-2(1H)-酮。
向以上粗產物中添加6-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲酸甲酯，2HCl（ 中間體 16）（278 mg，0.90 mmol）、乙腈（10 mL）和N-乙基-N-異丙基丙-2-胺（785 µl，4.51 mmol）並且加熱至70°C持續1 h。將反應混合物冷卻，濃縮，用NaHCO3水溶液（1 mL）淬滅並且在室溫下攪拌1 h。將水（3 mL）添加到以上混合物中並且攪拌10 min。將沈澱過濾並且用水（50 mL）洗滌。將固體通過正相層析法使用在DCM中的0-10% MeOH純化。分離的產物根據LCMS為89%純度。使用質量導向製備型HPLC進一步純化上述固體（使用20%-40%乙腈水溶液和NH4OH改性劑），以產生呈白色固體的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 68）（115 mg，0.262 mmol，29%），LCMS純度為93%。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.23 (3H, t), 2.45 - 2.49 (3H, m), 2.53 - 2.69 (4H, m), 2.83 (2H, q), 2.98 (4H, br s), 3.73 (2H, s), 3.83 (3H, s), 7.31 (1H, t), 7.45 (1H, d), 7.56 (1H, d), 7.86 (1H, d), 12.44 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO- d6) -135.54 (1F, s)。m/z (ES +) [M+H] += 440。 實例 26 ： 5-[4-[(2- 乙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將在甲醇中的7 N胺（6.40 ml，44.78 mmol）添加到在40 mL閃爍小瓶中的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 68）（0.0984 g，0.22 mmol），密封並且在室溫下攪拌18 h。將反應在真空下濃縮，添加另外的胺（6.40 ml，44.78 mmol）溶液，並且在50°C下攪拌16 h。將反應在真空下濃縮，並且添加在甲醇中的另外NH3並且在室溫下攪拌週末。根據LCMS反應完成。將反應混合物在真空下濃縮，將所得固體在乙醚中漿化。將固體過濾並且用另外的醚和甲醇洗滌以產生呈白色固體的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 26）（0.095 g，100%）；1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.22 (3H, br t), 2.45 - 2.49 (3H, m), 2.52 - 2.68 (4H, m), 2.82 (2H, q), 2.94 (4H, br s), 3.72 (2H, br s), 7.30 (1H, br t), 7.38 - 7.51 (2H, m), 7.55 (1H, br d), 7.80 (2H, br d), 12.41 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -135.53 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 425。 中間體 69 ： 2- 乙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 甲醛
將戴斯-馬丁高碘烷（458 mg，1.08 mmol）添加到在DCM（5 mL）中的3-乙基-8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 65）（被其區域異構物3-乙基-8-氟-5-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（160 mg，0.72 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌4 h。蒸發溶劑以得到粗產物，將該粗產物藉由快速C18快速層析法純化，洗脫梯度為在水中的5%值30% MeCN（0.4% FA）。將純級分蒸發至乾以提供呈黃色固體的2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（被其區域異構物3-乙基-8-氟-2-側氧基-1H-喹㗁啉-5-甲醛污染）（ 中間體 69）（110 mg，69%）。m/z (ES +) [M+H] += 221。 實例 27 ： 5-[4-[(2- 乙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 氟 -N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將異丙醇鈦（64.5 mg，0.23 mmol）添加到在THF（3 mL）中的2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（ 中間體 69）（被其區域異構物3-乙基-8-氟-2-側氧基-1H-喹㗁啉-5-甲醛污染）（50 mg，0.23 mmol）和6-氟-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺（54.1 mg，0.23 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌2 min。添加三乙醯氧基硼氫化鈉（ 中間體 32）（192 mg，0.91 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌16 h。將反應混合物用MeOH（0.1 mL）淬滅。蒸發溶劑以提供粗產物。將粗殘餘物藉由製備型HPLC純化（柱：Xselect CSH OBD 柱30*150mm 5 um；流動相A：水（0.05% TFA），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在10 min內10% B至20% B；254；220 nm）和（柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10 um；流動相A：水（10MMOL/L NH 4HCO 3+0.1%NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在7 min內21 B至95 B；254/220 nm。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 27）（6 mg，6%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 1.22 (3H, t), 2.56 - 2.64 (4H, m), 2.76 (3H, d), 2.82 (2H, q), 3.14 - 3.20 (4H, m), 3.71 (2H, s), 7.27 - 7.33 (1H, m), 7.53 - 7.59 (2H, m), 7.82 - 7.86 (1H, m), 8.38 - 8.45 (1H, m), 12.46 (1H, s)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -72.58, -135.51；m/z (ES +) [M+H] += 443。 實例 28 ： 6- 氯 -5-[4-[(2- 乙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將異丙醇鈦（51.6 mg，0.18 mmol）添加到在THF（3 mL）中的2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（ 中間體 69）（被其區域異構物3-乙基-8-氟-2-側氧基-1H-喹㗁啉-5-甲醛污染）（40 mg，0.18 mmol）和6-氯-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺（ 中間體 30）（50 mg，0.20 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌2分鐘。添加三乙醯氧基硼氫化鈉（154 mg，0.73 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物用MeOH（0.1 mL）淬滅並且蒸發以提供粗產物。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5 um；流動相A：水（0.05% NH 3H 2O），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內21 B至41 B；254/220 nm。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的6-氯-5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 28）（37.5 mg，45%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 1.22 (3H, t), 2.57 - 2.65 (4H, m), 2.76 - 2.86 (5H, m), 3.05 - 3.15 (4H, m), 3.72 (2H, s), 7.29 (1H, t), 7.55 (1H, d), 7.65 (1H, d), 7.93 (1H, d), 8.40 - 8.45 (1H, m), 12.45 (1H, s)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -135.46；m/z (ES +) [M+H] += 459。 實例 29 ： 5-[4-[(2- 乙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將異丙醇鈦（51.6 mg，0.18 mmol）添加到在THF（3 mL）中的2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（ 中間體 69）（被其區域異構物3-乙基-8-氟-2-側氧基-1H-喹㗁啉-5-甲醛污染）（40 mg，0.18 mmol）和N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺（ 中間體 31）（50 mg，0.23 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌2分鐘。添加三乙醯氧基硼氫化鈉（154 mg，0.73 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物用MeOH（0.1 mL）淬滅並且濃縮以提供粗產物。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：Xselect CSH OBD 柱30*150 mm 5 um，n；流動相A：水（0.1% FA），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內6 B至17 B；254；220 nm。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 29）（17.29 mg，22%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 1.22 (3H, t), 2.53 - 2.63 (4H, m), 2.74 - 2.87 (5H, m), 3.05 - 3.15 (4H, m, 合併入水峰中), 3.69 (2H, s), 7.29 (1H, t), 7.37 (1H, dd), 7.54 (1H, d), 7.81 (1H, d), 8.25 (1H, d), 8.35 - 8.42 (1H, m), 12.44 (1H, s)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -135.49；m/z (ES +) [M+H] += 425。 中間體 70 ： 5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 甲醛
將戴斯-馬丁高碘烷（1.34 g，3.16 mmol）添加到在DCM（20 ml）中的8-氟-7-(羥甲基)-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 17）（被8-氟-5-(羥甲基)-3-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（0.33 g，0.79 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌6小時。將反應混合物蒸發，以得到粗產物。將粗產物藉由快速C18快速層析法（在水中的5至30% MeCN（0.4% FA）的洗脫梯度）純化。將純級分蒸發至乾，以得到呈灰白色固體的5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（被8-氟-3-甲基-2-側氧基-1H-喹㗁啉-5-甲醛污染）（ 中間體 70）（0.300 g，92%）。m/z (ES +) [M+H] += 207。 實例 30 ： 6- 氯 -5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將異丙醇鈦（89 mg，0.31 mmol）添加到在THF（3 mL）中的5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（被8-氟-3-甲基-2-側氧基-1H-喹㗁啉-5-甲醛污染）（ 中間體 70）（150 mg，0.36 mmol）和6-氯-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 30）（80 mg，0.31 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌20分鐘。添加三乙醯氧基硼氫化鈉（266 mg，1.26 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物用MeOH（0.1 mL）淬滅並且濃縮以提供粗產物。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250 mm，10 um；流動相A：水（10 mmol/L NH 4HCO 3+0.1%NH 3.H 2O），流動相B：MeOH-製備型；流速：20 mL/min；梯度：在7 min內57 B至80 B；254/220 nm。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的6-氯-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 30）（35.6 mg，25%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.42 (3H, s), 2.58 - 2.66 (4H, m), 2.79 (3H, d), 3.06 - 3.16 (4H, m), 3.72 (2H, s), 7.30 (1H, t), 7.53 (1H, d), 7.65 (1H, d), 7.93 (1H, d), 8.41 - 8.48 (1H, m), 12.47 (1H, s)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -135.45；m/z (ES +) [M+H] += 445。 實例 31 ： 5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將異丙醇鈦（105 mg，0.37 mmol）添加到在THF（3 mL）中的5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（被8-氟-3-甲基-2-側氧基-1H-喹㗁啉-5-甲醛污染）（ 中間體 70）（150 mg，0.36 mmol）和N,6-二甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，HCl（ 中間體 33）（100 mg，0.37 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌2分鐘。添加三乙醯氧基硼氫化鈉（313 mg，1.48 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物用MeOH（0.1 mL）淬滅並且蒸發以提供粗產物。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5 um；流動相A：水（0.05% NH 3H 2O），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內19 B至39 B；254/220 nm。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈灰白色固體的5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 31）（12.39 mg，8%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.42 (3H, s), 2.48 (3H, s), 2.57 - 2.67 (4H, m), 2.80 (3H, d), 2.90 - 2.98 (4H, m), 3.72 (2H, s), 7.30 (1H, t), 7.47 (1H, d), 7.52 (1H, d), 7.79 (1H, d), 8.39 - 8.46 (1H, m), 12.46 (1H, s)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -135.52；m/z (ES +) [M+H] += 425。 實例 32 ： 5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將異丙醇鈦（103 mg，0.36 mmol）添加到在THF（3 mL）中的5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-甲醛（被8-氟-3-甲基-2-側氧基-1H-喹㗁啉-5-甲醛污染）（150 mg，0.36 mmol）和N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺（ 中間體 31）（80 mg，0.36 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌2分鐘。添加三乙醯氧基硼氫化鈉（308 mg，1.45 mmol）。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物用MeOH（0.1 mL）淬滅。將反應混合物蒸發，以得到粗產物。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：Xbridge Phenyl OBD柱，5 um，19*150mm；流動相A：水（0.05% TFA），流動相B：MeOH-製備型；流速：20 mL/min；梯度：在12 min內24 B至32 B；254/220 nm和（柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10 um；流動相A：水（10 mmol/L NH 4HCO 3+0.1%NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在10 min內15 B至30 B；254/220 nm。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（12.4 mg，8%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.42 (3H, s), 2.55 - 2.60 (4H, m), 2.78 (3H, d), 2.90 - 2.98 (4H, m, 合併入水峰中), 3.70 (2H, s), 7.30 (1H, t), 7.38 (1H, dd), 7.52 (1H, d), 7.82 (1H, d), 8.26 (1H, d), 8.38 - 8.43 (1H, m), 12.47 (1H, s)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -135.48；m/z (ES +) [M+H] += 411。 中間體 72 ： 4- 溴 -3- 氟 - 苯 -1,2- 二胺
將鐵粉（5.2 g，93.11 mmol）添加到在MeOH（30 mL）中的4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺（ 中間體 71）（7.3 g，31.06 mmol）和HCl（10 mL，100.00 mmol）（10 M）中。將所得混合物在室溫下攪拌18小時。在減壓下除去溶劑。將反應混合物用飽和Na 2CO 3溶液（100 mL）鹼化。將水層用EtOAc（2 x 100 mL）萃取。將有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾並且蒸發以提供呈黑色固體的4-溴-3-氟-苯-1,2-二胺（ 中間體 72）（6.05 g，95%）。1H NMR (400 MHz,DMSO- d6)  4.66 (2H, s), 4.94 (2H, s), 6.30 (1H, dd), 6.56 (1H, dd)；m/z (ES +) [M+H] += 205, 207。 中間體 73 ： 7- 溴 -8- 氟 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將在甲苯中的2-側氧基乙酸乙酯（6.41 g，31.39 mmol）添加到甲苯（30 mL）中的4-溴-3-氟-苯-1,2-二胺（ 中間體 72）（4.46 g，21.75 mmol）。將所得混合物在100°C下攪拌30分鐘。在減壓下除去溶劑。將反應混合物用（PE：10 mL和EA：2 mL）稀釋。藉由過濾收集沈澱，用EtOAc（5 mL）洗滌並且在真空下乾燥以提供呈灰白色固體的7-溴-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 73）（被6-溴-5-氟-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（2.75 g，52%）。m/z (ES +) [M+H] += 243。 中間體 74 ： 8- 氟 -7-( 羥甲基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將CataCXium A-Pd-G2（0.12 g，0.18 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿（30 mL）中的(三丁基甲錫烷基)甲醇（1.25 g，3.89 mmol）和7-溴-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 73）（1 g，2.06 mmol）（被6-溴-5-氟-1H-喹㗁啉-2-酮污染）。將所得混合物在氮氣下在100°C下攪拌18小時。將反應混合物用飽和KF（10 mL）淬滅，過濾並且蒸發以提供粗產物。將粗產物藉由快速C18快速層析法純化，洗脫梯度為在水中的3至30% MeCN（0.1%甲酸）。將純級分蒸發至乾以提供呈灰白色固體的8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 74）（260 mg，69%）（被5-氟-6-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）。m/z (ES +) [M+H] += 195。 實例 33 ： 5-[4-[(5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將SOCl 2（0.3 mL，4.11 mmol）添加到在DCM（3 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 74）（158 mg，0.41 mmol）（被5-氟-6-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）中。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。在減壓下除去溶劑。將DIPEA（0.25 mL，1.43 mmol）和N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 31）（141 mg，0.64 mmol）添加到在NMP（3.00 mL）中的混合物。將所得混合物在80°C下攪拌1 h。粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge Prep OBD C18柱，19*250 mm，5 um；流動相A：水（10 mmol/L NH 4HCO 3+0.1%NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在9 min內18 B至24 B；254；220 nm）。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的5-[4-[(5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 33）（13.00 mg，8%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.55 - 2.60 (4H, m), 2.77 (3H, d), 3.28 - 3.33 (4H, m), 3.71 (2H, s), 7.30 - 7.42 (2H, m), 7.61 (1H, d), 7.82 (1H, d), 8.20 (1H, s), 8.25 (1H, d), 8.37 - 8.42 (1H, m)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -129.26；m/z (ES +) [M+H] += 397。 實例 34 ： 6- 氯 -5-[4-[(5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將SOCl 2（0.3 mL，4.11 mmol）添加到在DCM（3 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 74）（被5-氟-6-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（143 mg，0.37 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。在減壓下除去溶劑。將DIPEA（0.25 mL，1.43 mmol）和6-氯-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 30）（101 mg，0.40 mmol）添加到在NMP（3.00 mL）中的混合物中。將所得混合物在80°C下攪拌1 h。粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge Prep OBD C18柱，19*250 mm，5 um；流動相A：水（10MMOL/L NH4HCO3+0.1%NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在9 min內25 B至28 B；254/220 nm。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的6-氯-5-[4-[(5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 34）（23.0 mg，14%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.58 - 2.65 (4H, m), 2.78 (3H, d), 3.07 - 3.14 (4H, m), 3.73 (2H, s), 7.35 (1H, dd), 7.61 (1H, d), 7.65 (1H, d), 7.93 (1H, d), 8.20 (1H, s), 8.41 - 8.45 (1H, m), 12.58 (1H, s)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -135.18；m/z (ES +) [M+H] += 431。 實例 35 ： 5-[4-[(5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將SOCl 2（0.3 mL，4.11 mmol）添加到在DCM（3 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 74）（被5-氟-6-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（143 mg，0.37 mmol）（153 mg，0.39 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。在減壓下除去溶劑。將在NMP（3 mL）中的DIPEA（0.25 mL，1.43 mmol）和N,6-二甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 33）（137 mg，0.58 mmol）添加到混合物中。將所得混合物在80°C下攪拌1 h。粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge Prep OBD C18柱，19*250 mm，5 um；流動相A：水（10MMOL/L NH 4HCO 3+0.1%NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在9 min內24 B至28 B；254/220 nm。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的5-[4-[(5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 35）（13.0 mg，8%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.48 (3H, s), 2.56 - 2.65 (4H, s), 2.79 (3H, d), 2.92 - 2.97 (4H, m), 3.73 (2H, s), 7.31 - 7.39 (1H, m), 7.47 (1H, d), 7.61 (1H, d), 7.78 (1H, d), 8.19 (1H, s), 8.39 - 8.44 (1H, m), 12.55 (1H, s)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -135.25；m/z (ES +) [M+H] += 411。 實例 36 ： 6- 氟 -5-[4-[(5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將SOCl 2（0.3 mL，4.11 mmol）添加到在DCM（3 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（被5-氟-6-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（144 mg，0.37 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。在減壓下除去溶劑。將DIPEA（0.25 mL，1.43 mmol）和6-氟-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 32）（94 mg，0.39 mmol）添加到在NMP（3.00 mL）中的混合物中。將所得混合物在80°C下攪拌1 h。粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge Prep OBD C18柱，19*250 mm，5 um；流動相A：水（10MMOL/L NH 4HCO 3+0.1%NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在9 min內23 B至25 B；254/220 nm；RT1:6.9,8.46。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的6-氟-5-[4-[(5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 36）（16.0 mg，10%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.56 - 2.62 (4H, m), 2.76 (3H, d), 3.13 - 3.20 (4H, m), 3.71 (2H, d), 7.33 (1H, dd), 7.55 (1H, t), 7.61 (1H, d), 7.83 (1H, dd), 8.19 (1H, s), 8.37 - 8.43 (1H, m), 12.56 (1H, brs)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -72.57, -135.21；m/z (ES +) [M+H] += 415。 實例 37 ： 5-[4-[[2-( 二氟甲基 )-5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ] 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在室溫下將氯化鐵(II)（6.18 mg，0.05 mmol）和二氟甲亞磺酸鋅(II)（86 mg，0.29 mmol）在水（0.5 mL）中之溶液分批添加到5-[4-[(5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 35）（40.0 mg，0.10 mmol）和TFA（7.51 µl，0.10 mmol）在DMSO（3 mL）中之攪拌溶液中。隨後添加三級丁基過氧化氫（9.44 μl，0.10 mmol）並且將所得混合物在室溫下攪拌2 h。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱，柱：XBridge Prep OBD C18柱，30×150 mm 5 um；流動相A：水（0.05% NH 3H 2O），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內12% B至32% B；254/220 nm；Rt：6.07 min。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈淡黃色固體的5-[4-[[2-(二氟甲基)-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 37）（2.2 mg，5%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.49 (3H, s), 2.60 - 2.65 (4H, m), 2.80 (3H, d), 2.92 - 2.99 (4H, m), 3.76 (2H, s), 7.08 (1H, t), 7.39 (1H, t), 7.48 (1H, d), 7.70 (1H, d), 7.79 (1H, d), 8.42 (1H, q), 13.01 (1H, s)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -124.324, -134.183；m/z (ES +) [M+H] += 461。 中間體 72 ： 4- 溴 -3- 氟 - 苯 -1,2- 二胺
在室溫下將鐵粉（3.56 g，63.83 mmol）添加到在MeOH（30 mL）中的4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺（ 中間體 71）（3.00 g，12.77 mmol）、濃氯化氫（10.64 ml，127.65 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌16 h。將反應混合物用水（100 mL）稀釋並且用乙酸乙酯（100 mL x 3）萃取。將有機層經MgSO 4乾燥，過濾並且蒸發以提供4-溴-3-氟-苯-1,2-二胺（ 中間體 72）（2.5 g，96%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 4.66 (2H, s), 4.94 (2H, s), 6.30 (dd, 1H), 6.56 (dd, 1H)；m/z (ES +) [M+H] += 205。 中間體 75 ： 7- 溴 -8- 氟 -3- 甲氧基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在室溫下將2,2,2-三甲氧基乙酸甲酯（2.402 g，14.63 mmol）添加到在甲苯（20 mL）中的4-溴-3-氟苯-1,2-二胺（ 中間體 72）（1.500 g，7.32 mmol）、三(((三氟甲基)磺醯基)氧基)鐿（0.454 g，0.73 mmol）。將所得混合物在100°C下攪拌5 h。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由逆相層析法在C18柱上純化，洗脫梯度為在水中的5%至70% MeCN。將純級分蒸發至乾以提供呈白色固體的7-溴-8-氟-3-甲氧基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 75）（0.650 g，32%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 3.97 (3H, s), 7.31 (1H, dd), 7.45 (1H, dd)；m/z (ES +) [M+H] += 273。 中間體 76 ： 8- 氟 -7-( 羥甲基 )-3- 甲氧基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在室溫下在氮氣下將(三丁基甲錫烷基)甲醇（882 mg，2.75 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿（20 mL）中的7-溴-8-氟-3-甲氧基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 75）（300.0 mg，1.1 mmol）、cataCXium A-Pd-G2（73 mg，0.11 mmol）中。將所得混合物在100°C下攪拌16 h。將反應混合物用飽和KF（10 mL）淬滅並且然後過濾。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由逆相層析法在C18柱上純化，洗脫梯度為在水中的5%至100% MeOH。將純級分蒸發至乾以提供呈白色固體的8-氟-7-(羥甲基)-3-甲氧基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 76）（130 mg，53%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 3.97 (3H, s), 4.88 (2H, d), 5.36 (1H, s), 7.27 - 7.32 (1H, m), 7.36 (1H, d), 12.45 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 225。 中間體 77 ： 7-( 氯甲基 )-8- 氟 -3- 甲氧基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在室溫下將SOCl 2（8 ml，109.62 mmol）添加到在乙醚（50 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-3-甲氧基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 76）（50.0 mg，0.22 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌16 h。在減壓下除去溶劑以提供呈黃色油狀物的7-(氯甲基)-8-氟-3-甲氧基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 77）（66.7 mg，122%,粗品）。將產物不經進一步純化直接用於下一步驟。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 3.97 (3H, s), 4.88 (2H, s), 7.27 - 7.42 (2H, m), 12.60 (1H, s) m/z (ES +) [M+H] += 243。 實例 38 ： 5-[4-[(5- 氟 -2- 甲氧基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在室溫下將N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 31）（150 mg，0.68 mmol）添加到在MeCN（10 mL）中的7-(氯甲基)-8-氟-3-甲氧基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 77）（198 mg，0.82 mmol）、DIPEA（0.595 mL，3.40 mmol）中。將所得混合物在60°C下攪拌16 h。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由快速C18-快速層析法純化（洗脫梯度為在水中的5%至70% MeCN）。將純級分蒸發至乾以提供呈黃色固體的產物（103.0 mg）（藉由UV，純度為80%）。藉由快速C18-快速層析法重新純化，洗脫梯度為在水中的5%至70%的MeCN。將純級分蒸發至乾以提供呈黃色固體的5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 38）（36.0 mg，12%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 2.51 - 2.60 (4H, m), 2.77 (3H, d), 3.18 - 3.45 (4H, m), 3.66 (2H, s), 3.95 (3H, s), 7.10 - 7.27 (1H, m), 7.27 - 7.42 (2H, m), 7.81 (1H, d), 8.25 (1H, d), 8.39 (1H, q), 12.30 (1H, s)；19F NMR (282 MHz, DMSO- d6) -134.783；m/z (ES +) [M+H] += 427。 實例 39 ： 6- 氟 -5-[4-[(5- 氟 -2- 甲氧基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在室溫下將SOCl 2（0.065 mL,0.89 mmol）添加到在乙醚（10 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-3-甲氧基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 76）（0.040 g，0.18 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌16 h。在減壓下除去溶劑。在室溫下將在MeCN（10.00 mL）中的6-氟-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 32）（0.043 g，0.18 mmol）和DIPEA（0.156 mL，0.89 mmol）添加到以上固體中。將所得混合物在60°C下攪拌16 h。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由製備型HPLC柱純化，柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250 mm，10 um；流動相A：水（10 mmol/L NH 4HCO 3+ 0.1% NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在7 min內34 B至48 B；254/220 nm；RT1：5.9。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 39）（0.020 g，25%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 2.55 - 2.61 (4H, m), 2.75 (3H, d), 3.11 - 3.19 (4H, m), 3.67 (2H, s), 3.96 (3H, s), 7.18 - 7.29 (1H, m), 7.35 (1H, d), 7.55 (1H, dd), 7.79 - 7.88 (1H, m), 8.41 (1H, d), 12.50 (1H, s)；19F NMR (282 MHz, DMSO- d6) -72.581, -134.799；m/z (ES +) [M+H] += 445。 實例 40 ： 5-[4-[(5- 氟 -2- 甲氧基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在室溫下將N,6-二甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 33）（0.097 g，0.41 mmol）添加到在MeCN（10 mL）中的7-(氯甲基)-8-氟-3-甲氧基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 77）（0.100 g，0.41 mmol）、DIPEA（0.360 mL，2.06 mmol）中。將所得混合物在60°C下攪拌16 h。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由製備型HPLC純化，柱：XBridge Prep OBD C18柱，30×150 mm 5 um；流動相A：水（0.05% NH 3H2 O），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內10B至30B；254/220 nm。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 40）（0.063 g，35%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.48 (3H, s), 2.58 - 2.63 (4H, m), 2.80 (3H, d), 2.92 - 2.96 (4H, m), 3.69 (2H, s), 3.97 (3H, s), 7.25 (1H, t), 7.36 (1H, d), 7.47 (1H, d), 7.79 (1H, d), 8.43 (1H, q), 12.51 (1H, s)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -134.815；m/z (ES +) [M+H] += 441。 實例 41 ： 6- 氯 -5-[4-[(5- 氟 -2- 甲氧基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在室溫下將SOCl 2（0.065 mL,0.89 mmol）添加到在乙醚（10 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-3-甲氧基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 76）（0.040 g，0.18 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌16 h。在減壓下除去溶劑以提供粗7-(氯甲基)-8-氟-3-甲氧基-1H-喹㗁啉-2-酮（0.045 g，0.18 mmol）。向以上固體中添加MeCN（10.00 mL），然後添加6-氯-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 30）（0.045 g，0.18 mmol）和DIPEA（0.156 mL，0.89 mmol）。將所得混合物在80°C下攪拌16小時。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由製備型HPLC柱純化，柱：YMC-Actus Triart C18，30*250，5 um；流動相A：水（0.05% NH 3H 2O），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內21 B至41 B；254，220 nm；RT1：6.18。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的6-氯-5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 41）（0.041 g，50%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 2.56 - 2.66 (4H, m), 2.79 (3H, d), 3.06  3.16 (4H, m), 3.70 (2H, s), 3.97 (3H, s), 7.19 - 7.30 (m, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.93 (d, 1H), 8.44 (d, 1H), 12.47 (s, 1H)；19F NMR (282 MHz, DMSO- d6) -134.746；m/z (ES +) [M+H] += 461。 中間體 78 ： 2-(4- 溴 -3- 甲基 -2- 硝基 - 苯胺基 ) 丁酸
在室溫下將2-胺基丁酸（0.793 g，7.69 mmol）添加到在DMF（20 mL）中的1-溴-4-氟-2-甲基-3-硝基苯（ 中間體 2）（1.500 g，6.41 mmol）、K 2CO 3（2.66 g，19.23 mmol）中。將所得混合物在100°C下攪拌6 h。將反應混合物倒入冰水中，在0°C下用1M HCl（20 mL）緩慢淬滅以得到黃色懸浮液。藉由過濾收集固體，用水洗滌並乾燥以提供呈黃色固體的2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丁酸（ 中間體 78）（1.4 g，74%）（不是很純，未經進一步純化直接用於下一步驟）。m/z (ES +) [M+H] += 317。 中間體 79 ： 7- 溴 -3- 乙基 -8- 甲基 -3,4- 二氫 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在室溫下將鐵粉（1.585 g，28.38 mmol）緩慢添加到在MeOH（100 mL）中的2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丁酸（ 中間體 78）（1.800 g，5.68 mmol）、濃氯化氫（4.73 ml，56.76 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌7 h。將反應混合物過濾。在減壓下除去溶劑。將反應混合物用飽和Na 2CO 3（40 mL）淬滅並且用EtOAc（3 x 50 mL）萃取。將有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾並且蒸發以提供棕色固體。將粗產物藉由快速C18-快速層析法純化（洗脫梯度為在水中的5%至50% MeCN）。將純級分蒸發至乾以提供呈白色固體的7-溴-3-乙基-8-甲基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 79）（650 mg，43%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 0.90 (3H, t), 1.43 - 1.72 (2H, m), 2.22 (3H, s), 3.56 (1H, ddd), 6.16 (1H, d), 6.56 (1H, d), 6.97 (1H, d), 9.76 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 269。 中間體 80 ： 7- 溴 -3- 乙基 -8- 甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在室溫下將DDQ（1.316 g，5.80 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿（150 mL）中的7-溴-3-乙基-8-甲基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 79）（1.300 g，4.83 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌3 h。在減壓下除去溶劑。將反應混合物用飽和NaHCO 3（150 mL）淬滅。藉由過濾收集沈澱。將固體用水（10 mL x 3）洗滌並且在真空下乾燥以提供呈黃色固體的所需產物7-溴-3-乙基-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 80）（1.2 g，93%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 1.20 (3H, t), 2.44 - 2.53 (3H, m), 2.78 (2H, q), 7.48 (2H, s), 11.74 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 267。 中間體 81 ： 3- 乙基 -7-( 羥甲基 )-8- 甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在室溫下在氮氣下將(三丁基甲錫烷基)甲醇（1202 mg，3.74 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿（40 mL）中的7-溴-3-乙基-8-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 80）（400 mg，1.50 mmol）、Pd(PPh 3) 4（173 mg，0.15 mmol）中。將所得混合物在60°C下攪拌16 h。將反應混合物用KF（10 mL）淬滅並且濾出固體。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由快速C18-快速層析法純化，洗脫梯度為在水中的5%至100% MeOH。將純級分蒸發至乾以提供呈白色固體的3-乙基-7-(羥甲基)-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 81）（100 mg，31%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 1.22 (3H, t), 2.32 (3H, s), 2.81 (2H, q), 4.59 (2H, d), 5.25 (1H, s), 7.33 (1H, d), 7.55 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 219。 實例 42 ： 5-[4-[(2- 乙基 -5- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在室溫下將在AcOH中的HBr（1 ml，6.08 mmol）（33w%）添加到3-乙基-7-(羥甲基)-8-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 81）（65.0 mg，0.30 mmol）中。將所得混合物在60°C下攪拌2 h。在減壓下除去溶劑。在室溫下將在NMP（3 mL）中的N,6-二甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 33）（69.8 mg，0.30 mmol）和DIPEA（0.156 ml，0.89 mmol）添加到以上固體中。將所得混合物在60°C下攪拌2 h。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱，柱：Sunfire prep C18柱，30*150，5 um；流動相A：水（0.1% FA），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內9 B至20 B；254/220 nm；RT1：5.15；將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈淡黃色固體的5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 42）（0.049 g，38%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 1.20 (3H, t), 2.42 (3H, s), 2.50 (3H, s), 2.53 - 2.59 (4H, m), 2.73 - 2.86 (5H, m), 2.87 - 2.93 (4H, m), 3.61 (2H, s), 7.23 (1H, d), 7.45 (1H, d), 7.52 (1H, d), 7.76 (1H, d), 8.39 (1H, d), 11.52 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 435。 實例 43 ： 5-[4-[(2- 乙基 -5- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 氟 -N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在室溫將在AcOH中的HBr（1 ml，6.08 mmol）（33 w%）添加到3-乙基-7-(羥甲基)-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 81）（65.0 mg，0.30 mmol）中。將所得混合物在60°C下攪拌2小時。在減壓下除去溶劑。在室溫下將6-氟-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺（ 中間體 32）（71.0 mg，0.30 mmol）添加到以上固體中，然後添加在NMP（3 mL）中的DIPEA（0.156 ml,0.89 mmol）。將所得混合物在60°C下攪拌2小時。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱，柱：XBridge Prep OBD C18柱，30 × 150 mm 5 um；流動相A：水（0.05% NH3H2O），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內31 B至51 B；254/220 nm；RT1：6.27；將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈淡黃色固體的5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 43）（0.043 g，33%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 1.20 (3H, t), 2.41 (3H, s), 2.49 - 2.59 (4H, m), 2.70 - 2.81 (5H, m), 3.08 - 3.16 (4H, m), 3.59 (2H, s), 7.22 (1H, d), 7.47 - 7.60 (2H, m), 7.82 (1H, dd), 8.37 (1H, d), 11.52 (1H, s)；19F NMR (282 MHz, DMSO- d6) -72.539；m/z (ES +) [M+H] += 439。 實例 44 ： 5-[4-[(2- 乙基 -5- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在室溫下將在AcOH中的HBr（1 ml，18.42 mmol）（33 wt%）添加到3-乙基-7-(羥甲基)-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 81）（65.0 mg，0.30 mmol）中。將所得混合物在60°C下攪拌2小時。在減壓下除去溶劑。在室溫下將N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺（ 中間體 31）（65.6 mg，0.30 mmol）和DIPEA（0.156 ml，0.89 mmol）添加到在NMP（3 mL）中的以上固體中。將所得混合物在60°C下攪拌2 h。粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：Sunfire prep C18柱，30*150，5 um；流動相A：水（0.1% FA），流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內9 B至20 B；254/220 nm；RT1：5.15；將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈淡黃色固體的5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 44）（0.014 g，10%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 1.16-1.26 (3H, m), 2.41 (3H, s), 2.49 - 2.59 (4H, m), 2.70 - 2.81 (5H, m), 3.30 - 3.35 (4H, m, 合併入水峰中), 3.61 (2H, s), 7.25 (1H, d), 7.38 (1H, d), 7.55 (1H, d), 7.82 (1H, d), 8.26 (1H, s), 8.38 (1H, s), 11.53 (1H, s)；m/z (ES +) [M+H] += 421。 中間體 82 ： 4-[6-( 乙基胺基甲醯基 )-2- 氟 -3- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將4-(2-氟-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 11）（500 mg，1.47 mmol）添加到在水中的乙胺（10 mL，1.47 mmol）（65 wt%）中。將所得混合物在室溫下攪拌2 h。反應達到完成。藉由過濾收集沈澱，用水（2 mL x 3）洗滌並且在真空下乾燥以提供呈灰白色固體的4-[6-(乙基胺基甲醯基)-2-氟-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 82）（0.515 g，99%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 1.09 (3H, t), 1.42 (9H, s), 3.11 (4H, t), 3.23 - 3.30 (2H, m), 3.49 (4H, t), 7.59 (1H, dd), 7.85 (1H, d), 8.45 (1H, t)；m/z (ES +) [M+H] += 353。 中間體 83 ： N- 乙基 -6- 氟 -5- 哌 𠯤 -1- 基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將4-[6-(乙基胺基甲醯基)-2-氟-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 82）（536 mg，1.52 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿中的HCl（5 mL，20.00 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。添加DIPEA（5 mL）並且將所得混合物在室溫下攪拌15 min。將反應混合物蒸發以提供粗產物。將粗產物藉由快速C18-快速層析法純化，洗脫梯度為以在水（0.1% NH 4HCO 3）中的5%至50% MeCN。將純級分蒸發至乾以提供呈黃色固體的N-乙基-6-氟-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 83）（0.368 g，96%）。樣本不純，未經進一步純化直接用於下一步驟；m/z (ES +) [M+H] += 253。 實例 45 ： N- 乙基 -6- 氟 -5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 吡啶 -2- 甲醯胺
將Ph 3P（94 mg，0.36 mmol）添加到在CH 2Cl 2（3 mL）中的CBr 4（119 mg，0.36 mmol）、8-氟-7-(羥甲基)-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（ 中間體 17）（50 mg，0.24 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。在減壓下除去溶劑。將在NMP（3 mL）中的N-乙基-6-氟-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 83）（60 mg，0.24 mmol）和DIPEA（1.5 mL，8.59 mmol）添加到混合物中。將所得混合物在80°C下攪拌2 h。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由快速C18快速層析法純化，洗脫梯度為在水（NH 4HCO 3）中的0至25% MeCN。將純級分蒸發至乾以提供呈白色固體的N-乙基-6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]吡啶-2-甲醯胺（ 實例 45）（2.60 mg，3%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 1.09 (3H, t), 2.40 (3H, s), 2.52 - 2.62 (4H, m), 3.17 - 3.27 (4H, m), 3.25 (2H, q), 3.68 (2H, s), 7.28 (1H, t), 7.48 - 7.59 (2H, m), 7.82 (1H, d), 8.41 (1H, t),12.48 (1H, s)；19F NMR (282 MHz, DMSO- d6) -72.58, -135.52；m/z (ES +) [M+H] += 443。 中間體 84 ： 5- 溴 -N- 乙基 -6- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將在H 2O中的乙胺（3 mL，2.20 mmol）（65 wt%）添加到5-溴-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 14）（505 mg，2.20 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌18 h。在減壓下除去溶劑以提供呈黃色固體的5-溴-N-乙基-6-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 84）（0.500 g，94%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 1.13 (3H, t), 2.66 (3H, s), 3.26 - 3.39 (2H, m), 7.76 (1H, d), 8.18 (1H, d), 8.67 - 8.72 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 243。 中間體 85 ： 4-[6-( 乙基胺基甲醯基 )-2- 甲基 -3- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將Cs 2CO 3（1.340 g，4.11 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿（5 mL）中的5-溴-N-乙基-6-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 84）（0.5 g，2.06 mmol）、哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（0.575 g，3.09 mmol）、BINAP（0.128 g，0.21 mmol）和Pd(OAc) 2（0.046 g,0.21 mmol）中。將所得混合物在100°C下在氮氣下攪拌18 h。將反應混合物用EtOAc（10 mL）稀釋，並且用水（10 mL x 2）洗滌並且然後用鹽水（10 mL x 1）洗滌。將有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾並且蒸發以提供粗產物。將粗產物藉由快速二氧化矽層析法純化，洗脫梯度為在石油醚中的0至40% EtOAc。將純級分蒸發至乾以提供呈黃色固體的4-[6-(乙基胺基甲醯基)-2-甲基-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 85）（0.481 g，67%）。1H NMR (300 MHz, 氯仿- d) 1.26 (3H, t), 1.49 (9H, s), 2.54 (3H, s), 2.85 - 2.98 (4H, m), 3.49 (2H, qd), 3.56 - 3.65 (4H, m), 7.32 (1H, d), 7.91 - 8.01 (2H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 349。 中間體 86 ： N- 乙基 -6- 甲基 -5- 哌 𠯤 -1- 基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將在1,4-二㗁𠮿中的HCl（4 ml，16.00 mmol，4M）添加到在MeOH（10 mL）中的4-[6-(乙基胺基甲醯基)-2-甲基-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 85）（0.481 g，1.38 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。在減壓下除去溶劑。將反應混合物用在MeOH（3 mL）中的DIPEA（1 mL）鹼化。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由快速C18快速層析法純化，洗脫梯度為在水（NH 4HCO 3）中的0至20% MeCN。將純級分蒸發至乾以提供呈黃色油狀物的N-乙基-6-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 86）（0.189 g，55%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 1.12 (3H, t), 2.81 - 2.92 (8H, m), 3.27 - 3.36 (5H, m), 7.46 (1H, d), 7.81 (1H, d), 8.43 (1H, t)；m/z (ES +) [M+H] += 249。 實例 46 ： N- 乙基 -5-[4-[(5- 氟 -2- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將Ph 3P（299 mg，1.14 mmol）添加到在CH 2Cl 2（3.00 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-3-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮（158 mg，0.76 mmol）（ 中間體 17）、CBr 4（378 mg，1.14 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。在減壓下除去溶劑。將N-乙基-6-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 86）（188 mg，0.76 mmol）和DIPEA（1.5 mL，8.59 mmol）添加到在NMP（3 mL）中的混合物中。將所得混合物在80°C下攪拌2 h。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由快速C18快速層析法純化，洗脫梯度為在水（NH 4HCO 3）中的0至25% MeCN。將純級分蒸發至乾以提供呈白色固體的N-乙基-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲醯胺 （實例 46）（7.40 mg，2%）。1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 1.10 (3H, t), 2.40 (3H, s), 2.50 (3H, s), 2.54 - 2.64 (4H, m), 2.87 - 2.97 (4H, m), 3.30 (2H, q), 3.70 (2H, s), 7.28 (1H, t), 7.47 (1H, d), 7.52 (1H, d), 7.77 (1H, d), 8.42 (1H, t), 12.44 (1H, s)；19F NMR (282 MHz, DMSO- d6) -135.54；m/z (ES +) [M+H] += 439。 中間體 87 ： 7- 溴 -8- 氟 -3-( 三氟甲基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將3,3,3-三氟-2-側氧基丙酸乙酯（2.30 g，13.52 mmol）添加到在甲苯（10 mL）中的4-溴-3-氟-苯-1,2-二胺（ 中間體 72）（2.20 g,10.73 mmol）中。將所得混合物在100°C下攪拌18 h。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由快速C18-快速層析法純化，洗脫梯度為以在水（0.1% NH 4HCO 3）中的3%至70% MeCN。將純級分蒸發至乾以提供呈灰白色固體的7-溴-8-氟-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 87）（被6-溴-5-氟-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（3.40 g，501%）。m/z (ES +) [M+H] += 311。 中間體 88 ： 8- 氟 -7-( 羥甲基 )-3-( 三氟甲基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將CataCxium A Pd G2（53 mg，0.08 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿（15 mL）中的7-溴-8-氟-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 87）（被6-溴-5-氟-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（0.5 g，0.80 mmol）和(三丁基甲錫烷基)甲醇（0.5 mL，0.80 mmol）中。將所得混合物在80°C下在氮氣下攪拌18 h。將反應混合物用飽和KF（1.25 mL）淬滅。藉由過濾收集反應溶液，用二㗁𠮿（2.5 mL）洗滌。在減壓下除去合併的有機層的溶劑。將粗產物藉由快速C18快速層析法純化，洗脫梯度為在水中的3%至40% MeCN（0.1% TFA）。將純級分蒸發至乾以提供呈灰白色固體的8-氟-7-(羥甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 88）（被5-氟-6-(羥甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（0.217 g，51%）。m/z (ES +) [M+H] += 263。 實例 47 ： 5-[4-[[5- 氟 -3- 側氧基 -2-( 三氟甲基 )-4H- 喹㗁啉 -6- 基 ] 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將SOCl 2（0.5 mL，6.85 mmol）添加到在Et 2O（5 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 88）（被5-氟-6-(羥甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（160 mg，0.31 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌2 h。在減壓下除去溶劑。將DIPEA（4 mL，22.90 mmol）和N,6-二甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 33）（134 mg，0.57 mmol）添加到在MeCN（10 mL）中的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌24 h。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge BEH C18 OBD Prep柱，5 µm，19 mm 250 mm；流動相A：水（10 mmol/L NH 4HCO 3+0.1% NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在10 min內24 B至33 B；254/220 nm；RT1：8.2/9.5），將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的5-[4-[[5-氟-3-側氧基-2-(三氟甲基)-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 47）（8.8 mg，6%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.50 (3H, s), 2.58 - 2.66 (4H, m), 2.79 (3H, d), 2.90 - 2.99 (4H, m), 3.77 (2H, s), 7.41 (1H, t), 7.47 (1H, d), 7.72 (1H, d), 7.78 (1H, d), 8.39 - 8.44 (1H, m),13.21 (1H, brs)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -68.50, -133.81；m/z (ES +) [M+H] += 479。 實例 48 ： 6- 氟 -5-[4-[[5- 氟 -3- 側氧基 -2-( 三氟甲基 )-4H- 喹㗁啉 -6- 基 ] 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將SOCl 2（0.4 mL，5.48 mmol）添加到在Et 2O（5 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 88）（被5-氟-6-(羥甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（120 mg，0.23 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌2 h。在減壓下除去溶劑。將DIPEA（2 mL，11.45 mmol）和6-氟-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 32）（156 mg，0.65 mmol）添加到在MeCN（10 mL）中的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌24 h。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge BEH C18 OBD Prep柱，5 µm，19 mm 250 mm；流動相A：水（10 mmol/L NH 4HCO 3+0.1%NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在10 min內25 B至37 B；254/220 nm；RT1：7.58/8.97）。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的6-氟-5-[4-[[5-氟-3-側氧基-2-(三氟甲基)-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 48）（8.9 mg，8%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.58 - 2.65 (4H, m), 2.76 (3H, d), 3.14-3.21 (4H, m), 3.75 (2H, s), 7.39 (1H, t), 7.56 (1H, dd), 7.71 (1H, d), 7.84 (1H, dd), 8.37 - 8.43 (1H, m), 13.39 (1H, brs)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -68.48, -72.59, -133.78；m/z (ES +) [M+H] += 483。 實例 49 ： 6- 氯 -5-[4-[[5- 氟 -3- 側氧基 -2-( 三氟甲基 )-4H- 喹㗁啉 -6- 基 ] 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將SOCl 2（0.4 mL，5.48 mmol）添加到在Et 2O（5 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 88）（被5-氟-6-(羥甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（120 mg，0.23 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌2 h。在減壓下除去溶劑。將DIPEA（2 mL，11.45 mmol）和6-氯-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 30）（157 mg，0.62 mmol）添加到在MeCN（10 mL）中的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌24 h。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10 um；流動相A：水（10 MMOL/L NH4HCO 3+0.1% NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在10 min內45 B至57 B；254/220 nm）。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的6-氯-5-[4-[[5-氟-3-側氧基-2-(三氟甲基)-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 49）（18 mg，16%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.60 - 2.68 (4H, m), 2.78 (3H, d), 3.07 - 3.16 (4H, m), 3.77 (2H, s), 7.40 (1H, t), 7.66 (1H, d), 7.72 (1H, d), 7.93 (1H, d), 8.40 - 8.43 (1H, m), 13.25 (1H, brs)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -68.51, -133.73；m/z (ES +) [M+H] += 499。 實例 50 ： 5-[4-[[5- 氟 -3- 側氧基 -2-( 三氟甲基 )-4H- 喹㗁啉 -6- 基 ] 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將SOCl 2（0.4 mL，5.48 mmol）添加到在Et 2O（5 mL）中的8-氟-7-(羥甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 88）（被5-氟-6-(羥甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮污染）（120 mg，0.23 mmol）中。將所得混合物在室溫下攪拌2。在減壓下除去溶劑。將DIPEA（2 mL，11.45 mmol）和N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺（ 中間體 31）（259 mg，1.18 mmol）添加到在MeCN（10 mL）中的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌24 h。將粗產物藉由製備型HPLC純化（柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250 mm，10 um；流動相A：水（10 mmol/L NH 4HCO 3+0.1%NH 3.H 2O），流動相B：ACN；流速：20 mL/min；梯度：在10 min內15 B至35 B；254/220 nm；RT1：10.18/11.2）。將含有所需化合物的級分蒸發至乾以提供呈白色固體的5-[4-[[5-氟-3-側氧基-2-(三氟甲基)-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（ 實例 50）（6 mg，6%）。1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 2.51 - 2.57(4H, m), 2.76 (3H, d), 3.25 - 3.34 (4H, m), 3.72 (2H, s), 7.30 (1H, t), 7.39 (1H, dd), 7.65 (1H, d), 7.83 (1H, d), 8.27 (1H, d), 8..36 - 8.41 (1H, m)；19F NMR (376 MHz, DMSO- d6) -68.34, -133.80；m/z (ES +) [M+H] += 465。 中間體 90 ： 2-(4- 溴 -3- 氟 -2- 硝基 - 苯胺基 )-3- 甲基 - 丁酸甲酯
將DIPEA（2.202 mL，12.61 mmol）緩慢添加到1-溴-2,4-二氟-3-硝基苯（ 中間體 35）（1 g，4.20 mmol）和纈胺酸甲酯，HCl（ 中間體 89）（0.704 g，4.20 mmol）在DMF（6 mL）中之攪拌溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌18小時（根據LCMS完全轉化為所需產物）。將反應混合物濃縮，用水稀釋並且用乙酸乙酯萃取，將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾並且在真空下濃縮。將粗產物經由正相層析法用己烷:乙酸乙酯純化以產生呈亮橙色固體的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-甲基-丁酸甲酯（0.763 g，52.0%）（ 中間體 90 ）。1H NMR (500 MHz, 二氯甲烷-d2) 1.00 - 1.14 (6H, m), 2.20 - 2.35 (1H, m), 3.78 (3H, s), 4.06 (1H, dd), 6.52 (1H, br d), 7.39 (1H, br d), 7.52 (1H, dd)；19F NMR (471 MHz, 二氯甲烷-d2) -109.33 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 349。 中間體 91 ： 7- 溴 -8- 氟 -3- 異丙基 -3,4- 二氫 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下將鋅粉（1.143 g，17.48 mmol）分批添加到2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-甲基-丁酸甲酯（0.763 g，2.19 mmol）（ 中間體 90 ）和氯化銨（0.935 g，17.48 mmol）在MeOH（12 mL）和水（0.3 mL）中之混合物中（放熱反應），將混合物在室溫下攪拌2 h（無SM剩餘，橙色完全消失表明反應完成）。濾出Zn，將固體濾餅用在DCM中的20% MeOH洗滌，並且將濾液在真空下濃縮。向上述粗產物中添加水，並且將產物萃取到乙酸乙酯層中。將有機層乾燥並且在真空下濃縮以提供無色油狀物。將粗產物在1 : 1乙酸乙酯:甲醇中漿化，添加0.5 mL在二㗁𠮿中的4N HCl並且將反應攪拌1 h（無未環化產物剩餘）。將反應混合物濃縮以產生7-溴-8-氟-3-異丙基-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 91 ）。假設此反應的產率為100%，將粗產物無需任何進一步純化即可經受試劑用於下一步驟。m/z (ES +) [M+H] += 287。 中間體 92 ： 7- 溴 -8- 氟 -3- 異丙基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將4,5-二氯-3,6-二側氧基環己-1,4-二烯-1,2-二甲腈（595 mg，2.62 mmol）一次性添加到7-溴-8-氟-3-異丙基-3,4-二氫喹㗁啉-2(1H)-酮（627 mg，2.18 mmol）（ 中間體 91 ）在DCM（20 mL）中之攪拌溶液中。將所得漿料在室溫下攪拌2小時（根據LCMS完全轉化為所需產物）。將反應混合物在真空下濃縮並且用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅。將以上漿料在室溫下攪拌過夜並且濾出固體。將過濾的固體用水接著用乙醚徹底洗滌並且乾燥以得到呈灰白色固體的7-溴-8-氟-3-異丙基-1H-喹㗁啉-2-酮（0.425 g，68.3%）（ 中間體 92 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.22 (6H, d), 3.36 - 3.52 (1H, m), 7.45 - 7.58 (2H, m), 12.62 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -124.16 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 285。 中間體 93 ： 8- 氟 -7-( 羥甲基 )-3- 異丙基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將Xphos Pd G2（103 mg，0.13 mmol）添加到7-溴-8-氟-3-異丙基喹㗁啉-2(1H)-酮（375 mg，1.32 mmol）溶液中（ 中間體 92 ）和(三丁基甲錫烷基)甲醇（507 mg，1.58 mmol）在1,4-二㗁𠮿（6.58 mL）中之攪拌脫氣溶液中。將所得溶液在80°C下攪拌16小時。將反應混合物在真空下濃縮，並且通過正相層析法純化（使用在DCM中的0-10% MeOH）以產生呈白色固體的8-氟-7-(羥甲基)-3-異丙基-1H-喹㗁啉-2-酮（0.255 g，82%）（ 中間體 93 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.22 (6H, d), 3.39 - 3.52 (1H, m), 4.64 (2H, d), 5.41 (1H, t), 7.33 (1H, s), 7.55 (1H, d), 12.42 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -137.71 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 237。 中間體 94 ： 7-( 溴甲基 )-8- 氟 -3- 異丙基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下在氮氣下經5分鐘的時間將三乙基膦（0.477 ml，3.23 mmol）逐滴添加到8-氟-7-(羥甲基)-3-異丙基喹㗁啉-2(1H)-酮（0.2541 g，1.08 mmol）（ 中間體 93 ）和CBr4（1.177 g，3.55 mmol）在DCM（8.49 mL）中之攪拌溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌1 h，在真空下除去DCM並且將所得固體在乙醚中漿化。在真空下過濾白色ppt，用水並且然後用醚洗滌。將固體在真空下乾燥過夜（不加熱）以得到呈淺棕色固體的7-(溴甲基)-8-氟-3-異丙基-1H-喹㗁啉-2-酮（0.313 g，97%）（ 中間體 94 ）。m/z (ES +) [M+H] += 299。 實例 51 ： 6- 氟 -5-[4-[(5- 氟 -2- 異丙基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向7-(溴甲基)-8-氟-3-異丙基喹㗁啉-2(1H)-酮（100 mg，0.33 mmol）（ 中間體 94 ）中添加6-氟-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，2HCl（104 mg，0.33 mmol）（ 中間體 32 ）、乙腈（5 mL）和N-乙基-N-異丙基丙-2-胺（291 µL，1.67 mmol）並且加熱至70°C。LCMS指示在1 h後SM完全消失以及形成所需產物。將反應混合物冷卻，濃縮，用NaHCO3水溶液（1 mL）淬滅並且在室溫下攪拌1 h。將水（3 mL）添加到以上混合物中並且攪拌10 min。過濾沈澱並且用大量水（50 mL）洗滌。將固體通過正相層析法純化（使用在DCM中的0-10% MeOH）以產生呈白色固體的6-氟-5-[4-[(5-氟-2-異丙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.050 g，32.8%）（ 實例 51 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.22 (6H, d), 2.53 - 2.65 (4H, m), 2.77 (3H, d), 3.12 - 3.24 (4H, m), 3.36 - 3.52 (1H, m), 3.71 (2H, s), 7.30 (1H, t), 7.52 - 7.59 (2H, m), 7.84 (1H, d), 8.36 - 8.41 (1H, m), 12.46 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -135.53 (1F, s), -72.59 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 457。 實例 52 ： 5-[4-[(5- 氟 -2- 異丙基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向7-(溴甲基)-8-氟-3-異丙基喹㗁啉-2(1H)-酮（109 mg，0.36 mmol）（ 中間體 94 ）中添加N,6-二甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲醯胺，2HCl（112 mg，0.36 mmol）（ 中間體 33 ）、乙腈（5 mL）和N-乙基-N-異丙基丙-2-胺（317 µl，1.82 mmol）並且加熱至70 C。LCMS指示在1 h後SM完全消失以及形成所需產物。將反應混合物冷卻，濃縮，用NaHCO3水溶液（1 mL）淬滅並且在室溫下攪拌1 h。將水（3 mL）添加到以上混合物中並且攪拌10 min。過濾沈澱並且用大量水（50 mL）洗滌。將固體通過正相層析法純化（使用在DCM中的0-10% MeOH）以產生呈白色固體的5-[4-[(5-氟-2-異丙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.057 g，34.6%）（ 實例 52 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.22 (6H, d), 2.46 - 2.49 (3H, m), 2.52 - 2.68 (4H, m), 2.80 (3H, d), 2.94 (4H, br s), 3.36 - 3.52 (1H, m), 3.73 (2H, s), 7.30 (1H, t), 7.47 (1H, d), 7.56 (1H, d), 7.79 (1H, d), 8.37 - 8.44 (1H, m), 12.46 (1H, s)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -135.55 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 453。 實例 53 ： 5-[4-[(5- 氟 -2- 異丙基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向7-(溴甲基)-8-氟-3-異丙基喹㗁啉-2(1H)-酮（100 mg，0.33 mmol）（ 中間體 94 ）中添加N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲醯胺，2HCl（98 mg，0.33 mmol）（ 中間體 31 ）、乙腈（5 mL）和N-乙基-N-異丙基丙-2-胺（291 µl，1.67 mmol）並且加熱至70°C。LCMS指示在1 h後SM完全消失以及形成所需產物。將反應混合物冷卻，濃縮，用NaHCO3水溶液（1 mL）淬滅並且在室溫下攪拌1 h。將水（3 mL）添加到以上混合物中並且攪拌10 min。過濾沈澱並且用大量水（50 mL）洗滌。將固體通過正相層析法純化（使用在DCM中的0-10% MeOH）以產生呈白色固體的5-[4-[(5-氟-2-異丙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.052 g，35.5%）（ 實例 53 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.22 (6H, d), 2.52 - 2.61 (4H, m), 2.78 (3H, d), 3.26 - 3.30 (4H, m), 3.36 - 3.52 (1H, m), 3.70 (2H, s), 7.31 (1H, t), 7.38 (1H, dd), 7.56 (1H, d), 7.82 (1H, d), 8.26 (1H, d), 8.38 (1H, br d), 12.45 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -135.54 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 439。 中間體 96 ： 2-(4- 溴 -3- 氟 -2- 硝基 - 苯胺基 )-2- 環丙基 - 乙酸甲酯
將DIPEA（2.202 mL，12.61 mmol）緩慢添加到1-溴-2,4-二氟-3-硝基苯（ 中間體 35）（1 g，4.20 mmol）和2-胺基-2-環丙基乙酸甲酯，HCl（ 中間體 95）（0.696 g，4.20 mmol）在DMF（6 mL）中之攪拌溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌18小時（根據LCMS完全轉化為所需產物）。將反應混合物濃縮，用水稀釋並且用乙酸乙酯萃取，將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾並且在真空下濃縮。將粗產物通過正相層析法純化（使用己烷和乙酸乙酯）以產生呈亮橙色固體的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-2-環丙基-乙酸甲酯（0.635 g，43.5%）（ 中間體 96 ）。1H NMR (500 MHz, 二氯甲烷-d2) 0.39 - 0.49 (1H, m), 0.54 (1H, td), 0.64 - 0.75 (2H, m), 1.25 - 1.39 (1H, m), 3.74 - 3.83 (4H, m), 6.45 (1H, dd), 7.34 (1H, br d), 7.52 (1H, dd)。19F NMR (471 MHz, 二氯甲烷-d2) -109.53 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 347。 中間體 97 ： 7- 溴 -3- 環丙基 -8- 氟 -3,4- 二氫 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下將鋅粉（957 mg，14.63 mmol）分批添加到2-((4-溴-3-氟-2-硝基苯基)胺基)-2-環丙基乙酸甲酯（635 mg，1.83 mmol）（ 中間體 96 ）和氯化銨（783 mg，14.63 mmol）在MeOH（12 mL）和水（0.3 mL）中之混合物中（放熱反應），將混合物在室溫下攪拌2 h（無SM剩餘，橙色完全消失表示反應完成）。將Zn濾出並且將固體濾餅用在DCM中的20% MeOH洗滌。將濾液濃縮，粗材料顯示出大多未環化的產物。向上述粗產物中添加水，並且將產物萃取到乙酸乙酯層中。將有機層乾燥並且在真空下濃縮以提供油狀物。將此材料在1 : 1乙酸乙酯:甲醇中漿化，添加0.5 mL在二㗁𠮿中的4 N HCl並且將反應混合物攪拌1 h（無未環化產物剩餘）。將反應混合物濃縮以產生呈灰色固體的7-溴-3-環丙基-8-氟-3,4-二氫-1H-喹㗁啉-2-酮（ 中間體 97 ）。假設此反應的產率為100%，將粗產物無需任何進一步純化即可經受試劑用於下一步驟。m/z (ES +) [M+H] += 285。 中間體 98 ： 7- 溴 -3- 環丙基 -8- 氟 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將4,5-二氯-3,6-二側氧基環己-1,4-二烯-1,2-二甲腈（499 mg，2.20 mmol）一次性添加到7-溴-3-環丙基-8-氟-3,4-二氫喹㗁啉-2(1H)-酮（522 mg，1.83 mmol）（ 中間體 97 ）在DCM（20 mL）中之攪拌溶液中。將所得漿料在室溫下攪拌2小時（根據LCMS完全轉化為所需產物）。將反應混合物在真空下濃縮並且用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅。將以上漿料在室溫下攪拌過夜並且濾出固體。將固體用水接著用乙醚徹底洗滌並且乾燥以得到呈灰白色固體的7-溴-3-環丙基-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（0.382 g，73.7%）（ 中間體 98 ）。m/z (ES +) [M+H] += 283。 中間體 99 ： 3- 環丙基 -8- 氟 -7-( 羥甲基 )-1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將Xphos Pd G2（92 mg，0.12 mmol）添加到7-溴-3-環丙基-8-氟喹㗁啉-2(1H)-酮（332 mg，1.17 mmol）（ 中間體 98 ）和(三丁基甲錫烷基)甲醇（452 mg，1.41 mmol）在1,4-二㗁𠮿（5.86 mL）中之攪拌脫氣溶液中並且將所得混合物在80°C下攪拌16小時。將反應混合物在真空下濃縮，並且通過正相層析法純化（使用在DCM中的0-10% MeOH）以產生呈白色固體的3-環丙基-8-氟-7-(羥甲基)-1H-喹㗁啉-2-酮（0.224克，82%）（ 中間體 99 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.02 - 1.14 (4H, m), 2.52 - 2.73 (1H, m), 4.62 (2H, d), 5.38 (1H, t), 7.29 (1H, t), 7.43 (1H, d), 12.43 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -137.67 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 235。 中間體 100 ： 7-( 溴甲基 )-3- 環丙基 -8- 氟 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下在氮氣下經5分鐘的時間將三乙基膦（0.422 ml，2.86 mmol）逐滴添加到3-環丙基-8-氟-7-(羥甲基)喹㗁啉-2(1H)-酮（0.223 g，0.95 mmol）（ 中間體 99 ）和CBr4（1.043 g，3.14 mmol）在DCM（7.52 mL）中之混合物中。將反應在室溫下攪拌1 h。在真空下除去DCM並且將所得固體在乙醚中漿化。在真空下過濾淺綠白色ppt，用水並且然後用醚洗滌。將固體在真空下乾燥過夜（不加熱）以得到呈淺綠色固體的7-(溴甲基)-3-環丙基-8-氟-1H-喹㗁啉-2-酮（0.193 g，68.2%）（ 中間體 100 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.03 - 1.17 (4H, m), 2.63 - 2.76 (1H, m), 4.79 (2H, s), 7.33 (1H, t), 7.43 (1H, d), 12.55 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -133.65 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 297。 實例 54 ： 5-[4-[(2- 環丙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-6- 氟 -N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向7-(溴甲基)-3-環丙基-8-氟喹㗁啉-2(1H)-酮（75 mg，0.25 mmol）（ 中間體 100 ）中添加6-氟-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲醯胺，2HCl（79 mg，0.25 mmol）（ 中間體 32 ）、乙腈（5 mL）和N-乙基-N-異丙基丙-2-胺（220 µl，1.26 mmol）並且加熱至70 C。LCMS指示在1 h後SM完全消失以及形成所需產物。將反應混合物冷卻，濃縮，用NaHCO3水溶液（1 mL）淬滅並且在室溫下攪拌1 h。將水（3 mL）添加到以上混合物中並且攪拌10 min。過濾沈澱並且用大量水（50 mL）洗滌。將固體通過正相層析法純化（使用在DCM中的0-10% MeOH）以產生呈白色固體的5-[4-[(2-環丙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.048 g，41.8%）（ 實例 54 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.04 - 1.13 (4H, m), 2.52 - 2.63 (4H, m), 2.71 (1H, s), 2.77 (3H, d), 3.12 - 3.21 (4H, m), 3.69 (2H, s), 7.26 (1H, t), 7.43 (1H, d), 7.55 (1H, dd), 7.84 (1H, d), 8.39 (1H, br d), 12.46 (1H, br s)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -135.52 (1F, s), -72.58 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 455。 實例 55 ： 5-[4-[(2- 環丙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向7-(溴甲基)-3-環丙基-8-氟喹㗁啉-2(1H)-酮（75 mg，0.25 mmol）（ 中間體 100 ）中添加N,6-二甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲醯胺，2HCl（78 mg，0.25 mmol）（ 中間體 33 ）、乙腈（5 mL）和N-乙基-N-異丙基丙-2-胺（220 µL，1.26 mmol）並且加熱至70°C。LCMS顯示出在1 h後完全轉化為所需產物。將反應混合物冷卻，濃縮，用NaHCO3水溶液（1 mL）淬滅並且在室溫下攪拌1 h。將水（3 mL）添加到以上混合物中並且攪拌10 min。過濾沈澱並且用大量水（50 mL）洗滌。將固體通過正相層析法純化（使用在DCM中的0-10% MeOH）以產生呈白色固體的5-[4-[(2-環丙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.049 g，43.1%）（ 實例 55 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.03 - 1.15 (4H, m), 2.46 - 2.49 (3H, m), 2.52 - 2.65 (4H, m), 2.65 - 2.75 (1H, m), 2.80 (3H, d), 2.94 (4H, br s), 3.71 (2H, s), 7.26 (1H, t), 7.40 - 7.50 (2H, m), 7.79 (1H, d), 8.37 - 8.44 (1H, m), 12.46 (1H, s)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -135.54 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 451。 實例 56 ： 5-[4-[(2- 環丙基 -5- 氟 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向7-(溴甲基)-3-環丙基-8-氟喹㗁啉-2(1H)-酮（43 mg，0.14 mmol）（ 中間體 100 ）中添加N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲醯胺，2HCl（42.4 mg，0.14 mmol）（ 中間體 31 ）、乙腈（5 mL）和N-乙基-N-異丙基丙-2-胺（126 µl，0.72 mmol）並且加熱至70°C。LCMS指示在1 h後SM完全消失以及形成所需產物。將反應混合物冷卻，濃縮，用NaHCO3水溶液（1 mL）淬滅並且在室溫下攪拌1 h。將水（3 mL）添加到以上混合物中並且攪拌10 min。過濾沈澱並且用大量水（25 mL）洗滌。將固體通過正相層析法純化（使用在DCM中的0-10% MeOH）以產生呈白色固體的5-[4-[(2-環丙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.020 g，31.7%）（ 實例 56 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.03 - 1.16 (4H, m), 2.53 - 2.60 (4H, m), 2.65 - 2.80 (5H, m), 3.68 (2H, s), 7.25 (1H, br t), 7.38 (1H, dd), 7.42 (1H, d), 7.82 (1H, d), 8.25 (1H, d), 8.35 - 8.40 (1H, m), 12.38 - 12.51 (1H, m) (缺失的3H可能與DMSO峰重疊)；19F NMR (471 MHz, DMSO-d6) -135.52 (1F, s)；m/z (ES +) [M+H] += 437 中間體 102 ： 7- 溴 -3- 甲氧基 -8- 甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將在密封管中的4-溴-3-甲基苯-1,2-二胺（1.75 g，8.70 mmol）（ 中間體 101）、2,2,2-三甲氧基乙酸甲酯（2.86 g，17.41 mmol）和三氟甲磺酸鐿(III)（0.540 g，0.87 mmol）在甲苯（10 mL）中之混合物脫氣，用N 2回填，在100°C下攪拌過夜得到棕色懸浮液，LCMS指示形成所需產物，將混合物冷卻至室溫，藉由過濾收集固體，用甲醇洗滌，乾燥以產生呈黃色固體的7-溴-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（1.2 g，51.2%）（ 中間體 102）（被約8%的其區域異構物6-溴-3-甲氧基-5-甲基喹㗁啉-2(1H)-酮污染）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 2.50 (3H, br s), 3.97 (3H, s), 7.32 (1H, d), 7.45 (1H, d), 11.79 (1H, br s)；(m/z) (ES +) [M+H] += 269。 中間體 103 ： 7-( 羥甲基 )-3- 甲氧基 -8- 甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
將(三丁基甲錫烷基)甲醇（1.844 g，5.74 mmol）、7-溴-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（1.03 g，3.83 mmol） （中間體 102 ）和Xphos Pd G2（0.452 g，0.57 mmol）在1,4-二㗁𠮿（40 mL）中之混合物在80°C下在N 2下攪拌過夜，得到深色混合物，LCMS指示接近完全轉化。在減壓下除去溶劑，將殘餘物在矽膠柱上純化（用0-20%甲醇的DCM溶液洗脫），將級分濃縮成黃色固體，藉由LCMS檢查固體，指示其不是很純，然後將產物在20 mL甲醇中漿化，藉由過濾收集固體，乾燥以產生純度為55%的呈黃色固體的產物（被30%起始材料和9.5%脫溴副產物污染）。
將以上獲得的固體裝入具有1,4-二㗁𠮿（40 mL）的乾燥燒瓶中，向燒瓶中添加900 mg (三丁基甲錫烷基)甲醇和300 mg xphos Pd G2，將混合物脫氣，然後在80°C下在N 2下攪拌過夜。在減壓下除去溶劑，將混合物在矽膠柱上純化（用0-20%甲醇的DCM溶液洗脫）以產生呈黃色固體的7-(羥甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（800 mg，95%）（ 中間體 103），藉由LCMS，純度為80%。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 2.32 (3H, s), 3.91 - 4.01 (3H, m), 4.56 (2H, d), 5.15 (1H, t), 7.27 (1H, d), 7.37 (1H, d), 11.57 (1H, br s)；(m/z) (ES +) [M+H] += 221。 中間體 104 ： 7-( 溴甲基 )-3- 甲氧基 -8- 甲基 -1H- 喹㗁啉 -2- 酮
在0°C下在N 2下將三乙基膦（294 µl，2.04 mmol）逐滴添加到7-(羥甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（300 mg，1.36 mmol）（ 中間體 103）和1,1,2,2-四溴-1,2-二氯乙烷（875 mg，2.11 mmol）在CH 2Cl 2（20 mL）中懸浮液中，然後將所得混合物在室溫下攪拌3.5 h，在減壓下除去溶劑，將殘餘物懸浮在醚（10 mL）中，過濾，將固體用醚（10 mL x 2）洗滌，然後將固體懸浮在水（20 mL）中，過濾，用水（5 mL x 3）洗滌，乾燥以產生呈淺黃色固體的7-(溴甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（0.250 g，64.8%）（ 中間體 104）。(m/z) (ES +) [M+H] += 285。 實例 57 ： 5-[4-[(2- 甲氧基 -5- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N,6- 二甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向N,6-二甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲醯胺，2HCl（83 mg，0.27 mmol）（ 中間體 33）和7-(溴甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（85 mg，0.27 mmol）（ 中間體 104）在乙腈（6 mL）中之懸浮液中添加DIPEA（236 µL，1.35 mmol），將所得混合物在70°C下攪拌2 h，得到澄清溶液，將混合物冷卻至室溫，得到懸浮液，藉由過濾收集固體，用水、乙腈洗滌，乾燥以產生呈白色固體的5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.064 g，54.3%）（ 實例 57）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 2.43 (3H, s), 2.49 (3H, s), 2.57 (4H, br s), 2.80 (3H, d), 2.91 (4H, br s), 3.60 (2H, s), 3.95 (3H, s), 7.18 (1H, d), 7.35 (1H, d), 7.46 (1H, d), 7.78 (1H, d), 8.40 (1H, q), 11.58 (1H, br s)；(m/z) (ES +) [M+H] += 437 實例 58 ： 6- 氟 -5-[4-[(2- 甲氧基 -5- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向6-氟-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲醯胺，2HCl（84 mg，0.27 mmol）（ 中間體 32）和7-(溴甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（85 mg，0.27 mmol）（ 中間體 104 ）在乙腈（6 mL）中之懸浮液中添加DIPEA（236 µL，1.35 mmol），將所得混合物在70°C下攪拌2 h，得到懸浮液，將混合物冷卻至室溫，藉由過濾收集固體，用水、乙腈洗滌，乾燥，將固體懸浮在乙腈中，過濾並且乾燥以產生呈米色固體的6-氟-5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.073 g，61.3%）（ 實例 58）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 2.42 (3H, s), 2.55 (4H, br s), 2.76 (3H, d), 3.14 (4H, br s), 3.58 (2H, s), 3.95 (3H, s), 7.17 (1H, br d), 7.35 (1H, br d), 7.50 - 7.63 (1H, m), 7.83 (1H, br d), 8.38 (1H, br d), 11.58 (1H, s)；(m/z) (ES +) [M+H] += 442。 中間體 106 ： 6- 溴 -5- 氟 - 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將硫酸（1.5 mL，28.14 mmol）緩慢添加到6-溴-5-氟吡啶甲酸（500 mg，2.27 mmol） （中間體 105 ）在MeOH（8 mL）中之混合物中。將混合物在室溫下繼續攪拌3 h，得到白色懸浮液。LCMS指示完全轉化，將混合物倒入飽和NaHCO 3水溶液中，用DCM（40 mL x 2）萃取，將有機層乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮以產生呈白色固體的6-溴-5-氟-吡啶-2-甲酸甲酯（532 mg，100%） （中間體 106 ），其無需進一步純化即可用於下一步驟。1H NMR (500 MHz, 氯仿-d) 4.01 (3H, s), 7.55 (1H, t), 8.15 (1H, dd)；(m/z) (ES +) [M+H] += 236。 中間體 107 ： 4-(2- 溴 -6- 甲氧基羰基 -3- 吡啶基 ) 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（8.21 g，44.06 mmol）、6-溴-5-氟-吡啶-2-甲酸甲酯（6.065 g，25.92 mmol） （中間體 106 ）和碳酸鉀（4.66 g，33.69 mmol）在DMF（60 mL）中之混合物在110°C下攪拌5小時，LCMS指示完全轉化。將混合物冷卻至室溫，用DCM和水稀釋，分離各層，將水層用DCM萃取兩次，將有機層合併，乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮，將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至50%乙酸乙酯洗脫，UV在221，310 nm處）以產生所需產物呈白色固體的4-(2-溴-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（7.68 g，74.1%）（ 中間體 107）。1H NMR (500 MHz, 氯仿-d) 1.51 (9H, s), 3.14 (4H, br t), 3.60 - 3.71 (4H, m), 3.99 (3H, s), 7.32 (1H, d), 8.08 (1H, d)；(m/z) (ES +) [M+H] += 402。 中間體 108 ： 4-[2- 溴 -6-( 甲基胺基甲醯基 )-3- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將密封管中的在甲胺（100 mL，19.16 mmol）（在乙醇中33%）中的4-(2-溴-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（7.67 g，19.16 mmol）（ 中間體 107）在60°C下攪拌4.5 h，LCMS指示完全轉化，將混合物冷卻至室溫，濃縮，將殘餘物溶解在DCM中，用飽和NH 4Cl溶液洗滌，乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮以產生呈白色固體的4-[2-溴-6-(甲基胺基甲醯基)-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（7.48 g，98%）（ 中間體 108）。1H NMR (500 MHz, 氯仿-d) 1.50 (9H, s), 3.02 (3H, d), 3.08 (4H, br t), 3.60 - 3.71 (4H, m), 7.36 (1H, d), 7.68 (1H, br d), 8.11 (1H, d)；(m/z) (ES +) [M+H] += 401。 中間體 109 ： 4-[6-( 甲基胺基甲醯基 )-2- 乙烯基 -3- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將4-[2-溴-6-(甲基胺基甲醯基)-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（1.344 g，3.37 mmol） （中間體 108 ）、三丁基(乙烯基)錫烷（1.174 g，3.70 mmol）和Xphos Pd G2（0.132 g，0.17 mmol）在1,4-二㗁𠮿（25 ml）中之混合物在100°C下在N 2下攪拌2.5 h，LCMS顯示完全轉化。將混合物用DCM稀釋，用飽和NH 4Cl洗滌，將有機層乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮，將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至80%乙酸乙酯洗脫，UV波長為226 nm，293 nm）得到呈白色固體的4-[6-(甲基胺基甲醯基)-2-乙烯基-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（0.961 g，82%） （中間體 109 ）。1H NMR (500 MHz, 氯仿-d) 1.50 (9H, s), 2.90 - 3.01 (4H, m), 3.05 (3H, d), 3.55 - 3.68 (4H, m), 5.54 (1H, dd), 6.42 (1H, dd), 7.10 (1H, dd), 7.39 (1H, d), 7.98 (1H, br d), 8.07 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 346.6, 348.5。 中間體 110 ： 4-[2- 甲醯基 -6-( 甲基胺基甲醯基 )-3- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將在H 2O中的四氧化鋨（0.0435 mL，6.00 µmol）添加到4-[6-(甲基胺基甲醯基)-2-乙烯基-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（960 mg，2.77 mmol） （中間體 109 ）、2,6-二甲基吡啶（646 µl，5.54 mmol）和高碘酸鈉（2371 mg，11.08 mmol）在THF（25 mL）/水（5 mL）/三級丁醇（2650 μL，27.71 mmol）中之溶液中並且在室溫下攪拌過夜，得到黃色懸浮液。LCMS和TLC指示完全轉化。將反應用水稀釋並且用乙酸乙酯萃取。濃縮後，將粗材料通過二氧化矽柱純化（用在己烷中的0至100%乙酸乙酯洗脫，UV在226 nm，310 nm處）得到呈黃色固體的4-[2-甲醯基-6-(甲基胺基甲醯基)-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（0.732 g，76%） （中間體 110 ）。1H NMR (500 MHz, 氯仿-d) 1.50 (9H, s), 3.07 (3H, d), 3.15 - 3.30 (4H, m), 3.63 - 3.79 (4H, m), 7.48 (1H, d), 7.85 (1H, br d), 8.28 (1H, d), 10.10 (1H, s)；(m/z) (ES +) [M+H] += 349。 中間體 111 ： 4-[2-( 二氟甲基 )-6-( 甲基胺基甲醯基 )-3- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將在CH 2Cl 2（10 mL）中的4-[2-甲醯基-6-(甲基胺基甲醯基)-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（730 mg，2.10 mmol） （中間體 110 ）冷卻至0°C，將在DCM（5 mL）中的DAST（692 μL，5.24 mmol）添加到混合物中，然後將所得混合物在室溫下攪拌4 h，TLC和LCMS指示完全轉化。將反應混合物逐滴用飽和NaHCO 3水溶液淬滅，用DCM萃取，將有機物乾燥（無水Na 2SO 4），過濾並且濃縮，將殘餘物在矽膠柱上純化（用在己烷中的0至100%乙酸乙酯洗脫，UV在254，293 nm處）以產生呈白色固體的4-[2-(二氟甲基)-6-(甲基胺基甲醯基)-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（0.666 g，86%） （中間體 111 ）。1H NMR (500 MHz, 氯仿-d) 1.50 (9H, s), 2.93 - 3.02 (4H, m), 3.05 (3H, d), 3.57 - 3.72 (4H, m), 6.99 (1H, t), 7.62 (1H, d), 7.92 (1H, br d), 8.27 (1H, d)；(m/z) (ES +) [M+H] += 371。 中間體 60 ： 6-( 二氟甲基 )-N- 甲基 -5- 哌 𠯤 -1- 基 - 吡啶 -2- 甲醯胺， 2HCl
將在二㗁𠮿中的HCl 4M（7 mL，28.00 mmol）添加到裝有4-[2-(二氟甲基)-6-(甲基胺基甲醯基)-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（665 mg，1.80 mmol） （中間體 111 ）和攪拌棒的燒瓶中，將混合物在室溫下攪拌1 h，得到黃色懸浮液。除去溶劑，將殘餘物用醚稀釋，藉由過濾收集固體，乾燥得到呈橙色固體的6-(二氟甲基)-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，2HCl（0.617 g,100%） （中間體 60 ）。(m/z) (ES +) [M+H] += 272。 實例 59 ： 6-( 二氟甲基 )-5-[4-[(2- 甲氧基 -5- 甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
向6-(二氟甲基)-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，2HCl（87 mg，0.25 mmol）（ 中間體 60）和7-(溴甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（80 mg，0.25 mmol）（ 中間體 104）在乙腈（6 mL）中之懸浮液中添加DIPEA（222 µL，1.27 mmol），將所得混合物在70°C下攪拌2 h，得到澄清溶液，將混合物冷卻至室溫，得到懸浮液，藉由過濾收集固體，用乙腈、水洗滌，乾燥以產生呈白色固體的6-(二氟甲基)-5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.070 g，58.3%） （實例 59 ）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 2.43 (3H, s), 2.59 (4H, br s), 2.83 (3H, br d), 2.98 (4H, br s), 3.60 (2H, s), 3.95 (3H, s), 6.92 - 7.29 (2H, m), 7.35 (1H, d), 7.85 (1H, br d), 8.08 (1H, d), 8.38 (1H, br d), 11.58 (1H, br s)；((m/z) (ES +) [M+H] += 473。 實例 60 ： 6-( 二氟甲基 )-5-[4-[(2,5- 二甲基 -3- 側氧基 -4H- 喹㗁啉 -6- 基 ) 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-N- 甲基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將7-(溴甲基)-3,8-二甲基-1H-喹㗁啉-2-酮（196 mg，0.73 mmol） （中間體 8 ）、6-(二氟甲基)-N-甲基-的混合物5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺, 2HCl（252 mg，0.73 mmol） （中間體 60 ）和Et 3N（0.614 mL，4.41 mmol）在乙腈（25 mL）中混合物在70°C下攪拌2 h得到澄清溶液，LCMS指示完全轉化。將混合物冷卻至室溫過夜。從混合物中結晶出固體，藉由過濾收集固體，用乙腈、水洗滌，乾燥得到產物的第1部分141 mg，將濾液濃縮，在逆相吉爾森上純化（用5%至80% ACN/水/0.1% TFA洗脫）得到作為TFA鹽的產物的第二部分92 mg。總共：呈灰白色固體的6-(二氟甲基)-5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（0.233 g，64.0%）（ 實例 60）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 2.40 (3H, s), 2.43 (3H, s), 2.60 (4H, br s), 2.83 (3H, d), 2.98 (4H, br d), 3.63 (2H, s), 6.95 - 7.22 (1H, m), 7.23 - 7.29 (1H, m), 7.51 (1H, d), 7.85 (1H, d), 8.08 (1H, d), 8.38 (1H, br d), 11.54 (1H, br s)；(m/z) (ES +) [M+H] += 457。 中間體 113 ： 6- 氯 -5-( 哌 𠯤 -1- 基 ) 吡啶甲酸甲酯
將哌𠯤（1.0 g，11.61 mmol）添加到在MeCN（30 mL）中的6-氯-5-氟吡啶甲酸甲酯（ 中間體 112，1.0 g，5.28 mmol）中。將所得混合物在80°C下攪拌18小時。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由逆相層析法純化，洗脫梯度為在水（0.1% NH 4HCO 3）中的5%至60% MeCN。將純級分蒸發至乾燥以得到呈紅色油狀物的6-氯-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲酸甲酯（ 中間體 113 ，1.28 g，95%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 2.81 - 2.91 (4H, m), 3.04 - 3.08 (4H, m), 3.85 (3H, s), 7.61 (1H, d), 8.00 (1H, d) (未顯示NH質子)；m/z (ES +) [M+H] += 256。 中間體 30 ： 6- 氯 -N- 甲基 -5-( 哌 𠯤 -1- 基 ) 吡啶醯胺
將甲胺在THF（40 mL，80.00 mmol）中的2 M溶液添加到6-氯-5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲酸甲酯（ 中間體 113 ，1.26 g，4.93 mmol）中。將所得混合物在80°C下攪拌18小時。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由逆相層析法純化，洗脫梯度為在水（0.1% NH 4HCO 3）中的5%至60% MeCN。將純級分蒸發至乾燥以得到呈淡黃色油狀物的6-氯-N-甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺（ 中間體 30 ，1.12 g，89%）。 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 2.79 (3H, d), 2.85 - 2.89 (4H, m), 2.97 - 3.02 (4H, m), 7.63 (1H, d), 7.94 (1H, d), 8.45 (1H, q) (哌𠯤-未顯示NH質子)；m/z (ES +) [M+H] += 255。 中間體 114 ： 4-[2- 氟 -6-( 甲基胺基甲醯基 )-3- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將在甲胺（120 mL，36.80 mmol，33 wt%，在乙醇中）中的4-(2-氟-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 11 ，12.49 g，36.80 mmol）在室溫下攪拌24 h（密封管）。在減壓下除去溶劑。將殘餘物溶解在DCM中並且通過矽膠床過濾並且用乙酸乙酯洗滌。將濾液濃縮並且在真空下乾燥以得到呈黃色固體的4-[2-氟-6-(甲基胺基甲醯基)-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 114，12.45 g，100%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 1.42 (9H, s), 2.77 (3H, d), 3.04 - 3.16 (4H, m), 3.43 - 3.56 (4H, m), 7.59 (1H, dd), 7.80 - 7.93 (1H, m), 8.41 (1H, q)；m/z (ES +) [M+H] += 340。 中間體 32 ： 6- 氟 -N- 甲基 -5- 哌 𠯤 -1- 基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在0°C下，將HCl（在二㗁𠮿中4M，100 ml，400.00 mmol）添加到4-[2-氟-6-(甲基胺基甲醯基)-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 114 ，12.5 g，36.94 mmol）在1,4-二㗁𠮿（50 mL）中之溶液中。將反應攪拌5 h，在這期間將溫度溫熱至室溫以得到黃色懸浮液。將懸浮液用醚稀釋，濾出固體並且用醚洗滌。將此固體在真空下乾燥以提供呈淺黃色固體的6-氟-N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，2HCl（ 中間體 32，11.42 g，99%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) δppm 2.8 (d, J=4.6 Hz, 3 H) 3.3 (br s, 4 H) 3.4 (br d, J=4.4 Hz, 4 H) 7.6 - 7.7 (m, 1 H) 7.9 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 8.4 (br d, J=4.4 Hz, 1 H) 9.0 - 9.3 (m, 2 H)；m/z (ES +) [M+H] += 239 中間體 115 ： 5- 溴 -N,6- 二甲基吡啶醯胺
將甲胺在THF（20 mL，40.00 mmol）中的2 M溶液添加到5-溴-6-甲基吡啶甲酸甲酯（ 中間體 14，2.0 g，8.69 mmol）中，並且將所得混合物在80°C下攪拌18小時。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由逆相層析法純化，洗脫梯度為在水（0.1% NH 4HCO 3）中的5%至80% MeOH。將純級分蒸發至乾燥以得到呈淡黃色固體的5-溴-N,6-二甲基吡啶醯胺（ 中間體 115，1.5 g，75%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 2.65 (3H, s), 2.82 (3H, d), 7.75 (1H, d), 8.17 (1H, d), 8.57 - 8.76 (1H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 229 中間體 116 ： 4-(2- 甲基 -6-( 甲基胺基甲醯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
在氮氣下將5-溴-N,6-二甲基吡啶醯胺（ 中間體 115 ，1.0 g，4.37 mmol）添加到在甲苯（20 mL）中的哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（0.894 g，4.80 mmol）、BINAP（0.272 g，0.44 mmol）、Pd(OAc) 2（0.098 g，0.44 mmol）和Cs 2CO 3（3.56 g，10.91 mmol）中。將所得混合物在80°C下攪拌16小時。在減壓下除去溶劑。將粗產物藉由逆相層析法純化，洗脫梯度為水（0.4% HCO 2H）中的5%至30% MeOH，。將純級分蒸發至乾燥以得到呈棕色固體的4-(2-甲基-6-(甲基胺基甲醯基)吡啶-3-基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 116 ，1.2 g，82%）。 1H NMR (300 MHz, CD 3OD) δ 1.50 (9H, s), 2.58 (3H, s), 2.92 - 3.00 (7H, m), 3.62 (4H, m), 7.50 (1H, d), 7.88 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 335。 中間體 33 ： N,6- 二甲基 -5-( 哌 𠯤 -1- 基 ) 吡啶甲醯胺
將4-(2-甲基-6-(甲基胺基甲醯基)吡啶-3-基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 115 ，1.18 g，3.53 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿（10 mL，329.15 mmol）中的4 M HCl溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌1小時。藉由過濾收集沈澱，用石油醚（5 mL x 2）、Et 2O（5 mL x 2）洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈黃色固體的N,6-二甲基-5-(哌𠯤-1-基)吡啶醯胺（ 中間體 33 ，0.77 g，81%）。 1H NMR (300 MHz, CD 3OD) δ 2.86 (3H, s), 3.02 (3H, s), 3.42 - 3.54 (8H, m), 8.29 (2H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 235。 中間體 117 ： 4-(6- 甲氧基羰基 -3- 吡啶基 ) 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將Ruphos Pd G3（4.07 g，4.86 mmol）添加到5-溴吡啶-2-甲酸甲酯（ 中間體 9，30 g，138.87 mmol）、哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（27.2 g，145.81 mmol）、Cs 2CO 3（90 g，277.73 mmol）在1,4-二㗁𠮿（200 mL）中之脫氣混合物中，並且將混合物在110°C下在N 2氣氛下攪拌6 h。然後將混合物冷卻至室溫，用水稀釋，用乙酸乙酯萃取（150 ml x 3）。將合併的有機層經無水Na 2SO 4乾燥並且過濾。向此濾液中添加3-(二伸乙基三胺基)丙基官能化的矽膠（12 g，1.3 mmol/g負載量）並且將混合物在室溫下攪拌1 h。將混合物過濾，並且將濾液濃縮至約100 mL。濾出結晶的黃色固體，用醚洗滌並且在真空下乾燥以得到呈黃色固體的4-(6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 117 ，26.36 g，82 mmol，59.1%）。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 1.50 (9H, s), 3.31 - 3.42 (4H, m), 3.56 - 3.68 (4H, m), 3.98 (3H, s), 8.04 (1H, d), 8.37 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 322。 中間體 118 ： 4-[6-( 甲基胺基甲醯基 )-3- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
將甲胺（100 mL，1155.26 mmol，40%，在水中）添加到4-(6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 117 ，36 g，112.02 mmol）在MeOH（100 mL）中之溶液中，並且將反應在室溫下攪拌4 h以得到白色懸浮液。將混合物濃縮，將殘餘物在飽和NH 4Cl溶液與DCM之間分配，分離各層。將水層用DCM萃取，將有機層合併，用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾並且濃縮以得到呈黃色固體的4-[6-(甲基胺基甲醯基)-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 118 ，35.9 g，100%）。1H NMR (500 MHz, 氯仿- d) 1.49 (9H, s), 3.02 (3H, d), 3.26 - 3.35 (4H, m), 3.58 - 3.67 (4H, m), 7.23 (1H, dd), 7.81 (1H, br d), 8.07 (1H, d), 8.16 (1H, d)；m/z (ES +) [M+H] += 321。 中間體 119 ： 5-( 哌 𠯤 -1- 基 ) 吡啶甲酸甲酯
在0°C下將在二㗁𠮿中的HCl 4M（20 ml，576.01 mmol）添加到4-(6-(甲氧基羰基)吡啶-3-基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 117, 1.55 g，4.82 mmol）在MeOH（2 mL）中之混合物中，將反應在室溫下攪拌2h，得到懸浮液，LCMS指示完全轉化，將混合物用醚（約80 ml）稀釋，藉由過濾收集固體，用醚洗滌，乾燥以產生呈黃色固體的5-(哌𠯤-1-基)吡啶甲酸甲酯（ 中間體 119）（1.384 g，98%）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 3.21 (4H, br s), 3.66 (4H, br d), 3.83 (3H, s), 7.43 - 7.55 (1H, m), 7.95 (1H, br d), 8.43 (1H, br s), 9.49 (2H, br s)；(m/z) (ES+) [M+H]+ = 223.0。 中間體 31 ： 甲酸酯 N- 甲基 -5- 哌 𠯤 -1- 基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
將HCl（在二㗁𠮿中4M，150 mL，600.00 mmol）添加到4-[6-(甲基胺基甲醯基)-3-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯（ 中間體 118 ，35.9 g，112.05 mmol）在MeOH（50 mL）中之懸浮液中，並且將所得橙色懸浮液在室溫下攪拌4 h。在減壓下除去約80 mL溶劑，並且將混合物用醚和己烷（200 ml，1/1）稀釋。藉由過濾收集固體，用己烷洗滌，乾燥並且在真空下乾燥以提供呈黃色固體的N-甲基-5-哌𠯤-1-基-吡啶-2-甲醯胺，2HCl鹽（ 中間體 31，37.0 g，100%）。1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) 2.79 (3H, d), 3.22 (4H, br s), 3.53 - 3.67 (4H, m), 7.51 (1H, dd), 7.91 (1H, d), 8.33 (1H, d), 8.50 (1H, br s), 9.19 - 9.49 (2H, m)；m/z (ES +) [M+H] += 221。 實例 61 ：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺結晶形式B（無水形式）的製備 方法1
將43 mg（0.10 mmol）6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（來自例如實例20）懸浮在1.0 ml MeOH中並且添加0.11 ml 1M甲磺酸（MSA）水溶液以獲得澄清溶液。向溶液中添加0.11 ml 1N NaOH水溶液。NaOH溶液添加完後，白色固體開始沈澱。將漿料在室溫下攪拌1天。過濾36 mg白色固體並且在空氣中乾燥。XRPD顯示固體係純6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺形式B。 方法2
將吡啶（93.5 g）添加到純6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺甲磺酸酯（4.67 kg，藉由實例63的方法2製備）在75°C ± 5°C的水（47.9 kg）和乙醇（38.0 kg）中之溶液中，然後添加根據方法1製備的6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺形式B種子（4.7 g）。將漿料在75°C±5°C下攪拌40 min，然後經3 h 40 min逐漸添加在50:50 v:v水:乙醇（4.2 g）中的吡啶（651 g）溶液。將漿料在75°C±5°C下攪拌50 min，然後經3 h 50 min逐漸添加在50:50 v:v水:乙醇（4.1 kg）中的4-甲基𠰌啉（900 g）溶液。將漿料在75°C ± 5°C下攪拌1 h 10 min，經4 h 50 min冷卻至25°C ± 5°C，在25°C ± 5°C下攪拌15 h，然後過濾。將所得固體用50:50 v:v水:乙醇（12.5 kg x 2）洗滌兩次，然後在25°C與50°C之間在真空下乾燥1天以得到純6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺形式B（3.54 kg），產率為93%。
將來自方法1的形式B藉由XRPD進行分析並且將結果如下列表（表1）並且在 圖 1中示出。 [ 表 1] .形式B的XRPD峰
角度（ 2 θ± 0.2° ） 強度（ % ）
18.2 100.0
9.6 86.7
9.1 80.7
18.7 55.8
12.7 24.1
8.5 23.9
10.0 15.6
20.1 14.8
21.7 13.9
23.2 12.3
12.4 12.2
16.1 9.6
14.3 9.2
6.2 8.9
15.6 7.7
27.4 6.9
26.4 6.6
29.7 6.2
27.1 6.0
25.0 5.0
形式B的特徵在於提供使用CuKα輻射測量的以下2 θ值中的至少一個：6.2、14.3、和15.6°。
將形式B（來自方法1）藉由熱技術進行分析。DSC分析表明形式B具有在275°C開始並且峰在276°C處的熔點。TGA表明形式B展現出在從約25°C加熱至約100°C後約0.2%的質量損失。形式B的代表性DSC/TGA熱譜圖示出在 圖 2中。
實例 62 ：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺結晶形式D（無水形式）的製備。
將5-6 mg 6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（實例20）溶解在MeOH/DCM/H 2O（0.50 ml/0.50 ml/0.20 ml）的混合溶劑中，將澄清溶液在環境條件下緩慢蒸發以獲得白色固體。XRPD顯示所得白色固體係6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺形式D。
將形式D藉由XRPD進行分析並且將結果如下列表（表2）並且示出在 圖 3中。 [ 表 2] .形式D的XRPD峰
角度（ 2 θ± 0.2° ） 強度（ % ）
9.6 100.0
18.4 43.0
13.1 32.0
19.9 17.9
27.1 17.3
9.2 15.9
21.7 14.0
23.4 11.2
24.5 9.6
19.3 8.8
16.8 8.7
22.2 8.3
16.3 8.0
18.8 7.6
25.4 6.9
10.2 6.6
33.0 6.3
22.5 5.8
12.6 5.7
7.9 4.5
形式D的特徵在於提供使用CuKα輻射測量的以下2 θ值中的至少一個：7.9°、13.1°和16.3°。
形式D的單晶從6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺的DMF溶液（或DMF/H 2O）的蒸發獲得。單晶結構分析證實形式D係無水形式。6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺形式D的分子結構示出在 圖 4中。晶體學數據：空間群單斜晶系 P2 1/ c，晶胞尺寸： a= 17.4559(8) Å， b= 5.0647(2) Å， c= 22.564(1) Å， β= 92.609(1)°， V= 1992.8(2) Å 3。 實例 63 ：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺MSA結晶鹽形式C（無水形式）的製備。 方法1
將427 mg 6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（實例20）懸浮在8.0 ml MeOH中。向懸浮液中添加1.1 ml 1.0 M MSA水溶液（1.1 mmol），獲得澄清溶液。過濾所得溶液，並且除去澄清溶液的溶劑。將所得固體懸浮在1.0 ml EtOH和2.0 ml THF中，以獲得漿料。將漿料在室溫下攪拌1天。藉由過濾收集固體並且風乾。獲得452 mg灰白色固體。XRD顯示獲得6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺MSA鹽形式C。 方法2
在25°C下將甲磺酸（16.8 g）添加到6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺（80.8 g，92.8% w/w）在4:1 v:v THF:乙醇（750 mL）中之攪拌懸浮液中。將所得懸浮液在25°C下攪拌16 h並且然後過濾。將固體用4 : 1 v : v THF : 乙醇（300 mL）洗滌並且然後在35°C下在真空下乾燥以得到6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺甲磺酸酯形式C（90.3 g），產率為98%。
將來自方法1的MSA-形式C藉由XRPD進行分析並且將結果如下列表（表3）並且在 圖 5中示出。 [ 表 3] .針對MSA-形式C的XRPD峰
角度（ 2 θ± 0.2° ） 強度（ % ）
17.5 100.0
24.6 95.7
25.4 75.8
16.0 73.8
22.5 72.6
19.4 72.5
24.3 71.6
13.6 65.6
19.0 61.3
20.4 53.3
21.5 43.4
15.5 43.2
22.0 40.2
28.8 35.8
14.6 34.2
26.9 29.7
21.0 29.4
18.3 29.1
31.4 26.8
16.8 26.0
藉由熱技術分析從方法1獲得的MSA-形式C。DSC分析表明，MSA-形式C在254°C開始並且峰在258°C處的溫度下開始熔化和分解。TGA表明，MSA-形式C在從約25°C加熱到約100°C後展現出約0.3%的質量損失。MSA-形式C的代表性DSC/TGA熱譜圖示出在 圖 6中。 生物學測定
可以採用以下測試程序來確定本文所述化合物的抑制特性。 PARP螢光各向異性結合測定
將重組全帶長6HIS標籤的PARP1蛋白用50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X100、10 mM MgCl 2、150 mM NaCl稀釋至6 nM，並且用等體積的2 nM螢光探針（用50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X100、10 mM MgCl 2、150 mM NaCl稀釋）孵育四小時。探針的最終DMSO濃度保持低於1%（v/v）。
將重組全長PARP2蛋白用50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X100、10 mM MgCl 2、150 mM NaCl稀釋至6 nM，並且用等體積的2 nM螢光探針（用50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X100、10 mM MgCl 2、150 mM NaCl稀釋）孵育四小時。探針的最終DMSO濃度保持低於1%（v/v）。
將重組全長PARP3蛋白用50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X100、10 mM MgCl 2、150 mM NaCl稀釋至100 nM，並且用等體積的6 nM螢光探針（用50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X100、10 mM MgCl 2、150 mM NaCl稀釋）孵育四小時。探針的最終DMSO濃度保持低於1%（v/v）。
將重組PARP5a結合結構域用50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X100、10 mM MgCl 2、150 mM NaCl稀釋至160 nM，並且用等體積的6 nM螢光探針（用50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X100、10 mM MgCl 2、150 mM NaCl稀釋）孵育四小時。探針的最終DMSO濃度保持低於1%（v/v）。
將重組全長GST標記的PARP6蛋白用50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X100、10 mM MgCl 2、150 mM NaCl稀釋至160 nM，並且用等體積的6 nM螢光探針（用50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X100、10 mM MgCl 2、150 mM NaCl稀釋）孵育四小時。探針的最終DMSO濃度保持低於1%（v/v）。
在存在測試化合物或溶劑對照的情況下，使用BMG Pherastar FSX ©測量與蛋白質結合時探針的螢光各向異性，並且確定對各向異性的影響。計算不同測試化合物濃度的%抑制值，並且將其擬合到四參數對數圖以確定IC 50值。必要時，化合物 K i可以使用Anal Biochem. [分析生物化學] 1980年9月1日;107(1):220-39定義的Munson Rodbard方程由IC 50值確定，並且其基於與相關PARP蛋白結合的探針的已知 K D。 PARP增殖測定（7天的化合物給藥）
在完全培養基中收穫密度分別為5000個細胞/ml和2.5E4個細胞/ml的DLD1細胞和BRCA2 (-/-) DLD1細胞，使用Multidrop Combi將它們以40 µL/孔接種到384孔板（格瑞納公司（Greiner），克雷姆斯明斯特（Kremsmunster），奧地利；781090）中，然後在37°C、5% CO 2下孵育過夜。第二天（第1天），使用Multidrop Combi將sytox綠（sytox green）（5 ul，2 uM）和皂素（10 ul，0.25%儲備液）添加到第0天的板中，使用黑色膠蓋密封板，並且在室溫下孵育 ＞ 3 h。使用裝有4x物鏡的Cell Insight（賽默飛世爾公司（Thermo Fisher））對細胞成像。使用Echo 555添加測試化合物，並且將其置於維持在37°C、5% CO 2下的培養箱中，並且孵育7天。在第8天，向板中添加sytox綠（5 ul，2 uM），並且然後添加皂素（10 ul，0.25%儲備液），使用黑色膠蓋密封板並且在室溫下孵育 ＞ 3 h。使用4x物鏡讀取Cell Insight上的所有細胞。藉由評估針對第0天和第8天的板的Cell Insight輸出的總細胞數，確定Genedata中的增殖速率。 體外人類運輸蛋白外排
將表現MDR1和BCRP的MDCKII細胞以形成融合細胞單層的密度接種到96孔Transwell插入系統中的聚乙烯膜上。測試和參考化合物用轉運緩衝液（HBSS HEPES pH 7.4）稀釋至1或0.1 μM的濃度。有機溶劑的最終體積百分比小於1%。在37°C和5% CO2和95%相對濕度下孵育90分鐘後確定測試化合物從A到B方向和從B到A方向的滲透。在孵育結束時，從頂端側和基底外側取樣，並且然後用含有內標的冷乙腈沈澱。4000 rpm離心後，將上清液用0.1%甲酸水溶液稀釋並且藉由LC-MS/MS定量。藉由使用標記螢光黃來確認細胞單層的完整性。
使用以下等式計算滲透係數（1 × 10-6 cm/s） Papp =(dCr/dt)×Vr/(A×C0) (1) 使用以下等式計算外排比 外排比 = Papp(B比A)/Papp(A比B) (2) 其中dCr/dt係接收室中化合物的累積濃度作為時間的函數（單位為μM/s）；Vr係接收室中的溶液體積（頂端側0.1 ml和基底外側0.3 ml）；A係轉運表面積，即單層面積為0.11 cm2；並且C0係供體室中的初始濃度（單位為μM）。 血漿中未結合分數的確定
使用RED設備確定未結合分數。
將化合物製備為在DMSO中的10 mM溶液。藉由混合多達9種測試化合物（每種4 uL）和1種對照（uL）製備1 mM工作儲備液。如果包含的測試化合物少於9種，則添加空白DMSO的體積以補足40 uL的體積。
將冷凍血漿在37°C水浴中解凍。然後將血漿以4,000 rpm離心2分鐘以去除凝塊並且將上清液收集到新鮮管中。檢查血漿的pH，並且僅在pH 7至pH 8範圍內時使用。將每個盒的3 μL工作溶液添加到597 μL空白血漿中，並其以1000 rpm渦旋5分鐘。有機溶劑的最終體積百分比為0.5%，並且測試化合物的最終濃度為5 μM。立即將50 μL加標血漿懸浮液轉移到96孔板中，充當T=0對照樣本。樣本與孵育後的樣本相同地處理。剩餘的血漿在開始透析前保持在37°C。
將插入物開口端朝上放置到底板的孔中。將300 μL加標血漿樣本添加到樣本室中，由紅色環指示。向緩衝室中添加500 μL磷酸鹽緩衝液（pH 7.4）。用透氣蓋蓋住裝置，並且在CO2培養箱中的定軌振盪器上以300 rpm用5% CO2在37°C下孵育18小時。在孵育結束時，取下蓋，分別從緩衝液和血漿室兩者中移液50 μL透析後樣本到分開的96孔板中進行分析。
藉由向緩衝液樣本中添加50 μL空白大鼠血漿和向收集的血漿樣本中添加等體積的PBS並且渦旋混合，對樣本進行基質匹配。添加400 μL含有適當內標（IS）的乙腈以沈澱蛋白質並且釋放化合物，並且藉由渦旋板10分鐘然後以4,000 rpm離心30分鐘來混合。將250 μL上清液轉移到新的96孔板中並且再次離心（4,000 rpm，30分鐘）。然後將100 μL上清液轉移到新的96孔板中，並且與100 μL蒸餾水藉由以1,000 rpm的轉速渦旋5分鐘混合到每個樣本中。藉由LC-MS/MS分析樣本，並且相對於由加標空白血漿產生的校準曲線確定藥物濃度，典型範圍為1-7500 nM。
未結合%確定為未結合% = (緩衝室濃度/血漿室濃度) × 100%。未結合分數 = 未結合%/100。 腦切片中未結合分數的確定
用於確定腦切片中未結合體積之方法的原理先前已發表（Development of a High-Throughput Brain Slice Method for Studying Drug Distribution in the Central Nervous System [開發用於研究中樞神經系統藥物分佈的高通量腦切片方法]；Fridén等人; Drug Metabolism and Disposition [藥物代謝和處置], 2009, 37 (6) 1226-1233）。簡言之：
在DMSO中製備濃度為10 mM的化合物儲備溶液。藉由混合多達9種測試化合物（每種4 uL）和1種對照（4 uL）製備1 mM工作儲備液。如果包含的測試化合物少於9種，則添加空白DMSO以補足體積至40 uL。在實驗當天，將4 ul在40 mL ECF緩衝液中稀釋以得到每種測試化合物的100 nM溶液，然後在孵育開始前將其預溫熱至37°C。
為了製備腦切片，藉由吸入異氟醚對重約300 g的大鼠進行終末麻醉，小心地取出腦並且浸入冰冷的含氧ECF緩衝液中。將大鼠腦轉移到含有冰冷、供應O2的ECF緩衝液的盤中，並且在黏在微型切片機的托盤上之前用剃刀修剪，腦被放置在托盤中央，背部剖切表面朝下。添加冰冷的ECF緩衝液以硬化膠黏劑並且潤濕腦。將托盤放置在微切片機中，並且使用合適的切割速度，切割100-400 µm的切片，直至出現紋狀體區域。每個腦四到六個，300 µm厚，紋狀體區域的冠狀切片被切割並且放置在冰冷的供應O2的緩衝液中直到孵育。將六個切片轉移到含有40 mL預熱（37°C）盒式混合物的孵育托盤中。從取出腦一直到切片進入雞尾酒式混合物的時間最長為20分鐘。孵育盤蓋上透氣蓋，放置在37°C水浴中，泵入O2，以45 rpm的振盪頻率孵育5 h。
孵育前，將200 μL未孵育的盒溶液保存為T = 0樣本。然後將200 µL與200 µL空白腦勻漿在ECF緩衝液（4體積（w/v）中混合。孵育後測量並且記錄盒溶液中的pH值，並且pH值必須高於7.3。將盒溶液表面的200 µL轉移到含有在ECF緩衝液中的200 µL空白腦勻漿（4體積（w/v））的管中。每個腦切片在濾紙上乾燥並且稱重在2 mL eppendorf管中。添加9體積（w/v）的ECF緩衝液後，將切片用超音波儀勻漿。如下沈澱和稀釋樣本。
將來自每個樣本的50 µL等分試樣和來自每個盒溶液（與空白勻漿混合）的3 x 50 µL轉移到0.6 mL離心管中。將樣本用200 µL含有內標的冰冷乙腈沈澱，並且以2,000 rpm渦旋3分鐘，然後在4°C下以14000 rpm離心15分鐘。將100 µL上清液轉移到新的96孔板中進行分析，並且向每個樣本中添加100 µL蒸餾水，並且將板以1000 rpm搖動2分鐘，藉由LC-MS/MS進行分析。
然後將混合切片樣本分兩步進一步稀釋，10倍和100倍，雙空白樣本用150 µL空白腦勻漿在ECF緩衝液（4體積（w/v））中製備，轉移到含有150 µL ECF緩衝液的1.5 mL離心管中，以2,000 rpm渦旋2分鐘。將樣本用1200 µL冰冷乙腈沈澱，並且在2,000 rpm下渦旋3分鐘，然後在4°C下在14000 rpm下離心15分鐘。然後將100 µL上清液轉移到新的96孔板中進行分析。向每個樣本中添加100 µL蒸餾水以獲得雙空白樣本。
未結合腦體積（V u, 腦）計算為V u=(C 切片- V 0* C ECF)/(1-V 0)*C ECF
其中C 切片、C ECF和V 0分別是切片中的藥物量、ECF中的藥物濃度（代表腦ECF中的藥物濃度，即游離濃度）和腦切片的水附著（0.0931）。 腦中的未結合分數f u, 腦=1/V u, 腦大鼠中Kpuu的確定
血漿中總/未結合藥物與腦中總/未結合藥物的比率（Kp/Kpuu）如下確定。
將化合物在1 : 1 : 1四甘醇 : 二甲基乙醯胺 : 水中以各0.5 mM的濃度配製為混合物，並且經由以2 　mol/kg/h以4 mL/kg的體積靜脈輸注投與於Han Wistar大鼠。4 h後處死動物，並且收集腦和血液樣本。由血液製備血漿，並且所有樣本均在-20°C下冷凍保存直至分析。收集後，將腦樣本在純化水中以1 : 3（w/v）的比率勻漿，並且在-20°C下冷凍儲存直至分析。
藉由蛋白質沈澱分析血漿和腦樣本，然後進行LC-MS/MS，並且根據藉由用適當濃度範圍內的藥物加標空白大鼠血漿或腦勻漿產生的校準曲線確定濃度。藉由從總腦濃度中減去0.8%的血漿濃度來校正殘留血液的腦濃度。
然後如下計算Kp：Kp = ((4 * [腦勻漿]) - (0.008 * [血漿]))/[血漿]
然後如下計算Kpuu：Kpuu = Kp * (腦切片中的未結合分數/血漿中的未結合分數) 生物學數據
實例 編號 PARP1 IC50（µM） PARP2 IC50（µM） PARP3 IC50（µM） PARP5a IC50（µM） PARP6 IC50（µM） hERG IC50（µM） BRCA2 -/- DLD-1增殖7 d IC50（µM） WT DLD-1增殖7 d IC50（µM） MDCK-MDR1- BCRP外排比 大鼠Kpuu
1 0.004 ＞70 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.014 24 0.7 0.07
2 0.011 15 ＞40 0.734
3 0.003 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.008 25 1.3
4 0.005 ＞83 78 ＞100 ＞100 ＞40 0.081 ＞14 0.8 0.13
5 0.005 ＞63 2.89
6 0.004 ＞100
7 0.006 58 8.43 ＞30
8 0.004 ＞66 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.012 ＞7.9
9 0.004 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.01 ＞10 0.4
10 0.013 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 ＞30.0 ＞30
11 0.003 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.009 ＞30
12 0.015 85 ＞100 ＞100 ＞40 0.008 4.2
13 0.009 ＞100 62 ＞100 ＞100 ＞40 0.019 22 3.0
14 0.013 ＞83 52 ＞100 ＞100 ＞40 0.015 3.7
15 0.012 ＞100 43 ＞100 ＞100 ＞38 0.014 3.7
16 0.01 ＞100 ＞100 ＞29 ＞100 ＞40 3.62 ＞30
17 0.006 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 1.05 ＞10
18 0.005 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 14 4.33 21
19 0.013 40 ＞40 0.006 2.4
20 ＜0.005 ＞93 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.008 ＞30 1.1 0.27
21 0.007 ＞100 5.8 ＞100 ＞100 ＞40 1.42 1.6
22 0.006 87
23 0.005 ＞67 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.003 ＞30 0.8 0.62
24 0.006 ＞81 ＞100 ＞100 ＞100 ＞36 0.003 ＞30 1.1
25 0.005 ＞100 0.297
26 0.005 88
27 0.004 ＞64 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.006 6.3 0.8 0.43
28 0.005 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞38 0.004 0.8
29 0.015 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.005 ＞10 0.7 0.33
30 0.006 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.003 ＞30 1.8
31 0.007 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.007 ＞30 1.6 0.19
32 0.007 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 1.08 23
33 0.167 ＞100 ＞30.0
34 0.026 ＞100 29 8.44
35 0.03 ＞100 10.3 ＞30
36 0.022 ＞100 16.2
37 0.026 57 0.01 5.0
38 0.012 21 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.547
39 0.006 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.008 1.9
40 0.011 ＞100 ＞100 13 ＞100 ＞40 0.007 2.0
41 0.005 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.007 2.4
42 0.005 ＞88 0.006
43 0.005 ＞100 0.01
44 0.128 ＞100 ＞30.0
45 0.006 ＞100 0.006 1.5
46 0.01 ＞100 0.013
47 0.076 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.058
48 0.039 26 ＞100 ＞100 ＞100 ＞40 0.018 27 8.8
49 0.043 11 ＞29 ＞100 ＞100 ＞40 0.041
50 0.060 35 ＞40 0.136
51 0.006 1.2   
52 0.085 3.8   
53 0.026 ＞100   
54 0.111 ＞100   
55 0.005 ＞100   
56 0.008 ＞100   
57 0.011 ＞100   
58 0.008 ＞100   
59 0.006 2.1   
60 0.023 ＞100   
[ 表 4] 其他材料和方法 細胞系
為了評價與護理標準化療替莫唑胺（TMZ）、電離輻射（IR）和新出現的化療VAL-083組合的本文所述PARP抑制劑的活性和效力，測定U87、SJG2和BT245神經膠質母細胞瘤細胞。親本U87細胞系從位於英國奧爾德利公園（Alderley Park）的阿斯利康全球細胞庫（AstraZeneca Global Cell Bank）獲得，並且異檸檬酸脫氫酶1突變體細胞系（IDH1mt R132H）從ATCC獲得許可。SJ-G2（ATRX突變體）和BT245（H3K27M突變體）細胞系從加拿大蒙特利爾QC H4A 3J1麥吉爾大學健康中心研究所（Research Institute of the McGill University Health Centre）獲得。在SJG2細胞系中誘導IDH1R132突變以產生等基因對（SJG2 IDH1mt和SJG2 IDH1wt）。 組合測定 - PARP 抑制劑與替莫唑胺（ TMZ ）或 VAL-083
為了評價實例20中產生的PARP抑制劑（6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺；下文稱為化合物 20）與TMZ或VAL-083的組合活性，在U87等基因對中使用核計數終點測定，並且對於SJ-G2等基因對使用CellTiter-Glo（CTG）終點。在此，將細胞以低密度（500個細胞/孔）接種在96孔板中，並且暴露於化合物 20持續對應於超過4-5個複製細胞週期（7-8）天的時間。細胞附著後，用自動數字D300 HP分配器（Tecan）將板用PARP抑制劑預處理一小時，此後自動分配TMZ或VAL-083。從溶解在DMSO中的化合物儲備液（PARP抑制劑10 mM儲備液、TMZ 100 mM儲備液和VAL-083 100 mM儲備液）中以指示的滴定稀釋度添加藥物，其中在每個板中一式兩份地測試每種濃度。DMSO用作媒介物對照。選擇測試的濃度範圍以獲得在等基因對中的最佳PARP抑制劑、TMZ或VAL-083活性，並且以多個劑量評估組合。將板在37°C、5% CO 2下孵育指示的時間。定期在顯微鏡下檢查細胞生長和無污染。
對於核計數終點測定，藉由每孔添加50 µl甲醛（西格瑪奧德里奇（Sigma-Aldrich）F8775）將細胞固定約15分鐘（min）。然後除去固定溶液，並且將板用PBS洗滌一次，然後在室溫（RT）下在30 min內以儲備液的在PBS中1 : 10000稀釋度添加hoechst（Thermo Scientific 33342）。將板再次洗滌並且添加PBS。使用CellInsight CX5（Thermo Fisher）採集圖像，並且藉由測量hoechst染色細胞核的總數進行分析。將藥物處理孔的細胞核數（融合度%）相對於DMSO對照歸一化，並且使用combenefit軟體（Di Veroli等人, 2016）計算生長抑制。類似地，對於CTG終點測定，藉由按照製造商說明添加試劑使SJ-G2等基因對的組合板停止（Promega，美國威斯康辛州麥迪森；G7570）。將藥物處理孔的細胞活力（活力%）相對於DMSO對照歸一化，並且使用combenefit軟體（Di Veroli等人, 2016）計算生長抑制。
藉由與HSA加性模型的比較，計算協同得分和相對於每種單一療法的過量活性（Borisy等人, 2003；Tan等人, 2012）。在所表示的圖中，誤差條係平均值±SD。 組合測定 - PARP 抑制劑與電離輻射（ IR ）
為了評價化合物 20與IR的組合活性，採用集落形成測定，並且測量在10-14天內單個集落的細胞生長，允許其經歷至少5個複製細胞週期。這裡，將細胞以低密度（500個細胞/孔）接種在包被有聚L-離胺酸的24孔板中，以促進細胞附著。細胞附著後，用自動數字D300 HP分配器（Tecan）將板用PARP抑制劑預處理一小時，此後通過高電壓X-射線發生器管（Faxitron X-ray Corporation）將細胞用0.9 Gy照射。從溶解在DMSO中的化合物儲備液（10 mM儲備液）中以指示的滴定稀釋度添加PARP抑制劑，其中在每個板中一式三份地測試每種濃度。DMSO用作媒介物對照。將板在37°C、5% CO 2下孵育指示的時間。定期在顯微鏡下檢查細胞生長和無污染。接下來，使用重構在1%乙酸中的磺基羅丹明B酸形式（SRB）[西格瑪（Sigma），341738-5g] 將細胞固定和染色，因為在固定後直接添加染色劑，而沒有任何限制細胞脫離的洗滌步驟。用GelCount集落計數器（Oxford OPTRONIX）以600 dpi解析度掃描帶有染色集落的板。藉由使用24孔板感興趣區域（ROI）掩模（CFU，集落形成單位）量化ImageJ軟體測量的總光密度來對集落形成進行評分。藉由相對於設置為 = 100的處理媒介物將相應板歸一化進行數據分析。將數據相對於相應的媒介物對照（設置為 = 100）或無IR進行歸一化，製圖並且用Prism GraphPad軟體計算IC 50。在所表示的圖中，誤差條係平均值±SD。 U87MG 異種移植研究
將U87MG細胞（在無血清MEM培養基中250萬個）皮下（SC）植入雌性裸小鼠（體重大於18 g）的背部側面。藉由雙邊遊標卡尺測量，每週兩次測量腫瘤（長度 x 寬度），並且使用橢圓公式（π/6 × 寬度 × 寬度 × 長度）計算腫瘤體積。在整個研究期間，監測動物體重和腫瘤情況。當平均腫瘤體積達到大約0.2 cm 3時，將小鼠隨機分配到處理組中。
從隨機化後第二天對動物進行口服（PO）處理。將對照動物每天一次用媒介物（水/甲磺酸（MSA）pH 3-3.2）處理，持續10天（QD x10）。單一療法組和組合組中分別以3 mg/kg QD x10或QD x33給藥在水/甲磺酸（MSA）pH 3-3.2中的PARP抑制劑。單一療法組中在第1-5和29-33天以25 mg/kg QD以及單一療法組和組合組中在第1-5和29-33天以6.25 mg/kg QD給藥在OraPlus Perrigo中的替莫唑胺（TMZ）。
藉由比較對照組和處理組的腫瘤體積（TV）的平均變化來評估從處理開始起的腫瘤生長抑制，並且表示為腫瘤生長抑制（TGI，當腫瘤體積（TV）≥ 起始TV時）或消退（reg，當TV ＜起始TV時）百分比。使用單尾t檢驗來評價統計學顯著性。統計學顯著性如下指示：* p ≤ 0.05，** p ≤ 0.01，*** p ≤ 0.001。 ATRX 突變體 GBM 模型中使用 PARP 抑制劑的處理
我們研究了化合物 20在IDHmt和ATRXmt細胞系（SJ-G2和U87 GBM模型）中的單一療法活性。ATRXmt GBM SJ-G2在臨床上可實現的劑量範圍內顯示出對化合物 20單一療法的敏感性，並且IDH1突變的增加未進一步提高對此模型的敏感性。與ATRXwt U87模型相比，SJ-G2 ATRXmt模型展現出對化合物 20的敏感性高約40倍。結果提供在下 表 5中並且示出在 圖 7中。 [ 表 5] ：ATRX突變體GBM模型中的單一療法處理
細胞系 化合物 20 IC50 （ µM ） 與 U87 相比的倍數變化 IC50
U87 IDH1wt ATRXwt ＞ 100   
U87 IDH1mt ATRXwt ＞ 100   
SJ-G2 IDH1wt ATRXmt 2.341 約43
SJ-G2 IDH1mt ATRXmt 1.748 約57
該等結果證明，化合物 20在ATRX突變體細胞系中具有有效的單一療法活性，並且IDH1突變的額外存在沒有進一步提高此模型的敏感性。 使用 PARP 抑制劑和 TMZ 的組合處理
在IDH1野生型（IDH1wt）和IDH1突變體（IDH1mt）神經膠質母細胞瘤（GBM）細胞中評價化合物 20和TMZ的組合。化合物 20在多種化合物 20濃度下顯示出增加的與TMZ的協同作用，這遠遠高於U87同基因對中化合物 20的PAR化抑制的IC95（0.008 µM；數據未示出）（ 圖 8）。重要的是，化合物 20在低至10 nM的濃度下顯示出對PARP1的有效捕獲，同時保留PARP2（數據未示出），表明在化合物 20和TMZ的情況下在此觀察到的組合益處係由PARP1的催化抑制以及由於在DNA上捕獲的PARP1而增加的DNA損傷驅動的。此外，與野生型相比，化合物 20與TMZ在IDH1mt GBM系中的協同作用濃度低10倍（與在IDH1mt中為1 µM相比，在IDH1wt中為10 µM），表明IDH1mt GBM對TMZ處理更敏感。
此外，在SJ-G2 GBM等基因IDH1mt和IDH1mt模型（其為ATRX突變體和p53突變體）中研究化合物 20和TMZ的組合。該等IDH1wt和IDH1mt SJG2模型更接近地表示GBM患者群體（Ohba, Kuwahara, Yamada, Abe和Hirose, 2020）。重要的是，化合物 20在多種PARP抑制劑濃度甚至低至10 nM下顯著增強在SJ-G2等基因對中的TMZ效應，（ 圖 9）。另外，TMZ在IDH1wt和IDH1mt模型中與相同濃度的化合物 20顯著協同。
使用上述方法在U87MG異種移植模型中也研究了化合物 20與TMZ的組合的抗腫瘤功效。在第1-5和29-33天以6.25 mg/kg QD給藥的TMZ導致28%的腫瘤消退（2/8個腫瘤消退），而其與化合物 20（3 mg/kg QD）的組合提供了95%腫瘤消退（8/8腫瘤消退）的進一步抗腫瘤益處（ 圖 10A）。差異係統計學顯著的。較高劑量的TMZ（在第1-5和29-33天，25 mg/kg QD）的效果是92%腫瘤消退（7/8個腫瘤消退），與組合處理效果可比較。在處理時監測體重減輕和動物福祉，作為毒性的替代指標。與較低劑量替莫唑胺（6.25 mg/kg）與3 mg/kg的化合物 20的組合，高劑量替莫唑胺（25 mg/kg）導致更多的體重減輕（ 圖 10B）。 使用 PARP 抑制劑和 VAL-083 的組合處理
在U87 IDH1wt和IDH1mt等基因對中評價化合物 20和烷基化劑VAL-083的組合。 圖 11中示出的結果證明在該等細胞中，化合物 20與VAL-083具有協同作用。值得注意地，化合物 20與VAL-083的組合益處不取決於GBM模型的IDH1突變狀態，因為在IDH1mt模型中與PARP抑制劑協同作用所需的烷化劑劑量沒有減少。
類似地，ATRX突變體SJ-G2 IDH1wt和IDH1mt等基因對顯示出化合物20和VAL-083的增強的組合益處，這與IDH1mt狀態無關（ 圖 12）。該等結果還證明，在不存在VAL-083的情況下，1 µM化合物 20在ATRX突變體細胞系中具有活性。這與以上報告的結果一致，並且示出在 圖 7中，證明了化合物 20在多種濃度下具有單一療法效果。因此，除了證明這種PARP抑制劑在單一療法（即，無化療或放療）中的潛在適用性外，這還表明PARP抑制劑具有減少腫瘤的作用，該作用與其加強烷基化化療劑（諸如VAL-083和TMZ）的功效的能力無關。 使用 PARP 抑制劑和電離輻射療法的組合處理
H3K27M-突變型彌漫性中線神經膠質瘤係兒科神經膠質瘤，對於該兒科神經膠質瘤而言放療係護理標準治療。然而，該等類型的腫瘤預後相對較差。在此研究中，在H3K27M-突變型神經膠質瘤模型中評價電離輻射和化合物 20的組合。
圖 13中示出的結果證明，在多個抑制劑劑量連同減少的臨床相關劑量的0.9 Gy（臨床相關劑量為1.8 Gy）下，研究的PARP抑制劑與電離輻射顯示出增強的組合益處。重要的是，在兒科模型中化合物 20誘導的PAR化抑制的IC95係0.004 µM，因此該化合物在其最大活性範圍內。該等結果表明，所揭露的PARP抑制劑可以與電離輻射組合用於治療具有挑戰性的神經膠質瘤，諸如H3K27M-突變型神經膠質瘤。此外，結果表明，有可能使用PARP抑制劑與降低水平的電離輻射治療腫瘤，這可以減少與暴露於高劑量輻射相關的有害影響。 參考文獻
上面引用了許多出版物以便更全面地描述和揭露本發明以及本發明所屬領域的技術水平。下面提供了該等參考文獻的完整引用。該等參考文獻中的每一篇參考文獻整體併入本文。 WO 2004/080976 EP 699 754 EP 705 903 Bai P. Biology of poly(ADP-ribose) polymerases: the factotums of cell maintenance. Mol Cell 2015;58:947-958, doi: 10.1016/j.molcel.2015.01.034 Bartkova J, Hamerlik P, Stockhausen MT, Ehrmann J, Hlobilkova A, Laursen H, Kalita O, Kolar Z, Poulsen HS, Broholm H, Lukas J, Bartek J. Replication stress and oxidative damage contribute to aberrant constitutive activation of DNA damage signalling in human gliomas. Oncogene. 2010 Sep 9;29(36):5095-5102. doi: 10.1038/onc.2010.249. Epub 2010 Jun 28. PMID: 20581868. Borisy, A. A., Elliott, P. J., Hurst, N. W., Lee, M. S., Lehar, J., Price, E. R., . . . Keith, C. T. (2003). Systematic discovery of multicomponent therapeutics. Proc Natl Acad Sci U S A, 100(13), 7977-7982. doi:10.1073/pnas.1337088100 Chappnis, P.O. and Foulkes, W.O., Cancer Treat Res, 107,29-59 (2002), doi: 10.1007/978-1-4757-3587-1_2 Di Veroli, G. 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無
[圖1]示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺形式B之X-射線粉末繞射圖
[圖2]示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺形式B之DSC跡線
[圖3]示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺形式D之X-射線粉末繞射圖
[圖4]示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺形式D（ORTEP50）之單晶結構
[圖5]示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺MSA鹽形式C之X-射線粉末繞射圖
[圖6]示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺MSA鹽形式C之DSC跡線
[圖7]示出了在具有ATRX突變（SJG2IDH1wt和SJG2IDH1mt）但不具有野生型ATRX（U87 IDH1wt和U87 IDH1mt）的神經膠質瘤細胞中代表有效PARP抑制劑單一療法活性的細胞融合度圖。示出了代表性圖，誤差條表示+/-SD
[圖8]示出了代表在U87 IDH1wt（A）和U87 IDH1mt R132H（B）等基因對中PARP抑制劑加強TMZ功效的細胞融合度圖。示出了3個生物複製的代表性圖，誤差條表示+/-SD
[圖9]示出了代表在SJ-G2 IDH1wt（A）和SJ-G2 IDH1mt R132H（B）等基因對中PARP抑制劑加強TMZ功效的細胞活力圖。示出了代表性圖，誤差條表示+/-SD
[圖10]示出了用以下給藥的U87MG異種移植模型的抗腫瘤功效（A）和體重變化（B）：i) 媒介物；ii) 僅化合物 20（3 mg/kg QD）；iii) 較低劑量的TMZ（在第1-5和29-33天，6.25 mg/kg QD）；iv) 較高劑量的TMZ（在第1-5和29-33天，25 mg/kg QD）；和v) 化合物 20和較低劑量TMZ的組合。
[圖11]示出了代表在U87 IDH1wt（A）和U87 IDH1mt R132H（B）等基因對中PARP抑制劑加強VAL-083功效的細胞融合度圖。示出了代表性圖，誤差條表示+/-SD
[圖12]示出了代表在SJ-G2 IDH1wt（A）和SJ-G2 IDH1mt R132H（B）等基因對中PARP抑制劑加強VAL-083功效的細胞融合度圖。示出了代表性圖，誤差條表示+/-SD
[圖13]示出了代表在BT245 H3K27M兒科神經膠質瘤中PARP抑制劑加強IR功效的細胞融合度圖。示出了代表性圖，誤差條表示+/-SD
無

Claims (33)

  1. 一種治療有需要的患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤之方法，該方法包括向該患者投與治療有效量的聚(ADP-核糖)聚合酶（PARP）抑制劑， 其中該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含X連鎖的α地中海貧血/精神發育遲滯綜合症（ATRX）缺陷表型， 其中該PARP抑制劑係式I之化合物 (I) 其中： R 1獨立地選自H、C 1-4烷基、C 3-6環烷基、C 1-4氟烷基、和C 1-4烷氧基； R 2獨立地選自H、鹵代、C 1-4烷基、和C 1-4氟烷基；並且 R 3係H或C 1-4烷基； R 4係鹵代或C 1-4烷基， 或其藥學上可接受的鹽。
  2. 如請求項1所述之方法，其中該腦腫瘤或神經母細胞瘤進一步包含異檸檬酸脫氫酶1和/或2（IDH1和/或IDH2）缺陷表型。
  3. 如請求項1所述之方法，其中該腦腫瘤或神經母細胞瘤不包含IDH1缺陷表型。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之方法，其中該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含O 6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶（MGMT）啟動子甲基化。
  5. 如前述請求項中任一項所述之方法，該方法進一步包括在投與該PARP抑制劑之前診斷該患者為患有包含該ATRX缺陷表型的該腦腫瘤或神經母細胞瘤的步驟。
  6. 如請求項5所述之方法，其中該診斷該患者的步驟進一步包括確定該腦腫瘤或神經母細胞瘤是否進一步包含該IDH1或IDH2缺陷表型和/或MGMT啟動子甲基化。
  7. 如請求項5或請求項6所述之方法，其中診斷該患者包括測定從該患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤獲得的細胞。
  8. 如前述請求項中任一項所述之方法，其中向該患者投與該PARP抑制劑與以下的組合： i)      烷基化化療劑；和/或 ii)     電離輻射。
  9. 一種治療有需要的患者的腦腫瘤或神經母細胞瘤之方法，該方法包括向該患者投與治療有效量的聚(ADP-核糖)聚合酶（PARP）抑制劑，以及 i)      烷基化化療劑；和/或 ii)     以10 Gy或更高劑量投與的電離輻射， 其中該PARP抑制劑係式I之化合物 (I) 其中： R 1獨立地選自H、C 1-4烷基、C 3-6環烷基、C 1-4氟烷基、和C 1-4烷氧基； R 2獨立地選自H、鹵代、C 1-4烷基、和C 1-4氟烷基；並且 R 3係H或C 1-4烷基； R 4係鹵代或C 1-4烷基， 或其藥學上可接受的鹽。
  10. 如請求項9所述之方法，其中該腦腫瘤或神經母細胞瘤包含： (i)    X連鎖的α地中海貧血/精神發育遲滯綜合症（ATRX）缺陷表型； (ii)   異檸檬酸脫氫酶1或2（IDH1或IDH2）缺陷表型；和/或 (iii)  O 6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶（MGMT）啟動子甲基化。
  11. 如請求項8至10中任一項所述之方法，其中該烷基化化療劑係替莫唑胺（TMZ）或二去水衛矛醇（VAL-083）。
  12. 如請求項11所述之方法，其中按以下投與TMZ： (i)    小於約200 mg/m 2的劑量、小於約150 mg/m 2的劑量、小於約125 mg/m 2的劑量、或小於約100 mg/m 2； (ii)   約50與150 mg/m 2之間的劑量、約75與150 mg/m 2之間、或約50 mg/m 2與125 mg/m 2之間的劑量。
  13. 如請求項11所述之方法，其中按以下投與VAL-083： (i)    小於約50 mg/m 2的劑量、小於約40 mg/m 2的劑量、小於約30 mg/m 2的劑量、或小於約20 mg/m 2； (ii)   約10與50 mg/m 2之間的劑量、約10與40 mg/m 2之間、或約10 mg/m 2與30 mg/m 2之間的劑量。
  14. 如請求項8至13中任一項所述之方法，其中按以下投與所述電離輻射： (i)    小於約60 Gy、小於約55 Gy、小於約50 Gy、小於約45 Gy、或小於約40 Gy的劑量；或 (ii)   約20 Gy與約60 Gy之間、約20 Gy與約55 Gy之間、約20 Gy與約50 Gy之間、約20與約45 Gy之間、或約20與約40 Gy之間、約30 Gy與約60 Gy之間、約30 Gy與約55 Gy之間、約30 Gy與約50 Gy之間、約30 Gy與約45 Gy之間、約30 Gy與約40 Gy之間的劑量 視需要，其中該電離輻射的劑量作為分次放療來投與。
  15. 如請求項8至14中任一項所述之方法，其中該PARP抑制劑協同地加強該烷基化化療劑和/或放療劑的活性。
  16. 如請求項8至15中任一項所述之方法，其中該PARP抑制劑治療該腦腫瘤或神經母細胞瘤，而不依賴於由該化療或放療劑的投與誘導的對該神經膠質瘤的任何作用。
  17. 如請求項1至16中任一項所述之方法，其中R 1選自甲基、乙基、異丙基、環丙基、1,1-二氟乙基、1-氟乙基、三氟甲基、二氟甲基和甲氧基中的任一個。
  18. 如請求項17所述之方法，其中R 1係甲基或乙基。
  19. 如請求項1至18中任一項所述之方法，其中R 2選自H、氯、氟、甲基和二氟甲基中的任一個。
  20. 如請求項19所述之方法，其中R 2係氟或甲基。
  21. 一種化合物如請求項1至20中任一項所述之方法，其中R 3係甲基或乙基。
  22. 如請求項1至21中任一項所述之方法，其中R 4選自氯、氟和甲基中的任一個。
  23. 如請求項22所述之方法，其中R 4係氟。
  24. 如請求項1至16中任一項所述之方法，其中R 1係C 1-4烷基，R 2係鹵代，R 3係C 1-4烷基，R 4係鹵代或C 1-4烷基，或其藥學上可接受的鹽。
  25. 如請求項1至16中任一項所述之方法，其中該PARP抑制劑選自： 5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氯-5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氯-5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氟-5-[4-[[5-氟-2-[(1S和1R)-1-氟乙基]-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[[5-氟-2-[(1S和1R)-1-氟乙基]-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[[2-(1,1-二氟乙基)-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-(二氟甲基)-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-(二氟甲基)-5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氯-5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氯-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氯-5-[4-[(5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氟-5-[4-[(5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[[2-(二氟甲基)-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氯-5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， N-乙基-6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]吡啶-2-甲醯胺， N-乙基-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[[5-氟-3-側氧基-2-(三氟甲基)-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氟-5-[4-[[5-氟-3-側氧基-2-(三氟甲基)-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氯-5-[4-[[5-氟-3-側氧基-2-(三氟甲基)-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[[5-氟-3-側氧基-2-(三氟甲基)-4H-喹㗁啉-6-基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氟-5-[4-[(5-氟-2-異丙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氟-2-異丙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(5-氟-2-異丙基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-環丙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-環丙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-環丙基-5-氟-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-氟-5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 6-(二氟甲基)-5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺，和 6-(二氟甲基)-5-[4-[(2,5-二甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺， 或其藥學上可接受的鹽。
  26. 如請求項1至16中任一項所述之方法，其中該PARP抑制劑係： 6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺或其藥學上可接受的鹽。
  27. 如請求項1至16中任一項所述之方法，其中該PARP抑制劑係： 6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-側氧基-4H-喹㗁啉-6-基)甲基]哌𠯤-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲醯胺。
  28. 如請求項1至27中任一項所述之方法，其中該腦腫瘤係神經膠質瘤或室管膜瘤。
  29. 如請求項28所述之方法，其中該腦腫瘤係神經膠質瘤。
  30. 如請求項29所述之方法，其中該神經膠質瘤係兒科神經膠質瘤。
  31. 根據請求項29或請求項30所述之方法，其中該神經膠質瘤係高級別神經膠質瘤，視需要選自由以下組成之列表：寡樹突神經膠質瘤、間變性星形細胞瘤、神經膠質母細胞瘤、和彌漫性中線神經膠質瘤。
  32. 如請求項29至31中任一項所述之方法，其中該神經膠質瘤係H3K27M突變型神經膠質瘤。
  33. 如請求項1至27中任一項所述之方法，其中該腦腫瘤或神經母細胞瘤被表徵為具有高水平的基因組不穩定性。
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